Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Модификация мутагенеза и канцерогенеза некоторыми биологически активными агентами

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Модификация мутагенеза и канцерогенеза некоторыми биологически активными агентами"

МИНИСТЕРСТВО .'ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСП.УКЛИКИ АРМ! КИЯ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ Щ-:НТР ИМ. в.А. ФАНАРЛ5ШНА НАЦИОНАЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ А№ПИИ РГ б ОЛ ИНСТИТУТ БИОХИМИИ им- Г-Х- КУНИЛТЯНА

Из правах рукописи '} Н0;1 Г.' ~> УДК 575:234 ;6Ни)О0 ИЗ.ЯМ.Г'

НЕРСЕГЯП А1МЕН КОНСТАНТИНОВИЧ

МОДИФИКАЦИЯ МУТАГЕНЕЗА И КАНЦЕГОГР.НГЛЛ ПЕК01 О] ИМИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫМИ АГЕНТАМИ ч-.СЮ.ОЗ- - Генетика, молекулярная биол':! ин ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени доктора бжшч ич'ч'ких нчук (в виде научного доклад) ЕРЕВАН - 1УУ7

<.изиизиъь ^пъгатьзп.и-заъ ишпяи'шкгшзиИ. ини-а; ш гшоод. ¡ЫШЛЯЗиХ-Ь иъчиъ ГШП.ОР.ШПП.ГШвЦЪ <М-С>шш\. т.

<шиизиъь «.иии^ьзплз-зиъ о-кп./з-эп.и-ио шпизм, шт'нлл-и <,. пп.ъьий-зиъь аъчиъ ЧЬЪШПНЛ-ШР кпл

аъгшчгь кичп,\.гпч

ььгиьизиъ игиы. чпиизиъзнл-

1т$1Ш;\.Ь9Ь ЬЧ <Ш\.5ЫтЬ\Л;ЯЬ иО'1М№а№а1 П1 ПГ. ■ч!ДДН!Гт.П1

иячич^тч

ч-оо.оз - ч-ьъьвнш. стпи^пл.виг ^ь-ииигтгш/И).\.

изсшгипи.'шзп.ъ

ЧЬЬишршЬш^шЬ ч[илшр,|тЬЬЬ[ф г(Ппр(1 ши1л|ц$шЬ|1 (гл |д>.''.и!, Ьчи/чщ

ьгьчаъ - Х997

г ; ; ьыполнея^ в Онкологическом научном ЦеНТ^О им- В.А. Фип, чсоша МЗ РА

И |уч.(!..< КоН'-уЛЬТЭНТ!.!: ЗУСЛуЖОШШЯ ДОЯЮЛЬ И^УКИ.

действительный член АМН (1. Ереван), доктор медицинских нэук. профессор Jl.il- Мкртчян доктор биологических наук, профессор Арутюняи

.){./..•.;; '¡I ¡то оппоненты: доктор бисшн ичоских наук-

профессор Л-М- Ьлископосян доктор медицинских наук, профессор А-М. Галстяп доктор биологичоских ¡пук. доцент Т-<1>. Саркисян

уч|(одкм(ио* НИИ окк^.йогии им- и^фоссяра ll.fl.

Петрова МЗ РФ (г- С.-Петербург)

¡'-•ии:-» ..«-к'-сертмиии состоится ",2(?" г- ь ""часов нэ

;псод «¡ми Специализированного совета~и42 при Институте биохимии 11/.;1 1'Д им- 1'.X. Буниатяна-

с № -оргчциаи можно (/.»лакомиться ь Оио.1ио-и>ке Инсчитутч биохимии <1'онш-"М. ул. [I. Сеь.-жа Ьх]).

глин разослана Э_" „)(__ ШУ? г.

Ученый секретарь Специализированно!о сиьета.

докгор биологических наук- профессор А-А. Симойян

Обшая характеристика проблемы

Актуальность работы. Многие химические, биологические и физические агенты обладают мутагенным эффектом- Мутации в половых клетках приводят к повышению генетического груза популяций, мутации в соматических клетках организма - к возникновению злокачественных новообразований. (DeMarini, 19G5). Исследования в области молекулярной биологии свидетельствуют о том. что нормальная клетка превращается в злокачественную в результате мутация, активирующих онкогены, инакгивиругацих антионкогэны или гены, ответственные за репарацию ДНК (Vogelstein, Kinzler, 1993; Helene, 1995; Bond/ et al,1996; Wei et al, 1996). ЭТО ПОЛОЖ6НИЭ

подтверждается данными о том, что среди 180 химических агентов (безусловные, возможные и вероятные канцерогены для человека) более 90"/. способны повреждать ДНК клеток (Bartsch, tlalavpille, 1990). Поэтому одной из важнейших задач современной биологии и медицины является защита уникальной генетической информацииклоток человека от поражающего действия канцерогенных и мутагенных факторов. Одним из подходов к решению этой задачи является применение антимутагенов, которые способны снижать индуцированный различными средовыми факторами уровень мутационных изменений

(Gebhart, ftrutyunyan, 1990; Talalay. 1996; Wattenberg,

1996)-Поскольку в основе инициации канцерогенеза лежат мутационные события, то снижая мутагенный эффект агента в клетках, можно снизить и его канцерогенное действие (DeFiora,

Ramel, 1990; ХУДОЛеЙ, 1992; Samman et al; 1996). ПОЭТОМУ ОДНИМ

из основных требований к соединениям, которые используются для химиопрофилактики рака, является наличие антимутагенной активности (Kelloff, 1992).

Одной из важнейших проблем клинической онкологии являогся поиск возможности для снижение побочного действия химио- и лучевой терапии (мутагенность, канцерогенность, токсичность) (Шлянкевич И др., 1993; Ferguson, 1996). С ЭТОЙ ЦРЛЬЮ перспективно применение некоторых штаммов микробов и полисахаридов микробного игрибкового происхождения (Купин, 1992, 1993; Nio et ах., 1996).Многие из этих природных агентов повышают радиорезистентность животных, оказывают антиканцерогенный и антитоксический эффекты, а также способны усиливать

Прг.ТИВииПуХОЛбВЫЙ Эффект химиопрепаратои (Biijham, 1993; Waldron, 199Г.; ^air.i et al; 1996; Sun et al; 1996; Ига et dl; 1997).

Эпидемиологические исследования показали, что употребление молочных продуктов, содержащих лактобациллы, приводит к снижению заболеваемости раком молочной железы и кишечника (дааыи, 1992; vont veer et ai., 19B9). Экспериментальные исследования показали, что некоторые штаммы лактобацилл обладают антимутагенной активностью (Pool-Zobel et al., 1994; 1995). БЫЛО выявлено, что микробные иммуномодуляторы способны ингибировать аКТИЬНПСТЬ продуктоь онкогенов (Umezawa, 1995; Reddy, 1996).

В экспериментах на крысах нами было выявлено, что ту.'ж^мианая вакцина (ТВ) обладает антимутагенным, антиканцерогенным и противоопухолевым аффектом (Нерсесян, 1987). Так как в странах СНГ ежегодно иммунизируется ТВ 12-14 млн челиьок. дальнейшие исследования антимутагенных,

антиканцерогенных и гфотиворпухолевых свойств ТВ особенно актуальны.

В Армении для детского питёния широко используется молоко "Нарино", содержащее в большом количестве лактобациллы l. acidophilus 417/302. в клинической медицине применяетется препарат "Бифидумбактерин", состоящий из лактобацилл в. bifidum. Действие этих лактобацилл на мутагенез, рост и зф1вктивность лечения перевиваемых опухолей не изучено.

В ОНЦ им- В.А- Фанарджяна МЗ РА под руководством профессора Л-Н. Мкртчяна создана поливалентная противораковая вакцина, содержащая белковый экстракт пуповины (БЭП) человеческого плода. Мутуюннос-ть, возможная канцерогенность БЭП, а также его влияние на индуцированный мутагенез и канцерогенез не исследовано.

Цоль и задачи исследования

Цолью исследований было изучение влияния ТВ, лактобацилл "Париж;" и "Бифидумбактерин", а также БЭП на кластогенез (повреждение хромосом), индуцируемый химическими,физическими и биоло! ическими агентами, химический канцерогенез, рост и эффективность лечения опухолей у грызунов.

Исходя из цели исследований, были сформулированы следующие . Зад-1'Ш:

1. Изучить влияние иммунизации на кластогенный эффект химических агентов, рентгеновского излучения. радиоактивных изотопов и вирусов методами анализа хромосомных аберрации /ХА/ в соматических и половых клетках, а такие микроядер /МЛ/ в эритроцитах крыс и мышей.

2. Выявить возможность усиления антикластогенного действия ТВ посредством других известных антимутагенов (судан ш, поливитамины "Ревит" и препарат "Лоштак") на крысах.

3. Исследовать влияние ТВ на токсичность противоопухолевых химиопрепаратов на крысах.

4- Изучить действие ТВ на радиорезистентность крыс.

5. Исследовать влияние ТВ на канцерогенез, индуцируемый у крыс и мышей 7,12-ДНБА. м-нитрозодиметиламином и ы-нитрозометилмочевиной у крыс и уретаном у мышей-

6- Изучить действие ТВ на рост индуцированных и перевиваемых опухолей у крыс в сочетании с химиопрепаратами и радиотерапией.

7. На крысах и мышах провести испытание препарата БЭЛ на мутагенность и канцерогенность.

8. Изучить влияние БЭП на индуцированный мутагенез и канцерогенез у крыс-

8- Изучить влияние лактобадалл "Нарине" и "Бифидумбактерин" на мутагенез и лечение перевиваемых опухолей химиопрепаратами у крыс.

9- Оценить антимутагенный эффект препарата "Бифидумбакгерин" и молочного продукта "Нарине" в соматических клетках крыс-

10. Изучить влияние "Нарине" и "Бифидумбактерин" на рост опухолей при лечении крыс различными химиопрепаратами.

Научная новизна результатов. Впервые показано, что иммунизация ТВ грызунов (крыс, мышей, морских свинок, серых армянских хомячков) приводит к возрастанию резистентности к кластогенному действию мутагенов химической, биологической и физической природы на соматические и половые клетки. Впервые выяснены механизмы антикластогенного действия ТВ. связанные с возрастанием резистентности ДНК клеток к генотоксическому действию экзогенных факторов, ингибированием системы цитохрима Р-450 и возрастанием активности антирадакальных ферментов

ката.чазы и супероксид дисмутазы (СОД).

Впервые показано, что иммунизация крыс и мышей ТВ оказывает шгтшслнцерогенныя эффект и влияет не только на фазу инициации канцерогенеза, но и на фазу промоции- Наилучшие результаты получены при иммунизации крыс до введения канцерогена и их ^вакцинации спустя 3 месяца.

Впервые показано,что у крыс, иммунизированных ТВ, усиливается эффект некоторых антимутагенов.

Выявлено, что убитая ТВ (УТВ) обладает антикластогенной, антитоксической и противоопухолевой активностью, а также усиливает противоопухолевый аффект химиопрепаратов. Введение ТВ в опухоль оказывает сильный противоопухолевый эффект. Сочетание ТВ с хшиопропаратами или радиацией приводит к усилению противоопухолевого эффекта.

Впервые показано, что БЭП не обладает мутагенной и канцерогенной активностями.' БЭП тормозит канцерогенез, индуцированный 7,12-ДМБА и бэнзо(а>пиреном у крыс, а также снижает кластогенную активность этих химических агентов и циклофосфана у крыс и мышей.

Впервые показано, что лактобациллы "Нарине" и "Бифидумбактерин" обладают антикластогенной активностью, слабым противоопухолевым действием и могут усиливать противоопухолевый эффект химиопрепаратов.

Кроме того, впервые было показано наличие антимутагенных свойств у препарата "Лоштак" в экспериментах in vivo и повышенная резистентность серых армянских хомячков к действию химических мутагенов по сравнению с другими грызунами.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований были выяснены механизмы антикластогенеза и антш.;л1цероганеза у животных, иммунизированных ТВ.

Проведенные нами экспериментальные исследования послужили петлят для применения ТВ при лечении больных раком легкого и тела матки в клинических отделах ОНЦ им- В.А. Фанардкяна МЗ РА. Результата показывают, что у таких больных достоверно удлиняется продолжительность жизни. Коллектив авторов из ОНЦ им-В-А. Фанарджяна (Мовсесян М.А. и др.) • получил патент на изобретение "Применение туляу^мияной живой вакцины в комплексном

лечочии больных раком тела матки и раком легкого" (Роспатент 92012992/14 058972 ОТ 10-10- 1995 Г).

В настоящее время фирма Pharma Project (Richmond, England) проводит лицензирование метода применения УТВ для лечения опухолей в сочетании с химиопрепэратами--

Показано, что у крыс, иммунизированных ТВ, противоопухолевый эффект химиопрепаратов и радиации достоверно усиливается.

Повышение радиорезистентности животных и одновременно снижение цитогенетического эффектов радиации позволяет рекомендовать предварительную иммунизацию ТВ контингента, вынужденного работать в зонах с повышенным радиоактивным фоном для снижения поражающего действия радиации.

Выявлено, что БЭП практически не обладает мутагенной и канцерогенной активностью- Более того, это соединение обладает выраженной антикластогэнной и антиканцерогенной активностью, и поэтому может быть рекомендовано для клинических испытаний с целью профилактики злокачественных новообразования.

Впервые показанная нами способность лактобацилл "Нарине" и "Бифидумбактерин" снижать уровень индуцированного мутагенеза, тормозить рост перевиваемых опухолей и усиливать противоопухолевое действие химиопрепаратов у экспериментальных животных может быть рекомендовано для дальнейших исследований в культуре клеток человека с далью использования вышеназванных лактобацилл в комплексном лечении онкологических больных для снижения побочного действия химио- и лучевой терапии.

Результаты, полученные в настоящей работе, могут служить методологической основой для исследования возможной антиканцерогенной активности химических или биологических агентов по антикластогенным свойствам.

Результаты исследования, изложенных в диссертации, используются в цикле лекций для студентов лечебного, педиатрического и медико-биологического факультетов Сибирского медицинского университета (Томск), читаемых на кафедре биологии и генетики, а также в спецкурсах для студентов биологического факультета ЕГУ, специализирующихся на кафедре генетики и цитологии-

Апробация работы- Материалы диссертации были предсталены на:

научных конференциях ОНЦ МЗ РА (Ереван, 1986, 1989, 1990, 1996), v с езде Армянского общества генетиков и селекционеров (Ереван, 1987), советско-итальянской конференции "Фарморубицин - новый эффективный противоопухолевый антибиотик" (Ереван, 1987), конференциях молодых медиков Грузии (Тбилиси, Бакуриани,1987, 1988, 1989, 1990), конференции "Актуальные вопросы радиационной гигиены" (Москва, 1987), hi Всесоюзном совещании по химиотерапии опухолей (Черноголовка, 1987), отраслевом совещании "Акгуальные вопросы сочетанного и комбинированного воздействия факторов лучевой и нелучевой природа" (Львов, 1987), Всесоюзной конференции "Действие малых дозионизирующих излучений на гонады и плод" (Обнинск, 1988), i конференции молодых медиков Армении (Ереван, I9i-o), Всесоюзных конференциях секции генетических аспектов проблемы "Человек и биосфера" (Киев, 1988; Ленинград, 1989; Караганда, 1990), II Всесоюзном симпозиуме "Могасгазирование злокачественных опухолей" (Киев, 1991), Республиканской конференции "Современные вопросы фитотерапии и традиционной медицины" (Ереван, 1993), конференции "Теория и практика комплексных экологических экспертиз" (Санкт-Петербург,

1993), I с"езде онкологов стран С11Г (Москва, 1996); а также на международных конференциях: "Anticancer Research; Maraphon, Greece, 1990; Corfu, Greece, 1995); "Mechanisms of anmutagenesis and anticarcinogesis" (Lucca, Italy, 1991; Alberta, Canada,

1994); Annual Meetings of EEMS(Prague, Czechoslovakia, 1991; Berlin, Germany, 1992); "Food and cancer prevention" (Norwich, UK, 1992); International Congresses "Molecular biology of cancer" (beijing, China, 1991); "Anticancer chemotherapy"(Paris, France, 199~, 1995, 1996, 1997); XVI International Cancer Congress (New Dt-llii, India, 1994); 19th International Congress on Chemotherapy (Montreal, Canada, 1995); 5th International Expert Forum on Immunotherapy and Gene Therapy (Jerusalem, Israel, 1996); 21st Mfntjng of the International Association for Breast Cancer Rt-'searth (Paris,France, 1996); UICC Cancer Management Meeting (Vienna, Austria, 1997).

Апробация работы была провена на заседании Ученого совета ОНЦ им. В-А- Фанардаяна 24 февраля 1997 г.

Структура диссертации. Диссертация изложена в форме научного

доклада-

Экспериментальная часть Глава I. Влияние ТВ на кластогенез I-I. Влияние иммунизации ТВ крыс, мышея, армянских хомячков и морских свинок на химический кластогенез-

Ранее нами было показано (Нерсесян, 1987), что иммунизация крыс ТВ приводит к снижению кластогелного эффекта циклофосфзна <ЦФ), 7 Д2-диметалбенз< а)антрацена, N-нитрозометилмочевины в клетках костного мозга крыс.

Изучено действия химических мутагенов на клетки костного мозга иммунизированных ТВ лабораторных животных- ТВ вводили в предварительно этилированную кожу спины животных однократно внутрикожно. Крысам и морским свинкам вводили по 10 млн микробов, а мышам и серым армянским хомячкам по 0,5 млн живых микробов {большие дозы микробов вызывают гибель двух последних видов грызунов из-за их высокой чувствительности к туляремийной инфекции) -

Онтогенетические нарушения изучались методом метаф.чзного анализа хромосомных аберрация (ХА) в клетках костного мозга крыс, морских СВИНОК, мышея И серых ХОМЯЧКОВ (Ford, Hamerton ,1756; Sugiyama et al., 1776). Ддя ОСТЭНОВКИ КЛ6ТОК НЭ СТаДИИ МОЧафаЗЫ

митоза животным вводили внутрибрюиинно (в/б) колхицин (крысам в дозе I мг/кг, мышам - 4 мг/кг, и морским свинкам - ?, мг/кг). Нами впервые было показано, что для остановки митозов армянским хомячкам надо вводить колхицин в дозе 100 мг/кг- Окраска препаратов костного мозга проводилась азур-зозином или красигалом Гимза- От каждого животного изучали по 100 клоток- Регистрировали хроматидные и хромосомные разрывы, аберрации обменного типа, клетки с множественными нарушениями хромосом (>10). Ахроматиновые пробелы (гепьп регистрировали, но в качестве аберраций не учитывали. ХА изучали также в сперматогониях. полученных из семенников крыс <Дыбан, 1970). От каждого животного изучали по 100 сперматогониев в стадии метзфазы.

Цитогенетические нарушения изучали также методом микроядер (МЯ) в полихроматофильных эритроцитах костного мозга крыс и мышей (Schmid, 1975). Мазки костного мозга грызунов окрэиивали азур-эозином или красителем Мзя-Грюнвзльд с подкрашиванием

красителем Гимза. От каждого животного изучали по 1000 полихроматофильных эритроцитов.

Известно, что организм крыс по отношению к туляремийной инфсжции и иммунологическим перестройкам при иммунизации ТВ стоит гораздо ближе к организму человека, чем других лабораторных животных (Олсуфьев, 1962). Мыши и хомячки намного чувствительнее к ТВ, и дозы вакцины, употребляемые для иммунизации людей, вызывают их гибель в течение 5-7 суток.

Ранее нами было показано, что ТВ в дозах, употребляемых для иммунизации человека, не индуцирует ХА в клетках костного мозга крыс (Зильфян и др., 1986). Аналогичное исследование было проведено на мышах. С этой целью мышей иммунизировали внутрикожно 0,5 млн микробов. Через 1,3, 5 и 10 суток после иммунизации мышеи забивали. Методом МЯ были исследованы цитогенетические нарушения в кос гном мозге. Результаты этих экспериментов показали, что ТВ не индуцировала достоверного повышения уровня МЯ в костном мозге мышей по сравнению с интактным контролем (0,I8v.) на всех сроках исследования.

Было продолжено изучение влияния ТВ на кластогенный эффект ксенобиотиков в клетках костного мозга крыс. В качестве мутагенов использовали противоопухолевые препараты, широко используемые в клинической онкологии - тиоТЭФ и антрациклиновые антибиотики адрибластин, фарморубицин и аклакур. Мутагенная активность тиоТЭФ и адрибластина хорошо изучена (iarc, 19вь). Фарморубицин -производное адрибластина (Farmitalia Carlo Erba, Italy) И аклакур (Leiras, Finland) бЫЛИ ПрвДОСТаВЛвНЫ

фирмами-производителями ОНЦ им- В. А. Фанардаяна МЗ РА для клинической апробации.

Нпорвые была изучена кластогенная активность этих препаратов на клочках костного мозга крыс. Выявлено, что фарморубицин при мен; ¡;>:м токсичности обладает практически равной с адрибластином клжчонжной активностью при введении эквитоксических доз. В дозах, эквивалентных 1/5 ЛД50, адрибластин и фарморубицин индуцируют появление 20"/. аберрантных метафаз- Аклакур обладает меньшой кластогенной активностью по сравнению с фарморубицином, и индуцирует I5v. клеток с ХА при введении в дозе, равной 1/2 ЛД50.

Мутагены вводились 20 крысам-самцам Вистар в/б, однократно,

через 15 с.угок после их иммунизации ТВ. В качестве контроля служили 20 неиммунизированных крыс, которые получили мутагены в тех же дозах (адрибластин - 1-4 мг/кг- фарморубицин - 3,0 мг/кг, аклакур - 15?0 мг/кг и тиоТЭФ -1.7 мг/кг). Спонтанный уровень хромосомных аберраций изучали в клетках костного мозга 5 крыс линии Вистар.

Было показано, что кластогенный эффект. индуцированный аклакуром в клетках крыс, иммунизированных ТВ. был снижен по сравнению с контролем на 68.8>:. адрибластином на 62'/-, фарморубицином - на 58-2"/. и тиоТЭФ - на 35,6"/. (рис- I).

Известно, что тиоТЭФ является алкилирующим мутагеном прямого действия. Мутагенность этого агента выявлена во всех использованных тест-системах. Индуцирует лейкозы у человека и опухоли различных локализаций у грызунов (п>ы:, \чаь >. Антрациклиновые антибиотики являются промутагенами и нуждаются в метаболической активации для приобретении биологических свойств, которая протекает в микросомах печени с участием цитохрома Г-450. Антибиотики индуцируют в клетках образование свободных радикалов кислорода . а их метаболиты способны инторкалировзть мо:кду основаниями ДНК (Farmitalia Carlo Erba. 19821. НаМИ П0КЭЗЗН0, что ТВ более эффективно снимает кластогенный эффекг промутзгонов (агентов: которые нуждаются в метаболической активации в организме для приобретения мутагенных свойств - Цф, антрациклиновые антибиотики)? чем мутагенов прямого действия (тиоТЭФ).

Было исследовано влияние иммунизации мышей нч кластогенный эффекг Щ>. противоопухолевого алкилирующего химиопрепарата с выраженными мутагенными и канцерогенными свойствами (iarc, 1 в'). Иммунизированным мышам на 5е. 10е. 15е- 2Г)е. 25е и ЗОе сутки :v6 вводили ЦФ в дозе 30 мг/кг. Через 24 ч мышей забивали, и в костном мозге изучали уровень МЯ- Результаты этого экспоримонта представлены в таблице I.

Показано, что антикластогенный эффект, индуцируемый ТВ, наиболее выражен на 15е сутки после иммунизации и длится 15 суток.

Таблица I.

Влияние иммунизации мышей ТВ на кластогенный эффект ЦФ

Время после иммунизации. сутки

Количество МЯ, г

Снижение кластогенного эффекта, у._

ю

13

го

1,98+0,13

11,2

1,36+0,12*

39,0

0,98+0,09*

5в,0

1 ,19+0,11*

46,6

1,62+0,14*

27,4

зо

только ЦФ

1 ,78+0,15

20,2

2,23+0,18

иитактные

0,18+0,03

I достоверное отличие от положительного контроля

Выяснив, что максимальный антикластогенный эффект у мышей наблюдается на 15е сутки после иммунизации , было изучено влияние ТВ на кластогенность пяти канцерогенных для человека агентов именно в этот срок ( бензол, бензидан, 4-аминобифенил, табачный дым и тиоТЭФ). Бензол я^вляется простейшим ароматическим углеводородом- Вызывает острый ммелоидныя лейкоз у человека, индуцирует цитогенэтическив нарушения в соматических клетках Грызунов (IАЯС, 1987). БбНЗИДИН (4,4-ЭМИНОбИфвНИЛ) И 4-аминобифенил являются представителями циклических аминов-Вызывают опухоли кочевого пузыря у человека и опухоли различных локализаций у экспериментальных животных (¡апс, 1987). Оба агента

ИНДУЦИРУЮТ МЯ В Эритроцитах КОСТНОГО МОЗГа МЫШей (АзЬЬу, ПпиеП, 19911) .

Эксперименты были проведены на 65 мышах- 30 мышей были иммунизированы ТВ и через 15 суток им вводили мутагены. 30 неикмунизированным мышам мутагены вводили в тех же дозах- Ь мышей слуълчи для изучения спонтанного уровня МЯ. Бе-н-зол, бензидин и 4-амш/обифонил вводили мышам однократно внутрижедудочно в дозах 1000 мг/кг, 700 мг/кг и 60 мг/кг, соответствующим 1/2 ЛД50

(Г.ч1,|,у, Т111ие11 , 19В9). ТИОфОСфЭМИД ВВОДИЛИ ОДНОКрЭТНО В/б В Д038

3,6 мг/кг, соответствующей 1/5 ДЦ50 (Проценко, Булкина, 1985). Кластогенность табачного дыма изучали по методу, описанному

ЛГчрр.пинис к кчыг. "»

АВ ГК!

ЛИ -алрибласиш; {"И - фармаруГмшин: АС - аклакур: I Г - инн

Рис. I Влияние иммунизации крыс'1 И на клас. ни сними эффект химических ¡псигон

Мнк(ЮИ |рл 1М

>|Ч1|р<1|||||(1||

А В С С' Е

А - Оешач: 1$ - Оеишлин; С - 4-цмш1оС>1|фснпл: Г) - шопф: I - мрачный

дым

Рис.2 Влияние иммушпашш мышей'I И на класпи еиш.ш м[«|ч-к1 5 капиерогеиныхдня челонека агент»

■ Контроль □ Иммушпиропанмые

F<aUiiií^/ et al (1937, 1939). В ID ЛИТрОВЫЙ СОСУД, СОДерЖаЩИЙ 600 мл табачного дыма от сигарет "Арин-Берд", помещали мышеи. Дым получали большим шпршцем, на конце которого была горящая сигарета. Мыши содержались в даму 15 мин, после чего сосуд проветривался- Процедуру повторяли 10 раз. Мышей забивали дислокацией шейных позвонков через 24 ч после воздействия мутагенов.

Рыло показано, что уровни МЯ при действии всех канцерогенов были достоверно снижены по сравнению с соответствующим контролем на 3;:,4>: при действии тиоТЭФ, на 51,8"/. при действии бензола, на G5.&: при действии бензидина, на 48,57. при действии 4-аминобифенила и на 507. при действии табачного дыма (рис. 2).

Впервые изучено влияние иммунизации ТВ армянских хомячков и морских свинок на кластогенный эффект ЦФ, который вводился животным в/б в дозах 100 мг/кг и 25 иг/кг, соответственно. Было выявлено, что армянские хомячки обладают высокой резистентностью к действию ЦФ (в дозах, эквивалентных I/IO - 1/2 ДД50), который '■•чдуцирукгг в соматических клетках хомячков в 3-5 раз меньшее количество клеток с цитогвнетическими нарушениями, чем у крыс, мышой и морских свинок (при введении эквитоксических доз). Анализ полученных данных показал, что уровень клеток с ХА, индуцируемый ЦФ у иммунизированных хомячков и морских свинок, достоверно ниже по сравнению с соответствующим контролем на 49,67- и на 427.

Было изучено влияние убитой ТВ (УТВ) на уровень МЯ при введинии ЦФ в дозе 25 мг/кг. По тесту влияния УТВ на токсичность ЦФ ь дозе 200 мг/кг (ЛД100) было выяснено, что наилучший эффект был получен при введении крысам 500 млн микробов- УТВ в этой дозе ьвидляи пяти крысам в/б, через 24 ч им и пяти интактным крысам вводили в/б ЦФ. Через 24 ч исследовали костный мозг на наличие МП. т >к как максимальный антикластогенный эффект полисахаридов

! >'ГСЯ ИМеННО В ЭТОТ CpOK (Hasegawa c-t al., 1989). ПЯТЬ КрЫС

служили контролем для изучения уровня спонтанных МЯ-

Результаты экспериментов показали, что УТВ снижает уровень МЯ, индуцируемых ЦФ с 30,2 до 14,0 на 1000 полихроматофильных эритроцитов (р:0,01). Исследование возможной кластогенности самой УТВ (500 млн) было проведено на II крысах- Было показано, что микробы не повышают уровеь МЯ в костном мозге крыс в течение 72 ч.

Таким образом, можно заключить, что УТВ не обладает кластогенноя активностью и способна снижать уровень МЯ, индуцированный ЦФ-

В литературе имеются лишь единичные работы, посвященные сочетанному действию двух антимутагенов, где показано, что их эффект не превышает суммарного (аддитивного) (Oenuv* «t «).,

19В9; Raupova et al., 19B9; Renner and Munzrier, 1991). БЫЛО

исследовано сочотанное действие ТВ и аокоторих антиму тарной на крысах. В качестве антимутагенов использовались-, азокраситэль судан in, эффективно снижающий канцерогенный и кластогенный эффекты полициклических ароматических углеводородов у крыс (ito

et al., 19В6)! ПОЛИВИТЭМИНЫ "РвВИТ", КОТОрЫО СНИЖЭЮГГ

кластогенный эффект ЦФ у крыс (Пашинский и др.. 1986) и растительный препарат "Лоштак", обладающий выраженными антиоксидантными свойствами (Паносян, 1990).

Нами впервые было показано, что препарат "Лоштак" снижает кластогенный эффект ЦФ у крыс и мышей при полном отсутствии мутагенных свойств (Мкртчян, Нерсесян, Паносян, 1995).

Эксперимент был проведан на 60 крысах-самцах линии Вистар. 25 из них были иммунизированы ТВ. Через 5 суток им ежедневно вводили внутршелудочно препарат "Лоштак" < 8 мг/кг» доза, рекомендуемая для человека и пересчитанная на крысу) или одно драже "Ревит", содержащее 2500 МЕ витамина А, I мг витамина BI и 35 мг витамина С < доза, применяемая в экспериментальных исследованиях на крысах; Пашинский и др., 1986). Через 15 суток после иммунизации крысам вводили ЦФ в дозе 25 мг/кг- Судан ш в дозе 10 мг/кг вводили крысам внутршелудочно за 24 ч до введения ЦФ- Крыс забивали через 24 ч после введения ЦФ и цшогенетичоские нарушения изучались методом анализа ХА. Судан iii и поливитамины "Ревит" даже в высоких дозах не индуцируют повышения уровня цитогенетических нарушений в соматических клетках крыс uu> et al., 1989; ПаШИНСКИЙ И Др., 1986), ПОЭТОМУ ИЗУЧвНИе ИХ кластогенной активности нами не проводилось- То же относится и препарату "Лоштак", который в высоких дозах не повышает уровень цитогенетических нарушений в клетках костного мозга крыс и мышей (Мкртчян, Нерсесян, Паносян, 1995).

Результаты эксперимента представлены на рис- 3 и показывают,

35

KjlLlk.ll 30 -

крыс С ^

ХД.% | 25 -

20 -

15 -

10 -

5 -

0

н

-••л

Г

■в

.¿1

и

I -ЦФ, 2 - ТВ + ЦФ; 3 - Судан + ЦФ; 4 - ТВ + Судан + ЦФ; 5 - Реши + ЦФ: <> - ТВч- Рсиит + ЦФ; 1 - Лоиггак + ЦФ; И - ТВ + Лоппак + ЦФ

Рис. 3 Сочетанию дейепше ТВ, Судана, препаратов "Реши" и "Лоиггак" па юшчшенный эффекг циююфосфаиа.

что ТВ снижает число клеток костного мозга с ХА, индуцируемыми ЦФ, в 2,26 раза, судан ш -в 1,7 раза, "Ревит" - в 1,62 раза, ТВ+судан ш- в 3,77 раза и ТВ+•■Ревит" - в 4,25 раза сво всех случаях р<0,05)•

Препарат "Лоштак" снизил кластогенную активность Ц Ф в 1,33 раза, ТВ - 2 раза, а ТВ+"Лоштак" - в 3,54 раза (во всех случаях р<0,01).

Конечный антимутагенный эффект не достигал аддитивного, но во всех случаях воздействие антимутагвнов на иммунизированных ГВ крыс приводит к достоверному усилениюих эффекта.

1-2. Механизмы антикластогенного действия ТВ Отмечено, что антикластогенный эффект у иммунизированных ТВ крыс более выражен в отношении промутагенов. чем мутагенов прямого действия- Промутагены нуждаются в метаболической активации для приобретения биологических свойств (Мизгирев,Худолей, 1985). Этот процесс происходи в печени, и ключевую роль в нем играет цитохром Р-450. Известно, что многие индукторы интерферона и иммуномодуляторы, включая полисахарида микробного и грибкового происхождения, являются ингибиторами системы цитохрома Р-450 (ОевсоЪеБ, 19855 Пе^пеге с?1 а1., 1984).

Было изучено влияние ТВ на цигогенетический эффект ЦФ в клетках костного мозга кррс и мышея, а также на активность цитохрома Р-450 с помощью длительности сна грызунов, вызываемого барбитуратами <Богуш и др.,1986). Эти соединения метаболизируются в организме с помощью цитохрома Р-450, и длительность сна, вызываемого барбитуратами, обратно зависит от активности системы цитохрома Р-450.

Была изучена зависимость между длительностью сна, вызванного гексеналом, и количеством МЯ (мыши) и ХА (крысы), индуцируемых ЦФ. 60 беспородных мышей-самцов и 70 крыс-самцов линии Вистар иммунизировали ТВ и на 5е, юе, 15е, 20е, зэе и ЗОо сутки им вводили Цф в дозе 25 мг/кг в/б. У этих животных (по 5 в группе) изучалось количество МЯ и ХА в костном мозге через сутки после введения ЦФ. В те же сроки у животных (по 5 в группе) изучалась длительность сна, индуцируемого гексеналом (60 мг/кг). Контролем служили неиммунизированные животные (по 5 в каждой группе), у

которых изучали уровень штотенеттескш нарушений, индуцируемых ЦФ, и длительность сна, индуцируемого гексеналом-

Результаты этих экспериментов (табл. 2; рис- 4 и 5) показали, что у иммунизированных ТВ мышей кластогенный эффект ЦФ достоверно снижен в течение 15 суток (с 10х до 25х суток после иммунизации), а у крыс - в течение 20 суток. Корреляционный анализ показал, что между количеством онтогенетических нарушений в клетках костного мозга и длительностью сна у мышей наблюдался высокий уровень обратной корреляции г=-о,97 (р<о,ои, а у крыс -

г=-0,93 <р<0,С>1).

Регрессионный анализ показал, что между двумя этими параметрами существует связь, выражающаяся

УраВНОНИОМ:У=38,7-0,71Х (МЫШИ) И У=52,13-0,73 (крысы), где У

число клеток с цитогенетическими нарушениями ("/.) в костном мозге грызунов, а х длительность сна, индуцируемого гексеналом (мин). Уто означает, что одним из механизмов антикластогенного эффекта ТВ (при действии промуталенов) является ингибирование активности цигохрома Р-450-В результате образуется меньше метаболитов, обладающих кластогеннои активностью.

Таблица 2,

Цитогенетическш нарушения в костном мозге крыс и мышей, индуцируемые ЦФ, и длительность сна, вызываемая гексеналом

Бремя после иммунизации, сутки Количе< ХА С/, с 2ТВ0 МЯ И эт контроля) Длительное у. от контре гь сна, )ЛЯ

крысы мьши крысы МЫШИ

5 94,5 88,8 109,5 91 ,2

1 о 63,0* 61 ,0* 1 31 ,9»« 130,*

15 44,2* 44,0* 173,1* 148,4м

£0 49,7* 53,4* 177,5* 121 ,9*

¿:5 63, О* 72,6* 134,5* 118,7*

зо 70,6* 79,8 129,0* 92,7

33 97,5 — 103,4

Примечание:* р<и,иь по сравнению с положительным контролем;

- не исследовано

о -1-1-1-;-1-

5 10 15 20 25 30 Время, суген

Рис. 4 Влияние иммунизации мышей ТВ на кластогенный эффект цнклофосфана и длительность сна, вызываемого гексенаюм

15 _ 20 Время, сутки

Рис. 5 Влияние иммунизации крыс ТВ на кластогенный эффект циклофосфана и длительность сна, вызываемого гексенаюм

Л - длительность сна В - цнтогенетический эффект

Изучение влияния иммунизации крыс ТВ на генотоксический »Мюкт N -метил-^-нитро-м-нитрозогуанидина (МННГ), канцерогена и мутагена прямого действия было проведено в Институте физиологии питания (Карлсруэ, Германия) под руководством Prof. Dr. b.l. pcjui-zobe-i. 5 крыс-самцов линии СД были иммунизированы ТВ- Через 12 сут с помощью протеаз были получены клетки кишечника. Контролем служили клетки кишечника 5 интзктных крыс- Клетки инкубировались в течение 30 мин с МННГ, а затем подвергались микршельэлектрофорезу, и повреждения ДНК изучали с помощью метода comet assay. Основным критерием повреждения ДНК является длина ее миграции. От каждого животного изучали по 202 клетки-Изучались следующие группы клеток: 1)интактный контроль, 2)иммунизированные, 3)контроль+МННГ, 4)иммунизировэнные+МННГ-

Длина миграции ДНК, выраженная в специальных единицах (image tu 111 ) была равна, соответственно , rio группам: 22,2+1,2, 18,-111.3, 120,0+3,3 и 55,2+6,9- Разница между первыми двумя группами достоверна (снижение длины миграции ДНК у иммунизированных крыс ниже по сравнению с неиммунизированными на I7,i"/., р<0,05). Повреждение ДНК клеток иммунизированных крыс под действием канцерогена было достоверно снижено по сравнению с неиммунизированными на 57,2у.-, (р<0,01). Это показывает, что ДНК клеток иммунизированных крыс достоверно более резистентна к генотоксическому действию МННГ.

Поскольку у всех видов изученных грызунов, иммунизированных ТВ, наблюдался антикластогенный эффект при действии как промутагенов (ЦФ, адрибластин, бензидин и др.), так и мутагенов прямого действия (тиоТЭФ, N-нитрозометилмочевина), то это может быть снизано с влиянием ТВ на механизмы репарации ДНК (Ramei, 1991. i. в пользу этого предположения свидетельствует прямая заии: .-.мость между выраженностью иммунитета и репативной активностью ДНК (Ильинских, 1990; Ber-tim et ai-, 1990, 1994).

При иммунизации крыс вакциной БВД в печени достоверно возрастает активность антиокислительных ферментов каталазы и супероксиддисмутазы (СОД) (Матэ, 1980), которые обладают выраженной антиоксидантной и антикластогенной активностью (Singh

et al., 1989; Larramendy et al., 1989). СОВМвСТНО С Д-б-H- М-

Симоняном была изучена активность этих ферментов в печени

иммунизированных ТВ крыс на 15е сутки. Эксперимент был проведен два раза. В первом эксперименте было использовано 15 иммунизированных и 15 неиммунизированных крыс, во втором - по 10 в каждой груше. Активность СОД определяли в цитозольной фракции печени по степени ингибирования процесса образования формазана (гиггиыли et а1., 1972). Активность каталззы определялась спектрофотометрически по степени расщепления пе[окиси водорода (дье1. 1974). Активность ферментов определяли в расчете на I мг белка, содержание которого определяли по Лоури.

Результаты экспериментов показали достоверное возрастание активности обоих ферментов в организме иммунизированных ТВ крыс по сравнению с неиммунизировзнными (в 1 эксперимепге возрастание активности СОД было равно 30"/-, каталазы - 21'/., во 11 - 34'/. и 2Сл, во всех случаях р<0,05).

Возможными механизмами антиклэстогенеза у иммунизированных ТВ животных могут быть возрастание резистентности ЛИК клеток к действию мутагенов и канцерогенов и повышение активности ферментов каталазы и СОД, а также ингибировлние активности цитохрома Р-450. При действии на организм грызунов промутагенов антикластогенныя эффект связан со всеми вышеотмеченяыми механизмами, а при действии генотоксикантов прямого действия -только с первыми двумя мёханизмами.

1.3- Влияние ТВ на цитогенотический эффект ионизирупцоя радиации

Известно, что микробные и грибковые полисахариды, а также микробные эндотоксины повышают радиорезистентность животных и одновременно снижают мутагенное действие радиации (вип^д. 19вз; Шубик, 1986). Исходя из этих предпосылок, было изучено влияние ТВ на кластогенныя эффект рентгеновского излучения- Эксперименты были проведены на 85 самцах крыс линии Вистар, 40 из которых иммунизировались ТВ за 15 суток до облучения. Контролем служили 40 неиммунизированных крыс, которых облучали в тех же дозах. Клетки костного мозга 5 крыс использовали для изу чопия уровня спонтанных ХА-

Животных облучали однократно в дозах 0,5 , 1.0 , 2,о и 4,о Гр однократно на аппарате РУМ-17 при напряжении 18П кВ. сило тока

10 мА. с использованием фильтров 0,5 мм си+1,о А1, и фокусным расстоянием 4о см. Клетки костного мозга изучали через 3 ч после облучения-

Результаты экспериментов (табл. 3) показывают, что у иммунизированных крыс, облученных дозой 0,5 Гр, уровень миолокариоцитов с ХА достоверно снижался на 36,Г/., а при действии дозы в 1,0 Гр - на 27,6'/- по сравнению с сответствующим контролем.

У иммунизированных крыс, облученных в дозах 2 и 4 Гр наблюдалось недостоверное снижение числа клеток с ХА и различных типов щтл о нетиче с к их нарушения (хроматидных и хромосомных разрывов).

С возрастанием дозы радиации число нарушений у иммунизированных крыс на I исследованную клетку увеличилось с 0,1 до 2.33, а у иммунизированных - с 0,05 до 1,55-

Таблица 3.

Влияние ГВ на цитоцрнэтические нарушения, индуцируемые рентгеновским облучением в мивлокариоцитах крыс

N группы ТВ Доза облучения крыс Гр Число аберрантных клеток,"/. Число наруше ний на иссл. клетку

1 г + о,з 6,3+1,о 5,3+0,6» 0,1 0,05

) - 1,0 •1 + 19,2 + 1 ,0 13,9+0,9* О,23 0,16

\з - 2,0 + 30,3+1,6 аз,4+1,1 0,34 0,31

7 - 4,0 Й ► 48,8+1,9 43,4+1,6 2,33 1 ,53

Ы ннтактныэ - О,8+0,2 0,008

Примечание: * достоверное отличие от соответствующего контроля

1.4. Влияние ТВ на кластогенный эффект ^Х1 в соматических клетках крыс Среди наиболее опасных радионуклидов важное место занимает 131I, способный индуцировать злокачественные новообразования щитовидной железы у человека и лабораторных животных (Василенко, 1988). Этот изотоп обладает также выраженной кластогенной активностью (Монахов, 1988).

Было изучено влияние иммунизации крыс ТВ на кластогенный

гот

эффект I. Эксперименты были проведаны на крысах линии Вистар, 12 из которых иммунизировали ТВ за 15 суток до введения изотопа, а 12 получили только изотоп (однократно, внутрижелудочно в дозе

з,7 кБк/г). Крыс забивали через I и 8 суток после введения радионуклида, так как максимальный кластопзнный эффект изотопа отмечается через I сутки после введения, а время его полураспада равно 8 суткам. В костном мозге 5 крыс изучали уровень спонтанных

и.

Результаты экспериментов показали. что радионуклид индуцировал в костном мозге крыс 20,9+1.0-/. клеток с ХА через I сутки после введения, а через 8 суток - 8,6+1,0"/-. В костном мозге иммуизированных крыс радионуклид индуцировал достоверно меньшее количество клеток с ХА на'36,4"/. и 61,6'/- через I и 8 суток, соответственно. Количество цитогенетических нарушений на клетку было в 2 раза меньше у иммунизированных крыс. Интеросон тот факт, что иммунизация крыс ТВ снижала цитогенетичеекия эЭДекг радионуклида через 8 суток после введения более эффективно, чем через I сутки. Видимо,это связано с ускорением выведения радионуклида из организма крыс под действием ТВ. так как некоторые живые вакцины обладают таким свойством (Шубин, 1083; Шальнов и др., 1983).

1.6 Влияние иммунизации крыс ТВ на сочетанное действие физических и химических факторов в половых и соматических клетках На 65 крысах-самцах .линии Вистар было изучено влияние иммунизации крыс ТВ на кластогенный эффект сочетанного действия рентгеновского излучения и хлоропрена (I эксперимент) или ЦФ (и

- гч -

эксперимент). На 15е сутки после иммунизации ТВ крысам однократно в/б вводили хлоропрен (500 мг/кг) или ЦФ (25 мг/кг). Через сутки после этого крыс облучали в дозах 0,5 Гр (i эксперимент) или I Гр (и эксперимент) на аппарате РУМ-17 (напряжение 180 кВ, сила тока 10 мА. фильтры 0,5 ммси+1,0 мм Ai, фокусное расстояние 40 см, мощность дозы 0,35 Гр/мин). Животных забивали через 3 часа после облучения. В каждой группе было по 5 крыс-Хлоропрен был выбран в качестве мутагена потому, что он является одним из загрязнителей сроду и обладает радиомиметическим свойством (Зильфян, Папоян, liWi). ЦФ широко используется в химиотерапии злокачественных ноьииоразованкй, и часто химиотерапия сочетается с лучевой.

Анализ представленных в табл. 4 данных показывает, что число клотик с ХА в соматических и половых клетках крыс, иммунизированных ТВ, при действии всех сочетаний мутагенов достоверно снижается.

Таблица 4.

•юомныв нарушения в миелокзриоцитах и сперматогониях крыс, иммунизированных" ТВ, при сочетанном действии физических и химических факторов.

Группа крыс Количество клеток с ХА,'/.

миелокариоциты сперматогонии

1.Облучение 8,2+1,0 2,1+0,5

г. хп , 8,3+0,9 1,6+0,3

3. ХП+облучение 20,7+1,8 4,8+0,5

4. ТВ+облучение 4,8+0,9* 0,8+0,2*

S. ТЕНХП 4,0+0,7* 0,6+0,2*

б. ТВ+облуч- +ХП 10,8 + 1 ,1* 1 ,5+1 ,1 »1

1 . С<5лучение 18,0 + 1 ,1 н.и.

а. ЦФ 34,0 + 1 ,8 "

3. Облуч.+Ц4> 63,0+2,О "

4. ТВ+облуч. 13.5+1,0* "

5. ТВ+ЦФ 20,0+1 ,1« "

6. ТВ+облуч . -»ЦФ 41,3+1,5*

7. ннтактньв О,8+0,2 0,1 +<0,1

* - достоверное отличие от соответствующего контроля н.и. - не исследовано.

1-7. Влияние иммунизаищ мышей ТВ на кластогенный эффект вируса кори Изучено влияние ТВ на кластогенный эффект вируса кори (вакцинный штамм Л-16),который вводили в/б 10 иммунизированным (на 15е сутки после иммунизации) и 10 неиммуяизированным мышам. 5 интактных мышей служили контролем для определения спонтанных ХА в клетках костного мозга-

Согласно полученным результатам, на 7е сутки после введения вирусов кори уровень клеток костного мозга с ХА достоверно возрос по сравнению с интактным контролем (32,2+1,4'/- и 2,8+0,4"/., соответственно). При этом число клеток со структурными нарушениями хромосом было равно 18.2+1, ху., а с численными нарушениями хромосом - 14,0+1,У иммунизированных ТВ мышей вирус индуцировал меньшее количество клеток костного мозга с нарушениями в структуре хромосом на 45"/. (10,0+0,9ч. р'0,01), с нарушениями в числе хромосом на 28,6"/- (10,1+0,9"/.. р:0,05) и с нарушениями всех типов на 37,3г. (20,2+0,8"/.. р<0,01).

Известно, что одним из основных механизмов мутагенного действия вирусов является ингибпропанне репарзтивных механизмов клеток и повышение уровня свободнорадикальных процессовв клетках

(ЛаиеЬг еЬ а1., 1991). КЛаСТОГвННЫЙ ЭффвКТ ВИРУСОВ МОЖНО СНИЗИТЬ

с помощью антиоксидантов (Ильинских и др, 1986: 1989: оеМога ^ а1., 1991). Поэтому антикластогенный эффект, подученный нами в данной серии экспериментов, можно об'яснить повышением ¡.езистонтности ДНК клеток иммунизированных ТВ мышея к действию генотоксикантов, а также возрастанием активности СОД и каталузы, которые обладают антирэдикальной активностью. Аналогичные данные были получены при изучении действия полисахаридов грибкового и микробного происхождения на кластогенный эффект вирусов кори, гриппа и полиомиелита (Фролов и др., 1990).

Независимо от природы кластогенного агента (химической, физической, биологической), иммунизация грызунов (крыс, мышей, морских свинок и серых хомячков) ТВ за 15 суток до введения мутагенов достоверно снижает их кластогенный эффект в половых и соматических клетках- Универсальный антикластогенный э(ЭД)ект ассоциируется с возрастанием резистентности ДНК клеток к действию

го.ыт. 'ксикантоь. влиянием на процесс метаболической активации ксеш 'бинтиков и возрастанием активности ферментов каталазы и СОД в орханизме иммунизированных ГВ грызунов. Убитая ТВ также обладает антикласты-енным свойством. Действие трех изученных антимутагенов усиливается у иммунизированных ГВ крыс-

Глава 11

Влияние ГВ на химический канцерогенез

Дли модификации химического канцерогенеза в экспериментах использовались бруцеллезная вакцина и БЦШ (Матэ, 1980;Волегов, iv«7; dd^orti i't ¿»i., 19q6), а также некоторые штаммы убитых микробов и полисахариды микробного и грибкового происхождения

(иг.»«» ttt al., 1991; Ogawa et al., 1991; Nio et «1-, 1995). С

помощью полисахаридов, полученных из N. rubra, была проведена профилактика рака легкого у рабочих, занятых на производстве с ВЫСОКИМ онкологическим риском (Yamakxdo et al., 1991).

Целью экспериментов, поставленных на крысах и мышах, было изучение влияния вакцинации и ревакцинации ТВ на стадии каацеригенеза, индуцированного 7,Г2-диметилбенз(а)антраценом (ДМЬА). Это самый сильный канцероген из группы полициклических ароматических углеводородов с выраженной мутагенной активностью

{Г«>|,1ч.. 19П9 ) .

Крысы-самцы линии Вистар были разделены на 4 группы по 30 в каи-о, л. Крысы i группы служили положительным контролем и получили едцокрапю подкожно по I мг ДМБА. Крыс ч и ш групп иммунизировали ТВ, а через 15 суток им подкожно вводили ДМБА. Кры;. ni группы через 3 месяца ревакцинировали ТВ. Крысы iv группы, получив ДМБА, через 3 суток иммунизировались ТВ. Эта группа была предназначена для изучения влияния ТВ на стадию промоции канцерогенеза. Для изучения влияния модификаторов на oí i. промоции химического канцерогенеза их вводят через 5-7 дней JJL еле конечного введения бла'стомогена (Owivedi et al., 1989; 1997.; hice et al., 1995). ИММУННЬЮ реаКЦИИ И ПрОТИВООПуХОЛеВЭЯ

резистентность у крыс начинают проявляться через 5 суток после их иммунизации ТВ (Зильфян, Нерсесяа, Г986). Поэтому иммунизация крыс: через 3 суток после введения ДМБА будет влиять на стадию пром'.ции канцерогенеза. ТО крыс контрольной группы получили

подкожно только растворитель канцерогена. Все крысы забивались эфирным наркозом спустя 6,5 мес после введения ДМБА-Выход опухолей рассчитывали с использованием эффективного числа животных, т.е. тех животных, которые выжили до момента появления первых опухолей.

Результаты экспериментов представлены в таблице 7 и показывают, что иммунизация крыс ТВ до введения канцерогена достоверно снижает выход опухолей (со 100л. в кошроле до 53, вх), удлиняет латентный период образования и их среднюю массу (индекс торможения роста опухолей 40,2'/.).Выход опухолей у крыс т группы был равен 46,4"/., индекс торможения - 60,6ч, а латентный период образования опухолей достоверно превышал таковой крыс контрольной группы на 35.97-. Сравнение показателей крыс ш 1руппы со и показало, что при ревакцинации не изменялись достоверно ни выход опухолей, ни латентный период их образования. Однако масса опухолей была достоверно меньше на 34,2"/-. У крыс IV группы выход опухолей был достоверно меньшим, чем в положительном контроле. Латентный период был удлинен достоверно на по сравнению с

контролем, а индекс торможения был равен 21,2"/- (ГП.05 в обоих случаях).

Таблица 5.

Влияние ТВ на канцерогенез, индуцируемый ДМ ВА у крыс

Группы крыс Эффективное Выход опу- Латентный Масса опухо-

число холей, У. период, сут лей, Г

1. ДМБА 2© гес 1 оог> 37 ,3+2,1 1 1 К>,«

2. ТР<ЛМБА 28 15СЗЗ,вЭ« 48,5+2,0* 7,1 »0,0*

3. ТВ+ДМБА+ТВ 28 13С46,4Г>»| 50.7 + ?:,4м 4.740,7*

4. ДМБА+ТВ 27 21С 77 ,83 * 44,4*2.О* 9.4-0,5*

5. Контроль» 1 0 - -

Примечание: * - достоверное отличие от положительного контроля

Показано, что наиболее выраженный антиканцерогенный эффект был получен у крыс ш группы, которых иммунизировали ТВ до введения ДМБА и через 3 месяца ревакцинировали. У крыс IV группы, которых иммунизировали ТВ через 3 суток после введения ДМБА (воздействие на стадию промоции канцерогенеза) выход опухолей.

л'.то/й.чый ¡¡ершд образования и масса новообразований были снижены по с.^аыкмию с положительным контролем- Это свидетельствует о том. что ТВ можот влиять также на стадию промоции канцерогенеза. И:>во;гпю. что стадия промоции химического канцерогенеза связана с аии!енпт/чоскими изменениями клеток, способствующими превращению инициированных канцерогеном (с генетическими изменениями) клеток В оцудоловыо (ХудОлей, IS87;Lewis, Adams, 1487). В ЭТОМ ЛрОЦвССв важную роль играют свободные радикалы кислорода («mes, 1983; Ct.-i.it и. rvov)., и антирадикальные фермента каталаза и СОД могут ЦОЦЧЬ.ЪГП, Промоцию химического канцерогенеза (Kens 1er, J 983 ; li-wi'.. 1907).

Аналогичный эксперимент был поставлен на беспородных мылах самцах, которые были разделены на 4 группы, i группа (25 w.'jujt'ii ) с.лужила положительным контролем и им вводили подкожно по 0,5 Mi ДМБА. и гругша (25 мышей) иммунизировалась ТВ и им через 1Ь суток вводили ДМБА. Мышам ш группы (20) вводили ДМБА,а через 3 суток их иммунизировали ТВ. Через 3 суток, в пориод максимального кластогенного действия ДМБА, по 5 мышей из г и и групп забили, и из костного мозга приготовили препараты для изучения МЯ в эритроцитах. Мышам iv i-руллы (20) подкожно вводили рзстворитсль канцерогена (негативный контроль). 5 мышей из этой группы были забиты через 3 дня для изучения уровня спонтанных МЯ. Ьсох остальных мышей забили через 6 мое после введения канцорогона. Гезультаты экспериментов представлены в таблице 6-

Таблица 6.

Влияние ТВ на канцерогенез, индуцированный ДМБА у мышей

L'py.:iibi Эффективное Выход опухо- Латентный Масса опухо-

ML;.,. А ЧИСЛО лей период. с,ут лей, г

] . ¿¡мг-А 16 1 6СЮО) 48,£+2,3 2,0+0,3

г. ТВ .ДМБА 18 ЮС S3,6)« 54,9+2,0* 1 ,1<0,2«

3. ДМВА+ТВ 16 1 2С 75 /О 45,8+2,6 1 ,4+0,2*

4. Контроль 1S - - -

Примечание: * - достоверное отличие от положительного контроля

Как и у крыс, иммунизация мышея ТВ за 15 суток до введения ДМБА приводит к достоверному снижению выхода опухолей, их массы, а также к удлинению латентного периода их образования . Иммунизация мышей через 3 суток после введения ДМБА (действие ТВ на стадию промоции канцзрогенеза) недостоверно снизила выход опухолей, не влияла достоверно на латентный период, но снижала достоверно массу новообразования (индекс торможения роста опухолей по сравнению с контролем был равен 30"/.). У мышей I группы ДМБА индуцировал 1,24+; 0,2'/. эритроцитов с МЯ в костном мозге, у мышея и группы - 0,710,1%. У интактных мышей уровень спонтанных мутаций был равен 0,22у.. Таким образом, между выходом опухолей и количеством МЯ у мышей I и II групп наблюдается параллелизм: снижение выхода опухолей в 1,9 раз, а количества МЯ - в 1,8 раз.

Изучено влияние иммунизации крыс-самок линии Вистар на канцерогенез, индуцированный ы-нитрозометалмочевиноя (НИМ) в молочных железах. Это соединение относится к группе нитрозосоединения, канцерогенно для всех видов животных, на которых испытывалось и обладает выраженной муташнной активностью (1АРС, 1986;БепТок, 1499>. 90 КрЫС бЫЛИ раЗДвЛвНЫ На 3 рЯВНЫв группы. I группе НММ вводили в каждую молочную железу по I мг, крысам и группы НММ вводили на 15е сутки после иммунизации их ТВ. Крысам III группы (контроль) в молочные железы вводили физраствор. Животные были забиты через 7 месяцев после введения канцерогена -

Таблица 7.

Влияние ТВ на канцерогенез, индуцируемый м-нитрозометилмочевиноя (НММ) в молочных железах крыс

Группы крыс Эффективное число Выход опухолей Латентный период,сут Число опухолей на крысу

1 . НММ 29 17(58,65 72,6+2,3 1,62+0,29

г. тв+нмм зо 9(30,О)* 88,2+2,6 0,76+0.11

3. Контроль 20 — —

*ркОД)Ь по сравнению с группой крыс, подучивших 1ШМ

Напученные результаты представлены в табл. 7 и показывают, что 14 I I рупш из 29 выживших крыс опухоли были обнаружены у 17 (58,(г.). Общее число опухолей - 47, среднее число опухолей на крысу 1,62, средний латентный период - 72,6 суток- У крыс и труппы опухоли были обнаружены у 9 из 30 (30"/.) со средним латентным периодом 88,2 суток- Общее число опухолей было равно 23. а сроднее на крысу- 0.7. Разница со всеми показателями I группы достоверна. У крыс контрольной группы опухоли молочных желпз ае были обнаружены.

Изучено влияние иммунизации мышей ТВ на канцерогенез, иидуцк1| * ¿ванный в легких у; юта и ом (этилкарбаматом)- Этот химический агент канцерогенен для грызунов при любых методах ш>едонии ь организм и обладает выраженной кластогенной

УКЧНЫШОЧ'Ш ПАГЧС, 1906; бьпТох, 1909). БвСПОрОДНЫв МЫШИ-СаМЦЫ

были рчзделены на 3 группы- I группе (20 мышей) был введен уретан (1 гчи). и группе (40) уретан был введен на 15 сутки после иммунизации их ТВ- т группа мышея (10) служила контролем и получила только растворитель канцерогена - физраствор. Все живочные были забиты через 6,5 мес после начала эксперимента.

Показано (табл. 8), что опухоли легких были обнаружены у 15 из 38 мышея I группы (83,3-/-), среднее число опухолей на животное •1,8- У мышеи п группы опухоли были отмечены у 18 из 38 (47,4*/.) со с]одним числом на мышь 2,9 (р<0,01 по сравнению с обоими параметрами мышей I группы). В контроле опухоли легких не были обнаружены.

Таблица 8.

Влияние ТВ на канцерогенез, индуцированный уротаном в легких мышей

1'рупии мышей Эффективное Выход опухолей Число опухолей на

число (*) мышь

1 . Уретан 18 13 С83,35 4,80+0,44

'< 11' У^'-'Т <> н 38 18 (47,41* 2,90+0,31 *

"з. Контроль ю 0 о

* рсо.иь по сравнению с показателями . руппы 1.

Таким образом, при предварительной иммунизации мышея ТВ наблюдается достоверное снижение выхода опухолей и их общего количества.

Известно, что воздействие некоторых микробов на организм животных с уже сформировавшимися опухолями может приводить к различным результатам (Матэ, 1980; Волегов, 1987). Было изучено влияние иммунизации крыс ГВ на рост ДМБА-индуцированных опухолей.

Эксперименты были проведены на 100 крысах линии Вистар. Для индукции опухолей им подкожно вводили по 1мг ДМБА. На 60е сутки после введения канцорогена прощупывались узелки размером около 0.5 см. Животные были разделены на 2 части (i и ii серия экспериментов). В х серии (60 крыс) влияние ТВ на опухолевый рост изучали по средней продолжительности жизни (СШ), во второй (40 крыс) - по индексу торможения (ИТ) роста опухолей через 5 мес после введения ДМБА- Животные каждой серии экспериментов были разделены на 2 равные группы: одну группу иммунизировали ТВ, другую - нет.

Результаты, полученные в i серии экспериментов, показали (табл. 9), что все невакцинированные крысы пали в течение 170 суток, а среди иммунизированных в течение 263 суток после введения ДМБА пали толька 23 крысы- СШ вакцинированных крыс (186,9+8,4 сут) была достоверно длиннее (р-0,01), чем невакцинмрованных (145,2+5,7 сут). Из оставшихся в живых 7 крыс (23"/.) после их естественной гибели при вскрытии опухоли не были обнаружены. Анализ. данных показал, что выживаемость вакцинированных крыс статистически достоверно выше. чем новакцинировэнных (р<0,05). А.И- Волегов (1987) . исследуя влияние иммунизации крыс с опухолями, индуцированными ДМВА, БЦШ, установил,что индекс Бредекка (отношение количества лимфоцитов к количеству палочко-ядерных лейкоцитов) играет прогностическое значение для оценки резистентности организма к росту опухоли-Снижение этого индекса или отсутствие изменений поело иммунизации опухоленосителей по отношению к показателям до иммунизации свидетельствует об усилении противоопухолевой резистентности организма, а увеличение индекса - о снижении резистентности. Нами были изучены эти показатели у крыс за сутки до их иммунизации ТВ и через 15 суток после- Результаты исследований показали, что

индекс Бродекка у опухоленосителей до иммунизации равен 10,2+1,2, а поело иммунизации - 16,2+1,6- Отношение I показателя ко н было раыю 0.62, что свидетельствует о снижении этого показателя и по данным Волегова (1987), о повышении противоопухолевой резистентности организма крыс при иммунизации их ТВ-

Таблица 9.

Влияние ТВ на среднюю продолюглзльность жизни крыс с ДМБА-индуцированными опухолями

Группы Число крыс Сроки гибели, era Число крыс с

крыс: сутки сутки регрессией опухоли

1 . Л1-ША ЗО 83-1 70 146,£+3,7 0

г. Д)И;А<ТВ ЗО 127-236 186,9+8,4* 7*

*р<и,0Ь по сравнению с контролем"

Во ii серии экспериментов .влияние ТВ на опухолевый рост оценивали по ИГ спустя 150 сут после введения ДМБА- Результаты показали (табл. 10), что у всех невакданированных крыс были обнаружены опухоли, средняя масса которых была равна 59,0+1,2 г. После забивки 15 оставшихся в живых вакцинированных крыс опухоли были ибнаружены только у 10, средняя масса которых составила ЗО.о.ь.г г. (р,<0,05).

Таблица ГО.

Влияние ТВ на массу ДМБА-индуцированных опухолей у крыс через 150 суток после введения канцерогена

Группа крыс Число крыс Средняя масса Г Индекс торможения У. Число крыс с регресс, опухолей

1 . ДМ1.;А 20 59,2+1,2 - о

г. ДМБА+ТВ 20 30,0+5,3* 49,6 5

*ркО,ОЬ по сравнению с контролем

Известно, что все канцарш. ка обладают сильным иммунодепрессивным свойством. В про» «э дальнейшего развшпя

опухолей угнетение иммунного статуса организма усугубляется (Клгьег, 1991). Было показано, что применение неспецифических стимуляторов иммунитета на ранних стадиях развития опухоли или до применения канцерогенов приводит к повышению функциональной активности иммунокомдатентной системы, восстановлению реактивности и .вследствие этого, к возрастанию противоопухолевой резистентности организма (Волегов,1987; Анисимов и др., 1992; СИ^ага е! а1.,19В2). ЭТИМ ОбСТОЯТСЛЬСТВОМ МОЖНО Об'ЯСНИТЬ

полученные в данной серии экспериментов результаты, так как ТВ относится к неспецифическим стимуляторам иммунитета (Олсуфьев и др., 1976).

Было изучено влияние предварительной иммунизации крыс ТВ на кластогенный и канцерогенный эффект м-нитрозодиметиламина (НДМА).Этот агент относится к группе нитрозосоединений, канцерогенен для всех видов животных, на которых испытывался, обладает высокой токсичностью и выраженной клантогенноя активностью (ХАИС. 1986; БепГох, 1999; ХуДОЛОЙ, 1994). ЗГ) СЙМЦОВ крыс линии Вистар были иммунизированы ТВ- Через 15 суток им и 35 интактным крысам в/ж вводили в течение 10 сут по 10 мг/кг НДМА-Через 24 ч после конечного введения 5 иммунизированных и 5 неиммунизированных крыс забивали и изучали ХА в клетках костного мозга.

Таблица II.

Влияние иммунизации крыс ТВ на канцерогенез, индуцированный и-нитрозодиметаламином в почках крыс

Группа крыс Эффективное | число Выход опухолей | 7. Число клеток костного мозга с ХА

1. НДМА 23 19 С 82,63 12,7+0,9

2. ТВ+НДМА 28 И С39,23* 6,7+0,7*

3. Контроль 13 о 0,8+0.4

«р<0,Ь по сравнению с показателями крыс, получивших

только канцероген

Анализ подученных результатов показал, что НДМА ин купировал ъ миелокариицитах иммунизированных крыс 6,7+0,4"/- клеток с ХА, что достоверно меньше в 1,9 раз, чем у неиммунизированных (12,7(0,9"/.)• Через 8 мое остальные животные были забиты- Опухоли почек среди неиммунизированных были обнаружены у 19 из 23 (82,а-), а среда иммунизированных ТВ - только у II из 28 (39,3х)(р<0,г)1).

Таким образом, предварительная иммунизация крыс ТВ снижает ¡слисилшшыя эффект НДМА в 1,9 раз, а его канцерогенный эффект -в 1,8. раз.

С целью изучения возможного антиканцерогенного действия УТВ 10 крысам-самцам линии Вистар ввели внутрибрюшинно по 0,Ь млрд УТВ. Через сутки этим крысам, а также 10 интактным животным был введен подкожно 7,12-ДМБА (I мг)-Все животные были забиты через 5 мосниов-

Иолученные результаты показали, что у всех 10 крыс контрольной группы были обнаружены опухоли в подкожной клетчатке. CfojtH крыс, получивших УТВ до введения канцерогена, одухоли были обнаружены у 6 из 10 (разница с контролем недостоверна, р>0,05). Средний латентный период образования опухолей у крыс этой группы был равен 46,8 суток и достоверно превышал этот показатель в контроле (37,1 суток, р<0,05). Средняя масса опухолей у крыс контрольной группы была равна 5,2+0,7 г, а у крыс, получивших УТВ - :-:/о(0,6 г (р<0,05, индекс торможения опухолевого роста 53,1*/-)-Таким образом, УТВ обладает антиканцерогенной активностью, которая, на наш взгляд, связана с ее антикластогенным свойством.

Подученные результаты можно об'яснить антикластогенной aiciиыюстыо ТВ, приводящей к повышению резистентности ДНК клеток к действию гвиотокстантов при иммунизации. Между антиканцерогенным и антикластогенным свойством, а также между резистентностью ДНК к генотоксическому действию канцерогенов и ^юзиспентносгью организма к возникновению опухолей существует выраженная положительная корелляция (Wattenberg, 1996; Wei et

dl., 1996; Tomatis et al., 1997). ВЭЖНОе ЗНЭЧеНИе В

ннтакннцорогенном эффекте ТВ может иметь также снижение активности системы цитохрома Р-450 и возрастание активности СОД и к:-лэл'!зы- Показано, что факторы, снижающие акиивность системы

цитохрома Р-4Ь0, относятся к антиканцорогенам <T*i.«i.»y, 199<ь; wattenberg, 1996). Активность СОД и катзлазы находятся в обратной зависимости от чувствительности клеток организма к действию мутагенов И канцерогенов (Werst, Gould, 19В6; Ci-riitti, 1992; й№5, 1983, 1995).

Таким образом, при, изучении влияния ТВ на химический канцерогенез можно сдолать следующее заключение- ТВ оказынаот антикластогенный и антиканцерогенный эффект при применении ее за 15 суток до введения химических агентов, влияя на стадии инициации и промоции канцерогенеза. При действии ТВ только на стадию промоции антиканцерогенный эффект сильнее выражен у крыс, чем у мышей- Во всех случаях, при действии ТВ на стадию инициации канцерогенеза между антиканцерогенным и антикластогенным эффектами наблюдался параллелизм- Наилучшие результаты были получены при иммунизации крыс ТВ до введения ДМБА с последующей ревакцинацией. Иммунизация крыс с уже возникшими опухолями,индуцированными ДМБА, достоверно снижает падеж животных, удлиняет их СПЖ-

Глава ni

Влияние ТВ на токсичность химических агентов Многие ксенобиотики нуждаются в метаболической экгивации для приобретения биологических свойств, включая мутагенность, канцероганяость и токсичность (Майорова, Худолея, 1886).Многочисленные исследования показали, что иммуномодуляторы микробного и грибкового происхождения могут ингибировать активность цитохрома Р-450, в результате чего часть введенною в организм ксенобиотика не будет мэтаболизирована с образованием биологически агрессивных реаюгантов. Такие данные имеются в отношении БВД и бруцеллезной вакцины (Матэ. 1880; remire <?t ai., 1984), коринебактерий <мпав, Scott, 1990), полисахаридов микробного И грибкового происхождения (Descotes. 1985¡ Gr if fits et al., 1995).

Нами было показано, что иммунизация грызунов ТВ приводит к снижению метаболической активации ксенобиотиков, и. вследствие этого, к снижению кластогенного эффекта химических агентов-

Изучено влияния иммунизации крыс ТВ на токсический эффект

ксенобиотиков- В I эксперименте на 126 крысах-самцах линии Вистар изучалось действие ЦФ (25 мг/кг, в/б, ежедневно, 4 раза), который начинали вводить через 15 суток после иммунизации крыс ТВ-Контролем служили неиммунизированные крысы, подучившие ЦФ. Токсичность ЦФ оценивали по падежу животных, массе тела, относительной массе селезенки (ОМС), количеству лейкоцитов в периферической крови- Кроме того, через сутки после конечного введения ЦФ в миелокариоцитах изучали ХА.

Результаты показали, что падеж среди неиммунизированных крыс составил 20"/.. а среди иммунизированных - только 5'<: (р.0,05). То^.'.-.ческоо действие ЦФ максимально проявлялось у неиммунизированных крыс в первые 5 суток после введения - ОМС умен1 шилась в 1,8 раза, а количество лейкоцитов - в 2 раза (в обоих случаях р:0,05). Эти показатели стали приближаться к показателям, полученным у интактных крыс, к 1Ьм суткам. У вакцинированных крыс на 5е сутки после введения ЦФ ОМС оставалась без изменений, а количество лейкоцитов недостоверно снизилось. Ко.адчество миолокариоцитов с ХА у невакцинированных крыс было равно 42,2+2,1'/-, а у иммунизированных - 28,0+0,8"/- (снижение по сравнению с контролем на 33,6"/., р<0,01). Вместе с этим, число цитогенетических нарушения на аберрантную клетку снизилось с 4 до Г,9. Таким образом, иммунизация крыс ТВ снижает токсическое и клаетогенное действие ЦФ в суммарной дозе 100 мг/кг-

Изучено влияние преиммунизации крыс ТВ на токсичность и клаоIогенность антрациклиновых антибиотиков: фарморубицина и адриоластина. Крысы иммунизировались ТВ за 15 суток до введения антибиотиков в дозах, эквивалентных ЛД50, и равным> соответственно. 7,4 мг/кг и 15,0 мг/кг. Контролем служили неьакцинированные крысы, которым антибиотики вводили в тех же дозах. Токсический эффект оценивали по падежу животных, ОМС и колу.оству лейкоцитов. Иммунизированных и неиммунизированных крыс заоиаали и исследовали на Зи, 13е, 20е и ЗОе сутки после введения антибиотиков. Уровни цитогенетических показателей (ХА) оценивали чо).оз сутки после введения препаратов.

}езультаты эксперимента с фарморубиданом (табл. 12) показали, что падеж среда неиммунизированных крыс составил 40,6"/., а С)оди иммунизированных - 6,7"/. (р'0,02). На Зи сутки после

введения фармарубицина контрольным крысам ОМС .уменьшилась на 43.2'/.. количество лейкоцитов - на 42.9"/. (р'-0,01 в обоих случаях). На 13е. 20е и ЗОе сутки ОМС не отличалась от этого показателя интактных крыс, а количество лейкоцитов достоверно превышало норму. Почти у всех ноиммунизированных крыс в брюшной полости была обнаружена кровянистая жидкость, образовавшаяся вследствие химического (асептического) перитонита, что характерно для действия антрэциклиновых антибиотиков. Кроме того, в брюшной полости наблюдались спайки, деформация и затвердение печени. У иммунизированных крыс достоверных изменений ОМС после введения антибиотика не наблюдалось. Количество лейкоцитов в крови иммунизированных крыс под действием антибиотика колебалось, однако во все сроки наблюдения этот показатель не снижался достоверно по сравнению с интактными животными. Перитонит у крыс этой группы протекал гораздо благоприятнее. чем у невакпинированных. что выражалось в достоверно меньшем количество жидкости в брюшной полости, меньшем количество спаок. Через мосяц после введения антибиотика у 68-8/. иммунизированных крыс перитонита не наблюдалось. Цитогенетические исследования показали, что у контрольных крыс антибиотик индуцировал 38.0+1.0* клеток с ХА и только 20,4+1.15: у иммунизированных через 24 ч после введения (р<0,01. снижение на 47.27.).

Аналогичные закономерности были обнаружены при изучении влияния ТВ на токсичность адрибластияа (табл. 12).

Изучалось влияние ТВ на токсичность 4 химических агошов -тиоТЭФт м-нитрозодиметиламина, Щ> и м-нитрозометилмочевины-Регистрировали только падеж животных. Препараты вводили животным в дозах, эквивалентных ДЦ50. Падеж среди неиммунизированных крыс был во всех случаях выше, чем среди иммунизированных (рО.оэ) (табл. 12).

Известно. что полисахариды микробного и грибкового происхождения снижают токсичность и повышают противоопухолевое действие химиопрепаратов (Соколова и др., 1987). В данной тории экспериментов изучено влияние УТВ на токсичность ряда химиопрепаратов. широко применяемых в .клинической онкологии по критерию падежа животных. УТВ вводили крысам в/б однократно за 24 ч до введения препаратов. В первом эксперименте использовали 1И> в

доз».) 200 мг/кг. Целью этого раздела исследований явилось определение оптимального количества УТВ, вводимой в дозах 10, Ь. .': и 0:5 млрд.

Таблица 12.

Влияние иммунизации крыс ТВ на острую токсичность химических агентов

Хим. аюнт Доза ТВ Число крыс Падеж СПЖ

мг/кг 7. сутки

1. Алрнбластин ю - 15 7(46,7) 6,2

16 1(6,3)* Ю,2*

f: нитрооодк- 22 - зо 27(90) 7,1

М< -1 ИЛ.1МИН 30 1 ЕЭС 63 , 33 * 12,4*

J.N■ннт риуоме- юо - 45 15(33,33 15,3

тилмочевина + 45 6(13,3)* 22,5*

'1 . 1ноТЭ<- 6 _ 20 15(75) в,2

20 7(35)* 14,6*

'.з. {.>рмору<5и- 15 „ 30 13(40,6) 1 0,5

li и и + 30 2(6, . 3* 31 ,5

ь. Ш- 150 _ 20 12(603 11 ,2

+ 20 7 (353 * 1 6,в*

*р<070ЕГпо сравнению с соответствующим контролем

Выявлено, что ЦФ вызывал 1007. гибель крыс в контрольная группа. Влияние УТВ в дозе 10 и 5 млрд на количество павших животных недостоверно. 2 млрд УТВ достоверно снижали гибель крыс до Р<8.8Ш.8>:.. а 0.-5 млрд - до 50-0+14,4/'. (р<0,05 в обоих случаи*).

Исследование УТВ (0,5 млрд) на токсичность тиоТЭФ (Э мг/кг) и адрибластина (ТО мг/кг), показало, что УТВ достоверно снижает токсичность обоих химиолрепаратов до 27.7+10,3"/. (71,4+12,0"/. в

контроле- р<0г02) и 76-5+10.4"/. (ЮСГ/. в контроле, р 0.05).

Для выяснения вопроса о возможной токсичности самой УТВ, которая вводилась крысам в/0 15 раз в количестве ?. млрд через день, наблюдения велись в течение месяца после коночного введения УТВ. Оказалось, что у крыс- получивших УТВ, не наблюдалось достоверных изменений массы тела, ОМС. количества лейкоцитов, массы печени и гибели животных. Следовательно, УТВ в данной дозе не обладает токсичностью и кластогенностью, и в то же время снижает токсичность и мутагенность ряда химиопропаратоа.

Показано, что многие полисахариды грибкового и микробного происхождения способны защищать кроветворную систему животных при введении химиопрепаратов в токсических дозах и одновременно усиливать ИХ противоопухолевое дэйствио (сыидга е1, <а1., 1702). Было изучено влияния ТВ и УТВ на кроветворную систему крыс при действии Щ> (50 мг/кг) и тиоТЭФ (5 мг/кг). Препараты вводились крысам через 15 суток после иммунизации их ТВ или через 24 ч после введения УТВ. Через 72 ч после введения химиопроиэрнтов у крыс определялось количество миелокариоцитов в бедренной кости, количество лвршощгов и эритроцитов в периферической крови.

Показано, что цитостатики достоверно снижают количество миелокариоцитов на 48"/. (Цф) и 56"/. (тиоТЭФ) у крыс контрольных групп- У иммунизированных ТВ крыс и животных, подучивших УТВ, количество клеток костного "Мозга недостоверно увеличивалось (106/. и 102"/.. соответственно). Введение ЦФ и тиоТЭФ имунизированным крысам снизило количество миелокариоцитов по сравнению с интактными лишь на 16"/. (р>0,05) и 28х (р-0,05). соопютаьошю. Аналогичные данные у крыс, подучивших УТВ. бы.™ равны 18"/. (р-0.05) и'337. (р:0.05). Как при действии ТВ, так и при действии УТВ. эти параметры достоверно отличаются от данных, полученных у крыс контрольной группы. При исследовании количества лейкоцит» и эритроцитов в крови было обнаружено, что ТВ и УТВ достоверно увеличивают" их количество у крыс, а введение цитостатиков на их фоне недостоверно снижало их количество.

Таким образом, показано, что иммунизация крыс ТВ и УТВ достоверно снижает токсический эффект всех изученных нами препаратов по сравнению с контролем. Причем снижение токсичности химиопрепаратов. нуждающихся в метаболической активации дл?

прииб^тения биологических свойств- более выражено, чем для препаратов прямого действия- Снижение токсичности ксенобиотиков, нуждающихся в метаболической активации, можно об'яснить снижением активности монооксигеназ печени и системы цитохрома Р-450 у иммунизированных и подучивших УТВ крыс, в результате чего часть введенного в организм ксенобиотика не метаболизирувтся и ВЫВОДИТСЯ В неизмененном вида ИЗ организма (Griffits et al., 19941. Огромное значение имеет также защита кроветворной системы организма крыс под действием ТВ и УТВ. Кроме того, как нами было показано. ТВ повышает резистентность ДНК к действию гентоксикантов, что также может играть роль в повышении устойчивости организма к воздействию экзогенных факторов.

Глава IV

Влияние ТВ на радиорезистентность крыс

Изностн. .. что многие живые и убитые микробы при введении в upi анизм животных в ощедедэнны© сроки до облучения повышают его радио!езистентность (Куна. 1Э89? Иванов- Мальцев, 1886; Блюм, 199(5).

Изучено влияние иммунизации крыс ТВ на их радиорезистентность. Исследования были проведены на 276 самцах беспородных крыс. Крысы иммунизьфовались ТВ накожно, и через 15 суток их подвергали общему однократному рентгеновскому облучению на аппарате РУМ-Г7 в дозах 6 Гр. 8 Гр и 10 Гр (ДД/50, ЛД/75 и ДЦ/Ш), соответственно). Изучено также влияние ТВ при 2-кратном облучении в дозе 2 Гр и через 15 суток - 6 Гр. Предварительное облучение крыс в малой дозе повышает их радиорезистентность при последующем облучении в высокой дозе (Кузин, 1986). Радиозащитное действие оценивали по общему состоянию животных, выживаемости в течение 30 суток после облучения и по содержанию лейкоцитов в пери.]*., лческой крови.

Результаты исследований показали (табл. 13), что при облучении крыс в дозе 6 Гр падеж в контрольной группе достигал 42,2'/., а СПЖ павших крыс 12,7+0-9 сут- У иммунизированных крыс эти показатели достоверно отличались от контроля : падеж - 10"/. и СП» - 20.5+1.I сут-

- ir -

Таблица 13.

Влияние ТВ на радиорезистентность крыс

Группы крыс Число крыс Доза облучения Гр Кол-во лейкоцитов в крови, х Ю9'л до обл-через 3 через 5 суток после обл

1-Облучение 2.0блуч.+ТВ 40 40 6 6 11.0 18.0 5.2 1 1 .5 8,8 14,2

3.Облучение 4.Облуч.+ТВ 28 28 8 8 Ю.1 16.4 3.3 9.0 6,0 12,9

5.Облучение 6.Облуч.+ТВ 20 20 Ю Ю 1 О.8 15.5 2.6 4.9 -

7-Облучение 8-Облуч-+ТВ 50 50 2+6 г+6 1 1 .2 15.4 4.0 8.5 8 , В 13,6

Смертность х

42.2

ю,о

67.8

1 ОО cío*

•К"), О ».О

СПЖ

сут-

1г.т

го, 5

о,о 1 г',6

7.2

£:я. 4 34 ,2

Примечание: во всех случаях, кроме отмеченных знаком », между показателями иммунизированных и неиммунизиронанных крыс наблюдалась достоверная разница.

При облучении в дозе 8 Гр падеж среди крыс в контроле составил G7.8X. а их СПЖ - 8.ОН.О сут. У вакцинированных крыс эти показатели достоверно отличались от контроля: падеж 7х (р-О.Ой) и СПЖ -15.6+1.5 сут (р<0-05 в обоих случаях)-

При облучении крыс дозой 10 Гр (ДД/1Ш) пчдож с№ди вакцинированных крыс составил 90у. при 100"/. в контроле (р 0д)ь>.

У невакцинированных крыс наблюдалось резкое снижение количества лейкоцитов в периферической крови, и. к 30м суткам оно достигало лишь 75v. от уровня до облучения. У иммунизированных крыс уровень лейкоцитов хотя и уменьшался- однако он достоверно не отличался от этого показателя у интзктных крыс.

Хорошо известно, что предварительное сублетальное об.лучение повышает радиорезистентность организма к повторному облучению (Кузинг 1986). В наших экспериментах облучение в дозах 2 Гр* 0 Гр

фиъелч к падежу 40'/. контрольных и только 8"/. иммунизированных ;рыс (11 П.01). СВД павших иммунизированных крыс была достоверно шинное. И в этом случае также количество лейкоцитов хотя и 'менъшалось по сравнению с уровнем до облучения, однако оно не сличались достоверно от такового интактных крыс

Обобщая все вышесказанное- следует отметить, что наибольшая йдио^аистентность под влиянием вакцинации наблюдалось у крыс, юдворгшихся фракционированному облучению. У этих животных д:таноьлоно благоприятное влияние ТВ на лучевое поражение, что выражалось в лучшем общем состоянии, удлинении СПК и уменьшении „'морпюсти по сравнению с контрольными. С увеличением дозы ^лучении действие ТВ на радиорезистентность, как и следовало зжидать. ослабевало. Однако в дозе 8 Гр (ЛД75/30) падеж среди лммуниз^ювэнных крыс был в 1,9 раз меньше, чем среди сшп рольных-

Следует отметить, что при- иммунизации крыс сибиреязвенной мшаной СТИ за 15 суток до рентгеновского облучения были подучены аналогичные результата (Мальцев и др.,1976). Иммунизация крыс вакциной БЦЖ до рентгеновского облучения также повышает их радиорезистентность- но более слабо по сравнению с ТВ и сибиреязвенной вакциной СТИ (Иванов, Мальцев, 1986).

В механизме радиозащитного действия большую роль играет длительность циркуляции микробов ТВ, размножающихся в регионарных лимфоузлах и паренхиматозных органах, как это показано для ЕДОК и сиби|ояавенной вакцин (Мальцев и др., 1976). При лучевой лейкопении, как известно, снижается сопротивляемость организма (Кузин.108С). Нами установлено значительное увеличение числа лейкоцитов в периферической крови иммунизированных крыс, тлшшда всех показателей фагоцитарной активности, повышение активности лизоцима сыворотки крови, СОД и каталазы . Последние раар.уа-ИТ биологически агрессивные кислородные радикалы, обр.;::.у. ,.„юсн при об.иучэнии в организме и оказывающие повреждающее дейса>ио на клетки.

Известно, что одним из поражающих действий радиации является аутосенсибилизация организма, которая возникает при реакции облученного организма на собственные тканевые антигены (Мальцев и др.. 1У76? Кузин, Г986)• Повышение радиорезистентности животных

при вакцинации их до облучения связано также с действие» гтротивотканевых антител, которые образуются в иммунизировании» организме наряду со специфическими противомикробными антителами, и которые могут соединяться с тканевыми продуктами распада, образующимися после облучения и нейтрализовать их поражающ«

действие на организм (Иванов.. Мальцов, !Э86). «

Глава у

Влияние ТВ на рост перевиваемых опухолей Ь нашей лаборатории было впервые показано, чт< предварительная иммунизация крыс ТВ тормозит рост и снижав" прививаемость пяти перевиваемых штаммов крысиных опухолей.

Было изучено противоопухолевое действия ТВ у крыс поел перевивки опухолей. Крысам перевивали солидные или асцитные форм опухолей- а затем их иммунизировали ТВ накожно. Иммунизации проводили на 2-3 сутки после перевивки солидных опухолей (когд опухоли начинали прощу; мваться) и через сутки после введен» асцитных опухолей. Были использованы следующие итамя перевиваемых крысиных опухолей-, асцитные гепатома Зайдела (АГЗ) 1 опухоль яичника крыс (ОЯ); солидные лимфосаркома Плисса (ЛСП) карциносаркома Уокер 256 (КСУ) и саркома 45- Ткань солидны: опухолей размельчалиг разводили физиологическим раствором ] отношении ЬЗ и вводили крысам подкожно по 0,5 мл суспензии. Асцитную жидкость разводили физраствором в отношении 1«5 1 подвивали в/б. После забивки животных солидные опухол отсопаровывали и взвешивали, а крыс с АГ'З и ОН взвешивали до ] после извлечения асцитической жидкости. Эффект терапии оценивал] по индексу торможения (ИТ) опухолевого роста (отношение разниц масс опухолей в контроле и опытной группе к массе опухолей 1 контроле, выраженное в процентах), либо по удлинению средне! продолжительности жизни (СПЖ) крыс по отношению к контролю.

В экспериментах на 60 крысах было установлено, что накожна! и внутрикожная иммунизация ТВ через сутки после введения клето1 АГЗ, ЛСП и КСУ ни в одном из опытов не оказывала достоверной влияния на СПЖ опухоленосителея-

Известно г что иммунитет у крыс начинает формироваться черв; 5-10 суток после их вакцинации ТВ. В зти же сроки начинав1;

возрастать противоопухолевая резистентность организма. СПЖ крыс с перевиваемыми опухолями составляет 10-15 суток. Поэтому при внутрикожной и накожной иммунизация возможно лишь незначительное повышение противоопухолевой резистентности организма крыс-опухоленосителей. Нами было показано, что в/б введение ТВ (I млн микробов) вызывало иммунные реакции у крыс не через 5-10 суток, как при накожной или внутрикожной иммунизации, а через 2-3 суток. Поэтому в экспериментах с ЛСП и КСУ на 2-3 сутки, когда опухоли начинали прощупываться, им в/б вводили по I млн ТВ.

Результаты исследований, проведенных на 44 крысах, показали, что СПЖ крыс с ЛСП и КСУ достоверно удлиняется на 50"/. и 52'/., соответственно.

Литературные данные также подтверждают, что в/б введение БЩ л бруцеллезной вакцины эффективней, чем накожная иммунизация, злияют на рост перевиваемых опухолей у крыс и мышей (Барышников и

пр.. 1982: Da?ortl et al-.19B6).

Введение микробов в опухоль очень эффективно тормозит их даст и в некоторых случаях приводит к полному выздоровлению

ШЮТНЫХ ÍDi Lurio et al..198В). НаМИ Изучено ВЛИЯНИв

знутриопухолрвого введения ТВ на СГШ крыс или массу опухолей -ТСП. КСУ. 0.' и АГЗ- Через сутки после инокуляции асцитных зпухолой и через 2-3 суток после перевивки солидных опухолей им эводили в различных дозах ТВ в/б (асцитные опухоли) или в опухоль [солидные).

Результаты экспериментов показали (табл- 14 и 15). что зведение микробов ТВ в опухоль оказывает выраженный 1ротивоопухоловыя эффект. При исследовании всех асцитных и солидных опухолей наибольший эффект был достигнут при энутриопухолевом введении 50 млн микробов по 3 раза через день. ]ри этом достоверно удлиняется СПЖ оцухоленосителей и часть животных излечивается от опухолей. Наилучшие результаты были юлучены в экспериментах с АГЗ. когда количество излеченных крыс !ыло статистически достоверным. Нротивоодухолевнр эффект при 1ВОДОНИИ 200 млн микробов однократно был менее выраженным, чем гри введении в 10 раз меньшего количества микробов. Это, •чевидно- можно об'яснить тем обстоятельством. что при иггратуморальном введении большого количества микробов происходит

их массовая гибельг сопровождающаяся обильным выделением эндотоксина. что ведет к быстрому (на Зи-4е сутки посла введения ТВ) распаду опухоли и интоксикации организма. Больпую чувствительность асцитных опухолей при интратуморальнон введении по сравнению с солидными можно обленить контактом микробов с большим количеством опухолевых клеток.

Таблица 14.

Влияние внутриопухолевого введения ТВ на среднюю продолжительность жизни крыс-опухоленосителей.

Опухоль Кол-во введенных СШ Удлинение Число излеченных

микробов, млн и сутки СШг ■/. крыс

число введения

АГЗ - 15.3+0.9 - о

20x1 18,5+1 ,1* го,э 6*

200x1 18,4+1 ,1* го,з 4*

50x3 2О.0+1 .3* 34,в ОМ

оя - Ю.8+1 ,4 - 0

20x1 29,9+2.0« 78,о 0

200x1 28,7+1,5м 70,8 о

50x3 35,6+2.О» 119,0 4

лсп - 15.Э+0.4 - о

20x1 21.0+1,4« 37,3 г

200x1 19.6+1,2* 28,1 1

50x3 23.7+1.4* 54.9 4

КСУ - 18.5+0,7 - О

20x1 28.0+1 ,1 * 51 ,3 1

200x1 26.4+2,2* 42.7 1

50x3 ЗО,5+2,4* 64,9 4

Примечание: « р<0г05 по сравнению с сответствупдим контролем! во всех группах было по 20 крыс.

_ h(, -

Полисахариды микробного и грибкового происхождения считаются наиболее сильными физиологически активными индукторами цитокинов в организме. способны усиливать механизмы. противоопухолевой резистентности и предотвращать побочные эффекта противоопухолевой терапии в эксперименте и клинике (Купин. 1992. 1994).

Таблица 15.

Влияние интратуморального введения ТВ на массу опухолей

Опухоль Число крыс Кол-во введенных микробов.млн и число введений Масса опухоли. г ИТ Число излеченных крыс

агз 20 - 16.4+0,9 - о

го гох1 3.9+0.6* 76.2 8*

го 5ÖX 3 2.0+0.4* В7.В ю*

ЛСП 10 - 10.6+1,4 - о

1 о 20x1 2.4+0.5« 77 , 6 1

10 50x3 1.4+0.4* 86,8 3

Примечание: - р<0.05 по сравнению с соответствующим контролем.

Мы использовали убитую ТВ- которую вводили крысам в/б на следующий день после введения АГЗ и на Зи сутки после введения клеток солидной опухоли ЛСП в оптимальной дозе I млрд х 3. через

до>1ь-

Проведоно сравнительное изучениее противоопухолевого эффекта УТВ и препарата ОК-432. широко применяемого в Японии при лечении некоторых форм злокачественных новообразований и состоящего из убитых стрептококков. ОК-432 вводили крысам в те же сроки, что и УТВ в оптимальной дозе 2 мг/кг в/б <Nio et al.. 1909).

Было показано (табл- 16). что УТВ и ОК-432 обладают практически равной противоопухолевой активностью.

Таблица ТВ.

Противоопухолевое действие УТВ и ОК-432 при внутрибрюшинном введении крысам.

Оцухоль Группа крыс Число крыс Масса опухоли г ИТ X

АГЭ Кои гроль Ю 12,3*1,2 -

УТВ 12 3,9+0,8* СО, 3

ОК-432 12 5,4+0,8" 53,3

леп Контроль 12 9,8+1,2 -

УТВ 12 3,0+0,6* 40,0

ОК-432 1 2 6,5+0,7* 43,3

оя Контроль 10 0,в+0,8 -

УТВ Ю й,3 + 1,о* 44,в

ОК-432 10 В,в+0.9* 41,7

КСУ Контроль Ю 12,3+1 ,1 -

УТВ Ю 6,0+0,8« 91 ,2

ОК-4 32 Ю 5,7+1,0* 53,в

Примечание: * р<0-05 по сравнению с соответствующим контролем.

Изучены цитогенетические нарушения в клетках ОЯ и костяого мозга пяти крыс через сутки после третьего в/б введения 50 млн микробов ТВ. Контролем служили пять невакцинироваиныж опухоленосигелеи- Исследования показали, что уровень клеток с ХА в костном мозге контрольных животных составлял 1,8+0,4*, а в клетках опухоли - 4-2ч0-8г. На следующий день после Зго введения ТВ уровень клеток костного мозга с ХА составил 6,0+1,Г/., а в клетки опухоли - 28..8+Г.4"/. (в обоих случаях р<0,01 по сравнению с со. отствующим контролем)- Если в клетках костного мозга в оснг гм наблюдались аберрации хроматидного типа, и число пару, -на на аберрантную клетку не превышало I, то в клетках опу> 1 наблюдались все типы цитогенетических нарушениях хром, л ше и хромосомные разрывы. обмены, клетки с

к мественными нарушениями хромосом (10<). Число нарушений на аберрантную клетку составило 5.2. Такое число аберраций является летальным для клеток. Поэтому мы считаем., что одним из механизмов противоопухолевого действия ТВ при интратуморальном введении является цитогенетический эффект-

Известно, что при развитии опухоли в организме активность СОД и каталэзы в печени резко уменьшается (Комов и др., 1882; Бабенко и др-• 1984: Тажибаев и др., 1989). Нами было показано, что в печени здоровых крыс, иммунизированных ТВ, активность СОД и каталазы достоверно возрастает. В данной сории экспериментов изучалась активность СОД и каталазы в печени 4 групп крыс (по 10 в каждой) : I - интактные: и - иммунизированные ТВ; ш - с АГЗ и IV - иммунинизированные с АГЗ (эксперименты проведены совместно с д.б.н. М. Симоняном).

Активность СОД в печени крыс с АГЗ составляла 4Г/. от активности интактных. а активность каталазы - 6№. Активность 2 этих ферментов была достоверно выше у иммунизированных, по сравнению с интактными- на 34'/- и 26"/-, соответственно. У иммунизированных опухолэносителей активность каталазы приближалась к норме (88"/. от уровня интактных крыс, р-0,05), а активность СОД была достоверно снижена (79"/.) по сравнению с интактными. хотя и была достоверно выше- чем у неиммунизированных опухоленосителеи.

Показано (ВолеговД987). что при возрастании противоопухолевой резистентности у животных под действием БШК наблюдается также целый ряд биохимических изменений. В частности, снижается активность общей лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и изменяется сшкггр изоформентов ЛДГ-

Изучение общей активности ЛДГ было проведено на 32 крысах-самцах линии Вистар (совместно с к-б-н- Р. Мелик-Шахназарян). Крысы были разделены "На равные группы, по 8 в каждой. 16 крыс были иммунизированы ТВ. « на 15е сутки 8 из них вводили в/б клетки АГЗ вместе с 8 интактными крысами. 8 интактных животных служили контролем для изучения фоновых показателей, а 8 иммунизированных - для изучения влияния ТВ на активность ДЦГ. Животных забивали на 10е сутки после введения клеток АГЗ. и общую активность ЛИГ изучали колориметрически по определению количества

пировиноградноа кислоты с помощью 2-4-динитрофенилгидразина в печони и селезенке крыс (Нательсон, 1967).

Показано, что общая активность ДЦГ в печени и селезенке крыс с АГЗ была достоверно выше, чем у интактных на 52"/.. Этот показатель у иммунизированных ТВ крыс-опухолвносителэй достоверно снижался на 30"/- по сравнению с предыдущей группой, но в то же время был выше/чем у интактных крыс (р<0,05). При этом ИТ опухолевого роста был равен 46"/. • и асцит образовался только у 5 из иммунизированных крыс.

Изучение спектра изоферментов ДДГ (совместно с к-б-н. Р. Мелик-Шахназарян)было проведено на 36 крысах-самцах линии Вистар, разделенных на 4 равные группы- Т8 крыс были иммунизированы ТВ. На 15е сутки 9 из них вместе с 9 неиммунизированными крысами в/б вводили клетки АГЗ- 9 интактных крыс служили контролем для изучения фоновых показателей, а 9 иммунизированных - для изучения влияния ТВ на изучаемые параметры. Животных забивали на 12а сутки после введения клеток АГЗ- Изоэимы ДЦГ изучали злекгрофоретическим методом на акриламидаом геле

ЬишЬгапо, 1967) с ПОМОЩЬЮ Прибора фирмы "Реапа1-69".

Картина изозимного состава ДЦГ в печени и селезенка иммунизированных крыс не отличалась достоверно от таково® у интактных животных. При развитии АГЗ отмечались резкие сдвиги в содержании изозимов ДЦГ, характерные для злокачественных новообразований: увеличение М и уменьшение Н суб' единиц, повышение коэффициента ДЦГ-5/ДДГ-1 в несколько раз- У иммунизированных крыс с АГЗ указанные показатели приближались к таковым интактных крыс. При этом ИТ опухолевого роста был равен 557., и асцит образовался только у 6 из 9 крыс-

Следовательно, ТВ вызывает сложные биохимические изменения в организме крыс и нормализует уровень гликолиза в тканях, что может быть одним из механизмов повышения противоопужолэвой резистентности организма- Следует отметить, что подобные изменения спектра ДДГ наблюдались в культивируемых злокачественных клетках при их спонтанной нормализации (Швамбергер, 1982). Во многих странах для лечения больных со злокачественными новообразованиями использутся живые вакцины (БЦЖ

И против бруцеллеза)(6гапдв а!.. 1991: Багогс! а!., 1976).

- сю ~

Имеются данные об успешном применении живых аттенуированных штаммов сальмонелл И Listeria monocvtogenes при ЛеЧеНИИ ОПуХОЛвЙ у человека И грызунов (Roy et al . . 1975: Kim et al., 1997;

WeisK i rc h et al.. 1997: Zheng et al.. 1997).

Обобщая все вышесказанное, можно отметить, что ТВ влияет на ряд биохимических параметров организма животных, которые повышают противоопухолевую резистентность организма. При введении ТВ в опухоль наблюдается выраженный противоопухолевый эффект, который, видимо, связан с кластогенным эффектом на опухолевые клетки.

Глава VI

Применение ТВ в комплексном лечении опухолей Изучено сочетанное действие ТВ и некоторых химиопрепаратов на рост перевивных опухолей у крыс Вистар обоего пола. Использовали перевивные штаммы крыс ЛСП и КСУ. Животные иммунизировались ТВ (в/б. I млн микробов) через 2-3 суток после перевивки опухолей- Через сутки после иммунизации начинали лечение опухолей химиопрепаратами- которые вводили крысам в/б, через день: платидиамом (0.75 мг/кг х 2 ). ЦФ (25 мг/кг х 3), тиоТЭФ (2 мг/кг х 3 )- натуланом (10 мг/кг х 4). ЦФ (50 мг/кг х I) и 5-фгорурацилом (50 мг/кг х I. через день после Цф). Противоопухолевый эффект оценивали по СПИ крыс и количеству животных с регрессикй опухолей, которые считаются основными критериями противоопухолевого действия для прогноза клинической активности препаратов (Софьина и др., 1993).

В табл. 17 показано, что в/d введение ТВ и химиопрепаратов, широко применяемых в клинической онкологии, оказывает выраженный противоопухолевый эффект, который в 5 случаях из 8 превышает аддитивный. При этом у 17-31"/. крыс наблюдалась полная регрессия опухолей. Результаты экспериментов, проведенных на 315 крысах, дают нам основание утверждать, что в/б введение ТВ усиливает противоопухолевое действие шести химиопрепаратов-

Исследование было продолжено на крысах с ДМБА-индуцированными опухолями. иммунизированных ТВ после обнаружения опухолей. Через 15 суток после иммунизации им вводили ЦФ в суммарной дозе 150 мг/кг. Выявлено (табл. 18). что после забивки крыс через 6 месяцев после введения ДМБА ИТ опухолевого

Таблица 17.

Сочетанное действие в/б введения ТВ и химиопрепаратов на среднюю продолжительность жизни крыс

Опухоль Группы крыс Число крыс СП», сутки Удлиненш

СПИ, х

К СУ 1.Контроль ю 16.5+1,7 -

2.ЦФ 12 31.0+2.1« «57,в

з.тв 12 23,6+1.2* 27,3

4 .ТВ+ИФ 12 37,9+2,3« 104,©**

З.тноТЭФ 12 31 .8+1 .4* 71,в

6.ТВ+тиоТЭФ 12 41.6+3.4* 124,9*«

КС У 1.Контроль 8 15.5+0,8 -

2.ТВ 1 О 23. 4+1 ,1 * 51 ,0

3 .натулан Ю 23,9+2,2»« 54,2

|4.Т1 5+натулан| ю I 31.2 ♦ 2,2* Ю1 ,3**

лсп 1 .Контроль 10 14,5+0,7 _

2.ТВ 13 18,6+1 .2» 28,3

З.платидиам 13 19,е+1.4* 35,2

4 .ТВ-»платил 13 24.4+1гО* 68,3мм

5.ЦФ 12 21,5+2,0" 48,3

6.ТВ+ЦФ 1В 28.4+1,е* 95,Омм

лсп 1 .Контроль 12 16.6+1 .2 -

2. ТВ 12 23,2 + 1 .0« за,а

З.ЦФ+ФУ 12 24.Э+1 ,4» 50,0

4 . ТВ+ЦФ+4>У 20 30,2+1,6« 81 ,в*М

5.аклак ур 16 24,2 + 1 .4* 43,в

б.ТВ+аклакур 16 31 ,4 + 1 .4»» 89,2

7.ТиоТЭФ 15 25,9+1,6« 5в,0

8.ТВ+тиоТЭ4> 1 6 34,2+2.2* 10в,0*м

Примечание: *р<0,05 по сравнению с соответствующим контролем»** у 2-4 крыс наблюдалась регрессия опухолей (р>0.05).

роста был равен 49.б-/., при действии ЦФ - 59.2"/-. Сочетанное действие ЦФ и ТВ привело к ИТ. равному 83.9"/-, при этом у 6 из 16 крыс опухоли не были обнаружены (р<0-05).

Эксперимент с ДМБА-индуцированными опухолями повторили по тому же протоколу- Обнаружено, что ИГ опухолевого роста у крыс, иммунизированных ТВ составил 32"/.. а леченых ЦФ - 59'/. ( в обоих случаях р<0.02). При действии обоих факторов вместе ИТ составил 84'/.. При этом у 20*/- крыс опухоли не были обнаружены (у 3 из 15, р>0.05).

Сочетанное действие ТВ и многих химиопрепаратов приводит к аддитивному, а в некоторых случаях к эффекту, превышающему аддитивный- Во многих случаях у 15-20x7. животных наступала полная рогрессия опухолей. но только в одном эксперименте с ДМБА-индуцированными опухолями количество таких крыс было статистически достоверным. Следует отметить очень важное обстоятельство - при иммунизации крыс с уже сформировавшимися опухолями с различной гтютоструктурой ни в одном случае не было обнаружено стимуляции роста опухолей, в отличие от БЦЖ и бруцеллезной вакцин.

Для сравнения противоопухолевого действии БЦЖ и ТВ в сочетании с химиопрепаратом ЦФ было проведено 2 эксперимента на крысах с ЛСП. В I эксперименте (72 крысы) противоопухолевый эффект был оценен по ИТ опухолей- во и ( 98 крыс) - по СШ-Поело того как опухоли стали прощупываться. крысы иммунизировались в/б БВД или ТВ одной дозой, применяемой для иммунизации людей- На следующий день начинали лечение ЦФ (4 раза по 25 мг/кг через день, суммарная доза 100 мг/кг).

В I эксперименте ИТ после забивки крыс на 15е сутки после перевивки ЛСП у иммунизированных ТВ крыс был равен 32"/- (р'0,05), у иммунизированных БВД - 23"/- (р>0,05). ЦФ уменьшил массу новообразований на 7Г/., а вместе с ТВ» - на 91'/.. Сочетанное действие БЦЖ и ЦФ привело к торможению роста ЛСП на 74"/., причем из 12 крыс 3 пали. У оставшихся в живых к моменту забивки наблюдалось достоверное снижение массы тела на 2?//.. в отличие от крыс . иммунизированных ТВ-

Таблица 18.

Сочетанное действие ТВ и циклофосфэна на рост ДМБА-индуцированных опухолей у крыс

Группа Число крыс Средняя масса опухолей г ИТ Число изле-7. ченных крыс

1 . ЦФ А« 2Э,4+2.3* 59,2 0

2. ТВ 13 ЗО.О+З.б* 40,6 О

3. ТВ+Ш> 16 9.6+1.3* 83,9 в*

4. Контроль 12 59.6+4,3 - О

Эксперимент 2

1 . ЦФ 16 13.4+1 ,4* 59,0 0

2. ТВ 15 22.2+1 ,9* 32,0 0

Э. ТВ*ЦФ 15 5.2+О,9м 83,2 э

4. Контроль 14 32.6+2,0 - 0

Примечание: *р<0,05 по сравнению с контролем.

Во и эксперименте.- где противоопухолевое действие оценивалось по СПИ крыс, были получены следующие результаты. Иммунизация крыс ТВ привела к удлинению СПЖ на 31г., а БВД - на 237- по сравнению с контролем (в обоих случаях р<0,05). ДО удлинил СПЖ только на 207- (р<0-05). Сочетанное действие ТВ и 1№ привело к удлинению СПЖ на 4Сг/. (р<0,05), и у 4 из 16 крыс наблюдалась регрессия опухолей <р>0,05).Сочетанное действие БЦЖ и Цф привело к недостоверному удлинению СПЖ на Их. У 2 из 16 крыс опухоли распались с образованием рубцов на коне и полным выздоровлэниэи крыс. При сочетанном действии БЦЩ и ЦФ наблюдалось достоверное снижение массы тела крыс на 207..

Таким образом- было показано, что ТВ по сравнению с БДО обладает более сильным противоопухолевым действием. При сочетанном действии ТВ и ЦФ наблюдается почти аддитивный эффект с выздоровлением 15-207.*/ крыс. Сочетанное же действие БЩ( и Щ привело в обоих случаях к выраженному токсическому эффекту с достоверным снижением массы тела животных. Исходя из результатов двух экспериментов, полученных на 168 животных, сделан вывод с

большей эффективности ТВ по сравнению с БЦЖ-

Таблица 19.

Ял/яние внутриопухолевого введения ТВ и химиопрепаратов на среднюю продолжительность жизни крыс

Опухоль Группы , крыс Число крыс СШ. сутки Удлинение СШ. •/-

ОЯ 1.Контроль 12 14,2+1.О -

2.7Н 12 24.3+1.2* 71 .1

1 2 44.5+3,2* 213,4

4.ТВ+ ФР 1 2 61 .2 + 3,4* 331,о**

ЛГЛ 1.Контроль Ю в.2+0.5 -

г. тв Ю 12.3+1.4* 50,0

З.Ммтомицин С Ю 13.3 + 1 .2* Р2,2

4.ТВ+мит. С 15 1 Г.2 + 1 .4* НО,О**

ЛС.П 1 .Кон гроль 16 113.8 + 0 .8 _

г. тв 16 24,4+1 .1* 45,2

З.ЦФ 1 6 27,2+2.0* 61 ,9

4 ЛВ + ИФ 1 6 Зд .6+2,3* 135.7**

КСУ 1.Контроль 16 1 7.2 + 1 ,1 -

глв 16 26,5 + 1 .8* . 54.0

ЗЛИ- 1 6 29.9+2.1* 73.е

4. 1В<1№ 1 6 43.2+3.3* 151,2**

Примечание: *р 0.05 по сравнению с соответствующим контролем; ** у 2-3 крыс наблюдалась регрессия опухолей (р 0.05).

Было изучено также сочетанное действие химиопрепаратов и ТВ при внутриопухолевом введении (50 млн микробов. Зх кратно,через донь- начиная со дня обнаружения опухолей КСУ или ЛСП, и на следующий день после инокулящи клеток ОЯ или АГЗ- > Крыс с КСУ и ЛСП лечили ИФ (25 мг/кг в/б. 3 раза, в те же сроки, что и ТВ),

крыс с ГЯ - ФР (3 мг/кг в/б, 3 раза)и крыс с АГЗ - митомиданом (однократно. 0-5 мг/кг).

В табл. 10 показано- что внутриопухолевое введение ТВ ! сочетании с химиэпрепаратами приводит к выраженном; противоопухолевому эффекту. При этом у части крыс наблюдалас: регрессии опухолей, однако ни в одном случав она не бы» статистически достоверной (р>0.05).

Проведены исследования по изучению действия УТВ в сочетанм с химиопрепаратами на рост перевивных опухолей. Результат экспериментов представлены в табл. 20 и 21. Сочетанное действие УГВ и химиопрепаратов эффективно тормозит рост опухолей- Причв! эЭДюкг противоопухолевых препаратов усиливается УТВ.

Таблица 20.

Сочетанное действие УТВ и химиопрепаратов на среднюю продолжительность жизни крыс

Опухоль Группы крыс СПЖ,сутки Удлинение СПМ.х

оя 1.Контроль 19.6^0.3 -

2. УТВ 27.5+2.2* 40,3

3-Ад.рибласт . 40.2*2,4* 105,1

4.УТВ+Адриб. 62.2+4.1 * 217,3**

КСУ 1.Контроль 23,1 +1 .1 -

2. УТВ 32.0+1.8* 44,8

З.ЦФ 37.8+1,5* 71 .8

4.УТВ+ЦФ 57.7+2.9* 161 ,1 **

З.ТноТЭФ 40.2+2,2* 74,0

б.УТВ+тиоТЭФ 63,3+3,0* 174,0

Примечание: *р<.0-5 по сравнению с контролем? в каждой группе было по 10 крыс? ** у 2 крыс наблюдалась регрессия опухолей

Нас заинтересовал вопрос о цетогенетических нарушениях в клетках костного мозга и опухолевых клетках при действии

химиопреиаратов на крыс- иммунизированных ТВ. Ранэе нами было показано, что в миелокариоцитзх здоровых крыс, иммунизированных ТВ. снижается количество аберрантных метафаз, индуцируемых различными химиопрепарзтами. Известно. что в механизме противоопухолевого действия многих цитостатиков важную роль играет индукция ХА в опухолевых клетках (Регдиьоп. 1985)-

Было исследовано влияние иммунизации крыс на кластогенный эффект ЦФ в клетках костного мозга и опухолевых клетках-Эксдарименты были проведены на 90 крысах-самках линии Вистар, массой 120 г- Крысы иммунизировались ТВ. и через 15 суток им в/б вводили клетки ОЯ. Крысам в/б вводили ЦФ в дозе 25мг/кг однократно чорез 48 ч после перевивки опухолевых клеток-

Таблица 21.

Сочетанное действие УТВ и химиопрепаратов на рост опухолей

Опухоль Группы крыс Масса опухоли-г ит.-/. Число излечен-

ных крыс

АГЭ 1.Контроль 12.4 + 1 .4 - 0

2.УТВ е.4 + 1 ,1»« 48,4 2

З.ЦФ 4.2+0.8* 66.1 1

4.УТВ+ЦФ 1,0+0.2» 91 ,9 6*

лсп 1 .Контроль 16.4+1.6 - 0

2.УТВ 10.0+1 .1* 39 .О 1

з.ш> 3,9+0,9* 76,2 1

4 . УТИ»1И' 1.2+0.4« 92 .7 3

Примечание: в каждой группе было гго 12 крыс? * р-0.05 по сравнению с контролем.

Крыс забивали через 48 ч после введения цитостатика, так как именно в этот срок наблюдался максимальный кластогенный эффект в опухолевых клетках.

Было установлено, что в клетках ОЯ количество ХА в 5 раз больше, чем в миелокариоцитах. Иммунизация крыс ТВ не влияла на уровень ХА в клетках костного мозга и в опухолевых клетках. ЦВ индуцировал в костном мозге неиммунизированных крыс в 2,7 раз меньше клеток с ХА. чем в ¡слетках ОЯ- что свидетельствует об избирательности действия ЦФ- Количество нарушений на I аберрантную клетау костного мозга было в 3,7 раз меньше, чем на I опухолевую- У иммунизированных крыс с ОЯ ЦФ индуцировал в миелокариоцитах достоверно меньшее количество клеток с ХА, а в опухоли - достоверно большее количество клеток с ХА, чей ото наблюдалось у крыс предыдущей группы- Число нарушений на I аберрантную клетку в II раз больше в опухолевых, чем в миелокариоцитах.

Таким образом, предварительная иммунизация крыс ТВ усиливает кластогенйое действие ЦФ на клетки опухоли, но снижает мутагенный эффект на клетки костного мозга.

Была изучена активность монооксигеназ печени крыс по длительности гексеналового сна (Богуш и др., 1986; Комов и др., 1986). Интактным, иммунизированным ТВ, неиммунизированным с опухолью ОЯ и иммунизированным с ОЯ крысам вводили в/б гексенал в дозе 80 мг/кг. В каждой группе было по 8 крыс. Было показано, что длительность сна у интактных крыс под действием гексенала равна 30-4 мин, у здоровых иммунизированных - 42,0 мин (р<0,02 по сравнению с интактными), у крыс с ОЯ - 49,2 мин (р,0,05 по сравнению с двумя предыдущими группами) и у иммунизированных крыс с ОЯ - 35.8 мин (р'0,03 по сравнению с предыдущей группой). Следовательно, ТВ достоверно удлиняет длительность сна у здоровых крыс, но снижает таковую достоверно у крыс-опухоленосителей по сравнению с неиммунизированиыми опухоленосителями (р<0,05).

На аналогичных группах крыс (в каждой было по 10 животных) было изучено противоопухолевое действие ЦФ ( 25 мг/кг, однократно. на Зи сутки после перевивки опухоли ОЯ) и ТВ по ИТ опухолевого роста спустя 15 суток после введения опухолевых клеток- Было показано, асцитическая жидкость была обнаружена у всех неиммунизированных крыс (средняя масса 16,8 г)- У иммунизированных крыс асцит был обнаружен у 8 из 10, и средняя масса асцотическоя жидкости была равна 6,3 г (ИТ=62,5"/.). у всех

крыс, получивших ДО. была обнаружена асцитическая жидкость со средней массой 12-9 г (ИТ=23.2"/.). СочетанноЕ действие ЦФ и ТВ привело к регрессии опухолей у 5 крыс из 10. При этом средняя масса асцита была равна 3-8 г (ИТ=77.4/.).

Аналогичный эксперимент был проведен на 36 крысах-самках линии Вистар. В качестве опухоли использовали ОЙ, а терапию щюводили фарморубицином. который вводили однократно, в/б, в дозе 3 мг/кг- Было отмечено, что у иммунизированных крыс с ОЯ цитогенетические нарушения в клетках костного мозга достоверно уменьшались, а в клетках ОЯ - достоверно увеличивались по сравнению с неиммунизированными опухоленосителями. получившими ФР. При этом наблюдалось достоверное усиление противоопухолевого действия ан тибиотика.

В усилении цитогенетического действия химиопрепаратов на опухолевые клетки важное значение имеет то обстоятельство, что в пораженном опухолью организме снижается активность монооксигеназ, что снижает терапевтический эффект химиопрепаратов. нуждающихся в мотабиличоской активации для приобретения биологических свойств (Комов и др.. 1У86). Как было показано нами. ТВ нормализует .¡¡стивность монооксогеназ печени у крыс-опухоленосигелей и за счет этого эффекта усиливает терапевтический эффект химиопрепаратов.

Сочетанное действие 2 иммуномодуляторов на рост опухоли более эффективно, чем применение каждого в отдельности <у^да в!..1990). Изучено СПЖ 40 крыс с КСУ. которым после обнаружения опухолей однократно в/б вводили ТВ (I млн), ОК-432 (4 раза через день. 1/2 дозы, употребляемой в клинике), либо ТВ и ОК-432 сочетание в тех же дозах. Результаты исследований показали, что ТВ удлинило жизнь крыс на 50,7:'-. ОК-432 - на 38.. а оба фактора вместе - на 75'/. (о-:о.оь во всех случаях по сравнению с контролем). В последнем случае у 2 из 16 крыс наблюдалась ршроссия опухолей- Следовательно- ТВ и ОК-432 усиливают противоопухолевое действие друг друга. 1отя эффект сочетанного действия не превышает аддитивного.

На 48 крысах изучено влияние иммунизации ТВ (за 15 суток до введения клеток ЛСП) на противоопухолевый эффект радиации. После прощупывания опухоли однократно облучались на аппарате РУМ-17 в дозе 20 Гр ( 180 кВ. 10 мА, фильтры 0,5 си+ 1.0 «1. фокусное

расстояние 25 см). Эффективность лечения оценивали по ИТ опухолей через 15 сут поело перевивки клеток ЛСП.

Выявлено, что ТВ снижает рост опухолей на 46.52, радиотерапия - на 75,6?.. а оба фактора вместе - на 95,37.. При этом у 2 из 12 крыс опухоли не были обнаружены- Сочетанное действие ТВ и радиации достоверно больше снижают массу опухолэй. чем каждое из нух в отдельности (р<0,05) (табл.22).

Таблица 22.

Сочоташюо действие ТВ и радиотерапии на рост лимфосаркоми Плисса

Группы Крыс Масса опухоли-г ИТ, 7.

1 . Контроль 15,2+0,8 -

2. ТВ 8.1+0,8" 4в,д

3. Радиотерапия 3,7+0.3* "••.в

4. ТВ+радиотералия 0,7+0.2* 05,3**

Примечание: *р<0,05 по сравнению с контролем? в каждой группе было по 12 крыс? н« у двух крыс наблюдалась регрессия опухолей-

Таблица 23.

Сочетанное действие ТВ и радиотерапии на среднюю продолжительность жизни крыс с лимфосаркомой Плисса

Группы крыс СПИ. сутки Удлинение СПЖ, X

1. Контроль 1 6 5+1 ,1 -

2. ТВ 22 0+1,3* 33,3

3. Радиотерапия ¿6 0+0,8* 57,6

4. ТВ+радиотч; рапия 33,9+2,1 *

Примечание: ., (К05 по сравнению с контролем; в каждой группе было но 14 - ** у двух крыс наблюдалась регрессия опухолей.

:-1ЫТ был повторен на 56 крысах,- но в качестве критерия противоопухолевой активности изучали СПЖ. Этот показатель у крыс, иммунизированных ТВ за 15 суток до инокуляции клеток ЛСП, был удлинен на 3?//.. у крыс, леченых радиацией - на 56"/.. Оба фактора вместо удлинили СШ крыс на 105'/., при этом у 2 из 14 крыс опухоли не были-обнаружены (табл. 23).

{"езультаты экспериментов, проведенных на 104 крысах, дают основание утверждать.- ■ что ТВ достоверно усиливает противоопухолевое действие радиотерапии- При этом СШ и масса опухолей у крыс при сочетанном действии обоих факторов достоверно превышает соответствующие показатели у крыс, получивших только радиотерапию.

Следует отметить, что для снижения побочных эффектов химио-и радиотерапии с успехом используются стрептококковый препарат ОК-432 (n10 е1 й1., 1995). ЛШОПОЛИСаХЗрИД , ПОЛУЧвННЫЙ из сальмонелл оат! ее а 1 . . 199а» и убитые микробы р«рш1отог>д5

а«1Ш1П05а (Бип «¿Ь а!., 1996 1.

Па основании полученных нами результатов, в клинических отделениях ОНИ им- В.А. Фанардаяна ТВ была с успехом использована в комплексном лечении больных с раком тела матки и легкого (Мовсесян и др.. 1990). Эта группа исследователей и клиницистов получила патент Российской Федерации на изобретение нового метода лечения больных с раком тела матки и легкого.

Глава ум

Влияние белкового экстракта пуповины человека на мутагенез и

канцерогенез

Эмбрионизация паренхиматозных и стромальных клеточных элементов.их примитивизация в процесс*? канцерогенеза находит свое подтверждение в структурном, энергетическом и иммунологическом отношении (Эренпрейс, 1983; Мкргчян,' 1993). В отношении последнего утверждения имеется в виду • не только образование эмбриоспеци^ических белков, но и интимные механизмы уклонения от атакующих свойств иммунного надзора организма- Особенно схож механизм супрессорного иммунитета при беременности и опухолевом росте- Это позволяет обосновать необходимость экспериментального изучения экстракта пуповины человека (ЭГГЧ) в аспекте

предупреждения опухолевого роста- Ткань пуповины насыщена гликозааминогликанами с выраженными адсорбирующими свойствами, в результате чего она должна содержать весь пул эмбриональных антигенов. Поэтому иммунизация ЭПЧ повышает невосприимчивость организма к эмбрионизаши тканей, происходящей во время канцерогенеза (Мкртчян, 1990:1993). Согласно результатам электрофореза в*полиакриламидном геле, в БЭП определено пять белковых фракций с молекулярными массами 40- 50, 55, 58, 67 и 72 кД. Методом иммуноферментного анализа в БЭП определяются шесть раково-эмбриональных антигенов. Получение БЭП защищено патентом Российской Федерации (Мкрггчян и др.? N2055589, 1996 г). Ц

Исследования на грызунах показали, что ЭПЧ обладает интерфороногенной активностью, и полностью лишен аллергизируодих и токсических свойств- Иммунизация крыс и мышей ЭПЧ тормозила развитие опухоли Эрлиха. АГЗ, саркомы 37 и ЛСП (Мкртчян и др., 1990).

Испытание БЭП на канцерагенность и мутагенность не проводилось, что и послужило далью настоящих исследований. Изучение мутагенных свойств ЭПЧ проводили на 15 крысах и мышах, которым препарат вводили в/б в дозах, превышающих терапевтические в 10 раз- Исследование клеток костного мозга грызунов через 24 и 48 часов показало, что ЭПЧ не повышал уровень цитогенетических нврушений по сравнению с интактными грызунами.

Исследования возможных канцерогенных свойств ЭПЧ проводили на 300 крысах и 300 мышах обоего пола, которым препарат вводили подкожно I раз в неделю в течение года, в дозах, превышающих терапевтическую в 10 и ТОО раз-. По 100 животных каждого веда служили контролем, и им вводили в течение года физиологический раствор. За животными наблюдали до их естественной гибели- Все органы и ткани павших грызунов исследовали щстологичесски-

Показано, что локализация и количество опухолей у живота опытных групп не отличались достоверно шалогичных показателэй в контроле. Это доказывает отсутствие канцерогенных свойств у ЭПЧ-

Поскольку ЭПЧ обладает интерфероногенной активностью, а все

ИНДУКТОрЫ Интерферона ЯВЛЯЮТСЯ антимутагенами (Reiner* et

a i., 19!зз: Золотарева и др., 1993).- мы изучили возможное

антикластогешюе свойство ЭПЧ- 10 иммунизированным ЭПЧ и 10 контрольным крысам в/б вводили по 10 мг/кг 7,12-ДМБА или 40 мг/кг бензо(з)пирона. Через 24 ч животных забивали и исследовали ХА в клетках костного мозга- Результаты исследований показали, что у иммунизированных крыс v,"^neнь цитогенетических нарушений был достоверно снижен по сра. лю с контролем на 38,6/. и 33,8"/., соответственно <,; ис. 6).

Эксперименты но изучению влияния ЭПЧ на мутагенез, индуцированный № в дозо 30 мг/кг, были проведены на 54 мышах- ЦФ вводили мышам в/б через 1.2. 3- 5, 7 и 10 суток после введения ЭПЧ. Чероз 24 ч после введония мутагена мышей забивали и костный мозг исследовали на наличие МЯ-

Иммунизация мышей Э1/Ч привела к достоверному снижению числа цитогенотичоских нарушений в костном мозге, индуцированных ЦФ, на 1. 2. 3- и 5 сут после иммунизации ЭПЧ. Максимальное снижение числа МЯ ( в 2 раза) наблюдалось на 1е и 2е сут. на Зи сут количество МЯ снижалось в 1.6 раз- на 5е сут - в 1.4 раза по сравнению с положительным контролем. Исследования, проведенные в более поздние сроки после иммунизации, не выявили достоверного влияния на уровень МЯ (рис. 7). Следовательно, ЭПЧ оказывает выраженный антикластогенный эффект в отношении сильных мутагенов и канцеро1внов- что- на наш взгляд, связано ис интерфероногеняым свойством ЭПЧ-

Таблица 24.

Влияние НЭП на канцероюнез. индуцируемый 7.12-ДМБА и бонзо(э)11иреном у крыс

Группы крыс ЗффОКГИВ- число Выход опухолей (V.) Латентный период.сут Масса опухоли, г ИТ У.

1 -ДМБА 1 9 1 9С 1 00) 45,5 6,80+2.21 -

.4. ЭП + ДМБ* 1 8 14С77.8)* 58,8* 2.68+0,24* бо,е

3. Б Л 19 15С78.9; 76,6 5,16+1,32 -

4-ЭП + БП 19 1 ОС 57.9) 89,9* 2,25 + 0.91 * 56,3

Примечание; *р-0.05 по сравнению с сответствующим контролем

JIJ -,

лмь\ mi

A - Kiiiirpn.ii.: Ii - Iimmviiii iiipuiwinu.ii' i'ik. (). В.шяпне jKci p;iki;i iiym niiini.i чс.юиека im к i,kiuK'iiii) in

.IKIimiHU II. K.IIIIK-pol L'lloli у KJIt.ll

4iu i..

МИН)*»-

■I "i

I 2 1 5 ii

JiiX'Mil. I. > I KU

I'm- 7. li.imiiiiic jkl ip;iKi.i imiouiiiu.i 'r-.idiíl'Kíi im к. i.k ihi i-iiiiwo л к »mimen. iiilk.ii>(|)iKí|xtii;i у мышеи

- СИ -

В следующей серии экспериментов изучалась возможная антиканцерогенная активность ЗПЧ. 40 крыс линии Вистар были иммунизированы Э11Ч. Через 5 сут после иммунизации 20 иммунизированным и 20 интактным крысам вводили п/к 7,12-ДМБА, 20 иммунизированным и 20 интактным - бензо(а)пирен- Животных забивали "через 5 месяцев после введения канцерогенов.

Показано, что ДМБА индуцировал возникновение опухолей у всех контрольных крыс и только у 77.8"/ (р0.05) иммунизированных. Аналогичные данные по индукции опухолей беизо(а)гшреном были равны 78,9"/. и 57.9"/. (р<0-05)- При этом наблюдалось удлинение латентного периода образования опухолей и снижение массы новообразований (табл. 24».

У иммунизированных крыс наблюдался достоверный сдвиг . по сравнению с контролем. в сторону нормализации ряда физиоло1-ических показателей (масса тимуса и селезенки, количество эритроцитов и лейкоцитов, содержание фибриногена и протромбиновый индекс)-

Таким образом. ЭПЧ- который предполагается использовать как противораковую вакцину, не обладает мутагенной и канцерогенной активностью- В то же время Э1ТЧ снижает кластогенный и бластомогенный эффект нескольких сильных канцерогенов-

Глава ущ

Влияние лактобацилл на мутагенез, рост и лочонио по[хи)И1кюмых опухолей -

Известно, что многие штаммы лактобацилл снижают выработку в организме микрофлорой кишечника ферментов (нитроредуктаза, глюкозидаза. глюкуронидаза, азоредуктаза), которые метаболизирукгг канцррогены 1986? 1996). Вследствие этого в некоторых

случаях лактобациллы оказывали антиканцерогенный эффект у

ЖИВОТНЫХ (Мап^Иа. 1990: ЯеЬЬу. 1792). ЭПИДеМИОЛОГИЧвСКИв

исследования показали, что лактобациллы. потребляемые в пищу, снижают риск развития опухолей молочной железы и кишечника у человека (дилыч. 199?: v.^(Гt чгрг 1909). Лактобациллы

могут тормозить рост перевиваемых опухолей у грызунов (айзсих, 1977I. и Обладают антимутагенной активностью (Гоо1-1оЬе1 е! а1, 1970. 179Т: Пршит .Мипгпрг. 1991). МОХЙНИЗМОМ ИНТИКаНЦОрОГОННОГО

и противоопухолевого действия лактобацилл является инактивация экзогенных канцерогенов . в желудочно-кишечном тракте, ингибирование эндогенной продукции канцерогенов и повышение иммунореактивности организма ( продукция tnf, ингерферонов и

ИНТерЛВЙКИНОВ) ÎKanbe, 1992).

В Армении для детского питания широко употребляются молочный продукт "Нарине"* содержащий в I мл 200 млн лактобацилл, и препарат "Бифидумбактерин" для лечения дасбактериоза. В отношении мутагенности лактобацилл имеются противоречивые данные (Mann* at

al.. 199П: Ronner, Murizner. 1991).

lia 1Ь крысах линии Вистар проведено испытание на наличие кдэстогенной активности этих лактобацилл. которые вводились грызунам внутрижелудочно в течение месяца, ежедневно, в дозах, используемых человеком с перерасчетом на крыс. В качестве контроля использовались 5 крыс, которые получали физиологический раствор внутрижелудочно в течение месяца. Результаты экспериментов показали полное отсутствие кластогенных свойств у двух штаммов лактобацилл. В следующей серии экспериментов 50 крысам в течение 15 сут вводили "Нарине" в дозах, употребляемых человеком- В качестве мутагенов были использованы ЦФ, тиоТЭФ и адрибластин в дозах, индуцирующих появление 20v. аберрантных клеток в костном мозге крыс- 5 крыс получили пастеризованное молоко с убитыми лактобациллами- Показано, что лактобациллы "Нарине" снижали кластогенный эффект ЦФ на 60,97-, тиоТЭФ - на 44.77. и адрибластина - на 58.87.. Убитые лактобациллы не влияли на кластогенную активность ЦФ. Препарат "Бифидумбактерин", снижал кластогенную активность ЦФ на 44,47.. тиофосфамида - на 27,Бх, адрибластина - на 41,47. (рис. 8 и 9).

Т'.'.им образом, было впервые показано, что лактобациллы "Нарине" и "Бифидумбактерин" обладают антшиастогенной активностью. Убитые лактобациллы такой способностью не обладали, что согласуется с данными других исследователей ( Pooi-zobej et ai., 1992). Изученные нами лактобациллы -оказывали более выр; нный антикластогенный зффект в отношении промутагенов (ЦФ, адрг. мастин), чем в отношении мутагена прямого действия (тиоТЭФ).

Дзучение влияния лактобацилл "Нарине" на генотоксическую аюг . 'сть канцерогена и мутагена прямого действия

■ Kim ijiii п. □ j 1;1к1чПац||.|.||.| "1 lapiiiic '

l'ik.K I in in Ii to .i.ik infuiiii.i.'i "Паримо па k.mci<>i о ними iiкiimiinoii. \ii\uioiipoiiapiuoit

К i. и. н \ \

В К.Ш1 ipo.n, □ I i|viiap;ii "Бпфи.пиПлкюрин "

l'iic .1) К uni uno ||1К-1шр.1иГ'1>1|ф|1Л>чГ|.1иер11|Г||;| kiacioi oiiiiuu iiK i и ni и к 11. xiiMiuuipciKipiimu

4

A - I('l>: H- I inn j(|r. С - A.'ipiiuiiiiLimi

м-метл-и-нитро-м-нитрозогуанидина было проведено в Институте физиологии питания (Карлсруэ. Германия) под руководством Prof. Dr. в. Pool-Zcbei. Исследование проводилось на клетках кишечника крыс линии cd. которые инкубировались с канцэрогеном и лактобациллами в течение 30 мин- После инкубации клетки подвергали микрогельэлектрофорезу ("comet assay"). Основным критерием генотоксического эффекта является длина миграции ДНКГ Этот показатель., выраженный в специальных единицах (inaq« unit«) был равен: интактный контроль -23.3+1,8: позитивный контроле: (клетки кишечника + канцероген)- 117,3+6.5. лактобациллы + МННГ, - 58г8+2-7.Лактобациллы достоверно снижали генотоксический эффект. канцерогена на клетки крыс на 50"/. по сравнению с позитивным! контролем. Это доказывает, что лактобациллы способны связывать1 метаболиты канцерогенов. Аналогичные данные были получены и другими исследователями (Pool-Zobel et al, 1995; Zhang et al,! 199Ы. Другим возможным механизмом антикластогеаного действия; лактобацилл "Нарине" является их интерфероногенная активность: (Kita et ai.. 1986), так как индукторы интерферона обладает антимутагенной активностью (Золотарева и др., 1993).

Исследование противоопухолевого действия лактобацилл "Нарине" проводилось на крысах с перевиваемыми опухолями - КСУ, ЛСП и ОЯ. Результаты экспериментов, проведенных на 80 крысах Вистар. показали, что введение лактобацилл за б суток да перевивки опухолей, а затем ежедневно достоверно удлиняет СШ крыс на 31-35/. при солидных опухолях и на 22'/- при ОЯ. Введение лактобацилл в день перевивки опухолей и далее ежедневно недостоверно удлиняет СПШ крыс на 21-27'/. (КСУ и ЛСП) и на I8X (ОЯ)- Воздействие лактобацилл в более поздние сроки, а такие введение убитых лактобацилл не оказывало противоопухолевого эффекта.

Изучалось комбинированное действие лактобацилл "Нарине" и химиопрепаратов на среднюю продолжительность жизни крыс с перевиваемыми опухолями КСУ, ЛСП и ОЯ- Лактобациллы вводились внутрижелудочно крысам на 2-3 сутки после перевивки, когда опухоли стали прощупываться (КСУ, ЛСП) или через сутки посла введения клеток ОЯ- Лечение химиопрепаратами начинали такав в эти сроки, и вводили их в/б, через день (Цф в дозе 25 мг/кг х 3|

натулан - 10 мг/кг к 4; тиоТЭФ - I мг'кг х 4). Всего было использовано 154 крысы.

Результаты экспериментов показали (табл. что во всех

случаях СГОН крыс, получивших лактобациллы и химиопрепараты, достоверно превышает СГОК животных. получивших только химиопрепараты.

Таблица 26.

Сочетанное действие лактобацилл "Нарине" (НН) на среднюю продолжительность жизни крыс-опухоленосителей

Опухоль Группы крыс Число крыс СП».сутки Удлинение СПЖ,7-

КСУ 1 . Конт роль Ю 13.6+1.о -

2. ЦФ Ю 24.5+1.8* во

3. НН Ю 16.6+1.4 22

4. НН + ЦФ Ю 32.2+2.О* 136,8

КСУ 1 . Контроль 6 14.5+1.1 -

2. НН 6 17.5+1.3 21

3. Натулан в 23.0+1.3* 58

4. НН+натул. н 6 31 .5+1 .2* 117,2

5. ТиоТЭФ е 24.0+1.2* 68,1

6. НН+тиоТЭ< е 29.1+0.9* ЮО,1

лсп 1. Контроль в 13-5+1 .1 -

2. НН 6 16.8+0.8 19,3

Э. ЦФ 12 21 .6+1 ,1 * 60,7

4. НН+ЦФ 12 27.6+1.8* 104, 4

оя 1. Контроль е 13.5+0.7 -

2. НН ю 1 8.3+1 .2 17,6

3. ЦФ 12 24.8+1.0* 60

4. ЬН+ЦФ 12 29.6+2.0* 119,3

Примечание: * р<0,05 по сравнению с соответствующим контролем

- 6У -

Действие препарата "Бифицумбактершг и химиопрепаратов проводилось на крысах с саркомой 45. Использовались те же дозы и схемы введения препаратов, что и в предыдущем эксперименте. Изучалось также противоопухолевое действие адрийластина (2 мг/хг х 3).Противоопухолевый эффект оценивали по индексу торможения роста опухоли.

Результаты экспериментов показали (табл. 27) что препарат "Бифидумбактерил" достоверно усиливал противоопухолевый эффект химиопрепаратов. 'Лактобациллы снижали массу опухолей на 32,4*. натулан - на 44 - б''., и оба фактора вместе - на 67,6'/.. При использовании в адрибластина были получены следующие результаты» торможение роста саркомы 45 при действии "Бифидумбактерина" не наблюдалось, при действии адрибластина ИТ =37,8?.. Сочетание антибиотика с лактобациллами повысило ИГ до 57,3"/..

Таким образом, результаты экспериментов, проведенных на 210 крысах, показали, что лактобациллы могут усиливать противоопухолевый эффект химиопрепаратов- •

На 36 крысах изучено влияние "Нарине" на острую токсичность ЦФ и тиоТЭФ, которые вводились в дозах, эквивалентных ЛД50.

Таблица 27.

Сочвтанное действие препарата "Бифидумбактерин" (БФБ) и химиопрепаратов на рост саркомы 45

Группы |1 1исло | Средняя масса | Индекс тормо-

крыс крыс опухоли, Г жения, х

1. Коптроль 8 14,8+1,о -

2. БФБ 8 10,2+1 .2* 32,4

3. Нотулан 8 в,2+0.о* 44.6

4. БФБ+натулан 8 4.8+0.&* 87,0

1 . Контроль 6 11,2+1.а -

г. бфе 6 11,9+1,9 -

3. Адрибластин 6 7.0+0,8* 37,8

4. БФБ+адрибласт 6 4,8 + 1 .0* 57,3

Примечание-. *р<0,05 по сравнению с соответствующим контролем

Показано, что введение лэктобадалл за 3 суток до введения химиопрепаратов и далее ежедневно, удлиняло достоверно ОТ крыс на ее.г67. (Щ>> И 38,77. {тиоТЭФ).

Обобщая вышеописанные исследования, можно констатировать, что лактобзциллы не обладают мутагенностью, снижают кластогенную активность и токсичность ксенобиотиков, обладают слабой противоопухоловоя активностью и усиливают противоопухолевое действие химиопрепаратов.

Изложенное выше дает основание рекомендовать применение лактобацилл с целью снижения побочных эффектов комплексной терапии злокачественных новообразований.

Вывода

Изучено влияние ряда биологически активных агентов (туляремияная живая <ТВ) и убитая вакцины сУТВ). белковый экстракт пуповины человека. лактобациллы "Марине" и "Би^идумбактерин") на мутагенез, канцерогенез и эффективность лечения опухолей у грызунов с целью разработки оптимального комплекса тест-систем для их оценки.

I. Выявлено, что как ТВ. так и УТВ не индуцируют повреждений хромосом (то есть не обладают кластогенной активностью). Превентивная иммунизация ТВ приводит к достоверному снижению кластогенного эффекта циклофосфана и хлоропрена в сочетании с рентгеновским излучением, циклофосфана. тиоТЭФ. адрибластина. бензола, бензидина. 4-аминобифенила,

рентгеновского излучения, а также йода-131 и противокоревой вакцины Л-16 в соматических и половых клетках грызунов. Антимутагенный действие ТВ у крыс и мышей проявляется с 10х суток после их иммунизации и длится 15-25 суток, отличаясь от таковой УТВ, оказывающей антикластогенное действие только в течение 48 часов. Антикластогенный эффект достоверно усиливается при сочетании ТВ с некоторыми антимутагенами (судан т, поливитамины "Ровит", препарат "Лоштак")•

2- Показано статистически значимое снижение токсического

эффекта циклофосфана. адрибластина, гч-нитрозометилмочевины, тиоТЭФ и н-нитроэодимэталамшга при иммунизации крыс за 15 суток до введения химических соединений. Аналогичное действие УТВ отмечено при ее введении животным за сутки до ин'екщи ксенобиотиков. Обе вакцины более эффективны в отношении химических агентов, биологическое действие которых проявляется после метаболической активации.

3. Радиорезистентность крыс достоверно повышается при их иммунизации ТВ за 15 суток до однократного общего рентгеновского облучения дозами 6 Гр и 8 Гр, что не наблюдается при облучении ' дозой 10 Гр (ДД 100). Статистически значимый радиопротекторный эффект наблюдается и при облучении иммунизированных крыс дозой 2 Гр. а затем 6 Гр с перерывом в 15 дней-

4. Выявлены знтикластогенный и антиканцерогенный эффекты ТВ при иммунизации подопытных животных за 15 суток до введения 7.Т2-ДМБА. м-нитроддаютиламина, м-нитрозометилмочевины и уретана. Наиболее выраженное антиканцерогенное действие выявлено, при иммунизации крыс ТВ за 15 суток до введения 7,12-ДМБА и их ревакцинации через 3 месяца. Иммунизация грызунов через 3 суток после введения 7.12-ДМБА (воздействие на фазу промоции канцерогенеза) также приводит к достоверному антиканцэрогениоиу эффекту. Иммунизация ТВ после образования опухолей, индуцированных 7.12-ДМБА- достоверно удлиняет среднюю продолжительность жизни крыс и снижает массу новообразований.

5- Установлено: что возможными механизмами антикластогенного. антиканцерогенного, радиопротекторного и антитоксического эффектов ТВ является повышение резистентности ДНК клеток к действию генотоксикантов. повышение активности антирадикальных ферментов каталазы и супероксиддисмутазы, а такжа снижение активности системы цигохрома Р-450-

6. Выявлено достоверное усиленно протиьооцухолево1 о действия циклофосфана, тиоГЭФ, адрибластина, аклакура, митомицина С и натулана, иммуномодулягора ОК-432 и радиотерапии у иммунизированных ТВ и УТВ крыс-опухолэносителей- Внутрибршшное и внутриоцухолевое введение ТВ, в отличив от накожной иммунизацииг статистически значимо удлиняют среднюю продолжительность жизни крыс-опухоленосителей. Важную роль в

противоопухолевом действии ГВ при ее интр'атуморальном введении играет кластогенный эффект в опухолевых клетках. У иммунизированных ТВ животных, в отличие от неиммунизированных, цитогонетическое действие циклофосфана и фарморубицина на опухолевые клетки достоверно усиливается, одновременно снижаясь в миелока'риоцитах. По противоопухолевой активности УТВ схожа со стрептококковым препаратом 0К-432-

7.Показано, что белковый экстракт пуповины человека в высоких дозах не повышает уровень хромосомных аберраций в клетках костного мозга грызунов и полностью лишен канцерогенной активности.Вместе с тем он достоверно снижает кластогенный и канцерогенный эффокт бензо(а)пирсна и 7Д2-ДМБА у подопытных животных•

8.Обнаружено, что молочный продукт "Наринэ" и препарат "Бифидумбактерин" обладают антикластогенной, антитоксической и щютивоопухолевой активностью. Методом микрогельэлектрофореза (••сошоь ^55«") показано, что лактобзциллы "Марине" защищают ДНК клеток крыс от гонотоксического действия канцерогенов. Оба штамма лактобацилл способны усиливать противоопухолевый эффект химиопрепаратов. широко используемых в клинической онкологии (циклофосфана. адрибластина, тиоТЭФ и натулана)-

9.Основные положения проведенного исследования могут служить методологической основой для изучения возможной антиканцерогенной активности химических агентов по их энтикластогонным свойствам-

Список работ, опубликованных по томе диссертации

I. Зильфии В.Н-. Норсесян А-К-. Кумкумаджян В.Л- О некоторых механизмах повышения резистентности организма крыс, иммунизированных туляремийной вакциной ' при канцерогенезе и мутагенезе// Актуальные вопросы онкологии. Доклады научной конференции ОНИ- Ереван, 1986, с. 24-26

2.3ильфян В-Н.. Кумкумадаян В-А., Нерсесян А.К-Антителообразование у крыс, иммунизированных ТВ при развитии зецитной гепатомы Зэйдела и лисфосаркомы Плисса// Актуальные вопросы онкологии. Доклады научной конференции ОНИ. Ереван, 1986.

с. 24

3- Зильфян В-Н-, Нерсесян А.К. Повышение радиорезистентности лабораторных животных с помощью ТВ// Актуальные вопрось радиационной гигиены. Тезисы докладов Всесоюзной конференции. Москва. 1987. с. 90-91

4- Зильфян В.Н., Кумкумадаян В. А., Нерсесян А-К. Усиленна противоопухолевого и снижение побочного действия циклофосфаяа у крыс под влияние ТВ//Актуальные вопросы химиотерапии опухолэй. Материалы ш Всесоюзного совещания- Черноголовка, 1987, с.209-210

5. Зил1>фян В-Н-- Нерсесян А-К.. Кумкумаджян В-А- 0 защитном действии иммунизации на мутагенез. индуцируемый сочетанием некоторых физико-химических факторов//Экспериментальные исследования гигиенических аспектов комбинированного и сочетанного воздействия физических и химических факторов, Москва, 1987г C.IT0-II5

6. Кумкумадаян В. А., Зильфян В.Н., Нерсесян А-К. Снижение токсичности и мутагенности циклофосфана у крыс иод воздействием ТВ.// Хим.-фарм. журнал, 1У88, т. 22.n 5, с- 526-529

7. Зильфян В-Н., Нерсесян А-К-, Кумкумаджян. В.А- Снижение датогенетического действия физических и химических факторов в половых и соматических клетках крыс, иммунизированных ТВ//Действие малых доз ионизирующих излучений на гонады и плод. Материалы m Всесоюзной конференции. Обнинск, 1988, с. 22-23

8. Нерсесян А-К., Meлик-Шахназарян Р-Б-, Прошпн Н-В- Спектр ЛДГ в органах крыс-опухолоносителеа- иммунизированных ТВ//Нэкоторыв современные вопросы клинической и экспериментальной медицины, Ереван, 1988, C.T09-II0

9. Кумкумадаян В.А., Нерсесян А-К. Сочетанное действие ТВ и некоторых циггостатиков на рост карциносаркомы Уокер// Материалы научной конференции 01Щ. Ереван, 1989, с- 108-110

10. Нерсесян А.К., Арутюнян P.M. Мутагены и канцерогены применимость средовых оценок к Армянской ССР// Биолог. ж. Армении- 1989, т. 42, N5- с- 499-504

П- Зильфян В-Н-, Кумкумадаян В-А-, Нерсесян А. К. Противоопухолевое действие ТВ при интратуморальном введении//Эксперим- онкология, 1989, т-II- n I, с. 78-79

- 7'i -

12. Зильфян b-li.r Нерсесян A-K-. Кумкумадаян В-А-, Прошян H.B. Цитогонетичоскоо действие противоопухолевого антибиотика аклакур// Всесоюзный симпозиум "Об'ем и методы генетической оценки билогически активных веществ". Ленинград, 1889, с. 43-44

13. Зильфян В-Н-- Кумкумадкян В.А.. Нерсесян А.К- Действие ТВ на опухоли, индуцированные ДМБЛ У крыс//Вопросы онкологии. 1989, Т.35. м 4. с. 484-485

14. Нерсесян А.К.. Прошян Н-В., Хачатрян Г.А- Питогенетическое действие противоопухолевого антибиотика 4-зпидоксорубицина//Антибиогики- 1989. N 3, с. ЯШ 217

15- Зильфян В-Н.. Кумкумадаян В.А.. Нерсесян А-К., Тонапетян Х-А-Влияние ТВ на радиоустоячивость организма белых крыс при рентгеновском облучении//Гадиобиология- 1989, т. 29, n i, с.

113-116

16. Нерсесян А-К-. Зильфян В.Н., Кумкумадаян В.А- Снижение цитогенетичоского действия адрибластина и фарморубицина с помощью ТВ в эксперименте//Цитология и генетика- 1989. т- 23. N4, с.

63-65

17. ItopcocHH A.K.. Кумкумадаян В.А-. Зильфян В.II. Изучение цитогенетического действия рентгеновского облучения на миелокариоциты крыс, иммунизированных ТВ//Цитология и генетика, 1989. Т. 23. N 6, С. 15-18

18. Норсесян А.К. Мутагенность канцерогенных доя чоловокаагентов природного происхождения//Эксперим. онкология,1990,т-12,n I.e.3-6

19. Нерсесян А-К. Мутагенность канцерогенных для животных агентов природногопроисхождония//Эксперим. онкология, 1990,т.12,N5.c-7-II

20- Нерсесян А.К.Связь противоопухолевой акгивности 4-зпидоксорубицина с нарушениями генетического аппарата опухолевых клеток в эксперименте//Антибиотики, 1990,n 4. с- 39-40

21- Мкртчян Л.Н-- Тер-Погосян З.Р., Нерсесян А-К-. Петанова Э-В-Противоопухолевое действие экстракта пуповины человеческого плода// Вопр. ОНКОЛОГИИ, 1990. n Зй. n g.-c. 956-960

22. Нерсесян А-К. Действие судана ш и ТВ на мутагенность циклофосфана// Методические и методологические вопросы генетики, п/р H.H. Ильинских- Томск. 1990. с. 123-125

23. Зильфян В.Н., Нерсесян А-К.Цитогенетическая активность противоопухолевых препаратов акларубидана и аранозы//

Методические и методологические вопросы генетики, и/р Н-Н. Ильинских. Томск, 1990. с. 123-125

24. Зильфнн В-Н-, Перевеян А.К., Кумкумадаян В.А- Действие ТВ и митомицина С на асцитную гопатому Зайдела/ / Экспорим. и клинич. онкология, т. I, Ереван, 1990 с- 76-77

25. Нерсесян А-К., Кумкумадаян В.А- Цитоганетичвское действие противоопухолевые антибиотиков аклакура и акларубицина// Эксперим. и клинич. онкология, т- I, Ереван, 1990, с- 76-77

26. Зильфян В.Н.. Кумкумадаян В.А-. Нерсесян А.К- Усиление противоопухолевого действия лучевой терапии путем иммунизации крыс ТВ// Мед. радиология, 1990, т. 35, n Ю, с-6

27- Нерсесян А-К., Зильфян В-Н., Кумкумадаян В-А- Снижение цитогенетического действия 3 нитрозосоединений в костномозговых клетках крыс, иммунизированных ГВ//Эколого-генетический мониторинг. Материала Всесоюзной конференции,КарагандаЛ990,с.82.

28. Мегьет.ыап А.К.. Zilfian V.N., Kuoikumad i an V.ft. The effect of tuUrmia live vaccine on DMBA-induced rat tumors//Antic»near Research, 1990, v. 10, N 5, p. 1454

29-Зил!;фянВ-Н. .НерсесякА.К., КумкумаджянВ-А.Снижение мутагенного действия циклофосфана у разных видов лабораторных животных, 1 иммунизированных ГВ//Биолог. Армении, 1990, т.43,м9, с. 796-797

30. Нерсесян А-К., Зильфян В-Н., Кумкумадаян В. А. Цитогенетическое действие циклофосфана на миелокариоциты и клетки рака яичника крыс, иммунизированных ТВ//Эксперим. онкология, 1991, т.13, N 2, с.67-70

31. Nersessian А.К.. Zilfian V.N.. Koumkoumadj1 an V.A. Inhibitory effect of rat imuiuni2<>t 1 r>n with tularemia vaccine on the in vivo clssluueiiicily of a anthrdcvrline antibiotics//Mutation Teats.( 1991. v. 360, N 7, p. 215-218

32- f-Urtchisn l.n.. nnrbiissian a.k". The ontidastogenic and an 11 u лг с. i iiout-n i с action of human umbilical cord e>; tr ac t//Abs trac ts of 3rd International Conferentt' on Mft tiaiiisns of Ari t icarc inigenesis aiid Antimutagenesis. Lucca , I ta 1 у, 1991 ,p. 127.

33- Nersesbian A.V. Tularemia vaccini? protects against с lactogenic action of с ус lophosphamide//I?l ¡.t Annual Meeting of EbMS. Prague. 1991. p. 1-31

o4. Nf>rsebbi«an А. к. The clastoqenic activity of tobacco smoke of Armenian сîuarettes//21st Annual Meeting of EEMS.Prague.1991,p B-4S

35- Нерсесян A-K-. Зильфян B-H-. Кумкумаджян В. А. Сравнительная цигогене-тичоская активность некоторых противоопухолевых препаратов// Биолог, ж. Армении- 1991, т- 44, и 2, с- 145-147

36- Нерсесян А-К- Чувствительность цитогенетических тестов in vivo, используемых при изучении канцерогенных для человека агонгов//Эксперим. онкология. 1991. т- 13. n 6. c-7-II

37. Нерсесян А.К. Чувствительность цшогенотических тестов in vivo в выявлении генотоксичности 50 канцерогенных агентов//Эксперим. онкология. 1992, т. 14, Т 2. с. 3-8

38. Nersessian А.К. Activitv of human carcinogens m the Sa 1 niciiipl 1 а and rodent bone marrow cvtooi'fiet ir. tPstc//Mulation. Кеч. . 1991*. v. 201. N 4. a. 239-24"

39. Норсосян А-К. Кластогенное действие канцерогенов на соматические клетки человека и грызунов-'/Эксперим- онкология, 1992-т- 14. N 4- с. 14-18

40- Нерсесян А-К., Зильфян В-Н-. Кумкумадаяп В.А- Снижение токсичности и мутагенности фармарубицина у крыс, иммунизированных ТВ//Экспер. и клинич- фармакология, Iî)92,t-I,n3,c-78, (jQen-N2I76-B)

41 .Ner sessi an A. Zilfian V.N. . Koumkoumadjaan V.A. Comparative investigation of cvc1oohosDhamide action on bone marrow colls of the Armenian hamster and 4 oth(-»r sopcips of r otb-n I ь//Mu ta t ion Res.. 1992, v. 26B. N 7. p. 7 11-215

42- NersEssian A.K. Combinedaction of 2 an t i mu tagens on сvcluphosohsmide-induced с 1 astooenicitv//22nd Meeting of EEMS.Berlin,1997,oBB

43- Nersessian A. К. r Zilfian V.N. Decrease of clastogenic action of "5 human carciniaens in mice immunized with tularemia

ф

vacс ine//22nd Meeting of EEMS, Berlin, p. 89

44- Nersessian A. t'. The ncssible clastogenic and an 11 с 1 as. togen ic action uf fi'rmpriled rni 1 k "Nar i ne"//Abs trac ts . "I Dot) and Cancer Prevention". Internationa 1 Co'ifprence. Norwich. UK, 1992, p.104

45- HersB«idn F.k., 7ilfian V.N., Koumkoumadjinn V.A. Combined action of сvc1 rmhiisphemide and tularemia vaccine nn rat tumors//

Atis tr rie t.s . 4th International Сопдгеьь «jri Anti-Cancer

Chemotherapy. Paris, 1993. p. 1B0

48. Мкртчян Л-Н-, Норсэсян А. К. Влиянии иммунизации мышей экстрактом пуповины человека//Генетика/ 1993, т- 29, ы 5, с.

866-868

47- Нерсесян А. К. Мутагенная активность микроорганизмов // Цитология и генеТика, 1998, т. 27. n Г, с- 96 (Деп. n 3562-В92)

48- Нерсесян А.К- Применение краткосрочных тестов ' для экологической экспертизы и оценки канцерогенной опасности химических агентов//Теория и практика комплексных экологических экспертиз, С.-Петербург, 1994, сю 71-72

49- Мегь е^ы an A.»'. Possible clastogenic and an t ic I autogenic action of feriMjiited lulk "Nariiie"//"Food anil Canter Prevention» Chemical and Biological Aspects" (K,W. Haldron, Ed.), Royal îirir. ii?tv uf ChenusLrv, Cumtiridne, 1993. p. 62-64

50- Nt?ri>ubi>iaii A.K., ftrutvunyan R.M. The comparative clastogenic cictivjtv of mainstream tobacco smoke from cigarettes widely сапытн-'d in firmtnid/ZMiitation Res., 1994, v. 321, Ы 1, p. 69-92 5T- lifcr best (an А. К . ,flouradian R.E., Zilfian V.N., koumkoumedjian V.A. Inhibition of carcinogenic and clastogenic effects of N-NDliA in rats immunized with tularemia live vaccine//Abstracts of XVI International Cancer Congress,1994, New Delhi, India,p. 355

52- Nersessian A.K. Clastogenic action of thiotepa an bone «arrow cells of the Armenian hamster/ZMutation Res.,1994, v.322, D. 2(37—290

53. Ml rtehian L.N.. Nersessian А.►Г. Antiс 1 astoqenic action of human umbilical cord extract/ZBLil1etin of the Genetics Society of Canada, 1994,v. 25, N 1. o. 42

54. terbessian A-K. Aritl с 1 astaaen 1С action of 2 strains of 1actobacl11i//Bulletin of the Genetics Society of Canada, 1994,

N 1 , p. A 2

55. Merscssian A.K., Mourailian R.E. The influence of tularemia vac- cine and cyclophosphamide on 7,12-I}MBA-induced rat tufnors//5th International Congress on Anti-Cancer Chemotherapy, Par lb, 1995.p 194

56. Нерсесян А.К- Модификация кластогенного действия iI3I клетках костного мозга крыс, иммунизированных ТВ//Цитология и генетика,

1094. T. 28. n 5. c- 3-5

57. Nerseisiari A.*... Mouradian K.E.. Zilfian V.U.. Koumkoumadjian V.A. Inhibition of carcinogenic and c1astogenic effects of N-NDMA in rats immunized with tularemia vaccine//Pfocewligs of the XVI ICC R.S..Rai> (t'il.l. Moriduzzi Editore. Bologna, Italy, 1994, p. 99-lo?

58. MV rte hi ort L.N.. Ner sessi an A . (■ . . Pänasun A.G. The effect of Loshtak I» r t?nar a t ion on t hp c 1 autogenic activity of eye 1 oohosnham ide/ / Russian Journal of Genetics, 1995, v. 31, N 5. n. 779-731

59. Nerses^ian A. t.. Zilfiari V.N.. t.oumfcoumadj ian V.A. Combined action of cytostatic drugs and lactobacilli on rat tumors//5th 1 n ter na t iciiia 1 Congress on Anti-Cancer Chemotherapy, Paris, 1995, p. 191!

./ü- Ni?r=.essian A.K.. Ayrapetian L.G. Increase of antitLimor action of aittlira^vcl itie antibiotics bv means of Bi f idumbac ter in// 19th Irilcriiiitinn.il Congress un Chemotherapy. Montreal, Canada, 1995, D. 4i)70

61. Mkrtchian L.N.. Ter-Pogossian Z.R., Nersessian A.K. Inhibition of carcinogenic and clastogenic effects of benzo(a 1ovrene in rats immunized with human umbilical card ex trai:t//Anticanc-er Research. 1995. v. 15, N 15A, p. 17B2

62. Nersessian A.K. Modification of clastooenic and carcinogenic effects of 7.12-DMBA in mice immunized with tularemia live vacc ine//An ticancer Research, v. 15. M 15A, p. 1785

63- NprsKii.vi A.K.. Mourfldiiii R.fF. The r. t.udy of possible car r ) nogei I ' r ami r lactogenic action of "Loshti>( " preparation// ftitiiantfr titwnrch. 1975. v. 15. N 15A, p. 1824

64- Nersessian A . . . Mouradian R.E. Combined action of Dif idiiinbac ter in and cytostatic drugs ..on rat tumors// 6th

International Congress on Anti-Cancer Treatment.Par is,1996,p.206.

«

65* Nersessian A.K. Increase of antitumor action of drugs by tularemia killed vaccine// feth International Congress on Anti-Tamer Treatment. Paris. 19?/), a.211

6ß. Mkrtchifii I.N.. Ter-Pouossian Z.R., Nersessian A.t., karalian Z.A. Anticancer and antitumor effects of polyvalent pmbr vusopr.if ic vaccine// fSt.h Internationa 1 Congress on

- 7'J -

An t i-f.'nncer Treatment. Paris. 1996. p. 102

67- NBr'-f-Si,] an A.K.. 1 F-r -Punossi an Z . ft . Prevention of mammary о I aiul r. m с l lingeries ib//' 21bt Meeting i>f tliu International Association tnr Breast CariLtr Kciearth, Par i ь, 1996, p. OH

C8- Нерсесян А.К. Микроядра в эксфолиатиьных клетках как метод изучения мутагенов/канцерогенов//Цитология и генетика, 1996, т.

ЗП. n i>. с. 91-9*6

69- Нчг1 ¿in А.К., Monradian ft.E. The influence of immunization w 1 f h I и I .irtmi л 1 ive varcii.e on (liii i 1 o-.i» ui)em r action of cvc 1 odIioe ohainide in mice// Mutation Researcli, 1996, v. 274, N 3, D. 311-314

7U. Нерсесян A-K-- Зильфнн B-H-. Кумкумядаян B-A. Действие лагстобацилл на мутагенную и противоопухолевую активность химиопрепаратов// Тезисы ЮЗилейноа научной сессии 01Щ им- В.А. Фанарджяна, Ереван, Ш)6, с- 139-141

71. Нерсесян А.К., Зильфян В.Н., Кумкумадаян В-А-, Мурадян Р.Е. Антимутагенное и антиканцерогенное действие туляремийной вакциныее Материалы i с'езда онкологов стран СНГ, Москва, 1998,

с. 67-(58

72. Ner bL-bbian А.К.. Mcjuradian R.E. Aupl icat ion of tularemia Killed v^c:cine in cheriititherapv of experimental tiiiriors/ZAbstract» of 7th П.,ЛСТ. Paris. 1997, p. 238

73. Ml rtr.hu« L.N., Nersessian A. К . . Tt-r -Pogossian Z.R. С1 as tont?ri i с and ant 1с 1 astnocnic action of polyvalent crnbr vubi ei i f il Kiiticani er vacc l r.t,//Atis tr ac t «. of 7tl> ICACT, Parli, 1997. u. 239.

Ььгиьиваь ис-иоь tjnUJSU^Sbl/h

ьч чиъоигпадгьаь ип-м-ьь^ивниг. nrnc чьъииоиъпрьъ U4sh4 иатцъьгпч

ииоофши

Hiimnílauu(ifii|l4 t npiij IjUjuujpuitniphh uilpnlii] ицгщ^ЬЬгф

( inmiujpbiíliiujf» i|uitfgf>[ixn, i/uiptjm 1Г{пр[лццшр)| iTqiJujftp, [Uilfnnpaflfijbfcp

cUuiphbb» Ii «Pt^tuyiiiti'UjljuiLplili»1 iuqi)tgmpjniln¡ i/noniuqblibqj) ü

|риЦ)Ьрп<)ЬЬЩ> i)pur. <J>npitp[> l]unnuipi)b| Ui uuflimml) umbt.mbhp)i Ii ¡¡¡¿¿зф, 6iuJuijunqnU]tiLpfi Ii qnpj hunluinLp|iIjItbpti ijpui: ПрцЬи dni[nii:;!,!;!iL(i оцшшцпр&ЦЦ Lli IijnipLp, Ьш1[Шпиаидри1](|Ь цЬципГ^^чЬ^р,

nUsnqLlijuili ¿umtuqiujpbbp, 1131 Ь i)ti[iniuU,p:

'Чшрц^Ь^ t, np inniiiuptiittmjti ijiulfititmiinij (iiiniîi(iqiiJt)i(aiS ilnui qquqJinpUi JijltnitJ t lintuiiuqUi шццшЦЪЬрш] иипшлшдЦшб pfmiInur.-Ju;jt>Ij luuipuipiuiJlibpfi PMg ипйшифЦ Ii ubmulprli p$j>gbb[>iiiil, JiIj^ujLu fciub ЫиЦиппфпрЬЬ nidbquiImuT t njurç huilpuiimmuiqljitilipli ujqriUpip;r.ib[i:

UnüUnbtif^i ijujljgtiliujgjiuili uuuiijq ршрДршдТти! t; bpuifig Ipiijmlinipjmlii) рЬщЬй nbbuiqUijuiti áuirxuquijplitpji U npnç pmlnmjnp lijmpLpJi: ЧиЛ^фЬи^шЪ фпрДЬш!рдЬ 1{Ь1п)ш14>ЪЬ[1{1 ilran lifbglirml l, ршцд1|1цшй|1й b]n:ptniuj

mraiymulmü пшпцдеЫр)) ilJut'b pui2[i, Lqiuibg pl'<lc uiujjipbp opquü^-uiul

( IpirptiUJqiJiALp, pnptp, tp|il(uiiitib[i, Llfpu/ilarçljuijlili ), itykUmjIi diitîojLTijlj

Ьр1^шршд11Цт( nmiigplibpti tumugoigiluili йилЩЬтц:

Ifiupijjii upipuiiDjiupli üqi]iu6pQ ljp&m|Iibph ilnm qquijfuiptli JçLglmuI t ptiifyuiljujb tijmpLpniJ umujjuigiJuifi pjuiiínuntíui]|ili juuipujpniiilibptt Ii puiliuilj[v. Uhülmijh dunjuibuilj hujplj t b¡l>i. np uijli осЬлЦшй ¿t, linimuiqU: b

ршцдЦЦиЗДЬ huimlpupjmWiLpiu}:

Цшр1п11}»рЦш][111 piugtutitp' <Чдир|<ЬЫ1> ü «Р[4>ЬфЧ1/рш1|1лЬ11(Жц»

Ьш^шш/ф nutbqiugtimil ЬЬ huilfunmmgpaijlili i)bi)iinl])¡nglikpti mqhg^idf ujqi)bgnipjnilic, о<}ин|шй Uli huiljuiifniinujqbli h huiljuminmopuiifili

huiuilfiipjniUiUpni|: XiJ^ujü Ijuipliuij» p i|ujj fiti ршд^фЬрц ЦшрЬ^ L oquiuipribi lflfibJilpjijnnf huiljiunvinujpiujlib i)bi)unfy)¡figlibpti uipíjjmUunJtmn'.pjr.iüp

ршрЛршцЬЦт ínijunnuiljm):

"liiqiqitbi I,, np шшррЬр tjUiuuipiiilmpbti uit|iji|ii| uiqrjuiljTil<pti hmljtiiiiniuiLUqLIi Гшлл1ртвдшШ>[ф типиЛтлфртвдшЬЪЬрц t|uipnr¡ bli

Ipulituujqiii2u]l|l4 Upuihg hujlpiiljuiligbpiiqbli hurmljujtilijlitpfi bbplfiijnipjniljQ: