Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Цитогенетический эффект стресса и циклофосфана в клетках костного мозга крыс, различающихся по стрессореактивности

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Цитогенетический эффект стресса и циклофосфана в клетках костного мозга крыс, различающихся по стрессореактивности"

Со

"Санкт-Петербургский Государственный Университет

ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЙ ЭФФЕКТ СТРЕССА И ЦИКЛОФОСФАНА В КЛЕТКАХ КОСТНОГО МОЗГА КРЫС, РАЗЛИЧАЮЩИХСЯ ........................ПО СТРЕССОРЕАКТИВНОСТИ ,

Специальность; ОЗ. 00.15 - Генетика

Автореферат

-------- диссертации.на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

На правах рукописи

БЫКОВ С К А Я Наталья Владимировна

О

/

/

Санкт-Петербург 3996 г.

Работа выполнена на кафедре зоологии Российского государственного педагогического университета ии. А.И.Герцена

Научные руководители: доктор биологических наук.

профессор П.Я.Шварцман, кандидат биологических наук Н. В. Хайцев

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук

чл. -корр. РАЕН В. В. Худолей, кандидат биологических наук Т. К. Яковлева

Ведущее учреждение: Всероссийский Научно-исследовательский институт разведения и генетики Сельскохозяйственных животных РАСХН

Защита диссертации состоится и.-ЮЦл, 1996 г. в ч на заседании специализированного Совета Д. 063. 57 . 21 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора биологических наук при Санкт-Петербургском государственном университете по адресу: Санкт-Петербург, Университетская наб., д. 7/9, СПбГУ, кафедра генетики и селекции.

С диссертацией можно ознакомиться в центральной научной библиотеке,СПбГУ.

Автореферат разослан

1996 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета кандидат биологических

наук

Л. А. Мамон .

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. С тех пор, как в 1925 г. Г. А. Надсонои и Г.С.Филипповым и э 1927 г. Г.Мелпером был открыт индуцированный мутагенез, прошло семь десятилетий, о течение которых достигнуты грандиозные успехи в познании молекулярных механизмов мутационного процесса.

Между тем, не потеряла своей актуальности проблема частоты возникновения мутации, особенно в связи с интенсивным загрязнением окружающей среды различными гонотоксикантами (Инге-Вечто-мов, Павлов, Шварцман, 1992). Накоплены многочисленные факты, свидетельствующие о возможности модификации выхода индуцированных мутаций разнообразным вмешательством в физиологические процессы, происходящие на клеточном и организменнном уровнях. Значительным достижением генетики является создание физиологической теории мутационного процесса Ю.Я.Керкисом (1940) и М. Е. Лобашевым (1947), в рамках которой была сформулирована концепция, определяющая мутации как результат нетождественной репарации, и обосновано участие различных адаптивных реакции клетки и организма в становлении индуцированных мутаций и в эволюции мутабильности.

Показано, что такая адаптивная на организменном уровне реакция как стресс-реакция при определенных условиях обладает собственным мутагенным эффектом (Керкис, 1977; Бородин,1987; Ильинских и др.. 1990; Даев, 1994). Кроме того, разнообразные стрессорные воздействия могут модифицировать мутационный процесс, индуцированный ионизирующим излучением (Керкис, Логвинова, 1963; Лобашев и др., 1973; Цалыгина и др., 1981) и химическими агентами (Ингель и др., 1993). Однако проблема собственно мутагенного и модифицирующего особенно химический мутагенез действия стресса изучена еще крайне недостаточно, хотя имеет важное значение в практике генетической токсикологии и в теории мутагенеза.

Решение другой, часто обсуждаемой проблемы изменчивости индивидуальной чувствительности организма к стрессорным воздействиям связано с пониманием роли генотипических и/или приобретаемых в онтогенезе различий по стрессреакивности. Несомнен-, но, что реактивность ответа организма на действие стрессорных

Факторов находится под генетическим контролем (Беляев, 1979; Беляев, Бородин, 1982; Hoffman, Parson, 1992). Поэтому исключительно важным является выяснение роли генотипических различий в мутагенном и модифицирующем мутагенез действием стресса (Логвинова, Керкис, 1971; Середенин и др., 1980; Алексеевич и др., 1981).

