Технология генотипирования на основе микросателлитного анализа в селекции рапса

Сатина, Татьяна Григорьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Технология генотипирования на основе микросателлитного анализа в селекции рапса
ВАК РФ 03.01.06, Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат диссертации по теме "Технология генотипирования на основе микросателлитного анализа в селекции рапса"

На правах рукописи

004611933

САТИНА ТАТЬЯНА ГРИГОРЬЕВНА

ТЕХНОЛОГИЯ ГЕНОТИПИРОВАНИЯ НА ОСНОВЕ МИКРОСАТЕЛЛИТНОГО АНАЛИЗА В СЕЛЕКЦИИ РАПСА (Brassica napus L.)

Специальность 03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2010

1 1 НОЯ 7010

004611933

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте сельскохозяйственной биотехнологии РАСХН (г. Москва) и Всероссийском научно-исследовательском институте рапса РАСХН (г. Липецк).

Научные руководители:

доктор биологических наук доктор сельскохозяйственных наук

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор доктор биологических наук

Шилов Илья Александрович Карпачев Владимир Владимирович

Морозов Сергей Юрьевич Соловьев Александр Александрович

Ведущая организация:

Всероссийский научно-исследовательский институт кормов им. В.Р. Вильямса.

Защита состоится <м» /г 2010 г. в ^ на заседании

диссертационного совета Д 006.027.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте сельскохозяйственной биотехнологии по адресу: 127550, г. Москва, ул. Тимирязевская, д. 42; тел.: (495) 976-65-44; факс: (495) 977-09-47; e-mail: iab@iab.ac.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института сельскохозяйственной биотехнологии РАСХН.

Автореферат разослан «_»_2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д 006.027.01

кандидат биологических наук /) // С.А. Меликова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Рапс (В. парт Ь.) является одной из самых востребованных масличных культур, как на российском, так и на мировом рынке. Рапс имеет более дешевую себестоимость возделывания, растет при относительно низкой температуре и может возделываться в севообороте с короткой ротацией. Это ценная кормовая культура, которая используется как в виде зеленых кормов, так и в виде шрота в комбикормах. Рапс является замечательным предшественником для других сельскохозяйственных культур, который улучшает агрофизический и фитосанитарный состав почвы. Рапсовую солому широко используют для сельскохозяйственных нужд и в целлюлозно-бумажной промышленности.

Современные селекционные программы направлены на выведение высокоурожайных сортов рапса с улучшенным соотношением жирных кислот (увеличение содержания олеиновой и линолевой кислот при уменьшении линоленовой кислоты максимум до 3%), а также крупносеменных сортов с повышенной масличностью, устойчивых к болезням и полеганию [Карпачёв,' 2005].

Основой любой селекционной программы является исходный материал. От степени разнообразия такого материала, его генетической изученности в решающей степени зависит успех селекционной работы. Естественное внутривидовое генетическое разнообразие рапса сравнительно невелико. Лучшие современные сорта рапса имеют очень узкую генетическую основу, так как в селекции на качество используют одни и те же источники низкого содержания эруковой кислоты и глюкозинолатов. В связи с этим необходимо вести тщательную оценку исходного материала по комплексу хозяйственно-ценных признаков.

Поэтому актуальной задачей в последнее время становится различение сортов рапса на генетическом уровне. Идентификация сортов является важнейшим этапом селекционного процесса. Она необходима для выявления желаемых генотипов из сложных естественных, сортовых и гибридных популяций. Особенно актуальна идентификация сортов в связи с интенсификацией селекции и семеноводства, требующих тщательного семенного контроля и оперативности. В условиях интенсивного земледелия селекционерам нужен такой исходный материал, который позволял бы получать ожидаемые результаты с _ наименьшими затратами труда и

времени. От степени разнообразия такого материала, его генетической изученности в решающей степени зависит успех селекционной работы.

Определяющими критериями сорта согласно требованиям Международного союза защиты сортов растений (UPOV) являются отличимость, однородность и стабильность (DUS), которые определяются рядом стандартизованных морфологических характеристик. Однако число таких признаков ограничено, и они не всегда стабильны, так как подвержены фенотипической изменчивости. Полевые методы определения трудоемки и требуют больших материальных затрат.

Принципиально новые возможности для сортовой идентификации и оценки сортовой чистоты семян открылись с появлением методов, основанных на применении ДНК-маркеров. Селекция на основе ДНК-маркеров позволит проводить идентификацию и отбор генотипов, минуя фенотипическую оценку, основываясь лишь на данных анализа ДНК. Поэтому в настоящее время большой интерес для селекции представляет разработка технологии генотипирования на основе анализа полиморфизма микросателлитов, позволяющей получить индивидуальную характеристику отдельного генотипа - ДНК-профиль.

Цель работы. Разработка технологии генотипирования сортов рапса на основе анализа полиморфизма микросателлитов с последующим применением в селекции рапса.

Для выполнения работы были поставлены следующие ЗАДАЧИ:

1. Разработать оптимальный набор праймеров для анализа микросателлитных локусов генома рапса.

2. Провести генетический анализ и составить «генетические паспорта» расширенной коллекции сортов рапса.

3. Оценить генетическую однородность сортов рапса отечественной и зарубежной селекции методом микросателлитного анализа и отобрать для дальнейшей селекции однородные родительские формы.

4. Оценить генетическую однородность полученных гибридов рапса методом микросателлитного анализа.

5. Исследовать передачу генетического материала родительских форм в гибриды. Научная новизна. Разработана универсальная технология генотипирования сортов рапса (В. napus) на основе анализа полиморфизма микросателлитов. На основании

проведенных исследований нами были определены 15 микросателлитных локусов, пригодных для различения и идентификации сортов рапса. С применением технологии микросателлитного анализа были получены уникальные генетические профили 18 однородных сортов рапса. Количество выявляемых аллелей в зависимости от сорта варьировало от 2 до 6 на локус. Впервые показана возможность контроля передачи генетического материала родительских форм (сортов В. парш Ь.) в гибриды первого поколения. На основе 6 сортов были получены гибриды и исследована передача генетического материала родительских форм в гибриды. В результате секвенирования полиморфных фрагментов ряда микросателлитных локусов установлено, что их полиморфизм определяется количеством тандемных повторов.

Практическая значимость работы. В результате совокупного анализа 15 микросателлитных локусов исследуемых сортов рапса было выявлено 53 дескриптора генетического разнообразия. Для каждого сорта получен уникальный генетический профиль, позволяющий осуществлять различение и идентификацию сортов рапса. Установлена степень генетического родства исследованных сортов, что является ценной информацией для селекции, особенно при отсутствии четких данных по родословной. Эти данные важны для поддержания и совершенствования коллекций сортов, а также могут использоваться для охраны авторских прав, сертификации семян и контроля подлинности сортового материала. Предлагаемая технология генотипирования рапса на основе микросателлитного анализа позволяет надежно различать сорта, выявлять генетическую однородность селекционного материала, осуществлять контроль передачи генетического материала от родительских форм в гибриды.

Таким образом, технология генотипирования на основе микросателлитного анализа может являться мощным инструментом для селекционеров, который позволит отбирать генетически однородный материал для скрещиваний и контролировать селекционную работу, что представляет особую важность для селекции перекрестноопыляемых растений, таких как рапс.

Публикации и апробация работы. По результатам диссертации опубликовано 4 печатные работы. Основные результаты исследований были представлены на Международном координационном совещании по рапсу «Научное обеспечение

отрасли рапсосеяния и пути реализации биологического потенциала рапса» (г. Липецк, 12 - 15 июля 2010 г.), Десятом юбилейном Международном форуме «Высокие технологии 21-го века» (г. Москва, 21-24 апреля 2009 г.), заседании Территориального координационного совета «Проблемы земледелия ЦЧЗ», (п. Каменная Степь, 29 мая 2009 г.), научно-практической конференции «Научное обеспечение агропромышленного комплекса Поволжья и сопредельных районов» (г. Пенза, 30 июня - 3 июля 2009 г.), IX молодежной научной конференции «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» (г. Москва, 8 апреля 2009 г.).

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, включающего 275 библиографических ссылок. Работа изложена на 147 страницах печатного текста, содержит 15 таблиц и 18 рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Материалы и методы исследования.

В работе использовали олигонуклеотиды, синтезированные ЗАО "Синтол" (г. Москва, Россия), дНТФ фирмы «Медиген» (Россия), ДНК-гюлимеразу ThermoStar, обеспечивающую «горячий старт» при проведении ПЦР, производства ВНИИСБ (лаб. Молекулярной диагностики и генно-инженерных конструкций, зав. лаб. Лунин В.Г.), эндонуклеазы рестрикции Msp I, £coRI, Т4 ДНК-лигазу и соответствующие буферные растворы фирмы MBI Fermentas (Литва).

Растительный материал был получен из коллекций Всероссийского НИИ рапса, Всероссийского НИИ растениеводства им. Н.И. Вавилова, Всероссийского НИИ кормов им. В.Р. Вильямса и Всероссийского НИИ масличных культур им. В.С. Пустовойта. Геномную ДНК выделяли из зеленых листьев проростков с помощью модифицированного СТАВ метода [Kidwell, Osborn, 2001].

Полимеразную цепную реакцию осуществляли с помощью локус-специфичных пар праймеров, представленных в Табл. 1. Реакции проводили в 25 мкл реакционной смеси, содержащей 20-50 нг ДНК, по 10 пмоль каждого из праймеров (один из праймеров был помечен флуоресцентным красителем Су5), буферный раствор, содержащий 100 мМ Трис-HCl (рН 8.3), 25 мМ MgCl2, 500 мМ КС1, 400 мкМ каждого

дезоксинуклеозидтрифосфата и 1 ед. ДНК-полимеразы ThermoStar. Активация термостабилыюй ДНК-полимеразы происходила в результате экспозиции реакционной смеси при 95 °С в течение 10 мин перед проведением ПЦР. Амплификация осуществлялась при следующих температурных условиях: 1 цикл: 95 °С - 10 мин, 30 циклов: 94 °С - 30 сек, Тотж - 30 сек, 72 °С - 30 сек, 1 цикл: 72 °С - 5 мин. Температура отжига праймеров (Тотж) указана в Табл. 1. Для амплификации использовали термоциклеры «Mastercycler gradient» фирмы «Eppendorf» (Германия), GeneAmp PCR System 2400 фирмы «Perkin Elmer» (США) и «Терцик» фирмы «ДНК-технология» (Россия).

Анализ флуоресцентно-меченых ПЦР-фрагментов проводили методом электрофореза в денатурирующих условиях с помощью автоматического анализатора ALFexpress II Amersham Biosciences (США). Полученные данные анализировали с помощью пакета прикладных программ ALFwin Software Fragment Analyzer.

Амплифицированные фрагменты ДНК клонировали в состав вектора pGEM-T Easy (Promega, США). Секвенирование фрагментов ДНК осуществляли по методу Сэнгера с использованием автоматического анализатора ALFexpress II Amersham Biosciences (США).

Для множественного выравнивания нуклеотидных последовательностей использовали программы ClustalW и GenDoc, для построения дендрограмм использовали пакет прикладных программ TREECON [Van de Peer, de Wachter, 1994].

2. Исследование полиморфизма микросателлитных локусов рапса.

При создании системы маркеров на основе микросателлитных локусов ДНК первоначальным этапом работы является проведение предварительных экспериментов по оптимизации методики ПЦР-анализа.

Выбор специфического фрагмента и оптимизация праймеров играет важнейшую роль в специфичности проведения амплификации, что сказывается на качестве проведения анализа.

В последнее время количество доступных праймеров к микросателлитным локусам Brassica значительно увеличилось. В международной базе данных Brassica Microsatellite Information Exchange (http://wvyw.brassica.info/ ssr/SSRinfo.htm) представлено 628 пар праймеров к фланкирующим областям микросателлитных локусов. Поскольку различие длин аллелей микросателлитного локуса определяется

главным образом числом повторяющихся единиц, представляющих собой ди-, три-, тетра-, пента- и гексануклеотиды, то при выборе праймеров для первичного исследования мы учитывали то обстоятельство, чтобы амплифицируемые фрагменты были небольшой длины (не более 300 и.н.). В этом случае повышается надежность идентификации аллельных вариантов, различающихся небольшим количеством повторов. Кроме того, для исследования отбирались те микросателлитные локусы, которые проявляли наибольший полиморфизм (большое аллельное разнообразие).

На основе перечисленных критериев для исследования полиморфизма микросателлитных локусов рапса первоначально была отобрана 31 пара праймеров.

Следующим этапом работы являлось исследование возможности использования отобранных пар праймеров для анализа генетического разнообразия сортов рапса.

На рис. 1 в качестве примера представлены электрофореграммы разделения ПЦР-фрагментов, полученных в результате амплификации с парами праймеров Bna.M.009, Впа.М.002, Впа.М.001, Впа.М.006, Впа.М.005 и Впа.М.007, демонстрирующие полиморфизм между сортами рапса.

По данным парам праймеров для каждого исследуемого сорта выявлен определенный набор фрагментов, отличающий его от других сортов.

Пара праймеров Впа.М.009 (рис. 1, А) обнаруживает полиморфизм у сортов рапса Магнум (3) и СНК-198 (13). Данная пара праймеров позволяет выявлять 4 аллеля на локус, показывает наличие 6 вариантов генотипов. Электрофореграмма разделения ПЦР-фрагментов, полученных при амплификации с парой праймеров Впа.М.002 (рис. 1, В), иллюстрирует пример значительного внутрисортового полиморфизма. С помощью данной пары праймеров можно различить сорта Kariath (2), Магнум (3), Ратник (12), Зян-Си (14), Ole (18) и Hja 81733 (15). Полиморфизм между сортами Futura (1), Kariath (2), Магнум (3), Lisora (10) и Ole (18) выявляется в результате амплификации пары праймеров Впа.М.005 (рис. 1, Е).

По результатам проведенного нами микросателлитного анализа сортов рапса было отобрано 15 пар праймеров (Табл. 1), позволяющих выявлять полиморфизм между сортами. Данные пары праймеров позволяют выявлять от 2 до 6 аллелей на локус, обнаруживают наличие от 4 до 9 вариантов генотипов. Диапазон длин получаемых фрагментов составляет от 100 до 310 п.н.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 И 12 13 14 15 16 17 18 19 20

Рис. 1. Электрофореграммы разделения в 8 %-ном полиакриламидном геле ПЦР-фрагментов, полученных в результате амплификации с парами праймеров А - Впа.М.009, В -Впа.М.002, С - Впа.М.001, D - Bna.M.006, Е - Bna.M.005, F - Впа.М.007. В качестве матриц для ПЦР использовали образцы ДНК растений В. napus: Futura (1), Kariath (2), Магнум (3), Лизонна (4), PR-4451 (5), Trailblaiser (6), PR-4051 (7), LG 3260 (8), Hudson (9), Lisora (10), B. napus 1096 (11), Ратник (12), CHK-198 (13), Зян-Си (14), Hja 81733 (15), CTC-7 (16), Nenn 20 (17), Ole (18), Janetzki (19). Дорожка 20 - маркер молекулярной массы.

Табл. 1. Праймеры для генотипирования сортов рапса.

№ Название пары праймеров Последовательности праймеров т отжига °С Диапазон длин ПЦР-фрагментов , п.н. Колич ество обнар уженн ых аплеле й

1 Впа.М.001 F-AGCCTTGTTGCTTTTCAACG R-AGTGAATCGATGATCTCGCC 55 150-180 3

2 Впа.М.002 F-ACATTCTTGGATCTTGATTCG R-AAAGGTCAAGTCCTTCCTTCG 53 110-180 6

3 Впа.М.003 F-TGCAACGAAAAAGGATCAGC R-TGCTAATGGAGCAATAGTGATTCC 53 160-180 2

4 Впа.М.004 F-ATACTCGGGATAGGTGTGCG R-CATGTGGCAATCCTACATTTAC 57 100-120 3

5 Впа.М.005 F-GTTGCGGCGAAACAGAGAAG R-GAGTAGGCGATCAAACCGAG 57 140-160 3

6 Впа.М.ООб F-TGGGTAAGTAACTGTGGTGGC R-AGAGTTCGCATACTCTGGAGC 55 170-190 3

7 Впа.М.007 F-ACAGCAAGGATGTGTTGACG R-GATGAGCCTCTGGTTCAAGC 55 240-295 6

8 Впа.М.008 F-ACCTCCTGCAGATTCGTGTC R-GCTGACCTTTCTTACCGCTC 57 150-165 3

9 Впа.М.009 F-TGGTGGCTTGAGATTAGTTC R-ACTCGAAGCCTAATGAAAAG 51 140-160 4

10 Впа.М.ОЮ F-AGGACACCAGGCACCATATA R-CATTGTTGTCTTGGGAGAGC 55 100-150 4

11 Впа.М.011 F-GGTCCATTCCTTTTTGCATCTG R-CATGGCAAGGGGTAACAAACAT 55 140-170 6

12 Впа.М.012 F-TCGGATTTGCATGTTCCTGACT R-CCGATACACAACCAGCCAACTC 59 195-210 3

13 Впа.М.013 F-GGATCAGTTATCTGCACCACAA R-TCGGAATTGGATAAGAATTCAA 59 110-140 2

14 Впа.М.014 F-GCGATGTTTTTTCTTCAGTGTC R-TTAATCCCTACCCACAATTTCC 55 300-310 3

15 Впа.М.015 F-AACTTTGCTTCCACTGATTTT R-TTGCTTAACGCTAAATCCATAT 53 160-180 2

3. Оценка генетической однородности сортов рапса.

Одним из критериев охраноспособности сорта является однородность по методики на ООС [Закон РФ «О селекционных достижениях» 1995]. Растения сорта должны быть достаточно однородны по своим признакам с учетом отдельных отклонений, которые могут иметь место в связи с особенностями размножения.

Поэтому важным этапом нашей работы был анализ генетической однородности коллекции сортов рапса отечественной и зарубежной селекции. У всех сортов (Kariath, Магнум, PR-4451, PR-4051, Lisora) внутрисортовой полиморфизм отсутствовал по всем локусам (рис. 2.). А сорт Futura по 3 локусам оказался неоднороден, что свидетельствует о его внутрисортовом полиморфизме. Индивидуальные растения в пределах одного сорта имеют

Рис. 2. Электрофореграмма разделения в 8%-ном ПААГе продуктов ПЦР, полученных по 3 парам праймеров: А- Впа.М.014, В- Впа.М.006, С- Впа.М.005. М-маркер молекулярной массы (50-500 п.н.); 1-Futura; 2-Kariath; З-Магнум; 4-PR-4451; 5- PR-4051; 6-Lisora.

одинаковые генотипы, но при этом каждый сорт имеет индивидуальный генетический профиль, отличающий его от других сортов.

В результате микросателлитного анализа с помощью отобранных 15 пар праймеров было установлено, что из 79 проверенных сортов рапса отечественной и иностранной селекции, только 18 являются однородными (Табл. 2).

Табл. 2. Список однородных сортов рапса.

№ п/п Наименование Происхождение

1 Kariath Германия

2 Лизонна

3 Lisora

4 Ole Швеция

5 СТС-7 Бразилия

6 Зян-Си Китай

7 Магнум Канада

8 PR-4451

9 Trailblazer

10 PR-4051

11 LG 3260

12 Hudson

13 В. napus 1096

14 Hja 81733 Финляндия

15 Nerin 20 Индия

16 Janetzki (озимый рапс) Чехословакия

17 CHK-198 Россия

18 Ратник

4. Установление родственных взаимосвязей мевду сортами рапса.

В микросателлитных профилях, получаемых по каждой паре праймеров, каждый аллель с известной молекулярной массой можно рассматривать как дескриптор генетического разнообразия. Для различения отдельных форм растений дескрипторов, выявляемых по одному локусу, часто оказывается недостаточно, так как в пределах вида генотипы повторяются (рис. 1 - А, дорожки 1, 6, 8, 11 и 17), поскольку в создании сортов принимают участие одни источники низкого содержания эруковой кислоты и глюкозинолатов. Выявленный в данном исследовании полиморфизм определяется частотой встречаемости аллелей у сортов рапса. Микросателлитный анализ всей панели локусов позволяет получить набор дескрипторов, уникальный для каждого сорта, на основе которого может быть составлен индивидуальный «генетический паспорт». Полученная информация о наличии/отсутствии каждого дескриптора может быть представлена в графической

форме, в качестве набора аллелей всех локусов или в математической форме, в виде матрицы, представляющей совокупный цифровой профиль дескрипторов, выявленных по всем исследуемым локусам, где 1 означает наличие фрагмента в геноме, а 0 - его отсутствие. В данной работе для исследуемого спектра видов с использованием 15 пар праймеров было выявлено 53 дескриптора генетического разнообразия. На основе полученных дескрипторов была создана матрица, которую вводили в программу ТКЕЕССЖ для расчета генетических расстояний между генотипами в соответствии с алгоритмом, предложенным N01 и (1979). Далее на основе полученной матрицы генетических расстояний проводили кластерный анализ, используя алгоритм и РОМ А [ЗпеаЛ, 1973].

Магнум 01е

УБОга

Ща 81733

Иепп 20

Зян-Си

Ратник

\ / - \ /

\ \ / \\ /

\/ г"

СНК-198

/ \ у-

В. парив 1096

IX 3260 Нш^оп Тга11Ыа15ег

Капай

СТС-7 / Р11-4051

РЯ-4451 Лизонна

1апе1г1а

Рис. 3. Оценка родства между сортами.

Результаты кластерного анализа показали родство между сортами (рис. 3), что позволяет различать озимые формы рапса от яровых. Все сорта кластеризовались на две группы, что в целом соответствовало их происхождению.

5. Паспортизация сортов рапса на основе микросателлитного анализа.

Для изученных сортов рапса были получены уникальные наборы аллелей и составлены молекулярно-генетические паспорта (табл. 3). Цифрами был обозначен код локуса, а нижний индекс - аллельное состояние данного локуса.

Табл. 3. Формулы сортов рапса.

Сорт Формула*

Kariath 12132226324,4352536,6372738,82931041121 1412213,143152

Магнум 1,132,243,32435,5361627,728,829,94102112114115116122132142151

Лизонна 11122,253,3243526,6263758,829310211211411511612213,142143152

PR-4451 1,122,253,324352536,62758,829,9210211211411511612213,142152

Trailblaiser 1,1з2,22253,324з52б1б2бз727з8,8з9210211211.41Ы1б12213214215,

PR-4051 1,121321253,32435,536,626372738,82839,9210211411511612213,14215,152

LG 3260 1|Ь2,25324з52б,б2727з8,839210з1121141Ы1б122132142151

Hudson 11132,2531324352536,626372738,839,921021 ы 1411511б12213214215,

Lisora Iil22i253i32435i6i6372738,829293l0,103l04ll4ll5ll6l2il3il4il5|152

В. napus 1096 111221253,324з525з6,6з727з818з9210з1 lil I2II411612,132142151

Ратник 1,122,222з25324з52б, 626з727з758,83931021041121 1 з П 511 б 12313214215,

СНК-198 1,122,253,324352536,626372758,829410^11,1121Ы 1б12213214215,

Зян-Си 1,122,222331324з525з6,6372768,82931021Ы Ы Ы1612212313214215,

Hja 81733 1,132,233243526,6372768,829,9210211211411511612,13,142152

СТС-7 1,121з21253132424з525з6,6з72748,828з9|9з104112114115Пб12212з13,14з152

Nerin 20 1,122,253,324з5,6,6з72758,83921 0210з112114115Пб12з13,14з152

Ole 11132,263,324351526,6372758,8283919210211211411511612212313214115,

Janetzki 111321222532435,536,627,727481839,9310110411211411511612112313214,151

'Примечание: код локуса 1- Впа.М.001, 2- Впа.М.002, 3- Впа.М.ООЗ, 4- Впа.М.004, 5-Впа.М.005, 6- Впа.М.006, 7- Впа.М.007, 8- Впа.М.008, 9- Впа.М.009, 10- Впа.М.ОЮ, 11-Впа.М.011, 12- Впа.М.012, 13-Впа.М.013, 14-Впа.М.014, 15-Впа.М.015.

Для всех выявленных аллелей по каждому локусу были вычислены частоты их встречаемости в изученной выборке сортов (рис. 4 и 5).

1ПП г и 1 и щ И)

90 ~ Я' 80 - | 70« 60 -а а- 50 т о ® 40 - Я о 30 - ¿3 20 -10 - У4 И 7< 89

17 7 2 7; 72 |

>1 V

14 1 4

!8 3 I !

17 1 Р

5 1 В 1 1: - 1

3 ЕЕ гел( 1 ;;

! 2 3 4 Ал, 1 1 6 7 8

Рис. 4. Частота встречаемости аллелей микросателлитных локусов 1- Впа.М.001, 2-Впа.М.002, 3- Впа.М.ООЗ, 4- Впа.М.004, 5- Впа.М.005, 6- Впа.М.006, 7- Впа.М.007, 8-Впа.М.008.

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

о 4и

4 5

Аллели

Рис. 5. Частота встречаемости аллелей микросателлитных локусов 1- Впа.М.009, 2-Впа.М.ОЮ, 3- Впа.М.011, 4- Впа.М.012, 5 - Впа.М.013, 6- Впа.М.014, 7- Впа.М.015 у однородных сортов рапса.

У четырех локусов Впа.М.ООЗ, Впа.М.004, Впа.М.006, Впа.М.008 выявлялись аллели с частотой встречаемости 100% (аллели - 32, 43, 6| и 81). Это может свидетельствовать об относительной генетической близости сортов рапса, что, по-

видимому, является следствием того, что сорта создавались на основе небольшого числа исходных популяций.

6. Оценка генетической однородности гибридов рапса, полученных на основе однородных и неоднородных сортов.

Возможность идентификации гибридов по микросателлитам определяется тем, что в соответствии с общей закономерностью наследования признаков электрофоретический спектр гибрида F) должен включать компоненты обеих родительских форм [Конарев 1993]. Микросателлитные маркеры позволяют легко выявить гибридность, потому что они имеют кодоминантный тип наследования.

п.н. 150

PR-4451 х Магнум Ml 2 3 4 5 6 7

п.н.

Магнум х Futura М 1 2 345 678

150

300

150

Рис. 6. - Электрофореграммы разделения в 8%-ном ПААГе продуктов ПЦР, полученных по парам праймеров: А - Впа.М.005, Б - Впа.М.006, В - Впа.М.014, Г -Впа.М.015, Д- Bna.M.009. I - 1 - Магнум; 2 - PR-4451; 3, 4, 5,6,7- РЛ-4451хМагнум; П 1, 2 - Futura; 3 - Магнум, 4, 5, 6, 7, 8-MarHyM*Futura.

На основании результатов анализа генетической однородности сортов в качестве родительских форм для гибридизации были отобраны 6 сортов рапса: 5 однородных -Lisora, Kariath, Магнум, PR-445, PR-4051 и 1 гетерогенный - Futura (Рис. 2). Было получено 15 гибридных комбинаций, которые проанализировали по 15 отобранным парам праймеров.

На рис. 6 приведен анализ генетической однородности гибридов F] PR-445 I*Магнум, полученных на основе однородных родительских форм (рис. 6 - I). В

генотипах гибридных образцов, полученных в результате скрещивания однородных родительских форм, аллели обоих родителей кодоминантно сочетаются. Гибрид PR-4451><Магнум (рис. 6-1, дорожки 3, 4, 5, 6, 7) сочетает аллели родительских форм Магнум (рис. 6-1, дорожка 1) и PR-4451 (рис. 6-1, дорожка 2).Индивидуальные растения каждого гибрида имеют одинаковые генотипы, но при этом гибриды имеют индивидуальный генетический профиль, отличающий его от других гибридов и родительских форм.

В случае гетерогенности одной из исходных форм в F, - поколении гибрида MarnyMxFutura наблюдается не один, а несколько вариантов генотипов, поскольку сорт Futura (рис. 6 - II дорожки 1, 2) имеет минимум два варианта генотипов по каждому локусу.

Таким образом, главным условием успешной идентификации гибрида является однородность родительских пар по микросателлитным спектрам. Отобранные 15 пар праймеров можно использовать для определения гибридности при создании гибридов рапса.

7. Исследование передачи генетического материала родительских форм в

гибриды.

Для исследования передачи генетического материала родительских форм в гибриды были установлены первичные структуры фрагментов, выявленных в результате амплификации с парой праймеров Впа.М.005 (рис. 6).

В геноме родительской формы Магнум с помощью пары праймеров Впа.М.005 выявлены фрагменты длиной 141 и 162 п.н. (рис. 7А, дорожка 1). В геноме другой родительской формы PR-4451 обнаружены фрагменты длиной 156 и 168 п.н (рис. 7А, дорожка 2). В геноме гибрида PR-4451xMarHyM сочетаются фрагменты длиной 141, 156, 162 и 168 п.н.

В результате секвенирования фрагментов локуса Olli-Gl 1, интрогрессирующих из родительских форм в гибриды, было установлено, что исследуемые фрагменты включают вариабельные тринуклеотидные повторы (CCN)n. Полиморфизм локуса Olll-Gll определяется исключительно числом микросателлитных повторов (Табл. 4). Выравнивание нуклеотидных последовательностей фрагментов локуса Oll 1-Gl 1 показало, что первичная структура

Магнум-141

П РЯ-4451х Магнум-141

РК-4451-156

П РЯ-4451*Магнум-156

Магнум-162

Р1 РЯ-4451 ^Магнум-162

РЯ-4451-168

К1 РЯ-445 1х Магнум-168

Магнум-141

Р1 РЯ-4451*Магнум-141

РИ-4451-156

Р1 РЯ-4451* Магнум-156

Магнум-162

П РЯ-445 1 хМагнум-162

РЯ-4451-168

П Р11-4451хМагнум-168

РК-4451х Магнум 1 2 3 4 5 6 7

162 п.н. 141 п.н.

168 п.н. 15 6 п.н.

СТТйСвССвАААСАОАОААесСТТТСТССАССАТТССТСТСбАСАСССАСТТССАСТТСССТТТСТТСТССААСАССССТ-СТТвССССвАААСАвАСААСССТТТСТССАССАТТССТСТССАСАСССАСТТССАСТТСССТТТСТТСТССААСАССССТ-СТТССССССАААСАбАвААСССТТТСТССАССАТТССТСТССАСАСССАСТТССАСТТСССТТТСТТСТССААСАССССТ-ОТТССввСОАААСАеАСААОССТТТСТССАССАТТССТСТССАСАСССАСТТССАСТТСССТТТСТТСТССААСАССССТ-СТТССООСвАААСАеАвААСССТТТСТССАССАТТССТСТССАСАСССАСТТССАСТТСССТТТСТТСТССААСАССССТ-СТТСССССбАААСАСАСААСССТТТСТССАССАТТССТСТССАСАССЗАСТТССАСТТСССТТТСТТСТССААСАССССТ-ОТТСССвСбАААСАвАОААвССТТТСТССАССАТТССТСТСеАСАССОАСТТССАСТТСССТТТСТТСТбСААСАССССТ-вТТСССОСвАААСАСАвААСССТТТСТССАССАТТОСТСТСОАСАССОАСТТССАСТТСССТТТСТТСТССААСАССССТ-

ССАСССССВССАССеСССССАССА---------------------------СТСАТТТТТТТТТТССССТССетТТОАТССССТАСТС

ССАССвСССССАССвССЕССАССА---------------------------СТОАТТТТТТТТТТеСССТСейТТТвАТССССТАСТС

ССТСССССвССвССОСССССАССАССАССАССвСССССе------------СТСАТТТТТТТТТТССССТСбОТТТСАТССССТАСТС

ССТССеСССССвССвССвССАССАССАССАССеСССССв------------СТСАТТТТТТТТТТССССТССОТТТСАТССССТАСТС

ССТССТСССССОССЗССеСССССАССАССТССТСССССССССССС------СТСАТТТТТТТТТТвСССТСССТТТСАТСОССТАСТС

ССТССТССеССОССвССеСССССАССАССТССТССОССеСССССв------СТСАТТТТТТТТТТбОССТСССТТТеАТСОССТАСТС

ССвССОССОСССССАССАССАССАСССССОССАССОССВСССССОССОССССТСАТТТТТТТТТТСОССТСеОТТТОАТСеССТАСТС ССОССОССесСвССАССАССАССАСССССОССАССССССССССССССвССвСТОАТТТТТТТТТТСОССТССОТТТОАТССССТАСТС

Рис. 7. А. - Электрофореграмма разделения в 8%-ном ПААГ продуктов ПЦР, полученных по паре праймеров Впа.М.005. Б - Первичная структура аллелей локуса 0111 -011, передающихся из родительских форм Магнум и РЯ-4451 в гибрид РЯ-445 IхМагнум.

фрагментов ДНК гибрида идентична фрагментам ДНК соответствующей длины родительских форм (рис. 7Б).

Табл. 4. Формулы микросателлитных повторов сортов рапса Магнум, РЯ-4451 и их гибридов РЯ-4451 х Магнум в локусе 0111-в 11.

Гибриды Н Длина фрагмента, ii.ii. Мотив Родительские формы

РК-4451хМагнум 141 (СС1Ч)8 Магнум

162 (СС1Ч)15

156 (сачь Р11-4451

168 (ССЛ),7

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Разработанная технология генотипирования на основе микросателлитного анализа позволяет надежно различать сорта рапса, выявлять генетическую однородность селекционного материала и осуществлять контроль передачи генетического материала от родительских форм в гибриды. Технология предназначена для решения таких селекционных задач, как определение однородности исходного материала для селекции, подбор родительских пар для скрещивания, контроль гибридности, регистрация новых сортов, контроль генетической подлинности сортов и защита авторских прав селекционеров.

Предлагаемая технология микросателлитного анализа сортов рапса разработана на основе современных методологических подходов, позволяющих значительно ускорить скрининг большого числа растительных образцов и повысить воспроизводимость результатов. В результате проведенной работы нами был отобран ряд информативных микросателлитных локусов для надежного различения сортов рапса и оптимизированы условия их амплификации.

Разработанные микросателлитные маркеры, позволяющие отслеживать передачу генетического материала родительских форм в гибриды, рекомендуется использовать в селекции рапса.

выводы

1. Разработана технология генотипирования сортов рапса (В. napus) на основе анализа полиморфизма микросателлитов. По результатам анализа 79 генотипов предложен оптимальный набор из 15 пар праймеров для генотипирования сортов рапса.

2. С помощью микросателлитного анализа проведена оценка генетической однородности коллекции сортов рапса отечественной и зарубежной селекции. Из 79 исследованных сортов в качестве родительских форм отобраны 18 однородных сортов для дальнейшей селекции.

3. Показано, что технология микросателлитного анализа позволяет осуществлять контроль генетической однородности гибридов рапса. С помощью микросателлитного анализа было отобрано 7 однородных гибридных комбинаций.

4. Установлено, что предлагаемая технология микросателлитного анализа позволяет осуществлять контроль передачи генетического материала родительских форм в гибриды при межсортовых скрещиваниях.

5. В результате анализа первичной структуры ряда микросателлитных локусов установлено, что их полиморфизм определяется количеством тандемных повторов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сатина Т.Г.. Анискина Ю.В., Карпачев В.В., Харченко П.Н., Шилов И.А. Различение и идентификация сортов рапса методом микросателлитного анализа//Доклады РАСХН, 2010. № 1. С. 11 - 13.

2. Сатина Т.Г., Анискина Ю.В., Карпачев В.В., Харченко П.Н., Шилов И.А. Генетический анализ однородности сортов и гибридов рапса и контроль наследования гибридами генетического материала родительских форм // Доклады РАСХН, 2010. № 6. С. 15 -19.

3. Сатина Т.Г., Анискина Ю.В., Карпачев В.В., Харченко П.Н., Шилов И.А. Генетическая паспортизация коллекции сортов ярового рапса на основе анализа полиморфизма микросателлитов // Материалы конференции Десятого юбилейного Международного форума «Высокие технологии 21-го века», Москва, 21 - 24 апреля 2009. С. 281 - 283.

4. Сатина Т.Г., Анискина Ю.В., Карпачев В.В., Харченко П.Н., Шилов И.А. Анализ реципрокных гибридов рапса с помощью микросателлитного анализа // Сб. докладов Международного координационного совещания по рапсу «Научное обеспечение отрасли рапсосеяния и пути реализации биологического потенциала рапса», г. Липецк, 12-15 июля 2010 г., С. 93 - 95.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Сатина, Татьяна Григорьевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Рапс как важная сельскохозяйственная культура и современные подходы в селекции рапса (литературный обзор).

1.1. Народнохозяйственное значение и распространение рапса (Brassica napus L.).

1.2. Происхождение рапса.

1.3. Морфобиологические особенности рапса.

1.3.1. Морфологические признаки рапса.

1.3.2. Биологические особенности рапса.

1.3.3. Биология цветения и оплодотворения рапса.

1.4. Генетика рапса.

1.5. Селекция рапса.

1.5.1. Направления селекции рапса.

1.5.2. Методы селекции.

1.5.3. Задачи селекции рапса.

1.5.3.1. Подбор исходного селекционного материала.

1.5.3.2. Оценка новых форм: однородность, гибридность.

1.6. Идентификация и регистрация сортов.

1.7. Применение молекулярно-генетических маркеров в селекции.

1.7.1. ПДРФ-маркеры.

1.7.2. RAPD-маркеры.

1.7.3. AFLP-маркеры.

1.7.4. ISSR-маркеры.

1.7.5. SSR-маркеры.

ГЛАВА 2. Материалы и методы.

2.1. Материалы и реактивы.

2.2. Приборы и методы.

2.3. Общие методики.

2.3.1. Выращивание растений.

2.3.2. Выделение геномной растительной ДНК.

2.3.3. Выделение плазмидной ДНК.

2.3.4. Полимеразная цепная реакция.

2.3.5. Электрофорез в агарозном геле.

2.3.6. Электрофорез в полиакриламидном геле.

2.3.7. Визуализация ДНК в полиакриламидном геле с помощью нитрата серебра.

2.3.8. Анализ флуоресцентно-меченых ПЦР-фрагментов.

2.3.9. Приготовление маркера длины pUC 18/MspI.

2.3.10. Проведение ферментативных реакций.

2.3.11. Клонирование амплифицированных фрагментов ДНК.

2.3.12. Трансформация и анализ клонов.

2.3.13. Анализ клонов с помощью ПЦР-амплификации.

2.3.14. Секвенирование ДНК-матриц по Сэнгеру.

2.3.15. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей микросателлитных фрагментов.

ГЛАВА 3. Технология микросателлитного анализа в селекции рапса (В. napus

L.) (обсуждение результатов).

3.1. Генотипирование сортов рапса методом микросателлитного анализа.

3.1.1 .Разработка оптимального набора праймеров для генотипирования сортов рапса.

3.1.2. Исследование полиморфизма микросателлитных локусов сортов рапса.

3.1.3. Оценка генетической однородности сортов рапса.

3.1.4. Исследование гомозиготности самоопыленных линий.

3.1.5. Установление родства между сортами рапса.

3.2. Паспортизация сортов рапса на основе микросателлитных маркеров.

3.3. Оценка генетической однородности гибридов рапса, полученных на основе однородных и неоднородных сортов.

3.4. Оценка генетической однородности реципрокных гибридов рапса.

3.5. Исследование передачи генетического материала родительских форм в гибриды.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Технология генотипирования на основе микросателлитного анализа в селекции рапса"

Рапс является одной из самых востребованных масличных культур, как на российском, так и на мировом рынке. Рапс имеет более дешевую себестоимость возделывания, растет при относительно низкой температуре и может возделываться в севообороте с короткой ротацией. Это ценная кормовая культура, которая используется как в виде зеленых кормов, так и в виде шрота в комбикормах. Рапс является замечательным предшественником для других сельскохозяйственный культур, который улучшает агрофизический и фитосанитарный состав почвы. Рапсовую солому широко используют для сельскохозяйственных нужд и в целлюлозно-бумажной промышленности.

Рапс (Brassica napus L., Brassica napus ssp. oleifera Metzg., 2n=38) — однолетнее озимое или яровое растение семейства крестоцветные (капустные) с геномом ААСС. Возник от естественного скрещивания примерно в 1680 г. капусты листовой (В. oleracea, 2п=18, геном СС) и сурепицы (В. campestris, 2п=20, геном АА) с последующим удвоением хромосом. В умеренных широтах по выходу технического масла с гектара не имеет себе равных (его можно использовать в пищу после рафинирования и удаления веществ, придающих неприятный привкус). В последние годы созданы формы и сорта ярового и озимого рапса с высоким качеством масла, не содержащие глюкозинолатов и эруковой кислоты.

Поэтому актуальной задачей в последнее время становится различение сортов рапса на генетическом уровне. Идентифицировать сорт (генотип, гибрид, линию, клон) - значит гарантированно узнать его с использованием данного метода в любой ситуации. Для этого надо иметь каталоги и базы данных, охватывающие генетическое разнообразие культуры или в целом вида. Надежный метод записи спектров ДНК -принципиальный элемент любой стандартной системы идентификации и регистрации сортов по молекулярным маркерам [Молекулярно-биологические аспекты прикладной ботаники, генетики и селекции. Теоретические основы селекции. Том 1. (под ред. В.Г.Конарева) 1993]. Только в этом случае возможен обмен данными между контролирующими лабораториями независимо от их принадлежности (генные банки, коммерческие и государственные контрольно-семенные лаборатории и т.п.) [International Rules for Seed Testing, 1996].

Для эффективного решения различных задач современной селекции, таких как идентификация, паспортизация и сертификация сортов, поддержание генетических коллекций, составление родословных, защита интеллектуальной собственности, подбор родительских пар при скрещивании, контроль передачи генетического материала наиболее перспективным методом генетического анализа является метод анализа полиморфизма микросателлитных последовательностей, позволяющий получить индивидуальную характеристику отдельного генотипа — ДНК-профиль. Микросателлиты отличаются широким и достаточно равномерным распределением по геному и очень высоким уровнем полиморфизма.

Целью данной диссертационной работы являлась разработка технологии генотипирования сортов рапса на основе анализа полиморфизма микросателлитов с последующим ее применением в селекции рапса.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)", Сатина, Татьяна Григорьевна

выводы

1. Разработана технология генотипирования сортов рапса (В. парив) на основе анализа полиморфизма микросателлитов. По результатам анализа 79 генотипов предложен оптимальный набор из 15 пар праймеров для генотипирования сортов рапса.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Разработанные микросателлитные маркеры, позволяющие отслеживать передачу генетического материала родительских форм в гибриды, рекомендуется использовать для селекции рапса.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Сатина, Татьяна Григорьевна, Москва

1. Алексеева С.Н. Получение гибридов рапса и горчицы на основе гетеростильных форм. Бюл. науч.-техн. информации по масличным культурам. — 1972. Вып. 4. — С. 2226.

2. Анащенко A.B., Гаврилова В.А., Дубовская А.Г. Полнее использовать генофонд рапса и сурепицы // Масличные культуры. — 1984. — № 4. — С. 30-33.

3. Анискина Ю.В. Технология генотипирования культурных и дикорастущих форм Brassica на основе анализа полиморфизма микросателлитов: Автореф. Дис. на соиск. уч. степ. канд. биол. наук. М.: ВНИИ с.-х. биотехнол. 2006. - С. 24.

4. Антонова М., Никитина В. Изучение рапса. // ВНИИМК. 1991. - С. 14-18.

5. Артемов И.В. Рапс. — М.: Агропромиздат. 1989. — С. 44.

6. Артемов И.В., Киселев A.M. Пути увеличения производства кормов и растительного масла. // Кормопроизводство. 1997. - №4.

7. Бломейер А. Рапсъ, Brassica napus oleifera II Культура масличных и волокнистых растений. — СПб. 1901. — № 19. — С. 3-57.

8. Бурмистров А.Н. , Дроздов В.Б., Иванов Е.С., Блохин В.Н., Самохвалов Т.П., Демидова Е.Е., Карпачёв В.В., Калягин Ю.С., Савенкова J1.M., Кукушкин В.А., Нарижный И. Ф. Опыление рапса ярового медоносными пчёлами. / Рыбное. 1991. - С. 23.

9. Вавилов Н.И. Теоретические основы селекции. — М.: Наука. 1987. — С. 511.

10. Василенко И.И. Увеличение производства зернобобовых, фуражных, масличных культур и повышения их качества. — М. 1988. — С. 92.

11. Велишаева Н.С. Технология генотипирования картофеля и его дикорастущих сородичей на основе микросателлитного анализа: Автореф. дис. на соиск. уч. степ, канд. биол. наук. М.: ВНИИ с.-х. биотехнол. - 2006. - С. 22.

12. Войтчишин Н.В. Селекция озимой пшеницы на устойчивость к ржавчине. В кн.: «Вопросы методики селекции пшеницы и кукурузы». Харьков. - 1957.

13. Воловик В.Т. Рапс: все возможности в наличии. // Новое сельское хозяйство. -2008. № 2. - С. 64-77.

14. Гольцов A.A. и др. Рапс, сурепица. — М.: Колос. 1983. - С. 3-20.

15. Горелова С. В. Наследование содержания эруковой кислоты в семенах ярового рапса: Автореф. дис. канд. биол. наук. — JI. 1989.

16. Гришко H.H., Делоне JI.H. Курс генетики. Сельхозгиз. М. - 1938.

17. Гуляев Г.В., Дубинин А.П. Селекция и семеноводство полевых культур с основами генетики. -М., Колос. 1969. - С. 487.

18. Декандоль А. Местопроисхождение возделываемых растений. Пер. под ред. X. Гоби.-СПб. - 1885.-С. 490.

19. Деревицкий Н.Ф. Методы хлопкового семеноводства в Средней Азии. // «Труды Всесоюзного совещания по генетике, селекции. Семеноводству и племенному животноводству». т. V. -JL - 1930.

20. Жегалов С.И. Введение в селекцию сельскохозяйственных растений. Госиздат. -М. Л. - 1930.

21. Жидкова E.H., Карпачев В.В. Получение ресинтезированных форм ярового рапса с целью селекции на желтосемянность и жирнокислотность масла. // С.-х. биология. Сер. биол. раст. 1996. - № 5.

22. Закон РФ «О селекционных достижениях от 6 августа 1993 г., №5606-1.

23. Исаев С.И. Роль материнского растения в формировании наследственности у гибридов. // Агробиология. № 2. - 1946.

24. Карпачёв B.B. Научное обеспечение отрасли рапсосеяния: итоги и задачи на 2006 2010 годы. / Рапс - культура XXI века: аспекты использования на продовольственные, кормовые и энергетические цели. — Липецк. - 2005. - С. 4 - 11.

25. Карпачёв В.В. Рапс яровой. Основы селекции: монография. ГНУ ВНИПТИ рапса - Липецк. - 2008. - С. 236.

26. Карпеченко Г.Д. Полиплоидные гибриды Raphanus sativus L. х Brassica oleracea L. // Классики советской генетики. — Л.: Наука. Ленингр. отд-ние. 1968. — С. 461511.

27. Кириченко Ф.Г. Методы и результаты работ по селекции озимой пшеницы. В кн.: «Вопросы методики селекции пшеницы и кукурузы». Харьков - 1957.

28. Кожухова Н.Э., Сиволап Ю.М. Идентификация и регистрация генотипов кукурузы при помощи молекулярных маркеров. // Генетика. 2004. - Т. 40. - № 1. - С. 59-66.

29. Корябин H.A. Рапс // Практикум по селекции и семеноводству полевых культур. — М.: Агропромиздат. 1987. — С. 284-289.

30. Корябин H.A. Селекция рапса и сурепицы: Лекция / МСХА. — М. 1989. — С.20.

31. Куделич B.C., Шпота В.И., Бек Т.В. Классификатор вида Brassica napus L. (рапс) / ВИР. — Л. 1983. — С. 20.

32. Лесневич Л.А., Моргун В.В. Анализ генотипической структуры сортов озимой мягкой пшеницы, возделываемых в Украине, по белковым и ДНК-маркерам. // Аграр. Россия. 2008. - № 3. - С. 6-13.

33. Лисицын П.И. Избранные сочинения. / Сельхозгиз. М. - т. 2. - 1953. Лукьяненко П.П. О влиянии материнской формы на зимостойкость межвидовых гибридов пшеницы. //Яровизация. - № 3 - (36) - 1941.

34. Майсямова Д.Р. Исходный материал для селекции рапса и сурепицы яровой в Северном Зауралье: Автореф. дис. канд. с.-х. наук. —Л. 1990. — С. 18.

35. Марков И.Л., Антоненко А.Ф. Действие химических мутагенов на хозяйственно ценные признаки у ярового рапса и устойчивость к главнейшим болезням // Защита растений в условиях интенсивного сельскохозяйственного производства. — Киев, 1987.1. С. 39-42.

36. Мережко А.Ф. Проблема доноров в селекции пшеницы. // Бюл. ВНИИР. -1982. -Вып. 122. С. 3-7.

37. Мережко А.Ф. Проблема доноров в селекции растений. Вавиловское наследие в современной биологии. М.: Наука. - 1989. - С. 368.

38. Мережко А.Ф. Система генетического изучения исходного материала для селекции растений: Метод, указания. Л.: ВИР. 1984. - С. 70.

39. Милащенко Н.З., Абрамов В.Ф. Технология выращивания и использования рапса и сурепицы. М.: Агропромиздат. -1989. - С. 223.

40. Молекулярно-биологические аспекты прикладной ботаники, генетики и селекции // Теоретич. основы селекции / Под ред. В. Г. Конарева. — М.: Колос. 1993.1. Т. I. — С. 447.

41. Муравлев A.A. Технологические особенности андрогенеза пыльников in vitro рапса ярового. // Науково-техшчний бюлетень 1нституту олшних культур УААН.-Запор1жжя. 2009. - С. 44-51.

42. Нарижный И.Ф. Экономика производства и использования рапса. — М: Росагропромиздат. 1991. — С. 190.

43. Нечипоренко В.Н. Современные направления селекции ярового рапса в Канаде // МС Агропроминформ. — М., 1991. — №5. — С. 12-19.

44. Новиков Ю.Ф. Коэффициенты биоконверсии. — М: Агропромиздат. 1989. —1. С. 189.

45. Осипова Г.М. Новый сорт ярового рапса СибНИИК-198: Информ. листок / Новосиб. ЦНТИ. — 1994. — № 352-94. — С. 1-2.

46. Осипова Г.М. Рапс в Сибири (Морфологические, генетические и селекционные аспекты). Новосибирск: СибНИИК. - 1998. - С. 168.

47. Основы селекции и семеноводства гибридной кукурузы. / Под ред. Б.П. Соколова. М.: «Колос». - 1968 - С. 495.

48. Пангало К.И. Введение в сортоводство. Вып. 1. Госиздат. М. - 1921. Пустовойт B.C. Методы работы в области выведения высокомасличных сортов подсолнечника. // Тр. Всесоюзного методического совещания по масличным культурам. - Краснодар. - 1946.

49. Пустовойт B.C. Подсолнечник. Краткий отчет о научно-исследовательской работе за 1950 г. Всесоюзн. н.-и. ин-т масличных культур. Краснодар -1951.

50. Ротмистров В.Г. Возделывание рапса и сурепицы. Киев: Земледелие. — 1892.1. С. 61.

51. Синская E.H. Историческая география культурной флоры. — JL: Колос. Ленингр. отд-ние. 1969. — С. 480.

52. Синская E.H. Масличные и корнеплоды сем. Cruciferae. Тр. прикл. бот., т. XIX. -№3.- 1926.-С. 647.

53. Синская E.H. Масличные и корнеплоды семейства Cruciferae L. — Л.: Изд-во народов СССР. 1928. — С. 647.

54. Синская E.H. Проблема популяций у высших растений. Л. 1963. — С. 123.

55. Смирнова Л. Перспективы комплексного использования рапса (зарубежный и отечественный опыт) // Междунар. с.-х. журн. — 1996. —№1. — С. 50—52.

56. Солоденко А.Е., Саналатий A.B., Сиволап Ю.М. Идентификация генотипов подсолнечника с помощью микросателлитных маркеров. // Цитология и генетика. -2004. Т. 38. -№2. - С. 15-19.

57. Стефанюк Л.С. и др. Использование рапса на корм: Метод, рекомендации.— М.: Агропромиздат. 1988. — С. 28.

58. Таланов В.В. Государственное сортоиспытание и его выводы по отношению к стандартизации, селекции и семеноводству. // Тр. Всесоюзного съезда по генетике, селекции, семеноводству и племенному животноводству. Т. V. - Л. - 1930.

59. Тимирязев К.А. Исторический метод в биологии. Избранные сочинения. Т. 3. Сельхозгиз, М. 1949.

60. Турбин Н.В. О смешанной наследственности и соматическом расщеплении у гибридных растений. //Яровизация. № 2. -1941.

61. Характеристики сортов растений, впервые включенных в 1994 году в Государственный реестр селекционных достижений, допущенных к использованию / МСХиП РФ. Госкомиссия по испытанию и охране селекционных достижений. — М. -1994, —С. 67-68.

62. Хохлов В.Н., Лисицын П.И. Общая селекция и семеноводство полевых культур. Сельхозгиз. М. - Л. -1931.

63. Цицин Н.В. Отдаленная гибридизация растений. Сельхозгиз. М. - 1954.

64. Чесноков Ю.В. ДНК-фингерпринтинг и анализ генетического разнообразия у растений.// Сельскохозяйственная биология. 2005. - № 1. — С. 20-40.

65. Шевелуха B.C. Об итогах научной деятельности Отделения растениеводства и селекции РАСХН и задачах на 1997 год. // Селекция и семеноводство. — 1997. — №1.1. С. 9.

66. Шмальц X. Селекция растений. Пер. с нем. и под ред. канд. биол. наук Ю.Л. Гужова. М., «Колос» 1973 - С. 295.

67. Шпота В.И. Подколзина В.Е. Результаты селекции горчицы и рапса на качество масла // Селекция и семеноводство масличных культур: Сб. науч. работ. / ВНИИМК. — Краснодар 1980. —С. 114-121.

68. Шпота В.И., Бочкарева Э.Б. Селекция желтосемянных сортов сурепицы и рапса // Докл. ВАСХНИЛ. — 1990. — № 10. — С. 25-28.

69. Шулындин А.Ф. К вопросу выбора материнского растения при гибридизации. // Селекция и семеноводство. 1939. - № 9.

70. Шулындин А.Ф., Манзюк В.Т. Влияние родительских сортов и условий воспитания на жизненность гибридного потомства яровой пшеницы. // Агробиология. -1955.-№4.

71. Эллиот Ф. Селекция растений и цитогенетика. / Пер. с англ. Волотовой E.H., Емельяновой H.A., Лисовской О.В. Под ред. и с предисл. Жебрака А.Р. М.: Из-во иностранной литературы. - 1961. - С. 448.

72. Юрьев В .Я., Кучумов П.В., Линник Г.Н., Вольф В.Г., Никулин Б.Т. Общая селекция и семеноводство полевых культур. / Сельхозгиз. М. - 1955.

73. Adams Н., Vaughan JG., Fenwick GR. The use of glucosinolates for cultivar identification in swede, Brassica napus (L.) var napobrassica (L.). Peterm. // J. Sei Food Agr.- 1989.-V. 46.-P. 319-324.

74. Ai Cheng-xiang, Xin Li, Zhang Li-si, Wei Hai-rong, Yuan Ke-jun, Sun Qing-rong, Jin Song-nan, Liu Qing-zhong. Phylogenetic relationships among cherry genotypes using microsatellite markers. // Guoshu xuebao=J. Fruit Sei. 2007. - 24. - № 4. - C. 460-465.

75. Akagi H., Yokozeki Y., Inagaki A., Fujimura T. Microsatellite DNA markers for rice chromosomes. II Theor. Appl. Genet. 1996. - V. 93. - P. 1071-1077.

76. Akkaya M.S., Shoemaker R.C., Specht J.E., Bhagwat A.A., Gregan P.B. Integration of simple sequence repeats (SSR) markers into a soybean linkage map. // Crop Sei. 1995. - V. 35. - P. 1439-1445.

77. Aldrich P.R., Jagtap M., Michler C.H., Romero-Severson J. Amplification of North American red oak microsatellite markers in European white oaks and Chinese chestnut. // Silvae genet. 2003. - 52. - № 3-4. - P. 176-179.

78. Amarasinglhe Vindhya, Carlos John E. The development of microsatellite DNA markers for genetic analysis in Douglas-fir. II Can. J. Forest Res. 2002. - 32. - № 11. - P. 1904-1915.

79. Amos B., Schlötterer C., Tautz D. Social structure of pilot whales revealed by analytical DNA profiling. II Science. 1993. - V. 260. - P. 670-672.

80. Andersson G., Olsson G. Cruciferen — Ölpflanzen. I.Raps ( B. napus L.ssp. oleifera) // Handbuch Pflanzenziichtg. V, 2 Auflag. — Berlin und Hamburg: Verlag Parey. 1961. — P. 5-49.

81. Anthony F., Combes M.C., Astorga C., Bertrand B., Graziosi G., Lashermes P. Theorigin of cultivated Coffea arabica L. varieties revealed by AFLP and SSR markers. // Theor.and Appl. Genet. K3. 2002. - V. 104. - № 5. - C. 894-900.

82. Appelqvist L.-A., Ohlson R. Rapeseed Cultivation, Composition, Processing and Utiluzation. / Amsterdam: Elsevier. 1972.

83. Arber W. Promotion and limitation of genetic exchange // Science. 1979. - V. 205.1. P. 361 -365.

84. Areshchenkova T., Ganal M.W. Long tomato microsatellites are predominantly associated with centromeric regions. // Genome. 1999. - V. 42. - P. 536-544.

85. Ashkenazi V., Chani E., Lavi U. et al. Development of microsatellite markers in potato and their use in phylogenetic and fingerprinting analyses. // Genome. 2001. - V. 44. - P. 50-62.

86. Bao Lu, Zhang Dong, Teng Yang-Wen, Chen Kun-Song. Mapping of simple sequence repeat loci in Pyrus. II Guoshu xuebao = J. Fruit Sci. 2006. - V. 23. - №2. - P. 270-275.

87. Bengtsson L. Improvement of rapeseed meal quality through breeding for high protein content.-Svalov: Sweden, 1985.—P. 122.

88. Bjerg B. et al. Metabolism of glucosinolates // Proc. 7th Intern. Rapeseed Congr. — Poland, Poznan, 1987. —V. 2. — P. 496-506.

89. Botstein D., White R.L., Skolnick M., Davis R.V. Construction of a genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphisms. // Amer. J. Hum. Genet. 1980. - V.32.-P.314.

90. Brookes A.J. The essence of SNPs. // Gene. 1999. - V.234. - N.2. - P. 177.

91. Broun P., Tanksley S.D. Characterization and genetic mapping of simple repeat sequences in the tomato genome. // Mol. Gen. Genet. 1996. - V. 250. - P. 39-49.

92. Buntjer, J. B., M. Otsen, I. J. Nijman, M. T. R. Kuiper, and J. A. Lenstra. Phylogeny of bovine species based on AFLP fingerprinting. // Heredity. 2002. - V.88. - P. 46-51.

93. Caetano-Anolles G., Bassam B.J., Gressho P.M. DNA amplification fingerprinting using very short arbitrary oligonucleotide primers // Biotechnology.(N Y). 1991. - V. 9. - № 6. - P. 553-557.

94. Charters Y.M., Robertson A., Wilkinson M. J., Ramsay G. PCR analysis of oilseed rape cultivars (Brassica napus L. ssp. oleifera) using 5'-anchored simple sequence repeat (SSR) primers. // Theor. Appl. Genet. 1996. - V. 92. - P. 442-447.

95. Choudhary Shalu, Sethy Niroj K., Shokeen Bhumika, Bhatia Sabhyata. Development of sequence-tagged microsatellite site markers for chickpea (Cicer arietinum L.). // Mol. Ecol. Notes. 2006. - V. 6. - № 1. - P. 93-95.

96. Chyi YS., Hoenecke ME., Sernyk JL. A genetic linkage map or restriction fragment length polymorphism loci for Brassica rapa (syn. campestris). II Genome 1992. — V. 35 - P. 746-757.

97. Cloutier S., Cappadocia M., Landry BS. Analysis of RFLP mapping inaccuracy in

98. Brassica napus L. // Theor. Appl. Genet. 1997. - V. 95. - P. 83-91.

99. Cooke R. J. Modern methods for cultivar verification and the transgenic plant challenge // Abstrs. of 25th Int. Seed Testing Congr. (Pretoria, 1998. April 15 24), ISTA. — Zurich. - 1998. — P.9-10.

100. Cooke R. J. The standartization of electrophoresis methods for variety identification // Biochemical Identification of varieties: Mater, of III Int Symp. ISTA. USSR, L., 1987. — USSR, L.: VIR, 1988. — P. 14-27.

101. Cooke RJ. Modern methods for the cultivar identification and the transgenic plant challenge. // Seed. Sci. Technol. 1999. - V. 27. - P. 669-680.

102. Culley Theresa M. Characterization of newly developed microsatellite loci in the stemmed yellow violet, Violapubescens (Violaceae). Il Mol. Ecol. Notes. 2005. - V. 5. - № 4. - P. 882-884.

103. Diehl, S.R., Ziegie, J., Buck, G.A., Reynolds, T.R. & Weber, J.L. Automated genotyping of human DNA polymorphisms. // Am. J. hum. Genet. 1990. V.47. - P. 177.

104. Diwan N., Cregan P.B. Automated sizing of fluorescent-labeled simple sequence repeats (SSRs) markers to assay genetic variation in soybean. II Theor. Appl. Genet. -1995.-V. 95. P. 723-733.

105. Donini P., Elias L., Bougourd S., Koebner RMD. AFLP fingerprinting reveals pattern differences between templates DNA extracted from different plant organs. // Genome. 1997. - V. 40. - P. 521-526.

106. Echt C.S., May-Marquardt P. Survey of microsatellite DNA in pine. II Genome. -1997. -V. 40. P. 9-17.

107. Fan Z., Riminer S.R. and Stefansson B.R. Inheritance of resistance to Albugo Candida in rape (.Brassica napus L.) II Can. J. Genet. Cytol. — 1983. — V. 25. — P. 420-424.

108. FAO Trade yearbook 1990. — Rome. -1991. — V. 44. № 102.

109. Ferreira M.E., Williams P.H. and Osborn T.C. RFLP mapping of Brassica napus using doubled haploid lines // Theor. Appl. Genet. 1994. - V. 89. - P. 615-621.

110. Frandsen K.J., The Experimental Formation of Brassica napus L. var. oleifera D.C. and Brassica carinata Braun, Dansk. // Botan. Arkiv, Bd. 1947. - V. 12. - N. 7. - P. 1-16.

111. Gowers S. The transfer of characters from Brassica campestris L. to Brassica napus L.: Production of clubroot-resistant oil-seed rape (B. napus ssp. oleifera) II Euphytica. — 1982. — V. 31. № 3. — P.971-976.

112. Graber J.H., Smith C.L., Cantor C. Differential sequencing with mass spectrometry. // Genet. Anal. Biomol. Eng. 1999. - V.14. -N.5-6. - P.215-219.

113. Graham J. An assessment of gene flow in red raspberry measured by SSRs. // Annual Report. 2001-2002: Scott. Crop Res. Inst. Dundee. 2003. - P. 155-156.

114. Grami B., Stefansson B.R. Gene action for protein and oil content in spring rape. // Canadian Journal of Plant Science. 1977. - V. 57. -N.3. - P. 625-631.

115. Grodzicker T., Williams J., Sharp P., and Sambrook J. Physical mapping of temperature-sensitive mutations of adenoviruses. // Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. -1974. V. 39. -N.l. - P. 439-446.

116. Guilford P., Prakash S., Zhu J.M., Rikkerink E., Gardiner S., Bassett H., Forster R.

117. Microsatellites in Malus y-domestica (apple)', abundance, polymorphism and cultivar identification. // Theor. Appl. Genet. 1997. - V. 94. - P. 249-254.

118. Gupta M., Chyi Y.S., Romero-Severson J., Owen J.L. Amplification of DNA markers from evolutionarily diverse genomes using single primers of SSRs. // Theor. Apl. Genet. -1994. Y.89. - P.998-1006.

119. Hacia J.G., Collins F.S. Mutation analysis using oligonucleotide microarrays. // J. Med. Genet. 1999. - V.36. - N.10. - P.730-736.

120. Halasz G., Veres A., Kozna P., Kiss E., Balongh A., Galli Z., Szoke A., Hoffmann S., Heszky L. Microsatellite fingerprinting of grapevine {Vitis vinifera L.) varieties of the Carpathian Basin. // Vitis. 2005. - V. 44. - №4. - P. 173-180.

121. Hallden C., Nilsson NO., Rading IM., Sail T. Evalution of RFLP and RAPD markers in a comparison of Brassica napus breeding lines. // Theor. Appl. Genet. 1994. - V. 88. - P. 123-128.

122. Hofman W., Peters R. Versuche zur Hergtellung synthetischer Raps-formen. // Der Zuchter. -1961.-P. 15-17.

123. Howard H.W., The Effect of Polyploidy and Hybridity on Seed Size in Crosses between Brassica Chinensis, B. carinata, Amphidiploid Brassica Chinensis-carinata, and Autotetraploid B. Chinensis. //J. Genet. 1942. - V. 43. - P. 105-119.

124. Jeffreys A.J., Wilson V., Thien S.L. Hypervariable minisatellite regions in Human DNA. //Nature (London). 1985. - V.314. - N.6006. - P.67-73.

125. Jin L., Macaubas C., Hallmayer J., Kimura A., Mignot E. Mutation rate varies among alleles at a microsatellite locus: Phylogenetic evidence. // Proc. Natl. Acad. Sci USA. 1996. -V. 93.-N. 26.-P. 15285.

126. Jin Meng-yang, Li Jia-na, Fu Fu-you, Zhang Zheng-sheng, Zhang Xue-kun, Liu Lie-zhao. QTL analysis of the oil content and the hull content in Brassica napus L. // Agr. Sci. China. 2007. - V.6. -№ 4. - P. 414-421.

127. Jonsson R. Breeding for improved oil and meal quality in rape (Brassica napus L.) and turnip rape (Brassica campestris L.) // Hereditas. — 1977. — Vol. 87. — P. 205-218.

128. Jonsson R., Uppstrom B. Quality breeding in rapeseed // Research and results in plant breeding. Svalof 1886 -1986.- Stockholm-Svalov AB, Sweden: LTs forlag, 1986. — P. 173183.

129. Kapila R.K., Yadav R.S., Plaha P., Rai K.N., Yadav O.P., Hash C.T., Howarth C.J. Genetic diversity among pearl millet maintainers using microsatellite markers. // Plant Breed. 2008. - V. 127. - № 1. - P. 33-37.

130. Karp A., Edwards KJ., Bruford M., Funk S., Vosman B., Morgante M., Seberg O. et al. Molecular technologies for biodiversity evaluation: opportunities and challenges. // Nature Biotech. 1997. - V. 15. - P. 625-628.

131. Kawchuk L.M., Lynch D.R., Thomas J., Penner B., Sillito D., Kulcsar F. Characterization of Solarium tuberosum simple sequence repeats and application to potato cultivar identification. //Am. Potato J. 1996. - V. 73. - P. 325-335.

132. Khattak J.Z.K., Christiansen J.L., Torp A.M., Andersen S.B. Genie microsatellite markers for discrimination of spinach cultivars. // Plant Breed. 2007. - V.126. - № 4. - P. 454-456.

133. Kidwell, K.K., Osborn T.C. Plant Genomes: Methods for Genetic and Physical Mapping. Kluever Academic Publishers Group. A.H. Dordrecht, The Netherlands. 2001. - P. 1-13.

134. Kijas J.M.H., Thomas M.R., Fowler J.C.S., Roose M.L. Integration of trinucleotide microsatellites into a linkage map of Citrus. II Theor. Appl. Genet. 1997. - V. 94. - P. 701-706.

135. Kilger C., Paabo S. Direct DNA sequence determination from total genomic DNA. // Nucleic Acids Res. 1997. - V.25. - N.10. - P.2032-2034.

136. Kimura T., Nishitani C., Iketani H., Ban Y., Yamamoto T. Development of microsatellite markers in rose. // Mol. Ecol. Notes. 2006. - V.6. - № 3. - P. 810-812.

137. Koh HJ., Heu MH., McCouch SR. Molecular mapping of the ge (S) gene controlling the super-giant embryo character in rice (Oryza sativa L.). // Theor. Appl. Genet. 1996. - V. 93.-P. 257-261.

138. Kondra Z. P., Downey R.K. Glucosinolate content of rapeseed (Brassica napus L. and B. campestris L.) meal as influenced by pod position on the plant. // Crop. Sci. 1970. - V. 10.-N.1.-P. 54-56.

139. Kondra Z. P., Stefansson Inheritance of the major glucosinolates of rapeseed {Brassica napus) meal. // Canadian Journal of Plant Science. 1970. -V. 50. -N.4. - P. 643-647.

140. Kreivi Marjut, Huttunen Susanna, Aspi Jouni. Isolation and characterization of polymorphic microsatellite markers from Primula nutans (Primulaceae). II Mol. Ecol. Notes. -2006. V.6. - № 2. - P. 334-336.

141. Ma Chao-zhi, Fu Ting-dong, Tuevesson Stine, Gertsson Bo. Genetic diversity of Chinese and Swedish rapeseed (Brassica napus L.) analyzed by inter-simple sequence repears (ISSRs). II Agr. Sei. China. 2003. - V.2. - № 2 - P. 137-143.

142. Ma Z.Q., Roder M., Sorrells M.E. Frequencies and sequence characteristics of di-, tri-, and tetra-nucleotide microsatellites in wheat. // Genome. 1996. - V. 39. - P. 123-130.

143. Mailer RJ., Scarth R., Fristensky B. Discrimination among cultivars of rapeseed (Brassica napus L.) using DNA polymorphisms amplified from arbitrary primers. // Theor. Appl. Genet. 1994. - V. 87. - P. 697-704.

144. Marchese A., Boskovic R.I., Martinez-Garcia P.J., Tobutt K.R. The origin of the self-compatible almond' Supernova'. // Plant Breed. 2008. - V.127. - № 1. - P. 105-107.

145. McGregor C.E., Lambert C.A., Greyling M.M. et al. A comparative assessment of DNA fingerprinting techniques (RAPD, ISSR, AFLP and SSR) in tetraploid potato {Solanum tuberosum L.) germplasm. // Euphytica. 2000. - V. 113. - P. 135-144.

146. Meng Jinling, Zhao Jianwei. Genetic analysis of loci associated with partial resistance to Sclerotinia sclerotiorum in rapeseed (.Brassica napus L.). // Theor. and Appl. Genet. K3. 2003. - V.106. - № 4. - P. 759-764.

147. Menz, M.A., R.R. Klein, J.E. Mullet, J.A. Obert, N.C. Unruh and P.E. Klein (2002) A High-density Genetic Map of Sorghum bicolor (L.) Moench based on 2926 AFLP, RFLP and SSR Markers. // Plant Mol Biol. 2002. - V. 48. - N.5-6. - P.483.

148. Milbourne D., Meyer R.C., Collins A.J. et al. Isolation, characterization and mapping of simple sequence repeat loci in potato. // Mol. Gen. Genet. 1998. - V. 259. - P. 233-245.

149. Mishima Kentaro, Watanabe Atsushi, Isoda Keiya, Ubukata Masatoshi, Takata Katsuhiko. Isolation and characterization of microsatellite loci from Quercus mongolica var. crispula. II Mol. Ecol. Notes. 2006. - V.6. - № 3. - P. 695-697.

150. Monforte A.J., Garcia-Mas J., Arüs P. Genetic variability in melon based on microsatellite variation. // Plant Breed. 2003. - V.122. - № 2. - P. 153-157.

151. Morinaga T. Interspesific hybridization in Brassica. VI. The cytology of Fl — hybrids of B. junceaand B. nigra II Cytologia. — 1934. — V. 6. — P. 62-67.

152. Mundges H., Diederichsen E., Kohler W. Comparisons of isozyme patterns in resynthesized amphihaploid rapeseed (Brassica napus) and their parental species Brassica campestris and Brassica oleracea. II Plant Breed. 1989. - V. 103. - P. 258-261.

153. Nei M. Molecular evolutionary genetics. // N.Y.: Columbia Univ. Press, 1987. - P.512.

154. Nunome T., Suwabe K., Iketani H., Hirai M. Identification and characterization of microsatellites in eggplant. // Plant Breed. 2003. - V.122. - № 3. - P. 256-262.

155. Odeny D.A., Jayashree B., Ferguson M., Hoisington D., Crouch J., Gebhardt C. Development, characterization and utilization of microsatellite markers in pigeon pea. // Plant Breed. 2007. - V.126. - № 2. - P. 130-136.

156. Olsson G. Josefsson A., Hagberg A., Ellerstrom S., Synthesis of the ssp. Rapifera of Brassica napus. //Hereditas. 1955. - V. 41. - P.241-249.

157. Olufowote J.O., Xu Y., Chen X, Park W.D., Beachell H.M, Dilday R.H., Goto M, McCouch S. Comparative evaluation of within-cultivar variation of rice (Oryza sativa L.) using microsatellite and

158. RFLP markers. // Genome. 1997. - V. 40. - P. 370-378.

159. Orita M., Suzuki Y., Sekiya T., Hayashi K. Rapid and sensitive detection of point mutations and DNA polymorphisms using the polymerase chain reaction. // Genomics. -1989. V.5. - N.4. - P.874.

160. Palombi M.A., Damiano C. Comparison between RAPD and SSR molecular markers in detecting genetic variation in kiwifruit (Actinidia deliciosa A. Chevj. // Plant Cell Repts K3. 2002. - V. 20. - № 11. - P. 1061-1066.

161. Parkin I., Magrath R., Keith D., Sharpe A., Mithen R. and Lydiate D. Genetics of aliphatic glucosinolates. II. Hydroxylation of alkenyl glucosinolates in Brassica napus. II Heredity. 1994. - V. 72. - P. 594-598.

162. Pelletier G. et al. Intergeneric cytoplasmic hybridization in cruciferae by protoplast fusion // Molec. Gen. Genet. — 1983. —V. 191. № 191 — P. 244-250.

163. Plaschke J., Ganal M.W., Roder M.S. Detection of genetic diversity in closely-related bread wheat using microsatellite markers. // Theor. Appl. Genet. 1995. - V. 91. - P. 1001-1007.

164. Plieske J., Struss D. Microsatellite markers for genome analysis in Brassica. I. Development in Brassica napus and abundance in Brassicaceae species // Theor. Appl. Genet. 2001. - V. 102. - P. 689-694.

165. Poulsen G.B., Kahl G., Welsing K. Abundance and polymorphism of simple repetitive sequences in Brassica napus L. // Theor. Appl. Genet. 1993. - V. 85. - P. 994-1000.

166. Powell W., Morgante M., Doyle JJ., McNicol JW., Tingey SV., Rafalski AJ. Genepool variation in genus glycine subgenus soja revealed by polymorphic nuclear and chloroplastmicrosatellites. // Genetics. 1996. - V. 144. - P. 793-803.136

167. Provan J., Corbett G., McNicol J.W., Powell W. Chloroplast DNA variability in wild and cultivated rice (Oryza ssp.) revealed by polymorphic chloroplast simple sequence repeats. // Genome. 1997. - V. 40. - P. 104-110.

168. Provan J., Powell W., Waugh R. Microsatellite analysis of relationships within cultivated potato {{Solanum tuberosum). II Theor. Appl. Genet. 1996. - V. 92. - P. 10781084.

169. Rakow G., Downey R.K. Profit summer rape // Can. J. Plant Sei. — 1993. — V. 73. -№1. —P.189-191.

170. Rayner C. J., Sang J.P., Buzza C.G. Screening rapeseed {B. napus) for low glucosinolate levels. //Austral. J. Experimental Agricul. Animal Husbandry. 1975. - V. 15. -N. 8.-P. 561-565.

171. Renard M. et al. Colza // INRA. Rennes. — 1988. — P. 57.

172. Renard M., Brun H. Colza: amelioration de la resistance aux maladies // Phytoma. — 1982. —№343. —P. 23-25.

173. Röbbelen G. Qualitätsentwicklungen für den Körnerraps der Zukunft. // Qualitäts. -Raps. 1980/1981.-P. 46-51.

174. Robbelen G. Transgene rapssorten. Die Zukunft hat schon begonnen // Raps. — 1995. — Bd 13. -№ 1. —S.4-6.

175. Robbelen J. Erucic-acid heredity in rapeseed (Brassica napus L. and Brassica campestris L.) II Hereditas. — 1977. — № 86. — P. 159- 170.

176. Roder M.S., Plaschke J., Konig S.U., Borner A., Sorrells M.E., Tanksley S.D., Ganal

177. M.W. Abundance, variability and chromosomal location of microsatellites in wheat. II

178. Mol. Gen. Genet. 1995. - V. 246. - P. 327-333.

179. Roose-Amsaleg G, Canon- Pham E., Vautrin D., Tavemier R., Solignac M. Polymorphie microsatellite loci in Linum ustitatissimum. // Mol. Ecol. Notes. 2006. - V.6. - №3. - P. 796-799.

180. Rudorf W. Die Bedeutung der Polyploidie für die Evolution und die. // Pflanzenzüchtung, Angew. Botan. 1943. - V. 25. - P.92-114.

181. Rudorf W. Über die Erzeugung und die Eigenschaften Synthetischer Rapsformen. // Z. Pflanzenzücht. 1950. - V. 29. - P.35-54.

182. Rutkowski A. Polandxs share in the development of world rapeseed production // Proc. 7th Intern.Rapeseed Congr. — Poland, Poznah. 1987 — Y. 1. — P. 14-23.

183. Saftic-Pankovic Dejana, Maijanovic-Jeromela Ana, Sakac Zvonimir, Marinkovic Radovan. Molekularni marker i kvalitet ulja kod razlicitih populacija iz roda Brassicaceae. II Uljarstvo. 2006. - V. 37. - № 3.4. - p. 55.59.

184. Saghai Maroof MA., Biyashev RM., Yang GP., Zhang Q., Allard RW. Extraordinarily polymorphic microsatellite DNA in barley: species diversity, chromosomal locations, and population dynamics. // Proc Natl Acad Sei USA. 1994. - V. 91. - P. 5466-5470.

185. Saiki R.K., Gelfand D.H., Stoffel S., Higuchi R. Primer-Directed Enzymatic Amplification of DNA with a Thermostable DNA Polymerase. // Science. 1988. - V.239. -N.2. - P.487-491.

186. Saiki R.K., Scharf S., Fallona F., Mullis K., Horn G. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. // Science. 1985. - V.230. -N.6. - P.1350-1354.

187. Samhez-Escribano E.M., Martin J.P., Carrino J., Gemis J.L. Use of sequence-tagged microsatellite site markers for characterizing table grape cultivars. // Genome. 1999. - V. 42. -№1.-P. 87-93.

188. Schlotterrer C. The evolution of molecular markers — just a matter of fashion. // Nature Rev. Genet. 2004. - V.5. - N.l. - P.65.

189. Schulz H. Wenn Rapsöl im Tank ist // Neue Landwirtschaft. — 1997. — № 10. — P.79.80.

190. Schwetka A. Inheritance of seed colour in turnip rape {Brassica campestris L.) // Theor. Appl. Genet. — 1982. — V. 62. — P. 161-169.

191. Scotti I., Paglia G.P., Magni F., Morgante M. Efficient development of dinucleotide microsatellite markers in Norway spruce {Picea abies Karst.) through dot-blot selection. // Theor. and Appl. Genet. K3. -2002. V. 104. - № 6-7. - P. 1035-1041.

192. Senior M.L., Chin E.C.L., Lee M., Smith J.S.C., Stuber C.W. Simple sequence repeat markers developed from maize sequences found in the GenBank database: map construction. II Crop Sei. 1996. - V. 36. - P. 1676-1683.

193. Sernyk J.Z., Stefansson B.R. Heterosis in summer rape {Brassica napus L.) // Can. J. Plant Sei. — 1983. — V. 63. № 2. — P. 407-413.

194. Siebel Jutta, Pauls K.P. Alkenyl glucosinolate levels in androgenic populations of Brassica napus II Plant Breed. — 1989. — V. 103. № 2. — P. 124-132.

195. Sneath P.H.A., Sokal R.P. Numerical taxonomy. The principles and practice of numerical classification. // San Francisco: W.H. Freedman and Co. — 1973.

196. Snyder M.P., Kimbrell D., Hunkapiller M., Hill R., Fristrom J., Davidson N. A transposable element that splits the promoter inactivates a Drosophila cuticle protein gene. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1982. - V. 79. - P. 7430-7434.

197. Sobotka R., Dolanska L., Curn V., Ovesna J. Fluorescence-based AFLPs occur as the most suitable marker system for oilseed rape cultivar identification // J. Appl.Genet. 2004. -V. 45.-№2.-P. 161-173.

198. Song K.M., Suzuki J.Y., Slocum M.K., Williams P.H., Osborn T.C. A linkage map of Brassica rapa (syn. campestris) based on restriction fragment length polymorphism loci // Theor.Appl.Genet. -1991. V. 82. - P. 296-304.

199. Suwabe K., Iketani H., Nunome T., Kage T., Hirai M. Isolation and characterization of microsatellites in Brassica rapa L. // Theor. Appl. Genet. 2002. - V. 104. - P. 1092-1098.

200. Tang S., Kishore V.K., Knapp S J. PCR-multiplexes for a genome-wide framework of simple sequence repeat marker loci in cultivated sunflower.// Theor. Appl. Genet. 2003. - V. 107.-P. 6-19.

201. Tautz D. Hypervariability of simple sequences as a general source for polymorphic DNA markers // Nucleic Acids Research. 1989. - V. 17. - № 16. - P. 6463-6471.

202. Tautz D., Trick M., Dover G.A. Cryptic simplicity in DNA is a major source of genetic variation. //Nature. 1986. - V.322. - N.6080. - P.652-656.

203. U.N., Genome-analysis in Brassica with Special Reference to the Experimental Formation of B. napus and Peculiar Mode of Fertilization. // Japan. J. Botany. 1935. - V. 7. -P. 389-452.

204. UPOV (Union for the Protection of New Varieties of Plants). Guidelines for the conduct of tests for distinctness, uniformity and stability. Rape seed {Brassica napus L. oleiferd). / UPOV, Geneva, Switzerland TG/36/6. 1996.

205. UPOV (Union for the Protection of New Varieties of Plants). International convention for the protection of new varieties of plants test guide-lines. / UPOV, Geneva, Switzerland. -1978.

206. UPOV (Union for the Protection of New Varieties of Plants). International convention for the protection of new varieties of plants test guide-lines. / UPOV, Geneva, Switzerland C/28/10.- 1994.

207. Uzunova M., Ecke W., Weissleder K., Robbelen G. Mapping the genome of rapeseed (Brassica napus L.).I. Construction of an RFLP linkage map and localization of QTLs for seed glucosinolate content. II Theor. Appl. Genet. 1995. - V. 90. - P. 194-204.

208. Uzunova M.I., Ecke W. Abundance, polymorphism and genetic mapping of microsatellites in oilseed rape (Brassica napus L.) // Plant Breeding. 1999. - V. 118. - P. 323-326.

209. Van de Peer Y., de Wachter R. TREECON for Windows: a software package for the construction and drawing of evolutionary trees for the microsoft windows environment // Comp. Appl. BioSci. 1994. - V. 10. - P. 569-570.

210. Van de Will C., Arens P., Vosman B. Microsatellite retrieval in lettuce {Lactuca sativa L.). // Genome. 1999. - V. 42. - №1. - P. 139-149.

211. Van Eijk M.J.T., Stewart-Haynes J.A., Lewin H.A. Extensive polymorphism of the BoLA-DRB3 gene distinguished by PCR-RFLP.// Animal Genetics. 1992. - V. 23. - N.6. - P. 483.

212. Vos P., Hogers R., Bleeker M., Reijans M., Van de Lee T., Homes M., Frijters A., Pot J., Peleman J., Kuiper M., Zabeau M. AFLP: a new technique for DNA fingerprinting // Nucleic Acids Res. 1995. - V. 23. - P. 4407-4414.

213. Vyvadilova M., Zelenkova S., Tomaskova D. Anther cultures of Brassica napus L. // Scientica agriculturae bohemoslovaca 1987. - № 4. - P. 267-273.

214. Wallace Lisa E., Helenurm Kaius. Characterization of microsatellite loci in polyploid Lavatera assurgentijlora ssp. assurgentijlora and ssp. glabra (.Malvaceae). II Mol. Ecol.

215. Notes. 2006. - V. 6. - № 2. - P. 331-333.

216. Wallace R. B. DNA recombinant technology. Boca Raton (Fla.): CRC press. 1983.1. P. 212.

217. Watcharawongpaiboon N., Chunwonfse J. Development and characterization of icrosatellite markers from an enriched genomic library of cucumber (Cucumis sativus). H Plant Breed. 2008. - V. 127. - № 1. - P. 74-81.

218. Waugh R., Powell W. Using RAPD markers for crop improvement. // Trends Biotechnol. 1992. - V. 10. - P. 186-191.

219. Weber J.L., May P.E. Abundant class of human DNA polymorhisms which can be typed using the polymerase chain reaction. // Am. J. Hum. Genet. 1989. - V.44. - N.3. -P.388.

220. Weising K., Nybom H., Wolff K., Meyer W. DNA fingerprinting in plants and fungi. — CRC Press. 1995. — P. 322.

221. Welsh J., McClelland M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers.// Nucleic Acids Res. 1990. - V.18. -N.24. - P.7213-7218.

222. White J., Law JR. Differentiation between varieties of oilseed rape Brassica napus (L.) on the basis of the fatty acid composition of the oil. // Plant Var Seeds. 1991. - V. 3. - P. 125-132.

223. Williams I.G.K., Kubelik A.R., Livak K.I., Rafalski I.A., Tongey S.N. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers is useful as genetic markers. // Nucleic Acids Res. 1990. - V.18. -N.22. - P.6531-6535.

224. Xu X.-x., Liang H.-Y., Zhen Z., Yang M. -S. Framework of simple sequence repeat marker loci in cultivated apple. II Guoshu xuebao = J. Fruit Sei. — 2006. V. 23. - №2. - P. 161-164.

225. Yan X.F., Lian C.L., Hogetsu T. Development of microsatellite markers in ginkgo

226. Ginkgo biloba L.). // Mol. Ecol. Notes. 2006. - V. 6. - № 2. - P. 301-302.143

227. Ziegle J.S., Su Y., Corcoran KP., Nie L., Mayrand PE., Hoff LB., McBride LJ., Kronick MN., Diehl SR. Application of automated DNA sizing technology for genotyping microsatellite loci. // Genomics. 1992. - V.14. - P.1026-1031.

Информация о работе

Сатина, Татьяна Григорьевна
кандидата биологических наук
Москва, 2010
ВАК 03.01.06

Диссертация

Технология генотипирования на основе микросателлитного анализа в селекции рапса - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы