Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изменение клеточного цикла при лучевом поражении и карцерогенезе

ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Изменение клеточного цикла при лучевом поражении и карцерогенезе"

Г ! Ь од

г.мп »аз1»

министерство здравоохранения и медпрошлен1шпти рф

центральный научно-исследовательский рентгено-рядиологическии институт

На правах рукописи

токалоб Сергей Вениаминович

УДК: 576.3:535.37:539Л2.04.

изменение клеточного цикла при ЛУЧЕВОМ п0ра8ений V. канцерогенезе

Специальность 03.00.01. - радиобиология

автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических надв

Санкт-Петербцрг 19Э4

-;>КТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕЛПРОИаИЯЬНМОСТИ РФ

центральный нпячно-исследовйтельскии

РЕНТГЕНО-РАЛИОЛОГИЧЕСШ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

токалов Сергей Вениаминович

УЛК: 5УВ. 3:535. ЪУ; 53.4.12.04.

ИЗМЕНЕНИЕ КЛЕТОЧНОГО цикла ПРИ ЛУЧЕВОМ 1ШРА1ЕНИИ И канцерогенезе

Снеииальность 03.00.01. • радиобиология

11 В Т О Р Е Ф Е Р А Т диссертации па соискание ученой степени доктор!) оиологичоских пацк

Санкт Нетериирг 13!14

Работа выполнена в Центральном научно — исследовательском рентгено - радиологическом институте Министерства Здравоохранения и ^промышленности РФ (директор - доктор медицинских наук, профессор A.M. Гранов )

Научный консультант - доктор медицинских наук Й.С. Ягунов

Официальные оппоненты: член-корреспондент АМН РФ, доктор медицинских наук, профессор К. П. Хансон, . доктор медицинских наук, Н. Н. Мамаев, доктор медицинских наук, Г. М. Жармнов

Ведущая организация - Институт биологической физики

АН РФ

Защита состоится " 27 " ивня 1994 г. на заседании Специализированного совета Д 074.23.01 Центрального научно-исследовательского рентгено-радиологического института Министерства Здравоохранения и Медпромышленности РФ (188646, С.-Петербург, Песочный-2, Ленинградская ул., 70/4).

С диссертацией моено ознакомиться в библиотеке института Автореферат разослан "26" мая 1994 г.

Ученый секретарь Специализированного совета,

доктор медицинских надк; -------------------------------------------------------------

профессор'- Л.И. Корытова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Одной из наиболее актуальных проблем современной радиобиологии является исследование нарунения визненного цикла в обновляющихся популяциях клеток в ранние и отдаленные сроки после действия ионизирующей радиации с розничным пространственно-временным распределением дозы. Тормояе-■ше роста тканей при облучении, открытое одной из первых в'.ря-[Щ радиобиологических закономерностей (Becquerel Н.,Ш1). остается по-преанему в центре внимания радиобиологов, как одна из самых существенных сторон патогенеза лучевого поранения.

Эта проблема касается различных сторон лучевого эффекта как для нормальных, так и для опухолевых клеток при облучении организма , процессов пострадиационного восстановления и модификации поранения различными агентами (Ярмоненко С.П..1990).

В последнее время, особенно после аварии на Чернобыльской АЗС-в 1986 г., первостепенное значение получило изучение отдаленных последствий лучевого воздействия радиации в малых дозах, при малых мощностях доз, а такзе сочетанного действия облучения и других вредных факторов внешней среды (Кузин А.й., 1989: Гуськова А.Н.,1990).

йежду тем. многие вопросы в этой области erçe далеки от своего решения. Так, до конца не ясно, чем отличаются изменения в системе кроветворения, в частности, изменения клеточного цикла в отдаленные сроки после острого и хронического облучения, в чем особенность сочетанного действия факторов лучевой и нелучевой природы, как соотносятся наблюдаемые эффекты с изме-

нениями, происходящими в организме при естественном старении. Актуальном остается также разработка способов биологиче-кой индикации радиационных эффектов б отдаленные сроки r широком диапазоне доз (Комар В.Е., 1932 ).

Как известно,, нарушение жизненного цикла'оьичио сопровождает малигнизацию клеток и является неотъемлемым признаком канцерогенеза. Наличие атипичных клеток издавна считается характерным для опухолевого роста (Вирхов Р.,1865 ). К настоящему времени на биопсийнои и операционном материале для новообразований различной локализации доказана диагностическая и прогностическая значимость таких параметров, как анзуплсидия и пролиферотивная активность, определяемых из распределения опу-ходоинх клеток по содержанию ЛИК (Barlogie S..et.al.,1Э73; Fi rend: 4. .e! .a) . ,1430: Tribukait. fi. ,19'Jl ). Однако и в этой оплаегк ш.таете;,i ащг иного нерешенных проблем. Одной из них м'-луотi пстреоность в разработке нових методов для аналияо npfuiiiCiiipaiiiiH опухоли.

В атом плане перспективен представляется применение современник, аисокоскоростных, автоматизированных методов, одним из которых является проточная цк-ометрия, позволяющая анализировать распределение клеток по фазам жизненного цикла, определять долю анэцплоидных элементов, подсчитывать процентное содержание ДИК-синтезирувдх клеток (Ягунов ft.С., 1987). В иаией стране такой подход пока еще не получил широкого распространения (Печатников В.fi.,1991), хотя в последние годы за рубежом он активно применяется для реиения многих задач радиобиологии и онкологии (Barlogie В.,et.al.,1983: Ualet J..1867: Coon 3.S., et.ai.,1389: fidolfsson З.Й..et.al.,1991: Tribukoit В..1991; Halberg F..et.al..1992).

Цель исследования.

Установить закономерности изменения клеточного цикла т лучевом поранении и канцерогенезе.

Задачи исследования.

в сравнительном плане исследовать изменения в распределении <елокариоцитов крыс по фазам жизненного цикла в ранние и от-зленные срони после действия ионизирующей радиации с различим пространственно-временным распределением дозы и при естес-зенном старении животных.

исследовать нарушение жизненного цикла клеток костного иозга эыс, переживших сочетанное воздействие хронического облучения

ионов тяжелых металлов.

разработать тест для биологической индикации лучевого пора-гния организма в отдаленные сроки после действия излучения с злой мощностью дозы.

разработать скоростные автоматизированные модификации мето-зв анализа опухолевой прогрессии для новообразований отдель-¡IX локализаций.

провести сравнительный анализ показателей, характеризующих 4зненный цикл миелокариоцитоз человека в норме и при онкоза-элеваниях кроветворной и лимфатической тканей.

Научная новизна.

I. Проведен сравнительный анализ клеточности и распределил миелокариоцитов крыс при лучевом и естественном старении

1в0тннх .

а) Подтверждены, полученные ранее автором, данные о тон.

что распределение клеток костного мозга по фазам жизненного цикла у интакных крыс имеет суточный и годовой ритмы.

Впервые установлено, что с возрастом животных происходит увеличение среднегодовых значений процентного содержания мие-локариоцитов в 5+Б2+М фазах жизненного цикла, которое сопровождается затуханием годовых колебаний этого показателя.

б) Впервые методом проточной цитофлуориметрии дана оценка изменения распределения миелокариоцитов по фазам жизненного цикла в ранние и отдаленные сроки после окончания лучевого воздействия с различным пространственно-временнным распределением дозы. Установлено наличие диапазона мощностей доз облучения при которых наблюдается устойчивое изменение в распределении миелокариоцитов костного мозга по фазам жизненного цикла, вырааавщееся в увеличении процентного содержания клеток костного мозга в Б Фазе и сохраняющееся практически до конца жизни животных. Показано, что наблюдаемый эффект проявляется в ранние сроки после окончания воздействия, зависит от дозы и мощности дозы облачения, превышает изменения, наблюдаемые у интактных крыс.

в) Получены новые данные при исследование нарушения распределения миелокариоцитов крыс по фазам жизненного цикла в ранние и отдаленные сроки после окончания сочетанного хронического действия ионизирующей радиации и ионов тяжелых металлов .

II.а) Впервые в отечественной практике разработан ряд методов анализа клеток из биологических яидкостей на основе регистрации ростовых характеристик опухолей. При апробации на большом клиническом материале показана их ценность для диагностики, прогноза и мониторинга злокачественных новообразова-

ний у человека.

б) Разработан неинвазивный метод дифференциальной диагностики опухолевых заболеваний предстательной яелезк и мочевого пузыря.

в) Обнаружено наличие атипичных клеток, выражающееся в расщеплении первого пика в распределении клеток костного мозга. лимфоидннх элементов лимфатических узлов и лейкоцитов периферической крови по содержанию ДНК у ряда больных страдающих злокачественными новообразованиями лимфатической и кроветворной ткани.

Теоретическая и практическая значимость.

На большом экспериментальном материале выявлены некоторые закономерности изменения распределения клеток костного мозга крыс по фазам кизненного цикла в ранние и отдаленные сроки после острого (тотального и субтотального), пролонгированного и хронического облучения с постоянной мощностью дозы в иироком диапазоне доз и мощностей доз, хронического лучевого воздействия с уменьиапщейся мощностью дозы, сочетанного хронического воздействия облучения и ионов тяжелых металлов, а также при естественном старении животных.

Практическая значимость работы заключается в разработке способа индикации лучевого пораиения в отдаленные сроки после воздействия с низкими иопностями доз.

Разработаны высокоскоростные автоматизированные методы предварительной диагностики, прогноза, оценки эффективности и корректировки лечения при некоторых опухолевых заболеваниях у человека.

Указанные методы внедрены в практику и на протяжении ряда

лет используются в клинических подразделениях ЦНИРРИ Миндзрава и Медпрома РФ.

По теме диссертации опубликовано 36 работ.

Положения. Еиносииые на защита.

1. Зависимость распределения клеток костного мозга крыс по Фазам аизненного цикла от дозы, мощности дозы и сроков после окончания облучения.

2. Суточные и годовые колебания и возрастные изменения распределения клеток костного мозга по фаза« кизиенного цикла у интактных животных.

3. Характеристики распределения клеток из биологических кидкостей по содеряанию ДНК в норме, при доброкачественных процессах и злокачественных опухолях человека. Их использование для дифференциальной диагностики.

Апробация работы.

Основные материалы диссертации и отдельные ее результаты были доложены и обсуждены на III и IY Всесоюзных рабочих совещаниях по проточной цитометрии (соответственно - Гатчина,1985; Пуцино,1388 ). на IX и X Всесоюзных конференциях "Восстановительные и компенсаторные процессы при лучевых поражениях" (Ленинград, 1986; С.-Петербург,1992 ), на Всесоюзной научной конференции "Актуальные вопросы экспериментальной и клинической рентгенорадиологии"(Ленинград,1988), на I Всесоюзном радиобиологическом съезде (Москва,1989), на Всесоюзной научной конференции "Поражение и восстановление кроветворения при острой лучевой болезни'ЧМосква, 1990), на I Всесоюзном симпозиуме "Мо-лккулярно-клеточнае механизмы хронического (внешнего и внут-

еннего) действия ионизирующих излучений но йиопоптские истеми'Ч Пущине.1390 ), на Есесокзной конференции "Влияния ма-нх уровней радиации на организм человека я аивотчих'Ч Ки-в.ИйП. на Всесоюзной конференции "Современние д^стиаеаия едицинской радиологии";С.-Петербург,1993 \ на заседаниях сек-,ии радиобиологии Ленинградского научного обществ-! радиологов рентгенологов (Ленинград,1983,1930,1991). на заседании сакли биологической физика Ленинградского научного общества стествоиспатателей (Ленинград,!983), на заседании Яенинг-адского отделения Всесоюзного общества урологов (Ленинг-ад. 1 992 ).

Разработанная аппаратура экспонировалась на международных ыставках в. ГДР (Лейпциг, 19В.Э) и.в Финляндии (Турку, 1989).

Диссертация апробирована'на меяотдельческой научной кон-еренции Центрального научно-исследовательского рентгено-ради-логичя^кого института Министерства Здравоохранения и Медпро-ышленности РФ 15 апреля 1994 г.

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, аналитического обзора итературы, описания материалов и методов исследования. 3 глав езультатов собственных данных и их обсуждения, заключения, ыводов и указателя цитированной литературы.

Диссертация излокена на 236 машинописных страницах, со-ераит 21 таблицу и 25 рисунков. Библиографический .указатель ключает 333 наименований печатных работ (192 отечественных и 41 иностранных).

Работа выполнена в лаборатории отдаленной лучевой патоло-ии ЦНИРРИ МЗ и МП РФ ( рук.- д.м.н. ft,С. Ягунов )

МйТЕРШ И ОСНОВНЫЕ МЕТПДи ИССЛЕДОВАНИЯ

Аппаратура.

Экспериментальны;; «г.следт^- чя. приведенные в работе., выполнены с применением проточного цитммцориметра. специальш разработанного для этих целей (Ягднвя й.С..Токолог* С.В.,1986). Аля препаративных целей использовали стандартное оборудование., обычно применяемое в лабораторных условиях.

Лабораторные животные.

Объектами исследования служили самцы нелинейных белый крыс в возрасте 3 мес, массой 1Н0-250 г (возраст и масса указаны к началу экспериментов) разводки вивария ЦНИРРДО КЗ МП РФ- 5280 животных и белых беспородных мышей, массой 18-20 г разводки питомника Рапполово - 800 еивотныу. . Все животные содержались в обычных условиях вивариума без ограничения корма и питья. В процессе хронического облучения крысы находились в блоке с искусственным освещением. Соответственно, на срок облучения контрольная группа яивотных также находилась в помещении с адекватным искусственным световым реккмэм. в котором светлое время суток составляло 7-Й часов.

Исследуемый материал.

Материалом для экспериментальной работы служили миелока-риоциты крыс и клетки перевиваемой мышиной гипердиплоидной аоцитиой карциномы Эрлиха (йКЭ).

Изучали также клетки костного мозга, лейкоциты периферический крови, лимфоидные элементы из биоптатов лимфоузлов, клетки из асцитичсской жидкости и осадков мочи 545 пациентов.

аходившихся в клинике ЦНИРРИ МЗ МП РФ по поводу различных он/

ологических заболеваний С Таблица 1). Всего было проведено 867 аблюдений. При анализе биологических жидкостей брали 2-3 про-ы. В ряде случаев проводили многократное обследование больных процессе лечения. В каждой пробе клетки обрабатывали и ана-изировали как самостоятельное наблюдение. Во всех случаях об-аботку клеток проводили в день взятия материала. Всего по линическому материалу было проанализировано 1328 гистограмм аспределения клеток по содерканию ДНК.

Взятие материала.

Миелокариоциты получали пункцией большеберцовой кости аркотизированных эфиром крыс. При исследовании ЙКЭ материал ля анализа получали аспирацией асцитичесной жидкости из бркш-ой полости ыыпей с развивающейся опухолью.

Онкологический материал поступал из различных подразделе-ий клиники ЦНЙРРИ МЗ МП РФ. Миелокариоциты брали в количестве О мкл из взвеси клеток, которую получали стернальной пункцией этрудники отделения лучевой терапии системных заболеваний, доводимой ими для уточнения первичного диагноза. Лейкоциты зриферической крови в количестве 20 мкл полдчали при взятии зови для клинического анализа, который проводили сотрудники пинико-биохимической лаборатории.

Клетки из асцитической жидкости гинекологических больннх зступали в виде взвеси в количестве 10 мл из отделения луче-эй терапии гинекологических заболеваний.

Моча больных с патологией мочевыделительной системы в ко-ччестве 10 мл поступала из отделения рентгено-эндоваскулярной оперативной урологии.

Таблица 1. Характеристика клинического материала

Заболевание Объект исследования Числе случаев

Лейкозы миелокариоцитн 40

лимфоидные элементы лимфоузлов • 17

Лимфогранулематоз ■ миелокариоцитн 104

лейкоциты периферической крови 77

......~......... ......" Неходякинские ЛИМфСМЫ линфоиднве элементы .лимфоузлов ¡1

■мйелокариоцитр 53

лейкоциты периферической крови 43

Злокачесивенние опухоли яичников клетки из асцитической жидкости 42

Опухоли почек клетки И 3 о с а д к а мочи 16

Опухоли предстательной яелезы 57

Опухоли кочевого пузыря 18

Хронический пиелонефрит *) 11

Контроль (доноры) лейкоциты периферической крови 8

Контроль **) лиыфоидные элементы лимфоузлов И

Контроль ■##*) миелокариоциты 12

Контроль ****) клетки из осадка мочи 25

ИТОГО • 545

*) случаи, при которых по клиническим данным установлен диагноз хронического пиелонефрита при отсутствии иной патологии со стороны мочеполовой системы.

**) случаи, при которых по морфологическим данным признаков опухолевого процесса не обнаруаено,

*г*) случаи, при которых по клиническим и цитологическим данным нарушений со стороны гемопоэза не сбнарунено.

****) случаи, при которых по клиническим данным отсутствовала патология со стороны мочеполовой системы.

ПоДД'фК.ЧПИП ЫТаММЛ ПК'1 .

Оиухолевн« клетки пассировали макам интраперитонеально. рапспллнтацию производили 0.,; мл асцитической жидкости, со-ерж/цей 1 млн клеток, на 7 день развития опухоли. Для дости-ения нужной концентрации клеток в инокуляте последний резво-ллн при необходимости физиологическим раствором (0.97. НаС) ). цодолжительнпсть жизни мышей с АКЗ с момента прививки опухоли а.танл'лла 14 (В дней.

Методы исследования.

Анализ распределения клеток по содержанию ДНК проводили ¡толом проточной цитофлуориметрии. Отработка методики окраски шток, модельные исследования возрастных изменений и постра-1ационной цитодинамики распределения клеток по содержанию ДНК ювели на клетках ЙКЗ. Остальные исследования выполнили оСчце-)инятыми методами.

Фиксация и окраска клеток.

Для определения содержания ДНК 20 мкл клеточной взвеси азу же после получения материала помещали в 1 мл 25% этанола . Физиологическом расстворе, содержащем 2 мкг ДНК-специфич-го красителя НоесЬз1-33258 (Н-33253) и тщательно переиешива-(Иеззе и.,1982). При анализе содержимого асцитической жид-сти, плевральных экссудатов и мочи, взвеси клеток из опера-онного материала, лимфоидных элементов лимфоузлов клетки едварительно осаждали центрифугированием, а затем ресуспен-ровали в 1 мл указанного раствора.

Методы облучения животных.

1. Рентгеновское облучение мыией-опухоленосителей в дозах 4. 6, 8, 10, 15, 20 Гр осуществляли на аппарате РУМ-17 (на-ажение 200 кВ, сила тока 15 мА, фильтры 0.5 мм Си +1.0 мм

А1, мл от 13 до 17 мГр/с).

2. Острое тотальное гамма-облучение ( Сз) крыс в доза; 1, ?., 4, 5, 6, 8 Гр _сМД - 3,0 сГр/с) проводили в 11-12 час дн; на установке "ИГУР-1". Животных обличали в квадратных кассета; Распределение дозы по ячейкам кассеты было относительно равномерным, и расхождение по дозе' составляло не более ТА.

3. По условию эксперимента отдельные группы крыс через 12 и 18 кеб после первичного воздействия подвергали дополнительному облучению на установке "ИГУР-1" в дозе 1 Гр (ИД = 3.0 сГр/с). Остальные условия облучения сохраняли неизменными.

4. Пролонгированное гамма-облучение крыс в дозе 2 Гр проводили на установке "ИГУР-1" ( МД - 0.28 и 1.1 мГр/с). Осталь-нне условия оолучения сохраняли неизменными.

5. Острое, субтотальмое облучение крыс в дозе 4 Гр осу-аествляли на аппарате "ЛУЧ" (60Со, МД = 15 мГр/с). В этом'случае в качестве экранов использовали набор свинцовых кубиков (толщина 100 мм), с помощью которых формировали поле облучения. экранируя голову, передние и задние конечности. При этом крысы находились под нембуталовнм наркозом (40 мг/кг).

6. Хроническое облучение крыс в дозах 0.12; 0.28; 0.54; 1.0; 2.0; 4.0 Гр (МД = 0.625; 1.2; 1.7; 10.0 мкГр/с) осуществляли на установке, разработанной в ЦНИРРИ ИЗ РФ. Дозное поле в рабочем объеме (2x3x3 м) создавали с помощью двух источников гамма-излучения закрытого типа (с^Со). Неравномерность уровня облучения составляла менее 15/.. Для устранения пространственной неоднородности мощности дозы облучения раз в 2 дня производили ротацию клеток. Кроме этого, отдельным животным ршивали под икуру спины 2 термолюминесцентных дозиметра с последушщей коррекцией поглощенной дозы. Достоверного спонтанного времен-

tro изменения мощности дозы в ходе хронического облучения видных обнаружено не было.

?. Хроническое гамма-облучение крыс в дозе 6.5 Гр с еньиающейся мощностью дозы (МД= от 4.6 до 0.26 мкГр/с) осу-ствляли за 5? сут. Изменение мощности дозы производили I раз сутки во время кормления иивотных. Остальные условия облуче-я оставляли неизменными, как и для хронического облучения с стоянной мощностью дозы.

8. Сочетанное облучение крыс. Часть животных а процессе онического гамма-облучения в дозе 4 Гр (МД = i."2 мкГр/с). кучала с питьевой водой хлористый кадмий (5 мг/л) или ацетат янца (50 мг/л). Одновременно в тех же пропорциях получала эристый кадмий или ацетат свинца.часть интактных животных.

Для дозиметрии использовали ионизационный клинический до-<етр "Robotron" модель Й2300(Германия) и терыолвминесценткый ¡иметр "TOLEDO" модель 640 фирмы "Pitman" (Великобритания).

Математическая обработка экпериментальных данных.

See полученные результаты подвергали статистической обра-ке, которую проводили общепринятыми методами (Плохинский 1970). На каждую экспериментальную точку использовали ериал, полученный от 4-76 животных в зависимости от условий перимента. Обработку гистограмм распределения^клеток по сованию ДНК с целью определения доли клеток , находящихся в личных фазах яизненного цикла, проводили "зеркальным" мето-(Barlogie В., et.al. 1979).

- ff)

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТУ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Распределение клеток костного мозга по фазам аизненного цикла у интактных крыс

На протя»ении 5 лет (1989-1933 гг.) исследовали кинетику распределения миелокариоцитов крыс по фазам жизненного цикла в течении суток. Было показано, что процентное содержание клеток в фазах S-tG2+M существенно изменяется ( рис. 1 ), Так, этот параметр возрастал в дневное время, достигая максимума к 16-19 часам вечера, а затем снижался до минимальных значений к 4-7 часам утра, при этом доля клеток в S+-62+M фазах в 12 часов дня и характер колебаний в различные годы не изменялись.

Рис. 1. Суточный ритм распределения кариоци-тов костного мозга по Фазам жизненного цикла. Результаты, полученные: -Q- - 01-05. 02. 89., -ф- - 01-05. 02. 90., - 01-05. 02. 91 ., -f>- - 01-05. 02. 92., -ф- - 01-05. 02. 93. По оси абсцисс - время суток, в час.; По оси ординат - доля клеток костного мозга в S+G2+M фазах, в '/..

На протяжении 6 лет (1988-1993 гг.) изучали годовые колебания распределения клеток костного мозга по фазам жизненного цикла у крыс разного возраста. Результаты анализа, представленные на рис. 2, показывают, что распределение клеток по фазам цикла у молодых животных в течении года претерпевает значительные изменения. При этом доля клеток в 5+&2+М фазах достигает минимальных значений весной, а максимальных - осенью. Регрессионный анализ полученных данных показал.что с возрастом животных среднегодовые значения анализируемого показателя увеличивались, а амплитуда годовых колебаний снижалась так, что у животных старшей Еозрастной группы годовой ритм отсутствовал.

Последующий анализ пострадиационной цитодинамики костного мозга проводили с учетом суточных и годовых колебаний и возрастных изменений анализируемых показателей у интактных крыс.

Рис. 2. Годовой ритм распределения кариоци-

—I- клеток костного мозга 12 в 5+62+М фазах, в "/..

фазам яизненного цикла

у крыс разного возраста (в 11-12 час дня).

тов костного мозга по

- средний возраст 4.6±0.1 (3-8) мес

-ф- - средний возраст

13.8*0.2 (9-23) мес. По оси абсцисс - время

года в мес ;

По оси ординат - доля

12

3

6

9

- 18 -

Нардиение кяеточности и распределения киелокариоциток

; крыс по фазам жизненного цикла в различные сроки после острого облучения животных.

Поскольку ранее был выявлен циркадный ритм в распределении клеток костного мозга по фазам »изненного никла у интакт-ннх крыс исследовали реакции системы кроветворения на острое лучевое воздействие в дозе 2 Гр (МД--3.0.пГр/с) в различное время суток. Для исключения влияния годовой ритмики эту часть работы провели 01-05.02.9!,, когда наличие суточного ритма било установлено. Для облучения были выбрани три временные точки: 21, 15 и 3 часа, когда клеточность костного мозга у интактных .крыс соответствовала минимальным, максимальным и средним значениям, соответственно. Во всех случаях через 24 час наблюдали изменение клеточности и распределения миелокариоцитов по фазам Г «изненного цикла, однако величина этих изменений была разной.

■ • Так, клеточность снижалась в 5.7*1.0: 10.2±1.4: 3.6-11.0 раз. а содержание клеток миелокариоцитов в 5 - фазе возрастало в 2.140.3: 2.2±0.3: 5.6±0.7 раз. в 21, 15. 3 часа, соответственно. В связи с этим во всех последующих случаях животных подвергали острому облучении в одно и то же время суток: в 11-12 .час дня.

Исследовали изменение кяеточности и распределения ииело-к.фноцитпс крыс через 3, 10 час, 1. 2, 3, 7, 15 сут. 1, 3, 6, '.). 12, П и 18 мес после острого гамма-облучения животных в дозах 1. 2, 3. 4. 5. 6 и 8 Гр (МД=3.0 сГр/с).

В ранние сроки после воздействия наблюдали снижение кле-тпчнпсти костного мозга, которое было достоверным уяе чере 3 ч после облучения в дозе 2 Гр и коррелировало с дозой облучения

( рис. 3. ). Одновременно было отмечено и перераспределение клеток по фазам яизнеиного цикла ( рис. 4'.).

Рис. 3. Изменение клеточнос-ти костного мозга крыс после гамма-облучения животных. По оси абсцисс - доза облачения, е Гр;

По оси ординат - число кари-оцитов в мерной пробе костного мозга, в У..

В дальнейшем происходило пос-48 час тепенное восстановление этих параметров так, "что через 9, 12. 13 и 18 мес (доза 4 Гр) их величина у облученных и интактных крыс не отличалась.

0 2 4 6 Однако, подведение дополни-

•ельной нагрузки в виде острого повторного облучения животных I дозе 1 Гр (18 мес) позволило выявить нарушение гемопоэза у ;рыс, переживвих лучевое воздействие в дозе 4 Гр. что выраяа-[ссь в увеличении доли клеток в БОШ и 5 фазах у подопытных ивотных по отновенип к одновозрастному контроля) через 48 час осле подведения нагрузки.

Субтотальное гамма-облучение животных в дозе 4 Гр через ,6, 9 и 12 мес после воздействия вызывало изменения в рас-ределении клеток костного мозга крыс по фазам жизненного цик-а, подобные тем, которые наблюдали после тотального облучена. Однако, в этом случае лучевой эффект был менек выражен.

- 20 -

Нарушение клеточности и распределения миелокариоцитов крыс по фазам кизнеиного цикла в различные сроки после окончания хронического облучения вивотййх.

Исследовали изменение клеточности и распределения миелокариоцитов крыс по Фазам аизненного цикла через 2 сут, 1, 6, 12 и 18 ыес после окончания облучения животных в дозах 0.15, 0.28, 0.54, 1.0, 2.0 и 4.0 Гр с низкими мощностями доз, составляющими 0.625, 1.7, 4.2, 10.0 мкГр/с, 0.28 и 1.1 мл Гр/с.

Было показано, что хроническое ( НД-0.625ыкГр/с) лучевое воздействие в дозе 2 Гр, приводило к повыиени» процентного со-дервания ДНК-синтезирующих миелокариоцитов ( рис.4.). При зток

3

х 10 3

хЮ 3

А(1)

В

1 АС 2)

Б( 1)

^—----г^

Б(2)

Рис.4. Распреде-

ВС1)

деление миелокариоцитов по со-деряанив ДНИ через 2 сут - (1) 1и 12 мес - (2)

- I \ I

В(2)

после облучения крыс в дозе 2 Гр А - контроль,

Б - МД-3.0 сГр/с, В - МД=0.6 мкГр/с По оси абсцисс -

- содеряание ДНК, в отн. ед..

,По оси ординат -

- число клеток в 100 200 мерной пробе

Л-

-1-

соответственно снижалась доля клеток в 50+Б1 фазах и в ряде случаев повышалось относительное содержание клеток в Е2+М фазах. Клеточность костного мозга не изменялась. Доля клеток в Б-фазе оставалась повышенной через 6, 12 и 18 мес после воздействия в дозе 2 Гр С рис. 5.).

1.6 1.4 1.2 1.0

.1.

Рис. 5. Изменение содержания миелокариоцитов в 5 фазе цикла в разные сроки после облучения крыс в дозе 2 Гр С МЛ = 0.625 мкГр/с). По оси абсцисс - время, мес. По оси ординат - Зо/Бк,

отн. ед. о - опыт, к - контроль

6 12 18 Анализ зависимости величины эффекта от мощности дозы облучения показал ( рис. 6.), что увеличение доли ДНК-синтезирующих мие-

1.8 1.6 1.4 1.2 1.0

О

_I_1_I_1_I_

-2 10

10

10

Рис. 6. Измение содержания миелокариоцитов в Б фазе после облучения крыс в дозе 2 Гр с различной мощностью дозы.

По оси абсцисс - мощность дозы облучения, Гр/с. По оси ординат - Зо/Бк,

отн.ед. о - опыт, к - контроль -ф— 1 мес, -О- ~ 6 мес, -А—12 мес, -А- -18 мес.

лскариоцитов отмечается в диапазоне мощностей доз от 0.625 до 10.0 мкГр/с. При облучении с более высокими мощностями доз (0.28 и 1.1 млГр/с) этот эффект не наблюдали.

Как известно, радиационная патология, развивающаяся при внешнем облучении тесным образом связана с временной динамикой формирования лучевой нагрузки (Ярмоненко С.П.,1990). Радиационный мониторинг обстановки в Чернобыле в 1987-1989 гг. показал на экспоненциальную зависимость от времени дозовой нагрузки по внешней гамма-компоненте (Серкиз Я.И. и др.,1991). Поэтому исследовали особенности изменения в распределении миелокариоци-тов крыс по фазам жизненного цикла через 2 сут, 3, 6 и 12 мес после окончания хронического лучевого воздействия со снижающейся мощностью дозы. Облучение животных в дозе 6.5 Гр (МЛ от 4.6 до 0.26 мкГр/с) осуществляли за 57 сут, ежедневно ступенчато снижая мощность дозы при кормлении животных.

Было установлено, что изменение в распределении клеток костного мозга по Фазам жизненного цикла у крыс в различные сроки после окончания хронического облучения в дозе 6.5 Гр с уменьшающейся мощностью дозы развивались аналогично изменениям после хронического лучевого воздействия с постоянной мощностью дозы. Процентное содержание миелокариоцитов в 5-Фазе у облученных крыс было выше чем у одновозрастных интактных животных во все указанные сроки наблюдения (р<0.001).

Поскольку одним из важных медико-биологических аспектов проблемы современной радиационной экологии является изучение комбинированных эффектов, исследовали изменение распределения миелокариоцитов крыс по фазам жизненного цикла после сочетан-ного действия облучения (Ц-2 Гр, МД--2.4 мкГр/с) и ионов тяже-, лых металлов (Сс1 и РЬ).

- гз -

Внпп угт-чнчвлйно. что гмстчплэние в организм хлорида кзд • мич, ^ ■( ак*«> йго сочетаиное действие не вызывало специфических ичиеиений крови и костного иозг.1. Введение ацетата свинка приводило к ниекьвенив доли клеток е "мК + М фазах настолько, что компенсировало радиационный «Фч>ек7. IIп мере выведрнш» свинца из паганизма наблюдаемое угнетен;».* гемопеэза уменьиалось так, что через 3 мег нзсле окончания воздействия ионов свинца отличий от интактных крыс обнаружено не выла. При сочетанием воз действии к этому времени определяющим становился рлди-идечгррй фактор, что лрпя8лялп1л, в чвеличеиик дпли ДИК-синтезодитих клеток (р'0.01 >. аднакз, »ти изирнекио Ныли конрс еирогсны. чем при действии талька р»-ди-)ции. По'-т'.-ку, черс б и ! 1 ч • наблюдаемые изменения проявляли лишь на ировие ткндеики

Лознуа зависимость эффекта изучалв при фиксированной коц-НОГТИ дп::к ОМЧЧен.ИЯ ' .'•' ЯКГр/» Бало УС"З.НРВЛ>-!1а . ЧТО ЧфгГект увеличение пвецемтнпге пглеряпнкч ниецпклриоиит.т р > йнзв можно огжарцаит ь при догтгпчпи» малых долах I рис. '.'.}. Т н:. через ! мес после получения изменения пай(«дали, начиная с V

пазоне доз. Постепенное снижение значений анализируемого показателя С Бо/Эк) вероятно являлось следствием нескольких причин. Это обусловлено как продолйашщимися процессами восстановления кроветворения у облученных особей в отдаленные сроки после воздействия, так и возрастными изменениями у интактных животных. До настоящего времени остается неясным, связан ли регистрируемый эффект с абсолютным увеличением числа клеток в Б-фазе или изменением ее длительности. Последнее согласуется с пока-заным ранее (Ильюхин Й.В. и соав.,1972) сокращением длительности £1-фазы у эритроидных элементов костного мозга хронически облученных собак. Увеличение доли ДНК-синтезирующих клеток может быть также обусловлено и ускоренным переходом клеток из £0 в фазу. Увеличение доли миелокариоцитов в 5-фазе можно рассматривать и как реакцию усиления пролиферации костного мозга. В этом случае полученные экспериментальные результаты хорошо укладываются в сформулированные ранее (йкоев И.Г.и др., 1984) представления о порочных патогенетических кругах. В то же время их можно рассматривать, как переход системы на "новый уровень функционирования" (Маркелов Б.Й., 1972), особенно если учитывать хронический характер облучения животных.

Тем не менее, независимо от механизмов дальнейшей реализации этого эффекта можно говорить о наличии определенного диапазона мощностей доз излучения, приводящих к стабильным изменениям показателей жизненного цикла миелокариоцитов костного мозга, которые, возникнув сразу после окончания облучения, сохраняются практически до конца жизни облученного организма.

- 25 -

. ДНК-цитометрия при злокачественных новообразованиях лимфатической и кроветворной тканей.

Исследовали клетки костного мозга, лимфоидные элементы лимфатических узлов и лейкоциты периферической крови у 376 пациентов. страдающих злокачественными новообразованиями лимфатической и кроветворной тканей.

При изучении лимФоидных элементов лимфоузлов (39 случаев) было установлено, что в норме (11 случаев) распределение клеток имеет диплоидный характер. Я 17 больных лимфогранулематозом (ЛГМ) и 11 - неходжкинскими лимфомами (НХЛ) по сравнению г, контролем наблвдалось увеличение процентного содержания клеток в 5+Б2+М фазах, что в ряде случаев (5 при ЛГМ, 10 при НХЛ) сопровождалось поялением популяции анэуплоидных клеток, доля которых и положение в общем распределении значительно варьировали у разных пациентов.

При изучении клеток костного мозга (209 случаев) было установлено. что в норме (12 случаев) распределение клеток имеет диплоидный характер. Н 40 больных лейкозом, 104 - ЛГМ и 53 -- НХЛ общий вид распределения, в основном, сохранялся. Увеличения процентного содершания клеток в 5+£2+М фазах по отношению к контролю обнаружено не было.

Последнее является особенностью канцерогенеза быстрооб-новляющихся тканей и находится в соответствии с результатами, получеными ранее другими авторами (РГгепсЬ Н. е^ а 1., 1990; Пиаров Л.А. и др..1992).

В то же время в ряде случаев (21 при лейкозе, 37 при ЛГМ, и 12 при НХЛ) наблюдали нарушение в распределении, выражавшееся в появлении анэуплоидных клеток ( рис. 8 А, Б. ).

Исследовали распределение лейкоцитов периферической .крови по содержанию ДНК (128 случаев).

Установлено, что у гематологически здоровых людей распределение клеток представлено в виде одного пика, соответствующего диплоидному набору ДНИ. У 77 больных ЛГЙ и 43 - НХЛ в 21 случае (17 - ЛГМ, 4 - НХД) выявлено аномальное распределение лейкоцитов, выражающееся в появлении анэуплоидной популяции клеток ( рис. 8. ), положение и процентное содержание которой варьировало от случая к случаю.

У 48 из 120 обследованных больных через 2-3 часа после взятия крови была произведена стернальная пунккция костного мозга. При этом, в 10 случаях анэуплоидия была обнаружена как в крови, так и в костном мозге, в 2 - только в крови, в 7 -- только в костном мозге и, наконец, в 29 случаях анэуплоидия отсутствовала как в крови, так и в костном мозге.

До настоящего времени остается неясным, с чем связано появление атипичных клеток. Это может быть обусловлено появлением клона клеток с анэуплоидным содержанием ДНИ, либо с измененной упаковкой хроматина или. наконец, быть результатом изменения у ряда кчеток сродства ДНК к красителю.

3

х10 3

2

Ф

\

©

\

Рис. 8. Распределение мие-локариоцитов (А. Б) и лейкоцитов периферической крови (В, Г) людей по содержа-

100 нию ДНК в норме (В, В) и при анэуплоидии (Б. Г) По оси абсцисс - содержание ДНК. отн. ед.

ДНК - цитометрия клеток из асцитической нидкости при злокачественных заболеваниях яичников.

Исследовали клетки из осадка асцитической нидкости у 42 больных, страдающих злокачественными опухолями яичников.

В 34 случаях распределение клеток было диплоидны«, а в 8 случаях наблюдали аномальное распределение, что выражалось в наличии популяции анзуплоидних клеток, доля которых и положение в общем распределениии значительно варьировало. Содержание клеток в 5+Й2+М фазах во 2 группе пациентов было выие. чем в первой ср<0.05). Сопоставление выживаемости больных из этих групп показало, что в первой за 2 года погибло 6 человек, а во второй - 4.

В 8 случаях больные с диплоидным распределением клеток были обследованы при первичном поступлении в клинику до начала лечения, а затем повторно при рецидиве заболевания. Во всех случаях при рецидиве заболевания распределение клеток было ан-зуплоиднкм ( рис. 9. ). В этой группе 3 человека умерли через несколько месяцев, а 2 человека в течении года после окончания лечения поступили с новыми рецидивами.

хЮ 3

\

© \

Рис. Э. Распределение клеток асцитической жидкости по содержанию ДНК у больных злокачественными новообразованиями яичников, й - первичные. Б - рецидив. По оси абсцисс - содержание ДНК, отн. ед.

- 28 -

ДНК-цитометрия клеток из осадков мочи /

при патологии мочеполовой системы.

Исследовали распределение ядросодержащих элементов из осадков мочи у больных с патологией мочеполовой системы (102 случая), в том числе при аденомах (23) и раке (34) предстательной железы, палиломах (6) и раке (12) мочевого пузыря,аденомах (1), поликистозе (8) и раке (?) почек, хроническом пиелонефрите (11) и при отсутствии патологии со стороны мочевыде-лительной системы (25). Последнюю группу считали контролем.

Результаты исследования, представленные на рис. 10., показывают, что распределение клеток в контроле, при аденоме и раке предстательной железы различно. В контроле оно представлено диплоидными клетками и элементами с меньшим содержанием ДНК. При аденомах предстательной железы количество клеток было выше (р<0.01), чем в контроле. Их распределение было во всех случаях диплоидным. ( рис. 10.). При этом, большинство клеток с содержанием ДНК >2С ноходилось в фазе синтеза ДНК, что согласуется с данными об увеличении длительности Б-фазы при этом заболевании (Портной .А.С. и др.,1984). При раке предстательной

2 х10 з хЮ Рис. 10. Распределение клеток из осадков мочи по со-

и держанию ДКК у людей при

2 ® / ^ А - аденоме, Б - раке © предстательной железы и

1 а! / / В - в контроле | По оси абсцисс - содержание —^у ДНК, отн. ед.

железы клеточностъ была выше, чем при аденомах (р<0.01). При этом ( рис. 10.) в распределении отмечалось значительное количество анэуплоидных клеток с содержанием ДНК>4С (р<0.01), что согласуется с результатами исследований, внполненнх методом проточной цитометрии на операционном материале другими авторами (Adolfsson З.А. et.al..1991; Tribukait Б..1991).

Аналогичная картина распределения клеток по содержанию ДНК наблюдается при сравнительном анализе осадков мочи у больных при папиломах, раке мочевого пузыря и в контроле. При па-пиломах распределение клеток имело диплоидных характер, а их количество было выше чем в контроле (р<0.01). При раке число клеток было выше, чем при папиломах (р<0.01) и во всех случаях имело анеиплоидных характер ( рис. 11 ), что проявлялось в наличии клеток с содержанием ДНК > 4С (р<0.01) . В 4 случаях кроме этого были зарегистрированы клеточные популяции с околодиплоидным содержанием ДНК. Аналогичные данные были получены ранее другими авторами (Klein F.ft..et.al.,1988 ).

9 больных различными заболеваниями почек распределение клеток по содержанию ДНК имело диплоидный характер без характерных особенностей, позволяющих выявить опухолевый процесс.

в

Рис.11. Распределение клеток из осадков мочи по содержанию ДНК у людей при А - папиломе, Б - раке мочевого пузыря.

--в контроле По оси абсцисс - содержание Д!!К, отн. ед. 200 По оси ординат - число кл.

выводи

1. Распределение клеток костного мозга по фазам жизненного цикла а интактных крыс имеет суточный и годовой ритмы, что выражается в изменении процентного содержания миелокариоцитов в Ь'+С2+М фазах. Величина этого показателя достигает максимальных значений к 16-18 часам вечера, а затем снижается до минимальных значений к 4-7 часам утра. В дневное время его величина максимальна осенью, а минимальна весной.

С возрастом животных происходит уменьшение амплитуды годовых колебаний процентного содержания миелокариоцитов в 5+Б2ьМ фазах и увеличение среднегодовых значений этого параметра.

2. Гамма-облучение в диапазоне низких мощностей доз от 0.625 до 10.0 мкГр/с вызывает стабильное изменение в распределении клеток костного мозга крыс по фазам жизненного цикла, что выражается в увеличении процентного содержания ДНК-синте-зирующих миелокариоцитов. В исследованном диапазоне доз (от 0.12 до 2.0 Гр) этот эффект линейно зависит от дозы облучения. Он обнаруживается в ранние сроки после окончания воздействия и сохраняется практически до конца жизни облученных животных.

3. Повыаение процентного содервания клеток костного мозга в 5-фазе в отдаленные сроки является особенностью реакции си-темы гемопозза на лучевое воздействие с низкими мощностями доз и не наблюдается при остром тотальном и субтотальном облучении организма, а также при длительном воздействии на него ионов тяжелых металлов.

4. Одновременный анализ клеточности и распределения мие-

локариоцитов по фазам жиэнчнниго цикла в значительной степени повышает их информативность при использовании лих показателей для биодозиметрии и позволяет осуществлять оипл^гичггкае индикацию лучевого поражения с низкими мощностям!; до? не только и рспний, но и в отдаленный период поел« обличения.

5. Метод проточной цитофлуориметрии позволяет с высокой скоростью, автоматически анализировать распределения клеток из биологических жидкостей но содержанию /!НК и момет быть использован для характеристики опухолевого роста при доброкачественных и злокачественных новообразованиях отдельных локализаций у человека.

Б. Анализ числа и распределения ядросодьрвацих алиментов из осадков мочи по содержанию ДНК методом проточной цито^луо-риметрии позволяет дифференцировать ьольннх, отрадачних лдено-мами и раком предстательной железы. Сказанный способ может быть использован в клинической практике для предварительного скрининга этих пациентов. Полная физиолагичипсть получения материала позволяет осуществлять постоянный мониторинг здчкплр-зой прогрессии в процессе лечения.

7, Использование метода проточной цито&яуорииг'.рии при анализе киелок-зриоцигов у иолышх, страдявщих спк"паО"лепииия-ми кроветворной и лимфатической тканей, дйрт возможность и ряде случаев обнаружить наличие ашнплоидкого клона в распределении клеток по фазам жизненного цикла. Модальный класс этих клеток находится в околодиплоипной области значений ДНК. При этом изменения процентного содкряэчкя миелокариоиитов в фазах цикла у первичных больных, кок правило. не отмечается.

СПИСОК РОБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Токалов С.В., Ягунов A.C., Геер Л.И. Нарушение клеточного деления костного мозга крыс после острого гамма-облучения животных .// В кн.: Поражен.и восстан. кроветворения при острой лучевой болезни (Тез.докл. Всес.науч.конф.).- М., 1950,- С.43.

2. Ягунов A.C., Токалов С.В., Геер Л.И. Анализ клеточно-сти костного мозга крыс после острого гамма-облучения животных методом проточной цитометрии // Там же.-С.92.

3. Волчков В.А., Ягунов A.C., Клестова O.Ö. . Тпкалпв С.В., Михайлова Н.Я., Геер Л.И.. Кованько Е.Г. Оценка состояния кроветворения в поздние сроки после однократного лучевого воздействия // Там же.-С.97- 38.

4. Ягунов A.C., Волчков Б.А., Клестова О.В.. Михайлова-Н.Я., Жербин Е.А., Массарский Л.К., Николаевская Л.В.. Токалов С.В., Геер ¿1.И., Лубоцкая Л.С. Изменение состояния кроветворной системы у крыс в отдаленные сроки после острого и хронического гамма облучения // В кн.: Молекулярно-клеточные механизмы хронического (внешнего и внутреннего) действия ионизирующих излучений на биологические системы (Тез докл. 1 Всес.симп. ).--Пушима.•1990.-С.142-143.

Б, Ягунов A.C., Маркочев A.B.. Токалов С.В.. Агафонова Н.Г.. Геер Л.И. Применение метода проточной цитофлуориметрии при анализе злокачественных лимфом // В кн.: IV конф. рентгенологов и радиологов БССР (тез.докл.).-Минск.-1990.-С.32-34.

Б. Ягунов A.C.. Массарский Л.И., Токалов С.В. Сравнительное исследование кроветворной системы в отдаленные сроки после

- 33 -

острого и хронического облучения // Там же.-С.127-130.

7. Ягунов A.C., Волчков В.А., Клестова O.Ö., Токалов C.B.. Геер Л.И. Сравнительное изучение состояния кроветворной системы в отдаленные сроки после острого и хронического лучевого воздействия // В кн.: Проблемы радиационной медицины (сборник научных трудов ).-М.-Мед.-1990.-С.42-45.

8. Ягунов A.C., Чухловин А.Н., Николаевская Л.В.. Токалов C.B., Геер Л.И. Об информативности некоторых показателей при оценке развития отдаленных последствий лучевого воздействия // Там же.-С.143-145.

9. Токалов C.B., Ягунов A.C., Геер Л.И. Пролиферативная активность клеток костного мозга в отдаленные сроки после острого и хронического облучения животных // Ленинградское.научн. о-во рентгенол. и радиол. Календарь работы о-ва.-Л.,1991.-С.3.

10. Иванов С.Д., Кованько Е.Г., Токалов C.B., Губарева A.B. Влияние малых доз радиации на структурные изменения ДНК нукле-оидов лейкоцитов крови и развитие отдаленной лучевой патологии у крыс // В кн.: Влияние малых уровней радиации на организм человека и животных (Тез.докл. ).-Киев.-1991.-С.17-22.

11. Ягунов A.C., Волчков В.А., Токалов C.B., Геер Л.И., Чухловин Я.Б.. Николаевская Л.В.. Коган Е.В. Информативность некоторых показателей кроветворной системы при оценке состояния облученного организма после острого и пролонгированного действия ионизирующей радиации // Там же.-С.23-25.

12. Ягунов A.C., Токалов C.B. Возможный критерий оценки лучевого воздействия на организм человека // Там же.-С.82-83.

13. Ягунов A.C., Токалов C.B.. Бланк М.А., Геер Л.И. Анализ цитодинамики костного мозга в норме и после действия ионизирующей радиации методом проточной цитометрии П Вопр. онко-

- 34 -

логии., 1991. - T.37, - S.U. - С. 83-95.

14. Бланк M.Д., Гущин В.А., Клестова Û.B.. Корытова Л.И., Лубоцкая Л.С.. Токалов C.B., Ягунов A.C. О механизме формирования суточного ритма пролиферации костного мозга // Вопр. онкологии., 1991. - Т.37. - N.9-10. - С. 941-948.

15. Бланк М.Й., Корытова Л.И., Токалов C.B., Ягунов A.C., Гущин В.А., Пастернак Н.Д. Кровь больных злокачественными лим-Фомами // В кн.: Вопр. экспериментальной и клинической рентге-норадиологии (Сборник научных трудов).-Л.-1991.- С.32-33.

16. Ягунов A.C., Токалов C.B., Гущин В.А., Геер Л.И. Пострадиационная кинетика клеток асцитной карциномы Зрлиха // Таи же.-С.61-70.

17. Ягунов A.C., Токалов C.B., Бланк М.А., Корытова Л.И. Применение метода проточной цитофлуориметрии для исследования клеток костного мозга при лимфогранулематозе // В кн.: Люминесцентный анализ в медицине и биологии и его аппаратурное обеспечение (Тез.докл. IY Всесоюз.совещание).-Рига.-1992.-С.68-73.

18. Бланк H.A., Токалов C.B.. Корытова Л.И.. Ягунов A.C., Пастернак Н.Д.. Потявина Е.В., Степанова H.A.. Белаиова Н.В. Прогностическое значение распределения клеток костного мозга больных лимфогранулематозом по содержанию ДНК при стандартных методах лучевой и химиотерапии // В кн.: Восстановительные и компенсаторные процессы при лучевых поражениях (Тезисы докладов) С.-Петербург.-1992.-С.12-13.

19. Бланк М.А., Лубоцкая Л.С., Токалов C.B., Гущин В.Й., Корытова Л.И., Ягунов A.C. Влияние тотального облучения на выживаемость крыс с лимфосаркомой Плисса // Там ie.-C.17.

20. Токалов C.B.. Бланк H.A.. Ягунов A.C.. Гущин В.А.. Корытова Л.И. Поражение костного мозга крыс после тотального об-

- 35 -

лучения в разное время суток // Там яе.-С.192-193.

21. Токалов C.B., Ягунов A.C. Влияние сезонных факторов на индикацию лучевого поражения // Там se.-С.193-194.

22. Токалов C.B., Ягунов A.C., Ольдберг О.М., Четчуева М.Э., Воронцова И.Е. Анализ радиационного нарушения сперматогенеза у мышей методом проточной цитофлуориметрии // Гам ае.-С.194-195.

23. Токалов C.B., Ягунов A.C., Юркова /I.E.. Винокуров В.Л, Буторина О.Д., Некласова Н.Ю. Исследование клеток рака яичников методом проточной цитофлуориметрии // Там яе.-С.195-196.

24. Ягунов A.C., Токалов C.B. Индикация острого лучевого поражения методом проточной ДНК-цитометрии в ранние сроки после воздействия // Там же.-С.225-226.

25. Ягунов A.C., Корытоза Л.И., Мус В.Ф.. Токалов C.B.. Сереброва М.К. Метод проточной ДНК-цитометрии и прогноз лучевой и комбинированной терапии при раке молочной яелезы // Там не.-С.226-220.

?.6. Ягунов A.C., Токалов C.B., Геер О., Ольдберг О.М. Распределение миелокарисцитов крыс, подвергавшихся острому и хроническому облучению, в отдаленные сроки после воздействия // Там же.-С. 228-230.

27. Парусин В.Д., Токалов C.B., Цыганов А.Б., Ягунов A.C., Януш О.В. Разработка проточного цитофлуориметра для биологии и медицины // Лазерная Физика.-1993.-Вып.5.-С.32-33.

28. Винокуров В.Л., Юркова /I.E., Буторина О.Д., Ягунов A.C., Токалов C.B. Метод проточной цитофлуориметрии в контроле за эффективностью лечения больных'раком яичников // В кн.: Современные достижения медицинской радиологии (Тезисы докладов). -1993.-С.-Петербург.-С.109-111.

29. Бланк М.А., Корытова Л.И., Токалов C.B., Ягунов A.C.

Циркадная зависимость постлучевой ыиелодеирессии // Там же,--С.259-261.

30. Бланк M.fl., Токалов С.В., Ягунов A.C., Гущин В.А. Поражение системы кроветворения крыс при остром лучевом воздействии в различное время суток // Там же.-С.261.

31. Токалов C.B., Карелин Н.И., Ягунов A.C., Щербань З.И., Козлов A.A. Сравнительный анализ информативности проточной ци-тометрии и трансректальной тонкоигольной биопсии при аденомах и раке простаты // Там же.-С.330.

32. Токалов C.B., Ягунов A.C., Ольдберг О.М., Потявина Е. В., Геер Л.И., Рогалева Н.В, Реакция системы кроветворения на сочетанное воздействие облучения и ионов тяжелых металлов // Там же.-С.331-332.

33. Ягунов A.C., Токалов C.B., Массарский Л.И., Геер Л.И,. Ольдберг О.М., Потявина Е.В., Рогалева Н.В. Сравнительные исследования изменений гемопоэтической системы при различных видах облучения в ранние и отдаленные сроки после лучевого воздействия // Там se.-С.346.

34. Ягунов A.C.. Токалов C.B. 0 возможности использования популяционных характеристик миелокариоцитов для ранней диагностики лучевых поражений // Радиобиология.-1993.-Т.33.-Вып.1. -С.100-103.

35. Ягунов A.C., Токалов C.B.. Геер Л.И.. Потявина Е.В., Ольдберг О.М., Рогалева Н.В. Изменения в системе кроветворения в отдаленные сроки после острого и хронического лучевого воздействия // Мед. радиология.-1993.-Т.38.-N.9.-С.37-40.

36. Ягунов Й.С., Токалов C.B. Влияние хронического облучения на жизненный цикл миелокариоцитов крыс // Радиобиология., 1994., в печати.