Сравнительная характеристика некоторых биологических свойств монокультур и сокультивируемых вариаций бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus

Мамбетова, Эльмира Факиловна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Сравнительная характеристика некоторых биологических свойств монокультур и сокультивируемых вариаций бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Сравнительная характеристика некоторых биологических свойств монокультур и сокультивируемых вариаций бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus"

На правах рукописи

/ „ /

Мамбетова Этьмирл Факиловиа

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НЕКОТОРЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МОНОКУЛЬТУР И СОКУЛЬТИВИРУЕМЫХ ВАРИАЦИИ БАКТЕРИЙ РОДА SERRATIA И STAPHYLOCOCCUS AUREUS

03 00 07-,микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских паук

003059577

ЧетяГ)|шск-2007

003059577

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусолоиш и иммуночопш I осударственного образовательного учреждения высшею профессионального образования «Башкирский юсударст венный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ»

Научный руководитель

доктор медицинских наук, профессор Габидуллин Зайнулла Гаинулинович

Официальные оппоненты

доктор медицинских паук, профессор

доктор биотогических наук, профессор

Бурмистрова Александра Леонидовна Карташова Очьга Львовна

Ведущая ор1 анизация

Институт экологии и генетики микроорганизмов УроРАН, г Пермь О у

Защта сосгошся » /? и 2007 г в__часов

на заседании Диссертационного совета Д 208 117 03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Челябинская государс1вснная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ" но адресу 454092, г Челябинск, ул Воровского, 64

С диссертацией можно ознакомиться в библиспеке Государственного образова1ельною учреждения высшею профессионального образования ' Челябинская государс!венная медицинская академия Федеральною агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ

Автореферат разосчап » /1'-/- . -- 20071

Ученый секре1арь Диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор ГелешеваЛФ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Особенности межмикробных взаимодействии могут существенно влиять на формы и течение инфекционного процесса (Вельский В В , 1999, Олескин А В , 2000, Хуснутдинова Л М, 2004) Возбудители при ассоциированной инфекции чаще характеризуются антибиотикорезистентностью, (Фадеев СБ, 1999), адгезивной, гемолитической, антилизоцимной, антиинтерцидной, лецитовителазной, ДНК-азной активностями и Л 1-эшеротоксигенностью (Габидуллин 10 3 , 2006)

Данные литературы показывают, что при изучении очагов хирургической инфекции наиболее часто встречаются ассоциации стафилококков и энтсробакггерий Инициируя патологический процесс, 1рамнотожительные кокки, по-видимому, определяют условия для возможного развития в оча1е хирургической инфекции как особой экологической нише грамотрицательных микроорганизмов с имеющимся высоким персистентным потенциалом, что повышает вероятность развития тяжетого хронического процесса (Бухарин О В , 2000)

Вместе с тем данные об изменчивости биологических свойств микробов-ассоциантов могут быть иснозьзованы как критерии при диагностике патологического процесса и выборе антибактериального препарата

Исходя из вышеизложенного, проведение комплексных исследований, направленных на выявление факторов патогенноеги, определяющих патогенный

потенциал каждого из ассоциантов, выделенных при инфекционных процессах различной локализации является весьма актуальным

Цель исследования

Изучение на модели экспериментальной моно- и ассоциированной инфекции некоторых биологических свойств бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus, выделенных при инфекционных процессах различной локализации

Задачи исследования

1 Выделить от больных, страдающих гноино-воспалшелышми, кишечными и урологическими инфекциями и от здоровых людей штаммы бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus и провести изучение их культуральных, морфологических свойств и ультраструктурьт, сравнительно с их сокультивируемыми вариациями Serratia + Staphylococcus aureus

2 Провести изучение у монокультур бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus адгезивной, гемолитической (а-, тиолзависимой), антилизоцимной, антиинтерфероновой, антикомплсментарной, лецитиназной, ДНК-азной протистоцидной активностей и ЛТ-энтеротоксигенности, сравнительно с их сокультивируемыми вариациями (Serratia -<- Staphylococcus aureus)

3 На различных биологических моделях экспериментальной инфекции провести изучение некоторых биологических свойств монокультур бактерий рода SerTatia и Staphylococcus aureus и их совместно сокультивируечых вариаций

4 Изучить спектр антибиогикоустойчивости монокультур бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus и их совместно сокультивируемых вариаций Serratia spp + Staphylococcus aureus к широко применяемым в практике аншбиотикам и провести подбор эффективных антибактериальных соединений среди производных азотсодержащих i егероциклов

Научная новизна исследований

С помощью электронного микроскопа описаны морфологические особенности взаимоотношений между бактериальными клетками монокультур бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus и > их совместно сокультивируемых вариаций Serratia+ Staphylococcus aureus

Отработаны наиболее оптимальные подходы для оценки этиологической значимости условно-патогенной грамо1рицательной и грамположительной

бактериальной флоры в ассоциированной инфекции

Проведена и представлена сравнительная характеристика данных об адгезивной, гемолитической, ДНК-азной, антилизоцимиои, антиинтерфероновой, антикомплементарной, лецитиназной активностей и JlT-энтеротоксигснности у монокулыур и совместно сокультивируемых вариаций бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus

Сокультивируемые вариации штаммов бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus чаще, чем их монокультуры обладают способностью синтезировать высокоактивный термолабильный энтероюксин, а- и гиолзависимый гемолизины, лецитиназу, ДПК-азу, способны к ад!езии, тго подтверждает их этиологическую роль при инфекционных процессах различной локализации

Выявлено расширение спектра аитибиотикоустойчивости у сокультивируемых вариаций штаммов бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus, чем их монокультур Отобраны эффективные аншбактериальные соединения среди производных азотсодержащих гетероциклов (бензимидазоты и ксантины) к монокультурам и сокультивируемьш вариациям бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus

В процессе работы, от онкотогических и урологических больных, страдающих инфекционными осложнениями в ассоциации с бактериями рода Serratia spp и Staphylococcus aureus были выдетены два штамма Е coll, обладающие комплексом факторов патогенности, которые депонированы в ГНИИСК имени J1А Гарасевичц и запатешованы (Escherichia coll ГНИИСК №280, иагент №2203765, Escherichia coll ГНИИСК №281, патент №2293764 от 26 01 2006)

Теоретическая и практическая значимость работы

Данные о повышении у совместно сокультивируемых вариаций (Serratia+ Staphylococcus aureus) адгезивной, лецитиназной, гемолитической (а- и тиодзависимои), ДНК-азной, антилизоцимной, антиинтерфероповоп антикомплементарной активностей, J11 -энтеротоксигенности, вирулентных свойств, чем у их монокультур, расширяет представление о роли ассоциаций этих бактерий в этиологии инфекционных заболеваний человека и позволяет провести профилактику неблагоприятного течения инфекции и правильный подбор антимикробных препаратов

Основные положения, выносимые на защиту

1 У совместно сокультивируемых вариаций бактерий рода Serratia + Staphylococcus aureus более выражены адгезивная, гемолитическая (а- и тиолзависимый), ДНК-азная, лецитиназная, антилизоцимная, антиинтерфероновая, ангикомплементарная активности и ЛТ-энтеротоксигенность, чем у их монокультур

2 На модели экспериментальной инфекции выявлено, что при совместном сокульгивировании бактерий Serratia и Staphylococcus aureus проявляется более выраженная экспрессия факторов патогенности и персистенции, чем у монокультур

3 При совместном сокулыивировании бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus происходит расширение спектра лекарственной устойчивости к широко применяемым в практике антибиотикам и производным азотсодержащих гетероциклов

Апробация работы

Диссертация обсуждена на совместном заседании кафедры микробиотогии, вирусологии и иммунологии, кафедры биоло1 ии и медицинской генетики, инфекционных болезней с курсом эпидемиочопш, ЦНИЛ БГМУ и правления Башкирского отделения Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитотогов (Уфа, 2007) Результаты работы были представлены на научных конференциях молодых ученых Республики Башкорюсган «Медицинская наука» 2004-2006гг, на Всероссийской научной конференции с международным участием, посвященной 100-летию со дня основания филиала «Иммунонренарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ и CP РФ (Уфа, 2005), на X международной научной конференции «Здоровье семьи-XXI век» (Бангкок-Патгайя, Тайланд, 2006) на I международной (X всероссийской) пироговской студенческой научно-медицинскои конференции, на Всероссийской научной конференции «Вопросы морфологии», посвященной профессору С 3 Лукмапову (Москва-Берлин) (2006)

Внедрение в практику

Результаты исследования, освещающие биологические свойства монокультур бактерии рода Serratia и Staphylococcus aureus и их сокультивируемых вариаций внедрены в практические и лекционные курсы кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Башкирского государственного медицинского университета и в бактериологическую лабораторию Республиканской клинической больницы им Г Г Кувагова

Публикации

По теме диссертации опубликовано 9 научных работ Объем и структура диссертации

Текст диссертации изложен на 155 страницах компьютерного текста, содержит введение, обзор литературы, материалы и методы исследовании, 7 глав результатов собственных исследований, заключение, выводы, практические рекомендации, список литературы, который включает 102 отечественных и 91 зарубежных источников Иллюстрации представтены 24 рисунками и 15 таблицами

Содержание работы Материалы и методы исследования Материалом для исследования служили 78 клинических штаммов бактерий рода Serratia и 82 клинических штамма бактерий Staphylococcus aureus, выделенные от больных с гнойно-воспалительными, кишечными и урологическими забочсваниями, а так же с 32 сокультивируемые вариации штаммов бактерий рода Serratia + Staphylococcus aureus Допочншельно были использованы по 10 штаммов Serratia и Staphylococcus aureus выделенные от здоровых людей В качестве эталонных культур были использованы штаммы бактерии Serratia marccscens №№275, которые обладали комплексом факторов патогенности и депонированы в ГНИИСК имени JIА Тарасовича и запатентованы (Serratia marcescens ГНИИСК №275, патент №2247150), а также депонированный в ГНИИСК им Л А Тарасевича штамм Staphylococcus aureus (АТСС 25923) любезно предоставленный нам бактериологической лабораторией Республиканской детской клинической больницы Лабораторные животные бетые мыши, кролики полученные из питомника лабораторных животных ГУП «Иммунопрепарат» г Уфа, а так же кролики из питомника Башкирского государственного медицинского университета

Новые химические соединения - производные азотсодержащих гетероциклов бензимидазолы, ксантины, синтезированы на кафедре фармацевтической химии Башкирского юсударственного медицинского университета Изучение клеточной поверхности и особенностей морфологической структуры клеюк моно- и сокультивируемых вариаций бактерий родов Serratia и Staphylococcus aureus проводили с помощью оптического и эчектронною микроскопов (JFM 100В, Япония) Биохимическую идентификацию культур проводили путем использования среды Гисса и тест - системы Enterotest и Staphytest фирмы "LACHEMA" Чехословацкой

Республики Изучение подвижности проводили по общепринятым методам висячая и раздавленная капля Адгезивную активность изучали в реакции гемагглютинации с эритроцитами различных животных, птиц и цыпленка (Габидуллин 3 I и соавторами Авторское свидетельство №1312098, 1987г) Изучение среднего показателя адгезивной активности проводили по Бриллису В И (1986i) а - гемолитическую активность изучали по методу Габидуллина 3 Г (1990г) Тиолзависимый гемолизин определяли на мясопептонном агаре, содержащем эритроциты I - группы крови человека по Appelbaum Р С , Prozecky О W (1983г), ДНК-азную активность определяли по методу Jeffries CD (1957) Лецитиназную активность на желточно-солевом агаре ЮН Чистовича (1969i ) Антилизоцимную активность по методу О В Бухарина с соавт (1984г), антиинтерфероновую активность по методу В Ю Соколова (1990г), антикомплемептарную активность по методу Бухарина О В и соавг (1992) Определение антибиотикорезистенгности проводили по общепринятой меюдике стандартных дисков и серийных разведении Протистоцидную активность изучали на инфузориях туфельках по методу Галикеева X А (1987г ), вирулентность «in vitro» по Н К Войно-Ясепецкой (1957г), кожно-некротическую способность по методу М Г Гимранова (1967г), токсигенность на изолированной петле тонкого кишечника кролика, ЛТ-энтеротоксигенность на тесте «отек лап» (Ю П Вартанян с соавт 1978г) Выделение плазмидной ДНК проводили по методу Kado СТ и Liu ST (1981г), анализировали электрофорегшчески в 2% агарозном геле, а в качестве маркеров использовали ДНК фага X, любезно предоставленный нам лабораторией молекулярной биологии ИБГ УНЦ РАН, ДНК окрашивали бромидом эгидия и фотографировали при освещении ультрафиолетовыми лучами на транеиллюминаторе (254 нм) Используемые праймеры к генам «островков патогенности» подобраны по данным «GenBank» (www nebí nih gov) и использования пакета прикладных программ фирмы Lasergene (DNAStar Inc) на базе лаборатории ФХМА, ИБГ УНЦ РАН Для статистической обработки использовали формулы Ашмарина И И и Воробьева А А (1962)

Результаты исследований и их обсуждение

Культуральные, морфологические и биохимические свойства бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus были типичными для представителей своего рода

При электронно-микроскопическом исследовании клетки бактерий рода Serratia представляли собой палочки длинной 1,1-1,3 мкм и шириной 0,5-0,6 мкм, с псритрихиально расположенными жгутиками Клетки Staphylococcus aureus имели разные размеры в пределах от 0,5 до 1,7 мкм, и располагались в виде скоплений

Данные электронно-морфологических исследований показали, что контакты между клетками значительно чаще встречались у сокультивируемых вариаций

Известно, что рецепторы эпителиальных клегок, участвующих в адгезии, аналогичны структурам, которые определяют группу крови и поэтому метод 1емаплютинации с эритроцитами человека, животных и птиц широко используется для предварительного выявления адгезинов бактерий

При постановке реакции гемагглютинации с эритроцшами цыпленка Д -маннозочувствительную (MS) реакцию гемагглютинации из 78 монокультур Serratia 29 (37,2±5,4%) давали положшечьпую реакцию и отрицательную 49 (62,8±5,4%) Положительную Д- маннозорезистентную (MR) реакцию давали - 23 (29,5±5,1%) и 55 (70,5±5,1%) отрицательную Изучение адгезивной активности монокультур Staphylococcus aureus показало, что из 82 штаммов MS-реакцшо гемагглютинации с эритроцитами цыпленка 19 (30,5±5,0%) давали положительную реакцию и 63 (69,5±5,0%) отрицательную Положительную MR-реакцию давали 11 (13,4±3,7%) штаммов и отрицательную 71(86,6±3,7%) При постановке реакции гемагглютинации с эритроцитами цыпленка среди штаммов бактерий Serratia и Staphylococcus aureus выделенных от здоровых людей, слабая адгезивная активность была выявлена по 1 культуре

Изучение адгезивной активности совместно сокультивируемых вариации показало, что положительную MS реакцию гемагглгстшации с эритроцитами цыпленка давали 59,4±7,6% вариаций (19 из 32) и отрицательную 13 (40,6±7,6%) Даиные по изучению их способности давать MR- реакцию гемагглютинации с эритроцитами цыпленка показали, что положительную MR-реакцию давали в 43,8±7,7% случаях (14 из 32 вариации) и отрицательную 18 (56,2±7,7%) вариаций (р<0,05) При эгом необходимо отметить, что клетки совместно сокультивируемых вариаций в большом количестве (15) плотно прилипали к эритроцитам цыпленка, тогда как количество клеток монокультур, прилипающих к эритроцитам цыпленка составляли не более 10 на эритроцит

Аналогичные результаты были получены при изучении среднего показателя адгезивной активности (СПЛ) в опытах на формализированных эритроцитах I группы крови человека

Условно-патогенные бактерии имеют сложную систему ферментов (токсинов), которые осуществляют процессы, позволяющие им преодолевать защитные механизмы макроорганизма

Исследования последних лет показывают, что гемолизины различных типов относят к числу важнейших ферментов патогенности, которые могут быть отнесены к факторам, указывающим в по тазу потенциальной патогенности бактерий

В настоящее время у условно-патогенных бактерий выявлены несколько типов гемолизинов Среди них наиболее патогенетически значимым является пороформирующий а-гемолизин представляющий собой водорас!Воримый мопомерный полипептид

Исследования а-гемолитической активности монокультур Serratia показали, что из 78 культур Serratia а-гемолитической активностью обладали 18 штаммов (23,0±4,7%), среди которых 4 (22,2±4,7%) проявляли высокую, 3(16,6±4,2%) среднюю, 11 (61,2±5,5%) слабую активности Не проявляли активность 60 (77±4,7%) культур Из 82 монокультур Staphylococcus aureus 46 (56,1±5,5%) штаммов обладали а-гемолитической активностью, среди которых 15 (32,6±5,2%) проявляли высокую, 10 (21,7±4,5%) среднюю, 21 (45,6±5,5%) слабую активности, не давали а-гемолтическую активность 36(43,9±5,5%) культур

Изучение а-гемолитической активности совместно сокультивируемых вариаций показало, что частота встречаемости а-гемолитическои активности была значительно выше, чем у монокультур- 75,0±7,6% (24 из 32) При этом значитетьно чаще проявлялась высокая и средняя «-гемолитическая активность в частности 12(50,0±7,8%) и 7 (29,2±8,0%) соответственно (р<0,05)

Albesa J et al (1985), Barber L J et al (1986) показали, что бактерии кишечной группы синтезируют отличающийся от а-гемолизина т иол-зависимый гемолизин, который в той или иной степени обуставтивает патогенный потенциал возбудителя

Результаты исследования показали, что из 78 монокультур Serratia способностью синтезировать тиол-зависимый гемолизин обладали 21 (26,9±5,0%) штамм, среди которых 4 (19,1+4,4%) высокой, 5 (23,8±4,8%) средней, 12 (57,1±5,6%)

- слабой активностью, не проявляли активность 57(73,1±5,0%) культур Из 10 культур выделенных от здоровых людей 2(20%) обладали слабой активностью Из 82 монокультур Staphylococcus aureus 20 (24,4±4,7%) синтезировали тиол-зависимый гемолизин, среди которых 3 (15,0±3,9%) проявляли высокую, 4 (20,0±4,4%) среднюю, 13 (65,0з-5,2%) низкую активности и 62(75,6±4,7%) культуры не проявляли активность Из культур изолированных от здоровых людей, один штамм давал высокую тиол-зависимую гемочитическую активность Среди 32 сокультивирусмых вариаций 14 (43,6±7,7%) синтезировали гиол-зависимый гемолизин, среди которых 7 (50,0±7,8%) проявлячи высок>ю, 6 (42,9±5,4%)-средшою и 1 (7,1+4,5%) с габую активности и не проявляли активность 18 (56,4±7,7%) вариаций (р<0,05)

Лецитиназную активность условно-патогенных бактерии, некоторые исследователи наряду с гемолитической активностью, относят к факторам папменности, которая может быть одним из важнейших показате iefl вирулентности высеваемых клинических изотятов от больных с инфекционными процессами разчичной локализации (Езепчук 10 В, 1985) Лецитиназа, разрушая лецитин, способствует высвобождению рецепторов, с которыми взаимодействуют микроорганизмы

Изучение лецитиназной активности монокультур Serratia показало, что из 78 культур лецитиназную активность проявляли 26(33,3±5,3%), среди них высокоактивными бьпи 9(34,6±5,3%), среднеактивными 10(38,5±5,5%), слабоактивпыми 7(26,9±5,0%) и не проявляли активность 52 (64,7±5,4%) культуры Из 82 штаммов Staphylococcus aureus лецитиназную активность проявчяли 61 штамм (74,4±3,0%), среди которых высокую активность проявляли 14(22,9±3,0%), 17(27,9±3,3%) - среднюю, 30(49,1±5,0%) штаммов слабую активности и оказались не активными 21 (25,6±3,0%) культура

Изучение лецитиназнои активноеш совместно сокультивирусмых вариации показало, что частота встречаемости лецитиназнои активности была значительно выше, чем у монокульт>р в частности из 32 вариации лецитиназную активность проявляли 31(96,8±7,8%) и не обчадала активностью 1(3,2±0,5%) вариация При этом совместно сокультивируемые вариации чаще проявляли высокую-15(48,4±7,8%) и среднюю - 15(48,4±6,8%) активности (р<0,05)

Данные литературы показывают, что нуклеиновые кислоты являются основным субстратом для действия ДНК-аз и РНК-аз, которые относятся к факторам патогенности (Филимонова МН, 1997) Эти ферменты вызывают понижение вязкости окружающей среды, благоприятное для развития микроорганизма в тканях и выделяются в среду при некрозе и гибели лейкоцитов в месте инфекции (Бухарин О В , 2002)

ДНК-азная активность выявлена у многих условно-патогенных бактерий, выделенных от больных с инфекционными процессами различной локализации (Габидуллин 3 Г , 1990, Ахтариева А А , 2000, Саляхов Р 3 , 2005) Однако данных в отношении ДНК-азнои активности у сокультивируемых вариаций бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus весьма скудны и противоречивы

Изучение ДНК-азной активности 78 монокультур Serratia показало, что ДНК-азную активность проявляли 27 штаммов (34,6±3,8%), среди которых 7(25,9±4,9%) проявляли высокую, 9(33,3±5,4%) среднюю, 11(40,7±5,4%) слабую активности и не обладали активностью 51 (65,4-t4,8%) Из 10 штаммов Serratia, изолированных от здоровых людей 2 штамма проявляли слабую активность Среди 82 штаммов Staphylococcus aureus ДНК-азную активность проявляли 27 штаммов (32,9±3,5%), среди которых 8 (29,6±3,2%) - высокую, 6 (22,2±3,8%) - среднюю, 13 (48,2±5,3%) -слабую и не проявляли активности 55(67,1±5,5%) культур

Частота встречаемости ДНК-азной активности у сокультивируемых вариаций была значительно выше, чем у монокультур в частности из 32 вариации 22 (68,7±7,1%) обладали ДНК-азной активностью Совместно сокультивируемыс вариации значительно чаще проявляли высокую и среднюю активности 7(43,7i7,7%) и 7(43,7*7,7%) (р<0,05)

Способность к засетешпо экологической ниши зависит от наличия у бактерий определенных биологических свойств (Ьондаренко В М, 1999) Поэтому представляют ишерес факторы патогенности, позволяющие микроорганизму длительное время сохранять жизнеспособность в организме человека

Антилизоцимный фактор, направлен на инактивацию лизоциш и обеспечивает выживание возбудителя в макрофагах (Бухарин О В , 1982)

Исследования показали, что из 78 клинических штаммов бактерий рода Serratia ангилизоцимной активностью (АЛА) обладали 40(51,3±5,6%) штаммов и не обладали

32 (48,7±5,6%) При титровании лизоцима в среде для определения антилизоцимной активности выявили, что 11(27,5±5,0%) штаммов инактивировали лизоцим в концентрации выше 10 мкг/мл, 13(32,5±5,3%) в концентрации 5-10 мкг/мл и 16(40,0^-5,5%) в концентрации до 5 мю/мл Из 82 штаммов Staphylococcus aureus инактивировали лизоцим 42 (51,2±5,5%) и не инактивировали 40(48,8±5,5%), при этом 17(20,7±4,4%) штаммов инактивировали лизоцим в концентрации выше 10 мкг/мл, 29(35,3±5,2%) в концентрации 5-10 мкг/мл и 36(44,0±5,4%) в концентрации до 5 мкг/мл

Изучение антилиюцимной активности совместно сокультивируемых вариаций показало, что из 32 вариации 28 (87,5=1-5,8%) инактивировали лизоцим, из которых 10(31,3±7,1%) в концентрации выше 10 мкг/мл, 15(46,9±7,8%) в концентрации 5-10 мкг/мл, 21(65,4±7,4%) в концентрации до 5 мкг/мл и не инактивировали 4(12,5±5,8%) (р<0,05)

Антикомнлементарный признак обеспечивает персистирование микробной клетки и характеризует способность инактивировать бактериальными клетками системы комплемента макроорганизма (Брудастов Ю А, 1996)

Анализ антикомптементарной активности монокультур 78 штаммов Serratia показал, что 40 (51,3±5,6%) штаммов инактивировали комплемент, из которых 9(22,5±4,7%) в концентрации до 5СН50/мл, 13(32,5±5,3%) в концентрации от 5 до 15СН5()/мл и 18(45,0±5,6%) в концентрации более 15СН5о/мл Не обладали активностью 38 (48,7±5,6%) культур

Среди 82 изученных штаммов Staphylococcus aureus антикомплементарнои активностью обладали 48(58,5±5,0%) штаммов, среди которых 23(47,9±5,5%) инактивировали комплемеш в концентрации 5 СН50/мл, 12(25 0±4,7%) в концентрации 01 5 до 15 СН50/мл и 13(27,li4,9%) в концентрации более 15 СН50/чл Не инактивировали комшемент 34(41,5±5,0%) кульгуры Среди кулыур изолированных от здоровых людей по 1 штамму Serratia spp и Staphylococcus aureus проявляли среднюю активность

Изучение атикомплементарной активности у совместно сокультивируемых вариации показало что из 32 вариаций 28(87,5±5,8%) оказались способными инактивировать компчемент, ш которых 1(3,6±3,2%) в концентрации до 5СН50/мл,

12(42,8±7,7%) в концентрациях от 5-15СН50/мл и 15(53,6±7,8%) в концентрации выше 15СНзо/мл Не инактивировали комплемент 4(12,5±5,8%) вариации

Данные сравнительного изучения антикомплементарной активности монокультур и совместного сокульгивируемых вариаций показали, что в последнем случае они значительно чаще проявляют высокую и среднюю активности (р<0,05)

К факторам, обеспечивающим персистирование микробной клетки в организме хозяина, относится «антиингерфероновый» (AHA) признак «Антиинтерфероновый» фактор подавляет катионные бе тки фагоцитов, обладает цитотоксическим эффектом, утяжеляя течение инфекции в клинике, а ею мишенью является бактерицидный фрагмент препарата лейкоцитарного интерферона (Соколов В 10 1990)

Титрование лейкоцитарного интерферона в среде для определения антиинтерфероновой активности показало, что из 82 штаммов Staphylococcus aureus инактивировали «катионные белки лейкоцитарного интерферона» 42(51,2±4,1%) культуры Среди них 18(42,8±4,4%) инактивировали интерферон в концентрации до 5 ед/мл, 11(26,1 ±3,9%) до 5-15 ед/мл и 13(31,1±3,0%) выше 15 ед/мл Не инактивировали интерферон 40(48,8±4,1%) культур

Из 78 штаммов Serratia антиинтерфероновой активностью обтадали 35(44,8±5,6%), среди которых 15(42,9±5,6.%) инактивировали интерферон в концентрации до 5 ед/мл, 9(25,7±4,9%) в концентрации до 5-15 ед/мл, 11(31,4±5,2%) в концентрации выше 15 ед/мл и не инакшвировали 43(55,8±5,6%) культуры

Изучение антиинтерфероновой активности 32 совместно сокультивирусмых вариаций показало, что способностью инакггивировать интерферон обладали 27(84,4±4,2%) вариаций, среди которых 1(3,7±1,2%) инактнвировала интерферон в концентрации до 5 ед/мч, 11(40,7±5,6%) в концентрации от 5-15 ед/мл, 15(55,5±5,8%) в концентрации выше 15 ед/мл и не инактивировали интерферон 2(6,2±3,2%) (Р if>,05)

С целью выяснения этиологической значимости бактерий испотьзуются экспериментальные модели инфекционного процесса, среди которых наиботес простым и чувствительным методом изучения вирулентности является метод иптраназального заражения белых мышей

Из 78 исследуемых штаммов Serratia 22(28,2±5,0%) обладали вирулентностью, среди которых проявляли высокую вирутептноегь 3(13,6±3,8%), среднюю

8(36,4±5,4%), 11(50,0±5,6%) слабую вирулентность и 56(71,8±5,0%) штаммов были авирулентными Среди 82 штаммов Staphylococcus aureus 27(32,9±5,1%) проявляли вирулентность, среди которых 4(14,8*3,9%) обладали высокой, 11(40,7±5,4%)-средней, 12(44,5±5,4%) слабой вирулентностью и 55(67,1±5,1%) быта авирулентными

Среди 32 совместно сокультивируемых вариаций вирулентностью обладали 17(53,1±7,6%), среди которых 5(29,4±7,1%) проявляли высокую, 9(52,9±б,8%) -среднюю и 3(17,6±7,4%) слабую вирулентность, а остальные 15(46,9±7,6%) были авирулентными (р<0,05)

Способность бактерий вызывать инфекционный процесс зависит от наличия у возбудителя комплекса факторов патогенности (Бондаренко ВМ, 1999), но токсигенност ь при этом является определяющим в развитии инфекционного заболевания

На модели «отек лан» мышей мы изучали способность 20- часовых бульонных культур продуцировать ЛТ-энтеротоксин

При изучении 82 штаммов Staphylococcus aureus 10(12,2±3,6%) монокультур вызывали отек лап, из которых 2(20,0±4,4%) вызывали отек лап от 95 до 120 мг, 4(40,0±5,4%) от 75 до 95 мг, 4(40,0±5,4%) давали положительный тест от 60 до 75 мг, а остальные 72(87,8±3,6%) менее 60 мг

Среди 78 монокультур Serratia центрифу1ат 11(14,1±3,9%) штаммов вызывал «отек лапки», из которых 3(27,3±5,0%) - от 95 до 120 мг, 4(36,3±5,4%) - от 75 до 95 мг и 4(36,3±5,4%) - от 60 до 75 мг и менее 60 мг - 67(85,9^3,9%) штаммов

Среди 32 сокультивируемых вариаций отек лапки вызывали 13(40,6±7,6%), среди которых 5(38,5±7,6%) вариации вызывали отек лап от 95 до 120 мг, 6(46,1±7,8%) вариаций - от 75 до 95 mi и 2(15,4±6,3%) вариации от 60 до 75 мг и менее 60 мг 19(59,4=7,6%) вариаций (р<0,05)

С целью выявления природы вещества, обуставливаютцего "отек лап", центрифугат 20 часовой бульонной культуры надевали при 56°С и 85°С в течение 45 минут и вводили субплаптарно Гретый при 56°С центрифугат давал разницу между опытными и контрольными ланками в пределах от 25-40 мг, при 85°С - от 20 до 30 мг, что указывало на термолабильность токсического вещества, выделяемого исследуемыми бактериями

В качестве одного из маркеров токсигенности моно- и совместно сокультивируемых вариаций мы использовали кожно-некротическую пробу Бактерии рода Serratia и Staphylococcus aureus способны вызывать положительную кожно-некротическую пробу, которая значительно ярче проявляется у суспензий совместно сокультивируемых вариаций, что возможно связано с взаимным индуцированием факторов патогенности дерчаго-пекротического действия при совместном сокультивированииэтих бактерий (р<0,05)

Патогенные свойства микроорганизмов, обнаруживаемые m vitro, не все!да позволяют составить полное предс1авяение о патогенном потенциале изучаемого объекта ввиду неидентичности условиям in vivo В этом отношении воспроизведение экспериментальной инфекции с применением метода "m vivo expression technology" (IVET) (Klose К E 2000) нозвопяет провести натлядную оценку патогенного потенциала возбудителя и возможные патологические изменения в тканях и органах "хозяина", в зависимости от наличия конкретных факторов вирулентности возбудителя В качестве примера IVET, для тестирования энтеротоксигенности штаммов, выделенных при инфекционной патологии человека, служит модель "лигированная петля тонкого кишечника" кролика

Положительной считали кишечную реакцию (V/L) при коэффициенте 1,0 и

более

Введение в петлю тонкого кишечника кролика взвеси монок\льтур бактерий рода Serratia или Staphylococcus aureus, обладающих способностью продуцировать ЛТ-энтеротоксин, обуславливало накопление экссудата и характеризовалось значениями отношения объема жидкости к длине дотированного сегмента (V/L) от 1,0 до 1,3

В то же время, введение суспензии совместно сокультивируемых вариаций продуцирующие LT-энтеротоксин, обуславливали накопление гнойно-геморрагического экссудата в просвете тонкой кишки, значительно чаще, чем монокультуры (V/L составляет 1,5-1,6) и проявляюсь в виде развития полнокровия, черно-багрового отека, с очаговыми гнойно-некротическими язвами стенки и брыжейки кишки В просвете кишечника определялось большое количество гнойно-геморрагического экссудата Эластичность и прочность кишечной стенки были

значительно снижены, чем при введении суспензии монокультур и при небольшом усилии ткань кишки легко рвалась

В процессе работы, от онкологических и урологических больных с инфекционными осложнениями были выделены два штамма Е coh в ассоциации с Serratia и Staphylococcus aureus У этих штаммов попутно изучали вирулентность на легочной модели штаммы вызывали гибель всех экспериментальных животных в течение 2-х часов, инфузорий туфелек в гечение 1,5 минут и продуцировали комплекс факторов патогенности (а-, тиолзависимый гемолизин, адгезивной, ДНК-азпои, лецитиназной активности), oieK лап мышей (более 0,9 мг) и персистирующими свойствами Поэтому эти 2 штамма Е coh мы депонировали в институт им Гарасевича и запатентовали (Escherichia coh ГНИИСК №280, патент №2293765, Escherichia coh ГНИИСК №281, патент №2293764 от 26 01 2006)

Использование лабораторных животных при изучении вирулентности и токсигенносш микроорганизмов имеют ряд недостатков, в частости дороговизна экспериментальных животных и сложность выполнения в условиях бактериологических лабораторий больниц

В связи этим с целью выявления цитотоксических токсинов бактерий был предложен протистоцидньш тест, который, по мнению X Л Галикеева и соавт (1987) позволяет оценивать не только наличие токсинов, но и определять степень вирулентности микроорганизмов в зависимости от времени гибели инфузорий туфелек

Результаты исследования показали, что время, в течение которого происходит гибель инфузорий, зависит от биологической активности штаммов

Из 78 монокулыур Serratia 22(28,2±5,0%) штамма вызывали гибель инфузорий туфстск в течение от 30 секунд до 5,5 минут из которых 4 (18,1±4,3%) тшамма вызывали гибель инфузорий в течение 30-90 секунд, 10(45,5±5,6%) в течение 1,5-3,5 минут, 8(36,4£5,4%) в течение 3,5-5,5 минут и 56(71,8±5,0%) штаммов Serratia не вызывали гибель простейших в течение 5,5 и более минут Из 82 штаммов Staphylococcus aureus суспензии 27(32,9±5,1%) бактериальных культур вызывали гибель инфузорий в течение от 30 секунд до 5,5 минут, из которых 7 (25,9±4,8%) - в течение 30-90 секунд, 11(40,7±5,4%) - 1,5-3,5 минуты, 9(33,3±5,2%) в течение 3,5-5,5

минут и 55(67,1±5,1%) штаммов не вызывали гибель простейших в течение 5,5 и более минут

При изучении протистоцидной активности совместно сокультивируемых вариаций были получены следующие результаты из 32 вариаций 22(68,8±7,1%) вызывали гибель инфузорий в течение от 30 секунд до 5,5 минут, из которых 8(36,3±7,5%) - в течении 30-90 секунд, 7(31,8±7,2%) - в течении 1,5-3,5 минут и 7(31,8±7,2%) в течении 3,5-5,5 минут 10(31,2±7,1%) не вызывали обездвиживание и гибель инфузории в течение 5,5 и более минут (р<0,05)

При изучении биологических свойств бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus важным моментом является определение их лекарственной устойчивости Нами было проведено сравнительное изучение антибиотикочувс!вительности монокультур бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus и их совместно сокультивируемых вариаций

Исследование антибиотикочувствитетытости монокультур Serratia показало, что штаммы были чувствительны к 16 антибиотикам, умеренно чувствительны к 9 и не чувствительны к 24 из 49 антибактериальных препаратов Монокультуры Staphylococcus aureus были чувствительны к 21, умеренно чувствительны к 11 и не чувствительны к 17 препаратам Исследование, чувствительности сокультивируемых вариаций показало, что они были чувствительны к 7, умеренно чувствительны к 10, а к остальным 32 препаратам не чувствительными (р<0,05)

Таким образом, результаты данного раздела исследований дают нам основание заключить, что при совместном сокультивироваиии бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus происходит расширение спектра устойчивости к широко применяемым в практике антибиошкам, чем у монокультур Исходя из этого, нами изучена противомикробная активность конденсированных гетероциклов, содержащих в своей crpyKiype имидазольный цикл, как бензимидазоты, ксантины

Результаты исследования позволит выявить 3 производных бензимидазола и 2 производных ксантина, которые проявчяти аншбактериальную активность

Бактерии рода Serratia и Staphylococcus aureus являются условно-патогенными микроорганизмами, поэтому трудно оценить их этиологическую значимость, не выяснив природу генетической детерминанты «факторов патогенности»

Нами был изучен профиль нлазмидной ДНК монокультур бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus и их сокультивируемых вариаций

В качестве контротя использовали депонированный в ГНИИСК им Л А Тарасевича штамм Serratia marcescens № 268 и его изогенный бесптазмидный вариант, а также штамм Staphylococcus aureus (АТСС 25923)

В первой серии опьпов мы изучали плазмидный профиль ДНК у 25 монокультур бактерий рода Serratia При этом 7 штаммов оказались несущими плазмиды Молекулярные массы плазмид значительно различались Так электрофорешчески было установлено, что бактерии рода Serratia несли плазмиды массой от 12 до 120 МД

В следующей серии опытов мы изучали плазмидный профиль ДНК 25 монокультур Staphylococcus aureus При этом 12 штаммов оказались несущими плазмиды Молекулярные массы плазмид значительно различались Так электрофоретически было установлено, что Staphylococcus aureus несли плазмиды массой от 12 до 120 МД

Из литературы известно, что бактерии рода Serratia и Staphylococcus aureus обладают а-гемолитической активностью, однако природа генетического контроля продукции а-гечолизина у штаммов Serratia и Staphylococcus aureus остается не до конца выясненной, в связи с этим мы попытались выяснить природу генетического детерминанта, контролирующею продукцию а-гемолизина у изучаемых культур

Исследование проводили на 6 штаммах Serratia, обладающих а-гемолитической активностью, и 5 штаммах, не способных продуцировать а-гемолизин В качестве эталонной культуры использовали штамм Serratia marcescens ГНИИСК № 268, обладающий ангемотшической активностью и несущий пчазмиду с массой 120 МД

Результаты иссчедований показали, что среди клонов 6 штаммов Serratia, обладающих а-гсмолитическои активностью, у клонов 5 культур обнаруживалась плазмида мотекутярнои массой 120 МД, что указывало на возможн>ю роль данной плазмиды в продукции а-гемочизина

В дальнейшем эш плазмиды элиминировали по общепринятой методике и у клонов изучали профиль плазмидной ДНК При этом большинство клонов изогенных пар штаммов Serratia потеряли свойство продуцировать смемолизин, и на фореграмме не просматривалась плазмида массой 120 МД, что указывало на

возможную роль данной пчазмиды в продукции а-гемолизина Тем не менее, некоторые (от 4 до 10) из клонов, утратившие плазмиды массой 120 МД, продолжали продуцировать а-гемолизин, что свидетельствовало о вероятности существования у бактерий рода Serratia генетической детерминанты иной природы, контролирующий продукцию а-гемолизина

Затем аналогичное исследование проводили на 12 штаммах Staphylococcus aureus обладающих «-гемолитической активностью и 10 штаммах не способных продуцировать а-гемолизин Результаты исследований показали, что среди клонов 12 штаммов Staphylococcus aureus, обчадающих а-гемолитическоч активностью, у большинства клопов обнаружили плазмиду с молекулярной массой 120 МД, чю также указывало на возможную роль данной птазмиды в продукции а-гемолизина у иссчедуемых бактерий

В дальнейшем эти плазмиды элиминировали по общепринятой методике и у клонов изучали профиль плазмидной ДНК При этом большинство (более 90%) клонов у изо1енных пар штаммов Staphylococcus aureus потеряли свойство продуцировать а-гемолизин, и на фореграмме не просматривалась плазмида массой 120 МД, что указывало на возможную роль данной птазмиды в продукции а-гемолизина Тем не менее, часть штаммов, угративших плазмиды массой 120 МД продолжали продуцировать биологически активные вещества, вызывающие гемолиз эритроцитов, продукция которых возможно контролируется структурными элементами хромосомной природы

Наши попытки осуществить коньюгативную передачу плазмиды массой 120 МД между бактериями рода Serratia и Staphylococcus aureus, а также к универсальному реципиенту Е coli К12 не увенчались успехом Таким образом мы не смогли в опытах прямой передачи плазмид, изучить механизм усиления а-гемолитической активностей у сокульшвируемых вариаций бактерий, принадлежащих к различным родам

Таким образом, резулыаты наших исследований по изучению генетической детерминанты а-гемолитической активности бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus показали, что продукция а-гемолизина возможно контролируется неконыогагивной плазмидой массой 120 МД и хромосомой

Среди применяемых молекулярно-биологичееких методик наиболее широкое распространение во всем мире получил метод полимеразнои цепной реакции (ПЦР), в основе которого лежит многократное увеличение числа копий специфического участка ДНК (так называемая направленная амплификация ДНК) Методом ПЦР были протестированы 18 клинических штаммов бактерий рода Serratia и 18 штаммов Staphylococcus aureus несущих плазмиды различном молекулярной массы

Амплификацию участков ДНК «островков пакменности» осуществляли методом Г1ЦР ПЦР проводилась на амплификаторе «Терцик» («ДНК-технология», Россия) По завершении амплификации их реакционной смеси отбирали аликвоту объемом 13 мкл и анализировали в 1-2% агарозном геле, в зависимости от предполагаемого размера фрагмента ДНК Был осуществлен подбор праймеров к некоторым генам «островков патогенности» Serratia и Staphylococcus aureus, определяющие их способность к продукции ЛТ-энтеротоксина

Проведенные исследования позволили установить факт наличия у протестированных микроорганизмов фрагментов ДНК, специфичных известным генам кластеров патогенности Serratia Среди исследованных штаммов образование искомых ампликонов при использовании праймеров имело место в 3 случаях из 18 у бактерий рода Serratia и в 5 случаях из 18 у Staphylococcus aureus

В следующей серии опытов мы провели амплификацию участков ДНК Serratia, используя олигонуклеогиды (праймеры), кодирующие продукцию ЛТ-энтеротоксина Staphylococcus aureus Результаты электрофореза показали, что данные праймеры кодировали несколько неспецифических участков геномной ДНК Serratia различной молекулярной массы Очевидно, что данные фрагменты генов, кодирующих продукцию ЛТ-энтеротоксина у Staphylococcus aureus имеют филогенетическое сходство с аналогичными структурами, ЛТ-энтерогоксшепности у Serratia Опыты по проведению амплификации Staphylococcus aureus, используя праймеры, кодирующие продукцию ЛТ-энтероюксина у Serratia не увенчались успехом Таким образом, методом ПЦР быта протестированы клинические штаммы бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus и обнаружены фрагменты «островков патогенности», в связи с чем данный метод может быть использован в качестве одного из методов для определения факторов патогенности бактерий рода Serratia

Таким образом, результаты проведенных исследований дают нам основание полагать, что штаммы бактерии рода Serratia и Staphylococcus aureus при совместном сокультивировании проявляют более выраженную адгезивную, о:-, тиолзависимую гемолитическую, лецитиназную, ДНК-азную, антилизоцимную,

«антиинтерфероновую», ангикомтсментарную, протистоцидную, JIT-энтеротоксигенную активности, антибиотикоустойчивость и вируленгносгь, что в совокупности может служить обоснованием для отнесения выделенных в ассоциации условно-патогенных бактерий к штаммам, обладающим бочее высоким патогенным потенциалом в сравнении с изочированными монокультурами Кроме того, генетическими детерминантами а-гемолитической активности бактерии рода Serratia и Staphylococcus aureus возможно является неконыогативная плазмида массой 120 МД и хромосома, а также возможно, что олигонуклеотиды, кодирующие продукцию ЛТ-энтеротоксина у Staphylococcus aureus имеют фило1 енетическое сходство со структурами, кодирующими продукцию ЛТ-энтеротоксина у Serratia

ВЫВОДЫ

1 Электронно-микроскопическое исследование структур колоний штаммов бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus, выделенных от больных показало, что клетки совместно сокультивируемых вариаций бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus в большом котичестве (более 15) плотно прилипают к эритроцитам цыпленка, тогда как количество прилипающих клеток у монокультур, составляло не более 10 на единичный эритроцит

2 Штаммы бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus, выделенные or больных страдающих инфекционными процессами разчичной локализации, при совместном сокультивировании чаще проявлячи высокую ад!езивную, гемолитическую (а-, тиоч-зависимый гемолизин), антилизоцимную, антиинтерфероновую, атикомплеменгарную, лецитиназную, ДНК-азную активности и LT-энтеротоксигенность, чем их монокультуры

3 Бактерии рода Serratia и Staphylococcus aureus способны вызывать положительную кожно-некротическую пробу, отек лап, накопление жидкости в петле тонкого кишечника кролика, гибель интраназально зараженных мышей и инфузорий туфелек, которые значительно ярче проявляются у совместно сокультивируемых вариаций

4 Изучение антибиотикограммы штаммов бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus показало, что у сокультивируемых вариаций этих микроорганизмов значительно шире спектр антибиотикоустойчивости к широко применяемым в медицинской практике антибиотикам и обладают чувствительностью к вновь синтезированным производным азотсодержащих гетероциклов, в частности бензимидазолу и ксангину

5 Результаты ПЦР реакции Serratia с праймерами Staphylococcus aureus указывают на филогенетическое сходство структур изучаемых бактерий, кодирующих продукцию JIT-энтеротоксина

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Полученные результаты по адгезивной, гемолитической (а-, тиолзависимый), ДНК-азной, лецитиназной, антилизоцимной, антиингерфероновой, антикомплемсптарнои активностей, ЛТ-знтсротоксигснности, а также вирулентных свойств монокультур бактерии рода Serratia и Staphylococcus aureus и их совместно сокультивируемых вариаций, расширяе1 представление о роли ассоциации этих бактерий в патогенезе заболеваний, вызванных условно-патогенными бактериями, что позволяет отнести их к этиологически значимым и соответственно провести профилактику неблагоприятного течения заболеваний и подбор антибактериальных препаратов для лечения инфекционных процессов, вызванных ассоциациями этих бактерий

2 Штаммы Escherichia coli ГИСК №№ 280, 281 рекомендуется использовать в качестве эталонных культур при иденшфикации и изучении биологических свойств бактерий рода Escherichia, а также при производстве биопрепаратов

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Мамбетова Э Ф Гемолитическая активность клинических штаммов бактерий родов Staphylococcus aureus и Serratia, выделенных в виде смешанных и монокультур / Э Ф Мамбетова, Ф С Билалов, 3 Г Габидуллин, Ю 3 Габидуллин, А А Ахтариева //ЗдравоохранениеБашкортостана Спец вып -2005 - №3 - С 323

2 I абидуллин Ю 3 Некоторые особенности факторов патогснности бактерий родов Enterobacter spp , Serratia spp в виде моно- и ассоциированных культур /10 3 Габидуллин, 3 1 Габидуллин, М М Туигунов, А К Булгаков А А Ахтариева, Э Ф

Мамбетова, Ф С Билалов, Н Н Гибазов, Р 3 Саляхов // Здравоохранение Башкортостана Спец вып - 2005 - № 3 - С 322

3 Мамбетова Э Ф «-гемолитическая активность моно- и ассоциированных культур бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus /ЭФ Мамбетова, 3 Г Габидуллин, А А Ахтариева, Ю 3 Габидуллин, Ф С Билалов, Н Н Гибазов // Медицинские иммунобиологические препараты в XXI веке разработка, производство и применение матер Всерос науч конф с международным участием, посвящ 100-летию «Иммунопрепарата» - 2005 - С 115

4 Мамбетова Э Ф Особенности патоморфолм ических изменении, вызванных моно- и ассоциированными бактериями семейства Enterobacteriaceae и Staphylococcus aureus в опытах петли тонкого кишечника кролика / Э Ф Мамбетова, 3 Г Габидуллин, М М Туйгунов, Ф С Билалов, А А Ахтариева, Р 3 Саляхов Н X Насибуллин, Ю 3 Габидуллин // Морфологические ведомости - 2006 - № 1-2 -С 155-156

5 Мамбетова Э Ф Антилизоцимная и антиинтерфероновая активности и вирулентность моно- и ассоциированных культур бактерий рода Serratia spp и Staphylococcus aureus /ЭФ Мамбетова, А А Ахтариева, Ф С Билалов, Ю 3 Габидуллин, Л И Лукманова//Вестник РГМУ .-2006 -Т 49, №2 - С 396

6 Габидуллин 3 Г Характеристика свойств, определяющих персистенцию моно-и ассоциированных культур условно-патогенных энтеробактерий / 3 Г Габидуллин, Ю 3 Габидуллин, А А Ахтариева, М М Алсынбаев, Э Ф Мамбетова, М М Туйгунов, Д Т Гашимова, Ф С Билалов, Н Н Гибазов, Р М Ахмадеев, А К Булгаков // Журнал микробиологии, вирусочогии и иммунобиотогии - 2006 - № 4 - С 62-64

7 Ахтариева А А Изучение влияния термотабильпого энтеротоксина некоторых представителей бактерий семейства ENTEROBACTERIACEAE на лизосомальную активность перитонеалышх макрофагов в эксперименте / А А Ахтариева, 31 Габидуллин, ЭФ Мамбетова, ФС Билалов // Здоровье семьи-XXl век матер X международ науч конф - М , 2006 - С 25-26

8 Пат 2293764 Российская Федерация, МПК C12N 1/00, А61К 39/108 Штамм бактерий Escherichia coll ГИСК №281, обладающий способностью продуцировать термолабильный ЛТ-энтеротоксин 2006 / Ф С Билалов 3 Г I абидуллин, Э Ф Мамбетова и др, заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО «Башкирский

государственный медицинский университет» федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию - №2006105030/13, заявл 26 01 06, опубл 20 02 07, Бют № 5 - 444 с

9 Пат 2293765 Российская Федерация, МПК C12N 1/20, А61К 39/108 Штамм бактерий Escherichia coli ГИСК №280, обладающий способностью продуцировать термолабильный ЛТ-энтеротоксин 2006 / Ф С Билалов, 3 Г I абидуллин, Э Ф Мамбегова и др, заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию - №2006105030/13, заявл 26 01 06, опубл 20 02 07, Бюл № 5 - 444 с

Мамбетова Эльмира Факиловна

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НЕКОТОРЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ ВОЙСТВ МОНОКУЛЬТУР И СОКУЛЬТИВИРУЕМЫХ ВАРИАЦИЙ БАКТЕРИЙ

РОДА SERRAT1A И STAPHYLOCOCCUS AUREUS

03 00 07-микробпо ютил

Авюрсфера1 диссертации на соискание ученой степени кандщлта мстишшских наук

Лицензия № 0177 от 10 Об 96 i

Подписано в печать «__» _ ______2007г

Бумага офсетная Отпечашпо па ризо!рафе Формат б0\84'/|6 Ус i-исч т 17 Уч-шд ч 1,9 Тираж 100 экз Заказ № 424

450000,1 Уфа ул Ленина, 3, ГОУ ВПО «Бацхгосмедуниверситет РОСЗДРАВА»

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мамбетова, Эльмира Факиловна

Введение 4

1.0 Обзор литературы

1.1. Этиологическая роль бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus в 11-14 инфекционной патологии человека

1.2. Факторы патогенности бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus 15-26 выделенных в виде моно- и ассоциированных культур

2.0 Материалы и методы исследования 27

3.0 Собственные исследования

3.1. Характеристика клинических штаммов бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus, выделенных от больных страдающих 42 инфекционными процессами различной локализации

3.2. Морфологические и культуральные свойства бактерий рода Serratia и 42-46 Staphylococcus aureus

4.0. Факторы патогенности монокультур бактерий рода Serratia и

Staphylococcus aureus и их сокультивируемых вариаций Serratia spp. +

Staphylococcus aureus

4.1. Адгезивная активность 47

4.2. Гемолитическая активность 52

4.3. Лецитиназная активность 57

4.4. ДНК-азная активность 59

5.0. Персистирующие свойства монокультур бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus и их сокультивируемых вариаций

5.1. Антилизоцимная активность 61

5.2. Антикомплементарная активность 63

5.3. Антиинтерфероновая активность 65

6.0. Изучение вирулентности и токсигенности монокультур бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus и их сокультивируемых вариаций

6.1. Легочная модель 68

6.2. Тест «отек лап» 70

6.3. Кожно-некротическая проба 72

6.4. Петля тонкого кишечника кролика 76

6.5. Протистоцидная активность 81

7.0. Изучение резистентности монокультур и сокультивируемых вариаций бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus к широко применяемым в практике антибиотикам и проведение подбора 83эффективных антимикробных средств среди производных азотсодержащих гетероциклов.

8.0. Генетическая природа некоторых факторов патогенности бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus и их совместно 91сокультивируемых вариаций

99-132 133 134

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сравнительная характеристика некоторых биологических свойств монокультур и сокультивируемых вариаций бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus"

Актуальность работы

В последние годы повсеместно наблюдается качественная перестройка видового состава возбудителей инфекционных заболеваний человека, с четкой тенденцией повышения удельного веса ассоциированных инфекций, вызванных условно-патогенными грамотрицательными и грамположительными бактериями. Данная патология человека характеризуется выраженным клиническим полиморфизмом, связанным с одновременным воздействием нескольких этиологических агентов, каждый из которых несет в своем арсенале комплекс факторов патогенности [4]. Истолкованию результатов при этих инфекциях затрудняет высокая частота выявления условно-патогенных микроорганизмов в составе микст-культур, каждая из которых обладает рядом характеристик, сочетание которых может определить высокий патогенный потенциал патогенов в целом [31,37]. Изменение этиологической структуры инфекционной заболеваемости, по мнению многих исследователей, связано с неблагоприятной экологической обстановкой, нерациональным применением антибактериальных препаратов, нарушением естественной резистентности макроорганизма, генетическим обменом внехромосомных элементов между патогенными и условно-патогенными микроорганизмами [20]. В процессе эволюции при взаимодействии организма хозяина с окружающими его микроорганизмами сформировались симбиотические сообщества, составляющие нормальную микрофлору человека [13, 70].

При изучении ассоциаций микроорганизмов решаются две проблемы. С одной стороны, оцениваются механизмы межмикробных взаимодействий в микросистемах и их роль в формировании биоценозов. С другой стороны, взаимодействия микроорганизмов-представителей одного биотопа, используют как инструмент для решения прикладных задач медицины и биологии [72].

Особенности межмикробных взаимодействий могут существенно влиять на формы и течение инфекционного процесса [9,64,95]. Возбудители при ассоциированной инфекции чаще характеризуются антибиотикорезистентностью, [90], адгезивной, гемолитической, антилизоцимной, антиинтерцидной, лецитовителазной, ДНК-азной активностями и ЛТ-энтеротоксигенностью [4].

Анализируя доступную нам литературу мы выявили, что из очагов хирургической инфекции наиболее часто выделяются ассоциации стафилококков и условно-патогенных энтеробактерий. Инициируя патологический процесс, грамположительные кокки, по-видимому, определяют условия для возможного развития в очаге хирургической инфекции как особой экологической нише грамотрицательных микроорганизмов с имеющимся высоким персистентным потенциалом, что повышает вероятность развития тяжелого хронического процесса [24].

Вместе с тем данные об изменчивости биологических свойств микробов-ассоциантов могут быть использованы как критерии для диагностики патологического процесса и выбора антибактериального препарата для элиминации возбудителя из микробиоценоза.

Одновременное развитие нескольких возбудителей приводит не только к суммированию болезнетворных возможностей, но и вызывает взаимное усиление вирулентности ассоциантов. Наряду с этим в популяциях взаимодействующих микроорганизмов увеличивается число особей, устойчивых к антибиотикам [9].

В ассоциациях микроорганизмов различной родовой принадлежности происходит взаимное усиление патогенного и персистентного потенциала симбионтной микрофлоры, что сопровождается прогрессированием заболевания[24].

Исследования, направленные на изучение биологических свойств микробных ассоциаций позволят в каждом конкретном случае провести целенаправленную профилактику и лечение инфекционных процессов.

В то же время, межбактериальные взаимодействия как один из механизмов формирования ассоциаций микроорганизмов при микст-инфекциях, и изменения в проявлении патогенных свойств представителями условно-патогенных грамположительных и грамотрицательных бактерий с учетом их симбиотических связей изучены недостаточно [95]. Вместе с тем, данные об изменчивости биологических свойств микробов-ассоциантов могут быть использованы как критерии при диагностике инфекционного процесса и оценке результатов их клинико-лабораторного исследования [40].

Поскольку в последние годы повсеместно отмечается тенденция увеличения ассоциированных инфекций, вызванных представителями бактерий семейства Enterobacteriaceae, в частности бактериями рода Serratia spp. и Staphylococcus aureus, проведение комплексных исследований, направленных на выявление факторов патогенности, определяющих патогенный потенциал каждого из ассоциантов, выделенных при инфекционных процессах различной локализации является весьма актуальным.

Цель исследования

Изучение на модели экспериментальной моно- и ассоциированной инфекции некоторых биологических свойств бактерий рода Serratia spp. и Staphylococcus aureus, выделенных при инфекционных процессах различной локализации.

Задачи исследования

1. Выделить от больных, страдающих гнойно-воспалительными, кишечными и урологическими инфекциями и от здоровых людей штаммы бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus и провести изучение их культуральных, морфологических свойств и ультраструктуры, сравнительно с их сокультивируемыми вариациями Serratia spp. + Staphylococcus aureus.

2. Провести изучение у монокультур бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus адгезивной, гемолитической (а-, тиолзависимой), антилизоцимной, антиинтерфероновой, антикомплементарной, лецитиназной, ДНК-азной протистоцидной активностей и JIT-энтеротоксигенности, сравнительно с их сокультивируемыми вариациями (Serratia spp. + Staphylococcus aureus).

3. На различных биологических моделях экспериментальной инфекции провести сравнительное изучение некоторых биологических свойств монокультур бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus и их совместно сокультивируемых вариаций.

4. Изучить спектр антибиотикоустойчивости монокультур бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus и их совместно сокультивируемых вариаций Serratia spp. + Staphylococcus aureus к широко применяемым в практике антибиотикам и провести подбор эффективных антибактериальных соединений среди производных азотсодержащих гетероциклов.

5. Дать сравнительную характеристику профиля плазмидной ДНК монокультур бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus и их совместно сокультивируемых вариаций Serratia spp. + Staphylococcus aureus.

Научная новизна исследований

С помощью электронного микроскопа описаны морфологические особенности взаимоотношений между бактериальными клетками монокультур бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus и у их совместно сокультивируемых вариаций Serratia spp. + Staphylococcus aureus.

Отработаны наиболее оптимальные подходы для оценки этиологической значимости условно-патогенной грамотрицательной и грамположительной бактериальной флоры в ассоциированной инфекции.

Проведена и представлена сравнительная характеристика данных об адгезивной, гемолитической, ДНК-азной, антилизоцимной, антиинтерфероновой, антикомплементарной, лецитиназной активностей и JIT-энтеротоксигенности у моно- и совместно сокультивируемых вариаций бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus.

Сокультивируемые вариации штаммов бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus чаще, чем их монокультуры обладают способностью синтезировать высокоактивный термолабильный энтеротоксин, а- и тиолзависимые гемолизины, лецитиназу, ДНК-азу, способны к адгезии, что подтверждает их этиологическую роль при инфекционных процессах различной локализации.

Определено расширение спектра антибиотикоустойчивости у сокультивируемых вариаций штаммов бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus, чем их монокультур.

Найдены эффективные антибактериальные соединения среди производных азотсодержащих гетероциклов к монокультурам и сокультивируемым вариациям бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus.

В процессе работы, от онкологических и урологических больных, страдающих инфекционными осложнениями в ассоциации с бактериями рода Serratia и Staphylococcus aureus были выделены два штамма E.coli, обладающие комплексом факторов патогенности, которые депонированы в ГНИИСК имени J1.A. Тарасевича и запатентованы (Escherichia coli ГНИИСК №280, патент №2203765; Escherichia coli ГНИИСК №281, патент №2293764 от 26.01.2006).

Практическая значимость

Данные о повышении у совместно сокультивируемых вариаций (Serratia spp. + Staphylococcus aureus) адгезивной, лецитиназной, гемолитической (а- и тиолзависимой), ДНК-азной, антилизоцимной, антиинтерфероновой, антикомплементарной активностей, JIT-энтеротоксигенности, вирулентных свойств (протистоцидный тест, интраназальное заражение и отек лап мышей, кожно-некротическая проба, петля тонкого кишечника кролика), чем у их монокультур, расширяет представление о роли ассоциаций этих бактерий в этиологии инфекционных заболеваний человека и позволяет провести профилактику неблагоприятного течения инфекций и провести правильный подбор антимикробных препаратов.

Штаммы бактерий рода Escherichia депонированы в ГНИИСК имени Л.А. Тарасевича под № 280, 281 и запатентованы (Escherichia coli ГНИИСК №280, патент №2203765; Escherichia coli ГНИИСК №281, патент №2293764 от 26.01.2006), могут быть использованы как эталонные при идентификации бактерий рода Escherichia, а также при производстве биопрепаратов.

Основные положения, выносимые на защиту

1. У совместно сокультивируемых вариаций бактерий рода Serratia + Staphylococcus aureus более выражены адгезивная, гемолитическая (а- и тиолзависимый), ДНК-азная, лецитиназная, антилизоцимная, антиинтерфероновая, антикомплементарная активности и ЛТ-энтеротоксигенность, чем у их монокультур.

2. При сравнительном изучении некоторых биологических свойств монокультур бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus и их совместно сокультивируемых вариаций было выявлено, что при совместном сокультивировании бактерий проявляется более выраженная экспрессия факторов патогенности и персистенции, чем у монокультур.

3. При совместном сокультивировании бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus происходит расширение спектра лекарственной устойчивости к широко применяемым в практике антибиотикам и производным азотсодержащих гетероциклов.

Апробация работы

Результаты работы были представлены на научных конференциях молодых ученых Республики Башкортостан «Медицинская наука» 20042006гг; на Всероссийской научной конференции с международным участием, посвященной 100-летию со дня основания филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ и CP РФ (Уфа, 2005); на X международной научной конференции «Здоровье семьи-XXI век» (Бангкок-Паттайя, Тайланд, 2006); на I международной (X всероссийской) пироговской студенческой научно-медицинской конференции; на Всероссийской научной конференции «Вопросы морфологии», посвященной профессору С.З. Лукманову (Москва

Берлин) (2006).

Внедрение результатов исследования в практику

Результаты исследования, освещающие биологические свойства монокультур бактерий рода Serratia spp. и Staphylococcus aureus и их сокультивируемых вариаций внедрены в практические и лекционные курсы кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Башкирского государственного медицинского университета и в бактериологическую лабораторию Республиканской клинической больницы им. Г.Г. Куватова.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, из них 2 в центральной печати.

Объем и структура диссертации

Текст диссертации изложен на 155 страницах компьютерного текста, содержит введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, 6 глав собственных исследований, заключение, выводы, практические рекомендации, список литературы, который включает 102 отечественных и 91 зарубежный источник. Иллюстрации представлены 24 рисунками и 15 таблицами.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Мамбетова, Эльмира Факиловна

выводы

1. Электронно-микроскопическое исследование структур колоний штаммов бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus, выделенных от больных показало, что клетки совместно сокультивируемых вариаций бактерий рода Serratia в большом количестве (более 15) плотно прилипают к эритроцитам цыпленка, тогда как количество прилипающих клеток у монокультур, составляло не более 10 на единичный эритроцит.

2. Штаммы бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus, выделенные от больных страдающих инфекционными процессами различной локализации, при совместном сокультивировании чаще проявляли высокую адгезивную, гемолитическую (а-, тиолзависимой гемолизин), антилизоцимную, атиинтерфероновую, антикомплементарную, лецитиназную, ДНК-азную активности и LT-энтеротоксигенность, чем их монокультуры.

3. Бактерии рода Serratia spp. и Staphylococcus aureus способны вызывать положительную кожно-некротическую пробу, отек лап, накопление жидкости в петле тонкого кишечника кролика, гибель интраназально зараженных мышей и инфузорий туфелек, которые значительно ярче проявляются у совместно сокультивируемых вариаций.

4. Изучение антибиотикограммы штаммов бактерий рода Serratia spp. и Staphylococcus aureus показало, что у сокультивируемых вариаций этих микроорганизмов обладают множественной антибиотикоустойчивостью к широко применяемым в медицинской практике антибиотикам и обладают чувствительностью к вновь синтезированным производным азотсодержащих гетероциклов, в частности бензимидазолу и ксантину.

5. Результаты ПЦР реакции Serratia spp. с праймерами Staphylococcus aureus указывают на филогенетическое сходство структур изучаемых бактерий, кодирующих продукцию JIT-энтеротоксина.

Практические рекомендации

1. Полученные результаты сравнительной характеристики адгезивной, гемолитической (а-, тиолзависимый), ДНК-азной, лецитиназной, антилизоцимной, антиинтерфероновой, антикомплементарной активностей, JIT-энтеротоксигенности, а также вирулентных свойств (протистоцидный тест, интраназальное заражение мышей, отек лап мышей, кожно-некротической пробы, петля тонкого кишечника кролика) монокультур бактерий рода Serratia spp. и Staphylococcus aureus и их совместно сокультивируемых вариаций'Serratia spp. + Staphylococcus aureus, расширяет представление о роли ассоциации этих бактерий в патогенезе заболеваний, вызванных условно-патогенными бактериями, что позволяет отнести их к этиологически значимым и соответственно провести профилактику неблагоприятного течения заболеваний и подбор антибактериальных препаратов для лечения инфекционных процессов, вызванных ассоциациями этих бактерий.

2. Штаммы Escherichia coli ГИСК Ma 280, 281 рекомендуется использовать в качестве эталонных культур при идентификации и изучении биологических свойств бактерий рода Escherichia, а также при производстве биопрепаратов.

135

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мамбетова, Эльмира Факиловна, Челябинск

1. Акатов А.К. Стафилококки / А.К. Акатов, B.C. Зуева.-М.:Медицина.-1983.-256с.

2. Андреева И.Н. Влияние условий культивирования на рост и пигментацию Serratia marcescens / И.Н.Андреева, Т.И. Огородникова // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1999. - №3.- С. 16-20.

3. Азнабаев Г.К. Биологические свойства бактерий рода Citrobacter, выделенных при моно- и ассоциированных бактериальных инфекциях: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Оренбург, 2003.

4. Ахтариева А.А. Некоторые биологические свойства бактерий рода Enterobacter, выделенных при различных инфекционных процессах: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Уфа, 2000.

5. Ашмарин И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев. Л.: Медицина, -1962.179 с.

6. Балякина Е.В. Роль а-гемолизирующего токсина Staphylococcus aureus в патогенезе инфекционного эндокардита (исследование in vitro). / Е.В.Балякина, Е.В.Герасимовская, Ю.А.Романов, Ш.Э.Атаханов // Тер. архив.-1999.-№12.-С.28-31.

7. Вельский В.В. Взаимное влияние возбудителей при смешанной инфекции ожоговой травмы / В.В.Бельский, Е.В.Шаталова // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.- 1999. -№ А.-С.Ъ—Л.

8. Бондаренко В.М. Клонирование и экспрессия генов у мол очно-кислых бактерий / В.М. Бондаренко, В.А. Белявская// Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-2000.-№2.-С.67-73.

9. Бондаренко В.М. Гемолизины энтеробактерий и их связь с вирулентностью возбудителя / В.М. Бондаренко, А.В. Голубева // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1988. -№11.-С. 102-109.

10. Бондаренко В.М. Клеточный и молекулярный уровни взаимодействия паразита и хозяина /В.М. Бондаренко, Ю.Е.Полоцкий //Эпидемический процесс как социально-экологическая система /М.,1986.-С.138-150.

11. Бондаренко В.М. Общий анализ представлений о патогенных и условно-патогенных бактериях / В.М. Бондаренко // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1997. - С.20-25.

12. Бондаренко В.М. Термостабильные энтеротоксины условно-патогенных представителей Enterobacteriaceae / В.М.Бондаренко, А.Р. Мавзютов, З.Г. Габидуллин //Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. -1998.-№3.-С. 104-107.

13. Бондаренко В.М. Факторы патогенности бактерий и их роль в развитии инфекционного процесса. / В.М. Бондаренко // Журн. микробиологии,Iэпидемиологии и иммунологии.-1999.-№5.-С.34-39.

14. Бондаренко В.М. Энтеротоксигенная способность штаммов родов Klebsiella и Enterobacter, выделенных при острых кишечных заболеванияху детей / В.М. Бондаренко // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-1999.-№5.-С.34-39.

15. Брилис В.И. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов / В.И. Брилис, Т.А. Брилене, Х.П. Ленцнер, А.А. Ленцнер // Лаб. дело.-1986, №4.-С.210-212.

16. Брудастов Ю.А. Антикомплементарная активность / Ю.А. Брудастов, А.В. Валышев, А.Н. Брудастов // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-1996.-№3 .-С .91 -93.

17. Булгаков А.К. Факторы вирулентности и лекарственной устойчивости некоторых представителей семейства Enterobacteriaceae их чувствительность к новому ряду азот содержащих гетероциклов: Автореф. дис. д-ра мед. наук. Челябинск, 2000.

18. Бухарин О.В. Антилизоцимный тест как маркер персистенции микроорганизмов / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов // Теоретическая и прикладная иммунология: Тез.докл.1 всесоюзн. конф./М.,1982.-С.34-58.

19. Бухарин О.В. Биология патогенных кокков / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов, О.Л. Карташова. -М.:Медицина, Екатеринбург: УрО РАН, 2002.-281 с.

20. Бухарин О.В. Бактерионосительство / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов.-Екатеринбург:Уро РАН, 1996.-С. 78-89.

21. Бухарин О.В. Изучение антикомплементарной активности стафилококков / О.В. Бухарин, Ю.А. Брудастов, Д.Т. Дерябин // Журн. клин. лаб. диагн.-1992.-№11.-С.68-70.

22. Бухарин О.В. Способность стафилококков к инактивации карнозина / О.В.Бухарин, О.Л.Чернова, С.Б.Матюшина // Бюл. эксперим. биол. и медицины.-1999.-№5.-С.545-546.

23. Бухарин О.В. Метод определения антилизоцимной активности микроорганизмов / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов, А.П. Малышкин, Н.В. Намуева // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-1984.-№2.-С.27-28.

24. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий / О.В. Бухарин. -М., 1999.-366 с.

25. Бухарин О.В. Питательная среда для выделения стафилококков с персистентными характеристиками./ О.В.Бухарин, С.Б.Матюшина, O.JI. Чернова // Журн. клин. лаб. диагн. 1999.-№8. - С.35-36.

26. Бухарин О.В. Факторы персистенции стафилококков в прогнозировании течения гнойно-воспалительных заболеваний // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-1998.-№5.-С.27-30.

27. Бухарин О.В. Экологическая детерминированность внутривидового разнообразия патогенных бактерий /О.В.Бухарин, В.А.Гриценко // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-2000.-№1.- С. 103-105.

28. Валышев А.В. Факторы персистенции энтеробактерий фекальной флоры при дисбактериозе кишечника. / А.В.Валышев, В.Г.Гильмутдинова, С.В Фомичева.// Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-1996.-№3.-С.96-98.

29. Вартанян Ю.П. Отек лап белых мышей тест для оценки активности энтеротоксинов Escherihia coli / Ю.П.Вартанян, М.К.Северцева, О.И. Введенская, Е.С.Станиславский. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1978.-№2.-С.150-152.

30. Вертиев Ю.В. Бактериальные токсины: биологическая сущность и происхождение / Ю.В .Вертиев// Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-1996.-№3 .-С.96-98.

31. Войно-Ясенецкая М.К. Опыт изучения дизентерийной инфекции и устойчивость лабораторных животных. / М.К. Войно-Ясенецкая // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1957. - №4.-С.65-69.

32. Воеводин Д.А. Роль дисбактериоза в формировании хронической неинфекционной патологии у детей. / Д.А. Воеводин, М.К. Северцева, О.И.Веденская и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-2001.-№6.-С.88-93.

33. Воробьев А.А. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции. / А.А.Воробьев, Е.А.Лыкова // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-1999.-№6.-С.102-105.

34. Габидуллин З.Г. Биологическая характеристика штаммов Proteus, выделенных при инфекционных процессах различной локализации: Автореф. дис. . д-ра мед.наук.-Саратов, 1990.-46с.

35. Габидуллин Ю.З. Сравнительная характеристика некоторых биологических свойств монокультур и сокультивируемых вариаций бактерий родов Enterobacter, Citrobacter, Serratia: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Уфа, 2006.

36. Галикеев Х.Л. Изучение вирулентности дизентерийных бактерий с использованием инфузорий-туфелек / Х.Л. Галикеев, Н.И. Потатуркина-Нестерова // Здравоохр. Казахстана.-1987.-№1.-С.34-36.

37. Гинцбург А.Л. Современное состояние и перспективы молекулярно-генетических методов в решении задач медицинской микробиологии / А.Л. Гинцбург, Н.А. Зиангирова, Ю.М. Романова // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1999. - №5. - С. 22-26.

38. Грачев С.В. Современные аспекты патогенеза сепсиса / С.В. Грачев и др. // Тер. архив.-2003.-№11 .-С.84-89.

39. Грузина В.Д. Коммуникативные сигналы бактерий / В.Д. Грузина // Антибиотики и химиотерапия.-2003, 48(10).-С.32-29

40. Дерябин Д.Г. Стафилококки: экология и патогенность. Екатеринбург, Уро РАН, 2000.

41. Дикий В.Н. К вопросу о болезнетворных свойств протея / В.Н. Дикий // Кишечные инфекции. Киев.-1974.-№7.-С. 163-165.

42. Езепчук Ю.В. Патогенность как функция биомолекул. / Ю.В. Езепчук./ М.: Медицина, 1985. С. 145.

43. Колганов А.Н. Гены резистентности к аминогликозидным антибиотикам клинических штаммов Serratia marcescens и кодируемые ими ферменты / А.Н. Колганов, С.Б. Вакуленко // Журн. антибиотики и химиотерапия.-1992.-№11.-С.10-14.

44. Колкер И.И. Микробиология ран / И.И. Колкер, С.М.Вуаль// Раны и раневая инфекция / ред. М.И. Кузина, Б.М.Костиченск.-М.,1981.-С.187-214.

45. Леванова Л.А. Становление микрофлоры кишечника у детей первого года жизни. / Леванова Л.А., Алёшкин В.А., Воробьев А.А., Афанасьев С.С. и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.- 2001.-№4.-С.47-50.

46. Лыкова Е.А. Ассоциативная инфекция при острых бронхолегочных заболеваниях у детей. / Лыкова Е.А., Воробьев А.А., Боковой А.Г., Каражас Н.В., Евсеева Л.Ф. // Вестник РАМН .-2003.-№ 4. -С.50-53.

47. Мавзютов А.Р. «Острова» патогенности условно-патогенных энтеробактерий / А.Р. Мавзютов, С.В. Фиалкина, В.М. Бондаренко // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-2002.-№1.-С.84-90.

48. Маньковский А.В. К вопросу о токсигенности культурных фильтратов протея разного происхождения / А.В.Маньковский // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.- 1965.-T.XXVII Вып.4.-С.10-13.

49. Меньшиков Д.Д. Актуальные проблемы нозокомиальных инфекций и лекарственная устойчивость микроорганизмов. / Д.Д. Меньшиков Р.Х. Енилеев, Е.Г. Кумачева.- Минск.-1986.-С. 173-174.

50. Митрохин С.Д. Значение энтеробактерий в инфекционной патологии человека / С.Д.Митрохин // Инфекции и антимикробная терапия.-2005, том 7.-№2.

51. Митрохин С.Д. Факторы персистенции условно-патогенных микроорганизмов при дисбактериозе желудочно-кишечного тракта. / С.Д.Митрохин, В.И.Минаев, О.Н.Зайцева // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-1997.-№4.-С.84-87.

52. Мнацаканов С.Т D-Маннозорезистентная гемагглютинация у условно-патогенных энтеробактерий при диареях у детей./ С.Т.Мнацаканов, М.Е.Коцинян // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии,-1984.-№3.-С.46-48.

53. Науменко З.С. Динамика устойчивости к лекарственным препаратам S. aureus, выделенных от больных хроническим остеомиелитом. / З.С. Науменко, JI.B. Розова, Н.М Клюшкин // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-2003.-№2.-С.70-72.

54. Навроцкий В.А. Особенности клиники и лечения гнойно-септических заболеваний, осложненных дисбактериозом, у детей раннего возраста: Афтореф. дисс. . к.м.н. Киев.- 1986.- С.23.

55. Николаева И.В. Частота колонизации стафилококками кишечника у детей с явлениями дисбактериоза./ И.В.Николаева, В.М.Бондаренко, В.А.Анохин, О.П.Галеева // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-2000.-№ 1 .-С. 17-21.

56. Николаева И.В. Лекарственная устойчивость штаммов S.aureus, выделенных у детей с дисбактериозом кишечника. / И.В.Николаева, В.А.Анохин, В.М.Бондаренко, О.П. Галеева // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-2001.-№1.- С.9-13.

57. Олескин А.В. Колониальная организация и межклеточная коммуникация у микроорганизмов / А.В.Олескин, И.В.Ботвиненко, Е.А.Цавкелова // Вестник Моск. Ун-та. Серия Биология,—2000.-№4.-С. 10-14.

58. Определитель бактерий Берджи. Т.1: Пер. с англ./ Под ред. Дж.Хоулта и др.- М.: Мир, 1997.-432с.

59. Очилова Р.А. Биологические свойства штаммов K.pneumoniae и S.aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций, при дисбактериозах кишечника у детей с бронхолегочной патологией: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Оренбург, 2004.

60. Пархоменко Л.В. К характеристике гемолизинов / Л.В. Пархоменко, И.Б. Лукач, Д.Е. Дыховичная // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. -1986. -Т.48. -№6. -С. 24-29.

61. Петровская В.Г. Адгезины энтеротоксигенных кишечных палочек: роль в патогенезе диарей и генетический контроль. / В.Г.Петровская, В.М. Бондаренко// Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-1990.-№5.-С.110-116.

62. Петровская В.Г. Адгезины энтеротоксигенных кишечных палочек: роль в патогенезе диарей и генетический контроль./ Петровская В.Г., Бондаренко В.М. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1990.-№5.-С.110-116.

63. Петровская В.Г. Энтеротоксины энтеротоксигенных Escherihia coli: характеристика, механизм действия и генетический контроль / В.Г.

64. Петровская, В.М. Бондаренко // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. -1990. -№7. С. 92-98.

65. Подзолокова Н.М. Тяжелые бактериальные инфекции в акушерстве и гинекологии / Н.М.Подзолокова, Т.И.Никитина // Инфекции и антимикробная терапия.-2004, том 6.-№3.

66. Покровский В.И. Человек и микроорганизмы. Здоровье и болезнь. / В.И. Покровский // Вестник РАМН,- 2000.-№l 1.-С.З-6.

67. Поликарпов Н.А. Биологические свойства условно-патогенных микроорганизмов, выделенных от больных с острыми кишечными заболеваниями. / Поликарпов Н.А. // Воен.-мед.журнал.- 1991.№7.-С.19-23.

68. Приказ № 250 «Об унификации методов определения чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам». Утв. МЗ СССР1303.75.

69. Применение легочной модели метода интраназального заражения белых мышей возбудителями кишечных инфекций. / Методические рекомендации.// Л., 1977.

70. Прозоровский С.В. Эпидемиологический анализ и опыт профилактики внутрибольничных заболеваний новорожденных и родильниц / С.В.Прозоровский, Л.А.Генчиков.-М.,-1991.

71. Рищук С.В. Факторы персистенции сальмонелл при их внутриклеточном паразитировании: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Челябинск, 1993. 25с.

72. Савицкая К.И. Современные представления о роли и составе кишечной микрофлоры у здоровых взрослых людей. / К.И. Савицкая, А.А. Воробьев, Е.Ф. Швецова // Вестник РАМН.-2002.-№2.-С.50-52.

73. Саляхов Р.З. Характеристика некоторых биологических свойств бактерий рода Serratia, выделенных при инфекционных процессах различной локализации: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Оренбург, 2005.

74. Саркулова М.Н. Микробиологическая характеристика возбудителей внутрибольничной инфекции у урологических больных. / М.Н.Саркулова // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-2005.-№5.-С.101-103.

75. Сиволодский Е.П. Профили утилизации 20 аминокислот в качестве единственного источника азота и углерода у бактерий Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Esherichia. / Е.П.Сиволодский // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-2005.-№5.-С.11-14.

76. Соколов В.Ю. Антиинтерфероновая активность микроорганизмов / В.Ю. Соколов // Персистенция микроорганизмов Куйбышев.-1990.-С.83-93.

77. Сурикова Е.В. Факторы персистенции клебсиелл: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Челябинск, 1992.- 22с.

78. Стручков В.И., Гостищев В.К., Стручков Ю.В. Хирургическая инфекция / В.И.Стручков, В.К.Гостищев, Ю.В. Стручков. -М.,1991.

79. Туйгунов М.М. Иммунобиологические основы энтеротоксигенности бактерий рода Citrobacter в системе взаимодействия «патоген-хозяин». Автореф. дис. . д-ра мед.наук.- Челябинск, 2003.

80. Усвяцов Б.Я. Взаимодействие бактерий и эритроцитов / Б.Я.Усвяцов, Е.А.Ханина, О.В.Бухраин // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-2005.-№4 -С.89-95.

81. Усманова С.С, Биологические свойства бактериофагов Serratia marcescens и разработка научных основ технологии получения препарата бактериофагов: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Уфа, 1999.

82. Фадеев С.Б. Микробиологические особенности хирургической инфекции мягких тканей /С.Б.Фадеев, О.В.Бухарин // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. -1999.-№ 4.-С.11-147.

83. Филимонова М.Н. Изоформы нуклеазы Serratia marcescens. Роль ионов Mg2+ в механизме гидролиза / М.Н. Филимонова, В.П. Губская, И.А. Нуретдинов и др. // Журн. биохим.-1997.-№9.-С.1148-1154.

84. Флуер Ф.С. Распространение энтеротоксигенных штаммов S.aureus, выделенных при патологии беременных женщин. / Ф.С.Флуер, А.Ф.Шевелева, С.И.Текутьев // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. -2000.-№ 6.-С. 13-15.

85. Хмелевская Г.В. Факторы патогенности некоторых условно-патогенных бактерий, вызывающих диареи. / Г.В.Хмелевская, Л.В.Девтерова, Э.А.Яговкин, А.П.Шепелев, Л.Д.Мартыненко // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-1990.-№ 4.-С.97-101.

86. Хуснутдинова Л.М. Межбактериальные взаимодействия на слизистой оболочке миндалин человека: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Оренбург, 2004.

87. Чернова О.Л. Антилизоцимная активность стафилококков, выделенных при бактерионосительстве: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Челябинск, 1989.- 22с.

88. Чернова О.Л. и др. Роль факторов персистенции Staphylococcus epidermidis в инфекционном процессе // Журн. микробиол. -1997.-№4.-С.81-83.

89. Шевелева С.А. Энтеротоксинообразование представителей условно-патогенной микрофлоры кишечника как диагностический тест при дисбактериозах кишечника. / С.А.Шевелева, И.Б.Куваева, Ф.С.Флуер и др. // Вопр.питания.-2002.-№4.-С.23-26.

90. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и ее роль в поддержании здоровья человека / Б.А.Шендеров // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии.-1998, том 8.-№1.-С.61-65.

91. Шуркалин Б.К. Изучение эффективности различных препаратов при лечении больных с распространенным перитонитом / Б.К. Шуркалин, W Busch, А.Г. Кригер // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-1994.-№4.-С.28-3 2.

92. Яковлев С.В. Госпитальные инфекции, вызванные резистентными грамотрицательными микроорганизмами: клиническое значение и современные возможности терапии / С.В.Яковлев // Инфекции и антимикробная терапия.-2004, том 6.-№4

93. A genetic locus of enterocyte effacement conserved among diverse enterobacterial pathogens / Т.К. McDaniel, K.G. Jarvis., M.S. Donnenberg, J.B. Kaper // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1995. -Vol.92. -P.1664-8.

94. Aktories K. Rho proteins: targets for bacterial toxins / K.Aktories // Trends Microbiol. -1997. -Vol.5. -P.282-8.

95. Albers MJ. Colonization and infection by Serratia species in a paediatric surgical intensive care unit / MJ Albers; JW Mouton; D Tibboel // J Hosp Infect, 2001 May; Vol. 48 (1), pp. 7-12.

96. Albesa J. A tiol-activated hemolysin in gram-negative bacteria / J. Albesa, L.J. Barberis, M.C. Pajaro et al. // Can. J. Microbiol. -1985. -Vol.31. -P.297-300.

97. Aygün C. Serratia marcescens: an emerging microorganism in the neonatal intensive care unit / C. Aygün, S.Yigit; D.Gür; G. Erdem; O. Oran; G. Tekinalp; M. Yurdak&ouml // Turk J Pediatr, 2000 Jul-Sep; Vol. 42 (3), pp. 219-22.

98. Baraldes M. Meningitis due to Neisseria subflava: case report and review / M.Baraldes, P.Domingo, J.Barrio et al//Clin. Infect. Dis.-2000.-V.30.-N.-3.-P.615-617.

99. Baselga R. Staphylococcus aureus capsule and slime as virulence factors in ruminant mastitis / R.Baselga, I.Albizu, B.Amorena // Vet.Microbiol.-1994.-V.39.-N.3-4.-P. 195-204.

100. Beutin L. Enterohemolysin, a new type by some strains of enteropathogenic E.coli (EPEC) / L. Beutin, J. Prado, S. Zamerman et al. // Zbl. Bakteriol. Hyd.A.- 1988, A 267.-S. 576-588.

101. Bhakdi S. Staphylococcal alpha-toxin, streptolysin-0 and Escherichia coli hemolysin: prototypes of pore-forming bacterial cytolysins / S.Bhakdi, H. Bayley et al. // Arch. Microbiol. -1996. -Vol.165.-P.73-9.

102. Bogaert M.A. Serratia fonticola isolated from a leg abscess / M Gainnier; JM Sainty; P Orhesser; P De Micco // J Clin Microbiol, 1991 Apr; Vol.29 (4), pp. 834-5.

103. Bornstein PF. Serratia marcescens cellulites in a patient on hemodialysis / PF Bornstein; AM Ditto; GA Noskin //Am J Nephrol, 1992; Vol. 12 (5), pp.374-6.

104. Braun V. Activation and secretion of Serratia hemolysin / V Braun; R Ondraczek; S Hobbie // Zentralbl Bakteriol, 1993 Apr; Vol.278 (2-3), pp.30615.

105. Brubaker R.R. Mechanism of bacterial virulence / RR Brubaker // Ann. Rev. Microbiol. -2000.-P.153-165.

106. Brumfitt W. Evidence for an schowing in trimethoprim resistance during 1981 a comparison with earlier years / W.Brumfitt, M.T.Ramilton-Wilier, A.Wood// J. Antimicrob. Chemother. -1983. -Vol.l 1. -P.503-9.

107. Brunder W. Genome plasticity in Enterobacteriaceae./ W. Brunder, H. Karch /Ant. J. Med. Microbiol.-2000.-Vol.290.-P. 153-165.

108. Carbonell GV. Virulence factors in Serratia marcescens: cell-bound hemolysin and aerobactin / GV Carbonell; MC Vidotto // Braz J Med Biol Res, 1992; Vol.25 (1), pp. 925-9.

109. Chen KH. Serratia marcescens corneal ulcer as a complication of orthokeratology / KH Chen; TM Kuang; WM Hsu // Am J Ophtalmol, 2001 Aug; Vol.l32 (2), pp.257-8.

110. Corbella X. Staphylococcus aureus nasal carriage as marker for subseguent staphyloccal infections in intensive care unit patients. / X. Corbella., M.A. Dominguez., M. Pujol et al. // Eur. J. Clin. Microbiol. Infekt. Dis.-1997.-Vol.l6,№5.-P.351-357.

111. Coria-Jiménez VR. Partial characterization of Serratia marcescens nosocomial strains / VR Coria-Jiménez; L Villa-Tanaka; С Ortíz-Torres // Arch Invest Med (Мех), 1991 Jul-Dec; Vol.22 (3-4), pp.273-8.

112. Cullmann W. Comparative evaluation of orally active antibiotics against community-acquired pathogens: a multi-center study in five Mediterranean countries / W.Cullmann // J. Chemother. -1995. -Vol.7. -P.21-5.

113. Dauga C. Nucleotide sequences of 16S rRNA from ten Serratia species / С Dauga; F Grimont; PA Grimont // Res Microbiol, 1990 Nov-Dec; Vol.141 (9), pp. 1139-49.

114. De la Cruz F. Hemolysis determinant common to Escherichia coli hemolytic plasmids of different incompatibility groups / De la Cruz F., Muller D., Ortiz J.M. // J. of Bacteriology. -1980. -v. 143. -№2. -P. 825-833.86

115. De Rycke J. Evidence for two types of cytotoxic necrotizing factor in human and clinical isolates of Escherichi coli / J De Rycke, EA Gonzalez, J Blanco et al. // J.Clin. Microbiol.-1990, 28.-P.694-699.

116. DeOreo PB. Serratia liquefaciens infections at a hemodialysis center / PB DeOreo; AS Kliger // N Engl J Med, 2001 Sep 20; Vol. 345 (12), pp.921.

117. Dom&iacte;nguez A. Nosocomial bacteremia caused by Serratia marcescens: analysis of 44 cases / A Dom&iacte;nguez; Ж Arribas; MD Folgueira // Enfem Infecc Microbiol Clin, 1990 Nov; Vol. 8 (9), pp. 553-9.

118. Duqued JP. Adhesive properties in Enterobacteriaceae / JP Duqued, DC Old // In Bacteriae Adherence, series 13.Vol.6. 1980, reseptors and recognisation ED.-Beachey E.H. 1980.-P. 185-217.

119. Ena J. Ciprofloxacin as an effective antibacterial agent in Serratia endocarditis / J Ena; С Ambador; F Parras; E Bousa // J Infect, 1991 Jan; Vol.22 (1), pp.259-68.

120. Espersen F. Identifying the patient risk for Staphylacoccus aureus bloodstream infections./ F. Espersen//J. Chemother.-1995.-№7.-P.l 1-17.

121. Esselman MT. Lecitinase production by gram-negative bacteria / MT Esselman, PV Liu // J. of Bacteriology.-1961.-81.-№6.-P.939-945.

122. Ferrari A. Human gastrointestinal tract and methanogenic bacteria. / A Ferrari, T Bursa, A Rutili, E Canzi // Microecol. Therapy.-1995.-Vol.25., P.275-289.

123. FimH adhesin of type 1 pili is assembled into a fibrillar tip structure in the Enterobacteriaceae / C.H.Jones, J.S.Pinkner, R. Roth et al. // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. -1995. -Vol.92. -P.2081-5.

124. Finlay B.D. Common themes in microbial pathogenicity revisited. Microbiol. / Finlay B.D., FalkoW S. // Mol. Biol. Rev.-1997.-Vol 61.-P.136-169.

125. Fleming A. Observations on a bacteriolytic substance ("Lysozyme") bound in secretions and tissues. Brit. / A.Fleming, V.D.Allison // J.Bacteriol.-1974.-Vol.120, №2.-P.252-260.

126. Fluit A.C. Molecular detection of antimicrobial resistance / A.C. Fluit, R. V. Maarten, F. J. Schmitz // Clin. Microbiol. Rev. 2001. -№4 - Vol: 14. - P. 836-871.

127. Garriguens N. Dissemination of antibiotic resistance genes in the digestive microflora. / Garriguens N., Wittmer A., Duval-Iflah Y. // Abstr. 21 Intern. Congress Microb. Ecol. Disease. Paris, 28-30 October 1996. P. 165-171.

128. Gilbert D.N. The Sanford Guide to Antimicrobial Therapy. / Gilbert D.N., Moellering R.C., Sande M.A. //31st ed. 2001. - 142p.l62.

129. Greenberg E. Quorum-sensing by bacteria / E. Greenberg, S. Winans, C. Fuqua//Ann Rev Microbiol.-1996.-Vol.50.-P.727-751.

130. Hacker J. Pathogenicity islands of virulent bacteria: structure, function, and impact on microbial evolution / J Hacker, G Oehler-Blum, I Muhlodorfer, H Tschape //Mol. Microbiol.- 1997, 23.- P. 1089-1097.

131. Hayley J. N. Contribution of long polar fimbriae to the virulence of rabbit-specific enteropathogenic Escherichia coli / J. N. Hayley, J. Sloan , V. Bennett

132. Wood, L. M. Adams, R. M. Robins-Browne, E. L. Hartland // Infection and immunity.- 2004.-Vol. 72.-P. 1230-1239.

133. Harrington DJ. Bacterial collagenases and collagen-degrading enzymes and their potential role in human disease / DJ.Harrington // Infect. Immun. -1996. -Vol.64.-P.l885-91.

134. Hogevick H. Virulence factors of Staphylococcus aureus strains causing infective endocarditis a comparasion with strains from skin infections. / H.Hogevick, B.Soderquist, H.S.Tung et al. // Ampis.-1998.-Vol.l06(9).-901-908.

135. Jeffries C.D. Rapid metod for determining the activity of microorganisms on nuclear acids. / Jeffries C.D., Holtman D.F., Gus D.G. // J.of Bacteriology-1957.-V.73.N.4-P.590-591.

136. Kado C.T. Rapid procedure for detection, and isolation of large and small plasmids / C.T.Kado, S.T.Liu // J.Bacteriol. -1981. -Vol.145. -P.1365-73.

137. Kato A. Spontaneous bacterial peritonitis in an abult patient with nephrotic syndrome / A.Kato, T.Ohtake, R.Furua et al. // Intern.Med. -1993. -Vol.32. -P.719-721.

138. Klose K.E. The suckling mouse model of cholera / K.E. Klose // Trends Microbiol. -2000. -Vol.8. -P. 189-91.

139. Kluytmans J. Nasal carriage of Staphylococcus aureus: epidemiology mechanisms and associated risks. / J.Kluytmans, A.van Belcum, H.Verbrugt // Clin. Microbiol. Rev.-1997.-Vol.10, №3.-P.505-520.

140. Kluytmans J. Food-initiated outbreak of methicillin-resistant Staphylococcus aureus analyzed by phenol and genotyping. / J.Kluytmans, W.Van-Leeuwen, W.Goessens et al. // J.Clin. Microbiol.-1995.-Vol.33(5).-P.l 121-1128.

141. Lautenschlager S. Course and outcome of bacteremia due to Staphylococcus aureus: evaluation of different clinical case definitions. / S.Lautenschlager, C.Hersog, W.Zimmerh // Clin Infect Dis.-1993.-№16.-P.567-573.

142. Leelarasamee A. Antimicrobial resistance of 100 serial gram negative isolates in two intensive care units./ A.Leelarasamee, K.Jenyapoon //J. Med.Assos. Thai.-1992.-Vol.75.-N. 12.-P. 680-687.

143. Lesseva M.I. Analysis of bacteriuria in patients with burns / M.I.Lesseva, O.G.Hadjiski //Burns. -1995. -Vol.21. -P.3-6.

144. Llanes C. Stability of conjugative and non-conjugative R-plasmids from Serratia marcescens to gyrase inhibitors / С Llanes; Y Michel-Briand; M Thouverez; С Bailly; F Grimont // Microbiologica, 1990 Apr; Vol. 13 (2), pp. 157-159.

145. Leung D.Y. Toxic shock syndrome toxin-secreting Staphylococcus aureus in Kawasaki syndrome. / D.Y.Leung, H.C.Meissner, D.R.Fulton et al. // Lancet.1993.-Vol.342.-P. 1385-1388.

146. Martin M. Exotoxins of Staphylococcus aureus. / M.Martin, P.M.Dingers et al. // Clin. Microbiol Rev.-2000.-Vol.l3(l).-P.16-34.

147. Martin M.A. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus the persistent resistant nosocomial pathogen./ M.A.Martin // Curr.Clin. Top. Infect.Dis.1994.-Vol. 14.-P. 170-191.

148. Mann E.A. Comparison of receptor for Escherichia coli heat-stable enterotoxin: novel receptor present in IEC-6 cells / E.A.Mann, M.B.Conen, R.A. Gianella // Am. J. Physiol. -1993. -Vol.264. -P.G172-G178.

149. Matsui S. Clinical bacteriology and empiric therapy for hospital-acquired pneumonia in the elderly at a national leprosarium / S.Matsui, T.Nakasawa // Nippon. Kyobu. Shikkan. Gakkai. Zasshi. -1994. -Vol.32. -P.851-5.

150. Meyer К. On the mechanism of lysozyme action. / K.Meyer, J.W.Palmer, R.Tompson, D.Khoraso // J. Biol. Chem.-1936.-Vol.l 13, №2.-P.479-486.

151. Molecular cloning of an E.coli plasmid determinant that encodes to the production of heat-stable enterotoxin / M. So, H.W. Royer, M. Bellach, S. Falkow // J. Bacteriol. -1976. -Vol.128. -P.463-72.

152. Molecular localization of the Escherichia coli cytotoxic necrotizing factor CNFI cell-binding and catalytic domains / E.Lemichez, G.Flatau, M.Bruzzone et al. // Mol. Microbiol. -1997. -Vol.24. -P. 1061-70.

153. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing, NCCLS Ninth Informational Supplement. M I00.-1998.-Vol.-91,N1.-S8.

154. Neu H.C. Infection problems for the 1990s-do we have an answer. // Scand. J. Infect. Dis. Supp.-1993.-Vol.91.-P.7-13.

155. Obana Y. Adherence of Serratia marcescens in the pathogenesis of urinary tract infections in diabetic mice / Y. Obana, K, Shibata, T.Nishino // J. Med. Microbiol, 1991 Aug, Vol.35 (2), pp.93-7.

156. Old D.C. A new mannose-resistant haemagglutinin in Klebsiella / D.C.Old, R.A.Adegbola // J. Appl. Bacteriol. -1983. -Vol.55. -P.165-72.

157. Omori K. Analysis of the Serratia marcescens proBA operon and feedback control of praline biosynthesis / K.Omori, S.Suzuki, Y.Imai, S.Komatsubara // J. Gen. Microbiol.-1991 Mar.-Vol.l37(Pt 3).-P.509-517.

158. Rusch V.C. Das Konzept Symbiose: Eine Ubersicht uber die Terminilogie zur Beschreibung von Lebensgemeinschaften ungleichnamiger Organismen. / V.C.Rusch//Microecol. Therapy. 1989.-Vol. 19.-P.542-549.

159. Ruan Y. Hemolysin as a marker for Serratia / Y. Ruan, V. Braun // Arch. Microbiol. -1990. -Vol.154. -P.221-5.

160. Sears C.L. Enteric bacterial toxins: mechanisms of action and linkage to interstinal secretion / C.L.Sears, J.B.Kaper // Microbiol. Reviews. -1996. -Vol.60.-P. 167-215.

161. Schaefer F. Bacterial keratitis: a prospective clinical and microbiological study / F. Schaefer; O. Bruttin; L. Zografos; Y. Guex-Crosier // Br. J. Ophthalmol, 2001 Jul; Vol. 85 (7), pp. 842-7.

162. Sears C.L. Enteric bacterial toxins: mechanisms of action and linkage to interstinal secretion / C.L.Sears, J.B.Kaper // Microbiol. Reviews. -1996. -Vol.60.-P. 167-215.

163. Shapiro J.A. Pattern and control in bacterial colonies / J.A. Shapiro // Sci. Progr. -1994. -Vol.76. -P.399-424.

164. Shiga toxin: biochemistry, genetics, mode of action, and role in pathogenesis / A.D. O'Brien, V.L.Tesh, A.Donohue- Rolfe et al. Pathogenesis of shigellosis // Eds. P.J.Sansonetti. -180th ed. -Berlin-Heidelberg: Springer-Verlag, 1992. -P.66-94.

165. Shoddy A. Polymicrobial gramnegative bacteremia associated with saline solution flush used with a needless intravenous system. / A.Shoddy, A.M.Pettis, D.Schoonmaker, M.A.Shelly //Am.J. Infect. Control. -1995. Vol. 19.-P.542-549.

166. Siam A.R. Staphylococcus aureus triggered reactive artritis. / A.R.Siam, M.Hammoudeh // Ann. Rheum. Dis.-1995.-Vol.54(2).-P.131-133.

167. Smith H.R. Mapping of a plasmid, coding for colonization factor antigen I and heat-stable enterotoxin production isolated from on enteritoxigenic strain of E.coli / H.R. Smith, G.A. Willchow, B. Rowl // J. Bacteriol. -1982. -Vol.149. -P.264-75.

168. Songer J.G. Bacterial phospholipases and their role in virulence / J.G.Songer // Trends Microbiol -1997. -Vol.5. -P.156-61.

169. Staphylococcal alpha-toxin, streptolysin-0 and Escherichia coli hemolysins: prototypes of pore-forming bacterial cytolysins / S.Bhakdi, H. Bayley et al. // Arch. Microbiol. -1996. -Vol.165.-P.73-9.

170. Strulens M.J. Modification of antibiotic policy associated with decrease in antibioticresistant gram-negative bacilli in ICU / Strulens M.J., Byl В., Govaerts D. et al. // 38-th ICAAC, San Diego, 1998. - Abstract 502.

171. Unhanand M. Gram-negative enteric bacillary meningitis: a twenty-one-year experience / M.Unhanand, M.M.Mustafa, G.H.McCracken, J.D.Nelson // J. Pediatr. -1993. -Vol.122. -P.15-21.

172. Vatopoulos A.C. Risk factors for nosocomial infections caused by gram-negative bacilli. The Hellenic Antibiotic Resistance Study Group / A.C. Vatopoulos, V.Kalapothaki, N.J.Legakis //J. Hosp. Infect. -1996. -Vol.34. -P. 11-22.

173. Vincent J.L. The prevalence of nosocomial infection in intersive care units in Europe / Vincent J.L., Bihari P.M., Suter P.M. et al. // JAMA. -1995. Vol. 274. - P.639 -644.

174. Welsch M. Le "lysozyme" des Staphylocoques. Compt. Rend. / M.Welsch // Soc. Biol.-1959.-Vol. 153 .-P.2080-2083.

175. Wenzel R. A Guide to Infection Control in the Hospital. / R.Wenzel, T.Brewer, J.P.ButzIer // An official publication of the International Society for Infectious Diseases. ВС Decker Inc Hamilton, London.-2002.-272p.

176. Zembrzuska-Sadkowska E. The danger of infections of the hospitalized patients with the microorganisms present in preparations and in the hospital environment / E.Zembrzuska-Sadkowska // Acta. Pol. Pharm. -1995. -Vol.52. -P.173-8.

177. Zinner S. Changing epidemiology of infections in patients with neutropenia and cancer:emphasis on grampositive and resistant bacteria //Clin. Infect. Dis.-1999.-V.29, N.3.-P.490-494.

Информация о работе

Мамбетова, Эльмира Факиловна
кандидата биологических наук
Челябинск, 2007
ВАК 03.00.07

Диссертация

Сравнительная характеристика некоторых биологических свойств монокультур и сокультивируемых вариаций бактерий рода Serratia и Staphylococcus aureus - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы