Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Технология производства пробиотика Биод-5 и его лечебно-профилактическая эффективность для разных видов животных
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология
Автореферат диссертации по теме "Технология производства пробиотика Биод-5 и его лечебно-профилактическая эффективность для разных видов животных"
На правах рукописи
Грязнева Татьяна Николаевна
Технология производства пробиотика Биод-5 и его лечебно-профилактическая эффективность для разных видов животных
03.00.23 - биотехнология 16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук
Москва - 2005
Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (МГАВМиБ)
Научные консультанты: доктор биологических наук, профессор
Тихонов Игорь Владимирович; Заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Гаврилов Владимир Андреевич.
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук Мирзаев Микаиль Нурбагандович; доктор биологических наук, профессор Еремец Владимир Иванович; доктор ветеринарных наук Кушнир Анатолий Тимофеевич.
Ведущая организация - Федеральное государственное учреждение «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ ВГНКИ).
Защита состоится 9 июня 2005 года в 10.00 часов на заседании диссертационного совета Д.220.042.01 в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23. Тел. (095) 377-93-83)
С диссертацией можно ознакомится в библиотеке МГАВМиБ.
Автореферат разослан « ЛгуМ^АЯ^ 2005 г.
Ученый секретарь диссертационного совета
Брылина В.Е.
Tw7
IA5Q268
3
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Фундаментальные исследования взаимоотношений макро- и микроорганизмов позволили разработать и внедрить в практику ветеринарии различные биопрепараты, основу которых составляют живые микроорганизмы.
На основании данных многочисленных источников литературы известно, что в число высокоэффективных лечебно-профилактических средств специалисты относят пробиотики (Воронин Е.С., 1989; Панин А.Н., 2000; Fuller R., Gibson G., 2000 идр).
Vanbelle М. (2000) отмечает, что в странах ЕЭС зарегистрировано более 20 пробиотиков, однако в результате ограниченного спектра биологической активности известных препаратов и разнообразия микроэкологических нарушений нормальной микрофлоры, обусловливающих развитие желудочно-кишечных болезней (ЖКБ) у человека и животных, в настоящее время существует потребность в новых пробиотиках.
По мнению многих специалистов, основополагающим принципом при создании пробиотиков является использование микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры животных (Бовкун Г.Ф., 1999; Сидоров М.А., 2000; Berg R., 1998 и др.).
Широкое применение в медицине и ветеринарии препаратов на основе лактобацилл и бифидобактерий при острых кишечных инфекциях и дисбактериозах показало их эффективность и перспективность (Малик Н.И., 2000; Субботин В.В., 2001 и др.).
В последние годы установлено, что не менее ва&ны в микробиоценозе желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) животных и человека и некоторые экзогенные бактерии, например, рода Bacillus. Среди различных представителей экзогенной микрофлоры, бациллы (кроме B.antracis и B.cereus) характеризуются рядом преимуществ, которые позволяют считать их перспективными в качестве основы новых пробиотиков. Эти микроорганизмы широко распространены в природе; являются безвредными для человека и животных; характеризуются высокой ферментативной активностью; являются устойчивыми к логическим и пищеварительным ферментам; синтезируют различные бактериоцины, что обуславливает их антагонистическую активность в отношении широкого спектра па-
РОС Н' V " :>\ЛЬНАЯ Ь! .. 'Tf КА
тогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Кроме того, эти бактерии технологичны в производстве, в приготовлении комбикормов и кормовых добавок, устойчивы к широкому диапазону температур, стабильны при хранении, экологически безопасны (Смирнов В.В., 2002; Сорокулова И.Б., 2003).
Ветеринарной практикой востребованы препараты в различных лекарственных формах, в зависимости от вида животных и способов их содержания. Однако традиционно пробиотики выпускают, в основном, в лиофильно высушенном виде в ампулах или флаконах, что лимитирует их применение (Чугунова Н.К., 1983; Смирнов А.О., 1996; Фукс ПЛ., 1997; Власов Н.Г., 1999).
С учетом отмеченного, конструирование пробиотиков на основе бацилл и разработка технологии производства таких препаратов в различных лекарственных формах для разных видов животных представляет собой актуальную задачу.
Цель и задачи исследований. Цель настоящих исследований -разработка технологии производства пробиотика Биод-5 в различных лекарственных формах и оценка его лечебно-профилактической эффективности при желудочно-кишечных болезнях разных видов животных.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Провести исследования по выделению культур бацилл от животных и с объектов внешней среды и изучить биологические свойства бацилл, перспективных для разработки пробиотического препарата Биод-5.
2. Приготовить лабораторные образцы пробиотика и изучить его биологические и антагонистические свойства.
3. Разработать промышленную технологию глубинного культивирования производственных штаммов в биореакторах и подобрать наиболее перспективные методы концентрирования бактериальной массы, включенной в состав Биод-5.
4. Решить технологические проблемы приготовления жидкой, сухой и таблетированной форм Биод-5 и определить методы контроля качества препарата.
5. Изучить лечебно-профилактическую эффективность Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях разных видов животных.
6. Рассчитать экономическую эффективность применения Биод-5.
7. Разработать и утвердить нормативную документацию на препарат Биод-5 и внедрить его в ветеринарную практику.
Научная новизна. Впервые, на основе спорообразующих штаммов B.subtilis ТЛИ 13 и B.licheniformis ТЛИ 11, выделенных с объектов животноводческих помещений, сконструирован новый про-биотик Биод-5 для применения в ветеринарии.
Теоретически обоснован и разработан метод глубинного культивирования штаммов B.subtilis ТЛИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 для производства пробиотика Биод-5 с использованием стандартизированных жидких питательных сред из отечественного сырья, позволяющий получить бактериальную суспензию, содержащую не менее 60 % зрелых спор.
Созданы промышленные технологии выпуска пробиотика Биод-5 в различных лекарственных формах (сухой, таблетированной и жидкой), с использованием отечественного технологического оборудования и материалов.
Разработана жидкая форма пробиотика Биод-5, которая сохраняет биологическую активность не менее 12 месяцев.
Разработан состав сухой микробной массы B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11, который включает наполнитель и связующие вещества, что позволяет высушивать биомассу конвективным методом и снизить инактивацию микроорганизмов в процессе получения таблетированной формы препарата Биод-5.
Показано, что препарат Биод-5 обладает уникальными биологическими свойствами, отличающими его от других пробиотиков: подавление размножения сальмонелл, кандид и стафилококков; стимуляция роста лактобацилл и бифидобактерий in vitro и в ЖКТ животных; иммуностимулирующее и адьювантное действие.
Методы контроля качества пробиотика Биод-5 позволяют дать объективную оценку биологической активности бактерий-компонентов препарата и охарактеризовать качество сухой, жидкой и таблетированной форм Биод-5.
Показана высокая (96-100 %) лечебно-профилактическая эффективность готовых лекарственных форм пробиотика Биод-5 при ЖКБ телят, поросят, лошадей, пушных зверей, собак и кошек.
Научная новизна работы подтверждена положительным реше-
нием Российского агентства по патентам и товарным знакам по заявке № 2004121854 «Лечебно-профилактический препарат ветеринарного назначения на основе штаммов спорообразующих бактерий Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis».
Практическая значимость. Для производства пробиотика Биод-5 селекционированы штаммы B.subtilis ТЛИ 13-07.06.21-ДЕП/ВГНКИ и В.licheniformis ТПИ 11-07.06.22-ДЕП/ ВГНКИ, которые паспортизированы и депонированы во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ФГУ ВГНКИ).
Разработаны и утверждены ТУ 9337-007-59088697-004 на про-биотик Биод-5; промышленный регламент производства пробиотика Биод-5 в сухой, таблетированной и жидкой лекарственных формах; разработано временное наставление по применению пробиотика Биод-5 в ветеринарии.
В соответствии с порядком регистрации ветеринарных препаратов в РФ, нормативная документация и отчеты об испытании пробиотика Биод-5 прошли экспертизу в ФГУ ВГНКИ. Регистрационные испытания (от 06.07.2004 г) подтвердили соответствие показателей качества пробиотика Биод-5 требованиям ТУ.
На базе Центра военно-технических проблем биологической защиты НИИ микробиологии МО РФ (Центр ВТП БЗ НИИМ МО РФ, г. Екатеринбург) создана автоматизированная технологическая линия промышленного производства пробиотика Биод-5. Получены серии сухой, таблетированной и жидкой форм препарата Биод-5, которые прошли производственные испытания.
На базе ООО «НПК ЦМВЭИ» (г. Москва) организовано серийное производство Биод-5 в различных лекарственных формах.
В опытах на телятах, поросятах, лошадях, пушных зверях, собаках и кошках изучен механизм действия Биод-5, дана оценка его влияния на микробиоценоз кишечника, обменные и иммунные процессы организма животных, показана высокая лечебно-профилактическая эффективность препарата, что подтверждено актами, утвержденными руководителями хозяйств и ветеринарных клиник Московской, Свердловской и Нижегородской областей.
Разработаны и утверждены Департаментом ветеринарии Мин-сельхоза РФ (per. № 13-5-02/1043 от 11.05. 2004) методические ре-
комендации «Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных», в которых изложены количественные и качественные методы исследований микрофлоры кишечника животных, позволяющие рационализировать бактериологический анализ с целью прижизненной диагностики ЖКБ и дисбактериозов.
Результаты исследований по созданию технологии производства пробиотика Биод-5 включены в учебник «Биотехнология» с грифом «Допущено Министерством сельского хозяйства Российской Федерации в качестве учебника для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальностям 310700 - Зоотехния и 310800 - Ветеринария» (28.12.2004 г, № 06-1456).
Апробация результатов диссертации. Основные результаты диссертационной работы изложены в отчетах НИР, 54 печатных работах; межвузовской конференции «Новое в диагностике, лечении и профилактике болезней молодняка животных» (Москва, 1991); международной конференции «Проблемы научного обеспечения повышения эффективности сельскохозяйственного производства» (Бишкек, 1992); научно-практической конференции «Проблемы диагностики, профилактики и лечения животных в Нечерноземной зоне» (Н.Новгород, 1992); научно-практической конференция «Достижения ветеринарной науки - производству» (Чебоксары, 1994); международной конференции «Животноводство на Европейском Севере: фундаментальные проблемы и перспективы развития» (Петрозаводск, 1996); I международной конференции «Здоровье, разведение и защита домашних животных» (Уфа, 2000); научно-практической конференции «Биотехнология на рубеже веков: проблемы и перспективы» (Киров, 2001); IX и XI международных ветеринарных конгрессах (Москва, 2001, 2003); международной научной конференции «Современные достижения и проблемы клеточной биотехнологии и иммунологии в ветеринарной медицине» (Москва, 2003); международной конференции «Молодые ученые в решении проблем аграрной науки и практики» (Львов, 2003); международной конференции «Актуальные проблемы развития животноводства» (Львов, 2003); международной научно-практической конференции «Ветеринарные и медицинские аспекты зооантропонозов» (Покров, 2003); международной конференции, посвященной 85-летию МГАВМиБ (Москва, 2004);
На защиту выносятся следующие положения и результаты:
1. Теоретическое и экспериментальное обоснование состава и формы выпуска Биод-5 на основе штаммов В. БиЫШв ТПИ 13 и В. НсИетАэптт ТПИ 11.
2. Промышленная технология производства пробиотика Биод-5 в сухой, таблетированной и жидкой формах.
3. Результаты изучения лечебно-профилактической эффективности жидкой, сухой и таблетированной форм пробиотика Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях разных видов животных.
Публикации. По результатам диссертации опубликовано 54 работы, в том числе 15 статей в научных журналах; 23 тезиса в сборниках конференций; 12 учебно-методических пособий по биотехнологии и учебная программа по специальности «Биотехнология», утвержденные УМО высших учебных заведений РФ в области ветеринарии и зоотехнии; методические указания по изучению дисциплины «Биотехнология»; методические рекомендации, утвержденные Департаментом ветеринарии; учебник «Биотехнология» для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальностям 310700 - Зоотехния и 310800 - Ветеринария.
Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 391 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, данные о практическом использовании научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы (499 источников, из которых 286 отечественных и 213 иностранных) Работа содержит 124 таблицы, 52 рисунка, 30 страниц приложений.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследований
Работа выполнена в период с 1991 по 2004 год на кафедре биотехнологии МГАВМиБ; ФГУП «Покровский завод биопрепаратов»; Центре ВТП БЗ НИИМ МО РФ (г. Екатеринбург); Всероссийском институте биохимии и физиологии микроорганизмов (г. Пу-щино), научно-производственной фирме «Био СВЭМ» (г. Киров); в хозяйствах и ветеринарных клиниках Москвы и Московской об-
ласти (СПК «Жегапово» и ЗАСХО «Красный луч» Щелковского района, ТОО «Тимоховское ЛТД» Ногинского района, конно-спор-тивный клуб «Измайлово», ветеринарный Центр МГАВМиБ), Свердловской (ЗАО «Чкаловское») и Нижегородской областях (СПХ «Горьковский» Канавинского района, Канавинской станции по борьбе с болезнями животных г. Н.Новгорода).
Штаммы B.subtillis ТЛИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11, входящие в состав пробиотика Биод-5, были получены методом селекции ан-тибиотикоустойчивых и антагонистически активных бацилл из изолятов, выделенных с объектов внешней среды.
При сравнительной оценке биологических свойств полученных штаммов были использованы штаммы B.subtillis 2335 и B.licheniformis 2336, 2 вакцинных штамма B.anthracis, 4 штамма Е coli, 3 -Lactobacillus, 2 - Bifidobacterium, 7 - Salmonella, 4 - S.aureus, 2 -Shigella, 2 - P.aeruginosa, 5 - Proteus, 2 - K.pneumoniae, 2 - Candida, 2 - Campilobacter, C.freundii, M.luteus 109, любезно предоставленных музеем штаммов Центра ВТП БЗ НИИМ МО РФ, а также 116 изолятов бацилл, выделенных нами при выполнении работы.
В экспериментах по изучению B.subtillis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 и оценке пробиотика Биод-5 были использованы 490 белых мышей массой 18-20 г; 15 кроликов массой 2,0-2,5 кг; 40 телят в возрасте 15-30 дней и 261 новорожденный теленок; 53 поросят-сосунов; 189 поросят-отьемышей; 20 спортивных лошадей; 147 песцов серебристых племенного стада; 455 песцов 40-дневного возраста; 80 собак; 54 кошки. Было отобрано и исследовано 485 проб фекалий и 313 проб крови животных.
При определении острой и хронической токсичности Биод-5 было исследовано 990 гистосрезов органов и тканей животных.
Для выделения и идентификации микроорганизмов, а также при разработке технологии глубинного культивирования бактерий-компонентов пробиотика Биод-5 использовали стандартные и модифицированные питательные среды, а также разработанные и приготовленные нами в ходе проведения исследований.
Культивирование бацилл проводили во флаконах, аппаратах Ф-1 и КМ-0,1, в биореакторах «БИОР-ОЛ » и «БИОР-0,25».
Концентрирование культур бацилл осуществляли с использованием боксированных сепараторов АСГ-ЗМБ, а также "Альфа-JIa-
валь", "Вестфалия" и ультрафильтрационной установки УПЛ-0,6.
Микробную массу бацилл лиофильно высушивали на установке МАСС-25, распылительным методом - на установке УРС-5,0. Таблетки Биод-5 прессовали на установке РГМ-12, упаковывали их в полумягкую оболочку на автомате АУТ-М или во флаконы.
Бактериологические исследования фекалий животных и изучение биохимических свойств бактерий проводили согласно методическим рекомендациям Блохиной И.Н., Воронина Е.С. и др., (1990).
Лизоцимсинтезирующую и антагонистическую активность бацилл определяли по Егорову Н.С. (1999).
Антибиотикочувствительность B.subtillis ТПИ 13 и B.lichenifor-mis ТПИ 11 определяли к 35 антибактериальным препаратам методом диффузии в агар с использованием стандартных дисков.
Электрофоретическое фракционирование культурального фильтрата и ультразвукового дезинтеграта изучаемых бацилл, выращенных на безбелковой питательной среде, проводили по методу Laemmli (1970).
Типирование штаммов B.subtillis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 по генотипу проводили методом ПЦР-фингенпринтинга (REP-ПЦР) и ARDRA (рестрикции амплифицированной 16S рДНК).
Оценку качества разрабатываемых питательных сред для культивирования бацилл проводили по методу Бендаса Л.Г. (1980).
Распадаемость таблетки Биод-5, величину относительной гигроскопичности порошков, коэффициент неоднородности смеси компонентов таблетируемой массы, сыпучесть порошков, относительное уплотнение материала при прессовании, условный предел прочности таблеток, прессуемость порошков определяли по методам, описанным Скворцовым А.Э. (2002).
Определение безвредности Биод-5 и изучение адьювантных свойств препарата проводили по методу Сорокуловой И. Б. (1998).
Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли по методу Коста Е.А. (1999), бактерицидную активность сыворотки крови -по методу Кашкиной В.Н. (1999). Иммуногенные свойства Биод-5 оценивали по активности естественных киллеров у мышей радиометрическим методом по Рыковой М.П. (1997).
Лечебно-профилактическую эффективность препарата Биод-5 при ЖКБ оценивали в контролируемых опытах на животных раз-
ных видов. Учитывали заболеваемость, сохранность и прирост живой массы, результаты бактериологических исследований микрофлоры ЖКТ и лабораторных анализов крови по гематологическим, биохимическим и иммунологическим показателям.
Экспериментальные данные обрабатывали по Ашмарину И.П. и Воробьеву А. А. (1962), а также методами корреляционного, вариационного и факторного статистического анализа с использованием компьютерных программ «Statgraphics Plus» и «Statistica 6,0».
В выполнении отдельных этапов работы принимали участие сотрудники Центра ВТП БЗ НИИМ МО РФ; ветврачи хозяйств и ветеринарных клиник, за что автор им искренне благодарен.
Особую благодарность автор выражает ректору МГАВМиБ, академику РАСХН, профессору Воронину Е.С. и начальнику научно-исследовательского управления Центра ВТП БЗ НИИМ МО РФ Васильеву П.Г. за неоценимую помощь и поддержку в выполнении данной работы.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Сравнительная характеристика биологической активности изолятов бацилл
С объектов внешней среды нами были выделены 116 изолятов бацилл, с целью оценки их перспективности для создания пробио-тика ветеринарного назначения. На основании изученных культу-рапьно-морфологических и биохимических свойств 84 изолята были идентифицированы как B.subtilis, а 32 - B.licheniformis. Было установлено, что изоляты B.subtilis № 13 и B.licheniformis № 11 обладали более высокой антагонистической активностью по отношению к тест-штаммам S.aureus 209, S.typhimurium 11, S.sonnei 659 и С albicans 690, чем остальные изоляты и компоненты про-биотика биоспорин - B.subtilis 2335 и B.licheniformis 2336.
При изучении антагонистической активности В. subtilis № 13 и В. licheniformis № 11 к широкому спектру патогенных (Salmonella, Staphylococcus, Shigella, Pseudomonas и др.), условно-патогенных (Proteus, Klebsiella, Candida и др.) и непатогенных (E.coli, Lactobacillus, Bifidobacterium) микроорганизмов было установлено, что изучаемые бациллы подавляли рост грамположительных и грамот-
рицательных бактерий, в том числе сальмонелл, кандид и стафилококков, и не оказывали ингибирующего действия на лактобациллы, бифидобактерии и непатогенные эшерихии.
Изоляты № 13 и № 11 были отобраны для дальнейшего изучения и получили рабочее обозначение - В.виЫШз ТПИ 13 и В.НсЬе-шйэгпш ТПИ 11. У изучаемых бацилл отсутствовала гемолитическая, лецитиназная и гиалуронидазная активность, что характеризует их как непатогенные микроорганизмы. В.ПсЬешйтшз ТПИ 11, в отличие от В.виЫШз ТПИ 13, обладал способностью расти в анаэробных условиях, что является одним из показателей различной адаптационной возможности данных видов бацилл в разных отделах ЖКТ животных. Изучаемые штаммы росли в присутствии 7 % 1ЧаС1, не нуждались в аминокислотах и витаминах, не проявляли взаимного антагонизма при совместном культивировании.
При изучении иммуномодулирующей активности исследуемых бацилл было установлено, что на фоне их однократного перораль-ного применения в дозе 2103 м.к. фагоцитарная активность макрофагов у экспериментальных животных увеличилась на 1,3 %, фагоцитарный индекс - на 2,5 %, по сравнению с контролем.
При оценке антибиотикочувствительности В.зиЫМз ТПИ 13 и В.НсЬешйэптиз ТПИ 11 было установлено, что штаммы характеризуются высокой устойчивостью к большинству из 35 исследуемых антибиотиков.
На основании изучения биологических свойств штаммов были определены основные фенотипические отличия В.зиЫШз ТПИ 13 и В.ИсЬешймтгт ТПИ 11, которые позволили обосновать необходимость включения изучаемых штаммов в состав пробиотика Биод-5 (табл. 1).
1. Фенотипическая гетерогенность штаммов В.эиЫШв ТПИ 13 и В.ПсЬешСогпш ТПИ 11
Фенотипический признак В. БиЫШБ В. ИсЬеш-
ТПИ 13 йиттБ
ТПИ 11
1 2 3
Рост в анаэробных условиях - +
Утилизация ксилозы + -
1 2 3
Аргининдигидролазная активность - +
Утилизация пропионата - +
Протеолитическая активность, ед/мкл 25 16
Амилолитическая активность, ед/мкл 36 17
Концентрация гомогенных белков в культураль- 2500,0 2000,0
ной жидкости (разведение 1.2), мкг/мл
Концентрация гомогенных белков в ультразву- 1200,0 1500,0
ковом дезинтеграте (разведение 1:5), мкг/мл
Зоны угнетения роста тест-штаммов, мм:
Salmonella paratyphi 2606 18+2 16+2
Salmonella stenly 5266 16+1 12+2
Staphylococcus aureus 1479 22+3 26+2
Shigella sonnei 659 13+1 16+2
Pseudomonas aeruginosa 32 7+1 12+1
Proteus vulgaris 491 25+2 20+2
Klebsiella pneumoniae 5055 16+3 10+1
Citrobacter freundii 381 22+2 18+2
Candida albicans 690 18+4 25+2
Campilobacter jejuni 418 20+4 22+2
Антибиотикочувствительность (диаметр зон
торможения роста культуры), мм:
Амикацин 0 14±0,2
Гентамицин 4±0,2 12±0,1
Канамицин 0 20±0,1
Тобрамицин 0 16±0,1
Цефоперазон 16+0,3 10±0,2
Тетрациклин 8±0,3 14+0,2
Нистатин 0 4±0,3
Рифампицин 16±0,3 0
По биологической активности штаммы В.БиЫШз ТПИ 13 и В.ПсЬешГогпш ТПИ 11 взаимно дополняют друг друга и сочетан-ное применение их в составе пробиотика должно обусловить более широкий диапазон действия препарата. На основании полученных данных были составлены паспорта изученных штаммов бацилл.
Приготовление опытных образцов препарата Биод-5
При оценке различных количественных комбинаций бацилл в препарате в качестве основного критерия использовали показатели антагонистической активности полученных ассоциаций культур.
В.зиЫШз ТПИ 13 и В.НсЬешАэгпт ТПИ 11 выращивали раздельно на МПА в течение 24 часов при температуре 37° С. Колонии смывали физиологическим раствором и рассчитывали по оптическому стандарту мутности количество микробных клеток в 1 мл суспензии. Затем готовили ассоциации изучаемых бацилл в различных количественных соотношениях и определяли антагонистическую активность полученных смесей культур (табл. 2).
2. Антагонистическая активность различных вариантов Биод-5
Количественные соотношения B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 Зона задержки роста тест-штамма, мм
S.sonnei 32 S.typhi- murium И S.aureus 209 C.aibicans 690
1:1 14±1 10±2 18±2 20±1
1:3 12±1 10±2 14±1 10±1
1:6 14±1 10±1 18±1 18±!
1:20 2±1 2±1 14±1 20±1
20:1 12±2 8±3 18±2 16±2
6:1 12±1 10±1 20±1 18±1
3:1 14±1 12±1 24±1 20±2
Было установлено, что оптимальным сочетанием B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 в препарате Биод-5 является их количественное соотношение — 3*1, при котором бациллы проявляли наивысшую степень антагонистической активности в отношении тест-штаммов, используемых в работе.
При культивировании изучаемых бацилл в МПБ в соотношении 3:1 в смеси с различными тест-штаммами, через 12 ч наблюдалось снижение концентрации S.typhimurium и S.sonnei с 109 м.к. до 104 м.к, C.aibicans - до 103 м.к, a S.aureus - до 102 м.к. Через 18 ч культивирования ни один тест-штамм из суспензии не был выделен (рис. 1).
Концешрация 1ес|-ипаммов. Ig КОЬ/'M-'i
ц - S.sonnci Р - С altnean.s Q - (llircih
- S ijphimurium
Время к\ дмивироваиия ч
1. Антагонистическая активность препарата Биод-5 в отношении тест-нламмов
Полученные данные свидетельствуют о высокой антатнисшче-ской активности Биод-5, содержащею изучаемые баци 11ы в cooi-ношении 3:1.
Для определения биологической акшвности и безвредное i и Биод-5 in vivo были приготовлены 4 серии экспериментальною образца гфепарата
Взяли 8 групп мышей по 10 голов в каждой У мышей 1 7 групп вызывали дисбактериоз путем перорального введения ампиокса в дозе 4 мг в сутки в течение 5 дней Мышей 1. 2. 3 и 4 групп ючили разными сериями Ьиод-5, мышей 5 группы лечили лактобактери ном. 6 - бифидумбактерином. 7 группа - контропьные животные 8 - интактные мыши
После применения антибиотика \ мышей развился дисбамери оз. на фоне снижения уровня анаэробных и повышения концентрации аэробных бактерий отмечался дефицит лакто-и бифи;юбак|е рий. После лечения животных препаратом Биод-5. и? кишечника мышей выделяли незначительное количество условно-пато!енны\ энтеробакгерий на фоне высокой концентрации лакто- и бифидо-бактерий В группах мышей, которых лечили лактобактерином и бифидумбак!ерином, концентрация лакто-и бифидобактерий была на 2 порядка ниже, чем > мышей, леченных Ьиод-5 (рис 2)
Концешрания Смюсрий КС)},/]
1 2 3 4 5 6 7 8
□-Ьифидобактерии. Лактобактерпи I рмшы жившныч
2. Количество лакто- и бифидобакгерий в кишечнике мышей разных групп после постановки опыта
Анализ полученных результатов позволяет предположат гь, что бактерии-компоненгы препарата Биод-5 обладают синер!идным действием в отношении лакго- и бифидобактерий Для подтверждения полученных данных, выделенные из кишечника мышей лактобациллы и бифидобактсрии а также гест-штаммы 1,.1егтеп-1ит Ф-36 и В globosшn ЬФ-4 раздельно засевали сплошным газоном на плотные пи отельные среды (ПС) и в центр чашки Петри на поверхность ПС наносили каплю суспензии препарата Ьиод-5
Через 24 ч культивирования вокруг зоны роста бацилл-компонентов Ьиод-5 наблюдался вторичный рост лакто- и бифидобактерий в виде валика, представляющею собой единичные и слившиеся колонии (рис 3)
а б
3. Зона вторичною рос та лакгюбацилл (а) и бифидобак!ерий (б)
При определении биологической концентрации лакто- и бифи-добактерий, выросших в контрольных ПС и в средах с добавлением культурального фильтрата B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 в соотношении 3:1 было установлено, что концентрация лакто- и бифидобактерий увеличилась на 7,0 и 9,0 порядков, соответственно, в сравнении с контролем.
Таким образом, опытные образцы пробиотика Биод-5, приготовленные в количественном соотношении B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ И 3:1, а также их метаболиты, обладали выраженной антагонистической активностью в отношении грамположи-тельных и грамотрицательных патогенных и условно-патогенных микроорганизмов и синергидным действием - в отношении лакто-и бифидобактерий как in vivo, так и in vitro.
Изучение биологической активности препарата Биод-5 и его компонентов
При определении острой и хронической токсичности Биод-5 было установлено, что препарат является безвредным, не влияет на показатели крови здоровых животных, способствует повышению в кишечнике на 2 порядка концентрации лакто- и бифидобактерий и уменьшению на 5 порядков концентрации условно-патогенных бактерий.
При однократном пероральном введении животным препарата Биод-5 через 3 сут наблюдалось достоверное увеличение (на 25 %) активности естественных киллеров, по сравнению с контролем, что свидетельствует о стимуляции препаратом факторов неспецифической защиты организма экспериментальных животных.
При изучении адьювантных свойств Биод-5 было установлено, что при введении белым мышам вакцин против энтерита и чумы плотоядных в комплексе с препаратом Биод-5, в 2 раза повышалась пролиферативная активность спленоцитов, по сравнению с контрольными животными.
Таким образом, Биод-5 является безвредным для животных, не оказывает побочного действия на организм, а также обладает иммуностимулирующими и адьювантными свойствами.
Технология промышленного производства препарата Биод-5 в различных лекарственных формах
Получение бактериальной суспензии В^иЬйПв ТПИ 13 и ВЛкЬешГогпш ТПИ 11 в биореакторах «БИОР-ОД» и «БИОР-0,25»
При разработке глубинного метода культивирования бацилл-компонентов Биод-5 необходимо было определить состав жидких ПС; оптимизировать условия приготовления и оценить качество посевных культур бацилл; разработать параметры и режимы культивирования бацилл в биореакторах марки «БИОР»; определить технико-экономические показатели разработанной технологии.
Вначале были проведены эксперименты по глубинному культивированию В.виЫШз ТПИ 13 на аммиачно-казеиновой среде, и ее вариантах с различным содержанием азотистых веществ. Культивирование проводили во флаконах, в течение 42 ч при температуре 37 С, с содержанием глюкозы 10 г/дм3 и величиной сульфитного коэффициента (К^) - 1,3. Во всех случаях доза посевного материала составила 1 млн. м.к. на 1 см3 ПС (табл. 3).
3. Характеристика культур В.$иЬ(Ш$ ТПИ 13, выращенных на аммиачно-казеиновой ПС и ее вариантах
Содержание казеина в ПС, г/дм3
Показатели 15 10 5
Характеристика ПС
Общий азот, мг% 268 210 115
Аминный азот, мг% 53,2 43,4 30,8
РН 7,20 7,44 7,65
Характеристика культуры через 42 ч культивирования
БК, млрд. м.к./смэ 0,35±0,06 2,17±0,31 2,47±0,57
БК1, млрд. м.к./см3 0,05±0,001 0,31 ±0,29 1,42±0,39
Спорообразование, % 14,3 14,2 57,5
рН 8,78 8,92 8,84
Наиболее оптимальной оказалась ПС с содержанием 5 г/дм3 казеина, уровнем общего азота 115 мг% и аминного азота 30,8 мг% В этом случае показатели биологической концентрации (БК) и спо-
рообразования составили 2,47 млрд. м.к./мл и 57,5 %, соответственно, а число термоустойчивых спор (БКО было равным 1,4 млрд. м.к./мл, т.е. максимальным в данном опыте.
При выборе основных компонентов ПС для выращивания В.эиЬ-11П5 ТТ1И 13 и В.НсЬетйэгпт ТПИ 11 остановились на кукурузном экстракте (КУК), как дешевом и доступном сырье, и гидролизате казеина (ГК), так как он содержит аминокислоты, необходимые для полноценного спорообразования бацилл. В опыте использовали рабочие растворы КУК и ГК с содержанием аминного азота 360 и 1315 мг%, соответственно. Выбор оптимального соотношения в среде ГК, КУК И глюкозы осуществляли согласно методу ортогональных латинских прямоугольников, варьируя содержанием этих компонентов. Солевой состав ПС был представлен М§504-5Н20 -0,25 г/дм3; МпБСХ, 5Н20 - 0,03 г/дм3; СаС12-5Н20 - 0,44 г/дм3; Ре804-7Н20 - 0,001 г/дм3; Си804-5Н20 - 0,001 г/дм3. Растворы глюкозы (50 %) и СаС12 вводили в ПС после стерилизации.
Для культивирования В. БиЫШв ТПИ 13 было создано 9 вариантов, а для В.Нс11еш<Ъггш8 ТПИ 11-16 вариантов ПС (табл. 4, 5).
4. Характеристика вариантов ПС и культур В. виЫШв ТПИ 13
№ ПС КУК, см'/дм3 ГК. см'/дм3 Глюкоза, г/дм3 Характеристика ПС Характеристика культуры
общ. азот, мг% амин, азот, мг% рН РН БК. млрд. м.к/см3 БК1, млрд. м.к/см3
1 30 4 7 40,0 16,7 7,02 5.75 0,6 0,4
2 30 8 15 51,0 22,5 7,05 6,35 1,3 1.10
3 30 12 11 54,0 28,0 7.12 6.05 1,0 1,0
4 60 8 11 65,0 30,0 6,98 7,40 2,2 2,0
5 60 12 7 79,0 38,0 7,08 5,75 0,9 0,3
6 60 4 15 54,0 23,2 6,98 6,95 0,2 0.2
7 90 12 15 82,0 46,4 6,90 5,50 0,05 0,01
8 90 4 11 68,0 33,0 6,82 7,65 2.4 1,6
9 90 8 7 73.0 39,6 7,0 6,00 0.5 0,07
Анализ полученных данных показал, что самая высокая концентрация В.зиЬйПэ ТПИ 13 (БК = 2,0 млрд.м.к/см3) была получена при культивировании в ПС № 4. Оптимальное содержание в среде
КУК, ГК и глюкозы должно составлять, соответственно, 60
3 3 3 3 3
см /дм , 8 см /дм , 11 г/дм . Большее или меньшее их количество оказывает отрицательное влияние на развитие культуры.
5. Характеристика вариантов ПС и культур В.НсЬешГогпнз ТПИ 11
№ Глю- КУК, ГК, Кца рН БК, БК1, Споро-
ПС коза, см3/дм3 м3/дм3 г02/дм3 ч млрд. млрд. образо-
г/дм3 м.к/см3 м.к/см3 вание, %
1 28 20 4 2.2 6,3 1,3 0,2 15.4
2 28 45 12 0,9 6,8 4,0 2,0 50,0
3 28 70 16 1,4 6,8 2,4 1,4 58,3
4 28 95 8 1,1 7,5 2,5 1,2 48,0
5 21 45 8 2,2 7,4 1,2 0,9 74,0
6 21 20 16 1,1 6,1 2,7 0,4 14,8
7 21 70 12 1,4 7,9 4,2 3,6 85,0
8 21 95 4 0,9 7,3 1,5 0,7 46.6
9 14 70 12 Ы 6,7 3,1 1,6 51,6
10 14 95 4 1,4 7,5 1,5 1,0 66,6
11 14 20 8 0,9 6,5 0,8 0,6 75,0
12 14 45 16 2,2 7,4 1,5 0,3 20,0
13 7 95 16 0,9 8,2 0,8 0,2 25,0
14 7 70 8 2,2 8,5 0,4 0,2 50,0
15 7 45 4 1,1 7,8 0,5 0,2 40,0
16 7 20 12 1,4 4,8 0,1 0.01 0.1
Максимальные величины анализируемых показателей при культивировании В.НсЬешй>п1Ш ТПИ 11 наблюдались для варианта ПС № 7 (БК = 4,2 млрд. м.к/см3).
Оптимальная посевная доза бацилл составила 1,0 млн. м.к/мл ПС, с содержанием зрелых спор не менее 95 %.
Учитывая, что для составления серии препарата Биод-5 биомассы В.зиЫШв ТПИ 13 требуется в 3 раза больше, чем В.НсЬетймтшз ТПИ 11, культивирование проводили в биореакторах «БИОР-0,25» и «БИОР-0,1», соответственно. На основании проведенных исследований были разработаны параметры и режимы глубинного культивирования бацилл (табл. 6).
6. Параметры и режимы глубинного культивирования бацилл
Параметры и режимы В.зиЫШБ В.ИсЬегшРог-
ТПИ 13 пш ТПИ 11
Тип биореактора БИОР-0,25 БИОР-0,1
Питательная среда №4 №7
Коэффициент заполнения биореактора 0,6 0,6
Температура, °С 37±1 37±1
Давление, МПа 0,10±0,05 0,10±0,05
Коэффициент аэрации, дм3/мин 0,7±0,1 0,38±0,1
Частота вращения мешалки, об/мин 530 320
Продолжительность культивирования, ч 24 26
Пеногаситель Э-1, дм3 0,8 0,5
Характеристики культур бацилл, полученных при выращивании в биореакторах представлены в табл. 7.
7. Характеристика культур В. виЬЛНв ТПИ 13 и В. ИсИетКзгпш ТПИ 11, полученных при культивировании в биореакторах
Кол-во Характеристика культур
Микроорганизм серий рН БК, БК1, Спорооб-
куль- млрд. млрд. разование,
тур м.к/см3 м.к/см3 %
В. эиЫШзТПИ 13 18 6,23±0,2 2,6±0,3 1,9±0,3 73±10
В КсЬешйоптш ТПИ11 15 6,5±0,4 5,7±2,1 3,8±2,1 67±5
Полученные результаты свидетельствуют об удовлетворительной воспроизводимости ростовых и спорообразующих свойств ПС № 4 и ПС № 7, а также параметров и режимов глубинного культивирования бацилл в биореакторах марки «БИОР», позволяющих получать высокий уровень накопления биомассы бацилл, содержащей более 60 % зрелых спор.
Технологические параметры глубинного культивирования В.зиЫШв ТПИ 13 и В.ПсЬешйнттш ТПИ 11 и требования к получаемым культурам бацилл были включены в регламент производства Биод-5 и технологические инструкции.
Методы концентрирования нативных культур B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11
На следующем этапе исследований необходимо было оценить возможность использования различных методов концентрирования биомассы B.subtilis ТПИ 13 и B.Hcheniformis ТПИ 11 и разработать технологические параметры концентрирования. С этой целью были проанализированы технические характеристики сепараторов АСГ-ЗМБ, Альфа-Лаваль и Вестфалия, различающихся по производительности и режиму выгрузки концентрата. Было установлено, что только сепаратор АСГ-ЗМБ обеспечивает асептические условия выгрузки концентрата, что явилось определяющим обстоятельством при выборе прибора для дальнейшей работы.
Для концентрирования были использованы нативные культуры (НК) бацилл, имеющие характеристики, представленные в табл. 8.
8. Характеристика культур B.subtilis ТПИ 13 и В. licheni-formis ТПИ 11, используемых для концентрирования
Показатели B.subtilis B.licheniformis
ТПИ 13 ТПИ 11
БК, млрд. м.к/см3 2,6±0,3 5,7±2,1
БЮ, млрд. м.к/см3 1,9±0,3 3,8±2,1
Концентрация зрелых спор, % 73,0±10 67±5,0
рн б,63±0,2 6,2±0,1
Посторонняя микрофлора (ПМФ) - -
Микробную массу бацилл сепарировали при 9000 об/мин и скорости подачи суспензии 35 дм3/ч. Продолжительность накопления биомассы B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 для заданной концентрации составила 74 и 33 мин, а выход целевого продукта по биологической концентрации - 79 и 82 %, соответственно.
Получаемые сепарированием концентрированные микробные суспензии (KMC) бацилл содержали 60 млрд.м.к/см3 при отсутствии ПМФ.
Была оценена возможность получения KMC бацилл с применением ультрафильтрационной установки УПЛ-0,6.
Было установлено, что концентрация спор в суспензиях, полученных ультрафильтрацией, в 2 раза меньше, чем в суспензиях, по-
лученных сепарированием за тот же промежуток времени. Кроме того, отсутствие качественных фильтров отечественного производства значительно повышает себестоимость препарата.
Таким образом, в основе разрабатываемой технологии серийного производства Биод-5 было признано целесообразным использовать способ концентрирования НК бацилл с применением боксиро-ванных сепараторов АСГ-ЗМБ, как технологичный и экономически выгодный.
Приготовление жидкой формы препарата Биод-5
Учитывая опыт приготовления жидких форм препаратов на основе живых бактерий, мы провели исследования по изысканию стабилизирующих добавок, способствующих сохранению биологической активности жидкого Биод-5 в течение не менее 1 года. В качестве стабилизаторов остановились на глицерине и феноле, как наиболее широко применяемых и доступных веществах.
Было приготовлено 4 серии жидкой формы Биод-5. На 1 мл препарата добавили различные стабилизаторы: серия 1 - 0,01 мл 50 %-ного раствора фенола; серия 2 - стабилизаторы не вводили (контроль); серия 3 - 0,14 мл глицерина; серия 4 - 0,01 мл 50 %-ного раствора фенола и 0,14 мл глицерина. Препарат представлял собой гомогенную суспензию и был безвреден для белых мышей.
На основании проведенных исследований были разработаны технические условия на опытную партию Биод-5 (ТУ 9337-00759088697-004).
Препарат фасовали по 10 мл во флаконы объемом 10 см3 и хранили в холодильнике при температуре 4°С в течение 12 месяцев. Один раз в месяц вскрывали по 3 флакона каждой серии и определяли соответствие препарата требованиям ТУ.
К концу срока хранения все изучаемые серии Биод-5 не изменили органолептических свойств, не контаминировались ПМФ, были безвредны для белых мышей и антагонистически активны в отношении тест-штаммов бактерий. Выживаемость бацилл в процессе хранения была 100 %-ной при стабилизации бактериальной суспензии фенолом и глицерином (серия 4).
Таким образом, был определен следующий состав жидкой фор-
мы Биод-5, в расчете на 1 мл. В^иЫШз ТПИ 13 - 18 млрд.м.к./мл; В.ПсЬепйоптз ТПИ 11-6 млрд.м.к./мл; глицерин - 0,14 мл; 50 %-ный раствор фенола - 0,01 мл; фосфатный буфер - 0,85 мл.
Исходя из результатов исследований, можно заключить, что разработанная технология производства Биод-5 позволяет получить жидкую лекарственную форму пробиотика, обладающую свойством длительного хранения.
Технология производства сухой формы препарата Биод-5
Учитывая, что высушивание микроорганизмов является одним из эффективных методов консервирования биопрепаратов, необходимо было определить наиболее перспективный метод сушки бактериальной суспензии В.зиЫШв ТПИ 13 и В.ПсНешйэпшз ТПИ 11, исследовать свойства сухих микробных масс (СММ) бацилл, полученных различными методами высушивания и определить возможность приготовления на их основе сухой и таблетированной лекарственных форм пробиотика Биод-5.
В работе использовали по 5 серий НК бацилл, полученных методом глубинного культивирования, и среду высушивания, содержащую сахарозу, желатину и хлорид натрия (табл. 9).
9. Характеристика СММ бацилл, полученных различными методами высушивания
Метод высушивания Микроорганизм Показатели СММ
рН БК, млрд. м.к/см' Спорообразование %
Сублимационный ВзиЫШзТПИ 13 7,1 576±254 67±13 6,3±3,8
В.НсЬешй>гпш ТПИ 11 6,8 307±117 88±21 4,3±2,7
Распылительный В.эиЬЫк ТПИ 13 7,2 5021193 79117 6,2±3,1
В.ПсЬешйлттш ТПИ 11 6,9 276+92 84+14 4,3±2,5
Контактно- сорбцион- ный В.зиЫШБ ТПИ 13 7,1 148139 65+9 2,1+0,7
В.1юЬеш1Ъггтп5 ТПИ И 7,2 156146 71+10 2,2+1,1
Примечание: \У - массовая доля влаги
Температурный режим лиофильного высушивания KMC бацилл поддерживали в пределах от минус 30 до плюс 30°С в течение 60 ч при давлении в сублиматоре 30 Па.
Полученная СММ по всем показателям соответствовала требованиям нормативных документов, содержала в 1 г 307-576 млрд. м.к., из них 67-88 % - споры. Однако недостатками данного метода являются длительность процесса высушивания, высокая гигроскопичность СММ, низкая насыпная плотность и сыпучесть.
При распылительном высушивании температура теплоносителя на входе составила 140°С. В 1 г СММ содержалось 276-502 млрд. м.к., из них 79-84 % - споры. Полученные СММ имели насыпную плотность на 25-35 % выше, чем у материалов, обезвоженных сублимационным способом, и обладали низкой гигроскопичностью.
При контактно-сорбционном обезвоживании биомассы B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ И в разбавитель (сахаразу, лактозу или глюкозу) вносили KMC бацилл до образования пластичной массы. Приготовленную смесь гранулировали через сито с диаметром отверстий 3 мм, распределяли по поддону с толщиной слоя не более 10 мм и выдерживали 20-24 ч при температуре (25±5)°С, а затем пропускали через сито с диаметром отверстий 2 мм. Грану-ляты, полученные на основе лактозы, имели высокую насыпную плотность (около 600 кг/м3) и сыпучесть (около 80 кг/м2с), обладали меньшей поглотительной способностью, чем приготовленные на основе сахарозы и глюкозы. Содержание бацилл в 1 г СММ составило 148-156 млрд.м.к., из них 65-71 % - споры
Таким образом, для приготовления сухой формы пробиотика Биод-5 можно использовать любой метод обезвоживания биомассы, в зависимости от имеющегося на предприятии оборудования.
Все приготовленные серии препарата соответствовали требованиям нормативных документов.
Приготовлевие таблетированной формы препарата Биод-5
Исходя из результатов исследований, можно предположить, что для приготовления таблетированной формы из СММ B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ И, полученных методами сублимационного и контактно-сорбционного обезвоживания, наиболее ра-
циональным будет использование метода прямого прессования, а для СММ, полученных распылительным высушиванием - с предварительной влажной грануляцией.
Для определения влияния вспомогательных веществ на жизнеспособность бацилл в суспензии раздельно добавляли магния карбонат основной, кальция фосфат, крахмал картофельный, тальк, магния стеарат, кальция стеарат.
Было установлено, что крахмал, тальк и кальция стеарат наиболее нейтральны в отношении бацилл и могут быть использованы в качестве вспомогательных веществ в приготовлении таблетиро-ванной формы Биод-5.
Лиофильно высушенную СММ бацилл измельчали, смешивали с лактозой и опудривали вспомогательными веществами. Для снижения времени распадаемости таблетки в смесь вводили крахмал в количестве 8 % от общей массы, а для улучшения технологических свойств использовали тальк - 3 % и кальция стеарат -1,5 %.
Полученная смесь обладала удовлетворительной сыпучестью (56 кг/м2с), однородностью, максимальное значение прессуемости достигалось для фракций с размером частиц не менее 0,1 мм.
Показатели качества Биод-5 в таблетках соответствовали требованиям нормативной документации (табл. 10).
10. Показатели качества таблеток, полученных на основе СММ, обезвоженных различными методами
I Метод БК, млрд Прочность' Распада- Массо- Усилие вы-
! обезвожи- м.к. в на излом, емость. вая доля талкивания из
вания табл. МПа мин влаги, % матрицы, МПа
Сублимаци- 4,0±0,2 3,6±0,6 9±1 2,2±1,1 8,8±1,3
1 онный
> Распылитель- 4,(НО,2 3,1 ±0,6 7±2 3,0±0,5 4,4± 1,6
; ный
Контактно- 4,0±0,1 1,3±0,1 9±2 2,5±0,4 4,1±1,2
1 сорбционный
Образцы таблеток, приготовленные из СММ, обезвоженных распылительным методом, имели более высокие показатели по прочности и гигроскопичности, чем таблетки, приготовленные из
лиофилизированной СММ. В то же время смесь для таблетирова-ния и таблетки, приготовленные на основе СММ и гранулята лактозы, овлажненных сахарным сиропом, имели наименьший коэффициент неоднородности и повышенную прочность на излом.
В СММ бацилл, обезвоженных контактно-сорбционным методом, вводили лактозу до 80 % от общей массы, крахмал (6 %) и кальция стеарат (0,5 %) и прессовали прямым методом. Полученные образцы таблеток характеризовались высокой прочностью (1,3 МПа) и низкой влагопоглощающей способностью.
На основании проведенных исследований были разработаны технологии приготовления таблетированной формы Биод-5 прямым прессованием и с влажной грануляцией.
Таблетки Биод-5 хранили во флаконах при температурах 5 и 25°С в течение 12 месяцев. Было установлено, что через 1 год хранения при заданных температурах все показатели таблеток соответствовали требованиям ТУ.
Методы контроля препарата Биод-5
С целью обеспечения безвредности, стандартности и специфической активности Биод-5 были разработаны методы контроля препарата по таким показателям как внешний вид, специфическая активность; количество жизнеспособных бацилл и спор в дозе; контаминация ПМФ; растворимость; массовая доля влаги; рН; безвредность; подлинность штаммов, составляющих основу Биод-5.
Препарат Биод-5 представляет собой микробную массу B.sub-tilis ТПИ 13 и В.licheniformis ТПИ 11 в виде спор, в соотношении 3:1 и производится в сухой (Биод-5С), жидкой (Биод-5Ж) и таблетированной (Биод-5Т) лекарственных формах. Препарат должен быть безвреден для белых мышей, не содержать ПМФ и давать зоны угнетения роста тест-штаммов не менее чем (мм): S.aureus-15, C.albicans-12, S.sonnei-10, S.typhimurium-10.
Биод-5 сухой - аморфный порошок или в виде гранул, бежево-серого цвета; количество жизнеспособных бацилл в 1 г должно составлять (24±3) млрд. м.к., количество зрелых спор - (90±5) %.
Биод-5 жидкий - гомогенная взвесь от бежевого до темно-серого цвета; количество жизнеспособных бацилл в 1 мл должно состав-
лять (24±3) млрд м. к., количество зрелых спор - (60 ±10) %.
Биод-5 в таблетках - таблетки круглой формы с плоскими или выпуклыми поверхностями, бежево-серого цвета, диаметром 9 мм, массой (0,4±0,05) г; количество жизнеспособных бацилл в 1 таблетке должно составлять (4,0 ± 0,2) млрд. м.к., количество зрелых спор - (70 ± 5) %; растворимость - (10 ± 2) мин.
Все серии Биод-5 в различных лекарственных формах прошли производственный контроль и соответствовали требованиям нормативных документов.
Лечебно-профилактическая эффективность пробиотика Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях животных
Контролируемые опыты по изучению лечебно-профилактической эффективности Биод-5 при ЖКБ телят и поросят были проведены в хозяйствах Московской, Свердловской и Нижегородской областей. У телят первых дней жизни регистрировался колибакте-риоз с заболеваемостью от 20 до 80 % и летальностью до 40-50 % от числа заболевших животных. У поросят первых 2-3 недель жизни и после отъема в возрасте 2 месяцев, отмечались поражения ЖКТ, сопровождавшиеся диареей и гибелью животных (от 16,3 % до 22,5%). Из фекалий больных поросят и от трупов выделяли возбудителей колибактериоза и сальмонеллеза.
Изучение терапевтической эффективности Биод-5 при ЖКБ лошадей было проведено в КСК «Измайлово». У 12 % лошадей разного возраста отмечалось расстройство пищеварения, плохая пере-вариваемость корма, задержка линьки, быстрая утомляемость. У животных был обнаружен дисбактериоз кишечника, биохимические показатели крови были ниже физиологической нормы.
Изучение лечебно-профилактической эффективности Биод-5 при ЖКБ пушных зверей проводили в звероводческом хозяйстве «Тимоховский», где заболеваемость песцов серебристых в 2002 г составила 22,1 %, падеж молодняка -10,9%.
Терапевтическую эффективность Биод-5 при ЖКБ мелких домашних животных оценивали на собаках и кошках разных пород и возрастов с признаками расстройства пищеварения, поступавших в ветеринарные клиники Москвы и Н.Новгорода.. Причинами ЖКБ
собак являлись острые и хронические гастриты, энтериты, стрессы, гельминты, дисбактериозы и др. У кошек отмечали диарею на фоне колитов, энтеритов, отравлений, неправильного кормления и др.
При проведении испытаний лечебно-профилактической эффективности пробиотика Биод-5 в различных лекарственных формах перед нами стояли задачи определить дозу, кратность и продолжительность введения Биод-5, обеспечивающих лечебно-профилактический эффект при ЖКБ сельскохозяйственных (телята, поросята, лошади) и плотоядных (пушные звери, собаки, кошки) животных (рис. 4).
[_ Биод-5 |
Таблегиро-ванный
Сухой Жидкий
Определение лечебно-профилактической дозы
Определение кратности и длительности введения
Лечение
Телята, поросята, лошади, песцы, собаки, кошки
Лечение
N
\
Поросята
Профи- Лечение
лактика
Телята,
Телята собаки
Разработка схемы применения препарата
| Инструкция по применению |
4. Схема эксперимента по определению лечебно-профилактической эффективности препарата Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях разных видов животных
Было установлено, что высокий профилактический эффект сухой формы препарата достигается при даче его разным видам животных 1 раз в день в течение 3 дней в дозах 0,2-1,0 г, терапевтический - 2 раза в день 5-7 дней подряд, в дозах 0,2-10 г; Биод-5 в таблетках с профилактической целью - 3 табл 1 раз в день в течение 3 дней, терапевтический - 3 табл 2 раза в день 6 дней подряд; жидкий Биод-5 - с терапевтической целью - 1 мл 1 раз в день в течение 7 дней (табл. 11).
11. Рекомендуемые дозы и схемы применении препарата Биод-5 для животных разных видов
Доза крашоаьи продолжительность применения
Ьиод-5С Ьиод-51 Ьиод-5Ж
Вид ЖИВОI ных 11рО<|>И- 'I еранев- 11рофи- 1ерапев- Профилак-
лактич гическая так гич шческая тическая
(1 pas и (2 раза в (1 раз в (2 раза и (1 раз н
день) день) день) день) день)
1еля1а 1.0 г х 3 1.0 г х 6 3 1абл х 3 3 !абл х 6 -
Порося 1 а-сосуны 0 2 i х 3 0.2 i х 6 - - -
11орося ьэ-отьемыши 0.5 т х 3 0.5 i х 6 - 1,0 мл х 7
Лошади - 10.0 1 х 7 -
Песцы племенные 0.5 г ч 3 05ix5! - -
) !есиы в во !рас ге 40 дн 0.2 т х 3 Oil х 5 - -
С обаки весом до 5 кг - Го 3Iх ^ Т 1 табл х 5 -
С обаки весом более 5 К1 - 1.0 i х 5 |2таблх5 -
Кошки - 0 2 i х 5 ] - | -
Примечание \ 3-7 - количество дней <•->•-iipenapai не применяли
Состав кишечной микрофлоры у животных нормализовался через 2-7 суток после применения Биод-5. лакто- и бифидобактерии
8 У
выделялись в высоких концентрациях (10 -10 м.кл), энтеропаю-¡енные бактерии V опытных животных не обнаруживались (рис 5, 6).
Концен[рация бактерий. ^ КОЕ/1
1 7 '1 « 5 в ! в В
Виды баюерий
Дни исследований 0 - 3 cvr, Jf - 7 cs i_ О - 14 сучки 1 - I cob, 2 - P vulgaris 3 - P mirabihb 4 - S epiderrmdib 5 - S iecaJib 6 - k pneumonia 7 - С ireundn 8 - i actobacillus 9 - Bifidobacterium
5. CociaB микрофлоры фекалий icjihi опытных ipvnii
Концентрация йашерии lg KOI h
Виды бак три и
Дни исследовании Q ' liijP ]4с\ши
1-1 coli 2 - Р vulgaris 3 - I'mirabilis 4 - S cpidermidis 5 S leutli'-6 - К pneumonid 7 - С Ireundn 8 - ! aclobacillus 9 - Bifidobaclenup1
6. Состав микрофлоры фекалий «елят кошрольных (руин
Бак1ерии-компонсн1Ы препарата Ьио,1 5 приживлялись в кп шечнике и на 7-15 дни исследований элиминировали и>> орымшма животных Заболеваемость животных опытных гр>лп соыавила 6.2 - 10 %.сохранность - ! 00 % (табл ]2)
11. Лечебно-профилактическая »ффекпшноегь Биол-5 при желудочно-кишечных болезнях разных видов живем пых
Живо! ные
Телята Порося! а
Сохранное 1ь "о.
-т
Лошади
Пушные звери
Собаки
Кошки
У теля г. получавших Биол-5 с терапевтической целью, продол жительность болемни была в 2 ра*а короче, чем \ живо I них коп I рольной Гр}!ШЫ
Живой вес поросят-отьемышей опытных групп был выше на 10,0 кг, а прирост массы - на 146,7 г, чем в контрольной группе.
У лошадей, леченных пробиотиком Биод-5, на 3 день после дачи препарата отмечалось улучшение аппетита и перевариваемое™ корма. Биохимический анализ крови показал, что уровень общего белка, альбуминов, холестерина, каротина, кальция (будучи понижены у животных как опытной так и контрольной групп до начала лечения) у лошадей опытной группы достиг средненормативных показателей, а у контрольных животных остался на том же уровне.
У песцов серебристых опытных групп плодовитость самок и количество родившихся живых щенков были больше на 8,6 % и 9,5 %, соответственно, чем в контрольной группе.
У собак и кошек, получавших Биод-5 с терапевтической целью, нормализация кишечной микрофлоры наблюдалась на 2-3 сутки, на фоне исчезновения клинических признаков ЖКБ.
Экономический эффект от применения Биод-5 при ЖКБ новорожденных телят составил 56,6 руб на рубль затрат.
Высокая профилактическая и терапевтическая эффективность препарата Биод-5 при ЖКБ животных позволяет рекомендовать его к применению в ветеринарной практике скотоводства, свиноводства, коневодства, звероводства, собаководства и кошководства.
ВЫВОДЫ
1. Бактерии рода Bacillus широко распространены во внешней среде и являются типичными представителями экзогенной кишечной микрофлоры животных разных видов Большинство изолятов бацилл, выделенных из кишечного содержимого телят, сточных вод и смывов с объектов животноводческих помещений, относятся к видам B.subtilis и B.licheniformis. Из 116 изолятов бацилл отобраны 2 культуры - B.subtilis и B.licheniformis, обладающие выраженным антагонистическим действием по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам.
2. Селекционно-генетическое изучение отобранных культур бацилл позволило получить 2 штамма, обладающих стабильными биологическими свойствами и множественной устойчивостью к антибиотикам. Выделенные штаммы депонированы во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, ис-
пользуемых в ветеринарии и животноводстве (ФГУ ВГНКИ) под номерами B.subtilis ТЛИ 13-07.06.21-ДЕП/ВГНКИ и B.licheniformis ТПИ 11 -07.06.22-ДЕП/ВГНКИ. На основе этих штаммов создан пробиотик Биод-5, содержащий 3 части B.subtilis ТПИ 13 и 1 часть B.licheniformis ТПИ 11.
3. Антагонистические свойства бактерий-компонентов Биод-5 обусловлены ферментативной активностью и продукцией метаболитов, обладающих бактерицидным и бактериостатическим действием in vitro и in vivo на энтеропатогенные эшерихии, сальмонеллы, стафилококки, кандиды, шигеллы, псевдомонады, протеи, клебсиеллы, цитробактеры и кампилобактеры.
4. Биод-5 проявляет синергидное действие in vitro и in vivo в отношении лактобацилл и бифидобактерий. Концентрация этих бактерий повышается с 105 до 109 м.к/мл при культивировании их в присутствии Биод-5 или культурального фильтрата бацилл-компонентов Биод-5. При пероральном применении препарата экспериментальным животным концентрация лакто-и бифидобаюерий в желудочно-кишечном тракте увеличивается с 10б до 109 м.к/г, в сравнении с контролем.
5. Биод-5 безвреден для животных. Многократное пероральное введение препарата в дозах, в 20 раз превышающих рекомендуемые, не вызывает изменений физиологических показателей организма животных.
6. Препарат Биод-5 активизирует факторы неспецифической резистентности организма животных - фагоцитарная активность макрофагов повышается на 5 %, фагоцитарный индекс - на 2,5 %, активность естественных киллеров - на 25 % и обладает адьювант-ным действием - в комплексе с противовирусными вакцинами у экспериментальных животных в 2 раза повышается пролифератив-ная активность спленоцитов.
7. Оптимизированные питательные среды с пониженным содержанием аминного азота (17-22 мг%) для выращивания В subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 методом глубинного культивирования в биореакторах, включающие гидролизат казеина, кукурузный экстракт и дополнительные компоненты, позволяют получать основной биотехнологический продукт в споровой форме. Разработанная технология глубинного культивирования бацилл-компонен-
РОС. с " ШАЛЬНАЯ
ÍFKA
С
т рк
тов Биод-5 позволила, по сравнению с аналогом, сократить трудозатраты в 1,9 раз, а продолжительность выращивания микроорганизмов - в 6 раз.
8. Оптимальными режимами концентрирования культур B.sub-tilis ТЛИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 с использованием боксиро-ванных сепараторов АСГ-ЗМБ являются скорость подачи суспензии 30±5 дм /ч, время накопления биомассы для заданной концентрации - от 33 до 74 мин. Полученный этим способом концентрат бацилл не содержит посторонней микрофлоры.
9. Использованные в качестве стабилизирующих добавок фенол (0,01 ±0,005 мл) с глицерином (0,14±0,01 мл) позволяют сохранить активность жидкой лекарственной формы Биод-5 в течение не менее 12 месяцев при положительных температурах. Биологическая концентрация бацилл в 1 мл препарата составляет 24±3 млрд. м.к.
10. При получении сухой формы Биод-5 наиболее эффективными являются сублимационный и распылительный методы высушивания, позволяющие получать препарат с концентрацией спор 24±3 млрд. м.к. в 1 г вещества.
11. Для приготовления таблетированной формы Биод-5 используется биомасса B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11, высушенная распылительным или контактно-сорбционным методом. Таблетированную форму Биод-5, состоящую из сухой микробной массы бацилл, лактозы, крахмала, талька и кальция стеарата, изготавливают прямым прессованием или с влажной грануляцией. Таблетка препарата содержит 4±0,2 млрд. м.к.
12. Разработана и апробирована с положительным результатом в условиях хозяйств и ветеринарных клиник схема применения жидкой, сухой и таблетированной форм пробиотика Биод-5 для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней телят, поросят, лошадей, пушных зверей, собак и кошек. Лечебно-профилактическая эффективность различных лекарственных форм Биод-5 составляет 96-100 %, при длительности применения препарата в рекомендуемых дозах от 3 до 7 суток.
13. Среднесуточный прирост живой массы поросят, получавших Биод-5, был выше на 147 г, по сравнению с контрольными животными. Препарат способствует повышению аппетита, переваривае-мости корма, а также повышению работоспособности спортивных
лошадей. У песцов серебристых племенного стада применение Биод-5 повышает плодовитость самок на 8,6 %, количество родившихся живых щенков в опытных группах увеличивается на 9,5 %, в сравнении с контрольной группой.
14. Экономический эффект от применения Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят составляет 56,6 руб на рубль затрат.
ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. Для производства пробиотика Биод-5 ветеринарного назначения селекционированы штаммы B.subtilis ТЛИ 13-07.06.21-ДЕП/ВГНКИ и B.lichenifo-rmis ТЛИ 11-07.06.22-ДЕП/ВГНКИ. Штаммы паспортизированы и депонированы во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ФГУ ВГНКИ).
2. Разработаны и утверждены в установленном порядке технические условия на жидкую, сухую и таблетированную формы «Биод-5 (ТУ 9337-007-59088697-004) на опытную партию».
3. Разработано «Временное наставление по применению пробиотика Биод-5 в ветеринарии».
4. Разработаны и утверждены «Инструкция по изготовлению пробиотика Биод-5» (17.03.2002), «Промышленный регламент производства Биод-5» на опытную партию (06.01.2004), «Технологический регламент производства препарата Биод-5» в сухой, табле-тированной и жидкой лекарственных формах (12.09.2004).
5. В соответствии с порядком регистрации ветеринарных препаратов в Российской Федерации, нормативная документация и отчеты об испытании Биод-5 прошли экспертизу в ФГУ ВГНКИ. Регистрационные испытания (от 06.07.2004 г) подтвердили соответствие показателей качества пробиотика Биод-5 требованиям ТУ.
6. На базе Центра ВТП БЗ НИИМ МО РФ и ООО «НПК ЦМВЭИ» созданы аппаратурно-технологические линии промышленного производства пробиотика Биод-5. Организовано серийное производство препарата в различных лекарственных формах.
7. По результатам исследований разработаны и утверждены Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ (per. № 13-5-02/1043 от
11.05. 2004) методические рекомендации «Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных».- М., 2004.
8. Разработаны и утверждены Учебно-методическим объединением высших учебных заведений в области ветеринарии и зоотехнии учебно-методические пособия по биотехнологии «Способы поддержания асептических условий при культивировании» (2002), «Способы культивирования микроорганизмов» (2002), «Концентрирование и высушивание биопрепаратов» (2002), «Выделение и идентификация условно-патогенных микроорганизмов и сальмонелл при острых кишечных заболеваниях молодняка животных» (2003), «Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных с целью постановки диагноза и производства вакцинных и пробиотических препаратов» (2004).
9. Результаты исследований по созданию технологии производства пробиотика Биод-5 и оценке его эффективности на разных видах животных включены в учебник «Биотехнология» для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальностям 310700-Зоотехния и 310800-Ветеринария» (28.12.2004 г, № 06-1456).
10. Получено положительное решение Российского агентства по патентам и товарным знакам по заявке № 2004121854 «Лечебно-профилактический препарат ветеринарного назначения на основе штаммов спорообразующих бактерий Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis».
РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ
1. Рекомендовать пробиотик Биод-5 зооветспециалистам и владельцам животных в качестве лечебно-профилактического средства при желудочно-кишечных болезнях телят, поросят, лошадей, пушных зверей, собак и кошек, вызванных энтеропатогенными эшерихиями, сальмонеллами, стафилококками, кандидами, шигел-лами, псевдомонадами, протеями, клебсиеллами, цитробактерами, кампилобактерами и их ассоциациями, а также как средство заместительной терапии для восстановления полезной микрофлоры кишечника животных, в частности, лактобацилл и бифидобактерий, после использования антибиотиков и других химиотерапевтиче-
ских препаратов.
2. Отработанные технологические параметры и режимы производства пробиотика Биод-5 в сухой, таблетированной и жидкой лекарственных формах с использованием отечественного сырья и оборудования рекомендуются для приготовления биопрепаратов на основе других микроорганизмов.
3. Методические рекомендации «Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных», утвержденные Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ, рекомендуется использовать ветеринарным лабораториям для прижизненной диагностики желудочно-кишечных болезней молодняка животных.
4. Результаты исследований по созданию технологии производства пробиотика Биод-5 и оценке его эффективности на разных видах животных рекомендуется использовать в учебном процессе по дисциплине «Биотехнология» в высших учебных заведениях по специальностям 310700- Зоотехния и 310800-Ветеринария.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Грязнева Т.Н. Антагонистическая активность бифидо- и лак-тобактерий в отношении энтеробактерий /Грязнева Т.Н., Ставцева Л.Я. //Ветеринария,- 1991. - № 6. - С. 21-22.
2. Грязнева Т.Н. Биологические средства коррекции микробиоценоза кишечника телят /Грязнева Т.Н., Павлова И.Б., Воронин Е С., Панитков М.А //Ветеринария - 1991. - № 7,- С. 23-24.
3. Девришов Д.А. Изучение бактериобиоценоза - причины острых желудочно-кишечных заболеваний молодняка животных /Девришов Д А., Воронин Е С., Ставцева Л Я , Грязнева Т.Н. // Вестник ВАСХНИЛ.- 1991.- № 2.- С. 43-46.
4. Ставцева Л.Я. Роль условно-патогенных энтеробактерий в возникновении диареи у новорожденных телят-гипотрофиков /Ставцева Л.Я., Грязнева Т.Н //Новое в диагностике, лечении и профилактике болезней молодняка с.-х. животных: Межвуз. сб. науч. ст. - М.: МВА. - 1991. - С. 27-28.
5. Грязнева Т.Н. Изучение коррекционного воздействия лакто-бактерий на биоценоз кишечника при диарее новорожденных телят /Грязнева Т.Н. //Новое в диагностике, лечении и профилактике бо-
лезней молодняка с.-х. животных: межвуз. сб. науч. ст. - М.: МВА. - 1991.-С. 31-32.
6. Панитков М.А. Коррекция биоценоза кишечника телят про-биотиками /Панитков М.А., Грязнева Т.Н. //Проблемы диагностики, профилактики и лечения с.-х. животных в Нечерноземной зоне: Сб. науч. ст. - Н.Новгород: НГСХА. - 1992. - С. 18-19.
7. Грязнева Т.Н. Коррекция бактериоценоза кишечника новорожденных телят лактобактерином и иммуномодуляторами /Грязнева Т.Н. //Проблемы научного обеспечения повышения эффективности с.-х. производства: Сб. науч. ст. /Ветеринария. - Бишкек. -1992,- С. 53-55.
8. Грязнева Т.Н. Элекронно-микроскопическое исследование колоний патогенных микроорганизмов и роль лактобактерий в процессе антагонизма /Грязнева Т.Н. //Достижения ветеринарной науки - производству: Сб. науч. ст - Чебоксары: Изд. Чувашского СХИ,- 1994.- С. 23-26.
9. Грязнева Т.Н. Способ профилактики диареи новорожденных телят /Грязнева Т.Н., Соболь М.А. //Ветеринарная и биологическая наука с.-х. производству: Сб. науч. ст. - Н.Новгород: НИВИ,- 1995.-С. 45-46.
10. Грязнева Т.Н. Экстренная профилактика болезней телят в неонатальный период /Грязнева Т.Н., Соболь М.А. //Животноводство на Европейском Севере: фундаментальные проблемы и перспективы развития: Сб. науч. ст. - Петрозаводск: Изд. Петрозаводского университета. - 1996.- С. 67-69.
11. Сочнев В.В. Планирование и организация ветеринарных мероприятий /Сочнев В.В., Голубев М.И., Панитков М.А., Аринкин A.B., Грязнева Т.Н. и др. НУчебное пособие по изучению дисциплины «Организация и экономика ветеринарного дела».- Н. Новгород: НГСХА -1998.- Т.2. - 80 с.
12. Грязнева Т.Н. Противоэпизоотические мероприятия в служебном собаководстве /Грязнева Т.Н., Вязмина Е.В., Жданова J1.B. //Концепция научного обеспечения развития ветеринарной медицины в северо-восточном регионе России: Сб. науч. ст. - Н. Новгород: НГСХА. - 1999,- С. 21-22.
13. Воронин Е С. Биотехнология /Воронин Е.С., Тихонов И.В., Девришов Д А., Грязнева Т.Н. и др. //Программа для высших учеб-
ных заведений по специальности 310800 - «Ветеринария»,- М.. МГАВМиБ.-2000.-21 с.
14. Воронин Е.С. Физические основы и способы микрофильтрации и ее применение в технологии производства ветеринарных препаратов /Воронин Е.С., Девришов ДА., Тихонов И.В., Грязнева Т.Н. // Учебное пособие по биотехнологии, 4.2 «Микрофильтрация».- М.: МГАВМиБ. - 2000.- 26 с.
15. Грязнева Т.Н. Ветеринарное обеспечение служебного собаководства /Грязнева Т.Н., Жданова JI.B. //Здоровье, разведение и защита мелких домашних животных: Сб. науч. ст. - Уфа: УГСХА. -2000.- С. 36-38.
16. Тихонов И.В. Асептика в биотехнологии /Тихонов И.В., Воронин Е.С., Ковалев C.B., Грязнева Т.Н. и др. //Учебно-методическое пособие по биотехнологии. - М.: МГАВМиБ.- 2000.- 20 с.
17. Тихонов И.В. Промышленное культивирование микроорганизмов /Тихонов И.В , Воронин Е.С., Ковалев C.B., Грязнева Т.Н. и др. //Учебно-методическое пособие по биотехнологии. - М.: МГАВМиБ. - 2000.- 50 с.
18. Тихонов И.В. Выделение, концентрирование и очистка биопрепаратов /Тихонов И.В., Воронин Е.С., Ковалев C.B., Грязнева Т.Н. и др. //Учебно-методическое пособие,- М.: МГАВМиБ.- 2000.60 с.
19. Тихонов И.В. Способ повышения устойчивости к желудочно-кишечным инфекциям /Тихонов И.В , Грязнева Т.Н., Девришов Д.А. //Сб. науч. ст. IX междунар. ветеринар, конгресса.- M . Ассоциация практикующих ветеринарных врачей. - 2001.- С. 318-319.
20. Тихонов И.В. Способы поддержания асептических условий при культивировании /Тихонов И.В., Воронин Е.С., Грязнева Т.Н. и др. //Учебно-методическое пособие.- М.: МГАВМиБ.- 2002,- 30 с.
21. Тихонов И.В. Способы культивирования микроорганизмов /Тихонов И.В, Воронин Е.С., Грязнева Т.Н. и др. // Учебно-методическое пособие.- М.: МГАВМиБ. - 2002,- 58.
22. Тихонов И.В. Концентрирование и высушивание биопрепаратов /Тихонов И.В., Воронин Е.С., Грязнева Т.Н. и др. // Учебно-методическое пособие. - М.: МГАВМиБ. - 2002.- 50 с.
23. Жданова J1.B. Организация ветеринарно-санитарных мероприятий против болезней служебных собак в территориальных ор-
ганах уголовно-исполнительной системы Министерства Юстиции Российской Федерации /Жданова Л.В., Тихонов И.В., Грязнева Т.Н. и др. // Ветеринарная медицина.- Изд. «Агровет».- 2002,- № 1.-С. 8-9.
24. Грязнева Т.Н. Изучение свойств бифидобактерий, выделенных от разных видов животных /Грязнева Т.Н., Лештаева A.B., Любимов Д.Н., Лукьянова Л.В. // Ветеринарная медицина.- Изд. «Агровет». - 2002,- № 1.- С. 13-14.
25. Грязнева Т.Н. Оценка эффективности пробиотика «БИОД-5» при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят /Грязнева Т.Н., Тихонов И.В., Васильев П.Г. и др. // Ветеринарная медицина.- Изд «Агровет». - 2002.- № 2,- С. 22-23.
26. Грязнева Т.Н. Теоретическое обоснование разработки технологии глубинного способа культивирования микроорганизмов B.subtilis и B.licheniformis для производства пробиотиков /Грязнева Т.Н., Васильев П.Г., Лиморенко А.П. // Ветеринарная медицина.- Изд. «Агровет». - 2002.- № 2,- С. 32-34.
27. Скворцов А.Э. Технология приготовления таблетированной формы пробиотика «Биоспорин» /Скворцов А.Э., Грязнева Т.Н., Лиморенко А.П. и др. // Ветеринарная медицина.- Изд. «Агровет». -
2002.- №2.- С. 40.
28. Грязнева Т.Н. Лечение спортивных лошадей при желудочно-кишечных болезнях /Грязнева Т.Н., Андреева Д.В. //Сб. науч. ст. XI междунар. ветеринар, конгресса. - М: Ассоциация практикующих ветеринарных врачей. - 2003.- С. 284-285.
29. Арчаков A.B. Приживляемость бактерий-компонентов пробиотика Биод-5 в кишечнике цыплят /Арчаков A.B., Грязнева Т.Н., Тихонов Г.И. //Сб. науч. ст. XI междунар. ветеринар, конгресса. -М: Ассоциация практикующих ветеринарных врачей,- 2003.- С. 231.
30. Грязнева Т.Н. Электронная микроскопия биологических объектов /Грязнева Т.Н., Меньшикова З.Н., Тихонов И.В., Мельницкая Т.И. //Учебно-методическое пособие.- М.: МГАВМиБ. -
2003.- 109 с.
31. Воронин Е.С. Выделение и идентификации условно-патогенных микроорганизмов и сальмонелл при острых кишечных заболеваниях молодняка животных /Воронин Е.С., Грязнева Т.Н.,
Тихонов И.В и др. //Учебно-методическое пособие,- М.: МГАВ-МиБ,-2003.-105 с.
32. Тихонов И.В. Биотехнология /Тихонов И.В., Грязнева Т.Н., Гаврилов В.А., Заболоцкая Т.В. //Учебно-методическое пособие по изучению дисциплины студентами заочного факультета ветеринарной медицины.- М.: МГАВМиБ. - 2003.- 109 с.
33. Тихонов И.В. Разработка технологии производства пробио-тика «Биод-5» и методов его контроля /Тихонов И.В., Грязнева Т.Н., Лиморенко А.П. и др. //Современные достижения и проблемы клеточной биотехнологии и иммунологии в ветеринарной медицине: Сб. науч. ст.- научно-практич. журнал по фундамент, и прикладным вопросам ветеринарии «Ветеринарная патология». -2003.- № 1 (5).-С. 161-163.
34. Грязнева Т.Н. Сравнительная эффективность фугатов В. sub-tilis ТПИ 13 и В. licheniformis ТЛИ 11 и жидкой формы пробиотика «Биод-5» при желудочно-кишечных болезнях поросят-отъемышей /Грязнева Т.Н., Тихонов И.В., Васильев П.Г. //Современные достижения и проблемы клеточной биотехнологии и иммунолохии в ветеринарной медицине: Сб. науч. ст.- научно-практич. журнал по фундамент, и прикладным вопросам ветеринарии «Ветеринарная патология». -2003,- № 1 (5).- С. 153-154.
35. Грязнева Т.Н. Разработка технологии получения сухих питательных сред в порошковой, гранулированной и таблетированной формах для использования в производстве препарата «Биод-5» /Грязнева Т.Н., Рогожин A3., Васильев П.Г и др. // Ветеринарная медицина,- Изд. «Агровет». - 2003.- № 3,- С. 31-32.
36. Грязнева Т.Н. Экспериментальное обоснование использования сухих питательных сред в производстве препарата «Биод-5» /Грязнева Т.Н., Рогожин А.З., Васильев П.Г. и др. //Ветеринарная медицина,- Изд. «Агровет». - 2003.- № 3,- С. 27-28.
37. Тихонов И.В. Биотехнология /Тихонов И.В., Грязнева Т.Н., Ковалев C.B. //Методич. указания по изучению дисциплины с заданиями для контрольных работ студентам заочного факультета ветеринарной медицины,- М.: МГАВМиБ. - 2003.- 59 с.
38. Грязнева Т.Н. Пробиотик «Биод-5» и применение его в ветеринарии /Грязнева Т.Н. //Молодые ученые в решении проблем аграрной науки и практики: Сб. науч. ст.- Науковий bîcthhk Льв1всь-
JlbBÍBCbKoi державнси академш ветеринарно1 медицини ¡Meiii С.З. Гжицького.- Льв1в. - 2003,- Том 5 (№ 2).- Частина 3.- С. 41.
39. Грязнева Т.Н. Применение пробиотика «Биод-5» в птицеводстве /Грязнева Т.Н., Арчаков A.B., Васильев П.Г., Гаврилов В.А. //Актуальные проблемы развития животноводства: Сб. науч. ст. - Науковий bícthhk Льв1всы«м державно! академш ветеринарно1 медицини ¡меш С.З. Гжицького.- Льв1в. - 2003.- Том 5 (№ 3).- Час-тина 4,- С. 32-35.
40. Грязнева Т.Н. Лечение поросят-отьемышей при желудочно-кишечных болезнях /Грязнева Т.Н. //Актуальные проблемы развития животноводства: Сб. науч. ст. - Науковий bícthhk Льв1всько1 державно! академш ветеринаржн медицини ¡меш С.З. Гжицького.-Льв1в. - 2003.- Том 5 (№ 3).- Частина 4,- С. 30-32.
41. Заболоцкая Т.В. Оценка эффективности пробиотика «Биод-5» при желудочно-кишечных заболеваниях песцов /Заболоцкая Т.В., Грязнева Т.Н., Фатеев В.В. //Актуальные проблемы развития животноводства: Сб. науч. ст. - Науковий bícthhk Львшсько1 державно! академш ветеринарно1 медицини ¡меш С.З. Гжицького,-Льв1в. - 2003.- Том 5 (№ 3).- Частина 4,- С. 44-47.
42. Грязнева Т.Н. Новый пробиотик «Биод-5» и оценка его эффективности при желудочно-кишечных болезнях пушных зверей /Грязнева Т.Н. //Ветеринарные и медицинские аспекты зооантро-понзов: Сб. науч. ст. - Покров: ВНИИВВиМ. - 2003.- С. 614-620.
43. Грязнева Т.Н. Технология производства пробиотика «Биод-5» и его применение в ветеринарии /Грязнева Т.Н. //Ветеринарные и медицинские аспекты зооантропонозов: Сб. науч. ст.- Покров: ВНИИВВиМ. - 2003.- С. 609-614.
44. Грязнева Т.Н. Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных с целью постановки диагноза и производства вакцинных и пробиотических препаратов /Грязнева Т.Н., Тихонов И.В., Девришов Д.А. // Учебно-методическое пособие.- М.: МГАВМиБ. - 2004.- 116 с.
45. Воронин Е.С. Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных /Воронин Е.С., Грязнева Т.Н., Тихонов И В. и др. //Методические рекомендации.- Утверждены Департаментом ветеринарии МСХ РФ 11.05. 2004, per. № 13-502/1043. - М.. МГАВМиБ,- 2004,- 108 с.
46. Грязнена Т.Н. Разработка глубинного способа культивирования бацилл-компонентов пробиотика Биод-5 /Грязнева Т.Н. //Биотехнология. - 2004.- № 5,- С. 67-68.
47. Тихонов И.В. Терапевтическая эффективность пробиотика «Биод-5» при желудочно-кишечных болезнях лошадей /Тихонов И.В., Грязнева Т.Н., Васильев П.Г., Андреева Д.В. //Ветеринарная медицина.- Изд. «Агровет». - 2004.- № 4.- С. 9.
48. Тихонов И.В. Совершенствование технологии производства пробиотика Биод-5 и методов его контроля /Тихонов И.В., Грязнева Т.Н., Лиморенко А.П. и др. //Ветеринарная медицина.- Изд. «Агровет».- 2004,- № 4,- С. 40-41.
49. Гаврилов В.А. Унификация биотехнологического производства ветеринарных препаратов в России / Гаврилов В.А., Тихонов И.В., Грязнева Т.Н.// Сб. науч. ст. международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 85-летию академии.- М.: МГАВМиБ,- 2004,- Ч. 1,- С. 207-208.
50. Тихонов И.В. Дисциплина «Биотехнология» - компонента федеральной программы в подготовке зооветеринарных специалистов / Тихонов И.В., Грязнева Т.Н., Гаврилов В.А. // Сб. науч. ст. международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 85-летию академии,- М.: МГАВМиБ,-
2004,-Ч. 1,- С. 127-130.
51. Грязнева Т.Н. Оценка терапевтической эффективности пробиотика Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях поросят-отъемышей / Грязнева Т.Н // Сб науч. ст. международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 85-летию академии,- М.: МГАВМиБ,- 2004,- Ч. II,- С. 305-307.
52. Грязнева Т.Н. Влияние субтилакта на микробиоценоз кишечника птиц и телят / Грязнева Т.Н, Тихонов И.В., Васильев П.Г., Плохушко E.H. // Ветеринарная медицина,- Изд. «Агровет».-
2005,-№ 1.- С. 7-8.
53. Грязнева Т.Н. Технология производства сухой формы пробиотика Биод-5 / Грязнева Т.Н , Акимочкин А.И., Тихонов И.В. // Ветеринарная медицина.- Изд. «Агровет»,- 2005,- № 1.- С. 17-18.
54. Тихонов И.В. Биотехнология: учебник / Тихонов И.В., Рубан Е.А., Грязнева Т.Н., Самуйленко А Я., Гаврилов В.А.; под ред Воронина Е.С.- Санкт-Петербург: Гиорд.- 2005.- 650 с.
Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1 -00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 25.04.04 Тираж 100 экз. Усл. пл. 2,69 Печать авторефератов (095) 730-47-74,778-45-60
РНБ Русский фонд
2007-4 1445
Содержание диссертации, доктора биологических наук, Грязнева, Татьяна Николаевна
ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ,
СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ.
ВВЕДЕНИЕ.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.:.
1.1. Перспективы использования пробиотиков в ветеринарии.
1.2. Состав и назначение пробиотиков.
1.3. Критерии отбора микроорганизмов в состав пробиотиков ветеринарного назначения.
1.4. Механизмы лечебно-профилактического действия пробиотиков.
1.5. Пробиотики, выпускаемые биологической промышленностью.
1.5.1. Пробиотики из лактобацилл и бифидобактерий.
1.5.2. Пробиотики из других видов бактерий.
1.6. Конструирование и свойства пробиотиков на основе бактерий рода Bacillus.
1.6.1. Культивирование бактерий-компонентов пробиотиков на основе бацилл.
1.6.2. Стабилизация микробных суспензий и их консервирование.
1.6.3. Характеристика лекарственных форм пробиотиков.
1.7. Лечебно-профилактическая эффективность пробиотиков при желудочно-кишечных болезнях животных.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
2.1.1. Микроорганизмы.
2.1.2. Экспериментальные животные.
2.1.3. Материалы, питательные среды, растворы, реактивы.
2.1.4. Технологическое оборудование
2.1.5. Методы исследований.
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
2.2.1. Сравнительная характеристика биологической активности изолятов бацилл.
2.2.2. Получение бактерий - компонентов препарата Биод-5.
2.2.3. Приготовление опытных образцов препарата Биод-5.
2.2.4. Изучение биологической активности препарата Биод-5 и его компонентов.
2.2.4.1. Острая и хроническая токсичность препарата Биод-5.
2.2.4.2. Влияние препарата Биод-5 на физиологические показатели периферической крови животных.
2.2.4.3. Влияние Биод-5 на микрофлору кишечника животных.
2.2.4.4. Изучение иммуностимулирующих и адыовантных свойств Биод-5.
2.2.4.5. Изучение антивирусной активности Биод-5.
2.2.5. Технология промышленного производства препарата Биод-5 в различных лекарственных формах.
2.2.5.1. Получение бактериальной суспензии B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 в биореакторах «БИОР-0,1» и «БИОР-0,25».
2.2.5.2. Методы концентрирования нативных культур
B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11.
2.2.5.3. Приготовление жидкой формы препарата Биод-5.
2.2.5.4. Технология производства сухой формы препарата Биод-5.
2.2.5.5. Приготовление таблетированной формы препарата Биод
2.2.5.6. Исследование стабильности свойств разных форм препарата Биод-5 в процессе хранения.
2.2.6. Методы контроля препарата Биод-5.
2.2.7. Лечебно-профилактическая эффективность пробиотика
Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях животных.
2.2.7.1. Результаты применения препарата Биод-5 при желудочнокишечных болезнях сельскохозяйственных животных (телята, поросята, лошади).
2.2.7.2. Испытания препарата Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях плотоядных (пушные звери, собаки, кошки).
2.2.8. Экономическая эффективность применения пробиотика Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях животных.
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.
4. ВЫВОДЫ.
5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.
6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ
НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Технология производства пробиотика Биод-5 и его лечебно-профилактическая эффективность для разных видов животных"
Актуальность темы. Разработка и внедрение в практику ветеринарии новых высокоэффективных препаратов отечественного производства для лечения и профилактики болезней животных представляет собой задачу, актуальность которой не вызывает сомнений.
На основании данных многочисленных источников литературы известно, что в число высокоэффективных лечебно-профилактических средств специи-алисты относят пробиотики (3-6, 21, 33, 59, 126, 132, 163, 269-274, 345, 382, 386, 406, 434, 455, 468,471, 492).
В настоящее время, которое некоторые ученые (352, 358, 456) называют "наступающей эпохой пробиотиков", биопрепараты на основе живых микробных культур широко применяются в медицине и ветеринарии для коррекции микрофлоры ЖКТ.
Vanbelle М. et al (494) отмечает, что только в странах ЕЭС зарегистрированы более 20 различных пробиотиков. Тем не менее, существует потребность в новых биопрепаратах, обусловленная ограниченностью спектра специфической активности известных пробиотиков и разнообразием микроэкологических нарушений нормальной микрофлоры, обусловливающих развитие ЖКБ животных.
Изучение отечественного рынка ветеринарных препаратов показало, что на пробиотики имеется устойчивый спрос. Причем востребованными оказываются препараты в различных лекарственных формах (36, 49, 63, 79, 122, 172,228,250, 267, 275,283).
Широкое использование в медицине и ветеринарии лактобактерина, би-фидумбактерина, колибактерина, бификола и др. для лечения и профилактики ОКИ и дисбактериозов подтвердило их высокую эффективность и перспективность (11,20,31,35, 110, 136, 148,259,294,335,380,407,435,471).
Всестороннее изучение бактерий-компонентов пробиотиков выявило у них наличие не только антагонистической активности по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам, но и ряда других полезных свойств: иммуномодулирующих, антиаллергических, антитоксических, антирадиационных (38, 45, 47, 151, 161, 171, 185, 199, 231, 314, 496).
Использование пробиотиков, до последнего времени, сводилось к заместительной терапии при ОКИ молодняка животных и, в меньшей мере, санации желудочно-кишечного тракта от патогенных и условно-патогенных микроорганизмов (49, 63. 65, 73, 93, 122, 172, 203, 238, 250, 267, 275, 278, 300, 434, 442, 472). Однако в результате полученных данных о новых свойствах и механизме действия пробиотиков, встал вопрос о расширении областей применения их в ветеринарной практике. Эти препараты можно использовать не только при ЖКБ, но и при респираторных, гинекологических, аллергических, I хирургических и других заболеваниях животных. Положительный опыт разностороннего применения пробиотиков уже имеется в медицинской практике (9-11, 14,34,38,43, 45,67, 89, 151, 161, 199, 185,314).
По мнению большинства специалистов, основополагающим принципом при создании пробиотиков является использование только микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры животных "(20, 34, 110, 198, 294, 329, 335, 407, 459, 468). Но если на этом пути не возникают трудности с отнесением к безусловно нормальной микрофлоре некоторых основных групп микроорганизмов, чаще всего присутствующих в составе микробиоценоза кишечника в больших количествах (например, лакто- и бифидобактерий), то нередко очень по разному трактуется оценка содержания в микробиоценозе меньших по количеству, но не менее важных по физиологической активности некоторых экзогенных бактерий.
Перспективным направлением в конструировании и совершенствовании пробиотиков является применение бактерий рода Bacillus (209-227, 444-447). Эти микроорганизмы широко распространены в природе, являются устойчи-л выми к литическим и пищеварительным ферментам, длительно сохраняют жизнеспособность в желудочно-кишечном тракте животных (18, 43, 64, 75, 154, 179, 192-197,458,485,501).
Среди различных представителей экзогенной микрофлоры, бациллы характеризуются рядом преимуществ, которые позволяют считать их наиболее эффективными в качестве основы новых пробиотиков. Эти бактерии (кроме B.anthracis и B.cereus), как правило, являются безвредными для организма животных даже в высоких концентрациях; обладают антагонистической активностью к широкому спектру патогенных и условно патогенных микроорганизмов; характеризуются высокой ферментативной активностью, что может обусловить существенное регулирование и стимулирование пищеварения; способны оказывать противоаллергенное и антитоксическое действие; технологичны в производстве и стабильны при хранении (2, 13-18, 48, 58, 103, 121, 160, 234, 264, 387, 408, 420, 446, 453, 481, 492).
Важная особенность бацилл состоит в том, что хорошо изучена их генетика и поэтому они являются перспективной системой для клонирования чужеродных генов. В настоящее время методами генетической инженерии на основе аэробных спорообразующих бактерий получены суперпродуценты различных биологически активных веществ (колицин Е2 и др). Это открывает перспективу конструирования на основе бацилл штаммов с заданными свойствами и использования их новых свойств (15, 60, 116, 169, 225, 491).
В 90-х годах прошлого века в медицинской практике проводились широкие испытания препарата «Биоспорин», созданного сотрудниками института микробиологии и вирусологии им. Д.К.Заболотного НАН Украины, на основе штаммов B.subtilis ВКПМ № 2335 и B.licheniformis ВКПМ № 2336 (209227, 264). Было установлено, что «Биоспорин» более эффективен по сравнению не только с пробиотиками из представителей нормального микробиоценоза ЖКТ (типа бифидумбактерина, лактобактерина или колибактерина), но и в сравнении с препаратами на основе монопрописей спорообразующих бактерий (бактисубтил, споробактерин).
На сегодняшний день пробиотик «Биоспорин» выпускается ОАО "Днеп-рофарм" (Украина). Существующая технология имеет ряд недостатков, прежде всего, из-за использования поверхностного способа культивирования бацилл, сопряженного с большими материальными затратами и высокой трудоемкостью. Продолжительность выращивания бацилл при такой технологии составляет 12 суток, а сырье для приготовления питательных сред является дефицитным. Кроме того, данная технология предусматривает производство пробиотиков только в ампулах по 1 или 2 дозы (128, 181, 257, 258).
Ветеринарной практикой востребованы препараты в различных лекарственных формах (жидкой, сухой, гранулированной, таблетированной и др), в зависимости от вида животных и способов их содержания. Однако традиционными лекарственными формами для пробиотиков являются, в основном, ! лиофильно высушенные препараты в ампулах или флаконах. Такая форма препарата может храниться длительное время. Тем не менее, упаковка пробиотика в ампулы или флаконы является непрактичной и неудобна для применения при групповом содержании животных (46, 208, 218, 256, 261, 265).
Пробиотик в жидкой форме особенно удобен в применении при групповом кормлении животных, например поросят-отъемышей. Его можно смешивать с любым кормом, водой, молоком. Поэтому, актуальным является разработка такого компонентного состава пробиотика, который бы позволил увеличить срок хранения жидкой формы препарата (28, 39, 62, 114, 240-242).
Известный отечественный и зарубежный опыт производства препаратов показывает, что таблетки занимают одно из ведущих мест на рынке фармацевтической продукции. К числу преимуществ таблеточной формы препаратов относятся точность дозирования, компактность, удобность упаковки, простота хранения и транспортировки. Однако пробиотики практически не выпускаются в таблетках по причине высокой инактивации микроорганизмов в процессе получения и хранения препаратов (208, 218, 254, 261, 265). • Безусловно, технология производства таблетированной формы пробиотиков на основе споровых бактерий может быть осуществлена только при высоком содержании зрелых спор в исходной субстанции и должна включать минимальное количество стадий, оказывающих неблагоприятное воздействие на жизнеспособность и биологические свойства бактерий.
Отмеченные выше обстоятельства обосновывают необходимость проведения исследований, направленных на получение и изучение свойств различных форм пробиотиков.
Лечебно-профилактическая эффективность пробиотиков при ЖКБ может достигать 90 % и более (36, 49, 63, 65, 73, 203, 228, 251, 267).
Некоторые авторы указывают, что пробиотики способствуют повышению привесов животных, улучшению усвояемости корма, увеличению яйценоскости кур и др. (93, 122, 172, 205, 238, 250, 275).
Многие отечественные и зарубежные специалисты высказывают мнение, что применение пробиотиков при болезнях животных и человека позволит отказаться от антибиотиков и других химиотерапевтических препаратов (35, 101,239, 260,363,470, 478).
Поэтому работы по совершенствованию технологии производства пробиотиков, направленные на создание безотходных технологий и новых лекарственных форм для многих видов животных, являются весьма важными и нужными для ветеринарной науки и практики.
Цель и задачи исследований. Цель настоящих исследований - разработка технологии производства пробиотика Биод-5 в различных лекарственных формах и оценка его лечебно-профилактической эффективности при желудочно-кишечных болезнях разных видов животных.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Провести исследования по выделению культур бацилл от животных и с объектов внешней среды и изучить биологические свойства бацилл, перспективных для разработки пробиотического препарата Биод-5.
2. Приготовить лабораторные образцы пробиотика и изучить его биологические и антагонистические свойства.
3. Разработать промышленную технологию глубинного культивирования производственных штаммов в биореакторах и подобрать наиболее перспективные методы концентрирования бактериальной массы, включенной в состав Биод-5.
4. Решить технологические проблемы приготовления жидкой, сухой и таблетированной форм Биод-5 и определить методы контроля качества препарата.
5. Изучить лечебно-профилактическую эффективность Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях разных видов животных.
6. Рассчитать экономическую эффективность применения Биод-5.
7. Разработать и утвердить нормативную документацию на препарат Биод-5 и внедрить его в ветеринарную практику.
Научная новизна.
1. Впервые, на основе спорообразующих штаммов B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11, выделенных с объектов животноводческих помещений, сконструирован новый пробиотик Биод-5 для применения в ветеринарии.
2. Теоретически обоснован и разработан метод глубинного культивирования штаммов B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 для производства пробиотика Биод-5 с использованием стандартизированных жидких питательных сред из отечественного сырья, позволяющий получить бактериальную суспензию, содержащую не менее 60 % зрелых спор.
3. Созданы промышленные технологии выпуска пробиотика Биод-5 в различных лекарственных формах (сухой, таблетированной и жидкой), с использованием отечественного технологического оборудования и материалов.
4. Разработана жидкая форма пробиотика Биод-5, которая сохраняет биологическую активность не менее 12 месяцев.
5. Разработан состав сухой микробной массы B.subtilis ТПИ 13 и B.licheni-formis ТПИ 11, который включает наполнитель и связующие вещества, что позволяет высушивать биомассу конвективным методом и снизить инактивацию микроорганизмов в процессе получения таблетированной формы препарата Биод-5.
6. Показано, что препарат Биод-5 обладает уникальными биологическими свойствами, отличающими его от других пробиотиков: подавление размножения сальмонелл, кандид и стафилококков; стимуляция роста лактобацилл и бифидобактерий in vitro и в желудочно-кишечном тракте (ЖКТ) животных; иммуностимулирующее и адьювантное действие.
7. Методы контроля качества пробиотика Биод-5 позволяют дать объективную оценку биологической активности бактерий-компонентов препарата и охарактеризовать качество сухой, жидкой и таблетированной форм Биод-5.
8. Показана высокая (96-100 %) лечебно-профилактическая эффективность готовых лекарственных форм пробиотика Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях телят, поросят, лошадей, пушных зверей, собак и кошек.
9. Научная новизна работы подтверждена положительным решением Российского агентства по патентам и товарным знакам по заявке № 2004121854 «Лечебно-профилактический препарат ветеринарного назначения на основе штаммов спорообразующих бактерий Bacillus subtilis и Bacillus licheni-formis».
Практическая значимость.
1. Для производства пробиотика Биод-5 селекционированы штаммы В. subtilis ТПИ 13-07.06.21-ДЕП/ВГНКИ и B.licheniformis ТПИ 11-07.06.22-ДЕП/ ВГНКИ, которые паспортизированы и депонированы во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ФГУ ВГНКИ).
2. Разработаны и утверждены ТУ 9337-007-59088697-004 на пробиотик Биод-5; промышленный регламент производства пробиотика Биод-5 в сухой, таблетированной и жидкой лекарственных формах; разработано временное наставление по применению пробиотика Биод-5 в ветеринарии.
3. В соответствии с порядком регистрации ветеринарных препаратов в Российской Федерации, нормативная документация и отчеты об испытании пробиотика Биод-5 прошли экспертизу в ФГУ ВГНКИ. Регистрационные испытания (от 06.07.2004 г) подтвердили соответствие показателей качества пробиотика Биод-5 требованиям ТУ.
4. На базе Центра военно-технических проблем биологической защиты НИИ микробиологии МО РФ (Центр ВТП БЗ НИИМ МО РФ, г. Екатеринбург) создана автоматизированная технологическая линия промышленного производства пробиотика Биод-5. Получены серии сухой, таблетированной и жидкой форм препарата Биод-5, которые прошли производственные испытания.
5. На базе ООО «НПК ЦМВЭИ» (г. Москва) организовано серийное производство пробиотика Биод-5 в различных лекарственных формах.
6. В опытах на телятах, поросятах, лошадях, пушных зверях, собаках и кошках изучен механизм действия Биод-5, дана оценка его влияния на микробиоценоз кишечника, обменные и иммунные процессы организма животных, показана высокая лечебно-профилактическая эффективность препарата, что подтверждено актами, утвержденными руководителями хозяйств и ветеринарных клиник Московской, Свердловской и Нижегородской областей.
7. Разработаны и утверждены Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ (per. № 13-5-02/1043 от 11.05.2004) методические рекомендации «Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных», в которых изложены количественные и качественные методы исследований микрофлоры кишечника животных, позволяющие рационализировать бактериологический анализ с целью прижизненной диагностики ЖКБ и дисбакте-риозов.
8. Результаты исследований по созданию технологии производства пробиотика Биод-5 включены в учебник «Биотехнология» с грифом «Допущено Министерством сельского хозяйства Российской Федерации в качестве учебника для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальностям 310700-Зоотехния и 310800-Ветеринария» (28.12.2004 г, № 06-1456).
Личный вклад соискателя. Автору принадлежат организация и непосредственное осуществление исследований по выделению и оценке биологических свойств штаммов B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11, испытание лечебно-профилактической эффективности пробиотика Биод-5 при ЖКБ разных видов животных, разработка технологии производства Биод-5 в различных лекарственных формах, анализ и теоретическое обобщение полученных данных, разработка научно-технической документации на препарат.
В работе использованы материалы, полученные лично автором, а также в соавторстве с:
- Лысенко Н.П. (лаборатория радиобиологии и экологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К. И Скрябина - изучение иммуностимулирующих и адью-вантных свойств препарата Биод-5).
- Лиморенко А.П. (ЦВТП БЗ НИИ микробиологии МО РФ - разработка технологии глубинного культивирования штаммов B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11);
- Скворцовым А.Э. (ЦВТП БЗ НИИ микробиологии МО РФ - разработка технологии производства сухой и таблетированной форм препарата Биод-5).
Всем соавторам выражаю глубокую благодарность. Особая благодарность ректору ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К. И Скрябина, академику РАСХН, профессору Воронину Е.С. и начальнику научно-исследовательского управления ЦВТП БЗ НИИ микробиологии МО РФ Васильеву П.Г. за помощь в организации производства препарата.
Апробация результатов диссертации. Основные результаты проведенных исследований были доложены:
- на международных конгрессах: IX и XI международные ветеринарные конгрессы (Москва, 2001, 2003);
- на международных конференциях: международная конференция молодых ученых, посвященная 60-летию Кыргызского СХИ «Проблемы научного обеспечения повышения эффективности сельскохозяйственного производства» (Бишкек, 1992); международная конференция «Животноводство на Европейском Севере: фундаментальные проблемы и перспективы развития» (Петрозаводск, 1996); I международная конференция «Здоровье, разведение и защита мелких домашних животных» (Уфа, 2000); международная научная конференция «Современные достижения и проблемы клеточной биотехнологии и иммунологии в ветеринарной медицине» (Москва, 2003); международная научно-практическая конференция молодых ученых и специалистов «Молодые ученые в решении проблем аграрной науки и практики» (Львов, 2003); международная научная конференция «Актуальные проблемы развития животноводства» (Львов, 2003); международная научно-практическая конференция «Ветеринарные и медицинские аспекты зооантропонозов», посвященная 45-летию создания ВНИИВВиМ (Покров, 2003); международная учебно-методическая и научно-практическая конференция, посвященная 85-летию МГАВМиБ им. К.И. Скрябина (Москва, 2004);
- на научно-практических конференциях: межвузовская конференция молодых ученых и специалистов «Новое в диагностике, лечении и профилактике болезней молодняка сельскохозяйственных животных» (Москва, 1991); научно-практическая конференция «Проблемы диагностики, профилактики и лечения сельскохозяйственных животных в Нечерноземной зоне» (Н.Новгород, 1992); научно-практическая конференция «Достижения ветеринарной науки - производству» (Чебоксары, 1994); научно-практическая конференция «Биотехнология на рубеже веков: проблемы и перспективы» (Киров, 2001).
Публикации. По результатам диссертации опубликовано 54 научные и учебно-методические работы, в том числе 15 статей в научных журналах; 23 тезиса в сборниках конференций; 12 учебно-методических пособий по биотехнологии и учебная программа по специальности «Биотехнология», утвержденные УМО высших учебных заведений РФ в области ветеринарии и зоотехнии; методические указания по изучению дисциплины «Биотехнология»; методические рекомендации, утвержденные Департаментом ветеринарии; учебник «Биотехнология» для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальностям 310700 - Зоотехния и 310800 - Ветеринария.
Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 391 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, данные о практическом использовании научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы (499 источников, из которых 286 отечественных и 213 иностранных). Работа содержит 124 таблицы, 52 рисунка, 30 страниц приложений.
Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Грязнева, Татьяна Николаевна
4. ВЫВОДЫ
1. Бактерии рода Bacillus широко распространены во внешней среде и являются типичными представителями экзогенной кишечной микрофлоры животных разных видов. Большинство изолятов бацилл, выделенных из кишечного содержимого телят, сточных вод и смывов с объектов животноводческих помещений, относятся к видам В. subtilis и B.licheniformis. Из 116 изолятов бацилл отобраны 2 культуры - В. subtilis и B.licheniformis, обладающие выраженным антагонистическим действием по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам.
2. Селекционно-генетическое изучение отобранных культур бацилл позволило получить 2 штамма, обладающих стабильными биологическими свойствами и множественной устойчивостью к антибиотикам. Выделенные штаммы депонированы во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ФГУ ВГНКИ) под номерами B.subtilis ТПИ 13-07.06.21-ДЕП/ВГНКИ и B.licheniformis ТПИ 11-07.06.22-ДЕП/ВГНКИ. На основе этих штаммов создан пробио-тик Биод-5, содержащий 3 части B.subtilis ТПИ 13 и 1 часть B.licheniformis ТПИ 11.
3. Антагонистические свойства бактерий-компонентов Биод-5 обусловлены ферментативной активностью и продукцией метаболитов, обладающих бактерицидным и бактериостатическим действием in vitro и in vivo на энте-ропатогенные эшерихии, сальмонеллы, стафилококки, кандиды, шигеллы, псевдомонады, протеи, клебсиеллы, цитробактеры и кампилобактеры.
4. Биод-5 проявляет синергидное действие in vitro и in vivo в отношении лактобацилл и бифидобактерий. Концентрация этих бактерий повышается с 105 до 109м.к/мл при культивировании их в присутствии Биод-5 или культу-рального фильтрата бацилл-компонентов Биод-5. При пероральном применении препарата экспериментальным животным концентрация лакто-и бифидобактерий в желудочно-кишечном тракте увеличивается с 106 до 109м.к/г, в сравнении с контролем.
5. Биод-5 безвреден для животных. Многократное пероральное введение препарата в дозах, в 20 раз превышающих рекомендуемые, не вызывает изменений физиологических показателей организма животных.
6. Препарат Биод-5 активизирует факторы неспецифической резистентности организма животных - фагоцитарная активность макрофагов повышается на 5 %, фагоцитарный индекс - на 2,5 %, активность естественных киллеров -на 25 % и обладает адьювантным действием - в комплексе с противовирусными вакцинами у экспериментальных животных в 2 раза повышается пролиферативная активность спленоцитов.
7. Оптимизированные питательные среды с пониженным содержанием аминного азота (17-22 мг%) для выращивания B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 методом глубинного культивирования в биореакторах, включающие гидролизат казеина, кукурузный экстракт и дополнительные компоненты, позволяют получать основной биотехнологический продукт в споровой форме. Разработанная технология глубинного культивирования бацилл-компонентов Биод-5 позволила, по сравнению с аналогом, сократить трудозатраты в 1,9 раз, продолжительность выращивания микроорганизмов - в 6 раз.
8. Оптимальными режимами концентрирования культур B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11с использованием боксированных сепараторов АСГл
3МБ являются скорость подачи суспензии 30±5 дм /ч, время накопления биомассы для заданной концентрации - от 33 до 74 мин. Полученный этим способом концентрат бацилл не содержит посторонней микрофлоры.
9. Использованные в качестве стабилизирующих добавок фенол (0,01±0,005 мл) с глицерином (0,14±0,01 мл) позволяют сохранить активность жидкой лекарственной формы Биод-5 в течение не менее 12 месяцев при положительных температурах. Биологическая концентрация бацилл в 1 мл препарата составляет 24±3 млрд. м.к.
10. При получении сухой формы Биод-5 наиболее эффективными являются сублимационный и распылительный методы высушивания, позволяющие получать препарат с концентрацией спор 24±3 млрд. м.к. в 1 г вещества.
11. Для приготовления таблетированной формы Биод-5 используется биомасса B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11, высушенная распылительным или контактно-сорбционным методом. Таблетированную форму Биод-5, состоящую из сухой микробной массы бацилл, лактозы, крахмала, талька и кальция стеарата, изготавливают прямым прессованием или с влажной грануляцией. Таблетка препарата содержит 4±0,2 млрд. м.к.
12. Разработана и апробирована с положительным результатом в условиях хозяйств и ветеринарных клиник схема применения жидкой, сухой и таблетированной форм пробиотика Биод-5 для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней телят, поросят, лошадей, пушных зверей, собак и кошек. Лечебно-профилактическая эффективность различных лекарственных форм Биод-5 составляет 96-100 %, при длительности применения препарата в рекомендуемых дозах от 3 до 7 суток.
13. Среднесуточный прирост живой массы поросят, получавших Биод-5, был выше на 147 г, по сравнению с контрольными животными. Препарат способствует повышению аппетита, перевариваемости корма, а также повышению работоспособности спортивных лошадей. У песцов серебристых племенного стада применение Биод-5 повышает плодовитость самок на 8,6 %, количество родившихся живых щенков в опытных группах увеличивается на 9,5 %, в сравнении с контрольной группой.
14. Экономический эффект от применения Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят составляет 56,6 руб на рубль затрат.
5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. Для производства пробиотика Биод-5 ветеринарного назначения селекционированы штаммы B.subtilis ТПИ 13-07.06.21-ДЕП/ВГНКИ и B.licheniformis ТПИ 11-07.06.22-ДЕП/ВГНКИ. Штаммы паспортизированы и депонированы во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ФГУ ВГНКИ).
2. Разработаны и утверждены в установленном порядке технические условия на жидкую, сухую и таблетированную формы «Биод-5 (ТУ 9337-00759088697-004) на опытную партию».
3. Разработано «Временное наставление по применению пробиотика Биод-5 в ветеринарии».
4. Разработаны и утверждены «Инструкция по изготовлению пробиотика Биод-5» (17.03.2002 г), «Промышленный регламент производства пробиотика Биод-5» на опытную партию (06.01.2004 г), «Технологический регламент производства препарата Биод-5» в сухой, таблетированной и жидкой лекарственных формах (12.09.2004 г).
5. В соответствии с порядком регистрации ветеринарных препаратов в Российской Федерации, нормативная документация и отчеты об испытании пробиотика Биод-5 прошли экспертизу в ФГУ ВГНКИ. Регистрационные испытания (от 06.07.2004 г) подтвердили соответствие показателей качества пробиотика Биод-5 требованиям ТУ.
6. На базе Центра ВТП БЗ НИИМ МО РФ (г. Екатеринбург) и ООО «НПК ЦМВЭИ» (г. Москва) созданы аппаратурно-технологические линии промышленного производства пробиотика Биод-5. Организовано серийное производство препарата в различных лекарственных формах.
7. По результатам исследований разработаны и утверждены Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ (per. № 13-5-02/1043 от 11.05. 2004) методические рекомендации «Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных».- М., 2004.
8. Разработаны и утверждены Учебно-методическим объединением высших учебных заведений в области ветеринарии и зоотехнии учебно-методические пособия по биотехнологии «Способы поддержания асептических условий при культивировании» (2002), «Способы культивирования микроорганизмов» (2002), «Концентрирование и высушивание биопрепаратов» (2002), «Выделение и идентификация условно-патогенных микроорганизмов и сальмонелл при острых кишечных заболеваниях молодняка животных» (2003), «Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных с целью постановки диагноза и производства вакцинных и пробиотических препаратов» (2004).
9. Результаты исследований по созданию технологии производства пробиотика Биод-5 и оценке его эффективности на разных видах животных включены в учебник «Биотехнология» с грифом «Допущено Министерством сельского хозяйства Российской Федерации в качестве учебника для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальностям 310700-Зоотехния и 310800-Ветеринария» (28.12.2004 г, № 06-1456).
10. Получено положительное решение Российского агентства по патентам и товарным знакам по заявке № 2004121854 «Лечебно-профилактический препарат ветеринарного назначения на основе штаммов спорообразующих бактерий Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis».
6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ
1. Рекомендовать пробиотик Биод-5 зооветспециалистам и владельцам животных в качестве лечебно-профилактического средства при желудочно-кишечных болезнях телят, поросят, лошадей, пушных зверей, собак и кошек, вызванных энтеропатогенными эшерихиями, сальмонеллами, стафилококками, кандидами, шигеллами, псевдомонадами, протеями, клебсиеллами, цит-робактерами, кампилобактерами и их ассоциациями, а также как средство заместительной терапии для восстановления полезной микрофлоры кишечника животных, в частности, лактобацилл и бифидобактерий, после использования антибиотиков и других химиотерапевтических препаратов.
2. Отработанные технологические параметры и режимы производства пробиотика Биод-5 в сухой, таблетированной и жидкой лекарственных формах с использованием отечественного сырья и оборудования рекомендуются для приготовления биопрепаратов на основе других микроорганизмов.
3. Методические рекомендации «Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных», утвержденные Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ, рекомендуется использовать ветеринарным лабораториям для прижизненной диагностики желудочно-кишечных болезней молодняка животных.
4. Результаты исследований по созданию технологии производства пробиотика Биод-5 и оценке его эффективности на разных видах животных рекомендуется использовать в учебном процессе по дисциплине «Биотехнология» в высших учебных заведениях по специальностям 310700 - Зоотехния и 310800 - Ветеринария.
Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Грязнева, Татьяна Николаевна, Москва
1. Абрамов Н.А. Перспективы создания промышленной технологии мик-рокапсулированных препаратов эубиотиков /Абрамов Н.А., Иванов Д.Г., Ланских А.Г. //Дисбактериозы и эубиотики.- Москва, 1996.- С. 2-8.
2. Алтон Л. В. Развитие и выживаемость бактерий рода Bacillus в морской и речной воде /Алтон Л. В. //Гигиена и санитария.- 1988.- № 9.- С. 14-16.
3. Антипов В.А. Эффективность и перспективы применения пробиотиков /Антипов В.А., Субботин В.М. //Ветеринария. 1980. - № 12. - С. 55.
4. Антипов В.А. Биологические препараты симбионтных микроорганизмов и их применение в ветеринарии /Антипов В.А. //Сельское хозяйство за рубежом.-1981 .-№ 2.-С. 43-47.
5. Антипов В.А. Отечественные пробиотики для животноводства /Антипов В.А., Мартынов Г.Н. //Биологические основы высокой продуктивности сельскохозяйственных животных. Москва, 1990. - Т. 2. - С. 109-110.
6. Антипов В.А. Использование пробиотиков в животноводстве /Антипов В.А. // Ветеринария. 1991. - № 4. - С. 55-58.
7. Антонов B.C. Динамика классов иммуноглобулинов и других сывороточных белков у крупного рогатого скота в онтогенезе /Антонов B.C., Кле-нина Н.В., Михайлова С.А. //Проблемы ветеринарной иммунологии.- М.: Аг-ропромиздат, 1985.- С. 49-50.
8. Аркадьева З.А. Факторы, влияющие на жизнеспособность и свойства микроорганизмов при различных методах хранения /Аркадьева З.А. //Биологические науки.- 1993.- № 4.- С. 93-104.
9. А.с. 1235896 А 1 СССР, МКИ4 С 12 0 1/02 А 61 L 9/00. Способ предупреждения распространения госпитальной инфекции /В.И.Никитенко, О.Б. Бухарин, И.К. Никитенко (СССР). 4 е.: ил. 2.
10. А.с. 1398868, МКИ4 А 61 К 35/74. Способ лечения гнойно-септических послеродовых заболеваний /В.В.Смирнов, С.Р. Резник,
11. И.Б.Сорокулова, В.А. Вьюницкая, С.В. Афонская, В.Я. Голота, Е.Н. Афиногенова, Л.Г.Голота, С.О. Иванюта, В.А. Грохольский (СССР). 2 с.
12. А.с. 1497211, МКИ4 С 12N 1/20, А 61 К 39/09. Штамм энтерококков Streptococcus faecium, используемый для приготовления бактерийных препаратов /В.М.Коршунов, Н.П.Иванова, Т.А.Логадырь (СССР). 4 с.
13. А.с. 1645299, МКИ5 С 12 N 9/22, 1/20. Штамм бактерий Bacillus cereus продуцент эндонуклеазы Все 751 I /В.В.Смирнов, С.Р.Резник, И.Б.Сорокулова, В.М.Крамаров, В.В.Смолянинов, Н.И. Матвиенко (СССР). - 2 с.
14. А.с. 1648975 А1, МКИ4 С 12N 1/20, А 61 К 35/74. Штамм бактерий Bacillus subtilis, используемый для получения молочного продукта, предназначенного для лечения диатеза, дисбактериоза и бактериальных инфекций / В.И.Никитенко (СССР). 2 с.
15. А.с. 1659479, МКИ5 С 12 N 9/14, 1/20. Штамм бактерий Bacillus licheniformis продуцент рестриктазы Bli 49 I /В.М.Крамаров, В.В.Смолянинов, Н.И.Матвиенко, В.В.Смирнов, С.Р.Резник, И.Б.Сорокулова (СССР). - 2 с.
16. А.с. 1710575 А1, МКИ5 С 12 N 1/29, А 61 К 35/74. Штамм бактерий Bacillus sp.-компонент лечебно-профилактического препарата против дисбак-териозов и аллергии /Л.И.Никитенко, В.И.Никитенко (СССР). 3 с.
17. А.с. 1723116 А1, МКИ5 С 12 N 1/20, А 61 К 35/74. Штамм бактерий Bacillus subtilis, используемый для получения препарата для профилактики и лечения воспалительных процессов и аллергических заболеваний /В.И.Никитенко, И.К.Никитенко (СССР). 4 е.: ил. 1.
18. А.с. 1723117 А1, МКИ5 С 12 N 1/20, А 61 К 35/74. Штамм бактерий Bacillus pulvifaciens, используемый для изготовления лечебно-профилактического препарата против бактериальных инфекций у животных /В.И.Никитенко, И.К.Никитенко, С.М.Пау (СССР). 3 с.
19. Ашмарин И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях /Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Л.: Гос. из-во мед. литературы, 1962.-290 с.
20. Бабенко Ю.С. Ростстимулирующая активность лизоэнзимного комплекса, синтезируемого S.recifensis var. lyticus 2435 /Бабенко Ю.С., Кукушкина Н.В., Черногор Н.П. //Микробиол. журн. -1990.- № 1.- С. 15-19.
21. Бабин В.Н. Биохимические и молекулярные аспекты симбиоза человека и его микрофлора /Бабин В.Н., Доморадский И.В., Дубинин А.В. //Российский химический журнал. 1994. - № 6. - С. 66-78.
22. Байбеков И.М. Взаимодействие индигенных пристеночных микроорганизмов с клетками слизистой оболочки пищеварительного тракта /Байбеков И.М., Мавлян-Ходжаев Р.Ш., Ирсалиев Х.И. //Арх.патол.- 1992.- № 5.-С.18- 22.
23. Бакулина Л.Ф. Пробиотики на основе спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus и их использование в ветеринарии / Бакулина Л.Ф., Тимофеев И.В., Перминова Н.Г. // Биотехнология. 2001. - № 2. - С. 48-56.
24. Белявская В.А. Пробиотики из рекомбинантных бацилл новый класс лечебно-профилактических препаратов и способ доставки лекарственных белков в организм /Белявская В.А. //Сб.науч.тр. сотр. НИКТИ БАВ.-Новосибирск.- 1996.-С. 90-197.
25. Белоус A.M. Научные основы сублимационного консервирования /Белоус A.M., Цветков Н.Д.- Киев: Технжа, 1985.- 120 с.
26. Бирюков В.В. Оптимизация периодических процессов культивирования микроорганизмов / Бирюков В.В., Кантере М.В.- М.: Наука, 1985.- 282 с.
27. Бовкун Г.Ф. Роль клебсиелл в патологии животных /Бовкун Г.Ф. //Ветеринария.- 1986.- № 8.- С. 70-71.
28. Бовкун Г.Ф. Лечебное действие бифинорма при микроэкологических нарушениях кишечника у телят /Бовкун Г.Ф., Семенихина В.Ф., Ткачев Н.Ф. // Ветеринария. 1999. - № 4 . - С. 38 - 40.
29. Бойко Н.В. Антагонистическое действие культур Bacillus subtilis на бактерии рода Klebsiella /Бойко Н.В., Туряница А.И., Попович Е.П. // Микро-биол. журн. 1989.-№ 1.-С. 87-91.
30. Бондаренко В.М. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры / Бондаренко В.М., Петровская В.Г. //Вестник РАМН. 1997. - № 3. - С. 7-10.
31. Бондаренко В.М. Иммуностимулирующее действие лактобактерий, используемых в качестве основы препаратов пробиотиков /Бондаренко В.М., Рубакова Э.И., Лаврова В.А. //Микробиол. журн.-1998. № 4. С. 107 - 111.
32. Брилис В.И. Антибиотики и адгезивность микроорганизмов / Брилис В.И., Бриленс Т.А, Ленцнер Х.П. //Сб. науч. тр. ВНИИ антибиотиков.-М., 1988.- С. 147-151.
33. Бродов Л.Е. Диагностика и лечение острых кишечных инфекций /Бродов Л.Е., Ющук Н.Д., Малеев В.В. //Эпидемиол. и инфек. болезни. -1997.-№4.- С. 4-6.
34. Брок Г.Д. Мембранная фильтрация / Брок Г.Д. -М.: Мир, 1987.- 464 С.
35. Будагов Р.С. Микробные биопрепараты нового поколения для раннего лечения радиационных и комбинированных радиационно-термических поражений /Будагов Р.С., Ульянова Л.П., Поспелова В.В. // Дисбактериозы и эубиотики:Сб.науч.тр.- М., 1996.- С. 4.
36. Быков В.А. Расчет процессов микробиологических производств /Быков В.А., Винаров А.Ю., Шерстобитов В.В.- Киев: Технжа, 1985. 245 с.
37. Быков В.А. Микробиологическое производство биологически активных веществ и препаратов /Быков В.А., Крылов И.А., Манаков М.Н. М.: Высшая школа, 1987.-143 с.
38. Варфоломеев С.Д. Биотехнология. Кинетические основы микробиологических процессов /Варфоломеев С.Д., Калюжный С.В. М.: Высшая школа, 1990.- 260 с.
39. Бахтин Ю.Б. Генетическая теория клеточных популяций /Бахтин Ю.Б.- Л.: Наука, 1980.- 168 с.
40. Вильшанская Ф.Л. Микрофлора кишечника и методы выявления дис-бактериоза/Вильшанская Ф.Л. //Медицинская сестра.-1987. № 10.- С.12-16.
41. Войчишина Л.Г. Применение спорообразующих бактерий в лечении больных дисбактериозом /Войчишина Л.Г., Чаплинский В.Я., Вьюницкая В.А. //Врачебное дело. 1991.-№6.-С. 73-75.
42. Воробьев А.А. Дисбактериозы актуальная проблема медицины /Воробьев А.А., Абрамов Н.А., Бондаренко В.М. // Вестник РАМН - 1997. - № 3. - С. 4-7.
43. Воробьев А.В. Опыт применения пробиотика биоспорин для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней молодняка /Воробьев А.В., Фадеев А.А. //Актуал. пробл. произв. продуктов жив-ва: Сб.науч.тр. Самара, 2001.-С. 86-88.
44. Воронин Е.С. Этиология и профилактика желудочно-кишечных заболеваний телят /Воронин Е.С., Девришов Д.А., Ставцева Л.Я. //Вестник с.-х. науки.-1989.- № 9.-С.105-116.
45. Талонов К.П. Процессы и аппараты микробиологических производств /Талонов К.П. -М.: Агропромиздат, 1981.- 128 с.
46. Текли Дж. Консервирование бактерий методом лиофилизации /Текли Дж. //Cryobiology.-1980.-vol. 17.-N6.-P. 598 /Переводы статей.-1981.-№ 5 (261).- С. 150.
47. Голубева В.А. Энтеробактерии: Руководство для врачей /Голубева В.А., Килессо В.А., Киселева Б.С.; Под ред. В.И. Покровского,- М.: Медицина, 1985.- 321 с.
48. Гончарова Г. И. Микробная экология кишечника в норме и при патологии /Гончарова Г. И., Дорофейчук В. Г., Смолянская A3 Л Антибиотики и химиотерапия. 1989. - № 6. - С. 462-466.
49. Горская Е.М. Повышение неспецифической резистентности макроорганизма при пероральном применении эубиотиков из лактобацилл /Горская Е.М. //Иммунобиологические препараты: Сб.науч.тр.-М., 1989. С. 181-185.
50. Горская Е.М. Механизмы развития микроэкологических нарушений вкишечнике и новые подходы к их коррекции: Автореф. дис. докт. мед. наук /Е.М.Горская.- М., 1994.- 53 с.
51. Готтшлак Г. Метаболизм бактерий /Готтшлак Г.-М.: Мир, 1982.-310 с.
52. Грачева Н.М. Эффективность нового бактерийного препарата био-спорина при лечении острых кишечных инфекций /Грачева Н.М., Гаврилов А.Ф., Соловьева А.И. // Журн. микробиол. 1996. - № 1. - С. 75-77.
53. Грачева Н.М. Применение препаратов из метаболитов нормальной микрофлоры в лечении больных острыми кишечными инфекциями /Грачева Н.М., Партий О.С., Леонтьева Н.И. //Эпидемиология и инфекционные болезни. 1996.-№3.-С. 30-32.
54. Грубер И.М. Микробиологические аспекты биотехнологии получения целевых продуктов микробного синтеза на примере рестриктаз /Грубер И.М. //Журн. микробиол. 1989. - № 9. - С.99-104.
55. Далин М.В. Адгезины микроорганизмов /Далин М.В., Фиш Н.Г. //ВИНИТИ.- Сер. «Микробиология», 1985.-№ 6.-107 с.
56. Дебабов В.Г. Современные методы создания промышленных штаммов микроорганизмов /Дебабов В.Г., Лившиц В.А.- М.: Высшая школа, 1988.- 208 с.
57. Дворкин Г.А. Дисбактериоз и токсинообразование при диарее телят /Дворкин Г.А. //Сб. науч.тр. Белорусского НИИ животноводства.-Минск, 1986. -Вып.16. С. 146-147.
58. Джупина С.И. Факторные инфекционные болезни животных /Джупина С.И. //Ветеринария.- 2001.- № 3,- С. 6.
59. Донченко А.С. Индукторы интерферона и перспективы применения в медицине и ветеринарии /Донченко А.С., Аликин Ю.С.-Новосибирск, 1990,1. С. 109-111.
60. Дрозд Т.Е. Стимулирующее влияние Aerococcus viridans на фагоцитоз и антителообразование /Дрозд Т.Е., Кременчуцкий Г.Н., Горбунова M.JI. //Ж. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1994.- № 6. - С. 111.
61. Дрыгина Е.С. Оборудование биотехнологических производств за рубежом /Дрыгина Е.С., Ципешок ИЛ. //Процессы и аппараты микробиологических производств: Сб.науч.тр. М.: Мир, 1987,- С. 23.
62. Евдокимова Н.В. Некоторые аспекты распространения в почвах представителей рода Bacillus в связи с кинетикой их роста /Евдокимова Н.В. //Науч. конф. мол. ученых фак. почвоведения МГУ: Сб.науч.тр.- М.: МГУ, 1989.-С. 25-26.
63. Егоров Н.С. Бактериоцины. Образование, свойства, применение /Егоров Н.С., Баранова И.П. //Антибиотики и химиотерапия.- 1999.- № 6.- С. 33.
64. Блинов Н.П. Современные лекарственные средства: Справочник с рецептурой /Блинов Н.П., Громова Э.Г.- Санкт-Петербург: Питер Пресс, 1997. -1152 с.
65. Ельшин А.И. Сгущение суспензий микробиологических производств и способы интенсификации процесса /Ельшин А.И.- М.: Агропромиздат, 1987.- 225 с.
66. Ефимов А.А. Клинико-гематологичес-кие и ферментативные исследования у здоровых и больных диспепсией телят /Ефимов А.А., Щербаков Г.Г., Ширяев Г.Г. //Сб. науч.тр. Ленинградского вет. ин-та.- Л., 1990.-Т. 62.-С.-31-34.
67. Жданов П.И. Применение споробактерина жидкого поросятам /Жданов П.И. // Ветеринария.- 1994. № 7.- С. 41-44.
68. Жданов П.И. Биологические и эпизоотологические аспекты производства и применение нового пробиотика из бактерий рода Bacillus в свиноводстве: Автореф. дис. . канд. вет. наук /П.И.Жданов; ПГАВМ СПб, 1997.21 с.
69. Жданов П.И. Опыт и перспективы применения нового пробиотика «Споробактерин» в животноводстве и ветеринарной практике /Жданов П.И., Мешков В.М., Лепский А.И. /ЛОбилейн. сб.тр.ученых Оренбург.гос.аграр.ун-та.- Оренбург, 2000. С. 4-7.
70. Жирков И.Н. Применение пробиотика Рас для коррекции дисбакте-риозов у телят /Жирков И.Н., Братухин И.И. //Ветеринария. -1999. -№ 4. С. 40-42.
71. Жужиков В.А. Фильтрование. Теория и практика разделения суспензий /Жужиков В.А. М.: Химия, 1980.- 400 с.
72. Зароза В.Г. Меры борьбы с диареей телят раннего возраста /Зароза В.Г. //Достижения с.-х. науки и практики: Сб.науч.тр.-М., 1984.-№ 6.-С. 9-20.
73. Запруднов A.M. Микробная флора кишечника и пробиотики /Запруднов A.M., Мазанкова Л.Н.- М.: Высшая школа, 1999.- 258 с.
74. Зуев Б.Г. Фильтры для жидкостей микробиологической промышленности /Зуев Б.Г., Филатов Ю.И.- М.: Высшая школа, 1985.- 56 с.
75. Изачик Ю.А. Дисбактериоз кишечника /Изачик Ю.А., Корсунский А.А. //Медицинская помощь. 1993. - № 2. - С. 58-60.
76. Ивановский А.А. Новый пробиотик бактоцеллолакт при различных патологиях у животных /Ивановский А.А. //Ветеринария.-1996.-№ 11.-С. 3435.
77. Иноземцев В.П. Новое эффективное средство для профилактики и лечения желудочно-кишечных болезней телят (Ветом 1.1) /Иноземцев В.П., Балкова И.И., Ноздрин Г.В. // Ветеринария. -1998. № 1. - С. 47-51.
78. Искова Д.И. Пробиотик руменолакт для молодняка крупного рогатого скота /Искова Д.И. // Молочное и мясное скотоводство.-1993.-№ 1.-С. 17-19.
79. Исмаилов М.А. Профилактическое и терапевтическое действие био-спорина-В при диареях телят и поросят /Исмаилов М.А., Девришов Д.А., Бе-доева З.М. //Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии: Сб.науч.тр.-М., 1997.-С. 12-13.
80. Интизаров М.М. Возможности гнотобиологического эксперимента при изучении механизмов бактериального антагонизма и симбиоза /Интизаров М.М. //Теоретические и практические основы гнотобиологии: Сб.науч. тр.- М.: Агропромиздат, 1986.- С. 22-29.
81. Интизаров М.М. Микрофлора тела животных /Интизаров М.М. //Лекция для слушателей ФПК, преподавателей и научных сотрудников.- М.: МВА, 1989.-23 с.
82. Исаева Н.П. Механизмы воздействия пробиотиков на функциональное состояние лимфоцитов при остром шигеллезе /Исаева Н.П., Шахмарда-нов М.З., Земскова Л.Н. //Микробиол., эпидемиол. и иммунобиология 1994.-№6.-С. 107-108.
83. Кавецкий Г.Д. Процессы и аппараты пищевой технологии /Кавецкий Г.Д., Васильев П.Г.- М.: Колос, 1997. 432 с.
84. Каврук Л.С. Ускоренная индикация патогенных энтеробактерий /Кав-рук Л.С., Кононенко А.Б., Бритова С.В. //Ветеринария.-1992.-№ 5.- С. 31-33.
85. Калачнюк Г.И. Стимуляция рубцового пищеварения и пробиотики /Калачшок Г.И., Копчены Я.К. Шимунек И.Н. //Биологические основы высокой продуктивности животных: Сб.науч.тр.-Боровск, 1990. ч.2. - С. 118-119.
86. Каллимулина Р.Г. Профилактика и лечение заболеваний телят /Каллимулина Р.Г. //Информ.бюл. МСХ и продов.- Башкортостан.-2002.- № 1.- С. 31-34.
87. Калунянц К.А. Оборудование микробиологических производств /Калунянц К.А., Голгер Л.И., Балашов В.Б.- М.: Агропромиздат, 1987.- 398 с.
88. Кантере В.М. Экономические аспекты деконтаминации питательных сред /Кантере В.М., Крамм Э.А. //Биотехнология,-1989.- № 4. С. 53 - 54.
89. Кантере В.М. Теоретические основы технологии микробиологических производств/Кантере В.М. М.: Агропромиздат, 1990. - 271 с.
90. Карпов A.M. Сушка продуктов микробиологического синтеза /Карпов
91. A.M., Улумиев A.A. M.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. - 216 С.
92. Карпов A.M. Состояние и перспективы мембранной техники в микробиологической, медицинской и пищевой отраслях промышленности /Карпов
93. A.M., Лялин В.А., Свитцов А.А. / Биотехнология.-1989.- № 3.- С. 260-275
94. Каширская Н.Ю. Значение пробиотиков и пребиотиков в регуляции кишечной микрофлоры /Каширская Н.Ю. //Русский медицинский журнал. -2000.-№ 13-14.-С. 38-42.
95. Клименко В.В. Применение пробиотиков в ветеринарии //Биотехнология, экология, медицина /Клименко В.В.-Киров: Экспресс, 2002.-С. 32-34.
96. Ковалев В.Ф. Некоторые проблемы применения антибиотиков в животноводстве и ветеринарии /Ковалев В.Ф. //Антибиотики и медбиотехноло-гия.-1989.- № 10.-С. 725-729.
97. Колчинская М.Д. Продукты ферментативного гидролизата казеина и эластина протеазой B.subtilis /Колчинская М.Д., Васильев В.Н., Качан А.Ф.// Микробиол. журнал. 1983. - № 9. - С. 13-16.
98. Коршунов В.М. Характеристика биологических препаратов и пищевых добавок для функционального питания и коррекции микрофлоры кишечника /Коршунов В.М., Ефимов Б.А., Пикина А.К. //Журн. микробиол.-1995.-№ 3.-С. 48-55.
99. Коршунов В.М. Изучение влияния энтерококков на нормализацию микрофлоры кишечника при экспериментальных дисбактериозах /Коршунов
100. B.М., Логадырь Т.А;, Попова С.Н. //Журн. микробиол. -1989. № 9.- С. 3-6.
101. Ковалев С.В. Процессы и аппараты биотехнологии /Ковалев С.В., Хрипков Ю.И. М.: ВАХЗ, 1998. - 248 с.
102. Ковалев С.В. Проектирование и оборудование биотехнологическихпредприятий /Ковалев С.В., Тихонов И.В., Симонова Н.И. //Практикум по процессам и аппаратам биотехнологии,- Ч. I.- М.: ВУ РХБЗ МО РФ, 2000 .123 с.
103. Ковалев С.В. Основы проектирования и оборудование биотехнологических предприятий /Ковалев С.В., Тихонов И.В., Симонова Н.И. //Практикум по основам проектирования предприятий биотехнологической промышленности.- Ч. 2.- М.: ВУ РХБЗ МО РФ, 2000.- 84 с.
104. Коган А.С. Применение иммобилизованных бактериальных протеаз для пролонгированной энзимотерапии гнойных хирургических заболеваний /Коган А.С., Салганик Р.И., Ефимов Ю.М. //Вестник хирургии.-1982. № 4. -С. 60-63.
105. Королюк A.M. Конструирование новых препаратов и лечебных продуктов для направленной коррекции микроэкологического статуса организма /Королюк A.M. //Инфектология, достижения и перспективы: Сб.науч.тр.-Санкт-Петербург, 1996,- С. 125.
106. Костенко Т.С. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии /Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И.- М.: Колос, 2001.350 с.
107. Котов В. Б. Состояние и тенденции развития биотехнологии за рубежом /Котов В. Б., Беляева Т.А. //Итоги науки и техники. Биотехнология: Сб.науч.тр.-М.: Мир, 1991.-С. 156.
108. Крамм Э.А. Деконтаминация питательных сред в процессах биосинтеза /Крамм Э.А. М.: МИХМ, 1991. - 38 с.
109. Крамаров В.М. Новые продуценты сайтспецифических эндонуклеаз из микроорганизмов рода Bacillus /Крамаров В.М., Скрышина Н.А. // Молекулярная генетика, микробиология, вирусология. 1989. - № 6. - С. 42-45.
110. Краморенко Ю.С. Микрометод комплексного определения Т- и В-лимфоцитов в капиллярной крови /Краморенко Ю.С., Урашева С.М., Байсал-баева В.К. //Лабораторное дело. 1990. - № 5. - С. 16-18.
111. Кругликов В.Д. Возможность приживления Lactobacillus acidophilus в кишечнике белых мышей на фоне бактериальной терапии /Кругликов В.Д., Цураева Р.И., Рыжков И.В. //Ж. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол,-1997.-№ 1.-С. 67-69.
112. Кудрявцев В.А. Подбор состава среды для оптимизации аминосинте-тической активности аэробных бацилл /Кудрявцев В.А., Сафронова Л.А., Осадчая А.И. //Микробиол. журн. 1991, т.53, № 4, С. 68-72.
113. Кудрявцев В.А. Влияние живых культур Bacillus subtilis на неспецифическую резистентность организма /Кудрявцев В.А., Сафронова Л.А., Осадчая А.И. //Микробиол. журн. 1996. - № 2.- С.46-55.
114. Куриленко А.Н. Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных /Куриленко А.Н., Крупальник В.Л.- М.: Колос, 2000.-387 с.
115. Ленцнер А.А. Лактофлора и колонизационная резистентность /Лен-цнер А.А., Ленцнер Х.П., Микельсаар М.Э. //Антибиотики и мед. биотехнол.-1987.-№ З.-С. 173-179.
116. Литвин В.П. Бактерин-СЛ при острых желудочно-кишечных болезнях /Литвин В.П., Резник С.Р., Вьюницкая В.А. //Проблемы диагностики, терапии и профилактики незаразных болезней с.-х. животных: Сб.науч.тр.-ВЗВИ .-Воронеж:, 1986. С. 76 -78.
117. Литвина Л.А. Перспективы использования пробиотиков в животноводстве /Литвина Л.А., Мотовилов К.Я. //Проблемы стабилизации и развития с.-х. пр-ва Сибири, Монголии и Казахстана в XXI в: Сб.науч.тр.- Новосибирск, 1999. ч. 2. - С. 220-222.
118. Лопатина Т.К. Иммуномодулирующее действие препаратов эубиоти-ков /Лопатина Т.К., Бляхер М.С., Николаенко В.Н. //Вестн. РАМН. М.: «Медицина», 1997.-№ З.-С. 30-34.
119. Лукин А.А. Защитная функция пептидных антибиотиков бацилл /Лукин А.А. //Антибиотики и медицинская биотехнология.-1987.- № 7.- С. 538-541.
120. Малик Н.И. Антилизоцимные свойства молочно-кислых бактерий, выделенных из кишечника поросят и птицы /Малик Н.И. //Совершенствование методов контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов: Сб.науч.тр.- ВГНКИ.- М., 2001.- С. 98-99.
121. Малик Н.И. Ветеринарные пробиотические препараты /Малик Н.И., Панин А.Н. // Ветеринария. 2001. - № 1. - С. 46-51.
122. Малик Н.И. Новые пробиотические препараты ветеринарного назначения: Автореф. дис.докт. биол.наук: 16.00.03 / Н.И Малик; ВГНКИ.-М., 2002. 53 с.
123. Мазанкова JI.H. Перспективы применения споровых пробиотиков при заболеваниях желудочно-кишечного тракта у детей /Мазанкова JI.H., Ку-рохтина И.С. // Педиатрия. 2002. - № 4. - С. 56-61.
124. Манаков М.Н. Мембранные биореакторы в биотехнологии /Манаков М.Н., Кузнецов А.Е., Мартвичев Н.С. //Биотехнология.-1988.-№ 2.-С. 65-67.
125. Матвеев В.Е. Научные основы микробиологической технологии. Кинетика развития и инактивация микробных популяций, септика, масштабирование /Матвеев В.Е.- М.: Агропромиздат, 1985. 224 с.
126. Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков.-М.:МЗ СССР, 1983.- 15 с.
127. Меджидов М.М. Состояние и перспективы развития производства микробиологических питательных сред /Меджидов М.М. //Актуальные вопросы разработки препаратов медицинской биотехнологии: Сб.науч.тр.- Махачкала, 1988.-Ч. I.-С. 3-8.
128. Мечников И.И. Этюды оптимизма /Мечников И.И.- М.: Наука, 1988.- 327 с.
129. Михайлова Н.А. Диагностика, профилактика и лечение гнойно-септических заболеваний лекарственными средствами, выпускаемыми НПО «Иммунопрепарат» /Михайлова Н.А., Никитенко В.И., Кузнецова Т.Н.- Уфа: НПО «Иммунопрепарат», 1993. С. 81-83.
130. Мишурнова Н.В. Препарат СТФ-1/56 при выращивании бройлеров /Мишурнова Н.В., Киржаев Ф.С. //Птицеводство. 1987. - № 2. - С. 40-41.
131. Мишурнова Н.В. Антагонистические свойства препарата СТФ-1/56 относительно сальмонелл и кишечной палочки /Мишурнова Н.В., Киржаев Ф.С. //Ветеринария. 1988. - № 10. - С. 34-36.
132. Мишурнова Н.В. Современное представление о роли нормальной микрофлоры пищеварительного тракта /Мишурнова Н.В., Киржаев Ф.С. //Ветеринария. 1993. - № 7 (6). - С. 30-33.
133. Молохова Е.И. Пробиотики на Российском рынке /Молохова Е.И. //Фармация. - 2000. - № 3. - С. 55-58.
134. Мосина JI. В. Распространение аэробных спорообразующих бактерий в почвах европейской части СССР /Мосина JI. В. // Изв. АН СССР, сер. «Биология» 1974. - № 2. - С. 283-286.
135. Мосичев М.С. Общая технология микробиологических производств /Мосичев М.С., Складнев А.А., Котов В.Б.- М.: Агропромиздат, 1982.- 185 с.
136. Неклюдов А.Д. Получение и очистка белковых гидролизатов /Неклюдов А.Д., Иванкин А.Н., Бердутина А.В. //Прикл. биохимия и микро-биол-2000-№ 4.-С.371-379.
137. Несчисляев В.А. Пробиотики: ретроспектива, проблемы и достижения научно-производственной практики НПО «Биомед» /Неклюдов А.Д., Иванкин А.Н., Бердутина А.В. //Журн. микробиол.-1998. № 2.- С. 100-102.
138. Никитенко В.И. Взаимоотношения макроорганизма и бактерий в ране и тканях человека и животных /Никитенко В.И. //Хирургия.-1990.- № 9.-С. 94-98.
139. Никитенко В.И. Вместо лекарств бактерии /Никитенко В.И. //Наука в СССР. - 1991.-№ 4. - С. 116-121.
140. Никитенко В.И. Споробактерин новый препарат для лечения дис-бактериозов и гнойно-воспалительных процессов /Никитенко В.И., Горбунова Н.Н., Жигайлов А.В. //Дисбактериозы и эубиотики: Сб.науч.тр,- М.,1996. -С. 26-28.
141. Никитенко В.И. Некоторые новые данные о механизме действия спо-рообразующих пробиотиков /Никитенко В.И., Бородин М.В. //Актуальные вопросы военной и практической медицины. Оренбург, 2000. - с. 79-80.
142. Огарков В.И. Основные биотехнологические проблемы микробиологической промышленности /Огарков В.И. // Биотехнология,-1986.-№ 4.-С. 5.
143. Определитель бактерий Берджи //Под ред. Дж. Хоулта, Н.Крига, П.Спита, Дж.Стейли, С.Уильямса (9-е издание в 2-х томах) /Пер. с англ. под ред. Г.А. Заварзина.- М.: Мир, 1997. 799 с.
144. Осадчая А.И. Стимуляция роста и спорообразование B.subtillis с оптимизацией углеводного питания при глубинном культивировании /Осадчая А.И., Кудрявцев В.А. //Прикл. биохимия и микробиол.- 1997.- Т.ЗЗ, № 3, С.321-324.
145. Осипова И.Г. Некоторые аспекты механизма защитного действия ко-либактерина и споровых эубиотиков и новые методы их контроля: Автореф. дис.канд. биол. наук:16.00.03 / И.Г.Осипова М., 1997. - 25 с.
146. Осипова И.Г. Изучение безопасности бактерий рода Bacillus, составляющих основу некоторых пробиотиков /Осипова И.Г., Сорокулова И.Б. //Журн. микробиол., эпидемиологии. 1998. - № 6. - С. 68-71.
147. Орлова М.В. Антибактериальная активность Bacillus laterosporus /Орлова М.В., Смирнова Т.А., Шамшина Т.Н. //Биотехнология.-1995.-№ 1-2,-С. 23-26.
148. Павлюк Т.Д. Применение препарата биоспорин в комплексном лечении пародонтита, осложненного кандидозом /Павлюк Т.Д. //Новая стоматология (Киев). 1995. - № 3. - С. 59-60.
149. Панин А.Н. Иммунобиология и кишечная микрофлора /Панин А.Н., Малик Н.И., Малик Е.В.- М.: Аграрная наука, ИК «Родник», 1988. 48 с.
150. Панин А.С. Пробиотические препараты в ветеринарии /Панин А.С., Серых Н.Е. //Ветинформ. 1993.- № 2,- С. 9-10.
151. Панин А.С. Принципы и перспективы применения пробиотиков в ветеринарии /Панин А.С., Малик Н.И. //Пробиотики и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека: Сб.науч.тр.- М., 1999.- С. 70.
152. Панин А.Н. Биотехнологические аспекты изготовления сухих про-биотических препаратов /Панин А.Н. //Научные основы пр-ва вет. биол. препаратов: Сб.науч.тр. / ВНИТИБП.- Щелково, 2000.-С. 343-345.
153. Парфенов А.И. Микробная флора кишечника и дисбактериоз /Парфенов А.И. // Рус.мед.журнал. 1998. - № 6 (18). - С. 1170-1173.
154. Пат. 1722502, МКИ5 А 61 К 39/02, 35/74. Препарат биоспорин для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний человека /В.В.Смирнов, С.Р.Резник, И.Б. Сорокулова (РФ).- 7 с.
155. Пат. 1839459, МКИ5 С 12 N 1/21. Штамм бактерий Bacillus subtilis, обладающий антивирусной и антибактериальной активностью /В.В.Смирнов, В.А.Белявская, А.А.Ильичев, И.Б. Сорокулова (РФ).- 4 с.
156. Пат. 2035185, МКИ6 А 61 К 35/66. Профилактический биопрепарат субалин /В.В.Смирнов, С.Р.Резник, И.Б.Сорокулова (РФ).- 5 е.: ил. 2.
157. Пат. 5374545, МКИ C12N 9/00, C12N 1/20. Cell wall lytic enzymes from Bacillus pabuli /Liu Chi-Li, Overholt Janet M; Novo Nordisk (США). 8 с.
158. Петров А.Н. Геродиетические продукты функционального питания /Петров А.Н., Григоров Ю.Г., Козловская С.Г.- М.: Колос-пресс, 2001.-С. 6167.
159. Пермаков Н.И. Лечение телят профилакторного периода /Пермаков Н.И. //Ветеринария. 1995. - № 4.- С. 51.
160. Петровская В.Г. Микрофлора человека в норме и патологии /Петровская В.Г., Марко О.П. М.: Медицина, 1976. - 231 с.
161. Петров В.Ф. Получение природных биологических активных препаратов новое направление исследований в НПО «Биомед» /Петров В.Ф., Сафонова Г.М. // Журн.микробиол. - 1998. - № 2. - С. 95-98.
162. Перетц Л. Г. Значение нормальной микрофлоры для организма человека /Перетц Л. Г. М.: Медицина, 1955. - 435 с.
163. Пикина А.П. Первичный скрининг штаммов бифидобактерий и лак-тобактерий с целью разработки на их основе эффективных препаратов-пробиотиков /Пикина А.П., Смеянов В.В., Ефимов Б.А. //Журн. Микробиол.-1999.-№6.- С. 34-36.
164. Пирузян Л.Ф. Сапрофитная микрофлора в качестве продуцента биологически активных веществ для целей микробной сапротрофной фармакотерапии /Пирузян Л.Ф., Михайловский Е.М. //Изв. Академии наук. Сер. «Биология».-1992.-№ 6.-С. 860 869.
165. Платонов А.В. Производство препаратов для животноводства на основе микроорганизмов-симбионтов желудочно-кишечного тракта /Платонов А.В.- М.: ВНИИСЭНТИ, 1985. 44 с.
166. Поберий И.А. Новый комплексный эубиотик "Биоспорин" для детей и взрослых /Поберий И.А., Харечко А.Т., Садовой Н.В. //Уральское медицинское обозрение.- Екатеринбург, 1998. С. 97-99.
167. Попова Ж.П. Новый пробиотик для животноводства /Попова Ж.П., Никонорова А.К. //Зоотехния. 1995. - № 11. - С. 21-22.
168. Проскурин Ю.Н. Пробиотические препараты для профилактики и лечения коров, больных маститом и новорожденных телят желудочно-кишечными заболеваниями: Автореф. дис. . канд. вет.наук: 16.00.03 / Ю.Н. Проскурин. М., 2000. - 25 с.
169. Подберезный В.В. Эффективность интрамаммарного применения пробиотика эндобактерина для лечения мастита у коров /Подберезный В.В., Париков В.А. //Акушерство, гинекол. и биотехн. размножения живот-ных:Сб.науч.тр. / ВЗВИ .- Воронеж, 1994. С. 253-254.
170. Полоцкий А.Е. Структурно-функциональные, селективные и эксплуатационные характеристики ультрафильтрационных полых волокон на основе ароматического полиамида /Полоцкий А.Е., Боризов Н.П. //Биотехнология,- 1990.- № 6,- С. 50-51.
171. Полянская Л.М. Динамика численности и структуры популяции Bacillus sphaericus в почвах /Полянская Л.М., Добровольская Т.Г., Исаева С.В. //Биодинамика почв: Сб.науч.тр. /Таллин: Харку, 1988. С. 130-132.
172. Проворов Н.А. Генетико-эволюционные основы учения о симбиозе /Проворов Н.А. // Журн. общ. биол.- 2001.- Т. 62.- № 6.- С. 472-495.
173. Равилов А.З. Микробиологические среды /Равилов А.З., Гильмуди-нов Р.Я., Хусаинов М.Ш. Казань: ФЭН, 1999.- 398 С.
174. Раицкая В.И. Новые препараты для лечения и профилактики диареи телят/Раицкая В.И. //Ветеринария.-2001.-№ 5.-С. 14.
175. Регистр лекарственных средств России //Энциклопедия лекарств,-М.:РЛС, 2000/1999,- 1006 с.
176. Резник С.Р. Биологические свойства споровых аэробных бактерий, выделенных из организма человека и животных /Резник С.Р., Вьюницкая В.А., Сорокулова И.Б. //Фитонциды. Киев: Наукова думка, 1981. - С. 35-40.
177. Резник С.Р. Влияние перитонеального введения бактерий рода Bacillus на фагоцитарную активность лейкоцитов крови /Резник С.Р., Смирнов В.В., Волынец А.К. //Микробиол. журн. 1982. - № 4. - С. 51-54.
178. Резник С.Р. Ассоциированный препарат из живых микробных культур рода Bacillus /Резник С.Р., Харченко С.Н., Вьюницкая В.А. //VI съезд Укр. микробиол. об-ва: Сб.науч.тр. /Киев: Наукова думка, 1984. С. 92-93.
179. Резник С.Р. Некоторые биологические свойства бактерий рода Bacillus, выделенных из организма людей /Резник С.Р., Слабоспицкая А.Т., Смирнов В.В. //Микроб, журн. 1985. - Т. 47, № 3. - С. 53-59.
180. Резник С.Р. Гематологические и цитохимические показатели телят при даче препарата Бактерин-СЛ /Резник С. Р., Шуст И. И. //Биохимия сельскохозяйственных животных и продовольственная программа: Сб.науч.тр. Киев, 1989. - С. 25-27.
181. Руденко И.Я. Оценка клинической эффективности оригинальногожидкого лактобактерина /Руденко И.Я., Херодинов Б.И. //Инфектология, достижения и перспективы: Сб.науч.тр.-Санкт-Петербург, 1996.- С. 184-185.
182. Сайтов М.М. О роли дисбактериоза в развитии хирургической инфекции /Сайтов М.М., Никитенко В.И., Есипов В.К. //Дисбактериозы и эу-биотики: Сб.науч.тр. М., 1996. - С.32-34.
183. Самгородская Н.В. Изучение действия некоторых биопрепаратов на бактерии рода Yersinia /Самгородская Н.В., Сорокулова И. Б., Ралко Н.М. //Микробиол. журн. 1994. - № 4. - С. 81-82.
184. Самуйленко А.Я. Основы технологии производства ветеринарных биологических препаратов /Самуйленко А.Я., Рубан Е.А.- М.: Россельхозака-демия.- Т 1.- Т 2,- М.: РАСХН, 2000,- 781 с.
185. Сафонов Т.А. Пробиотики как фактор, стабилизирующий здоровье животных /Сафонов Т.А., Калинина Т.А., Романова В.П. //Ветеринария.-1992.-№ 7-8 (З).-С. 3-34.
186. Сидоров М.А. Определитель зоопатогенных микроорганизмов /Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федотов В.Б. //Справочник.- М.: Колос, 1995.450 с.
187. Сидоров М.А. Основы профилактики желудочно-кишечных заболеваний новорожденных животных /Сидоров М.А., Субботин В.В. //Ветеринария.-1998.-№ 1.- С. 3-6.
188. Сидоров М.А. Нормальная микрофлора животных и ее коррекция пробиотиками /Сидоров М.А., Субботин В.В. //Ветеринария. 2000. - № 11. -С. 17-22.
189. Скальский Н.Г. Биотехнологический потенциал консорциумов микроорганизмов в народном хозяйстве /Скальский Н.Г., Лях С.П.-М.:ВНИИПИ,1990.- 198 с.
190. Скворцов А.Э. Технология приготовления таблетированной формы пробиотика «Биоспорин» /Скворцов А.Э., Лиморенко А.П., Тихонов И.В. и др.//Ветеринарная медицина.- Агровет.- 2002.- № 2- С. 44.
191. Слабоспицкая А.Т. Гиалуронидазная активность споровых аэробных бактерий, выделенных из различных экологических источников /Слабоспицкая А.Т. //Микробиол. журн. 1985.- Т. 47, № 4. - С. 71 - 74.
192. Слабоспицкая А.Т. Ферментативная активность бацилл, перспективных для включения в состав биопрепаратов /Слабоспицкая А.Т., Крымовская С.С., Резник С.Р. //Микробиол. журн. 1990. - Т. 52, № 1. - С. 9-14.
193. Смирнов В.В. Бактерии рода Bacillus продуценты антибиотиков /Смирнов В.В., Резник С.Р. //Проблемы изыскания и биотехнологии новых антибиотиков: Сб.науч.тр. - М.: Медицина, 1982. - С. 53 - 57.
194. Смирнов В.В. Методические рекомендации по выделению и идентификации бактерий рода Bacillus из организма человека и животных /Смирнов В.В., Резник С.Р., Сорокулова И.Б. Киев: БИ, 1983. - 50 с.
195. Смирнов В.В. Дискуссионные вопросы создания и применения бактериальных препаратов для коррекции микрофлоры теплокровных /Смирнов В.В., Резник С.Р., Сорокулова И.Б. //Микробиол. журн.- 1992.- № 6.-С. 82-94.
196. Смирнов В.В. Рост и спорообразование Bacillus subtillis в различных условиях аэрации /Смирнов В.В., Осадчая А.И., Кудрявцев В.А. //Микробио-л.журн. 1993. - № 3. - С. 38-43.
197. Смирнов В.В. Современные представления о механизмах лечебно-профилактического действия пробиотиков из бактерий рода Bacillus /Смирнов В.В., Резник С.Р., Выоницкая В.О. //Микробиол. журн.-1993. № 4. -С. 92-112.
198. Смирнов В.В. Чувствительность к антимикробным препаратам штаммов бацилл, составляющих основу некоторых пробиотиков /Смирнов В.В., Руденко А.В., Самгородская Н.В. //Антибиотики и химиотерапия.-1994,- №4.-С. 23-28.
199. Смирнов В.В. Влияние комплексного пробиотика споролакта на микробиоценоз кишечника теплокровных /Смирнов В.В., Резник С.Р., Вью-ницкая В.А. //Микробиол. журн. 1995. - № 4. - С. 42-49.
200. Смирнов А.О. Разработка технологии получения таблеточной формы препарата биоспорин /Смирнов А.О., Харечко А.Т., Садовой Н.В. //Биотехнология. 1996. - № 11. - С. 51-55.
201. Смирнов В.В. Новый пробиотик эндоспорин для лечения и профилактики эндометритов животных /Смирнов В.В., Кудрявцев В.А., Осадчая
202. A.И. //Дисбактериозы и эубиотики: Сб.науч.тр.- М., 1996,- С. 32-38.
203. Смирнов В.В. Пробиотики на основе живых культур микроорганизмов /Смирнов В.В., Коваленко Н.К. // Микробиол. журн.-2002.- № 4.-С.62-80.
204. Смирнова А.И. Дисбактериоз кишечника (Патогенез, клиника, диагностика и лечение): Учебно-методич. пособ. /Смирнова А.И., Золотарев Ю.В., Колеватых Е.П. Киров: КМИ, 1993.- 22 с.
205. Сорокулова И.Б. Сайтспецифические эндонуклеазы бактерий рода Bacillus /Сорокулова И.Б., Крамаров В.М., Резник С.Р. // Микробиол. журн.-1990.- № 5.-С.8-11.
206. Сорокулова И.Б. Перспективы применения бактерий рода Bacillus для конструирования новых биопрепаратов /Сорокулова И. Б. //Антибиотики и химиотерапия. 1996. -№ 10. - С. 13-15.
207. Сорокулова И.Б. Сравнительное изучение биологических свойств биоспорина и других коммерческих препаратов на основе бацилл /Сорокулова И.Б. //Микробиол. журн.- 1997.- № 6.- С. 43-49.
208. Сорокулова И.Б. Рекомбинантные пробиотики: проблемы и перспективы использования в медицине и ветеринарии /Сорокулова И.Б., Белявская
209. B.А. // Вестник РАМН. 1997. - № 3. - С. 46-49.
210. Сорокулова И.Б. Изучение безопасности и реактогенности нового пробиотика субалина на добровольцах /Сорокулова И.Б. //Микробиол. журн.1998.-№ i.-c. 43-46.
211. Сорокулова И.Б. Влияние пробиотиков из бацилл на функциональную активность макрофагов /Сорокулова И.Б.//Антибиотики и химиотерапия.- 1998.- №2.-С. 20-23.
212. Спасская Т.А. Повышение резистентности телят под влиянием пробиотических препаратов /Спасская Т.А. //Известия Тимирязевской с.-х. академии. М., 1998. - Вып. № 4. - С. 169-179.
213. Субботин В.В. Биотехнология пробиотика лактобифадола (бифаци-добактерина) и его лечебно-профилактическая эффективность: Автореф. дис. .докт. вет. наук: 16.00.03 /Субботин В.В; МГУПБ. М., 1999.-41 с.
214. Субботин В.В. Профилактика желудочно-кишечных болезней новорожденных животных с симптомокомплексом диареи /Субботин В.В., Сидоров М.А. //Ветеринария. 2001. -№ 4. - С. 3-7.
215. Степанов А.В. Иммуномодулирующее действие биоспорина /Степанов А.В., Мисников О.П., Василенко А.Ж. //Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения: Сб.науч.тр. / ВМА.- Санкт-Петербург, 1997,- С. 300301.
216. Тарабукина Н.П. Морфологические, культуральные и биологические свойства Bacillus subtilis «ТНП-3» /Тарабукина Н.П. //Научное обеспечениеветеринарных проблем в животноводстве: Сб.науч.тр. Новосибирск, 2000. -С. 264-266.
217. Тараканов Б.В. Использование микробных препаратов и продуктов микробиологического синтеза в животноводстве /Тараканов Б.В.-М.: ВНИИТЭИагропром, 1987.-48 с.
218. Тараканов Б.В. Новые биопрепараты для ветеринарии /Тараканов Б.В., Николичева Т.А. //Ветеринария. 2000. - № 7. - С. 45-50.
219. Тараканов М.А. Механизм действия пробиотиков на микрофлору пищеварительного тракта и организм животных /Тараканов М.А. //Ветеринария,- 2000.- №5.- С 32-33.
220. Темный Н.В. Профилактика и лечение при диарее новорожденных телят /Темный Н.В. // Ветеринария. 1990. - № 10. - С. 15 - 17.
221. Тец В.В. Влияние антибиотиков на популяционную изменчивость бактерий /Тец В.В., Борисова Л.Б. //Антибиотики и химиотерапия.-1988.- № 4.-С. 299-303.
222. Тихонов И.В. Основы биотехнологических процессов: Учеб.-метод. пособ.,Ч. II /Тихонов И.В., Воронин Е.С., Ковалев С.В. //Способы культивирования микроорганизмов.-М.: МГАВМиБ, 2002.-57 с.
223. Тихонов И.В. Основы биотехнологических процессов: Учеб.-метод. пособ., Ч. IH /Тихонов И.В., Воронин Е.С., Ковалев С.В. //Выделение, концентрирование и очистка биопрепаратов.- М.: МГАВМиБ.-2000.- 48 с.
224. Тихонов И.В. Проблемы и перспективы биотехнологии /Тихонов И.В. Гаврилов В.А. //Ветеринарная медицина.-М.: Агровет.- № 3.-2003.- С. 26-27.
225. Трапезов Е.В. Микробная экология пищеварительного тракта у больных острыми кишечными инфекциями /Трапезов Е.В., Леонтьева Н.И., Бон-даренко В.М. //Микробиол. эпидемиол. и иммунобиол.-1992.-№ З.-С. 25-28.
226. Трещанина Н.А. Техника микробиологических исследований /Треща-нина Н.А. //Лабораторный практикум по микробиологии.- Часть I.- Самара:
227. Самара: Изд. «Самарский университет», 1997.- 57 с.
228. Трещанина Н.А. Выделение чистой культуры бактерий /Трещанина Н.А. //Лабораторный практикум по микробиологии.- Часть II.- Самара: Изд. «Самарский университет», 1997.- 32 с.
229. Трещанина Н.А. Изучение свойств выделенного штамма /Трещанина Н.А. //Лабораторный практикум по микробиологии.- Часть III.- Самара: Изд. «Самарский университет», 1997.- 44 с.
230. Тремасов М.Я. Влияние пробиотика энтероспорина на течение мико-токсикоза /Тремасов М.Я., Сергейчев А.И., Титова В.Ю.- Киров: НИИМ МО РФ, 1998.-С. 235-236.
231. Тремасов М.Я. Изучение защитной роли пробиотиков при эшерихио-зе /Тремасов М.Я., Абдуллин А.Г. //Диагностика, лечение и профилактика инфекционных заболеваний. Биотехнология. Ветеринария: Сб.науч.тр / ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ.- Екатеринбург, 1999.- С. 247.
232. Тутов И.К., Ситьков В.И. Основы биотехнологии ветеринарных препаратов: Учеб.пособ. /Тутов И.К., Ситьков В.И.- Ставрополь: СГСХА, 1991 -251 с.
233. Урбан В.П. Болезни молодняка в промышленном животноводстве /Урбан В.П., Найманов И.Л. М.: Колос, 1984. - 207 с.
234. Уша Б.В. Клиническое обследование животных /Уша Б.В., Фельд-штейн М.А.-М.: Агропромиздат, 1986. -303 с.
235. Филонов А.Е. Стабильность плазмид и конкуренция плазмидсодер-жащих и бесплазмидных штаммов в условиях непрерывного культивирования /Филонов А.Е., Воронин A.M. //Антибиотики и химиотерапия.-1990.- № 5.- С. 46-50.
236. Фомченко Н.В. Прогнозирование сепарируемости микробных суспензий в центробежном поле /Фомченко Н.В., Бирюков В.В., Красильникова Н.В .//Биотехнология 1997. - № 4. с. 22-26.
237. Фукс П.П. Разработка новой технологии получения сухого пробиотика /Фукс П.П., Петренчук Э.П. //Вет.медицина.-1997.-Вып. 73.-С. 24-28.
238. Хундаков JI.E. Бифидумбактерин при диспепсии телят /Хундаков Л.Е., Жамбалов Д.Ж., Дугирова Б.В. // Ветеринария. 1976. - № 3. - С. 95 - 96.
239. Харечко А.Т. Полифункциональность лечебно профилактического действия нового эубиотика биоспорина /Харечко А.Т., Поберий И.А., Литусов Н.В. //Человек и лекарство: Сб.науч.тр. - М., 1997. - С. 208-210.
240. Цой И.Г. Иммуностимулирующее действие лактобактерий на цито-токсичность естественных клеток киллеров и продукцию интерферона /Цой И.Г., Сапаров А.С., Тимофеева И.К. //Микробиол. эпидемиол. и иммуноби-ол.-1994.-№ 6.-С. 112-113.
241. Чахава О. В. Гистобиология о микрофлоре организма хозяина и ан-тибиотикотерапии /Чахава О. В. //Антибиотики и мед. биотехн.- 1987.-№ 3. -С. 170-173.
242. Чернущенко Е.В. Процессы пищеварения и усвоения питательных веществ при скармливании сухой живой бактериальной культуры /Чернущенко Е.В. //Бюл. ВНИИФБИП с.-х. животных. 1988. - № 3. - С. 36-38.
243. Чернякова В.И. Бактериологическая и ммунологическая эффективность биоспорина при неспецифическом язвенном колите /Чернякова В.И.,
244. Береза Н.М., Селезнева С.И. // Микробиол. журн. -1993. № 3. - С. 63-67.
245. Чесалов С.А. Разработка методов конструирования сред высушивания биопрепаратов: Автореф. дисс. канд. технич. наук: 03.00.23 /С.А. Чесалов.-М, 1993.-25 с.
246. Чудновская И.В. Антивирусная активность пробиотиков из бацилл /Чудновская И.В., Рыбалко C.JL, Сорокулова И.Б. //Доповщ1 Н.ацюнальжн академп наук Украши. 1995. - № 2. - С. 124-126.
247. Чугунова Н.К. Исследование процесса таблетирования колибактери-на и лактобактерина: Автореф. дисс. канд. фарм. наук: 03.00.23 / Н.К. Чугунова. Пермь, 1983.- 21 с.
248. Шагам H.JI. О физико-химических методах стандартизации микробиологических питательных сред /Шагам Н.Л., Раскин Б.М., Мельникова
249. B.А. //Микробиол. эпидемиол. и иммунобиол.- 1981,- № 4.- С.24-29.
250. Шайхаманов М.Х. Профилактика диспепсии новорожденных телят /Шайхаманов М.Х., Грамолин В.П., Авакянц Б.М. //Ветеринария.-1994.-№ 3. -с. 21-23.
251. Шевелева С.А. Пробиотики, пребиотики и пробиотические продукты. Современное состояние вопроса /Шевелева С.А. //Вопр. питания.-1999. -№2.-С. 32-40.
252. Шендеров Б.А. Антимикробные препараты и нормальная микрофлора. Проблемы и возможные пути их решения /Шендеров Б.А. //Антибиотики и химиотерапия. 1988. - № 12. - С. 921-926.
253. Шендеров Б.А. Эубиотики как основа функционального питания человека /Шендеров Б.А., Манвелова М.А. //Актуальные проблемы инфекционной патологии: Сб.науч.тр. -М.: С-Пб., 1993. С. 47.
254. Шендеров Б.А. Значение колонизационной резистентности в патогенезе инфекционных заболеваний /Шендеров Б.А.- М.: Высшая школа, 1994.1. C. 112-121.
255. Шендеров Б.А. Пробиотики и функциональное питание /Шендеров
256. Б.А., Манвелова М.А., Степанчук Ю.Б. //Антибиотики и химиотерапия.— 1997.- №7.-С. 30-34.
257. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание /Шендеров Б.А. М.: Грантъ, 1998. - Т. 1-2. - 288 с.
258. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и ее роль в поддержании здоровья человека /Шендеров Б.А. //Росс. журн. гастроэнтерологии, гепато-логии и колопроктологии. 1998. - №1. - С. 61-65.
259. Щербаков П.Н. Профилактика и лечение при желудочно-кишечных болезней телят /Щербаков П.Н., Гусев А.Г. //Ветеринария.- 2002.- № 3.- С. 15.
260. Шимкус A.IO. Применение пробиотиков при выращивании телят /Шимкус A.IO. //Актуал. вопросы зоотехн. науки и практики как основа улучшен, продуктив. качеств и здоровья с.-х. животных: Сб.науч.тр. М.: Колос, 2001.-С. 81-83.
261. Шубин Х.А. Бактериальные препараты при профилактике желудочно-кишечных болезней телят /Шубин Х.А., Шубина JI.A. //Ветеринария. -1994.-№3.-С. 42-44.
262. Шубина J1.A. Профилактика желудочно-кишечных заболеваний ягнят бактериальными препаратами /Шубина JI.A., Гудков С.А. //Науч.-метод, конф.: Сб.науч.тр. / филиал Моск. СХА им. К.А. Тимирязева.- Ярославль, 1986.-С. 129-130.
263. Шевелуха B.C. Сельскохозяйственная биотехнология /Шевелуха В. С., Калашникова Е.А., Воронин Е.С. и др.- М.: Высшая школа, 2003.- 469 С.
264. Шкарупета М.М. Влияние пероралыюго введения индигенных микроорганизмов на устойчивость мышей к сальмонеллезной инфекции /Шкарупета М.М., Коршунов В.М., Савенкова В.Т. //Микробиол. эпидемиол.и иммунобиол. -1988. № 7. - С. 46-50.
265. Шкоп Я.Я. Совершенствование технологии разделения и концентрирования в производстве продуктов микробиологического синтеза /Шкоп Я.Я., Фомченко Н.В., Гуславский А.И. // Биотехнология. 1986. - № 5.- С. 43-44.
266. Щербаков Г1.Н. Профилактика и лечение при желудочно-кишечных и респираторных болезнях /Щербаков П.Н., Гусев А.Г. // Ветеринария.-2002. -№3.-С. 15-16.
267. Щербакова Э.Г. Новый препарат Бифилиз (ВИГЭЛ) и опыт его применения /Щербакова Э.Г., Грачева Н.М., Растунова Г.А. //Дисбактериозы и эубиотики: Сб.науч.тр.- М., 1996.- С. 41-43.
268. Эпштейн-Литвак Р.В. Дисбактериоз кишечника: Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследований /Эпштейн-Литвак Р.В.- М., 1973. С. 229-234.
269. Atkinson A. Production of alcohol by Bacillus stearothermophilus /Atkinson A., Ellucod D., Evans C., Yco R.- Biotechnol and Bioeng., 1975, 17, № 9, p. 1375-1377.
270. Axelsson L. Lactobacillus reuteri, a member of the gut bacterial flora /Axelsson L. //Microb.Ecol.Health and Disease, 1989.-Vol.2.- № 2 pp. 466-468.
271. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding /Bradford M.M. //Anal.Biochem. Vol.72, 1976, 248-254.
272. Bansal S. Probiotics in healyh and diseasts /Bansal S. //J. Assoc physicians.- 2001.- № 7.- P. 735-741.
273. Barrow P. Probiotics "The scientific basis" /Barrow P. //Edd by R.Fuller. First edition 1992. Published by Chapman and Hall. 2-6 Boundary Row.London
274. SE 1 8HN. 1980,- p. 225-257.
275. Behrens G. Aufzuchtleistung abgesetzter Ferkel mit dem Probiotikum PACIFLOR/Behrens G. // Schweinewelt. 1994. - 19, N6. - p. 219.
276. Benedettini G. Immunomodulation by Bacilllus subtilis spores /Benede-ttini G., Delibero C., Pierotti R. //Boll. 1st. Sieroter.Milan.-1983.- № 6.-p. 509-516.
277. Benno J. Bifidoflora and microflora /Benno J., Mitsuoka T. // Development of intestinal microflora in human and animals. 1986. - 5., № 1,- p. 13-25.
278. Berg R.D. Probiotics, prebiotics, or conbiotics /Berg R.D. // Treds Microbiol 1998. - Vol. 6. - p. 89-92.
279. Bonomi A. Probiotics in swine feeding: The use of Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis (experimental contribution) /Bonomi A. // Riv. della Soc. Italianadi Scienza Dell'Alimentazione. — 1992. 21, N 4. - p. 481-499.
280. Bell D.J. Downstream Processing /Bell D.J., Hoare M., Dunnill P.- Ber-lin.-1983.- P.l-72.
281. Bengmark S. Colonic food: pre- and probiotics /Bengmark S. //Am J Gastroenterol 2000; 95 (1) SuppI: S 5-7.
282. Braun O.H. Effect of consumption of human milk and other formulas on intestinal bacterial flora in infants /Braun O.H. //In: Lebenthal B. ed. Gasfroen-terology and nutrition In infancy. New York: Raven Press, 1981: 247-51.
283. Bmer G.W. Biotherapeutic Agents and Infection Diseases /Bmer G.W., Me Farland L.W. Surawicz СМ.- Human Press. 1999: 316 p.
284. Chauviere G. Competitive exclusion of diarrhoeagenic Escherichia coli ETEC from human enterocyte-like Caco-2 cells by "heat-killed Lactobacillus" /Chauviere G. //FEMS Microbiol. Lett. 1992.-N 91. - p. 213-218.
285. Cheng C.C. Growth stimylants for bifidobacteria produced by Lactobacillus casei /Cheng C.C., Nagasawa T. //D.S.A. -1985. -v. 47. -№ 10. p. 718.
286. Cheng C.C. Effect ofpeptides and amino acid prodused by Lactobacillus casei in milk on the acid production of bifidobacteria /Cheng C.C., Nagasawa T. // Japanise I of Zootechical Sci. -1984. 55(5). - p. 339-349.
287. Christopher F. Environmental biotechnology /Christopher F. New York. - 1990.-p. 265-270.
288. Cipradi G. Effect of an adjunative treatment with Bacillus subtilis for foodallergy /Cipradi G. // Chemioterapia.-1986.- 5, N6.- p. 408-410.
289. Coppi F. Results of treatment with Bacillus subtilis spores (Entero-germina) after antibiotic therapy in 95 patients with infection calculosis /Coppi F. // Chemotherapia. 1985. - 4, № 6. - p. 467 - 470.
290. Clarke R. J. T. Microbial ecology of the gut /Clarke R. J. T. // Bauchop. London etc. 1977.
291. Collins M.D. Probiotics, prebiotics, and synbiotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut /Collins M.D. -Am J Clin Nutr, 1999; 69 (suppi): 1052S-7S.
292. DaviesM. Bacterial cells as antitumor agents in man /Davies M. //Rev.Environ Health.- 1982.- 4.- № 1.- p.31-36.
293. Ducluzeau R. Production of an antibiotic substance by Bacillus Iieheniformis within the digestive tract of gnotobiotic mice /Ducluzeau R., Dubos F., Rainbaud P. // Antimicrob. Agents Chemother.-1978.-13, N 2.- P.97-103.
294. DatarR. Filtr and Separ / Datar R. 1984.-Voi.21, № 3.-P. 402-406.
295. De Valdez G.F. Effect of drying medium on residual moisture content and viability of freere dried lactic acid bacteria /De Valdez G.F., De Jion G.S., De Rmz Holgado A.P., Oliver G. //Appl. Environ. Microbiol.- 1985.- № 2.- P. 413-415.
296. Dityatkovskaja E.G. Biosporin white allergietching dermatosis treatment /Dityatkovskaja E.G., Chaplinsky V.Y. //1-st Int. Conf. Immunoreabilitation "Re-abilitation oe Immune system". Dagomys, 1-5 Juli, 1992 / Tsk. 1992. P. 97.
297. Deguchi Y. Comparative studies on synthesis of water-soluble vitaminsamong human species of bifidobacteria /Deguchi Y., Morishita Т., Mutai M. //Agric. Biol. Chem. -1985. -N 49(1). -Pp. 13-19.
298. Delneste Y. Functional foods: Mechanisms of action on immunocompetent cells /Delneste Y., Donnet-Hughes A., Schiffrin E.J. // Nutr. Rev. 1998. - № 56.-p. 93-98.
299. De Simone C. Effect of Bifidobacterium longum and Lactobacillus acidophilus on gut mucosa and peripheral blood B-lymphocytes /De Simone C., Ci-ardi A., Grassi A. //Immunopharmacol. 1992.-Vol. 14, N 1-2 -p.- 41-43.
300. De Simone C. The role of probiotics in modulation of the immune system in man and in animals /De Simone C., Vesely R., Bianchi Salvadori B. //Int. J. Immunother. — 1993.- 9.- p. 23-28.
301. DelnesteY. Functional foods: Mechanisms of action on immunocompetent cells /DelnesteY., Donnet-Hughes A., Schiffrin E. J. //Nutr. Rev. -1998. -N 56. -Pp.-S93-98.
302. De Vos W.M. Gene organization and expression in mesophili acid bacteria /De Vos W.M., Simons G., David S. //J.Dairy Sci. -1989, N 72.-Pp. 3398-3405.
303. De Vos W.M. Gene expression systems for lactic acid bacteria /De Vos W.M. //Curr Opin. Microbiol. -1999.-N2.-Pp.-289.295.
304. De Vuyst L. Antimicrobial potential of lactic acid bacteria /De Vuyst L., Vandamme E.J. //In Bactericins of Lactic Acid Bacteria.- Blackie Academic and Professional, Glasgow, 1994. -Pp.- 91-142.
305. Diep D.B. An bacteriocin-like peptide induces bacteriocin synthesis in Lactobacillus plantarum CI 1 /Diep D.B., Havarstein L.S., Nes I.F. //Mol. Microbiol. -1995. -N 18(4). -Pp.- 631-639.
306. Diez K.A. Antibacterial activity of lactic acid bacteria /Diez K.A., Daintly
307. R.H., Shaw G. // Ann. Fac. Veter. Leon. 1979. -25. - P.255 -271.
308. Dodd H.V Bacteriocins of lactic acid bacteria//In Genetics and Biotechnology of Lactic Acid Bacteria (Edds M.J. Gasson and W.M. de Vos). Blackie Academic and Professional, Glasgow, 1994. -Pp.- 211-251.
309. Drago L. Inhibition of in vitro growth of enteropathogens by new Lactobacillus isolates of human intestinal origin /Drago L., Gismondo M.R., Lombardi A., de Haen C., Gozzini L. //FEMS Microbiol. Lett. -1997. -N 153(2). -Pp.-455-463, Aug 15.
310. Dubos R. Staphylococcus and infection immunity /Dubos R. //Amer. J. Dis. Child. -1963, -N 105. -Pp.-643-645.
311. Ducluzean R. Implantation and development of the gut flora in the newborn animal /Ducluzean R. // Ann. Rech. Vet. 1983. -v. 14. -p. 359-369.
312. Dunny G.M. Cell-cell communication in gram-positive bacteria /Dunny G.M., Leonard В .A. //Ann. Rev Microbiol. -1997, -N51. -Pp.-527-564.
313. Ewe K. Effect of lactose, lactulose and bysacodyl on gastrointestinal transit studied by metal detector /Ewe K., Ueberschaer В., Press A.G. //Aliment Phar-macolther 1995; 9(1): 69-73.
314. Eden C.S. Escherichia coli: natural colonizanion and extraintestinal invasion /Eden C.S., Lindstendt R., Lomberg H. // XIY Int. Simp, on Maicrobial Ecology and Disease. San Antonio. Texas. USA. - 1989. - p. 175-177.
315. Eijsink V.G. Induction of bacteriocin production in Lactobacillus sake by a secreted peptide /Eijsink V.G., Brurberg M.B., Middelhoven P.H., Nes I.F. //J. Bacteriol. -1996. -N 178(8). Pp.- 2232-7.
316. Elkins C.A. Identification of genes encoding conjugated bile salt hydrolase and transport In Lactobacillus johnsonii 100-100 /Elkins C.A., Savage D.C. //J. Bacteriol. -1998. -N 180. -Pp.-4344-4349.
317. Evaldson I. The normal Human anaerobic microflora /Evaldson I., Heim-daki A, Kagar L., Nord C.E. // Scand. J. Infect. Dis. Suppl. 1982. - v. 35. -p.9-15.
318. Fais S. Lymphocyte activation by Bacillus subtilis spores /Fais S. // Boll. 1st. Sieroter. Milan. 1987. - 66, N 5. - P. 391-394.
319. Fadden K. Alteration in fecal microflora enzymes related to diet, age, Lactobacillus supplements and dimethylhydrazine /Fadden K., Hill M.J., Owen R.W, Goldin B.R., Gorbach S.L. //Cancer. -1998, -N 40. -Pp.-2421-2426.
320. Fadden K. Effect of fibre on bile acid metabolism by human faecal bacteria in batch and continuous culture /Fadden K., Hill MJ., Owen R.W. //Eur.J.Cancer Prevention. -1997. -N 6(2). -Pp.-175-194.
321. Falk P.G. Creating and maintaining the gastrointestinal ecosystem: what we know and need to know from gnotobiology /Falk P.G., Hooper L.V., Midtvedt Т., Gordon J.F. //Microbiol Mol Biol Rev.- 1998, -N 62. -p.-l 157-1170.
322. Famularo G. Stimulation of immunity by probiotics /Famularo G., Mretti S., Marcelli S., De Simone C. //In Fuller (ed.), Probiotics 2/ Applications and practical aspects. Chapman and Hall/ New York. -1977. -p. 133-161.
323. Farkas-Himsley H. Sensitivity it bactericin of murine leukemia's with varying oncogenic potency /Farkas-Himsley H. //Microbios.Lett. -1980, -N 15. -Pp.-89-96.
324. Fernandes C.F. Therapeutic role of dietary lactobacilli and lactobacillic fermented dairy products /Fernandes C.F., Shahani K.M., Amer M.A. //FEMC Mi-crobiol.Rev. -1987.-vol.466.-pp 343-356.
325. Finegold S.M. Human Intestinal Microflora in Health and diseased. D. J. Nent-ges /Finegold S.M. Sutler V. L., Mathisen G. F. New York, -1983.P. 3-31.
326. Fiorini G. Bacillus subtilis selectively stimulates the synthesis of membrane bound and secreted IgA /Fiorini G., Cimminel lo C., Chianese R.// Chimi-oterapia. 1985. -4.-p. 3 10-315.
327. Fontana M. An in vitro microbial model for studying secondary caries formation /Fontana M., Dunipace A.J., Gregory R.L., Noblitt T.W. //Caries Research. -1996. -N 30(2). -Pp.- 112-118.
328. Fox M. The philogeny of procaryotes et caseolytique /Fox M. // Lact.1988.-68.-p. 457-463.
329. Freter R. Factors affecting the colonization of the gut by Lactobacilli and other bacteria /Freter R., De Macias M.E. // In: Old Herborn University Seminar Monograph. № 8. Probiotics of use in Opportunistic Infections, 1995.- p. 256 -420.
330. Fuller R. Bacteria associated with the gastric epithelium of neonatal pigs /Fuller R., Barrow P.A., Brooker B.E. // Appl. Environ. Microbiol., 1978, vol. 35, N 3. -p. -582-591.
331. Fuller R. History and development of probiotics /Fuller R. // Probiotics. The scientific basis. London: Chapman a. Hall. - 1992. - p. 29-53.
332. Fuller R. Probiotics in man and animals /Fuller R. // J. Appl. Bacter.1989.-66 №5.-p. 365 -378.
333. Fuller R. Probiotics in human medicine /Fuller R. // Gut., 1991. 32 p.
334. Fuller R. Probiotics: the scientific basis /Fuller R. London: Chapman S1. Hall, 1992, p. 216-226.
335. Fuller R. Probiotics 2. Application and practical aspects. Introduction: Development of commercial preparations. Factors affecting the response /Fuller R.-1997.-153 p.
336. Fuller R. Probiotics and prebiotics: microtlora management for improved gut health /Fuller R„ Gibson G.R. //Clin Microbiol Infect 1998: 4: 477-480.
337. Fox M. The philogeny of procaryotes /Fox M. //Science.-1980.-N 4455.-P.457-463.
338. Foran C. Bacillus secreted IgA /Foran C. //Chimioterapia.-1989.-6.-P. 218-231.
339. Gauhe A.P. Bifidus factor. Preparations obtained from human milk. /Gauhe A.P., Gyorgy PA, Hoover J.R.E. //Arch Biochem 1954; 48.- P. 214-24.
340. Ganz T. Defensives and other endogenous peptide antibiotics of vertebrates /Ganz Т., Martin, E., Lehrer R.I. IIA\. Leu k. Biol. -1995. P.128-136.
341. Garlson H. Deference mechanisms of the avian gastrointestinal tract /Garl-son H. //Poltry Sci. -1982. -V.61, № 7. . p. 1268-1272.
342. Garvie E.L. The effect of yogurt on some components of the gut microflora and the metabolism of lactose in the raV /Garvie E.L, Coif C.B., Fuller R. //J.Appl.Microbiol., 1984, N 56. P.-237-245.
343. Genetics and Biotechnology of Lactic Acid Bacteria /(Ed. M.J. Gasson and W.M. de Vos) // Blackie Academic and Professional, Glasgow. -1996. -Pp.211.251.
344. Genovese S. Lactulose improves blood glucose response to an oral glucose test in non insulin dependent diabetic patients /Genovese S., Riccardi G., Riv-ellese A.A. DNM 1993; 5 (4), P. 295-297.
345. Gibson G.R. Regulatory effects of bifidobacteria on the growth of other colonic bacteria /Gibson G.R., Wang X. //J.Appl.Bacteriol. -1994. -77:412-420.
346. Gibson G.R. Dietary modulation of the human colonic microbiota: Introducing the concept of prebiotics /Gibson G.R., Robefroid M.B. //J. Nutr. 1995. -125, N6.-p. 1401-1412.
347. Gibson G.R. Selective stimulation of bifidobacteria in the human colon by oligofructose and inulin. /Gibson G.R., BeattyE.B., Wang X., Cummings J.H. //Gastroenterology 1995; 108: 975-82.
348. Gibson G.R. Oligosaccharides and prebiotics /Gibson G.R. // Petfood Fo-rum'96, Chicago, USA.- Chicago, 1996. p. 15-18.
349. Gibson G.R. Dietary modulation of the human gut microflora using the prebiotics oligofwtose and inulin /Gibson G.R. //J Nutr 1999; 129 (7) SuppI: 1438S-41S.
350. Gibson G.R. Aspects of in vitro and In vivo research approaches directed toward identifying probiotics and prebiotics for human use /Gibson G.R. Fuller R. //J. Nutr 2000: 130 (2) Suppl: 391S-395S.
351. Gilliland S. E. Antagonistic action of Lactobacillus acidophilus towards intestinal and food-bome pathogens in associative culture /Gilliland S. E. //FEMS Microbiol. Rev, 1990, V. 87.
352. Gilliland S.E. Influence of consuming milks containing cells of Lactobacilli acidophilus on lasctose malabsorption in humans /Gilliland S.E., Kim H.S. //Abstr. Ann. Meet. Am.Soc. Microbiol. -1981. -N 27. P.-200.
353. Gilliland S.E. Use of the Minitek system for characterizing lactobacilli /Gilliland S.E., Speck M.L. //Appl. Environ.Microbiol. 1985. -N 33. - P.-1289.
354. Gissen A.S. Off probiotics, prebiotics and synbiotics /Gissen A.S.// ISS
355. VRP'S Inc. Vit Res. Prod. Newsletters. USA. - 1995. - P. 111-117.
356. Gobel T. W. F. Identification of T cell receptor-chain genes in the chicken /Gobel T. W. F., Chen С. H., Lahti J., Kubota T. //Proc.Nat.Acad. Sci. USA, -1994. -N91.-Pp. 1094-1098.
357. Goldin B.R. Lactobacillus GG: a new strain with properties favorable for survival, adhesion and antimicrobial activity in the gastrointestinal tract /Goldin B.R., Gorbach S.L. // FEMS Microbiol. Rev.-1987.-N 46(3).-p. 72.
358. Goldin B.R. Probiotics for humans /Goldin B.R., Gorbach S.L. //In: Pro-biotics. The Scientific Basis (Fuller, R., ed.), Chapman & Hall, London. -1992. -Ch. 13, p. 366.
359. Goldin B.R. Alteration in fecal microflora enzymes related to diet, age, Lactobacillus supplements and dimethylhydrazine /Goldin B.R., Gorbach S.L. //Cancer. -1998. N 40. -Pp.-2421-2426.
360. Gorbach S.L. The discovery of Lactobacillus GG /Gorbach S.L. //Nutrition Today, -1996. -Vol.31 (6): 28-48.
361. Gorbach S.L. Successful treatment of relapsing Clostridium difficile colitis with Lactobacillus GG /Gorbach S.L., Chang T.W., Goldin B.R.//Lancet.-1987.-vol.2.- P. 55-56.
362. Gordon J.I. Interactions between epithelial cells and bacteria /Gordon J.I., Hooper L.V., Bry 1., Midtvedt Т., Falk P.G. //Science.-1997.-N 276.- P.-965.
363. Green D.H. Characterization of two Bacillus probiotics /Green D.H.// J. Appl. and Environ.Microbiol. 1999. - Sept. - P. 4288-4291.
364. Guida V. Importansia do Bacillus esporulados aerobios em gastroen-terologia e nutricao /Guida V., Guida R. // Ren. Brasil. Med. 1978. - 35, N 12. -P. 702-707.
365. Guerina N.G., Neutra M.R. Mechanism of Bacterial Adherence /Guerina N.G., Neutra M.R. // Microecol. Therapy, 1984. - vol. 14. - P. 466-467.
366. Gupta M. Lytic effect of Bacillus subtilis elastase on gram-positive and negative bacteria /Gupta M., Kaur M., Gupta K.G. // Indian .J. Exp. Biol.-1992.-30, N5.- P. 380-383.
367. Gyorgy P.A. Hitherto unrecognized biochemical differences between human milk and cow's milk/Gyorgy P.A. //Pediatrics 1953: 11: P. 98-108.
368. Gonzales R. Stimolazione seletiva dell'espressione di antigeni HLA-DR su linfociti T in vivo in seguito a somministrazione di "vaccini" orali /Gonzales R., Pirali F., Ravizzola G. et al. // Boll. Microbiol. Indag. Lab. 1989. - 9. - P. 5-9.
369. Greaves R. Preservation of living cells by freezing and by drying /Greaves R. // Federation Proceedings.-1963.-vol.22.- N 1.- Part 1.- P. 90.
370. Goldberg I. Stability of lactic acid bacteria to freezing as related to their fatty acid compositions /Goldberg I., Eschar L. //Appl. Environ. Microbiol.-1977.-vol. 33.-N 3.-P. 489-496.
371. Goldmann D.A. Bacterial colonization and infection in the neonate /Goldmann D.A.//Am J Med 1981; 70:417-22.
372. Hall M.A. Factors influencing the presence of faecal lactobacilli in early infancy /Hall M.A., Cole C.B., Smith S.L., Fuller R., Rolles C.J. //Arch. Dis. Child 1990:65:185-8.
373. Hansson H.B. Controlled comparison ofnalidixc acid or lactulose with placebo in shigellosis /Hansson H.B., Barkenius G., Cronberg S., Juhlin I. //Scand J Infect Dis 1981:13:191-3.
374. Haenal H. Aspecte der microokologiachen beziehungen des microorgan ismus /Haenal H. //Zbl. Bact. Abt. I. Ref. I960. - 176 (1). -p. 305.
375. Haenal H. Intestinal flora in health and disease /Haenal H. // Progr. Food and Nutr. Sci. 1975. - № 1. - p. 21 - 64.
376. Heimburger D.C. Diarrhoea with enteral feeding: Prospective reappraisal of putative causes /Heimburger D.C., Sockwell D.G., Geels W.J. //Nutrition.1994,- N 10.-P. 392-396.
377. Hefco G. The influence of various carbon source on. the fermentation with a-amylase producing strains of B. subtilis /Hefco G., Rugina V., Olteanu. Z. // An. sti. Univ. Iasi. Sci. 1996. - 42. - P.141-146.
378. Huis H.J. Selection criteria for probiotic microorganisms /Huis H.J., Shortt C. //Gut flora and health — past, present and future. — London; New York: Roval Soc. Med. Press Limited. 1996. - P. 27-36.
379. Hoffmann K. Untersuchungen uber die Wirkungsweise der Lactulose. /Hoffmann K., Mossel D.A.A., Korus W., Camer J. //Klin Woshenschr. 1964:42: 126-130.
380. Hatch R. C. Effect of adding Bacillus acidophilus to milk fed baby calves /Hatch R. C., Thomas R.O., Thayne W. V. // J.Dairy Sci.-1973.-56, N 4. P.682-687.
381. Heckly R.J. Protection kinetics of additives on survival of lyophilized bacteria /Heckly R.J., Dimmick P.L. //Cryoliology.-1978.- vol. 15.-N6.- P. 654-658.
382. Impey C.S. Competitive exclusion of Salmonellas from the chicken caecum using a defined mixture of bacterial isolates from the caecal microflora of the adult bird /Impey C.S., Mead G.C., George S.M. //J. Hygiene (Camb.). 1982. - 89, N 2. - P. 479-490.
383. Iwama T. Resistance of lactic acid bacteria products (Streptococcus fae-calis) Against Artificial Gastric Acid and a Number of Anti-bacteria /Iwama T. // Pharmacy. 1970. - Vol. 21(5). - P. 69.
384. Jenny K. Biosurfactants from Bacillus licheniformis: structural analysis and characterization /Jenny K., Kappeli O., Fiechter A. //Appl. Microbiol. Bio-technol.-1991.-36.-P. 5-13.
385. Jorgensen J. H. Probiotika till svin. En litterfturoversing og en afprovning at 2 probiotikas effekt under forskellige produktionsformer /Jorgensen J. H. // Dansk Vet. Tidskr.-1988. 71.- P.l211-1221.
386. Jenny B.F. Perfomance and fecal flora of calves fed a B. subtilis cjncentrate /Jenny B.F., Vandijk H.J., Collins J.A. //J.Dairy Sci. -1991.- N 6.- P. 19681973.
387. Jiraphocakul S. Influence of dried B.subtilis cultura and antibiotics on performanct and intestinal microflora in turkeys /Jiraphocakul S. // Poultry Science. 1990. - 69, N 11. - P. 1966-1973.
388. Jarvis W.R. The epidemiology of colonization, Infection Control and Nosocomial Colonization/Jarvis W.R. 1996; 17:47-52.
389. Kalmokoff M.L. Environ. /Kalmokoff M.L., Teather R.M. //Microbiol. 1997. V. 63. N2.
390. Kiyoe S. Preparation for lowering blood cholesterol /Kiyoe S., Suzuki H., Hirota I. // DSA. -1988. v. 50. - № 9. - p. 278.
391. Kmet V. Adherencia bacterii na epitelialne bunky bachorovej steny /Kmet V., Boda K., Kravjansky I. // Veter Med. (Praha). 1984. - 29. - № 8. - p. 473-477.
392. Kumprecht I. II Zivoc. Vyroba /Kumprecht I., Zobac P., Robosoya E. -1994.-v. 39.-N4.-P. 331-342.
393. Kailasapathy K.A. Survival and therapeutic potential of probiotic organisms with reference to Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium spp. Immunol /Kailasapathy K.A., Chin J. //Cell Biol 2000: Immunol Cell Biol: 78: 80-84.
394. Kleesen B. Effects of inulin and lactose on fecal microflora, microbial activity, and bowel habit in elderly constipated persons /Kleesen В., Sykura В., Zunft H.J., Blaut M. //Am J Clin Nutr 1997; 65: 1397-402.
395. Killen M. Genetic modification of intestinol lactobacilli and bifidobacteria /Killen M, Klatnhamm M. //J. Mol. Biol.- 2000.- № 2.-P. 41-50.
396. Kim W. Purification and characterization of a fibrinolytic enzyme produced from Bacillus sp. strain CK 11-4 screened from Chungkook-Jang /Kim W., Choi Keehyun, Kim Y. //Appl. and Environ. Microbiol. 1996. - N 7. - P. 24822488.
397. Lawrence C. Production of interleukin-12 by murine macrophages in response to bacterial peptidoglycan /Lawrence C., Nauciel C. // Infect. Immun.1998.- 66, N 10. P. 447-449.
398. Landsudvalget for svin. Bioplus 2B till smagrise // Den rullende Af-profning af staid- og produktionssystemer.- Copenhagen, Meddelse, 1989.-P.162.
399. Levitt J. The role of membrane proteins in freezing injury /Levitt J., Dean J. // In: The frozen cell. London. 1970.-P. 149-179.
400. Lilley D.M. Probiotics: growth promoting factors produced by microorganisms /Lilley D.M., Stillwell R.J. // Science. 1965. - 147. - p. 747-748.
401. Lion A.B. Probiotics /Lion А. В., Gumming R. В., Kent R. D. //Austral. Vet.- 1977.- 53.
402. Lucchini F. Specific delection of a probiotic Lactobacillus strain in faecal samples by using multiplex PSR /Lucchini F., Kmet V., Cerena C., Coppi L.// FEMS Microbiol. Lett. 1998. - N 158(2). - pp. 273-278.
403. Manachini P.L. Thermostable alkaline protease produced by Bacillus thermoruber a new species of Bacillus /Manachini P.L., Fortina M.G., Parini C. // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 1988. - 28, 4/5. - P. 409-413.
404. Mc Farland L.V. Saccharomyces boulardii. A review of an innovative bio-therapeutic agent /Mc Farland L.V., Berhasconi P. // Microbial ecology in health and disease. -1993.- N 6.- p. 157-171.
405. Microbial metabolism in the digestive tract//(ed. M.J.Hill) CRC PRESS, Boca Raton, Fl., 1994.- 346 p.
406. Misioka T. Ecology of the bifidobacteria /Misioka Т., Kanenchi C. // Amer. J. Clin Nutritioa. -1977. 30 (11). - p. 1799 - 1810.
407. Mitsuoka I. Comparative studies on lactobacilli from faeces of man, sivine and chickens /Mitsuoka I. //Zbl. Bacteriol., parasitenk. infections krankh. Ung. Hyg. -1969. -210, № 1. p. 52 - 64.
408. Mitsuoka T. Lactic acid bacteria and human health /Mitsuoka T. //4th Intern. Symp.- 1985.-Seul.
409. Morishita Y. The effects of various dietary substances on the intestinal microflora /Morishita Y. // J. Germfree Life Gnotobiol. 1991. - Vol. 21. - N 1.p. 344-346.
410. Mulder R.W. Probiotics as a tool against Salmonella contamination /Mulder R.W. // World Poultry. 1991. - 7.- N 3. - p. 36-37.
411. MacGillivray P.C. Use of lactulose to create a preponderance of lactoba-cilli in the intestine of bottle-fed infants /MacGillivray P.C., Finlay H.V.L, Binns T.B. //Scott Med J.-1959: 4:182-9.
412. Me Farland L.I. Biofherapeutic agents: past, present and future /Me Farland L.I., Elmer G.W. //Microecology Ther 1995; 23: p. 46-73.
413. Modler H.W. Bifidobacteria and bifidogenic factors /Modler H.W., McKellar R.C., Yaguchi M. //Can Inst Food Sci Technol 1990; 23: 29-41.
414. Mc Farland L.V. Biotherapeutic agents: boon or bane? /Mc Farland L.V. // Microbil. Ecol. Health and Disease.- 1994.-7, N1. P.585-586.
415. Mazza P. The use of Bacillus subtilis as an Antidiarrhoeal microorganism Mazza P. // Boll. Chem. Farm. -1994.-133, N.l -P.3-18.
416. Maruta Kiyoshi. Effect of Bacillus subtilis C-3102 intake in fecal flora of sows and on diarrhea and mortality rate of their piglets /Maruta Kiyoshi, Miyazaki Hiroshi, Tadano Yukie et al. // Anim. Sci. and Technol.-1996.-67, N5. P.403-409.
417. Maruta Kiyoshi. Probiotics or antibiotics /Maruta Kiyoshi. //World Poul-try.-1999,N3.-P. 112-127.
418. Malih K.A. A new freze-drying methods for preservation of nitrogen-fixing and other fragile /Malih K.A. // J. Microbiol. Methods. 1988. - Vol. 8. - № 5.-P. 259-271.
419. Mc Tigue M.A. The alkaline amylase of the alkalophilic Bacillus sp. IMD 370 /Mc Tigue M.A., Kelly C.T., Doyle E.M., Fogarty W. //Enzyme and Microb. Technol. 1995.- 17,N6. -P. 570-573.
420. Mendonca A.L. Bacillus spp. produtores de proteases: isolamento, carac-• terizacao e melhoramento de B. cereus /Mendonca A.L., Mariano R.L.R., Araujo
421. J.M.//Arg. biol. e tecnol. 1996. - 39, N 2. - P. 359-372.
422. Muscettola M. Plasma interferon-like activity in rabbits after oral administration of Bacillus subtilis spores /Muscettola M., Grasso G., Migliaccio P., Gallo V.C. //J. Chemother.- 1991.-3, Suppl. 3. P. 130-132.
423. Muscettola M. Effect of Bacillus subtilis spores on interferon production /Muscettola M., Grasso G., Blach-Olszewska Z. // Pharmacological Research.-1992. 26, Suppl. 2. - P. 176-177.
424. Nielsen O.H. Microbiological evaluation of jejunal aspirates and faecal samples after oral administration of bifidobacteria and lactic acid bacteria /Nielsen O.H. //J. Appl. Bacterid.- 1994. 76. - p. 469-474.
425. Noble W.C. Skin microbiology: coming of age /Noble W.C.// J.Med. Mi* crobiol.- 1989. 17, №1.- p. 1-12.
426. Nosaki-Renard J. Induction d'interferon par Bacillus subtilis /Nosaki-Renard J. Ann Microbiol., 1978, 129 a, № 4, p. 525-542.
427. Nurmi E.V. Process For the production of a bacterial preparation for the prophylaxis of intestinal disturbances in poultry /Nurmi E.V., Schneits J.E., Makela P.H. // U.S. Patent, august 25. - 1987, N 4.689.226, p. 287-346.
428. Ogawa M. Inhibition of in vitro growth of Shiga toxin-producing E.coli О 157:H7 by probiotic Lactobacillus strains due to production of lactic acid /Ogawa M., Shimizu K., Nomoto K. //Int J.Food Microbiol.- 2001/- № 2/- P. 135-140.
429. Ozawa K. Effect of administration of Bacillus toyoi on intestinal flora /Ozawa K., Yokota H., Kimura M., Mitsuoka T. //Japan. J. Vet. Sci.-1981/-43, N 5.-P. 771-775.
430. Ogle R.B. Alternatives to low dose antibiotics in piglet feeds in Swedenth • •
431. Ogle R.B., Inborr J. //38 Meeting of the European Association for Animal Production. Commission on Pig Production. Portugal. - 1987. -Session 4. - P. 1-6.
432. Oakey H.J. Enzyme production by lactobacilli and the potential link withinfective endocarditis /Оакеу H.J., Harty D.W., Knox K.W. // J.Appl. Bacteriol. 1995.-Vol. 78 (N2).-p. 142-148.
433. Parker R. Anim. Nutr. Health /Parker R. 1974. - 29. - p. 4-8.
434. Pelug W. Vitamin Вб biosynthese in Bacillus subtilis /Pelug W., Ligens F. //-Hoppe - Seyler's Z. Physiol. Chem. - 1978. - 359, № 5. - p. 559-570.
435. Pennington J.E. Bacillus species infections in patients with hematologic neonplasia /Pennington J.E., Gibbons N.D., Strobeck J.E., Simpson G.L.- JAMA. -1976.-238, №14.-p. 132.
436. Pollmann D.S. Influence of Lactobacillus acidophilus inoculum on gnoto-biotic and convetional pigs /Pollmann D.S., Danielson D.M., Uren W.S.// J. Anim. Sci. 1980. - v. 51. - .No 3. - p. 629 - 637.
437. Prokesova L. Effect of Bacillus firmus and other sporulating aerobic microorganisms on in vitro stimulation of human lymphocytis /Prokesova L., N0vakova M., Mara M. // Folia Microbiol. 1994. - 39. - p. 501 -504.
438. Pollman D. S. Effects of microbial feed additives on performance of starter and growing-finishing pigs /Pollman D. S., Danielson D.M. //J.Anim.Sci.-1980.-51, N3.-P.577-581.
439. Pollman D.S. Probiotics in pig diets /Pollman D.S. //Recent Advances in Animal Nutrition.- Butterworth, London, 1986.- P. 193-205.
440. Peterson W.L. The human gastric bactericidal barrier: Mechanisms of action, relative antibacterial activity, and dietary influences /Peterson W.L., Mack-rowiak Ph.A., Barnett C.C. // J. Infec. Diseases. -1989. -159.- № 5. -p.978—985.
441. Roberfroid M.B. Prebiotics and probiotics: are they functional foods? /Roberfroid M.B. //Am J Clin Nutr 2000: 71(6) Suppl: 1682-87.
442. Rowland I.R. The effects of transgalactosylated oligosaccharides on gut flora metabolism in rats associated with a human faecal microflora /Rowland I.R., Tanaka R. //AppI Bac-teriol.- 1993: 74: 667-74.
443. Roth F.X. Nutritive Wirksamkeit von Toyocerin.l. Mitteilung: Ferke-laufzucht /Roth F. X., Kirchgessner M. // Landwirtsch.Forsch.-1988.-41, N.l. P.58.62.
444. Priest F.G. DNA homology in the genus Bacillus. In: Aerobic Endospore -form /Priest F.G. //Bact.: CI. and Identif. Symp., Cambridqe, Apr., 1979, London, 1981, p. 33-57.
445. Rasik J.L. Bifidobacteria and their Role /Rasik J.L., Kurmann I.F. // Birkhauser verlag Basel Boston Stuttgart. -1983. 278 p.
446. Reid G. The scientific basis for probiotic strains of Lactobacillus /Reid G. //J. Appl. and Environ.Microbiol. 1999. - Sept. - p. 3763-3766.
447. Roffe C. Biotherapy for antibiotic-associated and other diarrhoeas /Roffe C.//J. Infect.-1996.-N32.-P. 1-10.
448. Sanvedra J.M. Feeding of Bifidobacterium bifidum and Streptococcus thermophilus to infants in hospital for prevention of diarrhoea and shedding of rotavirus /Sanvedra J.M. // Lancet. — 1994. 344. - P. 1046-1049.
449. Schilman D.A. Antagonism by gram-negativt bacteria to growth of Yersinia enterocolitica in mixed cultures /Schilman D.A., Olson S.A. // Appl. Environ. Microbiol. 1984. -48, № 3. - p. 539 - 549.
450. Schmidt D.D. Glucosidase Inhibiforen ans Bacillen /Schmidt D.D., Frommer W., Muller L., Truscheif E. // Naturwi's sen senschaffen. - 1979. - 66, № 11.-p. 584-585.
451. Simon L.L. Intestional microflora /Simon L.L., Lorbach S.L. // Med. Clin. North. Amer. -1982. v. 66. - p. 557 - 574.
452. Slabospitskaja A.T. Biosinthesis of enzymes by bacilli respective for production ofbiopreparations /Slabospitskaja A.T., Reznik S.R., Krymovskaja S.S. //1UMS. Congress: Bacterio-logy, Mycology. Osaka, 1990. - p. 92.
453. Soroculova I.B. Translocation of oxogenous microflora through mucous membraneus of blooded /Soroculova I.B. //Jums Congress: Bacterioligy, Mycol-ogy.-Osaca.-1990.-p. 150.
454. Su Li. Influence of a new living preparation Bacillus on mikrofloru of intestine of animals and function of immunity /Su Li, Zhang Zhihong, Xiao Xianzhi,
455. Wanq Xiaomin // J. Wuhan.Univ. Natur. Sci. Ed. 1996. -42.-N 4. - p. 516-518.
456. Surawicz C.M. Prevention of antibiotic associated diarrhoea by Sac-charomyces boulardii: a prospective study /Surawicz C.M., Elmer G.W., Speelman P. // Gactroenterology.-1989.- 96. p. 981-988.
457. Shan Varsha. Bacterial degradation of antinutritional factors: isolation of trypsin inhibitor and hemagglutinin degrading bacteria from rat small intestine /Shan Varsha, Perekh L.J. // Indian. J. Microbiol. 1984. - 24, N 3-4. - P. 149-151.
458. Senna V. The intestinal microtlora of infants: composition of fecal flora in breast-led and bottle-fed infants /Senna V., Sawada K., Mitsuoka T. //Microbiol. Immunol., 1984, P. 975-86.
459. Spreafico F. L'effetto immunostimolatore dell spore di B. subtilis: aspetti sperimentali /Spreafico F., Polentarutti N, Vecchi A. //Chemioter. Antimicrob.-1980.-4.- P. 259- 261.
460. Stephen A.M. Mechanism of action of dietary fiber in the human colon. /Stephen A.M., Cummins J.H. //Nature 1980; 284: 283-4.
461. Servin-Massien M. Effects of freeze-drying and sporulation of microfial variation /Servin-Massien M. // Curr. Top. Microbiol. Immunol.- 1971.- V.54.- P. 119-150.
462. Tan T.C. Activity of the enzyme system in thermally killed Bacillus cells /Tan T.C., Qian Z.R. // Enzyme and Microb. Technol. -996.-19, N 2. P. 150-156. .
463. Tanaka R. Effect of administration TOS and B. breve 4006 on the human fecal flora /Tanaka R., Takayama H., Morotomi M. //Bifidobacteria microflora 1983; 2: p.17-24.
464. Tanaka R. Probiotics: prospects of use in opportunistic infections /Tanaka R.- Microbiol. Biochem. 1995.- № 7.- P. 123-127.
465. Thihole F. Effects of probiotiks /Thihole F. // U.Zdravstv. Vesth.-1981.-Vol. 51.-P.3-5.
466. Thihole F. Fizioloski pomen bacteriemije Ljejundno microflora /Thihole F. //U. Zdravstv. Vesth. -1982. -51 № 1. -p.3-5.
467. Tournut J. Applications of probiotics to animal husbandry /Tournut J. // * Rev. Sci.Tech. Off. Int. Epiz.-1989.-8, N 3.-551-556.
468. Tannock G.M. Mini review: a new tool for investigating the microbiological ecology of the gastrointestinal tract /Tannock G.M. //Microbial. Ecol. 1988. -15, N3.-p. 239-256.
469. Tannock G.M. Genetic manipulation of gut microorganisms /Tannock G.M. //Probiotics.The scientific basis.-London: Chapman Hall, 1992,- p. 181-207.
470. Thach P.N. Le Bacillus subtilis en therapeutique et dans la prophilaxie /Thach P.N., Vu T.C., Nguen Т.Н. // Rev. Immunol. 1968. - 72, N 1/2. - p. 53-58.
471. Tcherdyntsew. N.V. It Sensitization Newsletter /Tcherdyntsew. N.V., Ut-vjakov, N.V., Belyavskaya V.A. -1998, October. V. 5.- N3. -P.3-7.
472. Vanbelle M. New probiotiki and application of them in veterinary science and medicine /Vanbelle M. //Ann. Microbiol. 2000. - 140a, N 8. - P. 251-253.к
473. Van Loo. Functional food properties of non-digestible oligosaccharides: a consensus report from the HVDO project (DGXII AIRII-CT94-1095) /Van Loo, J.A Cummings, J.A Delzenne, N.A Englyst // BrJNutr.- 1999: 81(2): 121-32.
474. Yoshita M. Development of the normal intestinal flora and its clinical significance in Infants and children /Yoshita M., Fujita K., Sakata P., Muronon K., IsekiK. //Bifidobacteria Microtlora. 1991; 10: 11-27.
475. Wei H. Bacillus cereus "Cereobiogen" as a growth promoter of Bifidobacterium in infantile diarrhoea therapy /Wei H., Kan E. //Recent advances in germfreeresearch. -Tokyo: Tokai Univ. press. 1981. - p. 475-480.
476. Wood T.N. Probiotics shown to change bacterial community structure in the avian gactrointestinal tract /Wood T.N. //J.Appl. and Environ. Microbiol.-1999.-Nov.-p. 134-138.
-
Грязнева, Татьяна Николаевна
-
доктора биологических наук
-
Москва, 2005
-
ВАК 03.00.23
- Жидкая форма пробиотика Биод-5 и его эффективность при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят
- Применение пробиотика субалин на пушных зверях семейства Canidae
- Технология производства пробиотика КД-5 и его использование в свиноводстве
- Совершенствование технологии приготовления пробиотика на основе лактобактерий, оценка его свойств и эффективности применения в птицеводстве
- Приготовление питательных сред на основе гидролизата соевой муки для глубинного культивирования бактерий рода Bacillus
