Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфофункциональное исследование нейтрофилов в условиях эндотоксикоза

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональное исследование нейтрофилов в условиях эндотоксикоза"

На правах рукописи

--"О04иБ

Федотова Галина Геннадьевна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЫЮЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НЕЙТРОФИЛОВ В УСЛОВИЯХ ЭНДОТОКСИКОЗА

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Саранск - 2007

003055406

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева» в лаборатории электронной микроскопии кафедры цитологии, гистологии и эмбриологии и на кафедре биохимии

Научные консультанты: доктор биологических наук, профессор

Киселева Руфина Евгеньевна

доктор медицинских наук, профессор Сосунов Александр Алексеевич

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Ямщиков Николай Васильевич

доктор медицинских наук, профессор Козлов Валентин Иванович

доктор биологических наук, профессор Макурина Ольга Николаевна

Ведущая организация: Российский государственный

медицинский университет

Защита диссертации состоится 2007 года в 10 часов

на заседании диссертационного совета Д 212.117.01 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева» (430000, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева» (430000, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68).

Автореферат разослан

» а- 2007 года.

Ученый секретарь

диссертационного совета доктор биологических наук, профессор

В. П. Балашов

1. Введение

Актуальность темы. Созданное И. И. Мечниковым учение о фагоцитозе и высоко оценимое наукой, за последние десятилетия получило дальнейшее развитие, связанное с успехами молекулярной биологии. Большой вклад в углубление фагоцитарной теории внесли работы отечественных и зарубежных ученых А. А. Богомольца, А. Д. Сперанского, А. Д. Адо, А. Н. Маянского, Р. И. Сепиашвили, Р. В. Петрова, Б. В. Пинегина, D. F. Bainton, J. Н. Brumell, N. Borregaard, Т. А. Sollner.

Иммуногистохимические, электронно-микроскопические, молекулярно-биологические методики позволили значительно расширить представления о фагоцитирующих клетках. Нейтрофилы обладают мощной бактерицидной системой, изучение которой постулировано открытием De Duve (1963) клеточных лизосом, обеспечивающих биохимические механизмы фагоцитоза. Большая роль принадлежит исследованиям, посвященным процессам гранулопоэза, функциям отдельных гранул нейтрофилов и изучению апоптоза в процессе фагоцитоза (Серов В. В., Пауков В. С., 1995; Маянский А. Н„ 1995; 1997; Сосунов А. А., Кругляков П. П., 1996; Певницкий J1. А., 1996; Ярилин А. А„ 1998, Тотолян А. А., Фрейдлин И. С., 2000; Набокина С. М., 2001; Пыцкий В. И., 2001; Адо А. Д., 2002; Авдеева М. Г., Шубин М. Г., 2003; Маянский А. Н„ 2004; Bianchi S. М., Dockreil D. Н„ Renshaw S. А. 2006; Moraes Т. J., Zurawska J. Н., Downey G. P., 2006).

Исследование реактивности нейтрофилов, ее причин, молекулярных механизмов относится к фундаментальным проблемам биологии клетки. Велико значение этой проблемы не только для биологии, но и для практической медицины, постановки правильного диагноза, контроля за эффективностью лечения, профилактики болезней. Изучение общебиологических закономерностей реализации повышения реактивности нейтрофилов, безусловно, является приоритетным направлением (Мазинг Ю. А., 1991; Маянский А. Н , Пикуза О. И., 1993; Галанкин В. Н., 1994; Sengelov Н. et al., 1995; Nabokina S. M. et al., 1997; Галкин А. А., 1997; Белова Л. А., 1997; Бахов Н. И., 2000; Хаитов Р. М., Пинегин Б. В., 2000; Герасимов И. Г., Калуцкая О. А., 2000; Долгушин И. И., Бухарин О. В., 2001; Jones X. А., 2005; Chignard М„ Pidard D., 2006; Janardhan К. S., Sandhu S. К., Singh В., 2006).

Проблема эндотоксикоза в настоящее время занимает одно из ведущих мест в развитии различных заболеваний (Киселева Р. Е., Кузьмичева Л. В., 1986; Альба Д. Л., 1994; Грызунов Ю. А., 1994; Малахова М. Я., 2000; Добротина Н. А., 2004; Кузьмичева Л. В., 2005; Федотова Г. Г., 2006). Синдром эндогенной интоксикации относится к числу наиболее распространенных. Его проявления, несмотря на различную этиологию, имеют общие патогенетические механизмы. С помощью количественного и качественного определения эндотоксинов детектируются соединения химической и биологической природы, обладающие мембранотропным действием. К настоящему времени накоплен обширный материал о структуре иммуно-компетентных клеток при различных заболеваниях. Однако, исследования по

влиянию мембранотропных эндотоксинов на них, являются во многом фрагментарными и не дают полной картины морфофункциональных изменений. Практически отсутствует сравнительный анализ различных ультраструктурных особенностей лизосомального аппарата клетки в процессе фагоцитоза.

Наиболее общим и, вероятно, пусковым звеном в развитии эндо-токсикоза при бронхолегочных заболеваниях является деструкция клеточных мембран, связанная с гипоксией. Накопление эндотоксинов свидетельствует о наличии воспалительного очага и предрасположенности к хронизации патологии. Комплекс токсических веществ, запускающих патологические процессы, характеризует степень и глубину дисфункции структур организма на клеточном уровне.

Реактивные свойства нейтрофилов в стадии апоптоза, эндотоксикоза, при действии низкоэнергетического гелий-неонового лазера (НЭГНЛ), применении лекарственных препаратов (димефосфона и мексидола) не изучены. Универсальность действия НЭГНЛ обусловлена влиянием на клеточный уровень регулирования и поддержания гомеостаза: изменение метаболической и энергетической активности клеточных структур. При возникающих нарушениях этих механизмов, являющихся истинной причиной многих заболеваний, НЭГНЛ корректирует стратегию адаптации организма на всех уровнях гомеостаза.

Внимание клиницистов привлекают работы фармакологов, теоретически и экспериментально обосновавших возможность безопасного и эффективного воздействия на первичные звенья воспалительного процесса препаратов с антиоксидантными, энергообеспечивающими, противогипок-сическими свойствами (Смирнов Л. Д., Дюмаев К. М., 1992; Балашов В. П., 1994; Воронина Т. А. и соавт., 1995; Цибулькина В. Н.,1999; Инчина В. И., 2001; Belvisi M. G., 2005; Esper A. M., Martin G. S., 2006).

Цель исследования - выяснение общих закономерностей морфофунк-ционального состояния нейтрофилов при бронхолегочных заболеваниях, а также проведение сравнительного анализа структурно-гистохимических особенностей фагоцитоза под действием эндогенной интоксикации.

Задачи исследования:

1. Изучить гистохимическими и иммуногистологическими методами нейтрофилы крови человека и влияние эндотоксинов на фагоцитарные реакции при бронхолегочных заболеваниях (бронхит, пневмония, бронхиальная астма).

2. Исследовать роль апоптоза и некроза нейтрофилов в реактивных и деструктивных процессах.

3. Изучить морфофункциональные изменения в нейтрофилах, характеризующиеся деструктивными процессами и их коррекция низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером.

4. Изучить структурно-функциональную организацию мембран нейтрофилов при бронхолегочных заболеваниях и коррекция их димефосфоном и мексидолом.

Научная новизна исследования. Впервые выявлены общебиологические закономерности морфологической и гистохимической организации нейтрофилов, выяснена роль лизосом в процессе фагоцитоза, а также митохондрий в процессах энергогенеза при эндотоксикозе и апоптозе. Гранулярные люминесцирующие клетки быстро реагируют на незначительные изменения в содержании эндогенных токсинов. Установлено наличие среди нейтрофилов мелко- и крупногранулярных клеток, обладающих различной ферментативной активностью. Установлена взаимосвязь между активностью кислой фосфатазы и щелочной фосфатазы, а также кислой фосфатазы и миелопероксидазы под влиянием низкоэнергетического гелий-неонового лазера в процессе фагоцитоза. Впервые установлено влияние эндотоксинов при бронхолегочных заболеваниях на митохондрии нейтрофилов, которые сочетают хорошо известные метаболические функции с участием в регуляции апоптоза. Наиболее эффективным средством, оказывающим свое позитивное воздействие на нейтрофилы является димефосфон. Препарат увеличивает общую антиоксидантную активность и значительно угнетает интенсивность перекисного окисления липидов, в результате чего происходит регенерация мембранного аппарата клетки. Впервые показано, что мексидол является ингибитором свободноради-кальных реакций, протекающих в нейтрофилах, изменяет структурно-функциональное состояние мембран, липид-белковые взаимосвязи, функции рецепторов и мембраносвязанных ферментов. Показана роль антиоксидант-ного стресса в деструктивных реакциях нейтрофилов, выражающиеся в изменении мембранного аппарата и гранулообразования при бронхолегочных заболеваниях, коррекция за счет стимуляции низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером и использования лекарственных препаратов. Впервые исследовано содержание биогенных аминов в крови и форменных элементах при бронхолегочных заболеваниях в развитии эндогенной интоксикации в острую фазу патологического процесса.

Теоретическая и практическая значимость исследования. Данная работа является фундаментальным исследованием, результаты которой существенно расширяют представления о структурной организации нейтрофилов в норме и выявляют общебиологические закономерности в процессе развития фагоцитоза, в связи с комплексным изучением динамики реактивных реакций, вызванных эндотоксинами мембранотропного действия и коррекция их НЭГНЛ и антиоксидантными препаратами.

Результаты исследований позволили систематизировать, углубить, расширить сведения о морфологических, ультраструктурных и биохимических характеристиках нейтрофильных лейкоцитов. Доказано влияние эндотоксинов на нейтрофилы в фазу обострения и ремиссии в различных этиологических группах заболеваний. В процессах деструкции нейтрофилов существенную роль играют продукты перекисного окисления липидов (ПОЛ). Впервые установлено влияние мембранотропных эндотоксинов на процесс фагоцитоза при бронхолегочных заболеваниях.

Установлено, что наиболее эффективными для повышения реактивности нейтрофилов оказались дозы облучения НЭГНЛ 6,0 Дж/см2 и 18,0 Дж/см2. Отмечен рост прогнозирования заболевания по альбумину.

Полученные результаты используются в учебном процессе и практической медицине.

Положения, выносимые на защиту

1. Механизмы действия мембранотропных эндотоксинов на нейтрофилы в норме и при различных формах бронхолегочных заболеваний.

2. Роль апоптоза и некроза нейтрофилов в реактивных и деструктивных процессах.

3. Характеристика терапевтического действия низкоэнергетического гелий-неонового лазера на нейтрофилы при эндотоксикозе.

4. Особенности действия лекарственных препаратов (димефосфона и мексидола) на нейтрофилы при развитии антиоксидантного стресса.

Апробация работы. Основные положения доложены и обсуждены на: Всероссийской научно-технической конференции с международным участием (Саранск, 1994); Научно-практической конференции «Методы эфферентной и квантовой терапии в клинической практике» (Ижевск, 1995); Научно-практической конференции «Региональные проблемы экологической генетики и пути их решения» (Саранск, 1996); Республиканской научно-практической конференции «Актуальные вопросы комбустиологии, реаниматологии и экстремальной медицины» (Саранск, 1996); 3-м Конгрессе Ассоциации морфологов (Тверь, 1996); Международной конференции «Новые направления лазерной медицины» (Москва, 1996), Второй Всероссийской научно-технической конференции «Светоизлучающие системы. Эффективность и применение» (Саранск, 1997); 3-й Всероссийской научно-практической конференции «Эфферентная и иммунокоррегирующая терапия в клинической практике» (Ижевск, 1998); Научной конференции «Клинико-экспериментальные аспекты современной медицины» (Саранск,

1999); Международном конгрессе «Лазер и здоровье» (Москва, 1999); Научной конференции «Макро- и микроморфология» (Саратов, 1999); 4-м Международном конгрессе по иммунореабилитации в медицине (Израиль,

2000); XXI Международной научно-практической конференции «Применение лазеров в медицине и биологии» (Одесса, 2004); 3-й Научной конференции с международным участием «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине» (Лутраки, Греция, 2005); 3-й Научной конференции с международным участием «Приоритетные направления развития науки, технологий и техники» (Египет, Хургада, 2005); VII Общероссийской конференции с международным участием «Успехи современного естествознания» (Сочи, Дагомыс, 2006); IV Научной конференции с международным участием «Производственные технологии» (Италия, Римини, 2006); III Научной конференции с международным участием «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине»

(Греция, Лутраки, 2006); III Научной конференции с международным участием «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии» (ОАЭ, Дубай, 2006); II Научной конференции с международным участием «Современные наукоемкие технологии» (Испания, Тенериф, 2006).

Публикации по теме диссертации. По материалам диссертации опубликовано: 45 научных работ, из них 1 монография «Влияние эндо-токсикоза на реактивные изменения лейкоцитов» (Саранск: Мордов. гос. пед. ин-т., 2006), получено 1 удостоверение на рационализаторское предложение (№ 792 «Способ определения регуляторных белков плазмы (сыворотки) крови»).

Внедрение результатов исследования. Результаты исследований используются в учебном процессе и при проведении научно-исследовательской работы в Мордовском государственном университете, в Мордовском государственном педагогическом институте, в Нижегородской государственной медицинской академии, в Нижегородском государственном университете, в Самарском государственном медицинском университете, в Ижевской государственной медицинской академии, в Самарском государственном университете.

Объем и структура диссертации. Диссертация общим объемом 292 страницы, состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, глав результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 336 источников. Работа содержит 66 микрофотографий, 45 таблиц, 32 графика, 2 схемы.

2. Материал и методы исследования

Материалом исследования являлась кровь людей - доноров, полученная из Республиканской станции переливания крови, и больных пульмонологического отделения 4-ой городской клинической больницы г. Саранска. Для определения биохимических и иммунологических показателей пробы крови брались из локтевой вены с соблюдением всех правил асептики и антисептики. Исследование крови людей больных бронхолегочными заболеваниями проводили во время обострения заболевания и при выписке из стационара (в период ремиссии). В модельных опытах in vitro исследовалось влияние различных доз низкоэнергетического гелий-неонового лазера и действие антиоксидантных препаратов.

Обследовано 120 людей - доноров и 140 больных бронхолегочными заболеваниями в возрасте от 18 до 45 лет. Возраст больных в контроле и при заболевании был статистически равным: контроль - 35±7, больные - 41±9 (t>0,05). В зависимости от диагноза бронхолегочных заболеваний больные разделены на три группы: I группа - больные бронхитом (40 человек), II группа - больные пневмонией (30 человек), III группа - больные бронхиальной астмой смешанного генеза (10 человек). Все обследуемые лица были согласны на проводимое исследование.

Кровь людей - доноров или суспензию лейкоцитов облучали in vitro низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером ЛГ-78 (клиническая модификация - аппарат «Узор», мощностью 0,02 Вт), дающим монохроматический когерентный красный свет с длиной волны 632,8 нм. Дозы облучения: 1,2 Дж/см2; 6,0 Дж/см2; 18,0 Дж/см2 и 24,0 Дж/см2. Период после облучения лазером суспензии лейкоцитов составил 30, 60, 120 и 180 минут. Контролем служила кровь человека или суспензия лейкоцитов, не подвергавшаяся воздействию лазерного облучения.

Эксперименты по изучению влияния НЭГНЛ проводили в 2-х сериях: 1) облучение НЭГНЛ периферической крови доноров; 2) облучение НЭГНЛ периферической крови доноров, инфицированной микроорганизмами.

В качестве активатора фагоцитов и дозированной бактериальной нагрузки использовали бактериальную взвесь золотистого стафилококка (Staphilococcus aureus) в концентрации 10° микробных тел в 1 мл. Определялись фагоцитарные показатели и морфологические изменения нейтро-фильных лейкоцитов на светооптическом уровне в мазках, окрашенных азур-эозином по методу Романовского-Гимза.

В серии опытов in vitro (30 больных бронхолегочными заболеваниями) было изучено влияние исследуемых препаратов - димефосфона и мексидола на перекисное окисление липидов в дозе, соответствующей концентрации препарата в крови больных, при которой они проявляют мембраностаби-лизирующее действие (Верещагина В. С.). Исследуемые препараты инкубировали с кровью больных людей бронхолегочными заболеваниями в объеме, не превышающим 3 мкл лекарственного препарата в 1 мл суспензии лейкоцитов в течение 30 мин при температуре 37°С. Данная процедура относится к числу медикаментозных и проведена с согласия больных.

Лейкоциты выделялись из венозной крови методом В. В. Меньшикова (1985). Чистоту осадка лейкоцитов контролировали в камере Горяева. Выделение фракции нейтрофилов проводили методом центрифугирования в градиенте плотности фиколла-верографина (1,077 и 1,119 г/л) по методу Bignold, Ferrante (1987). В полученной взвеси доля нейтрофилов составляет 95 %. При повторном фракционировании лейкоцитов в линейном градиенте 1 % бычьего сывороточного альбумина получали фракции, обогащенные эозинофилами (Sher, Glover, 1976) и базофилами (Sampson, Archer, 1967). Жизнеспособность клеточной суспензии, используемой в эксперименте, составила 95 - 98 %.

Фагоцитарная активность нейтрофилов (Медведев А. Н., Чаленко В. В., 1991) проводилась по традиционной методике, основанной на определении с помощью светового микроскопа положительной и переваривающей способности нейтрофилов крови по отношению к микробной тест-культуре после их совместной инкубации. При анализе данных учитывался процент фагоцитирующих нейтрофилов: фагоцитарный индекс (ФИ) - процент клеток, вступивших в фагоцитоз, от общего их числа; фагоцитарное число (ФЧ) - общее количество захваченных микробов, деленное на число фагоцитирующих клеток.

При помощи световой микроскопии определялась: функциональная активность нейтрофилов по НСТ-тесту (Park В. Н. et al„ 1968); активность миелопероксидазы (МПО) нейтрофилов (Graham-Knoll, 1966); активность кислой фосфатазы (КФ) методом азосочетания (Burstone, Li, 1970); активность щелочной фосфатазы (ЩФ) методом азосочетания (Rutenburg, 1965); активность Na-K-АТФ-гпы (Wachstein, Meisel, 1956); активность Са-АТФ-азы (Padicula, Herman, 1955). Количественное определение активности изучаемых ферментов проводилось на микроденситометре "М-100". Результаты выражались в относительных единицах плотности.

Ультраструктура немтрофильных лейкоцитов и процесс фагоцитоза исследовалась на электронограммах, полученных на электронных микроскопах ЭМВ-100Б и ЭМ-125 в лаборатории электронной микроскопии. Препараты для электронного микроскопирования готовились по традиционной методике.

Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) в плазме крови человека определялись методом осаждения с 3,5 % раствором полиэтиленгликоля (Вельбри С. К., Лиллеорг А. Л., Линдстрем С. Л., 1988).

Для определения апоптирующих клеток использовали моноклональные антитела CD95+, конъюгированные с флуоресцеинизотиоционатом (ФИТЦ). Количество активированных нейтрофилов определяли по интенсивности флуоресценции в реакциях с моноклональными антителами против CD45+, меченых ФИТЦ.

Флуоресцентными методами исследовались: трансмембранный потенциал, микровязкость и липид-белковые взаимодействия в плазматических мембранах с помощью флуоресцентного положительно заряженного зонда ДСМ - 4-(п-диметиламиностирил)-1-метилпиридиний-п-толуолсульфонат, пирена, 1-фениламино-8-сульфонафталина (АНС) по методу Г. Е. Добрецова (1989). Оценка митохондриальной активности клеток осуществлялась при помощи потенциалчувствительного зонда-катиона ДСМ (Морозова Г. И. и соавт., 1997). Содержание гистамина и серотонина в одной пробе крови определялась флуориметрическим методом (Прошина Л. Я., 1981).

Хемилюминесцентным методом определялась интенсивность перекис-ного окисления липидов (ПОЛ) и антиоксидантная активность (АОА) по методу Владимирова Ю. А. и Шерстнева М. Г. (1989).

Биохимическими методами осуществлялась: экстракция общих липидов (Folch et al„ 1957), количественное определение холестерина (Либерман, 1885; Бурхард, 1890); молекулы средней массы (МСМ) путем осаждения 10 % раствором трихлоруксусной кислоты (Габриэлян Н. И., Липатова В. И., 1984); спектрофотометрическое определение активности лактатдегидро-геназы (ЛДГ) и сукцинатдегидрогеназы (СДГ) по методу Пастушенкова В. Л. и Минтина Ю. А. (1993).

Содержание альбумина в сыворотке крови определялось по реакции с бромкрезоловым зеленым (БКЗ). Фракционирование белков сыворотки крови осуществляли методом электрофоретического разделения на базе биохимической лаборатории городской клинической больницы № 4 г. Саранска.

Определение показателей общей и эффективной концентрации альбумина (ОКА и ЭКА) проводилось флуоресцентным методом на анализаторе AKJI-01 в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к наборам реактивов (Миллер Ю. И., Добрецов Г. Е„ 1994).

Результаты исследования представлены как средние ± стандартное отклонение. Достоверность различий определяли с использованием критерия Стьюдента (t). Анализ результатов осуществляли с помощью статистической компьютерной программы STAT-2, на базе процессора Intel Pentium 133. Использован статистический метод ANOVA (analysis of variance).

3. Результаты исследования и их обсуждение 3.1. Нейтрофилы и их морфофункциональная организация

Нейтрофильным гранулоцитам свойственна иммунная реактивность, синтез и секреция медиаторов воспаления, компонентов системы фибрино-лиза, а также биологически активных веществ, стимулирующих рост клеток и способствующих заживлению ран (Галкин А, А. и соавт., 1997; Сосунов А. А., 1998; Маянский А. Н. и соавт., 1999; Бахов Н. И., 2000; Кругляков П. П., 2006).

Защитная функция нейтрофилов в значительной мере обусловлена мобилизацией внутриклеточных гранул. Для нормального функционирования нейтрофилов важны секреторные процессы. Экзоцитоз гранул необходим для адгезии, трансэндотелиальной миграции и выхода клеток из кровеносных сосудов в ткани, образования реактивных метаболитов кислорода и секреции литических ферментов. Экзоцитоз регулируется механизмом слипания и последующего слияния с плазматической мембраной внутриклеточных везикул, содержащих определенные вещества в высокой концентрации. Эти процессы основаны на универсальной модели слияния мембран, получившей название SNARE гипотезы (Sollner Т. et al., 1993).

У обследованных доноров 68,4 ± 0,09 % всех лейкоцитов составляли нейтрофилы. При формировании иммунного ответа происходит взаимодействие системы иммунитета с другими защитными механизмами организма, в частности, к иммунологическим реакциям присоединяются воспалительные. Активное участие нейтрофилов в этих процессах связано с их высокой фагоцитарной активностью, способностью к хемотаксису и иммунной адгезии. Взаимодействие микроорганизма с цитоплазматической мембраной нейтрофила инициирует образование псевдоподий, которые, окружая микроорганизм, сливаются между собой, формируя фагосому. Внутренняя поверхность фагосомы образована наружным слоем инвагинированной цитоплазматической мембраны. Киллинг и переваривание микроорганизмов происходит именно в фагосомах при условии, что фагосомы сливаются с лизосомами. Микробицидность нейтрофила в отношении фагоцитированных

микроорганизмов может быть обнаружена лишь при наличии в фагосоме содержимого нейтрофильных гранул.

По современным представлениям, нейтрофилы человека содержат внутриклеточные гранулы четырех типов: азурофильные (первичные), специфические (вторичные), желатиназные (третичные) и секреторные везикулы (BrumelJ, J. H. et al., 1995; Borregaard, N„ 1996; Набокина, С. M. 2001). Гранулы, принадлежащие к разным типам, формируются последовательно на различных стадиях созревания нейтрофила в костном мозге в результате агрегации и гомотипического слияния транспортных везикул, отпочковавшихся от аппарата Гольджи и содержащие белки, предназначенные для секреции путем регулируемого экзоцитоза.

Азурофильные гранулы содержат ассоциированный с мембранами бактерицидный, увеличивающий проницаемость белок (BPI). Он способен связываться с липополисахаридами и оказывать бактерицидное действие. Стимуляция нейтрофилов приводит к перемещению этого белка в активированные компартменты клетки. После фагоцитоза белок BPI выявляется вместе с миелопероксидазой в фагосомах. Азурофильные гранулы содержат в себе два семейства антимикробных катионных белков - дефенсины и серпонцидины.

Специфические гранулы классифицируются в зависимости от содержания в них лактоферрина и желатиназы. В клетках синтезируются маркеры специфических гранул лактоферрин и ассоциированный с желатиназой липокалин (NGAL). Стимуляция клеток вызывает секрецию NGAL из гранул Этот белок легко мобилизуется в процессе активации нейтрофилов, обладает способностью связывать хемотаксический формилпептид. Мембраны специфических гранул - место функциональной сборки НАДФН-оксидазного комплекса.

Желатиназные гранулы формируются позднее специфических и способны к более быстрой мобилизации под влиянием стимулирующих факторов. Желатиназа рассматривается как маркер циркулирующих нейтрофилов. Желатиназные гранулы содержат цитохром Ь558 (компонент НАДФН-окси-дазного комплекса), белки семейства аннексинов (Kjeldsen, L. et al., 1993).

Секреторные везикулы - новые внутриклеточные компартменты нейтрофилов, содержащие латентную щелочную фосфатазу и легко мобилизующиеся при активации белков плазматической мембраны. Эти гранулы перемещаются к поверхности нейтрофила в процессе его активации медиаторами воспаления.

Ферменты нейтрофилов способны функционировать как внутри клетки при фагоцитозе, так и вне клетки при экзоцитозе. В ходе экзоцитоза эти белки встраиваются в плазматическую мембрану нейтрофила и значительно изменяют способность клетки к взаимодействию с ее микроокружением. Фагоцитарная активность нейтрофилов у доноров - величина сравнительно постоянная и согласно нашим результатам у взрослых лиц после 30-минутной экспозиции стафилококка с кровью ФИ нейтрофилов составляет 74,00 ± 0,82 %, ФЧ - 4,36 ± 0,08 %. Нейтрофилы выделяют в окружающую

среду не только лизосомальные энзимы. Одновременно с гидролитическими энзимами освобождаются лизоцим, молочная кислота, разнообразные белки, обладающие бактерицидными свойствами. Поскольку процесс дегрануляции лизосом стимулируется во время фагоцитоза и при контакте нейтрофилов с иммунными комплексами, поэтому они в значительной мере ответственны за повреждение тканей.

В активных нейтрофилах фагоцитоз особенно четко удается проследить на электронно-микроскопическом уровне. На электронограмме видно, как усиливается процесс образования первичных фагосом. Нейтрофилы образуют цитоплазматические отростки при фагоцитозе бактерий и одновременно в цитоплазме образуются глубокие ямки, которые могут заключать одну или две бактерии. Особенностью контакта между фагоцитом и бактерией является наличие зоны повышенной цитоплазматической плотности.

Система нейтрофильных гранулоцитов рассматривается как совокупность достаточно иммунокомпетентных и иммунорегуляторных клеток, принимающих активное участие в поддержании иммунного и системного гомеостаза. Их защитная функция обусловлена способностью поглощать патогены, высвобождать широкий спектр микробицидных факторов и синтезировать вазоактивные и хемотаксические липидные медиаторы.

Плотная зона содержит мелкие гранулы. Затем образуется окруженный мембраной пузырек - фагосома; последняя сливается с одной или несколькими лизосомами. Первичные лизосомы на электронограммах выглядят в виде электронно-прозрачных пузырьков. Цитоплазматические гранулы мигрируют к фагоцитарным вакуолям и освобождают в нее свое содержимое, образуя фаголизосому (Сосунов А. А., Кругляков П. П., 1999; Федотова Г. Г., Киселева Р. Е., 2006). Высвобождение преформированных биологически активных веществ составляет важный этап реализации эффекторного потенциала нейтрофила.

Активность щелочной (2,39 ± 0,07 отн. ед. пл.) и кислой фосфатаз (0,87 ± 0,02 отн. ед. пл.) в нейтрофилах указывает на существенную роль зоны Гольджи в образовании специфических гранул. Большую часть этих гранул составляет основной белок со щелочными свойствами, содержащий аргинин. В участках локализации ЩФ наблюдаются гранулы черного цвета. В цитоплазме клеток, содержащих кислую фосфатазу, отмечается темно-синее окрашивание.

Наличие митохондрий свидетельствует о способности нейтрофилов к окислительному фосфорилированию, что подтверждают результаты биохимических исследований. Тем не менее, основную энергию нейтрофилы получают в результате гликолиза.

Реактивное усиление физиологической функции отражает обратимые изменения в плазматической мембране стимулированных нейтрофилов, индукцию адгезии, поглощения объекта и заканчивается его включением в новую внутриклеточную структуру. Объект должен активировать нейтрофил, возбуждая его функциональную трансформацию. Подобно другим реакциям большая роль в этом процессе принадлежит структурно-биохимическим

сдвигам на уровне плазматической мембраны, и изменение ее молекулярной топографии существенно влияет на окончательный результат.

Фагоцитоз является, хотя и важным, но не единственным способом реализации нейтрофильными гранулоцитами своих эффекторных функций. Они способны выделять биологически активные вещества, с помощью которых они могут осуществлять внеклеточный киллинг, а также, вступая в медиаторные контакты с гуморальными системами и клетками крови, соединительной ткани, оказывать регуляторное действие.

3.2. Реактивные изменения нейтрофилов при бронхолегочных заболеваниях

Развитие гипоксии является одним из значимых патогенетических факторов при бронхолегочных заболеваниях (Louis R., Djukanovic R., 2006; Ng С. S., Wan S., Arifi A. A., Yim A. P., 2006; Thickett D. R., Richter A. G., Nathani N., 2006). Тканевая гипоксия, вызванная нарушением тонуса периферических сосудов, реологических механизмов, кинетических и механических свойств форменных элементов крови, выступает одним из важных звеньев механизма развития эндогенной интоксикации. Снижение функций органов естественной детоксикации, антиоксидантной системы, и естественной резистентности при эндотоксикозе неизбежно усугубляют его течение. Самыми уязвимыми при гипоксии являются митохондрии, на которые действуют мембранотропные эндотоксины, образующиеся при бронхолегочных заболеваниях. Интегральная причина токсемии - дисбаланс процессов катаболизма-анаболизма в организме с образованием эндотоксинов. Дистанционное влияние эндотоксинов реализуется угнетением систем микроциркуляции с дестабилизацией мембран и повышением их проницаемости. Среди внутрисосудистых изменений основное место занимает нарушение реологических свойств крови, что с замедлением кровотока, вследствие сдвига регуляции сосудистого тонуса, приводит к гипоксии.

При электронно-микроскопических исследованиях вначале развития бронхолегочных заболеваний нейтрофилы находятся в различных функциональных состояниях, связанных с процессом фагоцитоза и имеют различные стадии активации В клетках наблюдаются вакуолеподобные полости, обнаруживаются изменения ультраструктуры ядра и цитоплазмы. Нередко в цитоплазме проявляются полости распада. Происходит расширение, вплоть до вакуолизации, канальцев эндоплазматической сети и набухания митохондрий, вследствие чего цитоплазма клетки имеет пенистый вид.

При обследовании больных людей бронхолегочными заболеваниями в стадии обострения и ремиссии, несмотря на их различную этиологию, проявление фагоцитарной активности нейтрофилов отражает состояние общей реактивности и выраженность аллергической перестройки в организме. В стадии обострения при различных формах бронхолегочных заболеваний поглотительная способность нейтрофилов в целом снижена по срав-

нению с нормой, как по ФИ, так и по ФЧ. Индуцированный тест с нитро-синим тетразолием (НСТ) логично рассматривать как биохимический критерий готовности нейтрофила к завершенному фагоцитозу.

В крови больных людей I группы заметно снижение показателей фагоцитоза: ФИ - на 17,6 % (р < 0,01) и ФЧ - на 41,1 % (р < 0,01), что связано с угнетением поглотительной активности нейтрофилов. Поскольку острый бронхит у большинства пациентов развивался на фоне перенесенной вирусной инфекции, то подавленную фагоцитарную активность нейтрофилов можно рассматривать как следствие супрессивного воздействия вирусов на фагоцитирующие клетки. При обострении происходит увеличение НСТ-позитивных нейтрофилов на 91,8 % (р < 0,01). Индекс активации нейтрофилов (ИАН) увеличивается в 2,2 раза (р < 0,01). Сталкиваясь с активированным нейтрофилом, НСТ восстанавливается в диформазан, который в виде гранул откладывается внутри или на поверхности клеток. Количество выпавшего диформазана служит критерием интенсивности реакции.

В крови больных людей II группы наблюдается снижение ФИ и ФЧ на 16,2 % (р < 0,01) и 35,6 % (р < 0,01) соответственно. В стадии обострения отмечается повышение НСТ-теста в 2 раза (р < 0,01). ИАН увеличивается в 2,27 раза (р< 0,01).

В фазу обострения в крови больных людей III группы отмечается снижение ФИ на 15,3 % (р < 0,01), ФЧ - на 40,0 % (р < 0,01). НСТ-тест увеличивается на 98,8 % (р < 0,01), ИАН - в 2,3 раза (р < 0,01). В организме при бронхиальной астме нейтрофилы вступают в контакт с комплексом аллерген-антитело с целью инактивации его путем поглощения и переваривания. Эти комплексы в свою очередь вызывают деструктивные изменения в нейтрофилах, что приводит к нарушению их поглотительной и переваривающей функции. Этим объясняется нарушение функционального состояния нейтрофилов у больных. Инфицирующие агенты, оказывая прямое или опосредованное воздействие на иммунокомпетентные клетки больного, способствуют развитию хронических заболеваний легких.

В фазу ремиссии показатели фагоцитоза: ФИ и ФЧ у больных I группы увеличиваются на 11,5 % (р < 0,01) и 23,7 % (р < 0,01), II группы - на 13,9 % (р < 0,01) и 25,3 % (р < 0,01), III группы - на 10,6 % (р < 0,01) и 26,0 % (р < 0,01) соответственно. Показатели НСТ-теста и ИАН снижаются у больных I группы на 21,0 % (р < 0,01) и 12,0 % (р < 0,01), II группы - на 18,0 % (р < 0,01) и 19,0 % (р < 0,01), III группы - на 20,0 % (р < 0,01) и 14,2 % (р < 0,01) против стадии обострения. После курса лечения показатели НСТ-теста и ИАН по отношению к периоду обострения снижаются, что связано с процессами перенапряжения функциональной деятельности нейтрофилов, обусловленной накоплением в плазме продуктов эндотоксикоза, что способствует развитию хронического заболевания легких.

В результате повышения фагоцитарной способности отдельных нейтрофилов дегрануляция и переваривание сопровождаются интенсификацией метаболизма в клетке. В цитоплазме наблюдается большое количество гранул различной электронной плотности.

Важная роль принадлежит медиаторам воспаления (гистамину и серотонину). Они воздействуют на процессы ПОЛ, активизирующиеся в условиях стресса и провоцируют увеличение уровня свободных радикалов (Бастрикова Н. А., 1999).

Физиологически активные формы биогенных аминов, циркулируя в кровотоке, являются сигнальными молекулами и действуют на специфические рецепторы плазматических мембран. Сопряжение этих рецепторов с аденилатциклазой или гуанилатциклазой позволяет преобразовывать внеклеточный сигнал и обеспечивать многократное усиление первоначального сигнала, что, в конечном счете, изменяет направленность процессов в клетке (Киселева Р. Е., Кузьмичева Л. В., 1997, 1999). При определении содержания гистамина и серотонина в крови доноров выявлено значительное повышение этих показателей относительно их содержания в плазме. Индекс гистамин/серотонин (Г/С) крови составляет 0,74; плазмы - 0,92. Низкое содержание гистамина в плазме доноров (0,15 мкмоль/л) обусловлено работой метаболизирующей системы, которая обеспечивает быструю инактивацию поступающего в кровь амина. Свободный физиологически активный серотонин составляет примерно 1/5 от общего. После проведенного курса лечения наблюдается снижение концентрации биогенных аминов: гистамин крови - на 48,0 %, серотонин - на 27,0 %; в плазме происходит снижение гистамина на 56,0 %, серотонина - на 28,0 %. Индекс Г/С крови составляет 1,2; плазмы - 1,96. Интенсивная реакция нейтрофилов на бактериальный агент приводит к накоплению липидных медиаторов воспаления и хронизацин процесса.

Нейтрофилы привлекаются в легкое в случае воспалительной реакции, для которой характерны гипоксия и ацидоз. Изменения в митохондриях при гипоксии прогрессируют и вызывают нарушения в них процесса биологического окисления, приводящего к снижению клеточного дыхания и интенсивности энергетического обмена, к дефициту АТФ и развитию деструктивных процессов в клетке (Федотова Г. Г., Киселева Р. Е„ 2005).

У больных в период обострения бронхолегочных заболеваний было выявлено, что уже на ранних стадиях заболевания, имеет место активизация щелочной и кислой фосфатаз. Течение острого воспаления ярко отражают изменения в активности этих ферментов. Цитохимическое выявление фосфатаз в световом микроскопе основано на образовании нерастворимого окрашенного осадка в местах, где наблюдается гидролиз субстрата. В очаге воспаления происходит мобилизация сначала вторичных, а затем первичных гранул и поочередное высвобождение их содержимого в формирующуюся фаголизосому. Процесс фагоцитоза сопровождается расходованием ЩФ, активность которой снижается на 25 - 50 %. В крови доноров (контрольная группа) отмечается слабая активность ЩФ и КФ. Содержание ЩФ в нейтрофилах у больных I группы повышается на 10,2 % (р < 0,05), II группы - на 19,8 % (р < 0,05), III группы - на 8,2 % (р < 0,05). Наблюдается прямая связь между тяжестью воспалительного процесса и активностью ЩФ. Механизм действия ЩФ на бактерии заключается в гидролизе нуклеиновых

кислот и фосфопротеидов. Щелочная фосфатаза как бы подготавливает бактерии для дальнейшего воздействия других бактерицидных факторов, содержащихся в клетке. Присутствие ЩФ необходимо для нормальной фагоцитарной функции нейтрофилов. Расходование ЩФ и других ферментов в процессе фагоцитоза объясняется деградацией ферментативных белков в фаголизосомах в результате действия поступления в них кислых гидролаз.

Кислые гидролазы, принимающие непосредственное участие в развитии воспалительного процесса, в значительной степени отражают характер легочной деструкции. Активность КФ в крови больных I группы увеличивается на 29,0 % (р < 0,05), II группы - на 37,1 % (р < 0,05) и III группы - на 32,6 % (р < 0,05). При анализе цитохимических препаратов в подавляющем большинстве клеток выявляются положительно окрашенные гранулы на КФ. Гранулы, проявляющие сильно положительную реакцию на кислую фосфатазу в фазу адгезии, иногда конденсируются в перинуклеарной зоне и области пластинчатого аппарата Гольджи.

При воспалительном процессе цитоплазма клетки закисляется, лизосомы распадаются и выходящие из них ферменты разрушают клетку. Увеличение активности КФ рассматривается как неспецифический признак воспаления, что свидетельствует о поражении данного органа, направлено на разрушение бактерий и имеет, очевидно, компенсаторный характер из-за подавления аэробных механизмов бактерицидности. Степень подъема активности фосфа-таз нейтрофилов в крови больных находится в прямой зависимости от острого воспалительного процесса и наличия осложнений.

В норме большинство нейтрофилов пребывает в инертном покоящемся состоянии. Их функциональные возможности раскрываются только на фоне стимулирующих воздействий (альтерирующих факторов). Через несколько секунд после активации нейтрофилов происходит респираторный взрыв, связанный с активностью миелопероксидазы.

Размер респираторного взрыва зависит от природы и концентрации стимулятора нейтрофилов. Респираторный взрыв, вызванный накоплением в нейтрофилах МПО составляет у больных I группы - 16,0 % (р < 0,05), II группы - 28,0 % (р < 0,05), III группы - 23,8 % (р < 0,05). Наиболее тяжелой формой заболевания в данном случае является пневмония.

Воспаление характеризуется процессами формирования бронхиальной гиперреактивности. Функциональные проявления нейтрофилов происходят только при соответствующем изменении их метаболизма. С этих позиций интерес представляют дегидрогеназы, функция которых создает предпосылки для энергетического обеспечения тканей. В связи с ростом гипоксии увеличивается активность лактатдегидрогеназы в крови больных I группы на 31,0 % (р < 0,01), II группы - на 48,0 % (р < 0,01), III группы - на 44,6 % (р < 0,01). При пневмонии значительно повышается интенсивность гликолиза, сопровождающегося угнетением фагоцитоза.

Рост анаэробного гликолиза приводит к снижению аэробного гликолиза, который выражается в увеличении гипоксии. Активность сукцинатдегидро-геназы в крови больных I группы понижается на 32,7 % (р < 0,01), II

группы - на 40,0 % (р < 0,01), III группы - на 35,0 % (р < 0,01), что свидетельствует о снижении активности аэробного и усилении анаэробного окисления. Причиной снижения активности СДГ можно считать накопление в клетке продуктов пероксидации мембранных липидов и их предшественников - реактивных форм кислорода. Супероксидгенерирующие системы в сочетании с МПО, особенно важны для разрушения микробных капсул, насыщенных липидными компонентами, так как за счет окисления они обеспечивают повышение гидрофильности субстрата и доступность для протеазных систем (Киселева Р. Е. и соавт., 2002).

Общебиологические свойства ионтранспортирующих систем, связанных с функционированием мембранного аппарата клеток, отражают активность Na-K-АТФ-азы и Са-АТФ-азы (Орлов С. Н., Федотова Г. Г., 1986; Ляпина С. А., 1998). Активность АТФ-аз в клетках выявляется в виде черных цито-плазматических отложений. Так, нами выявлено, что при действии альтерирующего агента активность ферментов изменяется: в стадии хемотаксиса и адгезии нейтрофилов их активность возрастает; в стадии киллинга и деградации микроорганизмов - снижается.

Современная концепция патологии клетки основывается на ведущей роли мембранных нарушений в развитии патологического процесса. Эндогенная интоксикация, сопровождающаяся заболеваниями и осложнениями, связана с повышенным распадом биомолекул, клеток и тканей, усилением процесса катаболизма в них, накоплением эндотоксинов мембранодеструк-тивного действия, что обеспечивает общность биохимических проявлений эндогенной интоксикации. Накопление избыточного количества токсических продуктов, биологически активных веществ и продуктов протеолиза приводит к блокаде ими клеточных мембран с нарушением биохимических и физических свойств последних.

Система гомеостаза у больных бронхолегочными заболеваниями стремится стабилизировать процессы на новом качественном уровне. Мощной защитой организма, инактивирующей чужеродные субстанции и продукты собственного извращенного обмена является иммунная система. Одним из основных маркеров характеризующих степень активации иммунной защиты на гуморальном уровне являются циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК).

Нами исследованы нарушения иммунного гомеостаза клеточного и гуморального звена, к которому относятся циркулирующие иммунные комплексы. Их наличие обусловлено тяжестью острой или хронической патологии. У больных I группы в фазу обострения наблюдается повышение содержания ЦИК в плазме крови в 1,4 раза (р < 0,001), II группы - в 1,6 раза (р < 0,001), III группы - в 1,75 раза (р < 0,001) по отношению к контрольной группе. Это говорит об избыточности антигенов и затрудненном удалении токсических среднемолекулярных комплексов.

После проведенного лечения в стадии ремиссии содержание ЦИК в плазме крови снижается у больных I группы на 11,2 % (р < 0,001), II группы

- на 11,1 % (р < 0,001), III группы - на 10,7% (р < 0,001) по отношению к стадии обострения, но не достигает контрольных значений.

Актуальными остаются исследования по решению широкого круга вопросов изучения особенностей и разбалансированности метаболического гомеостаза, связанных с накоплением молекул средней массы (МСМ), определение закономерностей реализации токсического эффекта, выявления возможностей включения молекул средней массы в механизмы этиопато-генеза заболеваний.

При длительных хронических бронхолегочных заболеваниях людей наблюдается усиление протеолиза молекул средней массы. Так, у больных I группы содержание МСМ в сыворотке крови увеличивается в 1,96 раза (р < 0,001), II группы - в 1,85 раза (р < 0,001), III группы - в 2,26 раза (р < 0,001), что свидетельствует об активности деструктивных реакций. Согласно нашим данным, содержание МСМ в значительной степени отражает тяжесть и глубину патологии. Повышение уровня в крови МСМ является крайне неблагоприятным признаком. Объясняется это тем, что отдельные фракции МСМ обладают свойствами эндотоксинов с различной биологической активностью.

Уровень МСМ в стадии ремиссии снижается в сыворотке крови больных I группы на 21,3 % (р < 0,001), II группы - на 27,5 % (р < 0,001), III группы -на 22,1 % (р < 0,001) по сравнению с периодом обострения, но остается выше контрольных значений.

Проблема патологии, связанная с усилением процессов свободноради-кального окисления в организме, остается одной из актуальных в теоретической и практической медицине. Определенные перспективы в разработке рациональных методов дезинтоксикационной терапии открываются в связи с уточнением роли ПОЛ в патогенезе различных заболеваний (Козлов В. И., 1993; Киселева Р. Е., 1994; Пиксин И. Н„ 1996; Трофимов В. А., 2004). При далеко зашедшем процессе окисления происходит дезинтеграция мито-хондриальных мембран, что ведет к саморазборке мембранных структур и дальнейшим дистрофическим процессам в клетке (Кузьмичева Л. В., 2005).

Активация ПОЛ сопровождается появлением большого количества токсических продуктов липопероксидации, повреждением клеточных мембран, высвобождением кислых протеаз. Последнее вызывает расщепление белков мембран с образованием полипептидов, играющих важную роль в эндотоксикозе. Гипоксия приводит к значительной активации ПОЛ за счет угнетения активности антиоксидантной системы в кислой среде, выброса в кровоток свободных жирных кислот, освобождение ионов железа из депо и разрушенных очагов, снижения микросомальной активности печени, блокады дыхательной цепи (Добротина Н. А., Копытова Т. В., 2004; Nagata М., 2005).

Содержание ПОЛ в сыворотке крови больных I группы в стадии обострения увеличивается в 3,2 раза (р < 0,001), II группы - в 3,7 раза (р < 0,001), антиоксидантная активность (АОА) снижается соответственно на 29,0 % (р < 0,001) и 39,0 % (р < 0,001) по отношению к контрольной группе.

У больных III группы ПОЛ повышается в 3,5 раза (р < 0,001), АОА снижается на 26,0% (р< 0,001).

На основании полученных результатов можно предположить, что стимуляция процессов ПОЛ при условии снижения антиоксидантной защиты нарушает существование равновесия вплоть до образования конечных токсических продуктов. Данные Л. В. Кузьмичевой (2004) подтверждают положение о том, что избыточное количество липоперекисей усугубляет функциональную недостаточность иммунокомпетентных клеток и тем самым способствует затяжному, осложненному течению заболевания.

Результаты исследования показали, что наиболее значительные нарушения в системе ПОЛ/АОА наблюдаются у больных пневмонией. Низкий уровень АОА свидетельствует о недостаточной антиоксидантной защите, что в сочетании с высоким уровнем ПОЛ создает условия для рецидивирования воспаления.

При бронхиальной астме в результате развития аллергических реакций за счет взаимодействия тучных клеток с антигенами происходит выброс биологически активных веществ. Гистамин оказывает выраженное бронхо-спастическое действие. В результате создаются условия для развития дыхательной (за счет бронхоспазма) и тканевой (за счет воспаления) гипоксии. Хемотаксический фактор возбуждает нейтрофилы и эозинофилы, которые начинают усиленно генерировать АФК, инициирующие цепные реакции ПОЛ (Ялкут С. И., 1995).

Низкий уровень АОА, лимитирующий образование АФК, не справляясь с возросшей пероксидацией, создает условия, которые способствуют формированию хронического воспалительного процесса в бронхолегочной системе, ведущего к прогрессированию бронхиальной обструкции. Мембраносенсиби-лизирующее действие ПОЛ не позволяет развиваться компенсаторно-адаптационным механизмам защиты мембран. Это приводит к деструкции клеток, изменяется микровязкость мембран и создаются условия для элиминации клетки.

Инициаторами чрезмерной активности ПОЛ и накопления свободных радикалов выступают гипоксия, иммунологическое повреждение мембран, действие токсикантов, несостоятельность антиоксидантной защиты организма и другие факторы.

Уменьшение клинических признаков обострения заболевания сопровождается снижением интенсивности ПОЛ в сыворотке крови во всех группах больных. У пациентов I группы уровень ПОЛ был ниже на 48,6 % (р < 0,001), II группы - на 44,0 % (р < 0,001), III группы - на 38,0 % (р < 0,001) по сравнению с обострением. АОА крови повышается у больных I группы на 46,2% (р< 0,001), II группы - на 85,4 %(р< 0,001), III группы-на 70,4% (р < 0,001) по сравнению с обострением. Судя по интенсивности снижения ПОЛ, можно говорить о намечающейся тенденции к стабилизации процессов перекисного окисления липидов в период становления ремиссии.

При бронхолегочных заболеваниях в результате развития процессов ПОЛ отмечены дистрофические нарушения в нейтрофилах, связанные с

изменением внутриклеточного метаболизма, с реакцией активного включения клеток в патологический процесс (через механизмы фагоцитоза, пиноцитоза и активной резорбции). Дистрофическое состояние клеток возникает именно вследствие повреждения аппарата внутриклеточного синтеза, диссимиляции и нарушения митохондрий, эндоплазматического ретикулума, пластинчатого комплекса, лизосом, ядерных и клеточных мембран. Для исследованных клеток характерны общие признаки деструктивных нарушений в митохондриях. Энергозависимые процессы связаны с деструктивными изменениями, происходящими в митохондриях, и носят общебиологический характер. Конденсация матрикса митохондрий осуществляется за счет изменения конформации его структур. Кроме того, в нем начинают накапливаться ионы натрия и вода за счет усиления проницаемости внутренней митохондриальной мембраны. Матрикс постепенно приобретает вид, похожий на «ортодоксальный», но затем он увеличивается в объеме, что проявляется увеличением объема всей митохондрии и деформацией крист.

Во многих клетках происходит расширение канальцев эндоплазмати-ческой сети и перинуклеарного пространства. В периферических отделах клеток нередко определяются мелкие, «пустые» везикулы или вакуоле-подобные структуры, которые возможно, являются глубокими инвагинациями плазматической мембраны. Аппарат Гольджи нередко выглядит гипертрофированным за счет, в первую очередь, многочисленных везикул.

Значительно повышается число мелких везикул, содержащих электрон-ноплотный материал, причем такие пузырьки чаще располагаются группами, обычно в крупных «выступающих» частях цитоплазмы. Иногда в цитоплазме определяются небольшие участки с резко просветленным цитоплазмати-ческим матриксом, напоминающие области лизиса и распада ультраструктур. Нередко, в таких местах на фоне просветленного цитоплаз-матического матрикса находились осмиофильные гранулы по размерам сравнимые с гранулами гликогена.

Важное звено в системе детоксикации организма представляет альбумин сыворотки крови. Главной его функцией является связывание низкомолекулярных метаболитов. В молекуле альбумина имеется несколько центров связывания. При ряде патологических состояний способность молекулы белка связывать метаболиты заметно снижается. Высокий уровень индекса токсичности (ИТ) показывает, что в сыворотке крови содержится большое количество метаболитов, которые в норме альбумин должен связывать и удалять из тканей.

Трансформация низкомолекулярных аллергенов и гаптенов (гидрофобные токсины) осуществляются путем связывания с белками. В этом процессе обычно участвует альбумин и липопротеиды. В стадии обострения в сыворотке крови больных людей I группы показатели общей концентрации альбумина (ОКА) и эффективной концентрации альбумина (ЭКА) снижаются на 37,5 % (р < 0,001) и 44,2 % (р < 0,001) по сравнению с контрольной группой. Индекс токсичности возрастает в 2 раза (р < 0,001). В

крови больных II группы содержание ОКА и ЭКА понижается на 36,1 % (р < 0,001) и 43,6 % (р < 0,001), одновременно увеличивается ИТ в 2,15 раза (р < 0,001) по отношению к контрольной группе. В крови больных III группы ОКА понижается на 32,6 % (р < 0,001), ЭКА - на 40,9 % (р < 0,001). ИТ увеличивается в 2,23 раза (р < 0,001).

У больных людей бронхолегочными заболеваниями в стадии обострения снижается связывающая способность альбумина (ССА). Наибольшее снижение наблюдается при бронхиальной астме - 77,0 % (р < 0,001). Низкий процент ССА свидетельствует о том, что основная часть связывающих центров сывороточного альбумина заблокирована токсинами.

Наши исследования показали, что увеличение уровня токсичности и снижение АОА больных бронхолегочными заболеваниями на фоне повышения МСМ, ЦИК, ПОЛ указывает на снижение компенсаторно-приспособительных и защитных механизмов, которые формируются в ответ на воздействие эндотоксинов, что способствует хронизации и рецидиви-

рованию заболевания (рис. 1).

%

400 350 300 250 200 150 100 50 0

*

* *

* * *

МСМ ЦИК ПОЛ АОА

ИТ

□ Контроль И Бронхит □ Пневмония Ш Бронхиальная астма

* - р < 0,001

Рис. 1. Динамика показателей эндотоксикоза в крови больных бронхолегочными заболеваниями в стадии обострения

При дефиците альбумина и снижении связывающей способности резко растет индекс-токсичности. Данный показатель, являясь величиной суммарной, отражает уровень токсинов различной природы. Среди продуктов естественного метаболизма, оказывающих токсическое воздействие на эффективную концентрацию альбумина, наиболее характерными являются продукты свободного окисления липидов, лежащие в основе развития

полиорганной недостаточности, характерной для острой фазы бронхо-легочных заболеваний.

Эффективная концентрация альбумина зависит не только от концентрации белка, но и от состояния его молекулы. Согласно мнению Г. Е. Добре-цова (1994), на ЭКА могут влиять три фактора: потеря альбумина (снижение ОКА), его загрузка метаболитами и изменение конформации молекулы альбумина. Пониженное содержание ЭКА можно объяснить высоким содержанием в сыворотке крови показателей эндотоксикоза за счет связывания большого количества продуктов метаболизма, в частности первичных и вторичных продуктов ПОЛ, ЦИК, МСМ, количество которых увеличивается в случае, когда ЭКА снижена.

По биологическим показателям предлагаемого нами комплекса тестов, возможно не только оценить состояние здоровья пациента, но и уловить начальные проявления заболевания, диагностировать его и прогнозировать течение воспалительного процесса. Выявленное уменьшение альбуминовых показателей - общей и эффективной концентрации альбумина, а также его связывающей способности в стадии обострения и повышение индекса токсичности свидетельствует о снижении детоксикационных возможностей организма и нарастании эндогенной интоксикации. Рост ИТ по альбумину характеризует увеличение эндотоксикоза.

В стадии ремиссии в крови больных I группы показатели ОКА и ЭКА увеличиваются на t0,0 % (р < 0,001) и 64,8 % (р < 0,001), ИТ снижается на 38,5 % (р < 0,001) по отношению к стадии обострения, ССА повышается на 18,0 % (р < 0,001). В крови больных II группы ОКА повышается на 9,2 % (р < 0,001), ЭКА - на 56,9 % (р < 0,001), ИТ понижается на 15,1 % (р < 0,001), ССА повышается на 32,2 % (р < 0,001). В крови больных III группы показатели ОКА и ЭКА возрастают на 9,6 % (р < 0,001) и 82,0 % (р < 0,001) соответственно, ИТ снижается на 20,7 % (р < 0,001) относительно стадии обострения, ССА повышается на 28,5 % (р < 0,001). В фазу ремиссии ИТ уменьшается, т. е. эндогенный альбумин, отражающий степень накопления токсических метаболитов повышает детоксикационные функции (рис. 2).

Загруженность альбумина метаболитами дает информацию об эффективности функционирования печени и почек как основных органов детокси-кации человека. Результаты исследования позволяют сделать заключение, что отношение ЭКА/ОКА и ИТ альбумина являются показателями детоксикационных функций печени и могут быть использованы в качестве косвенных признаков ее поражения у больных бронхолегочными заболеваниями.

Эндотоксикоз обусловлен развитием цепи взаимосвязанных и взаимо-отягощающий друг друга патобиохимических реакций. Одной из причин развития эндотоксикоза, мы считаем, является нарушение обмена веществ, сопровождающееся избыточным накоплением промежуточных и конечных продуктов обмена, оказывающих деструктивное и токсическое действие на системы жизнеобеспечения.

%

□ Контроль И Бронхит И Пневмония Ш Бронхиальная астма

*-р< 0,001

Рис. 2. Динамика показателей эидотоксикоза в крови больных броихолегочными заболеваниями в стадии ремиссии

Содержание продуктов патологического обмена, как это показано в наших исследованиях, определяется тяжестью заболевания и адекватно тестирует степень эндогенной интоксикации вне зависимости от характера возбудителя, что актуально для клинического применения.

3.3. Роль апоптоза и некроза нейтрофилов в реактивных и деструктивных процессах

Апоптоз нейтрофилов позволяет контролировать воспалительные реакции. Этот механизм увеличивается за счет действия антиапоптозных факторов, образующихся в очаге воспаления. В реализации этого механизма существенную роль при апоптозе играют митохондрии. В большинстве типов клеток митохондрии сочетают функции, относящиеся как к клеточной жизни, так и к клеточной гибели (Маянский Н. А., 2004; Киселева Р. Е., Федотова Г. Г., 2005). Установлено, что митохондрии нейтрофилов, несмотря на их ограниченное число, вовлечены в процесс апоптоза за счет заполнения проапоптозными белками, которые в результате апоптоза нейтрофилов выходят в цитозоль. Одним из основных регуляторов продолжительности жизни нейтрофилов является быстрый спонтанный апоптоз, не требующий какого-либо «позитивного сигнала смерти».

Использование в качестве маркера апоптоза нейтрофилов интенсивности свечения моноклональных антител СЭ95+ характеризует способность их к апоптозу. Активация нейтрофилов моноклональными антителами против

С045+, а также флуоресценция зонда ДСМ, которая коррелирует с деструктивными изменениями крист митохондрий, свидетельствует о процессах деэнергизации. Как показали исследования, морфологическая перестройка сопровождается изменением мембранного аппарата, уменьшением азуро-фильных и специфических гранул, снижением активности клеток, о чем свидетельствует уменьшение флуоресцирующих клеток, меченых С045+ и нарастанием флуоресценции СЭ95+, т. е. клеток, готовых к апоптозу.

Учитывая морфологические сходства апоптоза и некроза, следует остановится на электронно-микроскопической характеристике некроза и особенностях, позволяющих отличить его от апоптоза. В результате некроза стимулируются процессы катаболизма, связанные, прежде всего с лизо-сомами. Отмечается перераспределение ионов между цитоплазмой клетки и окружающей средой, что, в конечном счете, приводит к их выравниванию внутри и снаружи клетки. Происходит набухание митохондрий, они теряют способность к синтезу АТФ. При некрозе наблюдается неупорядоченная конденсация хроматина в виде глыбок разных размеров.

Комплекс морфологических изменений в ядре при некрозе в литературе описывают как пикноз, лизис и рексис. Кариопикноз характеризуется уплотнением и сморщиванием ядер, конденсацией хроматина. Однако, для апоптоза характерна конденсация хроматина в виде крупных агрегатов, как правило, располагающихся вдоль ядерной мембраны.

Изменения в клетке при некрозе сопровождаются деструктивными изменениями в цитоплазме. При электронно-микроскопическом исследовании они наблюдаются практически во всех структурах цитоплазмы. Обращают на себя внимание отек, набухание и просветление матрикса, нарушение структуры митохондрий. Выраженные деструктивные изменения происходят и в плазматической мембране, что является одним из важных дифференциально-диагностических признаков, отличающих некроз от апоптоза. В конечном итоге при некрозе происходят тотальное разрушение мембран, ядра и органелл цитоплазмы, выброс цитоплазматического содержимого в окружающее пространство. Некроз клеток сопровождается воспалительной реакцией, что не характерно для апоптоза.

Нейтрофилы, вступившие на путь апоптоза, теряют способность к стимулированной амебовидной активности, поглощению, хемотаксису, респираторному взрыву, секреторной дегрануляции. Механизмы рецептор-зависимого и стрессорного апоптоза одинаковы по финальным эффекторам, но различаются на его подготовительном этапе.

Гипоксия, которая провоцирует апоптоз других клеток, задерживает этот процесс у нейтрофилов. Возможно, это объясняется незначительным содержанием в них митохондрий, и они не нуждаются в энергии, запасаемой при аэробном дыхании. Они используют кислород для взрывного образования биооксидантов в системе НАДФН-оксидазы, и активация, затрагивающая кислородзависимый аппарат биоцидности, создает опасность оксидантного стресса и сопряженного с ним апоптоза.

Под влиянием эндотоксикоза происходит снижение активности клеток, морфологически проявляющееся уменьшением интенсивности их свечения. Так, у больных людей I группы интенсивность свечения клеток СБ45+ снижается на 18,2 % (р < 0,01), II группы - на 25,3 % (р < 0,01), III группы -на 16,9 % (р < 0,01) по отношению к контрольной группе. Подобные изменения отмечаются при дистрофическом процессе различных по этиологии бронхолегочных заболеваний, но особенно ярко они проявляются при пневмонии.

Нейтрофилы несут мощный биоагрессивный заряд и готовы реализо-вывать его при бронхолегочных заболеваниях. Апоптоз нейтрофилов крови обусловливает гибель клеток, которая выводит нейтрофилы из реакции, не позволяя проявлять им свою агрессивность. Гибель нейтрофилов в результате апоптоза, по-видимому, имеет биологический смысл. Выделяющиеся при деструкции нейтрофилов биологически активные продукты обеспечивают бактерицидность секретов.

Морфологические изменения апоптирующих нейтрофилов развиваются по стандартному плану. Характерным признаком апоптирующих клеток служит уплотнение и сохранение целостности плазматической мембраны и внутриклеточных органелл, агрегация, фрагментация хроматина с образованием апоптозных тел (фрагменты клеточных структур). Клетка сжимается, цитоплазма конденсируется. Клетка теряет поверхностные структуры (рецепторы, адгезивные молекулы, ворсинки), округляется и утрачивает способность отвечать на внешние сигналы. Последовательность изменений при апоптозе носит формальный характер, так как в действительности они происходят независимо друг от друга.

3.4. Коррекция процесса фагоцитоза различными дозами низкоэнергетического гелий-неонового лазера

Низкоинтенсивное лазерное излучение при действии на клетки вызывает широкий спектр фотофизических и фотохимических изменений, результатом чего является интенсификация структурно-метаболических процессов, не связанных с нарушением зон облучения (Козлов В. И., Буйлин В. А., 1992; Маянский А. Н., Невмятуллин Н. А., 1995; Киселева Р. Е. и соавт., 1999; Федотова Г. Г., 1995 - 2006). В клинической практике кроме облучения аутокрови применяют селективно модифицированные низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером форменные элементы крови.

Изучена динамика изменений электронно-микроскопических структур нейтрофильных гранулоцитов, фотомодифицированных излучением НЭГНЛ. С помощью количественного анализа показана цитоэнзиматическая активность миелопероксидазы, щелочной и кислой фосфатаз, теста восстановления нитросинего тетразолия в условиях лазерного облучения, вызывающего дозозависимые изменения в ультраструктурной организации фагоцитирующих клеток и их цитохимических показателей.

Проведенные функциональные исследования нейтрофильных лейкоцитов позволили дать комплексную морфоцитохимическую оценку влияния различных доз НЭГНЛ.

В первой серии эксперимента дозы 1,2 Дж/см2; 6,0 Дж/см2 и 18,0 Дж/см2 оказывают стимулирующий эффект на фагоцитарную активность нейтро-филов: ФИ соответственно возрастает на 39,0 % (р < 0,05); 65,3 % (р < 0,05) и 76,5% (р < 0,05). ФЧ также увеличивается на 17,1% (р < 0,05); 36,5 % (р < 0,05) и 53,7 % (р < 0,05) по отношению к контролю.

Облучение дозой 24,0 Дж/см2 незначительно повышает ФИ на 5,0 % (р < 0,05), ФЧ - на 8,0 % (р < 0,05). Наиболее высокий уровень ФИ и ФЧ наблюдается при облучении дозой 18,0 Дж/см2.

Анализ гистохимических препаратов свидетельствует о локализации по всей цитоплазме азурофильных гранул, содержащих миелопероксидазу. Активность реакции весьма вариабельна. Гранулы окрашиваются от бледно-желтого до темно-коричневого цвета. Обнаружены места локализации специфических гранул, они окрашиваются в черный цвет при постановке реакции на щелочную фосфатазу. Как и в случае определения щелочной фосфатазы методом азосочетания участки локализации кислой фосфатазы фиксируются в виде сине-окрашенных гранул, расположенных в цитозоле и иногда на ядре.

Изменение активности ферментов в нейтрофилах крови доноров при облучении НЭГНЛ дозой 1,2 Дж/см2 вызывает незначительное повышение активности МПО. Активность ЩФ повышается на 30,6 % (р < 0,05), КФ -на 9,5 % (р < 0,05), НСТ-теста - на 28,0 % (р < 0,05) к уровню контроля. Доза 6,0 Дж/см также увеличивает активность МПО на 14,4 % (р < 0,05), ЩФ - на 35,4 % (р < 0,05), КФ - на 29,3 % (р < 0,05), НСТ-теста - на 35,6 % (р < 0,05). Доза 18,0 Дж/см2 способствует дальнейшему повышению активности МПО на 22,7 % (р < 0,05), ЩФ - на 47,5 % (р < 0,05), КФ - на 35,1 % (р < 0,05), НСТ-теста - на 47,9 % (р < 0,05). Доза 24,0 Дж/см2 вызывает снижение активности МПО на 6,5 % (р < 0,05), ЩФ - на 20,9 % (р < 0,05), КФ - на 25,6 % (р < 0,05), НСТ-теста - на 30,1 % (р < 0,05), но эти показатели были выше уровня контроля. Пик активности изучаемых ферментов в первой серии приходится на дозу облучения НЭГНЛ 18,0 Дж/см .

Потенциальные возможности нейтрофилов удается выявить на фоне их стимуляции НЭГНЛ. Облучение суспензии нейтрофилов НЭГНЛ дозами 1,2 Дж/см2, 6,0 Дж/см2 и 18,0 Дж/см2 прежде всего, вызывает изменение в плазматической мембране, характеризующееся увеличением микровыростов; гетерохроматин диспергируется, эухроматин занимает всю центральную часть ядра, т. е проявляет черты, характерные для активации клеток. Со стороны ядерных структур особых изменений не наблюдается. В цитоплазме отчетливо заметна частичная дегрануляция азурофильных и специфических гранул. Часть таких гранул концентрируется около плазмалеммы или небольших вакуолей, заполненных хлопьевидным содержимым. Митохондрии увеличены в размерах. Доза облучения 24,0 Дж/см2 вызывает развитие в нейтрофилах деструктивных процессов со стороны плазма-

тических мембран, особенно митохондрий. Под влиянием НЭГНЛ наблюдается увеличение числа НСТ-положительных клеток, что свидетельствует о возрастании цитотоксического потенциала нейтрофилов. Этот показатель достигает максимума при дозе облучения 18,0 Дж/см2 и превышает контрольный показатель на 58,6 % (р < 0,05), доза облучения 24,0 Дж/см2 имеет более низкий показатель по отношению к контролю.

При облучении дозой 18,0 Дж/см2 фагоцитарные вакуоли имеют большой объем свободного электронно-светлого пространства и только незначительная часть их объема занята микробами. Такие полости встречаются в срезах, как на уровне ядра, так и в срезах, проходящих через безъядерную часть клеток. Вакуолеобразные полости с микроорганизмами находились в глубоких впячиваниях ядер, что создает впечатление об их сжатии. Ядро сдвинуто на периферию. Цитоплазматические перемычки между вакуолями очень тонкие.

В отдельных вакуолях можно наблюдать по три микроорганизма. Специфические гранулы нередко находятся рядом с вакуолями, что может являться иллюстрацией выхода содержимого гранул в вакуоли. Механизм формирования клеточного ответа на воздействие НЭГНЛ связан с ультраструктурной и функциональной модификацией клеток, появлением в цитоплазме крупных вакуолей, фагосом и деформацией ядра в нейтрофилах.

Следует отметить, что после воздействия НЭГНЛ многие клетки содержат большое число микроорганизмов. В таких "заполненных" микроорганизмами нейтрофилах микробы были частично лизированными, это свидетельствует об активных процессах переваривания фагоцитированных микробов, что связано с влиянием НЭГНЛ. Данные признаки можно расценивать как свидетельство активации в клетках процесса фагоцитоза.

Во. второй серии опытов, наиболее приближенных к патологическим ситуациям, при инфицировании крови человека стафилококком и последующем облучении НЭГНЛ происходит увеличение ФИ на 52,8 % (р < 0,05), ФЧ достигает 6,4 ± 0,29 бактерий на каждую клетку. Рост фагоцитарной активности особенно характерен для облучения дозами 6,0 Дж/см2 и 18,0 Дж/см2 и составляет соответственно 79,6 % (р < 0,05) и 84,6% (р< 0,05) к уровню контроля. ФЧ при облучении дозой 18,0 Дж/см2 увеличивается почти в два раза, т. е. в клетках наблюдается по 7 и 9 фагоцитированных бактерий. Сравнивая данные фагоцитарной активности в первой серии с фагоцитирующими клетками при последующем облучении, показатели фагоцитарной активности при всех дозах облучения во второй серии эксперимента выше на 20,0 % и более.

Активность ферментов во второй серии под влиянием облучения дозой 1,2 Дж/см2 характеризуется следующими изменениями: уровень активности МПО повышается на 9,3 % (р < 0,05), ЩФ - на 46,5 % (р < 0,05), КФ - на 12,3 % (р < 0,05), НСТ-теста - на 34,1 % (р < 0,05). Доза 6,0 Дж/см2 вызывает повышение активности МПО на 16,4 % (р < 0,05), ЩФ - на 44,5 % (р < 0,05), КФ - на 28,8 % (р < 0,05), НСТ-теста - на 42,4 (р < 0,05). Доза 18,0 Дж/см2 также способствует повышению уровня активности МПО на 27,3 % (р <

0,05), ЩФ - на 49,3 (р < 0,05), КФ - на 35,9 (р < 0,05), НСТ-теста - на 54,4 % (р < 0,05). Доза 24,0 Дж/см2 вызывает снижение активности МПО на 12,1 % (р < 0,05), ЩФ - на 37,6 % (р < 0,05), КФ - на 27,3 % (р < 0,05), НСТ-теста - на 37,3 % (р < 0,05), но эти показатели были выше уровня контроля. Рост активности изучаемых ферментов во второй серии особенно ощутим при облучении дозами 6,0 Дж/см2 и 18,0 Дж/см2.

Процесс дегрануляции нейтрофилов при фагоцитозе вполне упорядоченный: с наружной мембраной вначале сливаются специфические гранулы, затем - азурофильные. Эти данные хорошо согласуются с результатами гистохимических исследований клеток крови после облучения НЭГНЛ. Активность МПО, ЩФ и КФ носит дозозависимый характер, прежде всего наблюдается выброс МПО из азурофильных гранул, о чем свидетельствует снижение активности фермента, а затем его нарастание на 27,6 % (р < 0,05). Такая же картина наблюдается в отношении КФ - повышение на 12,0 % (р < 0,05). Активность ЩФ в зависимости от дозы вначале растет на 47,0 % (р < 0,05) и при облучении дозой 24,0 Дж/см2 снижается, не достигая уровня контроля. Ферментативная активность в первой и во второй серии эксперимента варьирует в зависимости от дозы облучения.

Одним из основных свойств ферментов биотрансформации является генетический полиморфизм, что предполагает их различную активность в метаболизме субстратов и обуславливает индивидуальную чувствительность как к химическим соединениям, так и к эндогенным веществам.

Таким образом, сопоставляя результаты интенсификации фагоцитоза с облученными клетками (первая серия) и инфицированными лейкоцитами, во второй серии модельных опытов фагоцитарная активность выражена сильнее, т. е. процесс фагоцитоза длится значительно дольше при облучении фагоцитирующих клеток НЭГНЛ. Прирост ФИ во 2-й серии для дозы 6,0 Дж/см2 составляет 14,3 % (р < 0,05), ФЧ - 26,9 % (р < 0,05). Доза 18,0 Дж/см2 дает еще больший прирост фагоцитарных показателей: ФИ на 38,1 % (р < 0,05), ФЧ - на 26,8 % (р < 0,05). Рассматривая это явление с точки зрения морфофункциональных характеристик фагоцитирующих клеток, можно проследить взаимосвязь между уже начавшимся" фагоцитозом и дополнительным стимулированием этого процесса НЭГНЛ.

Облучение НЭГНЛ вызывает перераспределение мембранных липидов, что влияет на структурное состояние плазматических мембран изучаемых клеток, выражающееся в дозозависимом снижении вязкости мембран. Первичные механизмы, задействованные в мембранах при облучении НЭГНЛ, вызывают изменения в ее липидных и белковых молекулах, снижение уровня холестерина в лейкоцитах на 15,0 % (р < 0,05). Уровень фосфолипидов максимально повышается на 17,0 % (р < 0,01). Коэффициент насыщенности жирных кислот на 34,0 % (р < 0,01) был выше контроля. Эти изменения в нейтрофилах вызывает доза облучения 24,0 Дж/см2.

Влияние НЭГНЛ сопровождается усилением метаболических процессов в фагоцитирующих клетках в пострадиационный период. Процесс повышения активности изучаемых ферментов носит волнообразный характер. Чем

выше доза облучения, тем быстрее наблюдается пик повышения активности, и тем более он значим Данное обстоятельство характерно для всех ферментов при облучении дозами 6,0 Дж/см2 и 18,0 Дж/см2 с анализом через 60 минут после облучения. Выявлено пролонгирование активного функционирования нейтрофилов, инфицированных микроорганизмами в пострадиационный период. Существенное повышение активности МПО, ЩФ, КФ и НСТ-теста во второй серии вызывает облучение дозами 6,0 Дж/см2 и 18,0 Дж/см2 с анализом через 60 минут. Снижение активности данных ферментов отмечается через 180 минут, но они остаются выше контрольного уровня, отражая адаптационные процессы.

В пострадиационный период при облучении дозами НЭГНЛ 1,2 Дж/см2; 6,0 Дж/см и 18,0 Дж/см2 в клетках развиваются процессы активации, связанные с неспецифическими формами передачи влияния НЭГНЛ на рецепторы мембран, которые приводят к изменению мембранного потенциала, плотности распределения рецепторов, взаимодействию их с белками, встроенными в мембрану, увеличению текучести мембран, что определяет интенсивность адаптационных процессов. Облучение крови НЭГНЛ, модифицируя структуру плазматической мембраны и ее микровязкость, способствует повышению функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов. Доза 24,0 Дж/см2 в пострадиационный период снижает активность фагоцитоза по показателям ФИ и ФЧ, ослабевает адгезивная способность нейтрофилов. В связи с перераспределением внутриклеточных органелл происходит изменение топографии мембранных рецепторов, обеспечивающих адгезию мембраны. Замедляется процесс миграции нейтрофилов.

Облучение НЭГНЛ дозой 24,0 Дж/см2 характеризуется наличием "темных" и "светлых" клеток с крупными вакуолями, содержащими микроорганизмы. «Темные» клетки - с умеренной электронной плотностью, для них характерно уменьшение количества гранул в цитоплазме. «Светлые» клетки - со сниженной электронной плотностью, содержат малое количество гранул, вакуоли и фагосомы (часто значительного размера) с наличием фагоцитированного материала различной плотности.

Поскольку щелочная фосфатаза обладает фосфопротеинфосфатазным действием, приводящим к активации аденилатциклазы, ускоряющей синтез циклической аденозинмонофосфатазы, регулирует хаотическое и направленное движение нейтрофилов, поглощение фагоцитируемых частиц, переход лизосомальных ферментов из первичных гранул в фагоцитарные вакуоли, высвобождение гистамина под влиянием антигенов, а также ряд метаболических процессов.

Наиболее информативным для оценки фагоцитарной активности является индекс активации нейтрофилов, представляющий собой, отношение числа лежащих внутриклеточно убитых микробов к общему числу фагоцитированных нейтрофилами микробов, выраженное в процентах. У обследованных доноров он колеблется от 70,0 % (р < 0,05) до 76,0 % (р < 0,05). Этот индекс характеризует именно бактерицидную способность нейтрофилов, т. е. киллинг-эффект по отношению к микробам. Киллинг-эффект

особенно выражен в нейтрофнлах при облучении дозами 6,0 Дж/см2 и 18,0 Дж/см2 и составляет 84,0 % (р < 0,05) и 87,0 % (р < 0,05) соответственно.

В связи с тем, что нейтрофилы выполняют функцию фагоцитоза, мы обратили внимание на структурированность их плазматической мембраны и ее жидкокристаллические свойства. Жидкостное состояние мембраны определяли по соотношению холестерин/фосфолипиды и коэффициенту эксиме-ризации гидрофобного зонда пирена. В нейтрофилах эти показатели составляют соответственно 0,86 усл. ед. (р < 0;05) и 0,92 усл. ед. (р < 0,05).

Уменьшение всех изучаемых показателей активности нейтрофилов при облучении дозой 24,0 Дж/см2 объясняется нарушением структурного состояния плазматической мембраны клеток за счет повышения ее кластеризованное™, образования в ней сверхплотных холестериновых доменов и многочисленных пор. Эти процессы ведут к деструкции мембраносвязанных ферментов. Просветление цитоплазмы свидетельствует об исчезновении из клетки гранул. В таком состоянии клетка становится не способной ни к фагоцитозу, ни к обеспечению своей жизнедеятельности. При облучении дозой 24,0 Дж/см2 большая часть нейтрофилов фактически утрачивает свои основные функции. Более благоприятное действие на нейтрофилы оказывают дозы облучения 1,2 Дж/см2; 6,0 Дж/см2 и 18,0 Дж/см2. Наиболее эффективное действие вызывает доза 18,0 Дж/см2.

В основе биостимулирующего действия лазерного излучения лежат структурно-функциональные перестройки мембранных образований клетки и внутриклеточных органелл, что может быть обусловлено возникновением колебательно возбужденных состояний, приводящих к изменению уровня ПОЛ и конформации локальных участков мембраны. Коррекция нарушений механических свойств мембран - это необходимая составляющая процесса детоксикации организма.

3.5. Влияние антиоксидантных препаратов на нейтрофилы при развитии антиоксидантного стресса

Мембранодестабилизирующее действие эндотоксинов приводит к деструкции рецепторного аппарата, снижению микровязкости биомембран, нарушению внутриклеточного метаболизма, снижению энергетики в митохондриях за счет роста процессов ПОЛ (Киселева Р. Е., Федотова Г. Г., 2006). Деструкция мембран играет ведущую роль в патогенезе бронхолегочных заболеваний, в связи с этим мы считаем необходимым использование в лечении бронхолегочных заболеваний антиоксидантов или мембраностаби-лизаторов. Димефосфон обладает рядом свойств - противовоспалительным, мембраностабилизирующим, иммунокоррегирующим, благодаря которым его применение при бронхолегочных заболеваниях патогенетически является обоснованным. Сочетание таких свойств димефосфона, как торможение процессов функциональной активности клеток за счет воздействия на кальцийзависимые пути передачи возбуждающего сигнала, подавление на

ранних стадиях острого воспаления, лежит в основе применения препарата (Цибулькина В. Н., 1999).

Другой препарат - мексидол, обладает широким спектром действия и фармакологической активностью, эффективен при гипоксии. Он способен ингибировать свободнорадикальное окисление липидов биомембран, активно реагировать с перекисными радикалами липидов и гидроксильными радикалами пептидов и белков, повышать активность антиоксидантных ферментов, ответственных за образование и расходование перекисей липидов, а также АФК. Мексидол является активным мембраномодулятором, способным изменять физико-химические и структурно-функциональные свойства мембран.

В патогенезе бронхолегочных заболеваний значительная роль отводится антиоксидантному стрессу, как фактору нарушения структурно-регуляторной функции клеток за счет метаболического повреждения липидного бислоя. Одновременно с усилением липопероксидации наблюдается деструкция белковых компонентов клеточных мембран.

У обследованных людей в стадии обострения интенсивность ПОЛ в сыворотке крови больных I группы увеличивается в 3,2 раза, II группы - в 3,7 раза, III группы - в 3,5 раза. Рост данного показателя сильнее выражен при пневмонии,

Кроме того, снижение уровня антиоксидантов в ответ на активацию ПОЛ при истощении резервных возможностей рассматривается как один из общих механизмов мембранного аппарата клеток.

Установлено, что процессы свободнорадикального окисления, изменяя структуру и фосфолипидный состав мембран клеток, приводит к искажению информации от внеклеточных регуляторов к внутриклеточным эффекторным системам, следствием чего является нарушение реактивности клеток.

В зависимости от характера проводимой терапии все обследованные больные получали базовое лечение и терапию димефосфоном и мексидолом. На фоне базовой терапии уровень процессов липопероксидации при бронхолегочных заболеваниях был статистически достоверно ниже соответствующего показателя в контроле. Димефосфон и мексидол угнетают интенсивность ПОЛ в сыворотке крови больных I группы на 35,0 % и 25,0 %, II группы - на 42,0 % и 23,0 %, III группы - на 11,0 % и 22,3 % соответственно.

Введение димефосфона наиболее существенно препятствует инициативе свободнорадикальных процессов, особенно при бронхите и бронхиальной астме. Меньше выражено влияние при пневмонии. Возможно, в реализации эффекта препарата лежит его способность выступать в качестве «ловушки» свободных радикалов. При этом димефосфон вызывает и значительное увеличение общей антиоксидантной активности. Согласно литературным данным в действии димефосфона имеется двойной механизм: во-первых, препарат проявляет свойства прямого антиоксиданта за счет антирадикальных свойств и, во-вторых, непрямого антиоксидантного действия, способного повышать активность ферментного звена.

Мексидол является ингибитором свободнорадикального окисления, уменьшающего ПОЛ и повышающего активность антиоксидантной системы. Препарат обладает мембранопротекторными свойствами в результате изменения вязкости липидного слоя, а также вследствие прямого встраивания в биомембраны. Он восстанавливает нарушенные функции клеточных мембран, оказывая моделирующее влияние на мембраносвязанные ферменты, ионные каналы, рецепторные комплексы (Данилова Е. Д. и соавт., 1995).

С. В. Оковитый (2001) установил, что мексидол является антигипок-сантом прямого энергизирующего действия. Он усиливает эндогенное дыхание в 3 раза, что сопровождается восстановлением флавопротеинов и появлением окислительного фосфорилирования в присутствии АДФ, т. е. проявляет свойства дыхательной цепи, что чрезвычайно важно для заболеваний, в генезе которых решающую роль играет гипоксия. Димефосфон оказывает влияние на активацию антиоксидантной системы, снижая ПОЛ, а мексидол, кроме снижения ПОЛ, в основном повышает энергетику клетки.

При анализе антиоксидантных свойств мексидола в опытах in vitro проявляется его влияние на процессы перекисного окисления липидов. Установлено, что процессы липопероксидации в сравнении с димефосфоном при применении мексидола значительно слабее. Показатели ПОЛ в сыворотке крови, инкубированной димефосфоном и мексидолом больных I группы составляет 70,0 % и 44,6 %, II группы - 55,0 % и 41,2 %, III группы -64,0 % и 49,8 %.

Положительный эффект димефосфона по сравнению с базовой терапией, по-видимому, объясняется тем, что при базовом лечении применяется несколько лекарственных веществ, действующих на разные стороны метаболизма. Димефосфон, обладая антиоксидантным и иммуномодулирую-щим действием, по сочетанию положительных эффектов не имеет аналогов (Анохин В. А. и соавт., 1996; Зиганшина Л. Е., 1992; Инчина В. И. и соавт. 2003).

За счет своих многочисленных метальных групп димефосфон способен проникать в биологические мембраны и встраиваться в них, тем самым стабилизируя мембрану клетки. Мембраносвязывающие ферменты антиоксидантной защиты восстанавливают свою активность, ингибируя процессы ПОЛ. Ингибируя перекисное окисление липидов снимается процесс воспаления, тем самым препарат проявляет свое противовоспалительное действие. За счет реактивной способности метальные группировки могут обладать электрофильностью и нуклеофильностью. Группировки (СО) и эфирная связь (ОСН3) характеризуются донорными свойствами, поэтому димефосфон обладает антиоксидантной активностью.

Димефосфон и мексидол проявляют выраженное антиоксидантное действие, ингибируя ПОЛ в сыворотке крови, нейтрофилах, с наиболее выраженным эффектом у димефосфона. Эти препараты влияют на рецепторы мембран клеток, на состояние самих мембран и главное - могут рассматриваться как иммуномодуляторы и физиологические стимуляторы иммунитета.

Выводы

1. Бронхолегочные заболевания характеризуются развитием эндогенной интоксикации, проявляющейся в увеличении количества циркулирующих в крови молекул средней массы, иммунных комплексов и продуктов пере-кисного окисления липидов; одновременно определяется повышение индекса токсичности по альбумину.

2. Для больных бронхолегочными заболеваниями (бронхит, пневмония, бронхиальная астма) в стадии обострения и ремиссии характерна недостаточная антиоксидантная активность в сочетании с высоким уровнем продуктов перекисного окисления липидов, что создает условия для рециди-вирования хронического воспаления и указывает на активное участие нейтрофилов в патогенезе бронхолегочной патологии.

3. Морфологическая перестройка апоптирующих нейтрофилов сопровождается изменением мембранного аппарата, уменьшением числа азурофильных и специфических гранул, разрушением крист митохондрий, снижением иммунореактивности С045+-клеток и повышением иммуно-реактивности СБ95+-клеток, коммитированных в направлении апоптоза. При некрозе происходит нарушение целостности плазматической мембраны, мембран цитоплазматических органелл и лизис ядра, что обусловливает выброс цитоплазматического содержимого в окружающее пространство.

4. Действие эндотоксинов на нейтрофилы определяется тяжестью течения бронхолегочных заболеваний. Наибольшие изменения касаются молекул средней массы, циркулирующих иммунных комплексов, перекисного окисления липидов и индекса токсичности. Дефицит общей концентрации альбумина и его связывающей способности при бронхолегочных заболеваниях приводит к снижению транспорта метаболитов различного происхождения и дезинтоксикационной функции белка, что способствует нарастанию эндогенной интоксикации.

5. Нарушение баланса биогенных аминов (гистамина, серотонина) в крови сочетается с увеличением уровня перекисного окисления липидов, повышением содержания в крови молекул средней массы и циркулирующих иммунных комплексов - эндотоксинов широкого спектра действия и может являться одним из критериев тяжести эндогенной интоксикации.

6. Механизм формирования клеточного ответа на воздействие низкоэнергетического гелий-неонового лазера находит свое проявление в начальной фазе развития реактивных изменений, связанных с изменением активности ферментов и структуры плазматических мембран и включает в себя следующие моменты: молекулярные перестройки мембран - снижение уровня холестерина и коэффициента насыщенности жирных кислот, повышение доли фосфолипидов и снижение микровязкости; функциональную модификацию мембран - изменение липид-белковых взаимодействий и повышение трансмембранного потенциала; функциональную модификацию клеток - повышение фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа нейтрофилов.

7. Димефосфон и мексидол, обладая антиоксидантной активностью пролонгируют период функциональной активности нейтрофилов в условиях гипоксии in vitro. Клетки становятся более активными, что проявляется достоверным повышением нейтрофильной активности. Электронно-микроскопически это выражается в увеличении лизосомального аппарата и регенерацией митохондриальных крист. В ядре обнаруживается большое количество гетерохроматина.

Научно-практические предложения

1. Полученные данные о морфофункциональном состоянии нейтрофилов рекомендуются для использования в учебном процессе на биологических и медицинских факультетах высших учебных заведений по дисциплинам цитология, гистология, биохимия, физиология, молекулярная биология, анатомия, гематология, пульмонология, иммунология.

2. Данные о влиянии эндотоксинов на морфофункциональное состояние нейтрофилов при бронхолегочных заболеваниях могут быть использованы в клинической практике, как для диагностики, так и для профилактики. С этой целью рекомендуется ввести в комплекс препаратов базисной терапии антиоксидантные препараты - димефосфон и мексидол.

3. При лечении больных бронхолегочными заболеваниями необходимо проводить контроль за уровнем эндогенной интоксикации. Критическое состояние больных при инфекционных заболеваниях, сопровождается снижением содержания альбумина, его связывающей способности и эффективной концентрации, увеличением индекса токсичности. В связи с этим альбуминовые показатели рекомендуется использовать в качестве диагностического и прогностического теста.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Федотова, Г. Г. Транспорт кальция через плазматическую мембрану нервного волокна лягушки / Г. Г. Федотова, Г. В. Максимов, Н. И. Покудин, Г. Г. Ряжский, С. Н. Орлов, А. Б. Рубин // Биологические мембраны. - 1986.Т. 3. - № 7. - С. 735 - 743.

2. Федотова, Г. Г. Транспорт кальция в субклеточные фракции нервного волокна лягушки / Г. Г. Федотова, Г. В. Максимов, С. Н. Орлов // Биологические мембраны. - 1986,- Т. 3. - № 8. - С. 823 - 828.

3. Федотова, Г. Г. Изменение активности миелопероксидазы в лейкоцитах после облучения гелий-неоновым лазером/ Г. Г. Федотова, О. С. Шубина, Р. Е. Киселева, JI. В. Кузьмичева // XXX Евсевьевские чтения: научная конференция. - Саранск, 1994. - Ч. 2. - С. 53 - 54.

4. Федотова, Г. Г. Гистохимические исследования морфофункцио-нальной активности фотомодифицированных лейкоцитов / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева, С. А. Ляпина, О. С. Шубина // Светоизлучающие системы.

Эффективность и применение: 1-я Всероссийская научно-техническая конференция с международным участием. - Саранск, 1994. - С. 66 - 67.

5. Федотова, Г. Г. Динамика активности мембраносвязанных ферментов в фотомодифицированных клетках крови / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева, С. А. Ляпина, Н. А. Мельникова // Светоизлучающие системы. Эффективность и применение: 1-я Всероссийская научно-техническая конференция с международным участием. - Саранск, 1994. - С. 68 - 69.

6. Федотова, Г. Г. Морфоцитохимическое исследование лейкоцитов периферической крови человека при действии гелий-неонового лазера: автореф. дис.... канд. биол. наук / Г. Г. Федотова. - Саранск, 1995. - 22 с.

7. Федотова, Г. Г. Влияние гелий-неонового лазера на функциональную активность форменных элементов крови / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева, Н. В. Альба, В. А. Трофимов, Л. В. Кузьмичева // Методы эфферентной и квантовой терапии в клинической практике: научно-практическая конференция. - Ижевск, 1995. - С. 80.

8. Федотова, Г. Г. Цитохимический профиль нейтрофильных лейкоцитов в норме и при фагоцитозе / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева, О. М. Юдина // XXIV Огаревские чтения: научная конференция. - Саранск, 1995. - С. 22.

9. Федотова, Г. Г. Влияние гелий-неонового лазера на функциональную активность лейкоцитов / Г. Г. Федотова, Ж. Д. Грехнева // XXIV Огаревские чтения: научная конференция. - Саранск, 1995. - С. 38 - 39.

10. Федотова, Г. Г., Пиксин И. Н., Киселева Р. Е., Кузьмичева Л. В. Способ определения регуляторных белков плазмы (сыворотки) крови. Рацпредложение № 792, принятое МГУ им. Н.П.Огарева от 14.02.1995.

11. Федотова, Г. Г. Влияние лазерного облучения на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови / Г. Г. Федотова, О. С. Шубина, Р. Е. Киселева, П. П. Кругляков, А. А. Сосунов // XXXI Евсевьевские чтения: научная конференция. - Саранск, 1996. - С. 87 - 88.

12. Федотова, Г. Г. Использование низкоэнергетического гелий-неонового лазера для селективного облучения форменных элементов крови / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева, Л. В. Кузьмичева, С. А. Ляпина, О. С. Шубина, Н. А. Мельникова // Морфология. - 1996. - Т. 109. - № 2. - С. 59.

13. Федотова, Г. Г. Воздействие факторов окружающей среды на иммунную систему человека / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева, Л. В. Кузьмичева // Региональные проблемы экологической генетики и пути их решения: научно-практическая конференция. - Саранск, 1996. - С. 17 - 18.

14. Федотова, Г. Г. Изменение ферментативных реакций нейтрофилов под влиянием гелий-неонового лазера / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева, С. А. Ляпина, О. С. Шубина, О. М. Юдина // Актуальные вопросы комбустио-логии, реаниматологии и экстремальной медицины: республиканская научно-практическая конференция,- Саранск, 1996. - С. 265 - 266.

15. Федотова, Г. Г. Особенности метаболизма форменных элементов крови после облучения низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева, С. А. Ляпина, О. С. Шубина // XXXII Евсевьевские чтения: научная конференция. - Саранск, 1996. - С. 60 - 64.

16. Федотова, Г. Г. Изменение морфофункционального состояния форменных элементов крови под воздействием гелий-неонового лазера / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева, JI. В. Кузьмичева, О. С. Шубина, С. А. Ляпина, О. М. Юдина // Новые направления лазерной медицины: международная научная конференция. - Москва, 1996. - С. 311 - 312.

17. Федотова, Г. Г. Морфофункциональные особенности амниона при нормальной беременности и многоводии / Г. Г. Федотова, О. С. Шубина, Р. Е. Киселева, И. А. Степаненко // XXXII Евсевьевские чтения: научная конференция. - Саранск, 1996. - С. 8 - 10.

18. Федотова, Г. Г. Изменения электронно-микроскопической организации нейтрофильных лейкоцитов при адаптации к воздействию низкоэнергетического гелий-неонового лазера / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева // Вопросы медико - биологических наук. Морфофункциональные и биохимические аспекты адаптации: сборник научных работ. - Саранск, 1997. - С. 12 - 20.

19. Федотова, Г. Г. Взаимодействие между процессом фагоцитоза и стимуляцией низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером / Г. Г. Федотова, С. А. Ляпина, О. М. Юдина // Светоизлучающие системы. Эффективность и применение: сборник научных трудов 2-й Всероссийской научно-технической конференции. - Саранск, 1997. - С. 105.

20. Федотова, Г. Г. Изменение активности Na-K-АТФазы в фагоцитах, стимулированных НИГНЛ / Г. Г. Федотова, С. А. Ляпина, Р. Е. Киселева, И. Р. Шашанов, М. А. Шубина // Светоизлучающие системы. Эффективность и применение: сборник научных трудов 2-й Всероссийской научно-технической конференции. - Саранск, 1997. - С. 101.

21. Федотова, Г. Г. Влияние лазерного облучения на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови / Г. Г. Федотова, О. С. Шубина, Р. Е. Киселева, Л. П. Пешев, И. А. Степаненко, О. М. Юдина // Проблемы лазерной медицины: материалы международного конгресса. -Москва: Видное, 1997. - С. 7.

22. Федотова, Г. Г. Изменение физико-химических свойств мембран нейтрофильных гранулоцитов при их облучении гелий-неоновым лазером in vitro / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева, О. С. Шубина, И. А. Степаненко // Эфферентная и иммунокоррегирующая терапия в клинической практике: материалы III Всероссийской научно-практической конференции. - Ижевск, 1998. - С. 102 - 103.

23. Федотова, Г. Г. Влияние свинца на антиоксидантную активность и перекисное окисление липидов / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева, О. С. Шубина, И. А. Степаненко // Эфферентная и иммунокоррегирующая терапия в клинической практике: материалы III Всероссийской научно-практической конференции. - Ижевск, 1998. - С. 100 - 102.

24. Федотова, Г. Г. Морфофункциональная характеристика микрофагов / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева // XXXIV Евсевьевские чтения: научно-практическая конференция. - Саранск, 1998. - С. 62 - 66.

25. Федотова, Г. Г. Возможности коррекции апоптоза нейтрофилов низкоинтенсивным гелий-неоновым лазером / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева,

С. А. Ляпина, М. А. Родина, О. В. Мозговая, О. С. Новожилова // Клинико-экспериментальные аспекты современной медицины: научная конференция. -Саранск, 1999. - Ч. 2. - С. 155 - 158.

26. Федотова, Г. Г. Формирование неспецифического адаптационного синдрома в клетках крови при облучении лазером / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева, Л. В. Кузьмичева, Н. В. Альба, С. А. Ляпина, Н. А. Мельникова. //Лазер и здоровье - 99: международный конгресс. - Москва, 1999. - С. 449 -450.

27. Федотова, Г. Г. Исследование нейтрофильных гранулоцитов периферической крови при действии низкоэнергетического гелий-неонового лазера / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева, Н. В. Альба, С. А. Ляпина, Д. Л. Альба // Макро- и микроморфология: сборник научных работ межвузовской конференции. - Саратов, 1999. - С. 223 - 226.

28. Федотова, Г. Г. Влияние гелий-неонового лазера на структурно-функциональное состояние лейкоцитов крови / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева, Н. А. Мельникова // Морфология. - 2000. - № 3. - С. 57 - 58.

29. Федотова, Г. Г. Изменение иммунной системы человека при интоксикации и роль в лазеротерапии и реабилитации / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева, Н. В. Альба, Д. Л. Альба, Л. В. Кузьмичева, В. Н. Ковалев, Н. В. Громова, С. А. Ляпина, Н. А. Мельникова // Иммунореабилитация и реабилитация в медицине: материалы международного конгресса, Израиль. - International journal on immunorehabilitation. - 2000. - Vol. 2. - N 2. - P. 412 - 413.

30. Федотова, Г. Г. Структурные и функциональные аспекты фагоцитоза / Г. Г. Федотова // Актуальные вопросы морфологии, физиологии и биохимии: сборник научных работ. - Саранск, 2002. - С. 58 - 63.

31. Федотова, Г. Г. Влияние излучения гелий-неонового лазера на лимфоциты крови белых крыс при свинцовой интоксикации / Г. Г. Федотова, О. С. Шубина, Р. Е. Киселева // Применение лазеров в медицине и биологии: материалы XXI Международной научно-практической конференции. -Одесса, 2004. - С. 116-118.

32. Федотова, Г. Г. Митохондрии как инициаторное патогенетическое звено дистрофического процесса / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева // Функциональные и прикладные исследования в медицине: материалы III научной конференции с международным участием, Лутраки, Греция. - Современные наукоемкие технологии. - 2005. - № 7. - С. 59 - 60.

33. Федотова, Г. Г. Апоптоз и его роль в ответе нейтрофилов / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева // Приоритетные направления развития науки, технологий и техники: материалы III научной конференции с международным участием, Египет, Хургада. - Современные наукоемкие технологии. - 2005. - № 8. - С. 75 -76.

34. Федотова, Г. Г. Механизмы действия серотонина при пневмонии / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева // Морфологические ведомости. - 2005. - № 34. - С. 45 - 47.

35. Федотова, Г. Г. Изучение фагоцитирующих клеток, фотомоди-фицированных низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером / Г. Г.

Федотова, Р. Е. Киселева // Морфологические ведомости. - 2005. - № 3-4. - С. 163 - 165.

36. Федотова, Г. Г. Мембраномодифицирующее действие низкоэнергетического гелий-неонового лазера на лейкоциты периферической крови в пострадиационный период / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева // Морфологические ведомости. - 2006. - № 1-2. - С. 124 - 126.

37. Федотова, Г. Г. Изменение активности НАД-, ФАД-дегидрогеназ и НАДФН-оксидаз при бронхолегочных заболеваниях / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева, О. С. Новожилова // Морфологические ведомости. - 2006. - № 1-2. -С. 88 - 90.

38. Киселева, Р. Е. Влияние эндотоксикоза на реактивные изменения лейкоцитов / Р. Е. Киселева, Г. Г. Федотова, // Мордов. гос. пед. ин-т. -Саранск, 2006. - 292 с.

39. Федотова, Г. Г. Влияние низкоэнергетического гелий-неонового лазера на процесс фагоцитоза / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева // Производственные технологии: материалы IV научной конференции с международным участием, Италия, Римини. - Фундаментальные исследования. - 2006. -№6.-С. 61 -62.

40. Федотова, Г. Г. Кооперативное взаимодействие различных клеточных элементов при фагоцитозе / Г. Г. Федотова // Морфологические ведомости. -

2006.- №3-4.- С. 61 -63.

41. Федотова, Г. Г. Деструктивные изменения в митохондриях лейкоцитов при бронхолегочной патологии / Г. Г.Федотова // Морфологические ведомости. - 2006. - № 3-4. С. 96 - 98.

42. Федотова, Г. Г. Роль биогенных аминов в реализации внутриклеточных процессов // Современные наукоемкие технологии: материалы II научной конференции с международным участием, Тенериф, Испания. -Современные наукоемкие технологии. - 2006. - № 8. - С. 86 - 87.

43. Федотова, Г. Г. Эффективная концентрация альбумина и его связывающая способность в оценке тяжести воспалительного процесса / Г. Г.Федотова, Р. Е. Киселева // Успехи современного естествознания: материалы VII научной конференции с международным участием, Сочи, Дагомыс. - Современные наукоемкие технологии. - 2007. - № 1. - С. 81.

44. Федотова, Г. Г. Деструктивные изменения в лейкоцитах при бронхолегочной патологии / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева // Фундаментальные и прикладные исследования в медицине: материалы III научной конференции с международным участием, Греция, Лутраки. - Современные наукоемкие технологии. - 2007. - № 1. - С. 81 - 82.

45. Федотова, Г. Г. Изменение активности щелочной и кислой фосфатазы лейкоцитов в развитии неспецифического воспаления в легких / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева // Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии: материалы III научной конференции с международным участием, ОАЭ, Дубай. - Современные наукоемкие технологии. -

2007. -№ 1.-С. 91 -92.

Подписано в печать 09.03.07. Объем 2,25 п л. Тираж 100 экз. Заказ № 462. Типография Издательства Мордовского университета 430000, г. Саранск, ул. Советская, 24

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Федотова, Галина Геннадьевна

ВВЕДЕНИЕ,

СОДЕРЖАНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ОРГАНИЗАЦИИ НЕЙТРОФИЛОВ.

1.1.1. Особенности морфологии и функционирования нейтрофилов.

1.1.2. Строение и функции мембран нейтрофильных лейкоцитов.

1.2. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ОСНОВЫ ПРОЯВЛЕНИЯ РЕАКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ.

1.2.1. Роль SNARE гипотезы в ходе регулируемого экзоцитоза гранул нейтрофилов.

1.2.2. Молекулярные основы фагоцитоза.

1.3. АКТИВАЦИЯ НЕЙТРОФИЛОВ.

1.3.1. Структурно-функциональные основы транспортных систем нейтрофилов.

1.4. ИЗМЕНЕНИЕ РЕАКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ ПОД ВЛИЯНИЕМ ЭНДОТОКСИНОВ ПРИ БРОНХОЛЕГОЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ.

1.5. ВЛИЯНИЕ МЕМБРАНОТРОПНЫХ ЭНДОТОКСИНОВ НА ДЕСТРУКТИВНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ НЕЙТРОФИЛОВ ПРИ БРОНХОЛЕГОЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ И ИХ КОРРЕКЦИЯ

НИЗКОЭНЕРГЕТИЧЕСКИМ ГЕЛИЙ-НЕОНОВЫМ ЛАЗЕРОМ

И АНТИОКСИДАНТНЫМИ ПРЕПАРАТАМИ.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объект исследования.

2.2. Методы исследования.

3. РЕАКТИВНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ НЕЙТРОФИЛОВ ПРИ БРОНХОЛЕГОЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ.

3.1. Нейтрофилы и их морфофункциональная организация.

3.2. Влияние эндотоксинов на фагоцитарные реакции при бронхолегочных заболеваниях.

3.3. Роль апоптоза и некроза нейтрофилов в реактивных и деструктивных процессах

4. КОРРЕКЦИЯ ПРОЦЕССА ФАГОЦИТОЗА РАЗЛИЧНЫМИ ДОЗАМИ НИЗКОЭНЕРГЕТИЧЕСКОГО ГЕЛИЙ-НЕОНОВОГО ЛАЗЕРА.

5. ВЛИЯНИЕ АНТИОКСИДАНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА НЕЙТРОФИЛЫ ПРИ РАЗВИТИИ АНТИОКСИДАНТНОГО СТРЕССА.

6. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПО

ИСПОЛЬЗОВАНИЮ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфофункциональное исследование нейтрофилов в условиях эндотоксикоза"

Актуальность исследований. Созданное И. И. Мечниковым учение о фагоцитозе и высоко оценимое наукой, за последние десятилетия получило дальнейшее развитие, связанное с успехами молекулярной биологии. Большой вклад в углубление фагоцитарной теории внесли работы отечественных и зарубежных ученых - А. А.Богомольца, А. Д. Сперанского, А. Д. Адо, А. Н. Маянского, Р. И. Сепиашвили, Р. В. Петрова, Б. В. Пинегина, D. F. Bainton, J. Н. Brumell, N. Borregaard, Т. A. Sollner, М. Chignard, D. Pidard (1975 - 2006 гг.)

Иммуногистохимические, электронно-микроскопические, молекулярно-биологические методики позволили значительно расширить представления о фагоцитирующих клетках. Нейтрофилы обладают мощной бактерицидной системой, изучение которой постулировано открытием De Duve (1963) клеточных лизосом, обеспечивающих биохимические механизмы фагоцитоза. Большая роль принадлежит исследованиям, посвященным процессам гранулопоэза, функциям отдельных гранул нейтрофилов и изучению апоптоза в процессе фагоцитоза (Серов В. В., Пауков В. С., 1995; Маянский А. Н., 1995; 1997; Сосунов А. А., Кругляков П. П., 1996; Певницкий Л. А., 1996; Ярилин А. А., 1998; Набокина С. М., 2001; Пыцкий В. И., 2001; Адо А. Д., 2002; Авдеева М. Г., Шубич М. Г., 2003; Маянский А. Н., 2004; Bianchi S. М., Dockrell D. Н., Renshaw S. А. 2006; Moraes Т. J., Zurawska J. Н., Downey G. P., 2006).

Исследование реактивности нейтрофилов, ее причин, молекулярных механизмов относится к фундаментальным проблемам биологии клетки. Велико значение этой проблемы не только для биологии, но и для практической медицины, постановки правильного диагноза, контроля за эффективностью лечения, профилактики болезней. Изучение общебиологических закономерностей реализации повышения реактивности нейтрофилов, безусловно, является приоритетным направлением (Маянский А. Н., Пикуза О. И., 1993; Галанкин В. Н. и соавт., 1994; Sengelov Н. et al., 1995; Nabokina S. M. et al., 1997; Галкин А. А. и соавт., 1997; Белова Л. А., 1997; Бахов Н. И.,

2000; Хаитов Р. М., Пинегин Б. В., 2000; Герасимов И. Г., Калуцкая О. А., 2000; Долгушин И. И., Бухарин О. В., 2001; Jones Н. А., 2005; Louis R., Djukanovic R., 2006; Janardhan К. S. et al., 2006).

Проблема эндотоксикоза в настоящее время занимает одно из ведущих мест в развитии различных заболеваний (Киселева Р. Е., Кузьмичева JI. В., 1986; Альба Д. JL, 1994; Грызунов Ю. А., 1994; Малахова М. Я., 2000; Добротина Н. А., 2004; Кузьмичева Л. В., 2005; Федотова Г. Г., 2006). Синдром эндогенной интоксикации относится к числу наиболее распространенных. Его проявления, несмотря на различную этиологию, имеют общие патогенетические механизмы. С помощью количественного и качественного определения эндотоксинов детектируются соединения химической и биологической природы, обладающие мембранотропным действием. К настоящему времени накоплен обширный материал о структуре иммуно-компетентных клеток при различных заболеваниях. Однако, исследования по влиянию мембранотропных эндотоксинов на них, являются во многом фрагментарными и не дают полной картины морфофункциональных изменений. Практически отсутствует сравнительный анализ различных ультраструктурных особенностей лизосомального аппарата клетки в процессе фагоцитоза.

Наиболее общим и, вероятно, пусковым звеном в развитии эндотоксикоза при бронхолегочных заболеваниях является деструкция клеточных мембран, связанная с гипоксией. Накопление эндотоксинов свидетельствует о наличии воспалительного очага и предрасположенности к хронизации патологии. Комплекс токсических веществ, запускающих патологические процессы, характеризует степень и глубину дисфункции структур организма на клеточном уровне.

Реактивные свойства нейтрофилов в стадии апоптоза, эндотоксикоза, при действии низкоэнергетического гелий-неонового лазера (НЭГНЛ), применении лекарственных препаратов (димефосфона и мексидола) не изучены. Универсальность действия НЭГНЛ обусловлена влиянием на клеточный уровень регулирования и поддержания гомеостаза: изменение метаболической и энергетической активности клеточных структур. При возникающих нарушениях этих механизмов, являющихся истинной причиной многих заболеваний, НЭГНЛ корректирует стратегию адаптации организма на всех уровнях гомеостаза.

Внимание клиницистов привлекают работы фармакологов, теоретически и экспериментально обосновавших возможность безопасного и эффективного воздействия на первичные звенья воспалительного процесса препаратов с антиоксидантными, энергообеспечивающими, противогипоксическими свойствами (Смирнов Л. Д., 1992; Балашов В. П., 1994; Воронина Т. А. и соавт., 1995; Цибулькина В. Н.,1999; Инчина В. И., 2001; Esper А. М., Martin G. S., 2005; Nagata М., 2005).

Цель исследования - выяснение общих закономерностей морфофунк-ционального состояния нейтрофилов при бронхолегочных заболеваниях, а также проведение сравнительного анализа структурно-гистохимических особенностей фагоцитоза под действием эндогенной интоксикации.

Задачи исследования:

1. Изучить гистохимическими и иммунопатологическими методами нейтрофилы крови человека и влияние эндотоксинов на фагоцитарные реакции при бронхолегочных заболеваниях (бронхит, пневмония, бронхиальная астма).

2. Исследовать роль апоптоза и некроза нейтрофилов в реактивных и деструктивных процессах.

3. Изучить морфофункциональные изменения в нейтрофилах, характеризующиеся деструктивными процессами и их коррекция низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером.

4. Изучить структурно-функциональную организацию мембран нейтрофилов при бронхолегочных заболеваниях и коррекция их димефосфоном и мексидолом.

Научная новизна исследования. Впервые выявлены общебиологические закономерности морфологической и гистохимической организации нейтрофилов, выяснена роль лизосом в процессе фагоцитоза, а также митохондрий в процессах энергогенеза при эндотоксикозе и апоптозе. Гранулярные люминесцирующие клетки быстро реагируют на незначительные изменения в содержании эндогенных токсинов. Становление гистохимической активности в стимулированных нейтрофилах следует закономерной динамике - вначале продукт реакции находится в ядре, затем в мембранах эндоплазматического ретикулума, лизосомах, митохондриях и на плазматической мембране, о чем свидетельствует люминесцентно-гистохимический анализ. Установлено наличие среди нейтрофилов мелко- и крупногранулярных клеток, обладающих различной ферментативной активностью. Установлена взаимосвязь между активностью кислой фосфатазы и щелочной фосфатазы, а также кислой фосфатазы и миелопероксидазы под влиянием низкоэнергетического гелий-неонового лазера в процессе фагоцитоза. Впервые установлено влияние эндотоксинов при бронхолегочных заболеваниях на митохондрии нейтрофилов, которые сочетают хорошо известные метаболические функции с участием в регуляции апоптоза. Наиболее эффективным средством, оказывающим свое позитивное воздействие на нейтрофилы, является димефосфон. Препарат увеличивает общую антиоксидантную активность и значительно угнетает интенсивность перекисного окисления липидов, в результате чего происходит регенерация мембранного аппарата клетки. Впервые показано, что мексидол является ингибитором свободнорадикальных реакций, протекающих в нейтрофилах, изменяет структурно-функциональное состояние мембран, липид-белковые взаимосвязи, функции рецепторов и мембраносвязанных ферментов. Показана роль антиоксидантного стресса в деструктивных реакциях нейтрофилов, выражающаяся в изменении мембранного аппарата и гранулообразования при бронхолегочных заболеваниях, коррекция за счет стимуляции низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером и использования лекарственных препаратов. Впервые исследовано содержание биогенных аминов в крови и форменных элементах при бронхолегочных заболеваниях в развитии эндогенной интоксикации в острую фазу патологического процесса.

Теоретическая и практическая значимость исследования. Данная работа является фундаментальным исследованием, результаты которой существенно расширяют представления о структурной организации нейтрофилов в норме и выявляют общебиологические закономерности в процессе развития фагоцитоза, в связи с комплексным изучением динамики реактивных реакций, вызванных эндотоксинами мембранотропного действия и коррекции их НЭГНЛ и антиоксидантными препаратами.

Результаты исследований позволили углубить, расширить сведения о морфологических, ультраструктурных и биохимических характеристиках нейтрофильных лейкоцитов. Доказано влияние эндотоксинов на нейтрофилы в фазу обострения и ремиссии в различных этиологических группах заболеваний. В процессах деструкции нейтрофилов существенную роль играют продукты перекисного окисления липидов (ПОЛ). Впервые разработана технология влияния мембранотропных эндотоксинов на процесс фагоцитоза при бронхолегочных заболеваниях. Установлено, что наиболее эффективными для повышения реактивности нейтрофилов оказались дозы облучения НЭГНЛ 6,0 Дж/см2 и 18,0 Дж/см2. Разработан рост прогнозирования заболевания по альбумину. Полученные результаты используются в учебном процессе и практической медицине.

Положения, выносимые на защиту

1. Механизмы действия мембранотропных эндотоксинов на нейтрофилы в норме при различных формах бронхолегочных заболеваний.

2. Роль апоптоза и некроза нейтрофилов в реактивных и деструктивных процессах.

3. Характеристика терапевтического действия низкоэнергетического гелий-неонового лазера на нейтрофилы при эндотоксикозе.

4. Особенности действия лекарственных препаратов (димефосфона и мексидола) на нейтрофилы при развитии антиоксидантного стресса.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Федотова, Галина Геннадьевна

ВЫВОДЫ

1. Бронхолегочные заболевания характеризуются развитием эндогенной итоксикации, проявляющейся в увеличении количества циркулирующих в крови молекул средней массы, иммунных комплексов и продуктов перекисного окисления липидов; одновременно определяется повышение индекса токсичности по альбумину.

2. Для больных бронхолегочными заболеваниями (бронхит, пневмония, бронхиальная астма) в стадии обострения и ремиссии характерна недостаточная антиоксидантная активность в сочетании с высоким уровнем продуктов перекисного окисления липидов, что создает условия для рецидивирования хронического воспаления и указывает на активное участие нейтрофилов в патогенезе бронхолегочной патологии.

3. Морфологическая перестройка апоптирующих нейтрофилов сопровождается изменением мембранного аппарата, уменьшением числа азурофильных и специфических гранул, разрушением крист митохондрий, снижением иммунореактивности СЭ45+-клеток и повышением иммуно-реактивности С095+-клеток, коммутированных в направлении апоптоза. При некрозе происходит нарушение целостности плазматической мембраны, мембран цитоплазматических органелл и лизис ядра, что обусловливает выброс цитоплазматического содержимого в окружающее пространство.

4. Действие эндотоксинов на нейтрофилы определяется тяжестью течения бронхолегочных заболеваний. Наибольшие изменения касаются молекул средней массы, циркулирующих иммунных комплексов, перекисного окисления липидов и индекса токсичности. Дефицит общей концентрации альбумина и его связывающей способности при бронхолегочных заболеваниях приводит к снижению транспорта метаболитов различного происхождения и дезинтоксикационной функции белка, что способствует нарастанию эндогенной интоксикации.

5. Нарушение баланса биогенных аминов (гистамина, серотонина) в крови сочетается с увеличением уровня перекисного окисления липидов, повышением содержания в крови молекул средней массы и циркулирующих иммунных комплексов - эндотоксинов широкого спектра действия и может являться одним из критериев тяжести эндогенной интоксикации.

6. Механизм формирования клеточного ответа на воздействие низкоэнергетического гелий-неонового лазера находит свое проявление в начальной фазе развития реактивных изменений, связанных с изменением активности ферментов и структуры плазматических. мембран и включает в себя следующие моменты: молекулярные перестройки мембран - снижение уровня холестерина и коэффициента насыщенности жирных кислот, повышение доли фосфолипидов и снижение микровязкости; функциональную модификацию мембран - изменение липид-белковых взаимодействий и повышение трансмембранного потенциала; функциональную модификацию клеток -повышение фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа нейтрофилов.

7. Димефосфон и мексидол, обладая антиоксидантной активностью пролонгируют период функциональной активности нейтрофилов в условиях гипоксии in vitro. Клетки становятся более активными, что проявляется достоверным повышением нейтрофильной активности. Электронно-микроскопически это выражается в увеличении лизосомального аппарата и регенерацией митохондриальных крист. В ядре обнаруживается большое количество гетерохроматина.

Научно-практические предложения по использованию результатов исследования

1. Полученные данные о морфофункциональном состоянии лейкоцитов рекомендуются для использования в учебном процессе на биологических и медицинских факультетах высших учебных заведений по дисциплинам цитология, гистология, биохимия, физиология, молекулярная биология, анатомия, гематология, пульмонология, иммунология.

2. Данные о влиянии эндотоксинов на морфофункциональное состояние лейкоцитов при бронхолегочных заболеваниях могут быть использованы в клинической практике, как для диагностики, так и для профилактики. С этой целью рекомендуется ввести в комплекс препаратов базисной терапии антиоксидантные препараты - димефосфон и мексидол.

3. При лечении больных бронхолегочными заболеваниями необходимо проводить контроль за уровнем эндогенной интоксикации. Критическое состояние больных при инфекционных заболеваниях, сопровождается снижением содержания альбумина, его связывающей способности и эффективной концентрации, увеличением индекса токсичности. В связи с этим альбуминовые показатели рекомендуется использовать в качестве диагностического и прогностического теста.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Федотова, Галина Геннадьевна, Саранск

1. Абдулходжаев, 3. Я. Вторичные эндогенные токсины при бронхиальной астме / 3. А. Абдулходжаев, А. Я. Бронштейн // Лаб. дело. 1996. - № 1. -С. 35 -37.

2. Абросимов, В. Н. Воспаление и гиперреактивность дыхательных путей при бронхиальной астме / В. Н. Абросимов, Г. В. Порядин // Тер. архив. -1994.-№ 11.-С. 60-63.

3. Авдеева, М. Г. Патогенетические механизмы синдрома системного воспалительного ответа / М. Г. Авдеева, М. Г. Шубич // Клин. лаб. диагностика. 2003. - № 6. - С. 3 - 10.

4. Адаменко, Г. П. Кооперативное взаимодействие поли- и моно-нуклеарных фагоцитов крови человека: влияние совместного культивирования клеток на их хемилюминесценцию и секрецию миелопероксидазы /Г. П. Адаменко // Иммунология. 1993. - № 5. - С. 26 - 29.

5. Адо, А. Д. Патофизиология фагоцитов/А. Д. Адо. М.: Медицина, 1981.-263 с.

6. Адо, А. Д. Современное состояние учения о фагоцитозе / А. Д. Адо, А. Н. Маянский // Иммунология. 1983. - № 1. - С. 20 - 27.

7. Аксенова, О. Н. Изменение липидного состава перитонеальных макрофагов и их ядер при апоптозе и некрозе: автореф. дис. . канд. биол. наук / О. Н. Аксенова. Саранск, 2004. - 16 с.

8. Альберте, Б. Молекулярная биология клетки: в 3 т./ Б. Альберте, Д. Брей, Дж. Льюис и др. М.: Мир, 1994. - 504 с.

9. Андарханов, Б. В. Некоторые современные представления о биологической значимости перекисного окисления липидов и системах его регуляции / Б. В. Андарханов, Е. А. Лунина, Е. Г. Ленская // Вопр. мед. химии. 1990.-№3.- С. 130- 138.

10. Андреева, JI. И. Программированная клеточная гибель / JI. И. Андреева, JI. И. Иванова, М. В. Титова; под ред. В. С. Новикова. Спб., 1996. - С. 51 -71.

11. Анчикова, Л. И. К механизму антиоксидантного действия димефосфона /Л. И. Анчикова, И. X. Валеева, А. О. Поздняк // Казан, мед. журн. -1998.-№5.-С. 362-364.

12. Арбузов, А. Е. Химия и применение фосфорорганических соединений / А. Е. Арбузов. М.: Наука, 1972. - 618 с.

13. Артюков, О. П. Противоаритмическая активность мексидола в сочетании с некоторыми традиционными антиаритмиками: автореф. дис. . канд. мед. наук / О. П. Артюков. Саранск, 1997. - С. 22.

14. Асланиди, К. Б. О возможном участии ионного стресса в холодовой гибели клеток / К. Б. Асланиди, Г. В. Асланиди, Д. М. Вачадзе // Биол. мембраны. 1997. - Т. 14. - № 1. - С. 50 - 65.

15. Байбеков, И. М. Морфологические основы низкоинтенсивной лазеротерапии / И. М. Байбеков, А. X. Касымов, В. И. Козлов. Ташкент: Изд-во Ибн Сины, 1991.-223 с.

16. Бала, М. А. Иммунные комплексы в патогенезе бактериальных инфекций / М. А. Бала // Врачебное дело. 1989. - № 11. С. 5 - 13.

17. Балканова, Е. О. Бронхиальная астма и респираторная вирусная инфекция / Е. О. Балканова, А. Г. Чучалин // Рус. мед. журнал. 2001. - Т. 6. -№17.-С. 108-116.

18. Барабой, В. А. Перекисное окисление и стресс / В. А. Барабой, И. И. Брехман, В. Г. Голотин и др. СПб.: Наука, С.- Петербург, отд-ние, 1992. - 148 с.

19. Барышников, А. Ю. Иммунологические проблемы апоптоза / А. Ю. Барышников, Ю. В. Шишкин. М.: Эдиториал УРСС, 2002. - 320 с.

20. Бахов, Н. И. Концепция апоптоза / Н. И. Бахов, Ю. Ф. Майчук, А. В. Корнев // Иммунология. 1997. - № 3. - С. 62 - 64.

21. Бахов, Н. И. Механизмы защиты организма от вирусных инфекций: нейтрофильные лейкоциты / Н. И. Бахов, Ю. Ф. Майчук, А. В. Корнев // Успехи современной биологии. 2000. - Т. 120. - № 1. - С. 23 - 35.

22. Белова, JI. А. Биохимия процессов воспаления и поражения сосудов. Роль нейтрофилов / JI. А. Белова // Биохимия. 1997. - Т. 62. - Вып. 6. - С. 659 -668.

23. Бергельсон, JI. Д. Мембраны, молекулы, клетки / JI. Д. Бергельсон. -М.: Наука, 1982.- 183 с.

24. Бережная, Н. М. Нейтрофилы и иммунологический гомеостаз / Н. М. Бережная. Киев: Наук, думка, 1988. - 192 с.

25. Береговская, Н. Н. Математическая модель состояния мито-хондриальной ДНК для оценки эффективности биосинтеза энергии в клетках млекопитающих / Н. Н. Береговская, Р. Е. Майборода, А. Д. Скорбун // Биофизика. 1995. - № 1. - С. 98 - 105.

26. Бессонов, Б. И. Физико-химические основы трансэпителиального транспорта ионов натрия / Б. И. Бессонов, С. В. Буцук // АН СССР, Дальне-вост. отд-ние. М.: Наука, 1991.- 174 с.

27. Бобырев, В. Н. Антиоксиданты в клинической практике / В. Н. Бобырев, О. Н. Воскресенский // Тер. архив. 1989. - № 3. - С. 122 - 125.

28. Болдырев, А. А. Биологические мембраны и транспорт ионов / А. А. Болдырев. М.: Изд-во МГУ, 1985. - 208 с.

29. Болдырев, А. А. Введение в биомембранологию / А. А. Болдырев. -М.: Изд-во МГУ, 1990. 206 с.

30. Болдырев, А. А. Функциональная активность Na-K-АТФ-азы тканей в норме и при патологии / А. А. Болдырев // Укр. биохим. журн. 1992. - Т. 64. -№5.-С. 3-9.

31. Болевич, С. Роль свободнорадикальных процессов в патогенезе бронхиальной астмы / С. Болевич, И. Г. Даниляк, А. X. Коган // Пульмонология. -1995.-№ 1. С. 18 - 24.

32. Болевич, С. Новые доказательства включения активных форм кислорода в патогенезе бронхиальной астмы / С. Болевич, И. Г. Даниляк, А. X. Коган // Клин, медицина. 1997. - Т. 75. - № 8. - С. 34 - 36.

33. Брасюк, Д. JI. Модификация метода определения молекул средней массы / Д. JI. Брасюк // Клинич. лаб. диагностика. 1995. - № 1. - С. 18.

34. Брискин, Б. С. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на метаболические и репаративные процессы в организме / Б. С. Брискин, А. К. Полонский, И. М. Алиев // Клин, медицина. 1996.- № 1. - С. 54 - 55.

35. Буйлин, В. А. Низкоинтенсивные лазеры в терапии различных заболеваний / В. А. Буйлин, С. В. Москвин. М.: ТОО «Фирма «Техника», 2001.- 176 с.

36. Бурлакова, Е. Б. Модуляция перекисного окисления липидов биогенными аминами в модельных системах / Е. Б. Бурлакова, А. Е. Губарева // Вопр. мед. химии. 1992. - № 12. - С. 17 - 20.

37. Бякин, С. П. Антиоксидантный эффект фотомодификации крови и ее компонентов в лечении острых деструктивных заболеваний легких: автореф. дис. канд. мед. наук / С. П. Бякин, СПб, 1992. - С. 33.

38. Вавилова, JI. М. Система комплемента. Механизмы активации и регуляции, значение в биологии и медицине / JI. М. Вавилова, Т. В. Голосо-ва // Итоги науки и техники: серия «Иммунология». Т. 24. М.: ВИНИТИ, 1990.

39. Вагина, О. Н. Взаимосвязь перекисного окисления фосфолипидов и их гидролиза фосфолипазой D в модельных системах / О. Н. Вагина, М. В.

40. Замараева, С. В. Гевантмахер // Биохимия. 1995. - Т. 60. - № 10. - С. 1596 -1599.

41. Вагнер, В. К. Количественная оценка теста восстановления нитро-синего тетразолия / В. К. Вагнер, О. С. Насонкин, Н. Д. Борискина // Лаб. дело. 1989.-№ 12.-С. 32- 33.

42. Васильева, Г. И. Кооперативное взаимодействие моно- и поли-нуклеарных фагоцитов, опосредованное моно- и нейтрофилокинами / Г. И. Васильева, И. А. Иванова, С. Ю. Тюкавкина // Иммунология. 2000. - № 5. -С. 11-16.

43. Вельбри, С. К. Единовременная оценка уровня иммунных комплексов и иммуноглобулинов для характристики патологического процесса / С. К. Вельбри, А. Л. Лиллеорг, С. Л. Линдстрем // Лаб. дело. 1998. - № 5. С. 7 -11.

44. Веренинов, А. А. Ионный электрический и водный баланс в животной клетке. Система с активным транспортом катионов, Гольдмановскими каналами и симпортом типа Na'I^CI / А. А. Веренинов ст., А. А. Веренинов мл. // Цитология. 1991. -Т. 33.- № 11.-С. 4-17.

45. Визель, А. А. Клинико-фармакологический подход к этиотропной терапии острых пневмоний / А. А. Визель// Казан, мед. журнал. -1997. № 1. -С. 65 - 67.

46. Владимиров, Ю. А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран/ Ю. А. Владимиров // Биофизика. 1987. - Т. 32. - Вып. 5. - С. 830 - 844.

47. Владимиров, Ю. А. Свободные радикалы в биологических системах / Ю. А. Владимиров // Соросовский образоват. журн. 2000. - Т. 6. - № 12. - С. 13-19.

48. Владимиров, Ю. А. Нарушение барьерных свойств внутренней и наружной мембран митохондрий, некроз и апоптоз/ Ю. А. Владимиров // Биол. мембраны. 2002. - Т. 19. - № 5. - С. 356 - 377.

49. Владыко, А. С. «Средние молекулы» и проблема эндогенной интоксикации при критических состояниях различной этиологии / А. С.

50. Владыко, Э. Р. Левицкий // Анестезиология и реаниматология. 1987. - № 1. -С. 37-41.

51. Владыко, А. С. Диагностическое значение уровня молекул средней массы в крови при оценке тяжести эндотоксикоза / А. С. Владыко, Н. А. Беляков, А. И. Шугаев // Вестн. АМН. 1990. - № 8. - С. 126 - 129.

52. Волчегорский, И. А. Изменения антиокислительной активности сыворотки крови при воспалительной патологии / И. А. Волчегорский, Е. И. Львовская, М. И. Глузман и др. // Вопросы мед. химии. 1997. - Т. 43. - № 4. -С. 233 - 238.

53. Гаврилов, В. Б. Оценка интоксикации организма по нарушению баланса между накоплением и связыванием токсинов в плазме крови / В. Б. Гаврил ов, М. М. Бидула, Д. А. Фурманчук // Клин. лаб. диагностика. 1999. -№2.-С. 13-17.

54. Галанкин, В. Н. О состоянии нейтрофильных лейкоцитов крови больных гнойно-септическими заболеваниями / В. Н. Галанкин, В. П. Сапрыкин, А. М. Светухин // Арх. патологии. 1994. - Т. 56. - № 5. - С. 20 - 25.

55. Галкин, А. А. Действие активаторов на подвижность нейтрофилов / А. А. Галкин, Е. А. Туманов, Е. Н.Тимин // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1997. - Т. 124. - № 10. - С. 409 - 412.

56. Гамалея, Н. Ф. Биостимуляционный эффект лазерного облучения крови / Н. Ф. Гамалея, В. Я. Стадник, 3. М. Рудых // Низкоинтенсивные лазеры в эксперименте и клинике: сб. науч. тр. Владивосток: Изд-во Дальневосточного ун-та, 1991. - С. 48 - 64.

57. Гацура, В. В. Фармакологические агенты в экспериментальной медицине и биологии / В. В. Гацура, А. С. Саратиков. Томск, 1990. - 232 с.

58. Герасимов, И. Г. Кинетика реакции восстановления нитросинего тетразолия нейтрофилами крови человека / И. Г. Герасимов, О. А. Калуцкая // Цитология. 2000. - Т. 42. - № 2. - С. 160 - 165.

59. Гильмиярова, Ф. Н. Оценка метаболического эффекта экзогенной лактатдегидрогеназы в условиях in vivo / Ф. Н. Гильмиярова, В. М. Радомская, Б. С. Мирзаев // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1994. - Т. 117.-№5.- С. 480-481.

60. Глебов, Р. Н. Эндоцитоз и экзоцитоз / Р. Н. Глебов // Биохимия мембран. Кн. 2; под ред. А. А. Болдырева. М.: Высш. школа, 1987. - 95 с.

61. Гончарова, В. А. Содержание серотонина, катехоламинов и активность монооксидазы легких при их патологии / В. А. Гончарова // Вопросы мед. химии. 1983. - № 6. - С. 34 - 39.

62. Горбенко, Г. П. Взаимодействие 4-(п-диметиламиностерил)-1-метил-пиридиний-п-толуолсульфоната с липосомами: анализ спектра флуоресценции / Г. П. Горбенко, Т. С. Дюбко // Биофизика. 1996. - № 2. - С. 348 -354.

63. Гуськов, Е. П. Нестабильность генома соматических клеток как адаптивная норма / Е. П. Гуськов, Т. П. Шкурат // Успехи современной биологии. 1989. - Т. 108. - № 7. - С. 163 - 172.

64. Данилова, Е. Д. Эффекты мексидола при болевых синдромах / Е. Д. Данилова, В. Н. Графова, Т. А. Воронина // Эксперим. и клинич. фармакология. 1995. - Т. 58. - № 3. - С. 17 - 20.

65. Дворецкий, Л. И. Медикаментозная терапия обострений хронической обструктивной болезни легких / Л. И. Дворецкий // Инфекции и антимикробная терапия, 2005. - Т. 7. - № 1. - С. 5 -10.

66. Девяткина, Т. А. Протекторный эффект мексидола на процессы перекисного окисления липидов и гликопротеиды при гипокинезии / Т. А. Девяткина, Э. Г. Коваленко, Л. М. Тарасенко // Бюл. ВНЦ БАВ. М., 1992. - С. 35 -40.

67. Дедов, В. Н. Индукция неселективной проницаемости внутренней мембраны в деэнергизированных митохондриях / В. Н. Дедов, О. В. Демин, В. Я. Черняк // Биохимия. 1999. - Т. 64. - № 7. - С. 965 - 973.

68. Джафаров, Э. С. Структура и конформационные особенности сывороточного альбумина / Э. С. Джафаров. Баку: Элм, 1990. - 204 с.

69. Добрецов, Г. Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов / Г. Е. Добрецов. М.: Наука, 1989. - 274 с.

70. Добрецов, Г. Е. Альбумин сыворотки крови в клинической медицине / Г. Е. Добрецов, Ю. А. Грызунов. М.: Ириус, 1994. - 226 с.

71. Добротина, Н. А. Эндоинтоксикация организма человека / Н. А. Добротина, Т. В. Копытова. Н. Новгород, 2004. - 70 с.

72. Долгушин, И. И. Секреторные продукты нейтрофилов и иммунный ответ / И. И. Долгушин, А. В. Зурочка, А. В. Власов // Иммунология. -1990.-№3.-С. 35 -37.

73. Долгушин, И. И. Нейтрофилы и гомеостаз / И. И. Долгушин, О. В. Бухарин. Екатеринбург: УрО РАН, 2001. - 277 с.

74. Дюмаев, К. М. Антиоксиданты в профилактике и терапии патологий центральной нервной системы / К. М. Дюмаев, Т. А. Воронина, JI. Д. Смирнов. М.: Медицина, 1995. - 272 с.

75. Евдотиенко, Ю. В. Автоколебания трансмембранных потоков кальция в митохондриях и их возможное биологическое значение / Ю. В. Евдотиенко // Биол. мембраны. 2000. - Т. 17. - № 1. - С. 5 -17.

76. Елисеева, J1. С. Биологический эффект связывания серотонина с иммуноцитами / J1. С. Елисеева // Иммунология. 1998. - № 5. - С. 42 - 46.

77. Ершова, И. Б. Функциональная активность лейкоцитов и перекисное окисление липидов у больных корью, осложненной пневмонией / И. Б. Ершова // Иммунология. 1997. - № 6. - С. 59 - 60.

78. Зборовская, И. А. Антиоксидантная система организма, ее значение в метаболизме. Клинические аспекты / И. А. Зборовская, М. В. Банникова // Вестн. АМН. 1995. - № 6. - С. 53 - 59.

79. Земсков, В. М. Фагоцитоз: физиологические и молекулярные аспекты/ В. М. Земсков // Успехи современной биологии. 1984. - Т. 98. - Вып. 2. - С. 219-234.

80. Земсков, А. М. Иммунокоррекция при заболеваниях легких / А. М. Земсков, В. М. Земсков, В. И. Золоедов // Иммунология. 1998. - № 4. - С. 40 -45.

81. Зенков, Н. К. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах / Н. К. Зенков, Е. Б. Меньшикова // Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113. - Вып. 3. - С. 286 - 296.

82. Зиганшина, JT. Е. Влияние димефосфона на воспалительную реакцию / JT. Е. Зиганшина, И. А.Студенцова, И.В. Заиконникова // Фармакология и токсикология. 1988. - № 3. - С. 58 - 60.

83. Зиганшина, JT. Е. К характеристике флоготропной активности димефосфона / JT. Е. Зиганшина, И. А. Студенцова, А. У. Зиганшин // Фармакология и токсикология. 1990. - Т. 53. - № 4. - С. 317 - 319.

84. Зиганшина, JI. Е. Механизм действия димефосфона / JT. Е. Зиганшина, И. А. Студенцова, А. У. Зиганшин, И. X. Валеева // Эксперим. и клинич. фармакология. 1992. - Т. 55. - № 2. - С. 43 - 46.

85. Зиганшина, JT. Е. Хемилюминесценция первичного очага гнойной инфекции и изолированных нейтрофилов при воздействии димефосфона / JI. Е. Зиганшина, Е. С. Диковская, С. М. Белоцкий // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунологии. 1992. - № 2. - С. 54 - 57.

86. Игнатова, Г. JI. Состояние процессов перекисного окисления липидов при хроническом бронхите / Г. JI. Игнатова, И. А. Волчегорский, Э. Г. Волкова // Тер. архив. 1998. - Т. 70. - № 3. - С. 36 - 37.

87. Извекова, В. А. Липиды мембран и функции иммунокомпетентных клеток в норме и при патологии / В. А. Извекова // Успехи современной биологии. -1991. Т. 3. - Вып. 4. - С. 577 - 589.

88. Камышников, В. С. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика: справочник / В. С. Камышников. В 2 Т. 2-е изд. - Мн.: Интер-прессервис, 2003. - Т. 1. - 495 с.

89. Капустина, Г. М. Внутривенное лазерное облучение крови (ВЛОК) / Г. М. Капустина, С. В. Москвин, М. В. Титов // Медикал Маркет. 1996. - № 24.-С. 20-21.

90. Кауфман, О. Я. Лаброциты, базофильные и эозинофильные грануло-циты / О. Я. Кауфман // Воспаление: руководство для врачей / под ред. В. В. Серова, В. С. Паукова. М.: Медицина, 1995. - С. 115 -137.

91. Кауфман, О. Я. Макрофаги / О. Я. Кауфман, А. Б. Шехтер // Воспаление: руководство для врачей / под ред. В. В. Серова, В. С. Паукова. М.: Медицина, 1995. - С. 115 -137.

92. Кей, А. Б. Роль эозинофилов в физиологических и патологических процессах / А. Б. Кей // Последние достижения в клинической иммунологии / под ред. Р. Л. Томпсона. М.: Медицина, 1984. - С. 159 - 200.

93. Келейникова, Т. Т. Возможности коррекции синдрома метаболической дисфункции некоторыми производными 3-оксипиридина / Т. Т. Келейникова, В. И. Инчина, А. В. Зорькина // Человек и лекарство: тез. докл. 5-го национ. конгресса. Москва, 2000. - С. 574.

94. Кетлинский, С. А. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции воспаления и иммунитета / С. А. Кетлинский, Н. М. Калинина // Иммунология. 1995. - № 3. - С. 30 - 44.

95. Киселева, Р. Е. Влияние лазеротерапии на динамику биохимических показателей крови / Р. Е. Киселева, Л. С. Дорофеева, Н. В. Альба // Действиенизкоэнергетического лазерного излучения на кровь: тез. всесоюз. конф. -Киев, 1989.-С. 22-23.

96. Киселева, Р. Е. Альбумин сыворотки крови как диагностический и прогностический показатель / Р. Е. Киселева, Н. В. Альба, JT. В. Кузьмичева // Альбумин сыворотки крови в клинической медицине / под ред. Ю. А. Грызунова. М.: ГЭОТАР, 1998. - С. 382 - 385.

97. Киселева, Р. Е. Влияние гелий-неонового лазера на структурно-функциональное состояние лейкоцитов крови / Р. Е. Киселева, Н. А. Мельникова, Г. Г. Федотова // Морфология. 2000. - Т. 117. - № 3. - С. 57 - 58.

98. Киселева, Р. Е. Влияние эндотоксинов на иммунный статус больных бронхиальной астмой / Р. Е. Киселева, JT. В. Кузьмичева, В. И. Штырова // Астма. 2001. - Т. 2. - № 1. - С. 65.

99. Киселева, Р. Е. Мембранотропные эндотоксины в оценке патологических процессов / Р. Е. Киселева, В. А. Трофимов, Н. В. Альба // Лабораторное дело, организация и методы исследования: материалы всерос. науч.-практич. конф. Пенза, 2001. - С. 5 - 7.

100. Киселева, Р. Е. Биохимические аспекты эндотоксикоза / Р. Е. Киселева, Н. В. Альба, Л. В. Кузьмичева. Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2002. -100 с.

101. Киселева, Р. Е. Адаптационные возможности иммунокомпетентных клеток / Р. Е. Киселева, JI. В. Кузьмичева. Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2004.- 180 с.

102. Киселева, Р. Е. Апоптоз и его роль в ответе нейтрофилов / Р. Е. Киселева, Г. Г. Федотова // Современные наукоемкие технологии. 2005. - № 8. -С. 75 - 76.

103. Киселева, Р. Е. Механизмы действия серотонина при пневмонии / Р. Е. Киселева, Г. Г. Федотова // Морфологические ведомости. 2005. - № 3-4.-С. 45-47.

104. Киселева, Р. Е. Мембраномодифицирующее действие низкоэнергетического гелий-неонового лазера на лейкоциты периферической крови в пострадиационный период / Р. Е. Киселева, Г. Г.Федотова // Морфологические ведомости, 2006. № 1-2.- С. 124 - 126.

105. Киселева, Р. Е. Изменение активности НАД-, ФАД-дегидрогеназ и НАДФН-оксидаз при бронхолегочных заболеваниях / Р. Е. Киселева, Г. Г. Федотова, О. С. Новожилова // Морфологические ведомости, 2006. № 1-2. - С. 88 - 90.

106. Клебанов, Г. И. Изменение физического состояния мембран в процессе стимуляции полиморфноядерных лейкоцитов крови / Г. И. Клебанов, А. Г. Максина, М. В. Крейнина // Биол. мембраны. 1990. - № 3. - С.281 - 287.

107. Клебанов, Г. И. Антиоксидантная активность сыворотки крови/ Г. И. Клебанов, Ю. О. Теселкина, И. В. Бабанкова // Вестник РАМН. 1999. - № 2. - С. 15-22.

108. Крепе, Е. М. Липиды клеточных мембран / Е. М. Крепе.- Л.: Наука. Ленингр. отд-ние, 1981. 339 с.

109. Крыжановский, С. А. Клиническая фармакология лекарственных средств, применяемых для лечения бронхообструктивного синдрома / С. А.

110. Крыжановский // Клиническая фармакология. М.: Академия, 2003. - С. 281 -316.

111. Коган, А. X. Фагоцитзависимые кислородные свободнорадикальные механизмы аутоагрессии в патогенезе внутренних болезней / А. X. Коган // Вестник РАМН. 1999. - № 2. - С. 3 - 10.

112. Козлов, В. И. Основы лазерной физио- и рефлексотерапии / В. И. Козлов, В. А. Буйлин, И. Г. Самойлов.-Самара, Киев: Здоровь'я, 1993. 215 с.

113. Козлов, В. И. Фотостимуляция основа лазерной терапии/ В. И. Козлов // Использование лазеров для диагностики и лечения заболеваний: науч.- информ. сборник. Вып. 3. - М., 2001. - С. 5 -11.

114. Кокряков, В. Н. Биохимические основы антимикробной активности нейтрофильных гранулоцитов / В. Н. Кокряков // Клиническая морфология нейтрофильных гранулоцитов: сб. науч. тр.; под ред. В. Е. Пигаревского. JL, 1988.-С. 12-15.

115. Колесова, Н. Г. Измерение трансмембранного электрического потенциала с помощью флуоресцентного зонда ДСМ / Н. Г. Колесова, А. Р. Колпаков // Биофизика. -1991. Т. 36. Вып. 5. - С. 802 - 806.

116. Колесова, О. Е. Перекисное окисление липидов и методы определения продуктов липопероксидации в биологических средах / О. Е. Колесова, А. А. Маркин, Т. Н. Федорова // Лаб. дело. 1989. - № 7. - С. 540 - 546.

117. Колодкина, Л. А. Локомоторная и фагоцитарная функция нейтрофилов при острых и хронических бронхолегочных заболеваниях: автореф. дис. канд. мед. наук/Л. А. Колодкина. Спб., 1993. - 18 с.

118. Конев, С. В. Структурная лабильность биологических мембран и регуляторные процессы/ С. В. Конев. Минск: Наука и техника, 1987. - 265 с.

119. Константинова, Н. А. Иммунные комплексы и повреждение тканей / Н. А. Константинова. М.: Медицина, 1998. - 256 с.

120. Константинова, Н. А. Роль иммунных комплексов в реализации эффекторных функций компонентов комплемента / Н. А. Константинова, Р. В. Петров // Иммунология, 2001. - № 1. - С. 75 - 79.

121. Копьева, Т. Н. Полиморфноядерный лейкоцит: роль в развитии острого и хронического неспецифического воспаления в легких / Т. Н. Копьева, О. М. Амосова// Терапевтический архив. 1987. - № 3. - С. 142 - 145.

122. Корочкин, И. М. Механизмы терапевтической эффективности излучения гелий-неонового лазера / И. М. Корочкин, Е. В. Бабенко // Сов. медицина. 1990. - № 3. - С. 3 - 8.

123. Коткина, Т. И. Диагностическое значение исследования альбумина сыворотки крови / Т. И. Коткина, В. Н. Титов // Лаб. дело. 1991. - № 7. -С.6-11.

124. Котова, С. Л. Внутриклеточная регуляция взаимодействия гистамина с рецепторами в норме и при атопии / С. Л. Котова, Н. М. Бережная // Иммунология. 1992. - № 5. - С. 4 - 7.

125. Крюк, А. С. Терапевтическая эффективность низкоинтенсивного лазерного излучения /А. С. Крюк, В. А. Мостовников, И. В. Хохлов.- Минск: Наука и техника, 1986.- 231с.

126. Кубатиев, А. А. Функциональные особенности моноцитов больных бронхиальной астмой: "респираторный взрыв" и перекисное окисление липидов / А. А. Кубатиев, Т. С. Балашова, О. В. Фесенко // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1994. - № 12. - С. 585 - 588.

127. Кузьменко, И. В. Влияние а-токоферола и его аналогов на стабильность мембран митохондрий in vitro / И. В. Кузьменко, Е. П. Клименко С. М. Алексеев // Биологические мембраны. 1994. - Т. 11. - № 2. - С. 69 - 73.

128. Кузьмичева, Л. В. Морфологические и функциональные изменения лимфоцитов в процессе краткосрочной адаптации: автореф. дис. докт. биол. наук / Л. В. Кузьмичева. Саранск, 2005.- 42 с.

129. Курский, М. Д. Биохимические основы механизма действия серотонина / М. Д. Курский, Н. С. Бакшеев. Киев: Наукова думка, 1974. - 294 с.

130. Кучкина, Н. В. Роль ионтранспортирующих систем в активации «кислородного взрыва» нейтрофилов человека: влияние осмотичности среды /

131. Н. В. Кучкина, С. Н. Орлов, А. Г. Чучалин // Биол. мембраны. 1994. - № 2. -С. 174- 179.

132. Левицкий, Д. О. Кальций и биологические мембраны / Д. О. Левицкий. М.: Медицина, 1990. - 124 с.

133. Лопухин, Ю. М. Альбумин крови в клинической медицине / Ю. М. Лопухин, Г. Е. Добрецов. М.: ГЭОТАР, 1998. - 126 с.

134. Лопухин, Ю. М. Конформационные изменения молекулы альбумина: новый тип реакции на патологический процесс / Ю. М. Лопухин, Г. Е. Добрецов, Ю. А. Грызунов // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 2000. -Т. 130. -№ 7. - С. 4 - 8.

135. Луйк, А. И. Динамическая структура сывороточного альбумина при взаимодействии с низкомолекулярными токсичными агентами / А. И. Луйк // Вестн. АМН СССР. 1987. -№ 4. - С. 63 - 68.

136. Лукьянова, Л. Д. Особенности антитоксического действия мексидола, связанные с его специфическим влиянием на энергетический обмен / Л. Д. Лукьянова, В. Е. Романова // Химико-фармацевтич. журн. 1990. -№8.- С.9-11.

137. Лукьянова, Л. Д. Биоэнергетическая гипоксия: понятие, механизмы и способы коррекции / Л. Д. Лукьянова // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1997. - Т. 124. - № 9. с. 244 - 253.

138. Лушников, Е. Ф. Гибель клетки (апоптоз) / Е. Ф. Лушников, А. Ю. Абросимов. М.: Медицина, 2001. - 192 с.

139. Любовцева, Л. А. Функциональная активность аминосодержащих структур костного мозга, тимуса и крови при действии нейромедиаторов и антигенов/ Л. А. Любовцева. Чебоксары. - 1993. - 121 с.

140. Ляпина, С. А. Активность Na-K- и Са-АТФ-аз нейтрофильных гранулоцитов крови при воздействии in vitro низкоинтенсивным гелий-неоновым лазером: автореф. дис. канд. биол. наук / С. А. Ляпина. Саранск, 1998.- 18 с.

141. Мазинг, Ю. А. Нейтрофильные гранулоциты и система защиты организма / Ю. А. Мазинг // Арх. патологии. -1991. № 9. - С. 70 - 73.

142. Малахова, М. Я. Эндогенная интоксикация как отражение компенсаторной перестройки обменных процессов в организме / М. Я. Малахова // Эфферент. терапия. 2000. - № 4. - С. 3 -14.

143. Манько, В. М. Иммунокомпетентные клетки / В. М. Манько, Р. М. Хаитов // ВИНИТИ: Итоги науки и техники. М., 1987. - 240 с.

144. Мартиросов, С. М. Бионасосы роботы клетки? / С. М. Мартиросов. - М.: Радио и связь, 1981. - 144 с.

145. Маянский, А. Н. Реактивность нейтрофила / А. Н. Маянский, А. Н. Галиуллин. Казань: Изд-во Казанск. ун-та, 1984. - 158 с.

146. Маянский, А. Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А. Н. Маянский, Д. Н. Маянский. Новосибирск: Наука, 1989. - 344 с.

147. Маянский, А. Н. Патогенетические аспекты нейтрофилзависимых реакций / А. Н. Маянский // Патол. физиол. и экспер. терапия. 1989. - № 6. -С. 66 - 72.

148. Маянский, А. Н. Актуальные проблемы фагоцитоза / А. Н. Маянский // Моделирование и клиническая характеристика фагоцитарных реакций: респ. сб. науч. тр., под ред. А. Н. Маянского. Горьков. мед. ин-т; Горький, 1989. - С. 3-15.

149. Маянский, А. Н. Клинические аспекты фагоцитоза / А. Н. Маянский, О. И. Пикуза. Казань: Магариф, 1993. - 192 с.

150. Маянский, А. Н. Проблема управления фагоцитарными механизмами / А. Н. Маянский, Н. А. Невмятуллин, Н. А. Маянский // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1995. - № 3. - С. 21 - 26.

151. Маянский, A. H. Апоптоз: начало будущего / А. Н. Маянский, Н. А. Маянский, М. А. Абаджиди // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1997. - № 2. - С. 88 - 94.

152. Маянский, А. Н. Апоптоз нейтрофилов / А. Н.Маянский, Н. А. Маянский, М. И. Заславская и др. // Иммунология. 1999. - № 6. - С. 11 - 20.

153. Маянский, Д. Н. Хроническое воспаление / Д. Н. Маянский. М.: Медицина, 1991.-270 с.

154. Маянский, Н. А. Митохондрии нейтрофилов: особенности физиологии и значение в апоптозе / Н. А. Маянский // Иммунология. 2004. -№5.-С. 307-312.

155. Мельникова, Н. А. Влияние ультрафиолетового и лазерного излучения на структуру и функции мембран форменных элементов крови: автореф. дис. канд. биол. наук / Н. А. Мельникова. Саранск, 1994. - 21 с.

156. Меньшиков, В. В. Лабораторные методы исследования в клинике: справочник / В. В. Меньшиков, Л. Н. Делекторская, Р. П. Золотницкая. -М.: Медицина, 1987. 368 с.

157. Меньшикова, Е. Б. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов / Е. Б. Меньшикова, Н. К. Зенков // Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113. - Вып. 4. - С. 442 - 453.

158. Миллер, Ю. И. Связывание ксенобиотиков альбумином сыворотки крови / Ю. И. Миллер // Клин. лаб. диагностика. 1993. - № 1. - С. 34 - 40.

159. Минеев, В. Н. Мембранно-рецепторные нарушения при бронхиальной астме / В. Н. Минеев, Е. А. Шпетная, Е. Б. Шадрин // Терапевтический архив. 1999. - № 3. - С. 9 - 14.

160. Молина, JI. П. Роль эндогенной интоксикации в нарушении иммунного статуса при неспецифическом хроническом воспалении: автореф. дис. канд. мед. наук / JI. П. Молина. Саранск, 1998. - 18 с.

161. Москвин, С. В. Эффективность лазерной терапии / С. В. Москвин. -М.: НПЛЦ «Техника», 2003. 256 с.

162. Мостовников, В. А. О механизме биологической активности низкоинтенсивного лазерного света / В. А. Мостовников, И. В. Хохлов // Применение методов и средств лазерной техники в биологии и медицине: материалы Всесоюз. конф. Киев, 1981. - С. 213 - 214.

163. Мостовников, В. А. О молекулярно-физической основе биологической эффективности лазерного излучения / В. А. Мостовников // Применение лазерного излучения и магнитного поля в биологии и медицине. -Минск, 1982.-С. 57.

164. Набокина, С. М. Регулируемый экзоцитоз в нейтрофилах человека / С. М. Набокина. Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2001 а. - 85 с.

165. Набокина, С. М. Внутриклеточная локализация белка VAMP-1 в нейтрофилах человека / С. М. Набокина // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 2001 б. - Т. 131. - № 2. - С. 160 - 162.

166. Насыров, X. М. К прооксидантному действию медиаторов воспаления / X. М. Насыров // Патол. физиол. и эксперим. терапия. 1990. - № 5.-С. 12-14.

167. Нестерова, И. В. Модуляция функций нейтрофильных гранулоцитов низкоинтенсивным лазерным облучением / И. В. Нестерова, Н. В. Колесников, Г. А. Чудилова // Иммунология. 1994. - № 2. - С. 39 - 41.

168. Никитин, А. В. Особенности иммунного статуса больных хроническим бронхитом / А. В. Никитин, JI. В. Васильева // Терапевтический архив. 2000. - № 12.-С. 30-35.

169. Новиков, В. С. Программированная клеточная гибель / В. С. Новиков, Д. В. Булавин, В. Н. Цыган; под ред. В. С. Новикова. СПб., 1996. - С. 30 -50.

170. Оболенский, В. А. Уровень средних молекул в определении степени интоксикации у больных с гнойными ранами / В. А. Оболенский // Вестн. хирургии. 1993. - № 3. - С. 34 - 38.

171. Оковитый, С. В. Антигипоксанты / С. В. Оковитый, А. В. Смирнов // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2001. - Т. 64. - № 3. - С. 76 -80.

172. Орлов, С. Н. Механизмы активации транспорта ионов при изменении объема клетки / С. Н. Орлов, Т. Г. Гурло // Цитология. 1991. - Т. 33. -№11.-С. 101-109.

173. Пальмина, Н. П. Влияние а-токоферола в широком интервале концентраций на активность протеинкиназы С. Связь с пролиферацией и злокачественным ростом / Н. П. Пальмина, Е. JI. Мальцева, Н. В. Курнаков // Биохимия. 1994. - Т. 59. - Вып. 2. - С. 193 - 200.

174. Пальцев, М. А. Межклеточные взаимодействия / М. А. Пальцев, А. А. Иванов. М.: Медицина, 1995. - 224 с.

175. Пальцын, А. А. Полиморфноядерные лейкоциты / А. А. Пальцын // Воспаление: руководство для врачей. Под ред. В. В. Серова, В. С. Паукова. -М.: Медицина, 1995. С. 100 -115.

176. Пауков, В. С. Структурно-функциональная характеристика нейтрофильных лейкоцитов и их роль в формировании воспалительных и иммунныхпроцессов / В. С. Пауков, О. Я. Кауфман // Арх. патологии, 1983. - № 5. - С. 3-13.

177. Певницкий, JI. А. Программированная гибель клеток и апоптоз: значение для развития и функционирования иммунной системы / JI. А. Певницкий // Вестн. РАМН. 1996. - № 6. - С. 43 - 50.

178. Пентюк, А. А. Изучение новых функциональных свойств альбумина / А. А. Пентюк, Р. А. Мусин, Г. П. Марченко // Вопр. мед. химии. 1995. -№3.-С. 11 - 13.

179. Первушин, Ю. В. Комплекс лабораторных показателей для оценки эндогенной интоксикации / Ю. В. Первушин, Т. П. Бондарь // Актуальные вопросы клинической медицины: сб. науч. тр. Ставрополь, 1994. - С. 59 - 61.

180. Петров, Р. В. Клеточные мембраны и иммунитет / Р. В. Петров, Р. И. Атауллаханов. М.: Медицина, 1991. - 143 с.

181. Пигаревский, В. Е. О секреторной активности полиморфноядерных лейкоцитов / В. Е.Пигаревский // Арх. патологии. 1982. - № 5. - С. 3 - 12.

182. Пинегин, Б. В. Простой метод оценки хемотаксина и ингибиции хемотаксиса лейкоцитов периферической крови человека / Б. В. Пинегин, М. 3. Саидов, И. Г. Ольков // Иммунология. 1994. - № 1. - С. 58 - 59.

183. Поспелова, Р. А. Лейкоконцентрация в клинической практике / Р. А. Поспелова. М.: Медицина, 1973. - 88 с.

184. Потапнев, М. П. Цитокиновая сеть нейтрофилов при воспалении / М. П. Потапнев // Иммунология. 1995. - № 4. - С. 34 - 40.

185. Потапнев, М. П. Апоптоз клеток иммунной системы и его регуляция цитокинами / М. П. Потапнев // Иммунология. 2002. - № 4. - С. 237 - 243.

186. Прийма, О. Б. Неферментные катионные белки лейкоцитов периферической крови фактор неспецифической реакции организма на повреждения / О. Б. Прийма // Клин, медицина. - 1997. - Т. 75. - № 2. - С. 4 - 6.

187. Прозоровский, Н. С. Гистамин в реакции иммунитета / Н. С. Прозоровский, И. С. Гущин // Патол. физиол. и эксперим. терапия. 1983. № 4. -С. 82 - 88.

188. Путов, В. Н. Респираторно-вирусные инфекции и иммунная реактивность у больных с различными формами бронхита / В. Н. Путов, Н. В. Яковлева // Терапевтический архив. 1995. - № 3. - С. 49 - 52.

189. Пыцкий, В. И. Бронхиальная астма: определение, классификация, патогенез / В. И. Пыцкий //Рос. мед. журнал. 2001. - № 1. - С. 34 - 41.

190. Рабинович, Н. J1. К методике раздельного определения общего, тромбоцитарного и свободного серотонина в плазме крови / Н. J1. Рабинович, В. М. Макотченко, И. М. Козинец // Лаб. дело, 1985. - № 12. - С. 729 - 731.

191. Редчиц, Е. Г. Адгезия нейтрофилов: патогенетические и методические аспекты / Е. Г. Редчиц, В. О. Гузева // Лаб. дело. -1991. № 5. - С. 4 - 8.

192. Ройт, А. Иммунология // А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. М.: Мир, 2000. - 592 с.

193. Роос, Д. Кислородзависимая биоцидность фагоцитов: инициация, регуляция, эффекторы /Д. Роос // Нижегород. мед. журн. -1991. № 3. - С. 56 -62.

194. Салмова, В. С. Диагностическая значимость уровня молекул средней массы / В. С. Салмова // Российский вестн. перинатологии и педиатрии. -1994.-№2.-С.48.

195. Саркисов, Д. С. Новые данные о функциональной морфологии лейкоцитов при гнойно-септических процессах / Д. С. Саркисов, А. А. Пальцын // Арх. патологии. 1992. - № 1. - С. 3 - 8.

196. Серов, В. В. Иммунологические и иммунопатологические аспекты воспаления / В. В. Серов // Воспаление: руководство для врачей / под ред. В. В. Серова, В. С. Паукова.- М.: Медицина, 1995. С. 219 - 240.

197. Сернов, Л. Н. Анализ механизма антиангинального кардиопротек-тивного действия 3-оксипиридина / Л. Н.Сернов // Человек и лекарство: тез. докл. 2-го Национ. конгресса. М., 1995. - С. 328.

198. Сидорова, Л. Д. Реактивность фагоцитов у больных хроническим бронхитом / Л. Д. Сидорова, Д. Н. Маянский //Терапевтический архив. 1988. - № 3. - С. 48 - 52.

199. Сильвестров, В. П. Хронический бронхит. Пневмония / В. П. Сильвестров // Клин, медицина. 1990. - Т. 68. - № 10. - С. 105 -118.

200. Симоненков, А. П. Серотониновая недостаточность нейтрофилов /

201. A. П. Симоненков, В. Д. Федоров, А. А. Галкин // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1986. - Т. 122. - № 4. - С. 467 - 469.

202. Скулачев, В. П. Альтернативные функции клеточного дыхания /

203. B. П. Скулачев // Соросовский образоват. журн. 1998. - № 8. - С. 2 - 8.

204. Скулачев, В. П. Механизмы эшелонированной защиты от кислорода: митоптоз, апоптоз и феноптоз / В. П. Скулачев // Митохондрии, клетки и активные формы кислорода: материалы междунар. конф. Пущино, 2000.1. C. 140-141.

205. Смирнов, Л. Д. Молекулярные механизмы действия и актуальные направления медико-биологического применения эмоксипина и мексидола / Л. Д. Смирнов, К. М. Дюмаев // Бюл. ВНЦБАВ. М., 1992. - С. 9 -14.

206. Соловьев, Г. М. Неспецифические заболевания легких / Г. М. Соловьев, О. Ю. Шаенко // Клин, медицина. 2001. - № 8. - С. 40 - 44.

207. Струков, А. И. Клеточный скелет лейкоцитов в норме и патологии / А. И. Струков, В. С. Пауков, О. Я. Кауфман // Арх. патологии. 1983. -№6.-С. 81 -86.

208. Струков, А. И. Патологическая анатомия / А. И. Струков, В. В. Серов. 4-е изд. - М.: Медицина, 1995. - 688 с.

209. Стручков, В. А. ДНК-связанные липиды: состав и возможные функции / В. А. Стручков, Н. Б. Стражевская // Биохимия. 1993. - Т. 58. -Вып. 8.-С. 1154- 1174.

210. Студенцова, И. А. Изучение антиацидотической активности димефосфона / И. А.Студенцова // Казан, мед. журн. 1989. - № 2. - С. 118 -120.

211. Судьина, Г. Ф. Адгезивные рецепторы регуляторы респираторного взрыва в нейтрофилах / Г. Ф. Судьина, А. В. Татаринцев, А. А. Кашкин // Докл. АН СССР. - 1990. - Т. 313. - № 3. - С. 740 - 743.

212. Сыромятникова, Н. В. Метаболическая активность легких / Н. В.Сыромятникова, В. А. Гончарова, Т. В. Котенко. JL: Медицина. Ленингр. отд-ние, 1987. - 164 с.

213. Сысолятина, Н. А. Современные возможности фармакологической регуляции метаболизма при экспериментальных катехоламиновых некрозах/ Н. А. Сысолятина, В. В. Артамонова // Эксперим. и клинич. фармакология.1998.-Т. 61.-№ 1.-С. 70-73.

214. Терещенко, И. П. Роль системы нейтрофильных гранулоцитов в формировании особенностей развития патологического процесса: обзор / И. П. Терещенко, А. П. Кашулина // Патол. физиология и эксперим. терапия. -1993. -№ 4.-С. 56-60.

215. Титов, В. Н. Альбумин, транспорт насыщенных жирных кислот и метаболический стресс-синдром / В. Н.Титов // Клин. лаб. диагностика.1999. № 4. - С. 3 -11.

216. Тиунов, Л. А. Механизмы естественной детоксикации и антиоксидантной защиты / Л. А. Тиунов // Вестн. РАМН. 1995. - № 3. - С. 9 -13.

217. Тотолян, А. А. Клетки иммунной системы. Нейтрофилы / А. А. Тотолян, И. С. Фрейдлин. СПб.: Наука, 2000. - 231 с.

218. Троицкий, Р. В. Изменение структуры и изменчивость сывороточного альбумина в норме и при патологии / Р. В. Троицкий, Л. В. Лжицкий //Молекулярная биология. 1997. - № 12. - С. 14 -17.

219. Трофимов, В. А. Фосфолипидиый состав нервных проводников при действии физических и химических факторов: автореф. дис. . канд. биол. наук / В. А. Трофимов. Ленинград, 1990. - 16 с.

220. Трофимов, В. А. Биохимические методы исследования липидов в клинике / В. А. Трофимов, Р. 3. Аширов, А. П. Власов. Саранск: Изд-во Морд, ун-та, 2000. - 80 с.

221. Трошин, А. С. Распределение веществ между клеткой и средой / А. С. Трошин. Л.: Наука, 1985. - 192 с.

222. Тутельян А. В. Прайминг фагоцитов и его применение в системе оценки специфической активности иммунорегуляторных соединений / А. В. Тутельян, Г. И. Клебанов // Иммунология. 2004. - № 1. - С. 14 -16.

223. Уманский, М. А. Синдром эндогенной интоксикации / М. А. Уманс-кий, Л. Б. Пинчук, В. Г. Пинчук. Киев: Наук, думка, 1979. - 201 с.

224. Уманский, С. Р. Апоптоз: молекулярные и клеточные механизмы / С. Р. Уманский // Молекулярная биология. 1996. - Т. 30. - Вып. 3. -С. 484 - 502.

225. Федоровский, Н. М. Связывающая способность альбумина в оценке эндотоксимии / Н. М. Федоровский, К. С. Каперская, Д. В. Куренков // Вестник интенсивной терапии. -1998. № 4. - С. 21 - 23.

226. Федотова, Г. Г. Морфоцитохимическое исследование лейкоцитов периферической крови человека при действии гелий-неонового лазера: автореф. дис. канд. биол. наук / Г. Г. Федотова. Саранск, 1995. - 22 с.

227. Федотова, Г. Г. Митохондрии как инициаторное патогенетическое звено дистрофического процесса / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева // Современные наукоемкие технологии. 2005. - № 7. - С. 59 - 60.

228. Федотова, Г. Г. Изучение фагоцитирующих клеток, фотомодифици-рованных низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером / Г. Г. Федотова, Р. Е. Киселева // Морфологические ведомости. 2005. - № 3-4. - С. 163 - 165.

229. Хаитов, Р. М. Основные задачи клинической иммунологии по изучению функциональной активности фагоцитирующих клеток / Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин // Иммунология. 1995. - № 3. - С. 6 -10.

230. Хаитов, Р. М. Современные представления о защите организма от инфекции / Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин // Иммунология. 2000. - № 1. - С. 61 -64.

231. Хансон, К. П. Программированная клеточная гибель (апоптоз): молекулярные механизмы и роль в биологии и медицине / К. П. Хансон // Вопр. мед. химии. 1997. - Т. 43. - № 5. - С. 402 - 411.

232. Хафизьянова, P. X. Димефосфон вазоактивное средство при нарушении функций нервной системы / P. X. Хафизьянова, А. И. Студенцова,

233. B. И. Данилов // Казан, мед. журн. 1993. - № 1. - С. 8 -11.

234. Хитров, Н. К. Медиаторы воспаления / Н. К. Хитров // Воспаление: руководство для врачей. Под ред. В. В. Серова, В. С. Паукова. М.: Медицина, 1995.-С. 81 -100.

235. Хрущева, В. А. Антибактериальная терапия при обострении обструктивного бронхита / В. А. Хрущева // Клин, медицина. 2000. - № 6.1. C. 53 57.

236. Цибулькина, В. Н. Оптимизация клинического использования димефосфона на основе исследования ведущих механизмов его действия: • автореф. дис. докт. мед. наук / В. Н. Цибулькина. Казань, 1997. - С. 26.

237. Цибулькина, В. Н. Ведущие механизмы лечебного действия димефосфона / В. Н. Цибулькина // Казан, мед. журн. 1999. - № 5. - С. 120 - 122.

238. Чучалин, А. Г. Бронхиальная астма / А. Г. Чучалин. М.: Русский врач, 2001.- 144 с.

239. Шепелев, А. П. Роль процессов свободнорадикального окисления в патогенезе инфекционных болезней / А. П. Шепелев, И. В. Корниенко, А. В. Шестопалов // Вопр. мед. химии. 2000. - Т. 46. - № 2. - С. 110 -116.

240. Шехтер, А. Б. Воспаление и регенерация / А. Б. Шехтер, В. В. Серов // Воспаление: руководство для врачей. Под ред. В. В. Серова, В. С. Паукова. М.: Медицина, 1995. - С. 200 - 218.

241. Шишкина, Л. Н. Связь повреждения мембраны и ДНК с процессом перекисного окисления липидов при слабых воздействиях / JI. Н. Шишкина, М. А. Смотряева // Биофизика клетки. 2000. - Т. 45. - Вып. 5. - С. 844 - 852.

242. Шубич, М. Г. Медиаторные аспекты воспалительного процесса / М. Г. Шубич, М. Г. Авдеева // Арх. патологии. 1997.- Т. 59. - № 2. - С. 3 - 8.

243. Щербаков, В. И. Применение НСТ-теста для оценки чувствительности нейтрофилов к стимуляторам / В. И. Щербаков // Лаб. дело. 1989. - № 1.-С. 30-33.

244. Ялкут, С. И. Роль гипоксии в развитии бронхиальной астмы / С. И. Ялкут // Терапевтический архив. 1995. - Т. 67. - № 8. - С. 71 - 74.

245. Ярилин, А. А. Апоптоз и его место в иммунных процессах / А. А. Ярилин // Иммунология. 1996. - № 6. - С. 10 -13.

246. Ярилин, А. А. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме / А. А. Ярилин // Патол. физиол. и эксперим. терапия. -1998.-№2.-С. 38-48.

247. Arends, М. J. Apoptosis: Mechanims and roles in pathology / M. J. Arends, A. H. Wyllie // Int. Arch. Pathol. 1992. - Vol. 32. - P. 223 - 226.

248. Bainton, D. F. Selective abnormalities of azurophyl and specific granules of human neutrophilic leucjcytes / D. F. Bainton // Feder. Proc. 1987. - Vol. 40. -P. 1443 - 1450.

249. Bainton, D. F. Morphology of neutrophils, eosinophils and basophils / D. F. Bainton // Williams Hematology. 5th ed. 1995. - P. 753 - 765.

250. Balkwill, F. R. Tumor necrosis factor as in anticancer agebt / F. R. Balkwill, M. S. Naylor, S. Malik // Eur. J. Cancer. 1990. - Vol. 26. - P. 641 - 644.

251. Banerjee, A. N-ethylmaleimidesensitive factor acts at a prefusion ATP-dependent step in Ca -activated exocytosis/ A. Banerjee, V. A. Barry, B. R. Das-gupta et al. // J. Biol. Chem.- 1996. Vol. 271. - P. 20223 - 20226.

252. Belvisi, M. G. Regulation of inflammatory cell function by corticosteroids / M. G. Belvisi // Proc. Am Thorac Soc. 2004. - Vol. 1. - N. 3. - P. 207 - 214.

253. Bianchi, S. M. Granulocyte apoptosis in the pathogenesis and resolution of lung disease / S. M. Bianchi, D. H. Dockrell, S. A. Renshaw, I. Sabroe, M. K. Whyte // Clin. Sci. 2006. - Vol. 110. - N. 3. - P. 293 - 304.

254. Borregaard, N. The human neutrophil. Function and dysfunction / N. Borregaard // Eur. J. Haematol. 1988. - Vol. 41. - P. 401 - 413.

255. Borregaard, N. Human neutrophil granules and secretory vesicles / N. Borregaard, K. Lollike, L. Kjeldsen et al.// Eur. J. Haemotol. 1993. - Vol. 51. -P. 187- 198.

256. Borregaard, N. Current opinion about neutrophil granule physiology / N. Borregaard // Curr. Opin. Hematol. 1996. - Vol. 3. - P. 11 -15.

257. Boxer, L. Membrane bound lactoferin alters the surface properties of polymorphonuclear leukocytes / L. Boxer, R. Heek, H. Yang et al. // J. Clin. Invest.- 1982.-Vol. 70.-P. 1049- 1057.

258. Boxer, L. Neutrophil disorders: qualitative abnormalities of the neutrophil / L. Boxer // Williams Hematology. 5th ed. 1995. - P. 228 - 244.

259. Brumell, J. H. Subcellular distribution of dockingfusion proteins in neutrophils, secretory cells with multiple exocytic compartments / J. H. Brumell, A. Volchuk, H. Sengelov et al. //J. Immunol. 1995. - Vol. 155. - P. 5750 - 5759.

260. Caramori, G. Anti-inflammatory mechanisms of glucocorticoids targeting granulocytes / G. Caramori, I. Adcock // Curr. Drug. Targets. Inflamm. Allergy. -2005.-Vol. 4.-P. 455-463.

261. Chignard, M. Neutrofil and pathogen proteinases versus proteinas-activated receptor-2 lung epithelial cells: more terminators than activators / M. Chignard, D. Pidard // Cell. Mol. Biol. 2006. - Vol. 34. - N. 4. - P. 394 - 398.

262. Chin, А. С. Differential expression of transcripts from syb, a Drosophila melanogaster gene encoding VAMP (synaptobrevin) that is abundant in non-neuronal cells / A. C. Chin, R. W. Burgess, B. R. Wong et al.// Gene. 1993. - Vol. 131.-P. 175-181.

263. Clark, R. A. Two cytostatic components of the human neutrophil respiratory burst oxidase translocate to the plasma membrane during cell activation / R. A. Clark, B. D. Volpp, K. G. Leidal et al. // J. Clin. Invest. 1990. - Vol. 85. -P. 714-721.

264. Densen, P. Granulocytic phagocytes / P. Densen, W. R. Clark, W. M. Nauseff// Infectious Diseases. 5th ed. 1995. - P. 78 -101.

265. Dinerman, J. L., Metha J.L. Leukocyte dysfunction on organisms / J. L Dinerman, J. L. Metha J. L. //Amer. Coll. Cardiol. 1990. - Vol. 16. - P. 207 - 222.

266. Dougherty, J. J. Effects of vitamin E and selenium in vivo and acute copper toxicity / J. J. Dougherty, W. G. Hoekstra // Proc. Soc. Exp. Biol, and Med.- 1992.-Vol. 169.-P. 201 -208.

267. Donnelly, S. R. Annexins in the secretory pathway / S. R. Donnelly, S. E. Moss // Cell. Mol. Life Sci. 1997. - Vol.53. - P. 533 - 538.

268. Ernst, J. D. Annexin III translocates to the periphagosomal region when neutrophils ingest opsonized yeast / J. D. Ernst // J. Immunol. 1991. - Vol. 146. -P. 3110 - 3114.

269. Esper, A. M. Evolution of treatments for patients with acute lung injury / A. M. Esper, G. S. Martin // Expert. Opin. Investig. Drugs. 2005. - Vol. 14. - N. 5.- P. 633 645.

270. Fossati, G. The mitochondrial metwork of human neutrophils: role in chemotaxis, phagocytosis, respiratory burst activation, and commitment toapoptosis / G. Fossati, D. A. Moulding, D. G. Spiller et al. // J. Immunol. 2003. -Vol. 170.-P. 1964- 1972.

271. Fridman, W. Fc-receptors and immunoglobulin binding factors / W. Fridman // FASEB J. -1991. Vol. 5. - P. 2684 - 2689.

272. Gaboury, J. P. The role of oxygen free radicals in human disease processes / J. P. Gaboury, D. C. Anderson, P. Kubes // Amer. J. Phusiol. 1994. -Vol. 266.-P. 847-853.

273. Godin, C. Toxity of lipoperoxides in the rat / C. Godin // Cell. 1993. -Vol. 106.-P. 441 -451.

274. Hansbrough, J. F. Effect of E-selectin blockade on neutrophil sequestration in tissues and neutrophil oxidative burns in burned rats / J. F. Hansbrough, T. Wilkstrom, M. Braide et al. // Crit. Care Med. 1996. - Vol. 24. - N 8. -P. 1366- 1372.

275. Harwig, S. L. Characterization of defensin precursors in mature human neutrophils / S. L. Harwig, A. S. Park, R. I. Lehrer // Blood.- 1992. Vol. 79. - P. 1532- 1536.

276. Hughes, B. J. Recruitment of CD 1 lb/CD18 to the neutrophil surface and adherencedependent cell locomotion / B. J. Hughes, J. C. Hollers, E. Crockett-Torabi et al II J. Clin. Invest. 1992. - Vol. 90. - P. 1687.

277. Hoogerwerf, M. Complement fragments C3b and iC3b coupled to latex induce a respiratory burst in human neutrophile / M. Hoogerwerf, R. Weening, H. Erik et al. //Mol. Immunol. 1990. - Vol. 27. - P. 159 - 167.

278. Janardhan, K. S. Neutrophil depletion inhibits early and late monocyte/macrophage increase in lung inflammation / K. S. Janardhan, S. K. Sadhu, B. Singh // Front Biosci. 2006. - Vol. 11. - P. 1569 - 1576.

279. Jones, H. A. Inflammation imaging / H. A. Jones // Proc. Am Thorac Soc. 2005. - Vol. 2. - N. 6. - P. 545 - 548.

280. Keoung, К. M. The role of unsaturated lipids in membranes / К. M. Ke-oung // Biochemist. 1990. - Vol. 12. - P. 29.

281. Kerr, J. F. R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wideranging implications in tissue kinetics / J. F. R. Kerr, A. H. Wyllie, A. R. Cur-rie // Brit. J. Cancer. 1972. - Vol. 26. - P. 239 - 257.

282. Klebanoff, S. J. Oxygen metabolism and the toxic properties of phagocytes / S. Klebanoff// Ann. Intern. Med. 1980. - Vol. 93. - P. 480 - 489.

283. Klebanoff, S. J. Myeloperoxidase. Occurrence and biological function / S. J. Klebanoff7/ Peroxidases in Chemistry and biology. Boca raton. FL. -1991. P. 1-36.

284. Klebanoff, S. J. Antimicrobial mechanism of phagocytes: Abstr. State of Art Symp. 24th Congr. Soc. Hatmatol / S. J. Klebanoff// Brit. J. Haematol. 1992. -Vol. 82. - N 1. - P. 243-244.

285. Lacal, P. Intracellular location of T200 and Mol glycoproteins in human neutrophils / P. Lacal, R. Pulido, F. Sanches-Madrid et al. // J. Biol. Chem. -1988.-Vol. 263.-P. 9946-9951.

286. Li, S. H. Consensus repeat domains of E-selectin enhance ligand binding / S. H. Li, D. K. Burns, J. M. Rumberger // J. Biol. Chem. 1994. Vol. 269, N6. P. 4431 -4437.

287. Li, C. Ca -dependent and independent activities of neural and nonneural synaptotagmins / C. Li, B. Ullrich, J. Z. Zhang et al. // Nature. 1995. - Vol. 375. -P. 594 - 599.

288. Louis, R. Is the neutrophil a worthy target in severe astma and chronic obstructive pulmonary disease? / R. Louis, R. Djukanovic // Clin. Exp. Allergy. -2006. Vol. 36. - N. 5. - P. 563 - 567.

289. Maianski, N. A. Apoptosis of neutrophils / N. A. Maianski, A. N. Maianski, Kuijpers T. W., D. Roos // Acta Haematol. 2004. - Vol. 111. - P. 56 -66.

290. Martin, W. Reduction of neutrophilmediated injury to pulmonary endothelial cell by dapsone / W. Martin, D. Kachel // Amer. Rev. resp. Dis. 1985. -Vol. 131.-P. 544-547.

291. Martin, T. F. J. Stages of regulated exocytosis / T. F. J. Martin // Trends Cell Biol. 1997. - Vol. 7. - P. 271 - 276.

292. Matzner, Y. Subcellular localization of heparanase in human neutrophils / Y. Matzner, I. Vlodavsky, M. Bar-Ner et al. // J. Leukocyte Biol. -1992.-Vol. 51.-P. 519-524.

293. McMahon, H.T. Cellubrevin is a ubiquitous tetanus-toxin substrate homologous to a putative synaptic vesicle fusion protein / H. T. McMahon, Y.A. Ushkaryov, L. Edelmann et al. // Nature. 1993. - Vol. 364. - P. 346 - 349.

294. Meers, P. Annexin I interactions Wih human neutrophil specific granules: fusogenicity and coaggregation with plasma membrane vesicles / P. Meers, T. Mealy, A. I. Tauber // Biochim. Et Biophys. Acta. 1993. - Vol. 1147. - P. 177 -184.

295. Mollinedo, F. Mobilization of gelatinase-rich granules as a regulatory mechanism of early functional responses in human neutrophils / F. Mollinedo, R. Pulido, P. M. Lacal et al. // Scand. J. Immunol. -1991. Vol. 34. - P. 33 - 43.

296. Moraes, T. J. Neutrophil granule contents in the pathogenesis of lung injury / T. J. Moraes, J. H. Zurawska, G. P. Downey // Curr. Opin. Hematol. 2006. -Vol. 13.-N. 1.-P. 21 -27.

297. Morel, F. Human neutrophil gelatinase is a collagenase type IV / F. Morel, S. Berthier, M. Guillot et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1993. -Vol. 191.-P. 269-274.

298. Nabokina, S. M. Intracellular location of SNAP-25 in human neutro-phils / S. M. Nabokina, G. Egea, J. Blasi et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1997.-Vol. 239.-P. 592-597.

299. Nagata, M. Inflammatory cells and oxygen radicals / M. Nagata // Curr. Drug. Targets. Inflamm. Allergy. 2005. - Vol. 4. - P. 503 - 504.

300. Nakamura, M. Molecular cloning and expression of platelet-activating factor receptor from human leukocytes / M. Nakamura // J. Biol. Chem. 1991. -Vol. 266. - P. 20400.

301. Newmeyer, D. D. Mitochondria: releasing power for life and unleashing the machineries of death / D. D. Newmeyer, S. Ferguson-Miller // Cell. 2003. -Vol. 112.-P. 481 -490.

302. Ng, C. S. Inflammatory response to pulmonary ischemia-reperfusion injury / C. S. Ng, S. Wan, A. A. Arifi, A. P. Yim // Surg Today. 2006. - Vol. 36. -N.3.-P. 205-214.

303. Padmanahan, R. Protection against pulmonary oxygen toxicity in rats by lipesome-encapsulatet superoxide dismutase or catalase / R. Padmanahan, S. Gu-dapaty, J. Lienes // Clin. Res. 1982. - Vol. 30. - P. 750 - 759.

304. Raynal, P. Annexins: the problem of assessing the biological role for a gene family of multifunctional calcium- and phospholipids-binding proteins / P. Raynal, H. B. Pollard // Biochim. et Biophys. Acta. 1994. - Vol. 1197. - P. 63 -93.

305. Rice, W. G. Defensin-rich dense granules of human neutrophils / W. G. Rice, T. Ganz, J. M. Kinkate et al. // Blood. 1987. - Vol. 70. - P. 757 - 765.

306. Rossi, F. Mechanisms and functions of thee oxygen radicals producing respiration of phagocytes / F. Rossi, B. Delia, P. De Togni // Сотр. Immunol. -1985.-Vol. 8.-P. 187-204.

307. Schiavo, G. A possible docking and fusion particle for synaptic transmission / G. Schiavo, M. J. Gmachl, G. Stenbeck et al. // Nature. 1995. Vol. 378. P. 733 736.

308. Schmid-Schonbein, G.W. Leukocyte biophisics an invited reviem /

309. G. W. Schmid-Schonbein // Cell. Biophys. 1990. - Vol. 17. - P. 107 - 135.

310. Sengelov, H. Control of exocytosis in early neutrophil activation /

311. H. Sengelov, L. Kjeldsen, N. Borregaard // J. Immunol. 1993. - Vol. 150. - P. 1535 - 1543.

312. Sengelov, H. Mobilization of granules and secretory vesicles during in vivo exudation of human neutrophils / H. Sengelov, P. Follin, L. Kjeldsen et al. // J. Immunol. 1995. - Vol. 154. - P. 4157.

313. Shalaby, M. Activation of human polymorphonuclear neutrophil functions by interferon-gamma and tumor necrosis factors / M. Shalaby, B. Ag-garwal, E. Rinderknecht et al. // J. Immunol. 1985. - Vol. 135. - P. 2069 - 2074.

314. Smith, J. A. Neutrophils, Host defense, and inflammation: a double-edged sword / J. A. Smith // J. Leukocyte Biol. 1994. - Vol. 56. - P. 672 -686.

315. Smolen, J. E. Function of neutrophils / J. E. Smolen, L. A. Boxer // Williams Hematology. 5th ed. 1995. - P. 779 - 798.

316. Sollner, T. A protein assembly-disassrmbly pathway in vitro that correspond to sequential steps of synaptic vesicle docking, activation, and fusion / T. Sollner, M. K. Bennett, S. W. Whiteheart et al. // Cell. 1993. - Vol. 75.-P. 409-418.

317. Sumida, C. Role of fatty acids in signal transduction: modulators and messengers / C. Sumida, R. Graber // Prostagland. Leukotrienes and Essent. Fatty Acids. 1993. - Vol. 48. - P. 117 -122.

318. Tagaya, M. Syntaxin 1 (HPC-1) is associated with chromaffin granules / M. Tagaya, S. Toyonaga, M. Takahashi et al. // J. Biol. Chem. 1995. -Vol. 270.-P. 15930- 15933.

319. Thickett, D. R. Pulmonary manifestation of anti-neutrophil cytoplasmic antibody (ANCA)-positive vasculitis / D. R. Thickett, A. G. Richter, N. Nathani, G. D. Perkins, L. Harper // Rheumatology. 2006. - Vol. 45. - N. 3. - P. 261 - 268.

320. Wheeler, M. B. Characterization of SNARE Protein expression in J3 cell lines and pancreatic islets / M. B. Wheeler, L. Sheu, M. Ghai et al. // Endocrinology. 1996. - Vol. 137. - P. 1340 - 1348.

321. Whiteheart, S. W. SNAPs and NSF: general members of the fusion apparatus / S. W. Whiteheart, E. W. Kubalek // Trends Cell Bioi. 1995. -Vol. 5. - P. 64 - 68.

322. Wild, C. G. Characterization of two azurophil granule protease with active-site homology to neytrophil elastase / C. G. Wild, J. L. Snable, J. E. Griffith, R. W. Scott// J. Cell. Chem. 1990. - Vol. 265. - P. 2038 - 2043.

323. Wilkinson, P. Neutrophil accumulation on immunecomplex-coated substrate in vitro / P. Wilkinson, J. Lackie // Agents and actions. 1985. - Vol. 16. -P. 46-47.

324. Zaks, W. J. Ca2+-dependent annexin self-association on membrane surfaces / W. J. Zaks, С. E. Creutz // Biochemistry. -1991. Vol. 30. - P. 9607 - 9615.

325. Zimmerberg, J. Mechanisms of membrane fusion / J. Zimmerberg, S. S. Vogel, L. V. Chernomordik //Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 1993. -Vol. 22. - P. 433 - 466.