Кроме того, для млекопитающих, в том числе и человека, эта проблема представляется значимой в связи с возможным в пределах нормы реакции имлринтингом, приобретением в онтогенезе устойчивости или чувствительности к стресоорным воздействиям (Selye, 1950; Хорн, 1988; Хайцев, Васильев, 1993; Худолей, 1994).

Цель и задачи исследования. Цель данной работы - анализ цитогенетического эффекта острой гипоксии и стрессорных воздействий гипоксии и невротизации, а также модификации данными Факторами эффекта химического мутагена циклофосфана на беспородных, фонотипически контрастирующих по устойчивости к острой гипоксии крысах, а также на линейных, в течение 20 лет селектируемых по порогу нервно-мышечной возбудимости животных.

Задачи работы включают:

1) Сравнение цитогенетического эффекта острой гипоксии и хронического стрессорного воздействия гипоксии у аутбредных беспородных крыс, контрастирующих по устойчивости к острой гипоксии.

2) Сравнение однократного и хронического стрессорных воздействий невротизации у линейных крыс, контрастирующих по возбудимости нервной системы (линии селектированы в лаборатории генетики ВНД ФИНа им. И.П.Павлова РАН).

3) Оценка цитогенетической активности химического мутагена циклофосфана у беспородных, линейных животных, различающихся по указанным характеристикам.

4) Сравнение модифицирующего химический мутагенез действия острой гипоксии и однократной невротизации у крыс контрастирующих групп и линий соответственно.

Научная новизна работы. В работе продемонстрирована цито-генетическая активность как острой гипоксии, так и хронического стрессорного действия гипоксии, впервые установлен мутагенный

эффект однократного стрессорного действия невротизации.

Еыявлсны межгрупповые и межлинейные различия в мутагенной эффективности стрессорных воздействий хронической гипоксии, однократной и хронической невротизации.

Межгрупповые и межлинейные различия по стрессореактивности отражаются на цитогенетической картине при комбинированном действии стрессорного фактора и химического канцсростатика цик-лофосфана. Причем, предварительная острая гипоксия повышает, а однократная невротизация понижает мутагенный эффект циклофосфа-на. что связано с необходимостью его метаболической активации, эффективность которой регулируется особенностями обменных процессов, по-разному модифицируемых в том и другом случае.

Практическая ценность работы. У млекопитающих и человека в практике генетической токсикологии необходимо учитывать следующие полученные в работе факты: собственный цитогенетический эффект острого действия гипоксии, хронического стрессорного

действия гипоксии, однократного стрессорного действия невротизации; разнонаправленная модификация острой гипоксией и однократной невротизацией мутагенного эффекта канцеростатика цикло-фосфа>:а, нуждающегося в метаболической активации, которая обусловлена как специфическим характером воздействующего фактора, так и межгрупповыми и межлинейными различиями по стрессореактивности. Полученные результаты имеют практическое значение для обоснования подходов к определению индивидуальной чувствительности организма к действию генотоксикантов. *

Апробация работы. Результаты проведенных исследований были представлены на Герценовских чтениях (Санкт-Петербург, 1993), Арсеньевских чтениях (Уссурийск, . 1993,1994), 1 съезде ВОГиС (Саратов, 1994), семинарах лаборатории генетики ВИД ФИНа им. И.П.Павлова РАН, лаборатории генетики животных СПбГУ.

IЪ9

Объем работы. Диссертация изложена на страницах, состоит из введения, 4 глав, выводов и приложения, содержит 18 таблиц и 5 рисунков. Список литературы включает наименований.

- в -

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

При анализе эффекта гипоксии всякий раз из выборки в 100-200 животных выделяли беспородных крыс-самцов, высокоустойчивых (ВУ) и низкоустойчивых(НУ) к острой гипоксии ("высота" -11 ООО 1.1), которую моделировали в барокамере (Васильев, Хайцев, .1994). Стрессорное хроническое действие гипоксии моделировали путем "подъема" животных на высоту 8250 м по 3 часа в течение 9 суток, за это время происходит осуществеление 3-х стадий общего адаптационного синдрома. Кроме цитогенетического анализа проводили определение стрессореактивности по физиологическим, биохимическим, гематологическим показателям. Эксперименты по гипоксии проводили на базе лабораториии токсикологии ЦНИИ "Прометей", совместно с ЦНИЛ ГИДУВа и лабораторией экспериментальной физиологии и патологии эндокринной системы ФИНа им. И.П.Павлова РАН. Для изучения цитогенетического эффекта невротизации использовали крыс-самцов четырех линий НП1, ВП1, НП2, ВП2 (НП и ВП - низкий и высокий пороги нервно-мышечной возбудимости к действию электрического тока, 1 и 2 - первая и вторая селекционные программы). Селекция была начата в 1976 г. (первая программа) и через несколько лет повторно (вторая программа), в обоих случаях из аутбредной линии крыс, Вистар (Вайдо, Ситди-ков. 1979).

В порядке возрастания порога возбудимости линии ранжированы следующим образом: НП2, НП1, ВП2, ВП1 (Вайдо.и др., 1985). Хроническую невротизацию, приводящую к стойкому неврозоподобно-шу состоянию, осуществляли путем подачи чередующихся ударов тока и вспышек света по схеме К.Гехта (Hecht et.al., 1972) - по 13 минут ежедневно в течение 15 Суток. Однократной невротизаци-ей считали один сеанс стрессирования. Эксперименты проводили на базе лаборатории генетики высшей нервной деятельности Института физиологии им. И. П. Павлова РАН.

В работе использовали канцеростатик циклофосфан (ЦФ). ЦФ -это мутаген, требующий ферментативной активации, которая катализируется системой микросомальных монооксигеназ различных тканей (Grochow, Colvin, 1979: Domeyer, Sladek, 1980) с выделением хлорэтиламина, обладающего алкилирующей активностью.

ЦФ растворяли в дистилированной воде (20 мг/мл) и вводили

крысам внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг массы. Мутагеном обрабатывали крыс через сутки после острой гипоксии и однократной невротизации. Тем же раствором и в той же дозе обрабатывали контрольных, нестрессированных животных. Материал фиксировали во всех случаях через 24 часа после введения ЦФ. Концентрация ЦФ, введение раствора ex témpora, срок Фиксации клеток костного мозга в точности соответствует Р. С.Баркан и Т. К. Яковлевой (1979).

В отличие от упомянутой работы цитогенетический анализ проводили, используя метафаэный метод. Для приготовления препаратов клеток костного мозга крыс использовали общепринятую методику (Ford, Hamerton, 1956), модифицированную в нашей лаборатории. Тотальную окраску хромосом проводили по Романовскому- Гимза.

Как при действии ЦФ, так и при действии стрессорных факторов фиксацию проводили через 24 часа после воздействия, за исключением анализа отдаленных последствий острой гипоксии и хронической невротизации.

При анализе хромосомных нарушений учитывали количество клеток с хромосомными аберрациями, количество и характер нарушений в каждой клетке. Регистрировали количество одиночных и парных фрагментов, транслокаций. Среди общего количества клеток с аберрациями отдельно учитывали клетки с множественными аберрациями. Определяли количество поврежденных хромосом на клетку. В опытах по стрессированию животных регистрировали количество анеуплоидных клеток. Обнаруживаемые пробелы не учитывали (Захаров и др., 1982).

В соответствии с имеющимися в генетической токсикологии методическими рекомендациями (Красовский, Журков и др., 1986; Лазутка и др., 1989) по оптимизации выборки на каждую исследованную точку использовали по 4-10 животных, от каждого животного анализировали по 100 метафаз.

При статистической обработке полученных результатов применяли дисперсионный анализ, критерии Фишера и Стъюдента, а также непараметрические критерии.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Цитогенетический эффект гипоксии

В предварительном исследовании на недифференцированных по устойчивости к гипоксии беспородных крысах был установлен слабый мутагенный эффект острой гипоксии (И ООО м в течение 10 минут), что определило использование этого воздействия в дальнейших исследованиях (табл. 1).

Для выяснения влияния устойчивости животных к острой гипоксии на цитогенетический эффект гипоксии использовали НУ и ВУ крыс. Результаты подтвердили мутагенный эффект острой гипоксии в течение 5 минут для НУ и 25 минут для ВУ. При этом возникают только одиночные и парные фрагменты, обнаружено увеличение количества анеуплоидных клеток (табл. 1). Между НУ и ВУ группами различий по выходу хромосомных аберраций не наблюдается.

Через 20 суток после дифференциации (в условиях острой гипоксии) у сравниваемых групп животных наблюдается сходный уровень функциональной активности дыхательной системы и обменных процессов. После хронической нагрузки были выявлены различия между НУ и ВУ животными по показателям, характеризующим функциональную активность гипофиз-адреналовой системы. Это свидетельствует о стойких изменениях, которые сохраняются у ВУ крыс через сутки после последнего стрессорного воздействия и, вероятно, накапливаются от одного стрессорного эпизода к другому.

Спустя 20 суток после острой гипоксии уровень хромосомных нарушений статистически значимо не отличался от контроля, между НУ и ВУ животными также не наблюдалось различий.

В случае же, когда через 20 суток после острой гипоксии НУ и ВУ крыс подвергали хронической гипоксии, показана отчетливая разница реакции НУ и ВУ крыс на хроническое стрессорное воздействие гипоксии. У ВУ животных имеет место выраженная индукция хромосомных нарушений, в то время как у НУ крыс частота хромосомных аберраций не отличалась от контроля (табл.1). Как у НУ, так и у ВУ групп отмечено увеличение числа анеуплоидных клеток, вероятно за счет нарушений в работе митотического аппарата.

Таблица 1.

Частота хромосомных аберраций, индуцированных острой и хронической гипоксией в клетках костного моага беспородных крыс

Вариант Число проаналиэи- Количество Количество аберраций Количество рованных метефаз клеток с на 100 метафаз анеуплоидных аберрациями, ____клеток.

Z одиночные фрагменты парные фрагменты Z

Контроль ÍÓC0 1.0 ± 0,4 0.8 + 0,4 О.Й ±0,2 + 0,3

Недифференцированные, острая гипоксия 500 2,8 ± 0,7 * 2,8 + 0,7* 0,4 + 0,3 0,8 ± 0.4

НУ, острая гипоксия 500 5,2 ± 1,0* 5,0 ± 1,0* 0,1 + 0,3 2,4 + 0.7

ВУ, острая гипоксия 500 4,8 + 1,0* 4.4 + 0,9* 0,4 ± 0,3 2,4 ± 0,7

НУ, хроническая гипоксия 1000 1,7 +0,4 1,3 + 0,4 0,5 ± 0,2 3,0 + 0,5*

ВУ, хроническая гипоксия 1126 4,1 + 0,6* 2,4 + 0,5* 2,0 + 0,4* 3,2 + 0,5 *

- значения, отличапдаеся от контроля по критерию Фишера при 0,05;

- значения, отличающиеся между группами при Р<;0,05.

Комбинированное действие гипоксии и циклофосфана

Показано, что воздействие острой гипоксии, которое предваряет введение циклофосфана, приводит к увеличению количества клеток с аберрациями при большей нагруженности клеток хромосомными нарушениями по сравнению с вариантом введения ЦФ недифференцированным по устойчивости к гипоксии животным (табл. 2). По-видимому, острое воздействие гипоксии приводит к активации микросомальных ферментов биотрансформации ЦФ и, следовательно, к увеличению дозы активных метаболитов ЦФ и повышению уровня хромосомных нарушений. Создается впечатление, что эффект гипоксии аналогичен эффекту таких индукторов метаболической активации как ароклор или фенобарбитал (Абилев, Порошенко, 1986).

Свободно-радикальные процессы, возбуждаемые действием ионизирующих излучений, аналогично в тс жо сроки увеличивают эффективность ЦФ (Баркан, Яковлева, 1979).

Причем, установлено большее количество транслокаций и большое количество поврежденных хромосом у ВУ крыс в отличие от НУ крыс (подобно тому, что наблюдали при хроническом стрессор-ном воздействии гипоксии, табл.1). Поскольку мы отмечали большую стрессореактивность ВУ крыс, то у них после острой гипоксии, вероятно, имеет место иной уровень Функциональной активности системы биотрансформации ксенобиотиков.

Цитогенетический эффект невротизации

В исследовании цитогенетического эффекта стресса, вызванного невротизацией, использовали животных, различающихся по реактивности в условиях применяемой модели.

Показано, что невротизация в течение одного сеанса по схеме Гехта вызывает мутагенный эффект (рис. 1) у крыс линии НП2, которая отличается максимальной стрессореактивностыо. Однократная невротизация индуцирует одиночные и редко парные фрагменты.

Проявляется некоторая разница (Р< 0,05) в уровне цитогене-тических нарушений между животными 1 и 2 селекционных программ, .различающихся по длительности инбредного разведения.

Анализ результатов воздействия хронической невротизации на НП2 и ВП1 крыс (выбранных для этого эксперимента как наиболее

Таблица 2.

Частота хромосомных аберраций, индуцированных'комбинированным действием острой гипоксии и циклофосфана в клетках костного мозга беспородных крыс

Число Количество Количество Количество Количество Количество

Вариант проанализи- клеток с клеток с фрагментов на трансгокаций поврежденных

рованных аберрациями, множеств. 100 метафаз на 100 хромосом

метафаз X аберрациями, __ метафаз на 100 метафаз

2 одиночные парные

Недиффе-

рекциро- 500 32,4+2,1 10,6+1,4 20,4+1,8 3,0+0,8 24,3+1,9 79,8+1,8

ванные,

ИФ •

и

НУ, острая I

гипоксия + 500 45,6 + 2,2 * 18,4 + 1,7*18,6+1,7 1,4+0,5 44.2 + 2.5* 1£0,8 + 2.2 * ЦФ -

ЕУ, острая

ГИПОКСИЯ +Цф 500 50,8 + 2,2* 18,6 + 1,7* 26,8+1,9 2,6+0.7 60.4 + 2,2* 164.8 + 4,6*

- значения, достоверно отличающиеся от положительного контроля (недифференцированные, ЦФ) по критерию Стъюдента при Р<0,05;

- значения, достоверно отличающиеся медду НУ и ВУ по критерию Стъюдгнта при Р<0,05.

контрастные по порогу нервно-мышечной возбудимости) показал отсутствие мутагенного эффекта.

Рис. 1 Частота клеток с хромосомными аберрациями, индуцированными однократной невротизацией в костном мозге линейных крыс

К - контроль: О - опыт

Частота клеток с

аберрациями

'О

НП1

ВП1

НП2

ВП2

Цитогенетический эффект циклофосфана и комбинированного воздействия однократной невротизации и циклофосфана

Цитогенетический анализ выявил попарные различия мутагенного эффекта'ЦФ у высоко- и низковозбудимых линий ( табл. 3 ): частота транслокаций выше у НП1 и НП2, чем у ВП1 и ВП2. По

К

О

О

К

Таблица 3. Частота хромосомных аберраций, индуцированных цикдофосфаном, комбинированным действием однократной невротиаации и циклофэсфана в клетках костного мозга линейных крыс

Количество Количество Количество Количество

Количество клеток с фрагментов транслокаций повременных

Число клеток с множествен- на 100 метафаз на 100 мегафаэ хромосом

Вариант проанали- аберрациями, ными __на 100 уетзФаз

зирован- аберрациями, одиночные парные

ных X

метафаз 7,

ЦИКЛОФОСФАН

НП1 400 42,3 + 2,5 7,0 ± 1,3 18,8+2,0 2,8+0,8 48,3 + 2.3 ^ ол 1. Т1 О ,6

ВП1 600 33,0 ± 1,9 7,2 + 1,1 21,8+1,7 3,0+0,7 38,0 * 2.0 100.5 ; г\ о, О,

НП2 400 41,0 ± 2,5 7,8 ± 1,3 15,0+1,3 0.5+0,2 48.8 + 2.3 120.3 г р , 5

ВП2 600 51,7 + 2,0 26,8 + 1,8 10,3+1,2 2,2-0.6 40,2 + О А 100.1 + с. ,1

ОДНОКРАТНАЯ НЕВРСГИЗАЦИЯ + ЦИКЛОООСФАН

НИ 500 16,6 ± 1,7 1,0 ± 0.4 22,4+1,9 1,8+0,6 4.0 + 0,9 ОТ' ° - 2, 1

ВШ. 500 19,8 ± 1,8 5,4 + 1.0 9,8+1,3 1,6+0,6 15,4 + 1.5 » ' ЧЧ, о о

Ш32 500 36,6 + 2,2 6,8 + 1.1 35,0+2,1 2,4+0,7 17,8 + 1.7 79,8 - 1 , а

ВП2 400 21,8 ± 2,1 4,5 + 0,9 22,0+2,1 2,8+0,8 3,8 0,9 58.3 п *■» » 5

- значения, различающееся между линиями одной селекционной программы по критерию Стыодента ,фи Р < 0,05.

частоте фрагментов такой закономерности не прослеживается, в силу чего показатель - количество клеток с аберрациями - не коррелирует с возбудимостью животных.

Особый интерес имеет ситуация с введением ЦФ после однократной невротизации. Частота хромосомных аберраций при предварительном стрессировании оказывается значительно меньшей во всех четырех линиях, чем при действии только ЦФ. Предварительная однократная невротизация как бы обладает "протекторным" эффектом. Причем, межлинейные различия, прослеживаемые по количеству транслокаций и количеству поврежденных хромосом на клетку, зависят, скорее, не от направления селекции, а от стартовых различий между животными 1 и 2 программ селекции.У линий первой селекционной программы большую частоту хромосомных аберраций демонстрируют ВП1, во второй селекционной программе - наоборот, НП2 «ивотные. Отметим между тем, что наиболее возбудимая линия НП2, у которой нейрологический стресс сам по себе в ■ остром опыте (рис. 1) индуцирует одиночные и парные фрагменты, в случае комбинированного воздействия невротизации и ЦФ действует таким образом, что обнаруживаемый цитогенетический эффект •последнего снижается минимально.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, при стрессорных воздействиях гипоксии и невротизации. в клетках костного мозга крыс удается засвидетельствовать появление одиночных (редко парных) фрагментов. Аберраций обменного типа мы не обнаружили. В настоящее время появились работы (Brinkley, Hittelnan, 1975; Biessman et.al., 1990), обосновывающие весьма критическую точку зрения на природу и одиночных и парных фрагментов. Доказано, что выявляемые даже в случае облучения фрагменты отражают наличие временной, обратимой деконденсации хроматина и не могут служить истинным критерием хромосомного мутагенеза. Мерой последнего можно считать лишь аберрации обменного типа.

Именно по частоте транслокаций мы видим совершенно разнонаправленный. характер модификации мутагенного эффекта ЦФ в клетках костного мозга в случав предварительного стрессирования животных - при остром гипоксическом воздействии эффективность

ЦФ существенно возрастает, при некрологическом - эффект ЦФ снижается.

С нашей точки зрения, различные виды воздействий могут разнонаправленно модифицировать такую адаптивную ( на тканевом и клеточном уровне) реакцию, как метаболическая биотрансформация ксенобиотиков. ЦФ - мутаген непрямого действия, эффект которого зависит от уровня экспрессии генов, контролирующих Р-450 цитохром-зависимые монооксигеназы. По всей видимости, гипоксия. нарушающая кислородный режим на клеточном и тканевом уровне, является индуктором системы метаболической активации, что ведет к усилению эффекта ЦФ, особенно отчетливо проявляющемуся при оценке выхода транслокаций.

В то же время, невротизация животных, по-видимому, влияет на процесс биотрансформации ксенобиотиков в противоположном направлении, - является фактором, блокирующим первый этап метаболической активации (превращение ЦФ в активную форму хлорэти-ламина).

Известно, что ферменты метаболической активации противодействуют поражению клеток ксенобиотиками. Если нейрологический стресс, снижающий эффект ЦФ, действительно блокирует эту систему ферментов, то можно ожидать, что те агенты, которые действуют "прямо" на геном и другие жизненноважные мишени в клетке, окажутся значительно более агрессивными при их сочетан-ном действии с нейрологическим стрессом.

Можно отметить в заключение, что генотипические или групповые различия между животными (НУ и ВУ при действии гипоксии; НП и ВП линии при действии невротизации) влияют на частоту как стресс-индуцированных цитогенетических событий, так и на химический мутагенез в соматических клетках животных. Это, как и предыдущее заключение, можно сделать даже в том случае, когда использована только одна точка фиксации материала - 24 часа после воздействия. Наиболее глубокие различия, как нам кажется, будут обнаружены, когда анализируемые показатели будут прослежены в отдаленные сроки после стресса и действия мутагенов.

вывода

1. Воздействие острой гипоксии приводит к увеличению частоты одиночных и парных фрагментов в клетках костного мозга низко- и высокоустойчивых к острой гипоксии крыс, которых выделяли из популяции беспородных животных. Стрессорное воздействие хронической гипоксии вызывает этот эффект только у высокоустойчивых крыс, стрессореактивных по отношению к данному фактору.

2. Предварительное (за 24 часа) воздействие острой гипоксии существенно повышает мутагеннный эффект циклофосфана в обеих группах животных. При этом повреждение генома по частоте транслокаций и частоте поврежденных хромосом больше у высокоустойчивых к острой гипоксии крыс, у стрессореактивных животных.

3. При использовании линий, различающихся по порогу нервно-мышечной возбудимости (НП2,НП1.ВП1, ВП2), стрессорное воздействие однократной невротизации увеличивает частоту одиночных и парных фрагментов в клетках' костного мозга НП2 крыс, линии высоковозбудимых животных. В то же время хроническая невротизация не обладает достоверным цитогенетическим эффектом.

4. При действии циклофосфана выявлены межлинейные различия, зависящие от программы селекции, по частоте клеток с хромосомными аберрациями. Причем, количество транслокаций связано с возбудимостью нервной системы животных: у высоковозбудимых линий больше по сравнению с низковозбудимыми.

• 5. Предварительное (за 24 часа) стрессорное воздействие однократной невротизации снижает мутагенный эффект циклофосфана у всех четырех линий крыс, наименее выражено снижение у высоковозбудимых крыс из второй селекционной программы (НП2), у которых отмечено цитогенетическое действие однократной невротизации.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

3. Хайцев Н. В., Васильев Г. Н., Быковская Н. В. К вопросу индивидуальной устойчивости и чувствительности // Тез. докл. научно-практической конференции "Актуальные вопросы гигиены и экологии транспорта". Одесса: НИИ гигиены транспорта. 1992. С. 179-180.

2. Быковская Н. В., Хайцев Н. В., Шварцман П. Я. Частота хромосомных аберраций, индуцированных гипоксией, в клетках костного мозга крыс, различающихся по устойчивости к этому фактору // Генетика. 1993. Т. 29, N 32. С. 2308-2111.

3. Быковская Н.В. Особенности мутагенного действия гипоксии й невротизации у крыс, различающихся по устойчивости к физиологическим нагрузкам // УП Арсентьевские чтения, Уссурийск, 1993. С. 29-33.

4. Быковская Н.В., Дюжикова И.О., Вайдо А.Н., Лопатина Н.Г., Шварцман П. Я. Частота хромосомных аберраций, индуцированных стрсссорным воздействием и циклофосфаном в клетках костного мозга крыс, селектированных по порогу возбудимости нервной системы // Генетика. 1994. Т. 30. N 9. С. 1224-1228.

5. Быковская Н. В. Модуляция стрессом мутагенного эффекта цикло-фосфана у животных, различающихся по чувствительности к стрес-сорным воздействиям // Материалы 1-го съезда ВОГиС (Саратов, 20-25 декабря 1994 г.) Генетика. Т.30. Приложение. 1994. С.22.

6. Быковская Н. В., Хайцев Н. В., Шварцман П. Я. Влияние острой гипоксии на цитогенетический эффект циклофосфана в клетках костного мозга крыс, различающихся по устойчивости к кислородной недостаточности // Генетика. 1995. Т. 31. N 11. С. 1575-1577.

7. Дюжикова Н. А., Быковская Н. В., Вайдо А. И., Лопатина Н. Г., Шварцман П. Я. Мутагенный эффект острой невротизации в клетках костного мозга крыс, селектированных по порогу возбудимости нервной системы.//Генетика. 1996. Т. 32. ,N6, С. 851-854.

Тип. ¿сии НЗ. т. 100- Яч/п,-д6