Суточная динамика биологических свойств Staphylococcus aureus

Паромова, Яна Игоревна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Суточная динамика биологических свойств Staphylococcus aureus
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Суточная динамика биологических свойств Staphylococcus aureus"

На правах рукописи

Паромова Яна Игоревна

СУТОЧНАЯ ДИНАМИКА БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ STAPHYLOCOCCUS AUREUS

03.02.03 - «Микробиология»

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 5 НОЯ 2010

Оренбург-2010

004614164

Работа выполнена в ГОУ ВПО Тюменской государственной медицинской академии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Научный руководитель:

кандидат биологических наук, доцент ГОУ ВПО Тюменская государственная

медицинская академия Росздрава Тимохина Татьяна Харитоновна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, доцент

Институт клеточного и внутриклеточного

симбиоза УрО РАН Карташова Ольга Львовна

доктор медицинских наук, профессор ГОУ ВПО Оренбургский государственный университет

Брудастов Юрий Авенирович

Ведущая организация: ГОУ ВПО Челябинская государственная медицинская академия Росздрава

Защита состоится «9» 2010 г. в 9 ^часов на заседании

диссертационного совета Д. 208.066.03 при Оренбургской государственной медицинской академии по адресу: Россия, 460000, г. Оренбург, ул. Советская, д. 6, зал заседаний диссертационного совета.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ОрГМА

Автореферат разослан «» 2010г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук,

профессор /Ч> ^ ¡Р/£{АФ Немцева Наталия Вячеславовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Для современного этапа развития медико-биологических наук характерен возрастающий интерес к закономерностям организации живого во времени. Ритмы охватывают все проявления живого - от деятельности субклеточных структур и отдельных клеток до сложных форм поведения организма, популяций и экологической системы. Это свидетельствует, что биоритмы являются универсальным и важнейшим свойством жизни (Агаджанян Н.А., Башкиров А.А., 1987; Арушанян Э.Б., 2000; Романов ЮА., 2000; Halberg F., 1994, 2006). Изучение биоритмов открывает новые возможности в решении ряда медико-биологических проблем -механизмов гомеостаза, адаптации, чувствительности к лекарственным средствам, диагностики, лечения, профилактики заболеваний человека (Комаров Ф.И. с соавт., 2008; Aschoff J., 1985; Cornelissen G., 1993; Halberg F., 1991; Minors D.S., 1992). Поэтому чрезвычайно важным является обнаружение в живой системе ритмических колебаний различных жизненных процессов (Романов Ю.А., 2005; Ноздрин Г.А., 2006; Маркина В.В., 2008; Смирнов С.Н., 2008).

Биологические ритмы различных функций хорошо изучены у эука-риотических клеток. Сведения же о биоритмах прокариот единичны, противоречивы, не систематизированы (Павлович Н.В., 1991; Капитанов Е.А., Жмакин А.И., 1992; Kippert F. et. al.,1987; Lloyd A., 1992; Min H. et al„ 2005).

Для изучения биоритмов прокариот нами в качестве модели был использован Staphylococcus aureus, который является уникальным микроорганизмом, колонизирующим и поражающим многие органы и ткани, демонстрируя при этом широкий диапазон адаптационных возможностей (Николаева И.В., 2000; Учайкин В.Ф., 2003; Габриэлян Н.И., 2004; Чернуха М.Ю., 2005; Кафарская Л.И., 2006; Флуер Ф.С., 2006; Поспелова С.В. с соавт., 2008). Успехи в изучении биологии стафилококков позволили относительно полно охарактеризовать механизмы и факторы, способствующие развитию инфекционной' патологии у человека (Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Карташова О.Л., 2002).

Изучение ритмических колебаний различных функций стафилококков позволяет по-новому подойти к оценке биологических свойств возбудителя, способствуя разработке новых подходов к микробиологической диагностике стафилококковых инфекций, созданию предпосылок для дальнейших исследований по осуществлению рациональных антимикробных мероприятий.

Цель и задачи исследования

Цель исследования - изучение особенностей биологических свойств S. aureus и влияние на них антимикробных препаратов в разное время суток.

Для реализации этой цели были поставлены и решены следующие задачи:

1. Изучить биологические ритмы пролиферативной активности и патогенных характеристик (протеазной, каталазной, гемолитической, плазмокоа-гулазной активности) музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus в разное время суток.

2. Определить чувствительность S. aureus к антимикробным препаратам с учетом индивидуальных особенностей их суточной динамики.

3. Оценить влияние антимикробных препаратов на биоритмы пролиферативной и плазмокоагулазной активности S. aureus.

Новизна исследования Впервые представлена характеристика суточной динамики пролиферативной активности и патогенных свойств S. aureus. Обнаружены цирка-дианные ритмы пролиферативной активности у музейных штаммов S. aureus, в отличие от госпитальных изолятов, у которых выявлены преимущественно ультрадианные ритмы. У музейных штаммов S. aureus отмечены в основном циркадианные ритмы факторов патогенности с акрофазами протеазной, каталазной и плазмокоагулазной активности в утренние часы, гемолитической - в вечернее время. У госпитальных изолятов обнаружены ультрадианные ритмы данных факторов, с акрофазами в вечернее и ночное время. Полученные результаты, расширяя теоретические представления о различных периодах физиологической активности биологических свойств патогенов в течение суток, позволили разработать способ дифференциации

госпитальных изолятов S. aureus от музейных штаммов (патент РФ № 2285258, от 10.10.2006 г. Бюл. № 28).

Исследование гемолитической активности у госпитального изолята S. aureus, типированного как негемолитический вариант во временном аспекте, позволило выявить наличие данного признака в ночное время (02.00 час), что расширяет возможность лабораторной идентификации золотистых стафилококков.

Определена прямая корреляция между пролиферативной и гемолитической активностью и обратная корреляция между пролиферативной активностью и протеазной, каталазной, плазмокоагулазной активностью S. aureus в течение суток, что указывает на способность микроорганизмов в период минимальной пролиферации более успешно противостоять факторам защиты организма хозяина за счет максимального количества протеазы, катала-зы, плазмокоагулазы.

Обнаружена суточная динамика чувствительности к антимикробным препаратам музейных и госпитальных изолятов S. aureus. Определено варьирование минимальных подавляющих концентраций (МПК) дезинфектан-тов в разное время суток. Выявлены периоды резистентности к антибиотикам у музейных (чувствительных к препаратам) штаммов S. aureus и периоды чувствительности у госпитальных (антибиотикорезистентных) изолятов в течение суток.

Установлено модулирующее влияние антимикробных препаратов на пролиферативную и плазмокоагулазную активность S. aureus. Показано изменение среднесуточного значения показателей, колебание амплитуды, смещение акрофазы под действием антимикробных препаратов, что свидетельствует о возможностях микроорганизма адаптироваться к изменяющимся условиям путем координации и регуляции собственных ритмометриче-ских параметров и синхронизации их с внешними циклами.

Научно-практическая значимость

Выявленные биоритмы пролиферативной активности, факторов пато-генности, их взаимосвязь в суточной динамике, лабильность биоритмов под влиянием антимикробных препаратов расширяют теоретические представления о физиологии биологических свойств S. aureus, его способности к

адаптации в изменяющихся условиях среды.

Практическое значение исследований определяется разработкой хро-нобиологического метода изучения пролиферативной активности S. aureus, позволяющего дифференцировать госпитальные изоляты микроорганизмов на основе сравнительного анализа суточной динамики данного биологического свойства S. aureus.

Хронобиологические исследования определили новый методический подход к изучению временной организации биологических свойств прокариот на модели S. aureus, что позволило выявить различные суточные периоды активности патогенных свойств микробных культур, чувствительности к антибиотикам и дезинфектантам, а также генетически детерминированные признаки, не определяемые традиционными методами.

Предложенный методический подход к изучению биологических свойств S. aureus может быть рекомендован для идентификации S. aureus и дальнейших исследований в области рациональной антимикробной терапии, а также использован в учебно-педагогическом процессе (акт внедрения результатов диссертационной работы № 01/1928 от 06.09.2010 г.).

Положения, выносимые на защиту:

1. Госпитальные изоляты S. aureus имеют преимущественно ультра-дианные ритмы пролиферативной активности, факторов патогенности, в отличие от музейных штаммов, для которых характерны циркадианные ритмы.

2. Хронобиологический подход изучения биологических характеристик S. aureus выявляет различные суточные периоды активности патогенных культур в отношении их устойчивости к антимикробным препаратам.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на: V Всероссийской конференции «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2006); научной сессии, посвященной 10-летию Южно-Уральского научного центра РАМН «Медицинская академическая наука - здоровью населения Урала» (Челябинск, 2008); выездной сессии Президиума РАМН (Челябинск, 2009); заседании Тюменского филиала Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов, паразитологов (Тюмень, 2009).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, из них 4 статьи в журналах, рекомендованных ВАК. Получен патент (№ 2285258, от 10.10.2006 г. Бюл. №28).

Объем и структура диссертационной работы

Диссертация изложена на 160 страницах машинописного текста и содержит введение, обзор литературы, главу с описанием материалов и методов исследования, 3 главы собственных исследований, заключение, выводы и указатель литературы, включающий 129 отечественных и 100 зарубежных источников. Иллюстрации представлены 16 таблицами и 32 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 5 Материалы и методы исследования

Для исследования биоритмов пролиферативной активности, факторов патогенности, чувствительности к антибиотикам и дезинфектантам были использованы музейные штаммы S. aureus, полученные из американской коллекции типовых культур (АТСС) - № 25923, государственного НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов имени JI.A. Тарасевича - № 209-Р; и клинические изоляты S. aureus (№№ 2305, 2888, 2891), выделенные из раневого отделяемого пациентов ожогового центра Областной клинической больницы г. Тюмени. Выделение и идентификацию S. aureus проводили общепринятыми методами на основании морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, фаголиза-бельных свойств в соответствии с приказом МЗ СССР № 535 от 22.04.85 г. Изоляты S. aureus, выделенные из клинического материала, обладали множественной лекарственной устойчивостью, и были идентифицированы как госпитальные.

Биоритмы пролиферативной активности S. aureus изучали многократно по разработанной нами методике проведения биоритмологического эксперимента и обработке данных, учитывающих особенности работы с микроорганизмами. Пролиферативная активность оценивалась по общему микробному числу (ОМЧ). Для исследований были получены 12-ти часовые

культуры, что соответствовало началу стационарной фазы развития бактерий. Каждое суточное исследование включало 8 контрольных точек. Через 3 часа в течение суток проводили высев исследуемой культуры на ОМЧ (патент на изобретение «Способ диагностики госпитальных штаммов» № 2285258 от 10.10.2006 г. Бюл. № 28).

Активность плазмокоагулазы изучали, используя стандартную методику с цитратной плазмой кролика (Клиническая лабораторная аналитика/ Под ред. В.В. Меньшикова, 2003).

Активность протеазы определяли по убыли альбумина после инкубации с исследуемыми штаммами биуретовым методом (Практикум по микробиологии/ Под ред. А.И. Нетрусова, 2005).

Активность каталазы определяли фотометрическим методом по убыли пероксида водорода (Бухарин О.В., Сгибнев A.B., Черкасов C.B., 2000), гемолитическую активность по методике (Бухарин О.В. и др., 2006).

Чувствительность к антибиотикам исследуемых культур проводили с использованием диагностических панелей для идентификации < грам-положительных микроорганизмов: MicroScan "Pos Combo Type 41" фирмы Dade Behring (USA) фирмы Dade Behring (USA) на бактериологическом анализаторе «Autoscan» фирмы «Baxter» (USA).

Влияние антибиотиков и дезинфектантов на биоритмы пролифератив-ной и плазмокоагулазной активности S. aureus определяли, взяв за основу стандартную методику серийных разведений, используя Vi МПК (Клиническая лабораторная аналитика /Под ред. В.В. Меньшикова, 2003).

Результаты исследований получены на основе анализа суточной динамики изучаемых биологических свойств штаммов S. aureus в течение 3-х лет.

Данные по биологическим свойствам S. aureus подвергали статистической обработке с определением средних значений (М), средней ошибки средней арифметической (m) в компьютерной оболочке Windows с помощью процессора электронных таблиц Microsoft Office Excel 2003. Сравнительный анализ биологических свойств между музейными и госпитальными штаммами проводили с использованием критерия Манна-Уитни (Т). Данные были обработаны также по методу наименьших квадратов (косинор-анализ)

при заданной значимости достоверности р<0,05, с целью поиска ритмов (ультрадианный ритм - длина периода до 20 часов, циркадианный ритм -длина периода 20-28 часов (околосуточный), МЕЗОРА (среднесуточное значение), амплитуды (величина наибольшего отклонения полезного сигнала от МЕЗОРа), акрофазы - момента времени, соответствующего регистрации максимального значения полезного сигнала (Nelson W. et al., 1979). Взаимосвязь между биоритмами пролиферативной активности и биоритмами факторов патогенности S. aureus анализировали с использованием программы «корреляционный анализ» Microsoft Excel 1997. Данные по определению влияния антимикробных препаратов на биологические свойства S. aureus были подвергнуты статистической обработке непараметрическим методом с применением критерия Уилкоксона (W). Разница между сравниваемыми величинами считалась достоверной при значении р<0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

Обнаружена суточная динамика пролиферативной активности изучаемых музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus. При оценке временных параметров музейных штаммов S. aureus 25923 и 209-Р установлены статистически значимые биоритмы пролиферативной активности со стабильными положениями акрофаз. Проведенное сопоставление акрофаз показало, что максимальные значения этого показателя наблюдались в вечернее и ночное время, минимальные - в утренние часы (рис. 1). Ритмомет-рический анализ выявил у музейных штаммов S. aureus 209-Р и 25923 ведущий циркадианный ритм - околосуточный (вклад ритма 38,4% и 56,1%, амплитуда 37,9±7,9 и 39,9±6,8, соответственно, р<0,05).

У госпитальных изолятов S. aureus 2305, 2888 и 2891 наблюдалось смещение акрофаз от соответствующих параметров музейных штаммов, максимальная пролиферативная активность проявлялась и в дневное, и в ночное время (рис. 2). На основании ритмометрического анализа установлено преобладание ультрадианных ритмов (период менее 20 часов) пролиферативной активности, отличающихся различными вкладами в общий спектр. Изолят S. aureus 2305 характеризовался 12-ти часовым периодом ритма (вклад ритма 44,0%, амплитуда 31,4±3,9, р<0,05); у S. aureus 2891 также

КОЕ/мл 300,0

250,0

200,0 -

150,0

100,0

50,0 -

0,0

Рис. 1

2 5 8 11 14 17 20. 23 2 время

суток

•S.aureus 25923

--—S.aureus 209-Р

••j)

Суточная пролиферативная активность музейных штаммов S. aureus

КОЕ/мл 350,0 -,

300,0 -

250,0 -

200,0

150,0 -

100,0

50,0

0,0

2 5 8 11 14 17 20 23

■S.aureus 2888 — — S. aureus 2891 — - S. aureus 2305

2 время суток

Рис. 2 - Суточная пролиферативная активность госпитальных изолятов S. aureus

был выявлен ритм с периодом 12 часов, но с меньшим процентным вкладом - 17,8%, амплитуда 25,4±8,9, р<0,05; у S. aureus 2888 12-ти часовой период ритма отличался низким вкладом - 15,6% (р>0,05), для этого изолята достоверным был период, близкий к 8-ми часовому (вклад 74,6%, амплитуда 41,8±16,4, р<0,05).

vO О4

о &

о-

5 «

70 60 50 40 30 20 ДО о

жщ

1 *

□ 12-ти

часовой ритм

О 24-х

часовой ритм

25923

209

2305

2888

2891

Рис. 3 - Спектральный состав биоритмов пролиферативной активности S. aureus

По оси абсцисс - музейные штаммы: 25923, 209; госпитальные: 2305, 2888, 2891; по оси ординат - вклад ритмов ( %); * - р<0,05 - достоверные вклады

Таким образом, музейные штаммы S. aureus обладали достоверным циркадианным ритмом, высокой амплитудой ритма, акрофазой в одно и то же время, что говорит о стабильности их ритма. Госпитальные штаммы характеризовались гетерогенностью ритмов, по всей видимости, сформировавшейся под влиянием внешних факторов. Преобладание того или иного ритма было явно выражено и, можно сказать, являлось типовым признаком в хроноструктуре изученных временных рядов пролиферативной активности данных штаммов (рис. 3).

Различия ритмометрических параметров пролиферативной активности музейных и госпитальных штаммов S. aureus, включая вклады циркади-анных, ультрадианных ритмов и амплитуды, имеют значение для дифференциации госпитальных изолятов S. aureus (патент № 2285258, 2006 г.).

На следующем этапе работы исследовали суточную динамику патогенных свойств S. aureus, в частности, плазмокоагулазную, протеазную, каталазную, гемолитическую активность и проводили сопоставление этих показателей с пролиферативной активностью S. aureus.

В литературе мы обнаружили лишь единичные сведения о биоритмах биохимической активности микробов, изменяющихся в зависимости от солнечной активности, фазы Луны и смены сезонов (Павлович Н.В., 1991, Поликарпов Н.А., 1995). В результате проведенных исследований обнаружено, что музейные штаммы S. aureus 25923 и 209-Р характеризовались достоверным циркадианным ритмом плазмокоагулазной активности с акрофа-зой в 11.00 часов, минимальная активность наблюдалась в вечерние и ночные часы - 17.00 и 23.00 часа. У госпитальных изолятов, напротив, отмечался ультрадианный ритм с акрофазами в 2.00 и 14.00 часов (рис.4).

мин ,

80,0

70,0 -60,0 -50,0 40,0

30,0

8 11 14 17 20 23

——— Музейный штамм 25923 ----Госпитальный изолят 2888

2 время суток

Музейный штамм 209-Р

— Госпитальный изолят 2305

Рис. 4 - Суточная динамика плазмокоагулазной активности S. aureus

Результаты исследований показали, что время коагуляции плазмы госпитальными изолятами было достоверно меньше, чем время коагуляции музейными штаммами S. aureus (Т = 36, р<0,05), т.е. госпитальные изоляты характеризовались более высокой плазмокоагулазной активностью.

Отработанные оптимальные условия оценки активности плазмокоагу-лазы штаммов S. aureus можно использовать для индикации госпитальных изолятов стафилококков, которые обладают более ранней по времени плаз-мокоагулазной активностью, по сравнению с негоспитальными штаммами.

У музейного штамма S. aureus 25923 обнаружен циркадианный и ультрадианный ритм протеазной и каталазной активности с акрофазами в утренние часы - 5.00; 11.00 часов (максимальные значения -4,1±0,02 мг/мин-мл и 6,2±0,1 мкмоль/мин, соответственно). Гемолитическая активность музейного штамма характеризовалась циркадианным ритмом с акрофазой в вечернее время - 23.00 часа (20,1±0,2 %).

У госпитального изолята 2888 выявлен ультрадианный ритм протеазной, каталазной активности с акрофазами в вечерние и ночные часы (рис. 5, 6). Интерес представляет тот факт, что госпитальный изолят S. aureus был типирован как негемолитический, но исследуя это свойство в разное время суток, мы выявили наличие гемолитической активности у данного изолята с максимальными значениями в ночное время - 2.00 часа (рис.7). Вероятно, хронобиологический подход позволяет выявлять те генетически детерминированные признаки S. aureus, которые не могут быть определены традиционными методами. Отмечено, что наибольшей среднесуточной активностью факторов патогенности характеризовался музейный штамм S. aureus (про-теаза - 2,3±0,03 мг/мин-мл, госпитальный изолят - 0,4±0,03 мг/мин-мл, р<0,05; каталаза - 3,4±0,1 мкмоль/мин, госпитальный изолят -2,7±0,7 мкмоль/мин, р>0,05; гемолизины - 14,7±0,1%, госпитальный изолят - 4,7±0,1%, р<0,05). Сравнительный анализ позволил выявить корреляцию между пролиферативной активностью и патогенными характеристиками S. aureus. У музейного штамма S. aureus показатели пролиферативной активности положительно коррелировали с гемолитической активностью (г = 0,38; р<0,05), но отрицательно коррелировали с каталазной активностью (г = -0,58; р<0,05), протеазной активностью (г =-0,60; р<0,05) и плазмокоа-гулазной активностью (г = -0,81; р<0,05). Т.е. в период минимальной пролиферативной активности стафилококков продукция ферментов (плазмо-коагулазы, протеазы, каталазы) была максимальна выражена, что может способствовать выживанию патогенов в организме хозяина.

мг/мин-мл 4,5 4,0 3,5 3,0 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0

- время суток -Госпитальный изолят 2888

2 5 8 11 14 Музейный штамм 25923 — Рис. 5 - Суточная динамика протеазной активности S. aureus

мкмоль/мин 7,0 -I 6,0 -5,0 -4,0 -3,0 -2,0 -1,0 -0,0 -

2 5 8 11 14 ■Музейный штамм 25923 —

17 20 23 2 время суток - Госпитальный изолят 2888

Рис. 6 - Суточная динамика каталазной активности S. aureus

25,0 20,0 15,0 10,0 5,0 0,0

2 5 8 11 14 17 20 23 2 время суток

Музейный штамм 25923 — —Госпитальный изолят 2888 Рис. 7 - Суточная динамика гемолитической активности S. aureus

С увеличением пролиферативной активности максимальных значений достигала продукция повреждающих факторов - гемолизинов.

У госпитального изолята S. aureus была выявлена положительная корреляция пролиферативной активности с каталазной активностью (г = 0,57; р<0,05) и отрицательная с плазмокоагулазной активностью (г = -0,91; р<0,05). С протеазной и гемолитической активностью четкой корреляции выявлено не было (г = -0,07; р>0,05; г = -0,29; р>0,05, соответственно), хотя в период минимальной пролиферативной активности наблюдали увеличение продукции протеазы и гемолизинов.

Полученные данные не противоречат существующему принципу попеременной (асинхронной) работы структур организма (Комаров Ф.И., 1989) и, вероятно, отражают стратегию распределения патогенных ресурсов микробных клеток. Так, при интенсивном функционировании той или иной системы функциональная активность многих других систем снижается: в одной и той же клетке адаптивная интенсификация синтеза одних ферментов обязательно сопровождается ингибированием продукции других. Это свидетельствует о том, что организму свойственна способность экономии материальных ресурсов и максимальная концентрация их на главном участке развертывания приспособительной реакции в каждый данный момент (Лукомская К. А., 1987; Комаров Ф.И., 2000).

Выявленные циркадианные и ультрадианные ритмы пролиферативной активности и факторов патогенности у S. aureus подтверждают высказывания авторов, что ритмы присущи всему живому (Агаджанян H.A., Башкиров A.A., 1987; Арушанян Э.Б., 2000) и согласуются с работами немногих авторов, также обнаруживших наличие биоритмов в прокариотиче-ской клетке (Капитанов Е.А., Жмакин А.И., 1992; Kippert F., 1987; Lloyd L., 1992; Johnson C.H., 2005; Smith R., 2006).

Исследования суточной динамики чувствительности S. aureus к антимикробным препаратам позволили обнаружить различные МПК антибиотиков в отношении музейного штамма S. aureus 25923. Максимальная чувствительность к большинству изученных антибиотиков (амоксиклав, имипе-нем, ванкомицин, гентамицин, рифампицин, тетрациклин, клиндамицин) зарегистрирована в раннее утреннее время - 5.00 часов и вечернее время -

20.00; 23.00 часа. Были выявлены периоды повышения МПК антибиотиков и приближение этих значений к показателям резистентности в утреннее и дневное время - 8.00; 11.00; 14.00 часов.

Госпитальный изолят S. aureus 2888 отличался колебаниями к меньшему количеству антибиотиков в течение суток. К большинству препаратов изолят был резистентен. Динамика чувствительности была отмечена только к линезолиду, цефалотину, гатифлоксацину, моксифлоксацину, си-нерциду. МПК цефалотина, линезолида выявлена в 2.00 и 5.00 часов, МПК моксифлоксацина наблюдалась в 5.00; 20.00 и 23.00 часа, МПК синерцида выявлена в 2.00; 5.00 и 23.00 часа, к гатифлоксацину изолят был чувствителен на всем протяжении суточного ритма, кроме 2.00 и 8.00 часов.

Следовательно, у госпитального S. aureus, напротив, были отмечены периоды чувствительности к антибиотикам в течение суток. :

Выявлена суточная динамика чувствительности музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus к пероксимеду, хлорамину., МПК хлорамина - 0,19% при 60 мин экспозиции с культурой музейного штамма S. aureus определена в 2.00 и 23.00 часа, с культурой госпитального изолята S. aureus - в 2.00 часа; МПК пероксимеда - 1,5% - в 11.00 часов для музейного штамма, в 23.00 часа - для госпитального изолята S. aureus.

Учитывая, что при взаимодействии микроорганизмов с различными стрессовыми факторами (антисептики, метаболиты, алкилоксибензолы и др.), возможны изменения численности популяции, стрессоустойчивости, факторов патогенности (Красильников А.П., 1994; Сузина Н.Е., 2001; Эль-Регистан Г.И., 2001; Ильинская О.Н., 2002; Бухарин О.В., Сгибнев A.B., 2002; Иванова Е.Б., 2004), мы предприняли попытку изучить модулирующее влияние антимикробных препаратов на биоритмы пролиферативной и плаз-мокоагулазной активности музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus.

Влияние суббактериостатических концентраций пероксимеда на про-лиферативную активность музейных штаммов S. aureus 209-Р и 25923 проявлялось снижением мезора, амплитуды ритмов, смещением акрофазы на дневное и утреннее время, а у штамма 209-Р изменением циркадианного профиля биоритма на ультрадианный. Таким образом, у музейных штаммов наблюдался десинхроноз ритма, который характеризовался изменением всех ритмометрических параметров, существенным смещением акрофаз (асин-хронностью), вплоть до противофазности, что свидетельствует о снижении адаптационных возможностей исследуемых микроорганизмов.

На биоритмы пролиферативной активности госпитальных изолятов S. aureus пероксимед оказывал меньшее воздействие. Достоверно снижалось только среднесуточное значение (W = 36, р<0,05), все остальные параметры ритма (вклады, акрофаза, амплитуда) оставались близкими к контрольным значениям.

Влияние суббактериостатической концентрации пероксимеда на плазмокоагулазную активность в разное время суток проявлялось у музейных штаммов S. aureus 25923 и 209-Р увеличением времени коагуляции плазмы (контроль - 66,0±0,6 мин и 74,8±0,7 мин; через 15 мин экспозиции -146,1±0,7 мин и 228,5±1,6 мин; через 30 мин - 164,8±0,7 мин и 263,7± 1,6 мин, соответственно), смещением акрофазы, увеличением вклада циркадианного ритма и амплитуды (контроль - 7,6±0,7 мин; через 15 мин экспозиции - 48,3±3,0 мин; через 30 мин - 60,0±3,6 мин), что свидетельствует об адаптивном напряжении изучаемых штаммов S. aureus.

В течение суток выявлены периоды (2.00; 5.00; 8.00; 14.00 часов), когда время коагуляции плазмы музейными штаммами S. aureus после 30 мин экспозиции с пероксимедом не отличалось от времени коагуляции после 15-ти минутной экспозиции (W = 20, р>0,05), а в некоторых случаях было даже меньше. Т.е. более длительная экспозиция с небольшими концентрациями дезинфектанта способствовала адаптации патогена, что проявлялось в увеличении плазмокоагулазной активности.

У госпитальных изолятов S. aureus 2305 и 2888 также наблюдалось увеличение времени коагуляции плазмы, хотя и в меньшей степени, чем у музейных штаммов (контроль - 47,3±0,5 и 50,0±0,5 мин; после 15-ти минут-

ной экспозиции с пероксимедом - 111,0±0,7 и 116,6±0,4 мин; после 30-ти минутной экспозиции -143,0±0,6 и 155,7±0,5 мин, соответственно),

Под воздействием суббактериостатических концентраций гентамици-на у музейного штамма S. aureus (гентамицинчувствительный) изменились ритмометрические параметры: уменьшился вклад циркадианного ритма, появился ультрадианный ритм, снизился среднесуточный показатель про-лиферативной активности, амплитуда ритма, изменилась акрофаза (р<0,05), т.е. наблюдалась десинхронизация. Изменения биоритмов пролиферативной активности музейного штамма S. aureus свидетельствуют о снижении адаптационных возможностей микроба и необратимых изменениях, в дальнейшем приводящих культуру к гибели.

У госпитального изолята S. aureus (гентамицинрезистентного) достоверных изменений при таком же режиме воздействия гентамицином не выявлено (р>0,05). Отсутствие изменений может быть использовано для дифференциации госпитальных изолятов от музейных штаммов.

Под действием суббактериостатических концентраций ванкомицина на пролиферативную активность S. aureus было установлено изменение ритмометрических показателей, как у музейного штамма, так и у госпитального изолята (W = -34; - 30, соответственно, р<0,05). Увеличивалось среднесуточное значение пролиферативной активности у музейного и госпитального штаммов (ванкомицинчувствительных) по сравнению с контролем в 3 раза (с 107,0±3,2 КОЕ/мл до - 321,5±7,4 КОЕ/мл и с 126,4±2,3 КОЕ/мл до 4,5±3,8 КОЕ/мл, соответственно). У музейного штамма появился ультрадианный ритм. Акрофаза пролиферативной активности музейного штамма сместилась с ночного периода на утро, у госпитального изолята акрофаза роста отмечалась в 14.00 и 20.00 часов, в отличие от контроля с максимумами в 5.00; 14.00 и 23.00 часа. У обоих штаммов отмечено сильное увеличение амплитуды ритма (у музейного - с 26,6 КОЕ/мл до 87,6 КОЕ/мл; у госпитального с 14,2 КОЕ/мл до 130,9 КОЕ/мл), что свидетельствует о сильном адаптивном напряжении, попытке стабилизировать внутреннее состояние после стрессового воздействия ванкомицина.

Под действием суббактериостатических концентраций ванкомицина на плазмокоагулазную активность S. aureus выявлено уменьшение времени

коагуляции плазмы музейным штаммом и госпитальным изолятом (W = 36, р<0,05). Все остальные ригмометрические параметры не отличались от контрольных значений (без воздействия антибиотика). Выявленные особенности суббактериостатических концентраций ванкомицина усиливать плазмо-коагулазную активность, а также стимулировать рост микроба, способствуя увеличению численности S. aureus, необходимо учитывать при рациональной антибиотикотерапии.

Таким образом, обнаруженные изменения биологических ритмов различных свойств S. aureus под влиянием антимикробных препаратов подтверждают высказывания ряда авторов о том, что это отражает адаптационные возможности патогена, т.к. биологический ритм все время подстраивается к новой среде обитания, чтобы дать организму максимальную возможность адаптироваться к окружающей среде путем синхронизации его собственных ритмов с внешними циклами (Агаджанян H.A., 1998; Губин Д.Г., 1989; Смирнов В.М., 2002; Маркина В.В., Романов Ю.А., 2005).

Ритмометрические параметры, как наиболее чувствительные, первыми реагируют на влияние какого-либо фактора окружающей среды. Это позволяет выявить информативные биоритмологические критерии для оценки наиболее ранних изменений показателей физиологической активности, а также определить механизмы адаптивных реакций микробов на действие различных факторов.

Результаты проведенной работы позволили выделить два основных момента:

- для музейных штаммов S. aureus характерны преимущественно цир-кадианные ритмы пролиферативной активности, патогенных свойств, чувствительности к антибиотикам в отличие от госпитальных изолятов, для которых основными являлись ультрадианные ритмы;

- антимикробные препараты изменяли биоритмы пролиферативной и плазмокоагулазной активности S. aureus в отношении их устойчивости к препаратам, отражая потенциальную возможность патогена к адаптации в изменяющихся условиях существования.

ВЫВОДЫ:

1. Определены особенности ритмов биологических свойств у музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus: циркадианная динамика про-лиферативной, протеазной, каталазной, плазмокоагулазной, гемолитической активности у музейных штаммов и ультрадианные ритмы этих характеристик у госпитальных изолятов.

2. Выявленные различия в хроноинфраструктуре ритмов пролиферативной активности музейных штаммов и госпитальных изолятов позволили разработать метод дифференциальной диагностики госпитальных изолятов S. aureus.

3. Хронобиологический подход позволил выявить генетически детерминированный признак - гемолитическую активность госпитального изолята S. aureus, типированного традиционным методом как гемолитически негативный вариант. *

4. Установлена прямая корреляция между пролиферативной и гемолитической активностью музейного штамма S. aureus и обратная корреляция между пролиферативной и протеазной, каталазной, плазмокоагулазной активностью. У госпитального изолята S. aureus пролиферативная активность находилась в прямой корреляции с каталазой и обратной с плазмокоагулазой.

5. Установленные различия чувствительности музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus к антибиотикам и дезинфектантам в течение суток могут иметь значение для дальнейших исследований в области рациональной антибиотикотерапии и проведении дезинфекционных мероприятий.

6. Продемонстрирована принципиальная возможность изменения биологических ритмов пролиферативной и плазмокоагулазной активности S. aureus под воздействием антимикробных препаратов: под действием пе-роксимеда и гентамицина отмечены изменения ритмометрических параметров у музейных штаммов; суббактериостатические концентрации ванкоми-цина приводили к изменению этих параметров, как музейных штаммов, так и госпитальных изолятов S. aureus.

7. Выявление суточной динамики биологических свойств определяет возможность нового подхода к изучению адаптивного потенциала микроорганизмов.

Список публикаций:

1. Биоритмы пролиферативной активности музейных и госпитальных штаммов микроорганизмов/ Я.И. Паромова, Т.А. Сергеева, Г.Н. Чередниченко, В.М. Ниязов // Материалы XXXVIII Всероссийской научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной и клинической медицины». - Тюмень, 2004. -С. 56-57.

2. Суточная динамика биохимической активности музейных и госпитальных штаммов микроорганизмов под действием пероксимеда/ Я.И. Паромова, СЛ. Галян, Т.Х. Тимохина, Н.А. Курлович,

B.В. Варницына, P.M. Хохлявина, Г.Н. Иванова, М.В. Николенко // Медицинская наука и образование Урала, 2005. № 5. - С. 86.

3. Адаптивный потенциал Staphylococcus aureus при госпитальных инфекциях/ Т.Х. Тимохина, В.В. Варницына, Я.И. Паромова, Н.А. Курлович,

3.А. Кашуба, М.В. Николенко, P.M. Хохлявина, Г.Н. Иванова II Медицинская наука и образование Урала, 2006. № 2. - С. - 94-103.

4. Биоритмы пролиферативной активности музейных и госпитальных штаммов микроорганизмов/ Т.Х. Тимохина, Н.А. Курлович, Я.И. Паромова, В.В. Варницына, Э.А. Кашуба, Д.Г. Губин, P.M. Хохлявина, М.В. Николенко // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2007. № 4. - С. 3-5.

5. Временная организация биологических свойств STAPHYLOCOCCUS AUREUS/ Я.И. Паромова, В.В. Варницына, Н.А. Курлович, Н.Б. Перунова,

C.Л. Галян, Т.Х. Тимохина // Медицинская наука и образование Урала, 2008. №2.-С. 56-57.

6. Суточные биоритмы антибиотикорезистентности, плазмокоагулазной и антилизоцимной активности Staphylococcus aureus/ Н.Б. Перунова, С.Б. Фадеев, Я.И. Паромова, Т.Х. Тимохина и др.// Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2008. № 3. - С. 6-9.

7. Биоритмы биологических свойств Staphylococcus aureus как фактор их адаптации при госпитальной инфекции/ Т.Х. Тимохина, В.В. Варницына,

Я.И. Паромова, Н.А. Курлович, М.В. Николенко, Э.А. Кашуба // Медицинская наука и образование Урала, 2009. № 3. - С. 118-119. 8. Биологические свойства доминирующих микроорганизмов в отделениях хирургического профиля/ Т.Х. Тимохина, М.В. Николенко, Я.И. Паромова, В.В. Варницына, А.А. Барадулин // Медицинская наука и образование Урала, 2010. № 2. - С. 100-101. Патенты:

Способ диагностики госпитальных штаммов /Э.А. Кашуба, Т.Х. Тимохина, Н.А. Курлович, Я.И. Паромова, В.В. Варницына, P.M. Хохлявина, Д.Г. Губин, Л.Б. Козлов// Патент РФ на изобретение № 2285258 от 10.10.2006 г. Бюл. №28.

]

Список сокращений:

АТСС - American Type Culture Collection (американская коллекция типовых культур)

КОЕ - колониеобразующая единица ОМЧ - общее микробное число ПЛК - плазмокоагулаза

МПК - минимальная подавляющая концентрация С - концентрация 1 г - коэффициент ранговой корреляции Спирмена Т - критерий Манна-Уитни W - критерий Уилкоксона

ПАРОМОВА ЯНА ИГОРЕВНА Суточная динамика биологических свойств Staphylococcus aureus

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Оригинал макет подготовлен в программе Word for Windows 2003 Подписано в печать 19.10.2010 Формат 60*84/16. Усл.-печ. л. 1,0. Печать оперативная. Бумага офсетная. Гарнитура Times/ Тираж 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Паромова, Яна Игоревна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. БИОЛОГИЧЕСКИЕ РИТМЫ РАЗЛИЧНЫХ СВОЙСТВ

МИКРООРГАНИЗМОВ (обзор литературы).

1.1. Современное представление о биологических ритмах.

1.2. Биологические свойства S. aureus.

1.3. Влияние различных факторов на биологические свойства

S. aureus.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы исследования.

2.1.1. Характеристика микроорганизмов, используемых в работе.

2.1.2. Выделение и идентификация микроорганизмов, используемых в работе.

2.2. Методы изучения биологических свойств S. aureus.

2.2.1. Определение пролиферативной активности.

2.2.2. Определение активности плазмокоагулазы.

2.2.3. Определение активности протеазы.

2.2.4. Определение активности каталазы.

2.2.5. Определение гемолитической активности.

2.3. Определение антибиотикочувствительности S. aureus.

2.4. Определение чувствительности S. aureus к дезинфектантам.

2.5. Методика изучения регулирующего влияния антимикробных препаратов на биологические свойства S. aureus.

2.5.1. Методика определения суббактериостатических концентраций антимикробных препаратов.

2.5.2. Методы изучения влияния антимикробных препаратов на биологические свойства S. aureus.

2.6. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. ОСОБЕННОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МУЗЕЙНЫХ ШТАММОВ И ГОСПИТАЛЬНЫХ ИЗОЛЯТОВ S. AUREUS В СУТОЧНОЙ ДИНАМИКЕ.

3.1. Суточная динамика пролиферативной активности музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus

3.2. Суточная динамика протеазной активности музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus

3.3. Суточная динамика каталазной активности музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus

3.4. Суточная динамика гемолитической активности музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus

3.5. Суточная динамика плазмокоагулазной активности S. aureus.

ГЛАВА 4. ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ S. AUREUS К АНТИМИКРОБНЫМ ПРЕПАРАТАМ С УЧЕТОМ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ОСОБЕННОСТЕЙ ИХ СУТОЧНОЙ ДИНАМИКИ.

4.1. Суточная динамика антибиотикочувствительности S. aureus.

4.2. Суточная динамика чувствительности S. aureus к дезинфектантам.

ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ АНТИМИКРОБНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА БИОРИТМЫ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ S. AUREUS.

5.1. Влияние пероксимеда на пролиферативную активность музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus.

5.2. Влияние пероксимеда на плазмокоагулазную активность музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus.

5.3. Влияние гентамицина на пролиферативную активность

S. aureus

5.4. Влияние ванкомицина на пролиферативную активность

S. aureus.

5.5. Влияние ванкомицина на плазмокоагулазную активность музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Суточная динамика биологических свойств Staphylococcus aureus"

Для современного этапа развития медико-биологических наук характерен все возрастающий интерес к закономерностям организации живого во времени. Ритмы охватывают все проявления живого — от деятельности субклеточных структур и отдельных клеток до сложных форм поведения организма, популяций и экологической системы. Это свидетельствует, что биоритмы являются универсальным и важнейшим свойством жизни (Агаджанян H.A., Башкиров A.A., 1987; Арушанян Э.Б., 2000; Cornelissen G., Halberg F., 1994). Одна из основных концепций современной хронобиологии базируется на принципах системного подхода к исследованию биоритмов, рассматривая организацию биологических систем не только в пространстве, но и во времени (Комаров Ф.И., 2007; Романов Ю.А., 2000; Halberg F., 2006). Хронобиологичесий анализ должен предусматривать сопоставление ритмов тех физиологических процессов, которые связаны между собой, а в совокупности создают основу пространственно-временной организации системы (Романов Ю.А., 2002).

Изучение биоритмов открывает новые возможности в решении ряда медико-биологических проблем - механизмов гомеостаза, адаптации, чувствительности к лекарственным средствам, диагностики, лечения, профилактики заболеваний человека. Установленные закономерности биологических ритмов используются при организации труда и отдыха людей, изучения умственной и физической работоспособности человека, в космической биологии (Комаров Ф.И, Рапопорт С.И., Чибисов С.М., 2008; Романов Ю.А., 1990; Aschoff J., 1985; Cornelissen G., 1993; Halberg F., 1991; Minors D.S., 1992). Поэтому чрезвычайно важным является обнаружение в живой системе ритмических колебаний всех жизненных процессов (Маркина В.В., Романов Ю.А., 2005; Ноздрин Г.А., 2006; Маркина В.В., 2008; Смирнов С.Н., 2008). Биологические ритмы различных функций хорошо изучены у эукариотических клеток. Сведения же о биоритмах прокариот единичны, противоречивы, не систематизированы (Павлович Н.В., 1991; Капитанов Е.А., Жмакин А.И., 1992; Rippert F., Lloyd D., 1987; Lloyd А., Rossi E., 1992; 1993; Min H., Guo H., Xiong J., 2005).

Для изучения биоритмов прокариотов нами в качестве модели был взят Staphylococcus aureus (S. aureus). Интерес к этим микроорганизмам обусловлен их важным биомедицинским значением (Бухарин О.В., 2002; 2006; Валышев A.B., 2006; Григорьев Е.В., 2009). S. aureus является уникальным микроорганизмом, он колонизирует и поражает многие органы и ткани, демонстрируя, при этом, широкий диапазон адаптационных возможностей (Николаева И.В., 2000; Усвяцов Б.Я., 2000; Учайкин В.Ф., 2003; Габриэлян Н.И., 2004; Чернуха М.Ю., 2005; Кафарская Л.И., 2006, Флуер Ф.С., 2006; Поспелова C.B., Горовиц Э.С., 2008). Успехи в изучении биологии стафилококков позволили относительно полно охарактеризовать механизмы и факторы, способствующие развитию инфекционной патологии у человека (Бухарин О.В., 2002, Валышев A.B., 2006, Карташова О.Л., 2006, 2007). Изучение ритмических колебаний различных функций стафилококков позволяет по-новому подойти к оценке биологических свойств возбудителя, способствовуя разработке новых подходов к микробиологической диагностике стафилококковых инфекций, созданию предпосылок для дальнейших исследований по осуществлению рациональных антимикробных мероприятий.

Целью настоящей работы явилось изучение особенностей биологических свойств S. aureus и влияние на них антимикробных препаратов в разное время суток. Задачи:

1. Изучить биологические ритмы пролиферативной активности и патогенных характеристик (протеазной, каталазной, гемолитической, плазмокоагулазной активности) музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus в разное время суток.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые представлена характеристика суточной динамики пролиферативной активности и патогенных свойств S. aureus. Обнаружены циркадианные ритмы пролиферативной активности у музейных штаммов S. aureus, в отличие от госпитальных изолятов, у которых выявлены преимущественно ультрадианные ритмы. У музейных штаммов S. aureus отмечены в основном циркадианные ритмы факторов патогенности с акрофазами протеазной, каталазной и плазмокоагулазной активности в утренние часы, гемолитической - в вечернее время. У госпитальных изолятов обнаружены ультрадианные ритмы данных факторов, с акрофазами в вечернее и ночное время. Полученные результаты, расширяя теоретические представления о различных периодах физиологической активности биологических свойств патогенов в течение суток, позволили разработать способ дифференциации госпитальных изолятов S. aureus от музейных штаммов (патент РФ № 2285258, от 10.10.2006 г. Бюл. № 28).

Определена прямая корреляция между пролиферативной и гемолитической активностью и обратная корреляция между пролиферативной активностью и протеазной, каталазной, плазмокоагулазной активностью S. aureus в течение суток, что указывает на способность микроорганизмов в период минимальной пролиферации более успешно противостоять факторам защиты организма хозяина за счет максимального количества факторов патогенности (протеазы, каталазы, плазмокоагулазы).

Обнаружена суточная динамика чувствительности к антимикробным препаратам музейных и госпитальных изолятов S. aureus. Определено варьирование минимальных подавляющих концентраций (МПК) дезинфек-тантов в разное время суток. Выявлены периоды резистентности к антибиотикам у музейных (чувствительных к препаратам) штаммов S. aureus и периоды чувствительности у госпитальных (антибиотикорезистентных) изолятов в течение суток.

Установлено модулирующее влияние антимикробных препаратов на пролиферативную и плазмокоагулазную активность S. aureus. Показано изменение среднесуточного значения показателей, колебание амплитуды, смещение акрофазы под действием антимикробных препаратов, что свидетельствует о возможностях микроорганизма адаптироваться к изменяющимся условиям путем координации и регуляции собственных ритмометрических параметров и синхронизации их с внешними циклами.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Выявленные биоритмы пролиферативной активности, факторов патогенности, их взаимосвязь в суточной динамике, лабильность биоритмов под влиянием антимикробных препаратов расширяют теоретические представления о физиологии биологических свойств S. aureus, его способности к адаптации в изменяющихся условиях среды.

Практическое значение исследований определяется разработкой хронобиологического метода изучения пролиферативной активности S. aureus, позволяющего дифференцировать госпитальные изоляты от музейных штаммов на основе сравнительного анализа суточной динамики данного биологического свойства S. aureus.

Предложенный методический подход к изучению биологических свойств стафилококков может быть рекомендован для идентификации S. aureus и дальнейших исследований в области рациональной антимикробной терапии, а также использован в учебно-педагогическом процессе (акт внедрения результатов диссертационной работы № 01/1928 от 06.09.2010 г).

Положения, выносимые на защиту

1. Госпитальные изоляты S. aureus имеют преимущественно ультрадианные ритмы пролиферативной активности и факторов патогенности, в отличие от музейных штаммов, для которых характерны циркадианные ритмы.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на: V Всероссийской конференции «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2006); научной сессии, посвященной 10-летию Южно-Уральского научного центра РАМН «Медицинская академическая наука — здоровью населения Урала» (Челябинск, 2008); выездной сессии Президиума РАМН (Челябинск, 2009); и заседании Тюменского филиала Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов, паразитологов (ВНПОЭМП), Тюмень, 2009.

Публикации

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Паромова, Яна Игоревна

ВЫВОДЫ:

1. Определены особенности ритмов биологических свойств у музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus: циркадианная динамика проли-феративной, протеазной, каталазной, плазмокоагулазной, гемолитической активности у музейных штаммов и ультрадианные ритмы этих характеристик у госпитальных изолятов.

5. Установленные различия чувствительности музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus к антибиотикам и дезинфектантам в течение суток могут иметь значение для дальнейших исследований в области рациональной антибиотикотерапии и проведению дезинфекционных мероприятий.

6. Продемонстрирована возможность изменения биологических ритмов пролиферативной и плазмокоагулазной активности S. aureus под воздействием антимикробных препаратов: под действием пероксимеда отмечены изменения ритмометрических параметров в основном у музейных штаммов; суббактериостатические концентрации ванкомицина приводили к изменению этих параметров, как музейных штаммов, так и госпитальных изолятов S. aureus.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время отмечается повышенный интерес к изучению временной организации процессов в различных организмах, поскольку ритмы наблюдаются во всем диапазоне существующих биосистем — от одноклеточных до сложных многоклеточных организмов. Это свидетельствует о том, что биоритмы являются универсальным и важнейшим свойством жизни. Проблема адаптации, нормы и гомеостаза также должны рассматриваться с учетом циклического течения всех процессов жизнедеятельности. Это означает, что глубокий хронобиологический анализ должен предусматривать сопоставление ритмов тех физиологических процессов, которые связаны между собой, а в совокупности создают основу пространственно-временной организации системы.

С позиций биоритмологии правильнее говорить не о гомеостатическом постоянстве, а о гомеостатической динамике, которая создает в организме стабильность и устойчивость (Дильман В.М., 1986). Поэтому чрезвычайно важным является обнаружение в любой системе ритмических колебаний всех процессов (Губин Г.Д., Герловин Е.Ш., 1980; Комаров Ф.И., 1989).

Однако в литературе мы встретили единичные данные об исследовании хроноинфраструктуры микроорганизмов. Биоритмы хорошо описаны у эукариот. Что касается прокариот, то более подробно изучены ритмы у цианобактерий, и представлено несколько работ по исследованию цирканнуальных и циркадианных ритмов у золотистого стафилококка и кишечной палочки (Павлович Н.В., 1991; Капитанов Е.А., Жмакин А.И., 1992; Поликарпов Н.А., 1994, 1995, 1996). Данных о биоритмах вариантов микроорганизмов, адаптированных к больничным условиям, мы не обнаружили. В связи с этим, важным является изучение физиологических свойств музейных штаммов и госпитальных изолятов микробов, что поможет расширить представление о биологических свойствах прокариот. Изучение ритмических колебаний различных функций стафилококков позволит поновому подойти к оценке биологических свойств возбудителя, способствуя разработке новых подходов к микробиологической диагностике стафилококковых инфекций, созданию предпосылок для дальнейших исследований по осуществлению рациональных антимикробных мероприятий. Это и определило цель и задачи нашего исследования.

Целью настоящего исследования явилось изучение особенностей биологических свойств S. aureus и влияние на них антимикробных препаратов в разное время суток.

Для реализации этой цели были поставлены и решены следующие задачи: изучены биологические ритмы пролиферативной активности, патогенных характеристик (протеазной, каталазной, гемолитической, плазмо-коагулазной активности) музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus в разное время суток; определена чувствительность S. aureus к антимикробным препаратам с учетом индивидуальных особенностей их суточной динамики; проведена оценка влияния антимикробных препаратов на биоритмы пролиферативной и плазмокоагулазной активности S. aureus.

Для исследований были взяты 5 штаммов S. aureus: 2 музейных штамма (АТСС 25923 и института им. JI.A. Тарасевича - 209-Р) и 3 госпитальных изолята, выделенных из клинического материала раневого отделяемого пациентов ожогового центра Областной клинической больницы г. Тюмени. Изучение суточной динамики пролиферативной активности проводили на основании патента РФ № 2285258, 2006. Изучение биологических свойств S. aureus проводили по известным адаптированным методикам (Нетрусов А.И., 2005; Бухарин О.В. с соавт., 2000; 2006; Меньшиков В.В, 2003).

Результаты обработали с помощью статистических методов.

В серии проведенных экспериментов обнаружена суточная динамика пролиферативной активности музейных штаммов S. aureus. Это подтверждает исследования ряда авторов (Павлович Н.В., 1991; Капитанов Е.А.,

Жмакин А.И., 1992), которые указывали на наличие у некоторых микроорганизмов циркадианных и цирканнуальных биоритмов.

При оценке временных параметров биоритмов музейных штаммов S. aureus установлены статистически значимые циркадианные ритмы пролиферативной активности со стабильными положениями акрофаз. Полученные результаты согласуются с мнением многих авторов, что околосуточные ритмы охватывают все проявления живого - от деятельности субклеточных структур и отдельных клеток до сложных форм поведения организма и даже популяций и экологической системы, т.е. являются фундаментальным всеобщим свойством жизни (Агаджанян H.A., 1987; Алпатов A.M., 1993, Комаров Ф.И., Рапопорт С.И., 2000).

Проведенный ритмометрический анализ показал, что у S. aureus максимальные значения показателя пролиферативной активности наблюдались в вечернее и ночное время (17.00 - 2.00 часа), минимальные - в утреннее время (11.00 часов). Рассматривая амплитуду как информативный показатель при оценке адаптивного напряжения, мы отметили, что наибольшей амплитудой характеризовались музейные штаммы S. aureus. Ритмометрический анализ выявил у музейных штаммов S. aureus ведущий циркадианный ритм пролиферативной активности. Для госпитальных штаммов S. aureus характерна гетерогенность биоритмов пролиферативной активности, а также смещение акрофаз от соответствующих параметров музейных штаммов. Для этих микроорганизмов не выявлено четкой закономерности данного свойства, они могли проявлять максимальную пролиферативную активность и в дневное, и в ночное время. У госпитальных изолятов выявлены преимущественно ультрадианные биоритмы пролиферативной активности, что не противоречит исследованиям авторов Lloyd A., Rossi Е. (1992), Min Н., Guo Н., Xiong J. (2005). К характерным свойствам таких ритмов относятся: значительная нерегулярность (вариабельность периодов), устойчивость к внешним воздействиям и способность к адаптивному ответу на периодические раздражители (Kippert F., Lloyd D., 1987; Сергеева Э.П. и соавт., 1987; Нечаева Н.В., Харазова А.Д., 1989; Lloyd А., Lloyd D., 1993).

Госпитальные изоляты S. aureus имели различный спектральный состав ритмов, причем преобладание того или иного периода ритма явно выражено и, можно сказать, являлось типовым признаком в хроноструктуре изученных временных рядов их пролиферативной активности. Результаты исследований положены в основу изобретения дифференциации госпитальных изолятов стафилококка, согласно которому госпитальные изоляты диагностируют по отсутствию совпадения хроноинфраструктуры биоритмов с эталонными (музейными) биоритмами бактерий (патент на РФ изобретение № 2285258, от 10.10.2006г.). Данный метод, характеризующийся высокой специфичностью и чувствительностью, позволяет дифференцировать госпитальные изоляты от музейных штаммов на основании сравнения показателей ритмов (вкладов: циркадианного - 24-х часового и ультрадианного - < 20-ти часового и амплитуды). Метод дает возможность оценить различные периоды физиологической активности S. aureus в разное время суток.

Особое внимание уделялось в нашей работе исследованию суточной динамики патогенных характеристик исследуемых микроорганизмов, в частности, плазмокоагулазной, протеазной, каталазной, гемолитической активности и сопоставление этих показателей с пролиферативной активностью S. aureus. В литературных источниках мы обнаружили лишь единичные сведения о биоритмах биохимической активности микробов. По данным Н.В. Павловича (1991), изменения биохимических свойств эшерихий, сальмонелл проявлялись повышением активности микроорганизмов, инокулированных днем (в 1,5-2 раза) и более низкой активностью — в ночные часы. Эти изменения находились в зависимости от смены сезонов, солнечной активности, фазы Луны. H.A. Поликарпов (1995) указывал также на циклические изменения в течение года способности тест-культур S. aureus коагулировать плазму в зависимости от гелиомагнитной активности. В серии наших экспериментов обнаружена суточная динамика плазмокоагулазной активности S. aureus. Музейные штаммы S. aureus (209-Р и 25923) проявляли наибольшую плазмокоагулазную активность в утренние часы - 5.00 и 11.00, минимальную - в вечерние и ночные часы - 17.00 и 23.00 часа. Госпитальные штаммы, напротив, характеризовались ультрадианным ритмом с максимальной активностью в ночные часы (23.00; 2.00) и ранние утренние часы (5.00). Плазмокоагулаза рассматривается рядом авторов как один из основных факторов патогенности стафилококка, независимо от наличия или отсутствия у них гемолитических свойств, характера пигмента и используется только для типирования стафилококков на коагулазопо-ложительные или коагулазоотрицательные (Кондрашова З.Н., 1999; Елисютина О.Г., Феденко Е.С., 2004; Меньшиков В.В., 2003). Результаты наших исследований показали, что госпитальные изоляты S. aureus быстрее коагулировали плазму по сравнению с музейными штаммами (Т = 36, р<0,05). Отработанные оптимальные условия оценки активности плазмокоагулазы штаммов S. aureus можно использовать для индикации госпитальных изолятов стафилококков, которые обладают более ранней по времени плазмокоагулазной способностью, по сравнению с негоспитальными штаммами.

Также была выявлена суточная динамика других факторов патогенности изучаемых культур S. aureus — протеазы, каталазы, гемолитической активности. По результатам наших исследований протеазная и каталазная активность музейного штамма S. aureus достигала максимума в утренние и дневные часы, гемолитическая активность, напротив, - в вечерние и ночные часы. У госпитального изолята все факторы патогенности проявляли наибольшую активность в вечерние и ночные часы. Продукция ферментов у одного и того же штамма S. aureus в течение суток изменялась в 3 - 4 раза. Следовательно, эти факторы указывают на различные суточные периоды активности микробных культур и, возможно, отражают стратегию распределения патогенных ресурсов S. aureus в течение суток.

Наибольшей среднесуточной активностью протеазы, каталазы и гемолизина характеризовался музейный штамм S. aureus. Госпитальные изоляты S. aureus обладали более высокой плазмокоагулазной активностью. Сравнительный анализ показал достоверную разницу протеазной, гемолитической активности между музейными штаммами и госпитальными изолятами S. aureus (Т = 40, р<0,05), но не выявил существенной разницы каталазной активности сравниваемых групп (Т = 58, при р>0,05).

Различия были выявлены и при сравнении значений амплитуд изучаемых культур. Наибольшими значениями этого показателя характеризовался также музейный штамм S. aureus, что свидетельствует о стабильности ритма культуры. Интерес представляет тот факт, что госпитальный изолят S. aureus был типирован как негемолитический, но исследуя этот показатель в суточной динамике, мы выявили наличие гемолитической активности у данного микроорганизма, с максимальным значением этого показателя в 2.00 часа. Вероятно, суточные исследования позволяют выявить генетически детерминированные признаки микроорганизмов, которые не могут быть определены традиционными методами.

Сравнительный анализ позволил выявить корреляцию между пролиферативной активностью и патогенными характеристиками S. aureus. Показатели пролиферативной активности положительно коррелировали с гемолитической активностью (г = 0,38; р<0,05), но отрицательно коррелировали с каталазной активностью (г = -0,58; р<0,05), протеазной активностью (г = -0,60; р<0,05) и плазмокоагулазной активностью (г = -0,81; р<0,05) музейного штамма S. aureus. Т.е. в период минимальной пролиферативной активности стафилококков наблюдалась продукция ферментов (плазмокоагулазы, протеазы, каталазы), способствующих выживанию патогенов в организме хозяина. С увеличением пролиферативной активности максимальных значений достигала продукция повреждающих факторов -гемолизинов. У госпитального изолята S. aureus была выявлена положительная корреляция пролиферативной активности с каталазной активностью (г = 0,57; р<0,05) и отрицательная с плазмокоагулазной активностью (г = -0,91; р<0,05). С протеазной и гемолитической активностью четкой корреляции не обнаружено (г = -0,07; р>0,05; г = -0,29; р>0,05, соответственно), хотя в период минимальной пролиферативной активности наблюдали увеличение продукции протеазы и гемолизинов.

Полученные данные не противоречат существующему принципу попеременной (асинхронной) работы структур организма (Комаров Ф.И., 1989). Он справедлив для всего диапазона структурных уровней организма, начиная от системного и кончая молекулярным. Так, при интенсивном функционировании той или иной системы органов функциональная активность многих других систем снижается: в одной и той же клетке адаптивная интенсификация синтеза одних ферментов обязательно сопровождается ингибированием продукции других. Это свидетельствует о том, что организму свойственна способность экономии материальных ресурсов и максимальная концентрация их на главном участке развертывания приспособительной реакции в каждый данный момент (Лукомская К.А., 1987; Комаров Ф.И., 2000).

Полученные результаты представляют интерес еще и в связи с тем, что отображают, по всей видимости, саморегуляцию продукции ферментов патогенности, которые определяют в значительной степени судьбу микробной клетки в организме хозяина. На это указывал H.A. Поликарпов (1994, 1995, 1996), изучая активность продукции факторов патогенности в течение года.

Были проведены исследования антибиотикочувствительности музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus в разное время суток. В результате исследований выявлена суточная динамика чувствительности музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus к антимикробным препаратам. Музейный штамм S. aureus характеризовался различной чувствительности к большему количеству антибиотиков в течение суток. Было обнаружено варьирование МПК к амоксиклаву, цефазолину, имипенему, гентамицину, рифампицину, клиндамицину, ванкомицину на протяжении суточного ритма. Максимальная чувствительность к этим антибиотикам была зарегистрирована в 5.00; 17.00; 20.00 и 23.00 часа. Выявлена обратная корреляция между минимальными значениями подавляющей концентрации имипенема, клиндамицина и пролиферативной активностью музейного штамма S. aureus. У музейного штамма S. aureus отмечены периоды резистентности к изучаемым антибиотикам в различное время суток. Эти периоды соответствовали минимальной пролиферативной активности данного штамма (8.00; 11.00; 14.00 часов). Суточная динамика чувствительности к антибиотикам у госпитального изолята S. aureus была выявлена только к тем антибиотикам, которые реже используются в практике как антистафилококковые (цефалотин, моксифлоксацин, гатифлоксацин, синерцид). У госпитального изолята отмечалась чувствительность к моксифлоксацину в 5.00; 20.00 и 23.00 часа и синерциду в 2.00; 5.00 и 23.00 часа, умеренная чувствительность на всем протяжении суточного ритма, кроме 2.00 и 8.00 часов. Следовательно, у госпитальных изолятов по отношению к этим антибиотикам были отмечены периоды чувствительности в течение суток.

На всем протяжении суточного периода госпитальный штамм был чувствителен только к ванкомицину, причем МПК ванкомицина по отношению к госпитальному изоляту была ниже, чем к музейному штамму (0,78 мкг/мл и 1,56 мкг/мл, соответственно).

Обнаружена суточная динамика чувствительности к пероксимеду, хлорамину, жавелиону как у музейных, так и у госпитальных штаммов

S. aureus. При оценке чувствительности имело значение время экспозиции культуры с рабочими концентрациями антисептиков и дезинфектантов.

Выявлена суточная динамика чувствительности музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus к пероксимеду, хлорамину. МПК хлорамина - 0,19% по отношению к музейному штамму S. aureus определена в 2.00 и 23.00 часа, к госпитальному изоляту S. aureus - в 2.00 часа; МПК пероксимеда зарегистрирована в 11.00 часов для музейного штамма, в 23.00 часа - для госпитального изолята S. aureus.

Таким образом, различная чувствительность S. aureus к антибиотикам и дезинфектантам в течение суток может иметь значение, как для идентификации штаммов, так и для дальнейших исследований по осуществлению рациональной антибиотикотерапии и проведению дезинфекционных мероприятий. Факт выявления периодов резистентности к некоторым антибиотикам музейного штамма S. aureus может рассматриваться как потенциальная способность патогена к формированию резистентности к этим препаратам.

Доказано, что при взаимодействии микроорганизмов с различными стрессовыми факторами (антисептики, метаболиты, алкилоксибензолы и др.), возможны изменения численности популяции, факторов патогенности, стрессоустойчивости (Красильников А.П., 1994; Сузина Н.Е., 2001; Эль-Регистан Г.И., 2001; Ильинская О.Н., 2002; Бухарин О.В., Сгибнев A.B., 2002; Иванова Е.Б., 2004). В нашей работе мы предприняли попытку исследовать влияние антимикробных препаратов (пероксимед, гентамицин, ванкомицин) на биоритмы пролиферативной и плазмокоагулазной активности музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus.

Под влиянием пероксимеда (концентрация 0,5%) в структуре биоритмов микробов происходили изменения ритмометрических показателей. У музейных штаммов S. aureus наблюдалось достоверное снижение среднесуточного значения пролиферативной активности (W = 34, р<0,05).

Менялся профиль биоритма: для музейного штамма 209-Р становился характерным только ультрадианный (в контроле до воздействия пероксимеда у музейных штаммов присутствовал только достоверный циркадианный ритм). Отмечено снижение амплитуды. Также у этих штаммов наблюдалось смещение акрофазы у штамма 25923 с 17.00 на 9.00 часов, у штамма 209-Р с 20.00 на 00.00 часов. Следовательно, на основании изменения всех ритмометрических параметров, существенном смещении акрофаз (асинхронности), вплоть до противофазности, у музейных штаммов выявлен десинхроноз ритма. Сравнительный анализ показал обратную корреляцию между ритмом пролиферативной активностью до и после воздействия пероксимедом (25923 - г = -0,54; 209-Р - г = -0,64; при р<0,05). В период максимальной пролиферативной активности суббактериостатические концентрации пероксимеда более эффективно воздействовали на музейные штаммы S. aureus, снижая их численность.

На основании проведенных исследований установлено, что под действием пероксимеда также происходило снижение среднесуточных значений показателей пролиферативной активности госпитальных изолятов S. aureus 2888 и 2891 (W = 36, р<0,05). Профили ритмов остались без изменений. У штамма S. aureus 2891 в 2.00 часа наблюдалась минимальная численность бактерий, до воздействия пероксимеда в этой точке наблюдалось увеличение количества микроорганизмов. У госпитального изолята 2888 появлялся достоверный циркадианный (вклад 17,3%, р<0,05) и ультрадианный ритм (41,9%, р<0,05) по сравнению с контролем, где достоверным был ультрадианный ритм, с 8-ми часовой гармоникой (вклад 74,6%, р<0,05). Отмечались два выраженных достоверных пика пролиферативной активности — в 5.00 и 17.00 часов.

При 30 мин экспозиции культур с 1% раствором пероксимеда музейный штамм S. aureus 25923 приобретал достоверный ультрадианный ритм с акрофазами в 14.00 и 20.00 часов, по сравнению с контролем, с сильным увеличением амплитуды ритма, что может свидетельствовать об усилении адаптивного напряжения данного штамма. В 17.00 часов отмечено резкое снижение пролиферативной активности (в контроле в 17.00 часов — максимальная пролиферативная активность), т.е. наблюдалась инверсия ритма. При 60 мин экспозиции профиль ритма нивелировался, мезор снижался, в некоторых точках роста культуры не было. Следовательно, 1% раствор пероксимеда при 60 мин экспозиции оказывался губительным для музейного штамма S. aureus. Госпитальный изолят S. aureus 2305 характеризовался максимальным увеличением пролиферативной активности в утреннее время - 8.00 и 11.00 часов до воздействия пероксимедом. После воздействия 1% раствора пероксимеда отмечено снижение пролиферативной активности в это время. Госпитальный изолят S. aureus не отличался достоверными изменениями профиля ритма как при 30 мин, так и при 60 мин экспозиции с 1% раствором пероксимеда. Достоверно снижался только мезор.

Таким образом, под действием пероксимеда в структуре биоритмов пролиферативной активности микроорганизмов, как музейных штаммов, так и госпитальных изолятов происходили изменения, определяющие реакцию биологических объектов на влияние стрессовых факторов окружающей среды. Госпитальные изоляты менее чувствительны к пероксимеду, так как под влиянием дезинфектанта в структуре их биоритмов зарегистрировано только достоверное снижение мезора.

Влияние суббактериостатической концентрации пероксимеда на плазмокоагулазную активность проявлялось у музейных штаммов S. aureus увеличением времени коагуляции плазмы после 15-ти и 30-ти минутной экспозиции с дезинфектантом (W = -30; -36, р<0,05), смещением акрофаз, увеличением вклада циркадианного ритма и амплитуды, что свидетельствует об адаптивном напряжении изучаемых штаммов S. aureus.

В течение суток выявлены периоды (2.00; 5.00; 8.00; 14.00 часов), когда время коагуляции плазмы музейными штаммами S. aureus после 30 мин экспозиции с пероксимедом достоверно не отличалось от времени коагуляции после 15 минутной экспозиции (W = 16; 22, р>0,05), а в некоторых случаях было даже меньше. Это может свидетельствовать о том, что длительное время экспозиции с небольшими концентрациями дезинфектанта способствовало адаптации патогена, что проявлялось в усилении плазмокоагулазной активности.

У госпитальных изолятов S. aureus также наблюдалось увеличение времени коагуляции плазмы (W = -36, р<0,05), хотя и в меньшей степени, чем у музейных штаммов. Т.е. госпитальные изоляты менее чувствительны к влиянию суббактериостатических концентраций пероксимеда, чем музейные штаммы.

При изучении времени коагуляции плазмы культур S. aureus (музейных и госпитальных) во втором поколении (после инкубации культур с пероксимедом выращивали микробы в течение 24-ти часов при 37°С на свежей питательной среде и вновь помещали в цитратную кроличью плазму) было отмечено меньшее время коагуляции плазмы S. aureus, инкубированных ранее с пероксимедом в течение 30 мин, чем инкубированных 15 мин. Разница между ними стала не достоверной (W =16; 20, р>0,05), акрофазы этих культур отмечались в одно и тоже время, профили ритма были одинаковыми.

Это свидетельствует о способности к восстановлению плазмокоагулазной активности после культивирования на свежей питательной среде без пероксимеда. Сходные данные были получены Фадеевой Н.И. с соавт. (1978), установившей приближение показателей активности плазмокоагулазы после устранения действия ди-п-окиси хиноксалина на культуру S. aureus.

При исследовании влияния суббактериостатической концентрации гентамицина на суточную динамику пролиферативной активности музейного штамма и госпитального изолята S. aureus оказалось, что различия в значениях мезора, как интегрального показателя хроноинфраструктуры, музейного штамма S. aureus до и после обработки гентамицином достоверны (р<0,05, при доверительном интервале 95%). Амплитуды репродуктивной активности штамма до и после обработки гентамицином отличались по циркадианному и ультрадианным вкладам. Достоверно снижался мезор (W = 36, р<0,05), вклад циркадианного ритма, амплитуда. Появлялся ультрадианный ритм с акрофазами в 8.00 и 17.00 часов. Изменения показателей хроноинфраструктуры биоритмов музейного штамма S. aureus свидетельствуют о состоянии сильного стресса, десинхроноза, который, вероятно, может привести к необратимым изменениям и нежизнеспособности культуры. Следовательно, по этим показателям можно судить о чувствительности S. aureus к данному антибиотику. Пролиферативная активность госпитального штамма S. aureus также снижалась под действием гентамицина. Остальные показатели достоверно не отличались от контрольных значений. Различия в значениях интегрального показателя хроноинфраструктуры штамма до и после обработки гентамицином не достоверны (р>0,05, при доверительном интервале 95%). Установлено, что госпитальный штамм сохранял свой суточный биоритм пролиферативной активности после обработки гентамицином в отличие от музейного штамма.

Таким образом, данные исследования могут являться новым подходом к дифференциации госпитальных изолятов S. aureus.

При исследовании воздействия суббактериостатических концентраций ванкомицина на суточную динамику пролиферативной активности S. aureus было установлено изменение всех ритмометрических показателей. Под влиянием ванкомицина (1/2 МПК) выявлено стимулирующее воздействие ванкомицина на пролиферативную активность изучаемых штаммов, способствующее увеличению популяции S. aureus (W = -34; -30, р<0,05). Этот факт согласуется с данными некоторых авторов, обнаруживших ростстимулирующий эффект низких концентраций химических препаратов (Сузина Н.Е. с соавт., 2001). Также у изучаемых штаммов S. aureus регистрировалось резкое увеличение амплитуды ритмов. Наблюдалось смещение акрофазы. Это может свидетельствовать о сильной резервной мощности культуры, позволяющей ей адаптироваться к новым условиям среды.

Мы исследовали влияние ванкомицина на культуры микроорганизмов во втором поколении. Т.е. после инкубации микробов с антибиотиком (1/2 МПК), культуры высевали на питательную среду и после 12-ти часовой инкубации исследовали пролиферативную активность S. aureus в разное время суток. В этом случае не было выявлено каких-либо существенных изменений в хроноинфраструктуре биоритмов микроорганизмов (W = 6, р>0,05). По всей видимости, все изменения ритмометрических параметров показателей пролиферативной активности, возникшие под действием низких концентраций антибиотика, исчезали после пересева культур на обычную питательную среду, т.е. они носили фенотипический характер, и после устранения действия фактора, вызвавшего изменения, все свойства микробов восстанавливались до уровня контрольных значений. Такого рода изменения помогают микробам быстро адаптироваться к различным условиям существования и сохранять на должном уровне свою жизнеспособность.

Интерес представляет и изучение влияние ванкомицина на плазмокоагулазную активность S. aureus. Оно проявилось в увеличении скорости коагуляции плазмы музейным штаммом и госпитальным изолятом S. aureus по сравнению с контролем (W = 36, р<0,05), что свидетельствует об усилении агрессивности микроба.

Полученные нами результаты мы сопоставили с имеющимися литературными данными о влиянии различных факторов на биологические свойства микроорганизмов. Изучая те или иные свойства возбудителей, авторы исследований неизменно приходили к заключению, что все вновь появившиеся или утраченные свойства - это результат адаптации микробных клеток к изменившимся внешним условиям. H.A. Поликарпов, изучая изменения активности факторов патогенности стафилококка в течение года под влиянием гелиомагнитных условий, отмечал, что их различная активность отображает саморегуляцию продукции этих факторов и это в значительной степени определяет судьбу микробных клеток в организме хозяина (Поликарпов H.A., 1994-1996). Появление штаммов с низкой плазмокоагулазной, ДНК-азной, гемолитической активностью под влиянием химических факторов свидетельствовало, по мнению авторов, о повышении стабильности популяции к различным стрессам, появлению адаптивных мутантов (Фадеева H.H., 1978; Ильинская О.Н., 2002; Isken S., 1998). Дисбаланс основных питательных элементов в среде приводил к диссоциациям, что обеспечивало адаптацию популяций бактерий к различным воздействиям (Максимов В.Н., 1999; Милько Е.С., 2001). При культивировании S. aureus с алкилоксибензолом появлялись мелкие не гемолитические G-колонии, с высокой устойчивостью к повышенным температурам (стрессоустойчивые) (Ильинская О.Н., 2002). Увеличение резистентности бактерий к некоторым антибиотикам под действием геомагнитных условий также приводило к соувеличению способности бактерий к выживанию (Колмаков В.М., 2002). Действие малых доз перекиси водорода вызывало повышенную устойчивость к действию больших доз, следовательно, бактерии обладали механизмами адаптивного ответа, которые регулировались на генетическом уровне, так как активировалась экспрессия ряда генов, включенных в защиту клеток от пероксидного стресса (Октябрьский О.Н., 2007). По мнению ряда авторов, изменение суточной и сезонной активности роста под влиянием различных физических и химических факторов являлось следствием специфических перестроек, определяющих жизненную активность микробов в зависимости от условий окружающей среды (Павлович Н.В., 1991; Karu Т., 1999; Ильинская О.Н.,

2002). Каталаза S. aureus подверглась изменениям под действием метаболитов микроорганизмов, выделенных из разных экотопов (Бухарин О.В., Сгибнев A.B., 2002).

Основываясь на литературных данных о влиянии различных факторов на биологические свойства микроорганизмов, можно предположить, что изменения ритмометрических параметров биологических ритмов пролиферативной и плазмокоагулазной активности S. aureus под влиянием антимикробных препаратов, выявленные в результате наших исследований, обеспечивают стабильность популяций бактерий и адаптацию их к внешним воздействиям. По мнению ряда авторов, одним из важных приспособительных свойств является лабильность ритма физиологических функций, т.е. способность организма менять их интенсивность в зависимости от частоты и силы действия различных факторов внешней и внутренней среды. В морфологическом отношении сущность этой приспособительной перестройки биоритмов состоит в том, что при разнообразных изменениях частоты действия раздражителя интенсивность репаративной реакции каждый раз устанавливается на уровне, предотвращающем несовместимый с жизнью дефицит структур. Это и обеспечивает сохранение гомеостаза в меняющихся условиях среды (Комаров Ф.И., 1989; Романов Ю.А., 2002; Смирнов В.М., 2002).

Таким образом, выявленные изменения параметров биологических ритмов различных свойств музейных штаммов и госпитальных изолятов S. aureus под влиянием антимикробных препаратов подтверждают высказывания ряда авторов о том, что биологический ритм все время подстраивается к новой среде обитания, чтобы дать организму максимальную возможность адаптироваться к окружающей среде путем синхронизации его собственных ритмов с внешними циклами (Агаджанян H.A., 1998; Губин Д.Г., 1989; Воложин А.И., 1987; Маркина В.В., Романов Ю.А., 2005). Возможность изменения частоты физиологических ритмов обеспечивает быструю адаптацию организма к различным условиям жизнедеятельности (Смирнов В.М., 2002).

Отсутствие существенных изменений под действием гентамицина, либо менее выраженные изменения под действием пероксимеда у госпитальных изолятов S. aureus также не противоречат существующему положению, что биологические ритмы должны быть достаточно устойчивыми и, по возможности, независимыми от многих воздействий для сохранения функций, обеспечивающих ее существование как целого в изменяющейся среде (Воложин А.И., 1987; Губин Д.Г., 2008).

Ритмометрические параметры, как наиболее чувствительные, первыми реагируют на влияние какого-либо фактора окружающей среды. Это позволяет выявить информативные биоритмологические критерии для оценки наиболее ранних изменений каких-либо показателей, а также определить механизмы адаптивных реакций микробов на действие различных факторов.

Результаты проведенной работы позволили выделить два основных момента:

- для музейных штаммов S. aureus характерны преимущественно циркадианные ритмы пролиферативной активности, патогенных свойств, чувствительности к антибиотикам в отличие от госпитальных изолятов, для которых основными являлись ультрадианные ритмы;

- антимикробные препараты изменяли биоритмы пролиферативной и плазмокоагулазной активности S. aureus в отношении их устойчивости к препаратам, отражая потенциальную возможность патогенов к адаптации в изменяющихся условиях существования.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Паромова, Яна Игоревна, Тюмень

1. Абрамзон О.М., Карташова О. Л., Валышев A.B. и др. Биологические свойства микроорганизмов как основа прогнозирования тяжести гнойно-воспалительных заболеваний легких и плевры // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2004. № 3. С. 7-10.

2. Агаджанян H.A. О физиологических механизмах биологических ритмов// Успехи физиологических наук, 1987. Т. 18. № 4. - С. 80-104.

3. Агаджанян H.A. Хроноархитектоника биоритмов и среда обитания/ H.A. Агаджанян, Г.Д. Губин, Д.Г. Губин, И.В. Радыш // Тюмень: Издательство Тюменского государственного университета, 1998. 168 с.

4. Алпатов A.M. Циркадианные ритмы человека и режим труда-отдыха: гипотеза «сжатой пружины» // Изв. РАН. 1993. № 6. - С. 810-812.

5. Алпатов A.M. Толковый словарь терминов хронобиологии // Руководство по хронобиологии и хрономедицине. — М., 2000. С. 482-488.

6. Арушанян Э.Б. Основы хронофармакологии // Ставрополь, 2000. 565 с.

7. Ашофф Ю. Обзор биологических ритмов/ под ред. Ю. Ашоффа // Биологические ритмы. Пер. с англ. -М.: Мир, 1984. Т.1. - С. 12-21.

8. Белобородов В.Б., Митрохин С.Д. Стафилококковые инфекции// Инфекции и антимикробная терапия, 2003. Т. 5. № 1. - С. 12-18.

9. Белькова Ю.А. Пиодермии в амбулаторной практике // М.: Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия, 2005. Т. 7. № 3. - С. 255270.

10. П.Брискин Б.С. Антибактериальная профилактика и лечение послеоперационных осложнений и внутрибольничных инфекций // Журнал «Врач», 2004. №3.-С. 30-33.

11. Брудастов Ю.А., Сборец Т.С., Дерябин Д. Г. Активность каталазы и супероксиддисмутазы при их персистировании в макроорганизме // М.: ЖМЭИ, 2001. № 2. С.13-16.

12. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий// М.: Медицина, Екатеринбург: УрО РАН 1999. 366 с.

13. Бухарин О.В. Влияние микробных метаболитов на активность каталазы и рост Staphylococcus aureus 6538 Р/ О.В. Бухарин, С.В. Черкасов, А.В. Сгибнев, Т.М. Забирова, Ю.Б. Иванов // Бюлл. эксп. биол., 2000. Т. 130. № 7. - С. 80-82.

14. Бухарин О.В., Сгибнев А.В., Черкасов С.В., Иванов Ю.Б. Способ выявления у бактерий ингибиторов каталазы микроорганизмов/ Патент РФ № 2180353 от 10.03.2002 г.

15. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Карташова O.JI. Биология патогенных кокков // М.: Медицина; Екатеринбург: УрО РАН, 2002. 282 с.

16. Бухарин О.В., Билимова С.И., Чертков K.JI. Механизмы выживания энтерококков в организме хозяина // М.: ЖМЭИ, 2002. № 3. С.100-106.

17. Бухарин О.В. Механизмы выживания бактерий/ О.В. Бухарин, A.JI. Гинцбург, Ю.М. Романова, Г.И. Эль-Регистан // Москва, Медицина, 2005. 376 с.

18. Бухарин О.В. Особенности взаимодействия бактерии с эритроцитами и их роль в развитии инфекционной анемии/ О.В. Бухарин, А.А. Стадиков, Б.Я. Усвяцов, Е.А. Ханин // М.: ЖМЭИ, 2006. № 4. С. 25-28.

19. Валышев A.B., Валышева И.В. Роль антилактоферриновой активности бактерий в их персистенции // М.: ЖМЭИ, 2006. № 4. С. 23-25.

20. Веретельникова И.Ю., Захарова Ю.В. Антибиотикорезистентность стафилококков, выделенных от медицинского персонала // Медицина в Кузбассе. 2007. В. 2. - С. 39-40.

21. Воложин А.И., Субботин Ю.К. Адаптация и компенсация универсальный биологический механизм приспособления//М.: Медицина, 1987,-176с.

22. Григорьев Е.В., Каменева Е.А., Коваль С.С. Гнойно-септические осложнения тяжелой сочетанной травмы // Ежегодник медицинских инноваций. Европейское научное общество, Ганновер, 2009. С. 31-38.

23. Грудинина С.А., Зубков М.М., Кротова JI.A. Линезолид при нозокомиальных пневмониях: результаты многоцентрового двойного слепого исследования в сравнении с ванкомицином // Антибиотики и химиотерапия, 2002. Т. 47. № 1. - С. 12-17.

24. Губин Г.Д. , Герловин Е.Ш. Суточные ритмы биологических процессов и их адаптивное значение в онто- и филогенезе позвоночных // Новосибирск: Наука, 1980. 278 с.

25. Губин Г.Д. Циркадианная организация биологических процессов в фило-и онтогенезе позвоночных // Хронобиология и хрономедицина М.: Медицина, 1989. С. 70-82.

26. Губин Д.Г., Губин Г.Д. Хроном сердечно-сосудистой системы на различных этапах онтогенеза человека // Тюмень, 2000. 176 с.

27. Гудкова Е.И. Формирование устойчивости к антисептикам и дезинфектантам возбудителей внутрибольничных инфекций и ее микробиологический мониторинг/ Е.И. Гудкова, А.А. Адарченко, И.Н. Слабко, Т.М. Ласточкина, Л.И. Симоненко // БМЖ, 2003. Т. 3. № 5

28. Дерябин Д.Г. Стафилококки: экология и патогенность // Екатеринбург: УрО РАН, 2000. 239 с.

29. Дехнич А.В., Нарезкина А.Д. Эпидемиология антибиотикорезистентных нозокомиальных штаммов Staphylococcus aureus // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия, 2002. Т. 4. № 4. - С. 325-332.

30. Дильман В.М. Большие биологические часы: Введение в интегральную медицину // 2-е изд., перераб. и доп. М.: Знание, 1986. - 256 с.

31. Дорошенко Е.В. Характеристика диссоциантов Bacillus cereus / E.B. Дорошенко, Н.Г. Лойко, О.Н. Ильинская, А.И. Колпаков, И.Б. Горнова, Е.В. Климанова, Г.И. Эль-Регистан // Ж. микробиол. 2001. - Т. 70. №6.- С. 811-819.

32. Елисютина О.Г., Феденко Е.С. Роль S. aureus в патогенезе атопического дерматита/ Рос. Аллергол. Журн., 2004. № 1. С. 17-21.

33. Ерюхин И.А. Хирургические инфекции: новый уровень познания и новые проблемы // Журнал «Инфекции в хирургии», 2003. № 1. С. 4-5.

34. Ефименко H.A., Гучев И.А., Сидоренко C.B. Инфекции в хирургии // Фармакотерапия и профилактика. Смоленск, 2004. 296 с.

35. Загускин С.Л., Федоренко H.H. Специфический для живой природы многочастотный параллельный резонансный захват и возможная его роль в аномальных явлениях // 6 Всероссийкая науч.-практ. конф. по квантовой медицине. М., 2000. С. 74-80.

36. Зайцев A.A., Карпов О.И., Сидоренко C.B. Стафилококки и ванкомицин: тенденции противостояния // Антибиотики и химиотерапия, 2003. Т. 48. № 6. - С. 20-26.

37. Зинкевич О.Д. Клинико-диагностическое значение оценки активности Ig-протеаз у детей с дисбактериозом кишечника/ О.Д. Зинкевич, В.М. Бонда-ренко, Ю.А. Тюрин, H.A. Сафина, В.А. Анохин // М.: ЖМЭИ, 2004. № 3.- С. 73-77.

38. Иванов Н.Р., Бриль Г.Е. Молекулярно-клеточные аспекты гемолитического действия стафилококкового а-токсина // М.: ЖМЭИ, 1984. № 9. -С. 3-10.

39. Иванова Е.Б., Курилов В.Я., Андрус В.Н. Изменение тонких морфологических структур Е. coli, S. aureus и спор Bacillus anthracis вакцинного штамма СТИ под действием дезинфектанта «Велтолен» // М.: ЖМЭИ, 2004. № 4. С. 61-63.

40. Казначеев В.П. Современные аспекты адаптации// Новосибирск, 1980. -188 с.

41. Капитанов Е.А, Жмакин А.И. Действие дексаметазона на циркадианные биоритмы бактерий // М.: ЖМЭИ. 1992. № 5-6. - С. 71.

42. Карп В.П., Катинас Г.С. Математические методы исследования биоритмов // Хронобиология и хрономедицина/ Под ред. Ф.И. Комарова// М.: Медицина, 1989. С. 29-45.

43. Карташова O.JL, Киргизова С.Б., Стадников A.A., Шевлюк H.H., Ковбык Л.В., Чуенко Э.А. Антикарнозиновая активность стафилококков как критерий оценки их персистентного потенциала // М.: ЖМЭИ. 2006. №4.-С. 13-16.

44. Карташова О.Л., Киргизова С.Б., Потехина Л.П., Бухарин О.В. Диагностическое значение персистентных характеристик стафилококков при бактерионосительстве // М.: ЖМЭИ. 2007. № 5. - С. 13-16.

45. Катинас Г.С. Уровни организации живых систем и биологические ритмы //Фактор времени и функциональной организации деятельности живых систем // Л. 1980. - С. 82-85.

46. Катинас Г.С. Основные понятия хронобиологии и хрономедицины// хронобиология и хрономедицина/ Под ред. Ф.И. Комарова. М.: Медицина. - 1989. - С. 17-29.

47. Кафарская Л.И., Володин H.H., Ефимов Б.А. и др.. Особенности микробной колонизации новорожденных и недоношенных детей в отделениях реанимации и интенсивной терапии // Вестник Российской АМН. 2006. № 1. - С. 10-15.

48. Клер К. Шмитт, Карен С. Мейсик и др. Бактериальные токсины: друзья или враги? Болезни и возбудители // КМАХ. 2000. - Т. 2. № 1. - С. 4-14.

49. Клиническая лабораторная аналитика/ Под ред. В.В. Меньшикова IV том. М., Агат-Мед; 2003. 815 с.

50. Козлов Л.В., Бичучер A.M., Мишен A.A. и др.. Определение активности протеиназ крови и микроорганизмов// Биомедицинская химия. — 2008. -Т. 54. Вып. 3.-С. 314-321.

51. Колпаков А.И., Ильинская О.Н., Беспалов М.М. и др.. Стабилизация ферментов аутоиндукторами анабиоза как один из механизмов устойчивости покоящихся форм микроорганизмов // М.: Ж. микробиол., 2000. Т. 69. № 2. - С. 180-185.

52. Комаров Ф.И., Рапопорт С.И. Хронобиология и хрономедицина// М.: «Триада-Х». 2000. - С. 9-24.

53. Комаров Ф.И., Рапопорт С.И., Чибисов С.М. // Хронобиология и хрономедицина актуальное направление в науке // Владикавказскиймедико-биологический вестник, 2007. Т. 7. Вып. 13. - С. 22-26.

54. Кондрашова З.Н. Пиогенные кокки стафилококки // Медицинский Вестник, 1999. № 1. - 77 с.

55. Коротяев А. И., Бабичев С. А. Роль генетической и умственной систем информации в возникновении и развитии жизни на Земле. Нальчик: Эльбрус, 2009. - С. 33-41.

56. Коротяев А. И., Бабичев С. А. Живая природа: неразрывное единство материи, энергии и сознания // Кубанский научный медицинский вестник, 2007. № 3 (96). С. 4-20.

57. Красильников А.П. Антисептики и дезинфектанты как факторы риска развития ятрогенных (внутрибольничных) инфекций // М.: Журнал микробиологии, 1994. № 2. С. 119-126.

58. Лукомская К.А. Микробиология с основами вирусологии: Учебн. пособие для пед. институтов по биол. и хим. Специальностям // Москва: Просвещение, 1987. 192 с.

59. Максимов В.Н., Милько Е.С., Ильиных И.Д. Влияние углеродного, азотного и фосфорного питания на рост R-, S- и М-диссоциантов // Ж. микробиол., 1999. Т. 68. № 2. - С. 206-210.

60. Маркина В.В., Романов Ю.А. Хронотопобиологический механизм гомеостаза структурно-функциональных единиц органов как функция их пространственно-временной организации // Современные наукоемкие технологии, 2005. №2.-С. 39-40.

61. Меньшиков Д.Д., Астафьева Р.Ф., Курилин Л.Б. Мониторинг возбудителей гнойно-септических заболеваний в стационаре скорой медицинской помощи//Журнал микробиологии, 2003. №1.- С. 10-13.

62. Методические рекомендации по ускоренному определению устойчивости бактерий к дезинфекционным средствам. Утв. МЗ Госсанэпиднадзора 10.01.2000 г. за№ 1100-26-0-117.

63. Милько Е.С., Ильиных И.Д. Влияние пониженных концентраций углерода, азота и фосфора в среде на динамику роста трех диссоциантов Pseudomonas aeruginosa//Микробиология, 2001. Т. 70. № 5. - С. 607-610.

64. Нечаева Н.В., Харазова А.Д., Фатеева В.И. Околочасовая периодичность синтеза белка в тканях некоторых беспозвоночных // Цитология, 1989. — Т. 31. №5. С. 601 -603.

65. Николаева И.В., Бондаренко В.М., Анохин В.А., Галеева О.П. Частота колонизации стафилококками кишечника у детей с явлениями дисбакте-риоза // М.: ЖМЭИ, 2000. № 1. С. 17-21.

66. Ноздрин Г.А., Одношевский Д.А. Хронофармакологические особенности применения пробиотиков в ветеринарии // Новосибирск, 2006.

67. Октябрьский О.Н. Музыка Н.Г., Ушаков В.Ю., Смирнова Г.В. Роль тиоловых редокс-систем в отклике бактерий Escherichia coli напероксидный стресс/ О.Н. Октябрьский, Н.Г. Музыка, В.Ю. Ушаков, Г.В. Смирнова // Микробиология, 2007. Т. 76. № 6. - С. 759-765.

68. Павлович Н.В., Павлович С.А., Галлиулин Ю.И. Биомагнитные ритмы // Минкс: Университетское, 1991. 186 с.

69. Паршута Л.И. Особенности формирования микробного биоценоза слизистой оболочки носа при стафилококковом бактерионосительстве: Автореф. дис. канд. мед. наук. Оренбург, 1998.

70. Патент на изобретение № 2285258 «Способ диагностики госпитальных штаммов» // Кашуба Э.А., Тимохина Т.Х., Курлович Н.А., Паромова Я.И., Варницына В.В., Хохлявина P.M., Губин Д.Г., Козлов Л.Б. 2006 г. - 11 с.

71. Поликарпов Н.А. Солнечная активность и продукция потенциально патогенными микроорганизмами факторов агрессии // М.: ЖМЭИ, 1994. -С. 19-20.

72. Поликарпов Н.А. Гелиогеомагнитная активность и биологические свойства Staphylococcus aureus // М.: ЖМЭИ, 1995. № 6. С. 8-9.

73. Поликарпов Н.А. О связи показателей солнечно-геомагнитной активности и автоколебаний биологических свойств у субкультур Staphylococcus aureus 209 in vitro // M.: ЖМЭИ, 1996. № 1. С. 27-30.

74. Поспелова С.В., Горовиц Э.С. Характеристики штаммов стафилококков, изолированных при обследовании на бактерионосительство // Проблемы и перспективы современной науки (сборник научных трудов). 2008, В. 2. -С. 26-31.

75. Практикум по микробиологии/ Под ред. А.И. Нетрусова // М.: Издательский центр «Академия», 2005. 608 с.

76. Приказ Ко 535 МЗ СССР 1985 г. от 22.04. 1985 г. «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений». — 127 с.

77. Романов Ю.А. Теория биологических систем и проблема их временной организации // Проблемы хронобиологии, 1990. Т.1. №. 3-4. — С. 105-122.

78. Романов Ю.А. Хронобиология как одно из важнейших направлений современной теоретической биологии/ Ф.И. Комаров, С.И. Рапопорт // Хронобиология и хрономедицина. М.: «Триада-Х», 2000. - С. 9-24.

79. Романов Ю.А. Пространственно-временная организация биологических систем // Вестник РАМН, 2002. № 6. С. 13-18.

80. Руденская Г.Н., Пупов Д.В. Цистеиновые протеиназы микроорганизмов и вирусов// Биохимия. 2008. - Т. 73. Вып. 1. - С. 3-17.

81. Руководство «Хронобиология и хрономедицина»/ Под ред. Ф.И. Комарова. М.: Медицина, 1989. 400 с.

82. Сергеева Э.П. Периодичность синтеза белка в клетках изолированных жабр мидии в разное время года/ Э.П. Сергеева, А.Д. Харазова,

83. B.И. Фатеева, Н.В. Нечаева // Биология моря. 1987. № 3. - С. 19-22.

84. Сидоренко C.B. Этиология тяжелых госпитальных инфекций в отделениях реанимации и антибиотикорезистентность среди их возбудителей // Антибиотики и химиотерапия, 2005. № 2-3. С. 33-41.

85. Скала Л.З., Сидоренко C.B., Нехорошева А.Г., Лукин И.Н., Грудинина С.А. Практические аспекты современной клинической микробиологии. Тверь: Издательство «Триада», 2004. 312 с.

86. Смирнов С.Г. Этология бактерий // Вестник Ивановской медицинской академии. Изд-во Ивановская госуд. мед. академия, 2006. Т. 11. № 3-4.1. C. 83-86.

87. Смирнов В.М., Дубровский В.И. Физиология физического воспитания и спорта. М.: Изд-во ВААДОС-ПРЕСС, 2002. - 608 с.

88. Смирнов С.Н., Захаров В.Б., Мамонтов С.Г. Становление суточного ритма пролиферации клеток в раннем постнатальном онтогенезе крыс/ Материалы Первого Российского съезда по хронобиологии и хрономедицине: Владикавказ: ИПО СОИГСИ, 2008. С. 86-87.

89. Страчунский Л.С. ß-лактамазы расширенного спектра — быстро растущая и плохо осознаваемая угроза // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. Москва, 2005. Том 7. № 1. - С. 92-96.

90. Страчунский Л.С., Белькова Ю.А., Дехнич A.B. Внебольничные MR.SAновая проблема антибиотикорезистентности// Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. Москва, 2005. Том 7. № 1. - С.32-46.

91. Титов Л. П., Адарченко А. А., Гудкова Е. И. Микробиологический мониторинг устойчивости возбудителей ВБИ к антимикробным препаратам//Медицинские новости, 1999. № 8. С. 8 - 10.

92. Тюрин Ю.А., Долбин Д.А. Роль факторов патогенности золотистых стафилококков развитии атопического дерматита // М.: ЖМЭИ, 2008. № 4. -С. 105-110.

93. Усвяцов Б.Я., Парпгута Л.И., Бухарин О.В. Характеристика микробного биоценоза слизистой оболочки носа у здоровых людей и стафилококковых бактерионосителей // М.: ЖМЭИ, 2000. № 5. С. 65-69.

94. Усвяцов Б.Я., Ханина Е.А., Бухарин О.В. Взаимодействие бактерий и эритроцитов // М.: ЖМЭИ, 2005. № 4. С. 89-95.

95. Учайкин В.М. Сумамед в лечении осложненных острых респираторных инфекций у детей/ В.М. Учайкин, Ф.С. Харламова, О.В. Кладова, В.Ю. Крылатых, Т.П. Легкова // Детские инфекции, 2003. № 2. С. 30-36.

96. Фадеева Н.И., Падейская Е.Н., Дегтярева И.Н., Першин Г.Н. Влияние производных ди-п-окиси хиноксалина на ДНК-азу и плазмокоагулазу золотистого стафилококка // Фармакология и токсикология, 1978. №5. -С. 613-617.

97. Фадеева Т.В., Верещагина С.А., Коган А.С., Григорьев Е.Г. Возбудители гнойно-некротических процессов в легких и их токсины // Инфекции в хирургии, 2007. Т. 5. № 1. - С. 23-26.

98. Флуер Ф.С. Частота встречаемости энтеротоксигенных Staphylococcus aureus при дисбактериозе кишечника у детей/ Ф.С. Флуер, Н.С. Бродино-ва, В .Я. Прохоров, О.Г. Логинова, А.В. Веснин // М.: ЖМЭИ, 2006. № 6. -С. 3-6.

99. Флуер Ф.С. Стафилококковый токсин синдрома токсического шока // М.: ЖМЭИ, 2007. № 5. с. 106-114.

100. Хазиев А.Ф., Михайлова Н.А. Молекулярные механизмы цитотоксического действия а — токсина Staphylococcus aureus // М.: ЖМЭИ, 2007. № 1. С. 77-83.

101. Хетагурова Л.Г. Патофизиология десинхронозов // Владикавказский медико-биологический вестник, 2005. Т. 5. Вып. 9. — С. 32-40.

102. Хетагурова Л.Г. Хронопатофизиология новое направление классической патофизиологии/ Л.Г. Хетагурова // Материалы Первого Российского съезда по хронобиологии и хрономедицине с международным участием: Владикавказ: ИПО СОИГСИ, 2008. - С. 47-55.

103. Чернохвостова Е.В. Местный иммунитет и микробные IgA — протеазы // М.: ЖМЭИ, 1987. № 6. С. 104-110.

104. Чернуха М.Ю. Микробиологические аспекты дисбактериоза кишечника у амбулаторных больных различных возрастных групп г. Москва/ М.Ю. Чернуха, Л.Р. Аветисян, Г.В. Алексеева, О.В. Кузнецова, И.А. Шагинян // М.: ЖМЭИ, 2005. № 4. С. 69-73.

105. Чибисов С.М. Биоритмы и гелиогеофизические факторы // Фундаментальные исследования. М., 2006. № 9. С. 34-41.

106. Шаркова В.А., Лайман Е.Ф., Баранова Н.А. Микрофлора гнойных ран хирургических больных. Актуальные вопросы инфекционной патологии // Международный евро-азиатский конгресс по инфекционным болезням, 2008.-Т. 1.-С. 31-32.

107. Шпрыкова О.Н., Сатунина Л.Ф., Сперанская О.А., Ждакова Н.А. Биологические свойства стафилококков, циркулирующих в стационарах Нижнего Новгорода // М.: Ж. микробиол., 2001. № 3. С. 95-97.

108. Шурлыгина А.В. Основы хронобиологии и хрономедицины в таблицах и схемах // Метод, пособие. Изд-во Новосибирский государственный университет. Новосибирск, 2001. 32 с.

109. Эль-Регистан Г.И., Гальченко В.Ф., Ильинская О.Н. и др. Функции химических шаперонов в развитии анабиоза и устойчивости микроорганизмов/ Ферменты микроорганизмов. Казань. XII юбилейная конференция, 2001. С. 50-53.

110. Яковлев С.В., Ромашов О.М., Проценко Д.Н. Значение цефепима в лечении госпитальной пневмонии // Антибиотики и химиотерапия, 2003. -Т. 48. №7.-С. 38-43.

111. Яфаев Р.Х, Зуева Л.П. Эпидемиология внутрибольничной инфекции// Ленинград: Медицина, 1989. 168 с.

112. Aschoff J. Circadian systems in animals and man // Monit. Zool. ital. 1985. -Vol. 19. N.3.-P. 143-144.

113. Batisson M., Strazielle N., Hejmadi M et al. Toxic shock syndrome toxin 1 challenges the neuroprotective functions of the choroidal epithelium and induces neurotoxicity. J. Infec. Dis. 2006, 194. P. 341-349.

114. Beard-Pegler M., Vickery A., Lysogenecy of methicillin-resistant strains of Staphylococcus aureus. J. Med. Microbiol., 1985. N. 20. P. 147-185.

115. Bhakdi S. Staphylococcal alpha-toxin, streptolysin-O and Escherichia coli hemolysm: prototypes of pore-forming bacterial cytolysins/ S. Bhakdi, H. Bayley, A. Valeva, I. Walev, B. Walker, U. Weller et al. // Arch. Microbiol., 1996. N. 165.-P. 73-79.

116. Breuer K. Alpha-toxin is produced by skin colonizing Staphylococcus aureus and induced a T-helper 1 response in atopic dermatitis/ K. Breuer, M. Wittmann, K. Kempe et al. // Clin, and Exp. Allergy. 2005. - V. 35. N 8. -P. 1088-1095.

117. Brien F., Gracey M. Community of methicillin-resistant Staphylococcus aureus involved in a hospital outbreak. J Clin Microbiol., 1999. N. 37.1. P. 2858-2862.

118. BoyceJ.M. MRS A patients: proven methods to treat colonization and infection // J. Hosp. Infect. 2001. - V. 48. - P. 9-14.

119. Chang F.Y. Staphylococcus aureus bacteremia: recurrence and the impact of antibiotic treatment in a procpective multicenter study/ F.Y. Chang, J.E. Jr. Peacock, D.M. Musher et al. // Medicine (Baltimore). 2003. - Vol. 82. -P. 333-339.

120. Cornelissen G. et al. Blood Pressure and Heart Rate Chronom Mapping: A Complement to the Human Genome Initiative/ G. Cornelissen, Otsuka K., F. Halberg // Chronocardiology and Chronomedicine. — Life Sciience. — Tokyo, 1993.-P. 16-48.

121. Cornelissen G., Halberg F. Introduction to Chronobiology // Medtronic Chronobiology Seminar, 1994. N. 7. 52 p.

122. Cornelissen G., Halberg F. Impeachment of Casual Blood Pressure Measurements and the fixed limits for Their Interpretation and Chronobiologic Recommendations // Ann. N. Y. Acad. Sei. 1996. - V.8. - P. 69-85.

123. Creech C.B. Increased nasal colonization of MRSA in children noted // Infectious Disease News. October, 2005. - P. 123-127.

124. Creech C.B. Increasing rates of nasal carriage of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in healthy children/ C.B. Creech, D.S. Kemodle, A. Alsentzer et al. // Pediatr. Infect Dis. J. 2005. - V. 24. - P. 617-621.

125. CDC. Staphylococcus aureus resistant to vancomycin. United States 2002 - MMWR 2002. - P. 51.

126. Cunha B.A. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus: clinical manifestations and antimicrobial therapy // Clin. Microbiol. Infect. 2005. -V. 11. S. 4.-P. 33-42.

127. Czeisler C.A. Kronauer R.E., Allan J.S. Assessment and modification of a subjects endogenous circadian cycle // US Patient: Washington D.C.; US. Patient Office -1992. Vol. 163. N. 5. - P. 146.

128. Dvornyk V. Subfamilies of cpmA, a gene involved in circadian output, have different evolutionary histories in cyanobacteria // Microbiology, 2006. — Vol. 152. P. 75-84.

129. Dinges M.M., Orwin P.M. Schliefert P.M. Exotoxins of Staphylococcus aureus. Clin. Microbiol. Rev. 2000. Vol. 13. N. 1. - P. 13-34.

130. Ditty J.L. Stability of the Synechococcus elongatus PCC 7942 circadian clock under directed anti-phase expression of the kai genes/ J.L. Ditty, S.R. Canalts, B.E. Anderson, S.B. Williams, S.S. Golden // Microbiology, 2005. N. 8.-P. 2605-2613.

131. Ditty J.L., Mackey S.R., Jonson C.H. Bacterial Circadian Programs. Springer, Berlin, 2009. 333 p.

132. Dubin G. Extracellular proteases of Staphylococcus spp. // Biol. Chem., 2002.-Vol. 383.-P. 1075-1086.

133. Dubin G. Proteinaceous cysteine protease inhibitors // Cell Mol. Life Sci., 2005. N. 62.-P. 653-669.

134. Dufour P., Gillet Y., Bes M., et al. Community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus infections in Franse // Clin. Infect. Dis. 2002. V. 35. -P. 819-824.

135. Fein A, Grossman R., Ost D. et al. Diagnosis and management of pneumonia and other respiratory infections. Professional Communications, Inc., USA, 1999. 288 p.

136. Filipek R., Potempa J., Bochtler M. A comparison of staphostatin B with standard mechanism serine protease inhibitors // J. Biol. Chem., 2005. — Vol. 280.-P. 14669-14674.

137. FriedenT.R., MunsifS.S., LowD.E. etal. Emergence of vancomycin-resistant enterococci in New York // Lancet. 1993. - Vol. 342. - P. 76-79.

138. Galdiero S., Gouaux E. High resolution crystallographic studies of a-hemolysin-phospholipid complexes define heptamer-lipid head groupinteractions: Implication for understanding protein-lipid interactions // Protein Science, 2004. N. 13.-P. 1503-1511.

139. Geha DJ., Uhl J.R., Gustaferro C.A., Persing D.H. Multiplex PCR for identification of methicilli-resistant Staphylococci in the clinical laboratory // J. Clin. Microbiol. 1994. - Vol. 32. - P. 1768-1772.

140. Gillet Y., Issartel B., Vanhems P. et al. Association between Staphylococcus aureus strains carrying gene for Panton-Valentine leukocidin and highly lethal necrotizing pneumonia in young immunocompetent patients // Lancet, 2002. N. 359. P. 753-759.

141. Haddadin A.S., Fappiano S.A., Lipsett P.A. Methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in the intensive care unit // Postgrad. Med. J., 2002.-V. 7.-P. 385-392.

142. Halberg F., Howard R.B. 24-hour periodicity and experimental medicine. Example and interpretations // Postgrad. Med. 1958. - Vol.24. - P. 349-358.

143. Halberg F. Physiologic 24-hour periodicity; general and procedural considerations with special to the adrenal cycle // Z. Vitamin, Hormon Fermentforsch. 1959. - Vol. 11. - P. 225-269.

144. Halberg F. Body temperature, circadian rhythms and eye // Centre National de la Recherche Scientifique: Photoregulation de la Reproduction chez les Oiseaux et les Mammifleres: Paris, 1970. N. 172. - P. 497-528.

145. Halberg F., Cornelissen G. Consensus concerning the chronom and the addition to statistical significance of scientific signification // Biochim. Clin. -1991.-Vol. 15.-P. 159-162.

146. Halberg F. Chronome: introduction to workshop // Workshop on computer methods on Chronobiology and Chronomedicine: 20th International Congress of Neurovegetative Research. — Tokyo, 1992. P. 1-4.

147. Halberg F., Cornelissen G. et al. // Chuonobiology,s progress. Part I, II season,s appreciations 2004-2005: time-, frequency-, variable-, individual-, age-and site-specific chronomics. J. Appl. Biomed. 2006. - N. 4. - P. 1-38.

148. Haus E., Nicolau G., Lakatua D. Reference values for chronopharmacology // Annual Review of Chronopharmacology. 1988. - Vol. 4. - P. 333-424.

149. Hiramatsu K., Hanaki H., Ino T. et al. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus clinical strain with reduced vancomycin susceptibility J Antimicrob Chemotber. 1997. - P. 40.

150. Hiramatsu K. Vancomycin- resistant Staphylococcus aureus: a new model of antibiotic resistance // Lancet Infect. Dis. 2001. -V. 1. - P. 147-155.

151. Hiramatsu K., Cui L. Kuroda M, Ito T.Trends Microbiol. -2001.- Vol. 9. N. 10.-P. 486-493.

152. Holden M.T., Feil E.J., Lindsay J.A., et al. Complete genomes of two clinical Staphylococcus aureus strains: evidence for the rapid evolution of virulence and drug resistance // Proc. Natl. Acad. Sei USA, 2004. Vol. 101. -P. 9786-9791.

153. Ishiura M., Kutsuna S., Aoki T. et al. Expression of a gene claster kai ABC as a circadian feedback process in Cyanobacteria. Sciens. 1998. - Vol. 281. — P. 1519-1523.

154. Isken S. Bacteria tolerant to organic solvents // Extremophiles. 1998. V. 2, № 3. - P. 229-238.

155. Ito T. et al. Antimicrob Agents Cbemotber. 1999. - Vol. 43. - P. 14491458.

156. Jensen A. Y., Wachmann C. H., Paulsen K. B. et al. Risk factors for hospital aquired Staphylococcus aureus bacteremia // Arch Int Med., 1999. -V. 158. N. 13.-P. 1437-1444.

157. Johnson C.H. Precise circadian clock in procaryotic cyanobacteria // Curr Issues Mol Biol, 2004. Vol. 6(2). - P. 103-110.

158. Johnson C.H. Testing the adaptive value of circadian systems. Methods in Enzymology, 2005. P. 393818-393837.

159. Johnson C.H., Mori T., Xu Y. A cyanobacterial circadian clockwork/ Curr Biol, 2008. Vol. 18(17).-P. 816-825.

160. Kallen A., Driscoll T., Thornton S. Increase in community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus at a naval medical center // Infect Control Hosp Epidemiol, 2000. V. 21. - P. 223-226.

161. Karu T. Primary and secondary mechanisms of action of visible to near-IR radiation on cells // J. Photochem. Photobiol., 1999. V. 49. - P. 1-17.

162. Kawate T., Gouaux E. Arresting and releasing Staphylococcal a-hemolysin at intermediate stages of pore formation by engineered disulfide bonds // Protein Science, 2003. Vol. 12. - P. 997-1006.

163. Kippert F. A temperature compensated ultradian clock explains temperature-dependent quantal cell cycle times/ F. Kippert, D. Lloyd D. // Soc. Exp. Biol. Symp. — 1987. Vol. 41. — P. 135-155.

164. Kondo T. Circadian clock mutants of cyanobacteria/ T.Kondo, F. Tsinoremans, S.S. Golden // Science, 1994. N. 226. P. 1233-1236.

165. Korido T., Ishiura M. The circadian clock of plants and cyanobacteria. Trends Plant.Sci. 1999.-Vol. 4.-P. 1711-1776.

166. Konopka R, Benzer S. Clock mutants of Drosophila melanogaster // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1971. - Vol. 68. - P. 2112-2116.

167. Kutsuna S., Kondo T., Aoki S. et. al. A period extender gene pex that extends the period of the circadian clock in the cyanobacterium Synechococcus // J. Bacterid., 1998. Vol. 180. - P. 2167-2174.

168. Liu Y., Tsinoremas N. F., Johnson C.N. Circadian orchestration of gene expression in cyanobacteria. Genes Dev. 1995. Vol. 9. - P. 1469-1478.

169. Liu Y., Tsinoremas N.F., Golden S.S. et. al. Circadian expression of gene involved in the purine biosynthetic pathway of the cyanobacterium Synechococcus sp. Strain PCC 7942. Mol. Microbiol., 1996. Vol. 20. - P. 1071-1081.

170. Lloyd A. Ultradian rhythms in life processes/ A. Lloyd, E. Rossi // SpringerVerlag. London, 1992. - 419 p.

171. Lloyd A. Hypothesis: The central oscillator of the circadian clock is a controlled chaotic attractor/ A. Lloyd, D. Lloyd // BioSystems. — 1993. —1. V. 29.-P. 77-85.

172. Lorensen D.R., Dux F., Uwe W. et al. Immunoglobulin AI protease, an exoenzyme of pathogenec Neisseriae, is a potent inducer of proinflammatory cytokines //J. Exp. Med. 1999. - Vol. 190. N. 8. - P. 1049-1058.

173. Menestrina G., Serra M.D., Prevost G. Mode of action of ß-barrel pore-forming toxins of the staphylococcal a-hemolysin family // Toxicon., 2001. -Vol. 39.-P. 1661-1672.

174. Methods for cosinorrhymometry/ W.Nelson, Y.L. Tong, J.K. Lee et al. // Chronobiologia, 1979. Vol. 6. N. 4. - P. 305-323.

175. Min H., Liu Y., Johnson C.P., Golden S.S. Phase determination of circadian gene expression in Synechococcus elongatus PCC 7942. J Biol Rhythms, 2004. -Vol. 19(2).-P. 103-112.

176. Min H., Guo H., Xiong J. Department of Biology, Texas A&M University, College Station, USA, 2005. P. 77843-77858.

177. Minors D.S., Waterhouse J.M. Investigating the endogenous component of human circadian rhythms: A review of some simple alternatives to constant routines // Chronobiol. Int. 1992. - Vol. 9. - P. 55-78.

178. Mohammad Al-Sharfat, Shaher Mahafza, Bassam Ababneh & Suzan Alshdefat/ Bacteriological screening of the hospital environment. 2003. - Vol. 22.No.L-P. 15-21.

179. Mongkolrattanothai K., Boyle S., Kahana M.D., Daun R.S. Severe Staphylococcus aureus infections caused by clonally related community-acquired methicillin-susceptible and methicillin-resistans isolates. Clin. Infect. Dis. 2003. Vol. 37. - P. 1050-1058.

180. Montoya M., Gouaux E. ß-Barrel membrane protein folding and structure viewed through the lens of a-hemolysin // Biochem. Biophes. Acta. — 2003. -Vol. 1609.-P. 19-27.

181. Nakagawa S., Kushya K., Taneike I. et al. Specific inhibitory action of anisodamine against a staphylococcal superantigenic toxin, toxic shock syndrome toxin 1 (TSST-1). Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2005. - Vol. 12. N.3.-P. 399-408.

182. Nakajima M. et al. Reconstitution of circadian oscillation of cyanobacterial KaiC phosphorylation in vitro. Sciens. 2005. - Vol. 308. - P. 414-415.

183. Noble W. C. Transfer of vancomicyn resistans to methicillin-resistant Staphylococcus aureus //FEMS Microbiol. Lett 1992; 93. P. 195-198.

184. Osmon S., Ward S., Fräser V. J., Kollef M.H. Hospital mortality for patients with bacteremia due to Staphylococcus aureus or Pseudomonas aeruginosa. Chest. 2004. - Vol. 125. - P. 607-616.

185. Pattanayek R., Williams D.R., Xu Y., Mori T. et al. Analysis of KaiC protein interactions in the cyanobacterial circadian clock using hybrid structural methods. EMBO, 2006. Vol. 25(9). - P. 2017-2028.

186. Ploy M. C., Grelaud C., Martin C. et al. First clinical isolate of vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus in a French hospital. Lancet. — 1998. Vol. 351.-P. 1212.

187. Prevost G., Mourey L., Colin D.A. Staphylococcal pore-forming toxins // Curr. Top. Microbiol. Immunol., 2001. Vol. 257. - P. 53-83.

188. Rao M.B., Tanskale A.M., Ghatge M.S. et al. Molecular and biotechnological aspects of microbial proteases // Microbiol. Mol. Biol. Rev. -1998. Vol. 62. N. 3. - P. 597-635.

189. Reinberg A. Circadian rhythm amplitude and individual ability to adjust shift-work/ A. Reinberg, N. Vieux, J. Ghata et al. // Ergonomics-1978. Vol. 21. N.10. - P. 763-766.

190. Reynolds C.F. Daytime sleepiness in the healthy "old": a cpmparison with young adults/ C.F. Reynolds, J.R. Jennings, C.C. Hoch et al. // J. Amer. Geriatrics Soc.-1991. Vol. 39. - P. 957-962.

191. Robertson McClung C. The cyanobacterial circadian clock is based on the intrinsic ATPase activity of KaiC/The National Academy of Sciences, October 23, 2007. Vol. 104. N. 43. - 16727-16728.

192. Smith R.M., Williams S.B. Circadian rhythms in gene transcription imparted by chromosome compaction in the cyanobacterium Synechococcus elongatus // The National Academy of Sciences. 2006. - Vol. 103. N. 5. - P. 8564-8569.

193. Song L. Structure of staphylococcal alpha-hemolysin, a heptameric transmembrane pore/ L. Song, M.R. Hobaugh, C. Shustak, S. Cheley, H. Bayley, J.E. Gouaux // Science, 1996. N. 274. P. 1859-1866.

194. Swartz M.N., Pasternack M.S. Cellulitis and subcutaneous tissue infection// Philadelphia: Churchill Livingston, 2005. P. 1172-1193.

195. Tan Y., Merrow M., Roenneberg T. Photoperiodism in Neurospora crassa. J Biol. Rhythms.-2004.-Vol. 19.-P. 135-143.

196. Tomita N., Tomita T., Kamio Y. Stochastic Assembly of Two-Component Staphylococcal y-Hemolysin into Heteroheptameric Transmembrane Pores with Alternate Subunit Arrangements in Ratios. Journal of Bacteriology, 2002. — Vol. 184. N. 17.-P. 4747-4756.

197. Tomita J. No Transcription-Translation Feedback in Circadian Rhythm of KaiC Phosphorylation/ J.Tomita, M. Nakajima, T. Kondo, H. Iwasaki // Science, 6, 2005. V. 307. - P. 251-254.

198. Valeva A., Schnabel R., Walev I. et al. Membrane insertion of the heptameric staphylococcal a-toxin pore // J. Biol. Chem., 2001. Vol. 276. N. 8.-P. 14835-14841.

199. Weems J.J., Beck L.B. Nasal Carriage of Staphylococcus aureus as a risk factor for skin and soft tissue infections// Curr. Infect. Dis Rep. 2002. -Vol. 4. P. 420-425.

200. Williams S.B. A circadian timing mechanism in the cyanobacteria. Adv. Microb Physiol. 2007. - Vol. 52. - P. 229-296.

201. Woelfle M.A., Johnson C.H. No promoter left behind: global circadian gene expression in cyanobacteria. J Biol Rhythms, 2006. Vol. 21(6). - P. 419-431.

202. Woelfle M.A., Xu Y., Qin X. Johnson C.H. Circadian rhythms of superhelical status of DNA in cyanobacteria. Proc Natl Acad Sci USA, 2007. — Vol. 104 (47).-P. 18819-18824.

203. Xu Y., Piston D., Johnson C.H. A biolumiscence resonance energy transfer (BRET) system-application to interacting circadian clock proteins. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. Vol. 95. - P. 15-16.

204. Xu Y., Mori T., Johnson C.H. Cyanobacterial circadian clockwork: roles of KaiA, KaiB and kai BC promoter in regulating KaiC. EMBO, 2003, J. -P. 222117-222126.

205. Xu X., Soutto M., Xie Q., Servick S. Imaging protein interactions with bioluminescence resonance energy transfer in plant and mammalian cells and tissues. Proc Natl Acad Sci USA, 2007. Vol. 104 (24). - P. 10264-10269.

206. Young M. W., Kay S.A. Time zones: a comparative genetics of circadian clocks. Nat Rev Genet. 2001. - Vol. 2. - P. 702-715.

207. Zordan M., Costa R., Macino G. Circadian clocks: what makes them tick? /Chronobiology international/ 2000. V. 17. N. 4. - P. 433-436.

Информация о работе

Паромова, Яна Игоревна
кандидата биологических наук
Тюмень, 2010
ВАК 03.02.03

Диссертация

Суточная динамика биологических свойств Staphylococcus aureus - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно