Микроморфологические исследования триады органов-печень, поджелудочная железа и двенадцатиперстная кишка-после действия антигельминтиков при экспериментальном описторхозе

Нестерок, Юлия Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Микроморфологические исследования триады органов-печень, поджелудочная железа и двенадцатиперстная кишка-после действия антигельминтиков при экспериментальном описторхозе
ВАК РФ 03.02.11, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Микроморфологические исследования триады органов-печень, поджелудочная железа и двенадцатиперстная кишка-после действия антигельминтиков при экспериментальном описторхозе"

На правах рукописи

005532364

НЕСТЕРОК ЮЛИЯ АЛЕКСАНДРОВНА

МИКРОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ТРИАДЫ

ОРГАНОВ - ПЕЧЕНЬ, ПОДЖЕЛУДОЧНАЯ ЖЕЛЕЗА И ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНАЯ КИШКА - ПОСЛЕ ДЕЙСТВИЯ АНТИГЕЛЬМИНТИКОВ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ОПИСТОРХОЗЕ

Специальность 03.02.11 - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 9АВГ 2013

Москва-2013

005532364

Работа выполнена на кафедре общей биологии с основами генетики и паразитологии ГБОУ ВПО «Кемеровской государственной медицинской академии» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Начева Любовь Васильевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Бенедиктов Игорь Иванович,

ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский инстшут гельминтологии им. К.И. Скрябина» Россельхозакадемии, ведущий научный сотрудник лаборатории биохимии и биотехнологии

доктор биологических наук

Сивкова Татьяна Николаевна,

ФГБОУ ВПО «Пермская государственная

сельскохозяйственная академия им. академика

Прянишникова»,

доцент кафедры инфекционных болезней

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Московская государственная

академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина»

Защита состоится «25» сентября 2013г. в 1422 часов на заседании совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук Д 006.011.01, созданного на базе ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский инстшут гельминтологии им. К.И. Скрябина» Россельхозакадемии.

Адрес: 117218, г. Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС Автореферат разослан » СЧ.^Ы^Суу^д. 2013 г.

Ученый секретарь совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук,

доктор биологических наук, профессор Бережко Вера Кузьминична

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Сложная эпидемиологическая обстановка описторхоза побудила ученых и практических врачей к активному поиску и внедрению эффективных антигельминтных препаратов позволяющих достичь полной дегельминтизации широкого контингента зараженных (Лебедева М.Н, Михайлицын Ф.С., Сергиев В. П. и др., 2001; Бибик О.И., Начева Л.В., 2010). Хронический описторхоз рассматривается как общее заболевание, при котором страдает весь организм, но доминирующим поражением является симптомокомплекс органов гепатобилиарной системы с различными функциональными нарушениями в ней (Белобородова Э.И., Калюжина М.И., Тиличенко Ю.А. и др., 1996). Проблема разработки новых эффективных методов лечения остается одной из актуальных и требует нового решения, предусматривающего использования современных подходов и современных медицинских технологий (Поддубная O.A., 2010). Для лечения описторхоза сегодня используется эффективное (85,5%) растительное средство экорсол (Мозжелин М.Е., Кадуков Д.В., 2001) и разработан растительный препарат эрлим (Турьянов М.Х., Погорельская Л. В., Калинина A.A., 2005). Очень важным аспектом изучения следует считать патоморфологические исследования органов и тканей трематод после воздействия антигельминтиков, что может способствовать поиску новых препаратов с более улучшенными трематодоцидными свойствами. Проводился патоморфологический контроль эффективности воздействия антигельминтиков на органы и ткани описторхов (Начева Л.В., 1993; Бибик О.И., 1997).

На сегодняшний день в паразитологии остаётся много вопросов в теоретическом и практическом плане, которые не нашли должного освещения, не изучены патоморфологические и гистохимические особенности органов и тканей паразита и хозяина, как до, так и после воздействия антигельминтиков в эксперименте. Хотя в целом существуют работы, посвященные патологии описторхоза (Зубов H.A., 1973; Астафьев Б.А., 1986), но они касаются или микроморфологии печени при хроническом описторхозе (Штейнпрейс Т.А., 2000), или патоморфолопш триады органов при спонтанном описторхозе (Додонов М.В., 2007). Мало проводилось экспериментальных исследований, направленных на изучение микроморфофункциональных механизмов взаимоотношений в паразитарной системе в эксперименте до и после воздействия препаратов. Актуальным является подход к изучению вопросов патологии органов и тканей в системе «паразит-хозяин» с точки зрения системогенеза в сравнительном аспекте.

Цель исследования: Установить микроморфологические изменения и гистохимическую реактивность триады органов (печень, поджелудочная железа и 12-перстная кишка) золотистых хомяков после воздействия антигельминтиков (эрлима и экорсола) при экспериментальном описторхозе.

Задачи исследования: 1. Изучить микроморфологию триады органов: печень, поджелудочная железа и 12-перстная кишка золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе. 2. Изучить микроморфологию триады органов золотистых хомяков при описторхозе после воздействия эрлимом и

экорсолом в эксперименте. 3. Провести гистохимический анализ тканевой реактивности органов: печень, поджелудочная железа и 12-перстная кишка золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе до и после воздействия эрлимом и экорсолом. 4. Разработать патоморфологические критерии оценки эффективности воздействия антигельминтиков на органы и ткани паразита и хозяина.

Научная новизна работы; 1. Впервые изучено в сравнительном аспекте воздействие антигельминтиков растительного происхождения - эрлима и экорсола на триаду органов (печень, поджелудочную железу и 12-перстную кишку) золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе и показано их различное действие на ткани с учетом их фармакогностических свойств. 2. Определены патоморфологические признаки триады органов, характеризующие экспериментальный описторхоз: дистрофии разного типа; некробиотические явления; гиперплазия эпителия с метаплазией, фиброз и пролиферация самих протоков; капиллярная инъекция и диапедез сосудов; снижение тинкториальных свойств и гистохимической реактивности тканей хозяина, выраженных торможением углеводно-белкового метаболизма. 3. Установлено, что эрлим эффективно воздействовал на ткани и органы описторхов, вызывая глубокую патологию и гибель паразита, и благоприятно влиял на восстановление микроморфологии триады органов хозяина. Экорсол оказывал губительное действие на паразита, но не влиял на восстановительные процессы в тканях и органах самого хозяина.

Практическая значимость работы: 1. Для учебного процесса: результаты исследования могут быть использованы при обучении клинических ординаторов, интернов, аспирантов медицинских и ветеринарных Вузов; включаться в лекционный и учебно-методический материал. 2. Для практического использования: теоретические положения и результаты исследований могут быть применены в НИИ соответствующего профиля для сравнительного морфофункционального анализа изменений триады органов (печень, поджелудочная железа и 12-перстная кишка) золотистых хомяков после действия антигельминтиков растительного происхождения; для создания новых антигельминтных препаратов, оказывающих токсическое действие на паразитов, и благоприятное влияние на хозяина. 3. Для практического здравоохранения: новые данные функциональной морфологии будут способствовать формированию теоретической базы к созданию более эффективных схем профилактики, выявления и лечения трематодозов инфекционистами, паразитологами, эпидемиологами, иммунологами, терапевтами, семейными врачами. 4. Внедрение методических разработок.

Общие положения диссертации, выносимые на защиту:

1 .Дистрофические, пролиферативные, гиперпластические,

фибротические, метапластические, некробиотические и некротические, процессы в печени, поджелудочной железе и двенадцатиперстной кишке характеризуют хронический описторхоз в эксперименте.

2. Особенности патоморфологии после воздействия эрлимом и экорсолом на печень, поджелудочную железу и двенадцатиперстную кишку определяются с помощью микроморфологических, гистохимических и статистических методов исследований и доказывают степень их воздействия и неоднозначность её проявлений в организме паразита и хозяина.

3. Патоморфологический контроль и гистохимическая реактивность тканей паразита и хозяина, как критерии оценки эффективности воздействия антигельминтиков.

Апробация. Межрегиональная научно-практическая конференция молодых ученых и студентов «Проблемы медицины и биологии» (г. Кемерово, апрель 2008, 2009, 2010, 2011, 2012 гг.); Всероссийская научная конференция «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (г. Москва, май 2009, 2010, 2011, 2012 гг.); Юбилейная научно-практическая конференция, посвященная 200-летию кафедры биологии имени академика Е.Н.Павловского «Актуальные вопросы медицинской биологии и паразитологии» (г. Санкт-Петербург, 26-27 марта 2009г); II Юбилейная научно-практическая конференция с международным участием, посвященная 55-летию кафедры общей биологии с основами генетики и паразитологии КемГМА и 85-летию со дня рождения доктора биологических наук, профессора Е.Д.Логачёва «Теоретические и практические вопросы паразитологии» (г. Кемерово, 26-27 мая, 2011 г.).

Личный вклад автора. Представленная диссертационная работа является результатом многолетних (с 2007 по 2011 год) научных исследований автора. Проведение эксперимента, набор материала, его фиксация, приготовление и обработка гистологическими и гистохимическими методами микропрепаратов с их описанием и микрофотосъемкой, а также морфометрический анализ со статистической обработкой результатов и подготовка публикаций проведены лично автором на базе микроморфологической лаборатории кафедры общей биологии с основами генетики и паразитологии КемГМА.

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 23 статьи, в т.ч. 2 в реферируемом ВАК РФ журнале и 1 в зарубежном издании.

Объем н структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 167 страницах компьютерного текста и состоит из введения, 5 глав, выводов и списка литературы (включающего 192 источников, из них отечественных - 138, иностранных - 54). Работа содержит иллюстрации: 129 рисунков (из которых 128 микрофотографий и 1 схематический рисунок); 8 диаграмм и 11 таблиц.

ГЛАВА 1. ВОЗДЕЙСТВИЕ АНТИГЕЛЬМИНТИКОВ ИА ОРГАНЫ И ТКАНИ ПАРАЗИТА И ХОЗЯИНА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ОПИСТОРХОЗЕ

(Обзор литературы)

Проведен анализ изучения воздействия антигельминтиков на органы и ткани, как паразита, так и хозяина при экспериментальном описторхозе. Выявлено, что, несмотря на достаточное количество микроморфологических

исследований, подтверждающих эффективность влияния препаратов на ткани описторхов (Кошкина Н.Г., 1970; Богоявленский Ю.К., Начева JI.B., 1985, 1986, 1988; Начева Л.В., 1993; Бибик О.И.1997; Начева Л.В., Бибик О.И., Гребенщиков В.М., 2000), микроморфофункциональные особенности и патоморфология печени, поджелудочной железы и 12-перстной кишки самого хозяина при описторхозе экспериментальной модели после действия антигельминтиков мало изучены.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалом для исследований служили органы сирийских, или золотистых хомяков (Mesocricetus auratus): печень, поджелудочная железа и двенадцатиперстная кишка. На хомяках была создана модель хронического описторхоза. Были использованы антигельминтики растительного происхождения: эрлим и экорсол. Производитель эрлима: ООО "Ростовская фармацевтическая фабрика" (ТУ 9197-001-77354567-06). Эрлим (регистрационное свидетельство 77.99.23.3.У.5726.6.09 от 09.06.2009) является фитопрепаратом, в состав которого включены растительные ингредиенты: пижма, имбирь, тысячелистник, корень одуванчика, хвощ полевой, полынь. Экорсол (регистрационное удостоверение № 77.99.11.936.Б.000404.08.03) разработан в ООО «Биолит» г. Томск (ТУ 9365-018-20680882-03), состоит из экстракта коры осины и экстракта солянки холмовой. Хомяков заражали в дозе 100 метацеркариев на одну особь (м/о), через три месяца (90 суток) проводили лечение эрлимом и экорсолом, через 14 дней после лечения экспериментальных животных вскрывали. Органы забирали при вскрытии животных и сразу помещали в фиксаторы. Все инвазированные описторхами хомяки были разделены на 4 группы: 1 - до лечения; 2 - после лечения эрлимом (0,023 г/кг массы тела животного в течение 5 суток); 3 - после лечения экорсолом (0,26 г/кг массы тела животного в течение 5 суток); 4 - контрольная группа.

Гистологическая обработка материала. Материал фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине, обрабатывали по общепринятой гистологической методике. Материал заливали в парафин с добавлением воска (Меркулов Г.А., 1969). Срезы, толщиной 5-6 мкм, окрашивали: гематоксилином Эрлиха-эозином, гематоксилином Карацци-эозином, по Маллори, по Селье, конго-красным, галлоцианином. Всего было изготовлено 4800 микропрепаратов, т.е. по 1500 микропрепаратов каждой группы после действия антигельминтиков, при этом по 500 микропрепаратов из каждого органа, а также по 900 микропрепаратов из первой группы экспериментальных животных без лечения и контрольной (четвертой) группы, т.е. по 300 микропрепаратов каждого органа.

Гистохимические методы окрашивания. Для выявления суммарных белков применяли метод сулема-бромфеноловый синий (БФС) по Бонхегу. Ферментативный контроль проводили с трипсином и пепсином. Для определения гликогена и других полисахаридов (или мукопротеидов) использовали Шик-реакцию по Мак-Манусу с докраской ядер гематоксилином.

Контрольные срезы обрабатывали диастазой и амилазой слюны. Гексозаминогликаны (ГАГ) выявляли альциановым синим (АС) по Стидмену при pH 3.0 и толуидиновым синим (ТС) pH 4.0-5.0. Контроли: метилирование, деметилирование по Спайсеру и сульфатирование по Муру и Шенбергу.

Проводили статистическую обработку результатов морфометрических исследований размеров диаметров ядер гепатоцитов золотистых хомяков 4-х групп. Оценка уровня статистической значимости различий между размерами диаметра ядер клеток печени в норме, при экспериментальном описторхозе и после воздействия антигельминтиков - эрлима и экорсола осуществлялась с использованием непараметрического критерия оценки достоверности -критерия Вилкоксона (для анализа зависимых переменных). Для сравнения действия эрлима и экорсола на размеры ядер гепатоцитов мы использовали критерий Манна-Уитни (для анализа независимых переменных). Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез принимали равным р<0,05. Статистическая обработка материала проводилась на ПЭВМ типа ШМ PC с использованием лицензионного пакета прикладных программ STATISTIC А 6.0 (лицензионное соглашение 74017-640-000106-57177). Для морфометрического анализа ядер гепатоцитов печени золотистых хомяков использовали пакет прикладных программ Apeno ImageScope v. 11.1.2.760. Размеры диаметра ядер измеряли в условных единицах (у.е.). Микрофотосъёмку производили микрофотонасадкой «Canon» PowerShot А510 digital camera с применением MultiMediaCard. Было изучено более 2000 микрофотографий, а в диссертационную работу отобрано 128. Все приведенные в диссертации микрофотографии оригинальные и сделаны самим автором. Печать фотографий осуществлялась на матовой фотобумаге для струйной печати Lomond формата А-4 (210x297 мм), плотностью 90 г/м2 с помощью принтера Epson AcuLaser C3000.

Работа была выполнена в микроморфологической лаборатории кафедры общей биологии с основами генетики и паразитологии ГБОУ ВПО «Кемеровская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

(Результаты исследований и их обсуждение) ГЛАВА 3. МИКРОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ

ИССЛЕДОВАНИЯ ТРИАДЫ ОРГАНОВ ЗОЛОТИСТЫХ ХОМЯКОВ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ОПИСТОРХОЗЕ

3.1. Патоморфология печени золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе.

Микроморфология печени золотистых хомяков (контрольная группа экспериментальных животных). Морфофункциональной единицей печени является ацинус. Гепатоциты в ацинусе образуют тяжи в виде трабекул. Клетки имеют стандартную полигональную форму и в них определяются синусоидальный и билиарный полюса между соседними гепатоцитами.

Цитоплазма выгладит гранулярной и амфофильной, то есть окрашивается основными и кислыми красителями. В перинуклеарной зоне и в области синусоидального полюса гепатоцитов видны небольшие скопления мелкозернистого базофильного материала. Ядра располагаются, как правило, в центре печеночных клеток, имеют одно или несколько ядрышек. Гепатоциты содержат достаточное количество гликогеновых зёрен, что определяется при постановке Шик-реакции.

Микроморфологическне исследования печени золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе показали, что распространенными патологическими процессами являются дистрофии, чаще гидропическая или «баллонная». При этом виде дистрофии вакуоли цитоплазмы заполнены жидкостью, что увеличивает объем гепатоцитов, а вокруг их ядер или вдоль клеточных мембран встречается эозинофильная зернистость. С помощью Шик-реакции до и после обработки контрольных срезов ферментом диастазой (амилазой), выявили, что при баллонной дистрофии гликоген в гепатоцитах не обнаруживается. Базофилия ядер снижена, наблюдается кариолизис. Наблюдали паренхиматозную углеводную дистрофию, выраженную нарушением распределения гликогена в печени, что определяется гистохимически. Увеличение размеров клеток ведет к сдавливанию синусоидов печени. Кроме этого нами была определена дистрофия соединительной ткани. В печени обнаруживали отложения бесструктурных, плотных, полупрозрачных масс, окрашенных эозином в розовый цвет, которые располагались по ходу ретикулярной стромы, в стенках сосудов и желчных протоков, и в портальных трактах. Отмечено, что преимущественно пораженным был интермедиальный отдел ацинусов. Гиалиноз встречался вдоль всей дольки, сдавливая печеночные пластинки, что способствовало атрофии гепатоцитов.

Наблюдали фокальный некроз - поражение части печеночной клетки с денатурацией белка, что отчетливо видно при окрашивании БФС. Объем гепатоцитов увеличен, цитоплазма достаточно прозрачна, только в перинуклеарных отделах определялось небольшое количество белковых глыбок. Ядра таких клеток с явлениями кариолизиса проявляли слабую базофилию. Особым видом клеточной гибели является апоптоз, который проявлялся «деструкцией» гепатоцитов, сморщиванием их и сепарацией с образованием конденсированных фрагментов клеток, заполненных негомогенным содержимым. Остатки клеток в результате апоптоза фагоцитировались макрофагами. Местами в печеночной ткани мы наблюдали участки с моноцеллюлярным некрозом, как очаговым, так и рассеянным. Гепатоциты уменьшены в объеме, сморщены, с плотной гомогенной цитоплазмой, интенсивно окрашивающейся эозином, и с пикнотичными ядрами. Обычная округлая форма гепатоцитов утрачивается, наружные

контуры приобретают вид изломанной линии. Такие гепатоциты называют тельцами Каунсилмена, которые недолго находятся в составе печеночной пластинки, подвергаются «мумификации» и выталкиваются в синусоиды. Эти тельца интенсивно окрашиваются эозином и часто приобретают форму полулуния. Часто встречали зональные и ацинарные некрозы, которые были видны в третьей зоне ацинуса. Это можно объяснить особенностями микроциркуляции данной зоны, наиболее отдаленной от источников кровоснабжения. Перивенулярные некрозы обычно определяются по ходу третьей зоны ацинуса, занимая благодаря этому территорию трех прилежащих гексагональных долек и приобретая треугольную форму, напоминая морскую звезду (колликвационный некроз). Повреждённые гепатоциты быстро лизируются, и в участках некроза происходит коллапс и конденсация ретикулиновых волокон. Вероятно, гепатоциты третьей зоны менее устойчивы к действию паразита и метаболитов распадающейся ткани самого хозяина. Выявили ступенчатый некроз, который характеризуется деструкцией печеночных клеток, происходящей на границе паренхимы и соединительной ткани с лимфоцитарной инфильтрацией. Стенки протоков утолщены за счет разрастания вокруг них плотной перидуктальной соединительной ткани, состоящей из грубых коллагеновых и аргирофильных волокон. Перидуктальные прослойки распространялись между печеночными дольками вплоть до портальных триад. На границе с прилежащей паренхимой печени септальная соединительная ткань имела более рыхлый вид, отечна, содержала значительное количество клеточных элементов: лимфоцитов, фибробластов, единичных макрофагов. Соединительная ткань, насыщенная клеточными элементами, является молодой тканью и присутствует как результат хронического воспаления и как показатель развития защитного блока -ксенопаразитарного барьера. Встречались разные варианты мостовидных некрозов: центроцентральный, центропортальный, портопортальный. Портопортальные мостики представляли собой обширные участки некроза, которые соединяются между собой. В воспалительном инфильтрате при экспериментальном описторхозе с мостовидными некрозами выявлялись макрофаги, лимфоциты и фибробласты, но последние клеточные формы по классическому варианту хронического паразитарного процесса должны были преобладать. В наших наблюдениях этого не установлено, что связываем с использованием в качестве экспериментальной модели описторхоза неспецифического хозяина.

Выявлено, что стенка протоков реконструировалась, и состояла из грубых, плотных коллагеновых волокон, образующих концентрические круги и широкие «муфты» вокруг протоков, сдавливая их просвет. Кроме этого наблюдали портальный и перипортальный фиброз, которые способствовали

развитию коллапса стромы, так как, разрастаясь, волокна сжимали паренхиму печени. В этой зоне встречались фибробласты, наблюдалась пролиферация желчных протоков, расширенные портальные поля, которые имели звездчатую форму за счет отхождения септ в паренхиму. Проявление фиброза является универсальной стереотипной реакцией печени, и указывает на хроническое течение болезни. Фиброзная ткань обеспечивает стабилизацию, изоляцию паразита, иммобилизируя его перемещение в паренхиму печени, выполняя роль ксеногостального барьера. Пролиферация желчных протоков является характерным патоморфологических признаком экспериментального описторхоза. Картина пролиферации протоков способствовала развитию синдрома длительного сдавливания (СДС), поэтому обнаруживалось скопление желчных пигментов в протоках и в гепатоцитах, наряду с яйцами описторхов. Обычно они не скапливаются в протоках, но при развитии СДС его стенок, происходит нарушение оттока желчи и разрушение половозрелых описторхов и яйца располагаются в протоках, в их стенке, и в строме среди гепатоцитов. Наблюдали гиперплазию с метаплазией эпителия протоков. Метаплазия в данном случае являлась отражением приспособления ткани к изменившимся условиям существования.

Шик-реакция показала распределение гликогена в виде зёрен, расположенных больше на периферии печени, и несколько меньше в центральной части печеночных долек. В целом тинкториальные свойства ткани были снижены, что подтверждает нарушение углеводного обмена.

3.2. Патоморфология поджелудочной железы золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе.

Микроморфология поджелудочной железы золотистых хомяков

(контрольная группа экспериментальных животных). Поджелудочная железа (pancreas) имеет классическое строение. Удалось выявить различные соотношения между ацинусами и конечными разветвлениями выводных протоков (вставочных отделов). Иногда отмечали, что вставочный отдел, расширяясь, прямо переходил в ацинус. Чаще всего дистальный конец вставочного отдела оказывался инвагинированным в полость ацинуса. В этом случае внутри ацинуса обнаруживались мелкие, неправильной формы клетки, образующие конечные разветвления вставочного отдела. Эти центроацинозные клетки имели, светлую цитоплазму и удлиненное крупное ядро, и характерны были для нормы, являясь отличительным признаком морфологии поджелудочной железы золотистых хомяков. Островки Лангерганса были хорошо выражены и их клетки имели четкую дифференцировку. Островки состояли из четырех групп клеток, различных по окрашиванию по методу Маллори. Отмечали наличие небольшого количества камбиальных клеток.

Микроморфологические исследования поджелудочной железы золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе показали, что, несмотря на отсутствие в ней трематод - описторхов, ткани панкреатической железы обладали морфофункциональной реактивностью. Основными патологическими процессами экспериментального описторхоза, как и в печени, являлись дистрофии разного типа. Наиболее выражены изменения в стенке протоков поджелудочной железы с развитием гипертрофии соединительной ткани. Наблюдали альтеративно-пролиферативные процессы. В поджелудочной железе происходила дифференцировка и трансформация клеточного состава, обнаруживали очаговые скопления лимфоцитов и фибробластов, в небольшом количестве определялись фиброциты и эозинофилы и реже встречались оседлые макрофаге. Междольковые выводные протоки местами были сужены за счет пролиферации эпителиальных клеток с образованием крупных выростов, выступающих в просвет протока, а также встречались сформированные менее разветвленные альвеолярно-тубулярные структуры, которые пронизывали всю толщу соединительнотканного слоя — это явление аденоматоза. Такая реконструкция клеток указывает на метапластический процесс. В просвете аденоматозных структур были пролифераты, состоящие из сплошной массы клеточных элементов эпителия. Это явление солидизации железистых структур. Эпителиальные вегетации в стенках панкреатических протоков были окружены прослойками из коллагеновых волокон. Наблюдалась гипертрофия соединительнотканной оболочки, бедной клеточными элементами, которая подверглась очаговому гиалинозу; были гипертрофированы междольковые прослойки соединительной ткани, местами содержавшие мелкие инфильтраты из лимфоидных клеток. Наибольшее разрастание стромы железы выявлено вблизи крупных выводных протоков. Вставочные протоки были выстланы однослойным плоским эпителием, который местами был десквамирован, местами набухшим. Вероятно, это результат межацинарного гипергидроза. В ацинусах наблюдалось скопление секрета, который имел углеводную природу. За счет этих гранул происходило увеличение размеров панкреоцитов, просвет ацинусов сужался и обтурировался секретом, что нарушало их функциональную морфологию. Во многих участках выявлялся фокальный некроз эпителиальной выстилки протока.

Островки Лангерганса выявлялись среди панкреатических ацинусов, но между эндокриноцитами разных типов сглаживались дифференциальные отличия, их тинкториальные свойства изменялись. Вблизи эндокринных островков обнаружены ациностровковые клетки, которые представляли собой функционально микст-клетки (смешанного типа). Известно, что такие клетки вырабатывают одновременно и гранулы зимогенов и гормонов. Между

эндокриноцитами определялась капиллярная инъекция. Вокруг островков Лангерганса также наблюдали очага кровоизлияния.

Гистохимическая реактивность тканей поджелудочной железы проявлялась положительной фуксинофилией при Шик-реакции. Апикальная часть эпителия протоков окрашивалась ярко-малиновым цветом, как и аденоматозные железы. Это свидетельствует о структурном сродстве аденоматозных структур с эпителиальной выстилкой протоков; при окраске АС они имели интенсивный голубой цвет, что указывает на скопление ГАГ, которые играют защитную роль.

3.3. Патоморфология двенадцатиперстной кишки золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе.

Микроморфология двенадцатиперстной кишки золотистых хомяков

(контрольная группа экспериментальных животных). Двенадцатиперстная кишка (duodenum) является одним из отделов тонкого кишечника, и стенка ее имеет следующие структурные компоненты: слизистая, подслизистая, мышечная и серозная оболочки. Вся поверхность слизистой оболочки покрыта небольшими выступами или выпячиваниями, называемые - ворсинки, между которыми есть впячивание - крипты. Последние содержат в себе железистые клетки. Ворсинки и крипты 12-перстной кишки покрыты однослойным каемчатым эпителием, который содержит много бокаловидных клеток. Железистые клетки выявляются на дне крипт. Они являются камбиальными участками, обеспечивающими восстановление эпителия ворсинок. Кроме этого в криптах встречаются клетки Панета и в глубине в небольшом количестве обнаруживаются аргентофильные или энтерохромаффинные клетки. Рельеф слизистой оболочки дуоденум контрольной группы хомяков носит равномерный характер без апикального утолщения, а также наблюдалась меньшая вариабельность формы и размеров либеркюновых крипт. Бруннеровы железы проходят через мышечную пластинку в собственную и располагаются под однослойным эпителием. При проведении гистохимических реакций на углеводный компонент нам удалось обнаружить положительное окрашивание их содержимого, что указывает на наличие в них мукоида. Альцианофилия хорошо выражена в слизистой оболочке ворсин и крипт.

При описторхозной инвазии золотистых хомяков в их двенадцатиперстной кишке выявлены нарушения структуры ее тканей. Микроскопическая картина показала, что ворсины слизистой оболочки были неодинаковой длины и толщины. Энтероциты эпителия, покрывающие ворсины и их боковые выросты были менее высокие по сравнению с таковыми крипт. Восприимчивость к гистологическим красителям этих клеток была снижена, в их апикальных отделах встречались аноксифильные вакуоли с включениями. Иногда обнаруживали кариолизис, нарушение структуры

апикальной части энтероцитов с её отторжением. Отмечали дистрофию и десквамацию апикальной части эпителия, в базальной части определяли интенсивную вакуолизацию. Дуоденальные крипты (либеркюновые железы), имели разную глубину, зачастую их просветы отсутствовали, за счет гипертрофии ворсин, которые при этом плотно прилегали друг к другу. Эти изменения прослеживались на всем протяжении дуоденума. Просветы крипт были сужены и практически не имели никакого содержимого. В ряде либеркюновых желез обнаруживали пролиферацию клеток, что является признаком гиперплазии эпителия. Количество Бруннеровых желез в подслизистой основе 12-перстной кишки было уменьшено по сравнению с нормой, при этом они определялись в виде небольших групп и не проникали в собственную пластинку. Собственная пластинка слизистой оболочки дуоденум была не одинаково утолщена за счет неодновременного разрастания волокон соединительной ткани, то есть прослеживалась неравномерная гипертрофия. Строма ворсин была разной толщины.

Наблюдали перерождение собственной и мышечной пластинок слизистой оболочки дуоденума золотистых хомяков. Подслизистая оболочка двенадцатиперстной кишки, представленная соединительнотканными волокнами, проявляла патологические признаки. Обнаруживали отек, неравномерную плотность и извилистый характер волокон, частичные их разрывы. Определялось развитие фиброзной ткани. Мышечная оболочка 12-перстной кишки имела гипертрофированный вид по сравнению с контролем.

Гистохимически при описторхозной инвазии эпителий ворсин проявлял слабую Шик-реакцию и отсутствие зёрен гликогена. В ворсинах проявлялись отрицательные реакции с АС и ТС, что показало отсутствие ГАГ. Реакция с БФС была незначительной (белковая дистрофия и дегенерация белковых комплексов). Апикальная часть эпителия крипт проявляла ярко-малиновое окрашивание муцинового секрета. Наблюдали выраженную пролиферацию Бруннеровых желез, проявляющих слабую реакцию при Шик-окрашивании. В клетках Панета и либеркюновых железах ворсин и крипт обнаруживались секреторные включения розового цвета с опалесценцией. Эпителий крипт проявлял альцианофилию и толуидинофилию с метахромазией, что демонстрирует высокие защитные возможности эпителия в патологии. Таким образом, можно говорить о том, что дуоденум выполняет роль ксеногостального барьера в развитии и формировании системы «паразит-хозяин» в эксперименте.

ГЛАВА 4. МИКРОМОРФОЛОГИЯ И ГИСТОХИМИЯ ТРИАДЫ ОРГАНОВ -ПЕЧЕНЬ, ПОДЖЕЛУДОЧНАЯ ЖЕЛЕЗА И ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНАЯ КИШКА -ЗОЛОТИСТЫХ ХОМЯКОВ ПОСЛЕ ЛЕЧЕНИЯ АНТИГЕЛЬМИНТИКАМИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ОПИСТОРХОЗЕ

4.1. Патоморфология печени золотистых хомяков с описторхозом после лечения эрлимом. Дистрофические процессы после лечения эрлимом проявлялись реакцией компенсации нарушенного внутриклеточного метаболизма, которая была связана с морфологическими перестройками клеток, клеточных сообществ или популяций. Клеточные дистрофии носили обратимый характер; снижалась выраженность «баллонной» дистрофии. Гепатоцшы приобретали нормальную полигональную форму и базофильность ядер, наблюдалось восстановление трабекул. Определялась митотическая активность гепатоцитов (наличие четко хроматинконтурируемых двуядерных клеток). Наблюдали повышение тканевой реактивности и усиление тинкториальных свойств гепатоцитов. Синусоиды не были расширены. Гиалиноз в межклеточных пространствах в печени не обнаруживали. Гепатоциты имели небольшое количество неравномерно распределенного гликогена в виде зёрен, явление углеводной дистрофии в целом снижалось. Некробиотические явления в ткани печени не выявлялись. В междольковых пространствах и в области триады печени соединительнотканные волокна были в виде тонких тяжей, фиброзные изменения не определялись.

После воздействия эрлимом явления вакуолизации гепатоцитов в печени были значительно снижены. Капиллярная инъекция ослаблена. В клетках печени выявлялись зёрна гликогена разной величины, располагающиеся хаотично в цитоплазме гепатоцитов, межклеточных пространствах и вдоль перегородок долек печени.

Гистохимическая реакция с АС показала, что после лечения сохранялись изменения в желчевыводящих протоках печени, которые были выражены аденоматозными структурами. Апикальная часть эпителия протоков и аденоматозных образований проявляли альцианофилию. В некоторых местах просвета главного желчевыводящего протока встречали погибших описторхов. Паразит имел патологические изменения, которые несовместимы с его жизнеспособностью. Покровная ткань паразитов была лизирована. Наблюдали гипергидроз паренхимы сосальщиков. На поверхности тела описторхов проявлялась альцианофилия, что можно объяснить выходом ГАГ из клеток внутренней части тегумента с образованием защитного слоя, который компенсирует функцию разрушенной наружной его части. Половые железы погибшего паразита имели разрушенное внутреннее содержимое, развитие гамет было прекращено, не удавалось увидеть дифференцированных клеток в

семенниках и яичниках. Желточники погибшего описторха были лизированы. Альцианофилия в органах половой системы не проявлялась.

В связи с тем, что эпителий главного желчного протока печени золотистого хомяка проявлял альцианофилию вокруг паразита, что указывает на гистохимическую мимикрию во взаимоотношениях между паразитом и хозяином, сохраняющуюся после действия антигельминтика для обоих партнеров в виде защитной зоны.

Таким образом, наблюдались восстановительные процессы морфологии и функции печени после лечения эрлимом, который оказывал токсическое воздействие на ткани и органы описторхов, наблюдалась гибель паразитов. Со стороны ткани печени, как эндостации, проявлялись реакции регенераторного плана, что указывает на эффективность препарата. Гистохимические методы окрашивания подтвердили восстановление тканевой реактивности паразита и хозяина.

4.2. Патоморфология поджелудочной железы золотистых хомяков с опнсторхозом после лечения эрлимом. Не наблюдали картины выраженного воспаления и межацинарного гипергидроза. Восстановительные процессы характеризовались нормализацией структуры простых и сложных ацинусов, снижением пролиферативных явлений и клеточной инфильтрации. Протоки вставочного типа обладали репаративной регенераций, то есть восстанавливали типичные для этой зоны клетки эпителия. В стенках протоков разного калибра не определялась гипертрофия незрелой соединительной ткани. В поджелудочной железе наблюдали снижение явлений гидропической дистрофии в ацинусах, а так же снижение скопления секрета из клеток (восстановление структуры ацинусов и секреторной функции их клеток). Определялось уменьшение разрастания соединительной ткани. Гиалиноз не обнаруживался. Инфильтраты из лимфоидных клеток не встречались. После лечения эрлимом островки Лангерганса восстанавливали свою дифференциальную картину. Выявление дву ядерных клеток является показателем пролиферативных процессов в эндокринных участках железы. После применения препарата выявлялось умеренное кровенаполнение мелких сосудов, в то же время была видимой картина активизации кровотока, что подтверждается резким снижением капиллярной инъекции.

Шик-реакция показала, что фуксинофильных зёрен было не очень много, и их окраска не имела опалесценции, что можно связать с активацией эвакуации секрета из клеток ацинусов железы. Местами в некоторых ацинусах наблюдались крупные вакуоли с глыбками, интенсивно окрашивающихся при Шик-реакции (т.е. восстановление секреторной функции идёт постепенно). Это углеводные соединения, которые не эвакуировались из ацинарных клеток, не проявляли опалесценции и не являлись гликогеном, что подтверждается

контрольными ферментативными реакциями. Отсутствие гликогена не следует рассматривать как отрицательный эффект воздействия антигельминтика, так как в контрольной группе у хомяков без описторхоза, в поджелудочной железе он не определялся.

4.3. Патоморфология двенадцатиперстной кишки золотистых хомяков с оиисторхозом после лечения эрлимом. Обнаруживали восстановление дифференцированности ворсин (пальцевидной и листовидной формы, и их боковых выростов). Энтероциты в апикальных отделах содержали небольшое количество аноксифильных вакуолей. Отмечали наличие десквамации эпителия в пределах физиологических проявлений и отсутствие вакуолизации в базальной части эпителия ворсин. После лечения эрлимом крипты приобретали обычные размеры, в них отсутствовали явления гиперплазии эпителия, восстанавливались тинкториальные свойства и секреторные функции. Последние данные подтверждались наличием секрета, со скапливающимися аргентофильными вакуолями в апикальной части железистых клеток, и наличием просвета в железах для эвакуации. В клетках крипт после воздействия эрлимом обнаруживали вакуоли с рыхлым содержимым и эозинофильные зёрна, что указывает на восстановление функции клеток и скоплении в них секреторных веществ. После лечения в криптах снова дифференцировались клетки Панета. Наблюдали снижение разрастания волокон, восстановление контурности структур, а также отсутствие фиброза. Структура гладкой мускулатуры 12-перстной кишки восстанавливалась, и были четко видны ее волокна.

В апикальных отделах эпителиальных клеток ворсин и крипт выявляли вакуоли с альцианофильными включениями, при этом до лечения их было значительно больше, как усиление защитной реакции. Постановка Шик-реакции показала снижение фуксинофилии как при описторхозе, так и после лечения. В первом случае это можно объяснить токсическим действием паразита, а во втором - реакцией антигельминтного препарата. Отмечено, что в энтероцитах дуоденума встречались Шик-положительные включения розового цвета с опалесценцией.

После лечения эрлимом гистохимические реакции демонстрировали восстановительные явления в морфологических структурах 12-перстной кишки: снижение вакуолизации базальной части эпителия; регенерация ворсин; нормализация тннкториальных свойств тканей.

4.4.Патоморфология печени экспериментальных животных с оиисторхозом после лечения экорсолом. Наблюдали картину частичного восстановления морфологии гепатоцитов и соединительнотканных структур. После воздействия экорсолом, кариопикноз в гепатоцитах не выявляли, клетки

имели четкие контуры с хорошо контурируемыми ядрами, прослеживались линии трабекул и просматривались синусоиды. Пролиферативные явления желчных протоков были минимальными, наблюдалось восстановление морфологии печени, а так же нормализация реактивности на гистологические красители. Портальные тракты также приобретали размеры близкие к норме, вокруг них выявляли наличие макрофагов и снижение явления клеточной инфильтрации.

Было выявлено, что экорсол действовал значительно на самого паразита, оказывал усиление патологических процессов в печени хозяина. В желчных протоках печени обнаруживали описторхов. Патология описторхов была выражена отсутствием яиц в петлях матки, что демонстрирует эффект стерилизации. Замечено незначительное количество незрелых дегенеративных яиц сосальщика. Паренхима паразита была местами разрушена и соединительнотканные её ячейки имели размытые контуры, периваскулярная жидкость в них не выявлялась, ячейки были запустевшими. Кишечник описторхов имел атрофированную эпителиальную выстилку и был забит гомогенной массой, что свидетельствовало о нарушении процессов пищеварения, вызванного антигельминтиком. Внутреннее содержимое половых желез - семенника и яичника было представлено смешанными клеточными элементами так, что определить их зоны развития гаметогенеза было невозможно. Желчный проток печени с погибшими описторхами был расширен, в нем просматривались аденоматозные структуры.

Реакция с БФС показала изменение тинкториальных свойств в положительную сторону, окраска тканей приобретала зелено-синее окрашивание, т.е. восстановление белкового обмена, а паразит имел коричневые тона, что указывает на белковую деградацию в его тканях.

Шик-реакция показала восстановление функций ткани печени: определялись зёрна гликогена небольшой величины в гепатоцитах и межклеточных пространствах. Преимущественное их расположение наблюдалось на периферии печени, и меньше вблизи портального тракта и центральной вены, но иногда они встречались между гепатоцитами вдоль трабекул. Кроме этого мелкие зёрна полисахарида обнаруживались вдоль перегородок долек печени.

Таким образом, на основании изучения патоморфологии и гистохимии тканей печени золотистых хомяков с описторхозом в эксперименте, установлены характерные морфофункциональные изменения, вызванные воздействием экорсола. Препарат оказывал токсическое воздействие как на ткани и органы описторхов, так и ткани хозяина, но в меньшей степени. Гистохимическая реактивность тканей в системе «паразит-хозяин» подтверждала факт эффективности экорсола.

4.5. Патоморфология поджелудочной железы золотистых хомяков с описторхозом после лечения экорсолом. Определялось снижение явлений гидропической дистрофии как в клетках ацинусов, так и в межацинарных пространствах; нормализация кровенаполнения крупных сосудов железы и снижение кровоизлияний в межацинарные пространства. Иногда вблизи магистральных сосудов обнаруживали сохранение небольших пластов гематомного типа, которые были похожи на гомогенную массу, что свидетельствует о рассасывании гематомы. Наблюдали снижение явления отека, сужение межацинарных пространств и нормализация структуры ацинусов железы. Секрет ацинарных клеток проявлял фуксинофилию, что является косвенным показателем нормализации функции железы. После воздействия экорсолом определялось снижение разрастания волокон соединительной ткани, но некоторая усиленность развитости коллагеновых волокон между ацинусами и вдоль крупных сосудов незначительно сохранялась.

Шик-реакция показала усиление фуксинофильности ацинусов панкреаса, зёрна гликогена разных размеров, больше их на периферии железы. Следует отметить, что этот полисахарид не характерен для скопления его в ацинусах панкреаса, поэтому его умеренная встречаемость вполне соответствует нормализации функции этого органа, и в то же время, наличие гликогена в клетках железы при описторхозе свидетельствует об извращенном характере его распределения и окрашивания.

4.6. Патоморфология двенадцатиперстной кишки золотистых хомяков с описторхозом после лечения экорсолом. Выявлено усиление слущивания апикальной части ворсин и восстановление их базальной структуры, разрушение энтероцлтов и отторжение их в просвет дуоденума. В базальной части эпителия ворсин наблюдали снижение вакуолизации. Крипты сохраняли разветвленность, которая была характерна до лечения, и имели место явления пролиферации эпителия, что является косвенным доказательством появления компенсаторных регенераторных процессов. Тинкториальные свойства тканей и секреторные функции дуоденума восстанавливались незначительно. Эти данные подтверждались гистохимически, наличием альцианофильного секрета скапливающегося в апикальной части железистых клеток. В энтероцитах крипт обнаруживали вакуоли с рыхлым содержимым, что указывает на восстановление их функции. В просвете 12-перстной кишки обнаруживали погибших описторхов с патологией тканей и органов: отсутствие наружного тегумента; вакуолизация и декомпозиция паренхимы; разрушение эпителия с отторжением его в просвет кишечника и нарушением функции пищеварения паразита; дегенерация яиц и органов половой системы (семенников, яичника, тельце Мелиса, простатической железы). У паразита прослеживалась картина снижения Шик-

положительной реакции, и наблюдалось изменение цвета окрашивания. Зёрна гликогена имели дегенеративную форму и в большинстве случаев представляли собой мелко распыленные частицы по всему телу гельминтов. Шик-реакция дала возможность выявить слияние ячеек паренхимы, образование больших, запустевших лакун, а также определить практически отсутствие реакции на мукопротеиды со стороны органов половой системы.

Шик-реакция, АС и ТС в 12-перстной кишке хозяина проявлялись слабо, что подтверждает токсическое воздействие экорсола.

4.7. Морфометрическнй анализ ядер гепатоцитов при экспериментальном опнсторхозе золотистых хомяков до и после лечения антигельминтиками (статистическая обработка результатов).

Анализируя полученные данные морфометрических исследований, и их статистическая обработка (Табл. 1) дали возможность, достоверно установить, что изменения размеров диаметра ядер гепатоцитов печени в зависимости от группы колебались в разных пределах и показатели эти значимы.

Таблица 1 - Статистический анализ параметров ядер гепатоцитов.

i ! N i „аб срсл,ь медиа i 1 мода на мнн. i макс. стд. ! лиспе 1 ср. i размах ¡ откл. ; рс. ; откл. ¡ j

норма 30 20,875 21,020 ; множ. 16,120 125,030 2,27753 ¡5,1871 1,8103 8,91000;

описторхо! ! 30 116,374 16,145 j множ. 12,130 |19,780 2,45650 16,0344 ¡2,0499 [7,65000

эрлим 30 12,925 экорсол 1 30 14,632 12,635 113,0400 15,080 ¡ множ. 9,690 119,310 Í1.370 18,010 2,50754 ¡6,2877 ¡ 1,9643 ¡9,62000 j 1,75000 3,0625 í 1,4643 6,64000 i • » ! » 1 » ,

После воздействия экорсолом мы наблюдали более выраженную патологию печени, поэтому стабилизация изменений диаметра ядер гепатоцитов является доказательством, что восстановительные процессы находятся в пролонгированном состоянии, то есть замедлены. После воздействия эрлимом наблюдалась положительная динамика изменений размеров диаметра ядер гепатоцитов, что указывает на активацию пролиферативных процессов, то есть имеет место репаративная регенерация клеток печени.

Результаты статистических исследований показали, что измерения размеров диаметра ядер гепатоцитов золотистых хомяков в эксперименте в разных группах, являются репрезентативными. Следует отметить, что р-уровень - это показатель, находящийся в убывающей зависимости от надежности результата. Более высокий /^-уровень соответствует более низкому уровню доверия к найденной в выборке зависимости между размерами диаметра ядер гепатоцитов и представляет собой вероятность ошибки, связанной с распространением наблюдаемого результата на всю популяцию ядер клеток печени экспериментальных животных разных групп. Результаты наших исследований были всегда ниже уровня р<,005 или р<,001, что следует считать их как высоко значимые. Необходимо отметить, что окончательный

результат был предсказан априори (т.е. до проведения опыта) в группе животных с экспериментальным описгорхозом. В то время как апостериорно это было доказано в группах после лечения описторхоза антигельминтиками в эксперименте.

ГЛАВА 5. ТКАНЕВЫЕ РЕАКЦИИ КАК КСЕНОГОСТАЛЬНАЯ СИСТЕМА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ОПИСТОРХОЗЕ ДО И ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ

АНТИГЕЛЬМИНТИКОВ

(Заключительное обсуждение)

Тканевые реакции в патологии многообразны, а все исследовательские данные морфологов добавляют к имеющимся классическим понятиям и фактам все новые и новые сведения. Любой чужеродный агент, попадающий в организм хозяина, вызывает раздражение различной силы и уровня ответных реакций, которые выступают в роли защитного барьера. В процессе формирования паразитарной системы на уровне «марита-хозяин» возникает ксеногостальный барьер, выполняющий защитные функции и образующийся из эпителия и соединительной ткани хозяина (Начева Л.В., Додонов М.В., Воробьева Е.И., 2005; Начева Л.В., Додонов М.В., 2007). В.Г.Елисеев (1961) представляет соединительную ткань как биологическую систему, осуществляющую комплекс вегетативных функций, в которой все находятся в теснейшем взаимодействии друг с другом, она живо реагирует на любые нарушения в организме, изменением морфофункциональных особенностей клеточных элементов. По мнению М.А.Пальцева, А.А.Иванова (1995) соединительная ткань и её производные объединяет другие ткани и органы структурно и интегрирует их по существу, обеспечивая полигранность функций. В процессе генеза ксеногостального барьера, «паразит» в эндостации хозяина осуществляет ряд необходимых действий: подача ложной информации - псевдоэффект; образование плотного контакта - адгезия; создание воровской зоны - клептомимикрия (Начева Л.В., 1993). Эти функциональные блоки способствуют достижению динамического взаимовыгодного соглашения, предотвращая иммунные конфликты. Паразитарная система находится в состоянии гомеостаза, при этом ксеногостальный барьер способствует коадаптации двух разных биологических видов и формированию гомеостатического равновесия в системе «паразит-хозяин» с развитием хронического адаптированного воспалительного процесса (Начева Л.В., Ткаченко Т.С., Додонов М.В., Воробьева Е.И., Басов A.B., 2007). Есть мнение, что в системе «паразит-хозяин» возникает состояние гомеореза (Додонов М.В., 2007), т.е. гомеорез - морфофункциональные взаимоСодействия двух чужеродных организмов, результатом, которого является взаимосохраняющая динамическая стабилизация (Беззаботнов Н.О., 2008). Это правомерно для исторически сложившейся паразитарной системы, а также и для формирования

паразитарной системы в эксперименте. Но между ними нельзя поставить тождество. Микроморфофункциональные тканевые перестройки в паразитарных системах эволюционно сложившихся и имеющих экспериментальный генез различаются степенью и силой адаптивных преобразований. В первом случае они будут больше выражены, чем во втором. В каждой из этих систем два сочлена, «паразит» и «хозяин» обладают гомеостазом, т.е. инвариантным состоянием каждого биологического вида в этой бинарной системе. Если между «паразитом» и «хозяином» возникает взаимоадаптация, то можно говорить о том, что паразитарная система состоялась. Это может произойти, когда возникает динамический гомеорезис данной паразитарной системы, которая обеспечивается морфологическими структурами, поддерживающими своё существование.

Система «паразит-хозяин» не может существовать вне взаимодействия, а это означает, что и представить ее функциональной или не функциональной нельзя, поскольку взаимодействие - это основополагающий признак (Воложин А.И., Субботин Ю.К., 1987; Кочетков А.Г., 1988). В данном случае, адаптацию следует рассматривать как сдвиг в функции или форме (структуре) для поддержания существования системы в определенной среде (Георгиевский А.Б., 1989). Взаимодействие организма со средой обитания, особенно в системе «паразит-хозяин», носит сложный многокомпонентный характер, разобраться в котором можно только на основе системного анализа. Реализация взаимодействия обязательно протекает в двух формах: первая характеризуется изменением биохимического состава бинарной системы, вторая проявляется в изменении ее пространственной и морфологической организации. В настоящий момент мы считаем, что формирование ксеногостального барьера в системе «паразит-хозяин» возможно при переходе системы в состояние гомеореза. В случае нарушения гомеорезиса происходит морфофункциональный «перелом» в ксеногостальном барьере и паразитарная система на этом уровне переходит в состояние гомеоклаза, то есть разрушаются защитные свойства барьера, что способствует появлению клинических признаков болезни, в данном случае -описторхоза. В то же время большой интерес вызывает взаимоадаптация на уровне «марита-ткань хозяина» и формирование ксеногостального барьера в экспериментальных условиях образования системы «паразит-хозяин» на примере паразитирования описторхов в организме золотистых хомяков.

После действия антигельминшков происходит разрушение взаимоадаптации в паразитарной системе на данном уровне. И мы можем наблюдать не разрушение её гомеорезисного состояния, а возникновение гомеоклаза, но при этом следует выделять два их варианта. С одной стороны, это может быть как разрешающая фаза развития бинарной системы, то есть её гибель, а с другой - может происходить усугубление этого гомеоклазисного

процесса, проявляющегося более выраженными патоморфологическими признаками в тканях и органах хозяина, которые находятся в новом состоянии - стадии дезадаптации и дезорганизации.

При изучении воздействия эрлима на органы и ткани паразита и хозяина было отмечено, что он эффективно воздействовал на описторхов, вызывая их гибель, и благоприятно влиял на ткани эндостации. Экорсол оказывал губительное действие на паразита, но не влиял на восстановительные процессы в тканях и органах самого хозяина.

Если сравнить составляющие этих двух антигельминтиков, то необходимо обозначить, что эрлим содержит пижму, имбирь, тысячелистник, корень одуванчика, хвощ полевой, полынь. Эти растительные ингредиенты способствуют нормализации работы пищеварительной системы хозяина. Препарат обладает противомикробным, противовоспалительным, противогрибковым, противопаразитарным, детоксицирующим, мочегонным, желчегонным, улучшающим деятельность ЖКТ, слабительным, регулирующим водно-солевой обмен, усиливающим лейкопоэз, антисклеротическим и антиаллергическим. Экорсол состоит из экстракта коры осины и солянки холмовой. Фармакологические эффекты коры осины определяются комплексом биологически активных веществ, которые обладают гельминтоцидным, желчегонным, противовоспалительным и спазмолитеческим действиями. В состав экорсола входит экстракт солянки холмовой, которая является гепатопротектором, нормализует функцию и метаболизм паренхимы печени, ускоряет регенерацию и восстановление функциональной активности гепатоцитов, улучшает окислительно-восстановительные процессы в печени. Но, при сравнении воздействия этих двух препаратов, мы наблюдали усиление воспалительной реакции ткани хозяина после экорсола.

Патоморфология экспериментального описторхоза была выражена дистрофическими процессами разной степени выраженности, с преобладанием пролиферативно-альтеративных реакций, с участками некробиоза, декомпозицией и дегенерацией гепатоцитов и сосудисто-стромальной архитектоники печени, поджелудочной железы и 12-перстной кишки хозяина, и разных жизненно важных структур паразита. Установили с помощью гистохимических методов снижение углеводно-белкового метаболизма в органах хозяина, в то же время его активацию у самих описторхов. После лечения эрлимом и экорсолом выявили, что максимальное токсическое воздействие на описторхов оказывали оба препарата, и это подтверждается выраженной патологией и необратимыми морфофункциональными изменениями органов и тканей гельминта. Но на ткань хозяина в сравнении наиболее благоприятно воздействовал эрлим, что может иметь значительные перспективы для его широкого использования в медицинской практике. В тоже

время было показано, что экорсол оказывал усиление степени патологии в тканевых системах триады органов хозяина, что указывает на возможность развития ухудшения общего состояния после лечения этим препаратом. Таким образом, при экспериментальном описторхозе золотистых хомяков воздействия антигельминтиков на органы и ткани паразита и хозяина не однозначны. Наиболее перспективным является эрлим, так как достаточно эффективно воздействует на описторхов, и щадяще - на триаду органов (печень, поджелудочную железу и 12-перстную кишку) хозяина, в то время как экорсол одинаково токсичен, как для паразита, так и для хозяина, и не может претендовать на приоритетность при выборе лечения описторхоза. Но в дальнейшем возможна разработка новых схем лечения с использованием экорсола.

ВЫВОДЫ

1. Микроморфофункциональные изменения в триаде органов (печень, поджелудочная железа и 12-ти перегнал кишка) при экспериментальном описторхозе золотистых хомяков были выражены: клеточными дистрофиями; фибротическими, некротическими и пролиферативными процессами; гиперплазией и метаплазией; гипертрофией и атрофией клеток.

2. Продуктивно-метапластические процессы (фиброз, аденоматоз, гиперплазия и метаплазия эпителия) являются неизбежными проявлениями в хронической стадии экспериментального описторхоза.

3. Микроморфология и гистохимия триады органов (печень, поджелудочная железа и 12-ти перегнал кишка) золотистых хомяков после лечения антигельминтиками при экспериментальном описторхозе имеет общие признаки: снижение патологических явлений, активизация восстановительных процессов тканей, появление клеточных регенераторных реакций, нормализация гистохимической реактивности.

4. При воздействии эрлимом наблюдалось восстановление морфологической архитектоники триады органов хозяина, реакциями компенсации нарушенного внутриклеточного метаболизма в виде цитологических перестроек, повышением гистохимической тканевой реактивности и тинкториальных свойств.

5. Воздействие экорсолом показало частичное восстановление морфофункциональных характеристик триады органов хозяина, сохранение дистрофических изменений и аденоматозных структур, местами наличие некробиоза, снижение гистохимической реактивности тканей.

6. Эрлим и экорсол, одинаково токсично воздействуют на описторхов, что проявляется атрофией кишечного эпителия и тегумента, лизисом паренхимы, резким снижением или отсутствием яиц в петлях матки, распадом

клеточных структур: семенников, тельца Мелиса, яичника, желточников, что обеспечивает эффект стерилизации гельминта.

7. Сравнительный анализ антигельминтиков растительного происхождения - эрлима и экорсола показал, что наиболее благоприятное воздействие на ткань хозяина оказывает эрлим, поэтому его можно считать приоритетным препаратом в терапии описторхоза.

Практические предложения

1. По результатам проведенных исследований разработано методическое пособие «Микроморфология и гистохимия печени, поджелудочной железы и 12-перстной кишки золотистых хомяков до и после лечения антигельминтиками при экспериментальном описторхозе», (Рассмотрено и одобрено на заседании секции «Инвазионные болезни животных» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии, 2012 г.).

2. Материалы экспериментальных исследований диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций, проведения практических занятий по паразитологии, патологической анатомии и фармакологии в КемГМА.

Список работ опубликованных по теме диссертации

1. Нестерок Ю.А. Действие бильтрицида на органы и ткани описторхов// ж. «Медицина в Кузбассе», приложение «Проблемы медицины и биологии». -Кемерово, 2008. - № 2. - С. 137.

2. Нестерок Ю.А. Морфологические особенности формирования гомеореза биологической системы «паразит-хозяин»/ Додонов М.В., Начева Л.В., Беззаботнов Н.О., Нестерок Ю.А.//В сб. «Актуальные вопросы медицинской биологии и паразитологию) по мат. юбилей, науч.-практ.конф., посвящ.200-летию каф. биол. им.акад. Е.НПавловского. - Санкт-Петербург, 2009. - С. 38-39.

3. Нестерок Ю.А. Патоморфология органов и тканей описторхов после лечения празиквантелем/ Беззаботнов Н.О., Нестерок Ю.А., Родионова В.А.// ж. «Медицина в Кузбассе», приложение «Проблемы медицины и биологии». -Кемерово, 2009. - С. 21.

4. Нестерок Ю.А. Микроморфология органов и тканей описторхов после действия экорсола/ Беззаботнов Н.О., Попова М.Г., Нестерок Ю.А.// ж. «Медицина в Кузбассе», приложение «Проблемы медицины и биологии». -Кемерово, 2009. - С. 21-22.

5. Нестерок Ю.А. Патоморфологаческие исследования органов и тканей описторхов после действия антигельминтиков в эксперименте/ Начева Л.В.,

Нестерок Ю.А.// Матер, докл. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - Москва, 2009. - С. 280-281.

6. Нестерок Ю.А. Патоморфология печени экспериментальных животных после лечения описторхоза празиквантелем и азиноксом/ Беззаботнов Н.О., Нестерок Ю.А,, Родионова В.А.// ж. «Медицина в Кузбассе», приложение «Проблемы медицины и биологию). - Кемерово, 2010. - №1. - С. 49.

7. Нестерок Ю.А. Патоморфология органов половой системы описторхов после воздействия экорсола в эксперименте/ Нестерок Ю.А., Попова М.Г.// ж. «Медицина в Кузбассе», приложение «Проблемы медицины и биологии». -Кемерово, 2010. -№1,- С. 161.

8. Нестерок Ю.А. Гистохимическая реактивность описторхов после лечения празиквантелем/ Нестерок Ю.А., Родионова В.А.// ж. «Медицина в Кузбассе», приложение «Проблемы медицины и биологии». - Кемерово, 2010-№1. - С. 161.

9. Нестерок Ю.А. Патоморфология органов и тканей Opisthorchis felineus (Rivolta, 1884) после воздействия экорсола/Нестерок Ю.А., Попова М.Г.// В сб. «Медико-биологические проблемы». - Кемерово-Москва, 2010. - С. 49-52.

10. Нестерок Ю.А. Гистохимические исследования распределения гликогена в органах и тканях OPISTHORCHIS FELINEUS, взятых после лечения антигельминтиками/ Начева Л.В., Бибик О.И., Нестерок Ю.А.// Матер, докл. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». -Москва, 2010.-С. 312-313.

11. Нестерок Ю.А. Гистохимические исследования печени золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе// Мат. межрег. науч.-практ. конф. молодых ученых и студентов с международ, участ. «Проблемы медицины и биологии». - Кемерово, 2011. - С. 132.

12. Нестерок Ю.А. Патоморфологический аспект дистрофических изменений печени золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе/ Нестерок Ю.А., Беззаботнов Н.О.// Мат. межрег. науч.-практ. конф. молодых ученых и студентов с между народ, участ. «Проблемы медицины и биологии». -Кемерово, 2011. - С. 132-133.

13. Нестерок Ю.А. Микроморфология дистрофии печени золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе/ Начева Л.В., Нестерок Ю.А., Беззаботнов Н.О.// Матер, докл. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - Москва, 2011. - С. 352-355.

14. Нестерок Ю.А. Клеточные реакции в печени при описторхозе/ Нестерок Ю.А., Литягина A.B., Додонов М.В.// Матер.докл, II Юб.науч,-практ.конф. с межд. уч., посвящ. 55-летию каф. общ. биол. с осн. ген. и паразит. КемГМА и 85-летию со дня рожд. д.б.н., проф. Е.Д.Логачёва «Теор. и практ. вопросы паразитологии». - Кемерово-Москва, 2011. - С. 51-53.

15. Нестерок Ю.А. Микроморфологические исследования органов и тканей хозяина при экспериментальном описторхозе после воздействия эрлима/ Начева JI.B., Нестерок Ю.А.// Cild 3, Proceedings of the Azerbaijan Society of Zoologists. - Baki-«Elm», 2011. - Vol.3.- S. 450-455.

16. Нестерок Ю.А. Цитологические реакции в печени и поджелудочной железе золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе/ Литягина А.В., Нестерок Ю.А, Колмогорова Т.О.// Мат. межрег. науч.-практ. конф. молодых ученых и студентов с международ, участ. «Проблемы медицины и биологии». - Кемерово, 2012. - С. 118.

17. Нестерок Ю.А. Воздействие антигельминтиков на органы и ткани паразита и хозяина при экспериментальном описторхозе/ Нестерок Ю.А., Литягина А.В., Мохонько Л. А., Миронова А.И.// Там же. - С. 135.

18. Нестерок Ю.А. Пролиферация желчных протоков как один из признаков экспериментального описторхоза/ Нестерок Ю.А., Беззаботнов Н.О., Биюшкина М.В.// Там же. - С. 136.

19. Нестерок Ю.А. Патоморфология двенадцатиперстной кишки золотистых хомяков с экспериментальным описторхозом после лечения эрлимом// В сб. «Медико-биологические проблемы». - Кемерово, 2012. - С. 56-58.

20. Нестерок Ю.А. Микроморфологические исследования органов и тканей хозяина при описторхозе в эксперименте после воздействия антигельминтиков растительного и синтетического происхождения/ Начева Л.В., Нестерок Ю.А.// Российский паразитологический журнал, 2012. - №2.- С.101-104.

21. Нестерок Ю.А. Морфометрический и статистический анализ ядер гепатоцитов в норме и при экспериментальном описторхозе золотистых хомяков/ Нестерок Ю.А., Начева Л.В., Додонов М.В., Литягина А.В.// Матер, докл. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». -Москва, 2012. - С. 280-283.

22. Нестерок Ю.А. Гистохимический анализ Шик-реакции поджелудочной железы золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе до и после лечения эрлимом/ Нестерок Ю.А., Начева Л.В., Беззаботнов Н.О.// Там же. - С. 284-286.

23. Нестерок Ю.А. Морфологические изменения печени и желчевыводящих протоков хомяков при экспериментальном описторхозе / Начева Л.В., Беззаботнов Н.О., Нестерок Ю.А., Литягина А.В. //Вестник Бурятского государственного университета, 2013. - №4. - С.170-174.

Подписано в печать: 2 августа 2013 г.

Заказ № 843 6 Тираж - 100 экз. Печать трафаретная Типография «Eugen - home» 650068, Кемерово, В. Толстикова, 5

Текст научной работыДиссертация по биологии, кандидата биологических наук, Нестерок, Юлия Александровна, Москва

Государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего профессионального образования «Кемеровская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации

04201360929

На правах рукописи

НЕСТЕРОК ЮЛИЯ АЛЕКСАНДРОВНА

МИКРОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ТРИАДЫ

ОРГАНОВ - ПЕЧЕНЬ, ПОДЖЕЛУДОЧНАЯ ЖЕЛЕЗА И ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНАЯ КИШКА - ПОСЛЕ ДЕЙСТВИЯ АНТИГЕЛЬМИНТИКОВ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ

ОПИСТОРХОЗЕ

Специальность 03.02.11 - паразитология

Диссертация

на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель:

д.б.н, профессор Начева Любовь Васильевна

Москва - 2013

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

ВВЕДЕНИЕ 4

ГЛАВА 1. ВОЗДЕЙСТВИЕ АНТИГЕЛЬМИНТИКОВ НА ОРГАНЫ И ТКАНИ ПАРАЗИТА И ХОЗЯИНА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ОПИСТОРХОЗЕ (Обзор литературы) 9

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 24

ГЛАВА 3. МИКРОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ТРИАДЫ ОРГАНОВ ЗОЛОТИСТЫХ ХОМЯКОВ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ОПИСТОРХОЗЕ 36

ЗЛ.Патоморфология печени золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе 36

3.2. Патоморфология поджелудочной железы золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе 51

3.3. Патоморфология двенадцатиперстной кишки золотистых хомяков

при экспериментальном описторхозе 61

ГЛАВА 4. МИКРОМОРФОЛОГИЯ И ГИСТОХИМИЯ ТРИАДЫ ОРГАНОВ - ПЕЧЕНЬ, ПОДЖЕЛУДОЧНАЯ ЖЕЛЕЗА И ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНАЯ КИШКА - ЗОЛОТИСТЫХ ХОМЯКОВ ПОСЛЕ ЛЕЧЕНИЯ АНТИГЕЛЬМИНТИКАМИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ОПИСТОРХОЗЕ 72

4.1.Патоморфология печени золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе после лечения эрлимом 72

4.2. Патоморфология поджелудочной железы золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе после лечения эрлимом 80

4.3. Патоморфология двенадцатиперстной кишки золотистых хомяков

при экспериментальном описторхозе после лечения эрлимом 88

4.4.Патоморфология печени золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе после лечения экорсолом 93

4.5. Патоморфология поджелудочной железы золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе после лечения экорсолом 102

4.6. Патоморфология двенадцатиперстной кишки золотистых хомяков

при экспериментальном описторхозе после лечения экорсолом Ю9

4.7.Морфометрический анализ ядер гепатоцитов при экспериментальном описторхозе золотистых хомяков до и после лечения антигельминтиками (статистическая обработка результатов)

ГЛАВА 5. ТКАНЕВЫЕ РЕАКЦИИ КАК КСЕНОГОСТАЛЬНАЯ СИСТЕМА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ОПИСТОРХОЗЕ ДО И ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ АНТИГЕЛЬМИНТИКОВ

(Заключительное обсуждение) 123

ВЫВОДЫ 145

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 146

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 147

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 149

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. В настоящее время описторхоз отнесен к группе наиболее опасных биогельминтозов, две трети мирового ареала которого приходятся на территорию России (Озерецковская H.H., Сергиев В.П., 1993; Сергиев ВН., Лебедева М.Н., 1997; Федоров К.П., Наумов В.А., и др., 2002; Начева JI.B., Бибик О.И. и др., 2007). Значимость данного трематодоза и его осложнений определяется тем, что длительное течение болезни, быстрое по темпам и массовости вовлечение в процесс новых контингентов населения, существенно снижают активность и потенциал жизни инвазированных (Сергиев В.П., 1991; Бычков В.Г., 1992). Сложная эпидемиологическая обстановка побудила ученых и практических врачей к активному поиску и внедрению эффективных антигельминтных препаратов (включая и отечественные препараты) позволяющих достичь полной дегельминтизации широкого контингента зараженных (Лебедева М.Н, Михайлицын Ф.С., Сергиев В. П. и др., 2001; Бибик О.И., Начева Л.В., 2010). Хронический описторхоз рассматривается как общее заболевание, при котором страдает весь организм. Но доминирующим поражением является симптомокомплекс органов гепатобилиарной системы с различными функциональными нарушениями в ней (Белобородова Э.И., Калюжина М.И., Тиличенко Ю.А. и др., 1996). Проблема разработки новых эффективных методов лечения остается одной из актуальных и требует нового решения, предусматривающего использования современных подходов и современных медицинских технологий (Поддубная O.A., 2010). Для лечения описторхоза сегодня используется эффективное (85,5%) растительное средство экорсол (Мозжелин М.Е., Кадуков Д.В., 2001) и разработан растительный препарат эрлим (Турьянов М.Х., Погорельская Л. В., Калинина A.A., 2005). Но очень важным аспектом изучения следует считать патоморфологические исследования органов и тканей трематод после воздействия антигельминтиков, что может способствовать поиску новых препаратов с более улучшенными

трематодоцидными свойствами. Проводился патоморфологический контроль эффективности воздействия антигельминтиков на органы и ткани описторхов (НачеваЛ.В., 1993; Бибик О.И., 1997).

На сегодняшний день в паразитологии остаётся много вопросов в теоретическом и практическом плане, которые не нашли должного освещения, не изучены патоморфологические и гистохимические особенности органов и тканей паразита и хозяина, как до, так и после воздействия антигельминтиков в эксперименте. Хотя в целом существуют работы, посвященные патологии описторхоза (Зубов H.A., 1973; Астафьев Б.А., 1986), но они касаются или микроморфологии печени при хроническом описторхозе (Штейнпрейс Т.А., 2000), или триады органов (Додонов MB., 2007), или самого гельминта (Начева JI.B., Бибик О.И., Гребенщиков В.М., 2000). Мало проводится экспериментальных исследований, направленных на изучение микроморфофункциональных механизмов взаимоотношений в паразитарной системе в эксперименте до и после воздействия препарата. Актуальным является подход к изучению вопросов патологии органов и тканей в системе «паразит-хозяин» с точки зрения системогенеза в сравнительном аспекте. Не разработаны патоморфологические и гистохимические критерии оценки эффективности действия антигельминтиков растительного происхождения.

Цель исследования. Установить микроморфологические изменения и гистохимическую реактивность триады органов (печень, поджелудочная железа и двенадцатиперстная кишка) золотистых хомяков после воздействия антигельминтиков (эрлима и экорсола) при экспериментальном описторхозе.

Задачи исследования:

1. Изучить микроморфологию триады органов: печень, поджелудочная железа и двенадцатиперстная кишка золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе.

2. Изучить микроморфологию триады органов: печень, поджелудочная железа и двенадцатиперстная кишка золотистых хомяков при описторхозе после воздействия эрлимом и экорсолом в эксперименте.

3. Провести гистохимический анализ тканевой реактивности органов: печень, поджелудочная железа и двенадцатиперстная кишка золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе до и после воздействия эрлимом и экорсолом.

4. Разработать патоморфологические критерии оценки эффективности воздействия антигельминтиков на органы и ткани паразита и хозяина.

Научная новизна работы;

1. Впервые изучено в сравнительном аспекте воздействие антигельминтиков растительного происхождения - эрлима и экорсола на триаду органов (печень, поджелудочную железу и 12-перстную кишку) золотистых хомяков при экспериментальном описторхозе и показано их различное действие на ткани с учетом их фармакогностических свойств.

2. Определены патоморфологические признаки триады органов, характеризующие экспериментальный описторхоз: дистрофии разного типа; некробиотические явления; гиперплазия эпителия с метаплазией, фиброз и пролиферация самих протоков; капиллярная инъекция и диапедез сосудов; снижение тинкториальных свойств и гистохимической реактивности тканей хозяина, выраженных торможением углеводно-белкового метаболизма.

3. Установлено, что эрлим эффективно воздействовал на ткани и органы описторхов, вызывая глубокую патологию и гибель паразита, и благоприятно влиял на восстановление микроморфологии триады органов хозяина. Экорсол оказывал губительное действие на паразита, но не влиял на восстановительные процессы в тканях и органах самого хозяина.

Практическая значимость работы.

1. Для учебного процесса:

Результаты исследования могут использоваться при обучении клинических ординаторов, интернов, аспирантов медицинских и ветеринарных Вузов; включаться в лекционный и учебно-методический материал обучения студентов.

2. Для практического использования:

2.1. Теоретические положения могут быть применены в научно-исследовательской работе лабораторий и НИИ соответствующего профиля для сравнительного морфофункционального анализа изменений триады органов (печень, поджелудочная железа и двенадцатиперстная кишка) золотистых хомяков после действия антигельминтиков растительного происхождения.

2.2. Результаты, полученные при микроморфологических исследованиях триады органов экспериментальных животных, могут быть использованы в лабораториях и НИИ соответствующего профиля для создания новых антигельминтных препаратов, оказывающих токсическое действие на паразитов, и благоприятное влияние на хозяина.

3. Для практического здравоохранения:

Новые данные функциональной морфологии будут способствовать формированию теоретической базы к созданию более эффективных схем профилактики, выявления и лечения трематодозов инфекционистами, паразитологами, эпидемиологами, иммунологами, терапевтами, семейными врачами.

4. Внедрение методических разработок.

ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1 .Дистрофические, пролиферативные, гиперпластические, фибротические, метапластические, некробиотические и некротические процессы в печени, поджелудочной железе и двенадцатиперстной кишке характеризуют хронический описторхоз в эксперименте.

Апробация диссертации. Материалы диссертации были доложены:

Межрегиональная научно-практическая конференция молодых ученых и студентов «Проблемы медицины и биологии» (г. Кемерово, апрель 2008, 2009, 2010, 2011, 2112 гг.); Всероссийская научная конференция «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (г. Москва, май 2009, 2010, 2011, 2012 гг.); Юбилейная научно-практическая конференция, посвященная 200-летию кафедры биологии имени академика Е.Н.Павловского «Актуальные вопросы медицинской биологии и паразитологии» (г. Санкт-Петербург, 26-27 марта 2009г); II Юбилейная научно-практическая конференция с международным участием, посвященная 55-летию кафедры общей биологии с основами генетики и паразитологии КемГма и 85-летию со дня рождения доктора биологических наук, профессора Е.Д.Логачёва «Теоретические и практические вопросы паразитологии» (г. Кемерово, 26-27 мая, 2011 г.).

ГЛАВА 1. ВОЗДЕЙСТВИЕ АНТИГЕЛЬМИНТИКОВ НА ОРГАНЫ И ТКАНИ ПАРАЗИТА И ХОЗЯИНА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ

ОПИСТОРХОЗЕ

(Обзор литературы)

В течение многих десятилетий XX и XXI веков изучались с разных сторон антигельминтные препараты, и проводились исследования по их воздействию на организм паразита. За этот период сделаны обзоры применяемых антигельминтиков и используемых методов лечения гельминтозов, включая трематодозы. Среди них наиболее интересны и актуальны были работы Карнаухова В.К. (1978), Демидова Н.В. и Потемкиной В.А. (1980). Изучалась эффективность действия препаратов при дегельминтизации животных и лечении человека разными учеными (Плотников Н.Н. с соавт., 1964, 1966, 1969; Дроздов В.Н., 1965; Скаредное Н.И., 1969; Anderews Р., 1978; Баягин В.Н., 1979; Гицу Г.А., 1983; Groning Е. at all., 1985; Jong Е. at all, 1985). Авторами был издан ряд практических рекомендаций (Демидов В.Н., Горохов В.В., 1960; Надыкто М.В., 1971-1973; Требухин М.В., 1974; Архипов И.А., 1976; Озерецковская Н.Н., Алексеева М.И., Калабухова Н.Ф., 1983; Бронштейн А.М. с соавт., 1988).

В конце 70-х годов XX века были определены перспективные направления химиотерапии и химиопрофилактики трематодозов (Рыжиков К.М., 1977, 1978; Русак Л.В., Чистяков Д.А., 1983; Баяндина Д.Г., Драбкина А.А., Кротов А.И., 1989; Лысенко А.Я., 1984; Цизин Ю.С. с соавт., 1985 и т.д.), в том числе и описторхоза.

Предпринимались многочисленные попытки систематизировать препараты, обладающие антигельминтным действием. Существовали принципы классификации, по которым препараты разделяли на vermífuga (средства, изгоняющие паразитов) и vermicida (средства, убивающие паразитов). Они основывались на том, что только некоторые из препаратов вне организмов убивают гельминтов, тогда как другие подобного действия не оказывают. Предполагалось, что свойства оглушать или убивать паразитических червей

приобретаются благодаря превращению препаратов в кишечнике (Кравков Н.П., 1904-1905).

В 1954 году В.П.Парибок разделил антигельминтики на специфические, «действующие избирательно на паразитических червей», и неспецифические, «способные оказывать одинаково сильное действие, как на гельминтов, так и на хозяина». Такой принцип классификации не оправдал себя с научной точки зрения и не нашел дальнейшего использования.

Было составлено несколько классификаций антигельминтных средств (Демидов Н.В., Вишняускас А.И., 1971). Изучался механизм действия некоторых антигельминтиков на трематод (Гевондян B.C., 1971).

В связи с тем, что фармакологические средства делят по химическим группам, и в ряде случаев каждой группе присущи определенные биологические свойства, была предложена другая классификация антигельминтиков по основному механизму их действия на паразитических червей (Кротов А.И., 1970, 1971). При этом учитывался ряд других свойств препаратов и были выделены шесть групп антигельминтиков:

1. Клеточные яды: с преобладающими наркотическими свойствами (наиболее известный препарат гексахлорпараксилол, или хлоксил); с преобладающим «прижигающим» действием (гептилрезорцин и гексилрезорцин); с другими свойствами (хеноподиевое масло).

2. Средства, нарушающие процессы нервно-мышечной регуляции: действующие сходно с холиномиметическими веществами и сами холиномиметики (никотин, сантонин, дитразин, карбохолин); антихолинэстеразные вещества (фосфорорганические вещества, эметин); действующие сходно с холинолитическими веществами или веществами, влияющими на адренореактивные системы (пиперазин и его соли, метиридин, семена тыквы).

3. Средства, парализующие нервно-мышечную систему преимущественно плоских червей, разрушающие их покровные ткани или выделительную систему:

препараты мужского папоротника, кора гранатника, камала, тельмезан, фенасал, трихлорофен, дихлорофен, гексахлорофен, битионол.

4. Средства, действующие преимущественно на энергетические процессы: усиливающие аэробное дыхание (кислород, метиленовый синий); подавляющие гликолиз (препараты сурьмы, амбильгар, тетрамизол, препараты меди и фтора); действующие на активность ряда ферментативных процессов (акрихин, аминоакрихин, хлорохин, фенотиазин, осарсол, тиабендазол); подавляющие аэробное дыхание и нарушающие всасывание углеводов в кишечнике (дитиазанин, пирвиний памоат).

5. Протеолитические ферменты, переваривающие ткани живых гельминтов (папаин и др.).

6. Средства с невыясненным механизмом действия (препараты кадмия, мирацил D, монопар, генцианвиолет, тимоловый эфир пальмитиновой кислоты). Автор считал, что данная классификация (из всех, которые есть) является прогрессивной, т.к. она наиболее тесно связана с физиологией гельминтов, а новые знания биохимии и физиологии паразитических червей крайне важны для разработки наиболее рациональной терапии гельминтозов. Построение такой классификации весьма сложно, потому что механизм действия многих антигельминтиков всесторонне не изучен. Но эта классификация легла в основу поиска новых антигельминтиков с высокими качественными характеристиками.

В 1980 году Н.В. Демидов и В.А. Потемкина предложили, для удобства практического использования, разбить антигельминтики не по механизму действия, а по их эффективности влияния на типы и классы па�

Информация о работе

Нестерок, Юлия Александровна
кандидата биологических наук
Москва, 2013
ВАК 03.02.11

Диссертация

Микроморфологические исследования триады органов-печень, поджелудочная железа и двенадцатиперстная кишка-после действия антигельминтиков при экспериментальном описторхозе - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы