Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфофункциональная характеристика органов и тканей паразита и хозяина при трематодозах после химиотерапии антигельминтиками

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональная характеристика органов и тканей паразита и хозяина при трематодозах после химиотерапии антигельминтиками"

На правах рукописи

Бибик Оксана Ивановна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОРГАНОВ И ТКАНЕЙ ПАРАЗИТА И ХОЗЯИНА ПРИ ТРЕМАТОДОЗАХ ПОСЛЕ ХИМИОТЕРАПИИ АНТИГЕЛЬМИНТИКАМИ

Специальность 03.02. П - паразитология

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук

? 4 2012

Москва-2012

У

005019072

Работа выполнена на кафедре общей биологии с основами генетики и паразитологии Кемеровской государственной медицинской академии

Научный консультант: НАЧЕВА Любовь Васильевна

доктор биологических наук, профессор, заведующая кафедрой общей биологии с основами генетики и паразитологии Кемеровской государственной медицинской академии

Официальные оппоненты: НОВИК Тамара Самуиловна

доктор биологических наук, профессор, ведущий научный сотрудник лаборатории

экспериментальной терапии Всероссийского НИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина

ЖДАНОВА Ольга Борисовна

доктор биологических наук, доцент, заведующая кафедрой гистологии Кировской медицинской академии

СИВКОВА Татьяна Николаевна

доктор биологических наук, доцент кафедры инфекционных болезней Пермской ГСХА им. академика Д.Н. Прянишникова

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина»

Защита диссертация состоится «30» мая 2012 г. в 1100 часов на заседании Совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 006.011.01. при ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии имени К.И.Скрябина» (ВИГИС)

Адрес: 117218, Москва, Б.Черемушкинская ул., д. 28. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВИГИС.

Автореферат разослан «/О » О. Г) 1р<2-01&- 2012 г.

Ученый секретарь Совета по защите докторских и кандидатских диссертаций, доктор биологических наук, профессор

В.К. Бережко

Введение

Актуальность проблемы. Одной из актуальных проблем в развитии гельминтологической науки является подробное изучение микроморфологии гельминтов, подвергшихся действию препаратов. Знание изменений микроструктуры тканей гельминтов и специфики их обменных процессов под воздействием антигельминтиков, по сравнению с нормой, даёт возможность оценить эффективность препарата, выявить пути его проникновения в организм гельминта и раскрыть механизм воздействия на паразита (Сенутайте Я.Ю., 1970; Сташайтис Ю.Н., 1974; Казанцева Г.Н, 1984; Начева Л.В., Бибик О.И., Гребенщиков В.М., 2000). Это может реализоваться с помощью гистологических, гистохимических и морфометрических методов иследования тканей и органов трематод после применения антигельминтиков (Кошкина Н.Г., 1970; Начева Л.В., 1977; Гребенщикова В.М., 1984; Чебышев Н.В., Котовский Е.Ф., Беречикидзе И.А., 1991; Бибик О.И., 1997). Патоморфология, вызываемая конкретным антигельминтиком, позволяет определить степень деструктивных процессов, как у паразита, так и у хозяина (Чебышев Н.В., Беречикидзе И.А., Богоявленский Ю.К., 1991; Богоявленский Ю.К., Рачковская И.В., Чебышев Н.В., 1994; Чебышев Н.В., Богоявленский Ю.К., Гришина Е.А., 1998) и прогнозировать возможность «привыкания» гельминта к препарату.

В течение многих лет коллектив сотрудников кафедры биологии КемГМА под руководством профессора Е.Д. Логачёва (1956-1992 гг.) занимался микроморфологическими и гистохимическими исследованиями тегумента и кишечника трематод после воздействия антигельминтиков и продолжает эти исследования в настоящее время. Особый вклад в развитие патомикроморфологического направления при трематодозах внесли ученые -Кошкина Н.Г. (1969-1985), Начева Л.В. (1977-1993), Гребенщиков В.М. (19811985). Их работы убеждают об актуальности более глубокого анализа патоморфологии трематод, патофизиологии и патогенеза гельминтов, изучения внутренних механизмов взаимоотношений паразита и хозяина при воздействии антигельминтиков (Начева Л.В., Бибик О.И., Гребенщиков В.М., 2000; Начева Л.В., Воробьёва Е.И., 2007; Гребенщиков В.М., Начева Л.В., 2008).

Однако недостаточно исследованной остается патоморфология органов хозяина при трематодозах (Начева Л.В., Додонов М.В., Воробьёва Е.И., 2009). Вместе с тем характеристика соединений с предполагаемой антигельминтной активностью требует комплексного подхода - одновременного изучения изменений в системе «паразит-хозяин» (Писарева Т.А., 1975; Рачковская И.В., 1985; Воробьева Е.И., 1992). Актуальным вопросом является изучение гистохимической реактивности тканей гельминта и хозяина при воздействии антигельминтиков, который также недостаточно освещен.

В последние 15 лет вопросами изучения микроморфологических механизмов взаимоотношений в системе «паразит-хозяин» до и после воздействия антигельминтиков занимаются фрагментарно, что ограничивает возможность поиска новых препаратов и актуальных способов борьбы с трематодозами. До сих пор окончательно не разработаны и не внедрены

патоморфологический, гистохимический и морфометрический критерии оценки эффективности воздействия антигельминтиков с позиций системогенеза, в то время, как каждый новый препарат требует широкого исследования и обязательного учета этих показателей.

Актуальность исследований настоящей работы подтверждается тем, что она была включена в Межведомственную координационную программу фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития АПК Российской Федерации на 2006-2010 гг.

Цель исследования - разработать и обосновать с позиций системогенеза патоморфологические, гистохимические и морфометрические критерии оценки эффективности воздействия антигельминтиков на органы и ткани трематод и хозяина.

Задачи исследования:

1. Изучить особенности патоморфологии органов и тканей ГаясЫа ИераИса, К ¿даапйса, БгсгосоеНит 1апсеаШт и РагатрИШотит сет после воздействия антигельминтиками (димезол, триклабендазол, тетраксихол, политрем, антитрем, тегалид, фаскоцид) и определить пути проникновения антигельминтиков в организм трематод.

2. Изучить гистохимическую реактивность тегумента, пищеварительной и половой систем трематод (дикроцелий, фасциол, парамфистом) после воздействия антигельминтиков для расшифровки морфофункциональных механизмов их действия.

3. Провести микроморфологические и гистохимические исследования тонкого отдела кишечника хозяина при парамфистомозе овец до и после воздействия антигельминтиков антитрема и тегалида.

4. Разработать и обосновать патоморфологические и гистохимические критерии оценки эффективного воздействия антигельминтиков на органы и ткани трематод.

5.Провести морфометрический анализ яиц трематод после воздействия разных антигельминтиков со статистической обработкой результатов и разработать морфометрические критерии оценки эффективности овоцидных свойств препаратов.

Научная новизна

Выдвинута и экспериментально обоснована концепция патоморфологического и гистохимического контроля эффективности антигельминтиков. Впервые установлены морфофункциональные изменения в органах и тканях трематод после воздействия триклабендазола, тегалида, антитрема и фаскоцида. Установлено, что степень воздействия препарата на организм паразита на уровне его клеток, тканей или органов определяется химической струюгурой антигельминтика. Препараты, которые в своей структуре содержат меньшее число полярных групп (-ОН, —С=0, -N11-) и наибольшее число атомов галогена вызывают более глубокую патологию.

Впервые показано, что триклабендазол, антитрем и тегалид - препараты из разных химических групп оказывают однотипное воздействие на внутреннюю часть тегумента и базальную часть кишечного эпителия, вызывая

увеличение количества клеточных элементов - пролиферацию ядер, как усиление регенераторно-адаптивных реакций в условиях среды I порядка.

Впервые доказано, что политрем, димезол и триклабендазол при фасциолёзе, а также тетраксихол, антитрем и тегалид при парамфистомозе и фасциолёзе и фаскоцид при дикроцелиозе вызывают глубокие нарушения распределения углеводов и белков во всех органах и тканях трематод, подтверждающие их трематодоцидную эффективность. Установлены особенности абсорбционных механизмов антигельминтиков и пути их проникновения в организм трематод.

Впервые установлено, что антитрем и тегалид вызывают в органах и тканях F. hepático и Р. cervi однотипные изменения (деструкцию, дезорганизацию, дистрофию и др.), но степень их проявлений выражается различно, что подтверждает свойство тканевой специфичности трематод, принадлежащих к разным видам. Определено, что наиболее сильный эффект воздействия антитрем и тегалид оказывают на ткани F. hepático.

Впервые определена последовательность воздействия антигельминтиков на органы и ткани трематод с позиций системогенеза: 1) Изначально -токсическое воздействие на тегумент и кишечник, вызывая уменьшение в них количества гексозаминогликанов, резко снижая защитные силы гельминта. Органы становятся неспособными создавать регулирующий барьер на границе раздела фаз системы «паразит-хозяин». 2) Проникновение токсинов в паренхиму приводит к нарушению осмотического и электролитного обмена трематод с развитием гидропической дистрофии, деструкцией белково-углеводных комплексов и тканевому некрозу. 3) Двойное воздействие, как антигельминтика, так и метаболитов лизиса ткани внутренней среды самого гельминта способствует усилению степени токсического давления на органы его половой системы. У трематод нарушается цитоархитектоника желточников, яичников, семенников; прекращаются процессы вителлогенеза, овогенеза и сперматогенеза, блокируется процесс формирования яиц.

Впервые показано, что морфофункциональные изменения эндостации паразита при парамфистомозе до лечения представлены дегенеративно-дистрофическими и пролиферативно-метапластическими процессами кишечника овец, выполняющего роль ксеногостального барьера. Гистохимически выявлены очаги мукоидного (после воздействия тегалида) и фибриноидного (после воздействия ангитрема) набухания. Установлено, что изменения в тканях эндостации паразита являются обратимыми, но отмечено, что воздействие антитрема сильнее, чем тегалида.

Впервые установлен феномен деструкций эозинофилов и блокировки эозинофильной реакции при парамфистомозе после воздействия антитрема, что является основой для расширения области применения для препарата.

Разработаны патоморфологические и гистохимические критерии оценки эффективного воздействия антигельминтиков на органы и ткани трематод.

Разработан метод морфометрического анализа яиц трематод до и после воздействия антигельминтиков со статистической обработкой результатов и

внедрен как морфометрический критерий оценки эффективности овоцидных свойств препаратов.

Практическая значимость

Реализация полученных результатов позволяет повысить объективность и информативность оценки эффективности воздействия антигельминтиков на органы и ткани трематод.

Разработаны и внедрены объективные и достаточно информативные критерии оценки эффективности воздействия препаратов на трематод: патоморфологический контроль органов и тканей гельминтов после воздействия антигельминтиков; гистохимический анализ реактивности их тканей в ответ на воздействие антигельминтиков; морфометрический анализ яиц трематод.

Результаты изучения гистохимической реактивности тегумента, пищеварительной и половой систем трематод при воздействии антигельминтиков могут быть использованы при разработке новых схем и методов лечебной и профилактической дегельминтизации трематодозов животных и человека.

Выявлены морфофункциональные изменения яиц трематод после воздействия антигельминтиков и предложен разработанный метод морфометрического критерия яиц гельминтов со статистическим анализом, который позволяет оценить овоцидное воздействие различных препаратов и влияние на яйцепродукцию гельминтов после химиотерапии хозяина.

Результаты исследования использованы при разработке: методических рекомендаций «Выявление трематодоцидной эффективности антигельминтных средств методом морфометрического анализа яиц трематод после воздействия препарата» одобренных секцией «Инвазионные болезни животных» РАСХН 29 мая 2008 г. (протокол №2 от 29.05.2008) и «Паразитарные болезни, распространенные на территории Кузбасса (меры борьбы и профилактики)» одобренных Ученым Советом ГБОУ ВПО «Кемеровской государственной медицинской академии» Минздравсоцразвигия России 23 июня 2010 г. и секцией «Инвазионные болезни животных» РАСХН 23 сентября 2010 г. (протокол №3 от 23.09. 2010).

Научные материалы диссертации внедрены в НИИ ВИГИС (г. Москва) и НИЛ «Микроморфология плоских червей» ГБОУ ВПО Кем ГМА (г. Кемерово), а также могут быть внедрены в другие учреждения соответствующего профиля для оценки эффективности антигельминтиков.

Результаты исследования внедрены в учебно-методическую литературу для ветеринарных специалистов, преподавателей и студентов факультетов ветеринарной медицины и используются в учебном процессе кафедр: общей патологии человека в разделе «Инфекционные и паразитарные болезни» ГБОУ ВПО «Бурятского ГУ»; общей биолопш с основами генетики и паразитологии в разделе «Паразитология», инфекционных болезней в разделе «Паразитарные болезни» и фармакологии по теме «Противопаразитарные средства» ГЪОУ ВПО «Кемеровской ГМА»; зоологии и экологии в разделах «Паразитология» и

«Практическая зоология беспозвоночных и позвоночных животных» ГБОУ ВПО «Кемеровского ГУ».

Положения, выносимые на защиту

1. Патоморфологические изменения органов и тканей трематод (фасциол, парамфистом, дикроцелий) после химиотерапии животных антигельминтиками (димезола, триклабендазола, тетраксихола, политрема, антитрема, тегалида, фаскоцида), как критерии степени эффективности воздействия препаратов.

2. Гистохимическая реактивность тканевых структур трематод (дикроцелий, фасциол, парамфистом) как критерии оценки воздействия антигельминтиков на функциональную морфологию органов и тканей трематод.

3. Морфометрический анализ яиц трематод до и после воздействия разных антигельминтиков со статистической обработкой результатов, как критерий оценки эффективности воздействия препаратов.

4. Микроморфофункциональные механизмы взаимоотношений в системе «паразит-хозяин» на примере паразитирования Р. сегхч в тонком кишечнике овец до и после воздействия антитрема и тегалида.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Всероссийских конференциях общества гельминтологов РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 1997, 1999, 2004-2007, 2009-2011), Межрегиональной конференции «Проблемы медицины и биологии» (Кемерово, 1997, 2000, 2001, 2008, 2010, 2011), Всероссийской конференции-семинаре с международным участием «Проблемы медицины и биологии» (Кемерово, 1998, 1999), Конференции, посвященной Всемирному дню охраны окружающей среды «Среда обитания и профилактика заболеваний в г. Кемерово» (Кемерово, 1999), Всероссийской конференции, посвященной 50-летию кафедры общей биологии и 80-летию со дня рождения первого заведующего кафедрой, д.б.н. Логачева Е.Д. (Кемерово, 2006), Межрегиональной конференции с международным участием, посвященной 55-летию Кем ГМА «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины, медицинской науки и образования» (Кемерово, 2010), Международной конференции «Экология России и сопредельных территорий» (Новосибирск, 2010), Конференции с международным участием, посвященной 55-летию кафедры общей биологии с основами генетики и паразитологии КемГМА и 85-летию со дня рождения д.б.н., проф. Е.Д. Логачёва «Теоретические и практические вопросы паразитологии» (Кемерово, 2011).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 343 страницах машинописного текста, состоит из введения, аналитического обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключительного обсуждения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 304 источников, из них 62 иностранных и 15 страниц приложения. Работа иллюстрирована 24 таблицами и 174 рисунками.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 49 научных работ, из них 15 статей в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ для представления

научных результатов диссертационных работ на соискание учёной степени доктора наук, монография.

Личный вклад соискателя. Представленная диссертационная работа является результатом 14-летних исследований автора. Анализ данных литературы по теме диссертации, гистологическая обработка материала, приготовление парафиновых срезов, окрашивание препаратов гистологическими и гистохимическими методами, описание, микрофотосъёмка препаратов, анализ и статистическая обработка полученных результатов и написание диссертации проведены лично автором.

Работа выполнялась при консультативном руководстве доктора биологических наук, профессора Л.В. Начевой, которому автор выражает искреннюю благодарность.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Представлен анализ литературы по вопросам патоморфологических и гистохимических исследований органов и тканей трематод после воздействия антигельминтиков.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследований служили трематоды - тип плоские черви (РІаШеІтіпЙіез), класс сосальщики (Тгетаїосіа):

ОісгосоеНит ІапсеаПті (БШєбєі НаБваІІ, 1896), род Оісгосоеііит Оіуагсііп, 1845, семейство Бісгосоеііісіае ОсШпег, 1911, полученные из желчных протоков печени крупного рогатого скота Тверской области после лечения фаскоцидом в дозе 10 мг/кг по ДВ однократно пероральным введением. Мариты О. ІапсеШит, собранные на 7 день после дачи препарата, фиксировали в 70 -ном спирте.

Га$сіоІа ^апіїса (СоЬЬоШ, 1855), род Равсіоіа Ь., семейство БаБсюМае ЯаШіеІ, 1895, собранные из желчных протоков печени спонтанно инвазированных овец Республики Калмыкии после лечения политремом в дозе 140 мг/кг и тетраксихолом в дозе 200 мг/кг по ДВ однократно перорально. Мариты Р. ^апйса, собранные на 17 день после дачи препаратов, фиксировали в 70°-ном спирте.

Гавсіоіа Ііераіїса (Ілппеиз, 1758), род Базсіоіа Ь., 1758, семейство Разсіоіісіае Ііаііііеі:, 1895, собранные из желчных протоков спонтанно инвазированных овец Кабардино-Балкарской Республики после лечения тріїклабендазолом в дозе 10 мг/кг по ДВ однократно перорально. Р. Иераііса, собранные из желчных протоков печени крупного рогатого скота Московской области после лечения антитремом в дозе 200 мг/кг и тегалидом в дозе 30 мг/кг по ДВ однократно пероральным введением. Мариты Г. ИераИса, собранные на 7 день после дачи препаратов, фиксировали в растворе метилового спирта и ледяной уксусной кислоты (3:1). Р. Нерайса из желчных

протоков спонтанно инвазированных овец после лечения димезолом в дозе 200 мг/кг по ДВ однократно пероральным введением. Марты F. hepatica, собранные на 7 день после дачи препарата, фиксировали в 70°-ном спирте.

Paramphistomum cervi (Zeder, 1790), род Paramphistomum Fischoeder, 1901, семейство Paramphistomatidae Fischoeder, 1901, набранные при гельминтологическом вскрытии из рубца спонтанно инвазированного крупного рогатого скота после лечения пгетраксихолом в дозе 200 мг/кг по ДВ однократно перорально. Трематод, собранных на 7 день опыта, фиксировали в 70°-ном спирте. Р. cervi, собранные из тонкого кишечника спонтанно инвазированных овец Нижегородской области после лечения антитремом в дозе 200 мг/кг и тегалидом в дозе 30 мг/кг по ДВ однократно перорально. Трематоды, собранные на 7 день опыта, фиксировали в 70°-ном спирте.

Контролем служили трематоды, собранные при гельминтологическом вскрытии животных, не подвергавшихся лечению. Всех гельминтов контрольных групп фиксировали соответствующими растворами для каждой экспериментальной группы.

Микроморфологические, гистохимические и патоморфологические особенности взаимоотношений в системе «паразит-хозяин» до и после воздействия антитрема и тегалида изучались в сравнительном аспекте на примере паразитирования парамфистом в кишечнике овец. Кусочки ткани тонкой кишки овец с Р. cervi до и после лечения антитремом в дозе 200 мг/кг по ДВ и тегалидом в дозе 30 мг/кг по ДВ фиксировали в 70°-ном спирте. Препараты вводили однократно перорально, материал был получен на 7 день опыта.

Трематоды после воздействия антигельмингиков были любезно предоставлены для микроморфологических исследований заведующим лабораторией экспериментальной терапии животных ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института гельминтологии имени К.И. Скрябина доктором ветеринарных наук, профессором И.А. Архиповым (ВИГИС, г. Москва). Настоящая работа выполнялась в соответствии с заданием №02 «Провести поиск новых методических подходов для получения фундаментальных знаний об экологических особенностях формирования паразитоценозов, биоценотических взаимоотношений и генетической структуре их сочленов, об эпизоотическом процессе, механизмах иммунитета и разработать относительно простые и экономичные средства диагностики, специфической профилактики и борьбы с паразитарными болезнями», которые проводились по Межведомственной координационной программе фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития АПК РФ (2006-2010 гг.).

АНТИТРЕМ - антигельминтик из группы трихлорметилбепзолов, содержит не менее 98% парабистрихлорметилбензола с внесением полиглицеридов. ДИМЕЗОЛ (БЗЛ) синтезирован в ВИГИСе, в химическом отношении относится к группе бензимидазолов: 5,6-диметилбензимидазол. ПОЛИТРЕМ (гексихол С) - лекарственная форма гексахлорпараксилола, полученная на основе гексихола (1,4-бистрихлорметилбензола) с внесением

сульфоната натрия, относится к хлорированным углеводородам. ТЕГАЛИД разработан в ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского, по химической структуре относится к салицилсшшшдам: К-[3'-(4-хлорбензоил)-4'-хлорфенил]-2-окси-3,5-дибромбензамид. ТЕТРАКСИХОЛ - комбинированный препарат, разработанный на основе политрема (3) и тетрахлордифенилсульфида (1) в ВИГИСе. Тетрахлордифенилсульфид (битионол) в химическом отношении представляет 2,2'-тиобис(4,6-дихлорофенол). ТРИКЛАБЕНДАЗОЛ (фазинекс) по химической структуре относится к группе беизимидазолов: 5-хлор-6-(2,3-дихлорфенокси)-2-метилтиобензимидазол, получен на основе отечественного сырья сотрудниками ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и ВИГИС. ФАСКОЦИД (10% гранулят оксиклозанида, занил, метилин, салинид, диплин, дистонин) - отечественный препарат, разработанный «НВЦ Агроветзащита», по химической структуре относится к салгщилстилидалг. 3,3',5,5'-6-пентахлор-2,2'-диоксибензамид.

Материал - половозрелые особи сосальщиков, взятые после воздействия антигельминтиков, а также мариты контрольных групп (без воздействия антигельминтных препаратов), после фиксации обрабатывали по общепринятой гистологической методике (Елисеев В.Г., 1967; Меркулов Г.А., 1969). Парафиновые блоки раскладывались на микротоме на срезы из трематод толщиной 5-6 мкм, а из тканей хозяина - толщиной 6-7 мкм. Депарафинированные поперечные, продольные и косые срезы гистологически окрашивали гематоксилином (Эрлиха, Карацци, Майера) с докраской эозином, по методу Маллори. Для изготовления гистологических препаратов использовали новый метод одновременной фиксации и окрашивания по А.Г. Михееву (Михеев А.Г., А.с. № 1807400, МКИ в 01 № 01 33/48, 1990).

Гистохимические реакции были проведены по рекомендациям методов гистоцитохимического анализа в патологии (Авцын А.П., Струков А.И., Фукс Б.Б., 1971), а также с учетом гистохимических методов в нормальной и патологической морфологии (Португалов В.В., Струков А.И., 1958) и гистохимии соединительной ткани (Фукс Б.Б., Фукс Б.И., 1968). В качестве базового пособия по гистохимии использовали «Гистохимия» Э. Пирс (1962).

Гистохимически выявлялись суммарные белки методом сулемма-бромфеноловый синий (БФС) по Бонхегу. Гликоген, нейтральные мукополисахариды (гликопротевды) и мукопротеиды выявлялись Шик-реакцией по Мак-Манусу. Кислые мукополисахариды (гексозаминогликаны, ГАГ) выявлялись альциановым синим (АС) по Стидмену и Моури при низких значениях рН (2,0-3,0) и толуидиновым синим (ТС) при рН=4,0 и рН=6,0, а также при рН=11,0 (Начева Л.В., 1993) выявлялись мукополисахариды и гликопротеиды. Оценка полученных результатов гистохимических реакций проводилась визуально с помощью светового микроскопа, путём сравнения окраски препаратов, полученных из гельминтов, подвергшихся воздействию антигельминтиков, с контрольными препаратами.

Ферментативный контроль для идентификации гистохимически положительных веществ, проводился на срезах, которые обрабатывались ферментами: 1) При выявлении белков проводился ферментативный контроль с

трипсином и пепсином. Обработку ферментами проводили при температуре 37 С в течение 60 минут в термостате, после окрашивали БФС. 2) При выявлении гликогена использовался контроль с диастазой и амилазой слюны, после которого наблюдалось отсутствие гранул полисахарида при постановке Шик-реакции. Депарафинированные срезы инкубировали в ферменте в течение часа при 37°С в термостате, после проводили Шик-реакцию. 3) Методом ацетилирования 1,2-гликольных групп выявляли Шик-положительные соединения с реакционоспособными 1,2-гликольными группами от Шик-положительной окраски, обусловленной другими веществами. Ацетилирование достигалось обработкой препаратов в растворе уксусного ангидрида на безводном пиридине. При ацетилировании происходило подавление Шик-положительной окраски структур. 4) При обработке тестикулярной гиалуронидазой наблюдалось ослабление метахроматического окрашивания и слабое подавление альцианофшши тканей. Результаты контроля показывают, что снижение окраски тканей АС обусловлено гексозаминогликанами в большей степени сульфатированного типа, а при снижении окрашивания ТС -гиалуроновой кислотой. 5) Частичное удаление сульфатных групп в результате «мягкого» метилирования по Спайсеру при 37°С в течение 60 минут значительно ослабляло окраску АС на всех контрольных препаратах. Последующее деметилирование не восстанавливало альцианофилию. В результате «жесткого» метилирования при 60°С в течение 60 минут наблюдалась полная блокада альцианофшши, деметилирование не возвращало тканям способности к окрашиванию. 6) Сульфатирование контрольных срезов по Мору и Шенбергу усиливало интенсивность метахроматической окраски ТС и окраски препаратов АС. Интенсивность окрашивания хромотропов особенно возрастала в структурах ярко окрашивающихся в малиновый цвет реактивом Шиффа. Корреляция гистохимических методов проводилась по рекомендациям Лойда 3. (Лойда 3., Госсрау Р., Шиблер Т., 1982).

Изготовлено и изучено более 15 ООО гистологических микропрепаратов после воздействия антигельминтиков и при различных способах окрашивания, которые изучались в световом микроскопе «Микмед-6» с фотонасадкой, и параллельно производилась микрофотосъемка. Микрофотосъемку производили цифровой фотокамерой «Canon» Power Shot А 510. Всего было сделано 5522 микрофотокадра, а в диссертационную работу отобрано 562 микрофотографий. Все приведенные в диссертации микрофотографии являются авторскими оригиналами.

Оценку эффективности воздействия антигельминтиков на трематод проводили, используя патоморфологический и гистохимический методы анализа их тканей и органов, а также метод морфометрии яиц гельминтов (Бибик О.И., Начева Л.В., 2009), путем сравнения трематод, набранных у подопытных и контрольных групп животных.

Метод морфометрии яиц трематод и их содержимого со статистическим анализом включал следующие этапы:

1) На гистологических препаратах из трематод (фасциол, парамфистом, дикроцелий), окрашенных гематоксилин-эозином, измерялись в миллиметрах с

помощью окуляр-микрометра ШИО-8* в световом микроскопе общие размеры 50 яиц трематод и размеры их содержимого по большому (Б) и малому (<1) диаметрам в норме и после воздействия антигельминтика, находящихся в дистальном отделе матки, яйца с несформированными мирацидиями (фасциолы, парамфистомы) и зрелые яйца с личинкой - мирацидием (дикроцелии) (рис. 1).

Окуляр-микрометр - круглое стёклышко с нанесённой на него шкалой длиной 1 см, разделённой на 100 частей. Величину одного деления шкалы окуляр-микрометра определяли с помощью объект-микрометра. В объект-микрометре между предметным и покровным стёклами нанесена шкала длиной 1 мм, разделённая на 100 частей, каждая из которых равна 0,01мм (10 мкм).

Рис. 1. Яйцо Р. ИераИса (А). Измерение яйца К Персика с помощью окуляр-микрометра после воздействия димезола (Б, В). О -большой диаметр яйца, с1 - малый диаметр яйца. Микрофото. Увел.: ок. 7 (Б, В), 10 (А) х об.40.Окраска гематоксилин-эозином.

Объект-микрометр помещали на предметный столик микроскопа, наводили на резкость, при которой были достаточно чётко видны обе шкалы объективной и окулярной линейки расположенные параллельно. Отсчитывали, сколько делений окулярной линейки и объект-микрометра совпадали между собой. Вычисление производили по формуле:

А = — с

где А - видимая величина одного деления окуляр-микрометра при данном увеличении; р — число делений объект-микрометра, совпадающих с определённым числом делений окулярной линейки; а - величина одного деления объект-микрометра, равная 0,01; с - число делений окулярной линейки, совпадающих с определённым числом делений объект-микрометра (р).

2) Рассчитывались объемы яиц (Уя) и их содержимого (Vc) с применением формулы объема эллипсоида (Автандилов Г.Г., 1990):

V = - -D-d2

где D - большой диаметр, d - малый диаметр.

3) Статистический анализ данных выполнен с использованием пакета прикладных программ Statistica 6.1 и Microsoft Office Excel 2007 (лицензионное соглашение 74017-640-0000106-57177). Исследование проводилось на достаточном объеме наблюдений. Критическое значение уровня статистической значимости, при проверке нулевых гипотез, принималось равным 0,05. В случае превышения достигнутого уровня значимости статистического критерия этой величины, принималась нулевая гипотеза.

Анализ нормальности распределения вероятности количественных признаков осуществлялся с помощью критерия Шапило-Уилка (W). Критерий W проверяет гипотезу (Но): распределение признаков в совокупности не отличается от нормального. В случае превышения достигнутого уровня значимости статистического критерия Но не отклонялась и распределение исследуемого признака считалось нормальным. В представленном исследовании вычисленные значения критерия W соответствуют 0,0000000,831401 при достигнутом значении уровня статистической значимости 0,000000-0,000005. Принята альтернативная гипотеза (Hi): распределение изучаемого признака отличается от нормального.

Описание количественных признаков в сравниваемых группах производилось с использованием средних арифметических и среднеквадратических (стандартных) ошибок среднего. Эти дескриптивные статистики в тексте представлены как М±ш, где M - среднее, а ш - ошибка среднего.

Для сопоставления двух зависимых выборок по количественным признакам (параметрам морфометрии), которые не являются нормально-распределенными использовался непараметрический критерий Вилкоксона (Т) для парных сравнений. Критическое значение уровня статистической значимости, при проверке Но, принималось равным 0,05. В случае превышения достигнутого уровня значимости статистического критерия гипотеза (Но) об отсутствии различий групп по изучаемому признаку принималась; при достижении уровня значимости статистического критерия менее 0,05 принималась альтернативная гипотеза (Hi) о существовании различий групп по изучаемому признаку.

Работа выполнялась в микроморфологической лаборатории на кафедре общей биологии с основами генетики и паразитологии ГБОУ ВПО «Кемеровской государственной медицинской академии» Минздравсоцразвития России.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

2.2.1. МИКРОМОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ТЕГУМЕНТА, ПИЩЕВАРИТЕЛЬНОЙ СИСТЕМЫ И ПАРЕНХИМЫ ТРЕМАТОД ДО И ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ АНТИГЕЛЬМИНТИКОВ

2.2.1.1. Морфофизиологические особенности трематод в условиях эндостации - среде I порядка указывают на то, что между гельминтом и эндостацией в организме хозяина складываются определённые трофические связи, которые непосредственно оказывают влияние на механизм воздействия антигельминтиков на органы и ткани трематод.

2.2.1.2. Микроморфологическая характеристика тегумепта, пищеварительной системы и паренхимы трематод до воздействия антигельминтиков соответствует классичеким гистологическим описаниям, которые излагаются в данном разделе.

2.2.1.3. Микроморфологические исследования тегумепта, пищеварительной системы и паренхимы трематод после воздействия антигельминтиков показали, что изначально дегенеративные повреждения выявлялись в пограничных структурах - тегуменге, присосках и кишечнике гельминтов, которые в первую очередь вступают в адгезивный контакт с паразитарной нишей в организме хозяина.

После воздействия антигельминтиков в тканях и органах трематод отмечается выраженный отёк. Сравнительный анализ микроморфологии тегумента и кишечника показал, что антигельминтики в одних и тех же тканях трематод вызывают развитие однотипных некробиотических процессов с разной выраженностью структурных изменений. Организм трематод на воздействие каждого антигельминтика отвечает неоднозначной реакцией морфофункциональных перестроек. Чем и обусловлена сила их эффективности в той или иной степени. Сильные деструктивные процессы наблюдались при воздействии политрема на К апИса, тетраксихола на К ^щапИса и Р. сепч, антитрема на К ИераИса и Р. сепп, фаскоцида на И. 1сагсеаПт и тегалида на Р.ИераИса и Р. сепп.

Установили, что антигельминтики нарушают гомеорезисное состояние биологической системы «паразит-хозяин», вызывая необратимые процессы в форме тотальной деструкции органов эктосоматическош барьера - тегумента и кишечника, которые обеспечивают адаптацию в среде I порядка. Первоначальное воздействие антигельминтиков происходит через органы разных систем трематод. Патологическая картина показала, что, несмотря на наличие некоторых качественных отличий в патологических реакциях, вызванных антигельминтиками, в эктосоматических органах трематод наиболее значительные изменения структуры тегумента трематод вызывают хлорированные углеводороды. На препаратах тегумент полностью выглядит разрушенным. После воздействия димезола, антитрема, тетраксихола и тегалида наблюдали усиленную вакуолизацию в дистальном слое тегумента

фасциол. Во внутренней части тегумента у /*'. ИераИса после воздействия триклабендазола и тегалида у Р. Нерайса и Р. сепч обнаруживалось увеличение количества клеточных элементов и отмечалось возрастание гиперсекреции клеток. Пролиферация клеток после воздействия тегалида наглядно выявлялась и в базальной части кишечного эпителия данных видов трематод. Процесс клеточной пролиферации является защитной реакцией тканей паразита, которая выявлялась как I стадия токсического воздействия антигельминтика. Отмечено, что триклабендазол, тегалид и фаскоцид оказывают более сильное воздействие на ткани пищеварительной системы трематод, особенно разрушают эпителий кишечника, который является внутренним «барьером», и преимущественно в тело трематод проникают через пищеварительную систему, а не покровную ткань. Антитрем и тегалид обладают неодинаковой степенью воздействия на одни и те же ткани разных видов трематод, проявляя свойство тканевой специфичности. Антигельминтики в органах и тканях фасциол и парамфистом вызывают гидропическую дистрофию, отёк, набухание и вакуолизацию с наибольшим их проявлением в пограничных тканях /*". ЬераИса. Некробиотические нарушения в тканях Р. сег\ч выражены слабее.

После абсорбции антигельминтика организмом паразита в тканевых структурах трематод происходит изменение восприятия гистологических красителей. Усиливается оксифильность тканей, их способность активно воспринимать кислые красители, или повышается их базофильносгь. Происходит нарушение рН внутренней среды организма паразита и химического состава тканевых компонентов. Обнаруживается разрушение ядерного аппарата, что подтверждает токсическое воздействие на генетические структуры.

Паренхима как промежуточное звено подвергается двухстороннему влиянию: со стороны тегумента и со стороны пищеварительной системы. Антигельминтики в разной степени вызывают декомпозицию паренхимы трематод, как ткани внутренней среды, обеспечивающей гомеостаз организма паразита. Микроморфологические изменения с выраженными деструктивными нарушениями соединительной ткани у Р. ^апИса и Р. сет вызывал тетраксихол. Токсическое воздействие на ткань внутренней среды оказывают триклабендазол у Р. Ъерайса и фаскоцид у О. ктсеаШп, вызывая деструкцию ткани с некротическими явлениями. У Р. ЬераНса тегалид максимально разрушал соединительную ткань, когда у Р. сете воздействие препарата выражено незначительными морфологическими изменениями. Некроз паренхимы отмечается после влияния антитрема как у Р. Ъерайса, так и у Р. сет. К необратимым патологическим процессам в тканях фасциол приводят политрем и димезол.

2.2.2. МИКРОМОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ОРГАНОВ ПОЛОВОЙ СИСТЕМЫ ТРЕМАТОД ДО И ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ АНТИГЕЛЬМИНТИКОВ

2.2.2.1. Морфофункциональная характеристика репродуктивных органов и гаметогенеза трематод до воздействия антигельминпшков

показала, что у всех изученных трематод (К ЬераИса, К агМса, В.¡апсеаШт, Р. сеп>1) мужские половые органы представлены семенниками, семяпроводами, семенными пузырьками, семяизвергательным каналом, простатической железой и совокупительным органом (циррусом). Выявлено, что стенки семенников состоят из соединительнотканных волокон. Цитоархитектоника внутреннего строения семенников представлена четырьмя зонами (размножения, роста, созревания, формирования). Зоны размножения сперматогоний у трематод выражены не однотипно. Поэтому, выделены две группы трематод: Р. сеп>1, Б. ¡апсеаШт, у которых зона размножения локализуется в пристеночном слое семенников; Р. ИераИса, Р. ^апйса, у которых зона размножения не имеет строгой приуроченности к какому-либо участку семенника. Пристеночно в семенниках расположены первичные половые клетки, образующие зону сперматогоний - округлых клеток, основная часть которых занята ядром. Вокруг ядер сперматогоний выявляются сформированные округлой формы симпласты с ярко окрашенной эозином цитоплазмой. Пространство между клонами в семенниках заполнено гелеобразной массой, в которой встречаются волокнистые структуры, вероятно, способствующие упорядоченному расположению клониальных элементов и сохранению архитектоники органа. Семявыводящие пути трематод представлены парными семяпроводами, семенными пузырьками, которые морфологически имеют вид трубок, изнутри выстланных микроворсинчатым эпителием. Семенные пузырьки - непарные органы, расположены внутри циррусной сумки у В. ¡апсеаШт и Р. ЪераИса, Р. ^апИса и вне ее у Р. сегхч. Семенной пузырек имеет форму мешочка или извитой широкой трубки. Семенные пузырьки заполнены сперматозоидами у Р. ¡гераИса, Р. §щапИса и В.¡апсеаШт и сперматидами у Р. сегхч. У последних трематод сперматозоиды выявляются только вблизи семяизвергательного канала. Вокруг семяизвергательного канала наблюдается хорошо сформированая простатическая железа, клетки которой располагаются вокруг канала и имеют грушевидную форму. У Р. Ъерайса и Р. ^апИса простатическая железа состоит из многочисленных сильно вакуолизированных каплевидных одноклеточных желез, располагающихся вокруг семяизвергательного канала в несколько рядов и содержащих большие прозрачные везикулы. Выводные протоки клеток пронизывают стенки семяизвергательного канала и имеют выход в его просвет. Простатическая железа у Р. сеп>г отграничена от окружающей паренхимы тонковолокнистой соединительнотканной мембраной. Клетки простаты располагаются в 3-5 рядов. Простатическая железа О. ¡апсеаШт состоит из немногочисленных крупных железистых клеток с длинными протоками, не образуя многорядья. Циррус и циррусный мешок

П. ¡апсеаШт и Р. ИераИса, Р. апИса отграничены от паренхимы волокнистым тяжем.

Женские половые органы у К ЬераНса, Р. giganíica, О. ¡апсеаШт и Р.сеЫ представлены яичником, яйцеводом, тельцем Мелиса, желточниками и их протоками, маткой. Микроморфологически яичники представлены небольшими органами округлой формы у Р. сепч и ¡1 1апсеаШт или выглядят древовидно рассеченными у Р. ИераИса и Р. апИса. Стенка яичников сформирована из соединительнотканных волокон коллагенового типа, окрашенных в голубой цвет по Маллори и тесно связаных с окружающей паренхимой. В слепых трубочках яичников фасциол выявляются очень мелкие клетки - овогонии, имеющие неправильную (полигональную) форму, расположенные пристеночно. Они составляют зону размножения яичника. Овоциты, выявляются в просвете яичника трематод с эксцентрично лежащим ядром и крупным ядрышком. Между клетками выявляется питательный материал в виде тёмных зернистых скоплений. В яйцеводе форма овоцита становится круглой, а ядро занимает почти половину клетки. У Р. сепч зона размножения из клеток овогоний расположена с одной стороны яичника, а не по всей периферии пристеночно, как у фасциол. Центральная часть яичника заполнена бесформенной, слегка зернистой массой, которая представляет собой коллоид белкового происхождения, окрашенной в оранжево-красный цвет по Маллори. Телы^е Мелиса (скорлуповая железа) - орган сферической формы с резко очерченными границами располагается рядом с яичником. Орган состоит из двух типов железистых клеток, погруженных в основное вещество по периферии тельца. Многочисленные базофильные крупные неправильно-каплевидной формы клетки содержат гранулы и имеют все признаки секреторных клеток. Мелкие центральные клетки имеют эозинофильную цитоплазму. Внутренняя часть железы эозинофильна. У Р.сегхч тельце Мелиса - компактный орган с чёткой границей, обособленный от окружающей паренхимы, а у К ЬераНса, Р.%щапИса и Б. ¡апсеайт железа рыхлая, состоит из пучка клеток, радиально расходящихся в разные стороны и не обособленных от паренхимы. Желточные фолликулы, в которых развиваются желточные клетки, располагаются по бокам тела трематод в виде групп, имеющих форму гроздевидных образований у ВЛапсеаЫт. У К ИераИса и К апИса желточники занимают большую часть тела. У Р.сеп>1 желточные фолликулы мелкие, неправильной формы. Желточные клетки шаровидной формы, содержат гранулы желтого цвета, располагающиеся по периферии. Вителлиновые клетки участвуют в образовании яйцевой скорлупы и питании развивающегося зародыша. В протоке тельца Мелиса происходит распад желточных клеток. Расплавленные желточные гранулы вместе с яйцеклетками перемещаются в начальные отделы матки, где и происходит образование яйцевой скорлупы. Это процесс пластификации, в котором участвуют скорлуповые гранулы и секрет тельца Мелиса. В матке трематод наблюдается разная микроморфологическая картина, соответствующая стадиям оплодотворения яйцеклеток, дробления яиц после формирования скорлуповой оболочки и развитию яиц до образования личинки. Дробление оплодотворенной яйцеклетки и начальное образование

скорлуповой оболочки наблюдается в проксимальных отделах матки. В средних отделах яйца содержат развивающийся зародыш, который у каждого вида имеет свои особенности строения и не до конца оформленную яйцевую оболочку. В дальнейшем, в связи с дублением скорлупы, цвет её становится вначале желтым, а затем желто-коричневым, В дистальных отделах матки обнаруживаются яйца со сформированной скорлуповой оболочкой желтого или как у Б. ¡апсеаШт коричневого цвета и содержат сформированный зародыш, готовый к развитию в окружающей среде, при этом у каждого сосальщика он находится на различной стадии онтогенеза. У О. IапсеаШт в яйце выходит личинка - мирацидий, а у Р. Ьераиса, Р. %щапИса и Р. сепч - выходит яйцо, в котором мирацидий заканчивает развитие в окружающей среде.

2.2.2.2. Патоморфологические исследования репродуктивной системы трематод после воздействия антигельминтиков показали, что органы половой системы оказываются в условиях двойного токсикогенного воздействия, подвергаясь химиопрессии как антигельминтика, так и метаболитов самого гельминта, выделяющихся при распаде тканей тегумента, кишечника и паренхимы. Установлено, что все используемые антигельминтики в терапевтических дозах вызывают в половой системе трематод деструктцию, деформацию, декомпозицию тканей и клеточных форм органов. Некробиотические и дистрофические явления в органах половой системы, сопровождаются выраженными разрушениями стенок органов, распадом клонов и клеточных элементов. Максимальную силу эффекта на гаметогенез Р.ИераИса и /\ фцапИса оказывают триклабендазол, тегалид, антитрем, тетраксихол, димезол и политрем (табл. 1). Эффект воздействия тегалида и антитрема у Р. сег\п с большой степенью воздействия проявляется в семенниках и в яичнике. Фаскоцид вызывает дегенеративные процессы в семенниках и яичнике П. 1апсеаШт. Гиперэффект воздействия - тотальная некротизация структур тканей в яичнике и семенниках наблюдается у Р. сегхч после применения тетраксихола. Токсическое влияние антигельминтиков нарушает гомеостатику в репродуктивной системе трематод, изменяя цитоархитектонику половых желез, и тем самым, блокирует сперматогенез и овогенез. Структура яйцеклеток и сперматозоидов резко изменяется, не происходит их созревание.

Микроморфологические исследования тканей трематод помогли установить и показать, что антигельминтики токсически воздействуют на желточники, их функции, вызывая прекращение синтеза желточного материала, необходимого для формирования скорлуповой оболочки яиц. Дегенерация желточников приводит к блокаде развития вителлиновых клеток и скорлуповых гранул. Выявляется цепь патологических явлений, действующих на весь процесс развития новой генерации паразита. Патологические нарушения архитектоники вителлогенеза, сперматогенеза и овогенеза способствуют стерилизации гельминта, скорлуповые оболочки яиц не формируются, и прекращается яйцепродукция трематод.

Таблица 1

Эффект степени воздействия ¡інтигельміштнков н;і органы половой системы трематод

Органы Аншгеяьмшпики

Бензимидазолы Хлорированные углеводороды Салициланилиды

Триклаоендазол | Дпмезол Поонтрем | Антнтрем | Тетракснхол Тегалид Фаскоцид

фасциолы парамфистомы фасшюлы парамф истомы дикроцелии

Мужские полоеые органы: Семгнники 1 1 IX О. Л 1111 О. л мм О. л 1 1 IX 1 1 IX О.Л -Н-+ О

о. л о.л О.Л

Семенной пузырёк 11 11 Л 1 1 IX л і і і і л +++ 1 1 IX ++++ і І І і і Л 1 1 IX О.Л О.Л

Простатическая железа 1111 л +++ 1 1 IX 1 1 IX 1 1 IX +++

МІМ о. л л

Женские полаеые органы: Яичник 1 1 IX мм Л о. л 1 1 IX Ля 1 1 IX Пя +++

л о

Тельце Мелиса 1111 о. л і і і і о. л 1 111 л +++ +++ 1 1 1 IX 1111 1 11 1 +++ +++

Желточшши ++± +++ +++ 1111 о +++± ++++ -Н-НЬ ++± 1 1 IX +++

Матка 1 • < 1 • 111 1 1 ■ 1 1 . 1 1 IX

М М 1 о. л 1 II 1 1 л

Примечание к табліще: + — минимальный эффект степени воздействия антигельмшгшка на ткань; ++ - эффект средней силы воздействия; -н-*- - эффект сильного воздействия; -И-+-+ - максимальный эффект воздействия антигельшштнка; і ! : ! і - гішерзффекгвоздейсівня ангигельмингика; ± - местами разной силы воздействия (скачкообразно); О - отёк; Л - лизис структур; Пя - пикноз ядер; Ля - лизис ядер.

Репродуктивная система трематод в норме направлена на продуцирование инвазионных яиц. Все антигельминтики оказывают гиперэффект воздействия на матку и формирующиеся в ней яйца. В меньшей степени воздействует на яйца Д. 1стсеаШт фаскоцид. После триклабендазола, димезола, антитрема, тетраксихола выявляется: нарушение целостности и деформация яиц; увеличение их размеров; усиление проницаемости их скорлуповой оболочки; деструкция и декомпозиция содержимого яиц; прекращение процессов их созревания.

Результаты наших наблюдений показали, что значительные микроморфологические изменения цитоархитектоники половых желёз (семенников, яичника, простатической железы, тельца Мелиса, желточных фолликулов), нарушения процессов сперматогенеза, овогенеза и вителлогенеза зависят от химической природы антигельмингика, длительности его воздействия на гельминта и видовой специфики ответных реакций трематод (Г. ИераИса, Р. ^апИса, Р. сет, 0.1апсеаШт).

2.2.2.3. Морфометрический анализ яиц трематод до и после воздействия антигельминтиков при статистической обработке морфометрических параметров яиц, находящихся в конечных отделах матки подтвердил данные патоморфологии о трематодоцидных возможностях триклабендазола, димезола, тегалида, фаскоцида, антитрема, политрема и тетраксихола. Анализ общих объёмов яиц трематод объективно показал увеличение объёма яиц трематод по отношению к норме у фасциол после воздействия димезола, триклабендазола, антитрема, тетраксихола и у парамфистом после воздействия тегалида (рис. 2-4). Это подтверждают гистологические результаты о проницаемости скорлупы яиц. После воздействия триклабендазола у Р. ЬераИса происходят патологические процессы внутри яиц, выраженные увеличением объёма содержимого яиц, его лизисом, расплавлением тканевых структур. Статистически значимое уменьшение общего объёма яиц трематод выявляется после воздействия политрема у Р. ф%стИса, тегалида у Р. ИераИса, антитрема у Р. се г VI и фаскоцида у Д ¡апсеаШт (рис. 2-5).

Обнаруживается уменьшение объёма содержимого яиц трематод после воздействия димезола, тегалида, антитрема, политрема и фаскоцида по отношению к норме, что демонстрирует блокировку развития личинки -мирацидия и подтверждает гистологические данные о деформации яиц и дегенерации их содержимого. Тенденция к снижению объёмов яиц и их содержимого после воздействия антигельминтиков свидетельствует о торможении развития яиц.

Морфометрические исследования яиц Р. ИераИса, Р. апИса, Р. сегу/ и Д. 1апсеа(ит, находящихся в конечных отделах матки подтвердили, что все антигельминтики вызывают микроморфофункциональные изменения яиц трематод и их содержимого, обладают выраженным токсическим эффектом воздействия с прекращением яйцепродукции и позволяют максимально объективизировать патологию, вызванную антигельминтиком.

■ Контроль

■ Димезола

■ Триклабендазола

■ Тегалида

■ Антитрема

Общий объём яиц

Объём содержимого яиц

Рис. 2. Общий объём яиц Р. ИераИса и объём их содержимого до и после воздействия антигельминтиков.

■ Контроль Политрема Тетраксихола

Общий объём яиц

Объём содержимого яиц

Рис. 3. Общий объём яиц Р. gigantica и объём их содержимого до и после воздействия антигельминтиков.

з Контроль I Тегалида Антитрема

Общий объём яиц

Объём содержимого яиц

Рис. 4. Общий объём яиц Р. сегУ1 и объём их содержимого до и после воздействия антигельминтиков.

0,5-10'

ы - Ы

Общий объём Объём Общий объём Объём незрелых яиц содержимого зрелых яиц содержимого незрелых яиц зрелых яиц

■ Контроль

■ Фаскоцида

Рис. 5. Общий объём яиц О. 1апсеаШт и объём их содержимого до и после воздействия антигельминтика фаскоцида.

2.2.3. ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ОРГАНОВ И ТКАНЕЙ ТРЕМАТОД ДО И ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ ЛИГИ ГЕЛЬМШ ПИКОВ

2.2.3.1. Гистохимические исследования тканей тегумента, пищеварительной системы, паренхимы и органов половой системы трематод до воздействия антигельминтиков показывают состояние химических соединений в клетках тканей и органов F. hepático, F. gigantica, P.cervi и D. lanceatum, а также изменения их распределения, количества и места локализации в теле гельминта после химиотерапии хозяина антигельминтиками. Высокая концентрация гексозаминогликанов (ГАГ) выявляется в дистальной части тегумента трематод с диффузной ортохроматической толуидинофилией. Цитоплазма цитонов внутренней части тегумента трематод богата ГАГ сульфатированного типа с метахроматическим эффектом при окраске ТС. Отмечается скопление ГАГ вокруг ядра. В отростках цитонов ГАГ выявляются диффузно. Метахромазия проявляется в мышцах присосок, фаринкса и их тегументальных выстилках с ортохромазией ядер.

Альцианофилия наблюдается на поверхности тегумента и в субинтегу ментальных клетках, что указывает на: 1) гистохимическую однородность отростчатых цитонов и наружной части тегумента; 2) участие цитонов внутренней части тегумента в создании наружной части тегумента; 3) регуляторную роль тегумента в ионно-осмотических процессах гельминта, за счёт присутствия ГАГ. Проявление интенсивной альцианофилии и толуидинофилии наружной части тегумента и цитоплазмы внутренней его части трематод, свидетельствует о наличии в тегументе гиалуроновой кислоты и хондроитинсульфатов, подтверждая его секреторную функцию и участие в защитных реакциях трематод. ГАГ играют важную роль в регуляции проницаемости тканей, участвуют в ионном обмене, иммунологических реакциях и явлениях межклеточной адгезии. Высокое содержание ГАГ в тегументальных выстилках присосок, фаринкса и пищевода свидетельствует об активном участии тегумента и его производных образований в белково-углеводном метаболизме трематод.

Ярко-розовое окрашивание дистального отдела тегумента при Шик-реакции обусловлено наличием мукопротеинов с мелкими зёрнами гликогена. В проксимальной части тегумента трематод наблюдается отсутствие гликогена, но у Р. cervi гликоген встречается в виде мелких зёрен. Дистальный отдел тегумента дикроцелий за счет содержания небольшого количества мукопротеинов проявляет слабую фуксинофилию, а проксимальный - содержит мелкие гликогеновые глыбки, количество которых увеличивается по направлению вглубь паренхимы. В ротовой присоске и фаринксе D. lanceatum большое количество гликогеновых гранул определяется в мышечных волокнах. Большая часть гликогена в присосках трематод сосредоточена на стороне противоположной тегументальной выстилке. У Р. cervi гликоген располагается преимущественно на том участке присосок, который находится ближе к тегументальной выстилке. У F. hepático и F. gigantica гранулы гликогеновой

природы не выявляются, а розовое окрашивание обусловлено присутствием мукопротеинов. В присосках трематод встречаются единичные крупные клеточные формы с бледно-розовой вакуолизированной цитоплазмой и крупным светлым ядром с чётко контурируемым ядрышком - нейроны.

Бромфенолофилия наблюдается в шипиках тегумента Р. керайса и К gigantica, которые тёмно-синего цвета, и свидетельствует о наличии суммарных белков. В цитонах проксимальной части тегумента трематод бромфенолофилия указывает на их секреторную функцию, участие в структурной организации его наружной части и в регуляции обменных процессов. У В. ктсеа/ит идентифицированы БФС-положительные отросчатые цитоны, находящиеся на разных стадиях секреции клетки, которые имеют вариабельные размеры, грушевидную форму. Интенсивная бромфенолофилия тегумента Р. сеЫ указывает на содержание большого количества суммарных белков. Это объясняется местом их локализации (желудок) в организме хозяина, где происходит 1 этап расщепления белков, и свидетельствует об активном транспорте веществ в организм паразита с участием тегумента в трансмембранном переносе. В мышцах присосок трематод бромфенолофилия демонстрирует скопление большого количества суммарных белков, включая белки сократительного типа. Железы, выявляемые в толще стенок ротовой присоски и фаринкса у трематод, проявляют положительную реакцию с БФС.

Показано, что для апикальной поверхности микроворсинчатого слоя клеток кишечного эпителия трематод характерно наличие зоны гликокаликса. В его состав входят ГАГ, что подтверждается альцианофилией и метахромазией. Шик-положительное окрашивание щеточной каймы эпителия доказывает накопление в этой части углеводов, а наличие альцианофилии и толуидинофилии с метахроматическим эффектом указывает на участие микроворсинок в процессах избирательной проницаемости и защитных свойствах. ГАГ равномерно распределенны в цитоплазме апикальной части энтероцитов. У Р. сепп апикальная часть эпителиальных клеток кишечника имеет синий цвет только на уровне микроворсинчатой каемки. Шик-реакция выявила пылевидные гликогеновые зёрна среди микроворсинок в апикальной части кишечного эпителия трематод на уровне базальной мембраны, а также паренхиматозных ячейках вдоль ветвей кишечника. Интенсивное окрашивание, подтверждающее наличие мукопротеинов, характерно для апикальной (микроворсинчатой) части кишечника. У фасциол, парамфистом и дикроцелий интенсивная пурпурно-малиновая окраска наблюдается в апикальной части кишечного эпителия. В микроворсинках обнаруживаются пылевидные гликогеновые зерна. Большое количество белков при бромфенолофилии определяется в кишечной стенке трематод. Апикальная часть энтероцитов приобретает зеленоватую окраску, а базальная часть эпителия - синюю, что свидетельствует о содержании разных белковых комплексов. Цитоплазма кишечных клеток Р. сет и О. !апсеа1ит в реакциях на белки окрашивается слабо. В период пищеварения в кишечнике, та часть эпителия, которая несёт функциональную нагрузку, чётко отличается по цвету и при окрашивании БФС приобретает коричневый цвет. Метахромазия, бромфенолофилия и

фуксинофилия энтероцитов подтверждают наличие белок-полисахаридных комплексов. Содержание в эпителии кишечника кислых белков в комплексе с кислыми углеводами придаёт клеткам устойчивость к химическому воздействию хозяина.

В паренхиме трематод обнаруживается наличие значительного количества ГАГ. У трематод основные запасы гликогена, находящегося как в диффузной, так и в гранулярной формах, сосредоточены в паренхиме центральной части тела вблизи органов половой системы. Но самое большое количество гликогена в виде глыбок выявляется в паренхиме О. ¡апсеаШт. У Р.сепп гликоген накапливается в отдельных ячейках паренхимы, преимущественно на вентральной стороне тела. Волокнистая структура паренхимы окрашивается ярко БФС. Сетевидная цитоплазма основной ткани трематод богата суммарными белками и представлена рыхлой массой светлой окраски. Ячейки паренхимы центральной зоны и в области половых желез окрашиваются в голубой цвет БФС.

Исследования на содержание ГАГ и гликогена в репродуктивных органах трематод показали неравномерное их распределение и различное их содержание у каждого вида. ГАГ в большей степени выявляются в органах женской половой системы - стенках матки, яйцах и желточниках. Это свидетельствует об их секреторной активности, выполнении защитной и барьерной функций. В яйцах фасциол и дикроцелий содержание ГАГ незначительно, но их достаточно много определяется в полости матки. Небольшое количество ГАГ в половых железах указывает на низкую способность участвовать в образовании защитного барьера. Неравномерное распределение окраски у разных видов трематод прослеживается в желточниках и железистых клетках тельца Мелиса. В меньших количествах, чем в женских половых органах, ГАГ выявляются в органах мужской половой системы - семенниках, семенных пузырьках и наружных покровах цирруса и полового сосочка. Самое интенсивное окрашивание наблюдается в семенниках. В простатической железе ГАГ не накапливаются. Пространство между клонами в семенниках заполнено гелеобразной жидкостью, проявляющей толуидинофилию и альцианофилию.

В зернистой форме гликоген встречается в органах женской половой системы: желточниках, яйцах, стенках матки. Особенно много мелких зёрен гликогена накапливается между желточными гранулами, вместе с которыми он попадает в формирующееся яйцо. При Шик-реакции в стенках фолликулов трематод и прилежащей паренхиме выявляется ярко-малиновое окрашивание, что обусловлено гликопротеидами. У Р. сегм гликоген в желточных клетках не обнаружен. Яичники проявляют интенсивное окрашивание при Шик-реакции, в их стенке выявляются мелкие зёрна гликогена. В овоцитах К %1£стНса и КИераИса обнаружен диффузно распределенный гликоген, который, возможно, потребляется при делении и созревании клеток, так как внутри скорлупы яйца клетки свободны от гликогена. В клетках тельца Мелиса гликоген определяется в виде мелких зёрен в небольшом количестве. Шик-реакция стенок матки трематод достаточно интенсивнная, особенно, сильно окрашивается

эпителиальный слой. В диффузной форме гликоген выявляется в органах мужской половой системы трематод - в сперматозоидах семенников и семенных пузырьков. Шик-реакция определяется в стенках семенников и сформированных сперматозоидах, которые образуют скопления на выходе из семенников в семяпроводы. Окрашивание каплевидных клеток простатической железы и их протоков происходит за счет накопления мукопротеидов. Обнаруживаются мелкие зёрна гликогена в цитоплазме колбовидного основания клеток простатической железы, а также незначительное их количество вокруг ядер клеток.

Реакция на суммарные белки с БФС, показала, что соединительнотканные волокна и мышцы стенки семенников, семяизвергательных каналов и циррусных сумок трематод интенсивно окрашены. Основная окраска приходится на долю ядер, где хорошо контурируются ядерная мембрана и хроматин. Особенно интенсивно окрашиваются ядра клеток на ранних стадиях развития, поэтому зона размножения окрашена сильнее, чем остальная часть семенников. Секрет клеток простатической железы проявляет положительную окраску с БФС, что подтверждает гликопротеиновую природу. Сложное волокнистое строение стенок семенников трематод и их положительный эффект при окрашивании ТС, БФС, АС и Шик-реакция подтверждают защитно-коррелятивную функцию и метаболическую активность органов половой системы. Гистохимические реакции показывают, что ядра желточных клеток трематод окрашиваются БФС в голубой (синий) цвет, а гранулы в зеленовато-голубой (зелёный). При постановке реакции с БФС в желточниках хорошо выявляются возрастные особенности клеток. Синее окрашивание БФС подчеркивает границы скорлуповых гранул, а цитоплазма зрелой желточной клетки окрашивается в зеленоватый цвет. Стенка яичника трематод богата белками. Овогонии в яичнике выявляются гораздо лучше по сравнению с овоцитами за счет большего количества хроматина. Периферические клетки тельца Мелиса проявляют бромфенолофилию сильнее, чем центральные клетки, что демонстрирует выраженную белковую секрецию. Стенки матки окрашиваются БФС интенсивно, особенно базальная часть. Большое количество белков определяется в яйцах начальных отделов матки и оотипа. Интенсивность окрашивания скорлупы яиц от тёмно-синего до голубовато-синего окраса, по мере продвижения яиц в матке снижается и становится жёлтой.

2.2.3.2. Гистохимические исследования тканей тегумента, пищеварительной системы, паренхимы и половой системы трематод после воздействия антигельминтиков показали большую разницу реактивности тканей Р. ЪераИса, Р. %щапИса, Р. сепп и О. 1апсеаШт. Гистохимические реакции демонстрируют нарушение обменных процессов, которые в первую очередь, связаны с углеводами, проявляющиеся с одной стороны, в исчезновении гликогена в паренхиме и мышцах, а с другой - в увеличении количества ГАГ в наружном тегументе и в апикальной части кишечного эпителия. Последствием этих нарушений является углеводная дистрофия и тканевая декомпозиция. Извращённая гистохимическая

реактивность тканей и органов трематод при окраске на белки подчёркивает дегенерацию ядерных структур, несостоятельность белкового обмена. Последнее доказывается снижением реакции с БФС и извращенном окрашивании тканевых структур трематод.

Наиболее отрицательное альционофильное окрашивание наблюдается после воздействия тегалидом на Р. ИераНса и Р. сепч, а также тетраксихолом на Р. аписа и Р. сепч. Антигельминтики димезол, триклабендазол, политрем, антитрем, тетраксихол, тегалид, фаскоцид в тегументе, кишечнике и паренхиме трематод вызывают уменьшение распределения углеводов, оказывая угнетающее воздействие на углеводный обмен. Тегалид, антитрем, политрем и тетраксихол видоизменяют полимерную структуру сохранившегося гликогена в тканях Р. ИераИса и Р. сеп>1, который определяется в виде атипично окрашенной расплавленной массы. Резко уменьшается содержание гликогена в паренхиме и мышечных структурах присосок и фаринкса £>. 1апсеаПт после воздействия фаскоцидом (табл. 2). Увеличение содержания Шик-положительных веществ и смещение окраски в сторону цвета зелёно-синей гаммы с БФС: в кишечном эпителии, желточниках и семенниках Р. сеЫ и в паренхиме вокруг органов половой системы и стенке матки Р. Ъерайса после воздействия антитремом; в паренхиме вокруг органов половой системы и желточниках Р. ЬераИса после тегалида; в яичнике Р. ЬераИса после триклабендазола свидетельствует о том, что токсичность препаратов влияет на дезорганизацию углеводно-белковых комплексов с освобождением углеводного компонента. Прокрашивание скорлупы яиц, особенно, у Р. ИераИса после воздействия бензимидазолов и тегалида указывает на её повышенную проницаемость. Влияние антигельминтиков на К ИераИса, Р. ^стНса, Р. сепч и I). 1апсеаШт выражается уменьшением или исчезновением метахромазии хромотропных структур, что указывает на снижение в тканях гельминтов ГАГ или нарушении их структурной организации.

2.2.4. МИКРОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ЭНДОСТАЦИИ ПАРАЗИТА ПРИ ПАРАЗИТИРОВАНИИ РАйАМРИКТОМиМ СЕ ЯVI ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ АНТИГЕЛЬМИНТИКОВ

Паразит обитает внутри организма хозяина и трофически зависим от него. Совместное существование выгодно только паразиту, тогда как хозяину его присутствие может приносить вред (Всеволодов Б.П., 1971). Паразит может существовать с хозяином, не причиняя ему серьезного вреда, обеспечивая собственное будущее в среде I порядка. Согласно занимаемой эндостации, трематоды обладают разнообразными приспособлениями. В системе «паразит-хозяин» на первое место выступают коэволюционные взаимоотношения. Оба партнёра обладают сохраняющими реакциями, которые обеспечивают устойчивость паразитарной системы, способной к авторегуляторным процессам, защищающих, как хозяина, так и паразита, обеспечивая установление динамически стабильных взаимоотношений.

Таблица 2

Распределение углеводов и белков в тканях и органах дикроцелнй до н после воздействия антигельминтика фаскоцида

Ткань, орган До воздействия фаскоцида Послс воздействия фаскоцида

Шик-реакция БФС Шик-реакция БФС

Тегумент Дистальная часть ++ зелёное +++ + ярко-синие ++

Проксимальная часть +++ МЗГ синие +++ + синие ++

Присоски 1 1 IX гг синие ++++ +++ сине-зелёное ++

Паренхима Кортикальной зоны +++ КГГ зелёно-синие +++ + ВПК сине-зелёное +

Вокруг органов половой системы +++++ КГГ зелёно-синие +++ ++± ВПК синие +

Кишечник Апикальная часть эпителия ++ сине-зелёное +++ + зелёное +

Базальная часть эпителия +++ МЗГ сине-зелёное +++ + зелёное ++

Базальные мембраны +++ тёмно-сине- зелёное ++++ ++ зелёное ++

Женская Яичник +++ МЗГ сине-зелёное ++++ ± тёмно-зелёное +

половая Стенка матки +++ МЗГ сине-зелёное ++ + синие +

система Скорлупа яиц - - - зелёное +

Содержимое яиц ++++ МЗГ сине-зелёное ++ ++ тёмно-зелёное +

Желточники + МЗГ синие +++ ++ зелёное +

Тельце Мелиса ++ зелёно-синие ++++ +± зелёное +

Мужская Семенники +++ гг сине-зелёное -н-н- + зелёно-синие +

половая Семенной пузырёк 1 1 1 1 синие ++ ++ сине-зелёное +

система Простатическая железа ++ синие +++ + сине-зелёное +

Примечание к таблице: + (плюс) - положительная реакция; - (минус) - отрицательная реакция; + - небольшое содержание углеводов и белков (следы компонентов); ++ -умеренное их содержание; +++ - сравнительно большое их содержание; ++++ - высокая концентрация веществ; 1111+ - максимальное. Шик-реакция - окраска на гликоген и мукопротеины; БФС - окраска на суммарные белки; МЗГ - мелкие зёрна гликогена; ГТ -гранулы гликогена; КГГ - крупные гранулы гликогена; ВПК - видоизменённый полисахаридный компонент.

Паразит и хозяин, взаимодействуют как две биологические системы, деятельность морфологических структур которых направлена на формирование гомеокинеза каждого при гомеорезисе в целом системы «паразит-хозяин» в условиях относительного антагонизма. Установлено, что взаимоотношения между паразитом и хозяином осуществляются с помощью адгезивных процессов, в которых участвует ксенопаразитарный барьер (Додонов М.В., 2007).

2.2.4.1. Микроморфологические и гистохимические исследования тонкой кишки овец при парамфистомозе показали, что Р. сеп>г, паразитирующие в кишечнике овец, вызывают патоморфологические изменения, представленные атипичным воспалением. Складки, ворсинки и крипты кишечника при макроскопическом осмотре имеют обычный вид, среди них расположены парамфистомы, которые повторяют форму ворсинки, что указывает на явление конгруэнтности трематод, которая, будучи адаптивным компонентом паразитирования в данной эндостации, не расценивается как чужеродное, а способствует снижению напряженности конфликта между паразитом и хозяином. Морфофункциональные видоизменения эпителиального слоя ворсинок кишечника хозяина выполняют роль ксеногостального барьера, проявляющиеся: дегенеративно-дистрофическими и пролиферативно-метапластическими процессами эпителия ворсинок; образованием слоя молодой соединительной ткани с клеточными элементами; начальными стадиями формирования фиброза. Обнаруживается набухание эпителия ворсинок и крипт, его вакуолизация и зернистая дистрофия. В соединительнотканной основе слизистой оболочки кишечника выявляются выраженные признаки воспалительного процесса: отёчность, круглоклеточная инфильтрация, расширение сосудов микроциркулярного звена. Местами выявляется пролиферация эпителиального пласта слизистой оболочки, наблюдается гиперплазия эпителия, в некоторых случаях переходящая в метаплазию. В основном веществе ворсинки наблюдается небольшое количество эозинофилов, гранулы которых по Маллори окрашиваются в ярко-оранжевый цвет. Эозинофильная реакция является защитным механизмом организма хозяина на внедрение Р. сегхч в кишечник хозяина.

При гистологических и гистохимических исследованиях кишечника овец при парамфистомозе удалось выявить адгезию. Между парамфистомами и эпителием слизистой оболочки кишечника наблюдается образование плотного контакта в разных вариантах адгезии, что связано с различной локализацией паразита в эндостации хозяина: 1) с присасыванием гельминта задней присоской к листовидной ворсинке; 2) с взаимодействием тегумента паразита с поверхностью эпителиального слоя пальцевидной ворсинки. Установлены разные морфофизиологические особенности адгезии, которые зависят от степени взаимосодействия паразита с хозяином. Трансэпителиальная, поверхностная адгезия - сближение паразита с тканью хозяина на уровне гликокаликсного слоя, с проявлением альцианофилии, метахромазии, бромфенолофилиии положительной Шик-реакции. Интрафибриллярная тканевая интерференция - глубокая адгезия, при которой наблюдается

срастание соединительнотканных волокон тегумента парамфистом с тканью стенки кишечника хозяина. При таком контакте, открепление тела гельминта от ворсинки сопровождается отслоением эпителиальной выстилки кишечника с последующей её десквамацией и прилипанием к тегументу паразита. Слабо выраженные альцианофилия, метахромазия, фуксинофшшя и тотальное окрашивание БФС указывают на перемешивание фибриллярных белков тегумента парамфистом с тканью эндостации. Установленные виды адгезии являются морфологическими и гистохимическими отражениями стадий формирования паразито-хозяинной системы, обеспечивающей генез самой паразитарной системы на уровне «парамфистома-кишечник хозяина».

2.2.4.2. Микроморфологические и гистохимические исследования тонкой кишки овец при парамфистомозе после химиотерапии анпшгельминтиками показали, что введение антигельминтиков усугубляет патологические процессы, вызванные инвазией парамфистом, что приводит к развитию некробиотических очагов в стенке кишечника хозяина. Возрастает пролиферация клеток эпителия ворсинок и крштг слизистой оболочки с усилением и видоизменением эозинофильной пролиферации в паразитарной ниши, за счёт миграции эозинофилов в ткань, где осуществляется их патогенное воздействие. При воздействии антитремом в строме ворсинок преобладают эозинофилы в большей степени, чем при воздействии тегалидом. В дезорганизованной соединительной ткани гистохимически выявляются очаги мукоидного (после воздействия тегалида) и фибриноидного (после воздействия антитрема) набухания. После химиотерапии тегалидом и антитремом в стенке кишечника овец наблюдается усиление дистрофических процессов, преобладание воспаления альтеративно-пролиферативного характера с десквамацией эпителия, некробиозом и фиброзом. Несмотря на то, что установлена эффективность воздействия препаратов на парамфистом, они оказывают токсикогенное влияние и на ткани хозяина, которое наиболее выражено после воздействия антитрема. Считаем, что в дальнейшем целесообразно разработать новые схемы комбинированого лечения, которые будут обеспечивать более высокий терапевтический эффект.

2.2.5. КОНЦЕПЦИЯ ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКОГО И ГИСТОХИМИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ОРГАНОВ И ТКАНЕЙ ПАРАЗИТА И ХОЗЯИНА КАК ОЦЕНКА ТРЕМАТОДОЦИДНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ АНТИГЕЛЬМИНТИКОВ

(Заключительное обсуждение)

Вопросы патоморфологии и гистохимии как до, так и после воздействия антигельминтиков разного генеза на органы и ткани гельминта и его хозяина обеспечивают раскрытие новых особенностей механизмов воздействия препаратов и направлению поиска к синтезу антигельминтиков с усовершенствованными их качествами. Установление признаков гистохимической реактивности тканевых систем трематод и хозяина

обосновывает тонкие механизмы взаимодействия в системе «паразит-хозяин» до и после воздействия антигельминтиков.

2.2.5.1. Патоморфологические исследования органов и тканей паразита и хозяина как критерии оценки противотрематодоцидной эффективности антигельминтиков следует проводить при сравнении патологии органов всех систем трематод, взаимозависимость от степени их морфофункциональной дегенерации, чтобы сделать вывод о несостоятельности или возможности гельминта к функционированию в организме хозяина после химиотерапии.

Наши исследования показали, что в результате интоксикации после воздействия антигельминтиков в организме трематод происходит нарушение водно-электролитного и белкового обмена, что приводит к изменению коллоидно-осмотического давления и развитию гндропической дистрофии тканей гельминтов. Накопление воды вызывает набухание, расплавление и вакуолизацию тканевых и клеточных структур, выраженный отёк. Всё это приводит к колликвационному некрозу и прекращению функции органа.

Отёк тканевых структур трематод - один из важнейших показателей повреждения, который указывает на проницаемость покровов трематод, а также пониженную тоничность в эндостации. Избыток межтканевой жидкости приводит к развитию водной интоксикации в организме паразита. В результате этого резко нарушается мембранный водно-электролитный транспорт, следствием чего происходит набухание клеток и отёк тканей. Проникновение лекарственных препаратов в организм паразитов связывают с химической структурой соединения, концентрацией препарата, поверхностью паразита, а также физико-химическими свойствами его окружающей среды (Alvarez L.I., Mottier M.L., Lanusse Е., 2004). Тегумент и кишечник имеют непосредственную связь с компонентами эндостации хозяина, как органы эктосоматического блока (Начева Л.В., 1985, 1993). Все антигельминтики внедряются в организм трематод в большем количестве через тегумент и в меньшем - через ротовое отверстие гельминта и об этой избирательной проницаемости писали ранее (Ханбегян P.A., 1971) и данные автора совпадают с нашими наблюдениями. Разрушение тегумента и кишечного эпителия трематод, как мультифункциональных органов (Начева Л.В., 1985), обеспечивающих динамическую стабилизацию гельминта, способствует усилению токсикогенного влияния и проникновения антигельминтика в организм паразита. Выраженная атрофия микроворсинок апикальной части кишечного эпителия трематод после воздействия антигельминтиков приводит к нарушению процессов всасывания и подтверждает высокую степень проникновения препарата и через пищеварительную систему трематод. Дегенерация кишечника и прекращение трофики гельминта способствует его гибели.

Ткань внутренней среды трематод назвали органом мезосоматического блока (Начева Л.В., 1993). Паренхима, выполняя в организме паразита роль транспорта и обезвреживания веществ в норме, после воздействия антигельминтиков перестает участвовать в этих процессах. Разрушение

паренхимы повышает токсические свойства антигельминтика, которые усугубляются влиянием продуктов распада тканей гельминта. Патологические изменения в паренхиме, удваивают токсическое воздействие на органы репродуктивной системы, в результате чего происходит нарушение их цитоархитектоники и прекращение развития половых гамет.

Органы половой системы, сохраняющие и обеспечивающие процесс паразитирования трематод за счёт продукции новой генерации половых клеток, оплодотворения и развития яиц и личинок, были отнесены исследователями к энтосоматическому блоку (Гребенщиков В.М., 1984; Начева Л.В., 1992; Гребенщиков В.М., Начева Л.В., 2008).

Раскрыты морфофункциональные механизмы развития патологических процессов, происходящих в организме трематод при воздействии антигельминтиков. Наблюдаемая пролиферация ядер дистальной части тегумента и базальной эпителия кишечника после воздействия тегалида морфологически подтверждает патологию клеточного ядра, происходящие изменения его функционального состояния. Увеличение содержания нуклеиновых кислот подтверждается возрастанием базофильности кариоплазмы. После антитрема в тегументе и кишечнике выявляется большое количество ядер, сохраняющих контур границ, но прозрачным содержимым, что указывает на разрушение генетического материала трематод в жизненно важных структурах.

После воздействия тегалида и антигрема морфологические изменения однотипных морфофункциональных процессов (декомпозиция, дезорганизация и др.) в организме F. hepático и Р. cervi проявляются специфично. Воздействие антитрема на ткани F. hepático и Р. cervi проявляется более сильным набуханием и лизисом их структур, развитием некроза (табл. 3, 4), что после тегалида, особенно в тканях парамфистом, не наблюдалось. Это связано не только с тем, что трематоды разной видовой принадлежности, но и с тем, что они занимают в организме хозяина разные паразитарные ниши - эндостации.

Антигельминтики (триклабендазол, димезол, полигрем, тетраксихол, фаскоцид) проявляют высокую степень эффективности, что подтверждается морфофункциональными изменениями с необратимыми явлениями в органах и тканях трематод. В исходе необратимые некротические изменения тканей после воздействия тегалида, антитрема и тетраксихола отмечаются значительнее в организме фасциол, чем парамфистом при сравнении. Фаскоцид же обладает выраженным воздействием на тканевые системы дикроцелий. Нарушение белкового и углеводного обмена с перераспределением и накоплением компонентов в тканях трематод кислого характера, приводящее в исходе к необратимым процессам некробиоза и некроза тканей и органов трематод, подтверждает сильную степень фасциоло-парамфистомоцидного и дикроцелиоцидного воздействия антигельминтиков.

Таким образом, патоморфологический контроль включает в себя разные патоморфологические критерии оценки эффективности воздействия антигельминтиков, которые необходимо учитывать для подтверждения трематодоцидных свойств препаратов.

Таблица 3

Морфофункциональные изменения в органах и тканях Е Иеравса и Р. сеЫ после воздействия антитреиом

Патологический процесс Органы

Тегумент Кишечник Паренхима

РМераНса Р.сеп>і Р.ИераИса Р.сегуі РМераИса Р.сеп'і

Дистрофия гидропическая +++ ++ ++ ++ +++ ++

углеводная +++ +++ +++ +++ +++ +++

белковая +++ +++ +++ +++ +++ +++

Аутолиз (лизис, расплавление) +++ +++ +++ +++ +++ +++

Базофилия ткани +++ ++ +++ ++ +++ ++

Деструкция +++ ++ +++ ++ +++ ++

Дезорганизация +++ +++ +++ +++ +++ +++

Декомпозиция +++ +++ +++ +++ +++ +++

Некробиоз +++ +++ +++ +++ +++ +++

Некроз ++± + +++ ++ +++ ++

Примечание к таблицам 3. 4: + (плюс) - положительная реакция; - (минус) -отрицательная реакция; + - патологическая картина с незначительными морфофункциональными изменениями после воздействия антигельминтика; ++ -выраженные морфофункциональные изменения; +++ - необратимые процессы патогенеза; ± - процессы с разной степенью проявления.

Таблица 4

Морфофункциональные изменения ядер тегумента и кишечного эпителия К ИераНса и Р. сепч после воздействия аититремом

Патологический процесс Ядро

Ь'.Иераііса Р.сєгуі

Базофилия - +++

Пролиферация только в эпителии +

Пикноз +-Н- -

Лизис +-Н- +++

2.2.5.2. Гистохимический анализ тканей трематод после воздействия антигельмиитиков показал снижение степени окраски органов и тканей Р.ИераИса, апНса, Р. сеп>1 и £>. /апсеайт при реакциях с АС, ТС, БФС и Шик-реакции, что подтверждало нарушение физиологического состояния трематод. У трематод в тегументе и кишечнике, находящихся на границе раздела фаз «паразит-хозяин», выявлено наличие мукополисахаридов -поверхностно-активных веществ, при увеличении или уменьшении которых соответственно меняется поверхностное натяжение поверхностей клеточных структур тегумента и кишечника, что обуславливает развитие патологического процесса, как внутри клеток, так и тканей трематод. Антигельминтики являются катионными детергентами, которые, попадая в организм трематод, образуют с полианионами мукополисахаридов поверхностно-неактивные соединения, проникающие вовнутрь тканевых (тегумент, кишечник) и

клеточных структур тела паразита, то есть в глубину внутриклеточного раствора, способствуя развитию патологического процесса.

Адсорбируясь изначально на поверхности тела гельминта, антигельминтики, блокируют мукополисахаридный слой гликокаликса тегумента. Этот компонент влияет на свойства клеточной поверхности -всасывание, иммунологическое поведение, адгезивные силы, выполняет барьерную функцию в сложившейся системе «паразит-хозяин» (Policard А., 1975; Gabrion С., Gabrion J., 1976; Threadgold L.T., Befus A.D., 1977; Перминов A.A., Воробьёва Е.И., 1995; Ястребов М.В., 1996). Нарушение антигельминтиками тинкториальных свойств в тегументе и кишечном эпителии трематод подтверждается ослаблением окрашивания тканевых структур АС. Возрастание степени интенсивности положительной Шик-реакции свидетельствует об увеличении полисахаридов. Вопрос о перестройке белково-углеводных комплексов после воздействия антигельминтных препаратов, обсуждался в работах исследователей (Кошкина Н.Г., 1984). О блокировке гликолитических путей антигельминтиками упоминалось в работах ранее на примере фасциол (Сенутайте Я.Ю., 1970), но это были биохимические исследования. Увеличение или уменьшение окраски тканей трематод ТС после воздействия антигельминтиков указывает на снижение или усиление кислотности среды, что регулируется степенью концентрации ГАГ. Это связано с воздействием антигельминтика на изменение метаболизма паразита. Муцины, вьивляемые в норме в больших количествах в тегументе и кишечном эпителии трематод (Bjorkman N., Thorsell W., Liemert E., 1963; Резник Г.Н.,1972; Начева JI.B., 1975) придают пограничным структурам влажность и эластичность, предохраняя органы от воздействия протеолитических ферментов, к которым они устойчивы (Threadgold L.T., 1963). Антигельминтики значительно уменьшают содержание муциноподобных веществ, нарушая избирательную проницаемость тканей и ослабляя защитные свойства тегумента и кишечника. Наличие сульфатированных мукополисахаридов в тегументе трематод подтверждает избирательную проницаемость покровной ткани трематод и её взаимозависимость не только с обменными процессами самого параз!гга, но и с метаболизмом хозяина. Выявление ГАГ в эпителии матки, желточниках и яйцах у F. hepatica и Р. cervi после воздействия триклабендазолом, тегалидом и антитремом в большем количестве, чем при норме, а также у D. Icmceatum после фаскоцида, доказывает повышение секреторной активности органов и их защитной - главной функции ГАГ, выступающих в роли ксеногостального барьера. Аналогичная картина описана на примере других видов трематод (Гребенщиков В.М., 1984; Начева Л.В., 1993).

После воздействия антигельминтиков у трематод в тканевых структурах всех органов происходило изменение природы белкового компонента, перераспределение его функциональных групп, о чём свидетельствовало извращённое окрашивание БФС. Воздействие димезола у F. hepatica, а также тегалида у F. hepatica и Р. cervi смещало белковое равновесие в сторону белков основной природы. Политрем у Р. gigantica и фаскоцид у D. lanceatum вызывали перераспределение в сторону кислых белков. Преобладание зелёно-

синего цвета в реакции с БФС проявлялось в тканях после воздействия антитрема у F. hepatica и Р. cervi, а также тетраксихола у F. gigantíca, что указывает на большее количество мукополисахаридов. Воздействие триклабендазола, антитрема и тегалида на F. hepatica, а также политрема и тетраксихола на F. gigantíca и тетраксихола на Р. cervi приводило к наличию нехарактерного, коричневого и болотного окрашивания тканевого субстрата. Триклабендазол и политрем вызывали атипичное окрашивание, как со стороны тегумента, так и кишечника, а тетраксихол, тегалид и антитрем только со стороны тегумента. Именно это подтверждает их неидентичный механизм проникновения в организм трематод, изменение физико-химических и морфологических свойств белков в организме гельминтов, синтез аномальных белково-полисахаридных комплексов.

Тетраксихол, в составе, которого содержится битионол, как в организме F.gigantica, так и Р. cervi вызывал сильное изменение в белковом обмене, нарушая структуру белкового компонента, а значит и ферментных систем. Об ингибирующем влиянии битионола на ферментные системы фасциол указывалось ранее (Бенедиктов И.И., 1982). Антигельминтики, вступая в реакцию с доступными функциональными группами биополимера, блокируют взаимодействие с красителями. При достаточно высокой концентрации белка в отсутствии сильного отталкивающего заряда молекулы могут объединяться друг с другом гидрофобными взаимодействиями, при этом растворимость белка снижается и происходит образование хлопьевидного осадка. Результаты наших исследований подтверждают этот механизм воздействия. Окрашивание тканей трематод БФС на белки выявляет наличие хлопьевидной массы коагулирующего белкового компонента, выпадающего в виде осадка в большом количестве после воздействия тегалидом и антитремом у F. hepatica, политремом и тетраксихолом у F. gigantíca, фаскоцидом у D. lanceatum, а также антитремом и тетраксихолом у Р. cer\>i. Особенно демонстративной и показательной картина была после воздействия хлорированных углеводородов, содержащих в химической структуре наибольшее число атомов хлора и меньше полярных групп. Наименьшее количество денатурирующего белкового компонента в тканях отмечалось у F. hepatica после воздействия димезолом -антигельминтика, не содержащего ни одной из вышеперечисленных функциональных группировок.

Антигельминтики являются типичными алкиляторами, полярные органические молекулы которых с различной структурой эффективно угнетают активность ферментов (Бенедиктов И.И., 1982). Обязательным структурным требованием к неспецифическим ингибиторам ферментов является наличие полярной группировки (-С=0 или -ОН), т.к. механизм воздействия обусловлен адсорбцией ингибитора на границе контакта гидрофобной площадки фермента с полярной фазой. Антигельминтик как электролит, вызывает коагуляцию биополимеров, поэтому чем больше в своей структуре содержит ионогенных групп, тем сильней эффект его воздействия. Катион-антигельминтики, образуя прочные связи с карбоксил-анионами субстрата тканей вызывают разрывы ионных связей (Переверзева Е.И., 1994). Снижение электрической поляризации

белка уменьшает его растворимость. Вследствие этого, находящийся в растворе белок, коагулируя, выпадает в осадок. Что наиболее часто обнаруживалось нами в тканях трематод (Начева Л.В., Бибик О.И., 2006). Большинство антигельминтиков относится к дифильным соединениям, их молекулы включают два центра, один из которых способен к ионизации в водных средах, а другой образует гидрофобные связи.

При разрушении белково-углеводных комплексов, происходит освобождение анионных центров, которые задерживают антигельминтики -катионные молекулы, образуя комплексы. Поэтому, мы считаем, что при взаимодействии в системах «антигельминтик-полимер ткани», с одной стороны, могут образовываться солевые связи между антигельминтиком и карбоксиланионами поликислот, которыми и являются ГАГ ткани паразита, а с другой стороны, молекулы препарата могут связываться с основной цепью белково-углеводного комплекса благодаря неполярным взаимодействиям.

Положительной стороной гистохимического изучения механизмов воздействия антигельминтиков и их производных является то, что помимо выявления точек приложения испытуемых препаратов появляется возможность раскрытия связи антигельмингного воздействия с их молекулярной структурой и определения роли функциональных групп в формировании ингибирующего эффекта. Установлено, что изменение химической структуры фасциолоцидов влияет на избирательную токсичность: антигельминтики с карбоциклическим строением активнее ациклических; разделение фенольных колец у производных дифенилов метиленовой группой и в большей степени серой и еще больше окисленной, уменьшают фасциолоцидную эффективность; с увеличением атомов хлора в соединении возрастает эффективность препарата (Ханбегян P.A., 1977).

В своих исследованиях И.И. Бенедиктов доказал, что антигельминтики, относящиеся к производным замещённых фенолов, бензимидазолов и салициланилидов, в которых присутствуют группы с диссоциирующим протоном, проявляют свойства типичных разобщителей окислительного фосфорилирования динитрофенольного типа. Введение в состав молекулы ингибитора-антигельминтика возрастающего числа атомов галогена приводит к усилению тормозящего воздействия соединений, т.е. ингибирующего влияния соединения на ферментные системы гельминта. При этом природа галогена практически не сказывалась на эффекте торможения - препараты, содержащие атомы брома (Вг), проявляли себя аналогично соединениям, содержащим атомы хлора (С1). Включение в сульфидный мостик (-S-) атомов кислорода (-S=0) снижает эффективность тормозящего воздействия препаратов на ферментные системы трематоды. При изучении производных бензимидазола для проявления ингибирующего воздействия необходимы замещения в фенильном кольце производных 2-фенилбензимидазола. Включение у 2-го углеродного атома фенила атомов хлора и брома, аминогруппы и гидроксила приводит к выраженному тормозящему эффекту на ферментативную активность митохондрий гельминта (Бенедиктов И.И., 1982).

Гисгохимически установлено, что все ангигельмннтики вызывали структурные изменения в тканях тегумента, паренхимы, пищеварительной и половой систем трематод, которые выражались дистрофиями разного генеза: 1) декомпозицией - наблюдалась деструкция углеводно-белковых комплексов, с высвобождением и накоплением белков или углеводов; 2) инфильтрацией (дистрофия количественного характера) - отмечалось накопление белков и углеводов; 3) извращённым синтезом (дистрофия качественного характера) на уровне белков. Гистохимическая гиперплазия характеризовалась увеличением количества белков хлопьевидной формы, что проявлялось при БФС окрашивании и указывало на нарушение внутриклеточного транспорта продуктов метаболизма. Выявляемый некробиоз тканей трематод подтверждал необратимые дистрофические изменения на уровне нарушения углеводного и белкового обменов. Исчезновение гликогена после воздействия антигельминтика, указывает на преобладание в тканях трематод катаболических реакций над анаболическими, а значит, происходит нарушение биохимических путей синтеза жизненно важных веществ.

Таким образом, воздействие антигельминтиков на органы и ткани КИераИса, р. gigantica, Р. сет и О. 1апсеа1ит выражалось постепенными изменениями: 1) деформацией, вакуолизацией, отечностью, атрофией и фокальным некрозом тегумента и кишечного эпителия; 2) набуханием, углеводно-белковой инфильтрацией всех соединительнотканных волокон с очагами их лизиса; 3) обезвоживанием ткани внутренней среды с явлениями инфильтрации ее волокон, исчезновением гликогена как запасного питательного материала, частичными некротическими явлениями; 4) декомпозицией половых желез, инфильтрацией их клеток и волокон углеводами, извращенным синтезом белков, разрушением цитофоров и распадом клонов, их смешиванием, с участками коагуляционного некроза; 5) разрушением зрелых яиц и морфофункциональных блоков их формирования, нарастающей дистрофией желточников с распадом желточных клеток, их декомпозицией и склеротизацией гранул; 6) извращённым и нарастающим снижением окрашивания тканей при реакциях толуидиновым, бромфеноловым и альциановым синим, Шик-реакцией, что свидетельствовало о белково-углеводных дистрофиях.

Однозначно, что степень воздействия антигельминтика на органы и ткани трематод, определяется химической структурой препарата и является процессом, сопровождаемым определенной морфологической перестройкой, в основе, которой лежат тонкие изменения внутриклеточного метаболизма.

Таким образом, гистохимический анализ тканевой реактивности необходимо использовать как критерии эффективности воздействия антигельминтиков при трематодозах.

2.2.5.3. Микроморфологические особенности взаимоотношения в системе «паразит-хозяин» на примере паразитирования парамфистом в кишечнике овец до и после воздействия антигельминтиков.

При изучении биологических основ патогенеза гельминтозов, показано, что взаимоотношения гельминтов с органами и тканями хозяина, их

механическое и токсическое воздействие, равно, как и реакции со стороны хозяина, являются причиной и основной сутью гельминтологического процесса (Шульц P.C., Гвоздев Е.В., 1976). С точки же зрения функциональной морфологии для установления эффективности воздействия антигельминтиков на трематод необходимо рассматривать взаимоотношения между паразитом и хозяином с учётом системного анализа.

Адаптивные реакции эндостаций паразита, динамика ксенопаразитарных барьеров и специфика их формирования, зависят от локализации трематод в среде первого порядка. Коэволюционный подход к изучению взаимоотношений в системе «паразит-хозяин» был использован многими авторами (Начева Л.В., Воробьёва Е.И., 1990; Воробьёва Е.И. 1992; Штейнпрейс Т.А., 2000; Перминов A.A., 2000; Додонов М.В., 2007). Отмечалась способность хозяина к сохраняющим морфологическим и физиологическим реакциям, позволяющим достичь определённой степени стабилизации системы, повышающей её жизнеспособность. Было установлено, что формирование систем «трематода-млекопитающее» характеризуется преобладанием пролиферативно-диспластических процессов в эндостации среды первого порядка, а формирование и специфика ксенопаразитарного барьера определяется, как механизмом паразитирования, так и особенностями реактивности тканей хозяина (Воробьёва Е.И., 1992; Воробьёва Е.И., Начева Л.В., 1994; Начева Л.В., Воробьёва Е.И.,2007).

Несомненно, воздействие антигельминтиков на трематод связано с эндостацией паразита, в которой между хозяином и гельминтом складываются определенные трофические связи, и что важной причиной в снижении напряжённости конфликта между паразитом и хозяином является эволюционно сложившаяся адаптация паразита. Она выражается в мимикрии формы гельминта, способностью к межгельминтной адгезии, антигенной близостью паразита к окружающей ткани хозяина, что рассматривалось в исследованиях других учёных (Березанцев Ю.А., 1964; Перминов A.A., 2000).

Возникновение ксенопаразитарного барьера, а в настоящее время называемого ксеногостальным (Воробьёва E.H., Начева Л.В., Штейнпрейс Т.А. и др., 2008), является необходимым морфофункциональным звеном, не только объединяющим, но и разъединяющим генетически неоднородные организмы. Ксенопаразитарный барьер является важной особенностью формирования гомеореза биологической системы «паразит-хозяин» с относительным физиологическим равновесием, как состоявшейся системы с взаимосохраняющейся динамической стабилизацией (Додонов М.В., Начева Л.В., 2007) и энергетическим балансом, обеспечивающим обмен веществ обоих партнеров в процессе их сосуществования.

В наших исследованиях выявляется локализация паразитов в слизистой оболочке кишки овец, спонтанно заражённых парамфистомами. Слизистая оболочка кишки овец выглядит резко утолщённой. Р. cervi, располагаются на верхушках кишечных ворсин листовидной формы, при этом находясь между пальцевидными ворсинами, что создает условия для наилучшего контакта между паразитом и хозяином. При расположении между ворсинками трематоды

приобретают удлиненную форму, приспосабливаясь к очертаниям ворсинок, на которых они паразитируют. Несмотря на конгруэнтность, т.е. соответствие формы паразита, занимаемой им ниши, плотный контакт P. cervi с тканью хозяина происходит не через тегумент тела, а через заднюю присоску гельминта. Чётко выявляются адгезивные взаимодействия на уровне системы «Р. сет-слизистая оболочка кишечника овцы». За счет такого контакта и прикрепления парамфистомы обладают двоякой диманичностью: седентарным характером (прикреплением задней частью) и относительной подвижностью передней части. В то же время такой способ существования дает возможность парамфистомам осуществлять пофазное перемещение за счет прикрепления фаринкса к ворсинке и открепления задней присоски, а затем возвращение в первоначальное состояние, но на другом участке кишечника.

Адгезию в морфофункциональном комплексе «тегумент-эпителиальная ткань ворсинки кишечника» при парамфистомозе овец рассматриваем как показатель зрелости взаимных отношений паразита и хозяина. При этом, взаимодействие обнаруживается на уровне контакта двух гликокаликсных слоёв - тегумента P. cervi и поверхности эпителиальных клеток ворсинок кишечника хозяина. При глубокой адгезии отмечается гистологическое и гистохимическое единство участков контакта паразита и хозяина, которое проявляется как при окрашивании гематоксилин-эозином, так и при Шик-реакции, АС, ТС, БФС. Происходит смешивание биохимического состава тегумента трематод и ткани эндостации хозяина, участвующих в адгезивном процессе. Эти данные свидетельствуют, что в системе «паразит-хозяин» складываются гомеорезисные взаимоотношения, то есть паразитарная система состоялась. Изменение гистохимических параметров в зоне контактирующего участка паразитов с тканью хозяина имеет подтверждение в исследованиях других учёных на различных видах (Aggarwal A., Nash Т.Е., 1988; Саргоп А., Dessaint I.P., 1989; Damian R.J., 1989; Начева JI.B., Штейнпрейс Т.А., 1995; Начева Л.В., Воробьёва Е.И., 1996).

Анализ литературных источников и результатов собственных исследований позволяют говорить о том, что при спонтанных трематодозах, адаптивные процессы, конфликтные и компенсаторные реакции имеют как стереотипный характер, так и дифференциальные особенности во взаимодействиях партнёров бинарной системы.

Патоморфологические проявления парамфистомоза разрешают охарактеризовать тканевую реактивность хозяина как биологически относительно целесообразный комплекс адаптивных реакций, направленных на установление длительных стабильных и относительно бесконфликтных отношений с паразитом. Тканевая реактивность хозяина как эндостация обитания паразита имеет ряд общих признаков: 1) длительное динамическое течение; 2) преобладание в среде 1-го порядка реакций пролиферативного плана; 3) изменения в ретикуло-эндотелиальной системе; 4) пролиферация соединительной ткани; 5) гиперплазия лимфоидной ткани; 6) активация камбиальных тканевых элементов; 7) сохраняющая реакция вокруг гельминта; 8) гранулематозные процессы в ответ на выделение продуктов

жизнедеятельности и гибель гельминтов (Воробьёва Е.И., 2006). А уплотнение и новообразование волокон соединительной ткани обеспечивает стабильность паразитов и снижает меру их воздействия на ткани хозяина (Начева JI.B., Воробьёва Е.И., 1990). Продуктивно-гиперпластическая активность, распространяясь на весь орган и затрагивая все его тканевые элементы, развивается и в исходе может привести к диффузному фиброзу.

Наши исследования показали, что подтверждением аллергического состояния при парамфистомозе овец являются: эозинофилия, гиперемия и тканевые отёки. Это согласуется с другими работами (Жариков И.С., Бобкова А.Ф., Орловский В.И., 1978; Найт Р., 1985; Озерецковская H.H., 2000). Патоморфологические изменения слизистой оболочки кишки овец при парамфистомозе характеризуются наличием альтеративных и пролиферативных явлений со стороны эпителия и собственной пластинки. Пролиферация, гиперплазия и метаплазия в эндостации паразпта обеспечивают динамическую стабильность паразито-хозяинной системы, за счёт относительной изоляции парамфистом, их трофических связей, определяют клинико-морфологическую картину парамфистомоза, предопределяя прогноз данной патологии для хозяина. Пролиферативные процессы имеют многообразие проявлений, обнаруживающихся в эпителии слизистой оболочки кишечника, где они выражены гиперплазией и метаплазией, разрастанием соединительной ткани в строме ворсинок. Благодаря секреторной активности эпителия тонкого кишечника хозяина, паразит получает достаточное трофическое обеспечение.

Патоморфологические проявления в тонкой кишке овец при парамфистомозе и химиотерапии тегалидом и антитремом складываются из альтернативно-дистрофических и пролиферативных процессов. Максимально выражены процессы пролиферации с местами некробиоза. Функциональные нарушения пролиферативных эпителиальных элементов в наших исследованиях характеризуются снижением содержания углеводных соединений и застоем секреторного продукта клеток. Это свидетельствует в пользу тканевой дегенерации. Умеренная эксудативная реакция в слизистой и подслизистой оболочках проявляется субэпителиальным отёком ворсин и крипт, отёком волокон и периваскулярного пространства, лимфогистиоцнтарной инфильтрацией собственной пластинки слизистой оболочки. Альтерация представлена истончением и обрывками ворсинок, растяжением крипт, десквамацией и дистрофией эпителия с функциональными нарушениями в нём. Эти процессы можно объяснить повышением токсических реакций на ткани хозяина. При введении антигельминтика в организм хозяина происходит нарушение гомеокинетического состояния каждого из биологических видов, составляющих данную бинарную систему, что приводит к дестабилизации и гомеоклазу, а далее к гибели системы и развитию заболевания с клиническими проявлениями, хотя паразит изгоняется из организма хозяина, но хозяин реагирует на разрушение коадаптивных взаимоотношений (Штейнпрейс Т.А., 2000; Начева Л.В., Додонов М.В., Воробьева Е.И., 2009).

Продукты метаболизма гельминтов способствуют изменению биоценоза кишечника и увеличению доли условно-патогенной и патогенной микрофлоры (Заяц Р.Г., Рачковская И.В., Карпов И.А., 2002). После химиотерапии антитремом в глубине кишечных крипт не наблюдалось содержание простейших. В тоже время, простейшие чётко обнаруживались нами до лечения в полости присосок самих гельминтов, что обеспечивает их трофику. Считается, что макроорганизм и его желудочно-кишечная микрофлора — единая экологическая система, находящаяся в динамическом равновесии (Асадуллина И.И., Галимова В.З., 2010). А так, как компенсаторные возможности организма весьма ограничены, то с этих позиций микрофлора пищеварительного тракта может выступать в качестве высокочувствительной индикаторной системы, которая реагирует своим составом на изменение клинического состояния животного связанного с отрицательным воздействием препарата на его кишечную микрофлору, что и отмечалось в наших исследованиях.

Тканевые реакции после воздействия антигельминтиков (тегалида и антитрема) в наших исследованиях представлены гиперемией и плазморрагией, которые приводят к инфильтрации, декомпозиции и дезорганизации соединительной ткани. Нарушение физико-химической и структурной организации соединительной ткани эндостации паразита выражалось мукоидным набуханием - перераспределением ГАГ. Последние обладают гидрофильными свойствами и накопление их способствует тканевой и сосудистой проницаемости. Деполимеризация ГАГ межуточного вещества с пропитыванием его белками плазмы крови приводит к набуханию ткани и повышению внутреннего давления. Это увеличивает фильтрацию жидкости из сосудов в ткани, где происходит её задержка. Поэтому мукоидное набухание с одной стороны способствует гидропической дистрофии, набуханию, отёку, результатом которого является колликвационный некроз. Аналогичное проявление процессов в механизме воздействия антигельминтика выявлялось у самого паразита. С другой стороны, мукоидное набухание переходит в фибргтоидное, дальнейшее развитие которого приводит к фибриноидному некрозу, характеризующегося полной деструкцией ткани. Воздействие антитрема характеризуется наличием ворсинок, покрытых массивными пластами дегенеративного пролиферирующего эпителия. Такие утолщённые ворсинки имели боковые выросты в виде аденоматознообразных структур. Наблюдался субэпителиальный отек, в результате которого кишечный эпителий ворсинок был отделен от стромы. Альцианофилия, толуидинофилия и Шик-реакция демонстрировали слабое проявление функциональной способности пролиферативных клеточных элементов, что свидетельствует в пользу дегенерации слоя кишечного эпителия, вызванной химиотерапией антигельминтиком.

Воспалительный процесс, вызываемый эозинофилией в строме ворсинок тонкого кишечника овец при парамфистомозе, подтверждает наличие паразитарной инвазии. Эозинофилы, мигрируя к месту эндостации хозяина, что вызвано наличием чужеродного белка, становятся «избирательно»

цитотоксичными (Озерецковская H.H., 2000; Додонова М.В., 2007). К активации их цитотоксичности приводит наличие инородных организмов -паразитов, а значит, в организме хозяина эозинофилия выполняет защитную роль. Было отмечено, что при интенсивности заражения эозинофилоциты усиливают своё действие на паразита, уничтожая его. Продукты эозинофильной дегрануляции играют защитную роль, способствуя лизису тканевых паразитов, но, фиксируясь в тканях, эозинофилы начинают выделять ферменты, обладающие протеолитической активностью в отношении не только паразитов, но и нормальных тканей хозяина. Поэтому роль эозинофилии положительна лишь частично. Появление эозинофилов в ткани указывает на усиление воздействия этих зернистых гранулоцитов (Воробьева Е.И., Начева Л.В., Штейнпрейс Т.А. и др., 2008). Некоторые авторы указывают, что морфофункциональные механизмы эозинофилии при трематодозах обладают однотипностью и обеспечиваются рядом факторов, активирующих эозинофилоцитов на выброс гранул (Брылева A.B., Фролов A.B., Додонов М.В., 2008; Додонов М.В., Брылева A.B., Додонова Г.Х., 2009).

После химиотерапии антитремом в ворсинках наблюдалось скопление эозинофилов, оболочка клеток которых была сохранена, ядра некротизированы (пикнотичны), зернистые включения клеток лизировались под влиянием антитрема и цитоплазма клеток окрашивалась в оранжевый цвет по Маллори. Считаем, что влияние антигельминтика блокирует эозинофильный эффект воздействия на окружающие ткани хозяина, вызывая гибель эозинофилов. Это указывает на приоритетность и перспективность использования препарата на практике и является основой для расширения области применения антитрема, блокирующего цитотоксичность эозинофилии, что благоприятно для тканей хозяина. Антитрем - синоним препарата циклодол из группы холинолитических средств, блокирующих мускариновые и никотиновые холинергические рецепторы. Опираясь на вышесказанное, мы предполагаем, что противопаразитарный эффект антитрема обусловлен воздействием на холинорецепторы скелетных мышц. Холинолитическое воздействие антитрема может проявляться в двух вариантах, как мускаринолитическом, так и никотинохолинолитическом. Мускаринолитическое воздействие антитрема выражается расслаблением гладкой мускулатуры эндостации, что является, как мы считаем, последствием угнетения нервно-мышечной передачи на уровне постсинаптической мембраны. На Р. cervi антитрем оказывает никотинохолинолитическое воздействие, что проявляется в снижении тонуса и расслаблении поперечнополосатых мышечных структур органов фиксации и мышечных элементов кожно-мускульного мешка. Миорелаксантный эффект приводит к параличу мышечной системы паразита не позволяющий ему фиксироваться внутри полости тела хозяина. Воздействие на нервную систему паразита, приводит к угнетению метаболизма и нарушению окислительно-восстановительных реакций, вызывая его гибель. Данный эффект подтверждается при исследовании нами углеводного обмена гистохимическими методами.

Мы считаем, что определенный дуализм токсического воздействия происходит за счет усиленной диффузии после воздействия антигельминтиков, разрушающих защитные барьеры в системе «паразит-хозяин». Токсические вещества, образующиеся в результате распада паразита, проникают в организм хозяина беспрепятственно, так же как и антигены хозяина диффундируют в гельминта, усиливая его разрушение.

Результаты собственных исследований позволили нам выдвинуть концепцию патоморфологического контроля и гистохимической тканевой реактивности паразита и хозяина, которая раскрывает механизмы морфофункциональных взаимоотношений в процессе перехода системы «паразит-хозяин» из гомеорезистого состояния в гомеоклазисное и позволяет оценить эффективность воздействия антигельминтиков при трематодозах.

выводы

1. Морфофункциональные изменения органов и тканей трематод указывают на высокую эффективность антигельминтиков: антитрема (в дозе 200 мг/кг по ДВ) и тегалида (30 мг/кг) на Рахсіоіа ИераИса, а также тетраксихола (200 мг/кг) на РагатрЫъктит сеп'і и фаскоцида (10 мг/кг) на Вісгосоеііит Істсесйит при трематодозах крупного рогатого скота; политрема (в дозе 140 мг/кг по ДВ) и тетраксихола (200 мг/кг) на Рсксіоіа ^аМіса, а также триклабендазола (10 мг/кг) и димезола (200 мг/кг) на Е ГіерМіса, антиггрема (200 мг/кг) и тегалида (30 мг/кг) Р. сеті при трематодозах овец! Степень воздействия препаратов на уровне клеток, тканей, органов и организма паразита и хозяина определяется химической струкіурой антигельминтика.

2. Установлено, что антигельминтики вызывают разный эффект развития некробиотических процессов в тканях пограничных органов трематод -тегументе и кишечнике: деструкцию и разрушение наружной части и вакуолизацию внутренней части с дезорганизацией цитонов тегумента; атрофию апикальной и базальной частей эпителия, пикноз и лизис ядер сохранившейся базальной части кишечника. Максимальную степень воздействия на тегумент трематод оказывают тетраксихол, политрем и антитрем, а на кишечник - тегалид и фаскоцид.

3. Все антигельминтики приводят к необратимым патологическим нарушениям ткани внутренней среды трематод с выраженным отёком, набуханием её клеточных и волокнистых структур. Наибольшие некротические явления в паренхиме выявляются вблизи тегумента и эпителия кишечника. Максимальная степень воздействия на ткань внутренней среды гельминтов обнаруживалась после тетраксихола, триклабендазола, тегалида и фаскоцида.

4. При патоморфологическом контроле органов и тканей трематод показано, что триклабендазол, антитрем и тегалид - препараты из разных химическим группам оказывают однотипное воздействие на внутреннюю часть тегумента и базальную часть кишечного эпителия, вызывая увеличение

количества клеточных элементов - пролиферацию ядер, как усиление регенераторно-адаптивных реакций в условиях среды I порядка.

5. При гистохимическом анализе органов и тканей трематод после воздействия антигельминтиков выявлено: усиление извращённого окрашивания БФС демонстрирующего нарушение реализации белков; снижение Шик-реакции, что свидетельствует о блокировке синтеза углеводных компонентов; повышение альцианофилии в тегументе и кишечнике указывающей на возрастание защитных свойств гельминта.

Изменение тинкториальных свойств трематод с нарастающим диссонансом повышения и снижения бромфенолофилии, альцианофилии, толуидинофилии и Шик-реакции тканевых структур и глубокие нарушения распределения углеводов и белков во всех органах сосальщиков свидетельствуют о выраженной токсичности антигельминтиков.

6. Установлено, что антитрем и тегалид вызывают в органах и тканях F.hepatica и Р. cer\>i однотипные изменения (деструкцию, дезорганизацию, дистрофию и др.), но их проявления выражаются различно, что подтверждает свойство тканевой специфичности трематод, принадлежащих к разным видам. Антитрем и тегалид оказывают более сильный эффект степени воздействия на ткани F. hepático.

7. При микроморфологическом анализе органов половой системы трематод показано, что антигельминтики вызывают патологию тканей и клеточных форм в репродуктивных органах F. hepático, F. gigantica, Р. cervi и D. lanceatum. Максимальный эффект степени воздействия на органы половой системы трематод оказывает триклабендазол и димезол у F. hepático, тегалид и антитрем у F. hepático и Р. cervi, а также тетраксихол у F. gigantica и Р. cervi.

8. Определено, что воздействие антигельминтиков на органы и ткани трематод происходит последовательно в несколько стадий: 1) Изначально -токсическое воздействие на тегуменг и кишечник, вызывая уменьшение в них количества гексозаминогликанов, резко снижает защитные силы гельминта и эти органы становятся неспособными создавать регулирующий барьер на границе раздела фаз системы «паразит-хозяин». 2) Проникновение токсинов в паренхиму приводит к нарушению осмотического и электролитного обмена трематод с развитием шдропической дистрофии, деструкцией белково-углеводных комплексов и тканевому некрозу. 3) Двойное воздействие, как антигельминтика, так и метаболитов лизиса ткани внутренней среды самого гельминта способствует усилению степени токсического давления на органы его половой системы. У трематод нарушается цитоархитектоника желгочников, яичников, семенников; прекращаются процессы вителлогенеза, овогенеза и сперматогенеза, блокируется процесс формирования яиц.

Антигельминтики, которые в своей структуре содержат меньшее число полярных групп (-ОН, -С=0, -NH-), и наибольшее число атомов галогена, оказывают более высокий эффект воздействия, вызывая глубокую патологию.

9. Выявленые патологические изменения общего объёма яиц трематод (Vя), находящихся в задних отделах матки, а также объёмов содержимого яиц, (Ус) при анализе их морфометрических параметров, статистически значимо

показали: 1) увеличение общего объёма яиц F. hepático после воздействия антитрема, димезола, триклабендазола и Р. cervi при воздействия тегалида (р<0,05); 2) уменьшение общего объёма яиц F. hepatica после воздействия тегалида, F. gigantica после тетраксихола и полтрема, D. lanceaíum при влиянии фаскоцида; 3) увеличение объёмов содержимого яиц F. hepatica после воздействия триклабендазола, Р. cervi после тегалида и антитрема; 4) уменьшение объёмов содержимого яиц F. hepatica после воздействия димезола, тегалида, антитрема, F. gigantica после политрема и D. lanceatum после фаскоцида; 5) правильно подобраную терапевтическую дозу антигельминтиков и их овоцидную эффективность.

10. Морфофункциональные изменения эндостации паразита при парамфистомозе до лечения представлены дегенеративно-дистрофическими и пролиферативно-метапластическими процессами эпителиального слоя ворсинок и крипт стенки кишечника овец, выполняющего роль ксеногостального барьера. В системе «паразит-хозяин» барьер обеспечивает иммобилизацию паразита и формирование адаптивной трофической зоны.

11. Воздействие антигельминтиков на кишечник хозяина проявляется альтеративно-пролиферативными реакциями, десквамацией эпителия и некробиозом, но антитрем вызывает более сильную патологию, чем тегалид. Гистохимически выявлялись очаги мукоидного (после воздействия тегалида) и фибриноидного (после воздействия антитрема) набухания в тканях эндостации хозяина, которые являются обратимыми.

Установлен феномен деструкции эозинофилов и блокировки эозинофильной реакции при парамфистомозе после воздействия антитрема, что является основой для расширения области применения этого препарата.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Разработаны критерии оценки эффективности воздействия антигельминтиков на трематод: 1) Патоморфологический контроль и патоморфологические критерии воздействия антигельминтиков на органы и ткани трематод; 2) Гистохимические критерии на основе гистохимического анализа реактивности тканей трематод после воздействия антигельминтиков. 3) Морфометрические критерии оценки овоцидного воздействия антигельминтиков. Разработаные критерии следует использовать, как методологические подходы прогнозирования процессов патогенеза в органах и тканях трематод после химиотерапии животных.

Список

работ, опубликованных по теме диссертации

1. Бибик О.И. Патоморфологический анализ органов и тканей трематод после действия антигельминтиков / О.И. Бибик // Медико-биологические проблемы: Сборник научных трудов. - Кемерово, 1997. - Вып. 2. - С. 40.

2. Бибик О.И. Сравнительный патоморфологический и морфометрический аналш яиц дикроцелий после действия кубена / О.И. Бибик, A.B. Васильев // Проблемы медицины и биологии: Материалы Всероссийской конфференции-семинара с международным участием. - Кемерово, 1998. - С. 94.

3. Бибик О.И. Результаты экспериментального изучения противоописторхозного препарата из растительного сырья / О.И. Бибик, A.JI. Смирнов // Проблемы медицины и биологии: Материалы Всероссийской конференции-семинара с международным участием. — Кемерово, 1998. - С. 8788.

4. Бибик О.И. Гельминтоз - это болезнь, лечение которой необходимо / О.И. Бибик, JI.B. Начева // Проблемы медицины и биологии: Сборник научных трудов по материалам Всероссийской научной конференции-семинару, посвященной 275-летию Российской Академии наук. - Кемерово, 1999. - ч. 1. -С. 124.

5. Бибик О.И. Анализ действия тетраксихола на ткани фасциол и парамфистом / О.И. Бибик, Л.В. Начева, В.М. Гребенщиков // Среда обитания и профилактика заболеваний в г. Кемерово: Тезисы докладов к городской научно-практической конференции, посвященной Всемирному дню охраны окружающей среды. - Кемерово, 1999. - С. 113-114.

6. Бибик О.И. Патоморфологический контроль трематодоцидных возможностей сочетанного действия празиквантеля и мебендазола / О.И. Бибик // Проблемы медицины и биологии: Сборник научных трудов. - Кемерово, 2000. - ч. 2. - С. 83-84.

7. Бибик О.И. Микроморфологические и гистохимические исследования органов и тканей описторхов после действия антигельмингиков / О.И. Бибик // Проблемы медицины и биологии: Сборник научных трудов. - Кемерово, 2000. -ч. 2.-С. 85.

8. Бибик О.И. Микроморфологические исследования дикроцелиев после фебантела / О.И. Бибик, Л.В. Начева, В.М. Гребенщиков // Медико-биологические проблемы: Сборник научных трудов. - Кемерово, 2000. - Вып. 7.-С. 9-10.

9. Бибик О.И. Ангигельминтики, эффективность их действия на органы и ткани Opisthorchis felineus (гистологические и гистохимические исследования) / Л.В. Начева, О.И. Бибик, В.М. Гребенщиков. - Кемерово, 2000. - 92 с.

10. Бибик О.И. Гельминтоз как болезнь и лечение его лекарственными средствами / Л.В. Начева, О.И. Бибик, Н.Г. Кошкина, В.М. Гребенщиков // Роль техногенных факторов в формировании патологии в Сибири: Сборник научных работ КемГМА. - Кемерово, 2000. - Вып. 2. - С.45-46.

11. Бибик О.И. Сравнительная микроморфология органов и тканей описторхов после действия мебендазола и празиквантела в эксперименте / Л.В. Начева, О.И. Бибик, К.С. Сурцев // Проблемы медицины и биологии: Сборник научных трудов. - Кемерово, 2001. - ч. 2. - С. 107-108.

12. Бибик О.И. Действие антнгельминтиков на органы и ткани трематод / Л.В. Начева, Н.Г. Кошкина, В.М. Гребенщиков, О.И. Бибик, М.В. Додонов, А.Т.

Закирова II Проблемы медицины и биологии: Сборник научных трудов. -Кемерово, 2001. - ч. 2. - С. 109-110.

13. БибикО.И. Патоморфологические исследования дикроцелиев после воздействия фебантела / JI.B. Начева, О.И. Бибик // Медико-биологические проблемы: Сборник научных трудов. - Кемерово, 2002. - Вып. 10. - С. 8-10.

14. Бибик О.И. Эффективность альбазола-С при аскариозе и его влияние на организм животных и репродуктивную систему Ascaris suum / И. А. Архипов, C.B. Русаков, Л.В. Начева, О.И. Бибик // Медико-биологические проблемы: Сборник научных трудов. - Кемерово, 2003. - Вып. 12. - С. 33-34.

15. Бибик О.И. Эффективность тегалида при фасциолёзе и его влияние на фасциол и организм животных / И.А. Архипов, C.B. Русаков, М.Б. Мусаев, НИ. Кошеваров, Д.Н. Шемяков, Л.В. Начева, О.И. Бибик // Медико-биологические проблемы: Сборник научных трудов. - Кемерово, 2003. - Вып. 12. - С. 32-33.

16. Бибик О.И. Гистохимическая реактивность тканевых систем трематод при действии антигельминтиков / Л.В. Начева, О.И. Бибик // Медико-биологические проблемы: Сборник научных трудов. - Кемерово, 2004. - Вып. 13.-С. 31-36.

17. Бибик О.И. Действие бифенала в системе «паразит-хозяин» / И.А. Архипов, М.Б. Мусаев, О.И. Бибик, Л.В. Начева, В.В. Лошкарёва // Медико-биологические проблемы: Сборник научных трудов. - Кемерово, 2004. - Вып. 13.-С. 7-8.

18. Бибик О.И. Микроморфология органов и тканей Fasciola hepatica, взятых после лечения антитремом / О.И. Бибик // Медико-биологические проблемы: Сборник научных трудов. - Кемерово, 2005. - Вып. 14. - С. 77-79.

19. Бибик О.И. Патоморфологические изменения органов и тканей Paramphistomum cervi после действия тетраксихола / Л.В. Начева, О.И. Бибик // Медико-биологические проблемы: Сборник научных трудов. - Кемерово, 2005. - Вып. 14. - С. 94-96.

20. Бибик О.И. Действие антитрема на микроморфологию органов и тканей фасциол / О.И. Бибик, И.А. Архипов, Л.В. Начева // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы научной конференции Всероссийского общества гельминтологов РАН. - М., 2005. - Вып. 6. - С. 5759.

21. Бибик О.И. Микроморфология органов и тканей Fasciola hepatica после лечения тегалидом / О.И. Бибик // Труды Всероссийского института гельминтологии имени К.И. Скрябина. - 2006. - Т. 42. - С. 84-87.

22. Бибик О.И. Патоморфологический контроль токсикогенного действия тегалида на органы и ткани Paramphistomum cervi / О.И. Бибик // Труды Всероссийского института гельминтологии имени К.И. Скрябина. -2006. - Т. 44. - С. 46-52.

23. Бибик О.И. Патоморфологический контроль токсикогенного действия тегалида на органы и ткани трематод Paramphistomum cervi и Fasciola hepatica / О.И. Бибик // Теоретические и практические вопросы паразитологии: Сборник работ Всероссийской научной конференции, посвященной 50-летию кафедры общей биологии с основами генетики и паразитологии и 80-летию со дня

рождения первого заведующего кафедрой, д.б.н., профессора Е.Д. Логачёва. -Кемерово, 2006. - С. 73-79.

24. Бибик О.И. Микроморфологические исследования органов и тканей разных видов трематод до и после воздействия антигельминтиками / Л.В. Начева, О.И. Бибик // Труды Всероссийского института гельминтологии имени К.И. Скрябина. - 2006. - Т. 44. - С. 162-169.

25. Бибик О.И. Патоморфологические исследования органов и тканей разных видов трематод до и после действия антигельминтиков / Л.В. Начева, О.И. Бибик // Теоретические и практические вопросы паразитологии: Сборник работ Всероссийской научной конференции, посвященной 50-летию кафедры общей биологии с основами генетики и паразитологии и 80-летию со дня рождения первого заведующего кафедрой, д.б.н., профессора Е.Д. Логачёва. -Кемерово, 2006. - С. 35-41.

26. Бибик О.И. Микроморфологические изменения органов и тканей Рагатр!ш1о11шт сегУ1 после тетраксихола / О.И. Бибик, Л.В. Начева, И.А. Архипов // Труды Всероссийского института гельминтологии имени К.И. Скрябина. - 2006. - Т. 44. - С. 53-57.

27. Бибик О.И. Распространение гельминтозов среди населения Кемеровской области / Л.В. Начева, О.И. Бибик, Т.Е. Старченкова // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы научной конференции Всероссийского общества гельминтологов РАН. - М., 2006. -Вып. 7. - С. 266-268.

28. Бибик О.И. Гистохимические исследования нарушения углеводного обмена в тканях и органах фасциол после воздействия тегалида / О.И. Бибик // Труды Всероссийского института гельминтологии имени К.И. Скрябина. -2007.-Т.45.-С. 40-45.

29. Бибик О.И. Оценка влияния триклабендазола на микроморфологические параметры органов и тканей Разсю1а ИераЬса / О.И. Бибик // Труды Всероссийского института гельминтологии имени К.И. Скрябина. - 2007. - Т. 45. - С. 46-52.

30. Бибик О.И. Патоморфологическая оценка эффективности действия триклабендазола на органы и ткани фасциолы печёночной / О.И. Бибик, Л.В. Начева // Медицина в Кузбассе: Научно-практический медицинский журнал. -Кемерово, 2007. - № 3. - С. 19-22.

31. Бибик О.И. Гистохимические исследования базальных мембран в органах и тканях паразита до и после воздействия антигельминтиков / Л.В. Начева, О.И. Бибик // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы научной конференции Всероссийского общества гельминтологов РАН. - М, 2007. - Вып. 8. - С. 241-244.

32. Бибик О.И. Гистохимические исследования базальных мембран органов и тканей гельминтов до и после воздействия антигельминтиками / Л.В. Начева, О.И. Бибик//Российский паразитологический журнал. - 2007. - № 1. - С. 63-66.

33. Бибик О.И. Патоморфология органов и тканей трематоды вида Fasciola hepatica после действия антигельминтика «альбен-супер» / О.И. Бибик, С.В. Енгашев, Л.В. Начева // Ветеринария. - 2007. - № 1. - С. 29-31.

34. Бибик О.И. Гельминтозы населения Кузбасса / Л.В. Начева, О.И. Бибик, Т.Е. Старченкова, М.В. Додонов // Медицина в Кузбассе: Научно-практический медицинский журнал. - Кемерово, 2007. - № 1. — С. 22-29.

35. Бибик О.И. Описторхоз в Кемеровской области / Л.В. Начева, Т.Е. Старченкова, О.И. Бибик, М.В. Додонов // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2007. - № 1. - С. 25-28.

36. Бибик О.И. Морфофункциональная характеристика органов и тканей паразита и хозяина при трематодозах после химиотерапии антигельминтиками / О.И. Бибик // Российский паразитологический журнал. - 2008. - № 1. - С. 99-106.

37. Бибик О.И. Гексозаминогликаны в органах и тканях половозрелых Fasciola hepatica после воздействия триклабендазола / О.И. Бибик, Л.В. Начева // Российский паразитологический журнал. - 2008. - № 3. - С. 72-76.

38. Бибик О.И. Методические рекомендации по выявлению трематодоцидной эффективности антигельминтных средств методом морфометрического анализа яиц трематод после действия препарата / О.И. Бибик, Л.В. Начева // Российский паразитологический журнал. - 2009. - № 1. - С. 102-106.

39. Бибик О.И. Действие триклабендазола в системе «паразит-хозяин» / И.А. Архипов, Н.И. Кошеваров, МБ. Мусаев, О.И. Бибик, Ф.С. Михайлицин // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы научной конференции Всероссийского общества гельминтологов РАН. - М., 2009. -Вып. 10. - С. 26-28.

40. Бибик О.И. Микроморфология органов половой системы трематоды Fasciola hepatica, взятых после лечения тегалидом / О.И. Бибик // Медицина в Кузбассе: Научно-практический медицинский журнал. - Кемерово, 2010. -спецвып. 3. - С. 14-15.

41. Бибик О.И. Патоморфологический контроль изменений в органах и тканях половой системы трематоды Dicrocoelium lanceatum после воздействия антигельминтика фаскоцида / О.И. Бибик // Российский паразитологический журнал. — 2010. - № 4. — С. 41-44.

42. БибикО.И. Гистохимические исследования распределения гликогена в органах и тканях Opisthorchis felineus, взятых после лечения антигельминтиками / Л.В. Начева, О.И. Бибик, Ю.А.Нестерок // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы научной конференции Всероссийского общества гельминтологов РАН. - М., 2010. -Вып. 11.-С. 312-314.

43. Бибик О.И. Паразитарные болезни, распространённые на территории Кузбасса (меры борьбы и профилактики). Методические рекомендации для врачей практического здравоохранения и ветеринарной медицины, студентов,

ординаторов и аспирантов соответствующего профиля / О.И. Бибик, Л.В. Начева. - Кемерово, 2010. - 63 с.

44. Бибик О.И. Морфометрический анализ яиц РаБСІоІа Ьерагіса до и после воздействия антигельминтиков / О.И. Бибик, Т.А. Штернис // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы научной конференции Всероссийского общества гельминтологов РАН. - М., 2011. -Вып. 12. - С. 73-77.

45. Бибик О.И. Микроморфологическое и гистохимическое исследование тонкой кишки овец при спонтанном иарамфистомозе после воздействия тегалида / О.И. Бибик, Л.В. Начева, И.А. Архипов // Российский паразитологический журнал. - 2011. - № 2. - С. 101-105.

46. Бибик О.И. Патоморфология тонкой кишки овец при парамфистомозе и после воздействия тегалидом / О.И. Бибик, Л.В. Начева, И.А. Архипов // Теоретические и практические вопросы паразитологии: Материалы II Юбилейной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 55-летию кафедры общей биологии с основами генетики и паразитологии КемГМА и 85-летию со дня рождения д.б.н., проф. Е.Д. Логачёва. - Кемерово, 2011. - С. 22-27.

47. Бибик О.И. Морфометрический анализ яиц Разсіоіа Ііераіїса до и после воздействия антигельминтиков триклабендазола и тегалида / О.И. Бибик, Т.А. Штернис // Российский паразитологический журнал. - 2011. -№ 4. - С. 132-138.

48. Бибик О.И. Патоморфология органов и тканей РаьсМа керайса и РагатрМ^отит сепч после воздействия антитрема / О.И. Бибик, Л.В. Начева, И.А. Архипов // Российский паразитологический журнал. - 2012. -№ 1. - С. 14-21.

49. Бибик О.И. Микроструктура тонкой кишки овец при парамфистомозе после воздействия антитрема / О.И. Бибик, Л.В. Начева, И.А. Архипов // Российский паразитологический журнал. - 2012. — № 1. -С. 62-65.

Сдано в набор 20 марта 2012 г., Формат 14,8 х 21,0. Печать офсетная. Гарнитура Times New Roman. Тираж 100 экз. Заказ № 006. Издано «Eugen-home»

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Бибик, Оксана Ивановна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Патоморфологические и гистохимические исследования органов и тканей трематод после воздействия антигельминтиков в историческом аспекте (Обзор литературы).

Глава 2. Материал и методы исследования.

Глава 3. Микроморфофункциональные особенности тегумента, пищеварительной системы и паренхимы трематод до и после воздействия антигельминтиков.

3.1. Морфофизиологические особенности трематод в условиях эндостации - среде I порядка.

3.2. Микроморфологическая характеристика тегумента, пищеварительной системы и паренхимы трематод до воздействия антигельминтиков.

3.3. Микроморфологические исследования тегумента, пищеварительной системы и паренхимы трематод после воздействия антигельминтиков.

3.3.1. Патоморфологические исследования тегумента, пищеварительной системы и паренхимы ¥а$сю1а кераНса и

Т7. gigantica после воздействия антигельминтиков.

3.3.2. Патоморфологические исследования тегумента, пищеварительной системы и паренхимы РагатрЫБ^тит сетг после воздействия антигельминтиков.

3.3.3. Патоморфологические исследования тегумента, пищеварительной системы и паренхимы 01сгосоеНит 1апсеаШт после воздействия фаскоцида.

Глава 4. Микроморфофункциональные особенности органов половой системы трематод до и после воздействия антигельминтиков.

4.1. Морфофункциональная характеристика репродуктивных органов и гаметогенеза трематод до воздействия антигельминтиков.

4.1.1. Микроморфология мужской половой системы и сперматогенеза трематод до воздействия антигельминтиков.

4.1.2. Микроморфология женской половой системы и овогенеза трематод.

4.2. Патоморфологические исследования репродуктивной системы трематод после воздействия антигельминтиков.

4.2.1. Патоморфологические исследования органов половой системы

Т7. кераНса и К gigantica после воздействия антигельминтиков.

4.2.2. Патоморфологические исследования органов половой системы

Р. сет после воздействия антигельминтиков.

4.2.3. Патоморфологические исследования органов половой системы 1апсеаШт после воздействия фаскоцида.

4.3. Морфометрический анализ яиц трематод до и после воздействия антигельминтиков.

Глава 5. Гистохимические исследования органов и тканей трематод до и после воздействия антигельминтиков.

5.1. Гистохимические исследования тканей тегумента, пищеварительной системы, паренхимы и органов половой системы трематод до воздействия антигельминтиков.

5.2. Гистохимические исследования тканей тегумента, пищеварительной системы, паренхимы и половой системы трематод после воздействия антигельминтиков.

5.2.1. Гистохимический анализ тканей К керайса и Р. gigantica после воздействия антигельминтиков.

5.2.2. Гистохимический анализ тканей Р. сегуг после воздействия антигельминтиков.

5.2.3. Гистохимический анализ тканей П. 1апсеаШт после воздействия фаскоцидом.

Глава 6. Микроморфологические и гистохимические исследования эндостации при паразитировании Р. сеп>1 после воздействия антигельминтиков.

6.1. Микроморфологические и гистохимические исследования тонкой кишки овец при парамфистомозе.

6.2. Микроморфологические и гистохимические исследования тонкой кишки овец при парамфистомозе после химиотерапии антигельминтиками.

Глава 7. Концепция патоморфологического и гистохимического исследования органов и тканей паразита и хозяина как оценка противотрематодоцидной эффективности антигельминтиков {Заключительное обсуждение).

7.1. Патоморфологические исследования органов и тканей паразита и хозяина как критерии оценки противотрематодоцидной эффективности антигельминтиков.

7.2. Гистохимический анализ тканей трематод до и после воздействия антигельминтиков.

7.3. Микроморфологические особенности взаимоотношения в системе «паразит-хозяин» на примере паразитирования парамфистом в кишечнике овец до и после воздействия антигельминтиков.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфофункциональная характеристика органов и тканей паразита и хозяина при трематодозах после химиотерапии антигельминтиками"

Трематодозы (фасциолез, дикроцелиоз, парамфистомоз) - заболевания, вызываемые Fasciola hepatica, F. gigantica, Dicrocoelium lanceatum и Paramphistomum cervi, относятся к широко распространенным гельминтозам (Коляда Е.Е., 2004; Горохов В.В., Скира В.Н., Клёнова И.Ф. и др., 2010; Кошеваров Н.И., Архипов И.А., 2010; Кротенков В.П., Буренков С.Н., Кушнир Ю.О., 2010; Кряжев А.Л., Бирюков С.А., Лемехов П.А., 2010; Кармалиев P.C., 2011; Кошеваров Н.И., 2011). Фасциолез, дикроцелиоз и парамфистоматоз наносят значительный экономический ущерб животноводству (Архипов И.А., 1979; Сафиуллин Р.Т., 1997; Сафиуллин Р.Т., Устинов A.M., Мукасеев С.В., 2010). В последние годы увеличилось количество выявляемых людей больных фасциолёзом (Сорокина Н.П., Москвин A.C., Горохов В.В., 2003; Горохов В.В., Сергиев В.П., Успенский A.B. и др., 2005, 2008). Высокая частота встречаемости трематодозов не только у домашних животных, но и у человека в Российской Федерации, вызывает необходимость тщательного и всестороннего изучения их возбудителей, а также разработки современных методов борьбы с ними - дегельминтизации химическими препаратами (Молчанов И.А., Сорокина Н.П., Фабиан А., Горохов В.В., 2004; Сергиев В.П., Успенский A.B., Романенко H.A. и др., 2005; Успенский A.B., Никитин В.Ф., Лемехов П.А., 2010).

В XX веке дегельминтизация человека и животных была одним из эффективных санитарно-эпидемиологических мероприятий. Дегельминтизация улучшает здоровье населения и является приоритетным направлением в борьбе с гельминтозами (Онищенко Г.Г., 2003). Ещё К.И. Скрябиным (1946) было подчеркнуто, что в решении практических задач лекарственной терапии гельминтозов лежит глубокое и всестороннее изучение обмена веществ у паразитических червей: «.без детализированных знаний биохимических особенностей того или иного гельминта, без понимания протекающих у паразитов физиологических процессов, наука не подберет ключа к разгадке кардинального вопроса практики о механизме действия антигельминтических препаратов и к отысканию новых лекарственных веществ, обладающих специфической дегельминтационной эффективностью».

Актуальность проблемы. В настоящее время наиболее действенной мерой борьбы с гельминтозами человека и животных является химиотерапия с использованием высокоэффективных антигельминтиков широкого спектра воздействия, максимально безопасных для организма и относительно безвредных для окружающей среды (Архипов И.А., 2004, 2009). Рядом авторов отмечается широкое распространение смешанной трематодозной инвазии (Ахмедрабаданов Х.А., Атаев A.M., 2006; Арисов М.В., 2009), микстинвазии трематодами и нематодами (Абдуллаев Х.С., Кузнецов В.М., Садов K.M. и др., 2006; Огородник С.Г., 2007). Заражение гельминтами чаще всего происходит в пастбищный период и нередко сроки заражения животных отдельными видами гельминтов совпадают, что создает возможность освободить животных от возбудителей разных заболеваний с помощью однократного использования препарата широкого спектра воздействия (Архипов И. А., 1995). Для проведения дегельминтизации нельзя ограничиваться применением одного или двух препаратов, так как у паразитов быстро развивается устойчивость к их воздействию, что представляет большую проблему, затрудняющую борьбу с ними (Архипов И.А., 2007). Лечение трематодозов требует создания средств, точкой «приложения» которых должны быть жизненно важные системы гельминта. Дегельминтизация требует более эффективных трематодоцидных средств, изыскание которых, помимо традиционных методов их скрининга целесообразно проводить путём гистологических, гистохимических и электронномикроскопических методов, с разносторонним изучением механизма воздействия антигельминтиков на паразита, а также изучать в динамике структурные и функциональные изменения в тканях гельминта и в некоторых органах хозяина (Жукова С.В., 1991).

Одной из актуальных проблем в развитии гельминтологической науки (ветеринарном и медицинском аспектах) является подробное изучение микроморфологии гельминтов, подвергшихся химиотерапии. Знание изменений микроструктуры тканей гельминтов и специфики их обменных процессов под воздействием антигельминтиков, по сравнению с нормой, даёт возможность 7 оценить эффективность препарата, выявить пути его проникновения в организм гельминта и раскрыть механизм на паразита (Сенутайте Я.Ю., 1970; Сташайтис Ю.Н., 1974; Казанцева Г.Н., 1984; Демидов Н.В., 1981; Начева Л.В., Бибик О.И., Гребенщиков В.М., 2000). Это может реализоваться с помощью гистологических, гистохимических и морфометрических методов исследования тканей и органов трематод после применения антигельминтиков (Кошкина Н.Г., 1970; Начева Л.В., 1977; Гребенщикова В.М., 1984; Чебышев Н.В., Котовский Е.Ф., Беречикидзе И.А., 1991; Бибик О.И., 1997). Патоморфология, вызываемая конкретным антигельминтиком позволяет определить степень деструктивных процессов, как у паразита, так и у хозяина (Чебышев Н.В., Беречикидзе И.А., Богоявленский Ю.К., 1991; Богоявленский Ю.К., Рачковская И.В., Чебышев Н.В., 1994; Чебышев Н.В., Богоявленский Ю.К., Гришина Е.А., 1998) и прогнозировать возможность «привыкания» гельминта к препарату. При изучении изменений в строении тканей гельминтов на различных сроках после применения антигельминтика можно выявить структуры, которые в первую очередь подвергаются воздействию препарата, определить глубину структурных нарушений, их «обратимость» или «необратимость» как в тканях гельминтов, так и их хозяев (Абдулазизов А.И., 1987; Богоявленский Ю.К., 1989).

В течение многих лет коллектив сотрудников кафедры биологии КемГМА под руководством профессора Е.Д. Логачёва (1956-1992гг.) занимался микроморфологическими и гистохимическими исследованиями тегумента и кишечника трематод после воздействия антигельминтиков и продолжает эти исследования в настоящее время. С 1978 года началось изучение половой системы трематод. Мощное развитие репродуктивной системы является одним из основных факторов приспособления гельминтов к паразитическому образу жизни, способствующему поддержанию их численности и обеспечивающему существованию видов. В этом аспекте изучение микроморфофункциональных особенностей половой системы гельминтов представляло и в настоящий момент представляет большой интерес. Считаем, что для разработки рекомендаций по применению антигельминтиков в борьбе с трематодозами необходимо учитывать все морфофункциональные особенности паразитов и их 8 изменения при воздействии антигельминтиков (Гребенщиков В.М., Начева Л.В., 2008).

Особый вклад в развитие патомикроморфологического направления при трематодозах внесли отечественные ученые - Резник Г.К. (1959-1969), Кошкина Н.Г. (1969-1985), Начева Л.В. (1977-1993), Гребенщиков В.М. (19811985). Их работы убеждают об актуальности более глубокого анализа патоморфологии трематод, патофизиологии и патогенеза гельминтов, изучения внутренних механизмов взаимоотношений паразита и хозяина при воздействии антигельминтиков (Начева Л.В., Бибик О.И., Гребенщиков В.М., 2000; Начева Л.В., Воробьёва Е.И., 2007; Гребенщиков В.М., Начева Л.В., 2008).

Однако недостаточно исследованной остается патоморфология тканевых систем органов хозяина при трематодозах (Начева Л.В., До донов М.В., Воробьёва Е.И., 2009). Актуальным вопросом является изучение гистохимической реактивности тканей гельминта и хозяина при воздействии антигельминтиков, который так же недостаточно освещён. В то время, как характеристика соединений с предполагаемой антигельминтной активностью требует комплексного подхода — одновременного изучения изменений в системе «паразит-хозяин» (Писарева Т.А., 1975; Рачковская И.В., 1985; Воробьева Е.И., 1992). Всестороннее изучение антигельминтных препаратов имеет большое значение для теоретической и практической паразитологии (Архипов, 2007; Гузоев А.Х., Беккиева С.А., 2007), что связано с непрерывным ростом ассортимента противопаразитарных препаратов на современном рынке. В мировой практике насчитывается свыше 1500 антипаразитарных средств и их лекарственных форм, относящихся к наиболее распространенным классам химических соединений (салициланилиды, пробензимидазолы, бензимидазолы, производные карбаматбензимидазола, дифенилсульфиды, хлорированные углеводороды и др.) (Архипов И.А., 2009).

К сожалению, в последние 15 лет вопросами изучения микроморфологических механизмов взаимоотношений в системе «паразит-хозяин» до и после воздействия антигельминтиков занимаются фрагментарно, что ограничивает возможность поиска новых препаратов и актуальных способов борьбы с трематодозами. До сих пор не окончательно разработаны и 9 не внедрены патоморфологические, гистохимические и морфометрические критерии оценки эффективности воздействия антигельминтиков с позиций системогенеза, в то время, как каждый новый препарат требует широкого исследования и обязательного учёта этих контролей.

Диссертационная работа посвящена микроморфологическим, гистохимическим и патоморфологическим исследованиям органов и тканей трематод и взаимоотношениям в системе «паразит-хозяин» до и после воздействия антигельминтиков с позиций системогенеза, построенных на базе комплекса наук: паразитологии, ветеринарной медицины, патоморфологии, патофизиологии, гистологии, цитологии, гистохимии, экологии и биологии в целом.

Актуальность исследований настоящей работы подтверждается тем, что она была включена в Межведомственную координационную программу фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития АПК Российской Федерации на 2006-2010 гг.

Цель исследования - разработать и обосновать с позиций системогенеза патоморфологические, гистохимические и морфометрические критерии оценки эффективности воздействия антигельминтиков на органы и ткани трематод и хозяина.

Задачи исследования:

1. Изучить особенности патоморфологии органов и тканей ^шсю/а кераНса, К gigantica, ОкгосоеИит 1апсеаШт, РагатрМБ^тит сеггг после химиотерапии антигельминтиками (димезола, триклабендазола, тетраксихола, политрема, антитрема, тегалида, фаскоцида) и определить пути проникновения антигельминтиков в организм трематод.

2. Изучить гистохимическую реактивность тегумента, пищеварительной и половой систем трематод (дикроцелий, фасциол, парамфистом) после воздействия антигельминтиков для расшифровки морфофункциональных механизмов их воздействия.

3. Провести микроморфологические и гистохимические исследования тонкого отдела кишечника хозяина при парамфистомозе овец до и после воздействия антигельминтиков антитрема и тегалида.

10

4. Разработать и обосновать патоморфологические и гистохимические критерии оценки эффективного воздействия антигельминтиков на органы и ткани трематод.

5. Провести морфометрический анализ яиц трематод после воздействия разных антигельминтиков со статистической обработкой результатов и разработать морфометрические критерии оценки эффективности овоцидных свойств препаратов.

Научная новизна.

Выдвинута и экспериментально обоснована концепция патоморфологического и гистохимического контроля эффективности антигельминтиков. Впервые установлены морфофункциональные изменения в органах и тканях трематод после воздействия триклабендазола, тегалида, антитрема и фаскоцида. Установлено, что степень воздействия препарата на организм паразита на уровне его клеток, тканей или органов определяется химической структурой антигельминтика. Препараты, которые в своей структуре содержат меньшее число полярных групп (-ОН, -0=0, -№!-), и наибольшее число атомов галогена вызывают более глубокую патологию.

Впервые при патоморфологическом контроле показано, что триклабендазол, антитрем и тегалид - препараты из разных химических групп оказывают однотипное воздействие на внутреннюю часть тегумента и базальную часть кишечного эпителия, вызывая увеличение количества клеточных элементов - пролиферацию ядер, как усиление регенераторно-адаптивных реакций в условиях среды I порядка.

Впервые при гистохимическом анализе доказано, что политрем, димезол и триклабендазол при фасциолёзе, а также тетраксихол, антитрем и тегалид при парамфистомозе и фасциолёзе и фаскоцид при дикроцелиозе глубокие нарушения распределения углеводов и белков во всех органах и тканях трематод, подтверждающие их трематодоцидную эффективность. Установлены особенности абсорбционных механизмов антигельминтиков и пути их проникновения в организм трематод.

Впервые установлено, что антитрем и тегалид вызывают в органах и тканях Г. керайса и Р. сеп?1 однотипные изменения (деструкцию,

11 дезорганизацию, дистрофию и др.), но степень их проявлений выражается различно, что подтверждает свойство тканевой специфичности трематод, принадлежащих к разным видам. Определено, что наиболее сильный эффект воздействия антитрем и тегалид оказывают на ткани Р. кераИса.

Впервые определена последовательность воздействия антигельминтиков на органы и ткани трематод с позиций системогенеза: 1) Изначально -токсическое воздействие на тегумент и кишечник, вызывая уменьшение в них количества гексозаминогликанов, резко снижает защитные силы гельминта. Органы становятся неспособными создавать регулирующий барьер на границе раздела фаз системы «паразит-хозяин». 2) Проникновение токсинов в паренхиму приводит к нарушению осмотического и электролитного обмена трематод с развитием гидропической дистрофии, деструкцией белково-углеводных комплексов и тканевому некрозу. 3) Двойное воздействие, как антигельминтика, так и метаболитов лизиса ткани внутренней среды самого гельминта способствует усилению степени токсического давления на органы его половой системы. У трематод нарушается цитоархитектоника желточников, яичников, семенников; прекращаются процессы вителлогенеза, овогенеза и сперматогенеза, блокируется процесс формирования яиц.

Впервые показано, что морфофункциональные изменения эндостации паразита при парамфистомозе до лечения представлены дегенеративно-дистрофическими и пролиферативно-метапластическими процессами кишечника овец, выполняющего роль ксеногостального барьера. Гистохимически выявлены очаги мукоидного (после воздействия тегалида) и фибриноидного (после воздействия антитрема) набухания. Установлено, что изменения в тканях эндостации паразита являются обратимыми, но отмечено, что воздействие антитрема сильнее, чем тегалида.

Впервые установлен феномен деструкции эозинофилов и блокировки эозинофильной реакции при парамфистомозе после воздействия антитрема, что является основой для расширения области применения препарата.

Разработаны патоморфологические и гистохимические критерии оценки эффективного воздействия антигельминтиков на органы и ткани трематод.

Разработан метод морфометрического анализа яиц трематод до и после воздействия антигельминтиков со статистической обработкой результатов и внедрён как морфометрический критерий оценки эффективности овоцидных свойств препарата.

Практическая значимость.

Реализация полученных результатов позволяет повысить объективность и информативность оценки эффективности воздействия антигельминтиков на органы и ткани трематод.

Разработаны и внедрены объективные и достаточно информативные контроли и критерии оценки эффективности воздействия препаратов на трематод: патоморфологические; гистохимические; морфометрические.

Результаты изучения гистохимической реактивности тегумента, пищеварительной и половой систем трематод при воздействии антигельминтиков могут быть использованы для оценки трематодоцидных свойств препарата и при разработке новых схем и методов лечебной и профилактической дегельминтизации трематодозов животных и человека.

Данные о морфофункциональных изменениях яиц трематод после воздействия антигельминтиков позволили разработать и внедрить морфометрические критерии, позволяющие оценить овоцидное воздействие различных препаратов и влияние на яйцепродукцию гельминтов после химиотерапии хозяина.

Результаты исследования использованы при разработке: методических рекомендаций «Выявление трематодоцидной эффективности антигельминтных средств методом морфометрического анализа яиц трематод после воздействия препарата» одобренных секцией «Инвазионные болезни животных» РАСХН 29 мая 2008 г. (протокол №2 от 29.05.2008) и «Паразитарные болезни, распространенные на территории Кузбасса (меры борьбы и профилактики)» одобренных Ученым Советом ГБОУ ВПО «Кемеровской государственной медицинской академии» Минздравсоцразвития России 23 июня 2010 г. и секцией «Инвазионные болезни животных» РАСХН 23 сентября 2010г. (протокол №3 от 23.09. 2010).

Научные материалы диссертации внедрены в НИИ ВИГИС (г. Москва) и НИЛ «Микроморфология плоских червей» ГБОУ ВПО Кем ГМА (г. Кемерово), а также могут быть внедрены в другие учреждения соответствующего профиля для оценки эффективности антигельминтиков.

Результаты исследования внедрены в учебно-методическую литературу для ветеринарных специалистов, преподавателей и студентов факультетов ветеринарной медицины и используются в учебном процессе кафедр: общей патологии человека в разделе «Инфекционные и паразитарные болезни» ГБОУ ВПО «Бурятского ГУ»; общей биологии с основами генетики и паразитологии в разделе «Паразитология», инфекционных болезней в разделе «Паразитарные болезни» и фармакологии по теме «Противопаразитарные средства» ГБОУ ВПО «Кемеровской ГМА»; зоологии и экологии в разделах «Паразитология» и «Практическая зоология беспозвоночных и позвоночных животных» ГБОУ ВПО «Кемеровского ГУ».

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на Всероссийских конференциях общества гельминтологов РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 1997, 1999, 2004-2007, 2009-2011, Межрегиональной конференции «Проблемы медицины и биологии» (Кемерово, 1997, 2000, 2001, 2008, 2010, 2011), Всероссийской конференции-семинаре с международным участием «Проблемы медицины и биологии» (Кемерово, 1998, 1999), Конференции, посвящённой Всемирному дню охраны окружающей среды «Среда обитания и профилактика заболеваний в г. Кемерово» (Кемерово, 1999), Всероссийской конференции, посвященной 50-летию кафедры общей биологии и 80-летию со дня рождения первого заведующего кафедрой, д.б.н. Логачева Е.Д. (Кемерово, 2006), Межрегиональной конференции с международным участием, посвященной 55-летию Кем ГМА «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины, медицинской науки и образования» (Кемерово, 2010), Международной конференции «Экология России и сопредельных территорий» (Новосибирск, 2010), Конференции с международным участием, посвящённой 55-летию кафедры общей биологии с основами генетики и паразитологии КемГМА и 85-летию со дня рождения

14 д.б.н., проф. Е.Д. Логачёва «Теоретические и практические вопросы паразитологии» (Кемерово, 2011).

Положения, выносимые на защиту

1. Патоморфологические изменения органов и тканей трематод (фасциол, парамфистом, дикроцелий) после химиотерапии антигельминтиками (димезола, триклабендазола, тетраксихола, политрема, антитрема, тегалида, фаскоцида), как критерии степени эффективности воздействия препаратов.

2. Гистохимическая реактивность тканевых структур трематод (дикроцелий, фасциол, парамфистом) как критерии оценки воздействия антигельминтиков на функциональную морфологию органов и тканей трематод.

3. Морфометрический анализ яиц трематод до и после воздействия разных антигельминтиков со статистической обработкой результатов, как критерий оценки эффективности воздействия препаратов.

4. Микроморфофункциональные механизмы взаимоотношений в системе «паразит-хозяин» на примере паразитирования Р. сеп?г в тонком кишечнике овец до и после воздействия антитрема и тегалида.

Личный вклад соискателя.

Представленная диссертационная работа является результатом многолетнего (с 1998 по 2011 год) научного исследования автора. Анализ данных литературы по теме диссертации, гистологическая обработка материала, приготовление парафиновых срезов, окрашивание препаратов гистологическими и гистохимическими методами, описание, микрофотосъёмка препаратов, анализ и статистическая обработка полученных результатов и написание диссертации проведены лично автором.

Работа выполнялась при консультативном руководстве доктора биологических наук, профессора Л.В. Начевой, которому автор выражает искреннюю благодарность.

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Бибик, Оксана Ивановна

выводы

1. Морфофункциональные изменения органов и тканей трематод указывают на высокую эффективность антигельминтиков: антитрема (в дозе 200 мг/кг по ДВ) и тегалида (30 мг/кг) на ^жсю/а керайса, а также тетраксихола (200 мг/кг) на РагатрЫяЮтит сегуг и фаскоцида (10 мг/кг) на ИкюсоеИит 1апсеаШт при трематодозах крупного рогатого скота; политрема (в дозе 140 мг/кг по ДВ) и тетраксихола (200 мг/кг) на Р. gщапИса, а также триклабендазола (10 мг/кг) и димезола (200 мг/кг) на Р. керайса, антитрема (200 мг/кг) и тегалида (30 мг/кг) Р. сегуг при трематодозах овец. Степень воздействия препаратов на уровне клеток, тканей, органов и организма паразита и хозяина определяется химической структурой антигельминтика.

2. Установлено, что антигельминтики вызывают разный эффект развития некробиотических процессов в тканях пограничных органов трематод — тегументе и кишечнике: деструкцию и разрушение наружной части и вакуолизацию внутренней части с дезорганизацией цитонов тегумента; атрофию апикальной и базальной частей эпителия, пикноз и лизис ядер сохранившейся базальной части кишечника. Максимальную степень воздействия на тегумент трематод оказывают тетраксихол, политрем и антитрем, а на кишечник - тегалид и фаскоцид.

3. Все антигельминтики приводят к необратимым патологическим нарушениям ткани внутренней среды трематод с выраженным отёком, набуханием её клеточных и волокнистых структур. Наибольшие некротические явления в паренхиме выявляются вблизи тегумента и эпителия кишечника. Максимальная степень воздействия на ткань внутренней среды гельминтов обнаруживалась после тетраксихола, триклабендазола, тегалида и фаскоцида.

4. При патоморфологическом контроле органов и тканей трематод показано, что триклабендазол, антитрем и тегалид — препараты из разных химических групп оказывают однотипное воздействие на внутреннюю часть тегумента и базальную часть кишечного эпителия, вызывая увеличение количества клеточных элементов - пролиферацию ядер, как усиление регенераторно-адаптивных реакций в условиях среды I порядка.

5. При гистохимическом анализе органов и тканей трематод после воздействия антигельминтиков выявлено: усиление извращённого окрашивания БФС демонстрирующего нарушение реализации белков; снижение Шик-реакции, что свидетельствует о блокировке синтеза углеводных компонентов; повышение альцианофилии в тегументе и кишечнике указывающей на возрастание защитных свойств гельминта. Изменение тинкториальных свойств трематод с нарастающим диссонансом повышения и снижения бромфенолофилии, альцианофилии, толуидинофилии и Шик-реакции тканевых структур и глубокие нарушения распределения углеводов и белков во всех органах сосальщиков свидетельствует о выраженной токсичности антигельминтиков.

6. Установлено, что антитрем и тегалид вызывают в органах и тканях Г. кераНса и Р. сет1 однотипные изменения (деструкцию, дезорганизацию, дистрофию и др.), но их проявления выражаются различно, что подтверждает свойство тканевой специфичности трематод, принадлежащих к разным видам. Антитрем и тегалид оказывают более сильный эффект степени воздействия на ткани Р. кераНса.

7. При микроморфологическом анализе органов половой системы трематод показано, что антигельминтики вызывали патологию тканей и клеточных форм в репродуктивных органах К кераНса, К ^щапйса, Р. сеп>1 и £>. 1апсеаШт. Максимальный эффект степени воздействия на органы половой системы трематод оказали триклабендазол и димезол у Р. кераНса, тегалид и антитрем у Р. керайса и Р. сегуц а также тетраксихол у К gigantica и Р. сегУ1.

8. Определено, что воздействие антигельминтиков на органы и ткани трематод происходит последовательно в несколько стадий: 1) Изначально — токсическое воздействие на тегумент и кишечник, вызывая уменьшение в них количества гексозаминогликанов, резко снижает защитные силы гельминта и эти органы становятся неспособными создавать регулирующий барьер на

309 границе раздела фаз системы «паразит-хозяин». 2) Проникновение токсинов в паренхиму приводит к нарушению осмотического и электролитного обмена трематод с развитием гидропической дистрофии, деструкцией белково-углеводных комплексов и тканевому некрозу. 3) Двойное воздействие, как антигельминтика, так и метаболитов лизиса ткани внутренней среды самого гельминта способствует усилению степени токсического давления на органы его половой системы. У трематод нарушается цитоархитектоника желточников, яичников, семенников; прекращаются процессы вителлогенеза, овогенеза и сперматогенеза, блокируется процесс формирования яиц.

Антигельминтики, которые в своей структуре содержат меньшее число полярных групп (-ОН, -С=0, -ЫН-), и наибольшее число атомов галогена, оказывают более высокий эффект воздействия, вызывая глубокую патологию.

9. Выявленые патологические изменения общего объёма яиц трематод (Уя), находящихся в задних отделах матки, а также объёмов содержимого яиц, (Ус) при анализе их морфометрических параметров, статистически значимо показали: 1) увеличение общего объёма яиц Р. керайса после воздействия антитрема, димезола, триклабендазола и Р. сегуг при воздействия тегалида (р<0,05); 2) уменьшение общего объёма яиц К Ьерайса после воздействия тегалида, К gigantica после тетраксихола и политрема, О. 1апсеаШт при влиянии фаскоцида (р=0,0000); 3) увеличение объёмов содержимого яиц (Ус) Т7. кераНса после воздействия триклабендазола, Р. сеп?г после тегалида и антитрема (р=0,0000); 4) уменьшение объёмов содержимого яиц Г. керайса после воздействия димезола, тегалида, антитрема, Р. gigantica после политрема и £). 1апсеаШт после фаскоцида (р=0,0000); 5) правильно подобраную терапевтическую дозу антигельминтиков и их овоцидную эффективность.

10. Морфофункциональные изменения эндостации паразита при парамфистомозе до лечения представлены дегенеративно-дистрофическими и пролиферативно-метапластическими процессами эпителиального слоя ворсинок и крипт стенки кишечника овец, выполняющего роль ксеногостального барьера. В системе «паразит-хозяин» он обеспечивает иммобилизацию паразита и формирование адаптивной трофической зоны.

310

11. Воздействие аитигельминтиков на кишечник хозяина проявляется альтеративно-пролиферативными реакциями, десквамацией эпителия и некробиозом, но антитрем вызывает более сильную патологию, чем тегалид. Гистохимически выявлялись очаги мукоидного (после воздействия тегалида) и фибриноидного (после воздействия антитрема) набухания в тканях эндостации паразита являются обратимыми.

Установлен феномен деструкции эозинофилов и блокировки эозинофильной реакции при парамфистомозе после воздействия антитрема, что является основой для расширения области применения этого препарата.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Разработаны контроли и критерии оценки эффективности воздействия аитигельминтиков на трематод: 1) Патоморфологический контроль и патоморфологические критерии воздействия аитигельминтиков на органы и ткани трематод; 2) Гистохимические критерии на основе гистохимического анализа реактивности тканей трематод после воздействия аитигельминтиков. 3) Морфометрические критерии оценки овоцидного воздействия аитигельминтиков. Разработаные критерии следует использовать, как методологические подходы прогнозирования процессов патогенеза в органах и тканях трематод после химиотерапии.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Бибик, Оксана Ивановна, Москва

1. Абдуллаев, X. С. Качество мяса крупного рогатого скота при моно- и микстинвазии трематодами и нематодами / X. С. Абдуллаев, В. М. Кузнецов, К. М. Садов и др. // Труды ВИГИС. М., 2006. - т. 44. - С. 9-13.

2. Автандилов, Г. Г. Медицинская морфометрия. Руководство. / Г. Г. Автандилов. — М.: Медицина, 1990. 384 с.

3. Авцын, А. П. Принципы и методы гисто- и цитохимического анализа в патологии / А. П. Авцын, А. И. Струков, Б. Б. Фукс. М., 1971. - 368 с.

4. Арисов, М. В. Паразитозы крупного рогатого скота в Среднем и Нижнем Поволжье и новые химические средства в борьбе с ними / М. В. Арисов: Автореф. дис. докт. ветер, наук. — Нижний Новгород, 2009. — 40 с.

5. Арутюнова, А. Л. Изменение количества гликогена в организме дикроцелий под действием гетола и гексахлорпараксилола / А. Л. Арутюнова // Библ. журнал Армении: Труды АН Арм.ССР. — Ереван, 1970. — 2151. — 7 с.

6. Арутюнова, А. Л. Мукополисахариды в организме дикроцелиев под действием гексахлорпараксилола и гетола / А. Л. Арутюнова // Труды Арм. НИИ животноводства и ветеринарии. Ереван, 1974. - 12. - С. 765-767.

7. Архипов, И. А. О снижении шерстной продуктивности овец, поражённых фасциолёзом / И. А. Архипов // Бюл. Всес. ин-та гельминтологии. М., 1979. - вып. 24. - С. 8-9.

8. Архипов, И. А. Препараты для терапии смешанных паразитарных заболеваний жвачных животных / И. А. Архипов // Ассоциациативныепаразитарные болезни, пробл. экологии и терапии: Сборн. научн. работ. — М., 1995. С.12-13.

9. Архипов, И. А. Химиотерапия гельминтозов животных: успехи, проблемы, перспективы / И. А. Архипов // Основные достижения и перспективы развития паразитологии: Мат. Междунар. конф. М., 2004. — С. 30-31.

10. Архипов, И. А. Этапы создания антигельминтиков и перспективы развития экспериментальной терапии гельминтозов животных в России / И. А. Архипов // Российский паразитологический журнал М., 2007 - № 1 - С. 67-73.

11. Архипов, И. А. Антигельминтики: фармакология и применение / И. А. Архипов. М., 2009. - 405 с.

12. Архипов, И. А. Временное наставление по применению препарата антитрем при трематодозах животных / И. А. Архипов, Т. П. Веселова, М. Б. Мусаев // Труды Всероссийского института гельминтологии им. К.И. Скрябина. — М., 2002. Т. 38. - С. 303-305.

13. Ахмедрабаданов, X. А. Сезонная и возрастная динамики инвазированности крупного рогатого скота РагатрЫБШтит сет в условиях Дагестана / X. А. Ахмедрабаданов, А. М. Атаев // Труды ВИГИС. М., 2006. - Т. 44.-С. 14-17.

14. Аюпов, X. В. Дикроцелиозное действие гексахлорпараксилола, гетола и морфологическая характреистика дикроцелиев, выделившихся у овец / X. В.

15. Аюпов, Г. К. Резник // Труды Башкирского сельскогохозяйственного института. -Уфа, 1966.-Т.12.-Ч. 3-С. 3-12.

16. Аюпов, X. В. Испытание антигельминтной эффективности битинола, сульфена, хлорфензидола при дикроцелиозе / X. В. Аюпов, Г. 3. Хазаев, X. Я. Юсупов и др. // Труды Башкирского сельскохозяйственного института. 1972. -17.-С. 18-22.

17. Бенедиктов, И. И. Пути биологического окисления и энергетический обмен у гельминтов и биохимический механизм действия аитигельминтиков / И. И. Бенедиктов: Автореф. дис. докт. биол. наук. -М., 1982. -47 с.

18. Бенедиктов, И. И. Действие битионола, оксинида, гексида и их сульфоксидов на холинэстеразу и аденозинтрифосфатазу фасциолы / И. И. Бенедиктов, Г. К. Резник // Ветеринария. 1989. - № 11. - С. 48-51.

19. Березанцев, Ю. А. Инкапсуляция личинок паразитических нематод и цестод в тканях позвоночных как форма взаимоотношения паразита и хозяина / Ю. А. Березанцев: Автореф. дис. докт. биол. наук. Л., 1964. - 33 с.

20. Бибик, О. И. Патоморфология и гистохимическая реактивность органов и тканей трематод после действия аитигельминтиков / О. И. Бибик: Автореф. дис. канд. биол. наук. -М., 1997. 13 с.

21. Богданова, О. Ю. Паразитозы крупного рогатого скота и меры борьбы с ними / О. Ю. Богданова: Автореф. дис. канд. ветер, наук. — Нижний Новгород, 2006. 20 с.

22. Богоявленский, Ю. К. Микроморфологические и гистохимические исследования тканей Opisthorchis felineus после применения антигельминтиков / Ю. К. Богоявленский // Актуальные проблемы описторхоза: Тез. докл. — Томск, 1986.-С.8-10.

23. Богоявленский, Ю. К. Использование микроморфологических и гистохимических исследований при подборе и оценке антигельминтиков / Ю. К. Богоявленский // Гельминтология сегодня: проблемы и перспективы: Тез. докл. М., 1989. - С. 54-55.

24. Богоявленский, Ю. К. Новые данные о деструктивных изменениях генитальных органов марит Opistorchis felineus при воздействии празиквантеля /Ю. К. Богоявленский, Г. В. Гончарова, JI. В. Начева // IV съезд ВОГ в Тбилиси: Тез. докл. -М., 1986. С. 16.

25. Богоявленский, Ю. К. Патоморфологические и гистохимические исследования тканей трематоды С^бШогсЫз ГеНтш после воздействия флюбендазола / Ю. К. Богоявленский, Л. В. Начева // Бюллютень ВИГИС. — М., 1986.-Т. 44.-С. 9-11.

26. Богоявленский, Ю. К. Структурные и функциональные изменения тканей и органов С^бЛогсЫб ГеНшш при действии антигельминтика мебендазола / Ю. К. Богоявленский, Л. В. Начева // Сборн. научн. трудов НИИ паразитологии. Баку, 1986. - № 6. — С. 76-77.

27. Богоявленский, Ю. К. Нематоды и антигельминтные средства / Ю. К. Богоявленский, И. В. Рачковская, Н. В. Чебышев. М., 1994. - 256 с.

28. Богоявленский, Ю. К. Гистохимические исследования содержимого и распределения углеводов в органах и тканях описторхисов (С^бАюгсЫз ГеИшш) после воздействия празиквантеля отечественного производства / Ю. К.3161.j

29. Богоявленский, JI. В. Начева, Г. Н. Казанцева, Л. Г. Баяндина // Проблемы морфологии и паразитологии: Сборн. науч. трудов. -М., 1988. С. 72-74.

30. Брускин, Б. Р. К вопросу об обмене веществ у Opisthorchis felineus / Б. Р. Брускин // Тез. докл. науч. конф. ВОГ. М., 1960. - С. 79-81.

31. Брускин, Б. Р. Некоторые данные о химическом составе сибирской двуустки (Opisthorchis felinius Revolita, 1984) / Б. Р. Брускин, Е. П. Ефимцева // Мединская паразитология и паразитарные болезни. 1964. - № 6. - С. 701-704.

32. Брылёва, А. В. Морфофункциональные механизмы эозинофилии при тремато дозах / А. В. Брылёва, А. В. Фролов, М. В. До донов // Проблемы медицины и биологии: Мат. межрегиональной науч-практич. конф. — Кемерово, 2008. спецвып. № 2. - С. 28-29.

33. Бычков, С. М. Новые данные о гликозаминогликанах и протеогликанах / С. М. Бычков, М. М. Захаров // Вопросы медицинской химии. М.: Медицина, 1979. - № 3. - Т . XXV. - С. 227-237.

34. Вертинская, М. В., Новик Т. С., Вайткявичене 3. А. // Труды ВИГИС. -1988.-Т. 29.-С. 32-40.

35. Веселова, Т. П. Гексихол С при фасциолезе крупного рогатого скота / Т. П. Веселова, М. В. Дорошина, И. А. Архипов // Ветеринария. 1987. - № 3. -С. 57-58.

36. Володин, А. В. Действие фенасала на ультраструктуру тегумента некоторых низших цестод / А. В. Володин, Б. И. Куперман // Гельминтология сегодня: проблемы и перспективы: Тез. докл. — М., 1989 С. 74-75.

37. Воробьёва, Е. И. Эколого-морфологические исследования систем «паразит-хозяин» при паразитировании трематод в разных эндостациях у млекопитающих / Е. И. Воробьёва: Автореф. дис. канд. биол. наук. — Алма-Ата, 1992.-19 с.

38. Воробьёва, Е. И. Морфо-функциональные особенности сохраняющих реакций хозяина при хронических трематодозах / Е. И. Воробьёва // Теоретические и практические вопросы паразитологии: Сборн. докл. Всеросс. науч. конф. Кемерово, 2006. - С. 53-58.

39. Воробьёва, Е. И. Пролиферативно-диспластические процессы в эндостациях хозяина при хроническом спонтанном эуритрематозе / Е. И. Воробьёва, JI. В. Начева // Гельминтозоонозы меры борьбы и профилактика: Мат. докл. науч. конф. - М., 1994. - С. 46-47.

40. Воробьёва, Е. И. Эозинофильная реакция при трематодозах / Е. И. Воробьёва, JI. В. Начева, Т. А. Штейнпрейс и др. // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Мат. докл. науч. конф. — М., 2008 — вып. 9 — С. 115117.

41. Всеволодов, Б. П. Общая патоморфология при гельминтозах / Р. С. Шульц, Е.В. Гвоздев // Основы общей гельминтологии — М., 1976 Т. 3 - 345 с.

42. Гинецинская, Т. А. Трематоды, их жизненные циклы, биология и эволюция / Т. А. Гинецинская. — JL: Наука, 1968. — 410 с.

43. Годердзишвили, Г. И. Основные трематоды и трематодозы, распространённые в Грузии / Г. И. Годердзишвили, Ш. О. Поцхверия // Известия аграрной науки. 2007. - 5(3). - С. 85-86.

44. Горохов, В. В. Фасциолёз у человека в Южной Америке / В. В. Горохов, В. П. Сергиев, А. В. Успенский и др. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. — 2005. — № 3. — С. 55-58.

45. Горохов, В. В. Заболеваемость фасциолёзом человека / В. В. Горохов, В. П. Сергиев, А. В. Успенский и др. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2008. - № 2. - С. 57-59.

46. Горохов, В. В. Эпизоотическая ситуация по основным гельминтозам в Российской Федерации / В. В. Горохов, В. Н. Скира, И. Ф. Клёнова и др.// Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Мат. докл. науч. конф. -М., 2010.-вып. 11.-С. 124-131.

47. Гребенщиков, В. М. Микроморфологические и гистохимические исследования половой системы и гаметогенеза некоторых трематод в норме и при действии антигельминтиков / В. М. Гребенщиков: Автореф. дис. канд. биол. наук. Алма-Ата, 1984. - 20 с.

48. Гребенщиков, В. М. Влияние димецина на сперматогенез ланцетовидной двуустки / В. М. Гребенщиков, Б. Б. Балабасов // X науч. конф., посвященной теорит. и практ. вопросам общей и экологической паразитологии: Тез. докл. Кемерово, 1992. - С. 31-32.

49. Гребенщиков, В. М. Гистохимический анализ углеводосодержащих соединений в репродуктивных органах некоторых трематод / В. М.

50. Гребенщиков, Л. В. Начева // Профилактика, диагностика и лечение заболеваний человека: Сборн. научн. работ. Кемерово, 1981. - С. 113-116.

51. Гребенщиков, В. М. Патоморфология половой системы Еигу1хета рапсгеайсит после действия оксинида / В. М. Гребенщиков, Л. В. Начева // I Межвузовской конф. молодых ученых Ленинского района г. Кемерово: Тез. докл. Кемерово, 1982. - С. 109-110.

52. Гребенщиков, В. М. Микроморфология и гистохимия половой системы и гаметогенеза трематод в норме и при действии антигельминтиков / В. М. Гребенщиков, Л. В. Начева — Кемерово, 2008. 118 с.

53. Гузоев, А. X. Эффективность новых лекарственных форм авертекса, ивермакса и аверсекта при нематодозах овец / А. X. Гузоев, С. А. Беккиев // Труды Всероссийского института гельминтологии имени К.И. Скрябина. — М., 2007.-Т. 45.-С. 83-85.

54. Гусельникова, Л. М. Влияние некоторых фасциолоцидных препаратов на тегумент БазсЫа Иерайса, имплантированных под кожу спины белых крыс / Л. М. Гусельникова // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. -1974.-№2.-С. 214-217.

55. Давыдова, В. Г. Ультраструктурные исследования цестод в аспекте взаимоотношений в системе «паразит-хозяин» / В. Г. Давыдов // Гельминтология сегодня: проблемы и перспективы: Тез. докл. — М., 1989 — С. 104.

56. Давыдовский, И. В. Проблемы причинности в современной биологии / И. В. Давыдовский М.: Изд-во АН СССР, 1961. - 63 с.

57. Демидов, Н. В. Химиотерапия гельминтозов животных в СССР и её перспективы / Н. В. Демидов // Работы по гельминтологии: Мат. заседания, посвящённого 100-летию со дня рождения академика К.И. Скрябина. — М.: «Наука», 1981.-С. 87-99.

58. Догель, В. А. Курс общей паразитологии / В. А. Догель — Л.: Учпедгиз, 1947.-363 с.

59. Додонов, М. В. Ксенопаразитарный барьер / М. В. Додонов // Актуальные вопросы современной медицины: Мат. науч. конф. — Хабаровск, 2002. С. 44-46.

60. Додонов, М. В. Микроморфологические особенности триады — печень, поджелудочная железа, двенадцатиперстная кишка как ксенопаразитарный барьер в системе «паразит-хозяин» при описторхозе / М. В. Додонов: Автореф. дис. канд. биол. наук. -М., 2007.-23 с.

61. Додонов, М. В. Микроморфологические особенности развития защитных барьеров при описторхозе / М. В. Додонов, Л. В. Начева // Вестник Кузбасского научного центра. Кемерово, 2007. - вып. 5. — С. 74-76.

62. Додонов, М. В. Эозинофилия при описторхозе / М. В. Додонов, А. В. Брылёва, Г. X. Додонова // Проблемы медицины и биологии: Мат. межрегиональной науч-практ. конф. — Кемерово, 2009 — спецвып. № 3 — С. 53.

63. Дорошина, М. В. Изучение острой токсичности, эмбриотоксического и тератогенного действия димезола и беномила / М. В. Дорошина // Труды ВИГИС. М., 1983. - Т. 26 - С. 41-46.

64. Елисеев, В. Г. Основы гистологии и гистохимической техники / В. Г. Елисеев. М.: Медицина, 1967. - 268 с.

65. Жариков, И. С. Некоторые вопросы патогенеза экспериментального лиорхоза телят / И. С. Жариков, А. Ф. Бобкова, В. И. Орловский // Тез. докл. конф., посвящённой 100-летию со дня рождения академика К.И. Скрябина. — Ташкент, 1978. С.52-54.

66. Жукова, С. В. Структурные изменения тканей нематоды БурИааа оЬуеЫа (ШЮОЬРШ, 1802) и органов хозяина после воздействия различных антигельминтиков / С. В. Жукова: Автореф. дис. . канд. мед. наук. — М., 1991. -23 с.

67. Заяц, Р. Г Основы общей и медицинской паразитологии: Учеб-метод, пособие / Р. Г. Заяц, И. В. Рачковская, И. А. Карпов. М.: БГМУ, 2002. - 184 с.

68. Збарский, Б. И. Биологическая химия / Б. И. Збарский, И. И. Иванов, С. Р. Мардашев. Ленинград, 1972. - 582 с.

69. Кадыжев, Ш. М. Эколого-эпизоотологические особенности фасциолёзно-дикроцелиозной инвазии жвачных животных в Карачаево-Черкесской республике и усовершенствование мер борьбы с ними / Ш. М. Кадыжев: Автореф. дис. канд. вет. наук. Ставрополь, 2003. — 25 с.

70. Казанин, В. И. Систематика клеточных реакций в патологии / В. И. Казанин. М.: Медицина, 1983. - 69 с.

71. Кармалиев, Р. С. Изменения в структуре популяции дикроцелийв организме крупного рогатого скота в разное время года / Р. С. Кармалиев // Российский паразитологический журнал. М., 2011. - № 1. - С. 47-49.

72. Кармалиев, Р. С. Гельминтозы крупного рогатого скота Западного Казахстана и меры борьбы с ними (эпизоотология, терапия, резистентность к антигельминтикам) / Р. С. Кармалиев: Автореф. дис. докт. вет. наук. — М., 2011.-51 с.

73. Кипайкин, В. А. Эпидемиология / В. А. Кипайкин, Л. А. Рубашкина. — Ростов н/Д, 2002. 480 с.

74. Ковалев, И. П. Тегалид при фасциолёзе жвачных / И. П. Ковалёв: Автореф. дис. канд. вет. наук. М., 1988. - 25 с.

75. Коляда, Е. Е. Эпизоотология и терапия фасциолёза и дикроцелиоза в Среднем Поволжье / Е. Е. Коляда: Автор, дис. канд. вет. наук М., 2004 - 25 с.

76. Комиссарчик, Я. Ю. Ультраструктура и возможное функциональное значение гликокаликса микроворсинок кишечных стенок / Я. Ю. Комиссарчик, А. М. Уголев // Докл. АН СССР. 1970. -Т. 94. -С. 731-733.

77. Кошеваров, Н. И. Циркуляция фасциолёзной инвазии животных в условиях Нечерноземья РФ / Н. И. Кошеваров // Российский паразитологический журнал. М., 2011. — № 1. — С. 62-65.

78. Кошкина, Н. Г. Микроморфологические исследования изменений тканей трематод и цестод при действии некоторых антигельминтиков / Н. Г. Кошкина: Автореф. дис. канд. биол. наук. — Кемерово, 1970. 18 с.

79. Кошкина, Н. Г. Гельминтоцидная активность групп антигельминтиков при описторхозе / Н. Г. Кошкина // Профилактика, диагностика и лечение заболеваний человека: Тез. докл. Кемерово, 1981. — С.116-119.

80. Кошкина, Н. Г. Структурные и гистохимические изменения в тканях описторха под влиянием некоторых антигельминтиков / Н. Г. Кошкина // Современное состояние проблемы описторхоза: Тез. докл. — Л., 1981. — С. 99103.

81. Кошкина, Н. Г. Празиквантель при экспериментальном фасциолезе крыс / Н. Г. Кошкина // VII научн. конф., посвящённая теоретическим и практическим вопросам общей и экологической паразитологии: Сборн. науч. работ. Кемерово, 1984. - С. 31-33.

82. Кошкина, Н. Г. Патоморфологическое действие битионола на ткани трематод и цестод / Н. Г. Кошкина // VIII научн. конф., посвященной323теоретическим и практическим вопросам общей биологии и паразитологии: Сборн. науч. работ. Кемерово, 1985. — С. 68-70.

83. Кошкина, Н. Г. Гистохимические исследования белка в тканях сибирской двуустки при действии хлоксила / Н. Г. Кошкина, JI. В. Начева // V науч. конф., посвящённой вопросам паразитологии: Тез. докл. — Кемерово, 1974.-С. 22-23.

84. Кротов, А. И. Основы экспериментальной терапии гельминтозов / А. И. Кротов. М.: Медицина, 1973. - 272 с.

85. Кублицкене, О. А. К изучению влияния четырёххлористого углерода на Fasciola hepatica / О. А. Кублицкене // Труды ВОГ. М., 1963. - ч. 1. - С. 164-165.

86. Кублицкене, О. А. Гистохимическое изучение трематоды Fasciola hepatica (2. Влияние четыреххлористого углерода на распределение жира игликогена) / О. А. Кублицкене // Труды Академии наук Литовской ССР. -Вильнюс, 1964.-Т. 1.-С. 117-125.

87. Кублицкене, О. А. Экспериментальный фасциолез: влияние паразита на организм хозяина и стимуляция восстановительных процессов в пораженной печени животных / О. А. Кублицкене: Автореф. дис. докт. биол. наук. -Вильнюс, 1970. -23 с.

88. Лаптева, Л. А. Фармакокинетика тетраксихола в организме крупного рогатого скота / Л. А. Лаптева, И. А. Архипов // Актуальные вопросы теоретической и прикладной трематодологии и цестодологии: Мат. докл. науч. конф.-М, 1997.-С. 87-88.

89. Лебедева, М. Н. Успехи в поиске и создании отечественных противогельминтных средств / М. Н. Лебедева, Ф. С. Михайлицын, Ю. С. Цизин, Б. А. Астафьев // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. — 1990.-№ 1.-С. 30-33.

90. Логачев, Е. Д. Эволюционная гельминтология и паразитоценология / Е. Д. Логачев // VI научн. конф., посвященная теоретическим и практическим вопросам экологической паразитологии: Тез. докл. Кемерово, 1981. — С. 8-9.

91. Лойда, 3. Гистохимия ферментов, лабораторные методы / 3. Лойда, Р. Госсрау, Т. Шиблер. М., 1982. - 272 с.

92. Лошкарёва, В. В. Маритогония трематод у крупного рогатого скота и оптимизация сроков применения антигельминтиков в условиях Среднего Преуралья /В. В. Лошкарёва: Автореф. дис. канд. вет. наук. -М., 2005. -25 с.

93. Маниковская, Н. С. Морфофункциональные особенности пищеварительной системы трематод при формировании системы «паразит-хозяин» / Н. С. Маниковская: Автореф. дис.канд. биол. наук. — М., 2005 -23 с.

94. Марков, Г. С. Гликоген и жир у некоторых гельминтов в зависимости от условий их существования / Г. С. Марков // Доклады Академии наук СССР. — М., 1950.-№74(1).-С. 165-167.

95. Меланич, Н. М. Комплексная оценка антитрема при трематодозах жвачных животных / Н. М. Меланич: Автореф. дис. канд. вет. наук. — М., 2003.-20 с.

96. Мелихова, А. Г. Холинэстеразная система у Ascaris suum и Fasciola hepatica и специфическое действие на нее четвертичных солей (3-арилоксиэтилбензиламмония (нафтамона и его аналогов) / А. Г. Мелихова: Автореф. дис. канд. наук. М., 1968. - 19 с.

97. Меркулов, Г. А. Курс патологогистологической техники / Г. А. Меркулов. Л.: Медицина, 1969. — 423 с.

98. Михеев, А. Г. Способ подготовки парафиновых срезов для гистологического выявления клеток крови и соединительной ткани / А. Г. Михеев // А.с. №1807400, МКИ G 01 №01 33/48. 1990.

99. Молчанов, И. А. Фасциолёз как серьёзный зооантропоноз / И. А. Молчанов, Н. П. Сорокина, А. Фабиан, В. В. Горохов // Ветеринарная патология. 2004. - № 4 (11). - С. 97-102.

100. Муромцев, А. Б. Основные гельминтозы жвачных животных в Калининградской области (эпизоотология, патогенез, лечебно-профилактические мероприятия) / А. Б. Муромцев: Автореф. дис. докт. вет. наук. Санкт-Петербург, 2008. - 47 с.

101. Мусаев, М. Б. Испытание политрема при дикроцелиозе овец / М. Б. Мусаев, И. А. Архипов // Бюллютень ВИГИС. 1991. - вып. 53. - С. 48-50.

102. Мустафин, А. О. Испытание антигельминтиков при моениозе овец /А. О. Мустафин, Н. В. Демидов // Бюллетень ВИГИС М., 1981. - вып. 28. - С. 92-95.

103. Надыкто, М. В. Антигельминтики при дикроцелиозе овец / М. В. Надыкто, JL Р. Шаповалова // Ветеринария. 1997. - № 8. - С.27-28.

104. Найт, Р. Паразитарные болезни / Р. Найт М: Медицина, 1985 — 416с

105. Напалкова, В. В. Терапевтическая эффективность суспензии триклабендазола при фасциолёзе крупного рогатого скота / В. В. Напалкова // Сборник научных трудов ФГУ «ВГНКИ». М., 2006. - вып. 67. - С. 205-211.

106. Начева, JI. В. Некоторые результаты гистохимического исследования мукополисахаридов у трематод / JI. В. Начева // Вопросы инфекционной патологии у детей: Сборн. науч. работ. Томск, 1974. - С.189-192.

107. Начева, JI. В. Распределение гликогена у некоторых трематод / JI. В. Начева // Гельминтозы домашних животных Западной Сибири и меры борьбы с ними: Сборн. науч. трудов. Омск, 1975. - Т. 31. - вып. 3 - С. 58-60.

108. Начева, JI. В. Гистологические и гистохимические исследования тегумента некоторых трематод / JT. В. Начева // Гельминтозы домашних животных Западной Сибири и меры борьбы с ними: Сборн. науч. трудов. — Омск, 1975. Т. 31. - вып. 3 - С. 61-65.

109. Начева, JI. В. Микроморфологические и гистохимические исследования покровных тканей и кишечника некоторых дигенетических трематод в норме и при действии антигельминтиков / JI. В. Начева: Автореф. дис. канд. биол. наук. Алма-Ата, 1977. - 20 с.

110. Начева, Л. В. Патоморфологические исследования тканей эуритермы поджелудочной при действии разных лекарственных препаратов / JI. В. Начева // Молодые ученые Кузбасса в Х-й пятилетке: Сборн. науч. работ. — Кемерово, 1981.-ч. II-С. 145-147.

111. Начева, JI. В. Тегумент трематод как функциональная система / JI. В. Начева // VTII научн. конф., посвящённой теоретическим и практическим вопросам общей биологии и паразитологии: Тез. докл. Кемерово, 1985. — С. 38-43.

112. Начева, JI. В. Сравнительная морфофункциональная организация кишечника трематод / Л. В. Начева // VIII научн. конф., посвященная теоретическим и практическим вопросам общей биологии и паразитологии: Тез. докл. Кемерово, 1985. - С. 43-48.327

113. Начева, JI. В. Патоморфологический контроль к эффективности использования празиквантеля при описторхозе / Л. В. Начева // Острые инфекции у детей: Тез. докл. — Кемерово, 1986. — С. 120-122.

114. Начева, Л. В. Патоморфологические изменения органов и тканей хасстилезий после действия антигельминтиков / Л. В. Начева // Острые инфекции и инвазии человека: Тез. докл. — Кемерово, 1990. — С. 94-96.

115. Начева, Л. В. Патоморфологические и гистохимические исследования органов и тканей фасциол после действия ацемидофена / Л. В. Начева // Методы профилактики и борьбы с трематодозами человека и животных: Тез. докл. -М., 1991. С. 84-86.

116. Начева, Л.В. Микроморфологические особенности мезосоматической системы трематод / Л.В. Начева // IX научн. конф., посвященной теоретическим и практическим вопросам общей и экологической паразитологии: Тез. докл. — Кемерово, 1991. С. 26-29.

117. Начева, Л.В. Морфоэкологический анализ и эволюционная динамика тканевых систем трематод, реактивность их органов и тканей при действии антигельминтиков / Л. В. Начева: Автореф. дис. докт. биол. наук. — М., 1993. -57 с.

118. Начева, Л. В. Патоморфология тегумента и пищеварительной системы дикроцелий после действия димецина / Л. В. Начева, Б. Б. Балабасов // VII Арсеньевские чтения: Сборн. научн. работ Уссурийск, 1992 - С. 54-56.

119. Начева, Л. В. Гистохимическая реактивность тканевых систем трематод при действии антигельминтиков / Л. В. Начева, О. И. Бибик //

120. Медико-биологические проблемы: Сборн. науч. трудов. Кемерово, 2004. -вып. 13. - С. 31-36.

121. Начева, JI. В. Патоморфологические исследования органов и тканей трематод разных видов до и после действия антигельминтиков / JI. В. Начева, О. И. Бибик НИ Теоретические и практические вопросы паразитологии: Сборн. докл. — Кемерово, 2006. С. 35-41.

122. Начева, JI. В. Гистохимические исследования системы «паразит-хозяин» при паразитировании эуритремы поджелудочной / JI. В. Начева, Е. И. Воробьёва // Острые инфекции и инвазии человека: Тез. докл. — Кемерово., 1990.-С. 97-99.

123. Начева, JL В. Морфофункциональные особенности взаимоотношений паразита и хозяина при парагонимозе / JI. В. Начева, Е. И. Воробьёва // Сборн. науч. трудов. Кемерово: Изд-во КМБСА, 1996. - С. 126.

124. Начева, JL В. Функциональная морфология взаимоотношений в системе «паразит-хозяин» при эуритрематозе (гистологические и гистохимические исследования) / Л. В. Начева, Е. И. Воробьёва. — Кемерово, 2007. 92 с.

125. Начева, Л. В. Некоторые результаты гистохимического исследования мукополисахаридов у трематод / Л. В. Начева, О. А. Головина // Вопросы инфекционной патологии у детей: Сборн. науч. работ Томск, 1974 - С. 189192.

126. Начева, Л. В. Цитологические исследования желточников эуритремы поджелудочной в норме и после действия антигельминтиков / Л. В. Начева, В. М. Гребенщиков // Молодые учёные Кузбасса в 10-й пятилетке: Тез. докл. -Кемерово, 1981.-ч. П.-С. 147-148.

127. Начева, Л. В. Патоморфологические изменения половой системы эуритремы поджелудочной после действия локсурана / Л. В. Начева, В. М.

128. Гребенщиков // Вопросы теоретической и практической медицины. — Кемерово,1982.-С. 47-49.

129. Начева, JI. В. Влияние фенасала на половую систему эуритремы поджелудочной / JI. В. Начева, В. М. Гребенщиков // Инвазионные и незаразные болезни животных и птицы: Сборн. науч. трудов. Новосибирск,1983.-С. 38-41.

130. Начева, JI. В. Гистологический эффект действия антигельминтиков на половую систему эуритрем / JI. В. Начева, В. М. Гребенщиков // III науч. конф. Молодых учёных Ленинского района г. Кемерово: Тез. докл. Кемерово,1984.-С. 69-71.

131. Начева, Л. В. Эмбриогенез печени, поджелудочной железы, двенадцатиперстной кишки и формирование ксенопаразитарного барьера при описторхозе/ Л. В. Начева, М. В. Додонов // Российский паразитологический журнал. 2009. - № 1 - С. 14-17.

132. Начева, Л. В. Сравнительная характеристика действия битионола и битина на половую систему трематод / Л. В. Начева, Н. Г. Кошкина // Профилактика, диагностика и лечение заболеваний' человека: Сборн. науч. работ. Кемерово, 1982. - С. 111-113.

133. Начева, JI. В. Ксенопаразитарный барьер в разных биологических системах / Л. В. Начева, Т. А. Штейнпрейс // Актуальные вопросы медицинской паразитологии: Мат. Всеросс. науч. конф. — Санкт-Петербург, 1998. — С.136.

134. Начева, Л. В. Антигельминтики, эффективность их действия на органы и ткани Opisthorchis felineus (гистологические и гистохимические исследования) / Л. В. Начева, О. И. Бибик, В. М. Гребенщиков. Кемерово, 2000. - 93 с.

135. Начева, Л. В. Патоморфология органов и тканей парамфистом после действия хлоксила / Л. В. Начева, В. М. Гребенщиков, О. И. Бибик // Медико-биологические проблемы: Сборн. науч. трудов. — Кемерово, 1995. — С. 21-23.

136. Начева, Л. В. Патоморфологические исследования лиорхисов после действия гексахлорпараксилола / Л. В. Начева, В. М. Гребенщиков, Н. Д. Жалцанова // Вопросы теоретической и клинической медицины: Тез. докл. -Кемерово, 1981.-С. 11-13.

137. Начева, Л. В. Ксенопаразитарный барьер при описторхозе (гистологические и гистохимические исследования триады органов печень, поджелудочная железа и двенадцатиперстная кишка) / Л. В. Начева, М. В. Додонов, Е. И. Воробьева. Кемерово, 2009. — 137 с.

138. Начева, Л. В. Динамика тинкториальных свойств адгезивных процессов при эуритрематозе / Л. В. Начева, А. А. Перминов, Е. И. Воробьева // Медико-биологические проблемы: Сборн. науч. трудов. — Кемерово, 1998. — вып. 4.-С. 34-35.

139. Начева, Л. В. Роль ксенопаразитарного барьера в формировании системы «паразит-хозяин» / Л. В. Начева, Г. Н. Чернобай, Т. А. Штейнпрейс // Медико-биологические проблемы: Сборн. науч. трудов. — Кемерово, 1999. — вып. 5. — С. 66-71.

140. Начева, Л. В. Морфофункциональные исследования паразитарных кист, содержащих трематод Paragonimus westermani / Л. В. Начева, Е. И. Воробьева, Т. А. Штейнпрейс, М.В. Додонов // Российский паразитологический журнал. -2008. -№ 1 С. 41-46.

141. Начева, Л. В. Функциональная морфология формирования кист разного генеза / Л. В. Начева, Е. И. Воробьева, Т. А. Штейнпрейс, Т. С.331

142. Ткаченко // Медико-биологические проблемы: Сборы, науч. трудов. -Кемерово, 2008. С. 66-73.

143. Огородник, С. Г. Парамфистоматоз крупного рогатого скота в хозяйствах Новгородской области (эпизоотология, меры борьбы) / С. Г. Огородник: Автореф. дис. канд. ветер, наук. Санкт-Петербург, 2007. - 19 с.

144. Онищенко, Г. Г. О мерах по усилению профилактики паразитарных болезней в России / Г. Г. Онищенко // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2003. — № 3. — С. 3-7.

145. Ошмарин, П. Г. К изучению специфической экологии гельминтов / П. Г. Ошмарин. Владивосток, 1959. - 111 с.

146. Павловский, Е. Н. Класс сосальщиков (Trematoda) / Е. Н. Павловский // Руководство по зоологии. 1. Биомедгиз. M.-JL, 1937 - С. 461-501.

147. Переверзева, Е. И. Модификация свойств карбоксилсодержащих полимеров органическими аминами / Е. И. Переверзева: Автореф. дис. канд. хим. наук. Ташкент, 1994. - 19 с.

148. Перминов, А. А. Микроморфологические особенности адгезивных процессов при адаптогенезе в паразитарной системе на уровне «марита трематод-хозяин» / А. А. Перминов: Автореф. дис. канд. биол. наук. — М., 2000. 26 с.

149. Перминов, А. А. Морфоэкологические особенности адгезии между гельминтом и хозяином в зависимости от эндостации паразитирования / А. А. Перминов, Е. И. Воробьёва // Медико-биологические проблемы: Сорн. науч. работ. — Кемерово, 1995. — С. 26-27.

150. Пирс, Э. Гистохимия / Э. Пирс. М., 1962. - 962 с.

151. Португалов, В. В. Гистохимические методы в нормальной и патологической морфологии / В. В. Португалов, А. И. Струков. М.: Медицинская литература, 1958. — 246 с.

152. Пронина, С. В. Взаимоотношения в системах «гельминты-рыбы» (на тканевом, органном и организационном уровнях). / С. В. Пронина, H. М. Пронин. -М.: Наука, 1988. — 176 с.

153. Рачковская, И. В. Тонкая структура нематод и тканей хозяина при воздействии антигельминтиков / И. В. Рачковская: Автореф. дис. докт. биол. наук. М., 1985.-38 с.

154. Резник, Г. К. Влияние четыреххлористого углерода на кутикулу Fasciola hepatica L., 1758 / Г. К. Резник // Бюлл. науч.-техн. информ. ВИГИС. — М., 1959.-Т. 5.-С. 84-86.

155. Резник, Г. К. Сравнительное изучение влияния четыреххлористого углерода на фасциол и дикроцелий методами гистохимии / Г. К. Резник // Тезисы докладов ВОГ. М., 1960. - С. 117-118.

156. Резник, Г. К. Влияние черыреххлористого углерода на кишечник Fasciola hepatica L., 1758 / Г. К. Резник // Бюлл. ВИГИС. 1961 - 7, № 8. - С. 51.

157. Резник, Г. К. Топография кислых мукополисахаридов в кутикуле и кишечнике половозрелых Dicrocoelium lanceatum по гистохимическому анализу / Г. К. Резник // Тез. докл. научн. конф. ВОГ. М., 1962. - вып. 9. - С. 323-324.

158. Резник, Г. К. К вопросу о влиянии хлорофоса на кутикулу и кишечный эпителий Dicrocoelium lanctanum Stiles et Hassall, 1896 / Г. К. Резник // Бюллетень ВИГИС. 1962. - Т. 9. - С. 319-322.

159. Резник, Г. К. К вопросу о гистологических и гистохимических изменениях, вызываемых четыреххлористым углеродом в кутикуле и кишечнике половозрелых фасциол / Г. К. Резник // Helmintologia. 1962. - 4, № 1-С. 397-403.

160. Резник, Г. К. Сравнительное гистологическое изучение действия хлорофоса и бабулина на половозрелых Dicrocotlium lanceatum Stiset et Hassel, 1896 / Г. К. Резник // Мат. науч. конф. ВОГ. М., 1964. - ч. 2. - С. 80-82.

161. Резник, Г. К. О действии хлорофоса на половозрелых фасциол при дегельминтизации овец (гистологические исследования) / Г. К. Резник // Мат. к докл. ВОГ.-М., 1965.-ч. 1.-С. 184-187.

162. Резник, Г. К. О гистологических изменениях, вызываемых гексахлорпараксилолом в пограничных системах трематод, паразитирующих в печени / Г. К. Резник // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. —1966.-№35.-С. 425-427.

163. Резник, Г. К. О влиянии антигельминтиков на содержание гликогена у половозрелых Dicrocoelium lanceatum, Stiles et Hassall, 1896 / Г. К. Резник // Мат. 2-ой Всесоюзноё конф. биохимиков сельскохозяйственных вузов. — Ереван, 1966.-С. 117-119.

164. Резник, Г. К. О защитных функциях тегумента половозрелых Dicrocoelium lanceatum Stiles et Hassall, 1896 / Г. К. Резник // Сборн. работ по гельминтологии сельскохозяйственных животных. — М., 1967. — Т. 13. — С. 305.

165. Резник, Г. К. О некоторых патоморфологических изменениях, вызываемых гексахлорпараксилолом у фасциол при дегельминтализации овец / Г. К. Резник // Докл. Всесоюзн. Академии сельхозяйственных наук. — Каунас,1967.-С. 39-41.

166. Резник, Г. К. Гистологические методы в изучении действия препаратов на гельминтов / Г. К. Резник // Сельскохозяйственная биология. —1968.-3,№5.-С. 765.

167. Резник, Г. К. О влиянии оксинида на морфологию фасциол / Г. К. Резник // Труды ВИГИС. М., 1969. - Т. 15. - С. 239-243.

168. Резник, Г.К. Перспективы и некоторые результаты гистохимического исследования пищеварительных ферментов гельминтов / Г. К. Резник // Сельскохозяйственная биология М., 1972. - 11, № 3. — С. 420-425.

169. Резник, Г. К. Сравнительное гистохимическое исследование действия производных битинола, гексида, оксинида на холинэстеразу фасциол / Г. К. Резник // Труды ВИГИС. М., 1972. - Т. 19. - С. 139-152.

170. Резник, Г. К. Гистохимическое исследование действия производных битинола, гексида и оксинида на аденозинтрифосфатазу фасциол in vitro / Г. К.

171. Резник // Проблемы паразитологии: Мат. VIII науч. конф. паразитологов УССР. -Киев, 1975.-ч.2.-С. 130-132.

172. Резник, Г. К. Антихолинэстеразное действие антигельминтиков на нервно-мышечный аппарат фасциол / Г. К. Резник // Ветеринария. — 1988. — № И.-С. 43-46.

173. Рябова, В. А. Фармакология димезола / В. А. Рябова, Т. П. Веселова, М. А. Белоусова // Бюллетень ВИГИС М., 1983. - вып. 34. - С. 32-37.

174. Савченко, А. В. Особенности энергетического обмена у Fasciola hepatica и влияние на него некоторых фасциолоцидных препаратов / А. В. Савченко: Автореф. дисс. канд. биол. наук. М., 1986. - 27 с.

175. Сафиуллин, Р. Т. Распространение и экономический ущерб от основных гельминтозов жвачных животных / Р. Т. Сафиуллин // Ветеринария. — 1997-№6.-С. 28-32.

176. Сенутайте, Я. Ю. Особенности гликолитических путей у Fasciola hepatica возможности их блокирования антигельминтными препаратами / Я. Ю. Сенутайте: Автореф. дисс. канд. биол. наук. Вильнюс, 1970. - 20 с.

177. Скрябин, К. И. Строительство советской гельминтологии / К. И. Скрябин М.-Л., 1946. - 211 с.

178. Слуцкий, Л. И. Биохимия нормальной и патологически измененной соединительной ткани / Л. И. Слуцкий. М.: Медицина, 1969. - С. 89-129.

179. Сорокина, Н. П. Фасциолёз человека, вызываемый Fasciola hepatica / Н. П. Сорокина, А. С. Москвин, В. В. Горохов // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2003. — № 1. - С. 37-39.

180. Сташайтис, Ю. Н. Микроморфологические исследования тканей фасциол (Fasciola hepatica L., 1758) при действии некоторыми антигельминтиками / Ю. Н. Сташайтис: Автореф. дис. . канд. биол. наук. — Вильнюс, 1974. 23 с.

181. Сташайтис, Ю. Н. Влияние битинола на ткани печеночной двуустки (Fasciola hepatica) в фистульных овцах / Ю. Н. Сташайтис, О. А. Кублицкене, А. И. Вишняускас // Acta parasitológica Lithuanica. 1969. - № 9. - С. 89-95.

182. Ткач, В. И. Основные механизмы двигательной активности Fasciola hepatica L. и влияние на них некоторых антигельминтиков / В. И. Ткач: Автореф. дис. канд. наук. — М., 1968. 20 с.

183. Тустановский, А. А. Мукоидные вещества тканей животных / А. А. Тустановский // Успехи современной биологии. 1962. -54.-1 (4). — С. 3-24.

184. Уголев, А. М. Мембранное пищеварение. Полисубстратные процессы, организация и регуляция / А. М. Уголев. JL: Наука, 1972. — 356 с.

185. Уголев, А. М. Эволюция пищеварения и принципы эволюции функций: элементы современного функционирования / А. М. Уголев. — Л.: Наука, 1985.-544 с.

186. Успенский, А. В. Технология скотоводства и концепция борьбы с «пастбищными» гельминтозами / А. В. Успенский, В. Ф. Никитин, П. А. Лемехов // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Мат. докл. науч. конф. — М., 2010. вып. 11. - С. 3-6.

187. Фукс, Б. Б. Очерки морфологии и гистохимии соединительной ткани / Б. Б. Фукс, Б. И. Фукс. Л.: Медицина, 1968. - 214 с.

188. Ханбегян, Р. А. К вопросу о питании и действии антигельминтиков на неполовозрелые формы Fasciola gigantica / Р. А. Ханбегян // Труды ВОГ. -М., 1971.-Т. 17.-С. 219-220.

189. Ханбегян, Р. А. Гистохимические исследования фасциол (Fasciola gigantica) при воздействии антигельминтиков / Р. А. Ханбегян: Автореф. дис. канд. вет. наук. Ереван, 1971. — 18 с.

190. Ханбегян, Р. А. Поиск фасциолоцидов преимагинального действия и некоторые стороны их антигельминтного механизма и фармакодинамики / Р. А. Ханбегян: Автореф. дис. докт. вет. наук. -М., 1977. 45 с.

191. Хромов, К. А. Фасциолёз и стронгилятозы желудочно-кишечного тракта крупного рогатого скота в условиях Центральной зоны России и поиск эффективных средств борьбы с ними / К. А. Хромов: Автореф. дис. канд. вет. наук. М., 2005.-22 с.

192. Цветаева, Н. П. Изучение патоморфологии гельминтозов / Н. П. Цветаева // Ветеринария. 1970. - № 11. — С. 25-28.

193. Чебышев, Н. В. Гельминтозы: органно-системные процессы в их патогенезе и лечении / Н. В. Чебышев, Ю. К. Богоявленский, Е. А. Гришина. — М.: Медицина, 1998. 240 с.

194. Чубрик, Г. К. Морфология и фукциональная изменчивость кишечного эпителия некоторых трематод / Г. К. Чубрик // Труды ВИГИС. -1971.-Т. 17.-С. 133.

195. Шемяков, Д. H. Антигельминтная эффективность тетраксихола при фасциолёзе и влияние его на организм и продуктивность жвачных / Д. Н. Шемяков: Автореф. дис. канд. вет. наук. М., 1999. — 22 с.

196. Шипкова, JI. Н. Гистологические изменения тканей и органов Fasciola hepatica под действием дисалана / JI. Н. Шипкова, А. В. Семёнов // Эколого-биологические и фаунистические аспекты гельминтозов: Тез. докл. науч. конф. -М., 1991. С. 126.

197. Штейнпрейс, Т. А. Морфо-экологические исследования взаимоотношений в системе «паразит-хозяин» на примере паразитирования трематод у холоднокровных и теплокровных животных / Т. А. Штейнпрейс: Автореф. дис. канд. биол. наук. -М., 2000. -24 с.

198. Штейнпрейс, Т. А. Типы ксенопаразитарных барьеров в биологических системах паразитарного типа / Т. А. Штейнпрейс, JI. В. Начева // Взаимоотношения паразита и хозяина: Тез. докл. Всероссийской науч. конф. — М., 1998.-С. 76.

199. Штейнпрейс, Т. А. Биологическое значение формирования системы «паразит-хозяин» / Т. А. Штейнпрейс, JI. В. Начева // Проблемы медицины и биологии: Сборн. науч. работ. Кемерово, 2007. - С. 83.

200. Шульц, Р. С. Общая патоморфология при гельминтозах / Р. С. Шульц, Е. В. Гвоздев // Основы общей гельминтологии М, 1976 - Т. 3 - 345 с.

201. Ястреб, В. Б. Побочные эффекты антигельминтиков / В. Б. Ястреб, Т .С. Новик // Восьмой Международный конгресс по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных. М., 2000. — С. 172-175.

202. Ястребов, М. В. Соотношение понятий «хозяин» и «среда обитания» и вопрос о сущности паразитизма / М. В. Ястребов // Экология. 1996. — Т. 27. -№1.-С. 61-64.

203. Aggarwal, A. Antigenic variation of Giardia lamblia in vivo / A. Aggarwal, T. E. Nash // Infec. and immun. 1988. - 56. - № 6. - P. 1420-1423.

204. Alvarez, L. I. Comparative assessment of the access of albendazole, fenbendazole and triclabendazole to Fasciola hepatica: Effect of bile in the incubation medium / L. I. Alvarez, M. L. Mottir, E. Lanusse // Parasitology. 2004. - 128, № 1. -P. 73-81.

205. Axmann, M. С. Morphological studies on glycogen deposition in Schistosomes and ofter flukes / M. C. Axmann // Journ. Morphology. 1947. - № 80 (3).-P. 321-334.

206. Barka, T. Histochemistry / T. Barka, P. J. Anderson // Theory, practice and bibliography. New York-Evanston-London: Harper and Row, 1963.

207. Bennion, P. J. Some effects of salts on staining: the use of Donnan equilibrium to describe staining of tissue sections with acid and basic dyes / P. J. Bennion, R. W. Horobin // Histochemistry. 1974. - v. 39. - P. 71-82.

208. Bjorkman, N. Studies on the action of some enzymes on the cuticle of Fasciola hepatica L. / N. Bjorkman, W. Thorsell, E. Liemert // Experientia. 1963. -19, № l.-P. 3-5.

209. Bogitsh, B. J. Cyfochemical and ultrastructural observations on the tegument of the trematodes Megalodiscus tremperatus / B. J. Bogitsh // Trans. Amer. Micr. Soc. 1968. - 87, № 4. - P. 477-486.

210. Brand, T. Histochemical glycogen studies of Fasciola hepatica / T. Brand, T. Y. Mecrado // Y. Parasitology. 1961. - № 47 (3). - P. 459-463.

211. Bueding, E. Content and distribution of glucogen in Schistosoma mansoni / E. Bueding, S. Koletsky // Prac. Soc. Exp. Bid. Med. 1950 - № 73 (4) - P. 594596.

212. Capron, A. Molecular lassis of host-parasite relationship forwards the definition of protective antigens / A. Capron, I. P. Dessaint // Immunol, rev. — 1989. — № 112. P. 27-48.

213. Cetindag, M. Использование антигельминтиков группы бензимидазола в животноводстве / М. Cetindag // Etlik vet. mikrobioyol. dergi. -1996-8, №4.-P. 181-195.

214. Cheng, Т. C. Studies on phosphtase systems in hepatopancreatic cells of the molluscan host of Echinoparyphium sp. And in the rediae and cercariae of this trematode / Т. C. Cheng // Parasitology. 1964. - № 54 (1). - P. 73-79.339

215. Claxton, J. R. Strategic control of fasciolosis in the inter-Andeann valley of Cajamarca, Peru / J. R. Claxton, H. Zambrano, P. Ortiz et al. // Vet. rec. 1998. -143, №2.-P. 42-45.

216. Qetindag, M. Использование антигельминтиков группы бензимидазола в животноводстве / М. £etindag // Etlik vet. mikrobioyol. dergi. — 1996. -8, №4.-P. 181-195.

217. Damian, R. J. Molecular mimicry: parasite evasion and host detense / R. J. Damian // Mol. mimicry. Berlin etc. - 1989. - P.l 01-115.

218. Davis, D. A. Cytochemical localization of the gastrodermal glycocalyx of Corgoderina attenuata and Haematoloechus medioplexus / D. A. Davis, B. J. Bogitsh // Acta histochem. et cytochem. 1971. - 4, № 2. - P. 64-68.

219. Dawes, B. A histochemical study of the caecal epitheliam of Fasciola hepatica / B. Dawes // L. Parasitol., 1962. 52, № 4. - P. 483-493.

220. Dawes В. Явный эффект действия битинола (Актамер) на Fasciola hepatica / В. Dawes // Nature, 1968. 4, № 209. - 5021. - P. 424-425.

221. Devine, С. Inhibition of cytochrome p450-mediateol enhances ex vivo succeptibility of Fasciola hepatica to triclabendazole // C. Devine, G. P. Brenman, C. E. Lanusse, L. I. Alvarez et al. // Parasitology. 2010. - 137, № 5. - P. 871-180.

222. Fairweather J. Fasciola hepatica: tegumental changes induced in vitro by the deacetylated (amine) metabolite of diamphenethide / J. Fairweather, H. R. Anderson, L. Treadgold // Exp. Parasitology. 1986. - 62, № 3. - P. 336-348.

223. Fairweather J. Fasciola hepatica: Motiliaty Response to Fasciolicides in vitro / J. Fairweather, S. D. Holmes, L. Treadgold // Exp. Parasitology. 1984. - 57, № 3. - P. 209-224.

224. Gabev E. E. Survey on the molecular mechanism of actions of anthelmintic agents / E. E. Gabev, M. V. Bogoeva // IV Национ. конф. по паразит., Варна, 3-5 октября: Резюме докл. — София, 1983. — Р. 227.

225. Gabrion С. Etude ultrastructurale de la larva de Ahomataenia constricta (Cestoda, Cyclophyllidea) / C. Gabrion, J. Gabrion // Ztschr. Parasitenc. 1976. -Bd. 49, №2.-P. 164-177.

226. Goldstein D. J. Correlation of size of dye particle and density of substrate, with special reference to mucin staining / D. J. Goldstein // Stain Technology. 1962. -v. 37.-P. 79-93.

227. Goldstein, D. J. Rate factors in staining with alcian blue / D. J. Goldstein, R. W. Horobin // Histochemical journal. 1974. - v. 6. - P. 157-174.

228. Goldstein, D. J. Surface staining of cartilage by alcian blue, with reference to the role of microscopic aggregates in histological staining / D. J. Goldstein, R. W. Horobin // Histochemical journal. 1974. - v. 6. - P. 175-184.

229. Gorchilova, L. N. Ultrastructural effects of clozantel, abamektin and their combination on Fasciola hepatica in vitro / L. N. Gorchilova, Y. Mizinska-Boevska, K. Georgeva et al. // Докл. Болг. АН. 1999. - 52, № 7-8. - С. 97-100.

230. Guichard, D. Distomatose á Fasciola hepatica. A propos de quatre observations en Haute-Loire / D. Guichard, P. Flori, H. Raberin et al. // Med. et malad. infec. 2002. - 32, № 4. - P. 190-195.

231. Halton, D. W. Studies on phosphatase activity in trematoda / D. W. Halton // Journ. of Parasitology. 1967. - № 53 (1). - P. 46-54.

232. Halton, D. W. Histochemical studeis of carboxylic esterase activity in Fasciola hepatica / D. W. Halton // Journ. of Parasitology. 1967. - № 53 (6). - P. 1210-1216.

233. Hunt, S. Polysaccharide-protein complexes in invertebrates / S. Hunt // London-New-York. Academ. Press. 1970. - P. 329.341

234. Kanwar, U. Egg shell formation in the trematode Diplodiscus amphichrus- a cytochemical study / U. Kanwar, M. Agrawal // Folia parasitology. — 1977. — № 24 (4).-P. 377-380.

235. Jin, Li-qun Влияние трикпабендазола на изоферменты, белки, нуклеиновые кислоты и гликоген у Paragonimus westermani / Li-qun Jin, Shi-e Xu, Xiu-jun Lu // Zhongguo renshou gonghuanbing zozhi=Chin. J. Zoonoses. 2006.- 22, № l.-P. 48-50.

236. Lai, M. B. Some Histochmical Observations on the Cuticle of Fasciola indica Verma, 1953 / M. B. Lai, S. H. Shrivastava // Experientia, 1960. 16. - P. 185-186.

237. Madhavi, R. Egg sgell in Paramhistomatidae (Trematoda: Digenea) / R. Madhavi // Experintia. 1966. - № 22. - P. 93-94.

238. Mansour, T. E. Studies on the carbohydrate metabolism of the liver fluke Fasciola hepatica / T. E. Mansour // Biochem. Biophys. Acta. 1959. - № 34. - P. 456-464.

239. Mathewos, Z. Observations on the effects of concurrent natural bovine Trypanosome and Fasciola infections in Kore area, western Ethiopia / Z. Mathewos A. Getachew, J. Yilma//Rev. méd. vét. -2001. 152, № 12. - P. 851-858.

240. McKinstry, B. Fasciola hepatica: tegumental surface alterations following treatment in vivo and in vitro with nitroxynil (Trodax) / B. McKinstry, I. Fairweather, G. P. Brennan, A. B. Forbes // Parasitol. Res. 2003. - 91, № 3. - P. 251-263.

241. Monne, L. On the external cuticles of varies helminths and their role in the host-parasite relationship / L. Monne // A hishemical study Archiv Zool. 1959. -№ 12.-P. 343-358.

242. Montenegro, Y. V. Field trial on the efficacy of an experimental fasciolicide compared with some commercial compounds in naturally infected cattle / Y. V. Montenegro, F. I. Velarde, H. Q. Romero et al. // Parasitology. Res. 2003. -91,№ l.-P. 1-4.

243. Oqunrinade, A. In vitro effect of nitroxynill (Trodax R) and rafoxanide on adult Fasciola gigantic / A. Oqunrinade, G. Gwaze // Rev. elev et med; vet. pays trop.- 1981.-34, № l.-P. 43-45.

244. Patil, H. S. Studies on the glycogen content and distribution in Paramphistomum cervi (Trematoda: Paramphistomidae) / H. S. Patil, S. S. Rodgi, S. D. Amoji //Proc. Indian. Nat. Sei. Acad. 1976. -№ 42 (2-3). -P. 149-150.

245. Policard, А. Поверхность клетки и её микросреда / А. Policard. М.: Мир, 1975.-106 с.

246. Revel, J. The specific of cell surfaces / J. Revel, S. Ito. 1967. - 234 c.

247. Robinson, M. N. The comparative metabolism of triclabendazole sulphxide by triclabendazole-susceptible and triclabendazole-resistant Fasciola hepatica / M. N. Robinson, J. Lawson, A. Trudgett et al. // Parasitology. Res. — 2004.- 92, № 3. P. 205-210.

248. Smyth, J. D. The Physiology of Trematodes / J. D. Smyth. Treman: San- Francisco, 1966. 256 p.

249. Smyth, J. D. Parasites as biological models / J. D. Smyth // Parasitol. -1969.-№59(1).-P. 73-91.

250. Stephenson, W. Physiological and histochemical observations on the adult liver fluke, Fasciola hepatica L. I. Survival in vitro / W. Stephenson // Parasitology. -1947. № 38 (3). - C. 116-122.

251. Teichmann, D. Acute fascioliasis with multiple liver abscesses / D. Teichmann, M. P. Grobusch, К. Gobels et al. // Scand. J. Infec. Diseases 2000. -32,№5.-P. 558-560.

252. Thorseil, W. The in vitro effect of hexachlorophene on some in the liver fluke, Fasciola hepatica L. / W. Thorsell // Parasitology. 1968 - № 57 - P. 665-671.

253. Threadgold, L. T. The tegument and associated structures of Fasciola hepatica / L. T. Threadgold // Quart. J. Vicroscop. Sei. 1963 - 104, № 4 - P. 503512.

254. Threadgold, L. T. Hymenolepis diminuta: ultrastructural localization of immunoglobulin binding sites on the tegument / L. T. Threadgold, A. D. Befiis // Exp. Parasitol., 1977. - vol. 43. -№ 1. - P. 169-179.

255. Threadgold, L. T. Electron microscope studies of Fasciola hepatica. I. The ultrastructure and interrelationship of the parenchymal cells / L. T. Threadgold, S. S. E. Gallagher // Parasitology. 1966. - № 56 (2). - P. 299-304.

256. Toner, E. A transmission electron microscope study on the route of entry of triclabendazole into the lifer fluke Fasciola hepatica / E. Toner, G. P. Brennan, F. McConvery et al. // Parasitology. 2010. - 137, № 5. - P. 855-870.

257. Weinland, E. O. Beobachtungen an Fasciola hepatica / E. O. Weinland, T. E. Brand // Zeitschr. Vergl. Physiology. 1926. - № 4. - P. 212-285.

258. Whyte A. Sone aspects of the histochemistry of Fasciola hepatica (Trematoda: Digenea) / A. Whyte // Microscopy. 1976. - № 33 (2). - P. 108-112.