Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Транскрипция антисмысловых РНК гена c-myc человека

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Транскрипция антисмысловых РНК гена c-myc человека"

, и V ><

;•} Г'-1! 'ИТ7.

российская шдения наук институт молекулярной биологии ин. в.а. энгельгардта

На правах рукописи удк 5т7.2н.6

ШЯХОВА Лариса Николаевна ТРАНСКРИПЦИЯ АЕГИСННСЛОВЫХ РНК ГЕНА С-НС ЧЕЛОВЕКА. 03.00.03 - Молекулярная биология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологически наук

X

Москва - 1994

Работа выполнена в лаборатории ыолекулярни основ онкогенеза Института молекулярной биологии РАН им. В.А..Энгельгардта, зев. лабораторией член-корр., проф. 1.1. Киселев.

Научные руководители: член-корр., проф. 1Л. Киселев

доктор биологически наук А.В. Иткес Официальные оппоненты: доктор биологически наук П.М. Чунаков кандидат хпяческш наук Э.А. Брага

Ведущая организация:

Инстатут бшшгга развития РАЙ ни. Н.К. Кольцова

Защита состоится " /Л 1994 г. в /О часов

на заседании Специализированного совета Д.002.79.01 при Институте молекулярной биологии РАН т. В.А. Энгельгардта но адресу 117984, Москва, ул. Вавилова, д. 32.

С диссертацией кохно ознакомиться в библиотеке Института колекулярной биологии РАН иы. В.А. Энгельгардта.

Автореферат разослан

*9 . Сьи^

1994 г.

Ученый секретарь Специализированного совета кандидат химических наук

а.И. Крищш

Актуальность проблема.

Экспрессия генов регулируется сложными процессами, иногда весьма нетривиальными. Например, недавно обнаружены особые- РНК, которые в некоторт клетках высокоспецифичн) ингибировали транскрипцию' определенных генов. Регуляторнае РНК содержали последовательности, комплементарные РНЕ-мшенян, и транскрибировались по противоположным цепям Щ. Они получили название антисмнсловых РНК (асРНК). Впервые асРВК были обнаружены у прокариот. У зукариот также обнаружена транскрипция по противоположной цепи ДНК. Такие трансхршлн найдены при исследовании синтеза РНК в раде клеточня1 линий, асРНК присутствует как "в ядре, так я в цитоплазме.

Антисмнсловне РНК изучены в очень малой степени, особенно в клетках ваши организмов. Из обдщх соображений можно предположить участие антисмнсловых РНК в процессах пролиферации и опухолевого роста. В этих процессах важную роль играет семейство генов туе (с-иус, Е-пус, Ь-шус). Наиболее изученный член этого семейства - ген с-иус, экспрессия которого характерна как для трансформированных, так и для ^трансформированных клеток. Этот ген имеет очень сложную систему позитивная и негативной регуляции, что по-видимому указывает на возиатнпсть его-участия в контроле клеточной пролиферации. Учитывая сказанное выше, мы полагали, что этот ген может регулировался и через антисмысловую РНК. Дель работа.

1. Обнаружение антисмнсловых транскриптов гена с-шус в разннх клеточных линиях, в том числе в зависимости от их пролиферативного статуса.

2. Определение стартов антисиыеловой транскрзпции.

3. Выявление возможных факторов, участвующих в регуляции антиемнеловой транскрипции.

Научная новизна в практическое значение работы.

В клетках ®ловека (линии Hela, лимфомн Беркита BL-60, t(8;22) и дишацнт фибробластах) обнаружена антисмысловая транскрипция геяа с-пус. Локализованы два старта антисмысловой транскрипции, аисодяадеся внутри первого- (нетранслируемого) экзона гена с-щс. Выявлена гонология между антисмысловой нуклеотидной шсвдовательностьв первого интрона гена с-иус и (фрагментов ДНК вируса S7Í0, содержащим участки связывания транскрипционных факторов GT-I, GT-II, TC-I a ÍC-IÍ. Обнаружена также гомология езду районом стартов антисшсловой транскрипции и просторной областьп ретротранспозона odgf дрозофилы. Установлено, что фрагмент ДНК первого интрона гена с-иус (участок проыоторной облети! образует .комплексы с белками экстракта клеток Hela по 15га участкам: ÍTTCTG , ТГИГА и TGACTrGíC. Все данные получены шрвые.

Полученные в работе данные вносят вклад в изучение механизмов рагу лещ вкспрессии онкогенов, что весьма важно для-понимания природа канцерогенеза и поиска путей возвращения клетки в нормальное прохйеративное состояние. Объем и структура диссертации.

ДиссертацЕа состоит из введения, трех глав, выводов и списка литератур. Она изложена на ТОО страницах, содержит 16 рисунков и библкзрафический список из 111 наименований.

ОСНОВНОЕ СОДЕРШКЕ РАБОТУ.

Антисмысловзя транскрипция гена с-иус в нормальных и трансформированных линиях клеток человека.

Для выявлегз антксаысловых транскриптов гена с-пус в тотальной РНК из клеточных линий мы сконструировали плазниды p!JS-2 и pDS-B на осшве вектора pGEH-1. По сайту Snal в вектор был встроен фрагмент первого зкзона гена с-иус от -101 до +514 в разных ориентазш по отношении к ТТ-промотору (рис.1).

Полученные конструкции использовала как матрщи для синтеза . рибопроб.

-101 +1

первиб этсэоа гена с-шус

первый квтроа гева с—туе - проиоторвая область гена с—ттс

платила рбЕМ!

старт траяскрвтяша Т7 волиыераэы

В - ВШШ Р - РтоП

Э - 8ша1 к - Есога

А - АтаЛ

Рис. 1 Схема плазкида рШИЗ.

Конструкция рИЭ-8 обеспечивала синтез антетнеловой туе-РНК, а рПЭ-2 - смысловой, что позволяло выявлять антисшсловне транскрштн в тотальной РНК при использовании р©-2 и смысловые -в случае рИЭ-в. При гибридизации тотальной Ш, выделенной из экспоненциально растущих клеток НеЬа с рибощгабей рГС>-8 выяснили, исходя размеров транскриптов, что нораыьная инициация транскрипции смысловой шус-РНК происходила со екртов Р(, Рг и Ро (рис. 2). Используя ргбопробу рШЗ-2, Заругали весьма интенсивнуи аятисиысловув транскрипции, причев дана наибольшего из антиемнеловнх транскриптов бала по крайне! нере .не меньше полной длины рибопробн (рис. 2).

Антисмысловая РНК гена р53 (ЮшсЬМл Б. й. а1., 1989) и антиошеловая" РНК, р-глобиновой пре-иРВК чэловгжа (Мипгое Б-Н., 1988) участвует в процессах созревания РНК. .Воааогно,

антисинсловая вус-РНК тою принимает участив в процессииге, так как антвгашслшая транскрипция обнаружена в первой зкзоне гена с-иус, который» транслируется.

1 2 77 ;

-, ,

»

*

щ с

_-pJ

Рис.. 2_ _________

РНК-РНК гибридизация в растворе (RNA protection assay) препаратов тотальной -РНК, выделенной из клеток, находящихся в. экспо- , ненциальной фазе роста (-2, 4) и из клеток, выращиваемых без сыворотки в течение 48 часов (1, 3). Антисмысловая РНК~ (1, 2), смысловая РНК (3, 4). Р0, V р,а» Р2 - старты транскрипции гена с-шус.

1нтисыыслшй синтез был обнаружен на клетках линии. Ее La, которые является трансформированными. Поэтому оставалось неясный, в какой мере вта результата приложим к нормальным клеткам. Изучение синтка антнскнсловнх транскриптов гена с-пус в нетрансфоригроганах клетка! мв проводили на линии дшлоидшп. фибробластов человека. Тотальную РНК, выделенную из фибробластов, тестировали евтодои гибридизация РЖ-РЯК в растворе. Мн. обнаружили, что уровень как анянашсловоЛ, так и сансдовой транскрипции геи с-пус в фибробластах существенно ниже, чем в клетка1 HeLa, в расчете на количество тотальной РЕПС. Кориадьная инициация транзфинцш происходила только со старта Р (рис.3).

Продукты антисынслового синтеза оыли представлен набором транскриптов разного размера (рис.3). Нужно отметить, что в отличие от клеток HeLa, в клетка! фио'робластов вэ обнаруживалось

2 1

_ L40Î Рис. 3 _ .

_ II331 РНК-РНК гибридизация в растворе

(RNA protection assay) препара-„ TQB тотально* РНК, выделенной

из диплоидных фибробластов че-СГЭ —4Q0 ловека, антиошсловая (1), смы-

__еловая (2).

— —147 р^ _ старт транскрипции' гена с-туе. Справа указаны размеры мает — 110 ркерных РНК-Фрагментов.

! ...

. ________ ___ ________' ■

антиснысловых транскриптов с длиной, равной ии нрэвшащей длину рибопробн. Более того, наибольшее количество антисшсловнх транскриптов имело существенно меньаий размер чш рибопроба.

Для сравнения процессов антискнсловой транскрипции в перестроенной и нормальном гене с-тус исследован РНК, выделенную из клеточной линии ВЬ-60 (линфоыа Веркгта|, Клеяга ВЬ-60 содержат перестроенный ген с-тус с хромосомной трансгясацией (Ц&;22)) (Яо1Г Л.' еЪ. а1., 1991). Старта инициации сшсжвбй транскрипции

P2-, D^ ; *

с-тус в эти штка1 находились внутри первого акзона. Из рис.4 видно, что сизыовой синтез довольно интенсивен. Антисыысловая транскрипция тшэ ярко внрахена и дает широкий набор транскриптов (рис.4), также как и. в клетках НеЬа (рис.2). Однако, среди антисмысловшс траискриптов клеток ВЬ-60 преобладали те, которые инела нескольш ввньиий размер, чем рибопроба, в отличие от клеток НеЬа. Тем не менее они превосходили по размеру антисмысловие тршскриптн фибробластов. Возможно, в перестроенном гене с-иус происходит изменение стартов в смысловой, и антисынсловой транскрипции, но яри этом не происходит угнетения антисынсловой транскрипции.

1 2

— бЗО

I

Ц —40о

Q ег

Рис. 4

РНК-РНК гибридизация в растворе (RNA protection assay) препаратов тотальной РНК, выделенной из клеток BL-60. Антисмысловая (1), смысловая (2). Справа указаны размеры маркерных РНК-фрагментов .

«а

Предыдущие работы (КЬосЬЫп Б. а!., 1989; Ьа11еташ1 С. • ег. а1., 1992) косвенно указывали на возиояную связь антисмнсловой транскрипции с процессам пролиферации и опухолевого роста. Исходя из этого мы провели анализ РНК, выделенной из клеток НеЬа, подвергавшихся ростовой задержке. Мы выдерживали клетки в бессывороточной среде в течение 48 часов, полученную РНК анализировали методом РНК-Р2Е гибридизации в растворе. Этот- анализ показал, что нереальная инициация транскрипции смысловой туе-РНК происходила только со старта Р , в то время как транскрипции со стартов Р0, Р1а ж Р почти исчезала (рис.2).Антиснысловая транскрипция практичеон прекращалась (рис 2). Таким образом, при изменении пролифвратгвшго статуса клетск происходило угнетение как смысловой транскрзяаии со стартов Ро,; Р1а и Р , так и антисмнсловой транскрищга. Это. наблюдение позволяет предполоетть, что антясмысловая транскрипция первого зкзона гена с-гаус вероятнее всего не свааана со смысловны синтезом со старта Рг. Однако, инициация тразприпцш со стартов ?0, ?1а и Р^ явно зависит ' от гнтенеявшжги антисюзслового синтеза. Это предположение подтверждается и теа, что при.низком уровне антисмнсловой транскрипции у диеквдннх фибробластов нормальная инициация смыслового синтеза преисходила только со старта Рг (рис.3). .

Для более детального анализа процесса акямшелового синтеза на провели картирование стартов антискясшвой транскрипции. Старты определяли методом удлинения затравки. В качестве затравки использовали олигонуклеотид б'ЧЮажКСАШЯАТТСТ-з', комллементареннй ' участку, распологенному за 122 п.н. левее границы между первый бкзояом и первый интронса (от +429 до +446, считая от старта Р(). Картирование стартов антисмнсловой транскрипции проводили для РНК, выделенной вз экспоненциально растущих клеток и из голодании клеток.

Мы обнарухили, что синтезировалось два фрагмента кДНК (рис. 5Б). Следовательно существует два старта аятикаслового синтеза.

Intron I

aqgacccecttctctqaaaqgctctccttqcaqct

_J

tsa •uric

_J

BOS •tart I

\CSS3

№. no.

¡4} ■

no-

ma» CD

6?.

о

о

J4" •

Рис. 5 Опреснение 5'-конца антискыслового транскрипта с-шус гена.(?г1е2г extension assay)

к. Схема щэдктое Primer extension assay. P( и - старты сыысловй транскрипции. Координаты отсчитывастся от старта Р, (+1)

К. Злектрофзретичвский анализ кДНК. РНК, синтезированная in vitro с гспользованиеы акстракта клеток Hela (в качестве матрицы Еспользовали фрагмент гена с-иус от -101 до +1185) (1). Тошьпая РНК из клеток, лишенных сыворотки (2). Тотальш РНК из растуидх клеток (3).

располагавшиеся в позициях на 43 п.н. и 67 п.н. левее начала первого интрона (их координата: +-485 и +509, считая от старта Î,), то есть, оба старта инициации антисмысловой транскрипции расположены в первом зкзоне (рис. 51). При анализе РНК, виде ленной из голодавадх клеток, кЩС ив синтезировалась, что -подтверждало результаты тестирования этой РНК методом РНК-РНК гибридизации в растворе.

На проверили, сохраняется ли эти старты при антисмнсловой транскрипции in vitro. Для этой цели использовали плазниду, содержащую фрагмент гена с-иус с координатами от -101 до +1185. Применяя экстракт из клеток Hela, ыа проведя синтез РНК in vitro. Полученную РНК анализировали методов удлинения затравки. Оказалось, что при синтезе антисмнсловой РНК ín uííro обнаруживается один старт, совершенно не совпадающий со стартами транскрипции in vivo (рис. 5): он, находится внутри первого интрона (на 152 п.н. правее его начала). Сравнение антисмнсловой транскрипции в условиях ín uítro и ■ in vivo показывают, что реконструкция этого синтеза in vitro сильно отличается от нормального внутриклеточного процесса и полученные данные должны интерпретироваться с определенной осторожности). Поскольку, старты антасансловой транскрипции in viiro я in vivo не совпадает, можно предположить, что экстракт, используемый нани в опытах in vitro, не содержит необходимых транскрипционных •. факторов в соответствующей концентрации. Вместе с тем, информации ДНК в плазмиде и в хроматине отличаются, поэтому возможно, что при синтезе in üifro, становится доступным участок связывания транскрипционного фактора, который определяет активность единственного старта in vitro.

Мы обнаружили гомологию между районом стартов антисмасловой транскрипции и проыоторнай область» ретротранспозона rndgl дрозофилы (АгПрота I.R., 11у1л Y., 1991). Промотор mdgí содержит два консервативных элемента. Первый (TCAGAG) обычно располагается рядом со стартом транскрипции, а второй (АСАС)- правее на 30 п.н.-Обе элемента обнаружены в антисмнсловой последовательности гена

с-шус человека в аналогичны! позициях, однако, вторая .последовательность (GTGT) комплементарна второму консервативному элементу ретротранспозона ndgl (АСАС) (рис.6).

start I start It

-10 |— j— CTAGGCAGCT GCAAGGAGAG CCTTTCAGAGA AGCGGGTCCT

* 31

GGCAGCGGCG GGGAAGTGTC CCCAAATGGG

Рис. 6 _ ____ _ __________

Схема расположения стартов транскрипции антисмысловой РНК гена с-шус. Мотивы, характеризующие промоторы ретротранспозона ядрозофиллы подчеркнуты.

Регуляция антисмысловой транскрипции.

После идентификации стартов антисмысловой транскрипции стало ясно, что возможные регуляторнне области антисннслового синтеза могут находиться в первом интроне, так как первый интрон по отношению к антисмысловой стартам занимает 5' положение.

Для идентификации предположительных участков ДНК, вовлеченных в регуляцию антисмысловой транскрипции, нами был проведен компьютерный анализ антисмысловой последовательности первого интрона гена .с-шус, с координатами от +553 до +950 (принимая старт Р. за +1). Анализируя ятот участок, мы обнаружили

нуклеотиднае последовательности, аналогичные участкам знхансерного района вируса SV40 (Xiao J.I., et. al., 1987). Как показано на рис- ' 7, расположение Б740-подо0ннх мотивов в антисннсловой последовательности гена с-пус относительно первого

А

-480

caqo-atqca aaqgqqcttt ctqcccccqc а аататавл ааз gtm

-400

aagcaacccc ссаосссссса aaacccac3ag тсс ccaq тсссса TCUII

В

-300 QT-J1

aqqtaccttc tqaqqcqqaa aqaaccaqct qtqqaatgtq tctcaottaq "

TC-II

- 280 QT-1 TC-1 Octamer. Sphll, Sphl

qqtotqqaaa qtccccaqqc tccccaqcaq qcaqaaqtat qoaaaocatq

РИС. 7

Гомология между антисмысловой нуклеотидной последовательностью первого интрона гена с-туе (А) и фрагментом ДНК генома SV40, который содержит участки связывания транскрипционных факторов GT-1, GT-JI, TC-I, и TC-II (Б).

старта антисмысловой транскрипции следующее: -420 для транскрипционного фактора GT-! (-250 в SV40) и -39О/-380 для факторов IG-1/TC-2 (-245/-235 в SV40). Наличие многочисленны! участков связывания • транскрипционных- факторов указывает на существование системы регуляции антисмысловой транскрипции. Участок гена с-иус, локализованный между стартами антисмысловой транскрипции и области 3740-подобных мотивов также может содержать участки . связывания еще неидентифщщроваяши транскрипционных факторов.

С помощь» метода торможения в геле мы обнаружили, что -исследуемый'фрагмент (luall/taalll, от +456 до +816, считая от старта Р,) связывается с белками из экстракта клеток Hela. Для зтих экспериментов мы использовали два вида экстрактов. Первый получали из клеток Hela, находящихся в стадии экспоненциального роста, второй - из клеток BeLa, выдержанных без сыворотки двое суток. Исследуемый участок гена с-аус образовывал едивственннй комплекс с белком ми белкайи первого экстракта (рис. 8А). При использовании второго экстракта ДНК-белковых комплексов обнаружить не удалось (рис. Щ. Эта результаты согласуйся с зависшостьв антисмысловой транскрипции от пролиферативного статуса клеток, описанную внне (рис. 2). По-видимому, в покоящихся клетках отсутствует фактор (или факторы) определяющий антисмнсловую транскрипцию.

При изменении условий комплексообразования (добавление в инкубационную смесь ЭДТ1 и удаление íg^) наблюдали не один, а два специфических ДНК-белковях комплекса для первого экстракта и один - для второго (рис. 8Б). Вероятно, существуют белки, которые связываются с регуляторами участками гена с-иус лишь при отсутствии ионов Ig2+. Возможно, что регуляция антисмысловой трансвфипции зависит от многих факторов, в том числе и от изменения концентрации двухвалентных ионов.

Для определения нукдеотидных последовательностей ДНК, с которыми связываются белки (или белок) из акстрактов клеток НеЬа . мы использовали технику . ДНКазного футаринта. Образование

белкового комплекса с анализируемым фрагментом ЦуаП/ХетаШ, от +456 до +816, считая от старта Р,) проводили при избытке экстракта, что обеспечивало полное вовлечение анализируемого .фрагмента в процесс комплексообразования.

А Б

12 3 * ~ 1 2 3

Рис. 8

.Электрофоретический анализ связывания белков экстракта клеток НеLa с фрагментом Avail/Хаз!И гена с-аус. Образование комплекса ДНК-белок происходит а присутствии Mg2* (А) и без в присутствии ЭДТА (Б). Экстракт из растущих клеток HeLa (1), экстракт из голодающих клеток HeLa (2), свободный фрагмент ДНК (3).

,54 32 1

8-- - г

Рис. 9. Комплекс фрагмента ДНК АшГШиаШ гена с-еус с белками из экстракта клеток НвЬа, обработаннн1 ДНКазой А в течение 2-х минут (2) и в течение 5-ти минут (3). Фрагмент ДНК 1иаП/ХпаШ гена с-ш/с,обработанный ДНКазой А в течение 2-х кинут (4) и в течение 5-ти минут (5). Пурин-специфическое расщепление фрагмента • ДНК 4иЛ1/1паШ гена с-шус (1).

После этого комплекс подвергали обработке ДНКазой А, которая впаивала статистическое расцепление незащищенных белков участков анализируемого фрагмента.

На рис.'9 видны три так называвши "окна" (соответствувдие участкам ДНК, защищенных белком). Следовательно, три последовательности фрагмента гена с-пус способны взаимодействовать с белками экстракта из растущих клеток HeLa.

Первая (ТИСТО) и1" вторая (5ШК последовательности представлены Т-богатыни участками. Зозматао, что они предназначены для связввания одного и того ze белка. В литературе мы не нашли данных о том, какие транскрипционные факторы могут связываться с подобными участками. Третья последовательность (TGACTTGTC) похока на участок для связывания фактора CREB (Hoatamlny ä.E., Bllezírjían Ь.й., 1987), но с вставкой И в середине.

Заключение.

Обнаружение интенсивной антисмысловой транскрипции нормального гена с-иус ставит вопрос о ее биологической роли. Недавно найден антисмысловой транскрипт (ASM-1) с приблизительно 85S гомологией к антисмысловнм нуклеотидннм последовательностям гена с-шус человека и с несколько меньшей гомологией к антисмнслован цепям гена ff-кус, гена р53 и тинидинкиназного гена (Celano Р. et. al., 1992).'Поскольку экспрессия всех этих генов связана с клеточным ростом, возмогло, что антисмысловае транскргптн, образуя дуплекса со смысловыми РЕК способны изменять экспрессию генов при процессах пролиферации и дафференцировки.

Известно, что в ряде случаев антисмысловце транскрипты могут слугить матрицей для синтеза белков идя полипептидов (Borbelo P.D. et. al., 1988). Следует отметить,- что среди таких антисмысловых транскриптов есть РНК, транскрибируемая со структурного гена - коллагена (POscílL Е. et. al., 1988).. Эта РНК ответственна за синтез одной из цепей коллагенового белка. Исследуемая нами антиснысловая шус-РНК ииеет открытую рамку

считывания для 160 аминокислотных остатков.

Антисмысловая транскрипция гена с-пус может оказывать .влияете на общий уровень экспрессии этого гена. Например, антисмысловой транскрипт способен к формированию дуплекса со зрелой смысловой РНК в районе первого зкзона. В зтоы случае участок РНК, соответствующий кодирующим (второму и третьему) экзонам остается однонитевым. Такая РНК может-служить матрицей для трансляции, имея в то же время двуспиральный S'-кояоц, с которым могут связываться белки, избирательно узнающие двунитевую РНК. Гак, одам из белков, связываицихся с двунитевой РНК, является 2',5'-олигоаденыатсинтетазв, которая активирует РНКазу I, гидролизувщув однонитевую шус-РЕК, со стороны дуплекса соответственно, уменьшая ее время жизни (Pestka S. et. al., í987; Itkes A.B. et. al., 1985.).

Этот гипотетический механизм, работающий по принципу отрицательной обратной связи, может быть включен в регуляцию трансляции с-шус мРНК путем, ограничения транскрипции активированного гена с-иус в растущих клетках. Это предположение может, объяснить, почему смысловой и антисинсловой синтез изменяется в клетках с разной пролифератквной активностью.

ВЫВОДЫ.

1. Обнаружена антисынсловая транскрипция гена с-шус человека,

. интенсивность которой определяется пролиферативнам статусом • клеток.

2. Локализованы два старта антнснысловой транскрипции i л vivo в первом зкзоне гена с-иус человека.

3. В нромоторвой области стартов антисынсловой транскрипции обнаружены нуыеотидаае последовательности, подобные двум консервативным вдементам, которые характерны для промотора ретротранспозона mdgl дрозофилы.

4. В регуляторной области стартов антисннслово! транскрипции найдены участки, аналогичные шследавательзагтяи зн1ансерного района вируса SV40. .

5. В промоторной области стартов антасин&шиа транскрипции обнаружены три участка, связыващахся с быками экстракта клеток Heia. Первый (ITrCTGj и второй (ТТША) представлены Т-богатыни последовательности. Третий учеток (ГСАСКСТС) похож на последовательность, с которой связывается транскрипционный фактор CREB, ко со вставка® ТГ в середине.

Основные результаты диссертации-излошш в следуядх публикациях:

1. Д.Н. Шляхова, A.B. Йткес, Б.К. Чернов, I.I. Киселев. Транскрипция антисиысловях РНК гена с-аус человека.. Молекулярная биология, 1594, т. 28, if 4, с. 509-918.

2. JLK. Вляхова, A.B. йткес, Л.Л. Киселев. Каркроваяие стартов антисштсловой транскрипция гена с-т/с челоета. Доклада РАН, 1994, т.337, Я 2, с. 240-242.

Подписано к печати "/3" ам.{,г'3199'У г. Отпечатано на ротапринте в Формат бумаги 30x42/4 Производственном комбинате Объем ^¿Г п. я. Литературного фада Зак,{50- Тир. 100