Морфофункциональные изменения тимуса и показатели крови после введения циклофосфана, имунофана и их комбинации

Михайлова, Марина Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Морфофункциональные изменения тимуса и показатели крови после введения циклофосфана, имунофана и их комбинации
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональные изменения тимуса и показатели крови после введения циклофосфана, имунофана и их комбинации"

На правахрукописи

МИХАЙЛОВА МАРИНА НИКОЛАЕВНА

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ТИМУСА И ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ ЦИКЛОФОСФАНА, ИМУНОФAHAИИХКОМБИНАЦИИ

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва-2004

Работа выполнена в Чувашском государственном университете им. И.Н. Ульянова

Научный руководитель:

доктор медицинских наук,

профессор МЕРКУЛОВА Лариса Михайловна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор ТОРБЕК Виктория Эдуардовна

доктор биологических наук, профессор КУРИЛО

Любовь Федоровна

Ведущая организация:

Российский университет Дружбы народов

Защита диссертации состоится «__»

.2004 г. в «_»

часов на заседании диссертационного совета Д 208.040.01 при Московской медицинской академии имени И.М. Сеченова по адресу: 119992, Москва, Б. Пироговская ул., д. 2, стр. 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ЦНМБ ГОУВПО ММА им. И.М. Сеченова (117998, Москва, Нахимовский проезд, д. 49).

Автореферат разослан « »_2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук,

профессор Владимир Анатольевич Варшавский

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В последние десятилетия, наблюдается рост числа инфекционных, аутоиммунных, аллергических и онкологических заболеваний. Эти болезни нередко вызваны первичным поражением иммунной системы и часто сопровождаются вторичными нарушениями ее. функций. Различные травмы, длительный стресс, интоксикации, неблагоприятные экологические условия, химио- и лучевая терапия также могут приводить к развитию вторичной иммунологической недостаточности (Караулов А.В., 2000; Ильина Н.И. и др., 2000; Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 2000).

Поддержание адекватного иммунного статуса при химио- и лучевой терапии опухолей является важнейшей клинической проблемой, однако до настоящего времени остается недостаточно изученной. Наслоение индуцированной цитостатиками иммунодепрессии на неблагоприятный общий иммунодефицитный фон, присущий течению опухолевых заболеваний, ведет к увеличению частоты вторичных осложнений (Гершанович МЛ., 1982; Ильина Н.И. и др., 2000; Кузьмина Е.Г. и др., 2003). При этом резко повышается восприимчивость к инфекциям, возможна также индукция вторичных злокачественных опухолей (Гершанович М.Л., 1982). Это связано, в основном, с повреждающим действием цитостатиков на лимфоидную ткань (Wang G.J., Cai L., 1999). Несмотря на очевидную важность проблемы, имеющиеся в литературе сведения в указанном аспекте крайне немногочисленны и фрагментарны, касаются, главным образом, токсического действия отдельных противоопухолевых препаратов на гемопоэз (Zandvoort A. et al., 2001).

этом тимус рассматривается

биологически активных пептидов формируются приобретенный и естественный иммунитет (Акмаев И.Г., 2001). Иммунорегуляторными факторами, обеспечивающими функции тимуса, наряду с цитокинами и тимическими гормонами, являются биогенные амины (Кветной И-М.и др.,. 2003; Hadden. J.W., 1992, 1998). Несмотря на кажущуюся. изученность различных структурно-функциональных характеристик тимуса, следует: отметить, что роль биогенных аминов в его функции, особенно в условиях иммунодефицита, изучена недостаточно.. Отсутствуют сведения о состоянии биоаминсодержащих структур тимуса, при цитостатической иммунодепрессии.

Среди, препаратов иммунодепрессивного действия широкое распространение получил циклофосфан, который входит во многие схемы противоопухолевой терапии (Переводчикова Н.И., 1993; Allison А.С., 2000), используется для профилактики отторжения трансплантантов (Gorantla. V.S. et al.,. 2000), для лечения аутоиммунных заболеваний (Дранник Г.Н. и др., 1994; Думан В.Л., 2002; Raza К. et al., 2000; Lamprecht P. et al., 2002). Ингибирование функциональной активности клеток иммунной системы является одним из главных причин токсического действия циклофосфана (Зуева Е.П., Яременко К.В., 1989; Zusman I. et al., 2002), поэтому проблема снижения его побочных действий является весьма актуальной (Земсков A.M. и др., 1994; Zusman I. et al., 2002).

химических препаратов последнего поколения, использующимся при лечении различных иммунодефицитных состояний и в онкологической практике, является имунофан (Покровский В.И. и др., 1998; Лебедев В.В. и др., 1999; Караулов А.В., 2000). В доступной литературе мы не встретили работ, касающихся морфологических аспектов иммуномодулирующего действия имунофана.

Всестороннее исследование влияния иммунотропных препаратов на органы иммунной системы, особенно на тканевом уровне, необходимо для избирательного, целенаправленного воздействия на нарушенные гистофизиологические процессы, что, в свою очередь, является обязательным условием успешной иммуномодуляции, иммунокоррекции и иммунореабилитации (Труфакин В.А., Шурлыгина А.В., 2002). Поэтому детальное исследование морфофуикционального состояния тимуса при иммуносупрессии, вызванной циклофосфаном, изучение морфологических аспектов иммуномодулирующего действия имунофана, а также возможностей коррекции имунофаном циклофосфан-индуцированных изменений представляет большой интерес как для практической медицины, так и для гистологии, иммунологии и иммуноморфологии.

Цель исследования — изучить морфофункциональное состояние тимуса и показатели крови через 1, 7 и 14 суток после изолированного введения циклофосфана, имунофана и их комбинации.

В соответствии с целью работы поставлены следующие задачи:

1. Исследовать уровень биогенных аминов и их соотношение в люминесцирующих структурах тимуса, изучить популяцию тучных клеток и провести морфометрию коркового и мозгового вещества долек тимуса через .1, 7 и 14 суток после изолированного введения циклофосфана.

2. Определить содержание биоаминов- и их соотношение в люминесцирующих структурах тимуса, изучить популяцию тучных клеток, провести морфометрию долек тимуса через 1, 7 и 14 суток после курсового введения имунофана.

3. Исследовать уровень биогенных аминов и их соотношение в люминесцирующих структурах тимуса, изучить популяцию тучных клеток, провести морфометрию долек тимуса через 1, 7 и 14 суток после введения циклофосфана с последующим курсовым введением имунофана.

4. Определить количество эритроцитов, лейкоцитов, лимфоцитов, содержание гемоглобина, а также уровень иммуноглобулинов в крови после изолированного введения циклофосфана, имунофана- и их комбинации.

Научная новизна работы

• Впервые показано, что острая, инволюция тимуса, развивающаяся после введения циклофосфана, сопровождается увеличением количества люминесцирующих гранулярных клеток.тимуса на фоне усиления люминесценции тимоцитарной паренхимы, возрастанием в них уровня биогенных аминов, особенно гистамина, повышением соотношения (серотонин+гистамин)/катехоламины.

• Впервые представлены результаты исследования цитоархитектоники тимуса после применения имунофана. Увеличение размеров коркового и мозгового вещества долек; тимуса, снижение соотношения (серотонин+гистамин)/катехоламины в клетках - тимуса может рассматриваться как одно из проявлений иммунокоррегирующего действия препарата.

• Установлено, что введение циклофосфана в комбинации с имунофаном сопровождается менее выраженными изменениями структуры тимуса, увеличением размеров коркового и мозгового вещества долек, уменьшением уровня- биогенных. аминов и соотношения (серотонин+гистамин)/катехоламины по сравнению с изолированным введением циклофосфана, однако не оказывает существенного влияния на измененные показатели крови.

• Впервые описаны изменения количественного и качественного состава популяции тучных клеток тимуса после введения циклофосфана, имунофана и их комбинации, показано участие тучных клеток в процессах восстановления ткани тимуса после повреждения циклофосфаном.

• Приоритетными следует считать данные о том, что использование имунофана после введения циклофосфана снижает степень инволютивных изменений в тимусе и способствует ускорению восстановления структуры органа.

Научно-теоретическая значимость

Результаты исследования дополняют представление о морфофункциональном состоянии тимуса в условиях иммуносупрессии (введение циклофосфана) и иммунокоррекции (введение имунофана). Полученные данные об изменениях биогенных аминов в тимусе при острых инволютивных процессах, их связь с изменениями количества люминесцирующих гранулярных и тучных клеток представляют интерес для гистологии и иммунологии.

Практические рекомендации

Результаты исследования могут служить морфологическим обоснованием применения имунофанадля уменьшения повреждающего действия циклофосфана на лимфоидную ткань, тимуса и позволяют рекомендовать комбинированное использование циклофосфана и имунофана в онкологической практике. Работа представляет несомненный интерес для практических врачей: онкологов, гематологов, иммунологов и терапевтов.

Результаты работы используются в материалах лекций; при проведении практических занятий и семинаров на кафедре функциональной и лабораторной диагностики Чувашского госуниверситета, кафедре терапии и семейной медицины ГОУ "Институт

усовершенствования, врачей МЗ Чувашской республики, а также в практической работе врачей-онкологов Республиканского клинического онкологического диспансера МЗ Чувашской. республики. Результаты исследования нашли отражение в опубликованных статьях и тезисах..

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Введение циклофосфана приводит к значительному увеличению количества люминесцирующих гранулярных клеток и тучных, клеток в тимусе на фоне деформации долек, фрагментации и уменьшения размеров коркового и мозгового вещества и замещения паренхимы жировой тканью. Во всех изучаемых структурах тимуса, особенно в паренхиме, отмечается значительный рост уровня гистамина. Выявленные изменения, являются следствием развития острой инволюции тимуса в ответ на введение цитостатика.

2. Курсовое введение имунофана сопровождается увеличением размеров коркового и мозгового вещества долек тимуса, волнообразными изменениями уровня биогенных аминов в люминесцирующих клетках и их микроокружении с тенденцией к более значительному повышению уровня катехоламинов в тимоцитарной паренхиме к 14 суткам после окончания инъекций.

3. Введение циклофосфана в комбинации с имунофаном приводит к менее выраженным и более кратковременным изменениям морфологии тимуса,. способствует снижению уровня гистамина и увеличению доли катехоламинов в его структурах, особенно в тимоцитах, по сравнению с изолированным введением, циклофосфана, что свидетельствует о способности имунофана снижать степень инволюции тимуса и ускорять восстановление его структуры.

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены на Всероссийской научной конференции "Морфологические основы

гистогенеза и регенерации тканей" (С.-Петербург, 2001), IV Международной конференции по функциональной нейроморфологии *'Колосовские чтеиия-2002" (С.-Петербург, 2002); V Юбилейном съезде иммунологов и аллергологов СНГ (С.-Петербург, 2003), 1-ой Всероссийской конференции по иммунотерапии (Сочи, 2003), на гистологической конференции "Фундаментальные и прикладные проблемы гистологии. Гистогенез и регенерация тканей" (С.-Петербург, 2004).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ в материалах международных и всероссийских научных конференций, из них 1-статья, 5 - тезисы.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 158 страницах машинописного текста (собственно текста — 125'страниц), состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, четырех разделов собственных исследований, обсуждения результатов и заключения, выводов, списка литературы. Работа иллюстрирована 10 таблицами, 63 рисунками. Список литературы включает 307 источников, в том числе 137 зарубежных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Эксперименты выполнены на 145 белых нелинейных крысах-самках массой 115-305 г, 14 из которых были интактными. Объектами исследования служили тимус и кровь. Проведено 3 серии экспериментов, каждая из которых включала курсовое 7-кратное введение разных препаратов с интервалом в 48 часов (через день):

I серия — введение циклофосфана (ОАО "Биохимик", г. Саранск) в дозе 200 мг/кг однократно в/м на физиологическом растворе с

последующим 6-кратным введением через день 0,5 мл физиологического раствора — 37 крыс;

II серия — введение имунофана. (НПП "Бионокс", г. Санкт-Петербург) по 1 мкг/кг в/м 7-кратно через день — 34 крысы;

Ш серия — комбинация однократного введения циклофосфана и имунофана через день 7-кратно в вышеуказанных дозах — 35 крыс.

В качестве контроля использованы животные, которым вводили по 0,5 мл физиологического раствора в/м 7-кратно через день (п=25).

Тимус и кровь забирали под глубоким эфирным наркозом через 1, 7 и 14 суток после последней инъекции. Тимус взвешивали, его массу выражали в мг на 100 г массы крысы. Затем изготавливали криостатные срезы органа толщиной 10 мкм.

В работе использовали следующие методы:

1. Люминесцентно-гистохимический метод Фалъка-Хилларпа (Falk В., Hillarp N., 1962) в модификации Е.М. Крохиной (Крохииа Е.М., Александров П.Н., 1969) — для избирательного выявления серотонина и катехоламинов.

2. Люминесцентно-гистохимический метод Кросса, Эвена, Роста (Cross et. al., 1971) — для идентификации гистаминсодержащих структур тимуса.

3. Метод цитоспектрофлуориметрии (Юденфренд С, 1965; Калмыков В. Л., 1982) — для количественной оценки уровней серотонина, катехоламинов и гистамина в структурах тимуса. Измерения производили с помощью насадки: ФМЭЛ-1А, установленной на люминесцентный микроскоп ЛЮМАМ-4 при выходном напряжении 900В. Уровень биоаминов оценивали в единицах флуоресценции (условные единицы по шкале регистрирующего прибора). Для удобства при подсчете цифровые значения умножали на 1000. В каждом препарате производилось 120 измерений. Для определения уровня серотонина использовали

интерференционный светофильтр с длиной волны 525 нм, катехоламинов — с длиной волны 480 нм, гистамина — с длиной волны 515 нм.

4. Для характеристики суммарно-направленного действия биогенных аминов вычислялось соотношение (серотонин + гистамин)/катехоламины (СТ+ГСТ/КА), свидетельствующее о функциональном состоянии клеток тимуса (Стручко Г.Ю., 2003).

5. Метод окраски гематоксилином-эозином с последующей морфометрией коркового и мозгового вещества долек тимуса. С помощью винтового окулярного микрометра МОВ-Ы5х (при увеличении объектива 3,2х) производили измерение диаметра коркового и толщины мозгового вещества. Площадь мозгового вещества вычисляли по формуле S=(ftxD*d)/4, где D — максимальный, d — минимальный диаметр мозгового вещества дольки.

6. Метод окраски полихромным толуидиновым синим по Унна — для качественной и количественной характеристики популяции тучных клеток тимуса. Тучные клетки подсчитывали в десяти полях зрения микроскопа (объектив 40 и окуляр 15). По степени дегрануляции выделяли 4 типа клеток: ТО — тучные клетки с плотно заполненными неразличимыми гранулами и ядром; Т1 — клетки с.отдельно различимыми гранулами и неполностью замаскированным ядром; Т2 — клетки с. хорошо различимыми гранулами как внутри, так и вокруг клетки и отчетливым ядром; ТЗ — опустошенные тучные клетки. с единичными гранулами внутри и рассеянными гранулами вокруг клетки (Линднер Д.П. и др., 1980; Стручко Г.Ю. и др., 1995).

7. Определение показателей крови (количество эритроцитов, лейкоцитов, лимфоцитов и уровень гемоглобина) с помощью автоматического гематологического анализатора "Sysmex" (Япония).

8.- Метод радиальной иммунодиффузии — для количественного определения иммуноглобулинов класса G, М и А в крови (Фримель X., 1987).

9. Статистическая обработка полученных цифровых данных проведена с помощью пакета программ Microsoft office (Word и Excel) на компьютере Celeron 1700A. Статистическую достоверность оценивали по t-критерию Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

При исследовании тимуса интактных животных с помощью люминесцентной микроскопии выявляются дольки полигональной формы с хорошо различимым корковым и мозговым веществом. Расположенное в центре дольки мозговое вещество ограничено непрерывным рядом люминесцирующих гранулярных клеток (ЛГК), условно названных «премедуллярные клетки» (Гордон Д.С., 1982). Эти клетки содержат компактно расположенные гранулы, обладающие яркой беловато-желтой люминесценцией. По периферии дольки, кнаружи от клеток внутренней кортикальной зоны располагаются более мелкие хаотично разбросанные «субкапсулярные клетки» с гранулами зеленовато-желтого свечения. По данным литературы, премедуллярные и субкапсулярные клетки имеют макрофагальную природу и совмещают в себе свойства клеток АПУД-системы и дендритных клеток (Гордон Д.С., 2001; Стручко Г.Ю., 2003).

С помощью цитоспектрофлуориметрии установлено, что гранулы люминесцирующих клеток, а также тимоциты коркового и мозгового вещества,. обладающие слабой люминесценцией, содержат биогенные амины: гистамин, серотонин, катехоламины, преобладающим среди них является гистамин.

Введение циклофосфана серьезно сказывается на морфологии тимуса. Значительно увеличивается количество жировой ткани, оголяется эпителиальная строма, дольки деформируются, резко уменьшаются их размеры и масса. органа. Наиболее выраженные изменения. отмечаются через 1 сутки после окончания инъекций (т.е. через 13 суток после введения циклофосфана), когда дольки приобретают веретенообразную

форму, в 3-5 раз увеличивается количество люминесцируюшнх клеток как кортико-медуллярной, так и субкапсулярной зон, которые в 6-8 рядов окружают мозговое вещество. Премедуллярные клетки становятся очень яркими, крупными, глыбчатыми, часто сливаются друг с другом на фоне резкого усиления люминесценции окружающей паренхимы. Подобные изменения в тимусе, согласно данным литературы, наблюдаются при развитии острой инволюции органа (Стручко Г.Ю.,.2003). Циклофосфан повреждает. ДНК тимоцитов, индуцирует их апоптоз, тем самым приводит к уменьшению общего количества лимфоцитов и инволюции тимуса (Hiramine С, 1996; Wang G.J., Cai L., 1999; Basta-Kaim A., 2001).

Визуальная картина тимуса через 7 суток (19 суток после введения циклофосфана) характеризуется выраженным полиморфизмом долек и разрыхлением люминесцирующих клеток. Во всех дольках корковое и мозговое вещество плохо дифференцируются и часто фрагментированы, ЛГК расположены хаотично. Обнаруживаются дольки с малым числом слабо люминесцирующих клеток, дольки с большим количеством очень крупных и разрыхленных клеток, местами распадающихся на отдельные гранулы, а также дольки с угасающим диффузным свечением остатков распавшихся клеток. Выявление такого разнообразия долек наряду с уменьшением общего количества ЛГК, их разрыхлением и ослаблением люминесценции, возможно, свидетельствует о том, что на этом сроке после введения циклофосфана в тимусе параллельно происходят процессы утилизации погибшей ткани и ее восстановления.. Через 14 суток (27 суток после инъекции циклофосфана) наблюдается формирование множества мелких долек с повторным увеличением количества, размеров и интенсивности свечения люминесцирующих клеток, что, вероятно, связано с преобладанием процессов регенерации в этот период наблюдения. Сохранение фрагментации коркового и мозгового вещества и наличие деформированных долек, свидетельствует о том, что структура тимуса восстанавливается лишь частично.

С помощью дитоспектрофлюориметрии нами выявлен дисбаланс биогенных аминов в структурах тимуса после введения циклофосфана. Через 1 сутки отмечается максимальное увеличение всех биоаминов во всех. ЛГК кортико-медуллярной и субкапсулярной- зон, а также в тимоцитарной паренхиме коркового и мозгового вещества. Особенно значительно возрастает уровень гистамина, цифры, которого в премедуллярных клетках превышают норму в 2,5 раза, в тимоцитах — в 45 раз. В.последующем содержание.гистамина постепенно снижается, но даже через 14 суток его уровень остается высоким во- всех исследуемых структурах тимуса (рис. 1).

В премедуллярных и субкапсулярных клетках отмечается. 2 пика увеличения уровня серотонина и катехоламинов — через 1 и 14 суток (рис. 1), в тимоцитах их содержание повышено до 7 суток, затем снижается почти до нормальных значений.

Рис. 1 Уровень биогенных аминов (у.е.) в премедуллярных клетках у интактных крыс и после введения циклофосфана

600 500 400

¿1 300 200 100

■ы

¡я**

-щ

я*»

Норма

ЦФ1сут

.-да;

НзР* а

вйе

т*

ЦФ7сут

ЦФ14сут

Псеротонин Вгистамин . • катехоламины ]

Известно, что на функциональную активность клеток, влияет не только абсолютное содержание биогенных аминов, но и их соотношение в клетке. Для того, чтобы охарактеризовать суммарно-направленное действие биогенных аминов, нами- вычислялось соотношение (СТ+ГСГ)/КА, увеличение которого косвенно свидетельствует о подавлении активности клетки, снижение - о её стимуляции «(Стручко

Г.Ю., 2003). После введения цнклофосфана данное соотношение во всех исследуемых структурах тимуса, особенно в тимоцитах, значительно возрастает с максимальной выраженностью в тимоцитах через 1 сутки, в премедуллярных клетках через 7 суток, что может свидетельствовать о подавлении их функциональной активности. В ЛГК данное соотношение к 14 суткам нормализуется, а в тимоцитарной паренхиме коркового вещества и микроокружения тучных клеток остается высоким.

Параллельно с повышением уровня биогенных аминов. отмечается увеличение количества тучных клеток в строме тимуса. Их абсолютное число максимально возрастает через 1 сутки, в основном за счет недегранулированных ТО и слабодегранулированных Т1-форм;_ что, возможно, связано с их повышенной миграцией в тимус для инактивации биогенных аминов гликозаминогликанами.

Повторное увеличение количества тучных клеток через 14 суток, преимущественно дегранулированных форм, совпадает с увеличением количества ЛГК и уровня серотонина и катехоламинов в них на фоне формирования множества мелких долек, что свидетельствует об активном участии тучных клеток в процессах регенерации в тимусе после острой инволюции, индуцированной циклофосфаном. Известно, что стимулированные иммунологическими или неиммунологическими механизмами тучные клетки синтезируют различные цитокииы и хемокины, опосредующие их участие в регуляции процессов репарации, в том числе фактор роста нервов (Быков В.Л., 1999; Reed J.A. et al., 1995; Nilsson G. et al., 1997). Установлено, что увеличение продукции этого фактора играет важную роль в образовании новых Т-лимфоцитов для замещения поврежденных клеток при регенерации тимуса после повреждения циклофосфаном (Yoon S., Lee H.W., 2003).

Введение циклофосфана также приводит к значительному уменьшению ширины коркового и диаметра мозгового вещества долек и, соответственно,. массы тимуса, особенно через 1 сутки. В дальнейшем

отмечается их постепенное увеличение, но даже к 14- суткам эти показатели не достигают соответствующих, значений у интактных крыс.

Наряду с изменениями в тимусе, в исследуемые сроки после введения, циклофосфана: регистрируются также изменения в крови, максимально выраженные через 1 сутки. Отмечается снижение количества эритроцитов и уровня гехмоглобина, что обусловлено прямым ингибирующим влиянием препарата на гемопоэз (Гершанович М.Л., 1982; Дыгай А.М. и др., .2000). Даже к. концу эксперимента количество эритроцитов \ остается1 на 25% ниже нормы. Количество лейкоцитов у половины крыс повышено через 1 и 7 суток. У всех животных регистрируется выраженная лимфопения на 1 и 7 сутки исследования, обусловленная прямым лимфолитическим действием циклофосфана на малые лимфоциты (Гершанович МЛ., 1982). В этот же период отмечается достоверное снижение уровня циркулирующих иммуноглобулинов класса оил.

Введение иммуномодулятора имунофаиа приводит к совершенно иным морфофункциональным изменениям в тимусе. Заметно увеличивается ширина коркового, диаметр и площадь мозгового вещества тимуса и, соответственно, масса органа по сравнению с показателями интактных крыс через 7 и 14 суток после окончания курса инъекций. Ширина коркового вещества через 7 суток увеличивается на 23%, диаметр мозгового — на 36%, и остаются практически неизменными до 14 суток.

Структура тимуса при люминесцентной микроскопии мало отличается от таковой у интактных крыс. Через 1 сутки после курса введения, имунофана количество люминесцирующих клеток немного увеличивается, недостоверно повышается уровень гистамина, что сопровождается повышением процентного содержания

дегранулированных Т2- и ТЗ-форм тучных клеток. Через 7 суток содержание биогенных аминов соответствует норме. Через 14 суток во всех ЛГК и их микроокружении возрастает содержание всех биоаминов,

преимущественно серотонина и катехоламинов. В тимоцитарнок паренхиме коркового и мозгового вещества более значимо повышается содержание катехоламинов, превышая соответствующие уровни серотонина и гистамина (рис. 2).

Рис. 2 Уровень биогенных аминов (у.е.) в тимоцитах. коркового вещества в норме и через 14 суток после курса введения физ. раствора (контроль) и имунофана *

Норма Физ.р-р Имунофан

Юсеротонин Пгистамин D катехоламины [

Соотношение (СТ+ГСТ)/КА после введения имунофана через 1 сутки возрастает во всех клетках, кроме тимоцитов мозгового вещества, где оно резко снижается (с 2,33 в норме до 1,75). Через 7 и 14 суток значения данного соотношения во всех клетках ниже соответствующих значений у интактных крыс, особенно в тимоцитарной паренхиме, что свидетельствует о повышении их функциональной активности.

При комбинированном введении циклофосфана и имунофана

структура тимуса и биоаминообеспечение клеток существенно отличается от таковой при изолированном введении циклофосфана. Дольки тимуса крупнее, хорошо отграничены друг от друга, широкими соединительнотканными промежутками, вокруг них.значительно меньше, жировой ткани. Через 1 сутки выявляются дольки полигональной формы, в которых по всему корковому веществу равномерно разбросаны.крупные люминесцирующие клетки. Общее количество ЛГК в 2 раза меньше, чем при изолированном введении циклофосфана, отмечается значительное разрыхление клеток кортико-медуллярной зоны, вероятно, связанное с тем,

что процессы утилизации погибшей лимфоидной ткани в этот период подходят к завершению. Однако дезорганизация структуры тимусных долек сохраняется до 7 суток: часто обнаруживаются малоклеточные дольки с фрагментированным корковым и мозговым веществом, встречаются резко измененные "погибающие"' дольки. Через 7 суток обнаруживаются единичные дольки, по структуре схожие с таковыми у интактных крыс; а через 14 суток морфологическая-картина тимуса практически не отличается от нормы.

Выявлено совершенно иное перераспределение биогенных аминов в ЛГК и их микроокружении. Во-первых, уровень гистамина на всех сроках исследования достоверно. ниже, чем при изолированном введении циклофосфана (рис. 3).

Рис. 3 Уровень гистамина в премедуллярных клетках при изолированном введении циклофосфана и его комбинации с имунофаном

- Цикпофосфан

Циклофосфан +имунофан

Норма 1 сут 7сут 14сут

Во-вторых, следует отметить значительное возрастание уровня катехоламинов по сравнению с остальными биогенными аминами-в тимоцитарной паренхиме через 1 и 14 суток.

И в-третьих, соотношение (СТ+ГСГ)/КА во всех структурах тимуса достоверно ниже, чем у крыс с изолированным введением циклофосфана. Через 1 и 14 суток данное соотношение в паренхиме, в противоположность

изолированному введению циклофосфана, уменьшается, свидетельствуя о повышении функциональной активности тимоцитов (рис. 4).

Рис. 4 Соотношение (серотонин+гистамин)/катехоламины :

в тимоцитах коркового вещества после изолированного. введения циклофосфана и его комбинации с имунофаном

.....циклофосфан

— ь—циклофосфан +имунофан

Норма

1 сут

7 сут

14 сут

Размеры коркового и мозгового вещества долек уменьшаются в меньшей степени на всех сроках исследования (рис. 5). Если при изолированном введении циклофосфана через 1 сутки ширина коркового вещества уменьшается в 4 раза, то при комбинации его с имунофаном — лишь, в 1,6 раза. Соответственно, масса тимуса на протяжении всего наблюдения выше, чем при введении только циклофосфана, и через 14 суток практически не отличается от нормы.

Рис. 5 Ширина коркового вещества долек тимуса при изолированном введении циклофосфана и его комбинации с имунофаном

.....Циклофосфан - ;

—в—Циклофосфан+ ; имунофан: |

Норма

1 сут

7сут

14 сут

Количество тучных клеток в тимусе увеличивается лишь через 1 и 7 суток, причем уже с первых суток заметно увеличено число дегранулированных форм, что может быть связано с их активным участием в репаративных процессах.

Введение имунофана на фоне циклофосфана способствует увеличению содержания эритроцитов и уровня гемоглобина на 1 и 7 сутки исследования, а к 14 суткам приводит к их нормализации. Выявляется тенденция к более ранней нормализации содержания лейкоцитов, уровня иммуноглобулинов, чем при изолированном введении циклофосфана. Уровень возвращается к соответствующему показателю у интактных животных к 14 суткам, а —уже на 7 сутки исследования. Однако имунофан не уменьшает степень выраженности лимфопении.

Таким образом, полученные нами экспериментальные данные свидетельствуют о том, что при острой инволюции тимуса, вызванной циклофосфаном, наряду с жировым перерождением органа, уменьшением размеров и дезорганизацией структуры долек, наблюдается дисбаланс биогенных аминов в его структурах со значительным возрастанием доли гистамина, который выступает как. фактор, тормозящий процессы восстановления. Имунофан, введенный на фоне иммуносупрессии циклофосфаном, оказывает положительное влияние на морфофункциональное состояние тимуса: увеличивает его массу, размеры долек, уменьшает количество жировой ткани, снижает уровень гистамина и увеличивает долю катехоламинов. Важную роль в процессах восстановления структуры тимуса и функциональной активности тимоцитов играют ЛГК тимуса и тучные клетки. Полученные. данные служат морфологическим обоснованием иммунокорригирующего действия имунофана и позволяют рекомендовать применение имунофана для снижения степени выраженности инволютивных изменений в тимусе, вызванных циклофосфаном.

ВЫВОДЫ-

1. Однократное введение циклофосфана в дозе 200 мг/кг приводит к дезорганизации. структуры тимуса, уменьшению его массы, размеров коркового и мозгового вещества долек, замещению паренхимы жировой тканью, значительному увеличению количества и величины тимусных ЛГК на фоне усиления люминесценции паренхимы.

2.. Морфологические изменения в тимусе, после введения циклофосфана сопровождаются изменениями функционального состояния его биоаминсодержаших структур и тучноклеточной популяции: во всех изучаемых клетках значительно возрастает . уровень гистамина, с максимальной выраженностью через 1 сутки; регистрируются волнообразные изменения уровня серотонина и: катехоламинов с максимальным повышением в ЛГК через 1 и 14 суток, в тимоцитах — через 1 и 7 суток; увеличивается количество тучных, клеток, преимущественно недегранулированных форм — через 1 сутки и дегранулированных — через 7 и 14 суток наблюдения.

3. Курсовое введение иммуномодулятора имунофана приводит к иным морфофункциональным изменениям в тимусе: увеличению размеров коркового и мозгового вещества тимусных долек через 7 и 14 суток после окончания курса инъекций; возрастанию уровня биогенных аминов в ЛГК и их микроокружении: гистамина — через 1 сутки, серотонина и катехоламинов — через 14 суток; повышению процентного содержания дегранулированных форм тучных клеток во все сроки наблюдения.

4. Введение циклофосфана в комбинации с. имунофаном сопровождается изменениями, отличными от таковых при изолированном введении циклофосфана: масса тимуса и размеры коркового и мозгового вещества долек уменьшаются в меньшей степени; содержание биогенных аминов изменяется волнообразно с пиком повышения через 1 и 14 суток; число тучных клеток увеличено через 1 и 7 суток с преобладанием дегранулированных форм.

5. Введение циклофосфана и имунофана приводит к изменению соотношения (СТ+ГСТ)/КА в структурах тимуса. При изолированном введении циклофосфана во всех изучаемых клетках через 1 и 7 суток оно возрастает, а через-14 суток нормализуется, за исключением тимоцитов коркового вещества и микроокружения-тучных клеток. Изолированное, введение имунофана сопровождается уменьшением соотношения (СТ+ГСТ)/КА во всех изучаемых клетках тимуса через 7 и 14 суток. При комбинации циклофосфана с имунофаном- данное соотношение в большинстве-клеток, особенно в паренхиме через 1 и 14 суток также уменьшается, что свидетельствует о повышении функциональной активности тимоцитов.

6. После введения циклофосфана выявляются значительные изменения показателей крови: снижается содержание эритроцитов, уровень гемоглобина, регистрируется выраженная лимфопепия на всех сроках наблюдения, особенно через 1 сутки; выявляется дисбаланс антителообразования с уменьшением уровня и через 1 и 7 суток и повышением уровня ^М. При комбинации циклофосфана с.имунофаном выявляется тенденция к ускорению нормализации количества эритроцитов, уровня гемоглобина и иммуноглобулинов, однако изменений содержания лимфоцитов по сравнению с изолированным введением циклофосфана не наблюдается.

7. Использование имунофана после введения циклофосфана уменьшает степень инволюции тимуса, приводит к перестройке функционирования его биоаминсодержащих структур и ускоряет процессы восстановления поврежденной ткани тимуса.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ:

1. Михайлова М.Н., Меркулова Л.М., Стручко Г.Ю., Иванова Н.Н. Изучение комбинированного действия циклофосфана и имунофана на биоаминсодержащие структуры тимуса. - Мат. IV Международной конференции «Колосовские чтения-2002». - СПб, 2002. - С. 189-190.

2. Меркулова Л.М., Стручко Г.Ю., Михайлова М.Н. Имунофан как корректор морфофункциональных изменений в тимусе, вызванных циклофосфаном. - Вестник Чувашского университета, 2003. - № 2. - С. 93101.

3. Михайлова М.Н., Меркулова Л.М., Стручко Г.Ю., Иванова Н.Н., Агафонкина Т.В., Хораськин С.Н., Ильин Е.Н. Изменения в биоаминсодержащих структурах тимуса как одно из проявлений иммуносупрессивного действия циклофосфана и возможность их коррекции имунофаном. - Аллергология и иммунология, 2003. - Т. 4, № 2. -С. 198.

4. Агафонкина Т.В., Стручко Г.Ю., Меркулова Л.М., Михайлова М.Н. Использование полиоксидония для коррекции постспленэктомического иммунодефицитного состояния. - Аллергология и иммунология, 2003. - Т. 4, № 2. - С. 146.

5. Михайлова М.Н., Меркулова Л.М., Стручко Г.Ю., Иванова Н.Н. Использование имунофана для коррекции изменений гематологических показателей, вызванных циклофосфаном. - International Journal on Immunorehabilitation, 2003. - Т. 5, № 2. - С. 230.

6. Михайлова М.Н., Меркулова Л.М., Стручко ГЛО. Влияние имунофана на морфометрические показатели тимуса в условиях экспериментальной иммунодепрессии циклофосфаном. - Мат. конф. «Фундаментальные и прикладные проблемы гистологии. Гистогенез и регенерация тканей». - СПб, 2004. - С. 123-124.

»47165

Подписано в печать 21.06.2004 Формат 60x84/16. Бумага писчая. Объем 1.0 печ.л. Тираж 100 экз. Заказ № 415

Чувашский государственный университет

Типография университета 428015 Чебоксары, Московский просп., 15

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Михайлова, Марина Николаевна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные представления о морфогенезе и гистологическом строении тимуса

1.2. Функции тимуса

1.3. Современные сведения о функциональном значении биогенных аминов и их участии в реакциях иммунитета

1.4. Современные представления о реакции организма на введение иммунотропных препаратов

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ,

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ,

3.1. Морфофункциональное состояние тимуса и гематологические показатели у интактных крыс

3.2. Морфофункциональное состояние тимуса и гематологические показатели после введения циклофосфана

3.2.1 .через 1 сутки

3.2.2 .через 7 суток

3.2.3 .через 14 суток

3.3. Морфофункциональное состояние тимуса и гематологические показатели после введения имунофана

3.3.1 .;через 1 сутки

3.3.2 .через 7 суток

3.3.3 .через 14 суток

3.4. Морфофункциональное состояние тимуса и гематологические показатели при комбинированном введении циклофосфана и имунофана

3.4.1 .через 1 сутки

3.4.2 .через 7 суток

3.4.3 .через 14 суток

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфофункциональные изменения тимуса и показатели крови после введения циклофосфана, имунофана и их комбинации"

Актуальность темы.

В последние десятилетия наблюдается рост числа инфекционных, аутоиммунных, аллергических и онкологических заболеваний. Эти болезни нередко вызваны первичным поражением иммунной» системы и часто сопровождаются вторичными нарушениями ее функций. Различные травмы, длительный стресс, интоксикации, неблагоприятные экологические условия, химио- и лучевая терапия также могут приводить к развитию вторичной иммунологической недостаточности (Караулов А.В., 2000; Ильина Н.И. и др., 2000; Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 2000).

Поддержание адекватного иммунного статуса при химио- и лучевой терапии опухолей является важнейшей клинической проблемой, однако до настоящего времени остается недостаточно изученной. Наслоение индуцированной цитостатиками иммунодепрессии на неблагоприятный общий иммунодефицитный фон, присущий течению опухолевых заболеваний, ведет к увеличению частоты вторичных осложнений (Гершанович М.Л., 1982; Ильина Н.И. и др., 2000; Кузьмина Е.Г. и др., 2003). При этом резко повышается восприимчивость к инфекциям, возможна также индукция вторичных злокачественных опухолей (Гершанович М.Л., 1982). Это связано, в основном, с повреждающим действием цитостатиков на лимфоидную ткань (Wang G.J., Cai L., 1999). Несмотря на очевидную важность проблемы, имеющиеся в литературе сведения в указанном аспекте крайне немногочисленны и фрагментарны, касаются, главным образом, токсического действия отдельных противоопухолевых препаратов на гемопоэз (Zandvoort A. et al., 2001).

Лимфоидная ткань, являясь основным местом развития специфических иммунологических реакций, содержит многочисленные клеточные популяции, участвующие в обеспечении генетического постоянства внутренней среды организма (Сепиашвили Р.И., 2003). При этом тимус рассматривается как «полигон», на котором посредством биологически активных пептидов формируются приобретенный и естественный иммунитет (Акмаев И.Г., 2001). Иммунорегуляторными факторами, обеспечивающими функции тимуса, наряду с цитокинами и тимическими гормонами, являются биогенные амины (Кветной И.М. и др., 2003; Hadden J.W., 1992, 1998). Несмотря на кажущуюся изученность различных структурно-функциональных характеристик, тимуса, следует отметить, что роль биогенных аминов в его функции, особенно в условиях иммунодефицита, изучена недостаточно. Отсутствуют сведения о состоянии биоаминсодержащих структур тимуса при цитостатической иммунодепрессии.

Среди препаратов иммунодепрессивного действия широкое распространение получил циклофосфан, который входит во многие схемы противоопухолевой терапии (Переводчикова Н.И., 1993; Allison А.С., 2000), используется для профилактики отторжения трансплантантов (Gorantla V.S. et al., 2000), для лечения аутоиммунных заболеваний (Дранник Г.Н. и др., 1994; Думан B.JL, 2002; Raza К. et al., 2000; Lamprecht P. et al., 2002). Ингибирование функциональной активности клеток иммунной системы является одним из главных причин токсического действия циклофосфана (Зуева Е.П., Яременко К.В., 1989; Zusman I. et al., 2002), поэтому проблема снижения его побочных действий является весьма актуальной (Земсков A.M. и др., 1994; Zusman I. et al., 2002).

Одним из путей повышения эффективности лечения онкологических и других заболеваний химиотерапевтическими препаратами является их комбинирование с иммуномодуляторами (Земсков A.M. и др., 1994; Менек Т.А. и др., 2000; Жданов В.В. и др. 2002; Мирюнусов М.Ш. и др., 2002). Имеются сведения о том, что применение препаратов тимического происхождения до начала или после химиотерапии у больных с онкологическими и аутоиммунными заболеваниями способствовало подъему ранее сниженных показателей иммунитета и улучшению состояния больных (Дранник Г.Н. и др., 1994; Garaci Е., 2000). Одним из тимических препаратов последнего поколения, использующимся при лечении различных иммунодефицитных состояний и в онкологической практике, является имунофан (Покровский В.И. и др., 1998; Лебедев В.В. и др., 1999; Караулов А.В., 2000). В доступной литературе мы не встретили работ, касающихся морфологических аспектов иммуномодулирующего действия имунофана.

Всестороннее исследование влияния иммунотропных препаратов на органы иммунной системы, особенно на тканевом уровне, необходимо для избирательного, целенаправленного воздействия на нарушенные гистофизиологические процессы, что, в свою очередь, является обязательным условием успешной иммуномодуляции, иммунокоррекции и иммунореабилитации (Труфакин В.А., Шурлыгина А.В., 2002). Поэтому детальное исследование морфофункционального состояния тимуса при иммуносупрессии, вызванной циклофосфаном, изучение морфологических аспектов иммуномодулирующего действия имунофана, а также возможностей коррекции имунофаном циклофосфан-индуцированных изменений представляет большой интерес как для практической медицины, так и для гистологии, иммунологии и иммуноморфологии.

В соответствии с целью работы поставлены следующие задачи:

1. Исследовать уровень биогенных аминов и их соотношение в люминесцирующих структурах тимуса, изучить популяцию тучных клеток и провести морфометрию коркового и мозгового вещества долек тимуса через 1, 7 и 14 суток после изолированного введения циклофосфана.

2. Определить содержание биоаминов и их соотношение в люминесцирующих структурах тимуса, изучить популяцию тучных клеток, провести морфометрию долек тимуса через 1, 7 и 14 суток после курсового введения имунофана.

Научная новизна работы

• Впервые показано, что острая инволюция тимуса, развивающаяся после введения циклофосфана, сопровождается увеличением количества люминесцирующих гранулярных клеток тимуса на фоне усиления люминесценции тимоцитарной паренхимы, возрастанием в них уровня биогенных аминов, особенно гистамина, повышением соотношения (серотонин+гистамин)/катехоламины.

• Впервые представлены результаты исследования цитоархитектоники тимуса после применения имунофана. Увеличение размеров коркового и мозгового вещества долек тимуса, снижение соотношения (серотонин+гистамин)/катехоламины в клетках тимуса может рассматриваться как одно из проявлений иммунокоррегирующего действия препарата.

• Установлено, что введение циклофосфана в комбинации с имунофаном сопровождается менее выраженными изменениями структуры тимуса, увеличением размеров коркового и мозгового вещества долек, уменьшением уровня биогенных аминов и соотношения (серотонин+гистамин)/катехоламины по сравнению с изолированным введением циклофосфана, однако не оказывает существенного влияния на измененные показатели крови.

Научно-теоретическая значимость

Практические рекомендации

Результаты исследования могут служить морфологическим обоснованием применения имунофана для уменьшения повреждающего действия циклофосфана на лимфоидную ткань тимуса и позволяют рекомендовать комбинированное использование циклофосфана и имунофана в онкологической практике. Работа представляет несомненный интерес для практических врачей: онкологов, гематологов, иммунологов и терапевтов.

Результаты работы используются в материалах лекций, при проведении практических занятий и семинаров на кафедре функциональной и лабораторной диагностики Чувашского госуниверситета, кафедре терапии и семейной медицины ГОУ "Институт усовершенствования врачей" МЗ Чувашской республики, а также в практической работе врачей-онкологов Республиканского клинического онкологического диспансера МЗ Чувашской республики. Результаты исследования нашли отражение в опубликованных статьях и тезисах. f

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Введение циклофосфана приводит к значительному увеличению количества люминесцирующих гранулярных клеток и тучных клеток в тимусе на фоне деформации долек, фрагментации и уменьшения размеров коркового и мозгового вещества и замещения паренхимы жировой тканью. Во всех изучаемых структурах тимуса, особенно в паренхиме, отмечается значительный рост уровня гистамина. Выявленные изменения являются следствием развития острой инволюции тимуса в ответ на введение цитостатика.

3. Введение циклофосфана в комбинации с имунофаном приводит к менее выраженным и более кратковременным изменениям морфологии тимуса, способствует снижению уровня гистамина и увеличению доли катехоламинов в его структурах, особенно в тимоцитах, по сравнению с изолированным введением циклофосфана, что свидетельствует о способности имунофана снижать степень инволюции тимуса и ускорять восстановление его структуры.

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены на Всероссийской научной конференции."Морфологические основы гистогенеза и регенерации тканей" (С.-Петербург, 2001), IV Международной конференции по функциональной нейроморфологии "Колосовские чтения-2002" (С.-Петербург,

2002); V Юбилейном съезде иммунологов и аллергологов СНГ (С.-Петербург,

2003), 1-ой Всероссийской конференции по иммунотерапии (Сочи, 2003), на гистологической конференции "Фундаментальные и прикладные проблемы гистологии. Гистогенез и регенерация тканей" (С.-Петербург, 2004).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 158 страницах машинописного текста (собственно текста — 125 страниц), состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, четырех разделов собственных исследований, обсуждения результатов и заключения, выводов, списка литературы. Работа иллюстрирована 10 таблицами, 63 рисунками. Список литературы включает 307 источников, в том числе 137 зарубежных.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Михайлова, Марина Николаевна

ВЫВОДЫ

1. Однократное введение циклофосфана в дозе 200 мг/кг приводит к дезорганизации структуры тимуса, уменьшению его массы, размеров коркового и мозгового вещества долек, замещению паренхимы жировой тканью, значительному увеличению количества и величины тимусных ЛТК на фоне усиления люминесценции паренхимы.

2. Морфологические изменения в тимусе после введения циклофосфана сопровождаются изменениями функционального состояния его биоаминсодержащих структур и тучноклеточной популяции: во всех изучаемых клетках значительно возрастает уровень гистамина, с максимальной выраженностью через 1 сутки; регистрируются волнообразные изменения уровня серотонина и катехоламинов с максимальным повышением в ЛГК через 1 и 14 суток, в тимоцитах — через 1 и 7 суток; увеличивается количество тучных клеток, преимущественно недегранулированных форм — через 1 сутки и дегранулированных — через 7 и 14 суток наблюдения.

4. Введение циклофосфана в комбинации с имунофаном сопровождается изменениями, отличными от таковых при изолированном введении циклофосфана: масса тимуса и размеры коркового и мозгового вещества долек уменьшаются в меньшей степени; содержание биогенных аминов изменяется волнообразно с пиком повышения через 1 и 14 суток; количество тучных клеток увеличено через 1 и 7 суток с преобладанием дегранулированных форм.

5. Введение циклофосфана и имунофана приводит к изменению соотношения (СТ+ГСТ)/КА в структурах тимуса. При изолированном введении циклофосфана во всех изучаемых клетках через 1 и 7 суток оно возрастает, а через 14 суток нормализуется, за исключением тимоцитов'коркового вещества и микроокружения тучных клеток. Изолированное введение имунофана сопровождается уменьшением соотношения (СТ+ГСТ)/КА во всех изучаемых клетках тимуса через 7 и 14 суток. При комбинации циклофосфана с имунофаном данное соотношение в большинстве клеток, особенно в паренхиме через 1 и 14 суток также уменьшается, что свидетельствует о повышении функциональной активности тимоцитов.

6. После введения циклофосфана выявляются значительные изменения показателей крови: снижается содержание эритроцитов, уровень гемоглобина, регистрируется выраженная лимфопения на всех сроках наблюдения, особенно через 1 сутки; выявляется дисбаланс антителообразования с уменьшением уровня IgA и IgG через 1 и 7 суток и повышением уровня IgM. При комбинации циклофосфана с имунофаном выявляется тенденция к ускорению нормализации количества эритроцитов, уровня гемоглобина и иммуноглобулинов, однако изменений содержания лимфоцитов по сравнению с изолированным введением циклофосфана не наблюдается.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В последнее время во всем мире растет интерес к исследованию функций иммунной системы на тканевом уровне. Прогрессирующее снижение иммунологической реактивности населения приводит к увеличению частоты инфекционных, аллергических, аутоиммунных и онкологических заболеваний. Понимание патогенеза нарушений иммунной системы и адекватная коррекция возможны лишь при всестороннем изучении внутритканевых и межклеточных механизмов регуляции иммунных процессов и их изменений под действием иммунотропных препаратов (Ильина Н.И. и др., 2000; Москалец О.В. и др., 2002; Манько В.М. и др., 2002, Труфакин В.А., Шурлыгина А.В., 2002).

Цитостатические препараты широко применяются при лечении злокачественных, лимфопролиферативных, аутоиммунных и других заболеваний (Булкина З.П., 1991; Дранник Г.Н. и др., 1994). К сожалению, эти препараты часто усугубляют имеющийся дисбаланс в иммунной системе и приводят к развитию инфекционных и других осложнений. В связи с этим повреждающее действие цитостатиков на лимфоидную ткань является одной из центральных проблем в химиотерапии опухолей (Гершанович M.JI., 1982; Ильина Н.И. и др., 2000; Кузьмина Е.Г. и др., 2003).

Циклофосфан, обладающий выраженным иммунодепрессивным действием, является одним из наиболее широко применяющихся в онкологической практике препаратов. Ингибирование функциональной активности иммунной системы является одним из главных причин токсического действия циклофосфана (Зуева Е.П., Яременко К.В., 1989; Zusman I. et al., 2002).

Морфогенетические процессы, обеспечивающие функции иммунной системы (пролиферация, дифференцировка, миграция, кооперация и апоптоз) генетически детерминированы, обусловлены метаболизмом, экспрессией рецепторов и продукцией цитокинов, синхронизированы с факторами внешней среды, взаимодействуют с нервной и эндокринными системами, поддержаны микроокружением (Труфакин В.А., Шурлыгина А.В., 2002). В регуляции этих процессов участвуют внутрииммунные регуляторные факторы — гормоны тимуса, биогенные амины, цитокины (Девойно Л.В., 1985; Ноздрачев А.Д., 2000; Hadden J.W., 1998).

Биогенные амины в иммунных органах, в частности тимусе, играют важную роль в обеспечении местного гомеостаза и взаимодействии с другими органами и системами организма (Кветной И.М. и др., 2003). В зависимости от концентрации и соотношения они обеспечивают нейроиммуномодуляцию, влияя на процессы пролиферации и дифференцировки лимфоцитов (Вайнсфельд И.Л., Кассиль Г.Н., 1981).

Из литературы известно, что в создании биоаминного микроокружения в тимусе участвуют люминесцирующие аминосодержащие структуры тимуса, в частности, премедуллярные и субкапсулярные клетки, которые составляют систему, обеспечивающую местный нейрогуморальный гомеостаз тимуса (Сергеева В.Е., Гордон Д.С., 1992). Различные реакции премедуллярных и субкапсулярных клеток в фармакологическом эксперименте побудили исследователей рассматривать первые как аминопродуценты, а вторые — как поглотители биоаминов, возможно макрофагальной природы, обладающие способностью связывать нейромедиаторы (Елисеева Л.С. и др, 1982; Гордон Д.С. и др., 1982; Сергеева В.Е., 1992).

Природа люминесцирующих гранулярных клеток тимуса окончательно не установлена. По данным литературы, эти клетки могут быть отнесены к макрофагам, о чем свидетельствует наличие в них кислой фосфатазы, неспецифической эстеразы, однако, как было выявлено позднее, они не обладают прямым фагоцитозом (Сергеева В.Е. и др., 1992). В то же время наличие в них серотонина, катехоламинов, гистамина, положительная реакция на альдегид-фуксин, аргирофилия и скрытая метахромазия свидетельствует об их принадлежности к клеткам APUD-системы (Сергеева В.Е. и др., 1994). Исследования последних лет показали, что люминесцирующие гранулярные клетки тимуса экспрессируют 1а-антиген и содержат белок S-100, что позволяет отнести их к дендритным клеткам (Гордон Д.С. и др., 2001; Стручко Г.Ю., 2003). Возможно, это тимические интердигитальные дендритные клетки, относящиеся к разновидности лимфоидных дендритных клеток (Макаренкова В.П., 2002). Как известно, они! играют ключевую роль, в иммунном ответе. Сосредотачивая и представляя антигены на своей поверхности, продуцируя цитокины, они запускают и регулируют адаптивный иммунный ответ. Дендритным клеткам тимуса принадлежит основная роль в осуществлении процессов отрицательной селекции тимоцитов (Пащенков М.В. и др., 2001, 2002).

Нами установлено, что введение циклофосфана приводит к значительной перестройке цитоархитектоники тимуса и функционирования его биоаминсодержащих структур. Через 1 сутки после окончания введения циклофосфана и физиологического раствора (через 13 суток после инъекции циклофосфана) большая часть ткани тимуса замещена жировой тканью, дольки имеют веретенообразную или полулунную форму, граница между корковым и мозговым веществом плохо дифференцируется. Значительно увеличивается количество люминесцирующих гранулярных клеток как кортико-медуллярной, так и субкапсулярной зон. Клетки становятся очень крупными, плотно заполняются гранулами, часто сливаются друг с другом, значительно усиливается люминесценция окружающей паренхимы.

Особенностью структуры тимуса через 7 суток является полиморфизм долек и фрагментация коркового и мозгового вещества. Обнаруживаются малоклеточные участки, в которых корковое и мозговое вещество долек четко не дифференцируются, люминесцирующие клетки расположены хаотично. Часто выявляются также дольки с прерывистым рядом крупных, имеющих тенденцию к разрыхлению и распаду, премедуллярных клеток. В корковом веществе таких долек появляется множество глубоких корковых люминесцирующих клеток. Обнаруживаются также резко измененные, возможно, погибающие дольки с остатками распавшихся люминесцирующих клеток.

Через 14 суток в тимусе на фоне фрагментации коркового и мозгового вещества формируются маленькие дольки с прерывистыми рядами премедуллярных клеток, местами образующих скопления. Премедуллярные клетки крупные, плотно заполнены беловато-желтыми гранулами. В мозговом веществе формирующихся долек, имеющем правильно округлую форму, выявляются внутримозговые люминесцирующие клетки.

Таким образом, наши исследования показали, что введение циклофосфана приводит к значительному уменьшению размеров коркового и мозгового вещества долек, их деформации, резкому сокращению массы тимуса и жировому перерождению органа, особенно выраженные через 1 сутки. Эти изменения свидетельствуют о развившейся острой инволюции тимуса (Ивановская Т.Е. и др., 1996; Basta-Kaim A. et al., 2001). Вероятно, это связано с повреждением ДНК лимфоцитов под действием циклофосфана (Москалева Е.Ю. и др., 1993), уменьшением процента тимоцитов в S-стадии клеточного цикла (Miyauchi A. et al., 1990) и торможением пролиферативной активности тимоцитов (Ishiyama N. et al., 1999). Известно, что циклофосфан вызывает прямую индукцию апоптоза тимоцитов (Strauss G. et al., 2002). Кроме того, апоптоз тимоцитов может быть опосредован через Fas-лиганды, экспрессия которых после введения циклофосфана в тимусе значительно увеличивается (Wang G.J., Cai L., 1999).

Апоптоз расценивается как способ «очистки» ткани от возможных последствий при сублетальном повреждении клеток, недостаточном для прямого их уничтожения путем некроза. Однако за счет включения специальных биохимических механизмов апоптоз значительно превосходит репаративный потенциал ткани и определяет уничтожение всей ткани (Гомазков О.А., 2001). Основной мишенью действия циклофосфана являются

CD3- и дубль-позитивные незрелые корковые тимоциты (Miyauchi A. et al., 1990; Hiramine С., 1996). В высоких дозах он также уменьшает количество Т-хелперов (Наполов Ю.К., Борисов К.Б., 1991). Повышенным лимфоцитолизом, вероятно, можно объяснить выявленное нами оголение стромы и появление полостей в корковом и мозговом веществе некоторых долек после введения циклофосфана.

Нами установлено значительное увеличение количества и величины люминесцирующих гранулярных клеток как в кортико-медуллярной зоне, так и во всем корковом веществе, особенно через 1 сутки. Это может быть связано с увеличением количества и активности макрофагов вследствие повышенного разрушения лимфоцитов, и согласуется с данными литературы (Абдурахманов М., Тухтаев К.Р., 1999; Gives К.М. et al., 2000).

Hiramine С. с соавт. (1996) обнаружили структуры, фагоцитирующие апоптотические тимоциты в тимусе после введения циклофосфана. Часть этих « структур, рассеянных по всему корковому веществу, оказались производными макрофагов. В то же время авторы указывают, что большинство из этих структур имеет эпителиальную природу и локализуются в субкапсулярной и наружной коре, периваскулярной области коркового вещества, кортико-медуллярной зоне и частично в мозговом веществе. Кроме того, Yoon S. с соавт. (1997) после введения циклофосфана обнаружили ультраструктурные изменения в кортикальных эпителиальных клетках, свидетельствующие об их активации.

Имеются также данные о том, что после токсических воздействий в тимусе увеличивается число интердигитирующих клеток (Абдурахманов М., Тухтаев К.Р., 1999). С помощью иммуногистохимических методов показано, что в тимусе крыс при иммуносупрессии, индуцированной циклофосфамидом, отмечается увеличение активности, количества, величины и изменение экспрессии поверхностных молекул макрофагов и дендритных клеток (Yoon S.,

Yoo H.J. et al., 2003). При этом изменяется экспрессия межклеточных молекул адгезии в корковом веществе тимуса.

Показана способность циклофосфана в присутствии некоторых цитокинов, в частности, фактора стволовых клеток (ФСК) мобилизовывать дендритные клетки из CD34+ стволовых кроветворных клеток (Menedez P. et al.,. 2001; Buchler Т. et al.,. 2003). ФСК преимущественно вырабатывается стромальными клетками, а также тучными клетками (Быков B.JI., 2000). Установлено увеличение количества его мРНК в костном мозге после введения циклофосфана (Psenak О. et al., 2003). Возможно, усиление миграции дендритных клеток в тимус является одной из причин увеличения количества ЛГК в тимусе, обнаруженное нами после введения циклофосфана. Известно, что дендритными клетками тимуса осуществляется негативная селекция тимоцитов путем индукции апоптоза Fas-лигандами, экспрессированными на поверхности этих клеток (Хаитов P.M. и др., 2000).

С помощью цитоспектрофлюориметрии нами выявлено, что введение циклофосфана приводит к значительному изменению биоаминообеспечения структур тимуса. Содержание биогенных аминов, особенно гистамина, во всех ЛГК тимуса и их микроокружении резко возрастает, максимально через 1 сутки после курса введения циклофосфана и физиологического раствора. Значительное увеличение уровня биоаминов в аминопродуцирующих клетках кортико-медуллярной зоны сопровождается усилением поглотительной способности клеток субкапсулярной зоны, что проявляется нарастанием уровня биогенных аминов в этих клетках. Избыток биоаминов также выходит в тимоцитарную паренхиму коркового и мозгового вещества. Особенно значителен в тимоцитах рост гистамина, цифры которого превышают норму в 3-4 раза. Рост уровня биогенных аминов во всех структурах тимуса может быть следствием увеличения количества макрофагов и дендритных клеток и связано с регуляторным влиянием биогенных аминов на процессы апоптоза тимоцитов (Стручко Г.Ю., 2003).

В дальнейшем уровень серотонина и катехоламинов в люминесцирующих гранулярных клетках снижается почти до нормы, а через 14 суток вновь возрастает. Содержание гистамина снижается плавно вплоть до 14 суток, но не достигает нормы. В тимоцитарной паренхиме коркового и мозгового вещества уровень всех биогенных аминов снижается плавно, содержание моноаминов при этом к 14 суткам нормализуется, в то время как уровень гистамина остается высоким.

Известно, что для регуляции функций клеток имеет значение не столько содержание в них биологически активных веществ, сколько их соотношение. Поэтому мы использовали соотношение (серотонин+гистамин)/катехоламины (СТ+ГСТ/КА), характеризующее суммарно-направленное действие биогенных аминов. Учитывая преимущественно иммуносупрессирующее действие серотонина и гистамина (Девойно Л.В., 2002; Бережная Н.М., Сепиашвили Р.И., 2003), и иммуностимулирующее — катехоламинов (Идова Г.В. и др., 2002), можно считать, что возрастание показателя свидетельствует об угнетении, функциональной активности структур, а снижение - о стимулировании (Стручко Г.Ю., 2003).

Нами зарегистрировано, что параллельно с возрастанием уровня биогенных аминов через 1 сутки во всех структурах повышается соотношение СТ+ГСТ/КА за счет преобладания доли супрессорных биоаминов, особенно гистамина. Следует обратить внимание на то, что максимальное увеличение соотношения отмечается в тимоцитарной паренхиме коркового, мозгового вещества и микроокружения тучных клеток, что приводит к подавлению функциональной активности тимоцитов под влиянием циклофосфана.

Мы обнаружили, что после введения циклофосфана в междольковых промежутках тимуса в 3-5 раз увеличивается количество тучных клеток. Рост количества тучных клеток, возможно, связан с увеличением мобилизации стволовых клеток под действием циклофосфана и ФСК (Menedez P. et al.,. 2001) и миграции в тимус образующихся из них тучных клеток для инактивации биогенных аминов гликозаминогликанами (Быков В.А., 2000).

В дальнейшем в тимусе, вероятно, одновременно происходят процессы утилизации погибшей лимфоидной ткани и ее восстановления, о чем свидетельствуют изменения,. обнаруженные через 7 суток: увеличение массы тимуса, полиморфизм долек, фрагментация коркового и мозгового вещества и увеличение их размеров, снижение общего количества люминесцирующих клеток, тенденция к их разрыхлению и распаду, а также уменьшение уровня биогенных аминов в ЛГК и их микроокружении по сравнению с предыдущим сроком исследования.

Нами также зарегистрировано, что через 7 суток соотношение СТ+ГСТ/КА в премедуллярных, тучных клетках и тимоцитарном микроокружении значительно превышает норму, особенно в тимоцитах коркового вещества и микроокружения тучных клеток. Поскольку гистамин и серотонин обладают свойством подавлять иммунный ответ (Девойно JI.B. и др., 1983, 2002), то их значительное преобладание свидетельствует об иммуносупрессивной направленности дифференцировки тимоцитов после введения циклофосфана. Это подтверждается данными Al-Jmara L.J. с соавт. (1985), которые выявили угнетающее действие гистамина на пролиферативные процессы в лимфоидной ткани и Brostoff S. с соавт. (1980), обнаружившими усиление дифференцировки тимоцитов в сторону супрессоров под влиянием гистамина.

Повторное увеличение количества ЛГК и уровня серотонина и катехоламинов в них с одновременным увеличением количества тучных клеток и формирование множества мелких долек в тимусе через 14 суток, по нашему мнению, связан с активизацией в этот период процессов регенерации в тимусе после острой инволюции, индуцированной циклофосфаном. Имеются сведения о том, что после введения циклофосфана наблюдается длительно сохраняющееся повышение функциональной активности тучных клеток

Красноженов Е.П., 1994). По данным литературы, тучные клетки способны вырабатывать факторы, опосредующие их участие в регуляции процессов репарации и ангиогенеза (Клименко Н.А., Татарко С.В., 1995; Reed J.A. et al., 1995). Кроме того, известно, что циклофосфан может непосредственно активировать, высвобождение гистамина из тучных клеток (Botana L.M. et al., 1992), который, в свою очередь, вызывает новообразование микрососудов, воздействуя на Нг и Н2-рецепторы эндотелиоцитов (Sorbo J. et al., 1994). Возможно, зарегистрированная нами в этот срок повышенная люминесценция сосудов в мозговом и корковом веществе формирующихся долек, а также выявление множества дегранулированных форм тучных клеток в паренхиме резко измененных долек связана с повышением активности тучных клеток и их участием в процессах репарации ткани тимуса после повреждения циклофосфаном. Кроме того, тучные клетки активно участвуют в поглощении и перераспределении биогенных аминов (Гордон Д.С. и др., 1974, 1993). Это подтверждается и тем, что уровень биогенных аминов в тучных клетках на этом сроке исследования почти в 2 раза превышает норму.

Зарубежными учеными показано, что при регенерации тимуса после острой инволюции, вызванной циклофосфаном, в тимусных субкапсулярных, околосептальных, периваскулярных и кортикальных эпителиальных клетках крыс увеличивается экспрессия TrkA-рецептора, высокоспецифичного для фактора роста нервов (Yoon S., Lee H.W. et al., 2003). В то же время известно, что стимулированные иммунологическими или неиммунологическими механизмами тучные клетки синтезируют различные цитокины и хемокины, в том числе фактор роста нервов (Быков B.J1., 1999; Leon A. et al., 1994; Nilsson G. et al., 1997). Увеличение продукции этого фактора, возможно, играет определенную роль в образовании новых Т-клеток для замещения поврежденных Т-клеток при регенерации тимуса после повреждения циклофосфаном (Yoon S., Lee H.W. et al., 2003).

Таким образом, через 14 суток после окончания введения циклофосфана и физиологического раствора происходит частичное восстановление структуры тимуса. Важную роль при этом играют ЛГК и тучные клетки. Однако сохранение фрагментации коркового и мозгового вещества, обнаружение полостей^в корковом и. мозговом веществе некоторых долек, наличие резко измененных долек через 14 суток после введения циклофосфана и физиологического раствора свидетельствует о том; что полного восстановления ткани тимуса на этом сроке не происходит.

Уровень гистамина через 14 суток после окончания введения циклофосфана и физиологического раствора во всех клетках тимуса наиболее низкий за весь период наблюдения, но, тем не менее, значительно превышает норму, особенно в тимоцитарной паренхиме. Соотношение СТ+ГСТ/КА по сравнению с предыдущим сроком снижается до нормы во всех клетках, за исключением тимоцитов коркового вещества и микроокружения тучных клеток, где оно остается высоким, что свидетельствует о сохранении иммуносупрессии и подавления функциональной активности этих клеток.

Таким образом, рост количества ЛГК в тимусе, связанный с увеличением количества макрофагов и повышенной миграцией дендритных клеток, значительное увеличение уровня биогенных аминов, особенно гистамина в ЛГК и тимоцитарной паренхиме, возрастание соотношения СТ+ГСТ/КА можно считать одним из критериев циклофосфан-индуцированной иммуносупрессии.

Введение циклофосфана также приводит к изменениям содержания форменных элементов крови и уровня циркулирующих иммуноглобулинов. Количество эритроцитов и уровень гемоглобина достоверно уменьшается через 1 сутки после окончания введения циклофосфана и последующего курсового введения физиологического раствора, в дальнейшем незначительно повышается, так и не достигая нормы. Считается, что это обусловлено прямым ингибирующим влиянием препарата на гемопоэз (Гершанович М.Л., 1982; Дыгай A.M. и др., 2000).

По данным литературы, после введения циклофосфана в высоких дозах угнетение гемопоэза кратковременное, начальные признаки регенерации отмечаются уже через неделю. В процесс восстановления вовлекаются различные цитокины и фактор стволовых клеток, экспрессия которых в костном мозге в это время увеличивается (Psenak О. et al., 2003). Восстановление гемопоэза происходит в течение 2-3 недель и завершается в течение месяца (Булкина З.П., 1991).

Согласно литературным данным, токсическая миелодепрессия проявляется определенной очередностью изменений в периферической крови: вначале регистрируется лейкопения, затем — тромбоцитопения и только в последнюю очередь — анемия, что связано с длительным сроком жизни эритроцита (Гершанович M.JL, 1982). Кроме того, циклофосфан, в отличие от других хлорэтиламинов, обладает менее выраженной лейкотоксичностью (Булкина З.П., 1991). Как показали наши исследования, через 1, 7 и 14 суток после введения циклофосфана и последующего курсового введения физиологического раствора (по истечении 13, 19 и 26 суток после введения циклофосфана) анемия сохраняется, а уменьшения содержания лейкоцитов не наблюдается.

По данным литературы, явления дезорганизации клеточного состава костного мозга после однократного введения циклофосфана в максимально переносимой дозе сохраняются длительно (Богдашин И.В. и др., 1992; Масная Н.В., Ратнер Г.М., 2000), что связано с истощением пула стволовых кроветворных клеток, а также изменениями в гемопоэзиндуцирующем щ микроокружении, играющем важную роль в регуляции пролиферации и дифференцировки стволовых кроветворных клеток (Гольдберг Е.Д. и др., 1999).

Нами также установлено, что введение циклофосфана приводит к значительному снижению содержания лимфоцитов. Через 1 сутки после окончания введения циклофосфана и физиологического раствора количество лимфоцитов падает в 3 раза, затем постепенно повышается, однако, не достигает нормы. Это согласуется с данными литературы о том, что к циклофосфану наиболее чувствителен лимфопоэз (Булкина З.П., 1991; Масная Н.В., Ратнер Г.М., 2000). Препарат оказывает прямое лимфолитическое действие, разрушая малые лимфоциты, что и приводит к формированию лимфопении (Гершанович M.JL, 1982).

Считается, что ингибирующий эффект циклофосфана направлен, главным образом, на популяцию В-клеток. При его введении истощаются В-клеточно зависимые области селезенки и лимфатических узлов и угнетается их стимулированная пролиферация (Леонтьева Т.И. и др., 1988; Запускалова О.Б. и др., 1989; Наполов Ю.К., Борисов К.Б., 1991; Hemendinger R.A., Bloom S.E., 1996; Allison А.С., 2000; Zandvoort A. et al., 2001).

Нарушение образования и дифференцировки В-клеток приводит к уменьшению образования иммуноглобулинов (Масная Н.В., Ратнер Г.М., 2000), с чем, вероятно, связано выявленное нами снижение уровня иммуноглобулинов, преимущественно класса А и G в крови подопытных животных. Через 1 сутки их уровень достоверно ниже, чем у интактных крыс, затем плавно увеличивается и к 14 суткам достигает нормы. Уровень иммуноглобулинов класса М при введении циклофосфана немного выше нормы через 7 и 14 суток.

Среди препаратов иммуномодулирующего действия, недавно внедренных в клиническую практику для лечения иммунодефицитных состояний различной этиологии, особый интерес представляет имунофан. Известно, что этот препарат обладает иммунокорригирующим действием в отношении Т-клеточного, фагоцитарного иммунитета, оказывает положительный эффект при лечении онкологических и других заболеваний. Наличие у препарата детоксикационного действия особенно важно для восстановления иммунитета после химиолучевой терапии (Покровский В.И., 1998; Караулов А.В., 2000). Однако в литературе совершенно отсутствуют сведения о морфофункциональном состоянии иммунных органов, в том числе тимуса, при его введении, а также о возможности коррекции имунофаном циклофосфан-индуцированных изменений в тимусе.

Нами впервые установлено, что курсовое введение имунофана приводит к изменениям морфологии тимуса и функционирования его • биоаминсодержащих структур. Имунофан достоверно увеличивает ширину коркового, диаметр и площадь мозгового вещества тимуса с соответствующим увеличением массы органа через 7 и 14 суток после окончания курса инъекций. Выявляется увеличение количества ЛТК кортико-медуллярной и субкапсулярной зон через 1 и 14 суток. Через 14 суток клетки как кортико-медуллярной, так и субкапсулярной зон становятся более крупными и плотно заполненными гранулами.

Мы полагаем, что увеличение размеров коркового и мозгового вещества долек при введении имунофана происходит за счет активации пролиферации и дифференцировки тимоцитов, которая может быть опосредована включением продукции факторов, контролирующих рост и развитие лимфоцитов (Покровский В.И., 1998; Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 2000). Известно, что препарат стимулирует образование ИЛ-2 иммунокомпетентными клетками и повышает чувствительность лимфоидных клеток к этому лимфокину (Покровский В.И., 1998; Караулов А.В., 2000). ИЛ-2 является основным ростовым фактором Т-лимфоцитов, участвующим в их пролиферации и дифференцировке (Симбирцев А.С., 1998). Клетками-продуцентами ИЛ-2 являются периферические Т-хелперы преимущественно клеточного ответа (Thl), а в тимусе — медуллярные клетки с фенотипом CD4+8~ и CD4"8", а также дубль-отрицательные тимоциты субкапсулярной зоны (Ярилин А.А., 1991; Симбирцев А.С., 1998). Показано, что при его введении увеличивается общее количество клеток в тимусе, содержание CD3+-, CD4+- и CD8+- тимоцитов и спленоцитов (Шурлыгина А.В. и др., 2000).

Мы установили, что имунофан также влияет на биоаминобеспечение структур тимуса. Начальное увеличение содержания гистамина сменяется возвращением к показателям интактных крыс. Но через 14 суток происходит повторный, более значительный рост уровня серотонина и катехоламинов и незначительное повышение содержания гистамина во всех ЛГК и их микроокружении. Следует отметить, что в тимоцитах, особенно мозгового вещества, увеличение серотонина несущественно, а катехоламины повышаются более значительно. Соотношение СТ+ГСТ/КА, повышенное через 1 сутки, постепенно снижается, опускаясь через 14 суток ниже нормы во всех клетках за счет увеличения катехоламинов и относительного снижения серотонина и гистамина.

Выявленное нами увеличение количества и величины ЛГК, а также уровня биогенных аминов во всех структурах тимуса с одновременным снижением соотношения СТ+ГСТ/КА через 14 суток после курса введения имунофана свидетельствует об активации функциональной активности ЛГК и тимоцитов под влиянием ИЛ-2, образование которого стимулируется имунофаном. Это подтверждается данными о том, что ИЛ-2 оказывает активирующее действие и на Т-лимфоциты, и на макрофаги путем взаимодействия со специфическими рецепторами на мембранах этих клеток (Симбирцев А.С., 1998). Нами также выявлено, что при этом увеличивается содержание катехоламинов в тимоцитарной паренхиме, которые, в свою очередь, обладая преимущественно иммуностимулирующим действием и способностью активировать иммунокомпетентные клетки (Божко Г.Х., 1984; Идова Г.В. и др., 2002), могут способствовать ускорению процессов созревания и дифференцировки лимфоцитов (Leposavic G. et al., 1992).

Наши исследования также показали, что после введения имунофана в строме тимуса увеличивается процентное содержание дегранулированных форм тучных клеток. Это, возможно, связано с повышением их функциональной активности под влиянием имунофана, которому предшествует активация Т-лимфоцитов и усиление ими продукции цитокинов и других биологически активных веществ. Установлено, что медиаторы Т-лимфоцитов вызывают дегрануляцию тучных клеток (Mekori Y.A., Metcalf D.D., 1999). В свою очередь, стимулированные тучные клетки продуцируют и секретируют большое количество различных биологически активных веществ, в том числе цитокины ИЛ-1, ИЛ-2, колоние-стимулирующий фактор гранулоцитов и моноцитов, фактор стволовых клеток, фактор роста нервов и другие (Быков1 В.Л., 1999). Не исключается, что усиление продукции этих факторов также способствует увеличению активности как ЛТК, так и лимфоцитов тимуса.

После комбинированного введения имунофана и циклофосфана структура тимуса и биаминообеспечение клеток существенно отличаются от таковых при изолированном введении обоих препаратов. Нами установлено, что применение имунофана на фоне введения циклофосфана способствует увеличению массы тимуса, размеров коркового и мозгового вещества долек и ускорению восстановления цитоархитектоники тимуса.

Процессы восстановления происходят уже через 1 сутки после комбинированного курса, о чем свидетельствуют повышение массы тимуса, увеличение размеров долек, особенно ширины коркового вещества (в 2 раза) и уменьшение количества жировой ткани вокруг долек по сравнению с изолированном введением циклофосфана. Отмечается менее выраженное увеличение количества ЛГК, значительное разрыхление клеток кортико-медуллярной зоны, что, возможно, связано с завершением процессов утилизации погибшей лимфоидной ткани. Однако дезорганизация структуры тимусных долек сохраняется: часто обнаруживаются малоклеточные дольки с фрагментированным корковым и мозговым веществом, встречаются резко измененные "погибающие" дольки. Через 7 суток масса тимуса и размеры коркового и мозгового вещества у крыс с изолированным введением циклофосфана и в группе с комбинированным введением циклофосфана и имунофана отличаются мало, но намечается тенденция к нормализации структуры тимуса.

В дальнейшем продолжается достоверное увеличение и ширины коркового, и диаметра мозгового вещества долек с соответствующим увеличением массы тимуса в группе с комбинированным введением препаратов по сравнению с изолированным введением циклофосфана, однако, размеры коркового и мозгового вещества долек остаются все-таки ниже нормы. Следует заметить, что структура долек через 14 суток практически не отличается от такового у интактных крыс.

Мы полагаем, что имунофан уменьшает степень разрушения лимфоцитов, поскольку обладает способностью защищать их ДНК от повреждения, вызванного циклофосфаном (Караулов А.В., 2000), тем самым уменьшая степень инволютивных изменений в тимусе. Кроме того, нами установлено, что имунофан ускоряет процессы восстановления структуры тимуса после острой инволюции, индуцированной циклофосфаном. Мы считаем, что это может быть опосредовано индукцией синтеза ИЛ-2 лимфоцитами (Покровский В.И., 1998; Караулов А.В., 2000). ИЛ-2, в свою очередь, аутокринно стимулирует пролиферацию лимфоцитов (Симбирцев А.С., 1998). Из литературы известно, что введение имунофана мышам с иммунодепрессией, вызванной циклофосфаном, восстанавливало сниженный пролиферативный ответ лимфоцитов на митогены и ИЛ-2 (Тутельян А.В., 1993).

Кроме того, нами выявлено совершенно иное перераспределение биогенных аминов в ЛГК и их микроокружении после комбинированного введения циклофосфана и имунофана. Во-первых, уровень биогенных аминов во все сроки достоверно ниже по сравнению с изолированным введением циклофосфана. Во-вторых, при комбинации препаратов во всех структурах тимуса гистамин увеличивается незначительно, тогда как в группе с изолированным введением циклофосфана его уровень сохраняется очень высоким на всех сроках исследования. И, наконец, в-третьих - соотношение

СТ+ГСТ)/КА во всех структурах тимуса достоверно ниже, чем у крыс с изолированным введением циклофосфана. Через 14 суток данное соотношение соответствует норме, что является признаком нормализации функциональной активности тимоцитов. Следует также отметить более значительное увеличение уровня катехоламинов в тимоцитарной паренхиме по сравнению с иммуносупрессорными биоаминами через 14 суток после комбинированного введения препаратов.

Обнаруженное нами снижение соотношения (СТ+ГСТ)/КА, особенно значительное через 1 сутки после комбинированного введения циклофосфана и имунофана свидетельствует об активации функциональной активности как тимоцитов, так и ЛГК. Это играет немаловажную роль в восстановлении его структуры после повреждения циклофосфаном. Одновременно в тимусе значительно увеличивается процентное содержание дегранулированных форм тучных клеток и повышается их функциональная активность, что также способствует ускорению репаративных процессов в органе.

В литературе имеются данные об ускорении восстановления количества и функций Т-клеток при иммунодефиците, вызванном циклофосфаном, тимическими препаратами, что косвенно подтверждает наши данные (Черненко О.Д., Гриневич Ю.А., 1991; Ohmori Н. et al., 2001), так как имунофан является синтетическим производным тимического гормона тимопоэтина.

В изменениях показателей крови в группе крыс с комбинированным введением циклофосфана и имунофана достоверных отличий от группы с изолированным введением циклофосфана не обнаружено, отмечается лишь тенденция к более ранней нормализации содержания эритроцитов, лейкоцитов и уровня гемоглобина. Однако количество лимфоцитов остается таким же низким, как при изолированном введении циклофосфана, изменения содержания иммуноглобулинов недостоверны.

Таким образом, опираясь на полученные нами экспериментальные данные, мы можем заключить, что введение циклофосфана приводит к острой инволюции тимуса, выражающейся в уменьшении размеров и фрагментации коркового и мозгового вещества, деформации долек, сокращении массы тимуса, жировом перерождении органа и возрастании доли гистамина в биоаминсодержащих структурах. Имунофан, введенный на фоне иммуносупрессии циклофосфаном, оказывает положительное влияние на морфофункциональное состояние тимуса: увеличивает его массу, размеры долек, уменьшает количество жировой ткани, снижает уровень гистамина и увеличивает долю катехоламинов. Важную роль в процессах восстановления структуры тимуса и функциональной активности тимоцитов играют ЛГК тимуса и тучные клетки. Полученные данные позволяют рекомендовать применение имунофана для снижения степени выраженности инволютивных изменений в тимусе, вызванных циклофосфаном.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Михайлова, Марина Николаевна, Москва

1. Абдурахманов М., Тухтаев К.Р. Изменения тимуса при хроническом гелиотриновом гепатите // Морфология. 1999. - Т. 116, № 6. - С. 63-65.

2. Автандилов Г.Г. Компьютерная микротелефотометрия в диагностике гистоцитопатологии. М.: РМАПО. - 1996. - 256 с.

3. Акмаев И.Г. Нейро-иммуно-эндокринные взаимодействия в физиологии и патологии // XVIII съезд физиологического общества им. И.П. Павлова. Казань, 2001. - С.296

4. Аминова Г.Г. Цитоархитектоника разных зон тимуса крыс // Арх. анатом, гистол. и эмбриол. 1987. - № 11. - С. 73-76.

5. Анфалова Т.В., Луцан Н.И. Образование Т-супрессоров, подавляющих активность аллореактивных клеток, при взаимодействии лимфоцитов с двумя различными медиаторами тимуса // Онтогенез. 1993. - Т. 24, №2.-с. 76-81.

6. Афанасьев Ю.И., Юрина Н.А (под ред.) Гистология: Учебник. М.: Медицина, 2002. - 744 с.

7. Балмасова И.П., Кветной И.М., Смородинов А.В. Эндокринная функция апудоцитов иммунокомпетентных органов при некоторых формах иммунного ответа // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1983. - № 9. - С. 78-80.

8. Безвершенко И.А., Онущенко Л.И., Быкова Л.М. Участие тимоцитов во взаимоотношениях тимуса и гипофиза // Физиологический журнал. 1993. -Т. 39.-№2-3.-С. 43-47.

9. Бережная Н.М., Сепиашвили Р.И. Тучные клетки и гистамин: физиологическая роль // Аллергология и иммунология. 2003. - Т. 4, № 3. - С. 29-38.

10. Божко Г.Х. Влияние катехоламинов на синтез белков и нуклеиновых кислот // Проблемы эндокринологии. 1984. - № 2. - С. 3-5.

11. Бородин Ю.И., Труфакин В.А., Юрина Н.А. Функциональная морфология иммунной системы. Новосибирск: Наука, Сиб. отд-ние, 1987. -200 с.

12. Брондз Б.Д. Т-лимфоциты и их рецепторы в иммунологическом распознавании. М.: Наука, 1987. - 470 с.

13. Булкина З.П. Противоопухолевые препараты. Киев: Наук, думка, 1991.-302 с.

14. Быков В.Л. Развитие и гетерогенность тучных клеток // Морфология.2000. № 2. - С. 86-92.

15. Быков В.Л. Секреторные механизмы и секреторные продукты тучных клеток // Морфология. 1999. - Т. 115. - № 2. - С. 64-72.

16. Былинкина Т.И. Морфофункциональная характеристика гистамин и серотонинпродуцирующих клеток при сенсибилизации // Иммунные дисфункции. Алма-Ата, 1990. - С. 51-55.

17. Вайсфельд И.Л., Кассиль Г.Н. Гистамин в биохимии и физиологии. -М.: Наука, 1981.-80 с.

18. Валькович Э.И. Гемопоэтическое микроокружение костного мозга и тимуса. Органы иммунной системы материнского и развивающегося организма в норме и эксперименте. Л.: Ленинградский педиатр, мед. ин-т, 1989. - С. 1824.

19. Бенедиктова М.Г. Применение тактивина и имунофана при лечении больных аденокарциномой эндометрия // Эксперим. и клинич. фармакол.2001. Т.64, № 5. - С. 46-49.

20. Виноградов С.Ю., Погорелов Ю.В. Морфогенез и нейромедиаторные биогенные амины // Морфология. 1993. - №9-10. - Т. 105. - С. 59.

21. Виноградов С.Ю. Функциональная морфология внутриорганного нейромедиаторного биоаминного обеспечения адаптационно-компенсаторных реакций щитовидной железы: Дисс. докт. мед. наук. Иваново, 1989. - 417 с.

22. Воробьев А.А. Иммуномодуляторы: принципы классификации и стратегия применения в медицине // Вестник РАМН. 2002. - № 4. - С. 3-6.

23. Галил-Оглы Г.А., Ингберман Я.Х., Берщанская А.И. Сравнительная ультраструктурная характеристика эпителиальных клеток паренхимы вилочковой железы и тимом // Архив патологии. 1988. - Т.50. - С.51-60.

24. Гершанович М.Л. Осложнения при химио- и гормонотерапии злокачественных опухолей. М.: Медицина, 1982. - 224 с.

25. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. Роль гемопоэзиндуцирующего микроокружения в регуляции кроветворения при цитостатических миелосупрессиях. Томск, 1999.

26. Гомазков О.А. Регуляторные пептиды и апоптоз: новые аспекты физиологической роли // XVIII съезд физиологического общества им. И.П. Павлова. Казань, 2001. - С. 69

27. Гордон Б.М. Интегральная характеристика динамики процесса гистаминообеспечения тимуса в первый час контакта организма с растворимым антигеном // Научная конференция молодых ученых и специалистов города Чебоксары. Чебоксары, 1990. - С. 83.

28. Гордон Д.С. Гепариновая инактивация моноаминов в структурах соединительной ткани и крови // Реактивность и пластичность ткани внормальных, экспериментальных и патологических условиях. Свердловск, 1974. С. 74.

29. Гордон Д.С. Гепариновый механизм воздействия низкоинтенсивного инфракрасного лазера на ткани организма человека // Мед. журн. Чувашии. — 1993.-№ 1(2). С. 77-80.

30. Гордон Д.С., Сергеева В.Е., Зеленова И.Г. Нейромедиаторы лимфоидных органов. М.: Наука, 1982. - 128 с.

31. Гордон Д.С., Сергеева В.Е., Смородченко А.Т., Кириллов Н.А., Петрова Т.Л., Олангин О.И., Спирин И.В. Идентификация люминесцирующих гранулярных клеток тимуса с дендритными макрофагами // Бюл. эксперим. биол. и мед.-2001.-Т. 132, №7.-С. 118-120.

32. Гриневич Ю.А., Чеботарев В.Ф. Иммунобиология гормонов тимуса. -Киев, Здоровье, 1989. 154 с.

33. Девойно Л.В. Биогенные амины в регуляции иммунных реакций // Химия и биология иммунорегуляторов. Рига: Зинатне. - 1985. - С. 206-221.

34. Девойно Л.В., Альперина Е.Л. Взаимодействие дофаминергической и серотонинергической систем в регуляции иммунного ответа // Регуляция иммунного гомеостаза. Л., 1982. - С. 48-49.

35. Девойно Л.В., Ильюченок Р.Ю. Моноаминергические системы в регуляции иммунной реакции. Новосибирск: Наука, Сиб. отд-ние, 1983. - 120 с.

36. Денисенко П.П., Чередниченко Р.П. Функциональное состояние холино- и адренореактивных систем, циклические нуклеотиды и интенсивность иммунных реакций // Физиология иммунного гомеостаза. Ростов н/Д, 1977. -С. 60-61.

37. Дранник Г.Н., Гриневич Ю.А., Дизик Г.М. Иммунотропные препараты. Киев: Здоровье, 1994. - 285 с.

38. Думай B.JI. Терапевтический эффект циклофосфамида у больных хроническим гломерулонефритом с нефротическим синдромом // Терапевтич. архив. 2002. - Т. 74, № 6. - С. 39-41.

39. Дюговская JI.A. Роль гистамина в функции супрессорной активности тимоцитов // Актуальные проблемы современной патофизиологии. Киев, 1981. -С. 126-127.

40. Елисеева Л.С., Стефанович Л.Е., Попова B.C. Специфическое связывание серотонина клетками интактных и иммунизированных мышей // Регуляция иммунного гомеостаза. Л., 1982. - С. 139-140.

41. Ерофеева Л.М Строение и цитоархитектоника тимуса человека в подростковом и юношеском возрастных периодах // Морфология. 2002. - № 6. - С. 37-40.

42. Забродин В.А, Галкина Ю.М. Морфология тимуса человека // II съезд анатом., гистол., эмбриол. Смоленск; Полтава. - 1992. - С. 85.

43. Зайратьянц О.В., Хавинсон В.Х., Кузьменко Л.Г. Продукция тимусом иммуномодулирующих полипептидов при его острой (акцидентальной) инволюции у детей // Архив патологии. 1990. - Т.52. - Вып.1. - С. 25-28.

44. Зайратьянц О.В. Морозов В.Г., Москвичева И.В., Рыжак Г.А., Хавинсон В.Х., Хмельницкий O.K. Выявление иммуномодулирующих полипептидов в клетках тимуса человека иммунофлюоресцентным методом // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1987. - №3. - С. 327-330.

45. Зеленова И.Г. Адренергические структуры лимфоидных органов кошки // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1974. - №7. - С. 97-98.

46. Земсков A.M., Караулов А.В., Земсков В.М. Комбинированная иммунокоррекция. М.: Наука, 1994. - 260 с.

47. Зуева Е.П., Яременко К.В. Способ отбора препаратов, снижающих токсичность цитостатиков при экспериментальной химиотерапии опухолей // Фармакология и токсикология. 1989. - Т. LII, № 1. - С. 74-77.

48. Ивановская Т.Е., Зайратьянц О.В., Леонова Л.В., Волощук И.Н. Патология тимуса. СПб, 1996. - 271 с.

49. Идова Г.В., Чейдо М.А., Жукова Е.Н., Девойно Л.В. Стимуляция иммунного ответа при активации дофаминэргической системы у мышей с оппозитными формами поведения // Российский физиологический журнал им. ИМ. Сеченова.-2002.-Т. 88, № 11.-С. 1394-1400.

50. Идова Г.В., Чейдо М.А. Участие различных клеточных популяций в иммунном ответе (IgM и IgG) при действии биогенного амина серотонина // Вестник АМН СССР. 1981. - №5. - С. 39-41.

51. Иллек Я.Ю., Зайцева Г.А., Леушина Н.П., Соловьева Г.В. Имунофан в комплексном лечении детей с аллергическим диатезом // Педиатрия. 1999. -№ 4.-С. 71-73.

52. Ильина Н.И., Латышева Т.В., Пинегин Б.В., Сетдикова Н.Х. Синдром вторичной иммунной недостаточности (протоколы диагностики и лечения) // 2000. № 5. - С. 8-9.

53. Калмыков В.Л. Современные методы количественного определения катехоламинов и серотонина // Лаб. дело. 1982. - № 7. - С. 31-36.

54. Караулов А.В. Вторичные иммунодефицитные состояния: молекулярно-биохимические механизмы развития и методы коррекции // Аллергия, астма и клинич. иммунол. 2000. - № 1. - С.24-25.

55. Караулов А.В. Клинико-иммунологическая эффективность применения имунофана при оппортунистических инфекциях // Лечащий врач. -2000.-№5-6.-С. 28-29.

56. Караулов А.В. Молекулярно-биологическое обоснование применения имунофана в клинической практике // Лечащий врач. 2000. - № 4. - С. 46-47.

57. Караулов А.В., Сокуренко С.И. Имунофан: непосредственные и отдаленные результаты лечения больных хроническим бронхитом // Медикал Маркет. 2000. - № 34. - С. 21-24.

58. Кветной И.М. APUD-система (структурно-функциональная организация, биологическое значение в норме и патологии) // Успехи физиологических наук. 1987. - Т. 18. - №1. - С. 84-85.

59. Кветной И.М. Диффузная эндокринная система: Автореф. дис. докт. мед. наук. М., 1983. - 32 с.

60. Кветной И.М., Райхлин Н.Т., Южаков В.В., Ингель И.Э. Экстрапинеальный мелатонин: место и роль в нейроэндокринной регуляции гомеостаза // Бюл. экспер. биол. и мед., 1999. Т. 127. - №4. - С. 364-370.

61. Кириллов Н.А. Морфофункциональные структуры иммунокомпетентных органов животных при воздействии биостимуляторов. -Чебоксары: Изд-во Чуваш, ун-та, 2001. 164 с.

62. Клименко Н.А., Татарко С.В. Роль тучных клеток в репаративных явлениях при воспалении // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1995. - Т. 119, вып. 3. -С. 262-265.

63. Козлов В.А., Журавкин И.Н., Цырлова И.Г. Стволовая кроветворная клетка и иммунный ответ. Новосибирск: Наука, Сиб. отд-е. - 1982. — 220 с.

64. Козлов В.И., Васильева Е.Ф., Архангельская C.JI. Участие адренорецепторной системы лимфоцитов и макрофагов в иммунологических реакциях // Физиология иммунного гомеостаза. Ростов н/Д, 1977. - С. 68-69.

65. Кордуняну А.В., Кушнир В.Н., Слепова О.С., Зиагирова Г.Г., Ешану Н.В., Кричевская Г.И. Экспериментальное исследование эффективности применения имунофана при лечении вирусиндуцированной патологии глаз // Вестник офтальмологии. 2001. - № 5. - С. 43-47.

66. Корнева Е.А., Шхинек Э.К. Гормоны и иммунная система. JL: Наука, 1988.-251 с.

67. Красноженов Е.П. Морфофункциональное состояние тканевых базофилов при цитостатической болезни // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1994. - №1. - С. 12-13.

68. Крохина Е.М., Александров П.Н. Симпатический (адренергический) компонент эффекторной иннервации сердечной мышцы // Кардиология. 1969. - Т.9. - №3. - С. 97-102.

69. Кудаева И.В. Морфологический и функциональный статус пула плазматических клеток при цитостатической гемодепрессии и в условиях антигенной стимуляции: Автореф. дис. канд. мед. наук. Томск, 1997.

70. Кузник Б.И., Витковский Ю.А., Цыбиков Н.Н. Иммунитет и гемостаз // International Journal on Immunorehabilitation. 2002. Т. 4, №1. - С. 45.

71. Кузьмина Е.Г., Неприна Г.С., Ватин О.Е., Сироткина Н.П., Рогова Н.М., Крикунова Л.И. Коррекция вторичных иммунодефицитных состояний, индуцированных химиолучевой терапией, у онкологических больных // Рос. онкологич. журнал. 2003. - № 2. - С.32-36.

72. Кулинский В.И., Черкасова Т.И. Серотонин кроветворной и иммунокомпетентной тканей разных видов млекопитающих // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1974. - № 8. - С. 71-74.

73. Кульберг А.Я. Регуляция иммунного ответа. М.: Медицина, 1986.220 с.

74. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. М.: Медицина, 1985.-256 с.

75. Лебедев В.В. Имунофан — регуляторный пептид в терапии инфекционных и неинфекционных болезней / Под ред. В.И. Покровского. М.: Праминко, 1990.-120 с.

76. Лебедев В.В., Покровский В.И. Имунофан — синтетический пептидный препарат нового поколения // Вестник РАМН. 1999. - № 4. - С. 5661.

77. Леонтьева Т.И., Гладкова Н.Е., Утешев Б.С. Исследование иммунотропной активности циклофосфана // Фармакол. и токсикол. 1988. - Т. LI, № 6. - С.60-65.

78. Линдлер Д.П., Поберий И.А., Розкин М.Я., Ефимов B.C. Морфометрический анализ популяции тучных клеток // Архив патологии. -1980.-№6.-С. 60-64.

79. Любовцева Л.А. Люминесцентно-гистохимическое исследование аминосодержащих структур костного мозга, тимуса и крови при действии нейромедиаторов и антигенов. Чебоксары: Изд-во Чуваш, ун-та, 1993. - 100 с.

80. Макаренкова В.П., Кост Н.В., Щурин М.Р. Система дендритных клеток: роль в индукции иммунитета и в патогенезе инфекционных, аутоиммунных и онкологических заболеваний // Иммунология, 2002. №2. — С. 68-76.

81. Манько В.М., Петров Р.В., Хаитов P.M. Иммуномодуляция: история, тенденции развития, современное состояние и перспективы // Иммунология. — 2002. № 3. - С. 132-138.

82. Масная Н.В., Ратнер Г.М. Влияние тимусзависимого антигена на восстановление гемо- и лимфопоэза, нарушенных в результате воздействия противоопухолевых препаратов // Бюл. эксперим. биол. и мед. 2000. — Т. 129, №6.-С. 689-694.

83. Масная Н.В., Ратнер Г.М. Особенности формирования первичного гуморального иммунного ответа у мышей с цитостатической болезнью // Бюл. эксперим. биол. и мед. 2000. - Т. 129, № 4. - С. 440-443.

84. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина, 1996. -Т.2. - С. 193.

85. Молодцова Г.Ф. Различия в вовлечении серотонина и дофамина в мозге крыс при латентном торможении // XVIII съезд физиологического общества им. И.П. Павлова. Казань, 2001. - С. 163

86. Москалева Е.Ю., Федоров Н.А., Кизенко О.А., Караулов А.В. Повреждение ДНК лимфоцитов и иммунодефицитные состояния // Вестник РАМН. 1993. - № 4. - С. 12-17.

87. Москалец О.В., Палеев Ф.Н., Котова А.А., Наумова Т.Е., Сучков С.В. Патогенез синдрома вторичной иммунной недостаточности и подходы к его лечению // Клиническая медицина. 2002. - № 11. - С. 18-23.

88. Муштоватова JI.C., Тихонова И.Б., Федоров Ю.В., Новицкий В.В. Механизмы развития патологических процессов. Кемерово, 1994.

89. Наполов Ю.К., Борисов К.Б. Иммунодепрессанты, применяемые при патологии иммунной системы. I. Циклоспорин, циклофосфан, азатиоприн, меркаптопурин // Фармакол. и токсикол. 1991. - Т. 54, № 4. - С. 80-87.

90. Николаева О.Я. Взаимодействия между тимоцитами и стромальными элементами тимуса//Морфология. 2002. - Т. 121, №2-3.-С. 113-114.

91. Новикова Н.В. Терапия больных саркомой Капоши имунофаном с учетом состояния иммунной системы: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 2002. - 24 с.

92. Новиков Д.К., Сергеев Ю.В., Новикова В.И. Характеристика иммунофармакотерапевтических препаратов // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2002. - № 4. - С. 7-27.

93. Ноздрачев А.Д. Роль периферической нервной системы в реализации связи иммунной системы с мозгом // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. -2000. Т. 86, № 6. - С. 728-742.

94. Пащенков М.В., Пинегин Б.В. Основные свойства дендритных клеток // Иммунология.,- 2001. № 4. - С. 7-15.

95. Пащенков М.В., Пинегин Б.В. Роль дендритных клеток в регуляции иммунного ответа // Иммунология. 2002. - № 5. - С. 313-321.

96. Переводчикова Н.И. (ред.) Противоопухолевая химиотерапия. Справочник. М.: Медицина, 1993. - 224 с.

97. Петренко В.М. Эмбриональный морфогенез тимуса и грудного протока у человека // Биомед. и биосоц. пробл. антропологии, 1998. №2. - С. 165-168.

98. Петров Р.В. Иммунология. М.: Медицина. - 1987. - 261 с.

99. Петров Р.В (под ред.) Итоги науки и техники: сер. Иммунология. Т. 9. Медиаторы иммунной системы. М., 1981.

100. Петров Р.В., Манько В.М. Иммунодепрессоры. М.: Медицина, 1971.-300 с.

101. Пол У. (под ред.) Иммунология: в 3 т. Пер. с англ. Т.1. М.: Мир, 1987.-476 с.

102. Попова Н.К., Науменко Е.В., Колпаков В.Г. Локализация серотонина и обмен. Экспериментальные подходы, применяемые при изучении его роли вповедении // Серотонин и поведение. Новосибирск: Наука, Сибирское отд., 1978.-С. 6-63.

103. Потапнев М.П. Апоптоз клеток иммунной системы и его регуляция цитокинами // Иммунология. 2002. - №4. - С. 237-243.

104. Ромейс Б. Микроскопическая техника. М.: Изд-во иностр. лит.,1954.

105. Рындина Е.И. Экспериментальное изучение иммуномодулирующего действия Т-активина на популяцию антителообразующих клеток при вторичном иммунном ответе // Иммунология. 2003. - № 5. - С. 321.

106. Рябчук В.А. К характеристике химического состава различных препаратов, полученных из тимуса // Фармация. 1993. - № 2. - С. 21-24.

107. Сапин М.Р. (под ред.) Анатомия человека. В 2 т. т.2. -М.: Медицина, 1997.-560 с.

108. Сапин М.Р. Органы иммунной системы. М.: Изд-во 1-го ММИ,1982.

109. Сапин М.Р., Этинген JI.E. Иммунная система человека. М.: Медицина, 1996.-304 с.

110. Сепиашвили Р.И. Функциональная система иммунного гомеостаза // Аллергология и иммунология. 2003. - Т. 4, № 2. - С. 5-14.

111. Сергеева В.Е. Гистотопография катехоламинов в зобной железе млекопитающих // Бюл. эксперим. биол. и мед. — 1974. № 4. - С. 115-118.

112. Сергеева В.Е., Возякова Т.Р., Сергеева А.Т. Функциональные связи клеток тимуса и лимфоузла по обеспечению нейромедиаторами // Физиология и биохимия медиаторных процессов. М., 1990. - С. 264-265.

113. Сергеева В.Е., Гордон Д.С. Люминесцентно-гистохимическая характеристика ранней реакции моноаминосодержащих структур тимуса на антигенные воздействия. Чебоксары: Изд-во Чуваш, ун-та, 1992. - 352 с.

114. Сергеева В.Е., Гордон Д.С., Гунин А.Г. Сочетание свойств макрофагов и клеток АПУД-серии в моноаминсодержащих премедуллярных клетках тимусной дольки // Морфология. № 1-3. - 1994. - С. 159-162.

115. Серебров В.Ю., Стуканов C.JI. Эндокринная функция тимуса. Томск: Изд-во Томского ун-та. 1993. - 128 с.

116. Симбирцев А.С. Интерлейкин-2 и рецепторный комплекс интерлейкина-2 в регуляции иммунитета // Иммунология. 1998. - № 6. - С. 38.

117. Слепова О.С., Кушнир В.Н. Роль иммунопатологических реакций в развитии глазных заболеваний у лиц, инфицированных вирусом гепатита В, и эффективность иммунокорригирующей терапии // Вестник РАМН. 2003. - № 5.-С. 15-20.

118. Смородченко А.Т. Лимфатические узлы в норме и при антигенных воздействиях: Учеб. пособие / Чуваш, ун-т. Чебоксары, 1996. - 76 с.

119. Сохин А.А., Чернушенко Е.Ф.Прикладная иммунология. Киев: Здоровье, 1984.-315 с.

120. Стручко Г.Ю., Меркулова Л.М., Сергеева В.Е., Стоменская И.С. Реакция биоаминсодержащих структур тимуса на экспериментальное удаление селезенки // Иммунология. 2000. - № 2. - С. 13-17.

121. Стручко Г.Ю. Морфофункциональное исследование тимуса и иммунобиохимических показателей крови после спленэктомии и иммунокоррекции. Дисс. . докт. мед. наук. Саранск, 2003.

122. Стручко Г.Ю., Сергеева В.Е. Реакция биоаминсодержащих структур тимуса на введение растворимого антигена. Чебоксары, 1999. - 130 с.

123. Соломонова В.Г., Сорокин J1.B. Взаимодействие медиаторных систем, гипотезы, факты // Физиол. и биохимия медиаторных процессов: Тез. докл. 5-ой Всесоюз. конф. М., 1990. - С. 281.

124. Сулейманов А.К., Желудков М.М., Чернышова М.И., Лебедев В.В., Магомедова Д.А. Динамика уровней специфических иммуноглобулинов классов G, А, М и Е в процессе лечения больных хроническим бруцеллезом // Терапевтич. архив. 1992. - № 11. - С. 26-28.

125. Сысоева Л.А. Люминесцентно-гистохимическая характеристика ранней реакции моноаминосодержащих структур селезенки на антигенное воздействие: Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 1987. - 20 с.

126. Тареева И.Е., Гордовская Н.Б., Гладских О.П., Иванов А.А., Краснова Т.Н., Мирошниченко Н.Г., Полянцева Л.Р., Самойлов Д.В., Шилов Е.М. Лечение хронического гломерулонефрита цитостатиками // Терапевтич. архив. 1989. - № 6. - С.9-14.

127. Томилец В.А. Регулирующее действие цАМФ и гистамина на иммунный ответ, опосредованное поверхностными рецепторами клеток // Гигиена и эпидемиология, микробиология, иммунология. 1981. - №3. - С. 265270.

128. Торбек В.Э., Юрина Н.А. Гетерогенность эпителиоцитов тимуса и их ультраструктура у новорожденных крыс при дисбалансе глюкокортикоидов // Морфология, 1998.-Т. 114. №6.-С. 54-58.

129. Труфакин В.А., Шурлыгина А.В. Проблемы гистофизиологии иммунной системы // Иммунология. 2002. - № 1. - С. 4-8.

130. Туаева З.С., Тотоев Н.М. Гистоструктура вилочковой железы человека // Морфология. 1993. - №9-10. — т.105. — с. 163.

131. Тутельян А.В. Клеточные и молекулярные механизмы действия синтетического гексапептида — тимогексина: Автореф. дис. канд. мед. наук. -М., 1993.- 18 с.

132. Улумбеков Э.Г. Гистология / Под ред. Ю.А. Челышева. М.: ГЭОТАР, 1997.-946 с.

133. Фримель X. (под ред.) Иммунологические методы. М.: Медицина, 1987.-472 с.

134. Хаитов P.M. Физиология иммунитета // Аллергия, астма и клин, иммунология. 2000. - № 2. - С.3-14.

135. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология: Учебник. М.: Медицина, 2000. - 432 с.

136. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Механизм действия и клиническое применение иммуномодуляторов // Аллергия, астма и клинич. иммунология. -2003,-№8.-С. 43-49.

137. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Основные принципы иммуномодулирующей терапии // Аллергия, астма и клинич. иммунология. -2000. -№ 1. С.9-16.

138. Хлыстова З.С. Становление системы иммуногенеза плода человека. -М.: Медицина, 1987.

139. Хлыстова З.С., Калинина И.И., Шмелева С.П., Рябчиков О.П. Время проявления эндокринной и лимфоцитопоэтической функции тимуса человека в эмбриогенезе // Бюллетень эксп. биол. и мед. 2000. - Т. 130. - №10. - С. 453456.

140. Хлыстова З.С., Шмелева С.П., Калинина И.И., Работникова E.JL, Минина Т.А., Рябчиков О.П. Карта заселения органов иммунной системы эмбриона и плода человека Т- и В-лимфоцитами и начало эндокринной функции тимуса // Иммунология, 2002. №2. - С. 80-82.

141. Черненко О.Д., Гриневич Ю.А. Возможность восстановления интерферонообразования биологически активными факторами тимуса в условиях экспериментально вызванной иммунодепрессии // Вопросы вирусологии, 1991. № 4. - С. 309-310.

142. Чипе не Г.И. (ред.) Структурные основы действия пептидных и белковых иммунорегуляторов. Рига: Зинатне, 1990.- 322 с.

143. Шарова Н.И., Дзуцев А.Х., Литвина М.М., Харченко Т.Ю., Ярилин А.А. Результаты взаимодействия лимфоидных и эпителиальных клеток тимуса человека in vitro. Активация и апоптоз // Иммунология. 2000. - №3. - С. 7-11.

144. Шурлыгина А.В., Ковшик И.Г., Вербицкая Л.В., Труфакин В.А. Хронозависимое влияние введения интерлейкина-2 на соотношение субпопуляций клеток тимуса и селезенки мышей // Иммунология. 2000. - № 1. - С.21-24.

145. Юденфренд С. Флуоресцентный анализ в биологии и медицине. М.: Мир. - 1965.-484 с.

146. Юрина Н.А. Межтканевые и межклеточные взаимодействия и их регуляция в органах иммунной системы // Морфология и развитие органов иммунной системы. М., Пермь. - 1988. - С.43.

147. Яглов В.В. Актуальные проблемы биологии диффузной эндокринной системы // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1989. - Т. 96. - Вып. 1. -С. 14-25.

148. Ярилин А.А., Беляков И.М. Тимус как орган эндокринной системы // Проблемы эндокринологии. 1996. - С. 4-10.

149. Ярилин А.А., Мирошниченко И.В., Рябинина И.Д., Филатов А.В. Исследование миграции предшественников Т-лимфоцитов в тимус и факторов, влияющих на этот процесс // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1986. - №10. - С. 447-449.

150. Ярилин А.А., Пинчук В.Г., Гриневич Ю.А. Структура тимуса и дифференцировка Т-лимфоцитов. Киев: Наук, думка, 1991. - 248 с.

151. Ярилин А.А. Возрастные изменения тимуса и Т-лимфоцитов // Иммунология. 2003. - №2. - С. 117-128.

152. Ярилин А.А. Симбиотические взаимоотношения клеток иммунной системы // Иммунология. 2001. - №4. - С. 16-20.

153. Ястребова С.А. Механизмы гидрокортизоновой иммуномодуляции биоаминной клеточной системы тимуса. Чебоксары, 2000. - 83 с.

154. Agarwala S.S., Sabbagh М.Н. Histamine dihydrochloride: inhibiting oxidants and synergising IL-2-mediated immune activation in the tumour microenvironment // Expert. Opin. Biol. Ther. 2001. - V. 1(5). - P. 869-879.

155. Aita M. The peptides of the immuno-neuro-endocrine system // Eur. J. His-tochem. 1993. - N.37, suppl. - P. 10.

156. Akashi K., Richie L., Miyamoto Т., Carr V., Weissman I. В lymphopoiesis in the thymus // J. Immunol. 2000. - V. 164, N 10. - P. 5221-5226.

157. Al-Jmara L.J., Dale M.M. The inhibitory effect of histamine on lymphoid tissue proliferation in mice // Cell. Immunol. 1985. - V. 91. - N. 1. - P.284-281.

158. Allison A.C. Immunosuppressive drugs: the first 50 years and a glance forward // Immunopharmacology. 2000. - Vol. 47, N 2-3. P. 63-83.

159. Amsen D., Kruisbeek A.M. Thymocyte selection: not by TCR alone // Immunol. Rev. 1998. - Vol. 165. - P. 209-229.

160. Ardavin C. Thymic dendritic cells // Immunol. Today. 1997. - Vol. 18, N7.-P. 350-361.

161. Arya S., Gilbert E., Hong R., Bloodworth B. The Thymus. In: Endocrine pathology, general and surgical. Ed. by J. Bloodworth. N.Y., 1982. - 2 ed. - P.767-833.

162. Atoji Y., Yamamoto Y., Suzuki Y. Parvalbumin in cortical epithelial cells of the pigeon thymus // J. Anat., 2000. V. 196. - №3. - P. 305-311.

163. Basta-Kaim A., Kubera M., Budziszewska В., Roman A., Skowron-Cendrzak A. Effect of physiological and pharmacologically induced thymusinvolution on the immunoreactivity in C57BL mice // Pol. J. Pharmacol. 2001. -Vol. 53, N4. P.-403-407.

164. Bellinger D.L, Lorton D., Felten S.Y., Felten D.L. Innervation of lymphoid organs and implications in development, aging, and autoimmunity // Int. J. Immunopharmacol. 1992. - V. 14, N 3. - P. 329-344.

165. Ben-Efraim S. Immunomodulating anticancer alkylating drugs: targets and mechanisms of activity // Curr. drug targets. 2001. - Vol. 2, N 2. - P. 197-212.

166. Bjorklund A., Nobin A., Stenevi H. Regeneration of central serotonin neurons after axonal degeneration induced by 5,6-dihydrooxytryptamine // Brain Res. -1973. V.50. - N.l. - P.214-220.

167. Boddy A.V., Yule S.M. Metabolism and pharmacokinetics of oxazaphosphorines // Clin. Pharmacokinet. 2000. - Vol. 38, N 4. - P. 291-304.

168. Bodey В., Bodey B.Jr, Siegel S.E., Kaiser H.E. Involution of the mammalian thymus, one of the leading regulators of aging // In Vivo. 1997. - V. 11, N5.-P. 421-440.

169. Botana L.M., Arnaez E., Vieytes M.R., Alfonso A., Bujan M.J., Louzao M.C., Cabado A. Non-immunological release of histamine from rat mast cells elicited by antineoplastic agents // Cancer Chemother. Pharmacol. 1992. - Vol. 29, N 6. -P. 495-498.

170. Brostoff S., Park S., Lydyard P. Histamine suppression on lymphocyte activation // Clin. And Exper. Immunol. 1980. - Vol. 39. - P. 739-745.

171. Chaffoy de Courcellecs D., Leysen J.E., de Clerk F. The signal transducing system coupled to serotonin-S2-receptors // Experientia. 1988. - Vol. 44.-P. 131-133.

172. Cheido M., Idova G. Participation of opiate delta-receptors in immunomodulation 11 Neurosci. Behav. Physiol. 1994. - V. 24, N 6. - 479-482.

173. Coffey R.G., Hadden J.W. Neurotransmitters, hormones and cyclic nucleotides in lymphocyte regulation // Fed. Proc. 1985. - Vol. 44, N 1. - PT1. - P. 112-117.

174. Cross S.A., Ewen S.W., Rost F.W. A study of methods available for cyto-chemical localization of histamine by fluorescence induced with o-phtaldehyde or acetaldehyde // Histochem. J. 1971. - V.3, N.6. - P.471-476.

175. Csaba G., Kovacs P., Pallinger E. Single treatment (hormonal imprinting) of newborn rats with serotonin increases the serotonin content of cells in adults // Cell Biol. Int. 2002. - V. 26, N 8. - P. 663-668.

176. CupicV., Colic M., Pavicic Lj., Vucevic D., Varagic V.M. The effect of xylazine on thymocyte proliferation // Toxicol. Lett. 2001. - Vol. 123, прил. 1. - P. 57.

177. Dardenne M., Savino W. Control of thymus physiology by peptidic hormones and neuropeptides // Immunol. Today. 1994. - V.15. - N.l 1. - P.518-523.

178. Deigin V.I., Poverenny A.M., Semina O.V., Semenets T.N. Reciprocal effect of optical isomerism of EW-dipeptides on immune response // Immunol. Lett. 1999. - Vol. 67, N 1. - P. 41-46.

179. Dorko F., Kocisova M., Rubarova S., Dorko E. (Acetylcholin-esterazolo-pozitivna innervacia regenerovaeho tymusu) in old rats after surgical and chemical castration //Bratisl. Lek. Listy. 1998. -N99 (5). -P. 258-261.

180. Dzutsev A., Sharova N., Kharcenco Т., Yarilin A. Thimic epithelial cells can take part in negative selection in thymus // Scand. J. Immunol. 2001. - V. 54. -P. 12.

181. Elenkov I.J., Wilder R.L., Chrousos G.P., Vizi E.S. The sympatheticnerve—an integrative interface between two supersystems: the brain and the immune system // Pharmacol. Rev. 2000. - V. 52, N 4. - P. 595-638.

182. Van Ewijk W. Immunohistology of lymfoid and non-lymphoid cells in the thymus in relation to lymphocyte differentiation // Amer. J. Anat. 1984. - V.70. -P.311-330.

183. Falk В., Hillarp N.A., Thieme G., Torp A. Fluorescence of catecholamines and related compounds condensed with formaldehyde // J. Histochem. Cytochem. 1962. - V.10. - P.348-354.

184. Fink P.I., Weissman I.L., Kaplan H.S. The immunocompetence of murine stromal cell-associated thymocytes // J. immunol. 1984. - V. 132, N5. - P. 22662272.

185. Floersheim G.L. A comparative stydy of the effects of anti-tumor and immunosuppressive drugs on antibody-forming and erythropoietic cells // Clin. exp. immunol. 1970.-Vol. 6, N6.-P. 861-870.

186. Flores K.G., Li J., Sempowski G.D., Haynes B.F., Hale L.P. Analysis of the human thymic perivascular space during aging // J. Clin. Invest. 1999. - Vol. 104, N8.-P. 1031-1039.

187. Forestier С., Park S., Wei D., Benlagha K., Teyton L., Bendelac A. T-cell development in mice expressing CD Id directed by a classical MHC class II promoter // J. Immunol. 2003. - V. 171. - N8. - P. 4096-4104.

188. Fulton R.M., Reed W.M., Thacker H.L., DeNicola D.B. Cyclophosphamide (Cytoxan)-induced hematologic alterations in specific-pathogen-free chickens//Avian. Dis. 1996.-Vol. 40, N l.-P. 1-12.

189. Gaillard V., Vivier G., Barjhoux L., Souchier C., Touraine I., Blanc-Brunat N. Image analysis of dendritic cells in the human fetal thymus // Thymus. -1993.-V. 21, N2.-P. 75-91.

190. Garaci E. Thymosin al in the treatment of malignant melanoma and other cancers // Int. J. Immunorehabil. 2000. - Vol. 2, N 3. - P. 12.

191. Gives K.M., Hart S.P., Haslett C., Rossi A.G., Dransfield I. An appetite for apoptotic cells? Controversies and challenges // Brit. J. haematol. 2000. - Vol. 109,N l.-C. 1-12.

192. Gorantla V.S., Barker J.H., Jones J.W., Prabhune K., Maldonado C., Granger D.K. Immunosuppressive agents in transplantation: mechanisms of action and current anti-rejection strategies // Microsurgery. 2000. - Vol. 20, N 8. - P. 420429.

193. Grouard G., Rissoan M.C., Filgueira L., Durand I., Banchereau J., Liu Y.J. The enigmatic plasmacytoid T cells develop into dendritic cells with interleukin (IL)-3 and CD40-ligand // J. Exp. Med. 1997. - Vol. 185, N 6. - P. 1101-1 111.

194. Guiltemot F., Oliver P., Peault D. Et al. Cell expressing la antigens in the avian thymus//J. Exp. Med. 1984.-V. 160, N6. P. 1803-1819.

195. Hadden J.W. Thymic endocrinology // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1998. -Vol. 840.-P. 352-358.

