Цито-физиологические особенности морфогенеза in vitro андроклинных каллусов пшеницы

Зайцев, Денис Юрьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Цито-физиологические особенности морфогенеза in vitro андроклинных каллусов пшеницы
ВАК РФ 03.00.12, Физиология и биохимия растений

Автореферат диссертации по теме "Цито-физиологические особенности морфогенеза in vitro андроклинных каллусов пшеницы"

На правах рукописи

Зайцев Денис Юрьевич

ЦИТО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ МОРФОГЕНЕЗА IN VITRO АНДРОКЛИННЫХ КАЛЛУСОВ ПШЕНИЦЫ

03.00.12 - «Физиология и биохимия растений»

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Cv>

Уфа-2008

003455985

Работа выполнена в Учреждении РАН «Институт биологии Уфимского научного центра РАН» (лаборатория экспериментальной эмбриологии растений).

Научный руководитель кандидат биологических наук

Сельдимирова Оксана Александровна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, проф.

Шаяхметов Изгам Фазлиахметович

доктор биологических наук Максимов Игорь Владимирович

Ведущая организация: Санкт-Петербургский государственный

университет

Защита диссертации состоится «18» декабря 2008 г. в 14:00 ч. на заседании диссертационного совета Д 212.013.11 при ГОУ ВПО «Башкирский государственный университет» по адресу: 450074, г. Уфа, ул. Заки Валиди, 32, биологический факультет, ауд. 332.

Факс (347)-273-67-78, e-mail: disbiobsu@mail.ru.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Башкирский государственный университет», с авторефератом - в сети интернет по адресу: http: www.bashedu.ru/autoreferat/ autoreferathtm

Автореферат разослан « » ноября 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор биологических наук

Шарипова М.Ю.

ОЫЦАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Современное развитие инновационных направлений биотехнологии растений требует новых фундаментальных данных о морфогенезе как в естественных условиях, так и в культуре in vitro. Один из перспективных экспериментальных подходов к изучению тонких особенностей морфогенеза состоит в использовании андроклинных каллусов, полученных в культуре in vitro изолированных пыльников из микроспор/клеток пыльцевого зерна на основе биологического феномена андроклuiiini, или андрогенеза in vitro. Хорошо установлено, что клетки таких каллусов способны реализовать свой морфогенетический потенциал различными путями морфогенеза in vitro [Androgenesis and haploid plants, 1998; Plant Biotechnology.., 2004; Эмбриологические основы андроклинии, 2005; От микроспоры к сорту, 2008].

Несмотря на то, что к настоящему времени накоплен значительный фактический материал, касающийся различных аспектов исследования андроклинных каллусов, многие вопросы остаются открытыми. Так, недостаточно полно выявлены цито-гистологические характеристики андроклинных каллусов, способных к морфогенезу in vitro, а сведения об их морфологических показателях противоречивы. Не изучены инициальные клетки/группы клеток андроклинных каллусов, в которых индуцируются пути морфогенеза in vitro, и факторы, стимулирующие морфогенез этих клеток. Далеким от окончательного решения остается вопрос об участии фитогормонов в реализации морфогенетического потенциала клеток андроклинных каллусов. Полностью отсутствуют данные о локализации гормонов в каллусах (и не только андроклинных) в динамике развития in vitro. Недостаточно изучены цито-физиологические и цито-гистологические особенности путей морфогенеза in vitro андроклинных каллусов. Проблемным остается вопрос о возможности управления путями морфогенеза in vitro андроклинных каллусов.

В связи с этим цель исследования состояла в выявлении цито-физиологических особенностей путей морфогенеза in vitro андроклинных каллусов яровой мягкой пшеницы.

Для достижения цели исследования были поставлены задачи:

1. Изучить особенности формирования in vitro и цито-гистологический статус морфогенных андроклинных каллусов.

2. Выявить пути морфогенеза in vitro андроклинных каллусов и установить фитогормонапьные условия индукции каждого из путей.

3. Выявить участие цитокининов в морфогенезе in vitro андроклинных каллусов.

4. Исследовать морфологические и цито-гистологические особенности каждого из выявленных путей морфогенеза in vitro андроклинных каллусов.

каллусов в динамике развития in vitro: геммогенез, ризогенез, гемморизогенез, эмбриоидогенез. Установлено, что индукция определенного пути морфогенеза in vitro андроклинных каллусов определяется балансом ауксина ИУК: эндогенного (в каллусе) и экзогенного (в составе питательной среды). Установлена универсальность начального этапа всех путей морфогенеза in vitro андроклинных каллусов, состоящая в формировании в каллусе зоны меристематических клеток, преимущественно в которых локализуются цитокинины, а также показано участие цитокининов на начальных этапах всех путей морфогенеза in vitro.

Практическая значимость работы. Разработанный методический подход, позволяющий индуцировать желаемый путь морфогенеза in vitro андроклинных каллусов, может быть использован для увеличения выхода андроклинных растений-регенерантов яровой мягкой пшеницы в биотехнологических исследованиях, связанных с массовым тиражированием гаплоидов, и тем самым -для ускорения селекционного процесса по созданию новых сортов этого основного хлебного злака. Полученные результаты могут использоваться в учебном процессе на биологических факультетах ВУЗов.

Связь работы с научными программами. Исследования поддержаны РФФИ (гранты № 05-04-08114, 2005-2006 гг.; № 05-04-97911, 2005-2007 гг.; № 08-0497045, 2008-2010 гг.), а также выполнены в рамках программы «Ведущие научные школы РФ» (гранты НШ 2148.2003.4, 2003-2005 гг.; НШ 4834.2006.4, 2006-2007 гг.; НШ 2096.2008.4, 2008-2009 гг.) и ГНТП Академии наук Республики Башкортостан (проекты № 17/5-Б, 2005-2007 гг., № 40/40-П, 2008-2010 гг.).

Личный вклад автора состоит в анализе литературных источников по теме исследования, получении и анализе экспериментального материала, описании результатов исследования, участии в формировании выводов.

Обоснованность выводов и достоверность результатов работы обеспечены значительным объемом экспериментального материала и применением современных математических методов, а также использованием современных методов цито-гистологического анализа с высокой разрешающей способностью.

Реализация результатов. Полученные результаты используются в работе базовой кафедры биотехнологии растений Башкирского государственного университета при Институте биологии УНЦ РАН.

Апробация работы. Результаты исследования представлены III (Москва, 2005) и IV (Пущино, 2006) съездах Общества биотехнологов России; I (Санкт-Петербург, 2005) и II (Уфа, 2007) международных школах молодых ученых «Эмбриология и биотехнология»; международной конференции «Генетика в России и мире» (Москва, 2006); X международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2006); Всероссийском симпозиуме «Биология клетки в культуре» (Санкт-Петербург, 2006); XIV (Москва, 2007) и XV (Москва, 2008) международных конференциях молодых ученых «Ломоносов», II съезде Общества клеточной биологии (Санкт-Петербург, 2007); III всероссийской научно-практической конференции «Проблемы экологии Южного Урала» (Оренбург, 2007); IV международной конференции «Факторы экспериментальной эволюции организмов» (Алушта, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 28 работ, в том числе 2 статьи в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК МОП РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 167 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания объекта

и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, заключения и выводов. Список литературы включает 378 работ, в том числе 244 работы зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 51 рисунком и 5 таблицами.

Искреннюю благодарность автор выражает: к.б.н. O.A. Сельдимировой за руководство выполнением работы; чл.-корр. РАН, зав. лабораторией эмбриологии и репродуктивной биологии БИН РАН проф. Т.Б. Батыгиной и в.н.с. этой лаборатории к.б.н. Г.Е. Титовой (г. Санкт-Петербург), с.н.с. лаборатории физиологии растений ИБ УНЦ РАН к.б.н. Л.Б. Высоцкой, д.б.н., проф. H.H. Кругловой за большую помощь и ценные научные консультации; а также всем сотрудникам лаборатории экспериментальной эмбриологии растений.

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Объектом исследования послужили 3 сорта (Скала, Жница, Московская 35) и гибридная линия яровой мягкой пшеницы Фотос, характеризующиеся высокой частотой образования in vitro андроклинных каллусов и интенсивно использующиеся в селекционной практике Башкирского НИИ СХ РАСХН.

Детальные цито-гистологические исследования выполнены на растениях и андроклинных каллусах гибридной линии Фотос. Использованы метод культуры in vitro изолированных пыльников яровой мягкой пшеницы с учетом эмбриологических данных [Круглова, Батыгина, 2002], методы световой [Паушева, 1988; Барыкина и др., 2004] и сканирующей электронной [Миронов и др., 1994] микроскопии, метод твердофазного иммуноферментного анализа растительных образцов [Кудоярова и др., 1986; 1990], метод иммунолокализации цитокининов [Веселов и др., 1999]. Препараты просматривали и фотографировали с применением микровизора проходящего света p.Vizo-103 (J10M0 ФОТОНИКА, г. Санкт-Петербург) при различном увеличении объектива. Статистическую обработку полученных результатов вели с применением программы Microsoft Office Excel 2003, учитывая основные статистические параметры.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Индукция формирования андроклинных каллусов in vitro на питательной среде Potato II На основании методологического подхода, разработанного для пшеницы [Горбунова, 1993], методом твердофазного ИФА провели анализ содержания эндогенного ауксина ИУК в пыльниках объектов исследования перед инокуляцией на питательную среду Potato II для каллусогенеза. На основании полученных данных изучаемые объекты условно разделены на высокоауксиновые (Фотос, Скала) и низкоауксиновые (Жница, Московская 35) (табл. 1), что позволило определить оптимальный диапазон концентраций экзогенного синтетического ауксина 2,4-Д в среде Potato II: 1.0-2.0 мг/л для высокоауксиновых объектов и 2.03.0 мг/л для низкоауксиновых объектов.

На 28-35 сут после инокуляции пыльников in vitro на варианты среды Potato II, различающиеся только концентрацией 2,4-Д, на их поверхности отмечено появление андроклинных каллусов двух типов.

Каллусы 1-го типа появлялись на поверхности пыльника на 28-30 сут культивирования и характеризовались белой матовой окраской, округлой формой и плотной компактной структурой (рис. 1а). Такая структура подтверждается данными СЭМ (рис. 16).__

Условные обозначения: ИУК - инд;олил-3-уксусная кислота, 2,4-Д - 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота, сут - сутки, СМ - световая микроскопия, СЭМ - сканирующая электронная микроскопия, ИФА - иммуноферментный анализ

Таблица 1

Содержание эндогенного ауксина ИУК в пыльниках исследуемых сортов и линии яровой мягкой пшеницы перед инокуляцией на среду Potato 11

Сорт/линии Содержание эндогенной ИУК, нг/г сухой массы

Фотос 389±63

Скала 368±54

Жница 64+10

Московская 35 71+11

Примечание: достоверно при 5 % уровне значимости.

Рис. 1. Морфологические характеристики морфогенного (а,б) и неморфогенного (в,г) андроклииных каллусов.

а,в - прижизненная съемка;

б,г - СЭМ.

Условные обозначения: К - каллус, 11л - пыльник.

Такие каллусы в первые же сутки от появления на поверхности пыльников переносили на среду для морфогенеза Blaydes. По мере культивирования на этой среде в каллусах были отмечены различные пути морфогенеза in vitro. Поэтому такой тип каллуса был определен нами как морфогенный.

Каллусы 2-го типа появлялись на поверхности культивируемых пыльников на 32-35 сут и характеризовались желтой окраской, неопределенной формой и мягкой рыхлой обводненной структурой (рис. 1в).

По данным СЭМ, такие каллусы также выглядят как структуры неопределенной морфологии, имеющие сморщенную поверхность (рис. \г).

Каллусы 2-го типа в первые же сутки от появления на поверхности пыльников также переносили на среду для морфогенеза Blaydes. Однако уже к 10 сут культивирования in vitro такие каллусы постепенно теряли тургор, их поверхность деформировалась, а клетки полностью дегенерировали. Этот тип каллуса определили как неморфогенный.

Экспериментально установлено, что концентрация 2,4-Д в среде Potato II, приводящая к формированию морфогенных и неморфогенных каллусов, различалась для изученных сортов и линии яровой мягкой пшеницы. Максимальное количество морфогенных каллусов у высокоауксиновых сортов формировалось при концентрации 2,4-Д в питательной среде в 1.0мг/л, у низкоауксиновых сортов - при концентрации 2,4-Д в 2.0 мг/л (рис. 2).

Цито-гистологический анализ развития морфогенных андроклииных каллусов in vitro на среде Potato II

На основании детального цито-гистологического анализа установлены основные этапы формирования и развития андроклииных морфогенных каллусов от инициальной клетки - сильновакуолизированной микроспоры.

Фогос

Скала

11 S 5 60

—г—I

концентрация 2,4-Д, мг/л

о с 5 1.о 1.5 го г& концентрация 2,4-Д, мг/л

Жница

Московская 35

г& 50

¡1 40

п 5 Si 30

? ъ II 20

R с. ~ о ? => 10

0.0 О 5 1.0 1.6 2.0 2.5 3.0 15 концентрация 2,4-Д, мг/л

03 05 1.Й 15 2.0 2.S 3.0 3.S концентрация 2,4-Д, мг/л

Рис. 2. Частота образования морфогснных андроклинных каллусов на питательной среде Potato II

Формирование каллуса начинается с симметричного (равного) митотического деления микроспоры, которое приводит к формированию двуклеточной структуры на 3-5 сут культивирования in vitro пыльников. В результате дальнейших клеточных делений на Ю-12 сут культивирования in vitro образуется многоклеточная структура, состоящая из 18-20 клеток, располагающаяся внутри оболочки микроспоры. Дальнейшие клеточные деления приводят к росту каллуса, который механически разрывает оболочку микроспоры и полностью заполняет гнездо пыльника к 20-21 сут культивирования in vitro. Дальнейшая пролиферация каллуса ведет к механическому разрыву стенки пыльника и появлению каллуса на поверхности пыльника на 28-30 сут культивирования in vitro.

Клетки морфогенного каллуса по своей морфологии характеризуются как меристематичные (рис. За). По своему цито-гистологическому статусу морфогенный каллус резко отличается от неморфогенного каллуса, появившегося на поверхности пыльников на 32-35 сут от инокуляции пыльников: в структуре последнего отсутствуют меристематические клетки (рис. 36).

С---'"л'

/у' ' 1 v.. -

Рис. 3. Морфогенный (а) и неморфогенный (б) андроклинные каллусы, поивившиеся на поверхности пыльника. СМ. I (остоянные препараты.

Цито-физиологическая характеристика развития морфогенных андроклинных каллусов in vitro на среде Blaydes

У части морфогенных андроклинных каллусов методом твердофазного ИФА определили содержание эндогенного ауксина ИУК в первые сутки от появления на поверхности пыльников. Полученные данные, приведенные в таблице 2, подтверждают разделение исследуемых объектов на высокоауксиновые и низкоауксиновые.

Таблица 2

Содержание эндогенного ауксина ИУК в морфогенных андроклинных каллусах исследуемых сортов и линии яровой мягкой пшеницы

Сорт/линия Содержание эндогенной ИУК, нг/г сухой массы

Фотос 584±74

Скала 424±68

Жница 10 8±18

Московская 35 111±17

Примечание: достоверно при 5 % уровне значимости.

Оставшуюся часть каллусов в первые же сутки от появления на поверхности пыльников инокулировали на разные варианты питательной среды для морфогенеза Blaydes, различающиеся только концентрацией вносимой экзогенно ИУК (гормональный компонент среды был представлен также и кинетином в неизменной для всех вариантов концентрации 0.2 мг/л).

В культивируемых каллусах всех исследуемых объектов наблюдали следующие пути морфогенеза in vitro: эмбриоидогенез - формирование эмбриоидов (зародышеподобных структур), гемморизогенез (сопряженное формирование почек и корней), геммогенез (формирование почек), ризогенез (формирование корней).

Установлено, что независимо от сорта/линии, пути морфогенеза in vitro андроклинных каллусов при повышении концентрации экзогенной ИУК в питательной среде индуцировались в следующей последовательности: эмбриоидогенез - гемморизогенез - геммогенез - ризогенез.

В то же время для индукции одного и того же пути морфогенеза, каллусам, характеризующимся более высоким содержанием эндогенной ИУК, требуется меньшая концентрация экзогенной ИУК в составе питательной среды Blaydes (рис. 4).

В результате цито-гистологического анализа андроклинных каллусов в динамике развития in vitro установлено, что к 3-5 сут культивирования при всех путях морфогенеза периферические клетки каллуса, находящиеся в контакте с питательной средой, дегенерируют, а в центре каллуса обособляется зона меристематическнх клеток (рис. 5а). Сопоставление данных цито-гистологического анализа и иммунолокализации показало, что цитокинины локализуются преимущественно именно в клетках меристематической зоны (рис. 56).

концентрация ИУК в сродо Blaydos, мг/л

Жница

100 80 60

концентрация ИУК в сроде Blaydos. мг/л

Московская 35

концентрация ИУК в среде Blaydes, мг/л

Й&5

0.1 0.5 1.0 1.5 2.0

концентрация ИУК в сроде Blaydos, мг/л

\ эмбриоидогенез

геммориэогенез :•;•:•;•: геммогенез

Рис. 4. Частота индукции путей морфогенеза in vitro андроклиниых каллусов па питательной среде Blaydes

Рис. 5. Формирование центральной зоны мерисгемаз ических клеток в морфогенном каллусе и локализации цптокининов в них (5 сут культивировании in vitro на среде Blaydes).

а-СМ. Постоянный препарат; б-СМ. Постоянный препарат. Иммунолокализация. Условные обозначения: МЗ - меристсматическая зона, ИЗ - периферическая зона. Окружностью отмечена зона преимущественной локализации цитокининов.

Геммогенез in vitro в андроклиниых каллусах

Образование почки начинается на 20 сут культивирования каллусов in vitro на среде Blaydes с формирования апекса побега в зоне мерисзематических клеток (рис. 6а). При этом цитокинины локализуются преимущественно в клетках меристематической зоны и развивающегося апекса побега (рис. 66).

Затем на апексе побега образуются зачатки листьев, которые постепенно развиваются в первые листья. В результате формируется типичная почка (рис. 7).

Jgj ' „p

" ■Htt«

Рис. 6. Формирование апексов побегов и локализация цитокининов в морфогенном каллусе (20 сут культивирования in vitro на среде Blaydes).

а -СМ. Постоянный препарат; б —СМ. Постоянный препарат. Иммунолокализация. Условные обозначения: АП - апекс побега, МЗ -меристематическая зона, ПЗ - периферическая зона.

Окружностями отмечены зоны преимущественной локализации цитокининов.

шттщ

Рис. 7. Сформированная почка (32 сут культивирования in vitro на среде Blaydes).

а-СЭМ;

б - СМ. Постоянный препарат. Условные обозначения: АП - апекс побега, К - каллус, МЗ - меристематическая зона, Пч - почка.

Ризогенез in vitro в андроклинных каллусах Апикальные меристемы корней закладываются на 23 сут культивирования каллусов in vitro на среде Blaydes в зоне меристематических клеток (рис.8а). При этом цитокинины локализуются преимущественно в клетках меристематической зоны и развивающегося апекса корня (рис. 86).

Рис. 8. Формирование в морфогенном каллусе апексов корней и локализации в них цитокининов (23 сут культивирования in vitro на среде Blaydes).

а-СМ. Постоянный препарат.

б-СМ. Постоянный препарат.. Иммунолокализация. Условные обозначения: АМК - апикальная меристема корня, МЗ - меристематическая зона.

Окружностью от мечена зона преимущественной локализации цитокининов.

Сформированный корень имеет строение, типичное для корней злаков (рис. 9).

Рис. 9. Сформированные корни в морфогенном каллусе (33 сут культивирования in vitro на среде Blaydes). а-СЭМ;

б-СМ. Постоянный препарат. Условные обозначения: К - каллус, Кр - корень.

Гемморшогепез in vitro в андроклинных каллусах Гемморизогенез состоит из двух этапов: сначала, на 20-22 сут культивирования каллусов in vitro на среде Blaydes, экзогенно формируются почки а затем, на 25 сут, в толще каллусов эндогенно формируются корни (рис. 10а). Начальное развитие почек и корней при гемморизогенезе in vitro также связано с деятельностью клеток меристематической зоны каллусов и происходит таким же образом, как и при геммогенезе и ризогенезе in vitro. При этом цитокинины преимущественно локализуются в клетках меристематической зоны и развивающихся апексов побега и корня (рис. 106).

Рис. 10. Формирование апексов побегов и корней и локализация цитокииинов в морфогенном каллусе (30 сут культивирования in vitro на среде Blaydes).

а - СМ. Постоянный препарат, б - СМ. Постоянный препарат. Иммунолокализация.

Условные обозначения: АП - апекс побега, АК - апекс корня, МЗ - меристематическая зона, ПЗ - периферическая зона.

Окружностями отмечены зоны преимущественной локализации цитокииинов.

По мере развития почек и корней между ними постепенно устанавливается связь путем формирования в толще каллуса элементов сосудистой системы, тем самым формируется гемморизогенная структура (рис. 11).

Рис. 11. Сформированная гемморизогенная структура в морфогенном каллусе (3S сут культивирования in vitro на среде Blaydes). а - СЭМ;

б - СМ. Постоянный препарат. Условные обозначения: АП -апекс побега, К - каллус, Кр - корень, J1 -лист.

Эмбриоидогенез in vitro в андроклинных каллусах Эмбриоиды развиваются из отдельных клеток меристематической зоны каллуса на 17 сут культивирования каллусов in vitro на среде Blaydes. В своем развитии эмбриоиды проходят все стадии, характерные для развития зиготических зародышей in vivo. Цитокинины локализуются в клетках меристематической зоны и формирующихся эмбриоидов на ранних стадиях развития, вплоть до глобулярной стадии (рис. 12).

Рис. 12. Глобулярный эмбриоид и локализация цитокининов в морфогенном каллусе (35 сут культивирования in vitro на среде на среде Blaydes).

а - СМ. Постоянный препарат, б - СМ. Постоянный препарат. Иммунолокализация.

Условные обозначения: К - каллус; МЗ - меристематическая зона, Э - эмбриоид. Окружностями отмечены зоны преимущественной локализации цитокининов.

Сформированный эмбриоид (рис. 13) схож по строению со сформированным зиготическим зародышем пшеницы.

Рис. 13. Сформированный эмбриоид в морфогенном каллусе (39 сут культивирования in vitro на среде Blaydes). д-СЭМ;

6-СМ. Постоянный препарат. Условные обозначения: К - каллус, Э - эмбриоид.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Одной из сложнейших фундаментальных проблем биологии остается изучение онтогенеза и его частного случая - морфогенеза.

Важное направление изучения морфогенеза растений - исследование андроклинных каллусов, полученных в ходе культивирования in vitro пыльников, поскольку в данном случае каллус как многоклеточная структура, способная к дальнейшему развитию, формируется из одной клетки - микроспоры или клетки пыльцевого зерна.

Проведенное нами исследование подтвердило, что гормональный статус пыльников, инокулируемых на индукционную питательную среду, - важнейший фактор формирования морфогенных андроклинных каллусов. Эти наблюдения лишний раз подтверждают приоритетную роль фитогормонов в регуляции морфогенеза растений in vitro.

В ходе наших исследований получил подтверждение методический подход, разработанный на примере яровой мягкой пшеницы: чем выше содержание эндогенного ауксина ИУК в пыльниках перед инокуляцией, тем ниже должна быть концентрация экзогенного ауксина 2,4-Д в питательной среде для индукции андроклинного каллусогенеза in vitro [Горбунова, 1993]. Более того, согласно полученным нами данным, такое соотношение эндогенного и экзогенного ауксинов необходимо соблюдать и для индукции формирования определенного типа андроклинного каллуса - способного к дальнейшему морфогенезу in vitro (морфогенный каллус) и не способного к такому процессу (неморфогенный каллус). В целом, формирование морфогенного каллуса определяется подбором адекватного баланса эндогенного (ИУК в инокулируемых пыльниках) и экзогенного (2,4-Д в составе питательной среды Potato II) ауксинов. Тем самым подтверждается роль природного ауксина ИУК [Полевой, 1982; Медведев, 2004] и синтетического ауксина 2,4-Д [Datta, 2001] как обязательных участников координации процессов морфогенеза, оказывающие существенное влияние на деление и дифференциацию клеток (а именно - микроспор как инициальных клеток и морфогенного, и неморфогенного каллусов).

Нами впервые изучено полное и детальное развитие морфогенных и неморфогенных андроклинных каллусов внутри культивируемых in vitro пыльников от инициальной клетки до сформированной структуры. Показано, что морфогенные и неморфогенные андроклинные каллусы существенно различаются по своему генезису. Резкое различие этих типов андроклинных каллусов подтверждено и после их появления на поверхности пыльников на основании впервые проведенного совмещения результатов сканирования поверхности каллусов с их цито-гистологическим статусом. Установлено, что именно морфогенные каллусы представлены главным образом меристематическими клетками. Таким образом, морфогенетическая компетентность морфогенных андроклинных каллусов определяется наличием в их составе меристематических клеток, обладающих морфогенетическим потенциалом для дальнейшего морфогенеза in vitro. Полученные нами данные согласуются с данными других авторов, изучавших каллусы иного происхождения [Амирова, Бишимбаева, 2002; Денебаева, 2003; Бишимбаева, 2007; Катасонова, 2007].

Цито-физиологическими исследованиями установлено, что в условиях культуры in vitro клетки меристематической зоны андроклинного морфогенного каллуса пшеницы реализуют морфогенетические программы различными путями (геммогенез, ризогенез, гемморизогенез, эмбриоидогенез). Полученные данные подтверждают мнение об универсальности путей морфогенеза как в естественных условиях, так и в культуре in vitro [Батыгина, Бутенко, 1981; Батыгина, 1987,2000],

индукцию определенного пути морфогенеза андроклинных каллусов in vitro на основе предварительного иммуноферментного анализа содержания эндогенного ауксина ИУК в каллусах перед инокуляцией на питательную среду. В частности, это дает принципиальную возможность биотехнологического получения растений на основе использования морфогенеза клеток каллуса in vitro (гемморизогенез и эмбриоидогенез), ведущих к формированию полноценных фертильных растений, что позволяет оптимизировать процесс массового тиражирования ценных андроклинных гаплоидов. С другой стороны, такой подход вносит дополнения в ставшую классической концепцию, разработанную F.Skoog и C.Miller [1957], согласно которой морфогенетические реакции тканей и органов (образование корней, побегов и недифференцированный рост) в каллусной культуре in vitro регулируются соотношением концентрации двух групп фитогормонов (ауксинов и цитокининов), и переход клетки к организованному развитию рассматривается как результат изменения количественных соотношений между ауксинами и цитокининами. Полученные нами данные позволили установить, что такая закономерность характерна и для таких путей морфогенеза in vitro андроклинных каллусов, как эмбриоидогенез и гемморизогенез. Таким образом, предложенная нами предварительная оценка содержания эндогенного ауксина ИУК в андроклинных каллусах перед инокуляцией на питательную среду позволяет подобрать количественное соотношение ауксин:цитокинин для индукции определенного пути морфогенеза in vitro.

Впервые проведенный детальный цито-гистологический анализ всех выявленных путей морфогенеза in vitro андроклинных каллусов в сопоставлении с данными локализации цитокининов продемонстрировал участие этих гормонов именно на начальных этапах всех путей морфогенеза, связанных с активными митотическими делениями и дифференциацией клеток меристематической зоны каллуса. Более того, самый начальный этап всех путей морфогенеза in vitro андроклинных каллусов универсален и состоит в обособлении в каллусе центральной меристематической зоны, преимущественно в клетках которой локализуются цитокинины. Такие данные еще раз подтверждают важную (и, по-видимому, определяющую) роль цитокининов в индукции митотической активности и дифференциации клеток, как правило, в сочетании с ауксинами - как в естественных условиях [Полевой, 1982; Чайлахян, 1982; Медведев, 2004], так и в условиях культуры in vitro [Бутенко, 1999; Jimenez, Bangerth, 2001; Долгих, 2005]. Таким образом, преимущественная локализация цитокининов в клетках меристематических зон андроклинных каллусов является основным фактором, влияющим на их дальнейшую дифференциацию при реализации того или иного пути морфогенеза in vitro.

В целом, изучение андроклинных каллусов в динамике развития in vitro открывает перспективы для исследования физиологических аспектов сложнейшей проблемы морфогенеза растений.

ВЫВОДЫ

1. Формирование морфогенных андроклинных каллусов пшеницы индуцируется при определенном соотношением эндогенных и экзогенных ауксинов. При повышенном содержании эндогенной ИУК (в инокулируемых пыльниках высокоауксиновых сортов) требуется пониженная концентрация экзогенной 2,4-Д (в составе питательной среды Potato II), и наоборот.

2. Каждый из выявленных путей морфогенеза in vitro андроклинных каллусов пшеницы (геммогенез, ризогенез, гемморизогенез, эмбриоидогенез) характеризуется своими цито-гистологическими особенностями на всех этапах. Показано экзогенное заложение почек; эндогенное заложение корней; сопряженное заложение почек и корней при формировании гемморизогенных структур; одноклеточное происхождение эмбриоидов, формирующихся в субэпидермальных слоях каллусов.

3. Индукция конкретного пути морфогенеза in vitro андроклинных каллусов определяется балансом между содержанием эндогенного (в составе каллуса) и концентрацией экзогенного (в составе питательной среды Blaydes) ауксина ИУК.

4. Независимо от содержания эндогенного ауксина ИУК в каллусах, при повышении концентрации экзогенного ауксина ИУК в составе питательной среды Blaydes пути морфогенеза in vitro андроклинных каллусов всегда индуцируются в определенной последовательности: эмбриоидогенез - гемморизогенез - геммогенез - ризогенез.

5. Начальный этап каждого из выявленных путей морфогенеза in vitro -формирование в андроклинных каллусах зоны меристематических клеток. Преимущественная локализация цитокининов в этих клетках подтверждает их статус как морфогенетически компетентных и инициальных при реализации путей морфогенеза in vitro андроклинных каллусов.

Таким образом, морфогенез in vitro андроклинных каллусов имеет принципиальное сходство с морфогенезом in vitro каллусов иного происхождения: полученные данные еще раз подтверждают универсальность путей морфогенеза как in vitro, так и in vivo. В то же время этот процесс характеризуется своими цито-гистологическими (способы заложения органов и формирования эмбриоидов) и цито-физиологическими особенностями (концентрация экзогенных фитогормонов в питательной среде, оптимальная для индукции конкретного пути морфогенеза in vitro, определяется содержанием эндогенных фитогормонов в инокулируемых эксплантах).

СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК МОН РФ

1. Круглова H.H., Сельдимирова O.A., Зайцев Д.Ю., Катасонова A.A. Биотехнологическая оценка экспланта для получения растений-регенерантов яровой пшеницы в культуре in vitro в целях адаптационной селекции в условиях Южного Урала // Известия Челябинского НЦ УрО РАН. 2006. Вып. 2 (32). С. 9498.

2. Круглова H.H., Сельдимирова O.A., Катасонова A.A., Зайцев Д.Ю. Формирование растений в каллусной культуре in vitro как биотехнологический подход к сохранению разнообразия флоры // Вестник Оренбургского государственного университета. 2007. Вып. 10(75). С. 178-180.

3. Круглова H.H., Сельдимирова O.A., Зайцев Д.Ю. Морфогенез в андроклинных каллусах злаков: цито-гистологические особенности // Успехи соврем, биологии. 2008. (в печати).

Публикации

4. Зайцев Д.Ю. К вопросу о генетической детерминации андроклинии у пшеницы // Материалы междунар. конф. «Генетика в России и мире». М., 2006. С. 72.

5. Zaitsev D.Yu. The cyto-histological analysis of wheat androclinal calli // Proceed. 1 (IX) Intern. Conf. of Young Botanists in Saint-Petersburg. Saint-Petersburg, 2006. P. 150.

6. Зайцев Д.Ю., Сельдимирова O.A., Круглова H.H. Особенности индукции путей морфогенеза в культуре in vitro пыльников пшеницы // Клеточные культуры. 2006. Вып. 21. С. 17-19.

7. Круглова H.H., Сельдимирова O.A., Зайцев Д.Ю. Культура in vitro каллусов как биотехнологический подход к сохранению биоразнообразия природных экосистем // Доклады МОИП. 2006. Т. 39 (специальный выпуск «Биотехнология - охране окружающей среды»), С. 230-231.

8. Зайцев Д.Ю. Формирование морфогенных каллусов в культуре in vitro пыльников пшеницы // Современные микроскопические исследования в биологии и медицине. М.: Набора, 2006. С. 20-22.

9. Зайцев Д.Ю. Каллусы пшеницы по данным сканирующей электронной и световой микроскопии // Материалы XIV междунар. научи, конф. студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2007». М., 2007. С. 42.

10. Сельдимирова O.A., Веселова C.B., Катасонова A.A., Зайцев Д.Ю., Круглова H.H. Иммуноферментный анализ каллусов яровой мягкой пшеницы // Известия Челябинского НЦ УрО РАН. 2007. Вып 1 (35). С. 131-135.

11. Круглова H.H., Сельдимирова O.A., Зайцев Д.Ю. Цито-физиологические особенности различных типов андроклинных каллусов пшеницы // Физиология и биохимия культурных растений. 2007. Т. 39. № 1. С. 42-50.

12. Зайцев Д.Ю. Цито-физиологические особенности морфогенного каллуса пшеницы // Материалы VI съезда Общества физиологов растений России и междунар. конф. «Современная физиология: от молекул до экосистем» Сыктывкар, 2007. С. 162-164.

13. Круглова H.H., Сельдимирова O.A., Катасонова A.A., Зайцев Д.Ю., Круглова А.Е. Биотехнология получения растений яровой мягкой пшеницы в условиях in vitro и ex vitro на основе феномена андроклинной гаплоидии // Материалы VIII съезда Украинского общества генетиков и селекционеров. Алушта, 2007. С. 517520.

14. Круглова H.H., Сельдимирова O.A., Катасонова A.A., Зайцев Д.Ю. Морфогенез in vitro клеток каллусов различного происхождения // Материалы II съезда Общества клеточной биологии. Цитология. 2007. Т. 49. № 9. С. 762-763.

15. Зайцев Д.Ю. Феномен непрямого эмбриоидогенеза in vitro как основа биотехнологии массового получения андроклинных растений яровой мягкой пшеницы // Материалы II междунар. школы молодых учёных «Эмбриология, генетика и биотехнология». Уфа, 2007. С. 51-52.

16. Зайцев Д.Ю. Анализ андроклинных каллусов пшеницы методом иммунолокализации // Материалы XV междунар. научи, конф. студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2008». М., 2008. С. 186-187.

17. Круглова H.H., Сельдимирова O.A., Катасонова A.A., Зайцев Д.Ю., Круглова А.Е. Биотехнология экспериментальной андроклинной гаплоидии яровой мягкой пшеницы in vitro на основе комплекса цитоэмбриологических и физиологических данных // Материалы IV междунар. конф. «Факторы экспериментальной эволюции организмов». Т. 5. Алушта, 2008. С. 397-402.

18. Зайцев Д.Ю., Высоцкая Л.Б. Иммунолокализация эндогенных фитогормонов в андроклинных каллусах яровой мягкой пшеницы // Материалы IX междунар. конф. «Биология клеток растений in vitro и биотехнология». Звенигород, 2008. С. 126-127.

Зайцев Денис Юрьевич

ЦИТО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ МОРФОГЕНЕЗА IN VITRO АНРОKJIИННЫХ КАЛЛУСОВ ПШЕНИЦЫ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Лицензия на издательскую деятельность ЛР № 021319 от 05.01.99 г.

Подписано в печать 12.11.2008 г. Формат 60x84/16. Усл. печ. л. 0,92. Уч.-изд. л. 1,07. Тираж 100 экз. Заказ 789.

Редакционно-издательский центр Башкирского государственного университета 450074, РБ, г. Уфа, ул. З.Валиди, 32.

Отпечатано на множительном участке Башкирского государственного университета 450074, РБ, г. Уфа, ул. З.Валиди, 32.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Зайцев, Денис Юрьевич

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. АНДРОКЛИННЫЙ КАЛЛУСОГЕНЕЗ В КУЛЬТУРЕ

IN VITRO ПЫЛЬНИКОВ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Пыльник как модель для изучения морфогенеза in vitro.

1.2. Андроклинный каллусогенез in vitro.

1.2.1. Формирование и развитие андроклинных каллусов in vitro в изолированных пыльниках.

1.2.2. Типы андроклинных каллусов.

1.2.3. Цито-гистологическая характеристика андроклинных каллусов.

1.2.4. Биохимическая характеристика андроклинных каллусов.

1.2.5. Цитогенетическая характеристика андроклинных каллусов.

1.3. Пути морфогенеза in vitro андроклинных каллусов.

1.3.1. Эмбриоидогенез in vitro.

1.3.2. Органогенез in vitro.

1.3.2.1. Геммогенез in vitro.

1.3.2.2. Ризогенез in vitro.

1.3.2.3. Гемморизогенез in vitro.

1.3.3. Гистогенез in vitro.t.

1.4. Фитогормональные аспекты андроклинного каллусогенеза in vitro.

1.4.1. Роль фитогормонов в индукции морфогенеза в культуре in vitro изолированных пыльников.

1.4.2. Фитогормональная регуляция путей морфогенеза in vitro в каллусных культурах.

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объект исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Метод культуры in vitro изолированных пыльников злаков.

2.2.1.1. Фенотипический отбор донорных растений в условиях in vivo.

2.2.1.2. Стрессовое воздействие на изолированные колосья донорных растений низкими положительными температурами.

2.2.1.3. Получение андроклинных каллусов in vitro.

2.2.2.Цитологические методы исследования.

2.2.2.1. Фиксация и обработка растительного материала для световой микроскопии.

2.2.2.2. Фиксация и обработка растительного материала для сканирующей электронной микроскопии.

2.2.2.3 Приготовление постоянных микротомных препаратов андроклинных каллусов, проанализированных методом сканирующей электронной микроскопии.

2.2.3. Прижизненное исследование андроклинных каллусов in vitro.

2.2.4. Метод твердофазного иммуноферментного анализа растительных тканей.

2.2.5. Метод иммунолокализации цитокининов.

2.2.6. Статистическая обработка полученных результатов.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Цито-физиологическая характеристика развития андроклинных каллусов in vitro на питательной среде Potato II.

3.1.1. Индукция формирования андроклинных каллусов in vitro на среде Potato II.

3.1.2. Цито-гистологический анализ развития андроклинных каллусов in vitro на среде Potato II.

3.1.2.1. Развитие морфогенных андроклинных каллусов.

3.1.2.2. Развитие неморфогенных андроклинных каллусов.

3.2. Цито-физиологическая характеристика развития морфогенных андроклинных каллусов in vitro на среде Blaydes.

3.2.1. Индукция путей морфогенеза in vitro андроклинных каллусов.

3.2.2. Формирование в андроклинных каллусах in vitro зоны меристематических клеток.

3.2.3. Пути морфогенеза in vitro андроклинных каллусов.

3.2.3.1. Геммогенез in vitro.

3.2.3.2. Ризогенез in vitro.

3.2.3.3 .Гемморизогенез in vitro.

3.2.3.4. Эмбриоидогенез in vitro.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Цито-физиологические особенности морфогенеза in vitro андроклинных каллусов пшеницы"

Актуальность темы исследования. Современное развитие инновационных направлений биотехнологии растений требует новых фундаментальных данных о морфогенезе как в естественных условиях, так и в культуре in vitro. Один из наиболее перспективных экспериментальных подходов к изучению тонких особенностей морфогенеза состоит в использовании андроклинных каллусов, полученных в культуре ш vitro изолированных пыльников из микроспор/клеток пыльцевого зерна на основе биологического феномена андроклинии, или андрогенеза in vitro. Хорошо установлено, что клетки таких каллусов способны реализовать свой морфогенетический потенциал различными путями морфогенеза in vitro [Androgenesis and haploid plants, 1998; Plant Biotechnology., 2004; Эмбриологические основы андроклинии., 2005; От микроспоры к сорту, 2008].

Несмотря на то, что к настоящему времени накоплен значительный фактический материал, касающийся различных аспектов исследования андроклинных каллусов, многие вопросы остаются открытыми. Так, недостаточно полно выявлены цито-гистологические характеристики андроклинных каллусов, способных к морфогенезу in vitro, а сведения об их морфологических показателях противоречивы. Не выявлены инициальные клетки/группы клеток андроклинных каллусов, в которых индуцируются пути морфогенеза in vitro, и факторы, стимулирующие морфогенез этих клеток. Далеким от окончательного решения остается вопрос об участии фитогормонов в реализации морфогенетического потенциала клеток андроклинных каллусов. Полностью отсутствуют данные о локализации гормонов в каллусах (и не только андроклинных) в динамике развития in vitro. Недостаточно изучены цито-физиологические и цито-гистологические особенности путей морфогенеза in vitro андроклинных каллусов. Проблемным остается вопрос о возможности управления путями морфогенеза in vitro андроклинных каллусов.

Для достижения цели исследования были поставлены задачи:

1. Изучить особенности формирования in vitro и цито-гистологический статус морфогенных андроклинных каллусов.

2. Выявить пути морфогенеза in vitro андроклинных каллусов и установить фитогормональные условия индукции каждого из путей.

3. Выявить участие цитокининов в морфогенезе in vitro андроклинных каллусов.

Научная новизна. На основании комплексных эмбриологических и цито-физиологических исследований установлено, что основным условием формирования морфогенных андроклинных каллусов является подбор адекватного баланса эндогенного ауксина ИУК (в инокулируемых пыльниках, содержащих инициальные сильновакуолизированные микроспоры) и экзогенного синтетического ауксина 2,4-Д (в составе питательной среды). Показано, что цито-гистологический статус определяет морфогенетическую компетентность морфогенного каллуса. Выявлены и методами световой и сканирующей электронной микроскопии детально исследованы пути морфогенеза андроклинных каллусов в динамике развития Ь7 vitro: геммогенез, ризогенез, гемморизогенез, эмбриоидогенез. Установлено, что индукция определенного пути морфогенеза in vitro андроклинных каллусов определяется балансом ауксина ИУК: эндогенного (в каллусе) и экзогенного (в составе питательной среды). Установлена универсальность начального этапа всех путей морфогенеза in vitro андроклинных каллусов, состоящая в формировании в каллусе зоны меристематических клеток, преимущественно в которых локализуются цитокинины, а также показано участие цитокининов на начальных этапах всех путей морфогенеза in vitro.

Практическая значимость работы. Разработанный методический подход, позволяющий на основании данных иммуноферментного анализа индуцировать желаемый путь морфогенеза in vitro андроклинных каллусов, может быть использован для увеличения выхода андроклинных растений-регенерантов яровой мягкой пшеницы в биотехнологических исследованиях, связанных с массовым тиражированием гаплоидов, и тем самым — для ускорения селекционного процесса по созданию новых сортов этого основного хлебного злака. Полученные результаты могут использоваться в учебном процессе на биологических факультетах ВУЗов.

Связь работы с научными программами. Исследования поддержаны РФФИ (гранты № 05-04-08114, 2005-2006 гг.; № 05-04-97911, 2005-2007 гг.; № 08-04-97045, 2008-2010 гг.), а также выполнены в рамках программы «Ведущие научные школы РФ» (гранты НШ 2148.2003.4, 2003-2005 гг.; НШ 4834.2006.4, 2006-2007 гг.; НШ 2096.2008.4, 2008-2009 гг.) и ГНТП Академии наук Республики Башкортостан (проекты № 17/5-Б, 2005-2007 гг., № 40/40-П, 2008-2010 гг.).

Обоснованность выводов и достоверность результатов работы обеспечены значительным объемом экспериментального материала, обработанного с применением современных математических методов, а также использованием современных методов цито-гистологического анализа с высокой разрешающей способностью.

Апробация работы. Результаты исследования представлены III (Москва, 2005) и IV (Пущино, 2006) съездах Общества биотехнологов России; I (Санкт-Петербург, 2005) и II (Уфа, 2007) международных школах молодых ученых «Эмбриология и биотехнология»; международной конференции «Генетика в России и мире» (Москва, 2006); X международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология — наука XXI века» (Пущино, 2006); Всероссийском симпозиуме «Биология клетки в культуре» (Санкт-Петербург, 2006); XIV (Москва, 2007) и XV (Москва, 2008) международных конференциях молодых ученых «Ломоносов», II съезде Общества клеточной биологии (Санкт-Петербург, 2007); III всероссийской научно-практической конференции «Проблемы экологии Южного Урала» (Оренбург, 2007); IV международной конференции «Факторы экспериментальной эволюции организмов» (Алушта, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 28 работ, в том числе 3 статьи в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК МОН РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 167 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания объекта и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, заключения и выводов. Список литературы включает 378 работ, в том числе 244 работы зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 51 рисунком и 5 таблицами.

Заключение Диссертация по теме "Физиология и биохимия растений", Зайцев, Денис Юрьевич

ВЫВОДЫ

4. Независимо от содержания эндогенного ауксина ИУК в каллусах, при повышении концентрации экзогенного ауксина ИУК в составе питательной среды Blaydes пути морфогенеза in vitro андроклинных каллусов всегда индуцируются в определенной последовательности: эмбриоидогенез -гемморизогенез - геммогенез - ризогенез.

5. Начальный этап каждого из выявленных путей морфогенеза in vitro - формирование в андроклинных каллусах зоны меристематических клеток. Преимущественная локализация цитокининов в этих клетках подтверждает их статус как морфогенетически компетентных и инициальных при реализации путей морфогенеза in vitro андроклинных каллусов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Одной из сложнейших фундаментальных проблем биологии остается изучение морфогенеза как последовательной цепи изменений формы в процессе онтогенеза, приводящая к созданию видоспецифичной пространственной структуры [Бутенко, 1994].

Важное направление изучения морфогенеза растений - исследование андроклинных каллусов, полученных в ходе культивирования in vitro пыльников, поскольку в данном случае каллус как многоклеточная структура, способная к дальнейшему развитию, формируется из одной клетки — микроспоры или клетки пыльцевого зерна.

К настоящему времени накоплен достаточно большой объем экспериментальных данных по различным аспектам культивирования in vitro андроклинных каллусов, в том числе пшеницы. Абсолютное большинство исследований в этой области посвящено оценке физиологических условий культивирования, в частности подбору оптимальной концентрации гормональных компонентов питательной среды для получения морфогенных каллусов. Проведенное нами исследование подтвердило, что гормональный статус пыльников, инокулируемых на индукционную питательную среду, -важнейший фактор формирования морфогенных андроклинных каллусов. Эти наблюдения лишний раз подтверждают приоритетную роль фитогормонов в регуляции морфогенеза растений in vitro.

В ходе наших исследований получил подтверждение методический подход, разработанный на примере яровой мягкой пшеницы: чем выше содержание эндогенного ауксина ИУК в пыльниках перед инокуляцией, тем ниже должна быть концентрация экзогенного ауксина 2,4-Д в питательной среде для индукции андроклинного каллусогенеза in vitro [Горбунова, 1993]. Более того, согласно полученным нами экспериментальным данным, такое соотношение эндогенного и экзогенного ауксинов необходимо соблюдать и для индукции формирования определенного типа андроклинного каллуса — способного к дальнейшему морфогенезу in vitro (морфогенный каллус) и не способного к такому процессу (неморфогенный каллус). В целом, формирование морфогенного каллуса определяется подбором адекватного баланса эндогенного (ИУК в инокулируемых пыльниках) и экзогенного (2,4-Д в составе питательной среды Potato И) ауксинов. Тем самым подтверждается роль природного ауксина ИУК [Полевой, 1982; Медведев, 2004] и синтетического ауксина 2,4-Д [Krikorian, 1995; Datta, 2001] как обязательных участников координации процессов морфогенеза, оказывающие существенное влияние на деление и дифференциацию клеток (а именно — микроспор как инициальных клеток и морфогенного, и неморфогенного каллусов).

Нами впервые изучено полное и детальное развитие морфогенных и неморфогенных андроклинных каллусов внутри культивируемых in vitro пыльников от инициальной клетки — сильновакуолизированной микропоры — до сформированной структуры. Показано, что морфогенные и неморфогенные андроклинные каллусы существенно различаются по своему генезису. Резкое различие этих типов андроклинных каллусов подтверждено и после их появления на поверхности пыльников на основании впервые проведенного совмещения результатов сканирования поверхности каллусов с их цито-гистологическим статусом. Установлено, что именно морфогенные каллусы представлены главным образом меристематическими клетками. Таким образом, морфогенетическая компетентность морфогенных андроклинных каллусов определяется наличием в их составе меристематических клеток, обладающих морфогенетическим потенциалом для дальнейшего морфогенеза in vitro. Полученные нами данные согласуются с данными других авторов, изучавших каллусы иного происхождения [Амирова, Бишимбаева, 2002; Денебаева, 2003; Бишимбаева, 2007; Катасонова, 2007].

Нами впервые показано, что индукция определенного пути морфогенеза in vitro андроклинных каллусов зависит от баланса содержания эндогенной ИУК в каллусах и концентрации экзогенной ИУК в составе питательной среды Blaydes. Иначе говоря, реализация путей морфогенеза in vitro каллуса во многом зависит от его гормонального статуса. Тем самым появляется возможность прогнозировать индукцию определенного пути морфогенеза андроклинных каллусов in vitro на основе предварительного иммуноферментного анализа содержания эндогенного ауксина ИУК в каллусах перед инокуляцией на питательную среду. В частности, это дает принципиальную возможность биотехнологического получения растений на основе использования морфогенеза клеток каллуса in vitro (гемморизогенез и эмбриоидогенез), ведущих к формированию полноценных фертильных растений, что позволяет оптимизировать процесс массового тиражирования ценных андроклинных гаплоидов.

С другой стороны, такой подход вносит дополнения в ставшую классической концепцию, разработанную F.Skoog и C.Miller [1957], согласно которой морфогенетические реакции тканей и органов (образование корней, побегов, недифференцированный рост и т.п.) в каллусной культуре in vitro регулируются соотношением концентрации двух групп фитогормонов (ауксинов и цитокининов), и переход клетки к организованному развитию рассматривается как результат изменения количественных соотношений между ауксинами и цитокининами. Полученные нами данные позволили установить, что такая закономерность характерна и для таких путей морфогенеза in vitro андроклинных каллусов, как эмбриоидогенез и гемморизогенез. Таким образом, предложенная нами предварительная оценка содержания эндогенного ауксина ИУК в андроклинных каллусах перед инокуляцией на питательную среду позволяет подобрать количественное соотношение ауксин :цитокинин для индукции определенного пути морфогенеза in vitro.

Впервые проведенный детальный цито-гистологический анализ всех выявленных путей морфогенеза in vitro андроклинных каллусов в сопоставлении с данными локализации цитокининов продемонстрировал участие этих гормонов именно на начальных этапах всех путей морфогенеза, связанных с активными митотическими делениями и дифференциацией клеток меристематической зоны каллуса. Более того, самый начальный этап всех путей морфогенеза in vitro андроклинных каллусов универсален и состоит в обособлении в каллусе центральной меристематической зоны, преимущественно в клетках которой локализуются цитокинины. Такие данные еще раз подтверждают важную (и, по-видимому, определяющую) роль цитокининов в индукции митотической активности и дифференциации клеток, как правило, в сочетании с ауксинами — как в естественных условиях [Полевой, 1982; Чайлахян, 1982; Медведев, 2004], так и в условиях культуры in vitro [Бутенко, 1999; Jimenez, Bangerth, 2001; Долгих, 2005]. Таким образом, преимущественная локализация цитокининов в клетках меристематических зон андроклинных каллусов является основным фактором, влияющим на их дальнейшую дифференциацию при реализации того или иного пути морфогенеза in vitro.

В целом, изучение андроклинных каллусов в динамике развития in vitro открывает широкие перспективы для исследования физиологических аспектов сложнейших проблем как морфогенеза растений, так и их онтогенеза в целом.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Зайцев, Денис Юрьевич, Уфа

1. Алаторцева Т.А., Тырнов B.C. Новообразования и регенерация в культуре зрелых зародышей кукурузы // IV междунар. науч. конф. «Факторы экспериментальной эволюции организмов»: Материалы. Т. 5. Алушта, 2008. - С. 245-248.

2. Амирова А.К., Бишимбаева Н.К. Идентификация типов каллусных тканей пшеницы и изучение путей их метаморфоза // Вестник КазНУ, серия биол. -2002. — № 3 (18). С. 15-19.

3. Анапияев Б.Б. Культура микроспор и гаплоидная биотехнология пшеницы / ред. И.Р.Рахимбаев. Алматы, 2001. - 220 с.

4. Бабаева С.А., Петрова Т.Ф., Гапоненко А.К. Цитогенетика культивируемых in vitro соматических клеток и растений-регенерантов Triticum durum Desf. // Цитология и генетика. 1994. - Т. 28. - № 4. - С. 23-30.

5. Банникова В.П., Барабанова Е.А. Индукция и гистологические особенности соматического эмбриогенеза в культуре ткани злаков // Цитология и генетика. 1990. - Т. 25. - № 2. - С. 61-68.

6. Батыгина Т.Б. Эмбриология пшеницы. Л.: Колос, 1974. - 206 с.

7. Батыгина Т.Б. Хлебное зерно: атлас. Л.: Наука, 1987. - 103 с.

8. Батыгина Т.Б. Пыльник как модель изучения морфогенетических потенций и путей морфогенеза // Эмбриология цветковых растений. Терминология и концепции. Т. 1: Генеративные органы цветка. — СПб.: Мир и семья, 1994.-С. 120-121.

9. Батыгина Т.Б. Эмбриоид // Эмбриология цветковых растений. Терминология и концепции. Т. 2. Семя. СПб.: Мир и семья, 1997. — С. 624628.

10. Батыгина Т.Б. Эмбриогенез и морфогенез половых и соматических зародышей // Физиология растений 1999. - Т. 46. — № 6. - С. 884-898.

11. Батыгина Т.Б. Воспроизведение, размножение и возобновление растений // Эмбриология цветковых растений. Терминология и концепции. Т. 3: Системы репродукции. — СПб.: Мир и семья, 2000а. — С. 35-39.

12. Батыгина Т.Б. Эмбриоидогения — новый тип вегетативного размножения // Эмбриология цветковых растений. Терминология и концепции. Т. 3: Системы репродукции. — СПб.: Мир и семья, 20006. -С. 334-349.

13. Батыгина Т.Б., Бутенко Р.Г. Морфогенетические потенций зародыша покрытосемянных растений (на примере представителей рода Paeonia, сем. Paeoniaceae) // Ботан. журн. 1981. - Т. 66. - № 11. - С. 1531-1547.

14. Батыгина Т.Б., Васильева В.Е. Размножение растений. — СПб.: Изд-во Санкт-Петербургского университета, 2002. — 232 с.

15. Батыгина Т.Б., Васильева В.Е., Маметьева Т.Б. Проблемы морфогенеза in vivo и in vitro (эмбриоидогенез у покрытосеменных) // Ботан. журн. — 1978. -Т. 63. -№ 1. С. 87-111.

16. Башаркина Н.В. Взаимовлияние гормонов питательной среды и гормонов экспланта в культуре пыльников яровой мягкой пшеницы // III съезд ВОФР: Тезисы докл. Ч. 1. СПб., 1993. - С. 66.

17. Башаркина Н.В., Надольская С.Н. Влияние предобработок на эндогенное содержание 3-индолилуксусной кислоты при культивировании пыльников яровой мягкой пшеницы // III съезд ВОФР: Тезисы докл. Ч. 1. — СПб., 1993.-С. 67.

18. Белоусов JI.B. Биологический морфогенез. — М.: Изд-во Московск. унта, 1987.-338 с.

19. Бишимбаева Н.К. Цитофизиологические основы биотехнологии длительной регенерации растений в культуре тканей зерновых злаков: Автореф. . д-ра биол. наук. — Алматы: Ин-т биологии и биотехнологии растений, 2007. 37 с.

20. Бобков С.В. Культуры изолированных пыльников и микроспор гороха Pisum sativum L. // IX Междунар. науч. конф. «Биология клеток растений in vitro и биотехнология»: Тезисы докл. М.: ИД ФБК-ПРЕСС, 2008. - С. 48.

21. Бутенко Р.Г. Индукция морфогенеза в культуре тканей растений // Гормональная регуляция онтогенеза растений. М.: Наука, 1984. - С. 42-54.

22. Бутенко Р.Г. Состояние и перспективы изучения морфогенеза растений // Всесоюзное общество физиологов растений. Вып. 8. — М.: ИФР АН СССР, 1990.-С. 5-8.

23. Бутенко Р.Г. Клеточные и молекулярные аспекты морфогенеза растений in vitro II I Чайлахяновские чтения. — Пущино: Пущинский НЦ, 1994.-С. 7-26.

24. Бутенко Р.Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе. М.: ФБК-ПРЕСС, 1999. - 160 с.

25. Бутенко Р.Г., Джардемалиев Ж.К., Гаврилова Н.Ф. Каллусообразующая способность эксплататов из разных органов различных сортов озимой пшеницы // Физиология растений. 1986. — Т. 33. - Вып. 2. - С. 350-355.

26. Бутенко Р.Г., Туркина М.В., Куликова А.Л., Коппель Л.А., Акатова Л.З. Компоненты активного цитоскелета в культуре клеток пшеницы // III Съезд ВОФР: Тезисы докл. Ч. 1. СПб, 1993. - С. 72.

27. Веселов С.Ю. Использование антител для количественного определения, очистки и локализации регуляторов роста. Уфа: БашГУ, 1998. - 138 с.

28. Веселов В.Ю., Вальке Р.С., Ван Онкелен X., Кудоярова Г.Р. Содержание и локализация цитокининов в листьях исходных и трансгенных растений табака // Физиология растений. — 1999. — Т. 46. — № 1. — С. 34-40.

29. Гамбург К.З., Рекославская Н.И., Швецов С.Г. Ауксины в культурах тканей и клеток растений. Новосибирск: Наука (Сибирское отделение), 1990.-243 с.

30. Гапоненко А.К., Мунтян М.А., Маликова Н.И., Созинов А.А. Регенерация растений пшеницы Triticum aestivum L. in vitro II Цитология и генетика. 1985. - Т. 19. - № 5. - С. 335-342.

31. Горбунова В.Ю. Генетические предпосылки спорофитного пути развития микроспор злаков в условиях in vitro. Уфа: УНЦ РАН, 1993. — 104 с.

32. Горбунова В.Ю., Круглова Н.Н. Методические аспекты культивирования изолированных пыльников пшеницы. — Уфа: БНЦ УрО АН СССР, 1988.-20 с.

33. Горбунова В.Ю., Круглова Н.Н. Индукция андрогенеза in vitro у яровой мягкой пшеницы. Оптимальная фаза микроспорогенеза // Известия РАН. Серия биол. 1997. - № 6. - С. 668-676.

34. Горбунова В.Ю., Круглова Н.Н., Абрамов С.Н. Индукция андрогенеза in vitro у яровой мягкой пшеницы. Баланс эндогенных и экзогенных фитогормонов // Известия РАН. Серия биол. 2001. - № 1. - С. 31-36.

35. Турецкая B.C. Роль биологически активных соединений в индукции гаплоидов в культуре пыльников // Междунар. конф. «Молекулярная генетика и биотехнология»: Тезисы докл. Минск, 1998. - С. 170-171.

36. Денебаева М.Г. Цитофизиологические особенности длительно культивируемых эмбриогенных каллусных тканей ячменя: Автореф. . канд. биол. наук. Алматы, 2003. - 30 с.

37. Джардемалиев Ж.К., Карабаев М.К. Получение каллусов из эксплантов разных органов пшеницы // Методы молекулярной биологии, биохимии и биотехнологии растений. Алма-Ата: АН КазССР, 1988а. - С. 120-125.

38. Джардемалиев Ж.К., Карабаев М.К. Получение растений-регенерантов из каллусов, индуцированных из разных органов пшеницы // Методы молекулярной биологии, биохимии и биотехнологии растений. — Алма-Ата: АН КазССР, 19886.-С. 125-129.

39. Дженсен У. Ботаническая гистохимия. М.: Мир, 1965. — 378 с.

40. Диас С., Долгих Ю.И., Шамина З.Б. Значение физиологических и генетических факторов в индукции эмбриогенного каллуса у разных линий кукурузы // Доклады Росс. акад. с.-х. наук. 1994. - № 2. — С. 6-8.

41. Долгих Ю.И. Сомаклональная изменчивость растений и возможности ее практического использования на примере кукурузы: Автореф. дисс. . д-ра биол. наук. М., 2005. - 45 с.

42. Долгих Ю.И., Пустовойтова Т.Н., Жданова Н.Е. Соотношение эндогенных фитогормонов в незрелых зародышах компетентных и некомпетентных к соматическому эмбриогенезу линий кукурузы // Физиология растений. 1999. - Т. 46. - № 6. - С. 861-864.

43. Дубровная О.В., Тищенко Е.Н. Геномная изменчивость морфогенного и неморфогенного каллуса кормовой свеклы // Цитология и генетика. — 2003. -Т. 37,-№6.-С. 23-30.

44. Ежова Т.А., Багрова A.M., Гостимский С.А. Побегообразование в каллусах из верхушек стеблей, эпикотилей, междоузлий и листьев различных генотипов гороха // Физиология растений. 1985. - Т. 32. - № 3. - С. 513-520.

45. Зобова Н.В., Луговцова С.Ю. Каллусо- и морфогенез в культуре изолированных зародышей ярового ячменя // IX Междунар. науч. конф. «Биология клеток растений in vitro и биотехнология»: Тезисы докл. М.: ИД ФБК-ПРЕСС, 2008. - С. 134.

46. Иванов Г.И. Биотехнологические аспекты создания исходного материала для селекции зерновых колосовых культур: Автореф. дисс. . д-ра биол. наук. — Краснодар, 2006. 45 с.

47. Иммуноанализ регуляторов роста в решении проблем физиологии растений, растениеводства и биотехнологии / Под ред. Г.Р.Кудояровой. -Уфа: АН РБ, 2000. 223 с.

48. Исаева Н.А., Годовикова В.А., Бородько А.В. Эмбриогенез в каллусной ' ткани и суспензионной культуре Hordeum geniculatum II Известия АН СССР. Серия биол. 1991. - № 2. - С. 294 - 299.

49. Искакова К.М. Морфогенез в длительно поддерживаемой культуре андрогенных каллусов ячменя: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Алма-Ата, 1991.-21 с.

50. Искакова К.М., Сариев Б.С., Анапияев Б.Б. Процессы морфогенеза в культуре микроспор ячменя {Hordeum vulgare L.) in vitro II IX Междунар. науч. конф. «Биология клеток растений in vitro и биотехнология»: Тезисы докл. М.: ИД ФБК-ПРЕСС, 2008. - С. 148.

51. Камелина О.П., Проскурина О.Б., Жинкина Н.А. К методике окраски эмбриологических препаратов // Ботан. журн. — 1992. Т. 77. — № 4. — С. 9396.

52. Карабаев М.К., Джардемалиев Ж.К. Культивируемые клетки пшеницы и кукурузы. Морфогенез и толерантность. // Физиология растений. 1994. -Т. 41.-№6.-С. 807-814.

53. Карабаев М.К., Джардемалиев Ж.К., Дарканбаева Г.Т., Бутенко Р.Г. Генетические особенности каллусообразования и регенерации растений в культуре клеток пшеницы и эгилопса // С.-х. биология. 1991. - № 3. - С. 6975.

54. Катасонова А.А. Оптимизация технологии получения растений-регенерантов яровой мягкой пшеницы в каллусной культуре in vitro: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. — Уфа: Институт биологии УНЦ РАН, 2007. 25 с.

55. Киричук Ю.С., Кищенко Е.М., Кучук Н.В. Особенности каллусообразования и регенерации растений свеклы столовой Beta vulgaris L.

56. IX Междунар. науч. конф. «Биология клеток растений in vitro и биотехнология»: Тезисы докл. М.: ИД ФБК-ПРЕСС, 2008. - С. 180.

57. Ковалева О.Н. Цитологический анализ клонов, полученных от незрелых зародышей ячменя сорта Bruce // Науч.-тех. Бюлл. ВНИИ растиниеводства. 1992. - Вып. 218. - С. 66-71.

58. Коваленко О.В. Генетические аспекты морфогенеза растений // Успехи соврем, биологии. 1993. - Т. 113. - № 3. - С. 269-285.

59. Миронов Н.В., Комиссарчик В.Л., Соколов А.Д. Методы электронной микроскопии в биологии и медицине. М.: Наука, 1996. - 243 с.

60. Конарев В.Г. Организация морфогенетических процессов и принципы молекулярных маркеров // Молекулярно-биологические аспекты прикладной ботаники, генетики и селекции. — М.: Колос, 1993. С. 51-74.

61. Конарев В.Г. Морфогенез и молекулярно-биологический анализ растений. СПб.: ВНИИ растениеводства, 1998. - 375 с.

62. Копертех Л.Г., Бутенко Р.Г. Нативные фитогормоны экспланта и морфогенез пшеницы in vitro II Физиология растений. 1995. — Т. 42. — № 4. -С. 555-558.

63. Костюкова Ю.А. Особенности каллусогенеза и морфогенеза в культуре тканей различных видов гречихи: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. -Казань, 1999.-24 с.

64. Косулина Л.Г. Особенности процесса регенерации в каллусной культуре зрелых зародышей пшеницы (Triticum aestivum L.) // С.-х. биол. Серия биол. раст. 1995. -№ 1. - С. 78-84.

65. Косулина Л.Г., Лапикова В.П. Ультраструктурная организация клеток каллусной ткани, полученной из зародышевых структур пшеницы сорта Мироновская яровая // V Всесоюз. симпоз. по ультраструктуре растений: Тезисы докл. Кишинев, 1983. - С. 86.

66. Круглова Н.Н. Периодизация развития пыльника злаков как методологический аспект изучения андрогенеза in vitro // Известия РАН. Серия биол. 1999. - № 3. - С. 275-281.

67. Круглова Н.Н. Морфогенез в культуре пыльников пшеницы: эмбриологический подход. Уфа: Гилем, 2001. - 203 с.

68. Круглова Н.Н. Микроспора злаков как модельная система для изучения путей морфогенеза: Автореф. дисс. . д-ра биол. наук. — СПб., 2002. — 48 с.

69. Круглова Н.Н., Батыгина Т.Б. Методические рекомендации по использованию морфогенетического потенциала пыльника в биотехнологических исследованиях яровой мягкой пшеницы. Уфа: ИБ УНЦ РАН, 2002. - 39 с.

70. Круглова Н.Н., Горбунова В.Ю., Абрамов С.Н., Сельдимирова О.А. Андрогенные эмбриоиды и каллусы пшеницы: данные сканирующей электронной микроскопии // Известия РАН. Серия биол. 2001. — № 2. -С. 191-197.

71. Круглова Н.Н., Горбунова В.Ю., Батыгина Т.Б. Эмбриоидогенез как путь морфогенеза в культуре изолированных пыльников злаков // Успехи соврем, биологии. 1995. - Т. 115. - Вып. 6. - С. 692-705.

72. Круглова Н.Н., Горбунова В.Ю., Куксо П.А. Морфогенез в культуре изолированных пыльников: роль фитогормонов // Успехи соврем, биологии. 1999.-Т. 119.-Вып. 6.-С. 567-577.

73. Круглова Н.Н., Горбунова В.Ю., Потапова Н.Н. Влияние концентрации 2,4-Д на начальные этапы эмбриоидогенеза в культуре пыльников яровой пшеницы // III съезд ВОФР: Тезисы докл. Ч. 2. СПб., 1993. - С. 139.

74. Круглова Н.Н., Сельдимирова О.А. Регенерация пшеницы in vitro и ex vitro. Уфа: Гилем, 2008. - 139 с.

75. Кударов Б.Р., Есмагулов К.Е., Тулегенова Б.Т., Анапияев Б.Б. Биохимическая гетерогенность каллусов в культуре пыльников пшеницы // II съезд ВОФР: Тезисы докл. Ч. 2. М., 1992,- С. 111.

76. Кудоярова Г.Р., Веселов С.Ю., Еркеев М.И. Иммуноферментное определение содержания индолилуксусной кислоты в семенах кукурузы с использованием меченых антител // Физиология растений. — 1986. — Т. 33. — №6.-С. 1221-1227.

77. Кудоярова Г.Р., Веселов С.Ю., Каравайко Н.Н., Гюли-Заде В.З., Чередова Е.П., Мустафина А.Р., Мошков И.Е., Кулаева О.Н. Иммуноферментная тест-система для определения цитокининов // Физиология растений. 1990. - Т. 37. -№ 1. - С. 193-199.

78. Кунах В.А. Геномная изменчивость соматических клеток растений. 3. Каллусообразование in vitro II Биополимеры и клетка. 1997. - Т. 13. — С. 362-371.

79. Кунах В.А. Изменчивость растительного генома в процессе дифференцировки и каллусообразования // Физиология растений. — 1999. — Т. 46.-№ 6.-С. 919-929.

80. Литовкин К.В. Генотипические особенности морфогенетических реакций в культуре тканей ячменя: Автореф. дисс. канд. биол. наук. Ялта: Никитский ботанический сад — Национальный научный центр, 2003. — 20 с.

81. Лобакова Е.С., Плетюшкина О.Ю., Бутенко Р.Г. Морфология распределения актина в клетках морфогенного каллуса пшеницы. // Доклады РАН. 1997. - Т. 352. - № 2. - С. 284-286.

82. Лутова Л.А. Биотехнология высших растений. — СПб.: Изд-во Санкт-Петербургского ун-та, 2003. — 227 с.

83. Марченко А.О. Индукция эмбриоидогенеза в первичных ютлусах из стебля и листьев винограда // Физиология растений. — 1991. Т. 38. - № 3. — С. 580-590.

84. Медведев С.С. Физиология растений. СПб.: изд-во Санкт-Петербургского ун-та, 2004. — 335 с.

85. Миронов А.А., Комиссарчик Я.Ю., Миронов В.А. Методы электронной микроскопии в биологии и медицине. — СПб.: Наука, 1994. — 400 с.

86. Муромцев Г.С., Бутенко Р.Г., Тихоненко Т.И., Прокофьев М.И. Основы сельскохозяственной биологии. М.: Агропромиздат, 1990. — 384 с.

87. Носова О.Н. Использование раствора 2,4-Д для повышения эффективности получения гаплоидов в культуре пыльников тритикале // II Российск. симп. «Новые методы биотехнологии растений»: Тезисы докл. — Пущино, 1993.-С. 160.

88. Орлов П.А. Взаимодействие ядерных и цитоплазматических генов в детерминации развития растений. — Минск: НАН Беларуси, 2001. — 170 с.

89. Орлов П.А., Маврищева Е.Б., Палилова А.Н. Отзывчивость к культивированию пыльников реципрокно бэккроссированных аллопоазматических линий пшеницы // Науч. конф. «Генетическая инженерия и биотехнология»: Тезисы докл. Минск, 1994. — С. 53.

90. От микроспоры к сорту / Батыгина Т.Б., Круглова Н.Н., Горбунова В.Ю., Титова Г.Е., Сельдимирова О.А. М.: Наука, 2008. (в печати).

91. Паушева З.П. Практикум по цитологии растений. М.: Колос, 1988.170 с.

92. Пиралов Г.Р., Абраимова О.Е. Культура ткани некоторых генотипов кукурузы зарубежной селекции // IV Междунар. науч. конф. «Факторы экспериментальной эволюции организмов»: Материалы. Т. 5. — Алушта, 2008а.-С. 309-313.

93. Пиралов Г.Р., Абраимова О.Е. Морфологические особенности каллусной ткани кукурузы и пути ее регенерации // IX Междунар. науч. конф. «Биология клеток растений in vitro и биотехнология»: Тезисы докл. -М.: ИД ФБК-ПРЕСС, 20086. С. 298.

94. Плаксина Т.В. Методы биотехнологии в работе с косточковыми культурами // IX Междунар. науч. конф. «Биология клеток растений in vitro и биотехнология»: Тезисы докл. М.: ИД ФБК-ПРЕСС, 2008. - С. 302.

95. Полевой В.В. Фитогормоны. — Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1982. 248 с.

96. Прозина М.Н. Ботаническая микротехника. М.: Высшая школа, 1960. - 206 с.

97. Рахимбаев И.Р., Тивари Ш., Бишимбаева Н.К., Кушнаренко С.В. Биотехнология зерновых культур. — Алма-Ата: Гылым, 1992. — 240 с.

98. Румянцева Н.И., Валиева А.И., Федосеева Н.В., Самохвалова Н.А., Яб локова Е.В. Биохимические и цитоморфологические особенности культивируемых каллусов растений с разной способностью к морфогенезу // Цитология. 1996. - Т. 38. - № 2. - С. 244-245

99. Савельев Н.И., Олейникова О .Я., Юшков А.Н. Индукция морфогенеза в андрогенных каллусах плодовых растений // IX Междунар. науч. конф. «Биология клеток растений in vitro и биотехнология»: Тезисы докл. — М.: ИД ФБК-ПРЕСС, 2008. С. 326.

100. Сайб Л.Р., Карабаев М.К. Эмбриогенный каллус кукурузы: условия формирования и характеристика пептидного состава // II съезд ВОФР: Тезисы докл. -М., 1992. Ч. 2. - С. 185.

101. Сатарова Т.Н. андрогенез и эмбриокультура у кукурузы in vitro: Автореф. дисс. . д-ра биол. наук. — Киев, 2002. 41 с.

102. Сельдимирова О.А., Титова Г.Е. Влияние 2,4-Д на формирование микроспориальных эмбриоидов яровой мягкой пшеницы in vitro II IX Междунар. науч. конф. «Биология клеток растений in vitro и биотехнология»: Тезисы докл. М.: ИД ФБК-ПРЕСС, 2008. - С. 338.

103. Станис В.А. Влияние регуляторов роста на органогенез в культуре ткани райграса постбищного // Физиология растений. — 1983. — Т. 30. № 3. — С. 431-436.

104. Сыртанова Г.А., Турдиева В.М., Мухитдинова З.Р., Нурмуханбетова Г.А., Сарсенбаев К.Н. О регенерационной способности кормовых злаков в культуре in vitro II С.-х. биология. — 1990. — № 1. С. 133137.

105. Тивари Ш. Морфогенез в культуре пыльников и изолированных микроспор ячменя: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. — М., 1989. 25 с.

106. Тивари LLL, Колумбаева С.В., Рахимбаев И.Р. Цитогенетическая гетерогенность андрогенных каллусов // Цитология и генетика. — 1990а. — Т. 24.-№4.-С. 12-15.

107. Тивари Ш., Рахибаев И.Р. Действие 2,4-Д на морфогенез в культуре пыльников и микроспор ячменя // II Всесоюз. конф. «Регуляторы роста и развития растений»: Тезисы докл. Киев, 1989. - С. 259.

108. Тивари Ш., Рахимбаев И.Р., Колумбаева С.В., Искакова К.М. Многократное получение гаплоидов в длительно поддерживаемой культуре андрогенных структур ячменя // Изв. АН СССР. Сер. биол. — 19906. № 6. — С. 939-942.

109. Турашева С.К. Совершенствование биотехнологических методов создания андрогенных дигаплоидов мягкой пшеницы: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Астана, 2003. - 28 с.

110. Турашева С.К., Жумабаева Б.А., Манабаева Ш.А., Жамбакин К.Ж., Рахимбаев И.Р. Оптимизация питательной среды для суспензионной культуры гаплоидных клеток пшеницы // Вестник сельскохозяйственной науки Казахстана. 2002. - № 6. - С. 14-17.

111. Туркина М.В., Куликова A.JL, Коппелль JI.A., Акатова JI.3., Бутенко Р.Г. Актин и термостабильные актин-связывающие белки в культуре клеток пшеницы // Физиология растений. 1995. - Т. 42. - № 3. - С. 348-355.

112. Федоренко Т.С., Никитина Н.И. Цитология каллусогенеза пыльников подсолнечника в культуре in vitro II Науч.-техн. бюлл. ВНИИ маслич. культур. 1983. - № 82. - С. 17-22.

113. Чайлахян М.Х. Гормональная регуляция роста и развития высших растений // Успехи соврем, биологии. 1982. - Т. 95. - Вып. 1. - С. 23-34.

114. Ченцов Ю.С. Общая цитология. — М.: Изд-во Московск. ун-та, 1984.352 с.

115. Шаяхметов И.Ф. Соматический эмбриогенез и селекция злаковых культур. Уфа: Изд-во Башкирск. ун-та, 1999. - 165 с.

116. Шаяхметов И.Ф. Культура клеток и тканей пшеницы in vitro и соматический эмбриогенез: Автореф. дисс. . д-ра биол. наук. — СПб.: Санкт-Петербургский госуниверситет, 2001. — 45 с.

117. Шаяхметов И.Ф. Основы биотехнологии растений. Уфа: РИЦ БашГУ, 2007.-134 с.

118. Шаяхметов И.Ф., Катасонова А.А. Количественная оценка морфогенетических очагов в каллусной ткани пшеницы по данным цито-гистологического анализа // Материалы II съезда Общества биотехнологов России. М., 2005. - С. 85.

119. Шепель JI.C. Морфогенез в культуре in vitro различных эксплантов ярового ячменя (Hordeum vulgare L.) и получение форм, устойчивых кмучнистой росе {Erysiphe graminis DC F. SP Hordei Marchal): Автореф. дисс. . канд. биол. наук. — Ялта, 2007. 20 с.

120. Эльконин JI.A., Тырнов B.C. Гистологическое исследование каллусных культур Sorghum caffrorum (Роасеае) со стабильной регенерационной способностью // Ботан. журн. 1990. - Т. 75. - № 1. — С. 44-48.

121. Эльконин JI.A., Тырнов B.C., Папазян Н.Д. Культура соматических тканей сорго. Фитогормональная регуляция морфогенеза // Физиология растений. 1986.-Т. 33.-№3.-С. 504-512.

122. Эмбриологические основы андроклинии пшеницы: атлас / Круглова Н.Н., Батыгина Т.Б., Горбунова В.Ю., Титова Г.Е., Сельдимирова О.А. М.: Наука, 2005. - 99 с.

123. Abraham A., Krishnan P.N., Seeni S. Induction of androgenesis, callus formation and root differentiation in anther culture of cassava (Manihot esculenta Crantz) // Indian J. Exp. Biol. 1995. - V. 33. - № 3. - P. 186-189.

124. Adda S., Reddy T.P., Kishor K. Androclonal variation in niger (Cuizotia abyssinica Cass) // Euphytica. 1994. - V. 79. - № 1-2. - P. 59-64.

125. Ahloowalia B.S. Plant regeneration from callus culture in wheat // Crop Sci. 1982. - V. 22. - № 2. - P. 405-410.

126. Ahloowalia B.S. Somatic embryos in monocots. Their genesis and genetic stability // Rev. Cytol. Biol. Veget. Bot. - 1991. - № 14. p. 223-235.

127. Al-Juboory K.H., Al-Naimi J., Al-Amiry L.K., Shibli R, Skirvin R.M. Organogenesis and cormel production from callus culture of Gladiolus cv. Balady I I Hort Sci. 1997. - V. 32. - № 3. p. 460-d-461.

128. Alemanno L., Ramos Т., Gargadenec A., Andary C., Ferriere N. Localization and identification of phenolic compounds in Theobroma cacao L. somatic embryogenesis // Ann Bot. 2003. - V. 92. - № 4. - P. 613-623.

129. Androgenesis and haploid plants (in memory of J.-P.Bourgin) / Eds Chupeau Y., Caboche M., Henry Y. Berlin, Heidelberg, New York: Springer-Verlag, 1998.-297 p.

130. Anil V.S., Rao K.S. Calcium-mediated signaling during sandalwood somatic embryogenesis. Role for exogenous calcium as second messenger // Plant Physiol. -2000. — V. 123.-№4. -P. 1301-1311.

131. Arif M.B., Khatamian H. In vitro embryogenesis derived from leaf callus of "Tiffany" rose // Hort Sci. 1990. -V. 25. - № 9. - P. 1085-f-1086.

132. Armstrong C.L., Green C.E. Establishment and maintenance of friable and embryogenic maize callus and the involvement of L-proline // Planta. 1985. -V. 164.-№2. - P. 207-214.

133. Asakaviciute R. Genetic and physiological aspects in androgenesis of barley: summury of doctoral dissertation. Kauno: Akademija, 2004. - 27 p.

134. Ashok Kumar H.G., Murthy H.N. Effect of sugars and amino acids on androgenesis of Cucamis sativus // Plant Cell, Tiss. Org. Cult. 2004. - V. 78. -№ 3. - P. 201-208.

135. Ashok Kumar H.G., Murthy H.N., Paek K.Y. Embryogenesis and plant regeneration from anther cultures of Cucumis sativus L. I I Scient. Hort. — 2003. — V. 98.-№3.-P. 213-222.

136. Assani A., Bakry F., Kerbellec F., Hancour R., Wenzel G., Foroughi-Wehr B. Production of haploids from anther culture of banana Musa balbisiana (BB). //Plant Cell Repts. -2003. V. 21. -№ 6. - P. 511-516.

137. Aulinger I. E., Peter S. O., Schmid J. E., Stamp P. Gametic embryos of maize as a target for biolistic transformation: comparison to immature zygotic embryos // Plant Cell Repts. 2003. - V. 21. - № 6. - P. 585-591.

138. Babbar Sh.B., Kumari N., Mishra J.K. In Vitro androgenesis: events preceding its cytological manifestation // Plant Biotechnology and Molecular Markers / Eds Srivastava P.S., Narula A., Srivastava Sh. New Delhi: Anamaya Publishers, 2004.-P. 1-17.

139. Bajaj S., Rajam M.V. Efficient plant regeneration from long-term callus cultures of rice by spermidine // Plant Cell Repts. 1995. - V. 14. - № 11. — P. 717-720.

140. Bajaj S., Rajam M.V. Polyamine accumulation and loss of morphogenesis in long-term callus cultures of rice. Restoration of plant regeneration by manipulation of cellular polyamine levels // Plant Physiol. 1996. - V. 112. - № 3. - P. 13431348.

141. Barchowsky S.L., Zemetra R.S. Screening for embryonic haploid callus based on callus type in wheat (Triticum aestivum L.) // VII Intern. Wheat Genet. Sympos.: Proceed. V. 1. Cambridge, 1988. - P. 705-709.

142. Barnabas В., Szakacs E., Karsai I., Bedo Z. In vitro androgenesis of wheat: from fundamentals to practical application // Euphytica. 2001. - V. 119. - № 1-2. -P. 211-216.

143. Baroncelli S., Buatti M., Bennici A. Genetic control of in vitro and in vivo growth in hexaploid wheat // Z. Pflanzenziicht. 1978. - V. 80. - № 2. - P. 109116.

144. Batygina T.B. Problems of morphogenesis in situ, in vivo and in vitro II Intern. Sympos. «Plant tissue cell culture: Application to crop improvement»: Proceed. Prague: Acad. Sci. press, 1984. - P. 43-55.

145. Batygina T.B., Shamrov I.I., Titova G.E. Somatic embryogenesis in cereals (comparative embryological approach) // XV Int. Bot. Congr.: Abstr. Yokohama, 1993.-P. 564.

146. Benmousea M., Desjardine Y. Tissue-culture and protoplast isolation in Asparagus densiflorus L. // Hort Sci. 1993. - V. 28. - № 4. - P. 259-f.

147. Berlin G.P., Miksche G.P. Botanical microtechnique and cytochemistry. -Yowa: State University press, 1976. — 326 p.

148. Bhaskaran S., Smith R.H. Regeneration in cereal tissue culture: a review // Crop Sci. 2000. - V. 30. - № 6. - P. 1328-1337.

149. Bhatnagar S.P., Singh M.N. Organogenesis in the cultured female gametophyte of Ephedra foliata II J. Exp. Bot. 1984. - V. 35. - № 2. - P. 268278.

150. Blanc G., Lardet L., Martin A., Jacob J.L., Carron M.P. Differential carbohydrate metabolism conducts morphogenesis in embryogenic callus of Hevea brasiliensis (Mull, Arg.) // J. Exp. Bot. 2002. - V. 53. -№ 373. - P. 1453-1462.

151. Blaydes D.F. Interaction of kinetin and various inhibitors in the growth of soybean // Physiol. Plant. 1966. - V. 19. - № 3. - P. 748-753.

152. Bojadjiev P., Cuong Ph. Cytological and physiological studies of some arieties and F1 hybrids of rice, Oryza sativa, using the method of anther culture // Bionature. 1988. -V. 8.-№ 1.-P. 41-46.

153. Bouharmont J. Cytology of micrispores and calli after anther culture in Hordeum vulgare II Caryologia. 1977. - V. 30. - № 3. - P 351-360.

154. Bregitzer P., Dahleen L.S, Campbell R.D. Enhancement of plant regeneration from callus of commercial barley cultivars // Plant Cell Repts. — 1998. -V. 17.-№ 12. -P. 941-945.

155. Brisibe E.A., Gajdosova A., Olesen A., Andersen S.B. Cytodifferentiation and transformation of embryogenic callus lines derived from anther culture of wheat//J. Exp. Bot. -2000. V. 51.-№343.-P. 187-196.

156. Brisibe E.A., Olsesen A., Andersen S.V. Characterization of anther culture-derived cell suspensions exclusively regenerating green plantlets in wheat СTriticum aestivum L.) // Euphytica. 1997. - V. 93. - № 3. - P. 321-329.

157. Canhoto J.M., Ludovina M., Guimaraes S., Cruz G.S. In vitro induction of haploid, diploid, and triploid plantlets by anther culture of Iochroma warscewiczii II Plant Cell, Tiss. Org. Cult. 1990. - V. 21. - № 2. - P. 171-177.

158. Chaturvedi R., Razdan M.K., Bhojwani. S.S. Production of haploids of neem (Azadirachta indica A. Juss.) by anther culture // Plant Cell Repts. 2003. - V. 21. - № 6. -P.531-537.

159. Chen Ch.-Ch., Tsay H.-Sh., Huang Ch.-R. Rice (Oiyza sativa L.): a factors affecting androgenesis in vitro II Biotechnology in agriculture and forestry. V. 2. Crops I. Berlin, Heidelberg, New York: Springer-Verlang, 1986. - P. 123-138.

160. Chen L., Park S.O., Dhir S., Bhagsari A.S. Effects of explant type, sucrose level and callus development time on in vitro plant regeneration of sweetpotato // Hort Sci. 2000. - V. 35. - № 3. - P. 449.

161. Chen Q.F., Wang C.L., Lu Y.M., Shen M., Afza R., Duren M.V., Brunner H. Anther culture in connection with induced mutations for rice improvement // Euphytica. 2001. - V. 120. - № 3. - P. 401-408.

162. Chen W.H., Davey M.R., Power J.B., Cocking E.C. Control and maintenance of plant regeneration in sugarcane callus cultures // J. Exp. Bot. — 1988. -V. 39. -№ 2. P. 251-261.

163. Choi Y.-E., Kim J.-W. Yoons E.-S. High frequency of plant production via somatic embryogenesis from callus or cell suspension cultures in Eleutherococcus senticosus И Ann. Bot. 1999. - V. 83. - № 3. - P. 309-314.

164. Christianson M.L., Warnick D.A. Organogenesis in vitro as a developmental process//Hort Sci. 1988.-V. 23.-№8. -P. 515-519.

165. Chua B.-Kh., Chen Y.-H., Omar O. Anther culture of rice hybrids 1854 and 1856 // MARDI Res. Bull. 1984. - V. 12. - №. 3. - P. 275-280.

166. Chuang Ch.-Ch., Ouyang T.-W. A set of potato media for wheat anther culture // Sympos. on Plant Tissue Culture: Proceed. Peking: Sci. Press. — 1978. -P. 51-56.

167. Conger B.V., Hanning G.E., Gray D J., Mcdaniel J.K. Direct embryogenesis from mesophyll cells of orchardgrass // Science. — 1983. — V. 221. №. 4613. -P. 850-851.

168. Cooke T.J., Racusen R.H., Cohen J.D. The role of auxin in plant embryogenesis // Plant Cell. 1993. - V. 5. - № 11. - P. 1494-1495.

169. Corredoira E., Ballester A., Vieitez A.M. Proliferation, maturation and germination of Castanea sativa Mill, somatic embryos originated from leaf explants // Ann. Bot. 2003. - V. 92. - № 1. - P. 129-13 6.

170. Corredoira E., Vieitez A.M., Ballestera A. Somatic embryogenesis in elm // Ann. Bot. 2002. - V. 89. - № 5. - P. 637-644.

171. Cure W.W., Mott R.L. A comparative anatomical study of organogenesis in cultured tissue of maize, wheat and oats // Physyol. Plant. 1978. - V 42. - № 1. -P. 91-96.

172. Daniel G. Einfinss der Antherenausrichtung auf die kallusbildung und pflanzenregeneration bei gerste (Hordeum vulgare L.) // Bayer. Landwirt. Jahrb. -1990.-V. 64. №. 7.-P. 863-871.

173. Datta S.K. Androgenesis in cereals // Current trends in the embryology of Angiosperms / Eds Bhojwani S.S., Soh W.Y. Dordrecht, Boston, London: Kluwer Acad. Publ. - 2001. - P. 471-488.

174. De Buyser J., Henry Y., Lonnet P. Florin: a doubled haploid wheat variety developed by the anther culture method // Plant Breed. 1987. - V. 98. - № 1. -P. 53-56.

175. De Jimenez E.S., Vargas M., Aguilar R., Jimenez E. Age-dependet responsiveness to cell differenciation stimulus in maize callus culture // Plant Physiol. Biochem. 1988. - V. 26. - № 6. - P. 723-732.

176. De Oliveira M.F., Fortes G.R.L., da Silva J.B. In vitro shoot regeneration from callus derived from Marubakaido apple rootstock under different aluminium concentrations // Hort Sci. -1998. V. 33. - № 3. - P. 460-d.

177. Denchev P.D., Conger B.V. Plant regeneraton from callus cultures of switchgrass // Crop Sci. 1994. - V. 34. - №6. - P. 1623-1627.

178. Deutsch F., Kumlehn J., Ziegenhagen В., Fladung M. Stable haploid poplar callus lines from immature pollen culture // Physiol. Plant. — 2004. — V. 120. -№ 4. -P.613-622.

179. Dodds J.H., Roberts L.W. Experiments in plant tissue culture. Cambridge: Cambridge Univ. Press, 1985. - 354 p.

180. Dogramaci-Altuntepe M., Peterson T.S., Jauhar P.P. Anther culture-derived regenerants of durum wheat and their cytological characterization // J. Hered. — 2001.-V. 92. № l.-P. 56-64.

181. Dornelas M.C., Vieira M.L.C. Appezzato-da-Gloria B. Histological analysis of organogenesis and somatic embryogenesis induced in immature tissues of Stylosanthes scabra II Ann. Bot. 1992. - V. 70. - № 5. - P. 477-482.

182. Draper J., Mur L.A.J., Jenkins G., Ghosh-Biswas G.C., Bablak P., HasterokR., Routledge A.P.M. Brachypodium distachyon. A new model system for functional genomics in grasses // Plant Physiol. 2001. - V. 127. — № 4. — P. 1539-1555.

183. Dubois Т., Guedira M., Dubois J., Vasseur J. Direct somatic embryogenesis in roots of Cichorium: is callose an early marker // Ann. Bot. — 1990. V. 65. -№5.-P. 539-545.

184. Dubois Т., Guedira M., Dubois J., Vasseur J. Direct somatic embryogenesis in leaves of Cichorium: a histological and SEM study of early stages // Protoplasma. 1991. -V. 162. - № 2-3. - P. 120-127.

185. Eash J.A., Waiss A.C., Jr. Media and growth conditions for induction of callus and organogenesis from protoplasts and explants of Physalls peruviana II Hort Sci. 1991. - V. 26. - № 6. - P. 729-e.

186. Elhag H., El-Olemy M.M., Al-Said M.S. Enhancement of somatic embryogenesis and production of developmentally arrested embryos in Nigella sativa L. // Hort Sci. 2004. - V. 39. - № 2. - P. 321-323.

187. Emons A.M.C., Mulder M.M., Kieft H. Pyrolysis mass spectrometry of developmental stages of maize somatic embryos // Acta Bot. Neerl. 1993a. -V. 42.-№ 4.-P. 319-339.

188. Espinasse A., Lay C. Shoot regeneration of callus derived from globular to torpedo embryos from 59 sunflower genotypes // Crop Sci. 1989. - V. 29. - № 1. -P. 201-205.

189. Etienne H., Lartaud M., Carron M.P., Michaux-Ferriere N. Use of calcium to optimize long-term proliferation of friable embryogenic calluses and plant regeneration in Hevea brasiliensis (Mull. Arg.) // J. Exp. Bot. 1997. — V. 48. -№306. -P. 129-137.

190. Fakhrai H., Fakhrai F., Evans P. K. In vitro culture and plant regeneration in Vicia faba subsp. Equina (var. Spring Blaze) // J. Exp. Bot. 1989. - V. 40. - № 7. -P. 813-817.

191. Fargo E.C., Adkins J.A. Callus induction and regeneration in Hydrangea macrophylla (Thunb.) Ser. // Hort Sci. 2006. - V. 41. - № 4. - P. 1041-a.

192. Fei S., Read P.E., Riordan T.P. In Vitro regeneration of buffalograss Buchloe dactyloides (Nutt.) Engelm through immature inflorescence culture // Hort Sci. 1997. - V. 32. - № 3. - P. 521-523.

193. Ferrie A.M.R., Palmer C.E., Keller W.A. In vitro embryogenesis in plants // Plant embryogenesis / Ed. Thorpe T.A. Dordrecht: Kluwer Acad. Publ., 1995. -P. 309-344.

194. Filippini F., Terzi M., Cozzani F., Vallone D., Schiavo F. Modulation of auxin-binding proteins in cell suspensions // Theor. Appl. Genet. 1992. - V. 84. -№ 3-4. - P. 430-434.

195. Fischer C., Speth V., Fleig-Eberenz S., Neuhaus G. Induction of zygotic polyembryos in wheat: Influence of auxin polar transport // The Plant Cell. — 1997. V. 9. - № 10. - P. 1767-1780.

196. Fischer-Iglesias C., Sundberg В., Neuhaus G., Jones A.M. Auxin distribution and transport during embryonic pattern formation in wheat // The Plant J.-2001.-V. 26.-№2.-P. 115-129.

197. Foiling L., Olesen A. Transformation of wheat (Triticum aestivum L) microspore-derived callus and microspores by particle bombardment // Plant Cell Repts. 2001. - V. 20. - № 7. - P. 629-636.

198. Fortes A.M., Pais M.S. Organogenesis from internode-derived nodules* of Hamulus lupulus var. nugget (Cannabinaceae): histological studies and changes in the starch content // Amer. J. Bot. 2000. - V. 87. - № 7. - P. 971-979.

199. Fortes G.R.L., Teixeira S.L. Calogenesis and organogenesis of somatic material from apple seedlings (Malus domestica Borkh) as affected by source material and dark period // Hort Sci. 1992. - V. 27. - № 6. - P. 572-c.

200. Fransz P.F., Schel J.H.N. Cytodifferentiation during the development of friable embryogenic callus of maize (Zea mays) // Canad. J. Bot. 1991. - V. 69. — № l.-P. 26-33.

201. Geler Т., Kohlenbach H.W. Entwicklung von Embrionen und embryogenem kallus ans pollen kornern von Datura meteloides and D. innoxia II Protoplasma. — 1973. V. 78. - № 2. - P. 381-396.

202. Germana M. A., Chiancone B. Improvement of Citrus Clementina Hort. ex Tan. microspore-derived embryoid induction and regeneration // Plant Cell Repts. -2003. -V. 22. -№ 3. -P.181-187.

203. Gerrits P.O. Staining procedures for tissues embedded in 2-Hydroxyethylmetacrylate (modifications for Technovit 7000) / Ed. Friedrichs H.K. Berlin, 1990. - S. 2-3.

204. Golovko A. Genetic variability of somatic embryogenesis in tissue cultures of sugar beet breeding lines // Цитология и генетика. — 2001. Т. 35. - № 6. -С. 10-17.

205. Govil S., Babbar S.B., Gupta S.C. Plant regeneration from in vitro cultured anthers of black mustard (Brassica nigra Koch.) // Plant Breed. 1986. — V. 97. -№ 1. - P. 64-71.

206. Gosch-Wackerle G., Avivi L., Galun E. Induction, culture and differentiation of callus from immature rachises, seeds and embryos of Triticum II Z. Pflanzenphysiol. 1979. - V. 91. - № 3. - P. 267-278.

207. Gray P.J., Trigiano R.N., Conger B.V. Somatic embryogenesis in orhardgrass // Hort Sci. 1993. - V. 28. - № 5. - P. 467-469.

208. Guenzi A.C., Scheets K., Green J.L., Fellers J.P. Development and characterization of a nonmorphogenetic cell line of wheat (Triticum aestivum) // Plant Cell, Tiss. Org. Cult. 2004. - V. 78. - № 1. - P. 23-28.

209. Guiderdoni E. Gametic selection in anther culture of rice // Theor. Appl. Genet. 1991.-V. 81.-№3.-P. 406-412.

210. Guha S., Maheshwari S. In vitro production of embryos from anther of Datura II Nature. 1964. - V. 204. - № 4957. - P. 497.

211. Guo Y-D., Pulli S. In vitro pollen culture and the regeneration on Brassica campestris L. plants // Agr. Sci. Finl. 1995. - V. 4. -№ 5-6. - P. 513-518.

212. Gupta R., Banerjee S., Mallavarapu G.R., Sharma S., Khanuja S.P.S., Shasany A.K., Kumar S. Development of a superior somaclone of Rose-scented Geranium and a protocol for inducing variants // Hort Sci. 2002. - V. 37. - № 4. -P. 632-636.

213. Hadfi K., Speth V., Neuhaus G. Auxin-induced developmental patterns in Brassica juncea embryos // Development. 1998. - V. 125. - № 5. - P. 879-887.

214. Halperin W., Jensen W.A. Ultrastuctural changes during growth and embryogenesis in carrot cell cultures // J. Ultrasrt. Res. — 1967. — V. 18. № 1. — P. 428-443.

215. Han D.-S., Niimi Y., Nakano M. Long term maintenance of an anther-derived haploid callus line of the Asiatic hybrid lily Connecticut King // Plant Cell, Tiss. Org. Cult. 2000. - V. 61. - № 3. - P. 215-219.

216. Higgins P., Mathias R.J. The effect of the 4B chromosomes of hexaploid wheat on the growth and regeneration of callus cultures // Theor. Appl. Genet. -1987. V. 74. - № 4. - P. 439-444.

217. Hoffmann В., Schumann G., Kriiger H.-U. Histological observations of morphogenesis from androgenetic tissues of Triticum aestivum L. I. Callus tissue // Arch. Zucht. 1990. - V. 20. - №. 3. - P. 179-187.

218. Hoopen P., Hunger A., Mtiller A., Hause В., Kramell R., Wasternack C., Rosahl S., Conrad U. Immunomodulation of jasmonate to manipulate the wound response // J. Exp. Bot. 2007. - V. 58. - № 10. - P. 2525-2535.

219. Howard L., Stewart P., Dhingra A., Chandler C., Folta K. A rapid transformation system for octoploid strawberry // Hort Sci. 2005. - V. 40. - № 4. -P. 1016-c.

220. Ни H., Huang B. Application of pollen-derived plants to crop improvement // Int. Rev. Cyt. 1987. - V. 107. - P. 293-313.

221. Jacqmard A, Detry N., Dewitte W., Van Onckelen H.A., Bernier G. In situ localisation of cytokinins in the shoot apical meristem of Sinapis alba at floral transition // Planta. 2002. - V. 214. - № 6. - P.970-973.

222. Jain M., Chengalrayan К., Gallo-Meagher M., Mislevy P. Embryogenic callus induction and regeneration in a pentaploid hybrid Bermudagrass cv. Tifton 85 // Crop Sci. 2005. - V. 45. - № 3. p. 1069-1072.

223. Jain R.K., Maherchandani N., Chowdhury V.K., Jain S. Radiation-induced organogenesis and isoenzyme patterns in long-term callus cultures of Datura innoxia II Ann. Bot. 1990. - V. 65. - № 6. - P. 659-663.

224. Jayasankar S., Yadava U.L. Partial organogenesis and somatic embryogenesis from petiole explants of field-grown papaya (Carica papaya L.) // Hort Sci. 1996. - V. 31. - № 4. - P. 629-630.

225. Jenik P.D., Barton M.K. Surge and destroy: the role of auxin in plant embryogenesis // Development. 2005. - V. 132. - № 16. - P. 3577-3585.

226. Jimenez V.M., Bangerth F. Endogenous hormone levels in explants and in embryogenic and non-embryogenic cultures of carrot // Physiol.Plant. — 2001. —11. V. 111. -№3.~P. 389-395.

227. Joshee N., Biswas B.K., Yadav A.K. Somatic embryogenesis in Centella asiatica, a valuable medicinal plant // Hort Sci. 2004. - V. 39. - № 4. - P. 859863.

228. Joshee N., Biswas B.K., Yadav A.K. Somatic embryogenesis and plant development in Centella asiatica L., a highly prized medicinal plant of the tropics I I Hort Sci. 2007. - V. 42. - № 3. - P. 633-637.

229. Kamada H., Harada H. Changes in the endogenous level and effects of abscisic acid during somatic embryogenesis of Daucus carota L. // Plant Cell Physiol. 1981. - V. 22. -№ 8. - P. 1423-1429.

230. Kavi K.P.B., Mehta A.R. Changes in some enzyme activities during growth and organogenesis in dark-grown tobacco callus cultures // Plant and Cell Physiol. 1988. - V. 29. - №. 2. - P. 255-259.

231. Kim M., Kim J., Yoon M., Choi D.-I., Lee K.-M. Origin of multicellular pollen and pollen embryos in cultured anthers of pepper (Capsicum annuum) II Plant Cell, Tiss. Org. Cult. 2004. - V. 77. - № 1. - P. 63-72.

232. King P., Potrycus I., Thomas E. In vitro genetics of cereals: problems and perspectives // Physiol, veget. 1978. - V. 16. - № 3. - P. 381-399.

233. Konieczny R., Czaplicki A.Z., Golczyk H., Przywara L. Two pathways of plant regeneration in wheat anther culture // Plant Cell, Tiss. Org. Cult. 2003. -V. 73.-№2.-P. 177-187.

234. Krikorian A.D. Hormones in tissue culture and micropropagation // Plant hormones. Physiology, biochemistry and molecular biology / Ed. Davies P.J. -Dortrecht, Berlin, London: Kluwer Acad. Publ., 1995. P. 774-796.

235. Maeda E., Chen M., Inoue V. Rice: regeneration of plants from callus cultures // Biotechnology in agriculture and forestry. New York; Heidelberg; Berlin: Springer-Verlag, 1986.-P. 105-122.

236. Martinez L.D., Noher de Halac I. Callus induction in culture of Oenothera hookeri and Oenothera picensis anthers I I Biologia plant. 1997/98. — V. 40. -№ l.-P. 11-16.

237. Mathias R.J., Fukui K. The effect of specific chromosome and cytoplasm substitutions on the tissue culture response of wheat // Theor. Appl. Genet. 1986. -V. 71.-№6.-P. 797-800.

238. Mathur J. In vitro morphogenesis in Nardostachys jatamansi DC.: shoot regeneration from callus derived roots 11 Ann. Bot. 1992. - V. 70. — № 5. — P. 419-422.

239. Maurya R., Godara N.R., Yadav R.C. Influence of basal medium and hormones on callus induction and its organogenesis from in vitro culture of rose leaf segments // Hort Sci. 2004. - V. 39. -№ 4. - P. 789.

240. Mercy S.T., Zapata F.J. Initiation of androgenesis in rice (Oryza sativa L. var. Taipei 309) // Indian Nat. Sci. Acad. 1987. - V. 53. - № 3. - P. 253-258.

241. Merkle S.A., Parrot W.A., Williams E.G. Application of somatic embryogenesis and embryo cloning // Plant Tissue Culture / Ed. Bhojwani S.S — Amsterdam: Elsevier, 1990. P. 67 - 107.

242. Miao S., Kuo C., Kwei L. Induction of pollen plants of maize and observations of their progeny // Sino-Austral. Sympos. on Plant Tissue Culture: Proceed. Boston: Pitman Publ. Ltd., 1981. - P. 23-34.

243. Michalczuk L., Cooke T.J., Cohen J.D. Auxin levels at different stages of carrot somatic embryogenesis // Phytochemistry. 1992a. — V. 31. - № 4. — P. 1097-1103.

244. Michalczuk L., Ribnicky D.M., Cooke T.J., Cohen J.D. Regulation of indole-3- acetic acid biosynthetic pathways in carrot cell cultures // Plant physiol. -1992b.-V. 100.-№3.-P. 1346-1353.

245. Miyoshi K. Callus induction and plantlet formation through culture of isolated microspores of eggplant (Solanum melongena L.) // Plant Cell Repts. -1996. V. 15. -№ 6. - P. 391-395.

246. Moctezuma E. Changes in auxin patterns in developing gynophores of the peanut plant (Arachis hypogaea L.) I I Ann. Bot. 1999. - V. 83. - № 3. - P. 235242.

247. Moctezuma E., Feldman L.J. Auxin redistributes upwards in graviresponding gynophores of the peanut plant // Planta. 1999. - V. 209. - № 2. -P. 180-186.

248. Moieni A., Sarrafi A. The effects of gibberelic acid, phenylethylamine, 2,4-D and genotype on androgenesis in hexaploid wheat (Triticum aestivum) // Cereal Res. Commun. 1996. -V. 24. - № 2. - P. 139-143.

249. Mohamed-Yasseen Y., Davenport T.L., Splittstoesser W.E., Skirvin R.M. Somatic embryogenesis from leaf of witloof chic017 (Cichorium intybus L.) // Hort Sci. 1993.-V. 28,-№4.-P. 270-c.

250. Mohanty B.D., Ghosh P.D. Somatic embryogenesis and plant regeneration from leaf callus of Hordeum vulgare II Ann. Bot. 1988. — V. 61. — №5. — P. 551555.

251. Mondal Т.К., Bhattacharya A., Laxmikumaran M., Aliuja P.S. Recent advances of tea (Camellia sinensis) biotechnology // Plant Cell, Tiss. Org. Cult.— 2004. V. 76. - № 3. - P. 195-254.

252. Mwange K.N., Hou H.-W., Cui K.-M. Relationship between endogenous indole-3-acetic acid and abscisic acid changes and bark recovery in Eucommiaulmoides Oliv. after girdling II J. Exp. Bot. 2003. - V. 54. - № 389. - P. 18991907.

253. Na H.Y., Shin D.J., Chun C. Promotion of embryogenic callus induction of Pimpinella brachicarpa by environmental control // Hort Sci. — 2004. — V. 39. -№ 4. P. 788-789.

254. Nageli M., Schmid J.E., Stamp P., Butter B. Improved formation of regenerable callus in isolated microspore culture of maize: impact of carbohydrates, plating density and time of transfer // Plant Cell Repts. — 1999. -V. 19. — № 2. — P. 177-184.

255. Nakano H., Maeda E. Cyto-histological studies on callus formation and its regeneration in anther culture of Oryza sativa L. // Jap. J. Crop Sci. — 1989. — V. 58. — № 3. — P. 409-418.

256. Narayanaswamy S., Chandy L.P. In vitro induction of haploid, diploid and triploid androgenic embryoids and plantlets in Datura metel L. // Ann. Bot. 1971. -V. 35.-№. 7.-P. 535-542.

257. Ning G.G., Bao M.Z. Plant regeneration from callus derived from immature embryo cotyledons of Prunus mume II Hort Sci. 2007. — V. 42. - № 3. - P. 744747.

258. Nolan K.E., Irwanto R.R., Rose R.J. Auxin up-regulates MtSERKl expression in both Medicago truncatula root-forming and embryogenic cultures // Plant Physiol. 2003. - V. 133. - № 1. - P. 218-230.

259. Nomura K., Komamine A. Identification and isolation of single cells that produce somatic embryos at a high frequency in a carrot suspension culture // Plant Physiol. 1985. - V. 79. - № 4. - P. 988-991.

260. Oka S., Saito N., Kawaguchi H. Histological observations on initiation and morphogenesis in immature and mature embryo derived callus of barley (Hordeum vulgare L.) // Ann. Bot 1995. - V. 76. - № 5. - P. 487-492.

261. Ovecka M., Bobak M., Blehova A., Kristin J. Papaver somniferum regeneration by somatic embryogenesis and shoot organogenesis // Biologia Plant. 1997/98. - V. 40. - № 3. - P. 321-328.

262. Ozawa К., Komamine A. Establishment of a system of high-frequency embryogenesis from long-term cell suspension cultures of rice (Oryza sativa L.) // Theor. Appl. Genet. 1989. - V. 77. - № 2. - P. 205-211.

263. Ozias-Akins P., Perera S. Organogenesis in cultured adventitious root segments and in protoplast-derived callus of sweet potato // Hort Sci. — 1990. -V. 25.-№9.-P. 1121.

264. Ozias-Akins P., Vasil I.K. Plant regeneration from cultured immature embryos and inflorescences of Triticum aestivum L. (wheat): evidence for somatic embryogenesis // Protoplasma. 1982. - V. 110. - № 2. - P. 95-105.

265. Palmer C.E., Keller W.A. Pollen embryos // Pollen biothechnology for crop production and improvement / Eds Shivanna K.R., Sawhney V.K. Cambridge: Cambridge Univ. press, 1997. - P. 392-422.

266. Park S.O., Chen L.H., Dhir S.K., Bhagsari A.S. Plant regeneration via organogenesis and embryogenesis from different tissues of sweetpotato // Hort Sci.- 2000. V. 35. - № 3. - P. 448-449.

267. Pechan P.M., Smykal P. Androgenesis: affecting the fate of the male gametophyte // Physiol. Plant. 2001. - V. 111. - № 1. - P. 1-8.

268. Peixe A., Barroso J., Potes A., Pais M.S. Induction of haploid morphogenic calluses from in vitro cultured anthers of Prunus armeniaca cv. «Harcot» // Plant Cell, Tiss. Org. Cult. -2004. -V. 77. -№ 1. P. 35-41.

269. Phippen C., Ockendon D.J. Genotype of plant, bud size and media factors affecting anher culture of cauliflowers (Brassica oleracea var. Botrytis) // Theor. Appl. Genet. 1990. -V. 79. -№. 1. - P. 33-38.

270. Pierik R. In vitro culture of higher plants. Dordrecht: Nijhoff Publ., 1987.- 344 p.

271. Plant biotechnology and molecular markers / Eds Srivastava S., Narula A., Srivastava S. New Delhi: Anamaya Publishers, 2004. 325 p.

272. Radojevic L., Djordjevic N., Tucic B. In vitro induction of pollen embryos and plantlets in Aesculus carnea Hayne through anther culture // Plant Cell, Tiss. Org. Cult. 1989. - V. 17. - № 1. - P. 21-26.

273. Raghavan V. Molecular embryology of flowering plants. Cambridge: Cambridge Univer. press, 1997. - 565 p.

274. Raghavan V., Nahmani R. Cytokinin effects on pollen embryogenesis in cultured anthers of Hyoscymus niger I I Canad. J. Bot. — 1989. V. 67. - № 1. -P. 247-257.

275. Rajasekaran K., Hein M.B., Vasil I.K. Endogenous abscisic acid and indole-3-acetic acid and somatic embryogenesis in cultured leaf explants of Pennisetum purpureum Schum. // Plant Physiol. 1987. - V. 84. - № 1. - P. 47-51.

276. Rakoczy-Trojanowska M., Malepsky S. Genetic factors influencing the regenertation ability of rye (Secale cereale L.). II. Immature embryos // Euphytica. 1995. - V. 83. - № 3. - P. 233-239.

277. Rashid A., Street H. The development of haploid embryoids from anther cultures of Ati-opa beladonna L. // Planta. 1973. - V. 113. - № 3. - P. 236-270.

278. Redway F.A., Vasil V., Lu D., Vasil I.K. Identification of callus types for long-term maintenance and regeneration from commercial cultivars of wheat {Triticum aestivum L.) // Theor. Appl. Genet. 1990. - V. 79. -№ 5. - P. 609-617.

279. Reinert J. Untersuchungen uber die Morphogenese an Gewebekulturen // Berl. Deutsch. Bot. Ges. 1958. - V. 71. - №. 1. - P. 218-226.

280. Reynolds Th. Plant embryogenesis // Plant Mol. Biol. 1997. - V. 33. -№ l.-P. 1-10.

281. Reynolds Th. Ethylene effects of pollen callus formation and organogenesis in anther culture of Solarium carolinense L. // Plant Sci. — 1989. V. 61. - № 1. — P. 131-136.

282. Rivas R.A., Evans P.T., La Bonte D.R. In vitro organogenesis of «Beaurgard» sweetpotato // Hort Sci. 1991. - V. 26. - № 6. - P. 728-d.

283. Rodrigues L.R., Terra T. de F., Bered F., Bodanese-Zanettini M. H. Origin of embryo-like structures in soybean anther culture investigated using SSR marker // Plant Cell, Tiss. Org. Cult. 2004. - V. 77. - № 3. - P. 287-289.

284. Rose J.B., Dunwell J.M., Sunderland N. Anther culture of Sorghum bicolor (L). Moench. 1. Effect of panicle pretreatment, anther incubation temperature and2,4-D concentration // Plant Cell, Tiss. Org. Cult. 1986. - V. 6. - № 1. - P. 1522.

285. Ruan Y., Brand M. Callus induction and shoot organogenesis in rhododendron «Besse howells» and «Catawbiense album» // Hort Sci. 1994. -V. 29.-№5.-P. 515-519.

286. Ribnicky D.M., Ilic N., Cohen J.D., Cooke T.J. The effect of exogenous auxis on endogenous indole-3-acetic acid metabolism // Plant Physiol. 1996. -V. 112. -№2.-P. 549-558.

287. Ryschka S., Ryschka U., Schulze J. Anatomical studies on the development of somatic embryoids in wheat and barley explants // Biochem. Physiol. Pflanz. — 1991.-Bd. 187.-№ l.-S. 31-41.

288. Sakhanokho H.F., Zipf A., Rajasekaran K., Saha S., Sharma G.C. Induction of highly embryogenic calli and plant regeneration in upland (Gossypium hirsutum L.) and pima (Gossypium barbadense L.) cottons // Crop Sci. 2001. - V. 41. -№4.-P. 1235-1240.

289. Samaj J., Baluska F., Bobak M., Volkmann D. Extracellular matrix surface network of embryogenic units of friable maize callus contains arabinogalactan-proteins recognized by monoclonal antibody JIM4 // Plant Cell Repts. 1999. -V. 18. -№ 5. -P. 369-374.

290. Samaj J., Bobak M., Erdelsky K. Histological-anatomical studies of the structure of the organogenic callus in Papaver somniferum L. I I Biologia plant. — 1990. V. 32. - № 1. - P. 14 - 18.

291. Sasaki K., Schimomura K., Kamada H., Harada H. IAA metabolism in embryogenic and non-embryogenic carrot cells // Plant Cell Physiol. — 1994. — V. 35. -№ 8. P. 1159-1165.

292. Satoh S. Functions of the cell wall in the interactions of plant cells: analysis using carrot cultured cells // Plant Cell Physiol. 1998. - V. 39. - № 4. - P. 361368.

293. Schiavone F.M., Cooke T.J. Unusual patterns of somatic embryogenesis in domesticated carrot: developmental effects of exogenous auxins and auxin transport inhibitors // Cell Differ. 1987. - V. 21. - № 1. - P. 53-62.

294. Schumann G. Zytologisch-histologische untersuchungen in triticale -antherenkulturen // Arch. Zucht. 1987. - Bd. 17. - H. 1. - S. 17-25.

295. Schumann G., Hoffman В., Kriiger H.-U. Histological observations on morphogenesis from androgenetic tissues of Triticum aestivum L. II. Embiyoid and embryo cell complexes // Arch. Zucht. 1991. -V. 21. - № 3. - P. 161-168.

296. Segui-Simarro J.M., Nuez F. Embryogenesis induction, cailogenesis, and plant regeneration by in vitro culture of tomato isolated microspores and whole anthers//J. Exp. Bot. 2007.-V. 58. -№5.-P. 1119-1132.

297. Shamrov I.I., Alimova G.K., Koudarov B.R., Dyachuk T.I., Nikiforova I.D., Batygina T.B. Some morphogenetic aspects of secondary embiyoidogeny (somatic embryogeny) in tissue culture // XIII Congr. Eucarpia: Abstr. — Angerns, 1992. — P. 387-388.

298. Sharma G.C., Bello L.L., Sapra V.T., Peterson C.M. Callus initiation and plant regeneration from triticale embryos // Crop Sci. 1981.-V. 21. — № 1. — P.113-118.

299. Sharma V.K., Hansch R., Mendel R.R., Schulze J. Mature embryo axis-based high frequency somatic embryogenesis and plant regeneration from multiple cultivars of barley {Hordeum vidgare L.) // J. Exp. Bot. 2005. - V. 56. - № 417. — P. 1913-1922.

300. Shillito R.D., Carswell G.K., Johnson C.M., Di Maio J.J., Harms C.T. Regeneration of fertile plants from protoplasts of elite inbread maize. // Nat. BioTechnol. 1989. - V. 7. - № 6. - P. 581-587.

301. Shimada Т., Otani M., Hatanaka H. Genetical factors of the anthers cuture response in Japanese winter wheat cultivars // Bull. Res. Inst. Arg. Resour. 1993.3. P. 1-8.

302. Sinha S., Sharon M. Somatic Embryogenesis and Plant Regeneration from Roots of Punica granatum L. I I Hort Sci. 1997. - V. 32. - № 3. - P. 545-546.

303. Skoog F., Miller C.O. Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro II Sympos. Soc. Exp. Biol.: Proceed. 1957. - V. 11. -№ 2. - P. 118-120.

304. Sopory S.K., Maheshwari S.C. Development of pollen embryoids in anther cultures of Datura innoxia. II. Effects of growth hormones // J. Exp. Bot. 1975. -V. 27.-№96.-P. 58-68

305. Sozinov A., Lukjanjuk S., Ignatova S. Anther cultivation and induction of haploid plants in Triticale // Z. Pflanzenzugt. 1981. - V. 86. - № 3. - P. 272-285.

306. Sterk P., Booij H., Schellekens G.A., Van Kammen A., De Vries S.C. Cell-specific expression of the carrot EP2 lipid transfer protein gene // Plant Cell. -1991. -V. 3.-№ 9. -P. 907-921.

307. Steward F.G. Growth and organized development of cultured cells. III. Interpretation of the growth from free cells to carrot plants // Amer. J. Bot. 1958.- V. 45. № 10. - P. 467-473.

308. Sugiura A., Matsuda-Habu Y., Gao M., Esumi Т., Tao R. Somatic embryogenesis and plant regeneration from immature persimmon {Diospyros kaki Thunb.) embryos 11 Hort Sci. 2008. - V. 43. - № 1. - P. 211-214.

309. Sunderland N. Anther and pollen culture 11 IV John Innes Sympos. and II Intern. Conf. «The plant genome»: Proceed. / Eds Davies D.R., Hopwood D.A. — Norwich: John Innes Inst, press, 1980. P. 171-183.

310. Swedlung В., Locy R.D. Embryogenic and nonembryogenic corn callus from immature embryo // J. Plant Physiol. 1993. - V. 103. - № 4. - P. 13391343.

311. Tanabe M.J., Wakida N. Morinda citrifolia In Vitro Seminal Germination, Callus and Organogenesis Induction // Hort Sci. 2005. - V. 40. -№ 4. - P. 10501053.

312. Tang W., Newton R.J., Outhavong V. Exogenously added polyamines recover browning tissues into normal callus cultures and improve plant regeneration in pine // Physiol. Plant. 2004. - V. 122. - № 3. - P. 386-395.

313. Taran В., Bowley S.R. Inheritance of somatic embryogenesis in orchardgrass // Crop Sci. 1997. - V. 37. - № 5. - P. 1497-1502.

314. Tchorbadjieva M., Somleva M., Odjakova M. Characterization of embryogenic and nonembryogenic callus of Dactylis glomerata L. // Докл. Болг. АН. 1992. - Т. 45. - № 7. - P. 103-109.

315. Terzi M., Sung Z.R. Somatic cells genetics of plants // CRC Crit. Rev. Biotechnol. 1986. - V. 3. - № 4. - P. 303-330.

316. Tetu Т., Sangwan R.S., Sangwan-Norreel B.S. Hormonal control of organogenesis and somatic embryogenesis in Beta vulgaris callus // J. Exp. Bot. — 1987. -V. 38. № 3. — P. 506-517.

317. Thorpe T.A., Stasolla C. Somatic embryogenesis // Current trends in embryology of Angiosperms / Eds. Bhojwani S.S., Soh W.Y. Dortrecht, Berlin, London: Kluwer Acad. Publ. - 2001. - P. 279-336.

318. Touraev A., Lezin F., Heberle-Bors E., Vicente O. Maintenance of gametophytic development after symmetrical division in tabacco microspore culture // Sex. Plant Reproduct. 1995. - V. 8. - № 1. - P. 70-76.

319. Tsay H.-Sh., Yeh C.-C., Hsu J.-Y. Embryogenesis and plant regeneration from anther culture of bamboo (Sinocalamus latiflora McClure) // Plant Cell Repts. 1990. - V. 9. - № 7. - P. 349-351.

320. Tsay S.-S., Miao S.-H., Widholm J.M. Factors affecting haploid plant regeneration from maize anther culture // Plant Physiol. 1986. - V. 126. — 1. — P. 33-40.

321. Uggla C., Mellerowicz E.J., Sundberg B. Indole-3-Acetic acid Controls cambial growth in scots pine by positional signaling // Plant Physiol. 1998. — V. 117. -№ l.-P. 113-121.

322. Vagera J., Novotnyr J., Ohnoutkovar L. Induced androgenesis in vitro in mutated populations of barley, Hordeum vulgare II Plant Cell, Tiss. Org. Cult. — 2004. V. 77. - № 1. - P. 55-61.

323. Vasil V., Lu C.Y., Vasil I.K. Histology of somatic embryogenesis in cultured immature embryos of maize {Zea mays L.) // Protoplasma. — 1985. — V. 127.-№ 1-2.-P. 1-8.

324. Vasil V., Vasil I.K. Somatic embryogenesis and plant regeneration from suspension cultures of pearl millet (Pennisetum americanum) // Ann. Bot. — 1981. -V. 47.-№5.-P. 669-678.

325. Vasil V.V., Vasil I.K., Lu Ch. Somatic embryogenesis in long-term callus cultures of Zea mays L. (Gramineae) // Amer. J. Bot. 1984. - V. 71. - № 1. — P. 158-161.

326. Verdeil J.L., Hocher V., Huet C., Grosdemange F., Escoute J., Ferriere N., Nicole M. Ultrastructural changes in coconut calli associated with the acquisition of embryogenic competence // Ann. Bot. 2001. - V. 88. - № 1. - P. 9-18.

327. Victor J.M.R., Murthy B.N.S., Murch S.J., KrishnaRaj S., Saxena P.K. Role of endogenous purine metabolism in thidiazuron-induced somatic embryogenesisof peanut (.Arachis hypogaea L.) // Plant Growth Regul. 1999. - V. 28. - № 1. -P. 41-47.

328. Wang L., Huang В., He M., Hao S. Somatic embryogenesis and its hormonal regulation in tissue cultures of Freesia vefracta II Ann. Bot. 1990. - V. 65. — №3.-P. 271-276.

329. Williams E.G., Maheshwaran G. Somatic embryogenesis: factors influencing coordinated behaviour of cells as an embryogenic group // Ann. Bot. -1986. V. 57. - № 4. - P. 443-462.

330. Yadav J.S., Rajam M.V. Temporal regulation of somatic embiyogenesis by adjusting cellular polyamine content in eggplant // Plant Physiol. 1998. - V. 116. -№ 2. -P. 617-625.

331. Yadav N.R., Varghese T.M., Sharma D.R. Morphogenetic studies in androgenic callus of Solarium melongena L. I I Curr. Sci. — 1989. — V. 58. № 11.— P. 637-639.

332. Yancheva S.D., Golubowicz S., Fisher E., Lev-Yadun S., M.A. Flaishman Auxin type and timing of application determine the activation of the developmental program during in vitro organogenesis in apple // Plant Sci. -2003.-V. 165.-P. 299-309.

333. Yang G., Kamp-Glass M. Influences of growth regulators and cultivars on callus and shoot production of alfalfa // Hort Sci. 1998. - V. 33. - № 3. - P. 461462.

334. Ye J.M., Harvey B.L., Kao K.N. Effect of 2,4-D and zeatin riboside on pollen callus induction in barley anther culture // Canad. J. Plant Sci. 1985. -V. 65.-№ l.-P. 29-32.

335. Zaghmout O.M., Oliver M.J. Differensial modulation of root formation in wheat embryogenic callus culture by endoleacetic acid-degrading compounds // J.Exp. Bot.- 1995.-V. 46.-№ l.-P. 155-159.

336. Zagorska N.A., Shtereva L.A., Kruleva M.M., Sotirova V.G., Baralieva D.L., Dimitrov B.D. Induced androgenesis in tomato (Lycopersicon esculentum

337. Mill.). III. Characterization of the regenerants // Plant Cell Repts. 2004. - V. 22. - № 7. - P. 449-456.

338. Zare A.G., Humphreys M.W., Rogers J.W., Mortimer A.M., Collin H.A. Androgenesis in a Lolium multiflorum x Festuca arundinacea hybrid to generate genotypic variation for drought resistance // Euphytica. 2002. - V. 125. - № 1. -P. 1-11.

339. Zhang X.-Y., Huang Y.-B., Yin G.-Ch. et al. Histological study of somatic embryogenesis in culture in vitro I I Acta Bot. Sin. 1992. - V. 34. - № 3. - P. 214218.

340. Zhanga C.-R., Huanga X.-L., Wub J.-Y., Fenga B.-H., Chena Y.-F. Identification of thidiazuron-induced ESTs expressed differentially during callus differentiation of alfalfa (Medicago sativa) ii Physiol. Plant. 2006. - V. 128. -№4.-P. 732-739.

341. Zheng M.Y., Konzak C.F. Effect of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid on callus induction and plant regeneration in anther culture of wheat (Triticum aestivum L.) 11 Plant Cell Repts. 1999. - V. 19. - № 1. - P. 69-73.

342. Zheng Z., Huang B. Rapid and repetitive plant regeneration in sweetpotato via somatic embryogenesis// Acta Bot. Sin. — 1994.-V. 36.-№ 3.-P. 175-179.

343. Zhou X., Han Y., Yang W., Xi T. Somatic embryogenesis and analysis of peroxidase in cultured lettuce (Lactuca sativa L.) cotyledons // Ann. Bot. — 1992. — V. 69.-№2.-P. 97-100.

344. Ziauddin A., Marsolais A., Simion E., Kasha K.J. Improved plant regeneration from wheat anther and barley microspore culture using phenylacetic acid (PAA) // Plant Cell Repts. 1992. - V. 11. - № 10. - P. 489-493.

Информация о работе

Зайцев, Денис Юрьевич
кандидата биологических наук
Уфа, 2008
ВАК 03.00.12

Диссертация

Цито-физиологические особенности морфогенеза in vitro андроклинных каллусов пшеницы - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы