Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Цитоморфологическая оценка ранних эмбрионов крупного рогатого скота, полученных при использовании разных типов гонадотропинов

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Цитоморфологическая оценка ранних эмбрионов крупного рогатого скота, полученных при использовании разных типов гонадотропинов"

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА (ВИЖ)

На прозах рукописи

Мишуковская Галина Сергеевна

ЦИТОМОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА РАННИХ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ПОЛУЧЕННЫХ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РАЗНЫХ ТИПОВ ГОНАДОТРОПИНОВ

03.00.13. - Физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

п. Дубровины Московской области 1991

Ракета зуаолнепе в отделе бпотвхналогпи Всесоюзного научпо-лсследовагельсксго зчеттута лшвотнозодстза.

Няучькб руководители: - доктор биологических наук.

профессор ".Я.Шахов;

- кандидат биологических кзух К.Х.Хебзбуллия

Официальные оппонента: доктор биологических наук, сро^ессор Ю.а.КишсгсзИ; кандидат биологических наук З.П.Рябьа.

Ведушее учреждение: '.¡ссксЕскгя Еетэринарная академия

а 020.16.02 хГиЛ Всесоюзном ньучло-псследоъательском институте ззлотноводстаа.

Адрес гнетагуте: 142012, Московская область, Подольский р-н, пос.Лубропгяь'.

С дгесертулей ыогло ознакомиться г библиотеке института.

Защита диссертации состоится^^£1991

'¿V " час. на заседлшм спеткзлизирсБ Совята

Автореферат разослея "

1291 г.

УченыЗ секретарь саецаадкзлрова:шого Совета, панледат биологических наук

.II .Шмнгиь

I. СЕДАЯ ХАРАКТЕРЛСТМА РАБСЩ

1.1. Актуальность темы

Интенсификация племенного дела в животноводстве является одной из актуальнейших задач сельскохозяйственного производства. Мировой опыт показывает, что система воспроизводства высокоценных производителей все чаше и чаще прибегает к новой технологии искусственного разложения - трансплантация- эмбрионов.

Такие широко известные флрш, кик "Гранада" (США), "Бритиш Лайвсток" (Англия), "Альберта Лайгсток Транспланг", "Виа Паке" (Канада) осуществляют производство эмбрионов крупного рогатого скота., их депонирование, транспортировку и пересадку в самых различных зонах земного шара.

В нашей стране так:е накоплены значительные материалу по трансплантации эмбрионов у сельскохозяйственных животных. Наиболее эффективно велись работы по пересадке эмбрионов во Всесоюзном НИК животноводства, БЖИРГЙс, НИИ! Лесостепи и Полесья УССР, Эстонском ШИ животноводства, в ряда развитых хозяйств -госЕлемзазодах "Заря коммунизма" и Петровское" Московской области', "Червоный Зелетень" Харьковской области, колхозах "Со-ветскея'^Лбруссия" Брестской области и "ТерЕете" Латвийской ССР.

Метод пересадки эмбрионов позволяет значительно повысить эф'.е^тц^ность селекции коров, оценивать их по качеству потомства, ускорить темпы селекции.

При целенаправленной и хорошо организованной работе ука-з&ЙШа методом-Получат* высокоценных сыков-произзодателей дая

станций искусственного осеменения от высокопродуктивных коров.

Вмести с тем не все вопросы в технике эмориопересадок могут считаться решенными. Наиболее сложными и требующим! скорейшего разрешения являются вопросы гормональной стимуляции допоров с целью повышения количества и качества вымываемых эмбрионов.

Известные способы гормонального вызывания полиовуляции у коров-доноров остаются неэффективными в среднем для 30% животных, при этом индуцирование высокой степени множественной овуляции отрицательно сказывается на выходе нормальных эмбрионов. При этом снижается индекс оплодотворяемости яйцеклеток, увеличивается число дегенерированных эмбрионов. Высокая вариабельность, непредсказуемость реакции яичников на гормональные препараты, проявление отрицательных свойств (отсутствие оплодот-воряемости яйцеклеток, высокий процент дегенерированных эмбрионов и др.) снижает надежность известных методоз. Поэтому изучение наиболее вероятных факторов, оказывающих влйянир на количество к качество эмбронов, а также на их пригивяяемость при работе в условиях ферм, имеют большое теоретическое и практическое значение.

1.2. Цель и задачи ¿сследэваний

Целью настоящей работы било ззучекие качественных изменений эмбрионов крупного рогатого скота а эффективности их вымывания у доноров при использовании различных типов гонадотроп-ных препаратов.

Поставленная цель исследований решалась по следующим этапам: •

1. Сравнение эф:.-ект2Еностг. стомуллрупдего действия разных типов фолликулостзмулнрунцйх гормонов отечественного и зарубежного производства и гонадотрсшна С2К на воспроизводительную систему сачок крупного рогатого скота, полиовуляцию и качество эмбрионального материала.

2. Изучение морфологического состава эмбрионов коров, полученных после воздействия гонад отрданыж гормонами в условиях подбора групп клинически нормальных доноров и с различными отклонениями от нормыо

Зо Изучение приживляемости эмбрионов разного качества и пра разном способе хранения.

1оЗ. Научная новизна работы состоит в том, что впервые на болыом систематическом материале изучено влияние на качество эмбрионов крупного рогатого скота различных типов фолликулости-мулируюцих гормонов (ФСГ-п, фоллитргашн, фолликотропик, грофо-ллон) и гонадотропина СЖ. Дано цито-морфологическое описание эмбрионов, полученных при использовании разных гонадотропинов и при разноги клиническом состоянии коров-доноров.

1.4. Практическая значимость работы заключается в определении эффективности использования гонадотротных препаратов отечественного и зарубежного производства при трансплантации, факторов, влияющих на качество и приживляемость эмбрионов.

1.5. Апробация работы. Основные положения диссертации до-логеаы на:

- ежегодных конференциях лаборатории воспроизводства и трансплантации эмбрионов с.-х. животных БаяШШЯК (1987-1988);

- научно-методических конференциях Центра трансплантации эм-

ОриснОЕ с.-х. .тлвотных КХа (1989-192С гг.).

1.6. Объем дз^оты.Диссертация изложена на 25 стра-шгах уаяинош'.ского текста, содержит 14 таблиц, 10 рисунков, состоит лз Еведанпя, обзора литературы, результатов собственных

исследований, обсуждения, выводов, списка литературы, вкмла-

юсего 152 источника, аз них 112 лнострадпкт.

2. МАТ2Е1А/ТУ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в отделе биотехнологии Всесоюзного К/П! животноводства, центре трансплантации эмбрионов К^в, учхозе Михайловскоз" Тимирязевской сельскохозяйственной акадэ-май, совхозе "Степановсклй" Благовещенского района и колхозе г:л.К.Маркса Федоровского района БамарскоЕ АССР.

В качестве доноров эмбрионов ¿спользозали 229 коров черно-пестро?. породы 4-7-легного возраста с молочной продуктивностью не ниже 6000 кг молока и телок случного возраста от высокопродуктивных матерей.

Для гормонального вызывания полиовуляции использовали препарат С2К (фоллигоа) в доза 2500-3000 11Е и глхофазарныэ препараты ОСГ: 2СГ-П а дозе 36-42 иг. фолликотропин (ЧС5Р) - 480600 ЙЕ. фоллатропин (СССР) - 12С0 5Д и грофоллон (СССР) -

1000 :з.

Коров-доноров осеменяли двойной дозой спермы дважды в день с интервалом 12 часов на протяжении всей охоты.

Эмбрионы извлекали яехирургическим способом на 7-й день посла первого осеызнения.

После Еымывания оценивала прозрачность промывного растЕО-ра и по этому показателю судили о состоянии эвдоыетрая коров-

доноров. Прозрачность промывной едкости определяли по коэффициенту светояропускгкпя, измеряемому ка фотоэлектроколоркметрэ с использован::e.v. красного светофильтра (Л =210-640).

Качество эмбрионов оценивали визуальным морфологическим способом, используя 'лкалу оценки, разработанную f K5Ze. В качестве дополнительного критерия оценки измеряли линейные размеры зародышей. Определяли диаметр эмбриона, стригителлиново-го пространства и тол^;:у зсны пеллюцлда, а так^е диаметр клеточного ко:.з!Л5кса. ' .7;орфслсг::-:есксму анализу подвергнуто II2S эмбрпокоЕ.О качестве суд.".ли по корТ>слоггчеСК2М признакам с учетом стад:".!", развитая, правильности формы, целостности прозрачной оболочки, равномерности дробления бластсмеров, состояния цитоплазмы.прозрачности перпЕНтеллппоЕОГо пространства и наличия в нем включений.

После оценки качества к выбраковки непригодных для пересадки, нормально развитые зародыш пересаживали либо в свежем состоянии телкам-реципиентач, либо замораживала для длительного хранения., ._

Замораживали эмбрионы ь соломинках с криопротектором глицерином в 1,4 1& концентрации на программном замораживателе УСС-

I и 2 (Харьков).

Для изучения качества эмбрионов при различном клиническом сострив доноров,отбирали лактирувдих .тавотных и коров, выбракованных вследствие значительного снижения молочной продуктивности, но не в сеязп с патологией органов размножения.

В качестве реципиентов использовали телок в возрасте IG-18 месяцев с живой массой 350-380 кг.

3. РЕЗУЛЬТАТУ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Морфологический анализ 7-днев:5ых эмбрионов крупного рогатого скота

В наших исследованиях морфологическому анализу подвергнуто 1229 эмбрионов, вымытых на 7-й день эстрального цикла коров-доноров. Учитывали состояние клеточного комплекса зародышей,ра= вномерность дробления Сластомеров, прозрачность перивителлико -еого пространства, целостность зоны пеллюцида. Посредством морфологической оценки отбирали не оплодотворенные яйцеклетка эм брионы на разных стадиях разввтия.

Всего получено 269 несеигодотзоренк:« яйцеклеток влг 21 от общего числа зародалейс ^асть из них проявляла внешни;», признаков дегедерадии, Они ймзлй гомогенную цитоплаз;.у: прозрачное перевйтеллиновог пространство« Однако в морфологии большинства яйдектеток наблядалась отклонения от нормы. Дегенеративные изменения не подчашлкеь каким-либо правилам. Часто наблюдались следуидие явления: растягизакле зоны пеллюцида, ее деформация, разрулзние цктоплазматаческой оболочки, выход цитоплазмы в перивителлиновое пространство. Фрагментарный распад цитоплазмы приводил к образованию псевцо'ластомеров. У некоторых неоплодотворенных яйцеклеток цитоплазма смещалась к одному из полюсов (отлеживалась) и внешне они напоминали раннюю 7-сутсчную сластоцисту.

Стадия развитая оплодотворенных яйцеклеток определялась количеством Сластомеров. 126 эмбрсоков (10,4£) сильно отстава-5 своем развитии (2-8 йластомерные эмбрионы) (табл. 1).Все

оти г^бркони проявляли признак: дегенерации. Оке и:.-ели сморщенные, неправильней тор:.^ сластомеры с разрушениям или Сольны ксличестьо.'.: плаз:.:: в периЕПтеллинсЕОм пространстве.Наб-

нарушение с?,яз;: сласто;.:ера.".2:, дефекты зоны

пел.-.:г:пдг.. Чаете д е г е н с р;:гс ьанкые з:.-Срноны имели ыеправллънув хорг.-.- (плеские, свальное, треугольной или яйцевидной $срг.к).

Таблица I

Стадия развития з:.-ср:?о:-:оъ при ЕЫ^иваниг. доноров на 7-Г. день ь с трального гхкла

хя иазк'тия

Число З.'-'бПЛОНОВ

%

Исследовано зародыше;': ^ Т С!/ 41* СГ5 ? 2--клеточные 4-8-."детсчные ;.1орулы: тзаккие поздние Етастоцпеты: ранние поздние

Неоплодотворенные яйцеклетки

1229

109

39 359

394 42

269

100

'1.4' 8,9

3,2 29,2

32,0 3,4

21,9

Больппнство зароды2е£, извлеченных :-:.? 7-й день :^::ла находились на стадии поздней корулк и ранке П бластоцпсты (29,2 и 32,1л соответственно).

Нереально развитая корула представляла собо£ плотное ско-плеййе клеток. Еластомери четкие, прозрачные, распслсзеи: симметрично. Перивителликовое пространство свободно от гранул z включений, зона пеллщцда округлая, без тредпн и сколов. На стадии ранней бластоцисты наблюдала начало образования трофо-

бласта и эмбриобласта, формирование бластополости.

Поздняя (экспандированная) бластоциста характеризовалась отсутствием перивителлинового пространства, расширением блас-тспслости. Клетки трофобласта четко выражены, Эмбриоблает округлой формы в виде компактного скопления клеток.

Частично нормальные эмбрионы возникали в том случае, ес-лз рядом с зктакткыма, способными к развитию клетки появлялись дефектные бластемзры. В стадии морулы дефектные клетки мокно было уверенно идентифицировать. Ски пояелелись как внеэмбрио» .калькой клеточны:! материал и поэтому всегда лежали вне клеточного скопления интактных бл&стомероз. Эмбрионы, имевшие 1-2 выделенных бластсмера, оценивали как "хорошие".

Зсли наблюдали значительное количество выделенных клеток. ;:.:срнсн зелтчь." "удовлетворителы;с". ^ля та!о!х эмерио-

нов были характерны солее пли менее объемные скопления плазмы е перенлтедлиновсм пространстве - следствие клеточного распада. Иногда наблюдала деформацию зоны пеллкцада, грешны, сколы.

су.'^локы, зсграктеризугсявся нарушением связи между блас-томерамн, ппккозоы части бластомеров, оценивали как "условно-голные". У них часто набл&лалк дефекты зоны пеллицида. У бла-стоцист трсфсбласт был трудно различим на фоне клеточного ко-•,т.-Л;7.2а, селасг деформирован.

Если дегенеративным изменения!.! было подьергено более 50% елаотомеров, эмбрион считали непригодным для трансплантации. Сгенерированные эмбрионы характеризовались нарушением связи лластомерами, распадом клеточного ко?,:плекса. ПернЕИтел-дсостракство было заполнено разрушенными бластомерами.

"ног-да- наблюдали разрыв зоны леллгег.да с частичным выходом клеточного комплекса.

Анализ качества зародышей показал, что более продвинувшиеся в своем развитии эмбрионы имели меньше отклонений от нормы. Так, если процент отлцчннх эмбрионов на стадии морулы был равен Нг,1:.,_ то- среда, бластоцист было уже 30% зародышей отличного качества (табл.< 2)На стадии поздней бластоцисты 76,2/5 эмбрионов была отличного качества я совсем не было условно-годных и дегенерарован;шх._ Число ранних морул в наших исследованиях было очзяь незначительным (п = 39). Все они проявляли существенна .огрэзнакй д-станерация (распад клеточного комплекса) и были радованы после оцедкя

Таблица 2

•Качество эмбрионов в зависимости от стадии разштия

Качестве эмбрионов

Стадия развития

' ~Шрут

растопи сты

Исследовано эмбрионов......* 398

из них (а-%):

- отличные 44-11,1

- хорошие 172-43,2

- удовлетворительные 88-22,1

- условно-годные 40-10,0

- плохие 54-13,6

435

131-30,0 218-50,0 51-11,7 23-5,3 13-3,0

При оценке качества зародышей учитывали линейные размеры поздних морул и ранних бластоцист.

Не обнаружено различий в среднем диаметре эмбриона и пери-внтеллинового пространства у морул а бластоцист, пригодных и нрпригодных для трансплантации. Диаметр клеточной массы у нормальных морул был достоверно меньше по сравнению с дегенериро-ванными (табл. 3).

Таблица 3

Линейные размеры эмбрюнов

Показатель

Морулы поздние

нормальные:дегене-:рирован-;ные

Бластоцисты ранние

отличные

хорошие :удовлет-гворитель-:ные

Всего эмбшо-

нов 14 10 12 8 8

Диаметр эмбриона 158+2,5 157+1,8 160+1,4 160+1,4 159+2,3

Диаметр ПШ 134+1,7 135+1,4 133+2,0 133+1,3 135+1,8

Диаметр клеточной массы 110+2,1 118+2,3 129+3,1 126+2,8 116+2,3

На стадии ранней бластоцисты набладали некоторое уменьшение диаметра клеточной кассы у эмбрионов удовлетворительного качества по сравнению с отличны;® и хорошими.

Диаметр неоплодотзоренных яйцеклеток колебался в наикх исследованиях от 158-176 мкм. Толщина зоны пелляцнда составляла 14-16 мкм.

3,2. Уровень суперовулядаи и качество эмбрионов при обработке доноров различными гонадотрош-шаш

Сравнительное изучение отечественных и зарубежных гипофк-зарных гор,гаков и СЖ проводили на 229 коровах-донорах черно-

пестрой породы. СЖ вводили на 10-12 день астрального цикла в дозе 2500-3000 1'Е однократно. Обработку гнпофязарными гормонами осуществляли по 4-дневной схеме, начиная с 8-10 дня цикла. Суммарная доза $СГ-п (США) - 36-42 мг, фоллпкотропина (:1С4Р) -480-600 ИЕ, фоллитропика (СССР) - 1200 ЕД и грофоллона (СССР) - 1000 ИЕ.

Эмбрионы извлекали нехкрургическам способом на 7-й день -геле первого осеменения.

Установлено, что при обработке гснадотроппнсм ОС, число животных, реагировавших суперогуляайег! было меньзе (7£,7?), че:.: при обработке пшо1изаркы.\з: препарата'« (в среднем 87«) (табл. 4).

Таблица 4

Уровень суперовуляции и еыход эмбрионов в зависимости от типа гонадотропина

Показатель : С2\ 0 • «•и!

: }СГ-п слли настроил н : *оллл-; : тропин: грог ол-лон

Обработано коров 59 65 21 63 21

Реагировало суиер-овуляппег (п-1) 47-79,7 59-93,8 18-85,7 53-84,1 18-85,7

Полс^тельних пс из влечен:: я э !.:б-рпонов (п-*) 44-93,7 58-98,3 16-38,9 53-94,3 15-83,3

Число овуляций на донора " 7,9+3,6 10,2+3,9 8,1+3,8 8,2+3,7 10,1+0,7

Поручено змбк:о-нов" на донора 5,3+3,6 8,5+1,1 6,4+1,3 6,3+0,7 6,9+1,4

из них:

нормальных 3,3+0,4 5,7+3,8 4,8+3,1 4,0+3,5 2,3+0,5

дегенешро-вакнкх" 1,0+3,2 0,9+3,2 3,8+3,6 1,0+3,2 1,7±0,7

неоплодотворенных яйцеклеток I,0+0,2 1,9+3,3 0,9+3,4 1,3+3,2 2,9+0,9

При сравнении гипо^азарных гормонов различного производства, число реагировавших зявоткых было наибольшим в группе £СГ-п (СЛА) - 93,8:2. В остальных трех группах этот показатель был примерно одинаковым (84,1-85,7*).

Уровень суперовуляции был максимальным при использовании ХГ-п (СЛА) и гро£оллона - 10,2 и 10,1 овуляпий на донора.Дос-товерно ниже число овуляик2 - в группе С1К - 7,9 (? / 3,31).

Наибольшее число эмбрионов на донора получено при использовании американского препарата -5СГ-п - 8,5. .Минимальным этот показатель был при обработке доноров СНК - 5,3. Здесь разность

была достоверной (Р {_ 0,05). Остальные три группы занимали промежуточное положение (6,3-6,3).

По количеству нормальных змбрноноз преимущество такке имел американский препарат - 5,7 на I донора. При использовании фоллпкотропина и фоллитропина этот показатель был несколько ниже - 4,8 и 4,0 соответственно. Упнамальное число нормальных зародышей 2,3 получено при обработке грофоллоном. 2то связано с большим числом неоплодотворенных яйцеклеток п дегенерн-розанпых зародышей у навотных, обработанных грофсллоном. При использовании СЕК получено 3,3 нормальны:-: зародыша на донора, что достоверно 'меньше, только в сравнении с американским препаратом (Р / 0,01).

Исследовала стадии развития эмбр;:оков у коров-доноров,обработанных различными препаратами. У доноров всех 5 групп на 7-й день цикла эмбрионы находились на стадии развития поздней морулы и ранней бластоцисты*. Лишь небольшое число зародышей достигло стадии поздней бластоцисты. Отмечены некоторые разли-• чия в соотношении морул и бластоцист по группам. Так, у животных, обработанных фоллктроликом, извлечено больше морул (60,51? от числа нормальных эмбрионов). В группах ЗСГ-п и СлК при вымывании преобладай: бластоцисты (табл. 5). У доноров, обработанных фоллитропиком и грофоллсном порчено примерно равное число морул и бластоцист.

Количество поздних бластоцист было очень незначительным к колебалось от 9,2 (фоллпкотроплн) до 0 (грофоллон).

Таблица 5

Стадия развития эмбрионов

/.пр

Показатель С2{ - ITi *f'w»i е гкотоо-;ппн' :фоллн-:тролли irpoi' : .зон 1

Исследовало эмсрпоное 142 32j ■ го ¿01 35

из них:

моруль! поздпзе 53-37,3 123-40 46-50,5 58-43,4 19-54,3 бластоцисты

- ранние 85-55,9 166-51,8 ¿3-30,3 98-42,8 16-45¡7-

- поздние 4-2,8 ¿6-3,1 7-9,2 5-2,5

Оценка качества зародыше:: показала: наибольшее число высшего качества эмбрионов получено при использовании чешского и американского препарата ЗСГ (32,9 и 32,5^ соответственно). 7 доноров, обработанных грофоллоком, вьплыто лишь 5,7.? отличных эмбрионов. В этой группе получено больше дегекерирэзанных эмбрионов, по сравнению с другими группами (табл. 6).

Оплодотворяемость яйцеклеток была максимальной у донороз, обработанных фолликотропином (86,4%). В группах ССГ-п, фолли-тропина и СНК она существенно не различалась и составила 78,2; 79,9; и 80,6л соответственно.

Низкой оплодотворлемостью яйцеклеток выделялась группа доноров, обработанных грофодлоном. Здесь этот показатель составил 58,3%.

Морфологические отклонения эмбриона от нормального состояния были весьма многообразны и касались всех его структур.Изучали частоту встречаемости различных »дефектов у эмбрионов при обработке донороз СЕК и гипофиз арными гормонами.

Установлено, что тип гонадотропика не оказывает влияния

ка состояние зоны пеллщида. Вовсех грушах треднны зоны встречалась редко - у 1-2,5%. Низким сило число зародышей, имеэдих неправильную форму зоны пеллшида - 1,7-2,5* (табл. 7).

Таблица 6

Качество эмбрионов б зависимости от типа гонадотропина Сп-«)

5СГ

-¿-ЗСГВО о-:брпонов СЗК ФСГ-п :фолла-:котро-;пин : ролди- : : тропин : в • грогол-лон

Исследовано зародыпег 232 477 103 314 103

Нот?.:альннх эмбрионов 142-61,2 320-67,1 76-73,8 201-54 ,0 35-34

лл э них

отличные 35-24,7 104-32,5 25*32 у и 39-19,4 2-5,7

хорошие 72-50,7 150-46,9 31-40,8 112-55,7 23-65,7

уд оате творительные 33-23,2 42-13,1 16-21 42-20,9 6-17,2

условно-годные 2-1,4 24-7,5 4-5,3 8-4,0 4-11,4

регенерированных эмбрионов 45-19,4 53-11,1 13-12,6 50-15,9 25-24,3

Не оплодотворенных яйцеклеток 45-19,4 104-21,8 14-13,6 63-20,1 43-41,7 Таблица 7

Состояние зоны пеллхпида при обработке доноров различные гонадотропика'.а (п-%)

зсг

Состояние зоны пеллзахида СЖ | ФСГ-с ri.a-_v.KO-: :тропин ; Ьолла-тропин : гро^ал-: лон

Исследовано эмбрионов Состояние зоны: круглая, без деформаций 232 477 103 314 223-96,1 459-96,3 100-97,1 300-95,6 103 103-100

круглая,с тре-диной 5-2,2 6-1,2 1-1,0 8-2,5 —

неправильно?, ¿оркы 4-1,7 12-2,5 2-1,9 6-1,9 —

Значительно ча^е встречалось такое отклонение от норгы, как наличие ьнеэмбрпонального клеточного материала - отдельных бластомеров, их фрагментов или цитоплазмы в пери вителлинов ом пространстве. Этот дефект наблюдали в среднем у 52,8.? эмбрионов. Колебания по группам составили от 44,7л в группе фолликотрспина до 65,7* - в группе грофоллона (табл. 8).

Таблица 8

Состояние клеточного комплекса и наличие включений в перивителлиноЕОм пространстве (п-%)

Состояние эмбрлона

ФСГ

ФСГ-п : фоллпко-: йолли- :гро<Ьол-: тропин : тропи н :лон"

Исследовано эмбрионов

Бнеэмбрнональный клеточный материал

Комплекс рыхлый, с частичным разрушением

142 320 76 201 35

78-54,9 154-48,1 34-44,7 120-59,7 23-65,7

10-7,0 23-7,2 7-9,2 26-12,9 4-11,4

Решающее значение для жизнеспособности зародыша имеет состояние клеточного комплекса. Большинство эмбрионов, достигших стадии морулы, имеет компактный клеточный комплекс. Ослабление связи между бластомерами - свидетельство значительных дегенеративных изменений, происходящих в зародыше. Б наших исследованиях рыхлый клеточный комплекс с частичным разрушением бластомеров встречался в среднем у 9% эмбрионов. Существенных различий по группам доноров здесь не выявлено.

3.3. Качество эмбрионов в зависимости от физиологического состояния коров-доноров

В опыте использовали 22 клинически здоровых (по результатам ректального и вагинального исследований) коровы-донора.

Суперовуляцию вызывали обработкой зизотных фолликулостк-ыулирущпм гормоном. Извлечение эмбрионов проводили на 7-5 день астрального цикла доноров,

О состоянии слизистой оболочки матки судили по раствору Дшьбекко, использованному- для промывания рога матки.Мутность раствора определяли по. коэффициенту экстинкции, измеряемому на фотоэлектроколориметре-нефелометре.

Помутнение раствора считали признаком скрытого эндомекри -та, поскольку в таком растворе наблюдалось большое количег.ч-ьг.: лейкоцитов и эпителиальных клеток эндометрия. Если дргашм'^ раствор был прозрачны«, то это указываю на отсут'л-вг- иао;ол> гии эндометрия.

Всего было, промыто 40 рогов матки, который разделили на две группы^. Е —с нормальным эндометрием, П • ■ со скрытым эндометритом.. У коровы-донора кагдой групш усяачевлавалй число хелтых тел: еипсилатеральном яичнике, число вымытых >:Еде?ле:?ок. эмбрионов: а морфологически нормальных эмбрионов на рог ш-а-кй,

Реакция- супер-озулядии в обеих группах была одинаковой (5,1 и 6,3 ж.т. на кпеилатеральный яичник в I и П группах соот-ветстЕеннс).

Не выявлено существенных различий в количестве вымытых эмбрионов в I и П- группах. Однако качество эмбрионов во второй группе было значительно ниже.

В первой группе норлальных эмбрионов извлечено на ЗСЙ больше, чем зо второй группе (4,4 и 2,4 на рог матки соответственно). Во вторей группе было в 2,8 раза больше неоплодотворенных яйцеклеток, чем в первой (табл. 9).

Для сравнительного изучения качества эмбрионов у лакткру-

эдкх и выбракованных коров били подобраны две группы аН£С1кк~. В I группу отбирали лахтирухиих коров, во П группу - коров, выбракованных вследствие значительного снижения молочной продуктивности, но не в связи с патологией органов размножения. 1ивотшх обеих групп обрабатывали фолликулостимулирутам гормоном для вызывания суперовуляши.

Таблица 8

Качество 7-дневных эмбрионов в зависимости от состояния эндометрия доноров.

Показатель

Состояние эндометрия по показателю прозрачности промывной среды

прозрачная

мутная

Промыто рогов матки

Коэффициент поглощения света

Бымыто эмбрионое на рог матки

из них:

нормальные

дегенерированные

неоплодотворенные яйцеклетки

20 0,27 6,0+0,4

4,4+0,5 0,8+3,2

0,8^0,2

23 • 0,55 5,4+0,6

2,4+0,6 0,8+0,2

2,2+3,4

Установлено, что качество зародышей у лактируюспх коров шао, чем у выбракованных (табл. 10).

В группе лактируицих коров-доноров больаг Сило мсргслоги-чески нормальных эмбрионов (5,5 протиЕ 3,5) и меньше г.е оплодотворенных яйцеклеток (1,3 против 1,9).

3.4. Эффективность пересадки свежеполученных и заморикепно-сттаянных эмбрионов

В наших исследованиях было пересажено 116 свежих и 236 замороженпо-оттаянных эмбрионов синхронизированным телкам-реципиентам.

Таблица 10

Эффективность использования лактнруппих и выбракованных коров з качестве доноров эмбрвонов

¿ Нооовы-доноры Показатель ;-:-

лакт:: руилие : выбракованные

Обработано животных 23 21

Реагировало супер-ову-лялией (п-*) 19-82,Б 16-76,2

Число овуляцзй на донора П Д+1.1 8,6+0,9

Извлечено зародышей на донора 8 д 1+1 9 4 6,4+0.9

из них:

нормальных 5,9*1,1

дегекёрировакных 0,9^0,3 1 * ; ^

не оплодотворенных яйцеклеток 1,3£0р с I(9+0,5

Изучала влияние типа гонадстролнка„ стадии развития с качества змбрсонов ка приживляемое ть после кехпрургнческой пере« садка. .

Установлено, что дрк пересадке свежих эмбрионов, полученных от доноров, обработанных СЗС, приживляемоеть составила 45,5:?. При использовании 2СГ для обработка ксров-доноров пре-живляемссхь свежих эмбрионов составила в среднем 55,т.е.

на 1и£ больше, чем з группе С2Н. При сравнении трех препаратов 5СГ установлено, что нагбольгая пряживляемость свежих эмбрионов получена з группе доноров, обработанных американским препаратом - 52,8«. При обработке докеров фолллкстропином, прв-дивляемость эмбрионов била несколько ниже (54,5 и 48,соответственно, табл. II).

Эффективность пересадки зауорежеыяо-оттаянкых эмбрионов в аелск была ниже. В группе СЕК она составила 31,&%. В остальных трех группах не выявлено существенных различий в грп.тпЕля-

емостя эмбрионов. При обработке декоров iCT в среднем ярияав-ляемость эмбрионов была на 8,? еышс (39,13) по сравнению с СЕК.

Таблзгаа II

Пркзквляемость эмбрионов при обработке доноров различными гонадотропинаыи

Показатель • rrv • • « Iii 1 * * ни i —п ÎCT !фоллико-;тропин Гфоллптропик 1

Свежие эмбри оны

Пересажено эмбрионов 12 45 II 41

Число реципиентов II 43 II 41

Стельных реципиентов 5 27 6 20

СтельностьЕ % 45,5 62,8 54,5 48,8

Пересакено эмбрионов Число реципиентов Стельных реципиектоЕ Стельность, %

орморотекно-еттаянные омбри оны

57 73 31 54

57 72 31 53

18 28 12 21

31,6 33,9 38,7 35,6

При изучении влияния стадии развития эмбриона на прпннв-ляемость не выявлено существенных различи? в приа'-Еляемсстг.

морул и бластоцвст (табл. 12).

Tai:, при пересадке свезих морул стельность cocTin...--52,8^, бластоцист - 56,1$. Прикивляе.-.:ссть ззморс-ек:: -„:талн-ных морул и бластоцист была ниге и составила 35,9 и 37,8.? соответственно.

Качество зародышей оказывало существенное влияние на эффективность пересадки. Так, при пересадке 28 свег^х :морионов отличного качества стельность составила Свеат.е эмбрионы хорошего качества дали 54,8% стельности, удовлетворительного -39,51 (табл. 13).

Таблица 12

Приживляемость эмбрионов ь зависимости от стадии "развития

Показатель

Морулы : Еластоцисты

Пересажено эмбрионов •Число реципиентов Отельных реципиентов Стельность,

Пересажено эмбрионов Число реципиентов Стельных реципиентов Стельность, %

Свезете эмбрионы

75 41

72 41

38 23

52.8 56,1

Заморопеннс-оттаянкце эыбрп оны

79 157

78 156

28 -55

35.9 37,8

I Таблица 13

Приживаемость эмбрионов в зависимости от их

качества

Качество эмбрионов

:Переса-23-:чо эмбри-:онов

Число реципиентов

Стельных -Стель-тов :Л0ГЬ'

Отличные Хоролие

Уд звле т ео он т ; л ъкые

Отличные Хорсдие

Удовлетворительные

Свежие эмбрионы

28 28 21

43 42 23

45 43 17

Замороженно-отташшые эмбрионы

27 126 83

27 126 81

13 50 24

75

54,3 39,5

48,1 39,7 29,6

После пересади: замороженно-оттаянных эмбрионов наблзда-,-.:±гъ та закономерность влияния их качестг-я на последующей пгнжиЕлле^ссть. Процент стельных реципиентов снижался от 48,1 при перееме отличных эмбрионов до 29,6 - при пересадке удо-

гвогительних.

Так;:;/ с 'раз о.", с}-"зств;'?т-: г роксмекдачпг о ясссхсдимостг учитывать качественны;: состав эмсрпснов при прогнозировании результатов трансплантации с нессмкенносгы, подтверди ли сь.Прк этом оказалось небезразлична/, на zone какого биостимулятор* получена суперовуляцпя дснороЕ. Наилучшие результаты по арнжк-влдемости эмбрионов паслены с ЬСГ-п ÍСША).

1. Уровень суперсвул,—п:г. коров-доноров э.'.-брпонов находпт-ся з тесной зависимости ст типа применяемого гонадотрспина. Препарат ^СГ обеспечивает на I?Z больше овуляций, чем стандартный препарат C¿K.

2. Еыход нормальных эмбрионов, годных для пересадки, составляет около 5 на донора при использовании £>СГ-п (СЛА) и значительно ниже при использовании CZK (3,3 на донора). Препарат 5СГ - гророллск по своему биологическому действию достоверно уступал ÍGT производства СЛА.

3. Отличных, без ¿"Л речных е морфологическом отношении ямб— р.; оное было больше в группах животных, обработанных препаратами 2СГ-п (С5ЛА) - и фоллнкстрош'.ном (ЧС5Р) - 33»; С££ - 25%; фол-литроплном - 19,1, грофоллсном - 6Й.

4. Хдаметр зоны пеллшида морул и ранних с.-:-сгс;:7'зт имеет одинаковые размеры и составляет около ISO мкм. У/. .плодотво-ренкая яйцеклетка к 7-дневнсму сроку подвергается д'-итруктг.в-ным изменения!.:, что приводит к колебаниям диаметр; покы. Дг.ь-метф клеточного комплекса дегенерированкых зарод-;."./ варьирует е зависимости от характера деструктивных изменений.

5. Качество промывной среды отражает состояние зндомет-

рая. Среда с мутностью 0,55 ед. Е свидетельствует о значительных нарушениях воспроизводительной функции, что отражается на качестве эмбрионов. Нормальных эмбрионов у доноров с прозрачной средой (0,27 ед.Б) получено 4,4 против 2,4 - с мутной (0,55 ед.Е); неоплодотворенных яйцеклеток - 0,8 против 2,2 соответственно.

6. Приживляемость эмбрионов после пересадки зависит от качества эмбрионов в типа гонадотропина, используемого при обработке доноров. Наивысшая приживляемость свежеполученных эмбрионов была при использовании ФСГ-п (США) - 62,8^ а наименьшая - пря обработке ГС2К - 45>5*.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для гормонального вызывания суперовуляции у коров-доноров рекомендуется использовать гипофизарные препараты 5СГ-п (СНА.) „ фолликотропин (ЧСФР) и фоллитропин (СССР), которые в настоящее время в основном удовлетворяют требования, предъявляемые к го= надотропанам такого рода.

Оценивать мутность промывной среды в качестве показателя состояния эндометрия у используемых доноров, влияющего на выход пригодных к пересадке эмбрионов.

По теме диссертации опубликованы работы:

1. Баяиев М.Т., Ыигуковская Г.С. Применение простагланди-нов для синхронизации астральных циклов телок-реципиентов при трансплантация эмбрионов //Резервы увеличения производства сельскохозяйственной продукции. - Оренбург. - 1990. - С.14."

2. Миыуковская Г.С. Уровень суперовуляции и качество эмбрионов в зависимости от типа гонадотропина //Проблемы развития

биотехнологии в животноводстве. - Дубр спицы. - 1990, - С. 5657.

3. Мищукогская Г.С. Качество эмбрионов крупного рогатого скота при вызывании суиеровуляции различным гонадотроплнаш. // Вопросы интенсификации животноводства. - Билл, научных работ В'Жа. - Вып. 101. - Дубровацы. - 1991. - С.50-54. '