196. Hadden I.W. Thymic endocrinology // Int. J. Immunopharmacol. 1992. -Vol. 14, N3.-P. 345-352.

197. Halper J.P., Mann J.J., Weksler M.E., Bilezikian J.P., Sweeney J.A., Brown R.P., Golbourn T. Beta adrenergic receptors and cyclic AMP levels in intacthuman lymphocytes: effects of age and genter // Life Sci. 1984. - Vol. 35, N 8. - P. 855-863.

198. Haynes B.F. Human thymic epithelium and T cell development: current issues and future directions // Thymus. 1990. - Vol. 16, N 3-4. - P. 143-157.

199. Haynes B.F., Sempowski G.D., Wells A.F., Hale L.P. The human thymus during aging // Immunol. Res. 2000. - Vol. 22, N 2-3. - P. 253-261.

200. Hellstrand K. Histamine in cancer immunotherapy: a preclinical background // Semin. oncol. 2002. - V. 29, N 3, suppl. 7. - P. 35-40.

201. Hemendinger R.A., Bloom S.E. Selective mitomycin С and cyclophosphamide induction of apoptosis in differentiating В lymphocytes compared to T lymphocytes in vivo // Immunopharmacology. 1996. - Vol. 35, N 1. - P. 7182.

202. Henry L. Anderson G. Immunoglobulin-producing cells in the human thymus // Thymus. 1989. - Vol. 12, N2. - P. 77-87.

203. Hiramine C., Nakagawa Т., Miyauchi A., Hojo K. Thymic nurse cells as the site of thymocyte apoptosis and apoptotic cell clearance in the thymus of cyclophosphamide-treated mice // Lab. Invest. 1996. - Vol. 75, N 2. - P. 185-201.

204. Home C., Isaacson P.G., Spencer J. Comparative study of the properties of human and murine thymic B-cells // J. Pathol. 1993. - V.169, suppl. - P. 140.

205. Huchet R., Graudjon D. Histamino-induced regulation of IL-2 synthesis in man: Characterization of two pathways of inhibition // Ann. Jnst. Pastenz. Immunol. -1988. V.139. - N5. - P.485-489.

206. Hur J., Kang M.K., Park J.Y., Lee S.Y., Bae Y.S., Lee S.H., Park Y.M., Kwak J. Y. Pro-apoptotic effect of high concentrations of histamine on human neutrophils//Int. immunopharmacol.-2003. V. 3(10-11).-P. 1491-1502.

207. Inage L., Wada N., Kikkawa Y., Inami M. Supressor T-lymphocyte dysfunction in MCNS: Role of the ^-histamine receptor-bearing supressor, T-lymphocytes // Clin. Nephrol. 1990. - V.333. - N1. - P.20-24.

208. Ishiyama N., Utsuyama M., Kitagawa M., Hirokawa K. Immunological enhancement with a low dose of cyclophosphamide in aged mice // Mech. ageing dev. 1999.-Vol. 111,N l.-P. 1-12.

209. Janossy G., Boffil M., Treidosiewicz L. Cellular Differentiation of lymphoid subpopulations and their microenvironments in the human thymus. In: The Human Thymus. Ed. by H. Muller-Hermelink. Berlin, 1986. - P.89-125.

210. Kendall M.D. Age and seasonal changes in the thymus. The cell of the thymus. In: The Thymus Gland. Ed. by M. Kendall. London, 1981. - P.27-37.

211. Kendall M.D. Thymus. Histology. In: Surgery of the Thymus. Ed. by J.-C. Givel. Berlin, 1990. - P. 19-27.

212. Kohm A.P., Sanders V.M. Norepinephrine and beta 2-adrenergic receptor stimulation regulate CD4+ T and В lymphocyte function in vitro and in vivo // Pharmacol Rev. 2001. - V. 53, N 4. - 487-525.

213. Kumar A., Cleveland R.P. Immunoregulatory effects of cimetidine. Ingibition of supressor cell effects function in vivo // Immunofarmacol. and immunotoxicol. 1988. - V.10. - N3. - P.327-332.

214. Kyewski В., Fathman C., Rouse R. Intrathymic presentation of circulation non MNC antigens by medullary dendritic cells // J. Exper. Med. 1986. - V.163. -P.231-246.

215. Kyewski В., Kaplan H. Lymphoepitelial interactions in the mouse thymus // J. Immunol. 1982.- V. 128, N5. - P. 2287-2294.

216. Leon A., Buriani A., Dal Toso R. et al. Mast cells synthesize, store, and release nerve growth factor // Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 1994. - Vol. 91. - P. 3739-373.

217. Livnat S., Madden K.S., Felten D.L., Felten S.Y. Regulation of the immune system by sympathetic neural mechanisms // Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 1987.-V. 11, N2-3.-P. 145-152.

218. Maestroni G.J. Dendritic cell migration controlled by alpha 1 b-adrenergic receptors // J. Immunol. 2000. - V. 165, N 12. - P. 6743-6747.

219. Marchetti В., Morale M.L., Paradis P., Bouvier M. Characterization, expre-ssion and hormonal control of a thymic p2- adrenergic receptor // Amer. J. Physiol. 1994.-V.267.-N5.-Pt. 1. - P.718-731.

220. Mekori Y.A., Metcalf D.D. Mast cell-T-cell interactions // J. Allergy Clin. Immunol. 1999.-Vol. 104.-P. 517-523.

221. Miyauchi A., Hiramine C., Tanaka S., Hojo K. Differential effects of a single dose of cyclophosphamide on T cell subsets of the thymus and spleen in miceA flow cytofluorometry analysis // Tohoku. J. Exp. Med. 1990. - Vol. 162, N 2. - P. 147-167.

222. Mignini F., Streccioni V., Amenta F. Autonomic innervation of immune organs and neuroimmune modulation // Auton. Autacoid. Pharmacol. 2003. - V. 23, N 1. - P. 1-25.

223. Milicevic N.M., Milicevic Z., Mujovic S. Histochemical characterization of the lipid content in the cortico-medullary zone of the rat thymus // Anat. Histoid Embriolog. 1986. - V.15. - N.4. - P.355-360.

224. Milicevic N.M., Milicevic Z., Piletic O., Mujovic S., Ninkov V. Patterns of thymic regeneration in rats after single or divided doses of cyclophosphamide // J. сотр. pathol. 1984. - Vol. 94, N 2. - C. 197-202.

225. Millington G., Buckingham J.C. Thymic peptides and neuro-endocrine-immune communication // J. Endocrinol. 1992. - Vol. 133, N 2. - P. 163-168.

226. Milton N.G., Selp C.H., Hillhouse E.W. Thymic corticotrophin-releasins factor synthesis and release from rat thymocytes in vitro in response to polyinosinic: polycytidylic acid stimulation // J. Physiol. 1993. - V.467. - P.861.

227. Miralles G.D., Smith C.A., Whichard L.P., Morse M.A., Haynes B.F., Patel D.D. CD34+CD38-lin- cord blood cells develop into dendritic cells in human thymic stromal monolayers and thymic nodules // J. Immunol. 1998. - Vol. 160, N 7.-P. 3290-3298.

228. Nabarra В., Andrianarison J. Pattern of secretion in thymic epithelial cells: Ultrastructural studies of the effect of blockadeat various levels // Cell and Tissue Res. 1987. - V.249. - N.l. - P.171-178.

229. Nabarra В., Andrianarison J. Ultrastructural studies of thymic reticulum // Thymus. 1987. - V.9. - P.95-121.

230. Nilsson G., Forsberg- Nilsson K., Xiang Z. Human mast cells express functional TrkA and are a source of nerve growth factor // Europ. J. Immunol. -1997. Vol. 27. - P. 2295-2301.

231. Ohmori H., Kamo M., Yamakoshi K., Nitta M.H., Hikida M., Kanayama N. Restoration of immunocytemfunctions by thymosin alpha 1 in cyclophosphamideinduced immunodeficient mice // Immunopharmacol. Immunotoxicol. 2001. - Vol. 23, N 1. — P. 75-82.

232. Patel D.D., Haynes B.F. Cell adhesion molecules involved in intrathymic T cell development // Semin. Immunol. 1993. - Vol. 5, N 4. - P. 282-292.

233. Penninger J., Ricker Т., Romani N., Klinna J., Salvenmoser W., Dietrich H., Stossel H., Wick G. Ultrastructural analisis of thymic nurse cell epithelium // Eur. J. Immunol. 1994. - V.24. - N1. - P.222-228.

234. Pitkanen J., Peterson P. Autoimmune regulator: from loss of function to autoimmunity // Genes Immun. 2003. - V. 4, N1. - P. 12-21.

235. Plaut M. Increased responsiveness to adenosine 3'5'-cyclic monophosphate-active agents during the immune response in vivo // Immunopharmacology. 1981.- Vol. 3,N2. P. 107-116.

236. Pongracz J., Hare K., Harman В., Anderson G., Jenkinson E. Thymic epithelial cells provide WNT signals to Developing thymocytes // Eur. J. Immunol. -2003. V. 33, N 7. - P. 1949-1956.

237. Psenak O., Sefc L., Sykora V., Chang K.T., Necas E. Cytokine gene expression in regenerating haematopoietic tissues of mice after cyclophosphamide treatment // Acta Haematol. 2003. - Vol. 109, N 2. - P. 68-75.

238. Raza К., Carruthers D.M., Exley A.R., Thambyrajah J., Bacon P.A., Rowe I.F. Dramatic aneurysm regression in polyarteritis nodosa following high dose puis cyclophosphamide // J. Rheumatol. 2000. - Vol. 27, N 5. - C. 1320-1321.

239. Reed J.A., Albino A.P., McNutt N.C. Human cutaneous mast cells express basic fibroblast growth factor // Lab. Invest. 1995. - Vol. 72. - P. 215-222.

240. Rissoan M.C., Soumelis V., Kadowaki N., Grouard G., Briere F., de Waal Malefyt R., Liu Y.J. Reciprocal control of T helper cell and dendritic cell differentiation // Science. 1999. - Vol. 283(5405). - P. 1183-1186.

241. Rothenberg E.V. Signaling mechanisms in thymocyte selection // Curr. Opin. Immunol. 1994. - Vol. 6, N 2. - P. 257-265.

242. Rouse R.V., Weissman I.L. Microanatomy of the thymus: its relationship to T cell dfferentiation // Ciba Found. Symp. 1982. - V. 84. - p. 161.

243. Sachs В., Hertl M., Merk H.F. Histamine receptors on lymphocytes: distribution and functional significance // Skin. Pharmacol. Appl. Skin. Physiol. -2000.-Vol. 13, N 6.-P 313-323.

244. Savino W., Hung P., Corrigan A. Thymic hormone- containing cells. Immunohistological detection of metallothionein within the cells bearing thymulin in human and mouse thymuses // J. Histochem. Cytochem. 1984. - V.32. - P.942-946.

245. Schnaper H.W., Anne T.M., Roly Rh.H. A role for histamine type II (H2) receptor binding in production of the lymphokine, soluble immune response supressor // Eur. J. Immunol. 1987. - V. 139. -N 4. - P. 1185-1190.

246. Scollay R. Thymus cell migration: cells migrating from thymus to peripherial lymphoid organs have a "mature" phenotype // J. Immunol. 1982. -V.128. - P.1566-1570.

247. Seifert J., Hallfeld K., Eberle B. Significance of the absorption of macromolecules for the immune response of an organism // Zentralbl. chir. 1999. -Vol. 124,N4.-P. 292-297.

248. Sharova N., Dzutsev A., Mitin A., Litvina M., Vasilenko R., Yarilin A. Activation of human thymic epithelial cells in co-culture with thymocytes // Scand. J. Immunol. 2001. - Vol. 54, 1. - C. F5.

249. Shiraishi J, Utsuyama M, Seki S, Akamatsu H, Sunamori M, Kasai M, Hirokawa K. Essential microenvironment for thymopoiesis is preserved in human adult and aged thymus // Clin Dev Immunol. 2003. - V.10, N1. -P. 53-59.

250. Slauson D.O., Walker C., Kristensen F., Wang Y., de Week A.L. Mechanisms of serotonin-induced lymphocyte proliferation inhibition // Cell, immunol. 1984. - Vol. 84, N 2. - P. 240-252.

251. Soderstrom K.O., Rinne A. Identification of acid cysteine proteinase inhibitor (cystatin A) in the human thymus // Anat. Rec. 1994. - V.240. - N1. -P.115-119.

252. Sorbo J., Jakobsson A., Norrby K. Mast-cell histamine is angiogenic through receptors for histamine 1 and histamine 2 // Int J. Exp. Pathol. 1994. - Vol. 75.-P. 43-50.

253. Spangelo B.L. The thymic-endocrine connection // J. Endocrinol. 1995. -V.147.-N 1.-P.5-10.

254. Specter S., Hadden J.W. New approaches to immunotherapy: thymomimetic drugs // Springer Semin. Immunopathol. 1985. - Vol. 8, N 4. - P. 375-385.

255. Starr TK, Jameson SC, Hogquist KA. Positive and negative selection of T cells // Annu. Rev. Immunol. 2003. - Vol. 21. - P. 139-176.

256. Stefulj J., Jernej В., Cicin-Sain L., Rinner I., Schauenstein K. mRNA expression of serotonin receptors in cells of the immune tissues of the rat // Brain Behav. Immun. 2000. - V. 14, N 3. - P. 219-224.

257. Steinmann G.G. Changes in the human thymus during aging // Curr. Top. Pathol. 1986. - Vol. 75. - P. 43-88.

258. Steinmuller D. Which T-cells mediate allograft rejection ? // Transplantation. 1985. - N. 3. - P.229-233.

259. Strauss G., Osen W., Debatin K. Induction of apoptosis and modulation of activation and effector function in T cells by immunosuppressive drugs. // Clin. Exp. Immunol.- 2002. N. 2. - P. 255-266.

260. Togias A. HI-receptors: localization and role in airway physiology and in immune functions // J. allergy Clin. Immunol. 2003. - Vol. 112, N 4. - P. 60-68.

261. Vakhari D.D., Mitchison N.A. Helper Tcell activity demonstrated by thymic nurse Tcells // Immunology. 1984. - V. 61, N2. - P. 269-273.

262. Varas A., Vicente A., Sacedon R., Zapata A. Interleukin-7 influences the development of thymic dendritic cells // Blood, 1998. V. 19(1). - P. 93-100.

263. Vizi E.S., Elenkov I.J. Nonsynaptic noradrenaline release in neuro-immune responses // Acta Biol. Hung. 2002. - V. 53, N 1-2. - P. 229-244.

264. Waldmeier P.C. Amine oxidases and their endogenous substrates // Pharmacol. And Toxicol. 1987. - Vol.60, N 1. - P. 50.

265. Wang G.J., Cai L. Relatively low-dose cyclophosphamide s likely to induce apoptotic cell death in rat thymus through Fas/Fas ligand pathway // Mutat. Res. 1999. - Vol. 427, N 2. - P. 125-133.

266. Wilson N.S., El-Sukkari D., Belz G.T., Smith C.M., Steptoe R.J., Heath W.R., Shortman K., Villadangos J.A. Most lymphoid organ dendritic cell types are phenotypically and functionally immature // Blood. 2003. - N 5.

267. Wu Di, Zhu Li-ping, He Wei Zhongguo yixue kexueyuan xuebao // Acta Acad. Med. Sin. 2002. - Vol. 24, N5: - P. 530-532.

268. Yarilin A.A. What the Thymus is Needed for? Intrathymic Events and Their Uniqueness // Russ. J. Immunol. 1998. Vol. 3, N 1. - P. 5-20.

269. Yoon S., Yoo Y.H., Kim B.S., Kim J.J. Ultrastructural alterations of the cortical epithelial cells of the rat thymus after cyclophosphamide treatment // Histol. Histopathol. 1997. -Vol. 12, N2.-P. 401-413.

270. Zandvoort A., Lodewijk M.E., Klok P.A., Dammers P.M., Kroese F.G., Timens W. Slow recovery of follicular В cells and marginal zone В cells after chemotherapy: implications for humoral immunity // Clin. exp. immunol. 2001. -Vol. 124,N2.-P. 172-179.

271. Zats M., Goldstein A. Thymosins, lymphokines and the immunology of aging // Gerontology. 1985. - V.31. - P.263-277.

272. Zuklys S., Balciunaite G., Agarval A., Paimer E. Normal thymic development assotiates with expression of AIRE, the gene defective in the monogenic autosomal-recessive autoimmune disease APECED // Allergologie. -2000.-V. 23, N3.-P. 140-141.

273. Zusman I., Kossoy G., Ben-Hur H. T cell kinetics and apoptosis in immune organs and mammary tumors of rats treated with cyclophosphamide and soluble tumor-associated antigens // In vivo. 2002. - Vol. 16, N 6. - P. 567-576.

Информация о работе

Михайлова, Марина Николаевна
кандидата медицинских наук
Москва, 2004
ВАК 03.00.25

Диссертация

Морфофункциональные изменения тимуса и показатели крови после введения циклофосфана, имунофана и их комбинации - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы