Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ЦИТОМОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА РАННИХ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ПОЛУЧЕННЫХ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РАЗНЫХ ТИПОВ ГОНАДОТРОПИНОВ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "ЦИТОМОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА РАННИХ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ПОЛУЧЕННЫХ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РАЗНЫХ ТИПОВ ГОНАДОТРОПИНОВ"

4-лш/

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ. ИНСТИТУТ . ЖИВОТНОВОДСТВА (ВИЖ)

На правах рукописи

Мишуковская Галина Сергеевна

1ШТОМОРФО ЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА РАННИХ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ПОЛУЧЕННЫХ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РАЗНЫХ ТИПОВ ГОНАДОТРОПИНОВ

О3.00.13. - Физиология человека в животных

АВТОРЕФЕРАТ

оиссертадии на соискание ученой степени кандидата биологических наук

п. Дуброашш Московской облаете 1991

?а(Ч5Тв выполнена в отделе Скомхкаюгга Вецсовзкого нвучко-ясс^едовате^ьсксго ичсткзута ли во твозодстаа.

Цяучьиб руководители: - доктор биологических наук,

профессор "Л.Птсов;

— кандидат еиилсгаческлх наук К.Х.Хаба булл гл

Мшкальйые огтоненты: доктор баологэтеишг наук, профессор кандидат биологических паук

I! .Я .Рябьх.

Ведущее учреждение: Московская вегзрлнарная ахадемая

.Скрлйнаа

Занята дсссертацав состоятся & V 1991 г.

в "_" чао. ва заселаняа епкпкзлазирсьанногс Совета

а CC0.I6.02 я^л Всесоюзном ньуыо-исследовательскоы ингтвъутч жтяотаоБОДстаа.

Адрес института: 142012, Уоеиовсгэя область, Подольский

р-^я, вос.Дуароыды.

С деесерттаией можао ознакомиться г блйлиог**; . -Автореферат разослав

УчэныЗ секретарь сзеиаадяэдроа&лнэго Совета, еандсдат йиадотчесгах наук

¡1.К .!2мнгжк

I. ОЕЦАЯ ХАРШЕККЛККА ?АБКЫ

1.1. Актуальность темы .

Интенсификация племенного дела в животаоводстев ЛЕЛяется одной из актуальнейших задач сельсяохо?яВствзшого производства, Маровой опат показг>вает, что система воспроизводства высокоценных прдазвотщтелей все чаке и чаще прибегав» к новой тех- , нологии я скусственного разложения — трансгшантациа амбрвонов. ^ Такие шроко известные х«к.*Трг>нада" (США), "Бр:-^

тяз Лаавоток" (Англия),, "Альберта Да2всгок Трансплакт", "Виа \ Паке" (Канада) осуществляют производство эмбрионов крупного-рогатого скота, их деяонированве, транспортировку а пересадку в самых различных зонах земного шара. , : _

В вашей стране такге накоплена значительные :латерашш по трансплантации эмбрионов у се льскохозяйственньа. жавохкых. Нал- более э$фекивно велись работы по пересадке эмбрионов во Все—. союзном НИК животноводства, ВНИИЕШв, НИШ Лесостепи и Полесья УССР, Эстонском ШК животноводства, в ряде развитых хозяйств -тйклемзиаодах "Зари ксмг,^нЕЗма" а "Петровское" Московской области', "Чер&сишй Зелетень" Харьковской области, колхозах "Советская .^шйуссая" Брестской-области и "ТерЕете" Латвийской ССР. : ' '

Мзтод пересадки энСрэонов позволяет значительно повысить тафЬе^ташость селекции коров, ссгниватъ их по качеству потом-. ■ ускорить теьаш селекши .■■'

■ При целенаправленной а хорошо организованной работе ука-зШ^'метещом-иолучато жоя^ дмя -

Ц:н«;:. и. ...и си.'ялзша Йш.ерд. Лшка с:шзз. кн, К,А. Т;:к::?Е!5:а Й

О&-Ш&

. сташий искусотвепкрго,осеменения от : шсокопрсдуктавпнх коров. . ■ йлеств: с тем не все;вопросы в технике эмориопересадок мо, гут считаться резешшыа. Наиболее слсккши и требуадиьш скорейшего разрешения являются вопросы гормональной стимулягиа допо-. ров с цельв повышения количества в качества вымываешх амбрио-зов. ."■■ ■.-Л ' . /

'ЪвестныесяосоШгорыональнгаовшыванияполвовуляциау коров-дсворов остаотся-нвэффв1азвны»щ в среднем для ЗОЕ животин*, при.этом индуцирование1высокой степени■множественной ову-ляши: отрицательно сказывается на выходе - нормальных эмбрионов. Прв эгои снажается-ивдекс.шдодотвор^емоста^яйцеклеток, урели-чиваетеячаслодегснерарованкшс эмбрионов. Высокая вариабелъ-ность. непредсказуемость реакции "яичниковна гормональные аре-параты,. проявлена е отрицательных.свойств>(отсутствие шлодот-воряеыости яйцеклеток,; высокий процент'дегенерированиях эмСр!-ояов в др.)' сН1!жает надехяорть известн1а метещоз. Поэтому изучение . наиболее, вероятных факторов, оназыващнх влияние на. ко-.личество в качество-эмбрясиов,'„атакже.на ихпражаЕляеыость , оргработе-в условию: ферм^пиеютбеишлое'те еретическое а про--ктаческое значение, .-■■ \г: - ■'-':■■-: '.'■*,..

' ' Х*2# Цель я-задача ^сслг^ованай

-" ■ Сельд настотаей работы бцдо азучркве качественных измене-. ■ ;'яий:Э!Лбряоноь крупного рогатого;скота и эЙ-зктавности их выш- ■ ■'дания-У;Доноров;П^ашольэовз^ гшадотрш-

•.пых препаратов, \ .'.; ' • " -. :■

Поставленная цель-^асаидсганай реоалась*1 по - следущгы ■ эта: яга: '■ V- '-.:

. !• Сратевае э££«кхз£еост:: етхкулгрушего дегстдоя роз-ншс типов фадликулостамулируысвх гормонов отечественного к зарубежного производства а гонадотрсална С2К на воспроизводи- ; ' тельнув систему самок крупного рогатого'скота, полиовулшшю н • качество эмбрионального материала.

2* Изучение морфологического состава эмбрионов коров, полученных после воздействия гонадотршшшс тормоша в условиях подбора групп кланическа нормальных доноров я с разлячнша от-клонеетяыв стноршо ' " '

39 Изучение дрпкивляемости эмбрионов разного качества в прь разном способе хранения» .

■1.3. Научная новизна работы состоит в том, что впервые на большом са стематнче сксы материале кзучено влияние на качество эмбрионов крупного рогатого скота различных типов фолликулости-нулируасдах горлонов (ФСГ-«, фоллатрсяшя, фшиикотраоин, грофо-ллон) и гонадотрошна СХК. Дано гато-могфслогическое описание ; эмбрионов, полученных при вшольэованив разных гонадотрссинов . а при разном клиническом состоянии коров-дояоров.

1.4. Практическая значимость работы заключается в опреде- ' ленив эффективности использования гонадотрооных препаратов отечественного и зарубежного производства про трансплантации, факторов, влиявдих на качество в прягшвляекость вибрионов.

1.5» Апробадая работы. Основные соложения диссертации до, лоаеян на: - ''.''■'■

- ежегодных конференциях лаборатории воспроизводства в трано-планташи эмбрионов с.-х. животных ЕаэННПИШ (I987-1&88)}

- научно-«етодическвх конференциях Центра трансплантация эм-

вргсязв с.-х. ^штянх:КЯа»(19аЭ-12гс гг.).

* • ••? ......... -..■ . ■■

1.6. га ^отчЛзс^артадпя изложена на ?о страняпах '

уадинош;сного: текста, 1с6даржгт 14 гайдян, Ю ргсунков. состэ-ат.зз введения, обзора литература,. результатов собственных ,

доследований,' обсуждения. выводов, спзска лл тературы,. гклша- • ,

швго 152 источняха. из игх 112 анострашп«. .... ■ ,

2. аАТЗяигы и глггош йссгзеованЛ _

Работа выполнена: в отделе биотехнологаа Всесогоного КС! жаэотноводства, тзеатре траясплантаа^'з .зкОрпоаоэ ЕИ^. : учхоза МзхаЯлозскоо" Тхмдрязевской сельскохозяйственной акада- : цзгг, совхозе "Ствсаяовскз2" Ел2гоЕе-онского раЕока з колхозе хм .К .Маркса. Оадоровокого раЛокаЕажзрской АСС?..

3 качестве доноров эибриэяов «сгальзоэадг 239 коров «ерно-пестро2 сороды^4-7-дегнего-возраста с подочной продуятгвностьь, не нзое 6000 нг молока я телок случного. возраста от высохо-яродуктгвных матерей.

Дгя гормонального вызывания содиовуляижа асдодьзовадж препарат СЗК (фоллатоа) а доза 2500-3000 113 в ггпс^азарныз сре-сараты ССГ: -ЭСГ-а а дезе 36-42 «г,*' фоллекотрогпш (ЧС5?) - 480600 НЕ. фоллатропан (СССР) - 12С0 НЕ В гроФоллоя (СССР) -1ооо * :

Коров-донороз осеиеляля двойной дозой сперык дваддн в день с интервалом 12 часов на протяяскяи всаЙ охоты.

Эибрионн изшекаля яахигтргэтесязгл спосоСом на 7-2 'день после пвртого осеыоненгя. ■ - ■ ■■

После Еьиывангя ошнаваля прозрачность дрсшивного раствора и по это1*у показатели судала о состоятся эндоыетрия коров-

доноров. Прозрачность врожгной гкдкоств ■-гаредедяяв по коэйз- -цзенту СЕетопрапускагая, язквряексыу на фот оэлектроколор.метре с яепсдьзоваюем красного светофильтра С Л =610-640).

Качество э:.с5р2 0к0В сиекзкж Егзуалыисд морфологически! способом, используя zxsjr? one hit. , разработанную р Slile. Б качестве исполнительного ктстерая оценка измеряли лшейные раз-керн зарсдютк. Спрегеля."-^ zscisrp эм5р:сеа, псриггтелгаково-го пространства г To^izry зоны оельЕлгла, a тазсге ;яа«етр кле- . -точного комплекса. ■.. *"

ГЛорфслсп:ческо!.^* енэ^эу подвергнуто XI29 змбрцоков.0 качестве ■ судили пс морфолога чеоам признакам с. учетом стали ра-ЗЕ2ТЛЯ, правильности формы, целостности прозраччойободочка, ■ равномерности дробленая Сластсмгров,.состояния яатетжазми»прозрачности веравгаеллиЕового пространства й наличия в пеы вклзз-ченп£.

После оцечкз качества и выбраковки незрьгсдаыхтля пере-садаа, нормально развитые зарсшга-аересагаваяи'либо в свежем состоянии' телкам-реципиентам, либо замораживала для длительного хранения;-,-—

Замораживала эмбрионы ь оолсшнкгх с красоротектором гли--церпном в 1,4 М концентраций на программном зачорагавателе У СЕ-

9

I в 2 (Харьков). - ■.

' Лея изучения качества эмбрионов грв различном кдяначеском состп<2Ши доноров,отбирали лактирующая животных а коров, выбраковал них вследствие значительного снигеная полочной продуктивности, но не в связи с патологией органов размножения.

В качестве репяпвентов использовала телок в возрасте It-IB кесяиев с дивой массой 350-380 кг.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ С0НГГВЕЙНЫ1 ЙССЛЦйОЕАНИй

3.1. Морфологи чески 2 анализ 7-днекшх эмбрионов крупного рогатого скота

В аажх зсследовзннях «©реологическому анализу подвергнуто 1229 эмбрионов, виштшс на 7-2 день астрального никла коров-дояоров. Учитывает состояние клеточного комплекса зародьггей.ра-шомервость дробленая Сластомероь, прозрачность перивителдянО' еого пространства« делсатпосгь зоны педлшгда. Посредством мор-= фологическоа опенки отоаралс не оплодотворенные яйцеклетка в эм^ брзоны на разных стздзта разнится;.

Всего получено 269 несшгодсгэсрэйгйа яйпеалгток зле 21,,$* от общего числа зародадгейв Часть из них се проявляла вае^нл»; празнаков дегеяедаови» Он» еизлв гомогенную датоплазму{ врозра» чноеперевателдиновое нространство» Однако в ыорфодогиг бояых-нсгва яЛпекчеток ваблшаляаь отклонения от ворш. Дегенеративные гзменешся кг подчинялась калам-лабо правилам. Часто а^блю-дгдгсъ следую е явления: растягизавае зоны паллицида. ее деформация, разрушение штошшз>^атичеокой оболочка,. выход отто-ддазш в пера аотелливовое пространство. Фрагментарный . распад штсшшзш прявоздл к образовании дсевдоСластшеров. У некото-риг неоолсдотворенных яйпеклеток цитоплазма смекалась к одщо-щ сэ полисов (отлетавалась) в внегше еда напоминали рзннсо 7-гутстауэ ояастояисту.

Стадия разввтяя оплодотворенных яыекдетох определялась иол: честно* Сластайеров. 126 экбр:онов (10,4^) сильно отставать в свое» развитая <2-8 йлаегомерные вибрионы) (табл. I).Все

зга зкгрконы^рсяэ.гялз'' Еркзвакг дегенерации* Онв ■ смели смор-генше; кыр^^нсА^орш'смстоздрт' С 'рзэрузеЕкЦцз' иетСо-ль^к колгчест^о^.глгз.'.^.в герйЕ: те лля новом пространствеСКав-

нгр^екге "сггзг Сд*стокераиидефекты зона

пе—^зга^-Чагта'дегекерЕрсБзнкне* неправилтяуо

(кемяе^ГоБ&^Еые,. треугсльнсй гЪ-яЙпевщсксгЧсрмьО*

:. 1 '.* ■ --'.- "'V-. .■ ?абягаа I

■ .рзэитая гмерзоксв.прг еш.21В£к:г, доноров ;

ее ?-; лень зстргдьнсгс гвгла '.

Е» -раэЕг:

Ч^ело эмсргонэв

%

«сследозако эарсасег . .. 1229: , . _ 100.. ... ,

в то: тссле:- • - - ■•■-■■■

17; - ■ -'-■-*' ;1,4--- -

■:4г8^чя9Игчкае.-„ ■ . . _ 105; ■ , / ■ ■ ■ * 8,5'.'. -.

Мойглы:^-,.. ' _ . /"' ...

ранкге ■* 35 '■ ■■ з(2~......

- Еяастос:.стн:,- , ., . , , ; •.

"рзЕЁае "" '. 354 _ *' 32,0

аоздЕге- ■ ■;'. ■.' ; ' - *42,Г; ■ ■■■3,4'

•яйцеклетки. • / . .265 • .. .• 21,6-

" Еользшство эероднг'еЛ, извлеченных: нз-7-2 день ггкла ка-хос=л::еь на.отадга. поздней иоруяи ¿ранней'бластоцкоты (22,2 , г 32,15 соответственно).. ■ - ,-- :■'

■ Бс^агьн о-.развитая-моруяа1 представляла хобой плотное скоске®.« клеток» Властсыери,чегтде,,прозрачные, расположены сси-кетра'чно.. Пера за те для новое .пространство .-свобода о от гранул г включений, зона пеллтщда округлая,.без трепан в сколов. На '•стадав" ранней б&астоцгсты'на&апаяа-начало образования трофо-

Лтаста а зийраойяаста, ;£оршрованме йластополости.

Поздняя (экспандароэаняая) йластоцяста характеризовалась - отсутствием первштех'а нового пространства, расширением Олас-тспсаости. Клетки трофобласта четко зыраяены. ЭмСрэоблаот• округлой в виде компактного скопления клеток. 1 '■ Частачно нормальные эмбрионы возникала в том случае,\ее-. рядом с знтактпыш, способныьа « развитие клетки появлялись дефектные йяастсыера, З-стасаа морулы дефектные,клетка мокло ¿уло .уверенно адвнта^зпарэвыь. Ска появлялась как шеэаврио-надьнзг кл е точны :!,материал в поэтоиу всегда леяадп вке клеток ного скопления зкггктных Сд&стомзрсз.. Экйрковы, амевате 1-2 , £нделенных йлгстскера, опззгоолз как "хороане"» - ■'

"" 2слз иаблньалз значзтельксе кол? честно выделенных клеток4 хтсрнса заггцл. "удо2летвор:1тедьпс", Лля тазхх эмер« су-

нов Сила ха^ектерка солее ада менее ооьекные'сяоалеккя плазмы .Е перезлтедлановс^ пространстве - следствие клеточного рассада, Иногда наблпдала до£оршси® зоны селлщада, грешны, сколы. ' _

. егг.рпош, хараятерззугстеся наружекаем-свяэи ыежцу блас-то:.;ера.*л:длкнозом часта -бдастскеров,. оцекзвала как "условного гаке". У них часто набдЕладк дефекты зоны педлзшда. У йла- 1 стоцгст трсфойласт Сил трудно раздачам на фоне клеточного ко-м^леаса, омбрцоблает деформирован. -

" £слд дкгенератз еным измененаям еыло подьерзено Солее 50« йл£отоиероэ, омСраон считали непригодным для трансплантатаа. ДегенерироБаныые эмбрионы характеризовалась варузенвем езягв ьэд^ду «аврала. рассадой клеточного кси.тсдекса. Пероввтел-дгньасе дг-остранство екдь заполнено разрушенными сластомерами.

Кнаям-наблхдали разрыв эшш пеллгеЬда с частичным выходом: кле*

точного комплекса. ......* 1'

Анализ качества зарсдахеЗ показал, что более прсдтанувапе-ся в своем развитее эмбгионы вмели меньше отклонение от. норм^ Так, если процент-отличных эмбрионов на стадии морулы был ра- . вен т-О; бластошст было уже 303 зародазей отличного-,

качества (табл., 2)._ На стации поздней бластоцастн 76,2? эмбрионов была оътчното качества и совеем не было условно-годных и. дегенеЕяровангдк., Число.ранках морул в назих иследованиях-бы- ' ло о^зиь незна>«тедадщ1. (п » 39). Все они проявляли существенен^ йри эн&Кл (распад клеточного комплекса) и Оылк• посла ориуа., '

'.-'".'.■ Таблица. 2 .

■Качество эмбрионов в зависимости от стадии развития

Качество эмбрионов

'Стадия развития

"Т^оруга

Бяастоцзсты

Исследовано эмбрионов" "" '"*""" 398 ' из них (п-£);

- отличные 44-11,1 -хорошие 172-43,2

- удовлетворительные:. 88-22,1 -условно-годные. 40-10,0

- плохие 54-13,6

436 .

131-30,0 2ХВ-50.0 . 51-11,7 23-5,3 13-3,0

' Ига оценке.качества зародышей учитывала лзнейЕке размера поздних:морул я ранних бластоцаст.

Не обнаружено различий в среднем диаметре эмбриона и дер!-вателлинового пространства у морул и бластоцаст, пригодных и непригодных для трансплантация. Диаметр клеточной массы у нормальных морул был достоверно мевьзе по сравнения с дегенерировал ныка (табл. 3).

Таблица 3

Япнейаые размеры эмбраонов

Показатель

Морулы поэднаа ; Еластошстн раннге

нормальные ¡дегеяе- : отличные.: хороозе гудовлет-:рирован-: ; :воритель-

:ные ; ' : :ние

Всего эмбраонов , ■ 14 10 12 8 8

Дааметр эмбриона 158±2,5 Х5?£1,8 I60±I,4 I60±L,4 159+2,3

. Дзаметр ЕПП 134±1,7 135±1,4 ХЭЗ±2,0 133±1,3 135±1,8

Даамегр кле- '

точной массы П0±2Д . -118^2,3 129+3,1 126+2,8 1X5+2,3

На стада ранней блаотсцасты наблздала некоторое уменьшение диаметра клеточноя'каосы у эмбрионов удоалетвортельного качества по сразивши) о отлачнымг и хороааш.

Диаметр неоплодотвореннюс яйцеклеток колебался в на^пх исследованиях от I58-I7S мкм. Тогаана эояа пеллшада составляла 14-16 мкм, ■

3,2« Уровень суперовуляотл я качество эмбрионов ври обработке доноров разязчкыми гонэдотросднама

Сравнительное nsywmae отечвотвгнных а зарубежных ranoía-заркых гормонов и С2К проведала на 229 коровах-донорах черно-

пестрой порода* СЗК вводя.тя на 10-12 день астрального шкла в

дозе 2500-3000 ¡Ш однократно. Обработку ггпо&заршаа гормона--

" ма осуществляла по 4-даз2ко2 схеме, начиная о 8-10 дня цэкла.

Суммарная дозе ФСГ-а (CO/k) - 36-12 мг, фоллзкотропяна-СЧИР) -

460-600 ÍJE, фоивтросйна {СССР) - 1200 £Б я грофсялона (СССР)

- 1000 ИЕ.

Эмбряспы (t'ejwtewwa явхадергачвсюм способом на 7-я день зервог» осеменвпзя.

V .Установлено,; что вре оСравотке гсналотрсяшнш СЕС, число тавотных. рещга^хавзгх суперо1^лгпте2; было меньше (75,7£), ;чеи прв обработке гипо^гэереыки препаратаья (в среднемВ75)

,(табл. 4).. '■'■' '■■'■•'-'. ■■■."■- • •• '

'■'..' ■ 'V. г""1:-/■ ■.; ■-'■■ .■*-';/■'■- • Таблица 4 .

Уровень суперовудянвю' в выход амбрионов ' *;

■ 2 эавгсгкоств от типа гонадотрстаиа '

.. . ,--■:. «Г , - л/:--.'..;. ■■

Показатель : С2Н

ХГ-П ' иаизко- 3^лст-:грсфал-■*, , хтрапан '■. ::тропин:дон- .._.,

. Обработано-.коров ■ ■: 59 ■■"..-'■ 65 ■ ■ - ■ 21 63 ■ : 21

Реагзровало стев1>- - ■-■ :-*■ - •'• .

. овудяпаег, (в-З) -47-79,7.'59-93,8 18-85,7 53-84,1 18-63,7

Полспателышх ЕС ■■■ . ■ ;"■"■■" : "'.,■■ ; Ч.' ••

: зэваечеагп ■- 1 -■■-■г- ■■ ■■■..;.■■■■■■■■...

рионов СП-?) * 44-93,7 58-58,3 ... 16-88,9 . 50-94,3 .15-63,3'

Число овуляций на 1 ■■■•■■■ ■ ..." ...

донора 7,9±Э,6 Ю,2£),9 8Д±3,8 8,2*3,7 10 ,7

Получено эмбрю» •••" "■■'.:■■ .:" ' ' ■

но»; на донора 5,3±0,6. 8,5*1,1 6,4*1,3 6,3*3,7 6,9*1,4

•'. из них: \ ' ; .--;;,::■'.'■■■.У '/■':■,'■. \ норгяугошх ... 3,3*0,4 5,7^3,8. .4,8*3,1 . 4,0*0,5 2,3^0,5 дегенервро- ■: ■ 4 ■ ■■.-■■..--■■ . •"•.ванных- 1,0*0,2 .0,9*0,2 3,8*0,6 1,0*3,2 1,7*3,7

.- , неозлсдотво^ " '■•'■! .:■' .";/. - .;.,у.

. реккзгх яйце-:. *

клеток . ^ , . . 1,0^0,21,9^0,3 ; 0,9±0,4 1,3^3,2 2,9*0,9

.-■.■■■Про сравнении гипо^иэатвых гормснов разлзчного произведет-* ва, ■ число реагировавши .зивотных .было'наибольшим в группе.5ЭГ-Й г (СИЛ) 93 '■ Б остальных трёх группах этот показатель был." примерно одинаковым (В4Д-85,7Х).

Уровень суперовуляпин был максимальным щв использования 5СГ-П (СЛА) и грофоллона -Ю ,2иЮ Д овуляци Й на донора .Достоверно ниже ча ело овуляпгй- в группе СИГ- 7,9 (Р ^ 3,01)»

-- Наибольшее -число эмбрионов на гонора подучена при иссаль-

зованяи американского препарата SCT-a -8,5,- Мякпмальянм о тот

показатель был.пря обработке донороз:СЗС - 5,3. Здесь разность

была достоверной (Р 0,05). -Остальные трр груааы занаг^алк промежуточное полосгенае <6,3-6,9).

По количеству нормальных зг'брпоноз прекму-нество такке имел американский препарат - 5,7 .'на. I донора..!3рг. аепояьзова-, im фоллпкотропана а' фояяатродлка этот показатель был не сколько: Ense - 4,8 : 4,0 соответственно. ;.!пж!:.гальное часяо нормальных -зарсщазей .'2,3-получек» nps-обработке'грофаядоном; ¿то .связало с б алкаем числом неоплодотзорекншс яйцеклеток/к дегонгрп-розакньпс з ароднз'с воткшсобраб от акннх. гро? олл оы см " Пго асподьзованза СЕК получено 3,3 нормальных эарсаыга на'донора, что достоверно *леньие, только в сравкенгд с американским препаратом-<Р 2 ¿,01). ' •. ...

Hiследовала стадии развития эмбрионов у коров-доноров,обработанных различны:® препаратами. 7 доноров всех 5 групп на 7-2'день цикла экбраоны находились на стада« разится поздней аорулы,я'/ранней бласгошсты,,Лагь небольшое число; зародыдей ■ достигло стадии поздне й- бластспасти.; Отмечены некоторые различи яв соотношении, модули. бластоыист по группа*.«. Так, у жавот-кых, обработанный фоллитропином, ¿залечено бользе иорул (60,53 от числа нормальных эмбрионов). .В гругхах'ХТ-па СЖ пра вы-¡/ыванип преобладали бластоцгсты (табл; 5).'7 доноров, обработанных' 1сллатропикш а гро^оллсном получено примерно, равное число корул и бластошст. "/У-

Количество поздних йластоцзст 'било очень незначительным " г колебалось о? 9,2 {фоллпкотрсетн)'до О (гро$оллон).

. - .. Та&шца 5

Стадия раз к: тля ^.гсрйоноа

. . ...Показатель : . . ост ;СГ . :;слл:- :~оллй- trpoi-ол-: ;котро- :тролкн :лок . .: аяк ' ;;.- ; ..

Исследовано г.мрюкОЕ 142 323 . 76: '¿21 .35

аз tex:

. моруль: позгпле 53-37,3 ' 123-íO 46-63,S 93-48,4- IS-54,3

бластозкаты-

■■- рання в 85-55 166-51,8 23-33,3 £3-4 S,8 l£-45¿7

■ — пегднге 4-2,8" 26-3,1 7-i,2 -■'".-.

■ " Оценка кечестга.зарсетггеЛ показала: налба^ьзее-часяо вые- .

эего качества эмбрионов получено ср:; нспсдьэованг.к чешского,к ■ американского-препарата ИГ (32,3 а 32,52-соответственно). У доноров, обработанных гра£оялоноа, ehlmto лешь 5,7Лотякчных 'эмбрионов. В:этой группе получено больше дегенеркрэваяЕых эмбрионов,.по сравнении с другим группами (табл. б). Ч ,■ Опл сл отворяемость яйцеклеток бцла максимальной у доноров,-.обработанных:$оллякотроппном (ББ.4&). В группах фолля-

тропяна и CSÍt она существенно не различалась ü составила - 78,2; 79,9"; в 80,6л.соответственно.

"' Низкой сшодотворл'емостью яйцеклеток выявлялась группа доноров,-oíработанкых.- грофоллоном. Здесь этот показатель состава л 58,3Í...: : '

■ :: Морфологические'отклонения эмбриона от нормального состояния была весьма многообразны s касались всех его структур.Йгу--

чгли частое встречаемости различных дефектов у эмбрионов nfo

обработке доноров С2К и пшофгзарныки гормонам:.

Установлено, что тип гшадотролика не оказыЕгет вяидкия

на состояние зонк оеллпвда» Вовсех груагах тресдян. зоны встре-талксь редко — у 1-2,Наэгшм вило число зародк=е2, нмевсих.' несравалъаух форту' зоны пеллиида - Г,7-г,5£ (тайв. 7). ..'.

■*':';•■_. ...'■■'■' " '-.'' '■ ■ "■. ■Та'Ьэка' в

, Качество эмбрионов а завасамости от тала гонад отроив на

;.- ^ V-- (п-*) ■ ■ ут

V - .■ - . 5СГ

" о^Сраснов ■/,-■;■ : С2К : ФСГ-с : гфолла--; .; ;котро- : : • ■ =:'• дан ; » *• • $олли-■трсоак- : гро^ол-: дон ■ I - , ч

Йсследоваао

■зародазег . '.'232 ■."'" 477 > 103 " 314 ."■ 103' ■

Яотаалыыг за--. : "

ерзсвов 142-61,2 320-67,1 76-73,8 201-64,0 35-34.

.. гэ. над: • •'' " • ' - ■

отлачкке ' .. 33-24,7 104-32,5 25-32,9 39-19,4 2-5,7

хорозе V 72-50,7 150-46,9 31-40,8 112-55,7 ° 23-65,7

удовлетвори- -■ ■ ''

тельные .. 33-23,2 42-13,1 16-21 42-80,9" 6-17,2

условао-годяые; 2-1,4 24-7,5 4-5,3 . В-4,0 ■ 4-11,4 .

Дегенерсрованных " ■'*.'" ' ■ '' -■ .

зыарвоаов . • 45-19,4 • 53-11,1 13-12,6 50-15,9 - 25-24,3

Неоялодотворен- . ' ■

вых яйцеклеток 45-19,4 104-21,8 14-13,6 63-20Д 43-41,7.

,'.'-■.' .". ',';-■ ■■'■■. -:Таблсса 7 ; Состачнае: зоны геддахида при оСработхй доноров

. различны» гонадотрозгнама (о-*) '

• фСГ. .'

Состачнае зоны: : СНЕС' ГрО^'ОЛ-'

у.,-геиагаяа.'. : ■ :тропзн ; тросиа;.-; ДОН

Цссдедоваво .* эмврошоа •' Состоднае зовы:

232. ; ' 477 103 - . . 314 - 103

дЙэриаи!?*' 223-96Д 459-96,3 100-37,1 300-95,6 103-100 круглая,с тре-..

дгиоа

'неправильной' ¿эре!

5-2,2 «,2 1-1,0 8-2,5 4-1,7 12-2,5 2-1,9 6-1,9

- -

Значительно чаде гстргчалссь такое отклонение ст нор.®,' как наличие внезмСрповального клеточного г^атераала - стдэль-ннх бластомеров, их фрагментов или ггтсплаз;.« в перааятедст-новом пространстве. Этот дефект наблэдали в среднем у 52,В* смбрзонов. Колебания ао группам составила от 44,7л в группе фолликотрегхина до 65,- в группе гроФоллона (таОл. 8), .

Таблица 8

Состояние клеточного комплекса я нашгпе. вклкненлй в перл bu теллиновом пространстве (ъ-%)'

Состояние эмбрюна : зсг

: СЖ : ОСГ-л : фаллкко-: : : трепан ; фОДЛИ-тропкн :грофол- 1ЯОН

Исследовано __

эмбрионов 142 320 ■ 76 ■ 201. 35

Внеэмбриональный

довтиишк _ _ _ ___

риал 78-64,9 154-48,1 34-44,7 120-59,7 -23-65,7

Комплекс рмхлый, •

с частичным разрушением 10-7,0 23-7,2 7-9,2 26-12,9 4-^1,4

Реаашее значение для жизнеспособности зародыша акеет состояние клеточного комплекса. Большинство эмбрионов, досгкгаих стада я морули, имеет компактный клеточный комплекс. Ослабленае связи между йластомерама - свидетельство значительных дегенеративных изменений, происходящих в зародыше. В нааих исследованиях рыхлый клеточный комплекс с частичным разрушением бластоме-ров встречался в среднем у эмбрионов. Существенных различия по группам доноров здесь не выявлено.

3,3. Качество эмбрионов в зависимости от физиологического . состояния коров-доноров

В опыте использовали 22 кланачески здоровых (по результатам ректального а вагинального исследований) коровы-донора, -

Супероэуляшт вызывала обработкой яявоткых фоадикулости-ыулзрупщм гормоном. Извлечение эмбраочов проводил;! на 7-й день астрального цикла доноров.

О состояния слизистой оболочка матки судили по раствору Двдьбекко, использованному для промывания рога матки.Мутность раствора определяла по. коэффициенту экстинкции, измеряемого на'фотоэлеятрокалорЕмет^е-иефелометрв.

Помутнение раствора считали признаком скрытого эндоме^чм ■ та, поскольку, в таком растворе наблюдалось большое кодачег.*:и.> лейкоцитов в апителиалькик клеток зндо^трпя. Если йромьетп^ раствор бил прозрачным, то это указывапо на отсутчтш* иа?ол>-гпа эндометрия..

Всего Сило.промыто 40 рогов матка, который разделила на две гругшю;Г—о нормальным эндометрием, П - со скрытом эндометритом.- ЗГ корова-донора каздой группы устака^ивзлп число, гелпсс. тел; шизсалагеральнсм яичнике, ;число виштнх яйцеклеток, змбрвшосх и. морфологически нормальных эмбрионов на рог ма-шг.

Реадгия- супер-овуляции в обеях группах была одинаковой (6,1 а 6,3 ж.т. на епоплатеральнн2 яичник в I я И группах соответственно).

■Не выявлено существенных различий в количестве вымытых эмбрионов в X в П группах. Окнако качество энгбряонов во второй группе было значительно ниже.

В первой груше аор'/альянх эмбрионов извлечено на 30% бо-льле, чем во второД группе (4,4 а 2,4 на рог матки соответственно). Бо второй группе бало в 2,8-раза больше неоплодотворенных яЫе клеток, чей в первой (табл. 9).

■Дпк сравнительного изучения качества змОртоноз у лактиру-

лдих и выбракованных коров билк. п к обрата: дэвтррспы '«деотных, В I группу отбирала лактарушях коров, во П группу - коров, выбракованных вследствие значительного ышлсная молочной продуктивности, но не в свяэп с патологией органов размножения.-: Животных. обеих групп. обрабатывали :$оллакулостгмулярушеы гср-мсном.для рызиваная. суперовуляша. .* ' . . ■ .

■.... г. '.Таблица 9

Качество 7-дневнш: эмбрионов;а зависосста от . ■ состоялся зндшетрая доноров ■ - .

Показатель

Состояние эндометрия пс.показатеяю-лразрачностй прошеной: срсды .*■ -

прозрачная, : мутная.

Просто регоц матки 20 . 20 Коэффициент поглощения

света 0,27 .. /0,55 Ьаггкто змбраоаоБ ¿а. рог ■

катка . ■ 6,0+0,4 5,41р,6

■ аз нгх: '.'.■'■''', -."'.■ • "

нормальные 4,4^0,5 . ' * 2,4+0,6.

дегенеркрованные 0^8^0,2 0,8+0,2-.'

не оплодотворенные ,

яйцеклетки 0,6+0,2 .2,2+9,4

Установлено, что качество зародышей у лактарушях коров шше, чем у выбракованных (табл. 10),

" В группе лактирупшах коров-доноров 'больше было морфологически нормальных эмбрионов (5,9 пропяв 3,5). и,меньше кзеадздо-гворенннх яйцеклеток (1,3 против.1,9).

0 3.4. 3>1)фектишость пересадки свежеподученнцх

- и заморикекно-оттаяннкх эмбрионов . .

В налах исследованиях било пересажено 116 се&екх я 236

заморохенно-оттаяншос эыбрашов; санхронизироданвш телкам-ре»

дапиентам. *

; •. ^ ^ , . Таблица 10

,^3$фектзвность аспользоБаняя1 лактарузждх а 'гибракоазякых ■ ^ норов з качестве , доноров эмбрионов-" - .

показатель

; Норош-доясЕн

лактгруясие'выбракованные.

Обработано азвотнкх ", : ■, 23 ^ - л . ,. ¿1

Реагировало стпер-ову- ■■-■■■■■'■■■■•■■■■■'■

ЛЯ^еЗ <2-?) v. I5-J32.6 • • • 16-76,2

Чзсдо;ов7^Епг-ва;;донора' ^ : '-1ГД±1(Г *'J ,v ■ 8»5±0,9

Извлечено 'эгрсл!Пе2 на до-- .'.v. ■ ■- ■ ■ ■ „. '

-ws^^-f^T.:^; ■ 8Д*Х,4.....• * ' : б,4*р;е ~

^¿з ----- --------* ■ •

' аирпальнйз:;."'--------Г.Т-, ;":5,9д1,1 ■'■' ■3i53pt7 ■

^¿еггаёрированнш..— - -0,5^3,3 ' - : '

нзоплодотворенных — ' " ■ "-.

яйцеклеток It3fO,E --г.vl-,9±p;5 ' '.

■ -

Изучала влияние типа гопадстропина, стадии-развития и„ка~

->. - ' и " - . -

чества*1смдд: оноз на прегквляемость после нехпрургг чёской, серо—

саза.", -с- „■

-Установлено, что-пересадке свегах эмбрионов^ получен-

НЫХ-ОТ'дойорсв,- обработанных С2Е,' граждвляеуость составила:

45,5*. При использований 5СГ для; обработки; ксров-донеров прв-

жвллек-сгь сэежах.эмбрвоног-состзтда в среднем- т.е.

.ва tût .чеи.в-грзрде C2S. Пр>, среза енмтрех препаратов

--SCT. установлено, -что наабольхая срзяззляемость свежих экбрио-

'нов подучена г групде доя'оров, обработг-кгых амерйканскгы препаратом - £2,8*. Прй .обработке доноров фоллзкстрсизном. ' про-жаадаемостъ эмбрвоноа бши несксдько назте :£54«5 и.48»в? соответственно, табл. II).- .

Эффективность пересашк эгморслеико-оттаяшшх эмбрионов в аелш Сала ягге. В группе" СЗ одэ составила S,осталь-

ных трех ггуг"»т ее выявлено суп^стьекных разлог в гра^ивля-

- 2Э -

емостя змбра ояов, При обработке дсноров 5СГ в среднем ярияаэ-ляемость змСрюнов была вз 8,? гаке (39,1%) по сравнения с СЕК,

Таблица II

Прсжавляемость экгрсопов про обработке доноров' различный: гонгдотрсшнаки

* : ссг.

Показатель . : СЕК ! ^^Г^оллатропан

Пересажено эмбрионов Число рецппаентов Стельных ретапаентов Стельеость, %

Пересажено эмбрионов Число решдзентов Стельных рецензентов Стельность, %

Свежие эмбргова

12 45 II 41 ...

II 43 II 41

5 27 6 20 '

45.5 62,8 54,5 48,6

Зг>ыоракенно-оттаянные . . эмбрионы-

57 73 31 54

57 72 31 53

16-28 12 21

31.6 33,9 38,7 35,б

Пргвзученпа влияния етщща. разЕатсд зкбраона на пряжа в-ляемость не выявлено существенных различай в лраяаьляемэстз

иорул а благтошст (табл. 12).

Так, про пересадке свежих моруд стельность с ост -а 52,8^, йластсшст - 56,1?. Прнкавяяемссть заморог.енк о-с иалн-ных моруя а бластоцаст Сала виге.и состашла 35,9 а 37,8:? соответственно.

Качество зародышей оказывало существенное вяаячае на эффективность пересадки. Так, при пересадке 28 свежгх :>:.:; раонов отличного качества стельность составила 75Я. Свежие эмбрионы хорогего качества дала 54,8$ стельности, удовлетворительного -39,5* (табл. 13).

• ; Таблица 12

' Прпжявляемость эмбрионов в зависимости от стадии развитая

.Показатель : Цорулы | Етастоцксты

Свеяие эмбрионы

Нереса-кено эмбрионов75 ; 41... ..

Число реципиентов 72 41

Стельных рецяанвнтов 38' 23 ■

Стельность, X ■ 52,8 56,1

. ■ Замороаенно-оттаяннпе

. эмбрионы , ■

Пересажено эибриокоь "79 "157

Число реципиентов- ■ 78 ; * 156 "

Стельных реципиентов . ' . 28 59

Стельность, % 35,9 -37,8.

' | . . Таблица 13

■ Пряжи вйяемость эмбрионов в зависимости от их качества — ■

Качество эмбрионов

:онов :тов • %

Свеяае эмбрионы-

Отличные: 28 ■ 28 21 . 75

Хороши2 . 43 • ■ 42 " " 23 54,8

Удэглатвор: тельные 45 43 . 17 39,5

Заморгаенно-оттащпше

■ эмбрионы ■.

Отличные 27 27 13 48,1,

Хорошие ' 126 126 50 39,7

Удовлетворительные :83 .81 ■ ' 24 29,6

После'пересадка заморогенно-оттаянных эмбрионов наблюдалась тл ге закономерность злиякая их качества на последующ'® дриз21в,-тз«ость. Процент стельных' рециклентов снижался от 43Д' пересадке отличнме эмбрионов до 29,6 - при пересадке удо-а .-лс-творительнах*

Татаи суяаог»ук=г рекспенд&чгг о ксосхссдаоотя

Згатыеать'щчзствекявй cosías э^брпсков прг прогнозировании 'результатов трансплантации с несо:.згеннсстм; псдТЕердя^сь.Пр« этои оказалось небезразличны;.:,. на £оке какого Сиостк.гуляторя получена'cyzepoBS'JKs:«'декоров. На^лутве результаты со при-ЕЛяе^остг эг^бр^онсв получены: с }СГ-с ■ (CZA).

■■.• ; ■ шзеи

I; Уровень суперевуляги керез-донорог 5~бр^онсв находится ' з теской aaEícr.J.íccxn' ст типа пре^иехсго гонадотрспгна» Препарат обеспечивает ка UtZ ссльэе огулен ччи стандартный препарат CíX. ;

2. Еыхог нереальные эмсрпспов, годных для пересадке, составляет около 5 ка донора etc использовании 5GT-3 (С1!1А) в значительно ЕИ^е ere использовании СЗГ (3,3.на донора), Препарат

■ ЗСТ" - rpo-*GJLiCH по СЕоег.г; биологического д&2стви» достоверно уступал SCT проезвеаства CEA»

3. Отличных, Сезупречкшс в м opj ол сгн че скок стнозенки ям С— рконсв было Сольае з группах зз'.вотных, обработанных препаратами ОСГ-п (США)-и фолдикогротнor,s (4CSP) - 33*; СЛС- 25*;*ол-лптродансм - 19*, гро$сллснсм - ей.

4. 7дакетр зоны . пеллшида :.:орул к рзннид t--i*srt:"CT. пь:е-ет одинаковые размера г составляет окаю ISO тле,;. Нс-.плодотво-ренная яйцеклетка к'7-дкевнс:/7 сроку подвергается д-зтруктпг-ним изменениям,. что приводят к колебаниям диаметра еоку. £па-íjs^ клеточнего комплекса дегенерирсванкых ■ заредаг*. г нарьиру-ет'в зависимости: от.характера деструктивных изменений.

-5. Качестьо пронаснсй среди отражает состояете эндокет-

put. Среда с мутноетьп 0,55 ед. Е свидетельствует:о знача те льнах варузегаях воспроизводительной гункцаг, что отражается на качество эмбрионов* Нормальных эмбрионов у доноров с прозрачной средой (0,27 ед.Б) получено 4,4 против 2,4 - смутной

(0,55 ед.Е); неоолодотвореншя яйаеплеток - 0,8 против 2,2 со* - ' ' >

ответственно.

6.,Пражявяяемость эмбрионов после пересадки зависит от качества эмбрионов в та па гонадотропана, используемого при обработке донороз. Наишсзая дряавляемость свежеполученных эмб-. раонов била при использовании ФСГ-о (СНА) - 62,в£ я наа^ньаая . - пра обработке ГСТК - 45^5Й.

ПРЖШЕСЖВ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для гормонального вызывания суперовуляпаэ у коров-доноров рекомендуется использовать гипо$азарные препараты ЗСГ-п (СНА)й $оллакотропин (ЧС5Р) и фсииштропан (СССР), которые а настоящее гремя в основном удовлетворяет требования, предъявляемые к го» надотроюнам такого рода.,

Оценивать мутность. промывной среда в качестве показателя состояния эндометрия у используемых доноров, влияшего на выход пригодных к пересащее эмбрионов.,

'!.'".' .."■ По теме диссертации. опубликована работы:

I. Баяиев Н.Т., Макуковская Г.С. Применение простаглаади-нов для синхронизащи астральных циклов телок-рецидаентов при ' транепяантаяиа эмбрионов //Резервы увеличения производства сельскохозяйственной продукдаа. - Оренбург. - 1990. - C.I4.* . V 2. Мацуковская Г.С. Уровень сусерояудядаии качество эыб-ряоиоз в зависимости от типа гонадотрозана //Йроблемы развитая

биотехнологии в тавогноводстве. - Дубровада. - 19У0, - С.56-57. '"V' ■■■,.■'■■?'' ^ '

-3. Мишукогская Г,С. Качество эмбрионов крупного- рогатого скота при вызывании: суперовуляции различныма гонадотрошнаьш; // Вопросы интенсификации , животноводства. Белл. научных работ ВМа. - Вал. 101.Дуброваш. - 1991. - С.50-54. '

Подписано к печати 11.03.1991 г. Заказ 652с

Тираж 100 экз. О&ъем 1,0 уч,^ кзсь л?