Функциональное состояние нейтрофильных лейкоцитов периферической крови и асцитической жидкости при раке яичников

Абакумова, Татьяна Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Функциональное состояние нейтрофильных лейкоцитов периферической крови и асцитической жидкости при раке яичников
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Функциональное состояние нейтрофильных лейкоцитов периферической крови и асцитической жидкости при раке яичников"

На правах рукописи

Абакумова Татьяна Владимировна

ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И АСЦИТИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ ПРИ РАКЕ ЯИЧНИКОВ

03.00.13 - физиология 16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

□03481458

Ульяновк-2009

003481458

Работа выполнена на кафедре физиологии и патофизиологии в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Ульяновский государственный университет

Научные руководители:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор биологических наук, профессор Генинг Татьяна Петровна кандидат медицинских наук Антонеева Инна Ивановна доктор биологических наук, профессор Напалкова Светлана Михайловна доктор биологических наук, профессор Любин Николай Александрович Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Самарский государственный университет

Защита диссертации состоится » _ 2009г. в /^АЗО часов на заседании

диссертационного совета Д 212.278.07 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Ульяновский государственный университет по адресу: ул. Набережная реки Свияги,106, корпус 1, аудитория 703.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ульяновского государственного университета, а с авторефератом - на сайге ВУЗа http://www.uni.ulsu.ru

Отзывы на автореферат направлять по адресу: 432000, г. Ульяновск, ул.Л.Толстого,42, Ульяновский государственный университет, управление научных исследований Автореферат разослан «У^ » г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент

С. В. Пантелеев

Общая характеристика работы

Актуальность работы. Результаты экспериментальных и клинических исследований свидетельствуют о связи нейтрофилов с патогенезом злокачественного роста [Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001]. Наблюдаемые в процессе опухолевого роста изменения со стороны гранулоцитарного звена лейкоцитов периферической крови можно с равной степенью вероятности рассматривать как результат системного действия опухоли на организм, так и в качестве компонента самого процесса необластомогенеза. Наблюдаемые сдвиги могут бьггь также интерпретированы и как результат мобилизации механизмов противоопухолевой резистентности [Шаталин Ю.В., 2008].

По современным данным нейтрофильные лейкоциты, подвергаясь каскадным влияниям различных цитокинов, способны изменять свой количественный и субпопуляционный состав, перестраивать свою функциональную активность, секрегировать многочисленные ферменты, медиаторы (в том числе и цитокины), активные формы кислорода, чтобы в конечном итоге реализовать свой физиологический потенциал - фагоцитоз и киллинг, уничтожая вирусы, бактерии, аллергены, неопластические клетки [Антонеева И.И., 2007; Нестерова И.В., Колесникова Н.В., 1999; Romani L. et al., 1997; Segal A.W., 2005]. Нейтрофилы, мигрируя в очаг развития опухоли, оказывают циголитическое и цитотоксическое действие [Блиндарь В.Н., Зубрихина Г.Н., 2002; Swann J.B., 2007].

По данным литературы [Поцелуева М.М. с соавт., 2005], при прогрессировании неоплазмы наблюдается одновременное увеличение количества активированных нейтрофильпых лейкоцитов в периферической крови. При этом роль микрофагов в прогрессировании неоплазмы остается неизвестной, так как выбрасываемые нейтрофильными гранулоцитами во внеклеточную среду - плазму крови и асцит [Baskic D, 2003, Kondera-Anasz Z. et al 2004], активные формы кислорода и лизосомальные ферменты оказывают повреждающее действие не только на опухолевые клетки, но и участвуют в мутагенезе, повреждая белки, нуклеиновые кислоты нормальных клеток организма, способствуя при этом пролиферации опухолевых клеток [Шаталин Ю.В., 2008; Zhang Q. et al., 1998; Sapone A. et al., 2003; De Larco J.E. et al., 2004]. В связи с вышеизложенным представляется актуальным исследование функционального состояния нейтрофилов асцитической жидкости (в зоне контакта эффекторных клеток и опухолевых клеток), а также периферической крови на поздних стадиях прогрессирования рака яичников.

Основные задачи исследования:

1. Изучить динамику показателей кислородзависимого и анаэробного метаболизма нейтрофилов асцигической жидкости и периферической крови крыс в процессе роста асцитной опухоли яичников.

2. Оценить фагоцитарную активность, кислородзависимый и анаэробный метаболизм нейтрофильных гранулоцитов асцигической жидкости и периферической крови женщин на поздних стадиях развития рака яичников.

3. Оценить рецепторный статус нейтрофильный гранулоцитов асцитической жидкости и периферической крови при раке яичников.

4. Определить уровень провоспалительных цитокинов асцигической жидкости и периферической крови женщин при раке яичников.

Научная новизна.

Впервые получены данные об изменении функционального состояния нейтрофилов асцитической жидкости и периферической крови женщин при раке яичников, а также о количестве и состоянии микрофагов асцитической жидкости и периферической крови крыс на разных стадиях опухолевого роста. Изучен рецепторный статус микрофагов асцитической жидкости при раке яичников. Также, впервые, оценен уровень цитокинов (1Ь-1Р, Т№-а, 1Ш-у) в асцитической жидкости и периферической крови женщин на поздних стадиях развития рака яичников и женщин-доноров. Установлены корреляционные связи уровня кислородзависимого и анаэробного метаболизма, а также фагоцитарной активности со стадией опухолевого процесса на модели прогрессирования асцитной опухоли яичников у крыс.

Научно-практическая значимость. Данные, полученные в результате оценки функционального состояния нейтрофильных лейкоцитов, их рецегггорного статуса и уровня цитокинов в периферической крови и асцитической жидкости на поздних этапах прогрессирования неоплазмы, могут быть использованы в патофизиологии, теоретической и практической онкогинекологии при разработке схем диагностики и терапии прогрессирующего рака яичников.

Положения, выносимые на защиту:

1. Функциональное состояние нейтрофилов периферической крови крыс зависит от стадии роста экспериментальной опухоли. При ее прогрессировании в нейтрофилах снижается фагоцитарная активность нейтрофилов. При этом в асцитической жидкости снижается доля активных нейтрофилов, но усиливается в последних миелопероксидазный кислородзависимый метаболизм и уровень кислой фосфатазы.

2. На поздних стадиях развития рака яичников у женщин в периферической крови увеличивается абсолютное количество нейгрофилов, способных продуцировать активные формы кислорода, но с низкой активностью ферментов микробицидных систем. В асцитической жидкости при переходе от III к IV клинической стадии снижается количество микрофагов, но увеличивается их АФК-генерирующая способность.

3. Прогрессирование рака яичников сопровождается снижением в периферической крови количества CD15+, CDlla+ нейтрофилов при раке яичников, способных к адгезии, а также CD95+ нейгрофилов, готовых к апоптозу. В асцитической жидкости увеличивается количество нейтрофилов, экспрессирующих CDlla, и снижается CD11Ь+ нейтрофилов.

4. Терминальные стадии рака яичников характеризуются разнонаправленным изменением уровня провоспалительных цитокинов (IL-1[5, TNF-a) в периферической крови и асцитической жидкости в клинике.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на VI съезде физиологов Казахстана с международным участием (Караганда, 2007), VIII Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации» (Москва, 2007), III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (Новосибирск, 2007), Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека» (Ульяновск, 2007), Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы физиологии, физического воспитания и спорта» (Ульяновск, 20008), II Международной научной конференции молодых ученых-медиков и I Международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине» (Курск, 2008), Международной научно-практической конференции «Современные проблемы экологической физиологии» (Алматы, 2008), IX Международном конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2008), II Съезде физиологов СНГ (Кишинев, 2008), VI Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 2008), I Всероссийской молодежной научной конференции «Молодежь и наука на Севере» (Сыктывкар, 2008), VIII Молодежной научной конференции «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике» (Сыктывкар, 2009), III Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека» (Ульяновск, 2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 22 научные работы, из них 6 - в изданиях, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 117 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Работа содержит 41 рисунок и 8 таблиц. Список литературы включает 242 источника, из которых 136 иностранных авторов.

Материал и методы исследования

Объектом исследования явились нейтрофилы (Нф) периферической крови и асцитической жидкости женщин в возрасте 31-79 лет при раке яичников III-IV клинической стадии по FIGO. Контрольную группу составляли практически здоровые женщины (30-60 лет). Группу активного контроля для определения цитокинов в асцитической жидкости составили пациенты с нераковым асцитом.

Экспериментальная модель асцитной опухоли яичников (АОЯ) (банк штаммов РОНЦ им Н.Н.Блохина (г.Москва), была воспроизведена на беспородных половозрелых самках крыс в возрасте 3 мес. массой 150 гр, путем перевивки асцита со средой 199 (1:1). Периферическая кровь и асцитическая жидкости отбирались под эфирным наркозом на 5-е (логарифмическая стадия) и 14-е сутки (терминальная стадия) после перевивки АОЯ.

Из периферической крови с гепарином (20ЕД/мл) [Кондратьева И.А., Самуилова В.Д., 2001] и осадка асцитической жидкости были изготовлены на предварительно обезжиренных стеклах мазки по стандартной методике [Бакшеев Н.С., 1977].

Цитохимические методы исследования. Проводили цитохимическое определение активности миелопероксидазы (МПО) с бензидином [Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001]. Определяли долю активных нейтрофилов (ДАН), продуцирующие активные формы кислорода в спонтанном варианте НСТ-теста [Карпищенко А.И., 1999; Земсков В.М., 1988]. Активность катионных белков (КБ) Нф проводили по методу М.Г.Шубича (1974) с бромфеноловым синим [Шубич М.Г., 1974].

Для цитохимического выявления кислой фосфатазы (КФ) применяли метод азосочетания по методу Burstone и Li с соавт. (1970) [Карпищенко А.И., 1999; Шубич М.Г., Нестерова И.В., 1980]. Для цитохимического определения активности ЩФ использовали метод азосочетания по Rutenburg с соавт. (1965) [Шубич М.Г., Нагоев Б.С., 1980]. В каждом мазке подсчитывали 100 или 50 Нф, среди которых определяли процент клеток, содержащих отложения соответствующего фермента и подсчитывали средний цитохимический коэффициент по формуле [Рудик Д.В., Тихомирова Е.И., 2006]:

Для определения фагоцитарной активности применяли стандартную методику с использованием дрожжей [Хейхоу Ф.Г.Дж., Квалигино Д., 1983]. Вычисляли следующие показатели фагоцитоза: фагоцитарное число (ФЧ) по Райту - среднее число захваченных одним фагоцитом частиц, и фагоцитарный индекс (ФИ) по Гамбургеру - процент фагоцитов, принимающих участие в фагоцитозе к общему числу фагоцитов [Медведев А.Н., Чаленко В.В., 1991].

Иммунологические методы. Иммуиофлуоресцентный метод основан на использовании моноклональных антител (МКА), конъюгированных с флуоресцеинизотиоционатом (ФИТЦ). На клеточной поверхности Нф имеются специфические антигенные детерминанты (дифференцировочные и активационные антигены), позволяющие выявить субпопуляцию этих клеток периферической крови и асцитической жидкости женщин с использованием МКА производства ООО «Сорбент» (г.Москва): CDlla, CDllb, CD15, CD95, меченых ФИТЦ. Регистрацию результатов производили визуально под флуоресцентным микроскопом (х700) с иммерсией.

Определение содержания цитокинов (IL-ip ,TNF-a, IFN-y).B сыворотке и асцитической жидкости проводили с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) с коммерческими тест-систсмами на основе МКА к исследуемым цитокинам (ООО «Цитокил», г.Санкт-Пегербург). Эти тест-системы основаны на «сэндвич»-методе твердофазного ИФА с применением в качестве индикаторного фермента (метки на антителах) пероксидазы хрена [Нго Т., Lenhoff G., 1990].

Статистическая обработка. Для выявления различий между данными, полученными в экспериментах и контрольных группах, а также результатов в зависимости от стадии развития опухоли применяли U-критерий Манна-Уитни. Статистически достоверными считались данные при р<0,05. Для выявления взаимосвязи между компонентами бактерицидных систем нейтрофилов был проведен корреляционный анализ полученных данных. Коэффициент корреляции Спирмена (г) рассчитывали с помощью компьютерной программы математического анализа "Stata v.6.0".

Результаты исследования и их обсуждение

Оценка функционального состояния нейтрофилов периферической крови и асцитической жидкости у крыс с перевиваемой асцитной опухолью яичников.

По мнению ряда авторов [Шаталин Ю.В., 2008; Enblad G. et al., 2007] развитие опухоли сопровождается увеличением нейтрофилов в периферической крови и увеличением миграции лейкоцитов в зону роста опухоли.

Полученные в эксперименте данные свидетельствуют о повышении абсолютного количества лейкоцитов и Нф в периферической крови, что согласуется с результатами В.С.Лавровой с соавт. (1992), а также снижении их в асцитической жидкости в ходе прогрессирования АОЯ крыс (табл.1). Увеличение Нф в крови может свидетельствовать об усилении иммунной реакции в процессе развития опухоли [Enblad G. et al., 2007]. Это может быть результатом увеличения уровня гематопоэтических факторов роста G-CSF или GM-CSF, которые также могут продуцироваться опухолевыми клетками [Чердынцева Н.В., 1989], нарастания времени транзита Нф в крови [Терещенко И.П., Кашулина А.П., 1993] и укорочения времени пребывания их в костном мозге [Лаврова B.C. с соавт., 1992]. Повышение продукции простагландина Е в процессе опухолевого роста также оказывает стимулирующее влияние на колониеобразующие единицы гранулоцитарно-макрофагального ростка [Терещенко И.П., Кашулина А.П., 1993]. Однако, в функциональном состоянии Нф наблюдаются разнонаправленные изменения.

Clark R.A. констатировал, что киллерный эффект Нф обусловлен секрецией МПО и Н2О2 [Мацнер Я., 1993]. Эти соединения в сочетании с внеклеточными галогенидами образуют реакционноспособные оксиданты, которые и повреждают клетки-мишени [Блиндарь В.Н., Зубрихина Г.Н., 2005]. Определение МПО позволяет судить о кислородзависимой бактерицидной активности Нф. Авторами отмечено увеличение уровня активности МПО в периферической крови животных-опухоленосителей [Лаврова B.C. с соавт., 1992]. Данные об активности данного фермента в Нф АЖ в доступной литературе не обнаружено. В результате наших исследованиях установлено, что уровень активности МПО Нф асцитической жидкости на терминальной стадии статистически значимо выше, чем на логарифмической стадии (табл.1). Возрастание активности МПО может отражать как противораковую активность Нф, так и их неспецифическую стимуляцию при воспалительной реакции, сопровождающей канцерогенез [Mosczynski Р., 1983]. Также обнаружена сильная корреляционная связь МПО микрофагов АЖ со стадией опухолевого роста (г=0,75).

Уровень активности МПО Нф периферической крови на ранней и поздней стадиях прогрессирования асцитной ОЯ у крыс статистически значимо не отличаются и статистически значимо ниже уровня фермента в Нф крови здоровых крыс. Существует мнение, что уменьшение уровня МПО в Нф периферической крови на поздних стадиях опухолевого роста может рассматриваться как следствие снижения способности к завершенному фагоцитозу [Герасимов И.Г., 2004].

Таблица 1

Показатели функциональной активности Нф периферической крови и АЖ крыс на разных стадиях прогрессирования АОЯ

\ipyiina показатель АЖ Кровь

Ранняя стадия АОЯ Поздняя стадия АОЯ Интакгные животные Ранняя стадия АОЯ Поздняя стадия АОЯ

п М±ш п М±ш п М±ш п М±т п М±ш

Количество Lei х107л 12 14,3±2,05 11 8,4±0,4) * 7 9,5±2,28 7 8,9±1,67' 8 22,4+2,41*'

Количество Нф х 10'/л 11 5,0±0,10 11 1,6±0,04* 7 1,5±0,07 7 3,9±0,1 Г 8 7,3±0,03*'

Количество Нф, % 11 35,0±4,54 12 19,2±7,94* 10 16,1 ±2,82 12 44,1 ±6,08' 8 32,7±0,92'

Активность МПО, СЦК 15 1,3±0,08 23 2,2±0,09' И 2,0±0,15 16 1,5±0,12* 34 1,7±0,08*

Уровень КБ, СЦК 15 1,5±0,01 21 0,9±0,06' 11 1,1 ±0,08 16 1,4±0,08* 34 1,0±0,06'

Активность КФ, СЦК 11 1,3±0,04 23 1,4±0,08 10 1,0±0,09 13 0,9±0,04' 31 1,3±0,05*

Активность ЩФ, СЦК И 1,4±0,06 23 1,4±0,05 10 0,4±0,03 13 1,3±0,05* 31 1,2±0,06*

ДАН, % 13 66,5±6,51 13 40,7±2,57' 9 7,3±1,59 18 49,0±4,53* 29 49,2±4,08*

ФИ, % 15 22,3±5,37 22 18,3±3,59 10 81,3+2,85 14 19,1±5,54* 23 42,7±5,85'*

ФЧ, ус.ед. 15 1,1 ±0,07 22 1,4±0,11' 10 1,7+0,11 14 1,2±0,06* 23 1,4±0,06'*

Примечание: * - данные статистически значимо отличаются от аналогичных показателей на предыдущей стадии (р<0,05);

' — данные статистически значимо отличаются от соответствующих показателей у интактных животных (р<0,05).

Спонтанный вариант НСТ-теста характеризует степень «функционального раздражения» Нф in vivo, и основан па поглощении фагоцитами нитросинего тетразолия (НСТ) из среды с последующим его восстановлением внутри клетки до формазана. При контакте с чужеродной поверхностью in vitro Нф генерируют АФК, и наиболее активные из них инактивируются [Герасимов И.Г., Игнатов Д.Ю., 2001]. По данным ряда авторов [Шаталин Ю.В., 2008; Поцелуева М.М. с соавт., 1999; di Carlo Е. et al., 2001; Junankar S R. et al., 2006] в процессе развития экспериментальных опухолей увеличивается общее количество Нф в циркулирующей крови и повышается удельная АФК-генерирующая их активность уже на ранних стадиях. А в АЖ на поздних стадиях наблюдалась гиперактивация Нф, которая приводит к скачкообразному многократному усилению продукции АФК [Шаталин Ю.В., 2008]. В то же время у мышей с имплантированными сингенными опухолями также отмечено нарушение показателей окислительного метаболизма, выражающееся в уменьшении числа активных Нф в спонтанном НСТ-тесте [Лаврова B.C. с соавт., 1992]. В ходе нашего исследования выявлено, что ДАН (%) асцитической жидкости, продуцирующих активные формы кислорода (АФК) на ранней стадии прогрессирования АОЯ составляет 66,5±6,51% и статистически значимо снижается на поздней стадии до 40,7±2,57% (р<0,05). Корреляционная связь между МПО и ДАН в АЖ средняя отрицательная (г=0,37) А связь количества АФК-генерирующих Нф АЖ со стадией равна 0,53. ДАН, циркулирующих в крови у крыс на разных стадиях прогрессирования АОЯ статистически значимо выше, чем в крови интактных крыс (49,0±4,5 и 49,2±4,08 против 7,3±1,60 % соответственно, pi<0,001, р2<0,001). Однако, АФК в организме не только обеспечивают защиту от патогенов и трансформированных клеток, но и участвуют в мутагенезе, повреждая белки и нуклеиновые кислоты, и содействуют пролиферации опухолевых клеток.

Уровень КБ характеризует кислороднезависимую бактерицидную систему Нф, их способность к внутриклеточному и экстрацеллюлярному киллингу. КБ формируют водные каналы в мембранах, что приводит к лизису клетки. В ряде работ описано снижение содержание КБ Нф периферической крови с разными локализациями злокачественного процесса у людей и животных с опухолями [Лаврова B.C. с соавт., 1992]. По результатам наших исследований, уровень КБ Нф в АЖ и периферической крови на терминальной стадии статистически значимо ниже, чем на логарифмической. При этом уровень КБ Нф в периферической крови крыс на ранней стадии опухолевого роста статистически значимо выше, чем в крови интактных животных (табл.1). Корреляционная связь со стадией АОЯ уровня КБ Нф АЖ была положительная средняя (г=0,68). Подобная динамика может быть связана с освобождением из Нф крови

вследствие диффузии через целостную мембрану тех КБ, которые вышли в цитоплазму из гранул, либо с повышенной секреторной активностью НГ [Пауков B.C., Кауфман О.Я., 1983]. Причиной декатионизации Нф может быть и снижение синтеза КБ на стадии промиелоцита и миелоцита в результате действия на костный мозг факторов, выделяемых опухолью.

КФ - лизомальный фермент, катализирующий гидролиз сложных эфиров фосфорной кислоты и органических соединений. Уровень КФ в Нф периферической крови крыс на терминальной стадии развития ОЯ статистически значимо выше, чем на логарифмической. Активность фермента в Нф крови на ранней стадии не отличается от таковой в крови интактных животных, а на терминальной стадии статистически значимо выше, по сравнению с Нф периферической крови здоровых крыс. Выявление в зрелых Нф высокой активности КФ является косвенным показателем диссоциации в созревании ядра и цитоплазмы, а следовательно, и нарушение химической дифференцировки гранулоцитов у опухоленосителей, так как, в норме максимальная активность КФ отмечается в молодых клетках гранулоцитарного ряда [Соловьева Е.А., 1973]. Возрастание активности гидролитических ферментов может отражать противораковую активность Нф [Mosczynski Р., 1983]. При этом, наблюдается средней силы корреляционная связь уровня КФ Нф периферической крови (г=0,57) со стадией процесса.

ЩФ катализирует в щелочной среде освобождение фосфата из фосфомоноэфиров. Это мембранный гликопротеин, связанный с липидами. Было установлено, что фермент присутствует только в зрелых Нф человека и животных, его активность повышается при бактериальных инфекциях, воспалении, лейкемоидных реакциях и миелофиброзе, при хроническом миелолейкозе. В отличие от костно-мозговых предшественников -циркулирующие Нф и клетки краевого пула обладают высокой активностью ЩФ [Katoh М., 1992]. В Нф периферической крови крыс-опухоленосителей на ранней и поздних стадиях активность данного фермента статистически значимо выше такого в Нф крови интактных крыс (табл.1). Увеличение синтеза ЩФ в Нф периферической крови связано, по-видимому, с общебиологическим действием продуктов распада опухолевых клеток на организм.

В исследованиях Лавровой B.C. с соавт. (1992) показано нарушение фагоцитарной активности Нф по отношению к стафилококку как на этапе поглощения, так и на стадии переваривания у животных с перевиваемыми злокачественными опухолями и химически индуцированными новообразованиями. По нашим данным, поглотительная способность Нф периферической крови на терминальной стадии статистически значимо выше, чем на логарифмической стадии при прогрессировании ОЯ и статистически значимо ниже, чем

Нф крови интактных крыс. ФЧ Нф асцитической жидкости и периферической крови на терминальной стадии статистически значимо выше, чем на логарифмической. ФЧ Нф в циркулирующей крови на разных стадиях прогрессирования ОЯ статистически значимо ниже, чем ФЧ Нф крови здоровых крыс (табл.1). Снижение способности Нф фагоцитировать дрожжевые клетки, может быть следствием перезагруженности микрофагов фагоцитированным материалом (очевидно, остатками разрушенных опухолевых клеток). С этим может быть связано истощение резервных возможностей Нф при раке [Бережная Н.М., 1988]. Выявленные нарушения фагоцитоза могут быть обусловлены дефектностью рецепторного аппарата клеток, а также нарушением механизмов переваривания вследствие недостаточности внутриклеточных ферментативных систем Нф [Блиндарь В.Н., 2000]. Сниженная фагоцитарная активность может быть связана с недостаточностью опсонизирующей активности сыворотки крови [Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 1995]. При прогрессировании экспериментальной опухоли наблюдается слабая (г=0,08) корреляционная связь ФИ Нф периферической крови со стадией, а ФЧ - средняя (г=0,32), а также связь средней силы (г=0,33) ФЧ Нф асцитической жидкости со стадией.

Функциональное состояние нейтрофилов периферической крови и асцитической жидкости при раке яичников.

Лейкоцитоз иейгрофильной природы отмечен на поздних стадиях у больных раком различной локализации [Лаврова B.C. с соавт., 1992; Антонеева И.И., 1997; Чердынцева Н.В. с соавт., 1989]. Проведенные нами исследования демонстрируют (табл.2) статистически значимое повышение абсолютного количества Нф в периферической крови на терминальных стадиях прогрессирования РЯ по сравнению с контрольной группой. В АЖ при переходе от Ш стадии РЯ к IV статистически значимо снижается абсолютное количество Нф.

Исследования не показали достоверных различий в количестве Нф, экспрессирующих рецептор CDlla (опосредующих хемотаксис и адгезию к клеткам-мишеням, эндотелию, эпителию) на Нф асцитической жидкости на III и IV стадии (табл.2). IV стадия развития РЯ характеризуется статистически значимым снижением CDlla+ Нф в периферической крови относительно таковых на предыдущей стадии и контрольной группы. Корреляционная зависимость количества CDlla+ нейтрофилов крови от стадии опухолевого процесса средняя (г=0,59), что, вероятно и является нарушения адгезивных способностей Нф и это является причиной снижения миграции их в АЖ.

Таблица 2

Количество Нф, экспрессирующих дифференцировочные антигены

^Дараметр группа \ абсолютное количество лейкоцитов (х10 /л)

контрольная группа III стадия РЯ IV стадия РЯ

п М±ш п М±т п М±т

АЖ 7 13,7±4,18 7 5,8±0,50'

Периф.кровь 10 6,4±0,68 10 11,1±3,60* 7 9,7±1,33'*

относительное количество нейтрофилов (%)

АЖ 7 39,3±10,02 7 12,7±8,80'

Периф.кровь | 10 55,9±4,40 10 68,0±8,31* 7 64,3±6,20

абсолютное количество нейтрофилов (х10ч/л)

АЖ 7 5,3±0,84 7 1,0±0,05'

Периф.кровь 10 3,6±0,03 10 7,5±0,30* 7 6,2±0,09*

СРПа, %

АЖ 7 67,3±6,76 6 71,3±3,78

Периф.кровь 20 61,5±2,36 9 | 66,8±4,08 7 44,3±6,95'*

СО 11Ь,%

АЖ 7 71,4±6,36 6 60,3±4,80'

Периф.кровь 17 65,2±3,5 9 60,7±5,05 7 57,1±5,05

СО 15, %

АЖ 7 57,1±6,79 6 71,0±6,25

Периф.кровь 17 58,8±4,60 9 33,2±5,02* 7 40,0±7,17*

СО 95, %

АЖ 6 49,6±4,73 6 57,3±2,75

Периф.кровь 7 58,0±5,98 6 39,3±9,91 6 34,2±7,62*

Примечание: * - данные статистически значимо отличаются от данных в периферической крови контрольной группы (р<Р,05); ' - данные статистически значимо отличаются от аналогичных на предыдущей клинической стадии (р<0,05).

СШ1Ь - интегрин, который присутствует на поверхности Нф, и опосредует прилипшие их к фибронектину и продуктам его расщепления, стимулированному эндотелию, а также опосредуют фагоцитоз частиц покрытых комплиментом. По данным Блиндарь В.Н. с соавт (2000), количество СШ1Ь+Нф в периферической крови женщин при РЯ незначительно отклоняется от аналогичных показателей в контрольной группе.

Была снижена экспрессия данного антигена у больных хроническим миелолейкозом [Блиндарь, В.Н., с соавт, 2002]. По нашим данным количество CDllb+ Нф периферической крови больных РЯ и женщин-доноров сравнимо по величине. В АЖ на IV клинической стадии РЯ количество CDllb+Нф статистически значимо ниже по сравнению с их количеством на предыдущей стадии (табл.2). Количество таких нейтрофилов асцитической жидкости коррелирует со средней силой со стадией опухолевого роста (г=0,39). Нф, на мембране которых не выявляются рецепторы CDllb, не способны реагировать на сигналы, а, следовательно, не могут прикрепляться к фагоцитированному материалу - бактериям, опухолевым клеткам, иммунным комплексам [Блиндарь В.Н., 2002].

CD 15 - сиалированный антиген Lex - поверхностный глипопротеид Нф, который служит лигандом для селекпшов эндотелиальных клеток [Kerr М.А. et al., 1992], «распознают» нейраминидаза-чувсгвительные углеводы на поверхности других клеток и связываются с этими клетками углеводными лигандами [Hughes B.J. et al., 1992], осуществляя Са2+-зависимую межклеточную адгезию [Bevilacqua М.Р. et al., 1993; Нестерова И.В. с соавт., 2007]. В ходе исследования выяснено, что количество CD15+ Нф, в периферической крови на III-ей (33,2±5,02 %) и IV-ой (40,0±7,17 %) клинических стадиях статистически значимо ниже такового в крови женщин контрольной группы (58,8±4,60 %). Экспрессия нейтрофилами асцитической жидкости CD15 рецепторов на IV стадии статистически значимо выше, чем на III стадии РЯ (71,0±6,25 против 57,1±6,79 %, р<0,05).

Экспрессия CD95 (Fas/Apol) рецептора на мембране Нф отражает готовность к реализации апоптозной программы [Владимирская Е.Б., 1999]. Апоптоз является важным механизмом, который лимитирует агрессивный потенциал Нф в условиях естественной микросреды. Нф, вступившие на путь апоптоза, теряют способность к рецепторзависимой активности, стимул-индуцированной амебоидной активности, поглощению, хемотаксису, респираторному взрыву, секреторной дегрануляции [Dransfîeld I. et al., 1995]. Экспрессия антигена CD95 на Нф периферической крови женщин при прогрессировании РЯ статистически значимо снижается от 58,0±5,98 % - в крови контрольной группы, до 33,2±5,02 % - на III-ей и 40,0±7,17 % - на IV-ой клинических стадиях (р<0,05).В АЖ при прогрессировании РЯ количество Нф, готовых к апоптозу, статистически значимо не меняется (табл.2).

МПО в сочетании с пероксидом водорода особенно важно для разрушения липидных компонентов мембран, так как за счет окисления они обеспечивают повышение гидрофильности субстрата и доступность для протеазных систем. При оценке

метаболизма НГ В исследованиях Бережной Н.М. с соавт. (1984) выявлено снижение активности МПО в Нф периферической крови больных раком легкого и прямой кишки. При прогрессировании РЯ в Нф периферической крови уровень МПО снижается, по сравнению с донорами [Антонеева И.И., 2007]. По данным наших исследований в Нф периферической крови женщин при прогрессировании РЯ происходит снижение уровня МПО: 2,7±0,07 СЦК - у контрольной группы, 2,4±0,15 СЦК - на III стадии, 2,2±0,23 СЦК - на IV стадии (р<0,05) (рис.1). Уровень МПО в Нф АЖ на IV стадии статистически значимо не отличается от такового на III стадии (2,0±0,19 против 2,4±0,09 СЦК, р>0,05) (рис.2).

Рядом авторов отмечено увеличение количества активных клеток в спонтанной НСТ-реакции у больных с неоплазмами [Korenkiewicz А. et al., 2001]. По нашим данным, количество НСТ-положительных Нф в периферической крови больных женщин на III и IV стадиях статистически значимо выше, чем в крови женщин контрольной группы (58,6±8,48 и 48,2±4,73 % против 6,2±0,95 % соответственно, pi,2<0,05) (рис.1).

контрольная III стадия IV стадия группа

ПДЗМПО ШШКБ —л—КФ -*-ДАН]

Рис.1. Ферментативная активность Нф периферической крови при прогрессировании РЯ

В АЖ ДАН на IV стадии статистически значимо повышается по сравнению с III стадией прогрессирования РЯ (56,3±9,33 против 44,0±6,12 %, р<0,05) (рис.2).

Уровень КБ в Нф асцитической жидкости статистически значимо не меняется при переходе от III (1,4±0,09 СЦК) к IV (1,7±0,14 СЦК) стадии РЯ (рис.2). В Нф периферической крови на поздних стадиях РЯ активность КБ статистически значимо сшшается по сравнению с контрольной группой (1,3±0,12 СЦК - на III и 1,3±0,21 СЦК -на IV стадии против 1,8±0,06 СЦК, pij<0,05) (рис.1). Это согласуется с данными некоторых авторов [Антонеева И.И., 2007; Лаврова B.C. с соавт, 1992]. Механизм снижения КБ при опухолевом росте может быть двояким: в результате дегрануляции Нф

под действием факторов, изменяющих проницаемость клеточных мембран; здесь определенную роль может играть циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК), концентрация которых в крови опухоленосителей, как правило, повышена. Взаимодействие ЦИК с рецепторами Нф приводит к дестабилизации мембран и выходу содержимого гранул. Причиной декатионизации Нф может быть и снижение синтеза КБ на стадии промиелоцита и миелоцита в результате действия ряда факторов опухолевого процесса на костный мозг; не исключено, что механизмы, ответственные за нейтрофилюо, обусловливают нарушения гранулогенеза Нф [Kokura S. et al., 1996].

Активность КФ в Нф периферической крови больных женщин на III стадии статистически значимо увеличивается по сравнению с Нф периферической крови контрольной группы (1,5±0,08 против 1,0±0,03 СЦК, р<0,05), что согласуется с данными, полученные при раке пищевода и желудка [Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 1995]. И корреляция между динамикой опухолевого процесса и варьированием уровня КФ средней силы (г=0,56). В исследованиях Бережной Н.М. с соавт. (1984) выявлено снижение активности КФ в Нф больных раком легкого и прямой кишки. Нами установлено, что на IV стадии РЯ содержание КФ в Нф периферической крови статистически значимо снижается до 1,2±0,14 СЦК (р<0,05). Увеличение активности КФ в Нф рассматривается как неспецифический признак воспаления. Уровень КФ Нф асцитической жидкости женщин на III и IV стадиях РЯ статистически значимо не отличаются (1,2±0,09 и 1,4±0,15 СЦК соответственно, р>0,5).

■••• — - | ; 1. ...... .

III стадия IV стадия

ЕЭЗО МПО i&saaa КБ Е S3 КФ —ЩФ -х-ДАН

Рис.2. Ферментативная активность Нф АЖ при прогрессировании РЯ

По данным некоторых авторов активность ЩФ в Нф периферической крови снижается при прогрессировании неоплазмы различной локализации [Бережная Н.М. с соавт. 1984; Лаврова B.C. с соавт, 1992]. По результатам нашего исследования уровень ЩФ в Нф периферической крови у пациенток с РЯ не отличается от такового в контроле

(1,2±0,07; 1,3±0,08 и 1,3±0,08 СЦК соответственно, р>0,5). Содержание ЩФ в Нф АЖ на III и IV стадиях статистически значимо не отличаются (1,3±0,09 и 1,2±0,12 СЦК соответственно, р>0,5).

При исследовании фагощгтарной активности Нф по отношению к микробным тест-культурам, разными авторами выявлено достоверное уменьшение поглотительной способности Нф у больных раком желудочно-кишечного тракта и других локализаций. Снижение переваривающей способности более выражено на поздних стадиях опухолевого роста и происходит раньше, чем угнетение поглощения [Лаврова B.C. с соавт, 1992]. У больных РЯ выявлено замедление фагоцитарной активности Нф периферической крови [Блиндарь В.Н. с соавт, 2000]. Имеются данные о неизменном ФИ Нф периферической крови больных РЯ на всех клинических стадиях, при одновременно увеличении ФЧ, по сравнению с донорами [Антонеева И.И., 2007]. По нашим данным, ФИ Нф периферической крови статистически значимо снижается на III-IV клинической стадии (55,5±7,15 и 53,9±9,03 против 70,8±3,59% в контроле, р<0,05). При этом, ФЧ на поздних стадиях РЯ статистически значимо не меняется по сравнению ФЧ НФ периферической крови женщин контрольной группы (1,7±0,24 и 2,2±0,28 соответственно, против 2,0±0,12, р>0,05).

Таблица 3

Фагоцитарная активность Нф периферической крови и асцигической жидкости на III и IV

стадиях РЯ

Периферическая кровь АЖ

контр, группа III стадия IV стадия III стадия IV стадия

п М±т п М±т п M=tm п М±ш п М±т

ФИ, % 17 70,8*3,59 10 55,5±7,15* 7 53,9±9,03* 8 77,1±3,39 7 72,8±4,47

ФЧ, ус.ед. 17 2,0±0,12 10 1,7±0,24 7 2,2±0,28 8 2,0±0,18 7 1,9±0,15

Примечание: * - данные статистически значимо отличаются от соответствующих данных в контрольной группе (р<0,05).

ФИ и ФЧ Нф асципгческой жидкости на IV клинической стадии статистически значимо не отличаются от таковых на III стадии РЯ (ФИ: 72,8±4,47 против 77,1±3,39 %, р>0,05; ФЧ: 1,9±0,15 против 2,0±0,18 ус.ед., р>0,05).

Изменение концентрации цитокинов в периферической крови и АЖ при РЯ.

Цитокины представляют собой группу полипептидиых медиаторов, участвующих в формировании и регуляции защитных реакций организма и функций Нф. По отношению к функционированию системы Нф цитокины принято делить на провоспалительные, работающие в очаге острого воспаления (IL-1, TNF-a, GM-CSF, G-CSF), и участвующие в регуляторной цепи взаимодействия при хроническом воспалении (IL-6, IFN-y) [Потапнев МП., 1995].

В ходе ИФА мы обнаружили, что при прогрессировании РЯ в периферической крови уровень IL-lp повышается (от 69,16±1,543 пг/мл в контрольной группе до 99,43±5,809 пг/мл на 111 стадии и 99,28±4,892 пг/мл - на IV стадии патологического процесса (рис.3), что согласуется с данными литературы при других локализациях опухоли [Mantovani G., et al., 1997; Бережная Н.М., Чехун В.Ф, 2000; Tartour Е., et al., 1995]. В АЖ, напротив, наблюдается статистически значимое снижение уровня IL-lp при прогрессировании неоплазмы (от 89,16±7,870 пг/мл в контрольной группе до 28,41±1,021 и 10,75±0,611 пг/мл на III и IV стадиях соответственно, pi,2<0,05) (рис.3).

120 --------------------------------------------- - -........

100 80

с;

| 60 с

40 20

0 -

Примечание: * - данные статистически значимо отличаются от данных в периферической крови контрольной группы (р<0,05); ' - данные статистически значимо отличаются от данных на предыдущей стадии (pS0,05).

Рис.3. Уровень IL-lß в периферической крови и асцитической жидкости женщин при РЯ

Провоспалительный цитокин IL-lß включается в патогенез анорексии, кахексии, анемии, которые в комплексе составляют один из выраженных синдромов опухолевой прогрессии [Lotzova Е., et al., 1984; Norman R.J., Brannstorm M., 1996]. В то же время существуют данные о позитивной роли IL-lß в опухолевом росте [Ока М„ et al., 1996].

контр.гр.

№ стадия

IV стадия

3 периферическая кровь - -асцитическая жидкое

250

С 200 2

327.67

' У У / У 'УУУУУ 'V/'Z/v /vyvy> /vyvyV 'УУУУУ 'УУУУ> ■У/у/у1 ь46,20 7,49'

'УУУ-Л syy/Уу ¿"VyyVv .-yyy-Уу 111,65'^

59,05 -у-,' ^УУ'УУу svyy/r

WWHMM хжШШ Луw> 22,84'

АКККК

- 18 16 14 12 10 8 б 4 2 0

логарифмическая стадия

терминальная стадия

EZ3IFN-Y BBaTNF-a —IL-1|3

Примечание: ' - данные статистически значимо отличаются от данных на предыдущей стадии (р<0,05).

Рис.4. Уровень цитокинов в асцитической жидкости крыс при прогрессировании

АОЯ

450 400 350 300 § 250 ? 200 150 100 50 О

] ЕЭ периферическая кровь —»— асцитическая жидкость

В АЖ крыс при экспериментальном воспроизведении АОЯ на терминальной стадии количество IL-ip также статистически значимо снижается (7,49±0,118 против 1б,20±7,039, р<0,05) (рис.4).

По данным авторов [Сорокин A.M., 1988], уровень сывороточного IFN-y возрастает при наличии опухоли. Самый низкий уровень у здоровых женщин, самый высокий - у

больных со злокачественными опухолями яичников. В ходе нашего исследования мы обнаружили, что на поздних стадиях прогрессирования РЯ статистически значимо снижается концентрация IFN-y и в периферической крови (50,77±2,360 и 31,79±1,126 пг/мл - на III и IV стадиях соответственно против 129,59±32,665 пг/мл в контроле, Ри<0,05) и в аедитической жидкости (200,91±8,157 и 122,10±6,131 пг/мл против 381,35±12,839 пг/мл в кошроле, pij<0,05) (рис.5).

Содержание IFN-y в АЖ крыс на терминальной стадии роста АОЯ статистически значимо ниже такового в АЖ на логарифмической стадии (П1,65±2,700 против 327,672±8,556, р<0,05) (рис.4).

контр.rp. III стадия IV стадия

кхххэ периферическая кровь —-асцитаческая жидкость

По результатам нашего исследования уровень ТМР-о. в периферической крови на терминальных стадия прогрессирования РЯ снижается до 0 пг/мл по сравнению с таковым в крови контрольной группы (0,90±0,042 пг/мл). В асцитической жидкости при РЯ наблюдается статистически значимое снижение на III (6,07±0,142 против 67,33±4,748 пг/мл, р<0,05) и статистически значимое увеличение на IV клинической стадии уровня ТОТ-а (78,42±5,741 против 6,07±0,142, р<0,05) (рис.6). Прирост концентрации, в частности ТЫР-а, может обеспечиваться, по мнению ряда авторов [Антонов В.Г., Козлов В.К., 2004] двумя аддитивными механизмами: селекцией клеток, резистентных к

цитотоксическому действию TNF-a и тем, что экспрессируемые опухолевыми клетками аитигены также индуцируют повышенную продукцию TNF-a.

В АЖ крыс при прогрессировании АОЯ концентрация TNF-a на логарифмической стадии составляет 16,20±0,703 пг/мл и статистически значимо снижается на терминальной стадии до 22,84±4,678 пг/мл (рис.4).

Таким образом, экспериментальный канцерогенез позволил оценить функциональное состояние нейтрофилов в периферической крови и асцитической жидкости при прогрессировании асцитной опухоли яичников крыс. При прогрессировании рака яичников нейтрофильные гранулоциты становятся некомпетентными по отношению к опухолевым клеткам, а продуцируемые ими супероксидные радикалы разрушают не только неопластические клетки, а их самих. Поэтому представляется перспективным развитие представлений о роли нейтрофилов в защите организма от раковой агрессии [Wakimoto H., 2003]. С осторожностью надо относиться к предложению стимуляции нейтрофилов при противораковой терапии [Dröge W., 2002]. Эффективность противоопухолевого действия нейтрофильных гранулоцитов будет определяться этиологией и стадией опухолевого процесса [de Visser К.Е. et al., 2006].

Выводы

1. В процессе роста асцитной опухоли яичников в нейтрофилах периферической крови крыс при снижении фагоцитарной активности увеличивается доля активных нейтрофилов и возрастает уровень кислой фосфатазы.

2. В асцитической жидкости на поздних стадиях опухолевого роста снижается АФК-генерирующая способность нейтрофилов, количество катионных белков и увеличивается уровень миелопероксидазы.

3. На поздних стадиях рака яичников в периферической крови женщин на фоне снижения фагоцитарной активности и увеличения доли активных нейтрофилов наблюдается дефицит миелопероксидазы и катионных белков микрофагов при одновременном повышении уровня щелочной фосфатазы. В асцитической жидкости возрастает количество нейтрофилов, продуцирующих активные формы кислорода.

4. У женщин при раке яичников имеет место снижение уровня экспрессии дифференцировочных маркеров CDlla, CD15 и CD95 иа нейтрофилах периферической крови и уменьшение CD11Ь+ нейтрофилов в асцитической жидкости.

5. Развитие асцитной опухоли яичников в организме животного сопровождается снижением уровня провоспалительных цитокинов в асцитической жидкости. При прогрессировании рака яичников в периферической крови женщин увеличивается уровень IL-ip, а в асцитической жидкости - TNF-a.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Абакумова, Т.В. Экспрессия рецепторов CD11, CD15 нейтрофилов периферической крови и асцитической жидкости больных раком яичников /И.И.Антонеева, Т.В.Абакумова //Российский иммунологический журнал. - 2008. -Т.2 (11), №2-3. - С.303.

2. Абакумова, Т.В. Закономерности количественных изменений NK-клеток, нейтрофильиых лейкоцитов и их рецепторного статуса на поздних клинических стадиях рака яичников /И.И.Антонеева, Т.В.Абакумова, Н.П. Чесиокова //Аллергология и иммунология. - 2008. - Т.9. - №3. - С.324-325.

3. Абакумова, Т.В. О патогенетической взаимосвязи процессов липопероксидацми ферментативного звена антиоксидантной системы неоплазмы и функционального состояния нейтрофилов асцитической жидкости при прогрессировании рака

яичников у крыс /И.И.Аитонеева, Т.В.Абакумова, Д.РЛрсланова, Н.П. Чеснокова /Вестник новых медицинских технологий. - 2008. - №4. - С.16-17.

4. Абакумова, Т.В. Функциональное состояние нейтрофилов и антиоксидантный статус у крыс с асцнтпон опухолью яичников /Т.П.Генинг, Д.Р.Арсланова, Т.В.Абакумова //Вестник новых медицинских технологий. - 2008. - №1. — С.32-33

5. Абакумова, Т.В. Система ПОЛ-АО и функциональное состояние полиморфноядерных лейкоцитов асцитической жидкости при прогрессировании неоплазмы (в эксперименте) /И.И.Антонеева, Т.В.Абакумова, Д.Р.Лрсланова //Вестник Тверского государственного университета. - 2009. - вып.12, №6. - С.7-10

6. Абакумова, Т.В. Функциональное состояние и рецепторами статус нейтрофилов периферической крови и их взаимосвязи с процессами липопероксидации на поздних стадиях рака яичников /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева, Н.П. Чеснокова //Вестник Тверского Государственного Университета. - 2009. - вып. 11, №2. - С.6-14.

7. Абакумова, Т.В. Анаэробный и кислородзависимый метаболизм нейтрофильных гранулоцитов периферической крови и асцитической жидкости у крыс с асцитной опухолью яичников на разных стадиях /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева //Материалы Международного конгресса молодых ученых «Науки о человеке», Томск, 2008. - С.81-82.

8. Абакумова, Т.В. Кислородзависимый метаболизм нейтрофильных гранулоцитов асцитической жидкости и периферической крови женщин при раке яичников /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева //Материалы Международной научно-практической конференции «Современные проблемы экологической физиологии», Алматы, 2008. - С.З.

9. Абакумова, Т.В. Кислородзависимый и анаэробный метаболизм нейтрофильных гранулоцитов асцитической жидкости и периферической крови крыс с перевитой опухолью яичника /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева //Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы физиологии, физического воспитания и спорта», Ульяновск. С.3-6.

10. Абакумова, Т.В. Количество NK, нейтрофильных лейкоцитов и субпопуляционный состав микрофагов периферической крови женщин в репродуктивном периоде и в постменопаузе /И.И.Антонеева, Т.В.Абакумова, Н.П. Чеснокова //Научные труды II съезда физиологов СНГ, Кишинев, Молдова, 29-31 октября 2008. - С.158.

11. Абакумова, Т.В. Метаболическая активность нейтрофилов асцитической жидкости и периферической крови женщин при раке яичников //Сборник материалов II Международной научной конференции молодых ученых-медиков, Курск, 2008. - С. 155156.

12. Абакумова, Т.В. Метаболическая и фагоцитарная активность нейтрофилов асцитической жидкости и периферической крови женщин при раке яичников /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева //Сибирский консилиум - №7(62) - 2007 - С.20.

13. Абакумова, Т.В. Паранеопластические изменения в системе крови в процессе прогрессирования асцитной опухоли яичников у крыс /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева, Д.Р.Арсланова //Материалы VIII Молодежной научной конференции Института физиологии Коми НЦ УрО РАН «Физиология человека и животных:от эксперимента к клинической практике» - Сыктывкар, 2009. - С. 17-20.

14. Абакумова, Т.В. Состояние нейтрофияьных гранулоцитов и антиоксидантной системы у крыс с асцитной опухолью яичников /Д.РЛрсланова, Т.В.Абакумова // материалы I Всероссийской молодежной научной конференции: «Молодежь и наука на севере», г.Сыюывкар, 2008. -С.192-194.

15. Абакумова, Т.В. Фагоцитарная активность нейтрофилов асцитической жидкости и периферической крови больных раком яичников /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева //Сборник материалов VIII Международного конгресса «Здоровье и образование в 21 веке; концепции болезней цивилизации», Москва, 2007. - С.87-88.

16. Абакумова, Т.В. Ферментативная активность нейтрофильных гранулоцитов асцитической жидкости и периферической крови женщин при раке яичников /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева //Материалы VI Сибирского физиологического съезда, 2008, Барнаул, Т.1. - С.95.

17. Абакумова, Т.В. Функциональное состояние нейтрофилов асцитической жидкости и периферической крови женщин с раком яичников /Т.В.Абакумова, Т.П.Генинг //Материалы Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека», 2007, Ульяновск. С.3-4.

18. Абакумова, Т.В. Функциональное состояние и экспрессия рецепторов CD11, CD15 нейтрофилов асцитической жидкости и периферической крови больных раком яичников /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева //Материалы 43-й межрегиональной научно-практической конференции врачей, 2008, Ульяновск. - С.345.

19. Абакумова, Т.В. Функциональное состояние нейтрофилов периферической крови и асцитической жидкости у больных раком яичников /И.И.Акгонеева, Т.В.Абакумова //Сборник материалов VI съезда физиологов Казахстана с международным участием, Караганда, 2007. - С.62.

20. Абакумова, Т.В. Бактерицидные системы нейтрофильных лейкоцитов асцитической жидкости и периферической крови при прогрессировании опухоли яичников крыс /И.И.Антонеева, Т.В.Абакумова, Т.П.Генинг //Сборник материалов III Всероссийской

конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека - Ульяновск, 2009. - С. 16-17.

21. Абакумова, Т.В. Патогенетическая взаимосвязь активации процессов липопероксвдации с измененпием рецепторного статуса и функционального состояния нейтрофилов периферической крови на поздних стадиях рака яичников /И.И.Антонеева, Т.В.Абакумова, Н.П.Чеснокова //Ученые записки УлГУ. Сер. Клиническая медицина. -2008. - вып. 14. - С.5-11.

22. Абакумова, Т.В.Роль провоспалительных цитокинов в развитии локальных эффектов при прогрессировании рака яичников /И.И.Антонеева, Т.В.Абакумова /Материалы 44 Межрегиональной научно-практической медицинской конференции, Ульяновск, 2009. -С.394-396.

Список сокращений

АЖ - асцитическая жидкость

АОЯ - асцитная опухоль яичников

АФК - активные формы кислорода

ДАН - доля активных нейтрофилов

ИЛ, IL - интерлейкнн

ИФА - иммуноферментный анализ

ИФН, IFN - интерферон

КБ - катионные белки

КФ - кислая фосфатаза

МПО - миелопероксидаза

HCT - нитросиний тетразолий

Нф - нейтрофилы

НГ - нейтрофильные гранулощпы

РЯ - рак яичника

СЦК - средний цитохимический коэффициент

ФИ - фагоцитарный индекс

ФНО, TNF - фактор некроза опухоли

ФЧ - фагоцитарное число

ЩФ - щелочная фосфатаза

CD - кластер дифференцировки

Абакумова Татьяна Владимировна

03.00.13 - физиология 16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Подписано в печать 13.10.09 Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная Печать ризографическая Гарнитура Times New Roman Усл. печ.л. 1,49. Заказ № 9/075

Тираж 100 экз.

Отпечатано в издательско-полиграфическом центре «Гарт» ИП Качалин A.B. 432042, г.Ульяновск, ул.Доватора, 16.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Абакумова, Татьяна Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Нейтрофильные лейкоциты периферической крови.

1.1.1. Кислородзависимый метаболизм нейтрофильных лейкоцитов

1.1.2. Анаэробные системы нейтрофильных лейкоцитов.

1.1.3. Фагоцитарная активность нейтрофильных лейкоцитов.

1.1.4. Рецепторный аппарат нейтрофильных лейкоцитов.

1.1.5. Понятие о праймированных нейтрофильных лейкоцитах.

1.2. Нейтрофильные лейкоциты асцитической жидкости.

1.3. Нейтрофильные лейкоциты как компонент системы неспецифической резистентности в динамике прогрессирования неоплазмы.

1.3.1. Нейтрофильные лейкоциты как компонент системы неспецифической резистентности в динамике прогрессирования неоплазмы в эксперименте.

1.3.2. Нейтрофильные лейкоциты как компонент системы неспецифической резистентности в динамике прогрессирования рака яичников.

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материал исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Выделение нейтрофилов.

2.2.2. Имму но флуоресцентный метод.

2.2.3. Методы оценки функциональной активности нейтрофилов.

2.2.3.1. Фагоцитарная активность нейтрофилов.

2.2.3.2. Определение активности миелопероксидазы.

2.2.3.3. Определение активности катионных белков.

2.2.3.4. Определение активности кислой фосфатазы.

2.2.3.5. Определение активности щелочной фосфатазы.

2.2.3.6. Определение активности нейтрофилов по спонтанному варианту НСТ-теста.

2.2.4. Определение содержания цитокинов (IL-1(3, TNF-a, IFN-y) методом иммуноферментного анализа.

2.3. Методы статистической обработки.

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ

ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Функциональное состояние нейтрофилов периферической крови и асцитической жидкости у крыс с перевиваемой асцитной опухолью яичников.

3.1.1. Количество лейкоцитов и нейтрофилов в периферической крови и асците крыс с опухолью яичников на разных стадиях опухолевой прогрессии.

3.1.2. Кислородзависимая микробицидная система нейтрофилов периферической крови и асцита крыс-опухоленосителей.

3.1.3. Анаэробный метаболизм нейтрофилов асцитической жидкости и периферической крови крыс с опухолью яичников.

3.1.4. Фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови и асцита крыс-опухоленосителей.

3.2. Функциональное состояние нейтрофилов периферической крови и асцитической жидкости при раке яичников.

3.3. Экспрессия дифференцировочных антигенов нейтрофилов периферической крови и асцитической жидкости женщин при раке яичников.

3.4. Уровень цитокинов (IL-lp, IFN-y, TNF-a) в периферической крови и асцитической жидкости при раке яичников.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Функциональное состояние нейтрофильных лейкоцитов периферической крови и асцитической жидкости при раке яичников"

Актуальность работы. Результаты экспериментальных и клинических исследований свидетельствуют о связи нейтрофилов с патогенезом злокачественного роста [32]. Наблюдаемые в процессе опухолевого роста изменения со стороны гранулоцитарного звена лейкоцитов периферической крови можно с равной степенью вероятности рассматривать как результат системного действия опухоли на организм, так и в качестве компонента самого процесса необластомогенеза. Наблюдаемые сдвиги могут быть также интерпретированы и как результат мобилизации механизмов противоопухолевой резистентности [99].

По современным данным, нейтрофильные лейкоциты, подвергаясь каскадным влияниям различных цитокинов, способны изменять свой количественный и субпопуляционный состав, перестраивать свою функциональную активность, секретировать многочисленные ферменты, медиаторы (в том числе и цитокины), активные-формы кислорода, чтобы в конечном итоге реализовать свой физиологический потенциал - фагоцитоз и киллинг, уничтожая вирусы, бактерии, аллергены, неопластические клетки [1,63,209,214]. Нейтрофилы, мигрируя в очаг развития опухоли, оказывают цитолитическое и цитотоксическое действие [9,221].

По данным литературы [78], при прогрессировании неоплазмы наблюдается одновременное увеличение количества активированных нейтрофильных лейкоцитов в периферической крови. При этом роль микрофагов в прогрессировании неоплазмы остается неизвестной, так как выбрасываемые нейтрофильными гранулоцитами во внеклеточную среду -плазму крови и асцит [116,174], активные формы кислорода и лизосомальные ферменты оказывают повреждающее действие не только на опухолевые клетки, но и участвуют в мутагенезе, повреждая белки, нуклеиновые кислоты нормальных клеток организма, способствуя при этом пролиферации опухолевых клеток [99,239,211,135]. В связи с этим представляется достаточно обоснованным исследование функционального состояния нейтрофилов асцитической жидкости (в зоне контакта эффекторных клеток и опухолевых клеток), а также периферической крови на поздних стадиях прогрессирования рака яичников.

Цель исследования. Оценить функциональное состояние нейтрофильных лейкоцитов периферической крови и асцитической жидкости при раке яичников.

Основные задачи исследования:

1. Изучить динамику показателей кислородзависимого и анаэробного метаболизма нейтрофилов асцитической жидкости и периферической крови крыс в процессе роста асцитной опухоли яичников.

2. Оценить фагоцитарную активность, кислородзависимый и-анаэробный метаболизм нейтрофильных гранулоцитов асцитической' жидкости и периферической крови женщин» на поздних стадиях развития рака яичников.

4. Определить уровень провоспалительных цитокинов асцитической-жидкости и периферической крови женщин при раке яичников.

Научная новизна.

Впервые получены данные об изменении функционального состояния нейтрофилов асцитической жидкости и периферической крови женщин при раке яичников, а также о количестве и состоянии микрофагов1 асцитической жидкости и периферической крови крыс на разных стадиях опухолевого роста. Изучен рецепторный статус микрофагов асцитической жидкости, при раке яичников. Также, впервые, оценен уровень цитокинов-(IL-ip, TNF-a, IFN-y) асцитической жидкости периферической крови женщин на поздних стадиях развития рака яичников и женщин-доноров. Установлена корреляционная связь уровня кислородзависимого и анаэробного метаболизма, а также фагоцитарной активности со стадией опухолевого процесса на модели прогрессирования асцитной опухоли яичников у крыс.

Научно-практическая значимость. Данные, полученные в результате оценки функционального состояния нейтрофильных лейкоцитов, их рецепторного статуса и уровня цитокинов в периферической крови и асцитической жидкости на поздних этапах канцерогенеза, могут быть использованы в патофизиологии, теоретической и практической онкогинекологии при разработке схем диагностики и терапии прогрессирующего рака яичников.

Положения, выносимые на защиту:

1. Функциональное состояние нейтрофилов периферической крови крыс зависит от стадии роста экспериментальной опухоли. При её прогрессировании снижается фагоцитарная активность нейтрофилов. При этом, в асцитической жидкости снижается доля активных нейтрофилов, но усиливается в последних миелопероксидазный кислородзависимый метаболизм и уровень кислой фосфатазы.

2. На поздних стадиях развития рака яичников у женщин в периферической крови увеличивается абсолютное количество нейтрофилов, способных продуцировать активные формы кислорода, но с низкой активностью ферментов микробицидных систем. В асцитической жидкости при переходе от III к IV клинической стадии снижается количество микрофагов, но увеличивается их АФК-генерирующая способность.

3. Прогрессирование рака яичников сопровождается снижением в периферической крови количества CD 15+, CDlla+ нейтрофилов при раке яичников, способных к адгезии, а также CD95+ нейтрофилов, готовых к апоптозу. В асцитической жидкости увеличивается количество нейтрофилов, экспрессирующих CD11а, и снижается CD11Ь+ нейтрофилов.

4. Терминальные стадии рака яичников характеризуются разнонаправленным изменением уровня провоспалительных цитокинов (IL-ip, TNF-a) в периферической крови и асцитической жидкости в клинике.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на VI съезде физиологов Казахстана с международным участием (Караганда, 2007), VIII Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации» (Москва, 2007), III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (Новосибирск, 2007), Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека» (Ульяновск, 2007), Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы физиологии, физического воспитания и спорта» (Ульяновск, 2008), II Международной научной конференции молодых ученых-медиков и I Международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине» (Курск, 2008), Международной научно-практической конференции «Современные проблемы экологической физиологии» (Алматы, 2008), IX Международном конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2008), II Съезде физиологов СНГ (Кишинев, 2008), VI Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 2008), I Всероссийской молодежной научной конференции «Молодежь и наука на Севере» (Сыктывкар, 2008), VIII Молодежной научной конференции «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике» (Сыктывкар, 2009), III Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека» (Ульяновск, 2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 22 научные работ, из них 6 - в изданиях, рекомендованных ВАК.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Абакумова, Татьяна Владимировна

ВЫВОДЫ

1. В процессе роста асцптной опухоли яичников в нейтрофилах периферической крови крыс при снижении фагоцитарной активности увеличивается доля активных нейтрофилов и возрастает уровень кислой фосфатазы.

4. У женщин при раке яичников имеет место снижение уровня экспрессии дифференцировочных маркеров CD 11 a, CD 15 и CD95 на нейтрофилах периферической крови и уменьшение CDllb+ нейтрофилов в асцитической жидкости.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В литературе имеются довольно многочисленные данные об изменении функциональной активности нейтрофилов при развитии опухоли [98,162,111,222]. Вероятно, влияние опухоли зависит от комплекса факторов, включающего тип и локализацию опухоли, продолжительность её роста.

Экспериментальный канцерогенез позволил оценить функциональное состояние нейтрофилов в периферической крови и асцитической жидкости при прогрессировании асцитной опухоли яичников крыс. Нейтрофилы первыми мигрируют в опухоль на ранней стадии её формирования [219,192]. На логарифмической стадии роста неоплазмы нейтрофилы первыми распознают и элиминируют опухолевые клетки [27]. На этом этапе количество нейтрофилов в крови не увеличивается, но повышается спонтанная продукция активных форм кислорода, содержание катионных белков и щелочной фосфатазы. Вероятно, это может быть также причиной прогрессирования опухоли, так как повышенная активность нейтрофильных гранулоцитов может вызвать элиминацию не только раковых клеток, но самих иммунокомпетентных клеток. Причем, продуцируемые опухолевыми клетками токсические продукты необратимо модифицируют нейтрофилы, в результате чего последние становятся некомпетентными по отношению к опухоли. Главное «поле битвы» иммунной системы и опухоли - её микроокружение. Видимо, поэтому, изменения в функциональном состоянии характерны как для периферических нейтрофилов, так и для клеток, мигрирующих в зону роста асцитной опухоли яичников. Эти изменения имеют разнонаправленный характер. Так, не терминальной стадии роста асцитной опухоли яичников крыс в периферической крови снижается количество нейтрофилов, падает способность к МПО-кислородзависимому киллингу. В периферической крови возрастает активность кислой фосфатазы микрофагов. При этом, наблюдается средней силы корреляционная связь уровня КФ (г=0,57) со стадией процесса (рис.36). интактные логарифм, стадия терминал, стадия животные с=]МПО сззКФ -а—Нфх109/л

Рис.36. Диаграмма изменения цитохимических показателей Нф периферической крови при росте АОЯ

Фагоцитарная активность Нф периферической крови повышается при прогрессировании АОЯ. Корреляционная связь ФИ Нф периферической крови со стадией слабая (г=0,08), а ФЧ - средняя (г=0,32) (рис.37). интактные логарифм, стадия терминал, стадия животные шДАН г—|ФИ ФЧ

Рис.37. Диаграмма изменения фагоцитарной активности и АФК-генерирующей способности Нф периферической крови при росте АОЯ

В АЖ снижается ДАН, но в них возрастает уровень МПО. Корреляционная связь между двумя этими параметрами средняя отрицательная (г=0,37). А связь количества АФК-генерирующих нейтрофилов АЖ со стадией равна 0,53. Также обнаружена сильная корреляционная связь миелопероксидазы микрофагов АЖ со стадией опухолевого роста (г=0,75), что, вероятно, может свидетельствовать об усилении в них МПО-кислородзависимого метаболизма при прогрессировании АОЯ.

Уровень КБ в НГ асцитической жидкости падает. При этом, корреляционная связь со стадией АОЯ уровня КБ нейтрофилов АЖ была положительная средняя (г=0,68) (рис.38). логарифм, стадия терминал, стадия cz=i МПО cz=3 КБ ДАН

Рис.38. Диаграмма изменения цитохимических показателей Нф АЖ при росте АОЯ

Нами установлено, что увеличивается ФЧ. При прогрессировании экспериментальной опухоли наблюдается средняя корреляционная связь (г=0,33) ФЧ Нф асцитической жидкости со стадией.

В последнее время активно обсуждается концепция, согласно которой развитию опухоли способствует хроническое воспаление, сопровождающееся увеличением уровня провоспалительных и регуляторных цитокинов (TNF-a, IFN-y, IL-1, 2, 4) [140,136,217]. Активирование цитокинами нейтрофилов приводит к усилению их противоопухолевой активности [159,129]. Снижение уровня IL-ip, IFN-y, TNF-a в асцитической жидкости крыс, таким образом, может причиной прогрессирования асцитной опухоли яичников, так как данные цитокины активируют нейтрофилы и регулируют их функции.

Полученные в ходе исследования данные дают возможность говорить об изменении функциональной активности нейтрофилов при прогрессировании неоплазмы. Так, при РЯ в периферической крови опухоленосителей увеличивается уровень IL-ip, активирующий нейтрофилы. Корреляция между количеством IL-ip и долей активных нейтрофилов положительная сильная (г=0,95) (рис.39). ц г контрольная группа hi стадия

IV стадия iL-tp — -ДАН

Рис.39. Диаграмма изменения АФК-генерирующей способности Нф и уровня IL-1 р периферической крови при РЯ контрольная ill стадия IV стадия группа

КИЯ МПО КБ —IFN-y

Рис.40. Диаграмма изменения ферментативной системы Нф и уровня IFN-y периферической крови при РЯ

Уровень IFN-y снижается и одновременно с этим снижается активность ферментов нейтрофилов периферической крови. Корреляционная связь по Спирмену между уровнем IFN-y и активностью миелопероксидазы и катионных белков сильная (г=0,80) (рис.39).

Увеличение активности кислой фосфатазы рассматривается как неспецифический признак воспаления и имеет, очевидно, компенсаторный характер из-за подавления аэробных механизмов бактерицидности. И корреляция между динамикой опухолевого процесса и варьированием уровня кислой фосфатазы в Нф крови средней силы (г=0,56).

Корреляционная зависимость количества CDlla+ нейтрофилов крови от стадии опухолевого процесса средняя (г=0,59), что, вероятно и является нарушения адгезивных способностей Нф и это является причиной снижения миграции их в АЖ.

Действие TNF-a на систему НГ приводит к усилению их адгезивных свойств. Поэтому, вероятно, повышение содержания TNF-a в асцитической жидкости при раке яичников сопровождается увеличением экспрессии антигена CDlla и CD 15 на нейтрофилах АЖ. Корреляционная связь между этими параметрами положительная сильная (г=0,80) (рис.41). шш CD11а езшз С015 —А—ДАН -в-TNF-a

80 70 60 50 S? 40 30 20 10 0

III стадия IV стадия

Рис.41. Диаграмма изменения количества CD11а+ и CD15+ Нф, ДАН и уровня TNF-a АЖ при РЯ

Нами установлено также, что в АЖ при РЯ увеличивается ДАН. Под влиянием TNF-a резко увеличивается образование Нф перекиси водорода и других свободных радикалов [227]. Корреляционные связи между этими параметрами сильные (г>0,90) (рис.41). Снижена способность нейтрофильных гранулоцитов экспрессировать CDllb антиген. Количество таких нейтрофилов асцитической жидкости коррелирует со средней силой со стадией опухолевого роста (г=0,39).

Таким образом, при прогрессировании рака яичников нейтрофильные гранулоциты становятся некомпетентными по отношению к опухолевым клеткам, а продуцируемые ими супероксидные радикалы разрушают не неопластические клетки, а их самих. Поэтому представляется перспективным развитие представлений о роли нейтрофилов в защите организма от раковой агрессии [229]. С осторожностью надо относиться к предложению стимуляции нейтрофилов при противораковой терапии [143]. Эффективность противоопухолевого действия нейтрофильных гранулоцитов будет определяться этиологией и стадией опухолевого процесса [136].

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Абакумова, Татьяна Владимировна, Ульяновск

1. Антонеева, И.И. Иммунопатология и иммунотерапия рака яичников. — Ульяновск, 2007. 144с.

2. Антонеева, И.И. Нейтрофильные гранулоциты в динамике прогрессии рака яичников //Клинич. лаб. диагн. 2007. - №№8. - С. 43-46.

3. Асадов, И.Д. Связь между фагоцитарной функцией и цитохимическими показателями нейтрофилов крови /И.Д.Асадов, Л.С.Нумерова, М.Э.Мирзоева //Лаб.дело. 1990. - №11. - С. 19-21.

4. Бакшеев, Н.С. Злокачественные новообразования женских половых органов. -М.: «Медицина», 1977. -328с.

5. Бахов, Н.И. Роль нейтрофилов в регуляции метаболизма тканей (обзор литературы) /Н.И.Бахов, Л.З.Александрова, В.Н.Титов //Лаб. дело. 1998. - №6. - С.3-12.

6. Бережная, Н.М. Нейтрофилы и иммунологический гомеостаз. Киев: Наукова думка, 1988. - 187с.

7. Бережная, Н.М. Система интерлекинов и рак. /Н.М.Бережная, В.Ф.Чехун. -Киев, 2000.-224с.

8. Блиндарь, В.Н. Функциональная характеристика нейтрофилов периферической крови больных раком яичников /В.Н.Блиндарь, Г.Н.Зубрихина, Е.А.Зарядьева, Т.Н.Заботина, Н.Н.Михайлова,

9. Т.В.Юдичева, Н.И.Лазарева, Н.Ю.Давыдова, А.Ю.Барышников. //Вест. РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМЕ. 2000. - №2. - С.46-52.

10. П.Блиндарь, В.Н. Адгезивная способность нейтрофилов периферической крови в норме и у онкологических больных /В.Н.Блиндарь, Г.Н.Зубрихина //Клинич. лаб. диагностика. 1998. - №5. - С.21-24.

11. Блиндарь, В.Н. Современные представления о роли нейтрофилов в противоопухолевом иммунитете /В.Н.Блиндарь, Г.Н.Зубрихина //Клинич. лаб. диагн. -2005. №8. - С.51-54.

12. Блохин, Б.М. Клиническое значение фактора некроза опухоли /Б.М.Блохин, Е.С.Дубровина, А.Ю.Щербина, В.В.Алдонина, Б.Л.Чертов //Гематол. и транфузиол. 1995. - Т.40, №5. - С.34-35.

13. Бородина, Т.М. Функциональная активность сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов у детей с разными цитологическими вариантами острого миелолейкоза //Педиатрия. 1996. - №8. - С.44-49.

14. Бут, П.Г. Антимикробная активность миелопероксидазы пероксидазосом нейтрофила /П.Г.Бут, Р.А.Муравьев, В.А.Фомина, В.В.Роговин //Изв. АН. Сер. Биологическая. 2002. - №3. - С.266-270.

15. Васильева, Г.И. Цитокины общая система гомеостатической регуляции клеточных функций /Г.И.Васильева, И.А.Иванова, С.Ю.Тюкавкина //Цитология. - 2001. - Т.43, № 12. - С.1101 -1111.

16. Васильева, Г.С. Биология трансплантируемых опухолей. Алма-Ата: Казахстан, 1982.-216с.

17. Винк, Д.А. Значение химических свойств оксида азота для лечения онкологических заболеваний /Д.А.Винк, Й.Водовоз, Д.А.Кук, М.С.Кришина //Биохимия. 1998. - Т.63, вып.7. - С.948-957.

18. Владимирская, Е.Б. Апоптоз и его роль в развитии опухолевого роста /Е.Б.Владимирская, А.А.Молчан, А.Г.Румянцев //Гематол. и трансфузиол. 1999. - Т.42, №5. - С.4-9.

19. Воробьёв, А.И. Руководство по гематологии. М., 2002. - 350с.

20. Гамалей, И.Ф. Перекись водорода как сигнальная молекула /И.Ф.Гамалей, И.В.Клюбин //Цитология. 1996. - Т.38, №12. - С. 1223-1247.

21. Герасимов, И.Г. Неоднородность нейтрофилов в фагоцитозе и респираторном взрыве //Клинич. лаб. диагн. 2004. - №6. - С.34-36.

22. Герасимов, И.Г. Функциональная неоднородность нейтрофилов //Клин, лаб. диагн. 2006. - №2. - С.34-36.

23. Герасимов, И.Г. Функциональная неравнозначность нейтрофилов крови человека: генерация активных форм кислорода /И.Г.Герасимов, Д.Ю.Игнатов //Цитология. 2001. - Т.43, №5. - С.432-436.

24. Герасимов, И.Г. Кинетика реакции восстановления нитросинего тетразолия нейтрофилами крови человека /И.Г.Герасимов, О.А.Калуцкая //Цитология. 2000. - Т.42, №2. - С. 160-165.

25. Гольдберг, В.Е. Цитохимические характеристики нейтрофильных лейкоцитов при раке легкого до и во время противоопухолевой химиотерапии /В.Е.Гольдберг, И.В.Кулагина, Б.Ю.Гумилевский, А.М.Дычай //Лаб. дело. 1991. - №10. - С.38-41.

26. Гранов, A.M. Канцерогенез и иммунобиология опухоли. Фундаментальные и клинические аспекты /А.М.Гранов, О.Е.Молчанов ///Вопр. онкологии. 2008. - Т.54, №4. - С.401-409.

27. Грязнова, И.М. Изменение активности естественных киллеров у больных с доброкачественными и злокачественными опухолями яичников /И.М.Грязнова, А.Н.Чередеева, О.В.Макаров //Акушерство и гинекология.- 1986. № 9. - С.39-43.

28. Дейчман, Г.И. Современные концепции иммунологических взаимоотношений опухоли и организма //Опухолевый рост как проблема биологического развития. М.: Наука, 1979. - С.208-231.

29. Долгушин, И.И. Нейтрофилы и гомеостаз. /И.И.Долгушин, О.В.Бухарин.- Екатеринбург, 2001. 278с.

30. Долгушин, И.И. Регуляторные пептиды нейтрофилов (нейтрофилокины) /И.И.Долгушин, А.В.Зурочка, А.В.Чукичев //Иммунология. 1995. - №4. -С.40-45.

31. Зайчик, А.Ш. Общая патофизиология (с основами иммунопатологии).

32. А.Ш.Зайчик, Л.П.Чурилов. СПб:: ЭЛБИ, 2008. - 656 с. Зб.Земсков, В.М. Изучение функционального состояния фагоцитов человека (кислородный метаболизм и подвижность клеток). - М., 1988. - 22с.

33. Иванова, Ю.В. Динамика экспрессии дифференцировочных рецепторов иммунокомпетентных клеток у больных с послеоперационным гнойным перитонитом /Ю.В.Иванова, И.В.Гусак, А.В.Москаленко /www.medsocium.com

34. Иммуноферментный анализ. /Под ред T.Hro, G.Lenhoff. Пер. с англ. М.: Мир, 1990.-444с.

35. Карпищенко, А.И. Медицинские лабораторные технологии (справочник).- С-Пб., «Интермедика», 1999. 656с.

36. Кашкин, К.П. Цитокины иммунной системы: основные свойств и иммунобиологическая активность //Клин. лаб. диагностика. 1998. - №11.- С.21-33.

37. Кетлинский, С.А. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления и иммунитета /С.А.Кетлинский, Н.М.Калинина //Иммунология. 1995. - №3. - С.30-44.

38. Клебанов, Г.И. Клеточные механизмы прайминга и активации фагоцитов /Г.И.Клебанов, Ю.А.Владимиров //Успехи соврем, биологии. 1999. -Т.119, №5. - С.462-475.

39. Комаров, Ф.И. От симптома к диагнозу. Асцит /Ф.И.Комаров, С.Д.Подымова //Клиническая медицина. 1997. - №4. - С.45-47.

40. Константинова, Н.А. Роль иммунных комплексов в реализации эффекторных функций компонентов комплемента /Н.А.Константинова, Р.В.Петров //Иммунология. -2001. №1. - С.75-79.

41. Кузнецов, В.Ф. Патофизиология дисфункций нейтрофилов. /В.Ф.Кузнецов, В.А.Черешнев. Киров, 1998. - 119с.

42. Кулинский, В.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред и защита //Соросовский образоват. журнал. 1999. - №1. - С.2-7.

43. Кучкина, Н.В. Роль ионтранспортирующих систем в активации «кислородного взрыва» нейтрофилов человека: влияние осмотичности среды /Н.В.Кучкина, С.Н.Орлов, А.Г.Чучалин //Биол. мембраны. 1994. -№2.-С. 174-179.

44. Лаврова, B.C. Нейтрофилы и злокачественный рост. /В.С.Лаврова, Н.В.Чердынцева, Н.В.Васильев. Томск: Изд-во Томского ун-та, 1992. -124с.

45. Мазинг, Ю.А. Нейтрофильные гранулоциты и системы защиты организма //Арх. патол. 1991. - №9. - С.70-73.

46. Мальцева, В.Н. Наблюдение в динамике модификации функциональной активности периферических нейтрофилов и её регуляции при росте опухоли in vivo /В.Н.Мальцева, Н.В.Авхачева, Б.Ф.Санталов, В.Г.Сафронова //Цитология. 2006. - Т.48, №12. - С.1000-1009.

47. Масычева, В.И., Даниленко Е.Д., Пустошилова Н.М., Белявская В.А. Создание средств стимуляции системы неспецифической резистентности. //Вест. Рос. АМН. 1998. - №4. - С.13-17.

48. Мацнер, Я. Исследование функций нейтрофилов в клинической медицине. I. Миграция нейтрофилов. //Гематол. и трансфузиол. 1993. -Т.38, №8. - С.42-45.

49. Мацнер, Я. Исследование функций нейтрофилов в клинической медицине. И. Адгезия, фагоцитоз и бактерицидность. //Гематол. и трансфузиол. 1993. - Т.38, №9. - С.39-42.

50. Маянский, А.Н. Реактивность нейтрофила. /А.Н.Маянский,

51. A.Н.Галиуллин. Казань: Изд-во Казанского ун-та, 1984. - 158с.

52. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. /А.Н.Маянский, Д.Н.Маянский. Новосибирск: Наука, 1989. - 344с.

53. Маянский, А.Н. Апоптоз нейтрофилов /А.Н.Маянский, Н.А.Маянский, М.И.Заславская, Н.М.Поздеев. //Иммунология. 1999. - №6. - С. 11-20.

54. Маянский, А.Н. Проблема управления фагоцитарными механизмами /А.Н.Маянский, Н.А.Невмятуллин, Н.А.Маянский //Журнал микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1995. - №3. - С.21-26.

55. Маянский, А.Н. Клинические аспекты фагоцитоза. /А.Н.Маянский, О.И.Пикуза. Казань: Магариф, 1993. - 192с.

56. Медведев, А.Н. Способ исследования поглотительной фазы фагоцитоза /А.Н.Маянский, В.В.Чаленко //Лаб. дело. 1991. - №2. - С.19-20.

57. Медицинская микробиология: Учебное пособие /Под ред. А.М.Королюка и В.Б.Сбойчакова. СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2002. - 267с.

58. Муравьев, Р.А. Желатиназные гранулы нейтрофильных гранулоцитов /Р.А.Муравьев, В.А.Фомина, В.В.Роговин //Изв. АН. Сер. Биологическая. 2003.-№4.-С.З89-394.

59. Нестерова, И.В. Фенотипические и функциональные характеристики нейтрофильных гранулоцитов и их сезонные изменения /И.В.Нестерова, И.Н.Швыдченко, Е.Ф.Фомичева, Е.Ю.Синельникова, Г.Г.Рожкова,

60. B.А.Роменская //Аллергология и иммунология. 2007. - Т.8, №1. - С.5.

61. Нестерова, И.В. Цитокиновая регуляция и функционирующая система нейтрофильных гранулоцитов /И.В .Нестерова, Н.В .Колесникова //Гематол. и трансфузиол. 1999. - Т.44, №2. - С.43-47.

62. Новиков, Д.К. Противоопухолевые реакции лейкоцитов. Минск: Наука и техника, 1988. - 280с.

63. Осипов, А.И. Образование гидроксильных радикалов при взаимодействии гипохлорида с ионами железа //Биофизика. 1993. - Т.38, №3'. - С.390-396.

64. Пальцев, М.А. Межклеточные взаимодействия. /М.А.Пальцев, А.А.Иванов. М.: Медицина, 1995. - 224с.

65. Пальцын, А.А. Некоторые вопросы современного учения о полиморфноядерных лейкоцитах //Арх. патол. 1998. - №8. - С.85-90.

66. Пауков, B.C. Структурно-функциональная характеристика нейтрофильных лейкоцитов и их роль в формировании воспалительных и иммунных процессов /В.С.Пауков, О.Я.Кауфман //Арх. патол. 1983. -№5.-C.3-13.

67. Пигаревский, В.Е. Зернистые лейкоциты и их свойства. — М.: Медицина, 1978.-128с.

68. Пигаревский, В.Е. О секреторной активности полиморфноядерных лейкоцитов //Арх. патол. 1982. - №5. - С.3-11.

69. Пигаревский, В.Е. Возрастные иммунодефициты системы нейтрофильных гранулоцитов /В.Е.Пигаревский, Ю.А.Мазинг, В.Н.Кокряков //Арх. патол. { 1990. - Т.52, №6. - С.43-46.

70. Пилиева, Е.В. Свойства нейтрофилов периферической крови у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких и раком легкого //Лаб. дело. 1981. - №10. - С.589-592.

71. Пинегин, Б.В. Простой метод оценки хемотаксиса и ингибиции хемотаксиса лейкоцитов периферической крови человека /Б.В.Пинегин, М.З.Саидов, И.Г.Ольков //Иммунология. 1994. - №1. - С.58-59.

72. Полевщиков, А.В. С-реактивный белок модулирует адгезивность и биоцидность нейтрофилов /А.В.Полевщиков, П.Г.Назаров, Л.К.Берестовая //Журнал микробиологии, эпидемиологи и иммунобиол. — 1994. №1. — С.69-72.

73. Потапнев, М.П. Цитокиновая сеть нейтрофилов при воспалении //Иммунология. 1995. - №4. - С.34-40.

74. Поцелуева, М.М. Генерация реактивных форм кислорода полиморфноядерными лейкоцитами в процессе развития гепатомы в брюшной полости животных /М.М.Поцелуева, А.В.Пустовидко, В.С.Алабин, Ю.В.Евтодиенко //Цитология. 1999. - Т.41, №2. - С.162-166.

75. Практикум по иммунологии: Учебное пособие /Под ред. И.А.Кондратьевой, В.Д.Самуилова. М.: Изд-во МГУ, 2001. - 224с.

76. Редчиц, Е.Г. Адгезия нейтрофилов: патогенетические и методические аспекты (обзор литературы) /Е.Г.Редчиц, В.О.Гузева //Лаб.дело. 1991.-№5. - С.4-8.

77. Ройт, А. Иммунология. //А.Ройт, ДжюБростофф, Д.Мейл. М.: Мир, 2000. - 592с.

78. Рудик, Д.В. Методы изучения процесса фагоцитоза и функционально-метаболического состояния фагоцитирующих клеток. /Д.В.Рудик, Е.И.Тихомирова. Саратов: Изд-во Сарат. Ун-та, 2006. - 112с.

79. Славинский, А. А. Цитоплазматическая зернистость нейтрофильных лейкоцитов //Клинич. лаб. диагн. 2002. - №3. - С.39-42.

80. Славинский, А.А. Компьютерный анализ изображения нейтрофильных лейкоцитов: миелопероксидаза. /А.А.Славинский, Г.В.Никитина //Клинич. лаб. диагн. 2000. - №1. - С.21-24.

81. Соловьева, Е.А. Ферментативная активность гранулоцитов периферической крови у больных злокачественными новообразованиями /Е.А.Соловьева, Г.Н.Зубрихина, Н.И.Кушнарева, А.К.Протасова //Вопр. онкол. 1973. - T.XIX, №6. - С.22-25.

82. Сорокин, A.M. Система интерферон естественные клетки-киллеры у больных с опухолями яичников. /А.М.Сорокин, Н.Б.Моисеева, А.Н.Чередеев, И.С.Фролова //Акушерство и гинекология. - 1988. - №5. -С.23-27.

83. Терещенко, И.П. Роль системы нейтрофильных гранулоцитов в формировании особенностей развития патологического процесса /И.П.Терещенко, А.П.Кашулина //Пат. физиол. и эксперим. терапия. — 1993. №4. - С.56-60.

84. Тотолян, А.А. Клетки иммунной системы. Нейтрофилы. /А.А.Тотолян, И.С.Фрейдлин. С-Пб.: Наука, 2000. - 231с.

85. Тутельян, А.В. Прайминг фагоцитов и его применение в системе оценки специфической активности иммунорегуляторных соединений /А.В.Тутельян, Г.И.Клебанов //Иммунология. 2004. - №1. - С.14-16.

86. Федотова, Г.Г. Морфофукциональное исследование нейтрофилов в условиях эндотоксикоза: автореферат. д.б.н. Саранск, 2007. - 39с.

87. Фишер, М.Е. Изменение крови при распространенных формах рака желудка /М.Е.Фишер, Е.Ф.Конопля //Клинич.медицина. 1980. - №11. -С.84-87.

88. Фрейдлин, И.С. Иммунная система и ее дефекты. — С-Пб.:НТФФ «Полисен». 1998. - 111 с.

89. Фрейдлин, И.С. Паракринные и аутокринные механизмы цитокиновой иммунорегуляции //Иммунология. 2001. - №4. - С.4-7.

90. Хаитов, P.M. Основные задачи клинической иммунологии по изучению функциональной активности фагоцитирующих клеток /Р.М.Хаитов, Б.В.Пинегин //Иммунология. 1995. - №3. - С.6-10.

91. Хаитов, P.M. Современные подходы к оценке основных этапов фагоцитарного процесса /Р.М.Хаитов, Б.В.Пинегин //Иммунология. — 1995. №4. - С.3-8.

92. Харкевич, Д.Д. Изучение опухолеиндуцированной иммуносупрессии у больных раком молочной железы /Д.Д.Харкевич, Е.Б. Полевая, З.Г.Кадагидзе //Эксперим.онкол. 1990. - Т. 12, №5. - С.117-119.

93. Хейхоу, Ф.Г.Дж. Гематологическая цитохимия: Пер. с англ./Ф.Г.Дж.Хейхоу, Д.Квалигино. -М.: Медицина, 1983. 465с.

94. Чердынцева, Н.В. Состояние нейтрофильных гранулоцитов у больных со злокачественными новообразованиями /Н.В.Чердынцева, И.В.Богдашин, С.А.Небера, Н.В.Васильев //Вопр.онкологии. 1989. - Т.35, №4. - С.429-433.

95. Шаталин, Ю.В. Про- и антиоксидантные системы крови и асцита при развитии гепатомы Зайделя и способы их коррекции: автореферат .к.б.н. -Пущино, 2008.-26с.

96. Шубич, М.Г. Выявление катионного белка в цитоплазме лейкоцитов с помощью бромфенолового синего //Цитология. 1974. - Т.16, №10. -С.1321-1322.

97. Шубич, М.Г. Щелочная фосфатаза лейкоцитов в норме и патологии. /М.Г.Шубич, Б.С.Нагоев. М.: Медицина, 1980. - 224с.

98. Шубич, М.Г. О специфичности цитохимического выявления кислой фосфатазы в нейтрофильных лейкоцитах /М.Г.Шубич, И.В.Нестерова //Лаб.дело. 1980. - №3. - С. 150-154.

99. Юшков, В.Г. Глюкозаминогликаны и стволовые кроветворные клетки в норме и при опухолевом росте //Стволовые клетки и опухолевый рост. Киев, 1985. - С.74-76.

100. Ярилин, А.А. Основы иммунологи. М.: Медицина, 1999. - 608с.

101. Abo, A. Activation of the NADPH oxidase involves the small GTP-binding protein p21racl. /A.Abo, E.Pick, A.Hall, N.Totty, C.G.Teahan, A.W.Segal//Nature. 1991 - Vol.353. -P.668-670.

102. Adam, J.K. Immune responses in cancer. /Adam JK, Odhav B, Bhoola KD. /J.K.Adam, B.Odhav, K.D.Bhoola //Pharmacol Ther. 2003. - Vol.99, №1.-P.l 13-132.

103. Amar, M. Molecular mechanisms involved in the inhibition of neutrophil locomotion by tumor cells. /M.Amar, T.Pham Huu, N.Amit, J.Hakim //Blood Cells. 1993. - Vol. 19, №1. - P. 177-184.

104. Aratani, Y. Severe impairment in early host defense against Candida albicans in mice deficient in myeloperoxidase. /Y.Aratani, H.Koyama, S.Nyui, K.Suzuki, F.Kura, N.Maeda //Infect Immun. 1999. - Vol.67, №4. - P.1828-1836.

105. Arnaout, M.A. Structure and function of the leukocyte adhesion molecules CD11/CD18. //Blood. 1990. - Vol.75, №5. -P.1037-1050.

106. Aryoshi, Y. Recombinant human granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) //Dept.Hematol.Chemother.Achi.Cancer Center. 1993. - Vol.20, №4. -P.541-549.

107. Au, B.T. Zymosan-induced IL-8 release from human neutrophils involves activation via the CDllb/CD18 receptor and endogenous platelet-activating factor as an autocrine modulator. //J. Immunol. 1994. - Vol.152, №11. -P.5411-5419.

108. Babior, B.M. Production, distribution, and fate of neutrophils /B.M.Babior, D.W. Gold //Williams Hematology. 5th ed. 1995. -P.773-779.

109. Babior, B.M. Investigating antibody-catalyzed ozone generation by human neutrophils. /B.M.Babior, C.Takeuchi, J.Ruedi, A.Gutierrez, P.Jr.Wentworth //Proc Natl Acad Sci USA.- 2003. Vol.100, №6. P.3031-3034.

110. Babior, B.M. NADPH oxidase: an update. //Blood. 1999. - Vol.93, №5. -P.1464-1476.

111. Baskic, D. Phagocytic activity and nitric oxide production of circulating polymorphonuclear leukocytes from patients with peritoneal carcinomatosis. /D.Baskic, L.Acimovic, A.Djukic et al. //Acta Oncol. 2003. - Vol.42, №8. -P.846-851.

112. Batandier, C. et al. Determination of mitochondrial reactive oxygen species: methodological aspects. /C.Batandier, E.Fontaine, C.Keriel, X.M.Leverve //J Cell Mol Med. 2002. Vol.6, №2. - P.175-187.

113. Beamer, N.B. Persistent inflammatory response in stroke survivors //Neurology. 1998. - Vol.50. - №6. - P. 1722-1728.

114. Bevilacqua, M.P. Endothelial-leukocyte adhesion molecules in inflammation and metastasis. /M.P.Bevilacqua, R.M.Nelson //Annu Rev Immunol. 1993. - №11. - P.767-804.

115. Binns, R.M. et al. In vivo E-selectin upregulation correlates early with infiltration of PMN, later with PBL entry: MAbs block both. /R.M. Binns, S.T.Licence, A.A.Harrison //Am J Physiol. 1996. - Vol.270, №1-2. - P. 183193.

116. Borregaard, N. Current concepts about neutrophil granule physiology. //Curr Opin Hematol. 1996. - Vol.3, №1. -P.l 1-18.

117. Borregaard, N. Granules of the human neutrophils polymorphonuclear leukocyte /N.Borregaard, J.B.Cowlend //Blood. 1997. - Vol.89, №10. -P.3503-3521.

118. Bru, A. et al. Pinning of tumoral growth by enhancement of the immune response. /A.Bru, S.Albertos, J.A.Lopez Garcia-Asenjo, I.Bra //Phys Rev Lett. 2004. - Vol.92, №23. - P.2381-401.

119. Cassatella, M.A. On the production of TNF-related apoptosis-indusing ligand (TRAIL/Apo-2L) by human neutrophils //J. Leukoc. Biol. 2006. -Vol.79, №6.-P.l 140-1149.

120. Chuluyan, H.E. Differential mechanisms of neutrophil and monocyte adhesion on neuroblastoma cells: CD 18 and VLA-4 integrins mediate adhesion to SK-N-SH, but not to SK-N-MC cell line. //J Neurosci Res. 2000. - Vol.60, №5. -P.649-655.

121. Clark, R.A. et al. The myeloperoxidase-hydrogen peroxide-halide system as effector of neutrophil-mediated tumor cell cytotoxicity. /R.A.Clark, S.Szot //J Immunol. 1981. - Vol.126, №4. - P. 1295-1301.

122. Clark, R.A. Activation of the neutrophil respiratory burst oxidase. //J Infect Dis. 1999. - Vol. 179, № 2. - P.309-317.

123. Clark, W.H.Jr. Model predicting survival in stage I melanoma based on tumor progression. //J Natl Cancer Inst. 1989. - Vol.81, №24. - P. 1893-904.

124. Cron, J. Phagocytic activity of leukocytes in tumors (clinical studies). //Neoplasma. 1975. - Vol.22. - №2. - P.211-223.

125. Das, U.N. Arachidonic acid as a mediator of some of the actions of phorbolmyristate acetate, a tumor promoter and inducer of differentiation. //Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids. 1991. - Vol.42. - №4. - P.241-244.

126. DeLeo, F.R. NADPH oxidase activation and assembly during phagocytosis /F.R.DeLeo, L.A.Allen, M.Apicella, W.M.Nauseef //J Immunol. 1999. - Vol.163, №12. - P.6732-6740.

127. DeLeo, F.R. Assembly of the phagocyte NADPH oxidase: molecular interaction of oxidase proteins. //J Leukoc Biol. 1996. - Vol.60, №6. - P.677-691.

128. Dinarello, C.A. Interleukin-1. //Adv Pharmacol. 1994. - Vol.25. -P.21-51.

129. Dransfield, I. Regulation of cell adhesion molecule expression and function associated with neutrophil apoptosis. Л .Dransfield, S.C.Stocks, C.Haslett//Blood. 1995. - Vol.85, №11.-P.3264-3273.

130. Droge, W. Free radicals in the physiological control of cell function. //Physiol Rev. 2002. - Vol.82, №1. - P.47-95.

131. Druker, В J. rel Is rapidly tyrosine-phosphorylated following granulocyte-colony stimulating factor treatment of human neutrophils. //J. boil. Chem. 1994. - Vol.269, №7. - P.5387-5390.

132. Enblad, G. The potential role of innate immunity in the pathogenesis of Hodgkin's lymphoma. /G.Enblad, D.Molin, I.Glimelius, M.Fischer, //Hematol Oncol Clin North Am. -2007. Vol.21, №5.-P.805-823.

133. Fearon, K.C.H. Elevated circulating IL-6 in associated with an acutephase response but reduced fixea hepatic protein synthesis in patients with cancer. //Ann Of Surgery 1991. - Vol.213, №1. - P.26-32.

134. Evans, R. Activation of the IL-1 pathway during amplification of immune responses in tumor-bearing mice. /R.Evans, T.M.Duffy //Cell Immunol. 1987. - Vol.105, №1. - P.86-98.

135. Forslund, T. Nitric oxide regulates the chemiluminescence from stimulated human neutrophils. /T.Forslund, T.Sundqvist //APMIS. 1995. -Vol.103, №11.-P.813-817.

136. Fujii, Y. In vivo antitumor effect of lymphokine-activated rodent polymorphonuclear leukocytes. /Y.Fujii, S.Kimura, S.Arai, F.Sendo //Cancer Res. 1987. - Vol.47, №22. -P.6000-6005.

137. Graf, M.R. IL-6 secretion by a rat T9 glioma clone induces a neutrophil-dependent antitumor response with resultant cellular, antiglioma immunity. /M.R.Graf, R.M.Prins, R.E.Merchant //J Immunol. 2001. - Vol.166, №1. -P.121-129.

138. Hampton, M.B. Inside the neutrophil phagosome: oxidants, myeloperoxidase, and bacterial killing. /M.B.Hampton, A.J.Kettle, C.C.Winterbourn //Blood. 1998. - Vol.92, №9. - P.3007-3017.

139. Heinecke, J.W. Is lipid peroxidation relevant to atherogenesis? //J Clin Invest. 1999. - Vol. 104, №2. - P. 13 5-136.

140. Henon, P.H. Functional abnormalities of neutrophils in cancer patients: inefficient phagocytosis and reveise endocytosis /P.H.Henon, I.Gerota, S.Palacios //Biomedicine. 1997. - Vol.27. - P.261-266.

141. Honn, K.V. Adhesion molecules and tumor cell interaction with endothelium and subendothelial matrix. /K.V.Honn, D.G.Tang //Cancer Metastasis Rev. 1992. - Vol.11, №3-4. - P.353-375.

142. Hughes, B.J. Recruitment of CD1 lb/CD18 to the neutrophil surface and adherence-dependent cell locomotion. /B.J.Hughes, J.C.Hollers, E.Crockett-Torabi, C.W.Smith //J Clin Invest. 1992. - Vol.90, №5. - P. 1687-1696.

143. Hwang, P.M. Three-dimensional solution structure of lactoferricin B, an antimicrobial peptide derived from bovine lactoferrin. /P.M.Hwang, N.Zhou, X.Shan, C.H.Arrowsmith, H.J.Vogel //Biochemistry. 1998. - Vol.37, №12. -P.4288-4298.

144. Igney, F.H. CD95L mediates tumor counterattack in vitro but induces neutrophil-independent tumor rejection in vivo. /F.H.Igney, C.K.Behrens, P.H.Krammer Hint J Cancer. -2005. Vol.l 13, №1. - P.78-87.

145. Ishikawa, F. New biodefense strategies by neutrophils. //Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 2005. - Vol.53, №3. -P.226-233.

146. Jablonska, E. iNOS expression and NO production by neutrophils in cancer patients. /E.Jablonska, W.Puzewska, M.Marcinczyk, Z.Grabowska, J.Jabionski //Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 2005. - Vol.53, №2. - P. 175179.

147. Junankar, S.R. Analysis of immune cell infiltrates during squamous carcinoma development. /S.R.Junankar, A.Eichten, A.Kramer, K.E.de Visser, L.M.Coussens //J Investig Dermatol Symp Proc. 2006. - Vol.l 1, №1. - P.36-43.

148. Kasimir-Bauer, S. Philadelphia chromosome-positive chronic myelogenous leukemia: functional defects in circulating mature neutrophils of untreated and interferon-alpha-treated patients. //Exp Hematol. 1994. -Vol.22, №5.-P.426-431.

149. Keel, M. Interleukin-10 counterregulates proinflammatory cytokine-induced inhibition of neutrophil apoptosis during severe sepsis. //Blood. — 1997. Vol.90. - P.3356-3363.

150. Kerr, M.A. The role of CD15-(Le(X))-related carbohydrates in neutrophil adhesion. /M.A.Kerr, S.C.Stocks //Histochem J. 1992. - Vol.24, №11.-P.811-826.

151. Kjeldsen, L. Subcellular fractionation of human neutrophils on Percoll density gradients. /L.Kjeldsen, H.Sengelov, N.Borregaard //J Immunol Methods. 1999. - Vol.232, №1-2. - P. 131-143.

152. Klaunig, J.E. The role of oxidative stress in carcinogenesis. /J.E.Klaunig, LM.Kamendulis //Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2004. - Vol.44. - P.239-267.

153. Klebanoff, S.F. Inflammation. /Klebanoff S.F., Eds I.J. Gallin New York, 1992.-P.541.

154. Klebanoff, S.J. Myeloperoxidase: friend and foe. //J Leukoc Biol. -2005. Vol.77, №5. - P.598-625.

155. Klebanoff, S.J. Oxygen metabolites from phagocytes //Inflanimation: basic principles and clinical correlates /By ed. J.I.Gallin, R.Snyderman. -Philadelphia, Lippincott Williams & Wilkins, 1999. - P.345-386.

156. Klebanoff, SJ. Reactive nitrogen intermediates and antimicrobial activity: role of nitrite //Free Radic. Biol. Med. 1996. - Vol.14, №2. - P.351-360.

157. Kokura, S. et al. Anti-tumor effects of hyperthermia plus granulocyte colony-stimulating factor. //Jpn J Cancer Res. 1996. - Vol.87, №8. - P.862-866.

158. Kondera-Anasz, Z. Metabolic activity of peripheral blood neutrophils in women with ovarian tumours //Ginekol Pol. 2004. - Vol.75, №8. - P.609-614.

159. Korenkiewicz, A. Nitroblue tetrazolium test in patients with neoplasma during surgical treatment. /A.Korenkiewicz, K.Merkiel, J.Prokopowicz //Neoplasma. 1983. - Vol.30, №5. - P.619-622.

160. Labro, M.T. Interference of antibacterial agents with phagocyte functions: immunomodulation or "Immuno-Fairy Tales"? //Clin.Microbiol.Rev. -2000.-Vol.13, №4.-P.615-650.

161. Langermans, J.A. Antimicrobial functions of mononuclear phagocytes. /J.A.Langermans, W.L.Hazenbos, R.van Furth //J Immunol Methods. 1994. -Vol.174, №1-2.-P.185-194.

162. Lee, M. Kinetics of tumor-induced murine neutrophilia. //Blood. 1979. - Vol.53, №4.-P.619-632.

163. Lehrer, R.I. Antimicrobial peptides in mammalian and insect host defence. //Curr OpinImmunol. 1999. - Vol.ll, №1. -P.23-27.

164. Lehrer, R.I. Defensins: antimicrobial and cytotoxic peptides of mammalian cells. /R.I.Lehrer, T.Ganz //Annu Rev Immunol. 1993. - №11. -P.105-128.

165. London, S.J. Myeloperoxidase genetic polymorphism and lung cancer risk. //Cancer Res. 1997. - Vol.57. - №22. - P.5001-5003.

166. Lotzova, E. Depression of murine natural killer cell cytotoxicity by isobutyl nitrite. //Cancer Immunol Immunother. 1984. - №2. - P. 130-134.

167. Malmberg, K.J. Effective immunotherapy against cancer: a question of overcoming immune suppression and immune escape? //Cancer Immunol Immunother. 2004. - Vol.53, №10. - P.879-892.

168. Mantovani, G. Medroxyprogesterone acetate reduces the in vitro production of cytokines and serotonin involved in anorexia/cachexia and emesis by peripheral blood mononuclear cells of cancer patients. //Eur J Cancer- 1997. Vol.33, №4. - P.602-607.

169. Matzner, Y. Subcellular localization of heparanase in human neutrophils. /Y.Matzner, I.Vlodavsky, M.Bar-Ner, R.Ishai-Michaeli, A.I.Tauber //J Leukoc Biol. 1992. - Vol.51, №6. -P.519-524.

170. Mocellin, S. Cancer vaccines: the challenge of developing an ideal tumor killing system. //Front Biosci. 2005. - №10. - P.2285-305.

171. Moilanen, E. Interactions between synthesis of platelet-activating factor and leukotriene B4 in isolated human polymorphonuclear leukocytes. //Inflammation. 1993. - Vol.17, №6. -P.705-714.

172. Morel, F. Human neutrophil gelatinase is a collagenase type IV. /F.Morel, S.Berthier, M.Guillot, P.Zaoui, C.Massoubre, F.Didier //Biochem Biophys Res Commun. 1993. - Vol.191, №1. -P.269-74.

173. Mosczynski, P. Enzymes of peripheral neutrophils in patients with stomach cancer //Pol Tyg Lek. 1983. - Vol.38, №13. - P.397-9.

174. Mueller, M.M. Friends or foes bipolar effects of the tumour stroma in cancer. //Nat Rev Cancer. - 2004. - Vol.4, №11.- P.839-49.

175. Nakao, S. et al. Infiltration of СОХ-2-expressing macrophages is a prerequisite for IL-1 beta-induced neovascularization and tumor growth. /S. Nakao, T.Kuwano, C.Tsutsumi-Miyahara, S.Ueda, Y.N.Kimura //J Clin Invest.- 2005. Vol. 115, №11. - P.2979-91.

176. Naylor, M.S. In situ detection of tumour necrosis factor in human ovarian cancer specimens. //Eur J Cancer. 1990. - Vol.26, №10. - P. 10271030.

177. Nilsen, E.M. Cytokine profiles of cultured microvascular endothelial cells from the human intestine. //Gut 1998. Vol.42, №5. - P.756-64.

178. Norman, R.J. Cytokines in the ovary: pathophysiology and potential for pharmacological intervention. /R.J.Norman, M.Brannstorm //Pharmacol Ther. — 1996. Vol.69, № 3. - P.219-236.

179. O'Beirne, J.P. The role of the immune system in the control of hepatocellular carcinoma. //Eur J Gastroenterol Hepatol. 2004. - Vol.16, №12. -P.1257-1260.

180. Oka, M. The influence of IL-6 on the growth of human esophageal cancer cell lines. //J Interfer Cytokine Res. 1996. - Vol.16. - P.1001-1006.

181. Owen, C.A. The cell biology of leukocyte-mediated proteolysis. //J Leukoc Biol. 1999. - Vol.65, №2. - P. 137-50.

182. Pabst, M.J. Priming of neutrophils //Immunopharmacology of neutrophils /By ed. P.J.Hellewell, T.J.Williams London, Academic. Press, 1994.-P. 195-221.

183. Pages, F. Effector memory T cells, early metastasis, and survival in colorectal cancer. //N Engl J Med. 2005. - Vol.353, №25. - P.2654-2666.

184. Panzer, S. Interaction of IL-1 beta, IL-6 and tumour necrosis factor-alpha (TNF-alpha) in human T cells activated by murine antigens. //Clin Exp Immunol. 1993. - Vol.93, №3. -P.471-478.

185. Pericle, F. Direct killing of interleukin-2-transfected tumor cells by human neutrophils. /F.Pericle, R.A.Kirken, P.K.Epling-Burnette, D.K.Blanchard, J.Y.Djeu //Int J Cancer. 1996. - Vol.66, №3. - P.367-373.

186. Podrez, E.A. Myeloperoxidase-generated reactive nitrogen species convert LDL into an atherogenic form in vitro. //J Clin Invest. 1999. -Vol.103, №11. -P.1547-1560.

187. Pustovidko, A.V. Generation of reactive oxygen species by polymorphonuclear leukocytes and its modulation by calcium ions during tumor growth. /A.V.Pustovidko, M.M.Potselueva, Y.V.Evtodienko //IUBMB Life. 2000. - Vol.50, №1. - P.69-73.

188. Quayle, J.A. Cytokine expression by inflammatory neutrophils. //FEMS Immunol Med Microbiol. 1994. - Vol.8, №3. - P.233-239.

189. Reali, E. Interferon-gamma enhances monoclonal antibody 17-1A-dependent neutrophil cytotoxicity toward colorectal carcinoma cell line SW11-16. /E.Reali, A.L.Guiliani, S.Spisani //Clin. Immunol. Immunopath. 1994. -Vol71, №1. -P.105-112.

190. Romani, L. Neutrophil production of IL-12 and IL-10 in candidiasis and efficacy of IL-12 therapy in neutropenic mice. //J Immunol. 1997. - Vol.158, №11.- P.5349-5356.

191. Saito, H. Visualization of oxidative processes at the cellular level during neutrophil-mediated cytotoxicity against a human hepatoma cell line, HCC-M. /Н.Saito, D.Fukumura, I.Kurose, M.Suematsu, S.Tada //Int J Cancer. 1992. -Vol.51, №1.-P.124-129.

192. Sapone, A. Induction and suppression of cytochrome P450 isoenzymes and generation of oxygen radicals by procymidone in liver, kidney and lung of CD1 mice //Mutat Res. 2003. - Vol.527. - №1-2. - P.67-80.

193. Sato, T. The neutrophil as an information transmitter in tumor inhibition by a streptococcal biological response modifier, OK-432. /T.Sato, Y.Midorikawa, T.Yamashita, A.Araki, F.Sendo //Cancer Immunol Immunother. 1996. - Vol.43, №2. - P.77-86.

194. Schwarz, R. Granulocytosis and colony stimulating factor (CSF) produced by mouse lymphoma cells with low and high metastatic capacity //Aspecte Klin. Oncol. Stuttgart. 1984. - №9. - P.873.

195. Segal, A.W. How neutrophils kill microbes. //Annu Rev Immunol. -2005. Vol.23. -P.197-223.

196. Smolen, F.E. Function of neutrophils /F.E.Smolen, L.A.Boxer //Williams Hematology. 5th ed. 1995. -P.753-765.

197. Shankar, S.L. Gas6/Axl signaling activates the phosphatidylinositol 3-kinase/Aktl survival pathway to protect oligodendrocytes from tumor necrosis factor alpha-induced apoptosis. //J Neurosci. 2006. - Vol.26, №21. - P.5638-5648.

198. Stevens, P. Interleukin-2 increases the oxidative activity and,induces migration of murine polymorphonuclear leukocytes in vivo. /P.Stevens, D.E.Piazza ИШ J Immunopharmacol. 1990. - Vol.12, №6. - P.605-611.

199. Sun, Z. Role of imbalance between neutrophil elastase and alpha 1-antitrypsin in cancer development and progression /Z.Sun, P.Yang //Lancet Oncol. 2004. - Vol.5, №3. - P.l 82-90.

200. Swann, J.B. Immune surveillance of tumors /J.B.Swann, M.J.Smyth //J Clin Invest. 2007. - Vol.117, №5. - P.l 137-1146.

201. Szuster-Ciesielska, A. Reactive oxygen species production by blood neutrophils of patients with laryngeal carcinoma and antioxidative enzyme activity in their blood. //Acta Oncol. 2004. - Vol.43, №3. - P.252-258.

202. Tartour, E. Prognostic value of cytokine and Fcg-receptor assays in oncology. //Immunol Lett 1995. - Vol.44. - P. 145-148.

203. Ueta, E. Influence of inductive chemoradiotherapy on salivary polymorphonuclear leukocyte (SPMN) functions in oral cancer. /E.Ueta,

204. Wakimoto, H. Effects of innate immunity on herpes simplex virus and its ability to kill tumor cells. //Gene Ther. 2003. - Vol.10, №11.- P.983-990.

205. Walz, A. Ca2+.i changes and respiratory burst in human neutrophils and monocytes induced by NAP-l/interleukin-8, NAP-2, and gro/MGSA. /E.J.von Asmuth, J.F.Leeuwenberg, C.J.van der Linden, W.A.Buurman //J Leukoc Biol. 1991. - Vol.50, №3. - P.279-286.

206. Watari, K. Hyperfunction of neutrophils in a patient with BCR/ABL negative chronic myeloid leukemia: a case report with in vitro studies. //Cancer. -2000.-Vol.89, №3. -P.551-560.

207. Waugh, D.J. The interleukin-8 pathway in cancer. //Clin. Cancer Res. -2008. Vol. 14, №21. - P.6735-6741.

208. Werner, E. GTPases and reactive oxygen species: switches for killing and signaling. //J Cell Sci. 2004. - Vol.117, № 2. - P. 143-153.

209. Willems, J. Human granulocyte chemotactic peptide (IL-8) as a specific neutrophil degranulator: comparison with other monokines. /J.Willems, M.Joniau, S.Cinque, J.van Damme //Immunology. 1989. - Vol.67, №4. -P.540-542.

210. Witko-Sarsat, V. Neutrophils: molecules, functions and pathophysiological aspects. /V.Witko-Sarsat, P.Rieu, B.Descamps-Latscha et al. //Lab Invest. 2000. - Vol.80, №5. -P.617-653.

211. Wu, Q.D. Human neutrophils facilitate tumor cell transendothelial migration. /Q.D.Wu, J.H.Wang, C.Condron, D.Bouchier-Hayes, H.P.Redmond //Am J Physiol Cell Physiol. 2001. - Vol.280, №4. - P.814-822.

212. Zhang, Q. Adoptive transfer of tumor-reactive transforming growth factor-beta-insensitive CD8+ T cells: eradication of autologous mouse prostate cancer. /Q.Zhang, X.Yang, M.Pins et al. //Cancer Res. 2005. - Vol.65, №5. -P.1761-1769.

213. Zhang, M. Expression genetics: a different approach to cancer diagnosis and prognosis //Trends Biotechnol. 1998. - №2. - P.66-71.

214. Zivkovic, M. Oxidative burst and anticancer activities of rat neutrophils. /M.Zivkovic, M.Poljak-Blazi, G.Egger et al. //Biofactors. 2005. - Vol.24, №1-4. -P.305-312.

215. Zou, W. Immunosuppressive networks in the tumour environment and their therapeutic relevance. //Nat Rev Cancer. 2005. - №4. - P.263-274.

Информация о работе

Абакумова, Татьяна Владимировна
кандидата биологических наук
Ульяновск, 2009
ВАК 03.00.13

Диссертация

Функциональное состояние нейтрофильных лейкоцитов периферической крови и асцитической жидкости при раке яичников - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы