Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Терапевтическая эффективность иммунотропного препарата лейкинферона и комбинации его с антигельминтиками при экспериментальных гельминтозах

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Терапевтическая эффективность иммунотропного препарата лейкинферона и комбинации его с антигельминтиками при экспериментальных гельминтозах"

Р Г 5 О Л 1 в и др 1323

лШШЗСТЕРСГВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИИ ИНСТИТУТ МЕДИЦИНСКОЙ ПАРАЗИТОЛОГИИ И ТРОПИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЫ им. Е. И. МЛРЦШЮИСКОГ'О

На правах рукописи

Малышева Наталья Семеновна

ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ НММУНОТРОПНОГО ПРЕПАРАТА ЛЕИКППФЕРОПА и КОМБИНАЦИИ ЕГО С АНТИГЕЛЬМИНТИЕАМИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ГЕЛЬМИНТОЗЛХ

03.00.19 - паразитология, гельминтология

автореферат

на соискание ученой степени кандидата биологических паук

Научные руководители: доктор медицинских наук Л Г,К ЕДЕ В Л. М. Н. доктор медицинских наук ШУЙК1ША Э. Е.

МОСКВА - 1998

Работа выполнена в Институте медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И. Марцмновского МЗ РФ

Научные руководители :

доктор медицинских наук М.Н. Лебедева доктор медицинских наук Э.Е. Шуйкина

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук , член-корреспондент

РАГ1Н Ю.К. Богоявленский

кандидат биологических наук Л.М Гордиева

Ведущая организация : Военно - медицинская академия, Санкт - Петербург

Защита состоится "19 "марта 1998 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д. 176. 02. 01. по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата биологических наук при Инстититуте медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И. Марциновского по адресу :

-МПОТП <т Мор-чп П|»ГЧ1-1ГГ|Г»ГЧГ^П ОП

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Институт ö медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И. Марциновского

Автореферат разослан " Щ " февраля 1998 года

Ученый секретарь Специализированного совета кандидат медицинских наук A.A. Фролова

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы

В настоящее время происходит снижение

популяционной иммунореактивности населения во всем

мире вследствие ряда причин - экологических, социальных

и других (Сидоренко Г. И., Захарченко М. П., Морозов В. Г.

• и сйаЪт., 1992). Поэтому интенсивно развивающимся новым

терапевтическим направлением стала коррекция

иммунодефицитных состояний особой группой

лекарственных средств - иммунотропных препаратов. К их < (

. числу относится леикинферон (ЛФ) - отечественный препарат, созданный, в 80-х годах в НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи (Кузнецов В. П., Беляев Д. Л. и др., 1989, 1992), успешное применение которого подтверждает

теоретические прёдположения о клинической перспективности комплекса цитокинов первой фазы-иммунного ответа для коррекции иммунодефицитных состояний. Тактика этиотропного лечения в инфекционной медицине в значительной степени исчерпана. Будущее за новыми комплексными схемами, включающими иммунокоррегирующие препараты (Кузнецов В. П., Беляев Д. Л., БабаянцА. А., 1996).

Сложившаяся серьезная эпидемическая обстановка в России в отношении паразитарных болезней настоятельно требует изменения стратегии и тактики профилак -тики этой массовой социально значимой патологии (Сергиев В. П. и соавт., 1997, Сергиев В. П., Лебедева М. Н., 1997).

Инфекционные заболевания вызывают различные изменения иммунного ответа. Паразиты оказывают активное иммуносупрессивное действие на хозяина причем приобретенный, ответ на патоген ; как у. вторичная иммуносупрессия , при паразитозах стадиеспецифичны (Шуйкина Э. Е., 1978, 1979 ).

Препараты интерферонов широко применяются при лечении вирусных инфекций, меньше при протозойных и бактериальных, но не при лечении гельминтозов. Этиотропные препараты - антигельминтики обладают неодинаковой активностью в отношении различных таксономических групп гельминтов; преимущественная активность химиопрепаратов направлена непосредственно на паразитов, главным образом, их просветных форм.

При анализе литературных данных ряда авторов, изучавших влияние химиопрепаратов на течение инвазионного процесса при различных гельминтозах (Безверхняя Ж. А.,1983; Алиева Т. И:, 1984; Рашид В. М., 1991), мы не встретили в литературе сведений, подтверждающих, что действие лекарственных средств, когда личинка проникает в ткани хозяина, всегда 100% эффективно.

Наши предварительные наблюдения подтвердили (Шуйкина Э. Е. и соавт., 1997), что лейкинферон эффективен в отношении гельминтозов, возбудители которых находятся в тканях в течение одной или нескольких фаз развития.

Исходя из этого представилось важным оценить

терапевтическое действие лейкинферона на возбудителей, жизненный цикл которых состоит из нескольких фаз развития (ниппостронгилез, трихофацелез,

гименолепидоз) и выяснить целесообразность применения комбинированной терапии лейкинферона с этиотропными химиопрепаратами.

Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось совершенствование антигельминтной терапии, обоснование подходов к комбинированной терапии - гельминтозов иммунотропными препаратами лейкинфероном. ( ЛФ )с этиотропными средствами.

Для достижения цели на экспериментальных моделях гельминтозов (ниппостронгилез, трихоцефалез, гименолепидоз) были поставлены и решены следующие задачи:

1. Изучить влияние ЛФ на развитие инвазии.

2. Определить терапевтическую эффективность ЛФ и оценить возможность комбинированного лечения гельминтозов.

Научная новизна. Впервые установлено терапевтическое действие лейкинферона на личиночные формы гельминтов (при ниппостронгилезе, трихоцефалезе, гименолепидозе). Противопаразитарная активность лейкинферона опосредована через организм хозяина. У интактных животных лейкинферон вызывает предстимуляцию ("рпттд"-эффект) лимфоцитов сходной выраженности независимо от их генетической

чувствительности к инвазии. У зараженных гельминтам^ животных вызываемые лейкинфероном > различи: предстимуляции особенно яркие по ходу инвазии резистентных по чувствительности к гельминтозу хозяев.

У мышей, получавших лейкинферон до заражения и i первые дни после него, происходит задержка роста i развития гельминта Hymenolepis папа в организме одного v того же хозяина.

In vivo и in vitro комбинированное лечение антигельминтиками с лейкинфероном приводит или i повышению эффективности антигельминтиков (например, медамин) или к сохранению эффективности препарата на том же уровне (альбендазол). Терапевтическая эффективность лечения инвазированных животных на фоне лейкинферона не одинакова и зависит от сроков-введения лейкинферона по отношению к тканевым (личиночным) стадиям развития паразита, чувствительности и восприимчивости хозяина к гельминту.

Практическая значимость работы. Лейкинферон обладает противопаразитарной активностью в отношении некоторых тканевых форм гельминтов, что позволяет рекомендовать применение этого препарата в комбинации с этиотропными препаратами в случаях упорного течения гельминтозов и хронических форм паразитозов.

Примененная методика определения уровня хемилюминесценции лимфоцитов проста в использовании и дает сопоставимые "результаты, что позволяет

рекомендовать ее для внедрения в практику медико-биологических исследований при паразитарных болезнях.

Внедрение результатов исследований в практику.

1. Результаты экспериментальной части работы вошли в материалы отчета. ИМПиТМ , им. Е.И.Марциновского доклинического изучения трихлорофена, поданные в Фармакологический комитет Минздрава России для получения разрешения на клинические испытания препарата. •

2. Раздел диссертационных материалов "Иммунитет при паразитозах" включен в цикл лекций по курсу "Паразитология" в Курском медицинском университете, на естественно-географическом факультете Курского педагогического университета, на ветеринарном факультете Курской сельскохозяйственной академии

3. Методика регистрации люминолзависимой хемилюминесценции использована в научных исследованиях со студентами факультете Курского педагогического университета ; в ветеринарной лаборатории г. Курска для оценки иммунореактивности животных.

Положения, выносимые на защиту.

1,Лейкинферон оказывает выраженное воздействие на развитие инвазии при исследуемых гельминтозах.

2. Лейкинферон обладает терапевтической активностью в отношении тканевых (личиночных) форм

исследованных гельминтозов. Результаты

комбинированного лечения инвазированных животных антигельминтиками на фоне лейкинферона неодинаковы и во многом зависят от сроков введения лейкинферона по отношению к тканевым стадиям развития паразита, чувствительности и восприимчивости хозяина к гельминту.

Апробация работы. Основные положения диссертации были доложены и обсуждены на научных конференциях профессорско-преподавательского состава Курского государственного педагогического университета ( Курск 1995, 1996, 1997), 7 Съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов ( январь 1997 , Москва ); 2 Съезде паразитологического общества при РАН ( 20 ноября 1997года, Санкт-Петербург ) ; на заседании специализированной комиссии по предварительной 'экспертизе диссертаций при ИМП и ТМ им. Е.И. Марциновского с приглашением сотрудников отделения экспериментальной

химиотерапии ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского ( 25. 11. 97). .

Публикации. По материалам диссертации опубликований 4 печатных работы в центральной печати.

Структура и объем работы.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, обсуждения результатов , заключения и выводов. Работа изложена на 145 страницах машинописного текста,

включая 12 таблиц и один рисунок. Библиографический указатель содержит 346 источников литературы ( 232 отечественных , 114 иностранных)

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Материалы и методы исследований

Работа проводилась на 3-х моделях гельминтозов: .Nippostrongylus braziliensis на крысятах высокочувствительных и восприимчивых естественных хозяевах, а также на беспородных белых мышах в качестве резистентного хозяина. Модель Nipposírongilus braziliensis является аналогом анкилостомидозов и трихоцефалеза' и удобна для изучения синдрома larva migrans,- так как гельминт имеет короткий цикл развития, включая стадию миграции в легкие.

Для заражения применяли инвазионных личинок третьей стадии (L 3), которых вводили подкожно. Доза

заражения на одну крысу составляла 2,5-103 L3 , а

инвазирующая доза для мышей составляла 103 L3.

Возбудитель Trichocephalus mûris на мышах DBA/ 2j и С57В!/б\является моделью трихоцефалеза человека. Самцов массой 12 - 14 г заражали перорально по 150 инвазионных яиц.

Модель Hymenolepis папа поддерживали на белых беспородных мышах 3-х недельного возраста массой тела 7 - 9 г. Доза заражения составляла 200 инвазионных яиц на одно животное.

В ходе опытов животным вводили лейкинферон ( ЛФ) - продукт жизнедеятельности лейкоцитов крови человека, содержащего интерфероны, интерлейкины и другие биологические активные вещества, в том числе факторы некроза опухолей, угнетения миграции макрофагов и лимфоцитов, факторы острой фазы воспаления . и другие. Схема .введения лейкинферона зависела от целей эксперимента. В первой группе опытов животные получали по 6 инъекций ЛФ за 6 дней до заражения и в первые 2 дня после него. Во второй группе экспериментов ЛФ вводили в периоды инвазии, соответствующие срокам смены стадии развития или полового созревания гельминта и миграции его в другие органы хозяина. Разовые лечебные дозы для мышей

( 103МЕ) и крыс (2,5 • 103 МЕ ) были рекомендованы авторами-разработчиками препарата как оптимальные для экспериментальной химиотерапии. ЛФ вводили внутримышечно через 48 - 72 часа.

Ведение моделей и их поддержание осуществлялось на основании широко известных методов, описанных в литературе (Астафьев Б.А. и соавт. , 1989)

Всего в работе использовано 715 животных из них 175 крыс.

В комбинации с ЛФ исследовали субстанции 3 антигельминтиков в лечебных разовых дозах в зависимости от схемы опыта : альбендазол - 50 -100 мг/кг, медамин - 400 мг/ кг для крыс и 100 мг/кг для мышей, трихлорофен -1000 мг/кг для мышей.

Функциональную , активность спленоцитов оценивали по уровню люминолзависимой хемилюминесценции ( ХЛ ) с помощью биолюминометра ЛБПАИ фирмы " Климби " ( Москва ) по методике, предложенной специалистами кафедры энзимологии МГУ им. М.В. Ломоносова ( Шерстнев М.П. , 1991).

Статистическая обработка оксперементальных данных проведена по критерию согласия (Фишера-Стьюдента) (Кузнецов В.К. ,1978).

Результаты наблюдений 2. ВЛИЯНИЕ ЛЕЙКИНФЕРОНА НА ИНВАЗИОННЫЙ ПРОЦЕСС ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ГЕЛЬМИНТОЗАХ

2.1 Влияние прямого воздействия ЛФ in vitro на гельминты Trichocephalus mûris, Nippostrongylus brazi-liensis, Hymenolepis nana.

Действие ЛФ на имаго Trichocephalus mûris, Hymenolepis папа и L3 Nippostrongylus braziliensis оценивали in vitro no единой схеме опытов. 15 - 20 экземпляров гельминтов инкубировали в растворе 1000 МЕ/мл, 2000 МЕ/мл , 3000 МЕ/мл лейкинферона в течение 6 часов. Условия инкубации: в стерильных чашках Петри при температуре 37°С. Через каждые 30 минут оценивали состояние гельминтов: подвижность, сохранность кутикулы, число погибших особей. Каждый опыт был повторен трижды на протяжении всего срока - нашей работы.

По результатам наблюдений через 6 часов имаго сохранялись практически полностью, а личинки L3 Nippo-

strongylus braziliensis частично погибали (таблица 1). В развитие этих наблюдений был поставлен опыт с Hymenolepis папа. Для этого отрезок тонкого кишечника длиной 4 - • 5 см с прикрепленными цестодами инкубировали при тех же условиях в течение б часов. Оказалось, что цестоды в отрезке кишечника были болзе активные, чем изолированные из кишечника. Зрелые яйца в цестодах выглядели неизмененными и заражение ими животных было успешным.Гибели половозрелых форм почти не наблюдалось как у Tricliocephalus maris , так и у Hymonolepis папа в отличиии от токсического действия на личинки Nippostrongylus braziliensis(ia6nv\u,a'\).

Таким образом in vitro мы не обнаружили отрицательного воздействия ЛФ на гельминты половозрелые, в отличие от ларвицидного действия на ниппострангилид.

. Таблица 1 Влияние лейкинферона на личиночную {Nippostrongylus braziliensis ) и половозрелые стадии развития ( Trichocephalus muris, Hymenolepis nana ) ^

в условиях in vitro.

Концентрация лейкинферо на, МЕ/мл Колич Эффективность, %%

пара -зитов N.brazil T.muris Н.пала

1000 15 24,0+3,2 0 2,0+0,1

2000 20 36,7±2,8 2,0+0,2 6,0+0,4

3000 15 42,4±5,1 '2,5+0,3 7,0±0,5

2.2. Влияние ЛФ in vivo на модели гельминтозов Trichocephalus mûris, Nippostrongylus brazUiensis, Hymenolepis nana

Задачей настоящих исследований было изучение действия ЛФ на заражаемость и течение инвазионного •процесса при экспериментальных гельминтозах. Опыты проводили по единой схеме для всех трех моделей. В первой группе опытов животные получали по 6 инъекций ЛФ за 6 дней до заражения и в первые 2 дня после него. Во второй группе экспериментов ЛФ вводили в периоды инвазии, соответствующие срокам смены стадии развития гельминта и его миграции в другие органы или полового созревания паразита; курсовые дозы и число инъекций варьировалось. Разовые лечебные дозы для мышей составляли 103 ME и крыс 2,5-103 ME . ЛФ' разводили водой для инъекций и вводили внутримышечно через 48 - 72 часа.Концентрация ЛФ в

1 мл составляла 5-10 J ME.

■ Повторность опытов была трехкратная. В части случаев основной опыт был дополнен группами животных, чтобы уточ нить условия эксперимента: оптимальные сроки введения препарата, дозы, сравнить биологическую активность разных серий ЛФ и др.

Модель Nippostrongylus brazUiensis.

Всего было выполнено 3 опыта на 60 мышах, 95 крысах. Крысята, зараженные Nippostrjngylus brazUiensis, получали ЛФ до заражения в суммарной дозе 8333 ME на одно животное.

Животных забивали на 2, 4, 15-й' день после заражения. На наличие мигрирующих личинок исследовали легкие (2-й день) и тонкую кишку (4-й день); на 15-й день в кишечнике подсчитывали число имаго..

По результатам подсчета мигрирующих личинок в легких (2 день инвазии) интенсэффективность (ИЭ) ЛФ составила -11,5%. При подсчете мигрирующих личинок в тонкой кишке крысят на 4-й день инвазии ИЭ ЛФ равнялась 38%. У мышей б те же сроки ИЭ ЛФ достигала 40,5%.

Таким образом терапевтическое действие ЛФ было практически одинаково при инвазии у крыс и мышей и не зависело от чувствительности (или резистентности) к гельминтозу вида хозяина.

Модель Trichocephalus mûris

Наблюдения за действием ЛФ на инвазию Trichocephalus mûris проводили на чувствительных к трихоцефалезу мышах DBA/2j и устойчивых C57BI/6. Общее число животных в опытах составило - 120 . Первая группа мышей получала

ЛФ до заражения в суммарной дозе 6-10"' ME на одно животное. Вторая группа мышей получала ЛФ с 10-го по 23-й день после заражения.

Установлено, что ЛФ оказывал активное лечебное действие на тканевой стадии развития гельминта. ИЭ ЛФ у мышей первой группы не зависела от чувствительности их к инвазии Trichocephalus mûris и составила 45,6 - 42,0%. У мышей второй группы при введении ЛФ в период линьки и проникновения Trichocephalus mûris в слизистую толстой кишки (10 - 23-й дни инвазии) показатели ИЭ колебались от 100% у

резистентной линии мышей С57В1/6 до полной неэффективности у РВАУ^.

Модель Нутепо1ер1з папа

Белые беспородные мыши получали ЛФ до заражения в курсовой дозе 3-103МЕ на одно животное с интервалом 48 часов. В опытах было использовано 80 мышей.

<г*

На 15 день инвазии при подсчете паразитов была обнаружена резкая 'дифференциация особей гельминтов в тонком кишечнике одного и того же животного. Меньшую часть паразитов (12%) морфологически можно было отнести к половозрелым гельминтам, у которых развивались жизнеспособные инвазионные яйца. Остальные (88%) особи значительно отличались от половозрелых: стробила была укорочена, нитевидной формы. На отдельных участках тонкого кишечника выявлены скопления мелких дефектных особей, напоминающих "щетку". Судить о зрелости этих форм паразитов без гистологического анализа было сложно, однако внешне выглядели они явно дефектными. • .

Самые низкие показатели ХЛ были в контрольных группах интактных животных, не получавших ЛФ (Табл. 2). Наиболее высокие показатели наблюдались у животных 4 группы, получавших ЛФ до заражения. Это свидетельствует о предстимуляции лейкоцитов ("прайминг" - эффект), то есть ЛФ способен активизировать неспецифические факторы защиты организма. Повышение уровня- ХЛ спленоцитов вызывает сам факт заражения животных, при этом уровень ХЛ спленоцитов сходен с таковым при введении ЛФ интактным животным.. /

Таблица 2

Влияние лейкинферона на хемилюминесценцию спленоцитов крыс и мышей, инвазированных

Nippostrongylus braziliensis

Показатели ХЛ (отн.ед.)

Группы животных в дни опыта

№ характеристика Кол-во 2-й 4-й 15-й

Интактные.

1. мыши 9 . 200±6,8 316±9,4 208±15.3

крысы 12 188+7,1 204±8,3 190+12,2

Получавшие

2. лейк инферон

мыши 29 320+6,1 341±2,4 350±9,1

Р<0,01 Р< 0,1 Р< 0,05

крысы 31 301+10,1 307+4,2 290±10,5

Р< 0,01 Р< 0,05 Р< 0,05

Зараженные л

3. мыши 9 290±10,8 314±7,8 320+15,4

крысы 12 276±9,3 270+9,5 281+7,1

Зараженные,

получавшие

4. лейкинферон

мыши 34 360+15,0 372±11,4 384+22,5

Р< 0,05 Р< 0,05 не

крысы 37 311+16,2 348±9,8 различимы

Р< 0,05 352±5,7

Р< 0,1

Уровень ХЛ : клеток нарастает в ходе развития инвазии.

Опыты показали, что уровень ХЛ спленоцитов у зараженных животных на фоне ЛФ выше у резистентных хозяев, чем у чувствительных к Trichocephalus mûris.

2.3. Обсуждение результатов и заключение

Полученные в ходе экспериментальных исследований данные подтвердили наши предположения о целесообразности использования лейкинферона при лечении ниппостронгилеза, трихоцефалеза, гименолепидоза на тканевых стадиях.

Проведенные нами наблюдения позволили получить ряд новых фактов о влиянии комплексного цитокинного препарата на инвазионный процесс на примере моделей Trichocephalus mûris, Nippostrongylus braziliensis, Hymenolepis nana

По итогам работы можно сделать следующее заключение. Лейкинферон in vitro губителльно влияет на личинки и не оказывает влияния на половозрелые гельминты.

Впервые установлено терапевтическое действие лейкинферона на моделях ниппостронгилеза, трихоцефалеза, гименолепидоза. Препарат влияет на хозяина и популяцию гельминтов, изменяя развитие инвазии в разной степени при ниппостронгилезе и трихоцефалезе.

При ниппостронгилезе эффективность применения лейкинферона была сходной у зараженных крысят и мышей, различающихся , как известно, по чувствительности и резистентности к инвазии. На . модели трихоцефалеза лечебное^ действие лейкинферона было заметно выше у мышей линии C57BI/6, резистентной к Trichocephalus mûris, по сравнению с чувствительной линией DBA/2j.

Терапевтическая активность лейкинферона варьировала

в зависимости от условий опыта, чувствительности животных к гельминту и реактивности хозяина,

Лейкинферон активизирует неспецифические факторы иммунитета, например, естественные киллеры, фагоцитоз и другие. Защитное действие лейкинферона приводит к гибели значительной части ■ паразитов и осуществляется при попадании личинки в ткань кишечной ворсинки. У йнтактных животных лейкинферон вызывает предстимуляцииз сходной выраженности независимо от их чувствительности к инвазии. Сам факт заражения также вызывает повышение уровня ХЛ, сравнимое с таковым при введении ЛФ интактным животным. Вызываемые лейкинфероном различия предстимуляции клеток особенно ярко выражены по ходу инвазии у оппозитных по чувствительности к гельминту хозяев. Уровень ХЛ спленоцитов был выше у резистентных хозяев (мыши беспородные при ниппостронгилезе и мыши линии C57BI/6 -при трихоцефалезе), чем при аналогичных условиях опыта у чувствительных к гельминту хозяев (крысы - при ниппостронгилезе, мыши DBA/2j - при трихоцефалезе).

Наши данные, отражающие вариабельность размеров Hymenolepis папа, не позволяют судить о механизме возникновения этого явления. Однако мы можем полагать, что именно введение лейкинферона до заражения и в первые дни после него служит причиной задержки роста и развития

гельминтов в популяции Hymenolepis nana. Возможно, что

/

биологически активные факторы, которые входят в состав лейкинферона, способны влиять на ранние стадии развития личинки in ovo.

3. ПОДХОДЫ К КОМБИНИРОВАННОЙ ТЕРАПИИ ГЕЛЬМИНТО-ЗОВ ЛЕЙКИНФЕРОНОМ С ЭТИОТРОПНЫГЛИ ПРЕПАРАТАМИ

3.1. Влияние комбинированного лечения лейкинфероном с противонематодозными препаратами на течение инвазии

В опытах in vitro на культуре Nippostrongylus braziliensis оценено прямое действие лейкинферона в концентрации

1 - 3 • 10 3 МЕ/мл и в комбинации с медамином. Наибольшую эффективность (68,1%) ЛФ проявлял в концентрации 2-103 МЕ/мл. Медамин в исследуемых концентрациях 2,5 - 7,5 мг/мл - давал эффективность, равную 76 - 77%. При комбинировании ЛФ ст медамином с сохранением тех же концентраций эффективность составляла 81,5% (таблица 3).

В опытах in vivo была изучена активность комбинированного лечения ЛФ с медамином на личиночную стадию ниппостронгилюсов.В опытах использовано 60 мышей и 80 крыс. Мыши и крысы получали по 6 инъекций ЛФ с интервалом в 48 часов, в том числе 4 инъекции были выполнены до заражения, одна в день заражения и последняя спустя 48 часов после него. Медамин вводили с первого по третий день после инвазии с интервалом 24 часа в дозе 400 мг/кг массы тела для крыс и 100 мг/кг для мышей.

На 2-й и 4-й дни инвазии эффект торможения миграции личинок ЛФ варьировал от 0 до 40%. Показатели ИЭ лечения медамином были высокими как у крыс, так и у мышей и достигали 100%. На фоне ЛФ эффективность медамина

составила 89,9% у крыс и 89,1% - мышей, то есть практичеа не изменилась.

Наивысшие показатели ХЛ спленоцитов отмечены на 1 й день инвазии у животных, получавших ЛФ в сочетании медамином . В группе зараженных животных, леченных одни медамином, показатели ХЛ' спленоцитов мышей близки таковым у инвазированных животных, не получавших лечени: Повышение уровня ХЛ спл'еноцитов было максимальным группе животных, пролеченных медамином в комбинации с Лс что свидетельствует о повышенной иммунореактивности данной группе мышей и крыс, ч

Таблица 3

Действие лейкинферона и его комбинации с . . медамином на личинок 3-й стадии

ГЛрроз^опду^э ЬгагШ'епв^

№ Препараты и концентрации Эффективность (%%)

1, Лейкинферон 1000 35,5

2. (МЕ/мл) 2000 68,1

3. 3000 47,3

4. Медамин 2,5 76,5

5. (мг/мл) 5,0 77,6

6. 7,5 76,3

7. Медамин + 2,5 + 1000 68,4

8. лейкинферон 5,0 + 2000 81,5

9. (мг/мл;. МЕ/мл) 7,5 + 3000 81,5

Р(2.5)< 0,1? Р(2.8)< 0,1, Р(5.8)< 0,1 . Результаты опытов различимы .Разница между ними достоверна .

Как нами отмечалось ранее ЛФ угнетает популяцию Trichocephalus mûris на тканевой стадии развития. Поэтому была предпринята попытка оценить эффективность лечения трихоцефалеза 'у чувствительных к нему мышей DBA/2j комбинацией ЛФ с противонематодозными препаратами альбендазолом и с медамином. Всего в опыте было использовано 90 животных. Мыши получали ЛФ на 14-15 дни инвазии, разовая доза 2-103 ME на мышь; альбендазол вводили дважды на 17 - 18 дни по 50 мг/кг. Медамин вводили в дозе 50 мг/кг по той же схеме, что и альбендазол. Комбинация ЛФ с медамином привела к некоторому повышению эффективности лечения по сравнению с одним медамином. В

связи с тем, что ИЭ альбендазола приближалась к 100%, то >

эффект ЛФ не проявлялся.

3.2. Влияние комбинированного лечения лейкинфероном с противоцестодозными препаратами на течение трихоцефалеза и гименолепидоза

Целью настоящего исследования была оценка влияния комбинированного лечения ЛФ с противоцестодозным препаратом трихлорофеном.

Опыт проводили на чувствительных мышах DBA/2j и C57BÎ/6, резистентных к возбудителю Trichocephalus mûris. Мыши получали 6 инъекций ЛФ до инвазии, другая группа с 10 по 23 дни после заражения, третья на 40 -44 дни после инвазии. Разовая доза введения ЛФ на одну мышь 1000 ME. В оп/|те было использовано 80 животных, трихлорофен вводили на 44 день после заражения. При введении ЛФ за 6 дней до заражения ИЭ составляла 45,6%. Абсолютный защитный

эффект (ИЭ - 100%) получен при более позднем введении Л< в той же суммарной дозе на "тканевой" стадии.. развити возбудителя, когда личинки погружены в. крипты, расту линяют, внедряются передним концом в слизистую кишки. Пр сочетанном применении лейкинферона (3 инъекции) трихлорофена на имагинальной стадии развития возбудител оказалось менее активным, чем медамин и альбендазог Применение трихлорофена на 44 день после заражения н вызывало массовой гибели паразитов.

Дальнейшее изучение действия трихлорофена М1 продолжили на ленточном паразите Нутепо1ер'!5 папа. В опыт использовали 130 мышей. Как отмечалось ранее, у зараженны Нутепо1ер!3 папа животных на фоне ЛФ в кишечнию преобладают дефектные формы гельминтов. В группа зараженных животных, получавших ЛФ до инвазирования, ; затем пролеченных трихлорофеном общее число гельминто было значительно меньше, чем у мышей других групп, однакс по-прежнему преобладали дефектные формы. При введени! ЛФ и трихлорофена после заражения общее число гельминто. в популяции сохранялось, но соотношение половозрелых ! дефектных форм было обратным . ИЭ при гименолепидоз! точно установить не удалось в связи с изменением гельминто. на фоне введения препаратов. Однако в ходе наблюдени! отмечали, что число гельминтов в опыте было больше, чем контроле. ИЭ при введении одного трихлорофен; приблизительно составила 90% и трихлорофена в сочетании ЛФ 95%.

3.3. Заключение.

Проведенные нами наблюдения за действием комбинированного лечения антигельминтиками с лейкинфероном показывают или тенденцию к повышению эффективности химиопрепаратов (медамин) или сохранение эффективности препарата на прежнем уровне (альбендазол). Как показали наши исследования, результаты комбинированного ne4eHnnf инвазированных *. животных антигельминтиками на фоне лейкинферона неодинаковы и во многом зависят от сроков введения ЛФ по отношению к тканевым стадиям развития паразита чувствительности и восприимчивости хозяина к гельминту.

ВЫВОДЫ

1. На моделях Nippostrongylus braziliensis , Tríchocephalus mûris, HymenoJepis папа обнаружена терапевтическая активность лейкинферона в отношении личиночных стадий развития гельминтов; в отношении половозрелых форм эффекта не наблюдали,

2. In vitro лейкинферон в относительно низких

концентрациях 1 - 2-10J МЕ/мл вызывает гибель 35 - 68 % личинок III стадии Nippostrongylus braziliensis в течение 4 - 6 часов инкубации. Дальнейшее увеличение концентрации лейкинферона приводит к снижению его эффективности.

3. In vivo при введении до заражения эффективность лейкинферона достигала при ниппостронгилезе 40 - 41 %, при

трихоцефалезе 42 - 47 %. При гименолепидозе лей.кинферо( приводит к задержке роста и развития гельминта Hymenolepi: папа в кишечнике мышей. На 14-15 сутки развития полово£ зрелости достигает не. более 10 - 12 % паразитов, остальные 88,1 ±2,5 % - 95,2±4,1 % дефектны.

4. Лейкинферон в сочетании с препаратами не влияет нг действие противонематодозного средства альбендазола высоко эффективного в отношении личиночной стади! Trichocephalus mûris и повышает эффективность медамина, ж влияющего на личиночные стадии нематод. ИЭ медамина npi трихоцефалезе у мышей DBA/2j при сочетании < лейкинфероном достигает 68,8 -81,5 %. Эффективное^ противоцестодозного препарата трихлорофена на фоне M существенно не меняется.

СПИСОК

научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Шуйкина Э.Е., Малышева Н.С., Лебедева М.Н. и соавт. Возможности применения иммунокоррекции при паразитозах// В : Материалы 7 Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. М., 28 -31 января 1997-. Т.1., С. 374 - 375.

2. Малышева Н.С., Шуйкина Э.Е. Лейкинферон и инвазионный процесс при гельминтозах // В: Материалы 2 Съезда Паразитологического общества при РАН, Санкт-Петербург, 18-20 ноября 1997, С. 74 -75.

3. Лебедева М.Н., Малышева Н.С., Федянина Л.В., Шуйкина Э.Е., Гицу Г.А. Подходы к комбинированной терапии гельминтозов лейкинфероном и этиотропными

препаратами // Мед. паразитология и паразитарные болезни., 1998. -№1. - С. 15 - 17.

4. Малышева Н.С., Шуйкина Э.Е., Лебедева М.Н.,Федян'ина Л.В. 'Влияние . лейкинферона на инвазионный процесс при экспериментальных гельминтозах // Мед. паразитология и паразитарные болезни, 1998. -№ 1. -С. 17-20.

/

Малышева Наталья Семеновна

" Терапевтическая эффективность иммунотропного препарата лейкинферона и комбинации его с антигельминтиками при экспериментальных гельминтозах"

03.00.19 - паразитология, гельминтология автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Типография КГПУ, Тираж - 100 экземпляров , ззк.№ ^