Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Термодинамические и гибридизационные свойства модифицированных олигонуклеотидов
ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология
Содержание диссертации, кандидата химических наук, Колганова, Наталья Анатольевна
1. Условные сокращения
2. Введение
3. Обзор литературы
3.1. Универсальные основания
3.1.1. Строение и свойства универсальных оснований
3.1.2. Применение олигонуклеотидов с универсальными основаниями в молекулярно-биологических исследованиях
3.2. Олигонуклеотиды с незаряженным или положительно заряженным остовом
4. Обсуждение результатов
4.1. Влияние 5-нитроиндола на стабильность и свойства дуплексов в растворе
4.2. Влияние 5-нитроиндола на стабильность и свойства дуплексов, иммобилизованных на матрице
4.3. Дезоксиолигонуклеотиды с удлиненной цвиттер-ионной межнуклеотидной связью
5. Экспериментальная часть
5.1. Синтез нуклеозидов и олигонуклеотидов
5.2. Минимизация конформационной энергии
5.3. Растворы олигонуклеотидов для физико-химических исследований
5.4. Кривые термической денатурации
5.5. КД-спектроскопия
5.6. Иммобилизация олигонуклеотидов в тонком слое ПААГ
5.7. Гибридизация и отмывка
5.8. Денатурирующий гель-электрофорез радиоактивно меченых (32Р) олигонуклеотидов в ПААГ
6. Выводы
Введение Диссертация по биологии, на тему "Термодинамические и гибридизационные свойства модифицированных олигонуклеотидов"
В последние годы в молекулярной биологии оформилось новое направление исследований, связанное с дизайном, синтезом и изучением физико-химических и биологических свойств модифицированных олигонуклеотидов, необходимых для решения конкретных-молекулярно биологических задач. Такие исследования имеют как фундаментальное, так и прикладное значение. Целенаправленное изменение химических, физико-химических и биологических свойств нуклеиновых кислот позволяет детально изучить процессы, протекающие в клетках.
Синтетические олигонуклеотиды, содержащие модифицированные фрагменты, являются одним из важнейших молекулярных инструментов исследования направленного регулирования экспрессии генов и преодоления проблем, связанных с полиморфизмом человеческого генома. Важным практическим применением таких исследований является синтез терапевтических противовирусных препаратов, искусственных репрессоров генов и создание надежных методов для диагностики наследственных и вирусных заболеваний.
Одними из наиболее перспективных путей решения этой проблемы считаются «антисмысловые»- и «антигенные»-технологии. Первая заключается в образовании «адресуемыми» олигонуклеотидами дуплексов с РНК. Вторая - в образовании трехцепочечных комплексов с дуплексами ДНК. На сегодняшний день наиболее интенсивно разрабатывается «антигенная» технология. В то же время, применению немодифицированных олигонуклеотидов в молекулярной биологии in vivo и для лечения различных вирусных и наследственных заболеваний препятствует недостаточная стабильность олигонуклеотидов в клетке.
Для достижения наилучшего соответствия требованиям, предъявляемым к антисмысловым и антигенным олигонуклеотидам, проводят их направленную модификацию - по гетероциклическим основаниям, остаткам рибозы и дезоксирибозы, межнуклеотидным связям и их комбинации. Актуальным представляется поиск новых типов модификаций олигонуклеотидов, в результате которых синтетические аналоги были бы способны к образованию прочных 2-х или 3-х цепочечных спиральных комплексов с природными олигонуклеотидами. Одним из направлений подобных исследований является синтез и исследование свойств универсальных оснований - нуклеотидных аналогов, проявляющих способность образовывать одинаково стабильные полноценные пары с любыми из природных нуклеотидов. Другим перспективным направлением на сегодняшний день представляется синтез и изучение олигонуклеотидов с пониженным отрицательным зарядом в боковых цепях. Уменьшение отрицательного заряда в боковых цепях приводит, как правило, к стабилизации спиральных комплексов олигонуклеотидов.
В настоящей работе были исследованы модифицированные олигонуклеотиды, содержащие нуклеозиды с универсальным основанием 5-нитроиндолом (N1) и цвиттер-ионную межнуклеотидную связь. В первой части работы был рассмотрен характер влияния N1, введенного в конец одной из цепей, на стабильность и свойства ДНК-дуплексов в растворе, а также рассмотрено практическое использование олигонуклеотидов с N в методе гибридизации с олигонуклеотидной матрицей для анализа реальных последовательностей ДНК. Были определены термодинамические параметры образования модифицированных дуплексов. Во второй части работы были синтезированы аналоги нукпеозидов М-(2-гидроксиэтил)-г'.б'-дидезокси-б-аминотимидин (с1Тж) и М-(2-гидроксиэтил)-1\1-метил-2',5'-дидезокси-5-аминотимидин (с1ТШе). Были исследованы физико-химические свойства олигонуклеотидов, содержащих цвиттер-ионную межнуклеотидную связь. Предложена пространственная модель модифицированного дуплекса.
Основные результаты диссертации опубликованы в работах [1, 2, 3, 4]. 7
Диссертация состоит из введения, литературного обзора, изложения полученных результатов, экспериментальной части и заключения.
Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Колганова, Наталья Анатольевна
6. ВЫВОДЫ
1. Синтезирован набор коротких ДНК-дуплексов с 5-нитроиндолом в одной из цепей.
2. Исследованы физико-химические свойства дуплексов с 5-нитроиндолом в одной из цепей. Показано, что:
• введение 5-нитроиндола стабилизирует дуплекс сильнее в случае введения в 5-конец олигонуклеотида;
• порядок влияния 5-нитроиндола на стабильность дуплексов в растворе и на полиакриламидной матрице качественно не отличается;
• 5-нитроиндол не отдает предпочтения ни одному из спаренных с ним природных оснований;
• стабилизирующее действие 5-нитроиндола уменьшается при соседстве с пуринами.
3. Синтезированы аналоги нуклеозидов с1Тмн и с1ТЫМе и их фосфорамидиты. Полученные аналоги использованы для последующего синтеза олигодезокситимидилатов и смешанных последовательностей дезоксиолигонуклеотидов с модифицированной межнукпеотидной связью. Показано, что полученные дезоксиолигонуклеотиды с удлиненной цвиттер-ионной межнукпеотидной связью образуют цвиттер-ионные фосфат-аминные пары.
4. Проведены конформационные расчеты и получена пространственная модель фрагмента дуплекса, содержащего цвиттер-ионную межнуклеотидную связь. Показано, что модифицированный фрагмент не разрушает присущую немодифицированному дуплексу В-форму.
79
5. Исследованы физико-химические свойства ряда коротких ДНК-дуплексов содержащих различное количество модифицированных с1Тмн или сП^® фрагментов Показано, что модифицированные фрагменты уменьшают стабильность дуплексов.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата химических наук, Колганова, Наталья Анатольевна, Москва
1. Kochetkova S. V., Timofeev E. N., Korobeinikova E. A., Kolganova N. A., Florentiev V. L., Oligodeoxynucleotides with extended zwitter-ionic internucleotide linkage, Tetrahedron, 2001, v. 57(52), p. 10287-10292.
2. Francois P., Perilleux D., KempenerY., SonveauxE., Flexible aglycone residues in duplex DNA, Tetrahedron Letters, 1990, vol. 31, 44, p. 6347-6350.
3. Brennan C. A., Gumport R. I., T4 RNA ligase catalyzed synthesis of base analogue-containing oligodeoxyribonucleotides and a characterization of their thermal stabilities, Nucleic Acids Research, 1985, vol. 13 (24), p. 8665-8684.
4. Schweitzer B. A., Kool E. Т., Aromatic nonpolar nucleosides as hydrophobic isosteres of pyrimidine and purine nucleosides, J. Org. Chem., 1994, vol. 59, p. 7238-7242.
5. Schweitzer B. A., Kool E. T. Hydrophobic, non-hydrogen-bonding bases and base pairs in DNA, J. Am. Chem. Soc., 1995, vol.117, n. 7, p. 1863-1872.
6. LoakesD., Hill F., Brown D. M., Salisbury S. A., Stability and structure of DNA oligonucleotides containing non-specific base analogues, J. Mol. Biol., 1997, vol. 270, 3, p. 426-435.
7. LoakesD., The applications of universal DNA base analogues, Nucleic Acids Research, 2001, vol. 29, p. 2437-2447.
8. Nichols R., Andrews P. C., Zhang P., Bergstrom D. E., A universal nucleoside for use at ambiguous sites in DNA primers, Nature, 1994, vol. 369, p. 492-493.
9. Ohtsuka E., Matsuki S., Ikehara M., TakahashiY., Matsubara K., An alternative approach to deoxyoligonucleotides as hybridization probes by insertion of deoxyinosine at ambiguous codon position, J. Biol. Chem., 1985, vol. 260, 5, p. 2605-2608.
10. ShermanS., Stewart J. V., Variation of mutagenic action on nonsense mutants at different sites in the iso-1-cytochrome с gene of yeast, Genetics, 1974, vol. 78, p. 97-113.
11. Singer В., Kusmierek J. R., Chemical mutagenesis, Ann. Rev. Biochem., 1982, vol. 51, p. 655-693.
12. Martin F. H, Castro M. M., Base pairing involving deoxyinosine: implication for probe design, Nucleic Acids Research, 1985, vol. 13, p. 8927-8938.
13. Hall K., Cruz P., Chamberlin M. J. Extensive synthesis of polyr(G-C). using Escherihia coli RNA polymerase, Arch. Biochem. Biophys., 1985, vol. 236 (1), p. 47-51.
14. Crick F. H., Codon-anticodon pairing: the wobble hypothesis, J. Mol. Biol., 1966, vol. 19, p. 548-555.
15. Aboul-ela F., Koh D., Tinoco I., Martin F. H. Base-base mismatches. Thermodynamics of double helix formation for dCA3XA3G + dCT3YT3G (X, Y = A, C, G, T), Nucleic Acids Research, 1985, vol. 13, p. 4811-4824.
16. Seela F., Kaiser K., Phosforamidites of base-modified 2'-deoxyinosine isosteres and solid-phase synthesis of d(GCI*CGC) oligomers containing an ambiguous base, Nucleic Acids Research, 1986, vol. 14 (4), p. 1825-1844.
17. Liu H., Nichols R., PCR amplification using deoxyinosine to replace entire codon and at ambiguous positions, Biotechniques, 1994, vol. 16, p. 24-26.
18. Van Aerschot A., Peeters B., Van Derhaeghe H., Hybridisation probes with deoxyinosine, deoxyxanthosine or deoxynebularine at ambiguous codon positions, Nucleosides Nucleotides, 1987, vol. 6, p. 437-439.
19. Seela F., Chen Y., Oligonucleotides containing fluorescent 2'-deoxyisoinosine: solid phase synthesis and duplex stability, Nucleic Acids Research, 1995, vol. 23, p. 2499-2505.
20. Seela F., Mittelbach C., 7-Deaza-2'-deoxyinosine: a stable nucleoside with the ambiguous base pairing properties of 2'- deoxyinosine, Nucleosides Nucleotides, 1999, vol. 18, p. 425-441.
21. Acedo M., De Clercq E., Erija R., Synthesis and biophysical and biological properties of oligonucleotides containing 2-aza-2'- deoxyinosine, J. Org. Chem., 1995, vol. 60, p. 6262-6269.
22. Bergstrom D. E., Zhang P., Johnson W. T., Design and synthesis of heterocyclic carboxamides as natural nucleic-acid base mimics, Nucleosides Nucleotides, 1996, 15, 59-68.
23. PochetS., Dugue L., lmidazole-4-carboxamide and 1,2,4-triazole-2-carboxamide deoxynucleotides as simplified DNA building blocks with ambiguous pairing capacity, Nucleosides Nucleotides, 1998, vol. 17, p. 2003-2009.
24. Francois P., Perilleux D., KempenerY., Sonveaux E., Flexible aglicone residues in duplex DNA, Tetrahedron Lett., 1990, vol. 31, p. 6347-6350.
25. Kool E. T., Replication of non-hydrogen bonded bases by DNA polymerases: a mechanism for steric matching, Biopolymers, 1998, vol. 48, p. 3-17.
26. Bergstrom D. E., Zhang P., Toma P. H., Andrews P. C., Nichols R. Synthesis, structure and deoxyribonucleic acid sequencing with a universal nucleiside: 1-(2'-deoxy-p-D-ribofuranosyl)-3-nitropyrrole. J. Am. Chem. Soc, 1995, 117, 1201-1209.
27. Loakes D., Brown D. M., 5-Nitroindole as an universal base analogue, Nucleic Acids Research, 1994, vol. 22, 20, 4039-4043.
28. Amosova O., George J., Fresco J. R., Effect of the 1-(2'-deoxy-|3-D-ribofuranosyl)-3-nitropyrrole residue on the stability of DNA duplexes and triplexes, Nucleic Acids Research, 1997, vol. 25, 10, 1930-1934.
29. GuoZ., Liu Q., Smith L. M., Enhanced discrimination of single nucleotide polymorphism by artificial mismatch hybridization, Nat. Biotechnol., 1997, vol. 15, p. 331335.
30. Bischofberger N., Matteucci M. D., Synthesis of novel polycyclic nucleoside analogues, incorporation into oligodeoxynucleotides, and interaction with complementary sequences, J. Am. Chem. Soc., 1989, vol. 111, 3041-3046.
31. Seela F., Bourgeois W., Rosemeyer H., Wenzel T. Synthesis of 4-substituted 1H benzimidazole 2'-deoxynucleosides and utility of the 4-nitro compound as universal base. -Helv. Chim. Acta,1996, v. 79, p. 488-498.
32. Seela F., Wenzel T., Oligodeoxyribonucleotides containing 4-aminobenzimidazole in place of adenine: solid-phase synthesis and base pairing, Helv. Chim. Acta, 1995, vol. 78, p. 833-846.
33. Van Aerschot A., Hendrix C., Schepers G., Pillet N., Herdewijn P., In search of acyclic analogues as universal nucleosides in degenerate probes, Nucleosides Nucleotides, 1995, vol. 14, p. 1053-1056.
34. Van Aerschot A., Rozenski J., Loakes D., Pillet N., Schepers G., Herdewijn P., An acyclic 5-nitroindazole nucleoside analogue as ambiguous nucleoside, Nucleic Acids Research, 1995, vol. 23, 21, 4363-4370.
35. Loakes D., Van Aerschot A., Brown D. M., Hill F., Enzymatic recognition of acyclic universal base analogues in oligonucleotides, Nucleosides Nucleotides, 1996, vol. 15, p. 1891-1904.
36. Ball S., Reeve M. A., Robinson P. S., Hill F., Brown D. M., Loakes D., The use of tailed octamer primers for cycle sequencing, Nucleic Acids Research, 1998, vol. 26, p. 52255227.
37. Loakes D., Hill F., Brown D. M., Ball S., Reeve M. A., Robinson P., S. 5'-Tailed octanucleotide primers for cycle sequencing, Nucleosides Nucleotides, 1999, vol. 18, p. 2685-2695.
38. Challa H., Styers M. L., WoskiS. A., Nitroazole universal bases in peptide nucleic acids, Org. Lett., 1999, vol. 1, p. 1639-1641.
39. Berger M., Wu Y., Ogawa A. K., McMinn D. L., Schultz P. G., Romesberg F. E., Universal bases for hybridization, replication and chain termination, Nucleic Acids Research, 2000, vol.28, 2911-2914.
40. Berger M., Ogawa A. K., McMinn D. L., Wu Y., Schultz P. G., Romesberg F. E., Stable and selective hybridization of oligonucleotides with unnatural hydrophobic bases, 2000, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., vol. 39, p. 2940-2942.
41. Seela F., Debelak H., The N8-(2'-deoxyribofuranoside) of 8-aza-7-deazaadenine: a universal nucleoside forming specific hydrogen bonds with the four canonical constituents, Nucleic Acids Research, 2000, vol. 28, p. 3224-3232.
42. Seela F., Debelak H., 8-aza-7-deazaadenine and 7-deazaguanine: synthesis and properties of nucleosides and oligonucleotides with nucleobases linked at position-8, Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids, 2001 Apr-Jul, vol. 20(4-7), p. 577-585.
43. Verma S., Eckstein F., Modified oligonucleotides: synthesis and strategy for users, Annu. Rev. Biochem., 1998, vol. 67, p. 99-134.
44. Loakes D., Brown D. M., Linde S., Hill F., 3-Nitropyrrole and 5-nitroindole as universal bases in primers for DNA sequencing and PCR, Nucleic Acids Research, 1995, vol. 23, 13, 2361-2366.
45. Rohrwild M., Alpan R. S., Liang P., Pardee A. B., Inosine containing primers for mRNA differential display, Trends Genet., 1995, vol. 11, p. 300.
46. Yang M., Hayashi K., Hayashi M., Fujii J. T., Kurkinen M., Cloning and developmental expression of a membrane-type matrix metaloproteinase from chiken, J. Biol. Chem., 1996, vol. 271, p. 25548-25554.
47. Day J. P., Bergstrom D. E., Hammer R. P., BaranyF., Nucleotide analogs facilitate base conversion with 3' mismatch primers, Nucleic Acids Research, 1999, vol.27, p. 1810-1818.
48. Clark J. M., Novel non-templated nucleotide addition-reactions catalysed by procariotic and eukaryotic DNA-polymerases, Nucleic Acids Research, 1988, vol. 16, 9677-9686.
49. Hoops G. C., Zhang P., Johnson W. T., Paul N., Bergstrom D. E., Davisson V. J., Template directed incorporation of nucleotide mixtures using azole-nucleobase analogs, Nucleic Acids Research, 1997, vol. 25, p. 4866-4871.
50. Loakes D., Hill F., Linde S., Brown D. M., Nitroindoles as universal bases, Nucleosides Nucleotides, 1995, vol. 14, p. 1001-1003.
51. Vallone P. M., Benight A. S., Melting behaviour of DNA hairpins containing the universal base 5-nitroindole, Biophys. J., 1997, vol. 72, TH426A421.
52. Zheng D., Raskin L., Quantification of Methanosaeta species in anaerobic bioreactors using genus- and species-spesific hybridization probes, Microb. Ecol., 2000, vol. 39, p. 246-262.
53. Oerther D. B., Raskin L., In Abstracts of the 96th General Meeting of the American Society for Microbiology. American Society for Microbiology, Washington, 1996, DC, vol. N-97, p. 339.
54. De Los Reyes F., Ritter W., Raskin L., Group-specific small-subunit rRNA hybridization probes to characterize filamentous foaming in activated sludge systems, Appl. Environ. Microbiol., 1997, vol. 63, p. 1107-1117.
55. Hansen K. N., Ahring B. K., Raskin L., Quantification of syntrophic fatty acid-p-oxidising bacteria in a mesophilic biogas reactor by oligonucleotide probe hybridization, Appl. Environ. Microbiol., 1999, vol. 65, p. 4767-4774.
56. FotinA. V., DrobyshevA. L., Proudnikov D. Y., PerovA. N., MirzabekovA. D., Parallel thermodynamic analysis of duplexes on oligodeoxyribonucleotide microchips, Nucleic Acids Research, 1998, vol. 26, p. 1515-1521.
57. ParinovS., BarskyV., YershovG., Kirillov E., TimofeevE., Belgovskiy A., Mirzabekov, DNA sequencing by hybridization to microchip octa- and decanucleotides extended by stacked pentanucleotides, Nucleic Acids Research, 1996, vol. 24, 15, p. 2998-3004.
58. Frieze A. M., Preparata F. P., Upfal E., Optimal reconstruction of a sequence from its probes, J. Comput. Biol., 1999, vol. 6, p. 361-368.
59. Preparata F. P., Upfal E., Sequencing by hybridization at the information -theory bound: an optimal algorithm, J. Comput. Biol., 2000, vol. 7, p. 621-630.
60. Buschta-Hedayat N., ButerinT., Hess M. T., MissuraM., NaegeliH., Recognition of nonhybridising base pairs during nucleotide excision repair of DNA, Proc. Natl Acad. Sci. USA, 1999, vol. 96, p. 6090-6095.
61. Luo J. Y., Bergstrom D. E., Barany F., Improving the fidelity of Thermus thermophilus DNA-ligase , Nucleic Asids Research, 1996, vol. 24, p. 3071-3078.
62. RustS., Funke H., Assmann G., Mutagenically separated PCR (MS-PCR): a highly specific one step procedure for easy mutation detection, Nucleic Acids Research, 1993, vol.21, p. 3623-3629.
63. Smith C. L., Simmonds A. C., Felix I. R., Hamilton A. L., Kumar S., Nampalli S., Loakes D., Hill F., Brown D. M., DNA polymerase incorporation of universal base triphosphates, Nucleosides & Nucleotides, 1998, vol. 17, p. 541-554.
64. Ogawa A. K., Wu Y., McMinn D. L., Liu J., Schultz P. G., Romesberg F. E., Efforts toward the expansion of the genetic alphabet: information storage and replication with unnatural hydrophobic base pairs, J. Am. Chem. Soc., 2000, vol. 122, p. 3274-3287.
65. Jacutin S., Zhang A. J., Russell D. H., Gibbs R. A., Burgess K., Test of potential of dATP surrogate for sequencing via MALDI-MS, Nucleic Acids Research, 1997, vol. 25, p. 5072-5076.
66. Martinez C. I., Jacutin S., Burgess K., Incorporation of unnatural nucleotides by DNA polymerases, Abstr. Pap. Am. Chem. Soc., 1998, vol. 215, ORGN, p. 295.
67. Petersheim M., Turner D. N., Base-stacking and base-pairing contributions to helix stability: thermodynamics of double-helix formation with CCGG, CCGGp, CCGGAp, ACCGGp, CCGGUp and ACCGGUp, Biochemistry, 1983, vol. 22, p. 256-263.
68. Patel D. J., Kozlowski S. A., Marky L. A., Rice J. A., Broca C., Itakura I., Breslauer K. J., Extra adenosine stacks into the self-complementary d(CGCAGAATTCGCG) duplex in solution, Biochemistry, 1982, vol. 21, p. 445-451.
69. Joshua-Tor L., Rabinovich D., Hope H., Frolow F., Appella E., Sussmann J. L., The three-dimensional structure of DNA duplex containing looped-out bases, Nature, 1988, vol. 334, p. 82-84.
70. Guckian K. M., Schweitzer B. A., Ren R. X.-F., Sheils C. J., Paris P. L., Tahmassebi D. C., Kool E. T., Experimental measurement of aromatic stacking affinities in the context of duplex DNA, J. Am. Chem. Soc., 1996, vol. 118, p. 8182-8183.
71. Guckian K. M., Schweitzer B. A., Ren R. X.-F., Sheils C. J, Tahmassebi D. C., Kool E. T., Factors contributing to aromatic stacking in water: evaluation in the context of DNA, J. Am. Chem. Soc., 2000, vol. 122, p. 2213-2222.
72. Matray T. J., Kool E. T., Selective and stable DNA base pairing without hydrogen bonding, J. Am. Chem. Soc., 1998, vol. 120, p. 6191-6192.
73. Nielsen P. E., Egholm M., Berg R. H., BuchardtO., Sequence-selective recognition of DNA by strand displacement with a thymine-substituted polyamide, Science, 1991, vol. 254, p. 1497-1500.
74. Almarsson O., Bruice T. C., Peptide nucleic acid (PNA) conformation and polymorphism in PNA-DNA and PNA-RNA hybrids, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, vol. 90, p. 9542-9546.
75. Shields G. C., Laughton C. A., Orozco M., Hydrophobic, non-hydrogen-bonding bases and base pairs in DNA, J. Am. Chem. Soc., 1998, vol. 120, p. 5895-5904.
76. Summerton J., Weller D., Morpholino antisense oligomers: design, preparation and properties, Antisense Nucleic Acid Drug. Dev., 1997, vol. 7, p. 187-195.
77. Summerton J., Stein D., Huang S. В., Matthews P., Weller S., Partridge M., Morpholino and phosphorothioate antisense oligomers compared in cell-free and in-cell systems, Antisense Nucleic Acid Drug. Dev., 1997, vol. 7, p. 63-70.
78. Mignet N., Gryaznov S. M., Zwitterionic oligodeoxyribonucleotide N3'-»P5' phosphoramidates: synthesis and properties, Nucleic Acids Research, 1998, vol. 26, p. 431-438.
79. Horn Т., Chaturvedi S., Balasubramaniam T. N., Letsinger R. L., Oligonucleotides with alternating anionic and cationic phosphoramidate linkages: synthesis and hybridization of stereo-uniform isomers, Tetrahedron Letters, 1996, vol. 37, p. 743-746.
80. Vinogradov S., Suzdaltseva Y. G., Kabanov A. V., Block polycationic oligonucleotide derivative: synthesis and inhibition of herpes virus reproduction, Bioconjugate Chem, 1996, vol. 7, p. 3-6.
81. Blasko A., Dempcy R. O., Minyat E. E., Bruice Т. C., Association of short-strand DNA oligomers with guanidinium-linked nucleosides. A kinetic and thermodynamic study, J. Am. Chem. Soc., 1996, vol. 118, p. 7892-7899.
82. Browne K. A., Dempcy R. O., Bruice Т. C., Binding studies of cationic thymidyl deoxyribonucleic guanidine t-RNA homopolynucleotides, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, vol. 92, p. 7051-7055.
83. Dempcy R. O., Almarsson O., Bruice Т. C., Design and synthesis of guanidine: a polycation analogue of DNA, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1994, vol. 91, p. 7864-7868.
84. Лившиц M. А., Иванов И. Б., Мирзабеков А. Д., Флорентьев В. Л., Секвенирование ДНК гибридизацией с олигонуклеотидной матрицей (СГОМ). Теория отмывки ДНК после гибридизации, Молекулярная биология, 1992, том 26, стр. 1298-1313.91
85. KunitsynA., Kochetkova S., Timofeev E., Florentiev V., Partial thermodynamic parameters for prediction stability and washing behavior of DNA duplexes immobilized on gel matrix, Journal of Biomolecular Structure & Dynamics, 1996, vol. 14, 239-244
86. Corey E. J., Venkateswarlu A., Protection of hydroxyl groups as tert-butyldimethylsilyl derivatives, J. Am. Chem. Soc., 1972, vol. 94, p. 6190-6191.
- Колганова, Наталья Анатольевна
- кандидата химических наук
- Москва, 2003
- ВАК 03.00.03
- Создание и исследование биологических микрочипов с 10-микронными гелевыми ячейками
- Измерение кривых плавления при гибридизации с олигонуклеотидными микроматрицами: определение термодинамических параметров и диагностика мутаций
- Анализ сиквенс-специфичности взаимодействия регуляторных белков HU и p50 с однонитевой и двунитевой ДНК с помощью универсального олигонуклеотидного микрочипа
- Энзиматические способы детекции, идентификации и анализа нуклеиновых кислот на микрочипах гель-иммобилизованных олигонуклеотидов
- Применение методов фрагментации ДНК и дополнительной гибридизации встыкдля диагностики мутаций и секвенирования ДНК методом гибридизации с олигонуклеотидными микрочипами