Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Свободнорадикальный потенциал нейтрофилов и его роль в механизме реализации специфических функций фагоцитирующих клеток
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Старикова, Марина Алексеевна

Вв едени е

1. Обзор литературы

1.1. Генерализация инфекции при термической травме - центральная проблема ожоговой болезни . И

1.2. Супероксидгенерирующая способность нейтрофилов - специфическая функция полиморфноядерных лейкоцитов

1.2. Современные методы регистрации и оценки способности полинуклеаров продуцировать свободные радикалы

2. Характеристика материала и методы исследований

2.1. Эксперименты на животных

2.2. Исследование свободнорадикального потенциала нейтрофилов у пациентов с ожоговой болезнью

2.3. Изучение эффекта транскраниальной электростимуляции на свободнорадикальный потенциал нейтрофилов

2.4. Статистический анализ

3. Результаты исследований и обсуждение

ЗЛ. Оценка эффективности генерации активированных метаболитов кислорода полиморфноядерными лейкоцитами при индукции инфекционного процесса в эксперименте

3.1.1. Абсолютное и долевое содержание нейтрофилов в образцах крови экспериментальных животных

3.1.2. Анализ светосуммы люминолзависимой хемилюминесценции нейтрофильных лейкоцитов

3.1.3. Результаты исследования максимальной интенсивности свечения нейтрофильных лейкоцитов на высоте "респираторного взрыва"

3.1.4. Изучение времени наступления максимальной интенсивности свечения гранулоцитов

3.1.5. Свободнорадикальный потенциал нейтрофилов - тест для оценки супероксидгенерирующей способности полинуклеаров

3.3. Апробация метода определения свободноради-кального потенциала нейтрофилов в клинике термических поражений. Динамика свободнора-дикального потенциала полиморфноядерных клеток при ожоговой болезни

3.4. Влияние транскраниальной электростимуляции на свободнорадикальный потенциал нейтрофилов

3 ак лю ч е ни е

В ы в о д ы

Указатель литературы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Свободнорадикальный потенциал нейтрофилов и его роль в механизме реализации специфических функций фагоцитирующих клеток"

Нейтрофильные полиморфноядерные лейкоциты в последние годы привлекают к себе все большее внимание специалистов в биологии и медицине (Ogle J.D. et al., 1989; Зинкевич О.Д. и соавт., 1990; Алексеев А.А. и соавт., 1993; Саломатин В.В. и соавт., 1993; Антипов А.Ю. и соавт., 1995; Краснова Е.И. и соавт., 1996; De La Cruz С. et al., 1997; Кузьмина Е.И. и соавт., 1998; Поцелуева М.М. и соавт., 1999; Филатов О.Ю., 1999). Изучаются молекулярные механизмы взаимодействия этих фагоцитирующих клеток с патогенными микроорганизмами, пути инактивации чужеродных объектов в системе гуморально-клеточ-ной кооперации. Нейтрофилы, а также гуморальные бактерицидные субстанции, активация которых не требует длительного подготовительного периода, участвуют в поддержании антигенного гомеостаза и играют важную роль в предупреждении и ликвидации осложнений, вызванных вторжением инфекционных агентов в среду организма.

Осуществляя фагоцитоз, полинуклеары обладают способностью продуцировать активированные метаболиты кислорода, оказывающие на микроорганизмы губительное действие. Как было отмечено при анализе литературы, это свойство нейтрофилов может служить объективным показателем состояния неспецифических факторов защиты, являясь практически ценным критерием для своевременного выявления "сбоев" в этой системе (Зенков Н. К., Куликов В.Ю., 1985; Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989; Алексеев А.А. и соавт., 1993).

Однако, несмотря на большое разнообразие методов, использующихся для этих целей, в том числе и хемилюминесцент-ных, позволяющих с высокой чувствительностью выявлять различные нарушения внутренней среды организма, все они имеют существенные недостатки: не выявляют метаболический резерв полинуклеаров, то есть потенциальную способность клеток отвечать увеличением продукции свободных радикалов при возрастании на них "нагрузки" (например, количества микроорганизмов в среде), а также скорость мобилизации бактерицидных эффектов полиморфноядерных лейкоцитов, зависящей от синхронности их работы и опсонической активности плазмы крови, без чего невозможно адекватно оценить функциональное состояние нейтрофилов. Известен и такой недостаток хемилюминесцентных методов, как зависимость результатов исследований от чувствительности фотоэлектронных умножителей, регистрирующих световые потоки, что в конечном итоге затрудняет использование этих приборов. До настоящего времени еще не разработаны общие методические приемы проведения анализов с помощью фотоэлектронных умножителей, результаты исследований несопоставимы между собой, а в качестве анализируемых параметров используют разные показатели, которые не унифицированы, нет четких критериев оценки и толкования получаемых результатов.

Кроме того, некоторые методы, особенно с использованием предварительно изолированных нейтрофилов крови, являются достаточно сложными, требуют для их выполнения дополнительного времени и вследствие этого малопригодны для клинико-диагностических лабораторий лечебных учреждений. Широко использовавшийся в течение нескольких десятилетий так называемый НСТ-тест (реакция бессубстратного восстановления нитро-синего тетразолия) с целью оценки интенсивности генерации полиморфноядерными клетками свободных радикалов к настоящему времени теряет актуальность вследствие трудоемкости метода и в значительной мере субъективности получаемых результатов, так как при визуальной оценке с помощью иммерсионного объектива микроскопа на мазках крови гранул диформазана, локализованных в нейтрофилах, невозможно учесть разнообразие размеров и степень окраски гранул, а также точно подсчитать их количество. Эта проблема хорошо известна специалистам.

Таким образом, поиск метода, позволяющего адекватно оценивать способность нейтрофилов продуцировать активированные кислородные метаболиты, выявлять резервные возможности клеток, до настоящего времени по-прежнему остается актуальным. Особый интерес в этом плане представляет разработка хемилю-минесцентного метода, так как он создает уникальные возможности для динамических наблюдений за фагоцитарными реакциями нейтрофилов, условиями и механизмами их инициации, развития и регрессии. Из всех способов функционального зондирования фагоцитов этот метод имеет наибольшие перспективы внедрения в общеклиническую практику.

Вышеизложенное явилось основанием для проведения настоящего исследования, направленного на устранение существующих недостатков известных хемилюминесцентных методов путем совершенствования лабораторной аналитической техники выполнения анализа.

Изучение способности полинуклеаров продуцировать активированные метаболиты кислорода представляет не только практический, но и познавательный интерес, так как данная информация внесет определенный вклад в понимание механизмов реализации специфических функций фагоцитирующих клеток.

Актуальными остаются вопросы, касающиеся изучения функциональной активности нейтрофилов, их супероксидгенерирующей способности, благодаря которой клетки осуществляют свои защитные функции, в условиях угрозы генерализации инфекции. Несмотря на широкое использование антибиотиков последних поколений, генерализация инфекции - сепсис остается одним из наиболее опасных осложнений и сопровождается высоким уровнем летальности - от 23 до 69% (Колкер И.И. и соавт., 1974; Лыт-кинМ.И., 1981; Кузин М. И. и соавт., 1982; Малиновский Н.Н. и соавт., 1992; Вазина И.Р. и соавт., 1996; Вазина И.Р. и соавт., 1997; Алексеев А.А. и соавт., 1998; Толстов А.В. и соавт., 1998). Существенное значение в проблеме сепсиса имеют вопросы его ранней диагностики - по данным Нижегородского НИИ травматологии и ортопедии она составляет лишь 60% (Пономарева Н.А. и соавт., 1986), что связано с отсутствием явных клинических признаков в латентную фазу развития этого осложнения и отчетливых лабораторных критериев. Вместе с тем, потенциальные возможности нейтрофилов продуцировать свободные радикалы кислорода могут служить практически ценным показателем для своевременной ранней диагностики несостоятельности гуморально-клеточного звена системы защитных механизмов от патогенных бактерий и прогнозирования вероятности генерализации инфекции (Владимиров Ю.А., Потапенко А.Я., 1989; Зен-ков Н. К. и соавт., 1990; Любимов Г.Ю. и соавт., 1992; Алексеев А.А. и соавт., 1993). Исследования в этой области имеют большое значение не только для медицины, но и для сельского хозяйства, в частности, для ветеринарной практики (Styrt В. et al., 1989).

Немаловажный интерес представляет также поиск путей направленного воздействия на различные параметры специфической и неспецифической защиты организма, в частности, на кисло-родзависимые реакции нейтрофилов - стимуляцию свободноради-кальных процессов, если в этом возникает необходимость.

Цель и задачи исследования

Целью исследования явилось изучение процесса образования нейтрофилами свободных радикалов кислорода и разработка метода для оценки состояния неспецифической резистентности организма.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие основные задачи:

- в эксперименте на животных разработать метод исследования состояния свободнорадикального потенциала нейтрофилов на основе регистрации люминолзависимой хемилюминесценции образцов крови;

- доказать возможность использования метода в клинических условиях и разработать на его основе способ диагностики генерализации инфекции (на примере термической травмы);

- исследовать модулирующий эффект транскраниальной электростимуляции (ТКЭС) на свободнорадикальный потенциал нейтрофилов.

Работа выполнена в соответствии с планом НИР на базе клиники термических поражений Российского ожогового центра в Нижегородском НИИ травматологии и ортопедии. Экспериментальная часть работы проведена на 67 беспородных белых крысах. Лабораторным исследованиям подвергнуты пациенты с ожогами разной степени тяжести (138 человек) в динамике и практически здоровые люди (44 человека) - контрольная группа. Эффект транскраниальной электростимуляции изучен у 22 пациентов, получивших термическую травму.

Новизна научных исследований

1. В эксперименте на животных разработан метод для определения свободнорадикального потенциала нейтрофилов - интегрального показателя, включающего результаты регистрации све-тосуммы свечения анализируемых образцов крови за период инкубации препаратов, максимальной интенсивности свечения проб на высоте "респираторного взрыва", отражающей синхронность процесса генерации клеткой свободных радикалов кислорода, времени наступления максимальной интенсивности свечения препаратов - параметра, характеризующего состояние опсонизирую-щей способности плазмы крови, непосредственно влияющей на фагоцитарные свойства нейтрофилов и продукцию свободных радикалов, сопряженную с этим процессом. На основе полученных данных вычисляют параметр, отражающий специфический метаболический резерв клеток (супероксидгенерирующая активность нейтрофилов), что, в конечном итоге, дает возможность более адекватно оценить способность нейтрофилов продуцировать активированные метаболиты кислорода, особенно при неблагоприятных ситуациях, когда возникает угроза генерализации инфекции. Разработанный метод заявлен в качестве изобретения: "Способ определения в эксперименте способности нейтрофилов продуцировать активированные метаболиты кислорода" (Патент РФ N 2089907).

2. Разработан тест для ранней диагностики несостоятельности гуморально-клеточного звена системы защитных механизмов от патогенных бактерий и прогнозирования вероятности генерализации инфекции, основанный на определении свободнорадикального потенциала нейтрофилов: "Способ прогнозирования возможности генерализации инфекции при ожоговой болезни" (Патент РФ N 2134419).

3. Разработан способ, позволяющий стимулировать свободнорадикальный потенциал нейтрофилов с помощью методики транскраниальной электростимуляции. На "Способ стимуляции свободнорадикального потенциала нейтрофилов" получен патент (Патент РФ N 2164156).

Научно-практическая значимость работы

Теоретическая и практическая значимость работы определяется тем, что она вносит определенный вклад в понимание механизмов функционирования нейтрофилов, дает возможность более правильно оценивать функциональное состояние полиморфно-ядерных клеток, их потенциальный резерв и способность адекватно защищать организм от инфекции. Разработанный метод позволяет своевременно выявлять "сбои" в гуморально-клеточ-ной системе организма и ее декомпенсированные состояния.

Предложенный тест в совокупности с данными клинических, иммунологических, бактериологических и других видов исследований позволит повысить качество диагностики генерализованных воспалительных осложнений в случаях возможного возникновения такой угрозы и оценить эффективность проводимых лечебных мероприятий.

Выявленное действие транскраниальной электростимуляции на функцию нейтрофилов, стимулирующее их способность продуцировать свободные радикалы кислорода, может быть использовано в комплексе профилактических и лечебных мероприятий в условиях снижения резистентности организма к микробной инфекции.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Свободнорадикальный потенциал нейтрофилов является адекватной характеристикой для оценки способности этих клеток продуцировать свободные радикалы кислорода.

2. На основании исследования свободнорадикального потен

10 циала нейтрофилов возможно прогнозирование генерализации инфекции в условиях возникновения такой угрозы.

3. Транскраниальная электростимуляция оказывает модулирующее действие на кислородзависимые реакции нейтрофилов.

Апробация работы

Основные положения работы доложены на Шестом съезде травматологов и ортопедов России (Н. Новгород, 1997), Втором Международном симпозиуме "Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи" (Саратов, 1998), Международном конгрессе "Комбустиология на рубеже веков" (Москва, 2000), конференции "Актуальные проблемы травматологии и ортопедии", проводимой в рамках Международного медицинского форума "Человек и травма" (Н. Новгород, 2001). По материалам диссертации опубликовано 8 статей, получено 3 Патента РФ на технические решения, созданные в процессе выполнения диссертации. и

1. Обзор литературы

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Старикова, Марина Алексеевна

Выводы

1. В эксперименте на животных разработан метод определения свободнорадикального потенциала нейтрофилов (СПН), который позволяет адекватно оценить процесс образования поли-морфноядерными лейкоцитами свободных радикалов кислорода. Показано, что СПН - интегральный параметр, который включает информацию об интенсивности продукции нейтрофилами активированных метаболитов кислорода, мере синхронности этого процесса и опсонизирующих свойствах плазмы крови, выявляет специфический метаболический резерв клеток.

2. Установлено, что у экспериментальных животных свободнорадикальный потенциал нейтрофилов в условиях физиологической нормы находится в пределах 21,8 - 53,0 усл.ед., в интервале 6,2 - 21,7 усл.ед. - в пределах нижней границы нормы; ниже 6,2 усл.ед. оценивается как низкий, при котором потенциальная способность нейтрофилов продуцировать свободные радикалы кислорода является недостаточной.

3. При моделировании инфекционных процессов различной степени тяжести интенсивность образования нейтрофилами активированных кислородных метаболитов в значительной степени определяет способность организма противостоять распространению инфекции. При высоких значениях свободнорадикального потенциала нейтрофилов у экспериментальных животных, зараженных синегнойной палочкой в суммарной дозе как 0,75-109, так и 3,0•109 микробных тел, сепсис не развивается до конца эксперимента.

4. У животных в условиях моделирования более тяжелого инфекционного процесса выявлено снижение усредненных значений свободнорадикального потенциала нейтрофилов во все сроки наблюдения по сравнению с интактными животными и крысами, которым вводили микроорганизмы в низкой дозе. При значениях показателя ниже 6,2 усл.ед. отмечена гибель животных и развитие у них сепсиса.

5. Свободнорадикальный потенциал нейтрофилов является высокодинамичным параметром, который меняется во времени и зависит от состояния гуморально-клеточной системы защиты организма. При ожогах более 20% поверхности тела в интервале со вторых по 5-6 сутки отмечено наиболее выраженное падение усредненного показателя, что свидетельствует о низкой способности полиморфноядерных лейкоцитов защищать в этот период организм от инфекции.

6. При ожогах с площадью поражения кожных покровов менее 20% поверхности тела снижение усредненного показателя сво-боднорадикального потенциала нейтрофилов в интервале со 2-х по 5-6 сутки выражено слабее и анализируемый параметр быстро достигает уровня нормы.

7. Установлен диапазон нормы свободнорадикального потенциала нейтрофилов для здоровых людей -7,1 - 26,0 усл.ед. При ожогах значения показателя ниже 7,1 усл. ед. с высокой степенью достоверности (в 75% случаев) прогнозируют возможность возникновения генерализованной инфекции, что позволяет рекомендовать данный тест с целью раннего выявления несостоятельности гуморально-клеточного звена системы антимикробной защиты организма.

8. Достоверное повышение супероксидгенерирующей активности клеток (на 55,7%) в случаях с низкими значениями свободнорадикального потенциала нейтрофилов под действием транскраниальной электростимуляции свидетельствует об участии нервной системы в регуляции кислородзависимых реакций нейтрофилов.

Заключение

Фагоцитирующие клетки выполняют важную роль в защите организма от микробной инфекции. Особый интерес в этом плане представляют нейтрофильные полиморфноядерные лейкоциты. Составляя большинство по сравнению с другими функционально активными клеточными элементами в крови и в очагах воспаления, обладая способностью к генерации высокореактивных форм кислорода и ряда других биоцидных факторов, нейтрофилы инакти-вируют и уничтожают чужеродные объекты, формируя тем самым авангардную линию защиты, направленную на предотвращение распространения инфекции и восстановление нарушенной стабильности внутренней среды. При этом определение интенсивности продукции супероксида полиморфноядерными клетками может служить объективным показателем состояния защитно-приспособительных возможностей организма (Зенков Н.К., Куликов В.Ю., 1985; Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989; Алексеев А.А. и соавт.,1993). Однако методы, использующиеся для этих целей, не позволяют адекватно оценивать способность нейтрофилов продуцировать спектр свободных радикалов - активированных метаболитов кислорода, обладающих микробоцидным действием, так как они не выявляют ни метаболический резерв клеток, ни скорость мобилизации бактерицидных эффектов поли-морфноядерных лейкоцитов. Своевременно обнаружить нарушения функциональной активности полинуклеаров, определить несостоятельность гуморально-клеточной системы защиты организма от патогенных бактерий без этого невозможно.

Несомненный интерес представляет исследование суперок-сидгенерирующей способности нейтрофилов, отражающей состояние неспецифической резистентности организма, у обожженных. Внимание к этой проблеме определяется высокой частотой развития инфекционных осложнений, в структуре которых особенно важное значение имеет генерализованный воспалительный процесс, являющийся частой причиной неблагоприятного исхода ожоговой болезни. Своевременная диагностика и прогнозирование возникновения таких состояний до настоящего времени затруднены, что связано с отсутствием явных клинических признаков в латентную фазу развития этого патологического процесса и его быстротечностью в случаях раннего сепсиса.

Целью настоящего исследования явилось изучение процесса образования нейтрофилами свободных радикалов кислорода и разработка метода для оценки состояния неспецифической резистентности организма.

Экспериментальная часть работы выполнена на 67 беспородных белых крысах. Инфекционный процесс различной степени тяжести моделировали путем введения животным под кожу суточной культуры синегнойной палочки в однократной дозе 0,25 х 109 (I серия опытов) и 1,0 х 109 микробных тел (II серия опытов) в течение трех дней, при этом суммарная доза заражения в I серии опытов составила 0,75 х 109, а во II - 3,0 х 109 микробных тел. Лабораторные исследования образцов крови проводились у пациентов с ожогами различной степени тяжести (138 человек) в динамике и у практически здоровых людей (44 человека) - контрольная группа.

В результате проведенных исследований в эксперименте на животных было показано, что при использовании способа оценки специфической функции нейтрофилов только по результатам регистрации светосуммы свечения образцов за период инкубации препаратов, как предлагается в большинстве известных хемилю-минесцентных методов, судить о способности клеток продуцировать активированные метаболиты кислорода оказалось крайне затруднительным. В условиях нормы светосумма при регистрации интенсивности свечения образцов варьирует в достаточно широких пределах. Не выявлена отчетливая зависимость снижения показателя светосуммы свечения образцов с гибелью животных, зараженных живой культурой синегнойной палочки, у которых при гистоморфологическом исследовании внутренних органов обнаружены признаки сепсиса.

С целью повышения информативности метода предложено дополнительно учитывать такие важные параметры, как максимальная интенсивность свечения препарата на высоте "респираторного взрыва" - показатель, отражающий синхронность процесса наработки клеткой активированных метаболитов кислорода, а также время наступления максимальной интенсивности свечения образцов. Последний параметр характеризует состояние опсони-зирующей системы плазмы крови, непосредственно влияющей на фагоцитарные свойства нейтрофилов и реакции продукции свободных радикалов, сопряженные с этим процессом.

Следующий этап разработанной методики регистрации свободных радикалов, генерируемых клетками, предусматривает проведение сопоставительного анализа способности нейтрофилов продуцировать активированные метаболиты кислорода в условиях минимальных и максимальных "нагрузок": при соотношении в реакционной кювете количества микроорганизмов (индукторов "респираторного взрыва") и гранулоцитов 10:1 и 100:1, что позволяет выявлять специфический метаболический резерв клеток. Увеличение хемилюминесцентного ответа полинуклеаров при возрастании в реакционной кювете соотношения количества микроорганизмов и нейтрофилов до 100:1, когда клетка "работает" на "пределе" функциональных возможностей по сравнению с ответной реакцией нейтрофилов при соотношении числа бактерий и полинуклеаров 10:1, свидетельствует об адекватной функциональной активности клеток, их высокой потенциальной возможности продуцировать свободные радикалы и проявлять микробо-цидный эффект. Снижение анализируемого показателя в аналогичных условиях говорит о функциональной неполноценности гу-морально-фагоцитарной системы, недостаточной способности нейтрофилов генерировать свободные радикалы кислорода и эффективно защищать организм от инфекции.

На основании проведенных экспериментов рассчитан коэффициент Ki как отношение светосуммы свечения препаратов при соотношении в реакционной кювете количества микроорганизмов и нейтрофилов 100:1 к аналогичному показателю при соотношении 10:1. Аналогично получен коэффициент К2 - отношение показателей максимальной интенсивности свечения образцов на высоте "респираторного взрыва" в тех же условиях эксперимента. Низкие значения коэффициентов Ki и К2 по сравнению с нормой (Ki и К2 у интактных животных приближаются к 2) коррелировали с гибелью животных и проявлением у них сепсиса, диагностируемого на основании гистоморфологических изменений внутренних органов.

С целью уменьшения ошибки при оценке опсонизирующей способности плазмы крови животных по времени наступления максимума свечения препаратов вычисляли комплексный показатель -Тк, который является суммой зарегистрированного времени наступления максимума свечения образцов при соотношении в реакционной кювете микроб/нейтрофил 10:1 и 100:1. При этом возможно более точное суждение об опсонизирующей способности плазмы крови, так как учитываются два показателя в параллельных реакционных кюветах. Возрастание Тк свидетельствует об уменьшении активности опсонизирующей системы, непосредственно связанной с проявлением специфических функций нейтрофилов и влияющей на скорость, а также синхронность "наработки" клетками свободных радикалов. Укорочение времени наступления максимума свечения анализируемых образцов отражает повышение опсонизирующих свойств плазмы крови, быстро наступающую активацию кислородзависимого метаболизма нейтрофилов.

В результате обобщения полученных показателей - свето-сумма свечения в процессе регистрации люминолзависимой хемилюминесценции нейтрофилов, высота пика "респираторного взрыва" и время наступления максимума интенсивности свечения препаратов был рассчитан интегральный параметр - свободноради-кальный потенциал нейтрофилов(СПН). СПН отражает функциональный резерв клеток, на основании оценки которого возможно суждение о потенциальной способности полинуклеаров продуцировать свободные радикалы, что представляет интерес диагностического характера, особенно при угрозе генерализации инфекции.

Свободнорадикальный потенциал нейтрофилов вычисляли по формуле:

СПН = [(Ki + К2)/Тк] х 100, где множитель 100 используется для представления показателя СПН свыше единицы.

При значении показателя от 21,8 до 53,0 усл. ед. СПН оценивается как находящийся в пределах оптинормы (М ± б), в интервале 6, 2 - 21,7 усл. ед. - в диапазоне нижней границы нормы, а ниже 6, 2 усл. ед. - за пределами нижней границы нормы. При этом потенциальная способность нейтрофилов продуцировать свободные радикалы оценивается как недостаточная.

Выявленная корреляция низких значений СПН с гибелью животных и гистоморфологическими проявлениями у них сепсиса позволяют считать предлагаемый метод адекватным для характеристики функционального состояния анализируемых клеток - их способности продуцировать активированные метаболиты кислорода, а также пригодным для прогнозирования возможности генерализации инфекции.

Поскольку в предложенном методе коэффициенты Ki и К2 рассчитываются в виде отношений однотипных параметров, это позволяет исключить необходимость подсчета абсолютного содержания нейтрофилов в образце крови, так как фактор количества клеток в этом случае не имеет значения (идентичные показатели нейтрофилов в 1 мкл крови в числителе и знаменателе сокращаются при вычислении коэффициентов Ki и К2). Это существенно упрощает методику и исключает необходимость привлечения к исследованию специалистов, владеющих техникой подсчета полинуклеаров в мазках крови или с помощью гематологического анализатора.

Важным преимуществом предложенного метода является исключение этапа изолирования нейтрофилов из цельной крови и приготовления взвеси этих клеток - достаточно трудоемкой процедуры, требующей дополнительного времени и специальных реагентов для создания градиента плотности в среде выделения, а также опущение процедуры предварительной преопсонизации сывороткой донора культуры микроорганизмов, использующихся для инициации "респираторного взрыва".

В методике, предложенной нами, опсонизация микроорганизмов - индукторов "респираторного взрыва", осуществляется непосредственно в реакционной кювете опсонинами плазмы крови того же биообъекта, нейтрофилы которого исследуются. При этом индивидуальные опсонизирующие свойства плазмы биообъекта непосредственно влияют на механизмы "включения" "респираторного взрыва" фагоцитирующих клеток. Этот фактор (Тк) учитывается при расчете свободнорадикального потенциала нейтрофильных гранулоцитов. Выполнение метода в таком варианте, с нашей точки зрения, является более правильным и адекватно отражает состояние гуморально-клеточной системы защиты организма от патогенных бактерий.

Существенным преимуществом предложенного метода является сопоставимость получаемых результатов оценки СПН при использовании для этих целей аналитической аппаратуры, имеющей различные конструктивные особенности и неодинаковую чувствительность фотоэлектронных умножителей (ФЭУ). Это обусловлено тем, что для расчета СПН используются не абсолютные значения параметров, которые различаются в зависимости от типа используемого прибора, а относительные величины - коэффициент Ki и К2. Время наступления максимума свечения образцов (Тк) является одинаковым при использовании любой марки хемилюминометра. Следовательно, независимость получаемых результатов от вида используемой аппаратуры для регистрации люминолзависимой хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов выгодно отличает разработанный метод от других способов регистрации продукции клетками свободных радикалов, так как это позволяет сравнивать результаты исследований, выполненных в различных научных и лечебных учреждениях, которые используют неидентичные по конструкции приборы, оснащенные ФЭУ.

Разработанный в эксперименте метод определения СПН был адаптирован для прогнозирования вероятности генерализации инфекции у пострадавших от термической травмы. Эффективность и адекватность метода была показана путем сопоставительного анализа результатов определения СПН и исходов ожоговой болезни: пациент выжил или умер, умер при явлениях сепсиса или в результате иных осложнений. При этом диагноз сепсиса и иных патологических состояний был верифицирован по результатам патологоанатомического вскрытия умерших. Анализу подвергнут массив историй болезни 138 пациентов, находившихся на лечении в клинике термических поражений Российского ожогового центра на базе ННИИТО. Из них 38 человек погибли в различные сроки после ожога, в том числе 8 пациентов умерли от сепсиса. У 6 погибших из 8, что составляет 75%, на основании анализа СПН, значения которого оказались за пределами нижней границы нормы, сепсис диагностирован правильно. Невозможность в 100% случаев прогнозировать возникновение сепсиса на основании регистрации падения СПН можно объяснить тем, что патогенез генерализации инфекции является очень сложным процессом, с которым связаны глубокие нарушения и в других звеньях системы гомеостаза.

Было обнаружено, что СПН является динамичным показателем, меняющимся не только во времени, но и в зависимости от тяжести термической травмы. Выявленные изменения колебательного характера усредненных величин анализируемого показателя в течение ожоговой болезни являются результатом слагаемых многих факторов - как эндогенного (защитные силы организма), так и экзогенного характера (патогенность микроорганизмов, адекватность лечебных мероприятий).

Резкое падение СПН, отмеченное у пациентов с.термической травмой в интервале со 2-х по 5 - 6 сутки после ожога, свидетельствует о том, что организм пострадавших в данный период оказывается наименее защищенным от инфекции активированными метаболитами кислорода, продуцируемыми нейтрофилами. Это может являться одной из ведущих причин снижения резистентности организма и способствовать генерализации инфекции. Как свидетельствуют данные литературы и наблюдения, проведенные в нашем институте, в этот период наиболее часто у пострадавших развивается так называемый ранний сепсис. Прежде всего, это касается пациентов с ожогами средней тяжести, тяжелыми и крайне тяжелыми. В этой группе было выявлено наиболее значительное снижение показателя по сравнению с пострадавшими, получившими легкие ожоги. Снижение СПН у людей с легкими ожогами было выражено значительно меньше и анализируемый параметр быстро возвращался к норме.

Резкое угнетение защитных антимикробных механизмов у пострадавших от термической травмы, в значительной мере способствующее генерализации инфекции, создает предпосылки для разработки новых методов лечебных мероприятий, направленных на повышение резистентности гуморально-клеточной системы и защитных сил организма в целом. Среди различных аспектов проблемы борьбы с инфекционными осложнениями это приобретает особенно важное значение в связи с высокой устойчивостью возбудителей к антибактериальным препаратам, в том числе и к антибиотикам последних поколений.

С целью коррекции функциональной активности нейтрофилов, которым принадлежит решающая роль в предупреждении возникновения и ликвидации осложнений гнойного характера, была предложена методика транскраниальной электростимуляции (ТКЭС) пациентам, перенесшим термическую травму. Как оказалось, тип ответной реакции нейтрофилов на ТКЭС в значительной мере определялся исходным состоянием супероксидгенерирующей способности полиморфноядерных лейкоцитов. СПН возрастает у пациентов при низких исходных значениях параметра и достигает уровня нормы после сеансов ТКЭС. При изначально высоком показателе СПН под влиянием ТКЭС наблюдается его снижение до нормальных значений. Эти результаты свидетельствуют о модулирующем эффекте ТКЭС на способность нейтрофилов продуцировать свободные радикалы. При этом низкие значения СПН являются показанием для включения процедуры ТКЭС в комплекс лечебных мероприятий.

Таким образом, в эксперименте на животных был разработан новый метод регистрации способности нейтрофилов продуцировать свободные радикалы, имеющий ряд преимуществ перед другими известными методами. Предложенный тест позволяет более

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Старикова, Марина Алексеевна, Нижний Новгород

1. А.с. 2003360 (СССР), МКИ А 61 N 1/36. Транскраниальный стимулятор / Л.Н.Синицин, В.М.Трошин, К.А.Кондратьев (СССР) // Открытия. Изобретения. 1993. - N 43.

2. Авзалетдинова А.Р., Фазлыева P.M., Фархутдинов P.P. и др. Хемилюминесценция крови и мочи в дифференциальной диагностике геморрагической лихорадки с почечным синдромом // Клинич. лаб. диагностика. 1995. - N 5. - С. 45-47.

3. Алексеев А.А. Ожоговый сепсис: диагностика, профилактика, лечение: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 1993. - 40 с.

4. Алексеев А.А., Карелин А. А., Глоба А.Г. и др. Определение продукции супероксида полиморфноядерными лейкоцитами для диагностики и прогнозирования ожогового сепсиса // Хирургия. 1993. - N 4. - С. 57-61.

5. Алексеев А. А., Лавров В. А. Ожоговая септикотоксемия: этиология, патогенез, клиника, лечение // Рос. мед. журн. -1998. N 1. - С. 41-44.

6. Антипов А.Ю., Шепелев А.П., Поляков В.М. Влияние экзотоксина токсического шока Staphylococcus aureus на хемилю-минесценцию клеток цельной крови In vitro и In vivo // Вопр. мед. химии. 1995. - Т. 41, N 2. - С. 40-42.

7. Арьев Т.Я. Термические поражения. Л.: Медицина, 1966. - 704 с.

8. Белоцкий С.М., Борисова Т.Г., Снастина Т.И. и др. Характеристика фагоцитов, Т- и В- лимфоцитов у обожженных // Иммунология. 1983. - N 6. - С. 51-54.

9. Бизюкин А.В., Коркина Л.Г. Использование флюоресцентного индикатора гидроэтидина для изучения окислительного метаболизма фагоцитов // Клинич. лаб. диагностика. 1994. -N 1. - С. 41-42.

10. Бирюков А.В., Стенина М.А., Скрипник А.Ю. и др. Роль системы циклических нуклеотидов в иммунорегуляторных процессах и методические подходы к ее изучению при оценке иммунного статуса человека // Лаб. дело. 1985. - N 1. - С. 29-35.

11. Богданова Ю. А., Каде А.Х., Куринный Н. А. и др. Применение транскраниальной электростимуляции у больных с вторичной иммунологической недостаточностью // Междунар. конгр. 1,Комбустиология на рубеже веков". М., 2000. - С. 68.

12. Бочоришвили В.Г., Бочоришвили Т.В. Новая иммунологическая концепция сепсиса и ее клиническое значение // Интерн. журн. по иммунореабилитации. 1997. - N 6. - С. 20-27.

13. Вазина И. Р., БушуевЮ.И., Сосин Е.Ю. Особенности сепсиса у обожженных в настоящее время // Вестн. хирургии им. Грекова. 1985. - Т. 135, N 12. - С. 66-68.

14. Вазина И.Р., Верещагина Е.С., Пылаева С.И. и др. Сепсис обожженных и вопросы его патогенеза // Междунар. конгр. "Комбустиология на рубеже веков". М., 2000. - С. 43-44.

15. Вазина И.Р., Пылаева С.И., Гординская Н.А. и др. Некоторые вопросы патогенеза раннего сепсиса при термической травме // VI Съезд травматологов и ортопедов России: Тез. докл. Н.Новгород, 1997. - С. 73.

16. Ветошкин А.И., Годков М.А., Шахламов М.В. и др. Сравнительный анализ хемилюминесцентного исследования нейтрофилов из различных бассейнов сосудистой сети // Клинич. лаб. диагностика. 1999. - N 10. - С. 26-27.

17. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липи-дов и физические свойства липидного слоя биологических мембран // Биофизика. 1987. - Т. 32, вып. 5. - С. 830-844.

18. Владимиров Ю.А., Потапенко А.Я. Физико-химические основы фотобиологических процессов. М.: Высшая школа, 1989. - 200 с.

19. Вуль С.М., Колкер И.И., Панова Ю.М. и др. Бактериологическая характеристика ожоговых ран // Хирургия. 1979. - N 8. - С. 3-6.

20. Гордиенко С.М. Одновременная люминесцентная оценка фагоцитарной и бактерицидной функции макрофагов и нейтрофилов кожного экссудата человека // Лаб. дело. 1982. - N 10.- С. 614-615.

21. Деев А.И., Добрецов Г.Е., Арнхольд Й. и др. Уменьшение площади поверхности фосфолипидных мембран при перекисном окислении липидов // Биол. мембраны. 1989. - Т. 6, N11. -С. 1227-1231.

22. Джафаров А.И., Магомедов Н.М., Азимова A.M. и др. О роли моноаминооксидазы в интенсификации перекисного окисления липидов митохондрий при экспериментальном некрозе миокарда // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1988. - N 7. -С. 45-47.

23. Долгушин И.И., Зурочка А.В., Чукичев А.В. Участие нейтрофилов в регуляции воспалительно-репаративной реакции поврежденной ткани // Иммунология. 1998. - N 6. - С. 14.

24. Долгушин И.И., Эберт Л.Я., Лифшиц Р.И. Иммунология травмы. Свердловск: Изд-во Урал.ун-та, 1989. - 188 с.

25. Зенков Н.К., Куликов В.Ю. Хемилюминесцентный метод исследования функциональной активности фагоцитирующих клеток // Лаб. дело. 1985. - N 1. - С. 43-44.

26. Зенков Н.К., Меньшикова Е.Б., Шергин С.М. Сравнительный анализ хемилюминесценции гранулоцитов капиллярной и венозной крови // Лаб. дело. 1990. - N 12. - С. 33-35.

27. Зинкевич 0.Д., Сафина Н.А., Харрасов А.Ф. и др. Влияние препаратов фибронектина на хемилюминесцентныи ответ нейтрофилов // Вопр. мед. химии. 1990. - Т. 36, N 2. -С. 53-55.

28. Золотницкая Р.П. Методы гематологических исследований // Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / Под ред. В.В. Меньшикова. М.: Медицина, 1987. С. 106-148.

29. Зурочка А.В., Долгушин И.И., Власов А. В. и др. Изучение латекс-индуцированной люминолзависимой хемилюминесценции нейтрофилов // Лаб. дело. 1989. - N 3. - С. 32-36.

30. Исаков Ю.Ф., Белобородова Н.В. Сепсис у детей. М.: Издатель Мокеев, 2001. - 369 с.

31. Карваял Х.Ф., Парке Д.Х. Ожоги у детей: Пер. с англ. М.: Медицина, 1990. - С. 265-388.

32. Карелин А.А., Алексеев А.А., Глоба А.Г. и др. Энзи-матическая продукция супероксида полиморфноядерными лейкоцитами человека при ожоговой болезни // Вопр. мед. химии. 1988. N 5. - С. 107-110.

33. Кашкина JI.M., Прилуцкая М.О. Динамика реакции хемилюминесценции нейтрофилов крови сирийских хомяков на рост десяти различных штаммов опухолевых клеток // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1992. - N 9. - С. 315-319.

34. Кипшидзе Н.Н., Хомерики С.Г., Кубатиев А.А. и др. Изменение лектининдуцированной хемилюминесценции нейтрофилов после облучения крови светом гелий-неонового лазера // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1992. - N 1. - С. 24-26.

35. Клячкин JI. М., Пинчук В.М. Ожоговая болезнь: (Клиника, патогенез, патологическая анатомия и лечение) / Под ред. Н.С. Молчанова. Л.: Медицина, 1969. - 479 с.

36. Кожевникова Т.А., Кожевников В.Н. Влияние методики транскраниальной электростимуляции (ТКЭ) на иммунную систему: Тез. докл. на 4 Междунар. конгр. "Иммунореабилитация и реабилитация в медицине" // Int. J. Immunorehabll. 1998.8. P. 175.

37. Колкер И.И. Инфекция и иммунитет при термических поражениях // Хирургия. 1980. - N 5. - С. 17-22.

38. Колкер И.И., Каем Р.И., Вуль С.М. Инфекционно-имму-нологические аспекты ожоговой болезни // Арх. патологии. 1974. N 1. - С. 3-13.

39. Колкер И.И., Победина В.Г., Панова Ю.М. Фагоцитарная активность леикоцитов крови и некоторые пути ее стимуляции у ожоговых больных // Клинич. медицина. 1978. - N 5. - С. 94-97.

40. Кочетыгов Н.И. Ожоговая болезнь. Л.: Медицина. Ле-нингр. отд-ние, 1973. - 246 с.

41. Краснова Е.И., Архипов С.А., Маянская Н.Н. Хемилюми-несцентный ответ лейкоцитов крови больных рожей при использовании различных стимуляторов // Клинич. лаб. диагностика. 1996. - N 3. - С. 35-37.

42. Кудрявицкий А.И. Оценка киллерной бактерицидности нейтрофилов периферической крови здоровых доноров и больных в прямом визуальном методе // Лаб. дело. 1985. - N 1. -С. 45-47.

43. Кузин М.И., Костюченок Б.М. Хирургический сепсис -современное состояние проблемы // Вестн. АМН СССР. 1983. -N 8.- С. 7-13.

44. Кузин М.И., Сологуб В.К., Юденич В.В. Ожоговая болезнь. М.: Медицина, 1982. - 160 с.

45. Кузнецов В.И., Станишевская О.Б. Хемилюминесценция компонентов крови здоровых людей // Лаб. дело. 1991. - N 2. - С. 54.

46. Кузьмина Е.И., Конторщикова К.Н., Щербатюк Т.Г. Хе-милюминесцентный метод оценки активности полиморфноядерных клеток крови при озонотерапии // Тез. II Всерос. конф. "Озон в биологии и медицине". Н. Новгород, 1995. - С. 32-33.

47. Кукаева Е.А., Андрианова М.Ю., Палюлина М. В. и др. Перекисное окисление липидов у кардиохирургических больных // Клинич. лаб. диагностика. 1999. - N 9. - С. 20.

48. Кулаичев А.П. Методы и средства анализа данных в среде Windows. Stadia 6. 0. М.: Информатика и компьютеры, 1998. - 270 с.

49. Кучкина Н.В., Орлов С.Н., Покудин Н.И. и др. Влияние осмотичности среды на хемилюминесценцию нейтрофилов человека // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1993. - N 4. -С. 360-362.

50. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1968. -284 с.

51. Лебедев В.П., Савченко А.Б., Петряевская Н.В. Об опиатном механизме транскраниальной электростимуляции у крыси мышей // Физиол. журн. СССР им. Сеченова. 1988. - Т. 74, N9. - С. 1249-1256.

52. Лебедев В.П., Савченко А.Б., Фан А.Б. и др. Транскраниальная электроанальгезия у крыс: оптимальный режим электрических воздействий // Физиол. журн. СССР им. Сеченова. 1988. - Т. 74, N 8. - С. 1094-1101.

53. Лыткин М.И. О патогенезе и принципах лечения сепсиса // Воен.-мед. журн. 1981. - N 4. - С. 26-30.

54. Лыткин М.И., Костин Э.Д., Костюченко А. Л. и др. Септический шок. Л.: Медицина, 1980. - 240 с.

55. Любимов Г.Ю., Зенков Н. К., Вольский Н.Н. и др. Хеми-люминесценция перитонеальных макрофагов при действии макро-фагактивирующего фактора // Иммунология. 1992. - N 1,-С. 40-43.

56. Малиновский Н.Н., Решетников Е.А., Шипилов Г.Ф. и др. Диагностика и лечение сепсиса // Хирургия. 1992. - N 7. - С. 3-8.

57. Маянский А.Н., Галиуллин А.Н. Реактивность нейтрофи-ла. Казань: Изд-во Казан, ун-та, 1984. - 158 с.

58. Маянский А.Н., Куравская М.С., Пикуза О.И. и др. Оп-соническая функция альтернативного пути активации комплемента: способ определения и клиническая характеристика // Иммунология. 1982. - N 3. - С. 84-87.

59. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1989. - 334 с.

60. Маянский А.Н., Невмятуллин А.Л., Маянская И.В. и др. Структурные и функциональные аспекты прямого взаимодействия бактерии с фагоцитами // Журн. микробиол., эпидемиол. и им-мунобиол. 1986. - N 4. - С. 90-96.

61. Маянский А.Н., ПазюкЕ.А., ВиксманМ.Е. Внутрипопу-ляционная неоднородность нейтрофилов человека по реакциям хемокинеза и респираторного взрыва // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1984. - N 6. - С. 699-700.

62. Маянский А.Н., Пазюк Е.А., Макарова Т.П. и др. Механизм и диагностические возможности реакции восстановления нитросинего тетразолия нейтрофилами человека // Казан, мед. журн. 1981. - N 4. - С. 64-68.

63. Маянский Д.Н. Хроническое воспаление. М.: Медицина, 1991. - 272 с.

64. Мешавкин В.К., Торопов А.В., Кост Н.В. и др. Повышение физической работоспособности под влиянием транскраниальной электростимуляции // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1996. - N 8. - С. 128-130.

65. Мицнефис М.М., Маянскйй А.Н., Невмятулин А.Л. и др. Определение реактивной люминолзависимой хемилюминесценции неитрофилов // Лаб. дело. 1991. - N 10. - С. 45-46.

66. Мусил Я. Основы биохимии патологических процессов. -М.: Медицина, 1985. 314 с.

67. Нилова Н.С., Полежаева Л.Н. Система перекисного окисления липидов головного мозга крыс в условиях эмоционально-болевого стресса различной длительности // Вопр. мед. химии. 1993. - Т. 39, N 6. - С. 28-31.

68. Орлов А.Н. Ожоговая инфекция. Л.: Медицина. Ле-нингр. отд-ние, 1973. - 198 с.

69. Паевская O.K., Малов В.А., Чернова М.Е. и др. Динамические изменения хемилюминесценции полиморфноядерных лейкоцитов у больных салмонеллезом при использовании различных стимуляторов // Клинич. лаб. диагностика. 2001. - N И. -С. 18-19.

70. Парамонов Б.А., Порембский Я.0., Яблонский В.Г. Ожоги: Руководство для врачей. СПб.: СпецЛит, 2000. - 480 с.

71. Пат. 2089907 РФ, МПК G 01 N 33/49, 21/76. Способ определения в эксперименте способности нейтрофилов продуцировать активированные метаболиты кислорода / В.Г.Сидоркин, М.А.Старикова, Ю.И.Бушуев и др. (РФ) // Изобретения (заявки и патенты). 1997. - N 25.

72. Пат. 2134419 РФ, МПК G 01 N 33/49, 33/53. Способ прогнозирования возможности генерализации инфекции при ожоговой болезни / В.Г.Сидоркин, М.А.Старикова, А.Н.Сидоркина и др. (РФ) // Изобретения (заявки и патенты). 1999. - N 22.

73. Пат. 2164156 РФ, МПК А 61 N 1/36, А 61 В 5/04. Способ стимуляции свободнорадикального потенциала нейтрофилов / Л.Н.Синицин, В.Г.Сидоркин, М.А.Старикова (РФ) //Изобретения (заявки и патенты). 2001. - N 8.

74. Пахомов С.П. Хирургия ожогов у детей / Нижегород.

75. НИИТО. М.: Журн. "Путь к успеху", 1997. - 207 с.

76. Пашутин С.Б., Борисова Т.Г., Белоцкий С.М. Циркулирующие иммунные комплексы и гетерофильные гемолизины при ожоговой болезни // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1984. N 3. - С. 324-326.

77. Петров A.M., Столяров И.Д., Огурцов Р.П. и др. Состояние иммунной системы пациентов с ишемическим инсультом при транскраниальных электромагнитных стимуляциях // Физиол. человека. 1999. - Т. 25, N 5. - С. 35-40.

78. Пирязев А.П. Хемилюминесценция фагоцитов цельной крови, стимулированная кристаллами сульфата бария: Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 1997. - 19 с.

79. Полевщиков А. В., Назаров П.Г., Берестовая Л.К. Влияние С-реактивного белка на синтез РНК и белка в нейтрофилах // Вопр. мед. химии. 1993. - Т. 39, N 1. - С. 43-45.

80. Поцелуева М.М., Пустовидко А. В., Алабин B.C. и др. Генерация реактивных форм кислорода полиморфноядерными лейкоцитами в процессе развития гепатомы в брюшной полости животных // Цитология. 1999. - Т. 41, N 2. - С. 162-166.

81. Прогнозирование, профилактика и лечение раннего сепсиса у тяжелообожженных детей: Пособие для врачей / (Авт.: Е.С.Верещагина, И. Р. Вазина, Н. А. Гординская и др.). Н.Новгород, 2000. - 18 с.

82. Росс Д. Кислородзависимая биоцидность фагоцитов: инициация, регуляция, эффекторы // Нижегород. мед. журн. -1991. N 3. - С. 56-62.

83. Руднов В.А. Сепсис. Терминология, патогенез, оценка тяжести и интенсивная терапия (современные представления). Часть 1. // Вестн. интенсив, терапии. 1997. - N 3. - С. 33-36.

84. Руднов В.А. Сепсис. Терминология, патогенез, оценка тяжести и интенсивная терапия (современные представления). Часть 2. // Вестн. интенсив, терапии. 1997. - N 4. - С. 40-45.

85. Рудовский В. и др. Теория и практика лечения ожогов: Пер. с англ. / В.Рудовскии, В.Назиловский, В.Зиткевич,

86. К.Зинкевич. М.: Медицина, 1980. - 375 с.

87. Рыжикова М.А., Габитова Д.М., Сибиряк С.В. Хемилюми-несцентные методы исследования в лабораторной диагностике // Клинич. лаб. диагностика. 2001. - N 11. - С. 3-4.

88. Саломатин В.В., Лютов А.Г., Еникеева С.А. и др. Влияние а!-кислого гликопротеина на хемилюминесценцию неитрофи-лов и перекисное окисление липидов при экспериментальной термической травме // Вопр. мед. химии. 1993. - Т. 39, N 3. - С. 24-26.

89. Семенков В.Ф. Индуцированная хемилюминесценция лейкоцитов крови как лабораторный тест экспресс-диагностики острого отторжения аллогенной почки // Клинич. лаб. диагностика. 1999. - N 9. - С. 43.

90. Сидоркин В.Г., Старикова М.А., Сидоркина А.Н. и др. Динамика свободнорадикального потенциала нейтрофилов при ожоговой болезни / ННИИТО. Н.Новгород, 1997. - 15 с. Деп. в ВИНИТИ 31.10.97, N 3203 - В 97.

91. Синицин Л.Н., Сидоркин В.Г., Старикова М.А. и др. Влияние транскраниальной электростимуляции на свободнорадикальный потенциал нейтрофилов // VI Съезд травматологов и ортопедов России: Тез. докл. Н.Новгород, 1997. - С. 140.

92. Смолиговец Е.0., Федоров Н.А., МалыхинаЛ.С. Определение люминолзависимой хемилюминесценции гранулоцитов // Лаб. дело. 1989. - N 2. - С. 23-26.

93. Старикова М.А. Ретроспективный анализ соотношения низких значений свободнорадикального потенциала нейтрофилов с генерализацией инфекции у больных с термической травмой //Междунар. конгр. "Комбустиология на рубеже веков". М.,2000. С. 60-61.

94. Старикова М. А., Сидоркин В. Г. Применение транскраниальной электростимуляции для активации свободнорадикального потенциала нейтрофилов // Клинич. лаб. диагностика. 2001. N 10. - С. 9.

95. Стрелков Р.Б. Метод вычисления стандартной ошибки и доверительных интервалов средних арифметических величин с помощью таблицы. Сухуми: Алашар, 1966. - 41 с.

96. Толстов А.В., Филимонов А.А., Бучин П.И. Совершенствование диагностики сепсиса у тяжелообожженных // Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи: Материалы II междунар. симп. Саратов, 1998. - С. 132-133.

97. Тюрин Ю.Н., Макаров А.А. Анализ данных на компьютере / Под ред. В.Э. Фигурнова. М.: ИНФРА-М. Финансы и статистика, 1995. - 384 с.

98. Фархутдинова Л.В., Фархутдинов Р. Р. Люминолзависи-мая хемилюминесценция цельной крови у часто болеющих детей // Клинич. лаб. диагностика. 2000. - N 2. - С. 13-16.

99. Федоров Н.А., Радуновацкий М.Г., ЧеховичГ.Е. Циклические нуклеотиды и их аналоги в медицине. М.: Медицина, 1990. - 176 с.

100. Филатов О.Ю. Роль гистамина в изменении секреции активных форм кислорода полиморфноядерными лейкоцитами подвоздействием аллезгенов / Рос. гос. мед. ун-т. М., 1999. 22 с. Деп. в ВИНИТИ 29.07.99, N 2479-В99.

101. Филюкова 0.Б., Снастина Т.И., Белоцкий С.М. и др. Стимуляция респираторного взрыва нейтрофилов здоровых людей различными концентрациями Staphylococcus aureus // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1987. - N 3. - С. 58-60.

102. ХаринГ.М., Шакирова А.3., Сабитова A.M. Влияние стимуляции фагоцитов на неспецифическую резистентность организма к шокогенным воздействиям // Бюл. эксперим. биологии имедицины. 1998. - Т. 126, N И. - С. 548-551.

103. ИЗ. Чернух A.M., Штыхно Ю.М. Травматическое повреждение (местные и общие патофизиологические механизмы) // Вестн. АМН СССР. 1975. - N 1. - С. 36-40.

104. Шерстнев К.Б., Сулейманов А.К. Белки мембран синап-тосом головного мозга крыс при судорогах, вызванных повышенным давлением кислорода // Вопр. мед. химии. 1986. - N 4. - С. 35-37.

105. Allen R.C., Prultt B.A. Humoral-phagocyte axis of Immune defense In burn patients. Chemoluminigenlc probing // Arch. Surg. 1982. - V. 117. - P. 133-140.

106. Ambruso D.R., Bolscher B.G., Stockman P.M. et al. Assembly and activation of the NADPH: 02 oxldoreductase In human neutrophils after stimulation with phorbol myrlstate acetate // J. Biol. Chem. 1990. - V. 265, N 2. - P. 924-930.

107. Arnhold J., Benard S., Kilian U. et al. Modulation of lumlnol chemiluminescence of fMet-Leu-Phe-stimulated neutrophils by affecting dephosphorylation and the metabolism of pnosphatidic acid // Luminescence. 1999. - V. 14, N 3. - P. 129-137.

108. Bablor B.M., Klpness R.S. Superoxide-forming enzyme from human neutrophils: evidence for a flavin requirement // Blood. 1977. - V. 50, N 3. - P. 517-524.

109. Baggiolini M., Kernen P., Deranleau D.A. et al. Control of motility, exocytosis and the respiratory burst In human neutrophils // Blochem. Soc. Trans. 1991. - V. 19, N 1. - P. 55-59.

110. Bechev В., Markova V., Alexandrova M. et al. Estimation of leukocyte activity of patients with pleural effusion by chemlluminescent method // Scr. scl. med. 1997.

111. V. 29, Suppl. N 4. P. 83-87.

112. Bergdoll M.S., Cross B. A, Reiser R.F. et al. An en-terotoxin-like protein In Staphylococcus aureus strains from patients with toxic shock syndrome // Ann. Intern. Med. 1982. ¥. 96. - P. 969-971.

113. Berger D. Infection without Infection focus clinical relevance of bacterial translokatlon // Langenbecks. Arch. Chlr. Suppl. Kongressbd. - 1997. - ¥. 114. - P. 941-946.

114. Bone R.C. Attenuating the effects of endotoxin // J. Lab. Clin. Med. 1992. - ¥. 119, N 4. - P. 323-324.

115. Bone R.C. Toward a theory regarding the pathogenesis of the systemic Inflammatory response syndrome: what we do and do not know about cytokine regulation // Crit. Care. Med. 1996. - ¥. 24, N 1. - P. 163-172.

116. Buchta R., Gennaro R., Pontet M. et al. C-reactive protein decreases protein phosphorylation in stimulated human neutrophils // FEBS Lett. 1988. - ¥. 237, N 1-2. - P. 173-177.

117. Cockcroft S., Leino L., Segal A.W. Reconstitution of G-protein-activated NADPH-oxidase activity with a cytoso-lic factor in streptolysin O-permeabilized human neutrophils // Clin, and Exp. Immunol. 1998. - ¥. 112, N 1. - P. 9.

118. Cooke E., Hallett M.B. The role of C-kinase in the physiological activation of the neutrophil oxidase. Evidence from using pharmacological manipulation of C-kinase activity in intact cells // Biochem. J. 1985. - ¥. 232, N 2. -P. 323-327.

119. Danner R.L., ElinR.J., Hosseini J.M. et.al. Endotoxin determinations in 100 Clin. Res. 1988. - ¥. 36,patients with septic shock // ЯЗ. P. 453A.

120. Danner R. L., Elin R.J., Hosseini J.M. et al. Endo-toxemia in human septic shock // Chest. 1991. - ¥. 99, N 1. - P. 169-175.

121. De La Cruz C., Haimovich В., Greco R. Bacterialphagocytosis and kill by neutrophils adherent to Ig G or fibrinogen // FASEB Journal. 1997. - V. 11, N 3. - P. 137.

122. Edwards K.M., Gewurz H., Sokalski S.J. et al. Antibody and complement In the stimulation of neutrophil chemi-luminescence by Neisseria meningitidis: studies in a patient with complete deficiency of C7 // J. Infect. Dis. 1982. -Y. 145, N 1. - P. 65-71.

123. Elbim C., Gougerot-Pocidalo M.-A. Priming study of human phagocites oxidative burst by using flow cytometry. // Hematol. and Cell Ther. 1996. - V. 38, N 6. - P. 527-535.

124. Ernst M., Heberer M., Fischer H. Chemiluminescence measurements of immune cells a tool in immunobiology and clinical research // J. Clin. Chem. Clin. Biochem. - 1983. -V. 21, N 9. - P. 555-560.

125. Farrar J.J., Benjamin W.R., HilfikerM.L. et al. The biochemistry, biology, and role of interleukin 2 in the Induction of cytotoxic T cell and antibody-forming В cell responses // Immunol. Rev. 1982. - V. 63. - P. 129-166.

126. Fast D.J., Schlievert P.M., Nelson R.D. Toxic shock syndrome-associated staphylococcal and streptococcal pyroge-nic toxins are potent inducers of tumor necrosis factor production // Infect. Immun. 1989. - V. 57, N 1. - P. 291-294.

127. FearonD.T., Wong W.W. Complement ligand-receptor interactions that mediate biological responses // Annu. Rev. Immunol. 1983. - V. 1. - P. 243-271.

128. Fletcher M.P., Seligmann В.E., Gallin J.I. Correlation of human neutrophil secretion, chemoattractant receptor mobilization, and enhanced functional capasity // J. Immunol. 1982. - V. 128, N2. - P. 941-948.

129. Gallin J.I. Human neutrophil heterogeneity exists, but is it meaningful ? // Blood. 1984. - V. 63, N 5. -P. 977-983.

130. Goldstein I.M., Roos D., Kaplan H.B. et al. Complement and immunoglobulins stimulate superoxide production by human leukocytes independently of phagocytosis. // J. Clin. Invest. 1975. - V. 56. - P. 1155-1163.

131. Governa M., Valentino M., Amati M. et al. Reactive oxygen species measured from suspensions of polymorphonuclear leukocytes after the addition of silicon carbide particles // ATLA. 1996. - V. 24, N 2. - P. 553-556.

132. Heideman M., Gelin L.E. Impaired host defence for infections due to complement consumption by tissues changed by heat // Burns. 1979. - V. 5, N 3. - P. 245-247.

133. HoranT.D., English D., McPherson T.A. Association of neutrophil chemiluminescence with microbicidal activiti // Clin. Immunol. Immunopath. 1982. - V. 22. - P. 259-269.

134. Ip C. Selenium and experimental cancer // Ann. Clin. Res. 1986. - V. 18, N 1. - P. 22-29.

135. Kelly J.L., 0'Sullivan C., O'Riordain M. et al. Is circulating endotoxin the trigger for the systemic inflammatory response syndrome seen after injury? // Ann. surg. 1997. V. 225, N 5. - P. 530-543.

136. Kiefer F., Brumell J., Al-Alawi N. et al. The Syk protein tyrosine kinase is essential for Fc receptor signaling in macrophages and neutrophils // Mol. and Cell. Biol.- 1998. V. 18, N 7. - P. 4209-4220.

137. Kilbourn R.G., Griffith O.W., Gross S.S. et al. Pathogenetic mechanisms of septic shock // N. Engl. J. Med.- 1993. V. 329. - P. 1427-1428.

138. Klebanoff S. J., Clark R. A. The neutrophil: function and clinical disorders. Amsterdam: North-Holland Publishing Co., 1978. - 313 p.

139. Kobzik L., Godleski J.J., Brain J.D. Oxidative metabolism in the alveolar macrophage: analysis by flow cytometry // J. Leukocyte Biol. 1990. - V. 47, N 4. - P. 295-303.

140. Kushner I. The phenomenon of the acute phase response // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1982. - V. 389. - P. 39-48.

141. Lyons A., Kelly J.L., Rodrick M.L. et al. Major Injury Induces Increased production of interleukin-10 by cells of the Immune system with a negative Impact on resistance to Infection // Ann. Surg. 1997. - V. 226, N 4. - P. 450-460.

142. Maridonneau-Parlni I., Tauber A.I. Activation of NADPH-oxldase by arachidonic acid Involves phospholipase A2 In Intact human neutrophils but not In the cell-free system // Blochem. Blophys. Res. Commun. 1986. - V. 138, N 3. - P. 1099-1105.

143. Maridonneau-Parlni I., Tringale S.M., Tauber A.I. Identification of distinct activation pathways of the human neutrophil NADPH-oxldase // J. Immunol. 1986. - V. 137, N 9. P. 2925 2929.

144. McPhall L.C., Snyderman R. Mechanisms of regulating the respiratory burst in leukocytes // Contemp. Top. .Immuno-blol. 1984. - V. 14. - P. 247-281.

145. Miller C.L., Baker C.C. Changes In lymphocyte activity after thermal Injury. The role of suppressor cells // J. Clin. Invest. 1979. - V. 63, N 2 - P. 202-210.

146. Milner.S.M., Ortega M.R. Reduced antimicrobial peptide ex' V. 25,presslon In human burn wounds // ■ Burns. 1999. N5. - P. 411-413.

147. Nakae H., Inaba H., Endo S. Usefulness of procalci-tonln in Pseudomonas burn wound sepsis model // Toho-ku. J. Exp. Med. 1999. - V. 188, N 3. - P. 271-273.

148. Nagahata H., Dezzutti C.S., Kociba G.J. A rapid microassay for measuring the luminol-dependent chemilumines-cent response In canine whole blood // Vet. Immunol. Immuno-pathol. 1991. - V. 29, N 3-4. - P. 285-293.

149. Naylor P.H., Goldstein A.L. Thymosin: cyclic nucleotides and T cell differentiation // Life Sci. 1979. -V. 25, N 4. - P. 301-310.

150. Neely A.N., Smith W.L., Warden G.D. Efficacy of rise In C-reactlve protein serum levels as an early Indicator of sepsis In burned children // J. Burn. Care. Rehabil. -1998. V. 19, N 2. - P. 102-105.

151. Noah R.M., Jais M.R., Noh L.M. Comparison of three different methods In the assessment of neutrophil function // Med. J. Malaysia. 1995. - V. 50, N 2. - P. 136-140.

152. Ogle J.D., Noel J.G., Sramkoski R.M. et al. Effect of antibiotics on CR 1 receptor levels of human neutrophils and on the binding and phagocytosis of opsonized polystyrene microspheres by these leucocytes // Burns. 1989. - V. 15, N 3. - P. 141-144.

153. Ono Y., Kunii 0., Kobayashi K. et al. Evaluation of opsonophagocytic dysfunction in severely burned patients by luminoldependent chemiluminescence // Microbiol, and Immunol. 1993. - V. 37, N 7. - P. 563-571.

154. Panaro M.A., Mitolo V. Cellular responses to FMLP challenging: A mini-review // Immunopharmacol. and Immunoto-xicol. 1999. - V. 21, N 3. - P. 397-419.

155. Parrillo J.E. Mechanisms of disease: pathogenetic mechanisms of septic shock // N. Engl. J. Med. 1993. - V. 328. - P. 1471-1478.

156. Pasnik J., Bukowski P., Pietruszynski R. Rola niek-torych receptorow i szlakow transdukcji sygnatu w preakty-wacji neutrofila przez TNF-a // Post. biol. Komorki. 1999. - V. 26, N 1. - P. 181-189.

157. Peteiro Cartelle F.J., Alvares Jorge A. Dynamic orofiles of interleukin-6 and the soluble form of CD25 in burned patients // Burns. 1999. - V. 25, N 6. - P. 487-491.

158. Radford D.J., Lord J.M., Savage C.O.S. ANCA activation of human neutrophils iduces tyrosine phosphorylation and translocation of protein kinase С // Clin, and Exp. Immunol. 1998. - V. 112, Suppl. N 1. - P. 39.

159. Roberts P.J., Williams S.L., Linch D.C. The regulation of neutrophil phospholipase A2 by granulocyte-macrophage colony-stimulating factor and its role in priming superoxide production // Brit. P. 804-814.

160. J. Haematol. 1996. - V. 92, N 4.

161. Robey F.A., Ohura K., Futaki S. et al. Proteolysis of human C-reactive protein produces peptides with potent immunomodulating activity // J. Biol. Chem. 1987. - V. 262, N 15. - P. 7053-7057.

162. Romaschin A.D., Harris D.M., Ribeiro M. B. et al. A rapid assay of endotoxin in whole blood using autologous neutrophil dependent chemiluminescence // J. Immunol. Methods.- 1998. V. 212, N 2. - P. 169-185.

163. Ross G.D., Medof M.E. Membrane complement receptors specific for bound fragments of 03 // Adv. Immunol. 1985.- V. 37. P. 217- 267.

164. Rufenacht R., Chase P., Jungl T.W. et al. Neutrophil chemiluminescence induced by opsonized group A streptococcal particles: An effective probe of intravenous immunoglobulin preparations // J. Lab. Clin. Med. 1989. - V. 113.- P. 387-395.

165. Sachse C., Machens H.G., Felmerer G. et al. Procal-citonin as a marker for the early diagnosis of severe infection after thermal injury // J. Burn. Care. Rehabil. 1999. - V. 20, N 5. - P. 354-360.

166. Sajewicz W., Diugosz A. The chemiluminescence of neutrophils as a method for the investigation of cytotoxicity of xenobiotics // Hum. and Exp. Toxicol. 1996. - V. 15, N8. - P. 652.

167. Shah D.T., Jackman S., Engle J. et al. Effect of gliotoxin on human polymorphonuclear neutrophiles // Infec. Diseases Obstet. and Gynecol. 1998. - V. 6, N 4. - P. 168-175.

168. Sheng Z., Yao Y., Yu Y. The relationship between gut-derived endotoxemia and tumor necrosis factor, neopte-rin: experimental and clinikal studies // Clin. Med. J. Engl. 1997. - V. 110, N 1. - P. 30-35.

169. Skubitz K.M., WeisdorfD.J., Peterson P.K. Monoclonal antibody AHN-1 inhibits phagocytosis by human neutrophils // Blood. 1985. - V. 65. - P. 333-339.

170. Slawlnska D., Slawlnskl J. Chemiluminescent analysis in biochemistry // Postepy. Biochem. 1977. - V. 23, N 3. - P. 445-473.

171. Strom T.B., Hirsch M.S., Black P.H. et al. Modulation of GvH proliferation by cyclic nucleotides // Transplant. Proc. 1975. - V. 7, Suppl. N 1. - P. 305-307.

172. Styrt В., Rocklin R.E., Klempner M.S. Inhibition of neutrophil superoxide production by fanetizole // Inflammation. 1985. - V. 9, N 3. - P. 233-244.

173. Styrt В., Walker R.D., White J.C. Neutrophil oxidative metabolism after exposure to bacterial phospholipase С // J. Lab. Clin. Med. 1989. - V. 114, N 1. - P. 51-57.

174. Tono Oka Т., Matsumoto Т., Ueno N. et al. Chemilu-minescence of whole blood. II. Application to clinical examination of phagocytic functions of whole blood from various types of disease // Clin.Immunol.Immunopathol. 1983. - V. 29, N 3. - P. 333-340.

175. Tovey M.G. Interferon and cyclic nucleotides // Interferon. 1982. - V. 4. - P. 23-46.

176. Trang L.E., Lovgren 0., Norlund A.E.R. et al. Cyclic nucleotides and catecholamines in rheumatoid arthritis // Scand. J. Rheumatol. 1980. - V. 12. - P. 171-176.

177. Walker B.A.M., Cunningham L.W., Zreyer D.R. et al. Regulation of superoxide responses of human neutrophils by adenine compounds Independence of requirement for cytoplasmic granules // Laboratory Investigation. 1989. - V. 61, N 5. - P. 515-521.

178. Wang D., Xu W., Shi J. The changes and clinical significance of serum CRP, C3, Tf, and PA In the early post-burn stage // Chung. Hua. Cheng. Hslng. Shao. Shang. Wal. Ко. Tsa. Chlh. 1997. - V. 13, N 5. - P. 361-364.

179. Welsdorf D.J., Thayer M.S. Occult Intracellular calcium pools: relevance to neutrophil oxidant production // J. Lab. Clin. Med. 1989. - V. 114. - P. 260-265.

180. Welch H., Mauran C., Marldonneau-Parini I. Nonreceptor proteln-tyrosine-kinases In neutrophil activation // Methods. 1996. - V. 9, N 3. - P. 607-618.

181. Yao Y., Yu Y., Sheng Z. Serum neopterln levels after extensive burns and their relationship to endotoxemla and sepsis // Chung. Hua. Cheng. Hslng. Shao. Shang. Wal. Ко. Tsa. Chlh. 1997. - V. 13, N 5. - P. 357-360.

182. Yeh F.L., Lin W.L., Shen H.D. et al. Changes In levels of serum IL-8 in burned patients // Burns. 1997.1. V. 23, N 7-8. P. 555-559.

183. Yeh F.L., Lin circulating levels of Burns. 1999. - V. 25,

184. W.L., Shen H.D. et al. Changes in interleukin 6 in burned patients // N2. P. 131-136.

185. Yeh F.L., Lin W. L., Shen H.D. et al. Changes in serum tumour necrosis factor-al Burns. 1997. - V. 23, N 1

186. Dha in burned patients // 6-10.D

187. Zhang В., Huang Y.H., Chen Y. et al. Plasma tumor necrosis factor-alpha, its soluble receptors and interleu-kin-lbeta levels In critically burned patients // Burns. 1998. V. 24, N 7. - P. 599-603.

188. Zimmerman J.J., Ringer T.V. Inflammatory host responses in sepsis // Crit. Care Clin. 1992,- V. 8, N 1. -P. 163-189.