Особенности некоторых свойств, определяющих патогенный потенциал сокультивируемых вариаций бактерий Enterobacter, Citrobacter, Serratia, E.Coli, Proteus

Габидуллин, Юлай Зайнуллович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Особенности некоторых свойств, определяющих патогенный потенциал сокультивируемых вариаций бактерий Enterobacter, Citrobacter, Serratia, E.Coli, Proteus
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Особенности некоторых свойств, определяющих патогенный потенциал сокультивируемых вариаций бактерий Enterobacter, Citrobacter, Serratia, E.Coli, Proteus"

Габидуллин Юлай Зайнуллович

ОСОБЕННОСТИ НЕКОТОРЫХ СВОЙСТВ, ОПРЕДЕЛЯЮЩИХ ПАТОГЕННЫЙ ПОТЕНЦИАЛ СОКУЛЬТИВИРУЕМЫХ

ВАРИАЦИЙ

БАКТЕРИЙ ENTEROBACTER, CITROBACTER, SERRATIA, E.COLI, PROTEUS

03.02.03 - Микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Чеяябинск-2015

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии государственного бюджетного образовательного учереждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г.Уфа

Научный консультант:

член-корр. РАН, Заслуженный деятель науки РФ доктор медицинских наук.профессор Долгушин Илья Ильич

Официальные оппоненты:

Горовиц Эдуард Семенович доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А.Вагнера» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра микробиологии и вирусологии, заведующий

Жесткое Александр Викторович доктор медицинских наук, профессор. Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра общей и клинической микробиологии, иммунологии и аллергологии, заведующий

Чайиикова Ирина Николаевна доктор медицинских наук, профессор. Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской академии наук, лаборатория биомониторинга и молекулярно-генетических исследований, ведущий научный сотрудник

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Институт экологии и генетики микроорганизмов" Уральского отделения Российской академии наук.

Защита состоится «_»_2015 года в_часов на заседании

диссертационного совета Д 208.117.03 при Государственном бюджетном образовательном учереждении «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного бюджетного образовательного учережпения«Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации и на сайтеш\у\у.с11е15П]а. ш

Автореферат разослан «_» 2015 года

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

Ю.С. Шишкова

r.'ICC имсклм : ис'/длп; I ItL JМIАН г.мг.лио i г кл

Л) 10

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования и степень ее разработанности

В настоящее время одной из проблем, стоящих перед исследователями, является решение вопросов диагностики, снижение частоты заболеваний. выданных условно-патогенными знтеробактериямн. к которым относятся бактерии семейства Knterobucteriaceae. особенно их ассоциированные формы. Представители семейства P.nterobacteriaceac. обладая значительным арсеналом приспособительных механизмов, способностью менять свойства, продуцировать различные ферменты вирулентности. вызывают знтеральные и парентеральные инфекции, число которых нарастает in года в год Кроме того, условно-патогенные •»итеробактериив ассоциации срядом микроорганизмов являются возбудителями гнойно-септических процессов, которые нередко закапчиваются летально (Ьухарин О.В.Ассоциативный симбиоз / О.В.Ьухарин. Ь.С.Лобакова. Н.В. Немцева (и др | -1катерннбург:УрО РАМ. 2007. -264с ).

До настоящего времени роль различных форм ассоциации условно-патогенных знтсробактерий с измененными признаками их патогенное™ остается до конца не изученной. Не отработаны доступные подходы к определению этиологической значимости и\ абонированных форм в развитии инфекционных процессов (Howell-JonsR.S. clal.A review of the microbiology, antibiotic usage and rcsislanse in chronic skin wounds./llowell-.lonsR.S. ctal.//J.Anlimicrob.Cheniotcr.-2005.-Vol.55.P. 143-149). Поэтому с обшсбио.чогической точки зрения становится важным сравнительное изучение каждого иерархического уровня паразитарных отношений, обнаружение связи с морфологическими особенностями возбудителей, характеристикой их факторов патогепности. генетического контроля, картиной развития и проявлениями инфекционного процесса.

Цель исследования

Дать комплексную характеристику некоторым свойствам, определяющих патогенный

потенциал сокультнвируемых вариаций бакгерий Ivntcrobacter. Citrobacler.SerTatia. I ..coli.

Proteus.

Чадачн исследования

1. Выделить от больных, страдающих различными инфекциями, штаммы I nlcmhacter. Citrobacter. Serratia. Г.. coli. Proteus и провести изучение культуральных. морфологических свойств п ультрасгруктуры их сокудьтивируемых вариаций.

2. Дать сравнительную характеристику вирулентных свойств монокулыхр l.nterobacier. Citrobacter. Serratia, I. coli. 1'rotensn их сокультнвируемых вариаций на различных

биологических модсляхи провести поиск штаммов, обладающих комплексом факторов патогеиности.

3. Провести сравнительное (пучение спектра лекарственной устойчивости у монокультур Enterobacter, Citrobacter, Serratia. Е. coli. Proteus и их сок у л ь ги я мру см ы х вариаций к широко применяемым в практике антибиотикам.

4. У монокультур Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Е. coli, Proteusuv их сокультивируемых вариаций определить природу генетических детерминант, контролирующих факторы патогеиности и антибиотикорезнсгенгность.

5. Изучить механизмы действия монокультур бактерий Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Е. coli, Proteus и их сокультинируемых вариацийна функции фагоцитирующих клеток.

6. Сравнить влияние монокультур бактерий Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Е. coli, Proteus и их сокультивируемых вариаций на амоптоз перитонсальпых фагоцитов мышей.

Методология и методы исследования

Чистые культуры бактерий Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Е. coli, Proteus были предоставлены бактериологическими лабораториями Государственного бюджетного учреждения здравоохранения «Республиканская детская клиническая больница» и Государственного бюджетного учреждения здравоохранения «Республиканская клиническая больница им. Г.Г. Куватова» г.Уфы. Материалом для наших исследований послужили 265 штаммов условно-патогенных микроорганизмов, выделенных от 3658 больных страдающих различными инфекциями: по 50 штаммов бактерий Enterobacterspp., Citrobacterspp., Serratiaspp., E.coli, Proteusspp.. а также по 10 сокультивируемых вариаций Enterobacterspp.+Citrobacterspp. (Р.+С), Enterobacter spp.+Serratia spp. (L:.+S), Citrobacter spp.+Serratia spp. (C+S). Enterobacter spp.+E.coli (Ent+l:.coli). Citrobacter spp.+ Ii.coli (C+U.coli). Serratia spp.+F.coli (S+K.coli). Proteus+Enterobacter spp. spp.(Prot+l;), Proteus spp.+Citrobacter spp. (Prot+C), Proteus spp.+Serratia spp. (Prot+S), Proteus spp.+E.coli (Prot+h.coli). В качестве ладонных культур были использованы штаммы E.coli, обладающие комплексом факторов патогенноети, которые были нами депонированы в I осударствснном НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов имени JI.A. Гарасевича и запатентованы. Тестирование в жеиериментах при определении патогеиности, вирулентности, токсигенности и изучении функционального статуса перитонсальпых макрофатов проводили по обшенринятым методикам.

Степень достоверное! и, йнроГмння результатов, личное участие автора

Па основании проведенной проверки достоверности первичной документации (Приказ ректора Государственною бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образонаннн "Ьамжнрскнй государственный медицинский университет"

Министерства здравоохранения Российской Федерации № 390-а. от 08.11.2013). комиссия в составе председателя - Мурзабаева Х.Х.. д.м.н.. профессора, заведующего кафедрой гистологии, цитологии, эмбриологии: членов комиссии - Булгакова А.К., д.м.н.. профессора кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии: Лукмаиовой Г.И., д.м.н.. профессора кафедры обшей биологии (акт от 8.11.20)3 г.) подтвердило достоверность включенных материалов в диссертационную работу.

Оценка достоверности результатов исследования выявила, что результаты получены на сертифицированном оборудовании: выделенные культуры идентифицировали по биохимическим свойствам при использовании сред Гисса с помощью планшет IIБД') (Нижне-Новгородский НИИЭМ). «Энтеротест» фирмы «Lachema» (Чехия) и системы типа API фирмы «BioMeruiox»: изучение клеточной поверхности и особенностей морфологической структуры бактерий проводили с помощью оптического («Биолам». Россия) и электронного («JEM-100В». Япония) микроскопов, фотографирование результатов микробиологичских исследований проводили фотокамерой «Olimpus»: амплификацию участков ДНК проводили на термоцикле фирмы «Hybaid» и на четырехканальном термоциклсрс «Тсрцик» научно-производственной фирмы «ДНК-Технология» (Москва); продукты амплификации анализировали электрофоретически. с последующей визуализацией в УФ-свете на трансиллюмннаторс («VilberLourmat» ТСР-20М); компьютерный анализ электрофореграмм осуществляли при использовании пакета программ TotalLab from Phoretix (Великобритания). Оценку апоптоза эукариотических клеток проводили в проточном цитофлюоримстре (FL3. >600 им) по структурным изменениям ядерной дезоксирибомуклеиновой кислоты клеток, окрашенных йодистым пропидисм (PI). так же использовали камеру Горяева с использованием светового микроскопа «JENAMED 2» и люминесцентного микроскопа, применяя фильтры, обеспечивающие возбуждающий свет с длинной волны не более 490 нм и с эмиссией длинной волны 520 нм. Теория построена на известных, проверяемых фактах, согласуется с опубликованными в литературе данными. Полученные результаты не противоречат данным, представленным в независимых источниках по данной тематике. В работе использованы современные методики сбора и обработки исходной информации с использованием пакета прикладных компьютерных программ "Медико-биологическая статистика".

Результаты исследований были представлснына V ежегодном Всероссийском конгрессе по инфекционным болезням (Москва. 2013) и обсуждены на совместном заседании башкирского отделения Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. кафедр микробиологии, вирусологии и иммунологии, детских инфекционных болезней, общей гигиены с экологией с курсом гигиенических дисциплин.

детской хирургии, биологии, ортопедии и анестезиологии, факультетской хирургии с курсом колопроктодогин Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Башкирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации и с ведущими сотрудниками уфимского филиала "Иммуиопреиарат" ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ (Уфа. 2014).

Личный вклад соискателя состоит в непосредственном участии на всех ггапах диссертационного исследования.

Основная идея, планирование научной работы, включая формулировку рабочей г ипотезы, определение методологии и обшей концепции диссертационного исследования проводились совместно с научным консультантом. Заслуженным деятелем науки РФ. член-корр. РАМП, заведующий кафедрой микробиологии, вирусологии, иммунологии и клинической лабораторной диагностики Государственного бюджетного образовательного учреждения высшею профессионального образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России, д.м.н., профессором Долгушиным И.И.

Цель и задачи сформулированы совместно с научным консультантом. Дизайн исследования разработан лично диссертантом.

Анализ современной и зарубежной литературы по изучаемой проблеме и интерпретация результатов исследования проведены лично диссертантом. Лабораторные исследования осуществлялись лично диссертантом при участии сотрудников кафедр микробиологии, вирусологии и иммунологии, факультетской хирургии с курсом колопрокгологии. 11смгральной научной исследовательской лаборатории Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Башкирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации профессором Г абндуллиным З.Г.. профессором Туйгуновым М.М., профессором Булгаковым А.К., профессором Алсынбасвым М.М.. профессором Ахтариевой A.A.. профессором Суфияровым P.C.. профессором Тимербулаговым M.D.. профессором Медведевым К).А., доцентами Давлетшиной Т.К.. Савченко 'Г.А.. Саляховым Р.З.. ассистентами Гибазовым H.H.. Насыровой Р.Ф.. Туйгуновой В.Г'.. Изикаевым В.М.. д.м.н.. профессором института клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской академии наук Псруновой II.В.

Статистическая обработка первичных данных и анализ полученных результатов, написание и оформление рукописи диссертации, представление результатов работы в научных публикациях и в виде докладов на конференциях осуществлялись диссертантом самостоятельно.

Положения, выносимые на зяшиту:

1. У бактерий Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Е. coli, Proteus при совместном культивировании происходит изменение конструкции и архитектуры взаиморасположения клеток.

2. При совместном культивировании бактерий Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Е. coli, Proteus происходит взаимное индуцирование факторов вирулентности и псрсистенцин.

3. При совместном культивировании бактерий Enterobacter. Citrobacter, Serratia, Е. coli, Proteus происходит увеличение количества клонов, несущих внехромосомные генетические детерминанты. контролирующие продукцию факторов патогенности и антибиотикорезистентности.

4. При введении «»культивируемых вариаций бактерий Enterobacter.Citrobacter, Serratia. Е. coli, Proteus в организм экспериментальных животных по сравнению с их монокультурами происходит изменение показателей врожденного иммунитета организма хозяина.

Научная новизна

Впервые с помощью электронного микроскопа описаны морфологические особенности взаимоотношений между бактериальными клетками у монокультур Enterobacter, Citrobacter. Serratia, E.coli. Proteus и их сокультивируемых вариаций (Enterobacter+Citrobacter. Enterobacter+Serratia. Enterobacter+E.coli, Citrobacter+Serratia. Citrobacter+E.coli, Serratia+E.coli, Proteus+Enterobacter, Proteus+Citrobacter. Proteus+Serratia, Proteus+E.coli). Электронно-микроскопическое исследование показало, что в концентрических зонах колоний сокультивируемых бактерий обнаружены клетки, имеющие большое количество швермеров. которые образуются в зависимости от пульсации "биологических часов". При этом у сокультивируемых вариаций бактерий Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Е. coli. Proteus выявлены различные типы контактов: «конец в конец», «конец в бок», «бок в бок», плотное слипание, образование перемычек на уровне наружных мембран, количество которых превалирует у совместно культивируемых вариаций. При электронно-микроскопическом исследовании обнаружено, что клетки сокультивируемых вариаций с высокой адгезивной активностью в большом количестве (более IS) плотно прилипают к эритроцитам цыпленка, тогда как количество прилипающих клеток у монокультур составляло не более 10 на единичный эритроцит. In vitro и in vivo исследованы факторы патогенности бактерий Enterobacter. Citrobacter, Serratia, Е. coli, Proteus, выделенных при различных инфекциях. Дана сравнительная молекулярно-биологическая характеристика факторов патогенности монокультур и сокультивируемых вариаций бактерий Enterobacter, Citrobacter, Serratia, E.coli, Proteus в свете новых представлений о генетических основах

иатогешюсти микроорганизмов. Обнаружены гены. аналогичные «островкам патогенностн» E.coli. При этом были протестирован штамм E.coli ГИСК №280 (Патент № 2293765). выделенный в ассоциации с Serratia marcescens, обладающий комплексом факторов патогенностн. депонированный и запатентованный в Государственном ПИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов имени JI.A. Тарасовича, а также штамм E.coli ГИСК №281 (Патент № 2293764). выделенный в ассоциации с Serratia odorifera. Сравнительно охарактеризованы молекулярные механизмы патогенного действия монокультур и сокультивируемых вариаций бактерий Enterobacter. Citrobacter. Serratia, E.coli, Proteus на защитные механизмы хозяина. V сокультивируемых вариаций выявлен более выраженный эффект иммуномодулирующего действия на процсссинговую функцию перитонеальных макрофагов по сравнению с их монокультур. В патогенезе инфекционного процесса впервые изучено иммунокомпрометирующее влияние монокультур и сокультивируемых вариаций бактерий Enterobacter, Citrobacter, Serratia. Е. coli. Proteus на макрофаги и нейтрофилы. При сравнительном изучении состояния внутриклеточных механизмов микробоцидной активности перитонеальных фагоцитов пол влиянием монокультур и сокультивируемых вариаций энтеробактерий выявлено более выраженное действие сокультивируемых вариаций на ферменты гексо зомонофосфа i ного шуига фагоцитов, что характеризовалось резким повышением образования супероксидных анионов. Сравнительное изучение влияния монокультур и сокультивируемых вариаций энтеробактерий на феномен апоптоза клеток воспалительного перитонеатьно! о экссудата и спленоцитов хозяина показало повышение запрограммированной клеточной смерти популяции спленоцитов под влиянием сокультивируемых вариаций условпо-патогениых энтеробактерий.

Теоретическая и практическая значимость работы Экспериментальные данные патогенетических механизмов действия монокультур и сокультивируемых вариации бактерий Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Е. coli, Proteus позволяют расшифровывать многие стороны развития ассоциированных инфекционных процессов, вызванных условно-патогенными энтсробактсриями, а также сформировать теоретические предпосылки для разработки новых подходов лечения и профилактики ассоциированных инфекций. Выявлены наиболее уязвимые звенья иммунной системы, повреждение которых можно связать с локальными особенностями в цепи патогенеза ассоциированных инфекционных процессов хозяина. Механизмы действия представителей I рамогрицательных микроорганизмов в системе взаимодействия "'пагоген-хозянн" раскрывают особенности развития инфекционных процессов, обусловленных как моно-, так и ассоциированными условно-патогепными энтеробактериями. что дает предпосылки

этиологической значимости каждого из патогенов как при моно-. так и при ассоциированных инфекционных процессах. вызваемых вышеперечисленными энтеробактериями. Комплексное молекулярно-биологическое тестирование клинических штаммов позволило отобрать применимые в качестве тест-культур штаммы условно-патогенных энтеробактерий, обладающие комплексом факторов патогсниостн. которые могут быть использованы как эталонные при идентификации условно-патогенных микроорганизмов, а также при производстве биопрепаратов. Расшифрован механизм иммуномодулирующего действия некоторых факторов патогепности моно- и ассоциированных культур некоторых представителей условно-патогенных энтеробактерий на макрофагальные клетки перитонеального экссудата.

Внедрение результатов исследования в теоретическую и практическую медицину будет способствовать разработке оптимальных вариантов этиопатогенетического подхода лечения и профилактики инфекционных процессов, а также своевременной коррекции иммунологических нарушений, связанных с действием ассоциаций условно-патогенных энтеробактерий в целом.

Внедрение результатов исследования в практику Издано пособие для врачей-бактериологов и клинических лаборантов, Уфа-2009, учебное пособие для студентов: «Условно-патогенные грамогрипатсльпые и грамположительпые бактерии», Уфа-2013. Результаты исследования используются в бактериологических лабораториях Государственного бюджетного учреждения здравоохранения «Республиканская детская клиническая больница» и Государственного бюджетного учреждения здравоохранения «Республиканская клиническая больница им. Г.Г. Куватова» г.Уфы. Результаты исследования внедрены в учебный процесс на кафедрах микробиологии, вирусологии и иммунологии; детских инфекционных болезней: обшей гигиены с экологией с курсом гигиенических дисциплин: детской хирургии, ортопедии и анестезиологии; факультетской хирургии с курсом колопроктологни Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Башкирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Конкурсная поддержка исследовании По представленным результатам исследования в 2009 году присужден диплом правительства Республики Башкортостан молодых ученых и молодых научных коллективов на тему: «Комплексное изучение иммунобиологических свойств термолабмлмшго энтеротоксипа бактерий рода Enterobacter в системе взаимодействия «патоген-хозяин».

Публикации

Соискатель имеет 33 опубликованные работы, из них по геме диссертации опубликовано 22 научных работ общим объемом 13,35 печатных листов, в том числе 16 публикаций в научных журналах и изданиях, которые включены в перечень российских рецензируемых научных журналов и изданий для опубликования научных результатов диссертаций (12 статей, 2 патента РФ на изобретение, 2 тезиса) и опубликовано 3 статьи в научных журналах, зарегистрированных в базе РИНЦ. I работа представлена в материалах всероссийской конференции, I учебное пособие для врачей. 1 монография. Авторский вклад 80 %..

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 274 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 9 таблицами и 41 рисунком. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования. 6 глав собственных исследований, заключения, выводов и пракгических рекомендаций. Список литературы включает 427 источников, из них 287 отечественных и 140 зарубежных авторов.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Все выделенные культуры идентифицировали по биохимическим свойствам. Изучение подвижности проводили стандартымн методами «висячая капля» и «раздавленная капля». Дополнительно использовали столбики с полужидким агаром. Изучение клеточной поверхности и особенностей морфологической структуры моно- и сокультнвируемых фамозрицатсльных бактерий проводили с помощью оптического («Виолам», Россия) и электронного («JEM-I00B». Япония) микроскопов. Адгезивную активность микроорганизмов определяли в реакции гемагглютинации с эритроцитами птиц (Габиду.тлин З.Г. Биологическая характеристика штаммов бактерий рода Proteus, выделенных при инфекционных процессах различной локализации: автореф. дисс... д-ра мед.наук, Саратов. 1989. 45с.) и 1(0) гру ппы крови человека (Брилис В.И. Методика определения адгезивного процесса микроорганизмов / В.И. Брилис, Т.А. Ленциер. А.А.Ленцнер // Лаб. дело. 1986. №4.

C. 210-212). Продукцию а- и гиолзависимого гемолизина определяли по рекомендациям Габидуллина З.Г . (Габидуллин З.Г. Биологическая характеристика штаммов бактерий рода Proteus, выделенных при инфекционных процессах различной локализации: автореф. дисс... д-ра мед.маук, Саратов. 1989. 45с.) и Albesa J. et al. (Albesa J. Atiol-activated hemolysinin gramnegative bacteria / J. Albesa, L.J. Barberis, M.C. Pajaro // Can. J. Microbiol. l985.Vol.3I.P.297-300). ДНКаэную активность определяли по методу Jeffries C.D. (Jeffries C.D. Rapid metod for determining the activity of microorganisms on nuclear acids / Jeffries C.D., Holtman D.F.. Gas

D.G. // J. of Bacteriology. 1957.Vol.73.P.590-591 ^Определение лецитиназной активности проводили на желточном arape Чистовича Ю.Ы. (Справочник по микробиологическим и

вирусологическим методам исследования: руководство для врачей пол ред. М.О. Берге. Москва: 1982. 462с.), антилиэоцимную активность (АЛА) проводили по методу Бухарина О. В. и др. (Бухарин О.В. Метол определения антилизоцимной активности микроорганизмов / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов. А.П. Малышкин. Н.В. Немцева // Журнал микробиол.. эпидемиол. и иммунобиол. 1984. №2. С.27-28), антиинтерфероновую активность (АИА) - по методу Соколова В.Ю. (Персистенция микроорганизмов. Под ред. О.В. Бухарина. Куйбышев. I990.C.83-93), антикомплементарную активность (АКА) - по методу Бухарина О.В. (Бухарин О.В. Изучение антикомплементарной активности стафилококков / О.В.Бухарин. Ю.А. Брудастов. Д.Т.Дерябин//Клин.лаб.диагн.1992.№11.С.68-70.) изучение антибиотикорезистентности проводили по общепринятой методике с помощью стандартных дисков в соответствии с Инструкцией МЗ СССР от 1986 года, утвержденной Управлением по внедрению новых лекарственных средств и медицинской техники (Лабораторные методы исследования в клинике: справочник. Под редакцией проф. В.А Меньшикова. М.: Медицина. 1987, с.341-343.), дополнительно использовали питательные среды с определенной концентрацией антибиотиков по Миллеру Дж. (Миллер Дж. Эксперименты в молекулярной генетике. Под редакцией проф. Адиханяна С.И. // Москва, Издательство Мир, 1986. С.436.). Протистоцидную активность изучали на простейших - Parameciumcaudatum (Г'аликеев Х.Л. Изучение вирулентности дизентерийных бактерий с использованием инфузорий туфелек / Х.Л. Гсликеев. Н.И. Потатуркина-Нестсрова // Здравоохр. Казахстана, 1987. №1. С.34-46.). Вирулентность оценивалась по способности вызывать гибель при «ннтранвзальном заражении» белых мышей (Войно-Ясененкая М.К. Опыт изучения дизентерийной инфекции у лабораторных животных /М.К.Войно-Ясенецкая // Ж урн. микробиол.. эпидемиол. и иммунобиол. 1957. №4.С.65-69). токсигенность - в тесте «отек лапки» (Вартанян Ю.П. и соавт. Отек лап белых мышей - тест для оценки активности зитеротоксинов / Ю.П.Вартанян и соавт. // Бюлл. зкеп. биол. и медицины. 1978. №2. С. 150-152), па модели «изолированная петля тонкого кишечника кролика» (Gianella R.A. Suckling mouse model for detection of heat-stable Escherichia coli enterotoxin: characteristics of the model / R.A. Gianella). Изучение кожно-нскротической способности проводили по общепринятой методике (Габидуллин З.Г. Биологическая характеристика штаммов бактерий рода Proteus, выделенных при инфекционных процессах различной локализации: автореф. дисс... д-ра мед. наук / З.Г. Габидуллин. Саратов. 1989. 49с.). Выделение плазмидной ДНК по методу Kado С.Т., Liu S.T. (Kado С Т.. Liu S.T. Rapid procedure for detection and isolation of large and small plasmids / C.T.Kado. S.T.Liu//J. Bacterio!. 1981.Vol. 145.P.1365-I373.). Элиминацию плазмид проводили при помощи акридинового оранжевого, бромистого этилия. лодсцилсульфата натрия и РНК-ингибиторами транскрипции (рифампицин. актиномицин Д) по методу Дж. Миллера

(Дж. Миллер. Эксперименты в молекулярной генетике / Дж. Миллер // Москва. Мир. 1976. 325с.). Полимераэную цепную реакцию проводили с использованием пары праймеров. подобранных Boyd Ii.F.. Hart D.L. (Boyd F.F.. Hart D.I.. Chromosomal regions specific to the pathogcnic isolates of Escherichia coli have a philogenetically clastered distribution / E.F. Boyd. D.I..Hart // J. Bacteriol. 1998. Vol. 180.P.l 159-1165.). Выявление коньюгативных плазмид проводили по методической рекомендации составленной коллективом авторов (Мамонтова Т.Н.. Белокрысенко С .С.. Тихомиров Е.Д.. Солодовников Ю.П.. Турчинская М.В. Методические рекомендации по обнаружению и классификации R-плазмид у шигелл / Москва. МЗ СССР. 1983 ). Модель острой экспериментальной инфекции воспроизводили в 3-х экспериментальных группах.

Эксперименты проводились на белых мышах - самцах линии СВА - 100 животных в контрольной группе н по 100 животных в каждой экспериментальной группе:

группа I - моделирование экспериментальной инфекции осуществляли внутрибрюшинным введением бульонных монокультур Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp.. E.coli, Proteus spp.. содержащих LT-энтеротоксин в дозе LD« - 5-10" КОЕ/мл;

группа Ii-моделирование экспериментальной инфекции осуществляли внутрибрюшинным введением сокультивируемых вариаций: Enterobacter spp.+Citrobacter spp.. Enterobacter spp.+Serratia spp., Citrobacter spp.+Serratia spp. Enterobacter spp.+E.coli, Citrobacter spp.+E.coli, Serratia spp.+E.coli. Proteus spp.+Enterobacter spp.. Proteus spp.+Citrobacter spp.. Proteus spp.+Serratia spp., Proteus spp.+E.coli штаммов содержащих LT-энтеротоксин в дозе LDW -5 10" КОЕ/мл:

группа III (контрольная) - введение стерильного бульона Хоттингера для исключения влияния внешних и внутренних факторов на характеристики оцениваемых иммунологических параметров.

Оценку всех тестируемых параметров проводили через 12-36-72 часа после инокуляции монокультур и их сокультивируемых вариаций.

Сепарацию фагоцитирующих клеток проводили следующим образом: резидентные клетки перитонеальных макрофагов (ПМф) у мышей получали промыванием брюшной полости охлажденной средой 199 с гепарином в концентрации 10 ед/мл. Все манипуляции проводили при температуре тающего льда. Выделение макрофагов (Мф) и моноцитов (Мн) из клеточной суспензии, в процессе культивироваиия связанное с их адгезивной способностью проводили по методу Хейфетца Л.Б. (Хейфетц Л.Б. Разделение форменных элементов крови человека в градиенте плотности всрографин-фиколл /Л. Б. Хейфетц. В.А. Абалакина // Лаб.дело. 1973. №10,- С.579-581.). Фагоцитарную активность исследуемых клеток оценивали по их способности к захвату частиц полистирольного латекса (ФреЙдлии И.С. Методы

изучения фагоцитирующих клеток при оценке иммунного статуса человека: учебное пособие.//Ленинград. 1986.261 с. |. Изучение состояния лизосомального аппарата фагоцитирующих клеток проводили с помощью метода Зеленина A.B. (Зеленин A.B. Взаимодействие аминопроизводных акридина с клеткой / A.B. Зеленин. Москва: Наука. 1971. 231с.). Изучение НСТ-релуцирующей активности ПМф проводили по спонтанному и индуцированному тестам (Маянский A.M. и соавт. Характеристика функциональной активности нейтрофилов крови человека с помощью реакции восстановления нитросинсго тетразолия / А.Н. Маянский с соавт. // Журн. микробиол., зпидемиол. и иммунобиол. 1977. №6. С. 108-110.). Определение образования эксграцеллюлярных сетей проводили по методу Долгушина И.И. с соавт. (Долгушин И.И. Нейтрофильные ловушки и методы оценки функционального статуса нейтрофилов / И.И. Долгушин, Ю.С. Андреева. А.Ю. Савочкипа // Москва. Издательство РАМН, 2009.С. 131-134.). Оценку апоптоза эукариотических клеток проводили в проточном цитофлюориметре (FL3. >600 нм) по структурным изменениям ядерной ДНК клеток, окрашенных йодистым пропидием (PI) (Сибиряк C.B. Оценка апоптоза в иммунологических исследованиях).

Все выделенные и используемые культуры по своим культуральным, морфологическим и биохимическим свойствам были типичными для соответствующих родов бактерий. Микроскопическое исследование окрашенных по Граму препаратов моно- и совместно культивируемых Enterobacter spp.. Citrobacter spp.. Serratia spp.. K.coli. Proteus spp. позволило нам на визуальном уровне выявить различия между моно- и сокультнвирумымн вариациями, а электоронно-микроскопическоеисследованис моно- и сокультивируеммх Enterobacter spp., Citrobacter spp.. Serratia spp., E.coli. Proteus spp.. базировавшихся на форме, рисунке, макро- и микроструктуре бактериальных колоний, свидетельствовало о переходе представлений от одноклеточности микроорганизмов к микробным колониям как целостным «сверхорганизмам». В толще колоний на злекторонограммах отпечатков моно-и совместно культивируемых штаммов Enterobacter spp., Citrobacter spp.. Serratia spp.. E.coli, E.coli. Proteus spp. обнаружены контакты различных типов: плозкое слипание, контакты «конец в конец», «бок в бок», «бок в конец». В зоне плотного слипания границы наружных мембран клеточных стенок трудно различимы. Через липидные слои их мембран, видимо, проходят соприкасающиеся белковые структуры, получившие название «Байеровскис зоны». Их значительно больше у совместно культивируемых штамов Enterobacter spp.. Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli, Proteus spp., чем у их монокультур. Вероятно, за счет «Байеровских зон» может контактировать цитоплазма совместно культивируемых соприкасающихся клеток. Большинство клеток таким образом контактируют с несколькими соседними клетками. Контакт второго типа, который существует у колоний Enterobacter

spp.. Citrobacter spp.. Serratia spp.. E.coli. Proteus spp. - внутри плазматические мостики между клетками - образованны наружно« мембраной клеточных стенок. Часть перемычек расположены по длине клеток, другие располагаются сбоку.

При постановке реакции гемагглютинации с эритроцитами цыпленка MS-реакцию из SO монокультур Enterobacter spp. давали 24 (48%), а MR-реакцию - 12 штаммов (24%): из монокультуры бактерий родов Citrobacter spp. и Serratia spp. MS-реакцию давали 25(50%) штаммов Citrobacter spp. и 22(44%) штаммов Serratia spp.. а MR-реакцию 10(20%) и 11(22%) штаммов соответственно: монокультуры E.coli положительную MS-реакцию давали 25(50%) штаммов, а MR-12 (24%): у 50 штаммов бактерий рода Proteus spp. положительную MS-реакцию давали 23(46%) штаммов, а MR - реакцию 15 (30%) штаммов. В дальнейшем нами было проведено сравнительное изучение адгезивной активности вариаций совместно культивируемых штаммов. При этом было выявлено, что показатели MS-реакции гемагглютинации с эритроцитами цыпленка были выше, чем у их монокультур: в частности E+C-MS-80% (8 из 10 вариаций), E+S - MS-90% (9 из 10 вариаций), (C+S) - 90% вариаций (9 из 10). E+E.coli - MS-70 % (7 из 10 вариаций), C+E.coli -MS-60 % (6 из 10 вариаций). S+E.coli - MS-70% (7 из 10 вариаций), Prot+Enl - MS-90% (9 из 10 вариаций). Prot+Citr - MS-90% (9 из 10 вариаций), Prot+Ser-90% вариаций (9 из 10). Prot+E.coli - MS-80% (8 из 10 вариаций) (Р<0,05). При изучении способности давать MR-реакцию гемагглютинации с эритроцитами цыпленка сокультивируемых вариаций были получены следующие данные: (E+C)-MR-40% (4 из 10 вариаций), (E+S)-MR-40% (4 из 10 вариаций). (C+S)-MR-40% вариаций (4 из 10). (E+F..coli)-MR-60 % (6 из 10 вариаций), (C+E.coli)-MR-50 % (5 из 10 вариаций), (S+E.coli)-MR-60% (6 из 10 вариаций), Prot+Ent-MR-50% (5 из 10 вариаций), Prot+Citr-MR-50% (5 из 10 вариаций). Prot+Ser-MR-40% вариаций (4 из 10), Prot+E.coli-MR-60% (6 из 10 вариаций) соответственно. При электронно-микроскопическом исследовании обнаружено, что клетки совместно культивируемых бактерий родов Enterobacter, Citrobacter, Serratia, E.coli, Proteuse большом количестве (более 15) плотно прилипают к эритроцитам цыпленка, тогда как количество прилипающих клеток у монокультур, составляло не более 10 на единичный эритроцит.

Исследования а - гемолитической активности показали, что из 50 монокультур бактерий Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli, Proteus spp. а-гемолитической активностью обладали 12(24%). 13(26%). 10 (20%).I3(26%) и 10(20%) штаммов соответстненно. В следующей серии опытов нами было проведено изучение а - гемолитической активности совместно культивируемых штаммов. При этом частота встречаемости а-гемолитической активности была значительно выше, чем у их монокультур, в частности у вариаций Enterobacter spp.+Cilrobacler spp. - 6 из 10(60%),

Enterobacter spp.+Serratia spp. - 7 из 10(70%). Enterobacter spp.+E.coli - 5 из 10(50%). Citrobacter spp.+Serratia spp. - 8 из 10(80%). Citrobacter spp.+E.coli - 6 из 10(60%), Serratia spp.+E.coli - 5 из 10(50%), Proteus spp.+Enteroljacter. spp.- 6 из 10(60%). Proteus spp.+Citrobacter spp.- 7 из 10(70%). Proteus spp.+SeiTatia spp. 9 из 10(90%). Proleus spp.+E.coli - 8 из 10(80%) обладали а - гемолитической активностью. При этом штаммы бактерий ролов Enterobacter spp.. Citrobacter spp.. Serratia spp.. E.coli, Proteus spp. при совместном культивировании значительно чаше проявляли высокую и среднюю а-гемолитическую активность, чем их монокультуры.

Проведенные исследования тиолгемолитической активности показали, что из 50 штаммов монокультур бактерий Enterobacter spp.. Citrobacter spp.. Serratia spp.. E.coli. Proteus spp. 20(40%). 25(50%). 16(32%). 19(38%). 25(50%) штаммов соответственно синтезировали тиолэависимый гемолизин. Тогда как при совместном культивировании штаммов из 10 вариаций Enterobacter spp.+Citrobacter spp. - 6(60%). из 10 вариаций Enterobacter spp.+Serratia spp. - 7(70%), из 10 вариаций Enterobacter spp.+ E.coli - 6(60%), из 10 вариаций Citrobacter spp.+Serratia spp. - 8(80%), из 10 вариаций Citrobacter spp.+E.coli -7(70%) вариаций, из 10 вариаций Serratia spp.+E.coli-6(60%). из 10 вариации Proteus spp.+Enterobacter spp.-70 % (7 нз 10). из 10 вариаций Proteus spp.+Citrobacter spp. 8 из 10(80%). из 10 вариаций Proteus spp.+Serratia spp. 90 % вариаций (9 из 10), из 10 вариаций Proteus spp.+E.coli 80% (8 из 10) соответственно обладали тползависмой гемолитической активностью. При этом штаммы бактерий ролов Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp.. E.coli. Proteus spp. при совместном культивировании значительно чаще проявляли тиолзависимую гемолитическую активность, по сравнению с их монокультурами. Энтерогемолитичсская активность была выявлена только у культур, изолированных при диарейных инфекциях, тогда как штаммы выделенные от больных с гнойно-воспалительными и урологическими заболеваниями, не проявляли энтерогемолитической активности. Таким образом, сравнительный анализ энтерогемолитической активности монокультур и сокультивируемых штаммов показал, что 7 штаммов Enterobacter spp. и по 8 штаммов Citrobacter spp. и Serratia spp., 4 штамма E.coli. 5 штаммов Proteus spp. обладали энтерогемолитической активностью. Было установлено, что монокультуры бактерий Enterobacter spp.. Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli. Proteus spp. в 1.5 раза реже проявляли высокую и в 2 раза чаще слабую энтерогемолитическую активность, чем их совместно культивируемые вариации.

Исследование ДНКазной активности монокультур показало, что из 50 монокультур бактерий Enterobacter spp.. Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli, Proteus spp. ДНКазной активностью обладали 18(36%). 19(38%). 17(34%). 15(30%). 16(32%) штаммов.

соответственно. Частота встречаемости ДНКазной активности у сокультивируеммх вариаций была значительно выше, чем у их монокультур: в частности из 10 вариации Enterobacter spp.+Cilrobacter spp.-7(70%). из 10 вариаций Knterobacter spp.+Serratia spp. -8(80%). из 10 вариаций Citrobacter spp.+Serratia spp. - 9(90%). из 10 вариаций Enterobacter spp.+E.coli-6(60%). из 10 вариаций Citrobacter spp.+E.coli 7-(70%). из 10 вариаций Serratia spp.+E.coli -7(70%). из 10 вариаций Proteus spp.+F.nterobacter spp. - 7 (70%) обладали Д1 (Казной активностью: из 10 вариации Proteus spp.+Citrobacter spp.-8(80%). из 10 вариаций Proteus spp.+ Serratia spp. - 9(90%). из 10 вариаций Proteus spp.+E.coli-8(80%).

Исследования лецитиназной активности монокультур показало, что из 50 монокультур Enterobacter spp.. Citrobacter spp.. Serratia spp.. E.coli, Proteus spp. лецитиназной активностью обладали 11(22%). 20(40%). 25(50%) 19(38%). 11(22%) культур соответственно. В последующем изучали изменение характера проявления лецитиназной активности при совместном культивировании штаммов бактерий Enterobacter spp., Citrobacter spp.. Serratia spp.. E.coli. Proteus spp.: в частности из 10 вариаций Enterobacter spp.+Cilrobacter spp. -7(70%). из 10 вариаций Enterobacter spp.+Serratia spp. - 8(80%). из 10 вариаций Citrobacter spp.+Serratia spp.-9(90%). из 10 вариаций Enterobacter spp.+E.coli - 6(60%). из 10 вариаций Citrobacter spp.+E.coli - 6(60%). из 10 вариаций Serratia spp.+E.coli - 7(70%), из 10 вариаций Proteus spp.+Enterobacter spp. - 7(70%), из 10 вариаций Proteus spp.+Citrobacter spp. - 8(80%). из 10 вариаций Proteus spp.+Serratia spp. - 9(90%). 7(70%) вариаций Proteus spp.+E.coli из 10 обладали лецитиназной активностью соответственно. Таким образом, исследование ДНКазной и лецитиназной активностей показало, что бактерии сокультивируемых вариаций Enterobacter spp.. Citrobacter spp., Serratia spp.. E.coli. Proteus spp. чаще обладали вышеизложенными признаками, чем их монокультуры.

Для зашиты от бактерицидных факторов сыворотки или фагоцитов микробная клетка располагает средствами дистанционного действия, направленного на инактивацию определенных факторов иммунной системы организма. Среди специализированных и наиболее изученных у множества представителей микроорганизмов учениками школы академика Бухарина О.В. изучен антилизоцимный фактор, который направлен на инактивацию тканевого лизоцима и лизоцима фагоцитов, обеспечивающий выживание возбудителя в макрофаге и пейтрофиле. Кроме того, микроорганизмы образуют анткинтерцилные и антикомнлементарные факторы, которые обладают инактивирующей активностью против катионных белков лейкоцитов и комплемента организма хозяина. Иехо;ш из тгого мы провели сравнительное изучение фснотипического признака инактивации лизоцима у монокультур бактерий Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp.. E.coli. Proteus spp. и у их сокультивируемых вариаций.

Проведенные исследования показали, что из 50 моноку льтур Enterobacter spp.. Citrobacter spp.. Serratia spp.. E.coli, Proteus spp. 30(60%), 25(50%). 26(52%). 23(46%), 25(50%) штаммов соответственно ннактивировали лизоцим. В следующей серии опытов нами было проведено изучение антилиэоцимной активности при совместном культивировании )тих микроорганизмов: из 10 вариаций Enterobacter spp.+Citrobacter spp. - 8(80%). из 10 вариаций Enterobacter spp.+Serratia spp. - 9(90%). из 10 вариаций Citrobacter spp.+Serratia spp. -7(70%). из 10 вариаций Enterobacter spp.+E.coli - 7(70%). из 10 вариаций Citrobacter spp.+ E.coli - 7(70%). из 10 вариаций Serratia spp.+E.coli - 7(70%) вариаций, из 10 вариаций Proteus spp.+Enterobacter spp. - 8(80%). из 10 вариаций Proteus spp.+Citrobacter spp. - 8(80%), из 10 вариаций Proteus spp.+Serratia spp. 8(80%) и из 10 вариаций Proteus spp.+E.coli - 7(70%) соответственно были способны инактивировать лизоцим.

Изучение антиинтерфероновой активности в различных конценграциях лейкоцитарного интерферона показало, что из 50 монокультур Enterobacter spp.. Citrobacter spp.. Serratia spp., E.coli, Proteus spp. антиинтерфероновой активностью обладали 29(58%). 26(52%), 25(50%). 22(44%), 29(58%) штаммов соответственно. В следующей серии опытов нами было проведено изучение антиинтерфероновой активности вариаций совместно культивируемых штаммов. Результаты исследований показали, что из 10 вариации Enterobacter spp.+Citrobacter spp. - 8(80%). из 10 вариаций Enterobacter spp.+Serratia spp. -9(90%), из 10 вариаций Citrobacter spp.+Serratia spp. - 9(90%). из 10 вариаций Enterobacter spp.+E.coli - 8(80%), из 10 вариаций Citrobacter spp.+E.coli - 9(90%). из 10 вариации Serratiaspp.+E.coli - 7(70%), из 10 вариаций Proteus spp.+Enterobacter spp. - 7(70%). из 10 вариаций Proteus spp.+Citrobucter spp. - 8(80%). из 10 вариаций Proteus spp.+Serratia spp. -8(80%), из 10 вариаций Proteus spp.+E.coli- 7 (70%) соответственно были способными инактивировать интерферон в различных концентрациях.

Исследования антикомплементарной активности монокультур показали, что из 50 штаммов Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp. E.coli. Proteus spp антикомплементарной активностью обладали 26(52%), 24(48%).25(50%), 15(30%), 24(48%) штаммовкоторые были способными инактивировать комплемент, соответственно. Проведенные в дальнейшем исследования показали, что из 10 вариаций Enterobacter spp.+Citrobacter spp. - 7(70%), из 10 вариаций Enterobacter spp.+SerTatia spp.-8(80%). из 10 вариаций Citrobacter .spp.+Serratia spp. - 9(90%). из 10 вариаций Enterobacter spp.+E.coli -6(60%), из 10 вариаций Citrobacter spp.+E.coli - 6(60%). из 10 вариаций SerTatiaspp.+E.coli -6(60%), из 10 вариаций Proteus spp.+Enterobacter spp.-8(80%), из 10 вариации Proteus spp.+Citrobacter spp.- 9(90%), из 10 вариаций Proteus spp+Serratia spp. - 8(80%). из 10

вариаций Proteus spp.+E.coli - 8(80%) соответственно были способными инактивировэть комплемент.

Таким образом, данные сравнительного изучения персистентных свойств монокультур бактерий Enterobacter spp., Citrobacter spp.. Serratia spp.. E.coli. Proteus spp. и их сокультивируемых вариаций показали, что у совместно культивируемых вариаций чаще проявляется антилизоцимная. антиинтерфероновая и антикомплементарная активность.

Для выявления вирулентности монокультур клинических штаммов Enterobacter spp., Citrobacter spp.. Serratia spp., E.coli, Proteus spp. и их сокультивируемых вариаций мы использовали метод интраназалыюго заражения беспородных белых мышей самцов весом 18-20г. Сначала на легочной модели была изучена вирулентность монокультур. Из всех исследуемых 50 монокультур Enterobacter spp.. Citrobacter spp., Serratia spp.. E.coli. Proteus spp 12(24%), 14(28%), 13(26%). 10(20%). 15(30%) соответственно проявляли вирулентность. В последующем, проведенные исследования по изучению вирулентности совместно культивируемых знтеробактерий, позволили выявить более выраженную динамику размножения микроорганизмов и сокращение интервала времени гибели экспериментальных животных с момента введения суспензий ассоциированных культур, что установило степень вирулентности сокультивируемых микробов в виде ассоциаций. Так, из 10 исследуемых вариаций Enterobacter spp.+Citrobacter spp.-4(40%). из 10 вариаций Enterobacter spp.+ Serratia spp - 4(40%), из 10 вариаций Citrobacter spp.+Serratia spp - 5(50%). из 10 вариаций Enterobacter spp.+E.coli - 6(60%), из 10 вариаций Citrobacter spp.+E.coli -4(40%), из 10 вариаций Serratia spp.+E.coli -4(40%). из 10 вариаций Proteus spp.+Enterobacter spp. - 6(60%), из 10 вариаций Proteus spp.+Citrobacter spp. - 4(40%), из 10 вариаций Proteus spp.+SerTatia spp. - 4(40%) вариации, из 10 вариаций Proteus spp.+E.coli - 5(50%) соответственно обладали вирулентностью. Таким образом, бактерии Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp.. E.coli, Proteus spp. при совместном культивировании значительно чаще обладают вирулентностью, чем их монокультуры.

Для выявления у условно-патогенных грамотрицательпых бактерий способности продуцировать термолабильное токсическое вещество типа LT-энтеротоксин используется метод «отека лап». Как показали результаты исследований, из 50 штаммов Enterobacter spp. центрифугаг 20-часовых бульонных культур 10(20%) монокультур вызывали отек лап от 60 до 75 мг, из 50 штаммов Citrobacter spp. 12(24%) штаммов вызывали «отек лапки» от 60 до 80 мг, из 50 монокультур Serratia spp. центрмфугат 8(16%) штаммов вызывали «отек лапки» от 65 - 75 мг, из 50 E.coli центрифугат 6( 12%) штаммов вызывали «отек лапки» от 65-75 мг, из 50 штаммов Proteus spp. 7(14%) штамма вызывали отек лап от 65-85 мг. Среди сокультивируемых 10 вариаций Enterobacter spp.+Citrobacter spp. центрифугаты 4(40%)

вариаций вызывали отек лап от 65 до 90 мг. из 10 вариаций Enterobacter spp.+Serratia spp. центрифугаты 5(50%) вариаций давали положительный тест «отек лапки» от 65 до 95 мг.. из 10 вариаций Citrobacter spp.+Serratia spp. 5(50%) давали положительный тест «отек лапки» от 65 до 95 мг. из 10 вариаций Enterobacter spp.+Е.coli цснгрпфугаты 6(60%) давали положительный тест «отек лапки» от 60 до 90 мг. из 10 исследуемых вариаций Citrobacter spp.+E.coli 6(60%) давали положительный тест «отек лапки» от 65 до 95 мг. из 10 вариаций Serratia spp.+E.coli 4(40%) давали положительный тест «отек лапки» от 65 до 85 мг. из 10 вариаций Proteus spp.+Enterobacter spp. центрифугаты 4-х(40%) давали положительный тест «отек лапки» от 65 до 95 мг, из 10 вариаций Proteus spp.+Citrobacter spp.5(50%) давали положительный тест «отек лапки» от 60 до 95 мг, из 10 вариаций Proteus spp.+Serratia spp. 4(40%) давали положительный тест «отек лап» от 60 до 85 мг. из 10 вариаций Proteus spp.+E.coli 5(50%) давали положительный тест «отек лапки» от 60 до 80 мг. Таким образом, у совместно культивируемых вариаций бактерий Enterobacter spp., Citrobacter spp.. Serratia spp.. E.coli. Proteus spp. чаше проявляется способность давать положительный гест «отек лап», чем у их монокультур.

В основе развития инфекционного процесса, вызванного условно-патогенными энтеробактериями. ведущую роль играют термолабильные (LT) и термостабильиые (ST) энтеротоксины, которые вызывают диарейные синдромы и общую интоксикацию макрооргинизма. В связи с этим мы провели сравнительное изучение токсигеппости монокультур бактерий Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli. Proteus spp. и их сокультивируемых вариаций па модели «изолированная петля тонкого кишечника кролика». Полученные результаты показали, что из 25 штаммов Enterobacter spp. центрифугаты 5-ти(20%) культур оказались способными вызывать накопление жидкости в тонкой кишке кролика (V/L от 1,0 до 1.1): из 25 монокультур Citrobacter spp. у 5(20%) соотношение объема экссудата к длине сегмента (V/L) составило от 1.0 до 1.1 ;иэ 25 штаммов Serratia spp. наблюдали в 4(16%) случаях накопление экссудата в просвете топкого кишечника, и соотношение (V/L) было в пределах от 1.0 до 1.1; из 25 штаммов E.coli наблюдали в 4(16%) случаях соотношение (V/L) было в пределах от 1.0 до 1.1; из 25 штаммов бактерий Proteus spp. у 6(24%) соотношение (V/L) было в пределах от 1.0 до 1.1. Результаты проведенных опытов показали, что при введении ценгрифугатов совместно культивируемых штаммов наблюдалось картина с наиболее выраженными макроскопическими и гистологическими изменениями. Совместно культивируемые вариации микроорганизмов, обладающие способностью продуцировать LT-энтеротоксин. обуславливали накопление экссудата в просвете тонкой кишки значительно чаще, чем н\ монокультуры, что характеризовалось значениями отношения объема жидкости к длине

легированного сегмента (V/L) 1.0: 1.3 н более). Так при введении центрифугата 10 совместно культивируемых вариаций Enterobacter spp.+Citrobacter spp. 7(70%) вызывали накопление жидкости в петле тонкого кишечника кролика, и показатели V/1. колебались в пределах 1.0-1,3; из 10 вариаций Enterobacter spp.+Serratia spp. давали положительную дслятацню 6(60%) и соотношение V/L колебалось в пределах 1.0-1,4: из 10 вариаций Citrobacter spp.+Serratia spp. все 6(60%) вариаций давали положительную делятацию (V/L от 1.0-1,3); из 10 вариаций Enterobacter spp.+E.coli-7(70%) давали положительную делятацию (VL от 1.0-1.3): из 10 вариаций Citrobacter spp.+E.coli давали положительную делятацию 7(70%) вариаций (V/L от 1.0-1,3); при изучении 10 вариаций Serratia spp.+E.coli-5(50%) вариаций давали положительную делятацию (V/L от 1.0-1.3); из 10 вариаций Proteus spp.+Enterobacter spp. давали положительную делятацию 5(50%) вариаций и соотношение V/L колебалось в пределах 1.0-1.3 и более; из 10 исследуемых вариаций Proteus spp.+Citrobacter spp. положительную делятацию давали 5(50%) вариаций (V/L от 1.0-1,3); из 10 вариаций Proteus spp.+Serratia spp. 6(60%) вариаций давали положи тельную делятацию и соотношение V/L колебалось в пределах 1.0-1.3 и более; при исследовании 10 сокультивируемых вариаций Proteus spp.+E.coli, положительную делятацию давали 6(60%) вариаций (V/L от 1.0-1.3 и более). Наиболее выраженными при морфологическом исследовании были изменения кишечника кролика, при введении центрифугатов сокульгивируемых штаммов нариаш1й Citrobacter spp.+Serratia spp. и Proteus spp.+Serratia spp.: штамм, продуцирующий JIT-энтеротоксин+штямм,продуцирующий энтеро гемолизин. Макроскопически: стенка тонкого кишечника была полнокровной, черно-багрового цвета, в состоянии выраженного отека, выраженная гиперемия сосудов стенки и брыжейки кишки. Эластичность и прочность кишечной стенки были значительно снижены по сравнению с введением монокультур, и при небольшом усилии ткань тонкого кишечника легко рвалась. В просвете кишечника определялось большое количество мутного с геморрагическим опенком экссудата. Поражение кишечной сгенки в группе животных, которым вводили сокультивирусмые вариации, проявлялись в виде резкой гиперплазии групповых и солигарных фолликулов с выраженной пролиферацией лимфоидных клеток в центрах размножения и появление среди них крупных одноядерных клеток со светлым ядром округлой или овальной форм. Аналогичные результаты были получены при постановке кожно-иекротичсском пробы на кроликах. Таким образом, результаты данного раздела исследований дают нам основание полагать, что ассоциации условно-патогенных энтеробактсрий способны вызывать крайне тяжелые инфекционные процессы, чем их монокультуры, что необходимо учитывать при лечении гнойио-воспалнтсльпых.

урологических и кишечных инфекций, вызываемых ассоциациями прамотрицательных бактерий кишечной группы.

Некоторые исследователи для выявления степени патогенное™ условно-патогенных знтеробактсрий рекомендуют использовать протистоцидный тесг, который позволяет но скорости гибели инфузорий не только оценить наличие токсина, но и определить вирулентность энтеробактернй. Исходя из этого нами было проведено сравнительное изучение гоксигенности монокультур Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli. Proteus spp. и их совместно культивируемых вариаций на модели с инфузориями туфельками. При воздействии на простейших суспензии 50 монокультур Enterobacter spp. 10(20%), из 50 монокультур Citrobacter spp. 12(24%). из 50 монокультур Serratia spp. 8(16%). из 50 штаммов E.coli 6(12%), из 50 монокультур Proteus spp. 12(24%) штаммов Proteus spp. вызывали гибель инфузорий туфелек в течение от 30 секунд до 5,5 минут, соответственно. В то же время изучение протистоцидной активности сокультнвируемых вариаций показало изменение протистоцидной активности при совместном культивировании условно-патогенных энтеробактернй и были получены следующие результаты: из 10 вариаций Enterobacter spp.+Citrobacter spp. в 7(70%) случаях, из 10 вариаций Enterobacter spp.+SerTatia spp. в 6(60%) случаях, из 10 вариаций Citrobacter spp.+Serratia spp. - 8(80%), из 10 исследуемых вариаций Enterobacter spp.+Е.coli у 4(40%) вариаций, из 10 вариаций Citrobacter spp.+E.coli у 5(50%) вариаций, из К) сокультнвируемых вариаций Serratia spp.+E.coli - 6(60%), при исследовании вариаций Proteus spp.+Enterobacter spp.—8(80%) вариаций, из 10 вариаций Proteus spp.+Citrobacter spp. - 9(90%) вариаций, из 10 вариаций Proteus spp.+Serratia spp. - 10(100%) вариации, из 10 сокультивирусмых вариаций Proteus spp.+E.coli - 9(90%) вариаций вызывали гибель инфузорий туфелек в течение от 30 секунд до 5,5 минут, соответственно. Таким образом, проведенные исследования протистоцидной активности моно- и сокультивирусмых изучаемых нами условно-пагогснных энтсробиктерий показывают, что более высокими значениями протистоцидной активности обладают суспензии сокультнвируемых вариаций, чем их монокультуры, что, возможно, связано с взаимным индуцированием биологической активности токсических веществ, вырабатываемых ассоциациями этих микроорганизмов.

Множественная резистентность условно-патогенных энтеробактернй к антибактериальным препаратам является основной причиной. ограничивающей эффективность лечения, что обусловлено интенсификацией генетического обмена мобильными внехромосомными элементами между условно-питогснпыми энтеробактериями и циркуляцией клопов, содержащих плазмиды множественной лекарственной устойчивости, нередко включающих одновременно гены, контролирующие синтез известных факторов

патогенности, повышающих вирулентность циркулирующих штаммов. В связи с этим нами было проведено сравнительное изучение антибиотикочувсгвителыюсти монокультур Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp.. E.coli, Proteus spp. и их совместно культивируемых вариаций методом стандартных дисков. Изучали чувствительность к 49 антибиотикам, в час™ости были использованы антибио™ки - ингибиторы синтеза и функций клеточной сгенки (азлоцилин, азтреонам. ампициллин, бензилпенициллин, ванкомицин. имипенем. карбенециллин. меропенем. новобиоцин. оксациллин. пиперациллин, стрептомицин, цефазолин, цефаклор, цефалексин, цефалотин, цефамандол, цефиксим, цефипим. нефоперазон. цефотаксим, цефтазидим. цефтриаксон. цефуроксим); ингибиторы синтеза и функций цитоплазматической мембраны (азитромицин, полимиксин); ингибиторы синтеза белка на уровне рибосом (доксициклин. кларитромицин. клиндамицин. левомецитин. лнпкомицин, олеацдомицин, ристомицин, рокситромицин. тетрациклин, фузидин. эритромицин); ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот (налидиксовая кислота, офлоксацин, рифампицин, ципрофлоксацин); а также антибио™ки смешанного механизма действия (амикацин, гептамицин. канамицин. неомецин. нетилмецин, сизомицин. тобрамицнн, фуродонин).

Исследование аптибно™кочувствительности монокультур Enterobacter spp. показало, что монокультуры Enterobacter spp. были чувствительными к 23 антибиотикам: Citrobacter spp. были чувствительными к 33 антибиотикам: Serratia spp. чувствительными к 33 антибиотикам; E.coli чувствительными к 32 антибиотикам: Proteusspp. чувствительными к 33 антибиотикам. Изучение аитибиотикоречистснтности совместно культивируемых вариаций показало, что происходило расширение спектра резистентности культур к антибиотикам: вариации Enterobacter spp.+Citrobacter spp. были чувствительны к II, вариации Enterobacter spp.+Serratia spp. к 12, вариации Citrobacter spp.+Serratia spp. к 10, вариации Enterobacter spp.+E.coli к 13, вариации Citrobacter spp.+E.coli к II. вариации Serratia spp.+E.coli к II, вариации Proteus spp.+Enterobacter spp. к II. вариации Proteus spp.+Citrobacter spp. к 10, вариации Proteus spp.+Serratia spp. к 10. вариации Proteus spp.+E.coli были чувствительны к действию 11 антобиогиков. соответственно. Анализ полученных результатов показал, что сокультивирусмые вариации реже были чувствительны к широко применяемым в практике антибиотикам.

В дальнейшем изучали возможность трансконьюгатовной передачи множественной лекарственной устойчивости к широко применяемым в практике антибиотикам между бактериями Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp.. E.coli, Proteus spp., и от бактерий Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp.. E.coli, Proteus spp. к универсальному реципиенту E.coli K| iGejRif". При этом у 50% и более трансконьюгатов сокультивируемых

вариаций обнаружили коньюгационную передачу реципиентам устойчивости к левомицетику, ампициллину, стрептомицину, неомицину и мономнцнну. Таким обратом, при совместном культивировании просходит расширение спектра лекарственной устойчивости изучаемых нами микроорганизмов, что, возможно, связано с передачей мобильных внехромосомных элементов (R-плазмид).

Популяционно-гснетическая изменчивость у микроорганизмов связана с изменениями в десятках и сотнях полиморфных локусов и сайтов, что одновременно подразумевает изменчивость ДНК в бактериальных популяциях в целом и обуславливает актуальность изучения этого процесса с теоретических позиций, поскольку позволяет понять генетическую структуру популяции и филогенетические отношения между различными штаммами, родами, видами микробов. С учетом вышеизложенного, мы провели ряд исследований по обнаружению хромосомных и внехромосомных элементов, детерминирующих факторы патир-енности монокультур Enterobacter spp.. Citrobacter spp.. Serratia spp., E.coli, Proteus spp. и их сокультивируемых вариаций, а также был изучен профиль их плазмидной ДНК.

В первой серии опытов мы проводили изучение профиля плазмидной ДНК монокультур Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli, Proteus spp. и их способность давать MS- и MR-реакции гемагглютинации с эритроцитами цыпленка. Наши попытки в опытах прямой передачи плазмид осуществить передачу между штаммами Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli, Proteus spp. детерминанты контролирующей реакцию гемагглютинации с эритроцитами цыпленка, не увенчались успехом.

Таким образом, результаты наших исследований лают нам основание полагать, что генетической летерминантой. контролирующей MS- и MR-рсикцию гемагглютинации с эритроцитами цыпленка у штаммов Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli. Proteusspp., возможно, являются структурные элементы хромосомной природы.

Известно, что продукция ЛТ-энтеротоксина у эптсротоксигенных кишечных палочек, детерминируется Ent-плазмидами, молекулярная масса которых колеблется от 55 до 61 МД и принадлежит к группе плазмид несовместимости. Однако природа генетической детерминвнты. ответственной за синтез энтеротоксина у культур Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli, Proteus spp., изучена недостаточно. Исходя из этого мы попытались выяснить природу генетической детерминанты, контролирующей у штаммов Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli, Proteus spp. продукцию ЛТ-энтеротоксина. Результаты данного раздела проведенных исследований показали, что генетической детерминантой, контролирующей у штаммов Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli и Proteus spp. продукцию LT-энтеротоксина. является

коиьюгативная плазмида массой 60 МД, выявляемая только у штаммов, вызывающих отек лап более 95 мг. В дальнейшем мы попытались выяснить природу генетической детерминанты, контролирующей продукцию а-гсмолнзина у штаммов Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp.. E.coli, Proteus spp. н провести передачу плазмиды массой 120 МД между штаммами Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli, Proteus spp. При этом было выявлено, что большинство клонов штаммов Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli, Proteus spp. обладающих а-гемолитической активностью имели плазмиды массой 120 МД. В дальнейшем, пугем культивирования а-гемолитнчески активных штаммов Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli, Proteus spp. в бульоне Хоттингера. содержащем 5% концентрацию додецилсульфат натрия или 75 мкг/мл акридина оранжевого, элиминировали плазмиду массой 120 МД. Анализ полученных результатов показал, что большинство клонов утрачивали данную плазмиду и а-гемолигичсскую активность. Тем не менее часть клонов, утративших плазмиду массой 120 МД продолжали продуцировать а-гемолизин. что, по нашему мнению, указывает на наличие генетической детерминанты иной природы, в частности хромосомой, контролирующей продукцию п-гемолизина.

Таким образом, результаты наших исследований показывают', что генетической летерминантой способности бактерий Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli, Proteus spp. давать реакцию гемагглютинации с эритроцитами цыпленка, видимо являются структурные элементы хромосомной природы; продукции Л'Г-энтсротоксина - плазмида массой 60 МД; продукции а-гемолизина, возможно, плазмида массой 120 МД и бактериальная хромосома. Так же мы не выявили в опытах прямой передачи плазмид, усиление адгезивной и а-гемолнтической активностей у сокультивирусмых вариаций. Возможно, зги признаки детерминировались структурными элементами хромосомной природы, а-гемолитическая активность - неконьюгативной плазмидой массой 120 МД. Поэтому в следующей серии опытов мы попытались изучить роль плазмиды массой 60 МД в изменении ЛТ-энтеротоксигенност'и сокультивирусмых вариаций. Для этого сначала брали вариации Enterobacter spp.+Citrobacter spp.. в которых присутствуют штаммы Enterobacter spp. супернродуценты ЛТ-энтеротоксина, вызывающие «отек лап» мышей 95 мг и более, а так же несущие плазмиды молекулярной массы 60 МД и штаммы Citrobacter spp., не продуцирующие Л'Г-энтеротоксин и вызывающие «отек лап» не более 35 мг и не несущие какой-либо плазмиды. У их трансконьюгатон после совместного культивирования изучали профиль плазмидиой ДНК. Результаты исследования профиля плазмидной ДНК у транскоиьюгатов совместно культивируемых штаммов вариаций Enterobacter spp.+Citrobacter spp. показали увеличение на 50% клонов, несущих плазмиды молекулярной

массой 60 МЛ " обладающих способностью вызывать отек лап более 95 мг. В дальнейшем были отобраны трансконьюгаты совместно культивируемых штаммов Enterobacter spp.+Citrobacter spp.. облачающие плазмидами и продуцирующие высокоактивный ЛТ-энтеротоксин. Путем культивирования в бульоне Хоттингера. содержащем 5% концентрацию додецилсульфата натрия или 80-100 мг/мл бромистого этндия, проводили элиминацию плазмид и у их клонов (не менее 50) утративших свойство продуцировать ЛТ-энтеротоксин. изучали профиль плазмилной ДНК. Из 50 клонов каждой вариации Enterobacter spp.+Citrobacter spp.. утративших свойство продуцировать ЛТ-энтеротоксин, не более чем у двух на фореграмме просматривалась плазмида массой 60 МД. остальные оказались не несущими плазмид. что является дополнительным подтверждением возможной коньюгативной передачи между этими бактериями и. соответственно, роли плазмиды массой 60 МД в продукции ЛТ-эптеротоксина. С целью исключения роли других плазмид в продукции ЛТ-энтеротоксина отбирали вариации Enterobacter spp.+Citrobacter spp., несущие плазмиды массой 40 и 10 МД, и штаммы, несущие плазмиды массой 120 МД. изучали способность центрифугатов 18-20 часовых культур вызывать «отек лап» мышей. Из взятых в опыт 10 вариаций совместно сокультивируемых штаммов Enterobacter spp.+Citrobacter spp. из 15 монокультур по 3 культуры из каждого рода. 3 вариации вызывали «отек лап» мышей до 45 - 55 мг., 4 вариации - до 35 - 49 мг и 3 не более 25 мг. что является дополнительным подтверждением роли 60 МД плазмиды в продукции термолябильного энтеротоксина. В дальнейшем нами была изучена возможность коньюгативной передачи Ent-плазмиды между штаммами Enterobacter spp. и Citrobacter spp. и от Enterobacter spp. и Citrobacter spp. к E.coli KI2 G62 Ril*. В качестве доноров брали по 16 штаммов Enterobacter spp. и Citrobacter spp.. При этом из всех вариаций штаммов при скрещивании донорного штамма Enterobacter spp. и реципиента Citrobacter spp. обнаружили коньюгативную передачу Ent-илазмнды. Анализ профиля плазмилной ДНК показал, что у 41 трансконьюгата из 50 на фореграмме просматривалась плазмида массой 60 МД. которая одновременно давала отек лапки 95 мг и более. Таким образом, результаты ниших исследовании дают основание полагать, что генетической детерминантой контролирующей у бактерий Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli, Proteus spp. продукцию термолабильного токсического вещества, является плазмида массой 60 МД. В аналогичной серии опытов, в которых брали вариации Enterobacter spp.+Serratia spp., Citrobacter spp.+Serratia spp, Enterobacter spp.+F.coli, Citrobacter spp.+E.coli, Serratia spp.+E.coli, Proteus spp.+Enterobactcr spp., Proteus spp.+Citrobacter spp., Proteus spp.+SerTatia spp., Proteus spp.+E.coli, была также выявлена роль плазмиды массой 60 МД в продукции термолабнлмюго энтеротоксина.

Проведенные исследования по изучению плазмнлного профиля Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp.. E.coli, Proteus spp. показали, что гены «островков патогснности» могут свободно мигрировать внутри одного вида, рода бактерий или между близкородственными микроорганизмами. В зтой связи нами была проведена оценка вероятности существования у клинических штаммов Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp.. Proteus spp. генетических детерминант, родственных ряду генов известных «островков натогенности» E.coli. В частности, в общем пуле исследованных штаммов бактерий рода Enterobacter spp. (34 шт.) образование искомых ампликонов при использовании праймеров к hlyA имело место в 7 случаях (20,5%), hlyB - в 8 (23.5%), рарАН - в 4 (11.8%). рарС - в 5 (14.7%) случаях. sfaG и sfaA обнаружены у 2 (5.9%) и 8 (23.6%) штаммов соответственно. Частота обнаружения фрагментов генов "'островков натогенности" у клинических штаммов Citrobacter spp. носила следующий характер: hlyA -35,7%. hlyB - 21.4%, рарАН - 21,4%, рарС - 14.3%, sfaG - 0%, sfaA - 7,1%, kpsMT - 7,1%. У исследованных штаммов Serratia spp. образование искомых амгишконов при использовании праймеров к hlyA и hlyB имело место по 4 (23.4%) случая, cnf 1-2(11,8%), sfaA и sfaG - по 2 (11.8%) случая, соответственно. При этом у 2-х штаммов Serratia spp. одновременно были обнаружены фрагменты генов «островков патогснности» к образованию sfaA и sfaG. продукции hlyA и hlyB, cnf I. которые были выделены при урологических п гинекологических инфекциях, относящихся к виду S.marccscens. Из 50штаммов E.coli ген Pap С обнаруживался у 12 штаммов, ген hlyA у 11. ген Lth - у 7 культур.Частота обнаружения фрагментов генов "островков натогенности" у клинических штаммов Proteus spp. носила следующий характер: hlyA - 8%, hlyB - 20%, рарАН - 20%, рарС - 20%. sfaG - 16%. sfaA - 14%, kpsMT - 2%. Таким образом, при изучении генетических детерминант у клинических штаммов Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp.. E. coli, Proteus spp. вне зависимости от источника их выделения обнаруживаются гены hlyA. hlyB, рарАН, рарС, Lth, sfaG и sfaA.

IIa сегодняшний день особую актуальность приобретает изучение особенностей и характера взаимоотношений в системе «патоген-хозяин».

Для характеристики взаимодействия микробов, помимо вышеописанных, логически определяется повое направление в микробиологии и иммунологии - изучение иммунологических механизмов, лежащих в основе патогенеза заболевания. С этой целью нами были выполнены ряд экперментальпых исследований.

Эксперименты проводились на белых мышах-самцах линии СВА - 100 животных в контрольной группе и по 100 животных в каждой экспериментальной группе:

Группа 1 - моделирование экспериментальной инфекции осуществляли внутрибрюшинным введением бульонных монокультур Enterobacter spp., Citrobacter spp.. Serratia spp.. E.coli, Proteus spp.. содержащих ЕТ-энтеротоксин в дозе LD5» - 5 10К КОП/мл:

группа II - моделирование экспериментальной инфекции осуществляли внутрибрюшинным введением сокультивирусмых вариаций: Enterobacter spp.+Citrobacter spp.. Enterobacter spp.+Serratia spp.. Citrobacter spp.+Serratia spp, Enterobacter spp.+E.coli. Citrobacter spp.+E.coli. Serratia spp.+E.coli. Proteus spp.+Enterobactcr spp.. Proteus spp.+Citrobacter spp., Proteus spp.+Serratia spp.. Proteus spp.+E.coli штаммов содержащих LT-энтеротоксин в дозе LDj« - 5 10" КОЕ/мл;

—IJ

•Mi*

Я1МН1-.

7IJMH

м,м%

»JM%

1*JM%

•JH* ,

Рисунок 1 - Влияние монокультур и сокультнвируемых Kntcrobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp., K. coli, Proteus spp. на фагоцитарную активность перитонеальиьн макрофаг он мышей полученных черет 12, 36 и 72 часа после инокуляции (активность фш оптом), (%)

На рисунке I представлены результаты изучения активности, а на рисунке 2 -

интенсивности фагоцитоза частиц латекса перитонсальными макрофагами, полученными

через 12.36. и 72 часа после заражения мышей монокультурами и сокультивнрусмыми

вариациямибактерий Enterobacter spp.. Citrobacter spp., Serratia spp., E.coti. Proteus spp.

-ч-12 часов -«-36 часов -»-72 часом ______________

У <>"' <s'

/ ¿¡р

✓ У

^ у 4

к' > „V > " . ' Л ^ Л" Л"

У У

СУ

V4" f

• .<.' л-& ф

г <?

Рисунок 2 - Влияние монокультур н сокулы ивируемы* нариаций Knterohacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp.. K. coli, Proteus spp. на фагонитарнуи» активность пернтонеальнмх макрофагов мышей полученных чере'1 12. 3fi н 72 часа после инокуляции (интенсивность фагоцнгота), (усл. ст.)

Результаты исследований показали, что не было выявлено существенных различий в активности и интенсивности фагоцитоза макрофагами у мышей зараженных монокультурами бактерий Enterobacter spp.. Citrobacter spp.. Serratia spp., E.coli. Proteus spp.. тогда как при сравнительном изучении активности и интенсивности фагоцитоза макрофагами монокультур и сокультивируемых вариаций такие различия были.

Механизмы внутриклеточной микробоцидности фагоцитов обеспечиваются широким спектром биологически активных веществ, сосредоточенных в лизосомах. В них содержится много различных ферментов, включающих протеиназы, нуклеотидазы, липазы, глюкозидазы и др. Число лизосом в цитоплазме фагоцитов - это показатель, отражающий их функциональную активность и способность к реагированию на внешние воздействия.

Насыщенность антимикробными факторами можно детектировать invitro с применением геста изучения лизосомальной активности фагоцитов.

Па рисунке 3 представлены результаты изучения активации лизосомальных гранул в ПМф. полученными через 12.36. и 72 часа после заражения мышей монокультурами и сокультнвируемыми вариациями бактерий Enterobacter spp.. Citrobacter spp.. Serratia spp.. E.coli. Proteus spp.

Рисунок Активации ЛИЭОСОМЙЛЬИМЖ грянул в ПМф пол действием монокультур и сокульгнвирусмых вариаций Enterobacter spp.. Citrobacter spp., Serratia spp., E. coli. Proleus spp., (усл. ел.)

Таким образом, изучение лизосомальной активности при введении монокультур штаммов Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp.. E.coli. Proteus spp. показало, что происходит активация лизосомальных гранул в ПМф. особенно в группе при введении сокулмивируемых вариаций изучаемых нами микроорганизмов.

Фагоцитоз сопряжен с серией метаболических реакций, типичными чертами которых являются быстрое увеличение потребления кислорода с превращением его в первичные (супероксиданион - 07. перекись водорода - Н2О2. гидроксильный радикал - ОН. синглетный кислород - ТО:, озон - Oj) и вторичные (гипохлорная кислота - HOCI. хлорамин, продукты перекисного окисления липндов) метаболиты активированного кислорода в системе НАДФ И-оксндазы. Для оценки кислородного «взрыва» существуют различные методы, среди которых наиболее доступным является НСТ-тест. В основе этого

Рисунок 4 - Спонтанная НСГ-актипность перитонеальных макрофагов у мышей заряженных монокультурами н сокультиннруемымн вариациями Enterobacter spp., Citrobacter spp.. Serratia

spp.. E.coli, Proteus spp., (%)

Обращает на себя внимание тот факт, что в клетках мышей II группы активность

процессов образования активных форм кислорода выше по сравнению с I группой, причем

максимальное увеличение образования супероксидного аниона относительно контроля

наблюдалось уже через 12 часов эксперимента. В другой серии экспериментов установлено.

что индуцированная НСТ-реакция макрофагов былавыше. чем спонтанная, и имела

тенденцию к у величению. Следует отметить, что во II группе мышей показатели имели

достоверно высокие значения по сравнению с контролем и 1 группой мышей (рисунок 5).

метода лежит реакция восстановления нитроеннего тетразолия (НСТ) ионом водорода и

супероксидным анионом, при котором в клетках образуется грубо дисперсный темно-синего

цвета диформазан, определяемый с помощью светового микроскопа.

Результаты оценки активности спонтанной НСТ-реакции перитонеальных макрофагов показаны в рисунке 4.

м,м%

»М«*р 7§дМ% <м*н яува%

4М«К 9ММ 2М** lt.ee* Ма%

100.00% 40J00V, «0,00% 70,00% 60,00% 50,00% 40,00% .10,00% 20,00% 10,00% одю%

Рисунок 5 - Индуцированная НСТ-акт явность пери гонеа.м.нмх макрофагов у мышей зараженных монокультурами и сокулы нвируемымн вариациями Enterobacter spp.. Citrobacter spp., Serratia »pp., К.coli, Proteus *pp.,(%)

Таким образом. результаты исследования показывают. что при введении сокультивируемых вариаций Enterobacter spp., Citrobacter spp.. Serratia spp.. E.coli. Proteus spp. в брюшную полость мышей происходит достоверное увеличение способности к восстановлению ИСТ по сравнению с введением их в виде монокультур.

В последние годы стало известно, что даже после гибели нейтрофилы могут выполнять антимикробную функцию за счет образования внеклеточных ловушек (Neutrophil Extracellular Traps. NETs, HBJ1). В ответ на микробные и немикробные стимулы нейтрофилы активно формируют во внеклеточном пространстве сетеподобные структуры, состоящие из нуклеиновых кислот и ферментов (FuchesT.A., AbedlJ. etal., 2007). В результате проведенных исследований было обнаружено, что при действии монокультур Enterobacter spp.. Citrobacter spp., Serratia spp.. E.coli, Proteus spp. количество экстрацеллюляриых сетей в перитонеальном экссудате возрастает. При этом максимальные изменения этих показателей наблюдаются при действии сокультивируемых вариаций.

шмкпъ чо,оо%

(ЮДЮ% 70ДХ»%

ым>о% sajaav.

40,00% .10.00% 20,00% 10,00% одю%

Рисунок 6 — Образование экстраиеллтлярных сетей ири исследовании влияния монокультур и сокулыивируемых вариаций Enterobacter spp., Citrobacter spp,, Serratia spp., E.coli, Proteus spp., (%)

Полученные результаты свидетельствуют о более выраженной поглотительной способности фагоцитов при введении ассоциаций условно-патогенных энтеробактерий по сравнению с монокультурами, что, по-видимому, имеет важное биологическое значение для активации более сильной воспалительной реакции при инфекциях, вызванных микробами с высоким патогенным потенциалом. Образование э кстраце ллюлярн ы х сетей при таких инфекциях может иметь как защитное действие, так и способствовать генерализации инфекции за счет распространения бактерий из первичног о очага.

В условиях инфекционной патологии апопточ обычно выполняет функцию защиты макроорганизма, при которой гибель инфицированных клеток с последующей их элиминацией из организма предотвращает распространение инфекции. Однако некоторые патогены в условиях инфицированного организма «отменяют» клеточную гибель, поддерживая жизнь клеток хозяина, способствуя тем самым выживанию и персистенции возбудителя. В связи с этим, на наш взгляд, эти обстоятельства диктуют необходимость сравнительного изучения явлений запрофаммированной клеточной смерти хозяина под влиянием монокультур штаммов Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp.. E.coli, Proteus spp. и их сокультивируемых вариаций, поскольку в доступной нам литературе мы не

встречали подобной информации. Во всех опытных группах отмечается появление аноптотических клеток, однако более достоверные различия по сравнению с контролем наблюдались во 11 группе мышей (рисунок 7).

Я Х>* слУ v X «- V V V « 1.

^ cf ¿Г -Л X* А

</ <2 V О*' # ^ 4

& & чГ ■ <>>

Рисунок 7— Выраженноегь апоптоза клеток перитонеально» о экссудата мышей, зараженных монокульту рами я сокулы инируемымн вариациями штаммов Enterobacter хрр.. Citrobacter spp., Serratia spp., К.coli, Proteus spp.,(усл. ед.)

Таким образом, монокультуры штаммов Enterobacter spp.. Citrobacter spp.. Serratia spp., F.coli. Proteus spp. и их сокультнвируемые вариации влияют на процесс апоптоэа клеток перитонеального экссудата мышей н это влияние более выражено у сокультнвруемых вариаций изучаемых нами микроорганизмов через 72 часа.

Переспективм дальнейшей разработки темы Сравнительное изучение факторов патогенно^ти. лерсистенции. вирулентности, токсигенности. лекарственной устойчивости, наличия внехромосомных элементов контролирующих их. а так же показатели иммунной защиты организма хозяина, дает предпосылку к дальнейшим исследованиям изучения механизмов вышеизложенных свойств.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

При изучении биологических свойств микроорганизмов, рассматривается множество сторон действия их как индивидуальных инфекционных агентов, так и их действие на иммунный статус макроорганизма. И при этом, можно сказать о том, что жизнедеятельность микроорганизмов и их факторы патогенности, вирулентности, токсигениости являются основными при взаимоотношениях с иммунным статусом организма хозяина. В данном исследовании изучались все моменты на которые бы можно было обратить внимание при изучении биологических свойств некоторых представителей условно-патогенных энтеробактерий и экпериментально созданных их ассоциаций, а так же был сравнительно изучен спектр лекарственной устойчивости к широко применяемым в практике антибиотикам, что, несомненно, может говорить о более высоком патогенном, персистентом и токенгенном потенциале ассоциаций условно-патогенных энтеробактерий. Так же был выявлен более выраженный эффект иммуномолулирующего действия па процессинговую функцию перитонеальных макрофагов, иммунокомпромегируюшее влияние на макрофаги и нейтрофилы, на ферменты гексозомонофосфатного шунта фагоцитов, образования экстрацеллюлярных сетей и феномен апоптоза клеток воспалительного перитонеального экссудата и сплсноцнтов хозяина, что несомненно в совокупности говорит о этиологической значимости условно-патогенных энтеробактерий. выделенных при различных инфекциях в виде ассоциированных культур. Проведенные исследования открывают перспективы дальнейшего изучения состояния гуморальных и клеточных факторов врожденного и приобретенного иммунитета при развитии инфекций полимикробной этиологии.

ВЫВОДЫ

1. У штаммов бактерий Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Е. coli, Proteus, выделенных от больных, страдающих различными инфекциями, при совместном культивировании происходит изменение конструкции и архитектуры взаиморасположения клеток, которое проявляется в виде увеличения количества контактов различных типов: «бок в бок. «конец в бок», «конец в конец», плотного слипания на уровне наружных мембран и образования перемычек.

2. Электронно-микроскопическое исследование показало, что в концентрических зонах колоний у сокультивируемых вариаций Enterobacter, Citrobacter. Serratia. Е. coli. Proteus обнаружены клетки, имеющие большое количество швермеров. по сравнению с монокультурами.

3. При сравнительном электронно-микроскопическом исследовании адгезивной активности микроорганизмов обнаружено, что клетки совместно культивируемых

вариаций штаммов бактерий Enterobacter, Citrobacter, Serratia. E.coli, Proteus с высокой адгезивной активностью в большом количестве (более 15) плотно прилипают к эритроцитам цыпленка, тогда как количество прилипающих клеток у монокультур составляло не более 10 на единичный эритроцит. Высокоадгсзивныс штаммы Enterobacter, Citrobacter, Serratia, E.coli, Proteus по периметру имели реснички дпиной 100-500 нм и шириной 2.0-6,0 пм.

4. При совместном культивировании штаммов бактерий Enterobacter. Citrobacter. Serratia, Е. coli, Proteus происходит увеличение гемолитической, лецитиназной. ДНКазной. антилизоцимной. антнннтерфероновой. антикомплементарной активностей. ЛТ-энтеротоксигенности и вирулентности по сравнению с их монокультурами.

5. Дана сравнительная характеристика вирулентных свойств монокультур Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Е. coli, ProteusH их сокультивнруемых вариаций на различных биологических моделях и были отобраны штаммы, обладающие комплексом факторов патогснности.

6. Сравнительное изучение спектра лекарственной устойчивости у монокультур Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Е. coli, Proteusn у их сокультивнруемых вариаций показало, что при совместном культивировании бактерий Enterobacter, Citrobacter, Serratia. Е. coli происходит расширение спектра устойчивости к широко применяемым в практике антибиотикам.

7. При сравнительном изучении профиля плазмидной дезоксирнбонуклеиновой кислоты у монокультур Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Е. coli, Proteus и их сокультивнруемых вариаций, выявлено увеличение у сокультивнруемых вариации количества клонов, несущих плазмиды контролирующие продукцию гермолабильного токсического вещества, дающих «отек лап мышей» 95 мг более, выраженную делягацпю «петли тонкого кишечника» и кожно-некротическую пробу на кроликах.

8. Сравнительное изучение механизмов действия сокультивнруемых вариаций бактерий Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Е. coli, Proteus иафункции фагоцитов зараженных мышей показало статистически достоверное увеличение количества перитонеальных фагоцитов, активности и интенсивности фагоцитоза, лизосомалыюн. НСТ-редуцирующей активности этих клеток, числа экстрацилюлярных сетей и апоптозных клеток, по сравнснению с действием монокультур.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для установления этиологической значимости ассоциаций штаммов бактерий родов Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Е. coli, Proteus, выделенных от больных с различными инфекциями, рекомендуется определение их факторов патогенное™ (гемолитической, лецитиназной. ДНКазной. антилизоцимной. антиинтерфероновой. антикомплементарной активностей. ЛТ-энгеротоксигепности).

2. Знания о взаимном индуцировании патогенных свойств при совместном культивировании бактерий родов Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Е. coli, Proteus рекомендуется использовать при проведении лечебно-профилакгических мероприятий инфекционных процессов, вызванных ассоциациями указанных бактерий.

3. Данные иммунологических исследований об изменениях в иммунной системе животных рекомендуются в перспективе использовать лля своевременной коррекции иммунологических нарушений, вызываемых ассоциациями бактерий родов Enterobacter, Citrobacter, Serratia. Е. coli, Proteus.

4. Штаммы E.coli ГИСК №280 (патент № 2293765). E.coli ГИСК №281 (патент № 2293764) рекомендуется использовать в качестве эталонных культур при идентификации выделенных штаммов от больных и в биотехнологии в качестве суперпродуцентов термолабильного энтеротоксина.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ АВТОРОМ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ахтариева, A.A. Влияние термолабильного энтеротоксина Enterobacter cloaceac на фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов мышей / А.А.Ахтарнева, II. И. Долгу шин, З.Г.Габндуллин, Ю.З.Габидуллии, А.А.Камалова // Журнал микробиолоши, эпидемиологии и иммунобнологии.-2007.-№4.-С.58-61.

2. Ахтариева, A.A. Состояние некоторых звеньев иммунной системы мышей, инфицированных энтеротоксин-нродуцирующнми штаммами бакгерий рода Enterobacter / А.А.Ахтарнева, ИЛДолгушин, З.Г.Габндуллин, Ю.З. Габидуллин, I.A.Савченко, Г.К.Давлетшиня. Д.М.Галимова, М.Ф. Газизова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.-2007.-№5.-С.84-87.

3. Ахтариева, А.А.Влияние энтеротоксина Enterobacter на клеточное звено иммунитета/ А.А.Ахтарнева, И.И.Долгушнн, З.Г.Гнбидуллин,Ю.З. Габидуллин, А.А.Камалова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.-2008.-.Ys3. С. 96-98.

4. Габидуллип, 3 Г. Сравнительная характеристика некоторых биологических свойств у бактерий Proteus и культур Staphylococcusaureus. выделенных при гнойно-воспалительных заболеваниях у больных, находящихся на стационарном лечении в онкологических отделениях и республиканской клинической больнице Г.Г. Куватова г.Уфа,' З.Г.Габндуллин. Н.Х.Наснбуллин. Ю.З.Габидуллин. Р.С.Суфияров, Р.Р.Суфияров // Медицинский вестник Башкортостана.-'2008.-№4.-С.25-28.

5. Габидудлин.З.Г. Условно-патогенные энтеробактерии. Пособие для врачей-бактериологов и клинических лаборантов / З.Г. Габидуллин, 'Г.А. Савченко, М.М. Алсынбаев. М.М. Туйгунов. А.К. Булгаков, Г.К. Давлетшина. A.A. Ахтариева. Ю.З. Габидуллин. Р.З. Саляхов // Уфа. 2009.-32с.

6. Долгушин, И.И. Изучение действия термолабильного энтеротоксина Enterobacter cloacae на экспрессию генов цитокинов мышей. / И.И. Долгушин, Л.Л. Лхтарнева, З.Г. Габидуллин, Ю.З. Габндуллин, A.A. Камалова, P.M. Ахмалеев II Журнал микробиологии, эпидемиологии н нммунобиплогиii.-2009.-.V?5.-C.62-66.

7. Лхтарнева, Л.Л. Влиянме термолабнльного энтеротоксина Enterobacter cloacac на иммуиную систему мышей / A.A. Лхтарнева, И.И. Долгушин,'!.Г. Габидуллин. Ю.З. Габндуллин, A.A. Камалова, Р.М.Ахмадеев // Журнал микробиологии, эпидемиолог ии и нммунобнологии.-2009.-№6.-С.98-|04.

8. Габидуллин. З.Г. Факторы натогснности семейства Enterobacteriaceae, обеспечивающие выживание в организме хозяина / З.Г. Габидуллин. A.A. Лхтарнева. М:М. Туйгупов. P.C. Суфияров. В.Г. Туйгунова. Н.Х. Насибудлнн. Р.Р. Суфияров, Ю З. Габидуллин. Г А. Идиатуллина. В.М. Изикаев // Мед.вестник Башкортостана.-2009.-Т.4,-№5.-С.86-94.

9. Габидуллин, З.Г.Регуляция аноптоза бактериальными клетками семейства Enterobacteriaceae / З.Г. Габидуллин. A.A. Ахтариева. М М. Туйгупов. P.C. Суфияров. В.Г. Туйгунова. Н.Х. Насибуллин. Р.Р. Суфияров. Ю З. Габидуллин. Г.А. Идиатуллина. В.М. Изикаев // Мед.вестник Башкортостанв.-2009.-т.4.-№6.-С.68-76.

10. Лхтарнева, Л.А. Влияние термолабнльного энтеротоксина Enterobacter cloacae на уровень каспазы 3,7,9 при экспериментальной инфекции / A.A. Лхтарнева, 11.11. Долгушнн, З.Г. Габидуллин, Ю.1. Габидуллин, A.A. Камалова, Р.Р.Суфияров, В.Г. Туйгунова И Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.-2010.-№2.-(.90-93.

П. Суфияров, P.C. Морфологические, ультраструктурные и биологические

особенности диссоциативных форм протея / P.C. Суфияров. З.Г. Габидуллин, М.В. Тимербулатов, Р.Р. Суфияров, Л.А. Лхтарнева, Габидуллин Ю.З., H.H. Гнбазов, В.М. Изикаев, Г.Л. Идиатуллина, Р.Ф. Насырова II Медицинский вестник Башкортостана.-2010.-.\§6.-т.5.-С. 108-111.

12. Габидуллин, З.Г. Исследование фагоцитоза н кислородзависнмого метаболизма пернтонеальных макрофагов мышей после воздействия сокультивируемых бактерий Enterobacter cloacac и S.aureus/ З.Г. Габидуллин, В.М. Изикаев, A.A. Лхтарнева, P.C. Суфияров, Р.Р. Суфияров, A.A. Камалова, Ю.З Г абидуллин// Медицинский вестник Вашкортостана.-2011.-ЛГ»1.-т.6.-( .92-95.

13. Габндуллин, З.Г. Сравнительное изучение функциональной активности пернтоннальных макрофагов мышей при экспериментальной моно- и микст-инфекинн / З.Г. Г абндуллин, В.М. Изикаев, A.A. Ахтариева, P.C. Суфияров, A.A. Камалова, Ю.З. Габндуллин, Л.А. Гайсина // Медицинский вестник Башкортоп ана.-2011.-Т.6.-ЛН.-С.110-114.

14. Габидуллин, З.Г. Лечение гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей протейно-энтеробактериой природы / З.Г. Габидуллин, В.М. Изикаев, Г.Л. Идиатуллина, В.Г. Туйгунова, Р.Ф. Насырова, Р.Р. Суфияров, H.H. Гибазов, Ю.З. Габидуллин, Р.Р. Суфияров, М.В. Тимербулатов, P.C. Суфияров, A.A. Ахтариева И Медицинский вестник Башкортостана.-2011.-№6.-С.94-9В.

15. Медведев, Ю.А.Характеристика свойств монокультур и сокультивируемых вариаций условно-патогенных энтеробактернй / Ю.А.Медведев. 10.3. Габидуллин.Р.С. Суфияров. З.Г. Габндуллин. М.М. Туйгупов // Материалы V Ежегодног о Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням - Москва.2013.-С .257-258.

16. Перунова, II.Б. Изменение бнопленкообразования и антилизоцнмной активности Citrobacter freundii под действием метаболитов кишечной мнкробноты / II.К. Перунова, В.Г. Туйгунова, Е.В. Иванова, Ю.З. Габндуллин // Медицинский вестник Башкортостана.^!) 13.-Т.Я.-№4.-С.61-64.

17. Габидуллин, ЮЛ. Особенности некоторых биологических свойств монокультур бактерий родов Enterobacter spp., Citrobacter spp., Serratia spp., Proteus spp. н, их совместно сокультивируемых вариаций / ЮЛ. .Габидуллин, P.C. Суфняров, t.I . Габидуллин, РЛ. ('уфиярова, М.Г, Зайнуллина // Вестник ЮжноУральского Государственного Университета. Сернц здравоо^ранение.-2013-Т.13.-.Vsl.-C.%-10l. ' ."

18. Суфняров, P.C. Комплексный подход профилактики и лечения гнойно-восналнтельных процессов, вызванных ассоциациями условно-патогенных бактерии / P.C. Суфияров. ЗГ. Габидуллин. М.В. Тимербулатов. Ю.З. Габидуллин.-Уфа.-2013.-200с.

19. Ахтяриева, A.A. Изучение кислород-зависимого метаболизма перитонеальных макрофагов мышей после воздействия монокультур Enterobacter, Staphylococcus aureus и их сокультивируемых вариаций / A.A. Ахтариева, Т.А. Савченко, К).). Габидуллин, A.A. Камалова // Проблемы медицинской мнкологии,-20I4.-T. 16.-№2.-С.40.

20. Ахтарнсва A.A. Сравнительное изучение а-гемолитической активности монокультур Enterobacter, Staphylococcus aureus и нх сокультивируемых вариаций / A.A. Ахтариева, Т.А. Савченко, ЮЛ. Габидуллин, A.A. Камалова // Проблемы медининской микологии.- 20I4.-T. 16.-№2,- С.41.

Патенты

21. Пат. 2293765. Рос.Фел.: С12М/20Штамм бактерий Е. coli ГИСК №280, обладающий способностью продуцировать термолабильный ЛТ-чнгеротоксин/ Бн.талов Ф.С., Габидуллин З.Г., Алсыибаев М.М., Туйгунов М.М., Булгаков А.К., Гибаэов ll.ll., Мамбггова ").Ф., Гатимова Д.Т., Туйгунова В.Г., Габидуллин ЮЛ., Ахтариева A.A. //заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО БГМУ РОСЗДРАВА (RI!); опубл. 20.02.2007.-Бюл.-№5.-Зс.

22. Пат. 2293764. Рос.Фед.: С12М/00Штамм бактерий Е. coli ГИСК №281. обладающий способностью продуцировать гермолабнльный ЛТ-знтеротоксин/ Билалов Ф.С., Габидуллин 1.Г., Алсыибаев М.М., Туйгунов М.М., Булгаков А.К., Гибазов H.H., Мамбетова Э.Ф., Га'шимова Д.Т., Туйгунова В.Г., Габидуллин ЮЛ., Ахтариева A.A.; заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО БГМУ РОСЗДРАВА (RU); опубл. 20.02.2007.-Бюл.-№5.-Зс. '

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АИА - антиинтсрфероновая активность АКА - антикомплементарная активносоть АЛА - антилизоиимная активность АОК - антителобраэующие клетки ДИК - деэоксирибонкуклеиновая кислота КонА - конкавалин А

ЛТ или LT-энтеротоксин - термолабильный энтеротоксин МД - мегадальтон Мф — макрофаги

MS — манноэочувствительная реакция агглютинации MR - манноэорсэистентная реакция агглютинации 11ВЛ -нейтрофильные внеклеточные ловушки Г1 Мф - перитонеальные макрофаги 11ЦР - полимераэно-цепная реакция

CT или ST - энтеротоксин - термостабильный энтеротоксин

ФГА - фнтогемагглютинин

ЭТКП - энтсротоксигенные кишечные налочки

ЭПКП - энтеропатогенные кишечные палочки

Вариациисокультивируемыхштаммов:

Enterobacter spp.+Citrobacter spp.-(E+C), Enterobacter spp.+Serratia spp.-(E+S), Citrobacter spp.+Serratia spp.-(C+S), Enterobacter spp.+E.coli - (Ent+E.coli). Citrobacter spp.+E.coli-(C+F.coli), Serratia spp.+E.coli-(S+E.coli), Proteus+Enterobacter spp. spp.-(Prot+E), Proteus spp.+Citrobacter spp.-(Prot+C). Proteus spp.+Serratia spp.-(Prot+S). Proteus spp.+E.coli -(Prot+E.coli)

SdS - лодецилсульфат натрия

ST - энтеротоксин - термостабильный энтеротоксин

Габидуллин Юлай Зайнуллович

ОСОБЕННОСТИ НЕКОТОРЫХ СВОЙСТВ, ОПРЕДЕЛЯЮЩИХ ПАТОГЕННЫЙ ПОТЕНЦИАЛ СОКУЛЬТИВИРУЕМЫХ

ВАРИАЦИЙ

SAKTEPIUIENTEROBACTER, CITROBACTER, SERRATIA, E.COLI, PROTEUS

03.02.03 - Микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени локтори медицинских наук

Челябинск - 2015

(«m^v.Отпечатано с готовых диапозитивов в ООО «Принт*», заказ № 385, тираж 100 шт, 450054, пр. Октября, 71

654¿

2010016544