Жидкая форма пробиотика Биод-5 и его эффективность при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят

Водолажская, Светлана Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Жидкая форма пробиотика Биод-5 и его эффективность при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Жидкая форма пробиотика Биод-5 и его эффективность при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят"

На правах рукописи

Водолажская Светлана Александровна

Жидкая форма пробиотика Биод-5 и его эффективность при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят

03.00.23 - биотехнология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2005

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (МГАВМиБ)

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Тихонов Игорь Владимирович.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Кузнецова Светлана Владимировна;

доктор биологических наук Мирзаев Микаиль Нурбагандович.

Ведущая организация - Федеральное государственное учреждение «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ ВГНКИ).

Защита состоится декабря 2005 года в часов на заседании диссертационного совета Д006.069.01 в государственном научном учреждении «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» (141142, Московская обл., Щелковский район, пос. Биокомбинат, ВНИТИБП). Тел. (095) 526-43-74.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке ВНИТИБП.

Автореферат разослан « » ноября 2005 г.

Ученый секретарь

диссертационного советау^^/^/^ Фролов Ю.Д.

¿406 - V /7240

' 3

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одна из основных задач ветеринарйой практики - снижение потерь от желудочно-кишечных заболеваний, неразрывно связана с изысканием способов нормализации кишечного биоценоза, разработкой и производством препаратов нового поколения, способных занять свое место в системе мероприятий по обеспечению биологической защиты животных (Воронин Е.С., 1989, Панин А.Н., 2000 и др.).

Этим требованиям в полной мере отвечают пробиотики, в состав которых входят бактерии из числа представителей нормального кишечного биоценоза - лактобациллы, бифидобактерии, стрептококки и др.

В последние годы установлено, что в микробиоценозе желудочно-кишечного тракт (ЖКТ) животных и человека не менее важны '"актерии рода Bacillus, которые характеризуются высокой ферментативной активностью и синтезируют различные бактериоцины, что обуславливает их антагонистическое действие в отношении широкого спектра патогенных микроорганизмов. Кроме того, эти бактерии технологичны в производстве, стабильны при хранении, экологически безопасны (Смирнов В.В., 2002; Сорокулова И.Б., 2003 и др.).

Ветеринарной практикой востребованы препараты в различных лекарственных формах, но пробиотики в жидкой форме особенно удобны в применении, т.к. не нуждаются в предварительной подготовке перед дачей животным, равномерно смешиваются с любым кормом и водой, себестоимость таких препаратов сравнительно невысока - при их производстве не требуется дорогостоящих операций по высушиванию, измельчению, прессованию и т.д. (Малик Н.И., 2002, Грязнева Т.Н., 2003 и др.).

Однако для ветеринарии пробиотики из эндогенной микрофлоры в жидком виде практически не производятся, в связи с коротким сроком их хранения.

Учитывая, что бактерии рода Bacillus, относящиеся к споровой экзогенной микрофлоре, устойчивы к факторам внешней среды, в том числе и к различным химическим веществам, именно дробиотики на основе бацилл можно рассматривать как перспективные в плане создания жидких лекарственных форм.

Поэтому исследования по совершенствованию технологии производства пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме, направленны в первую очередь, на снижение себестоимости препарата и оценка его эффективности при желудочно-кишечных болезнях (ЖКБ) новорожденных телят, являются актуальными и важным«—дая- ветеринарной науки и практики. рос национальна*

БИБЛИОТЕКА I

¡ntatoi

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований является совершенствование технологии производства пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме и оценка его лечебно-профилактической эффективности при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Усовершенствовать технологические стадии производства пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме, определив оптимальный компонентный состав производственной питательной среды для культивирования B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 глубинным методом в биореакторах.

2. Подобрать стабилизирующие вещества-консерванты и изучить их влияние на сохраняемость и выживаемость бацилл-компонентов препарата.

3. Приготовить опытные образцы жидкой формы пробиотика Биод-5.

4. Оценить биологические свойства препарата Биод-5, полученного по усовершенствованной технологии.

5. Изучить лечебно-профилактическую эффективность жидкой формы Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят.

6. Рассчитать экономическую эффективность применения жидкой формы пробиотика Биод-5.

Научная новизна. Усовершенствованна технология производства . жидкой формы пробиотика Биод-5, позволяющая сохранять биологическую активность препарата не менее 18 месяцев.

Теоретически обоснован и разработан компонентный состав питательной среды № 5 для глубинного культивирования штаммов B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 для производства пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме, позволяющий получить бактериальную суспензию, содержащую не менее 80 % зрелых спор.

Показано, что жидкая форма Биод-5 обладает уникальными биологическими свойствами, отличающими его от других пробиотиков: подавление размножения сальмонелл, кандид и стафилококков; стимуляция роста лактобацилл и бифидобактерий in vitro и в желудочно-кишечйом тракте новорожденных телят.

Использованные методы контроля качества пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме позволяют дать объективную оценку биологической активности бактерий-компонентов препарата.

Показана высокая (90%) лечебно-профилактическая эффективность жидкой формы пробиотика Биод-5 при ЖКБ новорожденных телят.

Практическая значимость. Результаты исследований включены в ТУ 9337-007-59088697-004 на пробиотик Биод-5, промышленный регламент производства препарата, проект наставления по применению про-биотика Биод-5 в ветеринарии.

На базе ФГУП «Покровский завод биопрепаратов» приготовлены 3 серии жидкой формы Биод-5, которые прошли производственные испытания.

На базе ООО «НГ1К ЦМВЭИ» (г. Москва) организовано серийное производство пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме.

В опытах на новорожденных телятах изучен механизм действия жидкой формы пробиотика Биод-5, дана оценка его влияния на микробиоценоз кишечника, обменные и иммунные процессы организма животных, показана высокая лечебно-профилактическая эффективность препарата, что подтверждено актами, утвержденными руководителями хозяйств Московской и Нижегородской областей.

Результаты исследований по созданию технологии производства пробиотика Биод-5 в жидкой" лекарственной форме используются в учебном процессе на кафедре биотехнологии МГАВМиБ имени К.И. Скрябина.

Апробация результатов диссертации. Основные результаты исследований изложены в 2 научных отчетах и доложены на международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 85-летию МГАВМиБ им. К.И.Скрябина (Москва, 2004); на научно-практической конференции ветеринарных врачей-эпизоотологов Москвы и Московской области (Москва, 2004).

На защиту выносятся следующие положения и результаты:

1. Экспериментальное обоснование состава жидкой формы пробиотика Биод-5.

2. Усовершенствованная технология производства пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме.

3. Результаты изучения лечебно-профилактической эффективности жидкой формы пробиотика Биод-5 при ЖКБ новорожденных телят.

Публикации. По результатам диссертации опубликовано 3 научные работы, в том числе 2 статьи в научных журналах; 1 - тезисы в сборнике статей международной учебно-методической и научно-практической конференции.

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 167 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, данные о практическом использовании научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список исполь-

зованной литературы (312 источников, из которых 215 отечественных и 97 иностранных). Работа содержит 29 таблиц, 13 рисунков и приложения.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы

Работа выполнена в период с 2001 по 2004 год на кафедре биотехнологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина и ФГУП «Покровский завод биопрепаратов». Эксперименты на животных проводили в ЗАО «Медвежьи озера» Щелковского района Московской области и СПХ «Горьковский» Канавинского района Нижегородской области.

Для приготовления пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме использовали штаммы B.subtilis ТЛИ 13-07.06.21-ДЕП/ВГНКИ и B.licheniformis ТПИ 11 -07.06.22-ДЕП/ВГНКИ.

Для определения антагонистической активности бактерий-компонентов Биод-5 были использованы штаммы: 2-Е.coli, 3-Lactobacillus, 2-Bifidobacterium, 3-Salmonella, 2-Staphylococcus, 2-Shigella, 2-P.aeruginosa, 2-Proteus," 2-K.pneumoniae, 2-Candida, 2-Campilobacter, C.freundii.

В экспериментах были использованы 200 белых беспородных мышей массой 18-20 г; 10 кроликов массой 2,0-2,5 кг; 110 новорожденных телят, 40 телят в возрасте 15-30 дней.

Было исследовано 258 проб фекалий новорожденных телят и 70 - от белых мышей, 40 проб крови телят и 10 - от кроликов.

При определении острой и хронической токсичности жидкой формы Биод-5 было исследовано 210 гистосрезов органов й тканей животных.

При совершенствовании технологии глубинного культивирования бактерий-компонентов Биод-5 использовали стандартные и модифицированные питательные среды (ПС), а также разработанные и усовершенствованные нами в ходе проведения исследований.

Культивирование бацилл проводили во флаконах, в аппаратах культиваторах (АКВ) объемом 10,50,100 и 250 литров.

Концентрирование нативных культур бацилл осуществляли с использованием стерилизуемых сепараторов.

Бактериологические исследования фекалий животных проводили согласно методическим рекомендациям Блохиной И.Н. и др., (1990).

Определение антагонистической активности бацилл-компонентов жидкой формы Биод-5 осуществляли по Егорову Н.С. (1999).

Электронно-микроскопические исследования антагонистического действия бацилл-компонентов препарата на тест-штаммы бактерий про-

водили с использованием электронного микроскопа «J100B» по методике, описанной Грязневой Т.Н. с соавт. (2003).

Оценку качества разрабатываемых ПС для культивирования бацилл проводили по методу Бендаса Л.Г. (1980). #

Определение безвредности препарата проводили по методу Сороку-ловой И. Б. (1998).

Лечебно-профилактическую эффективность Биод-5 при ЖКБ оценивали в контролируемых опытах на новорожденных телятах. Учитывали заболеваемость, сохранность и прирост живой массы. Результаты клинических испытаний подтверждали данными бактериологических исследований кишечного содержимого и анализами крови по гематологическим, биохимическим (Ефимов A.A., 1990), иммунологическим (Степанов А.И., 1997) и гормональным показателям (Спасская Т.А., 1998).

Экспериментальные данные обрабатывали с помощью пакета компьютерных программ «Statistica 6,0» и по методу Ашмарина И.П. и Воробьева A.A. (1962).

В работе использованы материалы, полученные лично автором, а также в соавторстве с Грязневой Т.Н.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Приготовление опытных образцов жидкой формы пробиотика Биод-5

При изготовлении опытных образцов жидкой формы Биод-5 мы учитывали данные, свидетельствующие о том, что пробиотик Биод-5 обладает высокой биологической активностью при содержании в нем B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 в соотношении 3:1.

При изыскании стабилизирующих добавок, способствующих сохранению биологической активности жидкой формы Биод-5 в течение не менее 1 года мы остановились на глицеринё и феноле, как наиболее широко применяемых, недорогостоящих и доступных веществах.

Было приготовлено 2 лабораторных серии жидкой формы Биод-5, в каждую из которых на 1 мл препарата с содержанием B.subtilis ТПИ 13 -18±3 млрд. м.к/мл и B.licheniformis ТПИ 11 - 6±1 млрд.м.к/мл, добавили 0,02±0,005 мл 50%-ного раствора фенола и 0,15±0,01 мл глицерина. Степень спорообразования бацилл в каждой серйи Биод-5 составила 95 %.

Приготовленные серии препарата были аналогичны по показателям качества и биологической активности. Антагонистическая активность изучаемых бацилл к тест-штаммам бактерий соответствовала требованиям ТУ 9337-007-59088697-004.

Было установлено, что бациллы-компоненты Биод-5 в процессе производства по усовершенствованной технологии не изменяют своих свойств, обладают широким спектром антагонистической активности в отношении патогенщлх (Salmonella, Staphylococcus, Shigella, Pseudomonas и др.) и условно-патогенных (Proteus, Klebsiella, Candida и др.) микроорганизмов и не оказывают ингибирующего действия на лактобациллы и бифидобактерии.

При электронной микроскопии препаратов, приготовленных из 24-часовых смешанных культур тест-штаммов и бактерий-компонентов Биод-5, было выявлено бактерицидное действие B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ И (рис. 1,2, 3).

1. Бактерицидное действие бактерий-компонентов Биод-5 в отношении в.аигеив 209

(деформация и разрушение клеток стафилококков за счет нарушения структуры клеточной стенки)

2. Деформация и разрушение клеток $.1урЬитп1|Ш1 11 под действием пробиотика Биод-5

(видны шаровидные, овальные клетки сальмонелл, нарушения структуры клеточной стенки, образования неправильной формы — агрегированные клетки)

3. Разрушение клеток С.а1Ысап$ 690 под действием пробиотика Биод-5

(видны деформированные и разрушенные клетки кандид)

Как видно на представленных фотографиях, клетки стафилококков,

сальмонелл и кандид, в присутствии биокомпонентов жидкой формы пробиотика Биод-5, деформируются и подвергаются разрушению.

При определения влияния in vitro культур B.subtilis ТЛИ 13 и B.liche-niformis ТПИ 11 в составе жидкой формы пробиотика Биод-5 на рост и размножение основных представителей полезной микрофлоры ЖКТ новорожденных телят, было установлено, что вокруг зоны роста бацилл-компонентов Биод-5 наблюдается вторичный рост лакто- и бифидобакте-рий, что свидетельствует о стимуляции размножения полезной кишечной микрофлоры пробиотиком Биод-5.

Таким образом, биокомпоненты жидкой формы Биод-5 полученные по усовершенствованной технологии приготовления сохраняют свои свойства, проявляют in vitro высокую антагонистическую активность в отношении грамположительных и грамотрицательйых условно-патогенных и патогенных бактерий и обладают синергидным действием в отношении лактобацилл и бифидобактерий. Стабилизирующие вещества - 50 %-ный раствор фенола и глицерин, введенные в Биод-5 из расчета на 1 мл в количестве 0,02±0,005 мл и 0,15±0,01 мл, соответственно, не ингибируют антагонистическую активность и синергидное действие биокомпонентов препарата.

Изучение биологической активности жидкой формы Биод-5

Исследования по изучению острой и хронической токсичности двух серий препарата не выявили признаков острого и хронического токсического его действия на организм лабораторных животных.

Изучаемые показатели крови экспериментальных животных как через 10, так и через 30 дней после дачи препарата Биод-5 существенно не отличались от соответствующих показателей контрольных животных.

У животных опытной группы, имеющих дефицит бифидо- и лакто-бактерий до постановки опыта, на 3 день после применения препарата наблюдалось увеличение концентрации полезных бактерий на 2 порядка и уменьшение концентрации условно-патогенных бактерий. Через 7 дней после окончания курса применения Биод-5 бациллы элиминировали из кишечника животных.

При изучении антивирусной активности пробиотика Биод-5, было установлено, что препарат стимулирует клеточные факторы иммунитета телят против инфекционного ринотрахеита, рота-корона-аденовирусных инфекций, вирусной диареи и парагриппа-3.

Таким образом, биокомпоненты жидкой формы пробиотика Биод-5 проявляют in vivo антагонистическую активность в отношении патогенной и условно-патогенной микрофлоры ЖКТ животных и синергидное

действие в отношении лактобацилл и бифидобактерий. Препарат является безвредным для телят, не оказывает побочного действия на организм и обладает противовирусной активностью.

Технология промышленного производства пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме

Основными задачами данных исследований явились оптимизация компонентного состава питательной среды (ПС) для промышленного культивирования В.эиЬйНз ТЛИ 13 и В.ПсЬешАэггшз ТПИ 11 глубинным методом в биореакторах с целью повышения выхода биомассы бацилл в споровой форме и воспроизведение технологии производства жидкой формы пробиотика Биод-5 в условиях ФГУП «Покровский завод биопрепаратов».

Питательные среды № 4 и № 7, разработанные ранее, являются достаточно продуктивными для выращивания бацилл-компонентов пробиотика Биод-5, в то же время выход биомассы в споровой форме при выращивании их в биореакторах составляет не более 60 %.

Учитывая отмеченное, нами были проведены исследования по разработке такой ПС, которая способствовала бы увеличению выхода биомассы бацилл в споровой форме и являлась универсальной для культивирования двух видов бацилл: В.виЫШз ТПИ 13 и В.НсИешАэптш ТПИ 11.

В результате исследований, была создана опытная ПС на основе КУК и ГК с повышенным содержанием Мп2+ и дополнительным введением Са2+ и ЫаС1. Питательная среда получила условное обозначение «ПС № 5». Раствор глюкозы (50 %) и Са2+ вводили в концентрациях 6 и 0,4 г/л, соответственно, после стерилизации перед культивированием (табл. 1).

1. Состав и характеристика ПС № 5

Компонент ПС Показатель Характеристика ПС Показатель

Кукурузный экстракт, мл/л 60 Азот общий, мг% 36-62

Гидролизат казеина, мл/л 10 Азот аминный, мг% 20-22

М£804-5Н20, Г/Л 0,3 Глюкоза, г/л 6-8

Мп804-7Н20, Г/л 0,35 рН 6,5-7,3

СаС12-5Н20, г/л 0,4

Ре804-7Н20, г/л 0,01

Сц804-5Н20, г/л 0,001

ЫаС1, г/л 10

Пробное культивирование В.эиЫШэ ТПИ 13 и В.НсЬешАопшз ТПИ 11 в ПС № 5 проводили во флаконах объемом 0,1 дм3, в аппаратах Ф-1 и КМ-0,1 (коэффициент аэрации - 0,7 дм3/мин, число оборотов мешалки -

500 об/мин), в течение 36 ч. Величина сульфитного коэффициента (Кьа) была принята константной - 1,4 г Ог/дм3ч. На 1 мл ПС вносили 1 млн. м.к. посевной микробной культуры бацилл (табл. 2).

2. Характеристика культур бацилл, выращенных во флаконах и в аппаратах

Тип культиватора Характеристика культур

рн БК, млрд. М.К./МЛ БЮ, млрд. М.К./МЛ Спорообразование, %

В.яиМШ ТПИ 13

Флакон 8,2 (8,2) 2,16 (1,72) 1,9 (1,42) 87,9 (82,5)

АКВ-0,01 7,12 (7,16) 2,32 (2,32) 2,14 (1,64) 92,2 (70,7)

АКВ-0,1 7,23 (7,27) 2,56 (1,76) 2,3 (1,44) 89Д- (81,8)

В-НсЬе^ГотЬ ТПИ 11

Флакон 8,4 (8,0) 3,22 (3,2) 2,83 (2,6) 87,9 (81,3)

АКВ-0,01 7,2 (7,9) г,61 (з,15) 2,1 (2,81) 78,7 (89,2)

АКВ-0,1 7,3 (7,2) 2,92 (3,6) 2,54 (2,85) 87,0 (79,2)

Примечание: БК - биологическая концентрация; БЮ - концентрация термоустойчивых клеток. Для сравнения в скобках указаны данные Грязневой Т.Н, полученные при культивировании В.эиЫШБ ТПИ 13 в ПС № 4 и В.ПсИешГог-пш ТПИ 11 - в ПС № 7.

Полученные данные свидетельствуют о том, что выращивание бацилл-компонентов Биод-5 в ПС № 5 не только во флаконах, но и в аппаратах АКВ-0,01м3 и АКВ-0,1м3 обеспечивает высокую «урожайность» культур (от 2,16 до 3,22 млрд. живых клеток/мл и от 1,9 до 2,83 млрд. теплоустойчивых спор/мл). Спорообразование составило 78,7 - 92,2 %.

Несмотря на то, что при культивировании В.ПсЬешАэгпш ТПИ 11 в ПС № 7 выход биомассы по БК был выше, спорообразование гТри выращивании бацилл во флаконах и в аппарате АКВ-0,1 было ниже на 6,6 и 7,8 %, соответственно, чем в ПС № 5.

Представленные выше характеристики роста и спорообразования бацилл в ПС № 5 в ферментационных сосудах различного объема по регистрируемым параметрам были практически одинаковы и превосходили таковые при культивировании бацилл в ПС № 4 и № 7.

Учитывая, что для составления серии жидкой формы препарата Биод-5, биомассы В. эиЫШэ ТПИ 13 требуется в 3 раза больше, чем В. ИсЬеш-йэгпш ТПИ 11, была проведена оценка воспроизводимости культивирования бацилл в биореакторах АКВ-0,25м3 (В. виЫШв ТПИ 13) и АКВ-0,1м3 (В. ИсЬешйитшБ ТПИ 11).

Питательная среда была внесена в АКБ из расчета коэффициента заполнения биореактора - 0,6.

Приготовленный нами посевной материал содержал в 1 мл 30 млн. м.к. бацилл. Из расчета содержания в 1 мл посевной дозы 1 млн. м.к. в биореактор АКВ-0,25 м3 было внесено 5 л, а в АКВ-0,1 - 2 л посевного материала с содержанием зрелых спор не менее 90 %.

Культивирование проводили в течение 26 ч при (37±1) °С и давлении (0,Ю±0,05) МПа. Аэрация для В.зиЫШэ ТПИ 13 осуществлялась со скоростью 0,7±0,1дм3/мин на 1 литр среды, для В.Нс11ешй>птш ТПИ И -0,38±0,1 дм3/мин, частота вращения мешалки - 530 и 320 об/мин, соответственно (табл. 3).

3. Характеристика культур В.яиЬНПз ТПИ 13 и В.НсЬешЛмиия ТПИ 11, полученных при культивировании в АКБ 0,25 м3

Микроорганизм Кол-во серий Характеристика культур

рН БК, млрд. м.к/мл БЮ, млрд. м.к/мл Спорообразование, %

В. виЫШв ТПИ 13 3 6,3±0,2 3,6±0,3 2,9±0,2 80,5±3

В.НсЬетСэгпш ТПИ 11 3 6,5±0,1 4,8±0,2 4,2±0,1 87,5±5

Из материалов таблицы следует, что процеср культивирования бацилл в разработанной ПС № 5 в биореакторах завершился высокими уровнями накопления биомассы, в составе которой зрелых спор более 80 %.

Полученные результаты свидетельствуют о воспроизводимости технологии выращивания бацилл-компонентов пробиотика Биод-5 глубинным способом в жидкой ПС № 5, выход биомассы в споровой форме составил более 80 %.

Оптимальными режимами концентрирования культур В.зиЫШв ТПИ 13 и В.НсЬешАэптиз ТПИ 11с использованием стерилизуемых сепараторов являлись скорость подачи суспензии 30±5 л/ч, время накопления биомассы для заданной концентрации - от 30 до 60 мин. Полученный этим способом концентрат бацилл не содержал посторонней микрофлоры.

После концентрирования нативных культур бацилл были получены микробные суспензии В.зиЫШя ТПИ 13 - (51,10±3,7) млрд.м.к./мл и В.П-сИегпйэптш ТПИ 11 - (51,6±4,5) млрд.м.к./мл, которые разводили фосфатным буфером из расчета 0,85 мл на 1 дозу, с добавлением стабилизаторов до необходимой концентрации и составляли серию препарата. Общая концентрация живых бацилл в 1 мл бактериальной суспензии составила

(24±3) млрд.м.к./мл.

Таким образом было приготовлено 3 серии жидкой формы Биод-5, которые по всем показателям соответствовали требованиям ТУ. Стабилизирующие добавки фенол и глицерин не снижали биологической активности бактерий-компонентов Биод-5.

Препарат фасовали по 10 мл во флаконы объемом 10 см3 и хранили при температуре 4°С в течение 18 месяцев. Один раз в месяц вскрывали по 3 флакона каждой серии и определяли соответствие требованиям ТУ.

К концу срока хранения все изучаемые серии Биод-5 не изменили ор-ганолептических свойств, не контаминировались посторонней микрофлорой, были безвредны для белых мышей и антагонистически активны в отношении тест-штаммов бактерий. Выживаемость бацилл в процессе хранения во всех сериях препарата составляла 96-98%.

С учетом проделанных исследований, был определен следующий состав жидкого препарата Биод-5, в расчете на 1 мл: В.виЫШБ ТПИ 13 -(18±3) млрд.м.к.; В.ПсЬешйэглш ТПИ 11 - (6±1) млрд.м.к.; глицерин -(0,15±0,01) мл; фенол, 50 %-ный раствор - (0,02±0,005) мл; фосфатный буфер - 0,85 мл.

Исходя из результатов исследований можно заключить, что разработанная технология производства препарата Биод-5 является воспроизводимой и позволяет получить жидкую лекарственную форму пробиотика Биод-5, обладающую свойством длительного хранения.

Методы контроля качества препарата Биод-5

С целью обеспечения безвредности, стандартности и биологической активности жидкой формы пробиотика Биод-5, были разработаны методы его контроля по таким показателям, как внешний вид, количество жизнеспособных бацилл и зрелых спор в дозе, контаминация посторонними микроорганизмами, рН, безвредность, антагонистическая активность, контроль подлинности штаммов, составляющих основу препарата.

Препарат Биод-5 представляет собой споровую микробную массу В.зиЫШэ ТПИ 13 и В.НсИетГогпш ТПИ 11, в соотношении 3:1, в жидкой лекарственной форме с коммерческим обозначением «Биод-5Ж».

Лечебно-профилактическая эффективность жидкой лекарственной формы пробиотика Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят

При проведении испытаний профилактической и терапевтической эффективности Биод-5 при ЖКБ новорожденных телят перед нами стоя-

ли задачи определить дозу, кратность и длительность введения препарата; изучить влияние Биод-5 на бактериальную микрофлору кишечника, гормональный фон организма, биохимические, иммунологические и гематологические показатели крови новорожденных животных; определить профилактическую и терапевтическую эффективность Биод-5 при ЖКБ новорожденных телят.

Было установлено, что высокий профилактический эффект жидкой формы препарата достигается при даче его новорожденным телятам 1 раз в день в течение 3 дней в дозе 3,0 мл/гол, а терапевтический - в дозе 3,0 мл/гол 2 раза в день в течение 6 дней (табл. 4).

4. Лечебно-профилактическая эффективность жидкой формы Биод-5 при ЖКБ новорожденных телят

Группа животных Количество животных Заболеваемость, % Сохранность, %

Опытная 80 10 100

Контрольная 30 90 80

Бактерии-компоненты Биод-5 приживлялись в кишечнике и на 7 сутки исследований элиминировали из организма животных. Заболеваемость телят опытных групп составила 10 %, сохранность -100 %.

У телят, получавших Биод-5 с терапевтической целью, продолжительность болезни была в 2 раза короче, чем у животных контрольной группы.

Состав кишечной микрофлоры у животных нормализовался через 2-5 суток после применения Биод-5, лакто- и бифидобактерии выделялись в высоких концентрациях (108-109 м.к/г), энтеропатогенные бактерии у животных опытных групп не обнаруживались (рис. 4, 5).

Концентрация бактерий, КОЕ/г

1 9

Виды бактерий

1 - Е. coli;

2 - P.vulgaris;

3 - P.mirabilis;

4 - S.epidermidis;

5 - S.fecalis;

6 - K.pneumonia;

7 - C.freundii;

8 - Lactobacillus,

9 - Bifidobacterium

4. Состав микрофлоры фекалий телят опытной группы

Концентрация бактерий, lg КОЕ/г

у 7- C.freundii;

1 - Е. coli;

2 - P.vulgaris;

3 - P.mirabihs;

4 - S.epidermidis;

5 - S.fecalis;

6 - K.pneumonia;

8 - Lactobacillus;

9 - Bifidobacterium

2 3 4 5 6 789

Виды бактерий

5. Состав микрофлоры фекалий телят контрольной группы

Клинические, гематологические, иммунологические, гуморальные и бактериологические исследования новорожденных телят опытных и контрольных групп подтвердили высокую лечебно-профилактическую эффективность жидкой формы препарата Биод-5 при ЖКБ животных.

Экономическая эффективность лечебных мероприятий при применении жидкой формы пробиотика Биод-5 составила 70,5 руб на одного теленка, а экономический эффект на рубль затрат - 8,6 руб.

1. Оптимизированная по составу питательная среда № 5 содержит следующие компоненты: 22 мг% - аминного азота, 0,35 г/л - MnS04, 0,4 г/л - СаС12 и 10 г/л - NaCl необходимые для выращивания бацилл-компонентов жидкой формы пробиотика Биод-5 методом глубинного культивирования в биореакторах, которые удовлетворяют питательным потребностям как B.subtilis ТПИ 13, так и B.licheniformis ТЛИ 11 и позволяют увеличить выход биомассы в споровой форме до 87 %.

2. Стабилизирующие вещества-консерванты - 50 %-ный раствор фенола и глицерин, введенные в Биод-5 из расчета на 1 мл в количестве 0,02±0,005 мл и 0,15±0,01 мл, соответственно, не ингибируют антагонистическую активность и синергидное действие биокомпонентов препарата. Жидкая форма пробиотика Биод-5 проявляет in vitro и in vivo высокую антагонистическую активность в отношении энтеропатогенных эше-рихий, сальмонелл, стафилококков, кандид, шигелл, псевдомонад, протеев, клебсиелл, цитробактеров и кампилобактеров в результате деформа-

выводы

ции клеток и разрушения структуры клеточной стенки, и синергидное действие - в отношении лактобацилл и бифидобактерий.

3. Стабилизирующие вещества-консерванты фенол с глицерином позволяют сохранить активность жидкой лекарственной формы Биод-5 в течение 18 месяцев при положительных температурах. Биологическая концентрация бацилл в 1 мл препарата составляет 24±3 млрд.м.к.

4. Лечебно-профилактическая эффективность жидкой формы пробио-тика Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят составляет 90 %, при схеме применения препарата в дозе 3,0 мл/гол в течение 3 и 6 суток.

5. Экономическая эффективность лечебных мероприятий при применении пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме составила 70,5 руб. на одного теленка, а экономический эффект на рубль затрат - 8,6 руб., чю в 2 раза выше, чем при использовании антибиотиков и сульфаниламидных препаратов.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

1. Результаты исследований включены в технические условия «Биод-5 (ТУ 9337-007-59088697-004) на опытную партию», утвержденные в установленном порядке.

2. Разработан проект «Временного наставления по применению жидкой формы пробиотика Биод-5 в ветеринарии».

3. Результаты исследований включены в «Технологический регламент производства препарата Биод-5», утвержденный 12.09.2004 г.

4. На базе ООО «НПК ЦМВЭИ» (г. Москва) создана аппаратурно-технологическая линия промышленного производства пробиотика Биод-5 и организовано серийное производство препарата в жидкой лекарственной форме.

5. Результаты исследований по созданию технологии производства пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме и оценке его эффективности при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят используются в учебном процессе на кафедре биотехнологии МГАВМиБ имени К.И. Скрябина при подготовке студентов по специальностям 310800-Ветеринария, 310700-3оотехния, 012200-Биофизика, специализации «Ветеринарная биофизика»; 012300-Биохимия, специализации «Ветеринарная биохимия».

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Рекомендовать пробиотик Биод-5 в жидкой лекарственной форме зооветспециалистам и владельцам животных в качестве лечебно-профилактического средства при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят, вызванных энтеропатогенными эшерихиями, сальмонеллами, стафилококками, кандидами, шигеллами, псевдомонадами, протеями, клебсиеллами, цитробактерами, кампилобактерами и их ассоциациями, а также как средство заместительной терапии для восстановления полезной микрофлоры кишечника животных, в частности, лактобацилл и би-фидобактерий, после использования антибиотиков и других химиотера-певтических препаратов.

2. Отработанные технологические параметры и режимы производства пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме рекомендуются для приготовления жидких биопрепаратов на основе других микроорганизмов.

3. Результаты исследований по совершенствованию технологии производства жидкой формы пробиотика Биод-5 и оценке его лечебно-профилактической эффективности при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят рекомендуется использовать в учебном процессе в высших учебных заведениях по дисциплине «Биотехнология».

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Водолажская C.B. Перспектива применения жидкой формы пробиотика «Биод-5» в ветеринарии /Материалы международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 85-летию академии,- М.: МГАВМиБ.- 2004,- Ч. II.- С. 296-300.

2. Тихонов И.В., Водолажская C.B. Применение пробиотика «Биод-5Ж» в ветеринарии //Ветеринарная медицина.- Изд. «Агровет».- 2004.- № 4.-С. 11-12.

3. Тихонов И.В., Грязнева Т.Н., Лиморенко А.П., Васильев П.Г., Водолажская С.А. Совершенствование технологии производства пробиотика Биод-5 и методов его контроля //Ветеринарная медицина.- Изд. «Агровет»,- 2004,- № 4,- С. 40-41.

4209 82

РНБ Русский фонд

2006-4 17240

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Водолажская, Светлана Александровна

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ,

СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Механизм действия пробиотиков на организм животных.

1.2. Критерии отбора микроорганизмов в состав пробиотиков ветеринарного назначения.

1.3. Характеристика лекарственных форм пробиотиков.

1.4. Пробиотики на основе бактерий рода Bacillus, используемые в ветеринарии.

1.5. Лечебно-профилактическая эффективность пробиотиков при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2.1. Приготовление опытных образцов жидкой формы пробиотика Биод-5.

2.2.2. Оценка биологических свойств жидкой формы Биод-5.

2.2.2.1. Острая и хроническая токсичность препарата Биод-5.

2.2.2.2. Влияние препарата Биод-5 на физиологические показатели периферической крови животных.

2.2.2.3. Влияние Биод-5 на микрофлору кишечника животных.

2.2.2.4. Изучение антивирусной активности Биод-5.

2.2.3. Технология промышленного производства пробиотика Биодв жидкой лекарственной форме.

2.2.4. Методы контроля качества препарата Биод-5.

2.2.5. Лечебно-профилактическая эффективность жидкой лекарственной формы пробиотика Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят.

2.2.6. Экономическая эффективность применения жидкого пробиотика Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят.

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4. ВЫВОДЫ.

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ

НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Жидкая форма пробиотика Биод-5 и его эффективность при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят"

Актуальность темы. Болезни, связанные с: нарушениями деятельности желудочно-кишечного тракта: животных, занимают одно из основных мест среди причин отхода молодняка в хозяйствах промышленного типа. В этой: связи, проблема профилактики желудочно-кишечных; болезней молодняка, возбудителями которых являются условно-патогенные микроорганизмы, считается одной из наиболее актуальных задач ветеринарной'практики (3, 17, 40).

Желудочно-кишечные болезни новорожденных телят распространены повсеместно, развиваются с первых часов жизни животного, сопровождаются тяжелыми токсическими явлениями- характеризуются высокой смертностью и наносят значительный экономический ущерб животноводческой отрасли. Согласно> данным ежегодной статастической отчетности, представленной Департаментом ветеринарии РФ,-, заболеваемость телят, протекающих с поражением желудочно-кишечного тракта, достигает 65-70 % от числа народившихся, а падеж средигзабо-левших составляет 40-60 % (26,41).

Во многих странах отмечена тенденция роста желудочно-кишечных заболеваний у молодняка крупного рогатого: скота. Имеется большое число работ, в; которых обоснована взаимосвязь этих болезней: с нарушениями в кишечной микроэкологии и, в первую очередь, с дефицитом нормальной кишечнош микрофлоры. Замед ление сроков формирования кишечного биоценоза у молодняка высокопродуктивных животных стало>общепризнанным^ фактом (7, 14, 58, 217,245).

Опыт применения- антибиотиков показал, что в данной ситуации они не обладают должной-эффективностью. Безуспешные попытки контролировать проблему путем, чередования схем применения антибиотиков. и химиопрепа-ратов; в том числе и нового поколения, не дали: желаемого результата, а напротив, усугубили ее. Негативные последствия фармакологического* прессинга, усиленные антропогенной и техногенной" нагрузкой на среду обитания;животных, привели к резкому истощению резервов адаптационных систем организма молодняка и выразились в изменчивости циркулирующих в хозяйстве бактерий и вирусов, в развитии множественной лекарственной резистентности и усилении факторов патогенности у таких представителей микроорганизмов кишечника, как эшерихии, сальмонеллы, энтерококки, протей, клебсиеллы, кампилобактерии, стафилококки и другие. Наряду с этой проблемой значительно возросла угроза попадания остаточных количеств лекарственных веществ в пищу человека, что достаточно часто является причиной возникновения аллергических состояний у детей и взрослых, а также способствует появлению антибиотико-устойчивых инфекционных очагов (37, 218). Ужесточение требований к экологической безопасности продукции животноводства заставило во всем мире пересмотреть многие методологические подходы к вопросам оптимизации контроля над эпизоотическим процессом болезней, возбудителями которых является условно-патогенная микрофлора. Актуальная задача ветеринарной практики - снижение потерь от желудочно-кишечных заболеваний, неразрывно связана с изысканием способов нормализации кишечного биоценоза и снижения риска контаминации желудочно-кишечного тракта условно-патогенной микрофлорой с повышенными вирулентными свойствами (87, 103, 146).

Это обстоятельство заставило признать необходимость получения нового поколения экологически безопасных препаратов, способных занять свое место в системе мероприятий по обеспечению биологической защиты животных (2, 47, 85, 235).

Наиболее полно этим требованиям могут отвечать пробиотические препараты, в состав которых входят живые бактерии из числа основных представителей нормального кишечного биоценоза, такие как лактобациллы, би-фидобактерии, стрептококки и другие (81, 94, 164, 275).

Исследования последних лет показывают, что нормальная микрофлора кишечника является весомым физиологическим компонентом, эволюционно связанным с макроорганизмом, положительное влияние которой далеко не ограничивается антагонистическим эффектом. Нормальная кишечная микрофлора обеспечивает физиологическую целостность многих систем организма, связанных с формированием общей лимфоретикулярной иммунной системы и локального местного иммунитета слизистой кишечника, периферической иммунной системы, гормональной и эндокринной систем. Бактерии-пробионты осуществляют в кишечнике животных синтез аминокислот, ферментов и витаминов, участвуют в общем метаболизме, частично восполняют недостаток белков животного происхождения, ускоряют процессы переваривания и усвоения кормов (131, 159, 208, 222, 239).

В последние годы установлено, что не менее важны в микробиоценозе желудочно-кишечного тракта животных и человека и некоторые экзогенные бактерии, например, рода Bacillus. Среди различных представителей экзогенной микрофлоры, бациллы (кроме B.antracis и B.cereus) характеризуются рядом преимуществ, которые позволяют считать их перспективными в качестве основы новых пробиотиков. Эти микроорганизмы широко распространены в природе; являются безвредными для человека и животных; характеризуются высокой ферментативной активностью; являются устойчивыми к литическим и пищеварительным ферментам; синтезируют различные бактериоцины, что обуславливает их антагонистическую активность в отношении широкого спектра патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Кроме того, эти бактерии технологичны в производстве, устойчивы к широкому диапазону температур, стабильны при хранении, экологически безопасны (170, 265).

Ветеринарной практикой востребованы препараты в различных лекарственных формах (жидкой, сухой, гранулированной, таблетированной и др), в зависимости от вида животных и способов их содержания (64).

Однако традиционными лекарственными формами для пробиотиков являются, в основном, лиофильно высушенные препараты, технология производства которых предусматривает использование дорогостоящего оборудования, трудоемкие и длительные по времени технологические стадии, что приводит к повышению себестоимости препаратов (88).

Таблеточные лекарственные формы, содержащие лактобациллы и бифи-добактерии, хотя и были разработаны в свое время, однако массового их выпуска не осуществлялось, вследствие высокой инактивации бактерий при прессовании и низкой последующей сохраняемости биологических свойств (108).

Пробиотики в жидкой форме особенно удобны для применения в животноводстве, не нуждаются в предварительной подготовке перед дачей животным, равномерно смешиваются с сухим и жидким кормом, с водой, молоком и др., а себестоимость таких препаратов сравнительно невысока, т.к. при-их производстве не требуется дорогостоящих операций по высушиванию, измельчению, прессованию и т.д. (45, 51).

Известно, что при производстве жидких биопрепаратов на основе живых микроорганизмов в них добавляют стабилизаторы, которые, с одной стороны, не должны разрушать биологические компоненты, а с другой — должны поддерживать жизнеспособность и стерильность препарата (197).

Однако для ветеринарии пробиотики из эндогенной микрофлоры в жидком виде практически не производятся, в связи с коротким сроком их хранения (206, 213, 249).

Учитывая, что бактерии рода Bacillus, относятся к экзогенной микрофлоре, за счет спорообразования устойчивы к факторам внешней среды, в том числе и к различным химическим веществам. Поэтому пробиотики на основе бацилл являются наиболее перспективными в плане создания жидких лекарственных форм (42-44).

Пробиотик Биод-5 включает 2 штамма бактерий рода Bacillus - B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 (48, 50, 55). Препарат в различных лекарственных формах был широко испытан в производственных условиях при желудочно-кишечных болезнях разных видов животных и показал высокую лечебно-профилактическую эффективность.

Однако технология производства жидкой формы пробиотика Биод-5 требует совершенствования на стадии культивирования бацилл-компонентов препарата с целью повышения выхода биомассы в споровой форме.

Кроме того, жидкая форма пробиотика Биод-5 не испытывалась при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят, отсутствуют данные о влиянии жидкой формы препарата на показатели периферической крови телят и микрофлору желудочно-кишечного тракта этого вида животных.

Поэтому исследования по совершенствованию технологии производства пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме, направленные на снижение себестомости препарата, и оценка его эффективности при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят являются актуальными и важными для ветеринарной науки и практики.

Цель и задачи исследований. Цель настоящих исследований - совершенствование технологии производства пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме и оценка его лечебно-профилактической эффективности при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Усовершенствовать технологические стадии производства пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме, определив оптимальный компонентный состав производственной питательной среды для культивирования B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТЛИ 11 глубинным методом в биореакторах.

3. Приготовить опытные образцы жидкой формы пробиотика Биод-5.

4. Оценить биологические свойства препарата Биод-5, полученного по усовершенствованной технологии.

5. Изучить лечебно-профилактическую эффективность жидкой формы Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях- новорожденных телят.

6. Рассчитать экономическую эффективность применения жидкой формы пробиотика Биод-5.

Научная новизна.

1. Усовершенствованна технология производства жидкой формы пробиотика Биод-5, позволяющая сохранять биологическую активность препарата не менее 18 месяцев.

2. Теоретически обоснован и разработан компонентный состав питательной среды № 5 для глубинного культивирования штаммов B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 для производства пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме, позволяющий получить бактериальную суспензию, содержащую не менее 80 % зрелых спор.

3. Показано, что жидкая форма Биод-5 обладает уникальными биологическими свойствами, отличающими его от других пробиотиков: подавление размножения сальмонелл, кандид и стафилококков; стимуляция роста лакто-бацилл и бифидобактерий in vitro и в желудочно-кишечном тракте новорожденных телят.

4. Использованные методы контроля качества пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме позволяют дать объективную оценку биологической активности бактерий-компонентов препарата.

5. Показана высокая (90%) лечебно-профилактическая эффективность жидкой формы пробиотика Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят.

Практическая значимость.

1. Результаты исследований включены в ТУ 9337-007-59088697-004 на пробиотик Биод-5, промышленный регламент производства препарата, временное наставление по применению пробиотика Биод-5 в ветеринарии.

2. На базе ФГУП «Покровский завод биопрепаратов» получены 3 серии жидкой формы препарата Биод-5, которые прошли производственные испытания.

3. На базе ООО «НПК ЦМВЭИ» (г. Москва) организовано серийное производство пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме.

4. В опытах на новорожденных телятах изучен механизм действия жидкой -формы пробиотика Биод-5, дана оценка его влияния на микробиоценоз кишечника, обменные и иммунные, процессы организма животных, показана высокая лечебно-профилактическая эффективность препарата, что подтверждено актами, утвержденными руководителями хозяйств Московской и Нижегородской областей. 5. Результаты исследований по созданию технологии производства пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме используются в учебном процессе на кафедре биотехнологии МГАВМиБ имени К.И. Скрябина.

Личный вклад соискателя. Автору принадлежат непосредственное осуществление исследований по оценке биологических свойств штаммов B.subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТЛИ 11 и жидкой формы Биод-5, совершенствование компонентного состава лабораторных и производственных питательных сред и технологии производства жидкой формы пробиотика Биод-5, испытание лечебно-профилактической эффективности пробиотика при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят, анализ и теоретическое обобщение полученных данных.

В работе использованы материалы, полученные лично автором, а также в соавторстве с Грязневой Т.Н, которой выражаю глубокую благодарность за помощь и поддержку.

Апробация результатов диссертации. Основные результаты исследований изложены в 2 научных отчетах («Экспериментальные испытания безопасности, реактогенности и специфической активности пробиотика Биод-5», «Испытание профилактической и терапевтической эффективности разных форм пробиотика Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях животжидкой формы препарата Биод-5, которые прошли производственные испытания.

3: На базе ООО <<НПК ЦМВЭИ>> (г. Москва) организовано серийное производство пробиотика Биод-5 в,жидкой лекарственной форме.

4. Вгопытах на новорожденных телятах изучен механизм действия жидкой формы ,пробиотика-Биод-5, дана; оценка его влияния: на микробиоценоз'кишечника, обменные и иммунные процессы организма животных, показана высокая; лечебно-профилактическая эффективность, препарата, что» подтверждено актами, утвержденными руководителями хозяйств Московской И; Нижегородской; областей^

5. Результаты исследований по созданию технологии производства1 пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме используются в учебном процессе на кафедре биотехнологии МГАВМиБ имени К.И. Скрябина;

Личный,; вклад.', соискателя. Автору принадлежат непосредственное осуществление исследований по оценке биологических свойств штаммов B;subtilis ТПИ 13 и B.licheniformis ТПИ 11 и жидкой формы Биод-5, совершенствование компонентного состава лабораторных и производственных питательных сред ^технологии производства жидкой формы пробиотика Биод-5,. испытание лечебно-профилактической: эффективности пробиотика при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят, анализ^ и теоретическое обобщение полученных данных.

В работе использованы материалы, полученные: лично автором, а,также в соавторстве с Грязневой Т.Н, которой выражаю; глубокую благодарность за помощь и поддержку.

Апробация результатов диссертации; Основные результаты исследований; изложены в 2 научных отчетах («Экспериментальные испытания безопасности, реактогенности И' специфической; активности пробиотика Биод-5», «Испытание профилактической и терапевтической эффективности разных форм пробиотика Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях животных в производственных условиях») и доложены на международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 85-летию МГАВМиБ им. К.И. Скрябина (Москва, 2004); на научно-практической конференции ветеринарных врачей-эпизоотологов Москвы и Московской области (Москва, 2004).

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Водолажская, Светлана Александровна

4. ВЫВОДЫ

1. Оптимизированная по составу питательная среда № 5 содержит следующие компоненты: 22 мг% - аминного азота, 0,35 г/л - MnS04, 0,4 г/л -СаС12 и 10 г/л - NaCl необходимые для выращивания бацилл-компонентов жидкой формы пробиотика Биод-5 методом глубинного культивирования в биореакторах, которые удовлетворяют питательным потребностям как В.subtilis ТПИ 13, так и B.licheniformis ТПИ 11 и позволяют увеличить выход биомассы в споровой форме до 87 %.

2. Стабилизирующие вещества-консерванты - 50 %-ный раствор фенола и глицерин, введенные в Биод-5 из расчета на 1 мл в количестве 0,02±0,005 мл и 0,15±0,01 мл, соответственно, не ингибируют антагонистическую активность и синергидное действие биокомпонентов препарата. Жидкая форма пробиотика Биод-5 проявляет in vitro и in vivo высокую антагонистическую активность в отношении энтеропатогенных эшерихий, сальмонелл, стафилококков, кандид, шигелл, псевдомонад, протеев, клебсиелл, цитробактеров и кампилобактеров в результате деформации клеток и разрушения структуры клеточной стенки, и синергидное действие - в отношении лактобацилл и би-фидобактерий.

4. Лечебно-профилактическая эффективность жидкой формы пробиотика Биод-5 при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят составляет 90 %, при схеме применения препарата в дозе 3,0 мл/гол в течение 3 и 6 суток.

5. Экономическая эффективность лечебных мероприятий при применении пробиотика Биод-5 в жидкой лекарственной форме составила 70,5 руб. на одного теленка, а экономический эффект на рубль затрат - 8,6 руб., что в 2 раза выше, чем при использовании антибиотиков и сульфаниламидных препаратов.

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

2. Разработан проект «Временного наставления по применению жидкой формы пробиотика Биод-5 в ветеринарии».

3. Результаты исследований включены в «Технологический регламент производства препарата Биод-5», утвержденный в 12.09.2004 г.

5. Результаты исследований по совершенствованию технологии производства жидкой формы пробиотика Биод-5 и оценке его эффективности при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят рекомендуется использовать в учебном процессе на кафедре биотехнологии МГАВМиБ имени К.И.Скрябина при подготовке студентов по специальностям 310800-Ветеринария, 310700-Эоотехния, 012200-Биофизика, специализации «Ветеринарная биофизика»; 012300-Биохимия, специализации «Ветеринарная "биохимия».

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Рекомендовать пробиотик Биод-5 в жидкой лекарственной форме зоо-ветспециалистам и владельцам животных в качестве лечебно-профилактического средства при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят, вызванных энтеропатогенными эшерихиями, сальмонеллами, стафилококками, кандидами, шигеллами, псевдомонадами, протеями, клебсиеллами, цитробактерами, кампилобактерами и их ассоциациями, а также как средство заместительной терапии для восстановления полезной микрофлоры кишечника животных, в частности, лактобацилл и бифидобактерий, после использования антибиотиков и других химиотерапевтических препаратов.

3. Результаты исследований по совершенствованию технологии производства жидкой формы пробиотика Биод-5 и оценке его лечебно-профилактической эффективности при желудочно-кишечных болезнях новорожденных те лят рекомендуется использовать в учебном процессе в высших учебных заве дениях по дисциплине «Биотехнология».

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Водолажская, Светлана Александровна, Щёлково

1. Антипов В.А. Биологические препараты симбионтных микроорганизмов и их применение в ветеринарии /Антипов В.А. //Сельское хозяйство за рубежом,-1981.-№ 2.-С. 43-47.

2. Антипов В.А. Отечественные пробиотики для животноводства /Антипов В.А., Мартынов Т.Н. //Биологические основы высокой продуктивности сельскохозяйственных животных. Москва, 1990. - Т. 2. - С. 109-110.

3. Антипов В.А. Использование пробиотиков в животноводстве /Антипов

4. B.А. //Ветеринария. 1991. - № 4. - С. 55-58.

5. Антонов B.C. Динамика классов иммуноглобулинов и других сывороточных- белков-у-крупного рогатого скота в-онтогенезе~/Антонов-В .СттТСле-нина Н.В., Михайлова С.А. //Проблемы ветеринарной иммунологии.- М.: Аг-ропромиздат, 1985.- С. 49-50.

6. Аркадьева З.А. Факторы, влияющие на жизнеспособность и свойства микроорганизмов при различных методах хранения /Аркадьева З.А. //Биологические науки.- 1993.- № 4.- С. 93-104.

7. Ашмарин И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях /Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Л.: Гос. из-во мед. литературы, 1962.-290 с.

8. Байбеков И.М. Взаимодействие индигенных пристеночных микроорганизмов с клетками слизистой оболочки пищеварительного тракта /Байбеков И.М., Мавлян-Ходжаев Р.Ш., Ирсалиев Х.И. //Арх.патол.- 1992.- № 5.1. C.18- 22.

9. Бакулина Л.Ф. Пробиотики на основе спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus и их использование в ветеринарии / Бакулина Л.Ф., Тимофеев И.В., Перминова Н.Г. // Биотехнология. 2001. - № 2. - С. 48-56.

10. Белявская В.А. Пробиотики из рекомбинантных бацилл — новый класс лечебно-профилактических препаратов и способ доставки лекарственныхбелков' в организм /Белявская В.А. //Сб.науч.тр. сотр. НИКТИ БАВ.-Новосибирск.- 1996.-С. 90-197.

11. Белоус A.M. Научные основы сублимационного консервирования /Белоус A.M., Цветков Н.Д.- Киев: Техшка, 1985.- 120 с.

12. Бирюков В.В. Оптимизация периодических процессов культивирования микроорганизмов / Бирюков В.В., Кантере М.В.- М.: Наука, 1985.- 282'с.

13. Бовкун Г.Ф. Роль клебсиелл в патологии животных /Бовкун Г.Ф. //Ветеринария.- 1986.- № 8.- С. 70-71.

14. Бойко Н.В. Антагонистическое действие культур Bacillus subtilis на бактерии рода Klebsiella /Бойко Н.В., Туряница А.И., Попович Е.П. // Микро-биол. журн. 1989. - № 1. - С. 87-91.

15. Бондаренко В.М. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры / Бондаренко В.М., Петровская В.Г. //Вестник РАМН. 1997. - № 3. - С. 7-10.

16. Бродов Л.Е. Диагностика и лечение острых кишечных инфекций /Бродов Л.Е., Югцук Н.Д., Малеев В.В. //Эпидемиол. и инфек. болезни. -1997.-№4.-С. 4-6.

17. Брок Г.Д. Мембранная фильтрация / Брок Г.Д. -М.: Мир, 1987.- 464 С.

18. Быков В.А. Расчет процессов микробиологических производств /Быков В.А., Винаров А.Ю., Шерстобитов В.В.- Киев: Техшка, 1985. 245 с.

19. Быков В.А. Микробиологическое производство биологически активных веществ и препаратов /Быков В.А., Крылов И.Л., Манаков М.Н. М.: Высшая школа, 1987.-143 с.

20. Варфоломеев С.Д. Биотехнология. Кинетические основы микробиологических процессов/Варфоломеев С.Д., Калюжный G.B: М.: Высшая школа, 1990.-260 с.

21. Бахтин Ю.Б. Генетическая теория клеточных популяций1 /Бахтин Ю.Б.- Л.: Наука, 1980.- 168 с.

22. Войчишина Л.Г. Применение спорообразующих бактерий в лечении больных дисбактериозом /Войчишина Л.Г.,. Чаплинский В;Я., Вьюницкая В.А. //Врачебное дело.- 1991.-№ 6.-С. 73-75.

23. Воробьев А.В. Опыт применения пробиотика биоспорин для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней молодняка /Воробьев А.В., Фадеев А.А. //Актуал. пробл. произв. продуктов жив-ва: Сб.науч.тр. Самара, 2001. - С. 86-88.

24. Воронин Е.С. Этиология и профилактика желудочно-кишечных заболеваний телят /Воронин E.G., Девришов Д.А., Ставцева-Л.Я: //Вестник с.-х. науки.-1989.- № 9.-С. 105-116.

25. Гапонов К.П. Процессы и аппараты микробиологических производств /Гапонов К.П. -М.: Агропромиздат, 1981.- 128 с.

26. Гекли Дж. Консервирование бактерий методом лиофилизации /Текли Дж. //Cryobiology.-1980.-vol. 17.-N6.-P. 598 /Переводы статей.-1981.-№ 5 (261).-С. 150.

27. Голубева В.А. Энтеробактерии: Руководство для врачей /Голубева В.А., Килессо В.А., Киселева Б.С.; Под ред. В.И. Покровского.- М.: Медицина, 1985.- 321 с.

28. Гончарова Г. И. Микробная экология кишечника в норме и при патологии /Гончарова Г. И., Дорофейчук В. Г., Смолянская А.З.// Антибиотики и химиотерапия. 1989. - № 6. - С. 462-466.

29. Горская Е.М. Повышение неспецифической резистентности макроорганизма при пероральном применении эубиотиков из лактобацилл /Горская Е.М. // Имму но биологические препараты: Сб.науч.тр.-М., 1989. С. 181-185.

30. Горская Е.М. Механизмы развития микроэкологических нарушений вкишечнике и новые подходы к их коррекции: Автореф. дис. докт. мед. наук / Е.М.Горская.-М., 1994.- 53 с.

31. Готтшлак Г. Метаболизм бактерий /Готтшлак Г.-М.: Мир, 1982.-310 с.

32. Грачева Н.М. Эффективность нового бактерийного препарата биоспо-рина при лечении острых кишечных инфекций /Грачева Н.М., Гаврилов А.Ф., Соловьева А.И. // Журн. микробиол. 1996. - № 1. - С. 75-77.

33. Грязнева Т.Н. Биологические средства коррекции микробиоценоза кишечника телят /Грязнева Т.Н., Павлова И.Б., Воронин Е.С., Панитков М.А. //Ветеринария. 1991. - № 7.- С. 23-24.

34. Грязнева Т.Н. Способ профилактики диареи новорожденных телят /Грязнева Т.Н., Соболь М.А. //Ветеринарная и биологическая наука с.-х. производству: СбГнаучТст. ^НТ1о^гбродТ НИВИ.- 19957- СГ45-46.

35. Грязнева Т.Н. Оценка эффективности пробиотика «БИОД-5» при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят /Грязнева Т.Н., Тихонов И.В., Васильев П.Г. и др. // Ветеринарная медицина.- Изд. «Агровет». 2002.-№2.- С. 22-23.

36. Грязнева Т.Н. Новый пробиотик «Биод-5» и оценка его эффективности при желудочно-кишечных болезнях пушных зверей /Грязнева Т.Н. //Ветеринарные и медицинские аспекты зооантропонзов: Сб. науч. ст. Покров: ВНИИВВиМ. - 2003.- С. 614-620.

37. Грязнева Т.Н. Технология производства пробиотика «Биод-5» и его применение в ветеринарии /Грязнева Т.Н. //Ветеринарные и медицинские аспекты зооантропонозов: Сб. науч. ст.- Покров: ВНИИВВиМ. 2003,- С. 609

38. Грязнева Т.Н. Разработка глубинного способа культивирования бацилл-компонентов пробиотика Биод-5 /Грязнева Т.Н. //Биотехнология. -2004.- № 5.- С. 67-68.

39. Грязнева Т.Н. Электронная микроскопия биологических объектов /Грязнева Т.Н., Меньшикова З.Н., Тихонов И.В., Мельницкая Т.Н. //Учебно-методическое пособие.- М.: МГАВМиБ. 2003.- 109 с.

40. Грязнева Т.Н. Технология производства сухой формы пробиотика Биод-5 / Грязнева Т.Н., Акимочкин А.И., Тихонов И.В. // Ветеринарная медицина.- Изд. «Агровет»,- 2005.- № 1.- С. 17-18.

41. Далин М.В. Адгезины микроорганизмов /Далин М.В., Фиш Н.Г. //ВИНИТИ.- Сер. «Микробиология», 1985.-№ 6.-107 с.

42. Дебабов В.Г. Современные методы создания промышленных штаммов микроорганизмов /Дебабов В.Г., Лившиц В.А.- М.: Высшая школа, 1988.208 с.

43. Дворкин Г.А. Дисбактериоз и токсинообразование при диарее телят /Дворкин Г.А. //Сб. науч.тр. Белорусского НИИ животноводства.-Минск, 1986. Вып.16. - С. 146-147.

44. Девришов Д.А. Изучение бактериобиоценоза причины острых желудочно-кишечных заболеваний молодняка животных /Девришов Д.А., Воронин Е.С., Ставцева Л.Я., Грязнева Т.Н. // Вестник ВАСХНИЛ.- 1991.- № 2.-С. 43-46.

45. Джупина С.И. Факторные инфекционные болезни животных /Джупина С.И. //Ветеринария.- 2001.- № 3.- С. 6.

46. Дрыгина Е.С. Оборудование биотехнологических производств за рубежом /Дрыгина Е.С., Ципенюк ИЛ. //Процессы и аппараты микробиологических производств: Сб.науч.тр. М.: Мир, 1987.- С. 23.

47. Егоров Н.С. Бактериоцины. Образование, свойства, применение /Егоров Н.С., БарановаИ.П. //Антибиотики и химиотерапия.- 1999.- № 6.- С. 33.

48. Блинов Н.П. Современные лекарственные средства: Справочник с рецептурой /Блинов Н.П., Громова Э.Г.- Санкт-Петербург: Питер Пресс, 1997. -1152 с.

49. Елыпин А.И. Сгущение суспензий микробиологических производств и способы интенсификации процесса /Ельшин А.И.- М.: Агропромиздат, 1987.225 с.

50. Ефимов А.А. Клинико-гематологические и ферментативные исследования у здоровых и больных диспепсией телят /Ефимов А.А., Щербаков Г.Г., Ширяев Г.Г. //Сб. науч.тр. Ленинградского вет. ин-та.- Л., 1990.-Т. 62.- С.-31-34.

51. Жданов П.И. Опыт и перспективы применения нового пробиотика «Споробактерин» в животноводстве и ветеринарной практике /Жданов П.И., Мешков В.М., Лепский А.И. /ЯОбилейн. сб.тр.ученых Оренбург.гос.аграр.ун-та.- Оренбург, 2000. С. 4-7.

52. Жирков И.Н. Применение пробиотика Рас для коррекции дисбактерио--зов у телят /Жирков И.Н., Братухин И.И. //Ветеринария. -1999. -№ 4. С.40.42.

53. Жужиков В.А. Фильтрование. Теория и практика разделения суспензий /Жужиков В.А. М.: Химия, 1980.- 400 с.

54. Зароза В.Г. Меры борьбы с диареей телят раннего возраста /Зароза

55. В.Г. //Достижения с.-х. науки и практики: Сб.науч.тр.-М., 1984.-№ 6.-С. 9-20.

56. Запруднов A.M. Микробная флора кишечника и пробиотики /Запруднов A.M., Мазанкова JI.H.- М.: Высшая школа, 1999.- 258 с.

57. Зуев Б.Г. Фильтры для жидкостей микробиологической промышленности /Зуев Б.Г., Филатов Ю.И.- М.: Высшая школа, 1985.- 56 с.

58. Изачик Ю.А. Дисбактериоз кишечника /Изачик Ю.А., Корсунский А.А. //Медицинская помощь. 1993. - № 2. - С. 58-60.

59. Ивановский А.А. Новый пробиотик бактоцеллолакт при различных патологиях у животных /Ивановский А.А. //Ветеринария.-1996.-№ 11.-С. 34-35.

60. Иноземцев В.П. Новое эффективное средство для профилактики и лечения желудочно-кишечных болезней телят (Ветом 1.1) /Иноземцев В.П., Балкова И.И., Ноздрин Г.В. // Ветеринария. -1998. № 1. - С. 47-5 Г.

61. Искова Д.И. Пробиотик руменолакт для молодняка крупного рогатого скота /Искова Д.И. // Молочное и мясное скотоводство.-1993.-№ 1.-С. 17-19.

62. Исмаилов М.А. Профилактическое и терапевтическое действие био-спорина-В при диареях телят и поросят /Исмаилов М.А., Девришов Д.А., Бе-доева З.М. //Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии: Сб.науч. тр.-М., 1997.-С. 12-13.

63. Интизаров М.М. Микрофлора тела животных /Интизаров М.М. //Лекция для слушателей ФПК, преподавателей и научных сотрудников.- М.: МВА, 1989.- 23 с.

64. Каврук JI.C. Ускоренная индикация патогенных энтеробактерий /Каврук Л.С., Кононенко А.Б., Бритова С.В. //Ветеринария.-1992.-№ 5.- С. 3133.

65. Калачнюк Г.И. Стимуляция рубцового пищеварения и пробиотики /Калачнюк Г.И., Копчены Я.К. Шимунек И.Н. //Биологические основы высокой продуктивности животных: Сб.науч.тр.-Боровск, 1990. ч.2. - С. 118-119.

66. Каллимулина Р.Г. Профилактика и лечение заболеваний телят /Каллимулина Р.Г. //Информ.бюл. МСХ и продов.- Башкортостан.-2002.- №1.-С. 31-34.

67. Калунянц К.А. Оборудование микробиологических производств /Калунянц К.А., Голгер Л.И., Балашов В.Б.- М.: Агропромиздат, 1987.- 398 с.

68. Кантере В.М. Экономические аспекты деконтаминации питательных сред /Кантере В.М., Крамм Э.А. //Биотехнология.-1989.- № 4. С. 53 - 54.

69. Кантере В.М. Теоретические основы технологии микробиологических производств /Кантере В.М. М.: Агропромиздат, 1990. - 271 с.

70. Каширская Н.Ю. Значение пробиотиков и пребиотиков в регуляции кишечной микрофлоры /Каширская Н.Ю. //Русский медицинский журнал. -2000. -№ 13-14.-С. 38-42.

71. Клименко В.В. Применение пробиотиков в ветеринарии //Биотехнология, экология, медицина /Клименко В.В.-Киров: Экспресс, 2002.-С. 32-34.

72. Ковалев В.Ф. Некоторые проблемы применения антибиотиков в животноводстве и ветеринарии /Ковалев В.Ф. //Антибиотики и медбиотехноло-гия.-1989.- № 10.-С. 725-729.

73. Колчинская М.Д. Продукты ферментативного гидролизата казеина и эластина протеазой B.subtilis /Колчинская М.Д., Васильев В.Н., Качан А.Ф.// Микробиол. журнал. 1983. - № 9. - С. 13-16.

74. Ковалев С.В. Процессы и аппараты биотехнологии /Ковалев С.В., Хрипков Ю.И. М.: ВАХЗ, 1998. - 248 с.

75. Ковалев С.В. Проектирование и оборудование биотехнологических предприятий /Ковалев С.В., Тихонов И.В., Симонова Н.И. //Практикум по процессам и аппаратам биотехнологии.- Ч. I.- М.: ВУ РХБЗ МО РФ, 2000 .123 с.

76. Ковалев С.В. Основы проектирования и оборудование биотехнологических предприятий /Ковалев С.В., Тихонов И.В., Симонова Н.И. //Практикум по основам проектирования предприятий биотехнологической промышленности.- Ч. 2.- М.: ВУ РХБЗ МО РФ, 2000.- 84 с.

77. Королюк A.M. Конструирование новых препаратов и лечебных продуктов для направленной коррекции микроэкологического статуса организма /Королюк A.M. //Инфектология, достижения и перспективы: Сб.науч.тр.-Санкт-Петербург, 1996.- С. 125. " " ~

78. Котов В. Б. Состояние и тенденции развития биотехнологии за рубежом /Котов В. Б., Беляева Т.А. //Итоги науки и техники. Биотехнология: Сб.науч.тр.-М.: Мир, 1991.-С. 156.

79. Крамм Э.А. Деконтаминация питательных сред в процессах биосинтеза /Крамм Э.А. М.: МИХМ, 1991. - 3 8 с.

80. Краморенко Ю.С. Микрометод комплексного определения Т- и В-лимфоцитов в капиллярной крови /Краморенко Ю.С., Урашева С.М., Байсал-баева В.К. //Лабораторное дело. 1990. - № 5. - С. 16-18.

81. Кудрявцев В.А. Подбор состава среды для оптимизации аминосинте-тической активности аэробных бацилл /Кудрявцев В.А., Сафронова Л.А., Осадчая А.И. //Микробиол. журн. 1991, т.53, № 4, С. 68-72.

82. Кудрявцев В.А. Влияние живых культур Bacillus subtilis на неспецифическую резистентность организма /Кудрявцев В.А., Сафронова Л.А., Осадчая А.И. //Микробиол. журн. 1996. - № 2.- С.46-55.

83. Куриленко А.Н. Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных /Куриленко А.Н., Крупальник В.Л.- М.: Колос, 2000.-387 с.

84. Ларионов Л.П. Разработка гелевой формы препарата "Биоспорин"

85. Ларионов Л.П., Щелгачев В.В., Литусов Н.В. //Перспективы использования эубиотика «Биоспорин» в практике здравоохранения и военно-медицинской службы: Сб.науч.тр.-ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ.- Екатеринбург, 1997.-С. 49-55.

86. Литвин В.П. Бактерин-СЛ при острых желудочно-кишечных болезнях /Литвин В.П., Резник С.Р., Вьюницкая В.А. //Проблемы диагностики, терапии и профилактики незаразных болезней с.-х. животных: Сб.науч.тр.- ВЗВИ .-Воронеж:,1986. С. 76 -78.

87. Лопатина Т.К. Иммуномодулирующее действие препаратов эубиоти-ков /Лопатина Т.К., Бляхер М.С., Николаенко В.Н. //Вестн. РАМН. М.: «Медицина», 1997. - № 3. - С. 30-34.

88. Лукин А.А. Защитная функция пептидных антибиотиков бацилл /Лукин-А.А. //Антибиотики и медицинская биотехнология.-1987.- № 7.- С. 538-541.

89. Малик Н.И. Ветеринарные пробиотические препараты /Малик Н.И., Панин А.Н. // Ветеринария. 2001. - № 1. - С. 46-51.

90. Малик Н.И. Новые пробиотические препараты ветеринарного назначения: Автореф. дис.докт. биол.наук: 16.00.03 / Н.И Малик; ВГНКИ.-М., 2002. 53 с.

91. Матвеев В.Е. Научные основы микробиологической технологии. Кинетика развития и инактивация микробных популяций, септика, масштабирование /Матвеев В.Е.- М.: Агропромиздат, 1985. 224 с.

92. Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков. -М.:МЗ СССР, 1983. 15 с.

93. Меджидов М.М. Состояние и перспективы развития производства микробиологических питательных сред /Меджидов М.М. //Актуальные вопросы разработки препаратов медицинской биотехнологии: Сб.науч.тр.- Махачкала, 1988. Ч. I. - С. 3-8.

94. Мечников И.И. Этюды оптимизма /Мечников И.И.- М.: Наука, 1988. -327 с.

95. ИЗ. Михайлова Н.А. Диагностика, профилактика и лечение гнойно-септических заболеваний лекарственными средствами, выпускаемыми НПО «Иммунопрепарат» /Михайлова Н.А., Никитенко В.И., Кузнецова Т.Н.- Уфа: НПО «Иммунопрепарат», 1993. С. 81-83.

96. Мишурнова Н.В. Антагонистические свойства препарата СТФ-1/56 относительно сальмонелл и кишечной палочки /Мишурнова Н.В., Киржаев Ф.С. //Ветеринария. 1988. - № 10. - С. 34-36.

97. Мишурнова Н.В. Современное представление о роли нормальной микрофлоры пищеварительного тракта /Мишурнова Н.В., Киржаев Ф.С. //Ветеринария. 1993. - №> 7 (6). - С. 30-33.

98. Молохова Е.И. Пробиотики на Российском рынке /Молохова Е.И. //Фармация. - 2000. - № 3. - С. 55-58.

99. Мосина JI. В. Распространение аэробных спорообразующих бактерий в почвах европейской части СССР /Мосина Л. В. // Изв. АН СССР, сер. «Биология» 1974. - № 2. - С. 283-286.

100. Мосичев М.С. Общая технология микробиологических производств /Мосичев М.С., Складнев А.А., Котов В.Б.-М.: Агропромиздат, 1982.- 185 с.

101. Неклюдов А.Д. Получение и очистка белковых гидролизатов /Неклюдов А.Д., Иванкин А.Н., Бердутина А.В. //Прикл. биохимия и микробиол.-2000-№ 4.- С.371-379.

102. Несчисляев В.А. Пробиотики: ретроспектива, проблемы и достижения научно-производственной практики НПО «Биомед» /Неклюдов А.Д., Иванкин А.Н., Бердутина А.В. //Журн. микробиол.-1998. № 2.- С. 100-102.

103. Никитенко В.И. Споробактерин новый препарат для лечения дис-бактериозов и гнойно-воспалительных процессов /Никитенко В.И., Горбунова Н.Н., Жигайлов А.В. //Дисбактериозы и эубиотики: Сб.научлр.- М.Д996. -С. 26-28.

104. Никитенко В.И. Некоторые новые данные о механизме действия спо-рообразующих пробиотиков /Никитенко В.И., Бородин М.В. //Актуальные вопросы военной и практической медицины. Оренбург, 2000. - с. 79-80.

105. Огарков В.И. Основные биотехнологические проблемы микробиологической промышленности /Огарков В.И. // Биотехнология.-1986.-№ 4.-С. 5.

106. Определитель бактерий Берджи //Под ред. Дж. Хоулта, Н.Крига, П.Спита, Дж.Стейли, С.Уильямса (9-е издание в 2-х томах) /Пер. с англ. под ред. Г.А. Заварзина.- М.: Мир, 1997 799 с.

107. Осадчая А.И. Стимуляция роста и спорообразование B.subtillis с оптимизацией углеводного питания при глубинном культивировании /Осадчая А.И., Кудрявцев В.А. //Прикл. биохимия и микробиол.- 1997.- Т.ЗЗ, № 3, С.321-324.

108. Осипова И.Г. Некоторые аспекты механизма защитного действия ко-либактерина и споровых эубиотиков и новые методы их контроля: Автореф. дис.канд. биол. наук: 16.00.03 /И.Г.Осипова М., 1997. - 25 с.

109. Осипова И.Г. Изучение безопасности бактерий рода Bacillus, составляющих основу некоторых пробиотиков /Осипова И.Г., Сорокулова И.Б. //Журн. микробиол., эпидемиологии. 1998. - № 6. - С. 68-71.

110. Орлова М.В. Антибактериальная активность Bacillus laterosporus /Орлова М.В., Смирнова Т.А., Шамшина Т.Н. //Биотехнология.-1995.-№ 1-2.-С. 23-26.

111. Павлюк Т.Д. Применение препарата биоспорин в комплексном лечении пародонтита, осложненного кандидозом /Павлюк Т.Д. //Новая стоматология (Киев). 1995. - № 3. - С. 59-60.

112. Панин А.Н. Иммунобиология и кишечная микрофлора /Панин А.Н., Малик Н.И., Малик Е.В.- М.: Аграрная наука, ИК «Родник», 1988. 48 с.

113. Панин А.С. Пробиотические препараты в ветеринарии /Панин А.С., Серых Н.Е. //Ветинформ. 1993.- № 2.- С. 9-10.

114. Парфенов А.И. Микробная флора кишечника и дисбактериоз /Парфенов А.И. // Рус.мед.журнал. 1998. - № 6 (18). - С. 1170-1173.

115. Пат. 1722502, МКИ5 А 61 К 39/02, 35/74. Препарат биоспорин для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний человека /В.В.Смирнов, С.Р.Резник, И.Б. Сорокулова (РФ).- 7 с.

116. Пат. 1839459, МКИ5 С 12 N 1/21. Штамм бактерий Bacillus subtilis, обладающий антивирусной и антибактериальной активностью /В.В.Смирнов, В.А.Белявская, А.А.Ильичев, И.Б. Сорокулова (РФ).- 4 с.

117. Пат. 2035185, МКИ6 А 61 К 35/66. Профилактический биопрепарат субалин /В.В.Смирнов, С.Р.Резник, И.Б.Сорокулова (РФ).- 5 е.: ил. 2.

118. Пермаков Н.И. Лечение телят профилакторного периода /Пермаков Н.И. // Ветеринария. 1995. - № 4.- С. 51.

119. Петровская В.Г. Микрофлора человека в норме и патологии /Петровская В.Г., Марко О.П. М.: Медицина, 1976. - 231 с.

120. Петров В.Ф. Получение природных биологических активных препаратов — новое направление исследований в НПО «Биомед» /Петров В.Ф., Сафонова Г.М. // Журн.микробиол. 1998. - № 2. - С. 95-98.

121. Перетц JL Г. Значение нормальной микрофлоры для организма человека /Перетц J1. Г. М.: Медицина, 1955. - 435 с.

122. Пирузян Л.Ф. Сапрофитная микрофлора в качестве продуцента биологически активных веществ для целей микробной сапротрофной фармакотерапии /Пирузян Л.Ф., Михайловский Е.М. //Изв. Академии наук. Сер. «Биология»-1992.-№ 6.-С. 860 869.

123. Платонов А.В. Производство препаратов для животноводства на основе микроорганизмов-симбионтов желудочно-кишечного тракта /Платонов А.В.- М.: ВНИИСЭНТИ, 1985. 44 с! ~~

124. Попова Ж.П. Новый пробиотик для животноводства /Попова Ж.П., Никонорова А.К. //Зоотехния. 1995. - № 11. - С. 21-22.

125. Проскурин Ю.Н. Пробиотические препараты для профилактики и лечения коров, больных маститом и новорожденных телят желудочно-кишечными заболеваниями: Автореф. дис. . канд. вет.наук: 16.00.03 / Ю.Н. Проскурин. М., 2000. - 25 с.

126. Подберезный В.В. Эффективность интрамаммарного применения пробиотика эндобактерина для лечения мастита у коров /Подберезный В.В., Париков В.А. //Акушерство, гинекол. и биотехн. размножения живот-ных:Сб.науч.тр. / ВЗВИ .- Воронеж, 1994. С. 253-254.

127. Полоцкий А.Е. Структурно-функциональные, селективные и эксплуатационные характеристики ультрафильтрационных полых волокон на основе ароматического полиамида /Полоцкий А.Е., Боризов Н.П. //Биотехнология.- 1990.- № б.- С. 50-51.

128. Полянская JI.M. Динамика численности и структуры популяции Bacillus sphaericus в почвах /Полянская JI.M., Добровольская Т.Г., Исаева С.В. //Биодинамика почв: Сб.науч.тр. /Таллин: Харку, 1988. С. 130-132.

129. Проворов Н.А. Генетико-эволюционные основы учения о симбиозе /Проворов Н.А. //Журн. общ. биол.- 2001.- Т. 62.- № 6.- С. 472-495.

130. Равилов А.З. Микробиологические среды /Равилов А.З., Гильмудинов Р.Я., Хусаинов М.Ш. Казань: ФЭН, 1999.- 398 С.

131. Раицкая В.И. Новые препараты для лечения и профилактики диареи телят /Раицкая В.И. //Ветеринария.-2001.-№ 5.-С. 14.

132. Регистр лекарственных средств России //Энциклопедия лекарств.- М.: РЛС, 2000/1999.- 1006 с.

133. Резник С.Р. Биологические свойства споровых аэробных бактерий, выделенных из организма человека и животных /Резник С.Р., Вьюницкая В.А., Сорокулова И.Б. //Фитонциды. Киев: Наукова думка, 1981. - С. 35-40.

134. Резник С.Р. Влияние перитонеального введения бактерий рода Bacillus на фагоцитарную активность лейкоцитов крови /Резник С.Р., Смирнов В.В., Волынец А.К. //Микробиол. журн. 1982. - № 4. - С. 51-54.

135. Резник С.Р. Ассоциированный препарат из живых микробных культур рода Bacillus /Резник С.Р., Харченко С.Н., Вьюницкая В.А. //VI съезд Укр. микробиол. об-ва: Сб.науч.тр. /Киев: Наукова думка, 1984. С. 92-93.

136. Резник С.Р. Некоторые биологические свойства бактерий рода Bacillus, выделенных из организма людей /Резник С.Р., Слабоспицкая А.Т., Смирнов В.В. //Микроб, журн. 1985. - Т. 47, № 3. - С. 53-59.

137. Резник С. Р. Гематологические и цитохимические показатели телят при даче препарата Бактерин-СЛ /Резник С. Р., Шуст И. И. //Биохимия сельскохозяйственных животных и продовольственная программа: Сб.науч.тр. Киев, 1989. - С. 25-27.

138. Самуйленко А.Я. Основы технологии производства ветеринарных биологических препаратов /Самуйленко А.Я., Рубан Е.А.- М.: Россельхозакадемия.- Т 1.- Т 2.- М.: РАСХН, 2000,- 781 с.

139. Сафонов Т.А. Пробиотики как фактор, стабилизирующий здоровье животных /Сафонов Т.А., Калинина Т.А., Романова В.П. //Ветеринария.-1992.-№7-8 (З).-С. 3-34.

140. Сидоров М.А. Определитель зоопатогенных микроорганизмов /Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федотов В.Б. //Справочник.- М.: Колос, 1995.450 с.

141. Сидоров М.А. Основы профилактики желудочно-кишечных заболеваний новорожденных животных /Сидоров М.А., Субботин В.В. //Ветеринария.-1998.-№ 1.- С. 3-6.

142. Сидоров М.А. Нормальная микрофлора животных и ее коррекция пробиотиками /Сидоров М.А., Субботин В.В. //Ветеринария. 2000. - № 11. -С. 17-22.

143. Скальский Н.Г. Биотехнологический потенциал консорциумов микроорганизмов в народном хозяйстве /Скальский Н.Г., Лях С.П.-М.:ВНИИПИ, 1990,- 198 с.

144. Скворцов А.Э. Технология приготовления таблетированной формы пробиотика «Биоспорин» /Скворцов А.Э., Грязнева Т.Н., Лиморенко А.П. и др. // Ветеринарная медицина,- Изд. «Агровет». 2002.- № 2.- С. 40.

145. Слабоспицкая А.Т. Гиалуронидазная активность споровых аэробных бактерий, выделенных из* различных экологических источников /Слабоспицкая А.Т. //Микробиол. журн. 1985.- Т. 47, № 4. - С. 71 - 74.

146. Слабоспицкая А.Т. Ферментативная активность бацилл, перспективных для включения в состав биопрепаратов /Слабоспицкая А.Т., Крымовская С.С., Резник С.Р. //Микробиол. журн. 1990. - Т. 52, № 1. - С. 9-14.

147. Смирнов В.В. Бактерии рода Bacillus продуценты антибиотиков /Смирнов В.В., Резник С.Р. //Проблемы изыскания и биотехнологии новых антибиотиков: Сб.науч.тр. - М.: Медицина, 1982. - С. 53 - 57.

148. Смирнов В.В. Методические рекомендации по выделению и идентификации бактерий рода Bacillus из организма человека и животных /Смирнов В.В., Резник СГР.ГСорокуловаИ.Б. Киев: БЙ, 1983. - 50 с.

149. Смирнов В.В. Рост и спорообразование Bacillus subtillis в различных условиях аэрации /Смирнов В.В., Осадчая А.И., Кудрявцев В.А. //Микробио-л.журн. 1993. - № 3. - С. 38-43.

150. Смирнов В.В. Современные представления о механизмах лечебно-профилактического действия пробиотиков из бактерий рода Bacillus /Смирнов В.В., Резник С.Р., Вьюницкая В.О. //Микробиол. журн.-1993. -№ 4. -С. 92-112.

151. Смирнов В.В. Влияние комплексного пробиотика споролакта на микробиоценоз кишечника теплокровных /Смирнов В.В., Резник С.Р., Вьюницкая В.А. //Микробиол. журн. 1995. - № 4. - С. 42-49.

152. Смирнов В.В. Пробиотики на основе живых культур микроорганизмов /Смирнов В.В., Коваленко Н.К. // Микробиол. журн.-2002.- № 4.-С.62-80.

153. Смирнова А.И. Дисбактериоз кишечника (Патогенез, клиника, диагностика и лечение): Учебно-методич. пособ. /Смирнова А.И., Золотарев Ю.В., Колеватых Е.П. Киров: КМИ, 1993.- 22 с.

154. Сорокулова И.Б. Перспективы применения бактерий рода Bacillus для конструирования новых биопрепаратов /Сорокулова И. Б. //Антибиотики ихимиотерапия. 1996. — № 10. - С. 13-15.

155. Сорокулова И.Б. Сравнительное изучение биологических свойств биоспорина и других коммерческих препаратов на основе бацилл /Сорокулова И.Б. //Микробиол. журн.- 1997.- № 6.- С. 43-49.

156. Сорокулова И.Б. Рекомбинантные пробиотики: проблемы и перспективы использования в медицине и ветеринарии /Сорокулова И.Б., Белявская В.А. // Вестник РАМН. 1997. - № 3. - С. 46-49.

157. Сорокулова И.Б. Изучение безопасности и реактогенности нового пробиотика субалина на добровольцах /Сорокулова И.Б. //Микробиол. журн.-1998.-№ 1.-С. 43-46.

158. Сорокулова И.Б. Влияние пробиотиков из бацилл на функциональную активность макрофагов /Сорокулова И.Б.//Антибиотики и химиотерапия.-1998.- №2.-С. 20-23.

159. Спасская Т.А. Повышение резистентности телят под влиянием про-биотических препаратов /Спасская Т.А. //Известия Тимирязевской с.-х. академии. М., 1998. - Вып. № 4. - С.169-179.

160. Субботин В.В. Профилактика желудочно-кишечных болезней новорожденных животных с симптомокомплексом диареи /Субботин В.В., Сидоров М.А. //Ветеринария. 2001. - № 4. - С. 3-7.

161. Степанов А.В. Иммуномодулирующее действие биоспорина /Степанов А.В., Мисников О.П., Василенко А.Ж. //Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения: Сб.науч.тр. / ВМА.- Санкт-Петербург, 1997.- С. 300-301.

162. Тарабукина Н.П. Морфологические, культуральные и биологические свойства Bacillus subtilis «ТНП-3» /Тарабукина Н.П. //Научное обеспечениеветеринарных проблем в животноводстве: Сб.науч.тр. Новосибирск, 2000. -С. 264-266.

163. Тараканов Б.В. Использование микробных препаратов и продуктов микробиологического синтеза в животноводстве /Тараканов Б.В.-М.: ВНИИТЭИагропром, 1987.-48 с.

164. Тараканов Б.В. Новые биопрепараты для ветеринарии /Тараканов Б.В., Николичева Т.А. //Ветеринария. 2000. - № 7. - С. 45-50.

165. Тараканов М.А. Механизм действия пробиотиков на микрофлору пищеварительного тракта и организм животных /Тараканов М.А. //Ветеринария.- 2000.-№5. С 32-33.

166. Темный Н.В. Профилактика и лечение при диарее новорожденных те-лят7ТемныйТ1 .В Г // В стер инария Г- 1990. МТ07-С.Т5- 17.

167. Тихонов И.В. Асептика в биотехнологии /Тихонов И.В., Воронин Е.С., Ковалев С.В., Грязнева Т.Н. и др. //Учебно-методическое пособие по биотехнологии. М.: МГАВМиБ.- 2000.- 20 с.

168. Тихонов И.В. Промышленное культивирование микроорганизмов /Тихонов И.В., Воронин Е.С., Ковалев С.В., Грязнева Т.Н. и др. //Учебно-методическое пособие по биотехнологии. М.: МГАВМиБ. - 2000.- 50 с.

169. Тихонов И.В. Выделение, концентрирование и очистка биопрепаратов /Тихонов И.В., Воронин Е.С., Ковалев С.В., Грязнева Т.Н. и др. //Учебно-методическое пособие.- М.: МГАВМиБ.- 2000.- 60 с.

170. Тихонов И.В. Способ повышения устойчивости к желудочно-кишечным инфекциям /Тихонов И.В., Грязнева Т.Н., Девришов Д.А. //Сб. науч. ст. IX междунар. ветеринар, конгресса.- М.: Ассоциация практикующих ветеринарных врачей. 2001.- С. 318-319.

171. Тихонов И.В. Проблемы и перспективы биотехнологии /Тихонов И.В. Гаврилов В.А. //Ветеринарная медицина.-М.: Агровет.- № 3.-2003.- С. 26-27.

172. Тихонов И.В. Совершенствование технологии производства пробиотика Биод-5 и методов его контроля /Тихонов И.В., Грязнева Т.Н., Лиморенко А.П. и др. //Ветеринарная медицина.- Изд. «Агровет».- 2004.- № 4.- С. 4041.

173. Тремасов М.Я. Изучение защитной роли пробиотиков при эшерихио-зе /Тремасов М.Я., Абдуллин А.Г. //Диагностика, лечение и профилактика инфекционных заболеваний. Биотехнология. Ветеринария: Сб.науч.тр / ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ.- Екатеринбург, 1999.- С. 247.

174. Тутов И.К. Основы биотехнологии ветеринарных препаратов: Учеб.пособ. /Тутов И.К., СитьковВ.И.- Ставрополь: СГСХА, 1997.- 251 с.

175. Урбан В.П. Болезни молодняка в промышленном животноводстве /Урбан В.П., Найманов ИЛ. М.: Колос, 1984. - 207 с.

176. Уша Б.В. Клиническое обследование животных /Уша Б.В., Фельд-штейн М.А.-М.: Агропромиздат, 1986. -303 с.

177. Чудновская И.В. Антивирусная активность пробиотиков из бацилл /Чудновская И.В., Рыбалко СЛ., Сорокулова И.Б. //Доповщ1 Н.ацюнальшм академн наук Украши. 1995. - № 2. - С. 124-126.

178. Шайхаманов М.Х. Профилактика диспепсии новорожденных телят /Шайхаманов М.Х., Грамолин В .П., Авакянц Б.М. //Ветеринария.-1994.-№ 3. -с. 21-23:

179. Шевелева С.А. Пробиотики, пребиотики и пробиотические продукты. Современное состояние вопроса /Шевелева С.А. //Вопр. питания.-1999. — № 2. С. 32-40.

180. Шендеров Б.А. Антимикробные препараты и нормальная микрофлора. Проблемы и возможные пути их решения /Шендеров Б.А. //Антибиотики и химиотерапия. 1988. - № 12. - С. 921-926.

181. Шендеров Б.А. Значение колонизационной резистентности в патогенезе инфекционных заболеваний /Шендеров Б.А.- М.: Высшая школа, 1994. -С. 112-121.

182. Шендеров Б.А. Пробиотики и функциональное питание /Шендеров Б.А., Манвелова М.А., Степанчук Ю.Б. //Антибиотики и химиотерапия — 1997.- №7.-С. 30-34.

183. Щербаков П.Н. Профилактика и лечение при желудочно-кишечных болезней телят /Щербаков П.Н., Гусев А.Г. //Ветеринария.- 2002.- № 3.- С. 15.

184. Шимкус А.Ю. Применение пробиотиков при выращивании телят /Шимкус А.Ю. //Актуал. вопросы зоотехн. науки и практики как основа улучшен, продуктив. качеств и здоровья с.-х. животных: Сб.науч.тр. М.: Колос, 2001.-С. 81-83.

185. Шубин Х.А. Бактериальные препараты при профилактике желудочно-кишечных болезней телят /Шубин Х.А., Шубина JT.A. //Ветеринария. -1994. -№ 3. С. 42-44.

186. Шубина JI.A. Профилактика желудочно-кишечных заболеваний ягнят бактериальными препаратами /Шубина Л.А., Гудков С.А. //Науч.-метод. конф.: Сб.науч.тр. / филиал Моск. СХА им. К.А. Тимирязева.- Ярославль, 1986.-С. 129-130.

187. Щербаков П.Н. Профилактика и-лечение при желудочно-кишечных и респираторных болезнях /Щербаков П.Н., Гусев A.F. // Ветеринария.-2002. -№ 3. С. 15-16.

188. Axelsson L. Lactobacillus reuteri, a member of the gut bacterial flora /Axelsson L. //Microb.Ecol.Health and Disease, 1989.-Vol.2.- № 2 pp. 466-468.

189. Bansal S. Probiotics in healyh and diseasts /Bansal S. //J. Assoc physicians.- 2001.- № 7.- P. 735-741.

190. Benedettini , G. Immunomodulation by Вacilllus subtilis spores /Benede-ttini G., Delibero C., Pierotti R; //Boll: 1st. Sieroter.Milan.-1983:- № 6:-p. 509-516.

191. Berg R.D. Probiotics, prebiotics, or conbiotics /Berg R.D: // Treds Micror biol- 1998.-Vol. 6.-p. 89-92.

192. Bonomi A. Probiotics in swine feeding: The use of Bacillus subtilis, and Bacillus licheniformis (experimental! contribution) /Bonomi A. // Riv. della Soc. Italianadi Scienza DellAlimentazione. — 1992. 21, N 4. - p. 481-499.

193. Bengmark S. Colonic food: prer and probiotics /Bengmark S. //Am; J Gastroenterol 2000; 95 (1) SuppI: S 5-7.

194. Bmer G.W. Biotherapeutic Agents and Infection Diseases /Bmer G.W., Me Farland L.W. Surawicz СМ.- Human Press. 1999: 316 p.

195. Cipradi G. Effect of an adjunative treatment with Bacillus subtilis for foodallergy /Cipradi G. // Chemioterapia.-1986.- 5, N6.- p. 408-410.

196. Coppi F. Results of treatment with Bacillus subtilis spores (Entero-germina) after antibiotic therapy in 95 patients with infection calculosis /Coppi F. // Chemotherapia. 1985.-4, № 6. - p. 467 - 470.

197. Dityatkovskaja E.G. Biosporin white allergietching dermatosis treatment /Dityatkovskaja E.G., Chaplinsky V.Y. //1-st Int. Conf. Immunoreabilitation "Re-abilitation oe Immune system". Dagomys, 1-5 Juli, 1992 / Tsk. 1992. P. 97.

198. Ducluzean R. Implantation and development of the gut flora in the newborn animal /Ducluzean R. // Ann. Rech. Vet. 1983. -v. 14. -p. 359-369.

199. Fais S. Lymphocyte activation by Bacillus subtilis spores /Fais S. // Boll. 1st. Sieroter. Milan. 1987. - 66, N 5. - P. 391-394.

200. Fadden K. Effect of fibre on bile acid metabolism by human faecal bacteria in batch and continuous culture /Fadden K., Hill MJ., Owen R.W. //Eur.J.Cancer Prevention. -1997. -N 6(2). -Pp.-175-194.

201. Famularo G. Stimulation of immunity by probiotics /Famularo G., Mretti

202. S., Marcelli S., De Simone C. //In Fuller (ed.), Probiotics 2/ Applications and practical aspects. Chapman and Hall/ New York. -1977. -p. 133-161.

203. Fiorini G. Bacillus subtilis selectively stimulates the synthesis of membrane bound and secreted IgA /Fiorini G., Cimminel lo C., Chianese R.// Chimi-oterapia. 1985.-4.-p. 3 10-315.

204. Fuller R. Bacteria associated with the gastric epithelium of neonatal pigs /Fuller R., BaiTOw P.A., Brooker B.E. // Appl. Environ. Microbiol., 1978, vol. 35, N 3. -p. -582-591.

205. Fuller R. History and development of probiotics /Fuller R. // Probiotics. The scientific basis. London: Chapman a. Hall. - 1992. - p. 29-53.

206. Fuller R. Probiotics in man and animals /Fuller R. // J. Appl. Bacter. -1989.-66 №5.-p. 365 -378.

207. Fuller R. Probiotics in human medicine /Fuller R. // Gut., 1991. 32 p.

208. Fuller R. Probiotics: the scientific basis /Fuller R. London: Chapman S Hall, 1992, p. 216-226.

209. Fuller R. Probiotics 2. Application and practical aspects. Introduction: Development of commercial preparations. Factors affecting the response /Fuller R.-1997.-153 p.

210. Fuller R. Probiotics and prebiotics: microtlora management for improved gut health /Fuller R., Gibson G.R. //Clin Microbiol Infect 1998: 4: 477-480.

211. Foran C. Bacillus secreted IgA /Foran C. //Chimioterapia.-1989.-6.-P. 218-231.

212. Gibson G.R. Dietary modulation of the human colonic microbiota: Introducing the concept of prebiotics /Gibson G.R., Robefroid M.B. //J. Nutr. 1995. -125,N6.-p. 1401-1412.

213. Gibson G.R. Oligosaccharides and prebiotics /Gibson G.R. // Petfood Fo-rum'96, Chicago, USA.- Chicago, 1996. p. 15-18.

214. Gibson G.R. Dietary modulation of the human gut microflora using the prebiotics oligofwtose and inulin /Gibson G.R. //J Nutr 1999; 129 (7) SuppI: 1438S-41S.

215. Gibson G.R. Aspects of in vitro and In vivo research approaches directed toward identifying probiotics and prebiotics for human use /Gibson G.R. Fuller R. //J. Nutr 2000: 130 (2) Suppl: 391S-395S.

216. Gissen A.S. Off probiotics, prebiotics and synbiotics /Gissen A.S.// ISS VRP'S Inc. Vit Res. Prod. Newsletters. USA. - 1995. - P. 111-117.

217. Goldin B.R. Probiotics for humans /Goldin B.R., Gorbach S.L. //In: Probiotics. The Scientific"Basis (Fuller, R., ed.), Chapman & Hall, London. -1992. -Ch. 13, p. 366.

218. Gordon J.I. Interactions between epithelial cells and bacteria /Gordon J.I., Hooper L.V., Bry 1., Midtvedt T, Falk P.G. //Science.-1997.-N 276.- P.-965.

219. Green D.H. Characterization of two Bacillus probiotics /Green D.H.// J. Appl. and Environ.Microbiol. 1999. - Sept. - P. 4288-4291.

220. Guida V. Importansia do Bacillus esporulados aerobios em gastroenterolo-gia e nutricao /Guida V., Guida R. // Ren. Brasil. Med. 1978. - 35, N 12. - P. 702707.

221. Guerina N.G., Neutra M.R. Mechanism of Bacterial Adherence /Guerina N.G., Neutra M.R. // Microecol. Therapy, 1984. - vol.14. - P. 466-467.

222. Gupta M. Lytic effect of Bacillus subtilis elastase on gram-positive and negative bacteria /Gupta M., Kaur M., Gupta K.G. // Indian .J. Exp. Biol.-1992.-30, N5.- P. 380-383.

223. Goldmann D.A. Bacterial colonization and infection in the neonate /Goldmann D.A. //Am J Med 1981; 70:417-22.

224. Haenal H. Aspecte der microokologiachen beziehungen des microorgan ismus /Haenal H. //Zbl. Bact. Abt. I. Ref. -1960. 176 (1). -p. 305.

225. Heimburger D.C. Diarrhoea with enteral feeding: Prospective reappraisal of putative causes /Heimburger D.C., Sockwell D.G., Geels W.J. //Nutrition.-1994.-N 10,-P. 392-396.

226. Huis H.J. Selection criteria for probiotic microorganisms /Huis H.J., Shortt C. //Gut flora and health — past, present and future. — London; New York: Roval Soc. Med. Press Limited. 1996. - P. 27-36.

227. Hatch R. C. Effect of adding Bacillus acidophilus to milk fed baby calves /Hatch R. C., Thomas R.O., Thayne W. V. // J.Dairy Sci.-1973.-56, N 4. P.682-687.

228. Jenny K. Biosurfactants from Bacillus licheniformis: structural analysis and characterization /Jenny K., Kappeli O., Fiechter A. //Appl. Microbiol. Bio------technol.-1991 .-36ЯР. 5^13^

229. Jorgensen J. H. Probiotika till svin. En litterfturoversing og en afprovning at 2 probiotikas effekt under forskellige produktionsformer /Jorgensen J. H. // Dansk Vet. Tidskr.-1988. 71.- P. 1211 -1221.

230. Jenny B.F. Perfomance and fecal flora of calves fed a B. subtilis cjncen-trate /Jenny B.F., Vandijk H.J., Collins J.A. //J.Dairy Sci. -1991.- N 6.- P.1968-1973.

231. Jiraphocakul S. Influence of dried B.subtilis cultura and antibiotics on per-formanct and intestinal microflora in turkeys /Jiraphocakul S. // Poultry Science. -1990.-69, N 11.-P. 1966-1973.

232. Jarvis W.R. The epidemiology of colonization, Infection Control and Nosocomial Colonization/Jarvis W.R. 1996; 17:47-52.

233. Kiyoe S. Preparation for lowering blood cholesterol /Kiyoe S., Suzuki H., Hirota I. // DSA. -1988. v. 50. - № 9. - p. 278.

234. Kim W. Purification and characterization of a fibrinolytic enzyme produced from Bacillus sp. strain CK 11-4 screened from Chungkook-Jang /Kim W., Choi Keehyun, Kim Y. //Appl. and Environ. Microbiol. 1996. - N 7. - P. 24822488.

235. Lawrence С. Production of interleukin-12 by murine macrophages in response to; bacterial peptidoglycan /Lawrence G., Nauciel G. // Infect. Immun.-1998;- 66, N10. -P. 447-449.

236. Landsudvalget for- svirn Bioplus 2B till smagrise:// Den rullende Af-profning af staid- og produktionssystemer.- Copenhagen, Meddelse, 1989.-P.162.

237. Lilley D.M. Probiotics: growth promoting factors produced by microorganisms /Lilley D.M., Stillwell R.J. // Science. 1965. - 147. - p. 747-748.

238. Lion А.В. Probiotics,/Lion А. В., Gumming R. В., Kent R. D. //Austral. Vet.- 1977.- 53.

239. Manachini P.L. Thermostable alkaline protease produced by Bacillus thermoruber a new species of Bacillus /Manachini P.L., Fortina M.G., Parini C. // Appl. Microbiol. Biotechnoi; - 1988. - 28,4/5.- P. 409-413. "" ~~~ "

240. Morishita Y. The1 effects of various dietary substances on the intestinal microflora /Morishita Y. // J.' Germfree Life Gnotobiol. 1991. - Vol. 21. - N. К - p. 344-346.

241. Mulder R.W. ■ Probiotics as a tool against Salmonella contamination /Mulder R.W. // World Poultry. 1991. - 7.- N 3. - p. 36-37.

242. Mc Farland L.V. Вiotherapeutic agents: boon or bane? /Мс Farland L.V. // MicrobiK EcoL Health and Disease.- 1994.-7, N1. P;585-586.

243. Mazza P. The use of Bacillus subtilis as ,an Antidiarrhoeal microorganism Mazza P. //Boll. Chem: Farm. -1994.-133,N:l-P.3-1&

244. Mc Tigue M.A. The alkaline amylase of the alkalophilic Bacillus sp. IMD 370 /Mc Tigue M.A., Kelly C.T., Doyle E.M., Fogarty W. //Enzyme and Microb. Technol: 1995. - 17, N 6. - P. 570-573.

245. Mendonca A.L. Bacillus spp. produtores de proteases: isolamento, carac-terizacao e melhoramento de B. cereus /Mendonca A.L., Mariano R.L.R., Araujo J.M.//Arg. biol. e tecnol. 1996. - 39, N 2. - P. 359-372.

246. Muscettola M. Plasma interferon-like activity in rabbits after oral administration of Bacillus subtilis spores /Muscettola M., Grasso G., Migliaccio P., Gallo V.C. //J. Chemother. 1991. - 3, Suppl. 3. - P. 130-132.

247. Muscettola M. Effect of Bacillus subtilis spores on interferon production /Muscettola M., Grasso G., Blach-Olszewska Z. // Pharmacological Research.-1992. 26, Suppl. 2. - P. 176-177.

248. Nosaki-Renard J. Induction d'interferon par Bacillus subtilis /Nosaki-Renard J. Ann Microbiol., 1978, 129 a, № 4, p. 525-542. ----

249. Nurmi E.V. Process For the production of a bacterial preparation for the prophylaxis of intestinal disturbances in poultry /Nurmi E.V., Schneits J.E., Makela P.H. // U.S. Patent, august 25. - 1987, N 4.689.226, p. 287-346.

250. Ozawa K. Effect of administration of Bacillus toyoi on intestinal flora /Ozawa K., Yokota H., Kimura M., Mitsuoka T. //Japan. J. Vet. Sci.-1981/-43, N 5,- P. 771-775.

251. Ogle R.B. Alternatives to low dose antibiotics in piglet feeds in Sweden /Ogle R.B., Inborr J. //38 th Meeting of the European Association for Animal Production. Commission on Pig Production. Portugal. - 1987. -Session 4. - P. 1-6.

252. Pelug W. Vitamin Вб biosynthese in Bacillus subtilis /Pelug W., Ligens F. // - Hoppe - Seyler's Z. Physiol. Chem. - 1978. - 359, № 5. - p. 559-570.

253. Pennington J.E. Bacillus species infections in patients with hematologic neonplasia /Pennington J.E., Gibbons N.D., Strobeck J.E., Simpson G.L.- JAMA. -1976.-238, №14.-p. 132.

254. Prokesova L. Effect of Bacillus firmus and other sporulating aerobic microorganisms on in vitro stimulation of human lymphocytis /Prokesova L., No-vakova M., Mara M. // Folia Microbiol. 1994. - 39. - p. 501-504.

255. Pollman D. S. Effects of microbial feed additives on performance of starterand growing-finishing pigs /Pollman D. S., Danielson D.M. //J.Anim.Sci.-1980.-51, N3.-P.577-581.

256. Pollman D.S. Probiotics in pig diets /Pollman D.S. //Recent Advances in Animal Nutrition.- Butterworth, London, 1986.- P.l93-205.

257. Roberfroid M.B. Prebiotics and probiotics: are they functional foods? /Roberfroid M.B. //Am J Clin Nutr 2000: 71(6) Suppl: 1682-87.

258. Rowland I.R. The effects of transgalactosylated oligosaccharides on gut flora metabolism in rats associated with a human faecal microflora /Rowland I.R., Tanaka R. // Appl Bac-teriol.- 1993: 74: 667-74.

259. Priest F.G. DNA homology in the genus Bacillus. In: Aerobic Endospore -form /Priest F.G. //Bact.: CI. and Identif. Symp., Cambridqe, Apr., 1979r London, 1981, p. 33-57.

260. Roffe C. Biotherapy for antibiotic-associated and other diarrhoeas /Roffe C.//J. Infect.-1996.-N32.-P. 1 10.

261. Simon L.L. Intestional microflora /Simon L.L., Lorbach S.L. // Med. Clin. North. Amer. -1982. v. 66. - p. 557 - 574.

262. Slabospitskaja A.T. Biosinthesis of enzymes by bacilli respective for production ofbiopreparations /Slabospitskaja A.T., Reznik S.R., Krymovskaja S.S. //1UMS. Congress: Bacterio-logy, Mycology. Osaka, 1990. - p. 92.

263. Su Li. Influence of a new living preparation Bacillus on mikrofloru of intestine of animals and function of immunity /Su Li, Zhang Zhihong, Xiao Xianzhi, Wanq Xiaomin // J. Wuhan.Univ. Natur. Sci. Ed. 1996. -42.-N 4. - p. 516-518.

264. Senna V. The intestinal microflora of infants: composition of fecal flora in breast-led and bottle-fed infants /Senna V., Sawada K., Mitsuoka T. //Microbiol. Immunol., 1984, P. 975-86.

265. Spreafico F. L'effetto immunostimolatore dell spore di B. subtilis: aspetti sperimentali /Spreafico F., Polentarutti N., Vecchi A. //Chemioter. Antimicrob.-1980.-4.- P. 259- 261.

266. Tan T.C. Activity of the enzyme system in thermally killed Bacillus cells

267. Tan T.C., Qian Z.R. // Enzyme and Microb. Technol. -996.-19, N 2. P. 150-156.

268. Tanaka R. Effect of administration TOS and B. breve 4006 on the human fecal flora /Tanaka R., Takayama H., Morotomi M. //Bifidobacteria microflora 1983; 2: p.17-24.

269. Tanaka R. Probiotics: prospects of use in opportunistic infections /Tanaka R.- Microbiol. Biochem. 1995.- № 7.- P. 123-127.

270. Thihole F. Effects of probiotiks /ThiholeF. // U.Zdravstv. Vesth.-1981.-Vol. 51.-P.3-5.

271. Thihole F. Fizioloski pomen bacteriemije Ljejundno microflora /Thihole F. //U. Zdravstv. Vesth. -1982. -51 № 1. -p.3-5.

272. Tournut J. Applications of probiotics to animal husbandry VTournut-//---

273. Rev. Sci.Tech. Off. Int. Epiz.-1989.-8, N 3.-551-556.

274. Tannock G.M. Mini review: a new tool for investigating the microbiological ecology of the gastrointestinal tract /Tannock G.M. //Microbial. Ecol. 1988. -15, N3.-p. 239-256.

275. Thach P.N. Le Bacillus subtilis en therapeutique et dans la prophilaxie /Thach P.N., Vu T.C., Nguen Т.Н. // Rev. Immunol. 1968. - 72, N 1/2. - p. 53-58.

276. Vanbelle M. New probiotiki and application of them in veterinary science and medicine /Vanbelle M. // Ann. Microbiol. 2000. - 140a, N 8. - P. 251-253.

277. Wei H. Bacillus cereus "Cereobiogen" as a growth promoter of Bifidobacterium in infantile diarrhoea therapy /Wei H., Kan E. //Recent advances in germfreeresearch. -Tokyo: Tokai Univ. press. 1981. - p. 475-480.

278. Wood T.N. Probiotics shown to change bacterial community structure in the avian gactrointestinal tract /Wood T.N. //J.Appl. and Environ. Microbiol.-1999.-Nov.-p. 134-138.

Информация о работе

Водолажская, Светлана Александровна
кандидата биологических наук
Щёлково, 2005
ВАК 03.00.23

Диссертация

Жидкая форма пробиотика Биод-5 и его эффективность при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы