Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Патоморфология и гистохимическая реактивность органов и тканей трематод после действия антигельминтиков

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Патоморфология и гистохимическая реактивность органов и тканей трематод после действия антигельминтиков"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ Р Г б ^^жнташгии к-и- СКРЯБИНА

На правах рукописи

БИЕИК Оксана Ивановна

ПАТОМОРФОЛОГИЯ И ГИСТОХИМИЧЕСКАЯ РЕАКТИВНОСТЬ ОРГАНОВ И ТКАНЕЙ ТРЕМАТОД ПОСЛЕ ДЕЙСТВИЯ ЖГИГЕЛЬМИНТИКОВ

Специальность 03.00.19 - паразитология, гельминтология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1997

Работа выполнена на базе кафедры биологии Кемеровской Государственной медицинской академии и лаборатории экспериментальной терапии Всероссийского института гельминтологии имени К.И.Скрябина.

Научпьгй руководитель-доктор биологических наук, профессор Л.В.Начева

Научны! копсультант-доктор ветеринарных наук И.А.Архипов

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор ВИГИС К.И. Бенедиктов, кандидат ветеринарных наук, доцент МАВмиБ им. К.И.Скрябина A.B. Степанов.

Ведущая организация: Институт Паразитологии РАК

Защита диссертации состоится " {' "и.сччг <ау_1597г.

в "fY " часов на заседании диссертационного совета Д-020.04.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте имени К.И.Скрябина.

Адрес: 117S59, г.Москва, Б,Черемушкинская ул., дом ES.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке ВИГИС Автореферат разослан " f " Ы-tL-C^Ji^- _1997г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

В.К. Бережко

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность. Среди проблем, которые стоят перед паразитологами нашей страны, есть более срочные и острые, на нет более масштабной и социальна-значимой, чем оздоровление населения и животных от гельминтозов.

Многолетний опыт проведения массовых мероприятий показал, что ликвидация гельминтозов человека и животных на территории такой большой страны, как наша Россия - задача трудновыполнимая.

Медико-профилактические мероприятия не имеют в настоящее время широкого охвата населения, а отдельные .гельминтозы в последние годы получили еще большее распространение- Это связано с резким ухудшением социальных условий жизни и миграцией населения.

В свяви с тем, что трематодоеы широко распространены на территории нашей страны, гельминтологами разработана комплексная система мероприятий, направленная на ликвидацию в нашей стране ряда гельминтозов, причиняющих огромный вред здоровью человека и ущерб народному хозяйству. Наиболее действенной мерой в настоящее время является химиотерапия.

Для познания механизма действия гельминтоцидных препаратов и изысканий оценки новых трематодоцидных веществ первостепенным и необходимым является изучение микроморфологии тканей трематод и их гистохимической картины под воздействием антигелъминтиков.

Проведение патоморфологических исследований и изучение гистохимической реактивности органов и тканей трематод после действия антигелъминтиков позволяет более полно распознать механизм антигельминтного действия и дает возможность рационального подхода к применению равличных лекарственных средств, обладающих трематодоцидными свойствами.

Дель и задачи исследований. Цель налшх исследований -выявить микраморфофункционадьные механизмы действия ряда антигелъминтиков на органы и ткани трематод и разработать метод патоморфологического контроля эффективности действия различных препаратов при трематодозах.

Для выполнения поставленной цели мы считаем необходимым изучить:

- особенности патоморфологии и гистохимической реактивности органов и тканей описторхов после действия медамина,

артемиэина, мебендазола и комбинации празиквантела и мебек-дазола;

- особенности патоморфологии органов и тканей фасциол после действия политрема и тетраксихола;

- изменение органов и тканей дикроцелий и их гистохимическую реактивность после действия дшалана, кубена, панаку-ра и фебантела;

- гистохимическую реактивность и патологические изменения органов и тканей парамфистом!после действия тетраксихола, и :■>'".

- провести морфометрический анализ яиц трематод в норме и после действия.различных антигельминтиков.

Новизна исследований^ .'.впервые -показана патоморфология' и гистохимическая реактивность■-органов1 и тканей парамфистом после действия тетраксихола;'-' Выявлены "особенности действия на органы я ткани трематод: медамина, артемизина и комбинации мебендаеола с празиквантелем при экспериментальном опио-торхозе золотистых; хомячков; фебантела," панакура'^ кубена и дисапана лрл спонтанном дикроцелиоз'ё"' • • овец,- тетраксихола и .политрема ;.при .фасциолезе овец; тетраксихола прй1 :парамфисто-матозе крупного, рогатого скота. Впервые -дан'Шр<$Ьйётрический анализ яиц дикроцелий после: действия кубб&а1Сй'!йисалаяа.

Практическая значимость. Покрученные результаты по изучению патоморфологии и гистохимической реактивности органов и тканей трематод после действия антигельминтиков можно использовать для контроля антигельминтной эффективности новых лекарственных препаратов и о целью выяснения ' механизма их действия. Этим методом- нами впервые выявлена эффективность дисалана против дикроцелий. Метод морфшетрии трематод позволяет оценить воздействие.на них различных препаратов. Установлено овоцидное действие дшалана и кубена на яйца дикроцелий и.медамина и артемиэина на яйца описторхов. Материалы диссертации используются*при обучении студентов ветеринарных, медицинских и биологических факультетов -ВУЗов.

Апробация диссертации. Материалы диссертации были" доложены на.Всероссийских.конференциях ВОГ по проблемам гельминтологии (1394...1995гг.) в г.Москве, международной конференции "Фундаментальные и прикладные проблемы охраны округкающей среды" (1995) >в г.Томске, научной конференций"Новосибирского отделения Паразитологического общества РАН по теме "Паразиты и п,аразитарные болезни.в Западной Сибири" (1996) в г.Новосибирске, Всероссийской научно-практической конференции, пос-

вященной 70-летию со дня рождения профессора, д.б.н. Е.Д.Логачева (1996) в г.Кемерово, научно-практической конференции, посвященной 40 - летию КГМА (1995) в г.Кемерово, межрегиональной научно-практической конференции по теме "Актуальные вопросы клинической иммунологии" (1996) в г.Кемерово.

Положения, выносимые на защиту:

1. Патоморфологический анализ и гистохимическая реактивность органов и тканей ошсторхов после действия медами-на, артемизина, мебендазола и комбинации празиквантела и мебендазола.

2. Изменения органов и тканей фасциол после действия политрема и тетраксихола.

3. Особенности патоморфологии и гистохимической реактивности органов и тканей дикроцелий после действия дисала-на, кубена, панакура и шебачтела.

4. Патологическое действие тетраксихола на органы и ткани парамфистом.

5. Морфометрический анализ яиц трематод в норме и после действия различных антигельминтиков.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 работ.

Объем и структура диссертации.

Диссертация состоит из введения, 4 глав, заключительного обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 296 работ (из них на русском - 233, на иностранном языке - 63). Работа изложена на 175 страницах машинописи, проиллюстрирована 4 таблицами и 40 рисунками.

В обворе литературы в хронологической последовательности изложены данные по изучению патоморфологии органов и тканей трематод при действии антигельминтиков.

Патоморфология органов и тканей трематод и их гистохимическая реактивность после токсического действия противо-гедьминтных препаратов исследовались в основном Г.К.Резник (19В4, 1965, 1958-1970, 1972). Н.Г.Кошкиной (1969, 1970, 1984), Л.В.Начевой (1974, 1977, 1981, 1986, 1993, 1994), В.М.Гребенщиковым (1984, 1985, 1994).

Работы Г. К.Резник (1959-1952), 0.А.Кублицкене (1953), А.Л.Арутюнова (1970-1974) были посвящены в основном гистологическим и гистохимическим исследованиям изменений трематод после действия гетола, гексахлорпараксилола и четыреххлорис-того углерода при экспериментальном фасциолезе и дикроцелио-зе животных.

- d -

Другими авторами (Кротов А.И., 1958, 1970, 1971; Демидов К.В.. Еишняускас А,И., 1971; Gabev Е.Е., Bogoeva M.V., 1994)""составлено несколько классификаций по механизму действия антигельминтиков на органы и ткани паразитов.

Высказаны разные мнения о специфическом действии трематодоцидкых средств на паразитов .(Гевондян B.C., 1971; Денисова Л.И., 1980; Кошкина Н.Г., Солокенко И.Г., 1981; Дроздов В.Н., Кошкина Н.Г., Логачев Е.Д., 1S84).

Г.К.Резник (1968), В.М.Гребещиковым (1S84), Н.Г.Кошкиной, М.Г.Солоненко (19845 и Л.В.Начевой (1986, 1993) определено, что патоморфологическш контроль может быть критерием оценки действия антигельминтиков ка органы и ткани паразитических червей.

Многие исследователи посвятили свои работы . анализу действия противогельминтных средств на ткани равных стадий развития трематод, полученных при экспериментальных моделях гельмиятозов (Резник Г.К., 1965, 197Е; Кублецкене O.A., 1970; Сташайтис Ю.Н., 1971, 1980; Ханбегян P.A., 1971; Кротов A.M., 1973; Алиев A.A., 1374; Кошкина К.Г., 1984;.Богоявленский Ю.К., Начева Л.Б., 1984, 1988).

Большое количество работ посвящено изучению эффективности действия препаратов при дегельминтизации животных и дечешш человека (Плотников H.H., 1964, 1966, 1969; Дольни-KGB D.H., 1966, 1970; Скаредков К.К., 1969; Аюпов A.A., 1972: Гицу Г.А., 1983; Groning Е., 1985; Баяндина Б.Г., 1986).

Практические рзюмендьщш была даны для использования различных антигельминтных средств в медицине и ветеринарии В.Н.Демидовым и В.В.Гороховым (I960), М.В.Надыкто (19711973), М.В.Требухиным (1974), Й.А.Архиповым (1975), Н.Н.Озе-рецковской, М.И.Алексеевой и Н.Ф.Калабуховой (1983), A.M. Бронштейном (1988).

Б работах" ряда авторов (Кублицкене O.A., 1970; Резник Г.'К., 1972; СтЙяайтис Ю.Н., 1971'Г Ханбегян P.A., 1971, 1976; Becker В. с соавт,,'1980; Fairweather J. с соавт., 1986; Начева Л. В. , 1993) описывается влияние разных антигельминтиков на ткани и ферментативную активность внешнего покрова фасци-ол.

Данные других авторов (Watts S.D. с соавт., 1979; Walker Е., Chapeïl L., 1980; Becker В. с соавт., 1980;Xiao Shu-nua с соавт., 1981, 1984, 1986; Shaw M.К., Erasmus D.A., 1S83; Díefrich V/., 1984; Leitch В., Probert А., 1984; Senft

к.Ч. о соавт., 1986; Harder к. с саавт., 1987) посвящены вопросам влияния ряда антигельминтиков на морфологию и гистохимическую реактивность органов и тканей шстосом.

Приведены данные патоморфологического и гистохимического анализа действии прагиквантеля и других антигельминтиков на органы и ткани олисторхов (Богоявленский Ю.К., Начева Л.В. с соавт., 1985, 1985, 1S8S).

Большинство работ в нашей стране посвящено изучению эффективности лекарственных препаратов при описторхове (Стра-женских А.Н. и др., 1990; Бычкова Н.К., Балашева И.И., 1993; Озерецковская H.H., Сергиев В.П., 1993; Ошмарина О.В., Максимова Э.А., 1993; Чуйкова К.П., 1993; Кортев А.й. и др., 1994; Пальцев А.И., 1994).

Литературные данные демонстрируют фрагментарность изучения вопросов механизма действия антигельминтиков на паразитов, а начиная с 1990 года наблюдается спад объема научных исследований в области гистологии и патоморфологии.

В отдельной главе приведена краткая справка о характеристике отечественных и зарубежных антигельминтиков и антипаразитарных веществ, используемых в эксперименте, среди которых как наиболее применяемые при данных гельминтовах в настоящее время (хлоксил, политрем, мебендазол, панакур, празиквантел, фебантел), так и малоизученные (медамин, ку-бен, тетраксихол, дисалан, артемизин).

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования служили трематоды: Opistborchis felineus (Rivolta, 1884), полученные из желчных протоков печени золотистых хомячков при экспериментальном заражении на базе ИМПиТМа; Dicrocoelium lanceatum (Stiles et Hassall, 1896) - из желчных протоков печени овец Алма-Атинской области; Fasciola gigantica (Cobboid, 1855) - из желчных протоков печени спонтанно инвазированных овец Калмыкии; Paramphisternum cervi (Zeder, 1790) - из рубца коров Нижегородской области и оленей Забайкалья.

Половозрелые особи оосадыциков были фиксированы в 70%-ом спирте и в 107»-ом нейтральном формалине. Материал после фиксации обрабатывали по общепринятой гистологической методике и заливали в парафин (Меркулов Г.А., 1969).

Срезы толщиной 5-6 мкм окрашивали гематоксилин Карацци-

.■—эозином, "азур-эозином. по Роыановс'кому-Гймза, по'Маллори.'Р1з гистохимических методик' были использованы: для выявления белкоЕ - метод сулема-бромфеноловый синий для анализа белков были проведены контрольные реакции с трипсином, обработку ферментами проводили при температуре 37°0 в течение 50 - минут); для обнаружения гликогена и гликопротеидов - Шик-реакция по Мак-Манусу (контрольные реакции проводили о диаста-, зой, препараты инкубировали в ферменте в течение часа при 37°С.); глккозашжогликаны определяли с помощью окраски тс-луидиновым.синим при рН-11 согласно методике, разработанной Л-В.Начевой-л(1Э93) и."реакции с алышановым синим'по Стидмену и Моури при рН-3, с соответствующими химическими контрольными реакциями (ферментативный контроль проводили о текстуляр-вой гиаиуронидаэой) (Авцын.А.Б., СтруковА-Й,, Фуко Б.Б., 1971).

Гистологические препараты после различных способов окрашивания изучались нами в световом микроскопе (МБИ-3 с фо-тонасалкой).

изучалось.действие на органы и ткани трематод следующих препаратов:

1, АЗИНОКС. Мы использовали азинокс для лечения экспериментального описторхова в дозе 100 мг/кг живого веса ежедневным однократным пероралькым введением в течение 2 суток. Через две недели после лечения болотистых хомячков вскрывали и ив желчных протоков печени извлекали оставшихся половозрелых описторхов. Марит фиксировали в 70° спирте.

2, АРТЕШЗШ. Данный антигельмиктик испытывали в дове 100 мг/кг в течение "3 суток, однократно. Эксперимент проводился на золотистых хомячках в ШПиТМе (г.Москва). Марит фиксировали в 10%-ном формалине.

3. ДИСАЛдН. Антигельминтик дисалан применялся для лечения спонтанного дикроцелиоза овец, полученных из желчных протоков печени животных* пролеченных: 1) диоаланом 12Х-ной суспензией в течение 3 суток, в дозе 6 мг/кг, однократно, перорально. Убой овец производился черее 1, £, 3, 7 и 14 дней после окончания лечения; 2) диоаланом - техническим в течение £ суток, в дозе 5 мг/кг, однократно, перорально. Убой животных производили через 14 суток после окончания лечения. Гельминтов фиксировали в 10%-ном формалине.

4. КУВЕН. Препарат кубен применяли для лечения дикроцелиоза овец при их. спонтанном заражении в дозе 90 мг/кг в течение б суток. Убой животных производили через 1, 2, 3, 7 и

14 дней после окончания лечения. Гельминтов фиксировали в 10%-ном формалине.

5. МЕБЕНДАЗОЛ. Применяли мебендазсл в качестве анти-гельминтного средства при химиотерапии экспериментального описторхоза. Золотистых хомячков лечили препаратом в течение 3 суток ежедневной однократной дачей в дозах 100 мг/кг и 300 мг/кг. Через 2 недели при вскрытии животных, описторхов набирали из желчных протоков печени и фиксировали в 10%-ном формалине.

6. МЕДАМШ. Препарат медамин испытывали в дозе 50 мг/кг, однократно, в течение 3 суток. Марит описторхов фиксировали в 10%-ном формалине.

- 7. ПАНАКУР. Для исследований были взяты дикроцелии, полученные из желчных протоков печени овец после 2 дневной дачи препарата панакура в дозе 22 мг/кг, перорально. Гельминтов извлекали на 14 сутки после окончания лечения и фиксировали в 10%-ном формалине,

3, П0ЖГРЕМ. Антигельминтик политрем применялся в дозе 0,14 г/кг при лечении фаоциолеза овец, однократно, перораль-ным путем. Паразиты извлекались на 17 день после дачи препарата. Свежий материал замороживали, а затем фиксировали в 70° спирте.

9. ПРАЗИКЕАНТЕЛ * ЙЕБЕНДАЗОЛ. Использовали препарат празиквангел в комбинации с мебендазолом для лечения экспериментально зараженных описторхами животных. Половозрелые особи описторхов были взяты из протоков печени золотистых хомячков через две недели после ежедневного лечения в течение 5 суток смесью мебендазола с празиквантелем в дозе по 50 мг/кг.

10. ТЕТРАКСЮС0Л. Действие антигельминтика тетраксихола изучалось: 1) при фасциолезе овец, после дачи животным тетраксихола в дозе 0,2 г/кг, однократно. Марит извлекали через 17 дней; 2) при парамфистоматозе крупного рогатого скота после дачи препарата в дозе 0,2 г/кг, однократно, перорально. Трематод собирали на 7 день опыта. Материал замораживали затем фиксировали в 70° спирте.

11. ФЕБАНТЕЛ. Для лечения спонтанного дикроцелиоза овец мы использовали 2,5%-нукз суспензию фебантела в дозе 25 мг/кг однократно, в течение 5 суток, перорально. Убой овец производили на 14 сутки после дачи препарата. Гельминтов фиксировали в 10%-ном формалине.

Контролем служили трематоды, собранные от животных, не

подвергавшихся лечению. Всех паразитов контрольных групп, фиксировали соответствующими растворами для каждой экспериментальной группы.

Нами использован, также материал (трематоды), представленный. сотрудниками ИШиТМ, Кзз.НйВИ и др. организациями.

Материал после фиксации: обезвоживали в спиртах восходящей концентрации (60°, 70°, 80°, 90°, 100°) в течение 1-2 сут; проводили.через смесь хлороформа к 100° спирта (в соотношении 1:1); чистый хлороформ в 2-х порциях по.10-15 минут; пропитывали материал кашшеобразнбй смесью хлороформа и парафина в термостате при температуре 37°С в течение 12-18 часов, а также парафином в термостате при 56°0 Б течекке 30-45 мин.; заливали в парафин с добавлением воска (Меркулов Г.А., 1969).

Для оценки эффективности действия актигельшштиков мы использовали патоморфологический и морфометрическии контроль (Начева Л.В., 1993;, Начева Л.В. , Бибик О.й. , Давыдова Е.А., 1595).

Метод морфометрии со статистическим анализом на ЭВМ применяли для оценки эффективности действия антигельминтиков на яйца паразитов, который включал следующие этапы: 1. Измеряли яйца на гистологических препарата", окрашенных гематоксилин- эозином, которые занимали средний и задний отделы матки. Иооледовааи по 50 яиц в норме и после действия антигельминтиков. 2. Измеряли общие размеры яиц и их содержимого по двум морфометрическим параметрам: большой и малый диаметры (в миллиметрах) с помощью окуляр-микрометра в световом микроскопе, 3. Исходя из шкалы измерений с соответствующей корректировкой в таблицу морфометрических данных заносились общие размеры яиц и их содержимого по двум параметрам. 4. Для вычисления объема яиц использовали формулу объема эллипсоида: Dd2, где D-большой диаметр; d-малый диаметр; ошибка средней - , где n-число измерений - 50; - среднее квадратичное отклонение; М-среднее арифметическое; С¥(%)- х100% - коэффициент вариации в процент&ч (Автандидов Г.Г., 1S73).

РЕЗУЛЬТАТЫ ПАТОШРФОЛОГИЧЕСКИХ К П!СТОХ11МИЧЕСКИХ ИССЖДОВА1ШЙ

ПАТОШРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОВЩ2ЮСГИ И ГИСТОХИМИЧЕСКАЯ РЕАКТИВНОСТЬ ОРГАНОВ И ТКАНЕЙ Opistorchis felirteus ПОСЛЕ ДЕЙСТВИЯ АНХЙГЕЛЬНШШШВ й ЛЕКАРСТВЕННЬЖ

ВЕЩЕСТВ АНТИПАРАЗЙТАРНОГО ЗНАЧЕНИЯ Ааинокс (Доза: iuu мг/кг). Наши гистологические исследования показали, что азинокс оказывает токсическое действие, выраженное дистрофическими (в тегументе и кишечнике) и некротическими (в паренхиме, половых, органах и яйцах) процессами и может расцениваться как высокоэффективный спистор-хоцидный препарат. Гистохимические данные демонстрируют нарушение обменных процессов в тканях и органах олистсрхов. Наблюдается исчезновение запасного питательного материала -гликогена, что приводит к истощению энергетических ресурсов в организме гельминта и его гибели.

йебекдааол (дога: 100 мг/кг и 200 мг/кг). Нами установлено, что мебендазол в дозе 100 мг/кг и его метаболиты нарушают равновесие биологической системы паразита, вызывая тотальную деструкцию эктссоматических органов, резко изменяя структуру половых желез и блокируя созревание яиц, что ведет к стерилизации инвазионного материала. Но данный антигель-минтик в дозе £00 мг/кг обладает более выраженными токсико-г«иными свойствами и вызывает в тканях и органах опиогорхов глубокие дистрофические процессы с явлением некроза. Анализ полученных результатов показал, что высокая дога (300 мг/кг) мебендазола губительно действует на ткани самого хозяина, а меньшая доза (100 мг/кг), на наш взгляд, более приемлима, так как приводит к разрушению половых клеток паразита и блокировке развития яиц в матке с дегенерацией зрелых яиц. Мы считаем, что более целесообразно использовать мебендазол в дозе 100 мг/кг, однократно, а в дозе 300 мг/кг для 2-3-х кратно в течение нескольких дней о использованием витаминотерапии, а в некоторых случаях иммуксмодуляторов.

Медамин (Доза: 50 мг/кг). Микроморфологические исследования показали, что изменения распределения гексоэаминогли-канов в организме паразита свидетельствуют о выраженном токсическом действии медамина и о повреждении защитного барьера пограничных тканей - тегумента, кишечника и матки. Медамин

вызывает морфофункциональную дегенерацию описторхов. Блокировка развития половых клеток и торможения формирования и созревания яиц подтверждены морфометрическими исследованиями яиц в конечных отделах матки после действия данного препарата, которые свидетельствуют о том, что при сравнении общих размеров яиц наблюдается увеличение коэффициента вариации по отношению к норме. При анализе размеров содержимого яиц разница в коэффициентах вариации возрастает, в норме он равен 51%, а при патологии 35% - это демонстрирует блокировку развития личинки и подтверждает гистологические данные о деформации яиц и дегенерации их содержимого. На основании литературных данных, которые показывают, что медамин является нематодоциднш препаратом, и по результатам собственных па-томорфологических исследований можно рекомендовать данный антигедъминтик в качестве эффективного препарата при гель-минтозах, вызванных как трематодами, так и нематодами, а также при их совместном паразитировании.

Мебендазол + Празиквантел (Доза: по 50 мг/кг). Изучение изменения тканей описторхов после комбинированного действия двух антигельминтиков, показало, что мебендазол и празиквантел вызывают глубокие патологические изменения органов и тканей паразита. Действие препаратов на яйца гельминта выражается полной блокировкой их развития и нарушением формирования, дробления и созревания. Это свидетельствует о высоких описторхоцидных возможностях аатигельминтиков с выраженным эффектом стерилизации самого гельминта и предохранения окружающей среды от контаминации.

Ыорфометрические данные показали, что изменяются размеры яиц и их содержимого. Коэффициент вариации общего размера яиц по отношению к норме (СУ - 23%) снижается (СУ - 20%). Тоже самое характерно и для содержимого яиц, коэффициент вариации в норме равен 51%, а при патологии 32Х, что свидетельствует о дегенеративных процессах, произошедших внутри яиц.

Артеиизин (Доза: 100мг/кг). Наш установлено, что действие артемизина на органы и ткани описторхов выражается в форме дистрофических процессов разной степени, которые проявляются как в эктосоматических органах (тегумент, присоски, кишечник), так и в эндосоматических органах (матка, яйца, семенники, желточники) паразита , что свидетельствует об описторхоцидных возможностях антигельминтика.

Морфометрические исследования показали, что после дейс-

твия артемизина размеры содержимого яиц уменьшаются и коэффициент вариации снижается до 46%- от размера содержимого яиц в норме 51%. Тенденция к снижению коэффициента вариации размеров содержимого яиц свидетельствует о торможении их развития и возрастании дистрофических процессов вЛяйце. Следовательно, артемизин можно рекомендовать при списторхозе, а также при смешанном течении описторхоза и малярии.

РЕАКТИВНОСТЬ ТКАНЕВЫХ СИСТЕМ ТРЕМАТОДЫ

01сгосоеНит 1апсеа1иш ПК! ДЕЙСТВИИ АНТИГЕЯЬМИНТИКОБ

Кубек " (Дова-. 50 мг/кг). Морфофункциональные исследования показали, что к/бен оказывает токсическое действие на -дикроцедий, которое выражается полным нарушением морфологии -органов и тканей за счет их некроза. Препарат нарушает структуру половых же'лез, энергообеспечение организма паразита за счет■расхода депонированного гликогена и прекращения его синтеза, тормозит процессы гаметогенеза и развития яиц и вызывает белковую и углеводную дистрофии.

Морфометрические исследования яиц на последних стациях развития после действия антигельминтика на 2, 7 и 14 сутки выражались разной патологической картиной. На 2 сутки после действия кубена"Общие размеры яиц" резко возрастали и коэффициент вариации по отношению к норме (СУ - £3%) увеличивался в £ раза (СУ - 46%}; а содержимое яиц наоборот уменьшалось в 1,5 раза. Эту разницу подтверждают гистологические данные о проницаемости скорлупы яиц и атрофичеоких процессах в личинках. -На 7 сутки после действия антигельминтика патологическая картина имеет совершенно иной вид: общий объем яиц значительно уменьшается и коэффициент вариации снижается в 3,5 раза, и соответствует 13%; коэффициент вариации содержимого яиц незначительно ' возрастает (Су - 261). На 14 сутки после действия кубена коэффициент вариации общего размера яиц немного возрастает (СУ - 16%)V а коэффициент вариации содержимого яиц увеличивается в 2 раза (СУ - 46%) й~превышает норму (СУ; - 392). Патологические процессы внутри яйца выражены лизисом содержимого, расплавлением тканевых структур и углеводной инфильтрацией мирацидия. Резкое изменение коэффициента вариации соотношения содержимого й" общего объема яиц указывает на дегенерацию и торможение развития яиц дикроцелиев. Кубен следует расценивать как ангкгельшштик, эффективный

- 14 -

как против марит, так и яиц дикроцелий.

Дисалан (12% суспензия) (Доза: 8 мг/кг). Дисалан обладает выраженным дикрацелиоцидным эффектом, так как после его действия отмечается полная деструкция всех соединительнотканных волокон тегумента, кишечника, затем паренхиматозной ткани, половых желез и матки с яйцами с сохранением лишь общих очертаний тела паразитов.

Сравнительный статистический анализ морфометрических исследований яиц дикроцелий, находящихся в конечных отделах матки в норме и после химиотерапии дисаланом подтвердил данные патоморфологии о трематодоцидных возможностях препарата. Данные статистического метода показывают объективные изменения яиц, после 2-х часового действия препарата в сторону уменьшения размеров по сравнению с нормой. Коэффициент вариации общих размеров яиц падает в 2 раза (СУ - £31), а содержимого в 1,5 раза (СУпат - 26Ж, а СУнорм - 39?»). На 7 сутки после действия препарата коэффициент вариации общего размера яиц нормализуется и соответствует норме (СУ - 23%) и содержимого соответственно (СУ - 82%). На 14 сутки коэффициент вариации общего размера яиц (СУ - 241) и их содержимого (СУ - ,36%) стабилизируется.

Дисалак (технический:) (Доза: 5мг/кг). Препарат действует на эктосоматические органы, вызывая атрофию в тегументе и явления фокального некроза в кишечнике. Действие препарата выражается фокальным некрозом ткани внутренней среды паразита - паренхимы; декомпозицией половых желез - яичников и се-

мвНййКОБ; ТОрШЖёКйбМ раЗВйТИК ЯИЦ К бЛОКИрОВКОЙ ИХ форМИрования; разрушением клеток тельцз Мелиса и простаты. Гистохимический анализ показал изменение тинкториальных свойств тканей дикроцелий при окрасках бромфеноловым синим, толуиди-новым синим, Шик-реакцией.

Панакур (Доза: 22 мг/кг). Панакур воздействует на органы и ткани дикроцелий вызывая глубокие дистрофические процессы, которые были выражены декомпозицией клеточных структур с явлениями некроза в тегументе и кишечнике, паренхиме, половых органах, отеком соединительнотканных волокон и мышц, исчезновением гликогена из мест его депонирования, блокировкой секреции половых желез, торможением развития яиц, распадом и "уменьшением их общего количества.

Фебантел (Доза.* 25 мг/кг) . Гистологические и гистохимические исследования органов и тканей дикроцелий после

действии фебантела показали, что препарат.оказывает токсическое действие на ткани дикроцеяиев, выраженное .следующей прцессами: атрофией наружной части тегумента и увеличением количества клеток его внутренней части, морфологически ке дифференцирующихся, но альцианофильных;_. дегенерацией мышц присосок; некрозом в желгочниках; гистохимической дисфункцией. , , . ^

РЕАКТИВНОСТЬ ТКАНЕВЫХ СИСТЕМ ТРЕМАТОДЬ] Ра£сн)1а в^еаписа ПРИ ДЕЙСТВИЙ АНТЖЕЛЬЙИНТИКОВ Пилитрем (Доза: 0,14 г/кг). Характерными, изменениями после действия препарата политремэ являются деструктивные процессы с явлениями тотального некроза. После влияния"анти-гельминтика тегумент представлен гомогенно-расплавленной массой с деформацией шипов,. Границы•субтегументальных клеток не выявляются. Желточники а распавшемся состоянии, четкость гранул отсутствует, границы клеток не определяются, ядра их Ш1КН0ТИЧНЫ. _ Содержимое семенников представлено однородной зернистой'кассой. Периваокулярная жидкость в паренхиматозных ячейках'"отсутствует. Тельце Мелиса представлено отдельными фрагментами,

Тетранрияол (Доза: 0,2 г/кг). После действия тетраксп-хола наблюдается полное отсутствие тегумента. Паренхима имеет зернистую структуру. Количество желточных клеток уменьшено, ядра некротические, скорлуповые гранулы оклеротизнрсва-ны. Яйца деформированы. Тельце Мелиса разрушено полностью. Данный препарат обладает сильным фасцшлоцидныы действием.

ПАТОШРФОЛОГИЯ И ШЕлОХИМйЯ ПАРАМЖГОМ ПРИ ДЕЙСТВИИ ТЕТРАКСЙХОЛА Тетраксихол (Доза: 0,2 г/кг). Микроморфологическкми исследованиями мы установили, что антигельминтик тетраксихол и его метаболиты вызывают деструкцию органов эктосоматичес-кого барьера (тегумента и кишечника), резко изменяют морфологию половых желез и блокируют согревание половых клеток и вызывает исчезновение запасного питательного материала -гликогена, что свидетельствует о трематодоцидных свойствах препарата.

выводы

1. Установлено, что изучаемые антигельминтики в разной степени поражают эктосоматические ткани и органы трематод и вызывают патологию их тегумента и кишечника в форме дистрофии разной степени с явлениями фокального некроза.

2. Впервые выявлено, что медамин в дозе 50 мг/кг и ар-темизин в дозе 100 мг/кг обладают описторхоцидным аффектом. Азинокс в дозе 100 мг/кг, комбинация празиквантела с мебен-дазолом в дозе по 50 мг/кг и мебендазол в дозах 100 и 300 мг/кг вызывают глубокие морфофункционадьные изменения в органах и тканях описторхов.

3. Показано, что дисалан в дозе б мг/кг является наиболее эффективным препаратом, который вызывает некротические изменения всех клеточных структур дикроцелий.

4. Установлено, что при дикроцелиозе спонтанно зараженных овец - кубен в дозе 90 мг/кг, фебантел в дозе 25 мг/кг и панакур в дозе 22 мг/кг обладают выраженным дикроцелисшдным эффектом, который проявляется в форме дистрофии и некроза органов и тканей паразита.

5. При изучении действия тетраксихола на фасциол и па-рамфистом в дозе 0.2 г/кг, а так же политрема на фасциол в дозе 0.14 г/кг установлен полный некроз тканей трематод.

8. Гисгохимически установлено, что наибольшие изменения гистохимической реактивности органов и тканей описторхов вызывает азинокс, дикроцелий - дисалан и парамфистом - тетрак-

сихсл, которые обуславливают сильное нарушение углеводного обмена, проявляющееся в резком снижении гликогена вплоть до полного его исчезновения.

7. Обнаружено, что азинокс и дисалан обладают выраженным действием на яйца трематод, которое проявляется деформацией, деструкцией, скдеротизацией и некрозом яиц.

8. Все антигельминтики, в разной мере, оказывают действие напроцесс образования желточных клеток, вызывая его блокировку с деструкцией желточных клеток. Наибольшим максимальным эффектом обладает комбинация мебендазола и празик-вантела, азинокс, мебендазол (в дозе 300 мг/кг), политрем, тетраксихол и фебантел.

9. Сравнительный анализ действия антигельминтиков на репродуктивную систему трематод показал, что органы половой системы обладают разной степенью гистохимической реактивности и патология проявляется декомпозицией, деструкцией, дегенерацией, дистрофией и некрозом половых органов.

- 17 -

10. Морфометрические исследования размеров яиц трематод и их содержимого подтвердили патоморфологические и гистохимические данные о разрушительном действии медамина, ' артеми-зина, комбинации мебеидазола и празиквантела на яйца опис-торхов и кубена и дисалана на яйца дикроцелий.

ФАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для контроля антигельминтной эффективности новых лекарственных препаратов и с целью выяснения механизма их действия"рекомендуем проводить микроморфологические и гистохимические исследования органов и тканей гельминтов после лечения животных.'

2. Для оценки воздействия на яйца гельминтов и эффективности' разных антигельминтиков рекомендуем проводить мор-фометрический анализ яиц гельминтов до -л после воздействия препаратов.

3. Материалы диссертации используются при обучении студентов ветеринарных, медицинских и биологических факультетов БУБов.'

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Еибик 0.И. Патоморфологические изменения органов и тканей 0р1з1ЬогсМз ГеНпеиз после действия азинокса// В

сб.: "Гельмингоеоонозы - меры борьбы и профилактика."- М,, 1994,- С.27-28.

к. Еибик О.И. Патоморфалогический и гистохимический контроль оценки эффективности действия артемизина на органы и ткани описторхов (0р1з1Ьогстз ГеНпеиз)// В сб.: "Ассоциативные паразитарные болезни, проблемы экологии и терапии. М,, 1995.- С.23-25.

3. Еибик О.И. Патоморфологические исследования органов и тканей 0р1з1погсЫз ГеНпецз после действия медамина/'/ В сб.: "Медико-биологические проблемы."- Кемерово, 1995.-С.24-25.

4. Бибик О.И. Изучение влияния антигельминтиков на те-гумент дикроцелий// В сб.: "Медико-экологические проблемы паразитологии."- Кемерово, 1996,- С.40-41.

5. Бибик О.й., Гребенщиков В.М. Анализ действия политрема и тетраксихола на ткани парамфистом и фасциол// Там же - С.38-39.

6. Бибик О.И., Еапабасов Б.Б., Гребенщиков В.М. Сравни-

тельный анализ микроморфологических изменений органов и тканей трематоды В1сгосоеНшп 1апсеа1ш после действия дисала-ра, кубена и политрема// В сб.: "Гельминтозоонозы - меры борьбы и профилактика."- М., 1994..- С.29-31.

7. Гребенщиков В.М., Бибик О.И., Начева Л.В. Дегельминтизация как антропогенный фактор и ее патоморфологическое обоснование// В сб.:"Паразиты и паразитарные болезни в Западной Сибири." - Новосибирск, 1995.- С.36-38.

8. Начева Л.В., Вибик О.И., Балабасов Б.Б, Патоморфоло-гический аспект изучения дегельминтизации как антропогенного фактора// В сб.:"Фундаментальные и прикладные проблемы охраны окружающей среды." Тез. докл. междун. конф.- Томск, 1995.- С.264.

9. Начева Л.В., Вибик О.И., Давыдова Е.А. Морфометри-ческие исследования яиц зуритремы в норме и после действия хлоксила// В сб.;"Медико-биологические проблемы."- Кемерово, 1995.- С.18-21.

10. Начева Л.В., Гребенщиков В.М., Бибик О.И. Патомор-фология органов и тканей парамфистом после действия хлоксила// Там же.- С.21-23.

11. Начева Л.В., Воробьева Е.Н., Гребенщиков Б.М., Бибик О.И. Медико-биологические аспекты дегельминтизации как

антропогенного фактора экологии// В сб.:"Среда обитания, состояние здоровья населения и Госсанэпиднадзор в КУББАС-Се."- Кемерово, 1996.- Ч.1.- С.102-103.

12. Начева Л.В,, Воробьева Е.И., Жарков С.Ю., Бибик 0,й. Влияние антигельминтиков на коадаптивные процессы в системе "паразит-хозяин" на примере трематодозов//' В сб.:"Паразиты и паразитарные болезни в Западной Сибири. "Новосибирск, 1996.- С.68-70.

13. Начева Л.В., Даугалиева Э.X., Жарков С.Ю., Бибик О.И. Иммунореактивность организма хозяина при описторхозе после лечения антигелъмннтными препаратами// В сб. ^'Актуальные вопросы клинической иммунологии."- Кемерово, 1996.-С.26-27.