Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Структурно-метаболические механизмы формирования нарушений при действии на организм детергентов
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия
Автореферат диссертации по теме "Структурно-метаболические механизмы формирования нарушений при действии на организм детергентов"
На правах рукописи ЖУКОВ ВИКТОР ИВАНОВИЧ
СТРУКТУРНО-МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ФОРМИРОВАНИЯ НАРУШЕНИЙ ПРИ ДЕЙСТВИИ НА ОРГАНИЗМ
ДЕТЕРГЕНТОВ
03.00.04 - БИОХИМИЯ
АВТОРЕФЕРАТ
ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ ДОКТОРА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК
РОСТОВ-НА-ДОНУ 2000 г.
Работа выполнена в Харьковском государственном медицинском
университете.
Научные консультанты:
доктор медицинских наук, профессор А.ПШепелев. доктор медицинских наук, И.А.Григорова. Официальные оппоненты:
доктор биологических наук, профессор Т.Н.Погорелова. доктор медицинских наук, профессор В.В.Давыдов, доктор биологических паук, МЛ.Кесельман
Ведущая организация: Ростовский государственный медицинский университет.
диссертационного совета Д.063.52.08 при Ростовском государственном университете (344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Большая Садовая, 105, РГУ, бколого-почвенкый факультет, ауд.203).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ростовского государственного университета (344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Пушкинская, 148).
Автореферат разослан 2000 г.
Ученый секретарь '
диссертационного совета, доктор
Защита состоится
в ^СО часов на заседании
биологических наук, профессор
Т.И.Бондаренко
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Интенсивная деятельность человека на современном этапе развития науки, техники и технологии привела к появлению в биосфере громадных масс химических, токсических, веществ, которые в разной степени обладают биологической активностью. Это в полной мере относится и к неизученным и биологическом отношении соединениям, которые широко используются а различных отраслях народного хозяйства, в частности, гакам как: фосфорсодержащие, азотсодержащие поверхностно-активные вещества (ПАВ), а также детергенты, полученные на основе оксиэтилированных алкилфенолов, изононилфенолов и гликолей. В существующей научной литературе нет сведений о потенциальной опасности и биологической активности новых групп ПАВ для теплокровных животных и биосферы в целом.
Изучение влияния веществ на метаболические и обменные процессы в организме является необходимым условием обоснования безвредных уровней содержания их в объектах окружающей и производственной среды, в том числе, воде водоемов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового назначения.
Детергенты по масштабам производства и ассортименту выпускаемой на их основе продукции занимают первое место в мире и СНГ среди других классов химических соединений (Л.А.Боидареико, 1995).
Широкий контакт населения с ПАВ ставит задачу своевременного обоснования донозологяческих критериев ранних проявлений биологического действия детергентов и оперативного контроля за состоянием здоровья населения. Решение эти:-: вопросов требует глубокого изучения биотрансформации, токсикокикетики и биохимических механизмов, лежащих в основе формирования структурно-метаболических нарушений. Исходя из этого, актуальным являлось изучбпне функционального состояния биологических мембран, монооксигеназной системы, свободнорадикального перекисного окисления липидов, рецепторного аппарата клеточных структур, нейрогуморатьной регуляции, биоэнергетики, окислительного фосфорилирования. Большие объемы и широкое внедрение в производство и быт ПАВ ставят важную задачу своевременной экспресс-оценки биологической активности и опасности новых групп детергентов.
Актуальность исследований подчеркивается также тем, что они выполнены по проблеме «Биохимия и патохимия обмена веществ, механизмы их регуляции и медицинская энзимологая» в рамках комплексной государственной программы 0.10.04. (№ государственной регистрации 01860021125) и программы ПСНТ-020 «Новые химические материалы».
Вышесказанное обосновывает актуальность изучения биохимических механизмов формирования структурно-метаболических нарушений при действии на организм детергентов и определение их потенциальной опасности для человека и окружающей среды.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью настоящей работы явилось обоснование биохимических механизмов формирования структурно-метаболических нарушений при действии на организм поверхностно-активных веществ и определение прогноза потенциальной опасности их для человека и окружающей среды.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
1. Изучить биологическую активность фосфорсодержащих, азотсодержащих ПАВ, а также детергентов, полученных на основе окснэтщзированных алкилфенолов, изононилфенолов и гликолей в условиях острого и подострого экспериментов на клеточном, тканевом и организменном уровнях.
2. Исследовать структурно-функциональную организацию биологических мембран, интенсивность свободнорадикальных процессов и состояние антиоксидантной системы под воздействием ПАВ в хроническом опыте.
3. Изучить биохимические механизмы формирования структурно-метаболических нарушений в организме при хроническом поступлении ПАВ, их биотрансформацию, токсикодинамику и токсикокинетику с учетом влияния детергентов на иммунобиологическую реактивность, генеративную функцию и генетический аппарат.
4. Разработать на основании многомерного статистического анализа математическую модель прогноза острой и хронической биологической активности детергентов в зависимости от их физико-химических констант.
5. Обосновать концептуальную модель механизма биологического действия ПАВ и структурно-метаболические эффекты с использованием данных, полученных на молекулярном, субклеточном, клеточном, тканевом, органном, системком и оргакизмснном уровнях,
¿С Пттнтпп-Г т г Г-1М Г П": т I' 1/'1 " . ( ' 1Г"'111 Г11 'V т,- Г' Г)Т" (1ТЛ Г ) О !Г с 1>Г\_-)1Т1'.;Ч*1Т
и. 1__' ШЛЛ] 1и I. ^^^ЦУ/ии^и — пиуу^к'ихлилии« и^и.м^итшии ли. . « . - • ЧЛ ^ .
донозологических показателей ранней диагностики свободнорадикальной патологии у рабочих производств ПАВ и синтетических моющих средств (СМС) при мониторной оценки состояния здоровья и определении биологической активности детергентов в эксперименте и натурных исследованиях.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Впервые проведен комплексный сравнительный анализ биологической активности новых групп детергентов на молекулярном, клеточном, тканевом, органном, организменном и популяционном уровнях.
Получены новые экспериментальные результаты, объясняющие механизм биотрансформации поверхностно-активных веществ в монооксигеназной системе печени.
Определены метаболиты биологического окисления ПАВ в организме и показана их роль в развитии структурно-метаболических нарушений органов и тканей. В работе обоснованы биохимические механизмы токсикодинамики и токсикокинетики детергентов.
Впервые, на различных уровнях структурно-функциональной организации биологических объектов с использованием системного подхода, изучено влияние веществ на белковый, жировой и углеводный обмен, интенсивность свободнорадикальных процессов, антиоксидантную систему, окислительное фосфорилирование, биоэнергетику, структуру биологических мембран, рецепторное звено, внутриклеточную медиацию, гормональный статус, пул свободных плазменных аминокислот, фонд микро- и макроэлементов. Установлены биохимические механизмы развития свсбоднорадикальной патологии под влиянием ПАВ и определена ее роль в формировании вторичных нарушений со стороны органов, систем и функций организма. Выявлены ключевые звенья нарушения метаболизма, лежащие в основе возникновения тканевой гипоксии, отдаленных эффектов, подавления клеточного и гуморального иммунитета.
Впервые, на большом фактическом материале установлено, что детергенты, а также метаболиты их биотрансформации, биологического окисления, способны модулировать в организме развитие радиомиметических эффектов и выступать в роли имиттеров радиотоксинов, что имеет важное научное значение при составлении прогноза потенциальной опасности ПАВ для человека и окружающей среды. В работе раскрыты структурно-метаболические нарушения в организме и обоснована концептуальная модель механизма биологического действия детергентов.
Впервые, с помощью многомерного статистического анализа выявлены количественные корреляционно-регрессионные зависимости между дискрипторами физико-химических параметров детергентов и биологической активностью в остром и хроническом опытах, что позволило разработать на их основе математическую модель прогноза биологической активности и опасности вновь синтезируемых и внедряемых ПАВ в народное хозяйство. Установлены ведущие физико-химические константы, определяющие биологическую активность молекулы ПАВ, которыми являются гидрофобные радикалы, гидрофильные группы, сила межмолекулярных и внутримолекулярных связей. Доказано, что полное биологическое окисление азот- и фосфорсодержащих детергентов делает эти вещества более токсичными и подтверждает их мембранотропное действие. Установлено, что разработанная модель прогноза острой и хронической биологической активности тесно связана с механизмом окисления, нейтрализации и выведения ПАВ из организма.
Впервые, результаты проведенных комплексных исследований позволили формулировать глубокое и всестороннее представление о влиянии ПАВ на метаболические процессы, оценить потенциальную их опасность для человека и эбосновать критериально-значимые диагностические показатели, характеризующие наличие в организме свободнорадикальной патологии, которая 1вляется ведущей в формировании радиомиметических эффектов.
Доказано, что информативные высокочувствительные биофизические методы - биохемилюминесценция, фосфоресценция, электрокинетические
свойства ядер клеток буккального эпителия, дают возможность судить о степени нарушения гомеостаза, регистрировать первичные процессы, происходящие на молекулярном уровне в биологических мембранах и скорость старения организма.
Впервые, обосновано применение методов биохемилюминесценции, фосфоресценции, электроотрицательности клеточных ядер в мониторной оценки влияния окружающей среды на формирование радиомиметических эффектов у рабочих производств ПАВ и CMC.
Политропный, мембраноповреждающий характер биологического действам ПАВ позволил обосновать коэффициенты надежности Государственных нормативов.
ПРАКТИЧЕСКАЯ И ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ
заключается в том, что результаты исследований были использованы для разработки 24 гигиенических нормативов в качестве предельно допустимых концентраций ПАВ в воде водоемов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового назначения (СанШН № 4630-88, МЗ СССР, М. - 1988; ГН 2.1.5.690-98). Материалы исследований лапши отражение при составлении и подготовке «Методических рекомендаций по оборудованию, устройству и содержанию производств ПАВ и CMC» (утв. мин. нефтехимической промышленности СССР 12 ноября 1990 г.), «Методических рекомендаций по санитарная охране водоемов от загрязнения сточными водами, содержащими ПАВ» (1999 г.).
Результаты работы положены в основу обоснования технико-экономических расчетов перепрофилирования производства тетрагидрофуранов на Киришском биохимзаводе Ленинградской области и Шсбекинском химзаводе Белгородской области.
Сведения, касающиеся механизма биологическою дейсгвия ПАВ, использовались при составлении комплексных лечебно-оздоровительных мероприятий на ПО «Капролактам» г. Дзержинск, НПО «Нижнекамскнефтехим» г. Нижнекамск, НПО «Полимерсинтез» г. Владимир, НПО «Синтез ПАВ» г. Шебекино Россия и ПО «Химпром» г. Первомайск Харьковской области.
Критериально-значимые информативные показатели, характеризующие наличие в организме свободнорадикальной патологии, были использованы в качестве мониторных тестов определения скорости старения организма и интенсивности СРО липидов у рабочих основных профессиональных групп производств ПАВ и CMC, а также для оценки состояния здоровья населения и определения факторов риска.
Исследования по изучению биохимических механизмов структурно-метаболических нарушений под влиянием детергентов были положены в основу разработки метаболически-адаптированного профилактического питания рабочих, имеющего антирадикальную направленность.
Математическая модель прогноза острой и хронической биологической активности детергентов нашла применение при обосновании гигиенических
нормативов безвредных уровней содержания детергентов в воде водоемов, а также в условиях экспресс-оценки биологической активности новых групп ПАВ.
По методическим приемам, используемым в диссертации, получено 7 патентов и изобретений: «Способ определения кожно-резорбтивного действия химических веществ», № 1755199 А1 от 15.08.92; «Устройство для регистрации при комнатной температуре люминесценции биологических мембран», № 203140 С1 от 20.03.95 г.; «Способ лечения ожогов при многофакторном повреждении», № 8273 А от 29.03.96 г.; «Способ-прогнозирования сепсиса у ожоговых больных'-), 8272 А от 29.03.96 г.; «Способ лечения интоксикаций», № 8296 А от 29.03.96 г.; «Способ оценки состояния больных на ишемический инсульт головного мозга» № 8271 А от 29.03.96; «Способ прогнозирования биологической активности простых полиэфиров», № 8474 А от 6.03.97 г.
Внедрения подтверждены санитарными правилами и нормами, Государственными нормативами, методическими рекомендациями, указаниями, актами и справками о внедрении.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.
1. Системный сравнительный анализ биологической активности неонолов, гликолей, азот- и фосфорсодержащих детергентов на молекулярном, клеточном, тканевом, органном, организкенкои и популяционном уровнях в краткосрочных острых и подострых опытах.
2. Общие закономерности развития биохимических механизмов свободнорадикальной патологии и нарушения структуры биомембран при действии на организм детергентов.
Т^т» луг« .»гуггалг.'тгз * гга*.- л тту./'ч 7 лггт ,--»-Г"т гг/->тттттла т» й4. /■% ■»-. I П1-*..ЛГ!1Т?Т1Т?
г» о 7тт.»гМ1*т**ж£»тт,гп е*г*хгггуг 'згКЛ^егт'ли лтгтч ггАмихту гтг\г>ттр> ттг*то тят* пиим/ч^ит-тт*
иммунобиологической реактивности организма, составляющие основу концептуальной модели механизма биологического действия ПАВ.
4. Корреляционно-регрессионная зависимость между биологической активностью и физико-химическими константами детергентов, включая их общие механизмы биотрансформации, токсикодинамики и токсикокинетики.
5. Комплекс высокочувствительных информативных, критериально-значимых диагностических показателей использован для установления :вободнорадикальной патологии, скорости старения организма, а также методического обеспечения исследований по регламентации детергентов в воде зодоемов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового назначения.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материаты диссертации доложены и обсуждены 1а 7 Всесоюзной конференции «Поверхностно-активные вещества и сырье для их 1роизводства» (г. Шебекино, 1988); Всесоюзной конференции «Химия и -ехнология производства, переработки и применения полиуретанов и сырья для 1их», (г. Суздаль, 1988); Всесоюзной конференции «Стресс и иммунитет» (г. 'остов-на-Дону, 1988); 1 Республиканской конференции УССР «Новые
физические методы в медицине» (г. Ворошиловград, 1990); 5 Всесоюзном симпозиуме «Взаимодействие нервной и иммунной систем» (г. Оренбург, 1990); Региональной научно-практической конференции «Медицинская экология, гигиена окружающей и производственной среды» (г. Харьков, 1990-1995); 1 Международной конференции «Экологические и гигиенические аспекты загрязнения окружающей среды» (г. Киев, 1996); Региональной научно-практической конференции гигиенистов и санитарных врачей «Актуальные проблемы гигиены, эпидемиологии я санитарного дела» (г. Харьков, 1997- 1999).
СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, глав - обзор литературы, обоснование выбора объектов, направления и методов исследования, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы, приложения. Список литературы включает 374 источника, из них 72 источника иностранных авторов. Диссертация изложена на 235 страницах машинописного текста, иллюстрирована 96 таблицами и 8 рисунками.
ПУБЛИКАЦИИ. Материалы диссертации нашли свое отражение в 57 публикациях, в том числе 6 монографиях к 6 отчетах плановых университетских тем.
МАТЕРИАЛЫ, МЕТОДЫ К ОБЪЕМ ИССЛЕДОВАНИЙ.
Выбор групп ПАВ, как объектов настоящего исследования, обусловлен необходимостью получения комплексной биологической характеристики и составления прогноза их неблагоприятного воздействия для человека и окружающей среды. В работе были использованы химически чисше образцы
TT Л О „-„„„У....... иттгь --TT* о,. - тгт_г________ _ .-----------J---------
д-^rkju, \,jriniv~>*iyvDfcirmi>Avv iuiv umi// 1. шеиеллпи, ь .эодапшимп
химическими характеристиками. Необходимость проведения этих исследований обусловлена большим объемом производства и широким внедрением в народное хозяйство в качестве эмульгаторов, флотореагентов, моющих и антикоррозийных средств, гидравлических и тормозных жидкостей и др.
Объекты исследования: группа оксиэтшшрованных алкилфенолов на основе тримеров пропилена (неонолы АФ 9 п) - неонол АФ 9-4, АФ 9-6, АФ 9-8, АФ 910, АФ 9-12, АФ 9-25; группа натриевых солей карбоксиметилированного этоксилата на основе соответствующих изононилфенолов (неонолы АФС 9 п КМ) - неонол АФС 9-4 КМ, АФС 9-5 КМ, АФС 9-6 КМ, АФС 9-10 КМ; группа азотсодержащих ПАВ (имидазолины - амидалин 9 БС, пеназолин 7-9 Б, пеназолин 10-16 БД, пеназолин 10-16 Б, бипан 10 А; группа фосфорсодержащих ПАВ - эфасол, полифос 72, синтаф 10-18, фосфоксит 7 А, фосфоксит 7 Б; группа детергентов на основе гликолей - лапроксид 303, 503, 703 и олигоэфирмоноэпоксид -лапроксид 512.
Первоочередной задачей исследования являлось определение острой биологической активности ПАВ в краткосрочных экспериментах. Опыты на белых крысах популяции Вистар и мышах проведены по Беренсу-Шлоссеру. Дозы
выбраны таким образом, чтобы определить смертельный эффект в интервале ДЛ50 - ДЛ!00- Расчеты ДЛ50 производились по Керберу, Бернесу-Шлоссеру. На морских свинках опыт проведен по Дейхману и Ле-Бланку. При постановке опытов учитывались методические указания О.Н.Елизаровой (1971).
В опыте использовано 1260 белых крыс весом 180-210 г; 1200 мышей массой 20-25 г; 80 морских свинок массой 300-460 г. Хроническое отравление тесно связано с кумуляцией в организме самого яда или вызванных им изменений. Кумуляция изучалась на белых крысах по Лиму и соавт. (1961).
Предварительная экспресс-оценка биологической активности испытуемых соединений осуществлялась на перевиваемых клеточных культурах линии Нер-2, Vero, I 929, Х63 (Дж. Уосли, 1976), а также с использованием буквального эпителия по изменению электрокинегических свойств ядер (В.Г.Шахбазов, 1982).
Влияние на синтез РНК, ДНК и белка оценивалось по уровню инкорпорации з культуру клеток 3Н-уридина, 3Н-тимидина, |4С-лейцина (Д.Кеняел, 1970).
В связи с тем, что детергенты могут поступать в водные объекты изучалась дополнительно биологическая активность соединений на одноклеточных зодорослях- Dunaliella salina, Pedinomonas tenuis (Л.А.Бондаренко, 1995).
Следующим этапом исследований являлось проведение подострого жеперимента. Выбор тестов обоснован литературными сведениями и результатами предварительных исследований биологической активности ПАВ в фаткосрочных опытах.
Длительность проведения подострого эксперимента составляла 1,5-2 месяца. 3 опытных и контрольных группах насчитывалось по 15 животных (белые ¡рысы). Вещества вводили зондом внутрижелудочко в виде водных растворов в 710; 1/100; 1/1000; 1/10000 ДЛ50.
Для выявления качественных сторон биологического действия ПАВ щенивались интегральные показатели на уровне целостного организма, а также есты, характеризующие состояние отдельных органов, систем и функций, ^пользовались показатели, позволяющие судить о состоянии биоэнергетики, жислительного фосфорилирования, ангиоксидантной системы (АОС) и жислительно-восстановительных процессов (ОВП) в организме.
Исследования проводились по следующим показателям: динамика массы и |бщее состояние животных; количество лейкоцитов в крови (г/л); лейкоцитарная юрмула (В.Е.Предтеченский, 1964); эритроциты (Т/л) по А.И.Воробьеву (1959); емоглобин, ммоль/л (Г.В.Дервиз и А.И.Воробьев, 1959); метгемоглобин Я.Э.Горн, 1951). Для определения газообмена использован экспрессивный метод П.А.Чайка, 1965). О качественной стороне ОВП судили по динамике активности яда ферментов.
Активность церулоплазмина определялась по H.A.Rawin (1961) в юдификации Г.А.Бабенко (1968); цитохромоксидазы (ЦХО) (Г.Л.Гудилова, [.Н.Сорокина, 1967); лактатдегидрогеназы (ЛДГ), малатдегидрогеназы (МДГ), ейцинаминопептидазы (ЛАП), алакиновой (АлТ) и аспарагиновой (АсТ) минотрансфераз, щелочной фосфатазы (ЩФ), креатинфосфокиназы (КФК),
фосфофруктокиназы (ФФК), каталазы, пероксидазы, холинэстеразы (ХЭ), ацетилхолинэстеразы (АХЭ) общепринятыми методами (В.С.Асатиани, 1965, 1969; М.Д.Г1одильчак, 1967; М.И.Прохорова, 1982); Са2+-и М£2+-зависимые АТФазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ), сукцинатдегидрогеназы (СДГ) (Н.П.Мешкова, С.Е.Северин, 1972; М.ИЛрохорова, 1982); глутатионпероксидазы (А.Р.Гаврилова, Н.Ф.Хмара, 1986). Содержание глутатиона определялось по W.W.Kay и соавт. (М.И.Прохорова, 1982); витамина С по T.W.Birch (1933); SH-групп по В.В.Соколсвсксму (1962).
Накопление в организме продуктов перекисного окисления липидов оценивалось по интенсивности биохемилюминесценции (БХЛ), содержанию в органах и тканях диеновых коньюгатов и малонового диальдегида (МДА) общепринятыми методами (Ю.А.Владимиров, АЛАрчаков, 1972; Н.И.Серкиз, 1978).
Содержание микроэлементов в органах и тканях (Na, К, Са, Mg, Zn, Fe, Си) изучалось атомно-абсорбционным методом (Г.И.Аронович, 1979).
Для более полного раскрытия механизмов биологического действия ПАВ дополнительно изучались; состояние биомембран клеток печени и эритроцитов, гормональный и рецепторный статус, нейромедиаторы, внутриклеточный циклазный каскад, аминокислоты, микросомальное окисление, биотрансформация, токсикодинамика и токсикокинетика, оксидантная и антиоксидантная системы.
Состояние фракции фосфолипидов изучалось методом двумерной хроматографии (V.E.Vaskhovsky, T.A.Terekkiove, 1979).
Определение фосфолшшдов производилось по неорганическому фосфору (B.M.Brockhuse, 1974) с идентификацией по стандартным растворам фосфолипидов и качественным обнаружителям (Ю.Кирхнер, 1981).
Аденилатциклазная и гуанилатликлазная системы исследовались в препаратах мембран печени и мозга крыс, об активности судили по уровню цАМФ и цГМФ, поглощения ионов 45Са2+ мембранными фракциями, активности аденилатциклазы (АЦ), гуанилатциклазы (ГЦ) (Г.М.Кравцов, Г.Г.Ряисский, С.Н.Орлов, 1982).
Параметры рецепторного связывания печени и структур головного мозга изучалось радиолигандным методом. Исследовалось состояние at, а2, Р-адрено-, С1, С2-серотониновых, Д2-дофаминовых и 2 типа глкжокортикоидяых рецепторов по общепринятым методикам (ВДРоманенко, 1975). Содержание цАМФ и цГМФ в плазме крови и внутренних органах белых крыс проведено радиоиммунологическим методом с использованием наборов реактивов фирмы Amersham International pic. (Великобритания). Определение простагландинов Ег, Fia, F2a осуществлялось с помощью набора реактивов фирмы Advanced magnetics inc. (США), содержание лейкотриенов В4, С4 с использованием наборов реактивов фирмы Amersham International pic. (Великобритания), пс методу, описанному B.Samuelsson и соавт.(1987).
Состояние монооксигеяазной системы (МОС) оценивалось по дыхательной и ферментативной активности, содержанию цитохромов b5 и Р450. Мембраны эндоплазматического ретикулума выделяли по методу S.A.Komoth, K.A.Narayn (1972). Содержание белка в суспензии микросом определяли модифицированным методом Лоури (Р.П.Марцышаускас и соавт., 1975). Потребление кислорода суспензией микросом регистрировали с помощью закрытого платинового кислородного электрода Кларка на полярографе ПА-3 (ВНР), НАДФН-цитохром с-рсдуктазную активность определяли на двулучевом спектрофотометре "Specord" по L.Ernster и соавт., (1962). Содержание цитохромов Ь3 и Р450 определялось а суспензии микросом по методу T.Omura, R.Sato (1964) .
Биогенные моноамины и их предшественники (адреналин, норадреналин, серотонин, тирозин, ДОФА, дофамин, триптофан) оценивались по Y.Endo, Y.Ogura (1975). Окисление катехоламииов и ДОФА производили методом G.Slabo и соавт. (1983). Спектрофлуориметрическое определение уровней анализируемых соединений осуществлялось на спектрофлуориметре МПР-4 фирмы "Хитачи" после колоночной хроматографии.
Гаптоглобин определялся в сыворотке крови по методу О.Г.Архиповой и соавт (1988); ГАМК - по E.Cormana, C.Vomes, G.Trolin (1980); глютамат - по E.Bernt, H.U.Bergmeyer (1970); а-кетоглютарат - по H.U.Bergmeyer (1970); пкруват - по Н.Д.Ещенко (1982); протеиногеннке аминокислоты исследовались методом ионообменной хроматографии на иокитах с последующим анализом их на автоматическом анализаторе Т-339 (Чехословакия) общепринятым методом (А.А.Зорышн, Б.М.Курцер, А.П.Довганьский, 1985). Хлориды, мочевина,
креатинин и белок в моче изучались общепринятыми методами (В.С.Асатиани, ' ] •
Оценка гормоняльчого статуса у белых кпые проводилась радиоиммунологическими методами. Определение прогестерона осуществлялось с помощью реактивов Стерон-АНЗ; тироксина - РИОТ4-ПГ; трийодтиронина-РИОТЗ-ПГ; инсулина - РИО-Инс.ПГ-1251, глюкагона - РИО Гл-ПГ-125.Г, разработанных институтом биоорганической химии АН БССР; пролактина - с помощью набора реактивов UPR LK-PR компании Oris Industrie S.A. International-cis (Франция); тиреоидстимулирующего - Ria-mdt TSH фирмы Mallinekard Diagnostika (ФРГ); АКТГ - AcTHK-PR компании Oris Industrie S.A. (Франция); кальцитонина - фирмы Amersham International (Великобритания); шотеинизирующего гормона - LHK-PR компании Oris Industrie S.A. (Франция); фолликулостимулирующего гормона - FS НК-РК компании Oris Industrie S.A. (Франция); соматотропного гормона - Ria-guost-KGH (ФРГ).
Влияние ПАВ на генеративную функцию и иммунитет выполнено в :оответствии с "Методическими указаниями по установлению порогов действия промышленных ядов на генеративную функцию с целью гигиенического аормирования"(Москва, МЗ СССР, 1978, № 1744-77) и "Методическими эекомендациямн по оценке влияния факторов окружающей среды на тамунобиологическую реактивность организма (Москва, МЗ СССР, 1981, №
2185-80). Мутагенное действие изучалось согласно "Методических указаний по изучению мутагенной активности химических веществ при обосновании их ПДК в воде" (Москва, 1986 г. №4110-86).
По окончанию подострого и хронического опытов определялись коэффициенты массы внутренних органов (О.Н.Елизарова, 1971).
Гистологическому и гистохимическому исследованию подверглись печень, почки, селезенка, головной мозг, желудок, легкие, сердце с использованием классических методов (О.В.Волков, Ю.К.Елецкий, 19S2). Выраженность обмена ДНК и РНК изучалась по Эйнарсону (1S51). Для определения содержания липидов проводилась окраска Суданом IV, белка - окраска по Даниелли, гликозаминогликанов - окраска тиф-йодной кислотой (Э.Пирс, 1962; А.Хэм, Д.Кормак, 1982). В криостатных срезах внутренних органов определялась активность СДГ, ЛДГ, моноаминоксидазы (МАО), Г-6-ФДГ, альфа-глицерофосфатдегидрогеназы (а-ГФДГ)- В гистохимических реакциях выявления дегидрогеназ акцепторами электронов от окисляемого субстрата служат соли тетразолия, которые при восстановлении приобретают другую окраску (М.Диксон, Э.Уэбб, 1966). Оценка ферментативного статуса клеток основывалась на подсчете количества гранул продукта реакции и оценивалась визуально по методу Astaldi Verga (1957) и цитофогометрически в единицах оптической плотности (В.В.Соколовский и соавг., 1975).
При изучении биотрансформации, токсикодинамики и токсикокинетики ПАВ в моче экспериментальных животных определялись продукты метаболизма исследуемых веществ хроматораспределительным методом (Р.Н.Мокеева и соавт., 1979).
для построския матсмйтйчсскон модслк прогнозй острои к xpohifaccivoh
/>тглта»тт ттх пагпо^лттлттит.тт/
многофакторный анализ (Г.Г.Харман, 1972; Дж. Драйпер, Г.Смит, 1986; М.Б.Славин, 1989), а также метод вероятностной оценки токсического эффекта и структурной обработки эмпирических данных (Э.М.Браверман, И.Б.Мичник, 1983; В.Н.Семенова, 1988).
Оценка состояния здоровья рабочих ПО «Капролактам» г. Дзержинск, НПО «ХЭМЗ» г. Харьков изучалась с помощью интегральных методов: биохемилюминесцешии, фосфоресценции и электрокинетических свойств ядер буккального эпителия (Ю.А.Владимиров, А.И.Арчаков, 1972; В.Г.Шахбазов, 1982).
Результаты исследований статистически обработаны с помощью критерия Стьюдента-Фишера, критерия Х2 и Вилкоксона на ЭВМ - 1ВМРС АТ. В экспериментальной части работы использовано около 4080 белых крыс, 2060 белых мышей, 200 морских свинок.
Для достижения поставленной цели применялись биохимические, биофизические, физические, цитогенетические, токсикологические, иммунологические, радиоиммунные, морфологические, математические и статистические методы.
Результаты исследований.
Комплексная оценка биологического действия 24 детергентов в краткосрочных опытах на перевиваемых клеточных культурах I 929 - линия фибробластов мыши; Х-бЗ-мышиная миелома; Нер-2 - клетки печени и Vero -клетки почек зеленых мартышек показала, что ПАВ в концентрациях 0,1 мг/л и более проявляют цитотоксическое действие, которое характеризовалось появлением округлых клеток, сморщиванием и сползанием их со стекла. Функциональная способность клеток захватывать нейтральный красный краситель снижалась. Инкорпорация 3Н-гимидина, 3Н-уридина, нС-лейцина в культуре ткани - замедлялась, что свидетельствовало о нарушении соответственно синтеза ДНК, РНК и белка. Пороговые концентрации ПАВ на основе оксиэтилированных алкилфенолов, изононилфенолов, гликолей установлены на уровне 1,0 мг/л, для азот- и фосфорсодержащих детергентов - 0,1 мг/л.
Менее чувствительными к детергентам оказались микроводоросли Pedinomonas tenuis и Dunalieüa sallina. В концентрациях 10 мг/л и более ПАВ нарушали подвижность микроводорослей, приводили к коагуляции и выпадению последних на дно модельных водоемов. Пороговые концентрации 5,0 и 10,0 мг/л определены соответственно для азот-, фосфорсодержащих ПАВ и детергентов на основе оксиэтилированных алкилфенолов, изононилфенолов, гликолей. На водных организмах (Daphnia magna) величины пороговых концентраций были идентичны.
Биологическая активность ПАВ с использованием нативных клеток буквального эпителия характеризовалась нарушением структуры цитоплазматической мембраны и снижением процента электроотрицательности ядер. Пороговые концентрации веществ находились в интервале 0,1-1,0 мг/л. Более высокая биологическая активность установлена для азот- и фосфорсодержащих ПАВ.
По результатам острой биологической активности на белых крысах, мышах, морских свинках детергенты относятся к умеренно- и малотоксичным соединениям (3-4 класс опасности). Среднесмертельные дозы установлены в интервале от 1,83 до 26,42 г/кг массы животных. Видовая и половая чувствительность не обнаружена. В клинической картине острого отравления преобладали симптомы нарушения центральной нервной (ЦНС), сердечнососудистой (ССС) и дыхательной системы. Морфологически обнаруживались деструктивные и дистрофические изменения со стороны головного мозга, сердца, печени, почек, надпочечников, селезенки.
Согласно расчета коэффициентов кумуляции (Кк) детергентам присущи выраженные, умеренновыраженные и слабокумулятивные свойства (Кк находились в пределах от 2,2 до 9,5). Кожно-резорбтивным действием обладали все ПАВ, кожно-раздражающим в слабой степени - лапроксиды, фосфор- и азотсодержащие детергенты.
В подостром опыте на белых крысах установлено гипохромную анемию, >ритропению, лейкопению и сдвиг лейкоцитарной формулы влево. Содержание в
крови гемоглобина было снижено под воздействием ПАВ в 1/10; 1/100 ДЛ5() Недействующей дозой на белую и красную кровь была 1/1000 ДЛ50.
Изучение ОВП в подостром опыте обнаружило изменение в органах и тканях активности ферментов ЛДГ, МДГ, ФФК, КФК, Г-6-ФДГ, Са , зависимых АТФаз, альдолазы (АД), АсТ, АлТ, ХЭ, ЛАП, гексокиназы (ГК), ЩФ, гамма-глютаматтрансферазы (у-ГТ), альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы (а-ГБДГ) (табл.1), О-деметилазы, НАДФН, НАДН-цитохром с-редуктазы (табл.4), глутатконпероксндазы, церулотигазмика, персксядазы, катал азы (табл.5), АД, ГЦ, фосфодиэстеразы (ФДЭ) (табл.6), кислой фосфатазы (КФ), ЦХО, АХЭ, содержания глутатиона, гаптоглобина, БН-групп, МДА, диеновых конъюгатов, аскорбиновой кислоты (Р<0,05). Во всех случаях ПАВ в 1/10 и 1/100 ДЛ50 к окончанию подострого опыта повышали БХЛ, МДА, диеновые конъюгаты, активность ЩФ, у-ГТ, АсГ, АлТ, снижали содержание 8Н-групп, глутатиона, гаптоглобина, аскорбиновой кислоты и активность Г-6-ФДГ, Са2+, М§2+-зависимых АТФаз, ЛДГ, МДГ, ФФК, КФК, а-ГБДГ (Р<0,05). Динамика АОС и свободнорадикального окисления (СРО) липидов свидетельствует о развитии в организме дефицита антиокислительной способности тканей. Количественная оценка ОВП выявила снижение продукции опытными животными углекислого газа и накопление в крови метгемоглобина (Р<0,05).
Гистохимически. в большинстве случаев, наблюдалось снижение активности ферментов СДГ, ЛДГ, МДГ, МАО, а-ГФДГ, Г-б-ФДГ (Р<0,05).
Микроскопические исследования препаратов внутренних органов животных, подвергавшихся воздействию 1/10, 1/100 ДЛ50, показали, что все вещества вызывали белковую и жировую дистрофию преимущественно б печени, почках, надпочечниках, селезенке.
Результаты подострого опыта свидетельствовали о том, что ПАВ в 1/10, 1/100 ДЛ=о нарушают ОВП, биоэнергетику, окислительное фосфорилирование и приводят к тканевой гипоксии, в основе которых лежит стимуляция СРО липидов и истощение АОС.
Отдаленные последствия влияния детергентов на организм теплокровных животных и иммунобиологическую реактивность.
При оценке гонадотоксического действия выявлено снижение времени подвижности сперматозоидов, их количества в суспензии придатка, увеличение числа мертвых форм, снижеше осмотической устойчивой и кислотной резистентности при воздействии ПАВ в 1/10 и 1/100 ДЛ50.
Морфологическая оценка сперматогенеза выявила снижение количества сперматогоний, числа канальцев с 12 стадией мейоза и увеличение их числа со спущенным эпителием. 1/100 ДЛ50 не влияла на функциональные и морфометрические показатели гонад.
Эмбриотоксическое действие 1/10, 1/100 ДЛ50 обнаружило снижение массы плодов, увеличение количества резорбций и общей эмбриональной гибели (Р<0,05).
Таблица 1.
Дипамнка биохимических показателей у белых крыс под влиянием детергентов 1/100 ДЛм
(п=12-15, М+т)
Исследуемые показатели Детергенты
Контроль АФ 9-12 АФС 9-6 КМ Амид алии 9 ВС Эфа сол
ЛДГ(ед.экст) сыворотка 403+3,7 30,4+43* 313±2,4* 30,612,8* 30,0+3,5*
МДГ(ед.Бюх-пера), сывор. 15^+2,4 103+23* 10,6+1,8* 10,8+13* 11,9103*
ФФЩмкмоль/ мг белка 1час) печень 8,60+0,16 6^0+0,10* 5,80+0,13* 6,00+0,40* 5,8010,12*
КФК(мкмоль/ мг белка 1час) печень 7,5610,17 6,10±0,27* 6,60+0,14* 4,80+0,55* 53010,40*
Г-6-ФДГ (мкмоль/мгбел. 1 час) печень 130+0,02 0,863+0,013* 0,7410,02* 0,70+0,04* 0,8010,07*
М^АТФаза (мкмоль/мгбел. 1чае) печень 105,9013,72 76,20+4,90* 70,80+4,80* 9430±2^3* 84,5013,70*
Са^АТФаза (мкмоль/мгбел. 1чае) печень 693012,4 57,20+1,17* 60,6013,50* 50,5012,70* 61,5012,70*
Г-6-ФДГ (икатл/кровь 23?,Ъ±0,026 1,35+0,!)) 7* 0,96±0,022* 0,о40_+05и15* 0,73410,013*
Аль10.'З " (мкат_ч)кровь 13810,040 0,75+0,013* 0,84+0,02* П «"1ХП ЛЛ1 О* А -т^л пчт*
АсТ (мкат.л) сыворотка 0.624+0,016 1,5610,021* 1,48+0,017* 1,712+0,030* 1,51410,026*
АлТ (мкат.л) сыворотка 0,924+0,021 1,659+0,030* 1,48010,015* 1,55610,028* 135010,031*
ХЭ (мкат.л) сыворотка 158,43±1,72 96^0+2,4* 103,5+1,80* 80,4211,12* 88Д412Д2*
ЛАП(млмоль/ л)сыворотка 0,94+0,02 0,6010,14* 0,57+0.013* 0,54+0,11* 0,60±0,05*
ЩФ (мкат.л) сыворотка 5,9011,42 14,511,80* 16,713,04* 11,0311,6* 11,1911,66*
У-ГТ (мкат.л) сыворотка 0,05810,02 0,17+0,02* 0,1910,016* 0,22+0,013* 0,126+0,02*
аГБДГ(мкат.л) сыворотка 11,59+2,9 7,40+0,75* 6,80+0,50* 032+0,02* 15,4512,4*
Примечание: * - различия достоверны, Р<0,05.
Детергенты в 1/10, 1/100 ДЛ50 увеличивали число клеток красного костного мозга белых крыс с хромосомными аберрациями и существенно снижали их митотическую активность. Основными типами хромосомных перестроек были делеции, дицентрики, транслокации, одиночные и парные фрагменты, кольцевые хромосомы. Учет доминантных летальных мутаций в половых клетках самцов не установил повышения до- и постимплантационной гибели эмбрионов в 1/1000 ДЛ30. Исследуемые детергенты не проявили генотоксичности на бактериях Escnerihia coli (штамм trp А223) и культуре клеток мышиной миеломы Х-63 в концентрациях до 10 мг/л. Специфических отдаленных последствий влияния детергентов на организм не выявлено. Тератогенный эффект не обнаружен.
Исследования иммунобиологической реактивности организма на мышах линии CBA/Lac показали, что ПАВ снижают антителообразование, гомотрансплацектарную активность лимфатических узлов и селезенки, функциональную активности Г- и В-лимфоцитов, их антигенсвязывающую способность и включение 3Н-уридина, 3Н-тимидина, 14С-лейцина в иммунокомпетентные клетки. Экспрессия на лимфоцитах селезенки E-, АЕ-, ЕАС-рецепторов не нарушалась. Детергенты в 1/10, 1/100 ДЛ30 на белых крысах повышали количество зрелых плазмобластов, снижали уровень незрелых клеток в лимфатических узлах и селезенке. Проведенные исследования свидетельствовали о подавлении ПАВ гуморального и клеточного иммунитета, патогенетическим звеном которого является стимуляция СРО липвдов и истощение АОС. Недействующей дозой была 1/1000 ДЛ50.
Биохимические механизмы формирования структурно-метаболических нарушений при действии на организм ПАВ.
Учитывая, что испытуемые соединения обладают поверхносшо-акшвными свойствами, изучение механизма биологического действия было начато из определения структурно-функционального состояния клеточных мембран. Определялось, в первую очередь, процентное содержание фракций фосфолипидов эритроцитов и гепатоцитов. В эритроцитах анализировались фосфатидилхолин (ФХ), сфингомиелин (СМ), фосфатидилсерин (ФС), лизофосфатидилхолин (ЛФХ) и лизофосфатидилэтаноламин (ЛФЭА). В печени дополнительно изучались ЛФЭА, фосфоинозитол (ФИ), фосфатидная кислота (ФК), кардиолипин (КЛ).
При оценке состояния биомембран, мы принимали во внимание как физико-химические свойства поверхностно-активных веществ, так и высокую радиомиметическую чувствительность жирнокислотных цепей фосфолипидов к воздействию их метаболитов биотрансформации, биологического окисления, таких как - альдегиды, кетоны, спирты.
Детергенты изменяли структурное распределение фракций фосфолипидов в печени и эритроцитах в испытанных условиях воздействия. Поверхностно-активные вещества в значительной степени повышали процентное содержание лизофосфатидилхолина и лизофосфатидилэтаноламина в эритроцитах. Сходные изменения обнаруживались и в печени. Исследуемые соединения под
воздействием 1/100 ДЛ50 в печени снижали сфингомиелин, фосфатидную кислоту и повышали лизофосфатидилэтаноламин, лизофосфатидилхолин. На метаболизм фосфатидилсерина и кардиолипина ПАВ не оказывали влияние.
Результаты показали, что детергенты в 1/100 ДЛ;о повышали во всех случаях, как в печени, так и в эритроцитах, содержание лизоформ фосфолипидов (табл.2,3). Это свидетельствует о количественных и качественных изменениях каталитической активности метаболических процессов в структурно-функциональных единицах клетки и дезинтеграции мембранных компонентов, связанных с рецепторпым аппаратом и маркерными ферментными системами (Ю.ИГубский, 1989).
В современных условиях воздействия на организм факторов окружающей и производственной среды наиболее адекватны методы изучения модифицирующего влияния загрязнителей на уровне микросомальной оксидазной системы (Г.И.Сидоренко, 1989).
В этой связи изучалось влияние веществ на состояние электронно-транспортных систем микросомального окисления (НАДФН-связывающая система с цитохром Р450 в качестве конечного звена и НАДН-система, связанная с цитохромом Ь5 в качестве акцепторов электронов).
Таблица 2.
Влияние ПАВ на фосфолипидньш состав мембран эритроцитов в 1/100 ДЛ50
(н-12-15, М±;а)
Детергенты Исследуемые показатели
ФЭА Фл СМ ФС ЛФХ
Спнтаф 21,0±1,4 46,2+1,8 17,2+1,3 83±2,6 6,9±0,7
10-18 Р>0,05 Р>0,95 Р<0,05 Р<0,05 Р<0,05
Подифос 22,6+1,7 473+2,6 16,6±1,4 9,4+13 7,4±0,5
124 ТМ Р>0,05 Р>0,05 Р<0,05 Р>0,05 Р<0,05
Амндалпн 16,6+1,5 48,5+3,6 16,8+2,1 12,2±3,0 6,8±1,2
9БС Р<0,05 Р>0,05 Р<0,05 Р>0,05 Р<0,05
Неонол 20,1+1,6 453±1,7 18,4±1,5 9,4±0,40 6,5±0,4
АФ 9-4 Р>0,05 Р>0,05 Р<0,05 Р>0,05 Р<0,05
Неопол 18,3±0,6 47,4+2,6 16,2±1,4 9,7+036 7,0±035
АФС 6-9 КМ Р<0,05 0« 1 - Р<0,05 Р>0,05 Р<0,05
Пеназолнн 19,6±13 463±1,8 18,0±0,8 8,9+0,44 5,6±0,20
7-9 Б Р>0,05 Р>0,95 Р<0,05 Р<0,05 Р<0,05
Лапрокснд 21,4+1,8 49,4+2,7 17,8±0,9 8,6±032 5,8+030
303 Р>0,05 Р>0,05 Р<0,05 Р<0,05 Р<0,05
Контроль 22,5+1,5 48,5+1,9 12,8±0,9 11,2±0,9 3,8+0,9
Таблица 3
Влияние ПАВ на фосфолипцдный состав мембран гепатоцитов в 1/100 ДЛ5а
(п=12-15, М±ш)
Детергенты Исследуемые показатели
ФЭА ФХ СМ ФС ЛФХ ЛФЭА ФИ кл
Контр. 25,3+2,1 393±3.1 16,0±0,9 9,0±1,2 1,0+0,4 1,31.0,и 7,7±0,9 0,510,1
Шлиф. 124ТМ 15,2+1,7 Р<0,05 61,6±2,5 Р<0,05 11,2±1,8 Р<0,05 9,9±0,7 Р>0,05 4,8±0,8 Р<0,05 4,0±0,5 Р<0,05 3,6±035 Р<0,05 0,7+0,15 Р>0,05
Амида- Л1Ш 9Г,С 24,1±0,9 Р>0,05 43,0+1,7 Р>0,05 12,9±2,4 Р<0,05 8,8+13 Р>0,05 5,7±03 Р<0,05 4,9+0,5 Р<0,05 4,2±0,7 Р<0,05 0,8±0,2 Р>0,05
Нсонол АФС 96 КМ 20,3±2,4 Р>0,05 44,0+3,2 Р>0,05 113±1,8 Р<0,05 10,0+0,8 Р>0,05 6,3±0,4 Р<0,05 4,6+0,6 Р<0,05 4,1+0,8 Р<0,05 0,9+03 Р>0,05
Пеназо- Лнн 7-9Б 22,5±1,8 Р>0,05 38Д±3,1 Р>0,05 12,4+1,3 Р<0,05 12,7±1,8 Р>0,05 4,8+0,7 Р<0,05 7,0+0,8 Р<0,05 3,9±0,4 Р<0,05 0,6±0,2 Р>0,05
Лапрок сид 303 24,4±13 Р>0.05 39,7+1,6 Р>0,05 12,8±1,1 Р<0.05 103+1,4 Р>0.05 6,5+0,9 Р<0.05 6,2±0,7 Р<0,05 4,1±0,5 Р<0,05 0,7±0,2 Р>0,05
Исследования показали, что все изучаемые группы детергентов активировали О-деметилазу, цитохром Р450, НАДФН и НАДН-цитохром с-редуктазпуто активность, эндогенное дыхание микросом и перекисное окисление липидов (ПОЛ). Испытуемые соединения не влияли на активность питохрома Ь5 (табл.4).
Известно, что МОС эндоплазматического ретикулума является ведущей в обезвреживании ксенобиотиков. В этой связи изучены биологическое окисление, биотрансформация, токсикокинетика и токсикодинамика детергентов.
Хроматографический анализ мочи экспериментальных животных обнаружил полное биологическое окисление азот- и фосфорсодержащих ПАВ. Среди продуктов биотрансформации определялись уксусный, пропионовый, масляный альдегиды, димер формальдегида, метанол, этанол, этилацетат, метилэтилкетон, ацетон, диацетоновый, изопропиловый, изоаллиловый спирты, серный эфир, диоксан.- У групп животных, которые подвергались воздействию оксиэтилированных алкилфенолов, изононилфенолов и гликолей, в моче дополнительно определялись исходные ПАВ, что указывает на частичную биотрансформацию этих детергентов. Во всех случаях основными продуктами биологического окисления были альдегиды, кетоны, спирты. Исследования подтверждают наличие у этих соединений радиомиметических эффектов и свидетельствуют, что продукты биологического окисления ПАВ способны оказывать на организм широкий спектр действия на различные органы, системы и функции, обладая при этом мембраноповреждающем действием (А.М.Кузин, 1986; Н.Г.Щербань, 1999).
Таблица 4.
Влияние детергентов на состояние моноокснгеназной системы печени в 1/100 ДЛ50
(п=12-15,М±т)
Исследуемые показатели Детергенты
Контроль Амидалин 9 БС Неоиол АФ 9-12 Эфасол Лапроксид 303
О-деметилаза (|>"|!СЛ1>р*шГТрОуС- кола/мин мг бел.) 6,69+0,64 15,20+1,90 ?<0,05 13,56+1,82 Р<9,05 10,97+138 Р<0,05 9,6210,90 Р«^0,05
НАДФНцитохром с-редуктаза (нмоль цптохрома с/мин мг белка) 202,0+24,3 270,7133,9 Р<0,05 280,4124,0 Р<0,05 2693±11,4 Р<0,05 273,8119,2 Р<0,05
11АДН-цитохром с-редуктаза (нмоль автохрома с /мин мг белка) 955,1+92,2 1354,5+102,1 Р<0,05 1365,0+103,2 Р<0,05 1597,0+151,6 Р<0,05 1214,2+11,2 Р<0,05
Скор-ть эндогенного дыхания (пмоль 02) 1,40+035 3,05±1,11 Р<0,05 2,73+0,40 Р<0,05 2,42+0,03 Р<0,05 2,52+0,04 Р<0,05
Скорость окисле-пия НАДФН ("нмоль 02) 332+0,40 5,0211,22 Р<0,05 7,16+1,12 Р<0,95 5,62+035 Р<0,05 5,01+038 Р<0,05
Скор-ть окисле-пня НАДФН а присутствии ЭДТА шмоль О?) 2,91+0,52 0,4210,11 4,951037 Р<0,05 5,42+0,66 Р<0,05 43610,17 Р<0,05 4,2810,42 Р<0,05
Скорость ПОЛ (нмоль 02) 1,10+0,06 Р<0,05 1,87+035 Р<0,05 1,68+0,15 Р<0,05 2,54Ю,12 Р<0,05
Цитохром Р450 (нмоль/мг белка) Л |)514-Л ">1 1 /МОО-Л 71*3 Р<0,05 1,473+1,112 Р<0,05 1,47810,110 Р<0,05 1536,0+0,11 Р<0,05
Цитохром Ь5 (нмоль/иг белка) 0,620+0,10 0,554+0,106 Р>0,05 0,58210,120 Р>0,05 034310,106 Р>0,05 0,635+0,113 Р>0,05
В настоящее время накопилось достаточно много сведений о том, что химические соединения способны стимулировать в организме образование окислителей, которым в организме противопоставлены биоантиокислители или тушители возбужденных электронных состояний (Л.А.Бондаренко, 1995). Повышение лизоформ фосфолипидов и активация МОС свидетельствуют об усилении процессов свободнораЯикального перекисного окисления липвдов под влиянием детергентов в испытуемых дозах, а повышение фракций, содержащих холин, указывает на снижение этих процессов в дыхании митохондрий.
Исследования установили, что ПАВ в 1/10/ 1/100/ 1/1000 ДЛ50 повышали БХЛ гомогенатов органов и тканей, а в 1/10/ 1/100 ДЛ50 накапливали в печени и сыворотке крови МДА, диеновые конъюгаты. Добавление в гомогенаты внутренних органов, сыворотку, нативную кровь классического антиоксиданта
цистеина приводило к значительному падению уровня биохемилюминесценции. По данным многих авторов это прямо указывает на развитие свободнорадикальной патологии у экспериментальных животных при воздействии ксенобиотиков на организм (Б.Н.Тарусов, 1972; В.А.Веселовский, 1987; Е.Н.Сидорик и соавт, 1989; В.И.Жуков и соавт., 1999).
Накопление промежуточных продуктов свободнорадикального перекисного окисления липидов ведет к ряду изменений структуры клеточных мембран (Ю.А.Владнмкров, А.И.Арчаков, 1972; Ю.П.Козлов и соавт., 1974; И.А.Тихая, 1997). В результате их воздействия увеличивается проницаемость мембран, нарушается энергетическая стабильность липидного бислоя, возникает структурный и функциональный дисбаланс.
В процессе свободнорадикального окисления и прямого действия ионогенных и неионогенных ПАВ, к которым в нашем случае относятся оксиэтилированные алкилфенолы, гликоли, изононилфенолы, фосфор- и азотсодержащие ПАВ, вымываются и расходуются, прежде всего, менее вязкие ПНЖК, то есть возникает своеобразный порочный круг и возможно развивается цепная реакция (Ю.П.Козлов, 1973, Ю.И.Губский, 1989; Н.Г.Щербань, 1999). Интенсивность этой реакции зависит от состояния антиоксидантной системы, которая тормозит накопление перекисей. Главную роль в защите от свободных радикалов, образующихся при восстановлении кислорода (супероксидный радикал, перекись водорода и гидроксильный радикал), играют ферменты, способные их каталитически обезвреживать (П.Хочачка, Дж.Сомерс, 1988; Л.А.Золотаревская, 1998). К ним относится каталаза, пероксидаза, церулоплазмин, глутатионпсроксндаза, супсроксиддисмутяза. Исследования ооияружили, что все детергенты при длительном поступлении в организм на 60 сутки опыта снижали содержание глутатиона, 5К-групп, галтоглобина, гемоглобина и активность ферментов антирадикальной защиты - пероксидазы, глутатионпероксидазы, каталазы, церулоплазмина, Г-б-ФДГ, СДГ, ЛДГ и др. (табл.5).
По мнению Ю.А.Владимирова, А.И.Арчакова (1972) такая динамика активности оксидантной и антиоксидантной систем подтверждает истощение АОС и стимуляцию ПОЛ под воздействием детергентов.
Экспериментально установлено влияние биоантиокислителей на активность мембранных липид-зависимых ферментов. На их активность сходно влияет как мягкое удаление липидов, так и накопление в мембранах перекисей (А-И.Журавлев, 1982).
В этой связи обнаружено, что ПАВ в 1/10, 1/100 ДЛ50 снижали в организме опытных животных активность КФК, ФФК, Са2+ и М§2+-АТФаз, пероксидазы, каталазы, глутатионпероксидазы, Г-б-ФДГ, альдолазы и др., и повышали АсТ, АлТ, 1ДФ, у-ГТ, что может указывать на мембранную патологию, в основе которой лежит стимуляция СРО липидов.
Известно, что микросомы, кроме МОС содержат в шероховатом отделе эндоплазматического ретикулума ряд фосфатаз, принимающих участие в синтезе фосфолипидов, холестерина, глюкуронидов.
Таблица 5.
Влияние ПАВ на СРО липндов и состояние аитлоксндантной системы
(п=12-15, Й1±т)
Исследуемые показатели Детергенты
Контроль Амид алии 9 БС Неонол АФ 9-12 Эфасол Лапрок-снд 303
Дир||лв1]р кмньюга-тм(нм»ль/л),сьш»р. 2,6 7+Э32 4,13+0,22" 4,36+037* 4,14+0,18* 3,2310,15*
МДА (ымоль/л), сыворотка крови 0,94+0,12 1,52±0,17* 1,861033* 1,5610,10* 1,6210,12*
БХЛ(имп/сек), сыворотка крови 980,0+353 1400,8+27,3* 1260,7+21,5* 1290,21 31,3* 1270,8+ 26,4"
БН-группы (мг%), кровь 68Д±ЗД4 60,6+2,5* 53,013,8* 513±2,07* 48,2+4,26*
Глутатион (мг%), кровь 8,22+0,95 4,18+0,49* 5,12+032* 5,8811,8* 5,65+0,48*
Витампп С (мг%), падпочечники 19,1+0,5 26,610,79* 233210,4* 26,48+0,6* 273±0,54*
Гаптоглобин (г/л), сьтопотхса коовц 23±0,09 0,82+0,20* 13310,10* 0,79+0,10* 0,8010,12*
Глутатпоппероксида за (ммоль ГЯП в г/л)э.м., кровь 57,6212,47 44,931235* 40,801230* 43,62+ 238* 46,131 2,02*
Церулоплазмии Гед.эксг.), сыв.крови 94,7±6,5 74,4+5,7* 70318,5* 70,4+7,1* 76,8+3,5*
Пероксвдаза (усл.ед.), кровь 60,111,4 83,712,5* 91,611,9* 80,5+4,6* 973+2,4*
Каталаза (кат.чпсло), кроаь 8,6±0,б 530+0,4* 6,20+0,18* 5,70+0-33* 6,15+0,17*
Примечание: * - различия достоверные Р<0,05.
Опыты обнаружили снижение активности щелочных и кислых фосфатаз во внутренних органах и увеличение их в сыворотке крови. Электронномикроскопические исследования выявили нарушение структуры мембраны, эндоплазматического ретикулума, в частности, исчезновение ее шероховатой части и уменьшение количества рибосом. Сходные изменения обнаруживались и в других структурных единицах клетки.
Изменение со стороны мембран не могло не сказаться на активности ферментов различных структур клеточного аппарата (Н.ПТаранова, 1988). Состояние маркерных ферментов цитоплазматических мембран (Са2+, К\
На+-АТФаз, АЦ); эндоплазматического ретикулума ( Г-6-ФДГ, ЦХО, цитохрома Р450. НАДФН-дегидрогеназы); пероксисом (каталазы, пероксидазы); лизосом (кислой фосфатазы) и митохондрий (МАО, МДГ, СДГ, цитохром с-оксидазы) показало, что ПАВ к окончанию подострого опыта снижали их активность, что
подтверждает их мембранотропное действие. Испытуемые ПАЕ нарушали динамику и других ферментов. Как правило, они приводили к снижению активности пероксидазы, глутатионпероксидазы, каталазы, церулоплазмина и повышению АсТ, АлТ, ЩФ, 7-ГТ.
Действие веществ может потенцироваться продуктами их биотрансформации (альдегиды, кетоны, спирты). Образование как собственных перекисей липидов (в результате воздействия ПАВ), так и вследствие биотрансформации, нежелательно для организма (Н.Е.Кучеренко, 1980). Чрезмерное их накопление может привести к нарушению жизнскноважных (руккции клеток — наоуханию мех^оран биологических структур, поязлекню дыр в гидрофобном барьере, разобщению окислительного фосфорилирования и дыхания (Н.В.Сергеев, 1973). Полученные результаты исследований полностью это подтверждают на всех внутриклеточных структурах.
Состояние структурной организации клеточных мембран, СРО липидов, антиоксидантной и ферментативной систем тесно связано с обменом микро- и макроэлементов. Исследуемые соединения в основном снижали микроэлементы во внутренних органах и увеличивали их в крови. Такая динамика может быть объяснена структурно-метаболическими'нарушениями со стороны биологических мембран и выходом их в тканевую жидкость и кровь. Между содержанием микроэлементов в органах и тканях к активностью ферментов существует тесная связь. Так, содержание меди и активность медьсодержащих белков-ферментов церулоплазмина, ЦХО, МАО, а также железа и активность железосодержащих ферментов СДГ, пероксидазы, каталазы, глутатионпероксидазы были снижены в органах и тканях. Э.А.Ропаева и соавт. (1966), изучая действие перекисей ненасыщенных жирных кислот (НЖЕ) на активность МАО, установили, что наибольшей способностью тормозить активность Фермента обладают пепекиси НЖК, диеновые коньюгаты, в меньшей мере этими свойствами обладают альдегиды. Продукты ПОЛ способны изменять полимеризацию белковых молекул. В таких условиях ионы металлов не способны встраиваться в активные центры и выводятся из организма (К.А.Ясников, 1982).
В системе клеточного метаболизма важное место принадлежит рецепторной регуляции и состоянию внутриклеточных медиаторов. Действие веществ на состояние адренорецепторов (ссь аг, Р)> дофаминовых Д2; серотониновых — С1, С2; глюкокортикоидных 2 типа рецепторов в различных отделах головного мозга и печени было неоднозначным. По своему влиянию на ссрадренорецепторы ПАВ снижали их сродство к лигандам как в печени, так и в головном мозге в сравнении с контролем. Сходная динамика наблюдалась и для {3-адренорецепторов, за исключением животных, подвергавшихся амидалином 9 БС (головной мозг) и лапроксидом 303 (печень), где сродство лигандов было выше, чем у интактных животных.
Амидалин 9 БС увеличивал количество мест связывания радиолигандов р-адренорецепторами. Неонолы, фосфорсодержащие ПАВ и гликоли выступали в роли агонистов а]-адренорецепторов. В группе животных, подвергавшихся
влиянию неонолом АФС 9-6 КМ, в продолговатом мозге определялись аь сь, Р-адренорецепторы. Для агадренорецепторов характерным было уменьшение сродства лигандов к рецептору, тогда как сродство лигандов к а2-адренорецепторам повышалось. Все детергенты увеличивали содержание Р-адренорецепторов.
Состояние а2-адреналовых, Д2-дофаминовых, С1, С2-серотониновых и глюкокортикоидных рецепторов в коре, стволе и мозжечке головного мозга также было нарушено под воздействием ПАВ. Наибольшие изменения параметров связывания лигандов сь-адренорецепторамл выявлено в коре головного мозга жиавотных, подвергавшихся эфасолом, амидалином 9 БС, лапроксидом 303, неонолом АФС 9-6 КМ и характеризовались снижением активности этого типа рецепторов.
В стволе головного мозга сродство аг-адренорецепторов к лигандам возрастало под влиянием эфасола, амидалина и неонола АФС 9-6 КМ, что указывает на активацию аг-адренорецепторов. Аналогичные изменения были обнаружены и в мозжечке.
У животных всех экспериментальных групп изменялось сродство Д2-рецепторов к лигандам в исследуемых структурах головного мозга (кора, ствол, мозжечок). ПАВ на основе гликолей, неонолы (изононилфенолы) и фосфорсодержащие детергенты активировали Д2-рецепторы, тогда как азотсодержащие вещества подавляли активность этих рецепторов.
Детергенты подавляли активность С 1-рецептороз в коре и мозжечке и практически не влияли на параметры их рецелторного связывания в стволе мозга. В коре наблюдалось снижение содержания С2-рецепторов. Активность этого типа рецепторов возрастала в стволе головного мозга и снижалась в мозжечке. В большинстве случаев отмечалось уменьшение сродства рецепторов к лигандам и количества мест их связывания (Р<0,005).
Таким образом, обнаружено действие веществ на структурно-функциональные единицы клеточных мембран и глубокую перестройку рецепторного звена. Все это приводит к метаболическим нарушениям функции клетки, разобщению окислительного фосфорилирования, инактивации ферментных систем и дезорганизации внутриклеточных структур. Большая роль в поддержании гомеостатической функции организма принадлежит глюкокортикоидам. Исследование рецепторного звена выявило увеличение количества рецепторов этого вида под влиянием ПАВ. Наблюдаемое повышение количества рецепторов, по-видимому, связано с мощным эффектом ядерной транслокации глюкокортикоидных рецепторов второго типа в комплексе со стероидами и отражает напряжение защитно-приспособительных механизмов организма экспериментальных животных в условиях токсического воздействия (Л.В.Сергеева, 1987).
Изучение рецепторного аппарата цитоплазматических мембран установило нарушение передачи внеклеточных сигналов на аденилат- и гуанилатциклазную
системы (АЦ-цАМФ и ГЦ-цГМФ) и внутриклеточные ультраструктурные единицы (табл.6).
Сходная картина наблюдалась при исследовании активирующего влияния биогенных моноаминов и их предшественников при реализации функции системы внутриклеточной медиации. Снижение уровня адреналина, норадренаяина, ДОФА, дофамина приводило к уменьшению сродства к лигандам и мест связывания, а вместе с тем и к инактивации системы цАМФ-аденилатциклаза. Блокирование стимулирующих сигналов в общем виде усиливало активацию тормозных медиаторов (ГАМК, серотонин). Исследования показывают, что гормональный сигнал не может реализовать функцию на уровне рецепторного звена клетки и приводит к нарушению внутриклеточного метаболизма. Содержание гистамина во всех группах животных увеличивалось, способность сыворотки крови связывать его снижалась. Все это позволило заключить о нарушении реализации медиаторного и гормонального эффекта через рецепторное звено и систему внутриклеточных медиаторов.
Нарушение медиаторной регуляции отражало существенное снижение энергообеспечения организма и защитно-компенсаторных механизмов поддержания гомеосгаза. Вместе с этим следует подчеркнуть об усилении активности трофотропной функции организма, избирательно активирующей деятельность внутренних органов, направленной на восстановление клетками и органами энергетических затрат, усиление ассимиляции. Наглядно это проявилось в повышении содержания серотонина, гистамина, инсулина, ГАМК.
Активирующим фактором в образовании цАМФ, цГМФ выступает группа простагландкнов (Е.С.СсБсрин, М.Н.Кочетова, 1985). Однако для перехода их в активную форму необходимо стимулирующее влияние адреналина и норадреналина на рсцсятсрнсс звено.
Исследования обнаружили, что сродство к лигандам адренорецепторов снижается и затрудняет проведение стимулирующего влияния на цАМФ и цГМФ простагландинов. ПАВ нарушали метаболизм предшественников арахидоновой кислоты (Ш ±¿1, ПГЕ2, ПГТ|а, ПП^а). Повышение в плазме крови ПГЕ2 и снижение 111'Hi указывало на мембранотропное действие детергентов (Н.Е.Кучеренко, А.Н.Васильев, 1985). Сходную направленность имели соответственно nTFia и Ш>2а- Лейкатриены С4 и В4 снижались во всех экспериментальных группах.
Поскольку регулирующее действие внеклеточных сигналов на клетку опосредуется цАМФ и цГМФ при участии связанной с мембраной АЦ и ГЦ, то нарушение этой системы внутриклеточной передачи является показателем глубоких метаболических нарушений. ПАВ снижали активность АЦ, содержание цАМФ и ионов Са2+. Изменения каталитической активности аденилатциклазной системы соответствовали кинетике адренорецепторов во всех случаях. Исследуемые вещества оказывали влияние на метаболизм катехоламин-, серотонин-, глутамат-, ГАМКергических систем, которые активно вовлекаются в процесс адаптации и играют существенную роль в генезе неспецифических
Таблица 6.
Влияние ПАВ на состояние медиаторов и «вторичных посредников» (п=12-15, М+ш)
Исследуемые показатели Детергенты
Контроль Лапрокснд 303 Неонол АФ 9-12 Амидалии 9 БС Эфасол
цАМФ (пмоль/ мл), плазма 115,13+12,46 164,51121,01 18032114,17 172,46+13,92 176,23+ 20,15
цГМФ (пмоль/ мл), плазма 9,10+0,86 5,80+0,25 6,90+0,98 4,7010,42 5,4210,63
АЦ(пмольцАМФ /иг белка 1мин), печень 1,96±0,008 2,5710,015 235Ю,001 23110,003 2,9910,014
ГЦ(пмольцГМФ /мг белка 1 мин), мозг 0,75+0,06 1,2610,02 1,42+0,05 1,60+0,12 1,5410,17
АЩпмольцАМФ /мг белка 1 мип), мозг 101,1±9,6 50,45+23 68,9+1,75 73,214,5 57,811,9
ФДЭ(фмоль/мг белка мнн) 4,90+0,15 8,40+031 9,60+0,27 10,5+0,44 7,801032
П"ГЛ0!ЛеНИе 4,Са2+(имп.мин/ мг белка),печень 6721,8+118,2 38,75+148,0 2146,4+105,8 2117,5156,7 4708,5+ 1173
Глутамат(миоль /г ткаин), печень 0,86+0,11 1,95x8,16 2,04+0,08 'у г»-» 1 1\ , *т 1. / 2,11+0,09
ГАМК (ммоль/г ткани), печень 30,0612,05 4634+6,9 473514,86 41,711,9
ДОФА (мкг/г ткани), печень 4,01+031 3,56+0,27 3,40+0,11 2,4210,12 23610,15
Дофамин (мкг/г ткани), печень 1,7610,13 1,0910,25 1,08+0,26 138+0,14 13610,23
Норадреналнн (мкг/г ткани), печень 0,8110,10 0,8010,22 0,4610,25 03510,11 0,48+0,12
Адреналпн(мкг/ г ткани), печень 0,15Ю,02 0,0910,0015 0,08+0,002 0,0810,002 0,08+ 0,0015
Трпптофан(мкг/ г ткани), печепь 14,0011,53 18,98+132 17,46+1,65 23,46+2,81 26,513,17
Серотоиин(мкг/ г ткани), печень 3,0310,76 8,99+1,46 7,24+1,53 130+0,45 1,1310,27
Примечание: различия достоверные Р<0,05,
реакций, в частности, активации симпатоадреналовой и гипоталамо-гипофизарно-кортикоадреналовой системы.
ПАВ снижали в печени и головном мозге содержание адреналина, норадреналина, ДОФА, дофамина и увеличивали триптофан, серотонин. Отмечалась тесная связь между состоянием аденилатциклазной системы и содержанием биогенных нейромедиаторов в органах и тканях.
Исключительную роль в стабилизации биологической активности этих структурных комплексов играет липидное окружение мембран, которое важно при реализации гормонального сигнала и превращении его в источник синтетических процессов внутриклеточными медиаторами. В этих условиях отмечалось повышение активности глутамат-ГАМК системы. Коэффициент ГАМК/глутамат опытных животных был выше контрольных, что указывало на преобладание тормозных процессов над возбуждением.
Результаты исследований свидетельствовали о существенном напряжении адаптационных механизмов, направленных на обеспечение гомеостатической функции, важная роль в которой принадлежит и аминокислотам (СХ.Хайдарлиу, 1985). Так, эфасол повышал в плазме крови уровень треонина, валина, цистина, метионина, изолейшна, фенилаланина, лизина, аспарагиновой кислоты и снижал таурин, серин, глицин, аланин. Фосфорсодержащие ПАВ нарушали утилизацию аминокислот, подавляли биосинтез белков, глюконеогеиез, липогенез. Азотсодержащие детергенты увеличивали ссрусодержащие аминокислоты, тогда как другие ПАВ снижали их количество. Уменьшение содержания этих аминокислот можно, по всей видимости, объяснить использованием их для предохранения соответствующих ферментов от инактивации эндоперекисями (Л.л.оолотарсБСлал, 1998Аау1х1дплг1п значительно повышал ссдср^гсаниз
возможно, на снижение метаболизма в организме. Данные экспериментов подтверждают, что при воздействии ПАВ происходит глубокая перестройка азотистого обмена, проявляющаяся количественными и качественными сдвигами пула свободных плазменных аминокислот.
Адаптация организма к действию различных факторов немыслима без соответствующих изменений метаболизма, ключевую роль в котором играет гормональная система Динамика колебаний гормонального статуса зависела от дозы ПАВ, наиболее значительные изменения отмечались со стороны глюкагона, АКТГ, трийодтиронина (Т3), тироксина (Т4), ТТГ, кальцитонина, инсулина (табл.7).
Высокая корреляционная обратная связь определялась между уровнем Т4, Т3, ТТГ. Повышение уровня Т3 сопровождалось снижением Т4 и ТТГ. Адренокортикотропный гормон во всех экспериментальных животных был увеличен, кальцитонин снижен. Изменения гормонального статуса отражали существенное напряжение защитно-приспособительных механизмов и представляли неспецифическую реакцию организма на вредное воздействие химических токсических факторов (А.И.Робу, 1989; В.Н.Зовский и соавт., 1999).
Таблица 7.
Дипамика изменения гормонального статуса белых крыс под влиянием детергентов
в 1/100 ДЛ5о (11=12-15, М±т)
Исследуемые 110жС*13!1ТЕЛ12 Детергенты
Контроль Лапрокгзд 303 НсЭиОЛ АФ 9-12 11''" 9 ВС Эфзгоя
Т4 (ПМОЛЬ/Л), плазма 116,8219,70 8034110,89 51^87^5)61 70,82120,02
Тэ (нмоль/л), плазма 4,52±0,8 8,0311,60 8,6710,68 9,1310,96 7,36+0,58
АКТГ(нмоль/л), плазма 695,71+20,42 822,1127,06 884,69+203 1047,7121,80 945,54+30,4
ТТГ (пмоль/л), плазма 13,49+1,96 73311,91 73010,81 9,961038 83411,60
Глюкагон(пмоль /л),плазма 208,8911635 154,615,23 131,01730 162317,4 140314,80
Инсулин(мк.ед/ Мл),плаз!иа 253+1,83 48,412,5 37,911,2 56,412,8 45,612,70
Кальцитонйн (мк.ед/мл)плазм 47,10+2,87 253±1)67 1Я 7 4-1 ->1 —-—- 17,11+1,12 183ИД8
Поверхностно-активные вещества, продукты их метаболизма - радиотоксины (альдегиды, кетоны, спирты и др.), а также метаболиты перекисного окисления полиненасыщенных жирных кислот - малоновый диальдегид, диеновые конъюгаты, перекиси, гидроперекиси, свободные радикалы, обладая мембранотропным действием, приводили к повреждению генетического аппарата клетки. Оно выражалось появлением хромосомных аберраций: дицентриков, транслокаций, делеций, разрывов, однонитевых хромосом, значительным снижением митотической активности клеток красного костного мозга, уменьшением синтеза ДНК, РНК и белка, появлением значительного числа клеток ревертантов при оценке генотоксичности.
Известно, что стабильность генетического аппарата поддерживается на физиологическом уровне ферментами, удаляющими поврежденные участки ДНК (фосфодиэстераза, эндонуклеаза, экзонухлеаза), восстанавливающими поврежденные участки ДНК (полимеразы, лигазы, инвертазы, инсертазы, полинуклеотидкиназы). Большинство этих энзимов в своем аллостерическом центре содержат БН-группы, активность которых напрямую зависит от кофакторов Са2+, К+, АТФ, НАД. Изучая ключевые звенья гликолиза,
установлено, что ПАВ, их метаболиты и продукты СРО липидов вначале активировали альдолазу, гексокиназу, фосфофруктокиназу. Этот механизм включается для усиления процессов регенерации АТФ, НАД, так необходимых для восстановительных синтезов ДНК при действии радиотоксинов. В
последующие сроки наблюдения (окончание подострого опыта) установлено нарушение гликолиза и окислительного фосфорилирования. Наблюдения показали снижение инкорпорации 3Н-тимидина и 3Н-уридина в ядерные структуры клеток, что свидетельствует о снижении синтеза ДНК и РНК. Вместе с тем следует полагать о нарушении всего сложного мембранно-структурного комплекса генетического аппарата - хроматина, который содержит ДНК, РНК, кислые структурные белки, пистоны, белки ферменты, иминопротеины и др. Обнаруженное снижение митотической активности клеток красного костного мозга под влиянием детергентов и их радиотоксинов напрямую зависит от суммарного количества ДНК в тканях, и состояния хроматинового мембранного комплекса. Разрушение структуры которого приводит к замедлению начала синтеза ДНК, вызывая задержку деления и вступления клетки в митоз, что может рассматриваться как защитная реакция, увеличивающая время для репарации первичных повреждений (А.М.Кузин, 1986). Длительное воздействие радиотоксинов в больших дозах неизбежно приводит к образованию укороченных цепей ДНК, которые перейдя после митоза в дочерние клетки, явятся причиной образования нормальных двуцепочечных ДНК. Поломка структурной организации ДНК является индикатором деградации всего хроматинового комплекса и отражает состояние репарации ферментов (выщепляющих поврежденные участки ДНК с последующим репарационным синтезом). С другой стороны, экзонуклеазы и протеазы клетки, основная биологическая роль которых состоит в деградации нуклеиновых кислот и белков (для удаления их из клетки), проникая в ядро, будут узнавать места повреждения, гидролизовать поврежденный субстрат и тем самым наносить глубокие вторичные повреждения генетического аппарата клетки (А.М.Кузин, В.А.Копылов, 1983). Именно эти процессы наблюдались нами под воздействием радиотсксинов к продутегов свободнорадикального перекисного окисления липидов, вызывая появление однонитевых разрывов, кольцевых хромосом, делеций, транслокаций, дицентриков. Учитывая, что основными биохимическими реакциями, обеспечивающими энергией внутриклеточные процессы, являются гликолиз, дыхание и сопряженное с ними окислительное фосфорилирование, нами определено нарушение активности КФК, ФФК, ГК, ЛДГ, СДГ, Са2+, Mgгl"-АТФазы, ЦХО, Г-6-ФДГ, ЩФ, ФФК, МДГ и др. В начале подострого опыта в большинстве случаев наблюдалось повышение активности энзимов, а к окончанию эксперимента эти показатели снижались. Увеличение активации ферментов гликолиза отражает мобилизацию энергетических ресурсов для обеспечения ферментативных процессов репарации ДНК. В дальнейшем комплекс эндо- и экзорадиотоксинов снижает дыхание митохондрий и окислительное фосфорилирование (образование АТФ) (А.М.Кузин, 1986).
Поверхностно-активные вещества, метаболизируясь в организме, распадаются на альдегиды, кетоны, спирты. Обладая мембранотропным действием, они приводят к накоплению продуктов деструкции полиненасыщенных жирных кислот - малонового диальдегида, диеновых
конъюгатов, перекисей, идроперекисей, свободных радикшгов, которые стимулируют свободнорадикальное перекисное окисление липидов. В организме продуктам СРО липидов противопоставлена антиоксидантная система. Детергенты в хроническом опыте приводили к истощению антиокислительной способности тканей, что выражалось снижением содержания в организме экспериментальных животных БН-групп, глутатиона, витамина С, гаптоглобина, железа, меди и др. Известно, что кислород, необходимый для процессов пероксидации, потребляется электронтранспортными ферментными системами дыхания и для продукции АТФ, это приводит к понижению парциального давления кислорода в мембранах и сдерживает реакции пероксидации А.М.Кузин, 1986; Ю.И.Губский, 1989). Наличие специфического фермента супероксиддисмутазы (СОД) препятствует накоплению супероксидного анион-радикала кислорода (02"), способствующего перекисному окислению липидов. С другой стороны, ферментная система липооксигеназ, полифенолоксидаз, пероксидаз способствует в норме поддержанию в тканях определенного (очень низкого) уровня биологически высокоактивных продуктов ПОЛ с образованием перекисей, гидроперекисей, свободных радикалов, хиноновых радиотоксинов, альдегидов, кетонов. Свободные радикалы липидов или полифенолов, реагируя с кислородом, дают цепную реакцию ПОЛ с образованием свободных и хиноновых радикалов, Антиоксиданты при появлении продуктов СРО липидов обрывают цепные реакции, недостаток кислорода в таком случае сдерживает цепные реакции ПОЛ и снижает накопление свободных радикалов. Изменения, обнаруженные нами в липид-белковых структурах, их конформации, в значительной мере обусловлены водородными связями и дисульфидными мостиками. Они легко изменяются под воздействием радиотсксиков и продуктов ПОЛ, нарушая структуру липкдного бкслся мембран (Ю.А.Владкмпрсз, А.И.Арчаков, 1972; А.М.Кузин, 1986). Подтверждением чего явилось изменение процентного содержания фракций фосфолипидов и появление их лизоформ (лизофосфатидилхолина, лизофосфатидилэтаноламина). Качественная и количественная перестройка структуры клеточных мембран отразилась на активности специфических мембраносвязанных ферментов МАО, Г-6-ФДГ, АХЭ, пероксидазы, каталазы, СДГ, Са2+, Мв2+-АТФазы, АЦ, ЩФ, ФДЭ, АТФазы, функции системы вторичных посредников медиаторов (цАМФ, цГМФ) и рецепторном аппарате клетки (а1-,а2-,|3-адренорецепторы, Д1, Д2-дофаминовые, С1, С2-серотониновые и глюкокортикоидные 2 типа рецепторы).
Поверхностно-активные вещества, их радиотоксины, нарушая функциональное состояние мембран (проницаемость Ог, ионов, нейтральных молекул, изменение ионного баланса в ядре клетки, особенно Са2\ Mg■'+, К+, ионного равновесия) снижают устойчивость хроматина. Фиксация первично возникающих дефектов ДНК присутствующими в клетке низкомолекулярными биологически активными веществами (альдегиды, кетоны, перекиси, гидроперекиси, свободные радикалы), препятствует их постоянной репарации. Детергенты, образуя в процессе метаболизма радиотоксины и продукты
перекисного окисления липидов, оказывают потенцирующее действие на хроматин и генетический аппарат клетки, что неизбежно влечет за собой возникновение отдаленных эффектов (гонадотоксическое, эмбриотоксическое, мутагенное и тератогенное действие). Появление ошибок в транскрипции и трансляции ведет к возникновению ошибочных сигналов при реализации информации, увеличению нестабильности клеточных систем и вероятности гибели клетки. Все процессы возрастают в зависимости от дозы радиотоксинов, трансформации хромосомной поломки аномальных форм, увеличивающих дестабилизацию метаболизма и гиоель клетки, б основс которой лежит нарушение структурной организации мембран и , активация процессов, ведущих к развитию свободнорадикальной патологии.
Метаболические и токсикокинетические свойства изучаемых веществ хорошо согласуются с выявленными дистрофическими и деструктивными нарушениями внутренних органов. Электронномикроскопические исследования обнаружили изменение структуры мембран митохондрий, эндоплазматической сети, аппарата Гольджи и их функций, напряжение которых отражало состояние биосинтетических и биоэнергетических процессов.
Таким образом, ПАВ стимулировали СРО липидов, накопление перекисей, свободных радикалов, диеновых коньюгатов, МДА. В результате биотрансформации ПАВ образовались альдегиды, кстоны, спирты — вещества, обладающие радиомиметическим эффектом. Продукты ПОЛ и биотрансформации истощали антиоксидантную систему, инактивировали маркерные мембраноспецифические ферменты, нарушали структуру мембран и рецепторного аппарата клетки, что блокировало нервно-гуморальную регуляцию внутриклеточного ыегаослизыы. Зтн изменения привели к нарушению биоэнергетики, бассиягеткческкх процессов, окислительного фссфсрилирсвапия, тканевого дыхания, структурной дезорганизации клеточных биомембран и вторичным изменениям функции различных органов и систем.;
Обладая радиомиметическими и мембранотропными свойствами, детергенты таким образом стимулировали в организме свободнорадикальную патологию, которая представляет собой концептуальную модель механизма биологического действия (рис.1). Основными критериально-значимыми симптомами, обнаруженными при действии на организм детергентов являлись:
- активация СРО липидов и накопление в организме свободных радикалов, перекисей, гидроперекисей, альдегидов, кетонов;
- истощение антиоксидантной системы (снижение БН-групп, глутатиона, витамина С, гаптоглобина и активности супероксиддисмутазы, пероксидазы, каталазы, глутатионпероксидазы, церулоплазмина);
- нарушение структуры мембран, изменение количественных и качественных характеристик их фосфолипидного слоя, появление лизоформ фосфолипидов;
- снижение гемоглобина эритроцитов, лейкоцитов, митотической активности клеток красного костного мозга и повышение гемолиза эритроцитов;
- снижение белоксинтетической функции клеток;
ПОВЕРХНОСТНО-АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА
I
Рис.1. Модель структурно-метаболических механизмов формирования нарушений при действии на организм ПАВ.
- нарушение биоэнергетики, окислительного фосфорилирования и тканевого дыхания;
- снижение активности маркерных мембраносвязанных ферментов (митохондрий, эндоплазматической сети, цитоплазматической мембраны, пероксисом);
- сдвиг гормональной и нейромедиаторной активности в сторону вагоинсулярной (повышение гистамина, серотонина, инсулина);
- подавление клеточного и гуморального иммунитета;
- повышение вероятности возникновения отдаленных эффектов (эмбриотоксический, гонадотоксический, мутагенный, тератогешшй).
Математическая модель прогноза острой и хронической биологической активности детергентов на основе физико-химических констант.
Имеющиеся и вновь синтезируемые химические вещества, вводимые в производство и быт, требуют оперативного контроля установления потенциальной опасности их для человека и окружающей среды. Определение связи между структурой вещества и его биологическим эффектом позволяет своевременно исключить из производства биологически активные и опасные химические вещества.
В разработке модели ппогаоза острой и хронической биологической активности ПАВ использовался комплексный подход, включающий анализ многих и разнообразных показателей, которые обладают различной степенью влияния на суммарную биологическую активность вещества. Среди них были
такие, KSK СКОрОСТЬ ОКИСЛСКИЯ. TSMUSpSTypS ВСПЫШКИ, ЗКВИВ2ЛгПТ11ил Mü-CCü..
вязкость, функциональность, кислотное и тидроксильное число, степень ионизации, массовая доля стартового вещества, окиси этилена и пропилена и др. Возможность решения такого рода вопроса дало применение методов многомерного статистического анализа (А.Афифи, С.Эйзен, 1982; М.Б.Славин, 1989).
Применение многомерного статистического анализа позволило выделить наиболее существенные константы, влияющие на биологическую активность веществ и построить математическую модель прогноза острой и хронической биологической активности ПАВ.
Ln(S/yi50) = Коас + К,(Моп - Моз) + К2 Тв + К3 у + К, А + К5ср, где S -растворимость; Моп - массовая доля окиси пропилена; Моэ -массовая дояя окиси этилена; Тв - температура вспышки; у - вязкость; А -кислотное число; ср - функциональность; К- коэффициенты пропорциональности;
К,=0,13; Кг—0,025; К3=-З,2х10"5; К4=13,94; Кг=0,015; Коас=7,32. Аналогичная модель разработана для прогноза хронической биологической активности с изменением Коас на Koch, которое имеет значение для всех ПАВ 0,007, а для фосфор- и азотсодержащих - 0,0007. Данная модель хорошо объясняет основной механизм биологического действия для всей группы веществ.
Она позволяет прогнозировать степень острой и хронической биологической активности на этапах получения новых химических соединений данного класса и может использоваться при экспресс-опенки потенциальной опасности и гигиенической регламентации детергентов новых марок в объектах окружающей среды.
Критериально-значимые информативные показатели в диагностике свободиорадикальиой патологии у рабочих производств ПАВ и CMC.
Разработка вопросов количественной сценки влияния различных факторов окружающей среды на состояние здоровья и выделение критериально-значимых диагностических показателей, позволяет в конечном счете прогнозировать возможные сдвиги в состоянии здоровья населения в зависимости от экологической ситуации на перспективу.
Для оценки состояния здоровья нами использовались высокочувствительные методы - биохемилюминесценция, фосфоресценция и электрокинетические свойства ядер буккального эпителия.
Усиление фосфоресценции и ПОЛ имели высокую корреляционную связь со скоростью старения организма, оценка которого осуществлялась по элекгрокинетическим свойствам ядер буккального эпителия. Результаты выявили увеличение биологического возраста рабочих, занятых на вредных участках производств в среднем на 5-8 лет по сравнению с паспортными сведениями и эталонными стандартами (В.Г.Шахбазов, 1982). Используемые методы позволяют судить о степени нарушения гомеостаза организма и делать прогностическое заключение в плане развития отдаленных эффектов. В этой связи, несмотря на сложность выделения ведущих вредны:-: факторов, биохемилюминесценция, фосфоресценция и элекгрокинетические свойства ядер буккального эпителия отражают интенсивность свободнорадккальных процессов и скорость старения организма.
Использование биофизических методов при интегральной оценке функционального состояния основных систем организма позволяет получить характеристику здоровья населения на уровне "донозологических сдвигов". Это в свою очередь создает предпосылки для обоснования мер первичной профилактики по отношению к антропогенным факторам окружающей среды на самых ранних стадиях их неблагоприятного влияния. Наблюдения обнаружили высокую корреляционную связь между показателями БХЛ, фосфоресценции, электрокинетическими свойствами ядер буккального эпителия и рядом простудных, воспалительных и обменных заболеваний. Исследования показывают, что высокочувствительные интегральные биофизические методы могут быть использованы в медико-биологических исследованиях как критериально-значимые при изучении и диагностике свободнорадикальной патологии в донозологической оценке состояния здоровья населения.
ВЫВОДЫ.
1. Фосфорсодержащие, азотсодержащие ПАВ, а также детергенты на основе оксиэтилированных алкилфенолов, изононилфенолов, гликолей в концентрациях
0,1 мг/л и более оказывают на перевиваемые культуры клеток Нер-2, Vero, Х63, J929 цитостатическое действие, в основе которого лежит нарушение синтеза ДНК, РНК, белка. Биологическая активность на нативных клетках буккального эпителия характеризовалась нарушением структуры цитоплазматических мембран и снижением процента электроотрицательности ядер. ПАВ в концентрациях 5,0 мг/л и более снижали подвижность и вызывали коагуляцию одноклеточных водорослей (Pedinomonas tenuis, Dunaliella salina), тормозили рост и размножение дафний. Пороговые концентрации для культур клеток и буккального эпителия составляли 0,1 и 1,0 мг/л; водорослей и дафний 10,0 а 20,0 мг/л соответственно для фосфор-, азотсодержащих ПАВ и детергентов на основе оксиэтилированных алкилфенолов, изононилфенолов, гликолей.
2. ПАВ, по результатам острой биологической активности на белых крысах, белых мышах, морских свинках относятся к умеренно- и малотоксичным (3-4 класс опасности). Среднесмертельные дозы были на уровнях от 1,83-26,4 г/кг массы животного. В клинической картине острого отравления преобладали симптомы нарушения ЦНС, дыхания и гемодинамики. Исследуемым веществам присущи выраженные, умеренновыраженные и слабокумулятивные свойства. Коэффициенты кумуляции составляли от 2,1 до 9,5. Видовой и половой чувствительностью детергенты не обладали. Кожно-резорбтивные свойства присущи всем ПАВ, кожно-раздражающие проявились у лапроксидов и неонолов. Азотсодержащим ПАВ присущи более высокая биологическая активность и кумулятивные свойства.
3. Биохимические механизмы биотрансформации, токсикодинамики и токсикскинетики сопровождаются окислением ПАВ в монооксигеназной системе эндоплазматического регикулума печени с образованием низкомолокулярных метаиолиюв — альдегидов, кетоков, спиртов, которые совместно с продуктами ПОЛ модулируют в организме свободнорадикальную патологию. Фосфор- и азотсодержащие ПАВ полностью подвергаются биологическому окислению в МОС, остальные группы детергентов выводятся частично из организма в неизменном виде.
4. Концептуальная модель механизма биохимического действия ПАВ заключается в том, что они при поступлении в организм стимулируют СРО липидов, истощают антиоксидантную систему, нарушают биоэнергетику, биосинтетические процессы, окислительное фосфорилирование, которые приводят к тканевой гипоксии, структурным изменениям мембран и как следствие вторичным нарушениям функции органов и систем организма.
5. Поверхностно-активные вещества модулируют радиомиметические эффекты, основными симптомами которых являлись: накопление в организме продуктов СРО липидов; истощение АОС; нарушение структуры биологических мембран; снижение количества клеток красной и белой крови, содержания гемоглобина и повышение лизиса эритроцитов; снижение митотической активности клеток красного костного мозга; снижение белоксинтетической функции клеток и активности маркерных мембраноспецифических ферментов;
снижение биоэнергетики, разобщение окислительного фосфорилирования и тканевого дыхания; подавление гуморального и клеточного иммунитета; сдвиг гормональной и нейромедиаторной активности в сторону вагоинсулярной, которые формируют общий синдром вегето-сосудистой дистонии; возникновение возможных отдаленных эффектов и ускорение старения организма.
6. Математическая модель прогноза острой и хронической биологической активности отражает основной механизм биологического действия ПАВ, подтверждает, что ведущими физико-химическими параметрами, определяющими биологическую активность молекулы детергента являются гидрофобные радикалы, гидрофильные группы, сила углерод-водородных и межмолекулярных связей. Разработанная модель свидетельствует, что биологическая активность ПАВ тесно связана с механизмами их окисления, нейтрализации и выведения. Установлено, что молекулярная масса, растворимость, функциональность, плотность, степень оксиэтилирования, кислотное число, коэффициент распределения, ионизации слабо влияет на общую биологическую активность ПАВ.
7. Критериально-значимыми информативными показателями диагностики свободнорадикальной патологии являлись биохемилюминесценция, фосфоресценция и электрокинетические свойства ядер буккального эпителия. Они дают возможность определить степень нарушения гомеостаза, регистрировать первичные процессы, происходящие на молекулярном уровне в биомембранах и судить об ускорении старения организма. Высокочувствительные биофизические методы использованы в мониторной оценке влияния окружающей среды на Формирование радиомиметических эффектов у рабочих производств ПАВ и CMC.
8. Результаты исследовании по обоснованию молекулярных механизмов биохимического действия ПАВ, биотрансформации, токсикокинетики, токсикодинамики, математическому моделированию биологической их активности, использованы в комплексной программе по научному обоснованию 24 Государственных нормативов и разработке лечебно-оздоровительных мероприятий на производствах ПАВ и CMC.
Список основных работ, опубликованных по теме диссертации
1. Бондаренко Л.А., Жуков В.И., Сидоренко H.A., Тищенко С.Р., Кудымова Т.В. Гигиеническое обоснование ПДК поверхностно-активных веществ группы неонолов на основе тримеров пропилена в воде водоемов // Гигиена и санитария. -Москва: Медицина. - 1988. 3. - С. 68-69.
2. Красовский Г.Н., Жуков В.И., Бондаренко Л.А., Дергачева Т.С. Применение метода биохемилюминесценции в санитарно-токсикологических исследованиях // Гигиена и санитария. - Москва: Медицина. - 1989. - № 11. - С. 35-39.
3. Жуков В.И., Шахбазов В.Г., Колупаева Т.В., Рак A.B. Изучение влияния на организм человека условий химического производства по электрокинетическим
свойствам клеточных ядер // В мат. совещания: Биоэлектрические свойства клеточного ядра и состояние организма. - Харьков. - 1989. - С. 32-33.
4. Кратенко И.С., Жуков В.И., Кривоносов М.В. Оценка состояния здоровья рабочих производства тормозной жидкости «Роса» с помощью биофизических и цитогенетических методов исследования // В мат. совещания: Биоэлектрические свойства клеточного ядра и состояние организма. - Харьков. - 1989. - С. 56-61.
5. Зайцева О.В., Жуков В.И., Бондаренко Л.А., Абашин В.М. Использование биохемилгаминесценции и фосфоресценции при изучении влияния химических факторов производственной среды на организм // В мат. 1 Респ. копф.: Новые физические методы в медицине. - Ворошиловград. - 1990. - С. 20-21.
6. Дехтярь A.B., Жуков В.И. Особенности механизма биологического действия фосфорсодержащих ПАВ на организм // В сб.: Актуальные вопросы патологической анатомии. - Харьков. - 1990. - С. 67-69.
7. Дехтярь A.B., Жуков В.И. Состояние системы микросомального окисления как критерий оценки воздействия на организм некоторых фосфорсодержащих ПАВ // В сб.: Актуальные вопросы патологической анатомии. - Харьков. - 1990. -С. 69-72.
8. Жуков В.И. Использование многомерного статистического анализа в прогнозировании острой и хронической токсичности простых полиэфиров в связи с проблемой санитаркой охраны водоемов // В сб.: Профилактическая токсикология ксенобиотиков. -Харьков.- 1992. - С. 8-13.
9. Жуков В.И. Изменение аминокислотного состава плазмы крови белых крыс под влиянием олигоэфирмоноэпоксидов в условиях подострого воздействия // В сб.: Биологически активные вещества и регуляция Функций мозга. - Харьков. - 1993. -С. 119-121.
10. Бондаренко Л.А., Жуков В.И., Щербань Н.Г. Поверхностно-активные вещества как источники образования радиотоксинов // В сб.: Биологическое действие химических соединений и гигиенические мероприятия. - Харьков. -1993.-С. 11-14.
11. Шахбазов В.Г., Жуков В.И., Колупаева Т.П. Влияние условий труда на биологический возраст рабочих // В сб. Эколого-гигиенические аспекты производственной и окружающей среды. -Харьков. - 1995. - Ч. 1. - С. 51-55.
12. Шахбазов В.Г., Колупаева Т.В., Жуков В.И. Применение новой цитобиофизической методики для определения токсичности некоторых веществ, загрязняющих воздух в цехах химического комбината // В сб. Эколого-гигиенические аспекты производственной и окружающей среды. - Харьков. -1995.-Ч. 1.-С. 56-59.
13. Жуков В.И., Бондаренко Л.А. Влияние фосфорсодержащих ПАВ на монооксигеназную систему и перекисное окисление липидов белых крыс в условиях подострого опыта // В сб.: Медицинская экология, гигиена производственной и окружающей среды. - Харьков. — 1995. - С. 25-30.
14. Жуков В.И. Структурно-метаболические нарушения внутренних органов белых крыс, подвергшихся пероральному воздействию
олигоэфирмоноэпоксидами // В сб.: Актуальные вопросы профилактической медицины. - Харьков. - 1996 . - С. 48-50.
15. Григорова И.А., Григоров Б.И., Погорелов В.Н., Зовский В.Н., Жуков В.И. Этиология и патогенетические механизмы модельного атерогенеза. -Харьков: РИП «Оригинал», 1997. - 254 с.
16. Резуненко Ю.К., Жуков В.И. Влияние лапроксидов на интенсивность биохемилюминесценции сыворотки крови и внутренних органов в токсикологических исследованиях. - Клиническая фармация. — 1998. - Т. 2, №3. — Харков. - С. 62-64.
17. Жуков В.И., Золотаревская Л.А., Григоров Б.И., Погорелов В.Н. Структурно-функциональная теория биологического действия радиотоксинов. -Харьков: Основа, 1998. - 225 с.
18. Золотаревская Л.А., Жуков В.И., Зовский B.II., Григоров Б.И., Погорелов В.Н. Биологическая активность детергентов в связи с проблемой охраны водных экосистем . - Харьков: РИП "Оригинал". - 1998. - 174 с.
19. Резуненко Ю.К., Жуков В.И. Состояние окислительно-восстановительных процессов у белых крыс под влиянием эпоксидсодержащих олигоэфиров в связи с регламентацией их в воде водоемов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового назначения // Проблемы экологии и медицины. - 1999. - № 1-2. - С. 4951.
20. Зайцева О.В., Жуков В.И., Дсхтярь A.B., Кратенко Р.И., Резуненко Ю.К. Влияние детергентов на метаболические процессы белых крыс в условиях подострого эксперимента // В сб.: Эпидемиология, экология и гигиена. - Харьков. _ - 1999. - Вып. 2. - С. 154-155.
21. Жуков В.И., Резуненко Ю.К., Зайцева О.В. Тормозные и гидравлические жидкости. Гигиенические аспекты охраны окружающей и производственной среды. - Харьков, 1999. - 170 с.
22. Денисов В.М., Руказишникоза С.М., Жуков В.И. Биохимия миокарда, поврежденного адреналином.-Харьков: Оригинал, 1999. - 184 с.
23. Жуков В.И. Изменение фонда микроэлементов белых крыс под воздействием фосфорсодержащих ПАВ // В сб.: Медицинская экология. Гигиена окружающей и производственной среды. -Харьков. - 1999. - С. 126-127.
24. Жуков В.Й., Зайцева О.В. Влияние группы фосфорсодержащих ПАВ на фосфолипидный состав эритроцитов и гепатоцитов белых крыс при пероральном пути введения // В сб.: Медицинская экология. Гигиена окружающей и производственной среды. - Харьков. -1999. - С. 129-131.
25. Жуков В.И. Метаболизм биогенных моноаминов и циклических нуклеотидов у крыс, подвергавшихся воздействию неонолов // В сб.: Медицинская экология. Гигиена окружающей и производственной среды. -Харьков.- 1999.-С. 131-134.
26. Жуков В.И. Динамика аминокислотного состава плазмы при воздействии фосфорсодержащих ПАВ // В сб.: Медицинская экология. Гигиена окружающей и производственной среды. -Харьков. - 1999. -С. 135-138.
27. Жуков В.И. Влияние лапроксидов на генеративную функцию и генетический аппарат белых крыс в связи с регламентацией их в воде водоемов // Проблемы экологии и медицины. - Полтава. - 1999. - № 1-2. - С. 55-59.
28. Жуков В.И., Резуненко Ю.К., Зайцева О.В. Медико-биологические аспекты проблемы загрязнения водных объектов поверхностно-активными веществами. - Харьков, 1999. - 394 с.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АлТ- алашшамшютрансфграза АсТ- аспартатаминотрансфераза АОС-антиоксидантная система АЦ- аденилатциклаза АХЭ-ацетилхолинэстераза а-ГБДГ-гидроксибутиратдегидро-геназа
а-ГФДГ- глицерофосфатдегидро-геназа
Г-б-ФДГ-глюкозо-б-фосфатдегидро-геназа
у-ГТ - глютаматгрансфераза ГЦ - гуанилатциклаза КЛ - карднолипин КФК - креатинфосфокиназа КФ - креатинфосфат ЛАП - лейцинаминопептидаза ЛДГ - лактатдегидрогеназа ЛФХ - лизофосфатидилхолин ЛФЭА-лизофосфатидилэтанол-амин
МАО - моноаминоксидаза МДА - малоновый диальдегид МДГ - малатдегидрогеназа ОВП -окислительно-восстановительные процессы
ПАВ - поверхностно-активные
вещества ПОЛ -перекисное окисление
липидов СДГ - сукцинатдегидрогеназа СМ - сфингомиелин CMC- синтетические моющие
средства СРО - свободнорадикальное перекисное окисление ХЭ - холинэстераза ФИ - фосфатидилинозитол ФДЭ -фосфодизстераза ФС - фосфатидилсерин ФХ- фосфатидилходин ФФК -фосфофруктокиназа ФЭА -цюсфатидклэтаноламик ССС-сердечно-сосудистая
система ЩФ - щелочная фосфатаза ЦНС -центральная нервная
система ЦХО - цитохромоксидаза
Содержание диссертации, доктора биологических наук, Жуков, Виктор Иванович
ВВЕДЕНИЕ.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА 1. Медико-биологические аспекты проблемы загрязнения окружающей среды поверхностно-активными веществами.
1.1 .Медико-экологическая проблема загрязнения водоемов поверхностно-активными веществами.
1.2. Биологическая характеристика ионогенных и неионогенных ПАВ.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 2. Обоснование выбора объектов, направления и методов исследования.
2.1. Обоснование выбора объектов и направления исследования.
2.2. Методы исследования, используемые в работе.
ГЛАВА 3. Биологическая активность азот-, фосфорсодержащих ПАВ и детергентов на основе гликолей, оксиэтилированных и карбокси-метилированных алкилфенолов в острых и подострых опытах.
ГЛАВА 4. Отдаленные последствия влияния детергентов на организм теплокровных животных и иммунобиологическую реактивность.
ГЛАВА 5. Экспериментальное изучение механизма биохимического действия исследуемых поверхностно-активных веществ.
5.1. Влияние ПАВ на фосфолипидный состав эритроцитов и гепатоцитов.
5.2. Активность системы микросомального окисления.
5.3. Состояние антиоксидантной системы и окислительно-восстановительных процессов.
5.4. Содержание микроэлементов в органах и тканях.
5.5. Действие неонолов, фосфор-, азотсодержащих ПАВ и детергентов на основе гликолей на дофаминовые, глюкокортикоидные, серотониновые и адреналиновые рецепторы.
5.6. Особенности метаболизма биогенных аминов и циклических нуклеотидов.
5.7. Состояние гормонального статуса под воздействием поверхностно-активных веществ.
5.8. Динамика аминокислотного состава плазмы крови под воздействием ПАВ.
5.9. Гистологические, электронномикроскопические и гистохимические исследования внутренних органов белых крыс.
ГЛАВА 6. Разработка математической модели прогноза острой и хронической биологической активности детергентов на основе физико-химических констант.
ГЛАВА 7. Изучение свободнорадикального перекисного окисления липидов и скорости старения организма рабочих производств ПАВ и CMC с помощью информативных критериально-значимых диагностических показателей.
7.1. Использование биофизических методов в комплексной оценки состояния здоровья рабочих.
7.2.Оценка состояния здоровья рабочих с помощью интеграль биофизических методов.:.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.
ВЫВОДЫ.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Структурно-метаболические механизмы формирования нарушений при действии на организм детергентов"
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Интенсивная деятельность человека на современном этапе развития науки, технологии и техники привела к появлению в биосфере громадных масс химических, токсических веществ, которые в разной степени обладают биологической активностью. Наши знания о возможных последствиях их воздействия ограничены и явно недостаточны для тех соединений, с которыми человек в процессе своей эволюции прежде не встречался. Возник значительный разрыв между высокой способностью современной цивилизации создавать новый химический потенциал планеты и ограниченными возможностями человека и биосферы в целом воспринять действие этого потенциала с достаточной эффективностью и без серьезных последствий. В настоящее время создана такая ситуация, когда воздействие комбинации различных химических соединений на человека и живую природу в целом трудно предсказать. Бесконтрольное использование химических соединений может иметь непоправимые последствия. Существуют многочисленные примеры интенсивного загрязнения производственных территорий и цехов, водоемов и почвы, говорящие о вреде, который может быть нанесен здоровью, флоре и фауне.
По мнению многих авторов (А.М.Кузин, В.А.Копылов, 1983; Ю.А.Владимиров, А.И.Арчаков, 1979; В.И.Куликов, А.В.Семенюк, Л.И.Колесникова, 1988; В.Ю.Куликов, Г.В.Далевич, 1974; Л.А.Куликова, 1972, В.И.Жуков, 1991, Л.А.Бондаренко, 1995; В.А.Канищев, 1997; В.А.Телегин, 1997; В.И.Жуков, Ю.К.Резуненко, О.В.Зайцева, 1999), значительное количество химических соединений способны модулировать радиобиологические эффекты, обладают мембранотропным действием, вызывают в организме свободнорадикальную патологию, подавляют гуморальный и клеточный иммунитет, оказывают мутагенное, гонадотропное и эмбриотропное влияние. Это в полной степени относится и к не изученным поверхностно-активным веществам, которые широко используются в различных отраслях народного хозяйства, таких как: фосфорсодержащие, азотсодержащие поверхностно-активные вещества (ПАВ), а также детергенты, полученные на основе оксиэтилированных алкилфенолов, изононилфенолов и гликолей. Интерес к данным группам ПАВ обусловлен большим объемом производства и значительным их контактом с населением. В существующей литературе нет сведений о потенциальной опасности и биологической активности новых групп ПАВ для теплокровных животных и биосферы в целом. Отсутствуют данные о регламентации этих веществ в объектах окружающей среды. Все это не позволяет прогнозировать возможное неблагоприятное воздействие соединений для населения, флоры и фауны. В связи с этим, изучение влияния новых групп ПАВ на метаболические и обменные процессы в организме, является необходимым условием при обосновании безвредных уровней содержания их в объектах окружающей среды.
Широкий контакт населения с ПАВ ставит перед медиками и биологами задачу своевременного обоснования донозологических высокочувствительных показателей ранних проявлений биологической активности детергентов и оперативного контроля за состоянием здоровья рабочих, населения и окружающей среды. Решение этих вопросов требует глубокого изучения биотрансформации, токсикодинамики, токсикокинетики и молекулярных биохимических механизмов, лежащих в основе формирования структурно-метаболических нарушений при действии на организм ПАВ с учетом возможных отдаленных эффектов. Исходя из этого, актуальным является изучение функционального состояния биологических мембран, монооксигеназной системы, свободнорадикального перекисного окисления липидов, рецепторного аппарата клеточных структур, нейрогуморальной регуляции, биоэнергетики, окислительного фосфорилирования при действии на организм детергентов. Большие объемы и широкое внедрение в производство и быт поверхностно-активных веществ ставят важную и актуальную задачу своевременной экспресс-оценки биологической активности и опасности новых групп детергентов.
Актуальность исследований подчеркивается также тем, что они выполнены по проблеме «Биохимия и патохимия обмена веществ, механизмы их регуляции и медицинская энзимология» в рамках комплексной Государственной программы 0.10.04 (№ государственной регистрации 01860021125) и программы ГКНТ 020 «Новые химические материалы», утвержденной ГКНТ 30.10.85 г. № 555, и вошли составной частью при обосновании Государственных стандартов (ПДК).
Все вышесказанное обосновывает актуальность изучения биохимических механизмов формирования структурно-метаболических нарушений при действии на организм детергентов и определения их потенциальной опасности для человека и окружающей среды.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью настоящей работы явилось экспериментальное и теоретическое обоснование биохимических механизмов формирования структурно-метаболических нарушений при действии на организм поверхностно-активных веществ и определение прогноза потенциальной опасности их для человека и окружающей среды.
Достижение поставленной цели решалось с помощью следующих задач:
1. Изучить биологическую активность фосфорсодержащих, азотсодержащих ПАВ, а также детергентов, полученных на основе оксиэтилированных алкилфенолов, изононилфенолов и гликолей в условиях острого и подострого экспериментов на клеточном, тканевом и организменном уровнях.
2. Исследовать структурно-функциональную организацию биомембран, интенсивность свободнорадикальных процессов и состояние антиоксидантной системы под воздействием ПАВ в хроническом опыте.
3. Изучить биохимические механизмы формирования структурно-метаболических нарушений в организме при хроническом поступлении ПАВ, их биотрансформацию, токсикодинамику, токсикокинетику с учетом влияния детергентов на иммунобиологическую реактивность, генеративную функцию и генетический аппарат.
4. Разработать на основании многомерного статистического анализа математическую модель прогноза острой и хронической биологической активности детергентов в зависимости от их физико-химических дискрипторов и констант.
5. Обосновать концептуальную модель механизма биологического действия ПАВ и структурно-метаболические нарушения, формирующие в организме развитие радиомиметических эффектов с использованием данных, полученных на молекулярном, субклеточном, клеточном, тканевом, органном системном и организменном уровнях.
6. Выявить и обосновать комплекс информативных критериально-значимых донозологических показателей ранней диагностики установления свободнорадикальной патологии у рабочих производств ПАВ и CMC при мониторной оценки состояния здоровья, определении биологической активности детергентов в эксперименте и натурных исследованиях.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Впервые проведен комплексный сравнительный анализ биологической активности новых групп детергентов на молекулярном, клеточном, тканевом, органном, организменном и популяционном уровнях. Получены новые экспериментальные результаты, объясняющие механизм биотрансформации поверхностно-активных веществ в монооксигеназной системе печени. Определены метаболиты биологического окисления ПАВ в организме и показана их роль в развитии структурно-метаболических нарушений органов и тканей. В работе обоснованы биохимические механизмы токсикодинамики и токсикокинетики детергентов.
Впервые, на различных уровнях структурной организации биологических объектов, с использованием системного подхода изучено влияние детергентов на белковый, жировой и углеводный обмен, интенсивность свободнорадикальных процессов, антиоксидантную систему, окислительное фосфорилирование, биоэнергетику, структуру биологических мембран, рецепторное звено, внутриклеточную медиацию, гормональный статус, пул свободных плазменных аминокислот, фонд микро- и макроэлементов. Установлены и раскрыты биохимические механизмы развития свободнорадикальной патологии под влиянием ПАВ и определена ее роль в формировании вторичных нарушений со стороны различных органов, систем и функций организма. Выявлены ключевые звенья нарушения метаболизма, лежащие в основе тканевой гипоксии, отдаленных эффектов, подавления клеточного и гуморального иммунитета.
Впервые, на большом фактическом материале установлено, что детергенты, а также метаболиты их биотрансформации и биологического окисления способны модулировать в организме развитие радиомиметических эффектов и выступать в роли имиттеров радиотоксинов, что имеет важное научное значение при составлении прогноза потенциальной опасности для человека и окружающей среды. Раскрыты ведущие молекулярные биохимические и структурно-метаболические нарушения в организме, подвергающемуся хроническому воздействию детергентов. Обоснована концептуальная модель механизма биологического действия ПАВ.
Впервые, с помощью многофакторного анализа выявлены количественные корреляционно-регрессионные зависимости между дискрипторами физико-химических параметров детергентов и биологической активностью в остром и хроническом опытах, что позволило разработать на их основе математическую модель прогноза биологической активности и опасности вновь синтезируемых и внедряемых ПАВ в народное хозяйство.
Установлены ведущие физико-химические константы, определяющие биологическую активность молекулы ПАВ, которыми являются гидрофобные радикалы, гидрофильные группы, сила межмолекулярных и внутримолекулярных связей. Модель прогноза острой и хронической биологической активности тесно связана с механизмами биологического окисления, нейтрализации и выведения ПАВ из организма. Доказано, что полное биологическое окисление азот- и фосфорсодержащих детергентов делает эти вещества более токсичными и подтверждает основной механизм их биологического действия.
Результаты проведенных комплексных исследований позволили сформулировать глубокое и всестороннее представление о влиянии ПАВ на метаболические процессы, оценить потенциальную их опасность для человека и обосновать критериально-значимые диагностические показатели, характеризующие наличие в организме свободнорадикальной патологии, которая является ведущей в формировании структурно-метаболических нарушений.
Доказано, что информативные высокочувствительные методы -биохемилюминесценция, фосфоресценция, электрокинетические свойства ядер клеток буккального эпителия, дают возможность судить о степени нарушения гомеостаза, позволяют регистрировать первичные процессы, происходящие на молекулярном уровне в биологических мембранах и отражают скорость старения организма.
Впервые эти методы использованы в мониторной оценке влияния окружающей среды на формирование структурно-метаболических эффектов у рабочих производств ПАВ и синтетических моющих средств (CMC).
Установленный политропный, мембраноповреждающий характер биологического действия ПАВ, позволил обосновать коэффициенты надежности при разработке Государственных нормативов.
ПРАКТИЧЕСКАЯ И ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Практическая значимость работы заключается в том, что результаты исследований были использованы для разработки 24 гигиенических нормативов в качестве предельно-допустимых концентраций поверхностно-активных веществ в воде водоемов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового назначения (Санитарные правила и нормы охраны поверхностных вод от загрязнения, СанПиН №4630-88 МЗ СССР, М. - 1988; ГН 2.1.5.690-98).
Материалы работы нашли отражение при составлении и подготовке «Методических рекомендаций по оборудованию, устройству и содержанию производств ПАВ и CMC» (утверждены Министерством нефтехимической промышленности СССР 12 ноября 1990 г.).
Результаты исследований положены в основу обоснования технико-экономических расчетов на перепрофилирование производства тетрагидрофуранов на Киришском биохимзаводе Ленинградской области и Шебекинском химзаводе Белгородской области.
Сведения, касающиеся механизма биологического действия ПАВ, использовались при составлении комплексных лечебно-оздоровительных мероприятий на ПО «Капролактам» г. Дзержинск, НПО «Нижнекамскнефтехим» г. Нижнекамск, НПО «Полимер-синтез» г.
Владимир, НПО «Синтез ПАВ» г. Шебекино Россия и ПО «Химпром» г. Первомайск Харьковской области.
Критериально-значимые информативные оценочные показатели, характеризующие наличие в организме свободнорадикальной патологии, были использованы в качестве мониторных тестов определения скорости старения организма и интенсивности перекисного окисления липидов у рабочих различных профессиональных групп производств ПАВ и CMC, а также для обоснования состояния здоровья населения и факторов риска.
Исследования по изучению биохимических механизмов структурно-метаболических нарушений под влиянием детергентов были положены в основу разработки метаболически-адаптированного профилактического питания рабочих, имеющего антирадикальную направленность.
Математическая модель прогноза острой и хронической биологической активности детергентов нашла применение при обосновании гигиенических нормативов безвредных уровней содержания детергентов в воде водоемов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового назначения (Сан ПиН № 4630-88; ГН 2.1.5.690-98), в условиях экспресс-оценки биологической активности новых ПАВ.
Теоретические положения и практические рекомендации по результатам исследований внедрены в практику обучения студентов на кафедрах биологической химии, гигиены питания, труда и коммунальной гигиены Харьковского медицинского университета.
По методическим приемам, используемым в диссертации получены следующие патенты, изобретения и рацпредложения: «Способ определения кожно-резорбтивного действия химических веществ» № 1755199 А1 от 15.08.92; «Устройство для регистрации при комнатной температуре люминесценции биологических мембран» № 203140 С1 от 20.03.95; «Способ лечения ожогов при многофакторном повреждении» №8273 А от 29.03.96;
Способ прогнозирования сепсиса у ожоговых больных» № 8272 А от 29.03.96; «Способ лечения интоксикаций» № 8296 А от 29.03.96; «Способ оценки состояния больных на ишемический инсульт головного мозга» № 8271 А от 29.03.96; «Способ прогнозирования биологической активности простых полиэфиров» № 8474 А от 6.03.97. Рацпредложений - пять. Внедрения подтверждены санитарными правилами и нормами, Государственными нормативами, методическими рекомендациями, указаниями, актами и справками о внедрении.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:
1. Системный сравнительный анализ биологической активности неонолов, гликолей азот- и фосфорсодержащих детергентов на молекулярном, клеточном, тканевом, органном, организменном и популяционном уровнях в краткосрочных острых и подострых опытах.
2. Общие закономерности и молекулярные биохимические механизмы развития свободнорадикальной патологии и изменения структурно-функционального состояния биомембран при действии на организм различных классов детергентов.
3. Биохимические механизмы, участвующие в формировании радиомиметических эффектов, в том числе, развитии отдаленных последствий, снижении иммунобиологической реактивности организма, составляющие основу концептуальной модели механизма биологического действия ПАВ.
4. Корреляционно-регрессионная зависимость между биологической активностью и физико-химическими константами детергентов, включая общие механизмы биотрансформации, токсикодинамики и токсикокинетики исследуемых ПАВ.
5. Комплекс высокочувствительных информативных, критериально-значимых диагностических показателей использован для установления свободнорадикальной патологии, оценки степени тяжести болезни, скорости старения организма, а также методического обеспечения исследований по регламентации детергентов в воде водоемов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового назначения.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации доложены и обсуждены на следующих съездах, конференциях и симпозиумах:
- 7 Всесоюзной конференции «Поверхностно-активные вещества и сырье для их производства», г. Шебекино, 1988 г.;
- Всесоюзной конференции «Химия и технология производства, переработки и применения полиуретанов и сырья для них, г. Суздаль, 1988;
- Всесоюзной конференции «Стресс и иммунитет», г. Ростов-на-Дону, 1989 г.;
- 1 республиканской конференции УССР «Новые физические методы в медицине», г. Ворошиловград, 1990 г.;
- 5 Всесоюзном симпозиуме «Взаимодействие нервной и иммунной систем», г. Оренбург, 1990 г.;
- 6 съезде фармакологов Украинской ССР г. Харьков, 1990 г.;
- Региональной научно-практической конференции «Медицинская экология, гигиена окружающей и производственной среды», г. Харьков, 1990, 1991, 1992, 1993, 1994, 1995 г.г.;
- 1 Международной конференции «Экологические и гигиенические аспекты загрязнения окружающей среды», г. Киев, 1996 г.;
- Региональной научно-практической конференции гигиенистов и санитарных врачей «Актуальные проблемы гигиены, эпидемиологии и санитарного дела», г. Харьков, 1997, 1998, 1999 г.
18
Все материалы опубликованы в сборниках и монографиях.
СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, главы - обзор литературы, главы - обоснование выбора объектов, направления и методов исследования, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы, приложения, изложена на 235 страницах машинописного текста. Список литературы включает 374 источника, из них 72 источника иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 8'6 таблицами и 9 рисунками.
Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Жуков, Виктор Иванович
8. Основные результаты исследований по обоснованию механизмов биологического действия детергентов на молекулярном, клеточном, тканевом, органном, организменном уровнях; общие закономерности биотрансформации, токсикодинамики, токсикокинетики, а также прогностические данные о связи биологической активности детергентов и их физико-химическими константами были использованы при научном обосновании 24 государственных стандартов ПАВ в качестве предельно допустимых их концентраций в воде водоемов, которые направлены на предупреждение неблагоприятного воздействия детергентов на здоровье человека и качество водных экосистем. При разработке нормативов принимались во внимание мембранотропное действие ПАВ и способность их модулировать возникновение в организме радиомиметических эффектов, что явилось основой для введения коэффициента надежности установленных стандартов.
Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Жуков, Виктор Иванович, Ростов-на-Дону
1. Абрамзон A.A. Опыт статистической обработки данных эксперимента при изучении биолюминесцентной лимфоидной ткани. В сб.: Электроника, физика и математика в биологии и медицине. - Новосибирск, 1979. - С. 141-143.
2. Абрамзон A.A. Поверхностно-активные вещества. Свойства и применение. Ленинград: Химия, 1988. - 304 с.
3. Авакумов В.М., Ковлер М.А. Влияние пиридитола и механизм некоторых лекарственных средств // Фармакология и токсикология. 1980. - № 6. -С. 417.
4. Авакян О.М. Фармакологическая регуляция функции адренорецепторов. -М.: Медицина, 1988. 250 с.
5. Аветисов Э.С., Ачилов С.Д., Мац К.А. Некоторые методы исследования зрительной работоспособности. // В кн.: Эргономика. ВНИИТ. 1984. - № 2.-С. 63-72.
6. Авидон В.В. Критерии сравнения химических структур и принципы построения информационного языка для информационно-логической системы по биологически активным соединениям // Химико-фармакологический журнал. 1974. - Т. 8, № 8. - С. 22-25.
7. Авидон В.В., Аролович B.C. Анализ сходства химических структур на основе дискрипторного языка ФКПС // НТИ. Сер.2. - 1975. - № 5. - С. 26-31.
8. Адаме Р. Методы культуры клеток для биохимиков. Москва: Мир, 1983. -263 с.
9. Андреев C.B., Кобкова И.Ф. Роль катехоламинов в здоровом и больном организме. Москва: Медицина, 1970. - 295 с.
10. Анохина И.П., Рещикова Е.В. Стимуляторы дофаминовых рецепторов в лечении алкоголизма // Неотложная наркология. Харьков. - 1987. - С. 38.
11. Архипова О.Г., Шицкая H.H., Семенова JI.C. Определение гаптоглобина в сыворотке крови // Методы исследования в профпатологии. Москва: Медицина. - 1988. - С. 15-17.
12. Асанов М. Методика регистрации и исследования хемилюминесценции мочи человека в норме и при некоторых патологических состояниях . -Фрунзе. 1974.-С. 95.
13. Асатиани B.C. Ферментные методы анализа. Москва: Наука, 1969. -560 с.
14. Афифи А., Эйзен С. Статистический анализ. Подход с использованием ЭВМ. Москва: Мир, 1982. - 488 с.
15. Бабенко Г.О. Визначення мшроелемент1в i металофермештв у юпничних лаборатор1ях. -Кшв: Здоров'я, 1968. 136 с.
16. Бабийчук Г.А., Шифман М.И. Нейрохимические процессы в центральной нервной системе. Киев: Наукова думка, 1989. - 136 с.
17. Багалиев А.Б., Елемесова М.Ш. Влияние а-токоферола на цитогенетический эффект хрома // Цитология и генетика. 1978. - Т. 12, № 5.-С. 414-416.
18. Баренбойм Г.М., Березовский Б.С. Система биологических испытаний химических соединений и создание лекарств. Москва: ВДНХ, 1981. -17 с.
19. Баренбойм Г.М., Маленков А.Г. Биологически активные вещества. -Москва: Наука, 1986. 362 с.
20. Бахшиев Ю.А. Влияние цистеина на содержание некоторых функциональных групп белков в условиях острой интоксикации бромистым метилом // Гигиена применения пестицидов и клиника отравлений. Киев. - 1971. - Вып. 9. - С. 261-264.
21. Безуглая И.П., Коробчанский В.А., Канищев В.А. Влияние группы краун эфиров на иммунобиологическую реактивность экспериментальных животных // Медицинская экология. Гигиена окружающей и производственной среды. Харьков: ХГМУ. - 1999. - С. 68-72.
22. Безуглая И.П. Отдаленные последствия влияния группы краун эфиров на организм в связи с нормированием в воде водоемов // Медицинская экология. Гигиена окружающей и производственной среды. Харьков: ХГМУ.-1999.-С. 76-79.
23. Беленький M.J1. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. Ленинград, 1963. - С. 54-64.
24. Беллер H.H., Болодинский В.К., Бусыгина И.И. Оценка надежности биосистем. Ленинград: Наука, 1986. - 136 с.
25. Белов П.С., Фролов В.И., Чистяков Б.Е. Новые поверхностно-активные вещества на основе замещенных имидазолинов. М.: ЦНИИТЭ-Нефтехим, 1979.-54 с.
26. Белоконь Е.М., Кириченко H.A. Исследование мутагенной активности некоторых замещенных 1,3-диоксанов // Гигиена и санитария. 1988. - № 6.-С. 86-89.
27. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия / Под ред. С.С.Дебова. -Москва: Медицина, 1982. 752 с.
28. Березовский В.А. Биологическая активность и механизм действия ПАВ // Сурфактанты легкого в норме и патологии. Киев: Наукова думка, 1988. -С. 5-19.
29. Болдырев A.A. Введение в биохимию мембран. Москва: Высшая школа, 1986.- 109 с.
30. Бондаренко Л.А. Методические подходы к гигиеническому нормированию окислителей в воде водоемов // Гигиена внешней и производственной среды. Харьков: ХМИ. - 1984. - С. 54-55.
31. Бондаренко JI.A., Жуков В.И. Влияние неионогенных поверхностно-активных веществ на иммунологическую реактивность организма // Труды Всесозн. Конф. «Поверхностно-активные вещества и сырье для их производства». -Шебекино. 1987. - С. 4.
32. Бондаренко Л.А., Дехтярь A.B. Обоснование предельно-допустимых концентраций фосфорсодержащих ПАВ в воде водоемов // Профилактическая токсикология ксенобиотиков. Харьков: ХМИ. - 1992. -С. 14-19.
33. Бондаренко Л.А., Дехтярь A.B., Логинова Г.А. Сравнительная гигиеническая оценка группы фосфорсодержащих ПАВ в связи с проблемой санитарной охраны водоемов // Поверхностно-активные вещества и сырье для их производства. Шебекино. - 1988. - С. 44.
34. Бондаренко Л.А., Жуков В.И., Жукова C.B., Милаева С.Я. Влияние неионогенных ПАВ на иммунологическую реактивность организма // Поверхностно-активные вещества и сырье для их производства. -Шебекино. 1988.-С. 4.
35. Бочаров В.В., Коренев К.Д., Перегудин Ю.Ф. О взаимосвязи структуры оксиэтилированных алкилфенолов со скоростью их биоразложения // Поверхностно-активные вещества и сырье для их производства. -Шебекино. 1988.-С. 46.
36. Бочаров В.В., Перегудин Ю.Ф., Рабинович Н.Л. О влияниии минеральных солей на скорость биоразложения анионных и неионогенных ПАВ //Поверхностно-активные вещества и сырье для их производства. -Шебекино.- 1988.-С. 47.
37. Бочков Н.П., Шрам Р.Я., Кулешов Н.П. Система оценки химических веществ на мутагенность для человека: общие принципы, практические рекомендации и дальнейшие разработки // Генетика. 1975. - Т. 2, № 10. -С. 156- 169.
38. Браверман Э.М., Мичник И.Б. Структурные методы обработки эмпирических данных. Москва: Наука, 1983. - 486 с.
39. Брицке М.Э. Атомно-абсорбционный спектрохимический анализ. -Москва: Химия, 1982. 280 с.
40. Бурлакова Е.Б., Дзюба Н.М., Пальмина Н.М. Синтетические ингибиторы и природные антиоксиданты // Биофизика. 1965. - Т. 10, вып. 5. - С. 766769.
41. Бурлакова Е.Б. О возможной роли свободнорадикального механизма в регуляции размножения клеток // Биофизика. 1967. - Т. 12, № 1. - С. 8289.
42. Бурлакова Е.Б. Роль антиокислителей в физико-химических процессах регулирования размножения клеток // Физико-химические основы авторегуляции в клетках. Москва. - 1968. - С. 15-25.
43. Бурлакова Е.Б., Добрина С.К., Козлова Ю.П. Измерение свободнорадикальных процессов в тканях животных с привитой опухолью // Физико-химические основы авторегуляции в клетках. Москва. - 1968. -С. 213-221.
44. Вайсфельд И.Л., Кассиль Г.Н. Гистамин в биохимиии и физиологии. -Москва: Наука, 1981.-276 с.
45. Веселовский В.А. Надежность растительной клетки и стресс // Надежность и гомеостаз биологических систем. Киев: Наукова думка. -1987.-С. 96-101.
46. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. Москва: Наука, 1972. - 320 с.
47. Владимиров Ю.А., Оленов В.И., Гаврилов В.Б. Свободные радикалы и хемилюминесценция в липидах биологических мембран // Свободнорадикальное окисление липидов в норме и патологии. Москва.- 1976. С. 30-31.
48. Владимиров Ю.А. Чем болеют и от чего умирают клетки // Наука в СССР.- 1989.-№2.-С. 76-81.
49. Владимиров Ю.А., Потапенко А .Я. Физико-химические основы фотобиологических процессов. Киев: Вища школа, 1989. - 196 с.
50. Волков О.В., Елецкий Ю.К. Основы гистологии с гистологической техникой. Москва: Медицина, 1982. - 303 с.
51. Волошенко О.И., Леонская Г.И., Раецкая Е.В. Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия щелочной протеазы и энзимосодержащего CMC // Гигиена и санитария. 1990. - № 4. - С. 39-40.
52. Волошенко О.И., Медяник И.А. Гигиена и токсикология бытовых химических веществ. Киев: Здоров'я, 1983. - 144 с.
53. Волошенко О.И., Медяник И.А., Чекаль В.Н. Гигиена применения синтетических моющих средств. Киев: Здоров'я, 1977. - 144 с.
54. Волошенко О.И., Мудрый И.В. Поверхностно-активные вещества в окружающей среде и здоровье человека // Гигиена и санитария. 1988. -№ 11.- С. 58-61.
55. Волошенко О.И., Мудрый И.В. Гигиеническое значение поверхностно-активных веществ. Киев:Здоров'я, 1991. - 174 с.
56. Волошенко О.И., Мудрый И.В., Кузьмина А.И., Голенкова Л.Г. Гигиеническая характеристика поверхностно-активных веществ при комплексном и комбинированном их воздействии на организм // Врачебное дело. 1988. - № 5. - С. 99-101.
57. Волошенко О.И., Мудрый И.В., Сватков В.И. Зависимость статистических параметров комплексного и комбинированного действия ПАВ от величины остролетальной дозы // Гигиена и санитария. 1987. - № 7. - С. 59-62.
58. Волошенко О.П., Прокопов В.А., Чегринец Г.Я. Актуальные проблемы санитарной охраны водных ресурсов и почвы // Гигиена и санитария. -1991. -№9. с. 6-9.
59. Воскресенский О.Н., Левицкий А.П. Вопросы медицинской химии. -Москва: Медицина, 1970. С. 563-580.
60. Воробьев A.B., Коровкин В.И., Падалкин В.П. Общие подходы к определению экологической опасности антропогенных факторов окружающей среды // Гигиена и санитария. 1991. - № 9. - С. 9-13.
61. Воронина Л.Я. Бромсульфалеиновый тест у кроликов при воздействии некоторых пестицидов // Фармакология и токсикология. 1973. - № 9. - С. 128-129.
62. Гаврилова А.Р., Хмара Н.Ф. Определение активности глутатионпероксидазы эритроцитов при насыщенных концентрациях субстрата // Лабораторное дело. 1986. - № 12. - С. 721-724.
63. Гаршенин Е.Ф. Пенообразование как лимитирующий показатель при гигиеническом обосновании предельно допустимых концентраций детергентов в воде // Гигиена и санитария. 1968. - № 1. - С. 113.
64. Глебов Р.Н., Крыжановский Г.Н. Функциональная биохимия синапсов. -Москва: Медицина, 1978. 325 с.
65. Гоева О.Э. Экспериментальное обоснование предельно допустимых концентраций поверхностно-активных веществ OII-7 и II-10 в воде водоемов // Санитарная охрана водоемов от загрязнения промышленными сточными водами. 1962. - Вып. 5. - С. 233
66. Голиков П.В. Рецепторные механизмы глюкокортикоидного эффекта. -Москва: Медицина, 1988. 285 с.
67. Григоров H.H. Динамика фонда микроэлементов у экспериментальных животных при хронической алкогольно-никотиновой интоксикации // Медицинская экология, гигиена производственной и окружающей среды.- Харьков: ХГМУ. 1997. - С. 103-106.
68. Григоров Б.И. Отдаленные последствия влияния группы неонолов в связи с нормированием в воде водных объектов // Медицинская экология. Гигиена окружающей и производственной среды. Харьков: ХГМУ. -1999.-С. 130-133.
69. Григорова H.A. Нарушения оксидантно-антиоксидантной системы, изменения фракций фосфолипидов клеточных мембран у больных с ишемическим мозговым инсультом и их медикаментозная коррекция // Клппчна фармащя. 1997. - Т. 1, № 1. - С. 44-48.
70. Григорова H.A., Григоров Б.И., Погорелов В.Н. Этиология и патогенетические механизмы модельного атерогенеза. Харьков: РИП "Оригинал", 1997.-253 с.
71. Григорьева JLB. Санитарная бактериология и вирусология синтетических моющих средств. Киев: Здоров'я, 1980. - 160 с.
72. Григорьева JT.B. Взаимодействие синтанола и сульфанола с сапрофитной микрофлорой водоема и фагом Т2 // Гигиена населенных мест. 1982. -Вып. 21.-С. 50-54.
73. Григорьева JI.B., Касьяненко A.M. Микробиологические аспекты факторов и последствий эвтрофироваиия водоемов // Гигиена населенных мест. 1984. - Вып. 23. - С. 11-16.
74. Губский Ю.И. Коррекция химического поражения печени. Киев: Здоров'я, 1989. - 157 с.
75. Губский Ю.И. Перекисное окисление мембранных липидов и его регуляция при химическом поражении печени // Коррекция химического поражения печени. Киев: Здоров'я. - 1989. - С. 93-113.
76. Гудилова Г.П., Сорокина И.Н. Некоторые условия спектрофотометрического определения активности сукцинатдегидрогеназы и цитохромоксидазы в митохондриях мозга // Бюлл. экспер. биологии и медицины. 1967. - Т. 63, № 1. — С. 24-26.
77. Гурвич Г.А. К методике цито-серологического исследования лимфоидной ткани // Пробл. инфекции, иммунитета и аллергии. 1969. - С. 322-327.
78. Данилова Л.А., Федотенков А.Г., Петров Р.В. Влияние криоконсервирования на гемотрансплантационную активность лимфоцитов // Проблемы гематологии и переливания крови. 1978. - Т. 23, № 12.-С. 21-25.
79. Дамбинова С.А. Нейрорецепторы глутамата. Ленинград: Наука, 1989. -129 с.
80. Дервиз Г.В., Воробьев А.И. Количественное определение гемоглобина в крови посредством аппарата ФЭК-М // Лаб. Дело. 1959. - № 3. - С. 13.
81. Дехтярь A.B., Жуков В.И., Щербань Н.Г., Н.А.Сидоренко. Особенности механизма биологического действия фосфорсодержащих ПАВ на организм // Медицинская экология. Гигиена производственной и окружающей среды. Харьков: ХГМУ. -1994. - С. 67-72.
82. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты. Москва: Мир, 1966. - 728 с.
83. Дмитриев М.Т., Китровский H.A., Маслеиковский Л.Г. Определение двуокиси азота в атмосферном воздухе хемилюминесцентным методом // Гигиена и санитария. 1977. - № 1. - С. 61-64.
84. Добрина С.К., Владимиров Ю.А., Дубир Г.Я. Свободнорадикальное состояние и роль при лучевом поражении и злокачественном росте. -Москва: МГУ, 1971.-С. 33.
85. Дрейнер Дж., Смит Г. Прикладной регриссионный анализ. Москва: Финансы и статистика, 1986. - Т.1. - 366 с. - Т.2. - 351 с.
86. Дружинина H.A., Чеботарев Е.Е., Рябова Э.З. Хемилюминесценция гемоглобина, индуцированная перекисью водорода // Укр. биохим. журнал. 1978. - Т.50, № 5. - С. 596-599.
87. Дыбан А.П., Баранов B.C., Акимова И.М. Основные методические подходы к тестированию тератогенной активности химических веществ // Арх. Анатомии. 1970. - № 10. - С. 89-99.
88. Елецкий B.C., Кузякова Н.М. Сверхслабое свечение биосубстратов в клинико-диагностических исследованиях // Пробл. создания аппаратуры для мед. лаб. исследований. 1974. - С. 85-87.
89. Елизарова О.Н. Определение пороговых доз промышленных ядов при пероральном введении. Москва: Медицина, 1971. - 173 с.
90. Емельянов H.A., Герасимова И А. Кортикостероиды и обмен веществ в мозгу. Ленинград: Наука, 1990. - 120 с.
91. Ефимова Г.В., Подклетнова И.М. Исследование функционального состояния человека-оператора в условиях выработки умственного навыка. Методика и техника психофизиологических исследований операторской деятельности. Москва, 1984. - С. 64-70.
92. Жуков В.И., Носатенко П.Е., Бондаренко Л.А. Гигиеническое обоснование предельно допустимых концентраций лапроксида 703 в воздухе рабочей зоны. Отчет. - Харьков: ХМИ, 1988. - 46 с.
93. Жуков В.И. Мутагенное и эмбриотоксическое действие простых полиэфиров как загрязнителей водоемов // Гигиена внешней и производственной среды. Харьков. - 1982. - С. 43-46.
94. Жуков В.И. Гигиеническая характеристика простых полиэфиров как загрязнителей водоемов // Респ. конф. молодых ученых-медиков. -Донецк. 1983. - С. 205-206.
95. Жуков В.И., Зовский В.Н., Евтушенко Л.Г. Изменения содержания микроэлементов и некоторых биохимических показателей организма лабораторных животных при воздействии простых полиэфиров // Гигиена внешней и произв. среды. Харьков. - 1984. - С. 36-38.
96. Жукова C.B. Влияние простых полиэфиров (лапролов) на гипоталамическую нейросекрецию и семенники белых крыс // Эндокринная система организма и вредные факторы внешней среды. -Ленинград. 1983. - С. 67-68.
97. Жуков В.И., Золотаревская JI.A., Григоров Б.И. Структурно-функциональная теория биологического действия радиотоксинов. -Харьков: Основа, 1998. 225 с.
98. Жуков В.И., Кривошей В.А. Гигиеническое обоснование безвредных уровней содержания простых полиэфиров (лапролов) в воде водоемов // Гигиена произв. и окружающей среды. Харьков. - 1987. - С. 15-18.
99. Жуков В.И., Резуненко Ю.К., Зайцева О.В. Тормозные и гидравлические жидкости: гигиенические аспекты охраны окружающей и производственной среды. Харьков: Харюв, 1999. - 250 с.
100. Жуков В.И., Резуненко Ю.К. Влияние лапроксидов на генеративную функцию и генетический аппарат белых крыс // Проблемы экологии и медицины. Полтава. - 1999. - № 2. - С. 55-60.
101. Жуков В.П., Сидоренко H.A. Комплексная гигиеническая характеристика неионогенных ПАВ группы простых полиэфиров как загрязнителей водоемов // Поверхностно-активные вещества и сырье для их производства . Шебекино, ВНИИПАВ. - 1988. - С. 54.
102. Жуков В.И., Жукова C.B., Манжелей Е.С. Эмбриотоксическое и тератогенное действие простых полиэфиров // Химия и технология производства, переработки и применения полиуретанов и сырье для них. Суздаль. - 1988. - С. 168-169.
103. Жуков В.И., Логинова Г.А. Состояние некоторых нейромедиаторных систем и иммунобиологической реактивности организма под воздействием группы макроциклических эфиров // Взаимодействие нервной и иммунной системы. Ленинград. - 1990. - С. 129-130.
104. Зайцева О.В. Состояние перекисного окисления липидов и скорость старения организма рабочих модельного цеха // Медицинская экология. Гигиена окружающей и производственной среды. Харьков: ХГМУ. -1999. - С. 116-118.
105. Зайцева О.В. Микроеомальное окисление как критерий оценки токсического действия химических соединений // Медицинская экология. Гигиена окружающей и производственной среды. Харьков: ХГМУ. -1999.-С. 207-211.
106. Зарипов Ф.Г., Гулевич Н.Е. Изучение некоторых свойств перевиваемой линии клеток Рн // Цитология. 1973. - Т. 15, № 6. - С. 746-750.
107. Заяц Л.Т., Головчинский В.Б., Музыкан Л.И. О роли гипоталамической области в нарушениях белкового обмена после ожоговой травмы // Бюлл. экспер. биологии и медицины. 1968. - № 8. - С. 48-50.
108. Зауэр X. Метод иммунных розеток // Иммунологические методы. -Москва. 1987. - С. 278-282.
109. Зовский В.Н. Содержание меди и активность церулоплазмина в печени, крови и некоторые стороны их регуляции // Физиология и патология органов пищеварения. Харьков. - 1974. - С. 130-132.
110. Зовский В.Н. К вопросу действия простых полиэфиров и краун эфиров на состояние антиоксидантной системы организма животных // Медицинская экология, эпидемиология и гигиена окружающей и производственной среды. Харьков. - 1996.- С. 23-25.
111. Зовский В.Н., Жукова Н.В., Усенко С.А. Роль адаптационно-приспособительных механизмов в ответной реакции на стресс // Медицинская экология. Гигиена окружающей и производственной среды. -Харьков: ХГМУ. 1999. - С. 186-188.
112. Зовский В.Н. Действие простых полиэфиров и краун эфиров на состояние антиоксидантной системы организма животных // Медицинская экология. Гигиена окружающей и производственной среды. Харьков: ХГМУ. -1999.-С. 198-202.
113. Золина З.М. Проблема классификации видов труда по тяжести и напряженности, критерии и методы их оценки // Физиологические методы исследования трудовых процессов. Москва. - 1969. - С. 55-57.
114. Золотаревская JI.A., Жуков В.И., Зовский В.Н. Биологическая активность детергентов в связи с проблемой охраны водных экосистем. Харьков: РИП «Оригинал», 1998. - 178 с.
115. Ильин И.Е. Изучение токсичности продуктов трансформации ПАВ, образующихся в процессе обеззараживания питьевой воды // Гигиена и санитария. 1982. - № 9. - С. 33-36.
116. Ильин И.Е. Гигиеническое изучение барьерной функции локальных водопроводных сооружений в отношении химических загрязнителей типа «агрохимикаты + ПАВ» // Гигиена и санитария. 1984. - № 8. - С. 15-18.
117. Ильин И.Е. Санитарно-микробиологическая оценка барьерной функции современных водопроводных сооружений в условиях загрязнения гидросферы ПАВ // Гигиена и санитария. 1985. - № 12. - С. 10-13.
118. Ильницкий А.П., Ершова К.П. Некоторые факторы, влияющие на растворимость безнпирена в воде // Вопросы онкологии. 1970. - № 3. -С. 86.
119. Казначеев В.П. Информационная функция сверхслабых световых потоков в биологических системах // Вопросы биофизики. Новосибирск, 1967. -С. 7-18.
120. Казначеев В.П., Михайлов Л.П. Сверхслабые излучения в межклеточных взаимодействиях. Новосибирск: Наука, 1981. - 144 с.
121. Канищев В.А. Обоснование предельно-допустимых концентраций краун-эфиров в воде водоемов // Эпидемиология, экология и гигиена. Харьков: ХГМУ,- 1998.-С. 82-84.
122. Канищев В.А. К вопросу о токсичности макроциклических эфиров // Медицинская экология. Гигиена производственной и окружающей среды. Харьков: ХГМУ. - 1997. - С. 53-55.
123. Кассиль Г.Н. Внутренняя среда организма. Москва: Наука, 1983. - 227с.
124. Каспаров A.A., Саноцкий И.В. Токсикометрия химических веществ, загрязняющих окружающую среду. Москва: Центр междунар. проектов, ГКНТ, 1986.-426 с.
125. Кац М.М., Лаврецкая Э.Ф. Рецепторы биогенных аминов мозга: структура, механизмы функционирования и взаимодействия с физиологически активными веществами // Итоги науки и техники ВИНИТИ. Биоорган. Химия. 1986. - № 8. - 226 с.
126. Кеннел Д. Методы определения радиоактивности РНК, ДНК, белка // Методы исследования нуклеиновых кислот. Москва. - 1970. - С. 138144.
127. Китте М. Техника липидологии. Москва: Мир, 1975. - 322 с.
128. Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография. Москва: Мир, 1981. - Т. 1. -616 с.-Т. 2.-527 с.
129. Козинец K.M., Клемперт Н.К. Некоторые вопросы напряженности труда водителей автопогрузчиков // Всес. конф. по физиологии труда. -Москва. 1973.-С. 175-176.
130. Козлов Ю.П. Свободные радикалы и их роль в норме и патологических процессах. Москва: МГУ, 1973. - 174 с.
131. Козлов Ю.П., Тарусов Б.П. Свободнорадикальные процессы в биологических системах. Москва: Наука, 1976. - 131 с.
132. Козлов Ю.П., Данилов B.C., Каган В.Е. Свободнорадикальное окисление липидов в биологических мембранах. Москва: МГУ, 1974. - 88 с.
133. Коломийцева И.К. Радиационная биохимия мембранных липидов. -Москва: Наука, 1989. 181 с.
134. Колупаева Т.В., Шахбазов В.Г. Изменения биоэлектрических свойств клеточных ядер, как показатель возраста и физиологического состояния организма // Молекулярные и функциональные механизмы онтогенеза. -Харьков. 1987.-С. 93-94.
135. Кондратюк В.Н. Экспериментальное обоснование предельно допустимых концентарций водоемов // Гигиена и санитария. 1981. - № 6. - С. 72-75.
136. Комиссаров И.В. Механизмы химической чувствительности синаптических мембран. Киев: Наукова думка, 1986. - 238 с.
137. Корзун Е.И. Электрокинетические свойства ядер буккального эпителия человека в условиях гипоксии и при болезни движения // Патология, физиология и экспериментальная терапия. 1985. - № 6. - С. 63-65.
138. Кравцов Г.М., Райский Г.Г., Орлов С.Н. Транспорт кальция в синаптосомы и субклеточные мембранные фракции головного мозга: влияние опиоидных ферментов // Биохимия. 1982. - Т. 44, вып. 12. - С. 2006-2014.
139. Красильщиков Д.Г. Влияние присутствия в воде детергентов на поступление гексахлорана в печень и жировую ткань белых крыс // Гигиена и санитария. 1972. - № 9. - С. 96.
140. Красовский Г.Н. Методологические указания к проведению и оценке результатов острого опыта и их обоснование // Санитарная охрана водоемов от загрязнения промышленными сточными водами. Москва: Медгиз. - 1965. - С. 46.
141. Красовский Г.Н., Шаган Е.И. К оценке механизма мутагенного эффекта циклофосфана с крыс на человека // Гигиена и санитария. 1977. - № 8. -С. 27-29.
142. Красовский Г.Н., Соколовский В.В. Генетические эффекты тяжелых металлов // Гигиена и санитария. 1979. - № 9. — С. 56-59.
143. Красовский Г.Н. Среднее эффективное время гибели животных как параметр для прогнозирования хронической токсичности веществ // Гигиена и санитария. 1982. - № 7. - С. 12-14.
144. Красовский Г.Н., Жуков В.И., Бондаренко JI.A. Применение метода биохемилюминесценции в санитарно-токсикологических исследованиях // Гигиена и санитария. 1989. - № 9. - С. 35-39.
145. Красовский Г.Н., Алексеева Т.В., Егорова H.A. Биотестирование в гигиенической оценке качества воды // Гигиена и санитария. 1991. - № 9. - С. 13-16.
146. Красовский Г.Н., Авалиани C.JL, Жолдакова З.И. Система критериев комплексной оценки опасности химических веществ, загрязняющих окружающую среду // Гигиена и санитария. 1992. - № 9-10. - С. 15-17.
147. Кривошей В.А., Жуков В.И., Яковцова А.Ф., Щербань Н.Г. Особенности влияния простых полиэфиров на организм // Современые проблемы гигиены труда и профпатологии в машиностроительной химической промышленности. Харьков. - 1983. - С. 101-102.
148. Кротов Ю.А., Лыкова A.C., Скачков М.А. Санитарно-токсикологическая характеристика эфиров диэтиленгликоля (карбиталов) применительно кохране атмосферного воздуха // Гигиена и санитария. 1981. - № 2. - С. 14-17.
149. Кудрин B.C., Мирошниченко И.И., Раевский К.С. Различия в механизмах ауторецепторной регуляции биосинтеза и высвобождения дофамина в подкорковых структурах мозга крыс // Нейрохимия. 1987. - Т. 7, № 1. -С. 3-10.
150. Кудымова Т.В. Влияние неонолов АФ 9-12 и АФ 9-6 на репродуктивную функцию белых крыс // Опыт использования неонолов АФ 9-п-оксиэтилированных алкилфенолов в народном хозяйстве. Белгород: ВНИИПАВ. - 1990. - С. 6-26.
151. Кузин A.M., Кудряшев Ю.Б., Лебедева Н.Е. Динамика накопления и взаимосвязь липидных радиотоксинов и хинонов // Радиотоксины. -Москва, 1966.-С. 186-191.
152. Кузин A.M., Копылов В.А. Радиотоксины. Москва: Наука, 1983. - 172 с.
153. Кузин A.M. Структурно-метаболическая теория в радиобиологии. -Москва: Наука, 1986. 265 с.
154. Куликов В.Ю., Семенюк A.B., Колесникова Л.И. Перекисное окисление липидов и холодовой фактор. Новосибирск: Наука, 1988. - 189 с.
155. Кучеренко Н.Е. Биологическое метилирование и его модификация в ранний период лучевого поражения. Киев: Наукова думка, 1980. - 166 с.
156. Кучеренко Н.Е., Васильев А.Н. Липиды. Киев: Вища школа, 1985 - 246с
157. Кучеренко Н.Е., Германюк Я.Л., Васильев А.Н. Молекулярные механизмы гормональной регуляции обмена веществ. Киев: Вища школа, 1986.-248 с.
158. Кучмистова Е.Ф., Лысенко С.Н., Сурай П.Ф. Влияние длительного введения тироксина на микросомальное окисление в печени крыс разного возраста // Биологический вестник. 1997. - № 1. - С. 30-39.
159. Лакин K.M., Крылов Ю.Ф. Биотрансформация лекарственных веществ. -Москва: Медицина, 1981. 304 с.
160. Ленинджер А. Основы биохими. Москва: Мир, 1985. - Т. 1-3. - 366 с.
161. Литвинов М.Н., Никонова А.Г. Влияние алкилсульфата на резорбцию пестицидов и содержание их в органах подопытных животных // Гигиена и санитария. 1971. - № 9. - С. 21.
162. Литвинов H.H., Соколовский В.В., Журков B.C. Модификация анилиновой мутагенной активности циклофосфамида в хроническом эксперименте на мышах // Гигиена и санитария. 1983. - № 8. - С. 13-16.
163. Литовченко Т.А., Жуков В.И. Исследование фосфолипидного состава мембран эритроцитов у больных эпилепсией // Проблемы медицины. -Киев. 1999. - № 5. - С. 49-50.
164. Лойко Е.А. Спектрохимическое определение микроэлементов в сыворотке крови и моче // Лабораторное дело. 1967. - № 7. - С. 403-406.
165. Лукиных H.A. Очистка сточных вод, содержащих синтетические поверхностно-активные вещества. Москва: Стройиздат, 1972. - 96 с.
166. Луцевич И.Н. Изучение токсичности продуктов трансформации химических веществ в условиях острого опыта // Здоровье населения и окружающая среда. Саратов: СГУ, 1986. - С. 68-70.
167. Мак-Мюрей. Обмен веществ у человека. Москва: Мир, 1980. - 340 с.
168. Макотченко В.М., Сонкин И.С., Цюхно З.И. Эндокринная система организма при профессиональных заболеваниях. Киев: Здоров'я, 1985. -160 с.
169. Малюгин Э.Ф., Владимиров Ю.А., Беляков H.A. Сверхслабое свечение сыворотки крови при ишемическом повреждении печени // Экспер. основы лечения печеночной недостаточности. Москва. - 1975. - С. 1925.
170. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. -Москва: Мир, 1984. 480 с.
171. Манухин Б.К. Адренорецепторы эффекторной клетки локальные регуляторы интенсивности адренергической реакции // Физиол. журнал СССР им. Сеченова. - 1984. - Т.70, № 5. - С. 609-616.
172. Маргулис Г.В., Журавлев А.И. Сверхслабое свечение сыворотки крови человека при некоторых хронических заболеваниях // Сверхслабое свечение в медицине и сельском хозяйстве. Москва. - 1971. - С. 27.
173. Маргулис Г.В. Влияние бальнеофизиотерапевтического лечения на сверхслабое свечение плазмы крови при некоторых хронических заболеваниях // Сверхслабые свечения в медицине и сельском хозяйстве. МОИП. - 1974.-С. 31-36.
174. Марцишаускас Р.П., Тарасявичеке Н.Э., Конопкайте С.И. Определение белка по методу Лоури в разных модификациях // Методы биохимии. -1981. Т.2. - С. 134-136.
175. Марцонь Л.В. Химические факторы окружающей среды и генеративная функция //10 Укр. съезд гигиенистов. Киев. - 1981. - Т.2. - С. 134-136.
176. Маслов М.Л., Жуков B.C., Голубев И.Р. Влияние загрязнений атмосферного воздуха на хромосомный аппарат соматических клеток человека // Гигиена и санитария. 1981. - № 9. - С. 9-11.
177. Медведь Л.И., Спыну Е.И., Каган Ю.С. Методы условных рефлексов в токсикологии пестицидов // Гигиена и токсикология пестицидов и клиника отравления. Киев. - 1966. - С. 5-34.
178. Меерсон Ф.З. Адаптация, деадаптация и недостаточность сердца. -Москва: Медицина, 1978. 343 с.
179. Меркурьева Р.В. Критериальная значимость изменений активности ферментов-маркеров различных внутриклеточных органелл при оценке эмбриотоксического действия формальдегида // Гигиена и санитария. -1983. -№ 8.-С. 13-15.
180. Метелица Д.И. Активация кислорода ферментными системами. Москва: Наука, 1982.-254 с.
181. Мешкова Н.П., Северин С.Е. Практикум по биохимии. Москва: МГУ, 1979.-428 с.
182. Михно JI.E. Клиническое значение определения сверхслабого свечения сыворотки крови в диагностике инфаркта миокарда // Хемилюминесцентный метод в биологии и медицине. Киев. - 1981. - С. 100-102.
183. Можаев Е.А. Загрязнение водоемов поверхностно-активными веществами. Москва: Медицина, 1976. - 96 с.
184. Мокеева Р.Н., Царфин Я.А., Карнишин A.A. Определение низкомолекулярных примесей в сточных водах производства полиоксипропиленполиолов хроматораспределительным методом // Журнал аналитической химии. 1979. - Т.34, № 9. - С. 1821-1824.
185. Мусил Я., Новакова О., Кунц К. Современная биохимия в схемах. -Москва: Мир, 1984. 216 с.
186. Мушкамбаров H.H. Метаболизм: структурно-химический и термодинамический анализ. Москва: Химия. - 1988. - 1011 с.
187. Нейфах Е.А. Свободнорадикальный механизм сверхслабой хемилюминесценции сопряженной с перекисным окислением ненасыщенных жирных кислот // Биофизика. 1971. - Т. 16, № 3. - С. 560.
188. Пальмера Дж. К. Нейрофармакология циклических нуклеотидов. -Москва: Медицина, 1982. 310 с.
189. Панин JI.E. Биохимические механизмы стресса. Новосибирск: Наука, 1983.-233 с.
190. Паранич A.B., Карпенко H.A., Алесина М.Ю. Изучение направленности и интенсивности процессов перекисного окисления липидов, инициированных действием «чернобыльских факторов» // Радиационная биология и радиоэкология. 1998. - Т. 38, № 3. - С. 318-321.
191. Пирс Э. Гистохимия. Москва: Мир, 1984. - 962 с.
192. Пирузян J1.A. Действие физиологически активных соединений на биологические мембраны. Москва: Наука, 1974. - 386 с.
193. Подильчак М.Д. Клиническая энзимология. Киев: Здоров'я, 1967. - 286 с.
194. Полторак О.М., Чухрай Е.С. Физико-химические основы ферментативного катализа. Москва: Высшая школа, 1971. - 310 с.
195. Покровский A.A. Химический состав пищевых продуктов. Москва: Пищевая промышленность, 1979. - 247 с.
196. Попов И.В., Канищев В.А. Гигиеническое изучение макроциклических эфиров в связи с проблемой санитарной охраны водоемов // Медицинская экология. Гигиена производственной и окружающей среды. Харьков: ХГМУ. - 1997.-С. 40-44.
197. Попов И.В. Определение токсичности краун эфиров в опытах на тканевых культурах и на буккальных клетках // Медицинская экология. Гигиена производственной и окружающей среды. Харьков: ХГМУ. -1997.-С. 46-49.
198. Посохов В.А. Очистка воды от биологических ядов в условиях загрязнения водоемов ПАВ // Здоровье населения и окружающая среда. -Саратов: СГУ. 1986. - С. 53-60.
199. Постнов Ю.В., Орлов С.Н. Первичная гипертензия как патология клеточных мембран. Москва: Медицина, 1987. - 177 с.
200. Предтеченский В.Е. Руководство по клиническим лабораторным исследованиям. Москва: Медицина, 1964. - 640 с.
201. Прохорова М.И. Определение количества пировиноградной кислоты и активности пируватдегидрогеназы. Методы биохимических исследований. Ленинград: ЛГУ, 1982. - С. 190-194.
202. Радбиль О.С., Калинин А.П. Простагландины и некоторые аспекты их клинического применения. Москва: ВНИИМИ. - 1976. - № 2. - 118 с.
203. Рахманин Ю.А., Ческис А.Б., Михайлова Р.И., Актуальные задачи совершенствования системы требований и контроля качества воды // Гигиена и санитария. 1992. - № 9. - С. 41-46.
204. Резуненко Ю.К., Телегин В.А. Оценка кожно-резорбтивного действия лапроксидов методом биохемилюминесценции // Медицинская экология. Гигиена производственной и окружающей среды. Харьков: ХГМУ. -1997. - С. 59-62.
205. Резуненко Ю.К., Телегин В.А. Обоснование предельно допустимых концентраций группы лапроксидов в воде водных объектов // Медицинская экология. Гигиена производственной и окружающей среды. Харьков: ХГМУ. - 1997. - С. 62-64.
206. Ретнев В.М. Проблемы гигиены труда при механизации производства // Гигиена труда и профзаболеваний. 1985. - № 5. - С. 35-42.
207. Робу А.И. Стресс и гипоталамические гормоны. Кишинев: Штиинца, 1989.-220 с.
208. Розен В.Б., Смирнов А.Н. Рецепторы и стероидные гормоны. Москва: МГУ, 1981.-310 с.
209. Розенблат В.В. Проблемы утомления. Москва: Наука, 1975. - С.240-248.
210. Роланд Элойт. Текучесть мембраны в биологии. Киев: Наукова думка, 1989.- 309 с.
211. Романенко В.Д. Физиология кальциевого обмена. Киев: Наукова думка, 1975.-264 с.
212. Рудык Ю.С. Антагонисты кальция: новые перспективы // Клиническая фармация. 1998. - Т. 2, №. 2. - С. 13-17.
213. Саноцкий И.В., Фоменко В.Н. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм. Москва: Медицина, 1979. - 218 с.
214. Саркисова Д.С. Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций. Москва: Медицина, 1987. - 343 с.
215. Северин С.Е., Кочеткова М.Н. Роль фосфорилирования в регуляции клеточной активности. Москва: Наука, 1985. - 286 с.
216. Северин С.Е. Механизм действия и биологическая роль циклазной системы. Москва: Наука, 1981. - 196 с.
217. Семенова В.Н. Метод вероятностной оценки токсического эффекта. -Новосибирск: Наука, 1988. 125 с.
218. Сергеев П.В. Биологические мембраны. Москва: Медицина, 1973. - 278 с.
219. Сергеев Е.П., Можаев Е.А. Санитарная охрана водоемов. Москва: Медицина, 1979. - 152 с.
220. Сергеев П.В., Шимановский H.JI. Рецепторы физиологически активных веществ. Москва: Медицина, 1987. - 400 с.
221. Серкиз Я.И. Индуцированная хемилюминесценция мочи человека // Хемилюминесцентный метод в биологии и медицине. Киев. - 1978. - С. 105.
222. Сидоренко Г.И. Методические и теоретические аспекты гигиены окружающей среды // Гигиена окружающей среды в СССР. Москва: Медицина. - 1989. - С. 5-14.
223. Сидоренко Г.И., Можаев Е.А. Санитарное состояние окружающей среды и здоровье населения. Москва: Медицина, 1987. - 128 с.
224. Сидорик Е.П. Сверхслабое свечение митохондрий печени при индуцированном химическом канцерогенезе // Врачебное дело. 1968. -№4.-С. 12-15.
225. Сидорик Е.П., Баглей Е.А., Данко М.И. Биохемилюминесценция клеток при опухолевом процессе. Киев: Наукова думка, 1989. - 214 с.
226. Славин М.Б. Методы системного анализа в медицинских исследованиях. Москва: Медицина, 1989. - 304 с.
227. Соболев A.C. Радиационная биохимия циклических нуклеотидов. -Москва: Энергоатомиздат, 1987. 100 с.
228. Соколовский В.В. Определение содержания сульфгидрильных групп в крови амперометрическим титрованием // Лабораторное дело. 1962. - № 8.-С. 3-6.
229. Соколовский В.В., Нарциссор Р.П., Иванова Л.А. Цитохимия ферментов в профпатологии. Москва: Медицина, 1975. - 120 с.
230. Строганова Л.А. Сверхслабая люминесценция биологических систем как новый вид информации о некоторых физиологических и патологических процессах в организме // Педиатрия. 1975. - № 1. - С. 82-85.
231. Судак К.В. Системное квантование поведения // Успехи физиол. наук. -1983. Т. 14, № 1,-С. 3-26.
232. Таранова Н.П. Липиды центральной нервной системы при повреждающих воздействиях. Ленинград: Наука, 1988. - 157 с.
233. Тарусов Б.Н. Информационное значение сверхслабого свечения // Труды МОИП. 1972. - Вып. 39. - С. 9-17.
234. Тарусов Б.Н. Хемилюминесценция липидов при облучении // Первичные и начальные процессы биологического действия реакции. Москва. -1972.-С. 50-54.
235. Телегин В.А. Отдаленные последствия влияния группы неонолов в связи с нормированием в воде водных объектов // Медицинская экология. Гигиена производственной и окружающей среды. Харьков: ХГМУ. -1997.-С. 55-57.
236. Тимашов С.Ф. Физико-химия мембранных процессов. Москва: Химия, 1988.-236 с.
237. Тихая И.А. К проблеме применения в медицине метода биохемилюминесценции // Медицинская экология. Гигиена производственной и окружающей среды. Харьков: ХГМУ. - 1997. - С. 33-37.
238. Ткачук В.А., Авдонин П.Е., Палденков Г.Н. Изучение механизмов активации аденилатциклазы сердца адреналином и ионами фтора // Биохимия. 1983. - № 11. - С. 2000-2005.
239. Товмасян А.П., Галетян Г.Г., Улаян С.М. Хемилюминесцентный метод определения перекиси в биосредах // Гигиена и санитария. 1979. - № 5. -С. 75-76.
240. Торчинский М.Ю. Сульфгидрильные и дисульфидные группы белков. -Москва: Наука, 1971.-224 с.
241. Тугаринова В.Н., Миклашевский В.Е. Современные методы функционального исследования печени в санитарно-токсикологическом эксперименте // Санитарная охрана водоемов от загрязнения промышленными сточными водами. Москва: Медгиз. - 1964. - С. 301312.2+
242. Туровец Г.Л. Инициированная Fe -хемилюминесценция плазмы крови и мочи в остром периоде ревматизма у детей // Сверхслабое свечение плазмы крови в клинической диагностике. Москва: ММИ. - 1974. - С. 72-79.
243. Туровец Г.Л., Владимиров Ю.А. К методике регистрации инициированной хемилюминесценции в моче в гигиенических исследованиях // Гигиена и санитария. 1975. - № 10. - С. 60-62.
244. Уосли Дж. Новые методы культуры животных тканей. Москва: Мир, 1976.-255 с.
245. Уткина Н.С., Тузова Т.А. Некоторые особенности функционирования дыхательной и сердечно-сосудистой систем в зависимости от различных напряжений при монотонной работе // Всес. научная конф. по физиологии труда. Москва. - 1973. - С. 357-358.
246. Фархутдинов P.P., Владимиров Ю.А. Хемилюминесценция плазмы крови и ее фракций, инициированная ионами двухвалентного железа //Сверхслабое свечение плазмы крови в клинической диагностике. -Москва: ММИ. 1974. - С. 34-48.
247. Фриден Э. Биохимия меди // Молекулы клетки. Москва: Мир. - 1969. -Вып. 4.-С. 136-150.
248. Фур дуй Ф.И. Физиологические механизмы стресса и адаптации при остром действии стресс-факторов. Кишинев: Штиинца, 1986. - 238 с.
249. Хайдаршу Ч.Х. Нейромедиаторные механизмы адаптации. Кишинев: Штиинца, 1989.- 177 с.
250. Харман Г.Г. Современный факторный анализ. Москва: Статистика, 1972.-486 с.
251. Хасис Г.Л. Опыт изучения функции внешнего дыхания в производственных условиях // 6 Всес. научная конф. по физиологии труда. Москва. - 1969. - С. 139-141.
252. Хорст А. Молекулярные основы патогенеза болезней. Москва: Медицина, 1982. - 456 с.
253. Хочачка П., Сомеро Дж. Биохимическая адаптация. Москва: Мир, 1988. -565 с.
254. Хьюз М. Неорганическая химия биологических процессов. Москва: Мир, 1983.-380 с.
255. Чайка П.А. Экспрессный метод определения продукции С02 у лабораторных животных // Гигиена труда и проф. заболеваний. 1965. -№9.-С. 59-61.
256. Чередников A.A. Влияние группы ПАВ на фосфолипидный состав эритроцитов и гепатоцитов белых крыс при пероральном поступлении их в организм // Медицинская экология. Гигиена окружающей и производственной среды. Харьков: ХГМУ. - 1999. - С. 31-34.
257. Чередников A.A. Состояние антиоксидантной системы и окислительно-восстановительных процессов у белых крыс под действием неонолов иэфасола // Медицинская экология. Гигиена окружающей и производственной среды. Харьков: ХГМУ. - 1999. - С. 259-262.
258. Чершущенко Е.Ф., Когосова JI.C. Иммунология и иммунопатология заболеваний легких. Киев: Здоров' я, 1981. - 208 с.
259. Чистяков Е.Е., Полковниченко И.Т., Чепланов П.Е. Фосфорсодержащие поверхностно-активные вещества. Москва: ЦНИИТЭННефтехим. -1975.-44 с.
260. Шаляпина В.Г. Физиология гормональной рецепции. Ленинград: Наука, 1986.-230 с.
261. Шандала М.Г., Волошенко О.И., Мудрый И.В. Гигиеническое значение поверхностно-активных веществ в условиях загрязнения почвы химическими соединениями // Гигиена и санитария. 1991. - № 1. - С.4-6.
262. Шандала М.Г., Руднев М.М., Шеметун A.M. Методические подходы к оценке мутагенного действия факторов электромагнитной природы // Гигиена и санитария. 1983. - № 2. - С. 11-13.
263. Шахбазов В.Г. О генетическом значении ядерных биоэлектрических потенциалов // Состояние и перспективы развития генетики и генетических основ селекции. Киев. - 1966. - С. 94-95.
264. Шахбазов В.Г. Биоэлектрические потенциалы клеток и их возможное значение в эффекте гетерозиса и других генетических явлениях // Цитология и генетика. 1967. -Т.1, № 4. - С. 74-79.
265. Шахбазов В.Г. О локализации и биологическом значении электрического заряда живой растительной клетки // Электронная обработка материалов. 1970. -№ 2.-С. 67-70.
266. Шахбазов В.Г. Биоэнергетические свойства клеточного ядра, ядрышка и хроматина в функциональной активности ядерного генома // 1-й Всес. биофиз. съезд. Москва: МГУ. - Т. 2. - С. 826-828.
267. Шахбазов В.Г. Биоэлектрическая регуляция состояния ядерного генома в онтогенезе // Молекулярные и функциональные механизмы онтогенеза. -Харьков. 1987. - Т. 2. - С. 826-828.
268. Шахбазов В.Г., Колупаева Т.В., Гончаренко М.С. Суточный ритм изменений электрокинетических свойств клеточных ядер человека // Биохимические механизмы регуляции генетической активности. Киев. -1984.-С. 160-161.
269. Шахбазов В.Г., Шкорбатов Ю.Г. Активность ядерного генома и биоэлектрические свойства клеточного ядра и хроматина // Структура и функции клеточного ядра. Черноголовка. - 1987. - С. 95.
270. Шахбазов В.Г., Шкорбатов Ю.Г., Шенхайт К. Биоэлектрические свойства клеточного ядра и теплоустойчивость как показатели неспецифической устойчивости растений // Молекулярная генетика и биофизика. 1988. -Вып. 13.-С. 40-45.
271. Шея Дж. Методы генетики соматических клеток. Москва: Мир, 1985. -Т. 1. - 310 с.
272. Щербань Н.Г. Оценка кожно-резорбтивного действия лапроксидов методом биохемилюминесценции // Медицинская экология. Гигиена окружающей и производственной среды. Харьков: ХГМУ. - 1999. - С. 211-214.
273. Щербань Н.Г., Чередников А.А., Телегин В.А. Влияние группы неонолов на иммунобиологическую реактивность организма в эксперименте // Медицинская экология. Гигиена окружающей и производственной среды. Харьков: ХГМУ. - 1999. - С. 256-259.
274. Щютт X. Реакция бласттрансформации лимфоцитов. Москва: Мир, 1985.-Т. 1. -310 с.
275. Эйхгорн Г. Неорганическая биохимия. Москва: Мир, 1978. - Т. 1. - 688 с.-Т. 2.-664 с.
276. Эмануэль Н.М., Заиков Г.Е., Крицман В.А. Цепные реакции. Москва: Наука, 1989.-328 с.
277. Юдаев Н.А., Афиногенова Ф.А., Булатов А.А. Биохимия гормонов и гормональной регуляции. Москва: Наука, 1976. - 379 с.
278. Юдаев Н.А., Покровский В.В., Протасова Т.Н. Механизмы действия гормонов // Биохимия гормонов и гормональной регуляции . Москва, 1976.-С. 336-373.
279. Arenaz P., Bittickc L., Pannell К. Genotoxic potential of cvown ethers in salmonella typhimurium // Mutagenesis. 1989. - №. 4. - P. 437-438.
280. Arhem P., Frankenhaeuser В., Kvistbjarharson M. Inactivation of the potassinee transport system of myelinates nerve in the presence of a cyclic ionophore // Acta Physiol. Scand. 1982. - № 114 (4). - P. 593-600.
281. Artizzu M., Pani P., Satto G. The action of carbon tetrachloride on lisosomes in vitro // Biochem. Et biophys. Acta. 1964. - V. 82. - P. 454-462.
282. Astaldi L., Verga L. The glicogen content of the cell of Limphatic leumecia // Acta Haematol. 1957,-V. 17, №3,-P. 129-135.
283. Barder H.A., Bernheim F. Advauces in Gerontologie Research. 1967. - V. 2. -P. 355.
284. Beato M., Feigelson P. Clucocorticoidbinding protein of liver cytosol // Biol. Chem. 1972. - V. 247. - P. 7890-7896.
285. Bell P.A., Munck A. Steroid-binding properties and stabilisation of cytoplasmic glucocorticoid receptor from rat thymus cells // Biochem. 1973. -V. 136.-P. 97-107.
286. Bergmeyer H.U., BerntE. Methoden der enzymatischen analys. Berlin, 1970. - Bd.3. - S. 1536-1543.
287. Bernt E., Bergmeyer H.U. Methoden der enzymatischen analyze. Berlin, 1970.-Bd.3.-S. 1659-1665.
288. Birch F.W., Harries L.J., Raw S.W. A micro-chemical method for determining the hexuronic acid (Vitamin C) content of food staffe // Biochem. 1983. - V. 27, №2.-P. 590-594.
289. Brockhuse R.M. Phospholipide structure of erythrocytes and hepatocytes // Clin. Biochem. 1974. - V. 14, № 3. - P. 157-158.
290. Buttkus H.J. Food science. 1967. - V. 32. - P. 432.
291. Chuang D.M., Kinner W.S., Farber L. Biochemical study of receptor internalization during beta-adrenergenic receptor desensitization in from erythrocytes // Mol. Pharmacol. 1980. -V. 18. - P. 348-355.
292. Chuang D.M., Costa E. Evidence for internalization of recognition site of beta-adrenergic receptors during subsensitivity induced by isoproteterenol // Proc. Nath. Acad. Sei. USA. -1979. V. 76. - P. 3024-3028.
293. Claman H.W. Thymus-marrow cell combinations: Sinergism in antibody production//Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1966. - V. 122. - P. 1167-1171.
294. CessiC. etal. Biochemical. 1966.-V. 101.-P. 45.
295. Chio K.S., Tappel A.L. Biochemistry. 1969. -V. 8. - P. 2821-2827.
296. Crawford E.L. Food Sciens. 1967 . -V. 32. - P. 332.
297. Christion C.D. Atomic absorpion spectroscopy for the determination of element in medical biological samples // Forschr. Chem. Forsch. 1972. - № 26.-S. 77-112.
298. Clark S.L. The thymus in immunology. New-York, London. , 1964. -134 p.
299. Cormana E., Uomes C., Trolin V. Purification of GABA on small colunus of Dowex 50 w: combination with a method for separation of biogenic amines // Acta pharm. et toxic. 1980. - № 46. - P. 235-240.
300. Corman A.L., Mermann A., Thomas M.V. Intracellular calcium and the central of neuronal pacemaker activity. Fed.Proc, 1981.-V. 40.-P. 2233-2239.
301. Сох E.C., Yanofsky C. Mutator gene studies in Escherichia coli // J.Bacter. -1969. -№ 100.-P. 390-397.
302. Dijk H., Bloksma N. Onantification in vitro antibody secretion by immune spleen cells//J. Immunol. Methods. 1977. - V. 14. - P. 325-331.
303. Endo Y., Ogura Y.A. Rapid and simple determination of histamine and polyamines // Japan J.Pharmacol. 1975. - № 25. - P. 610-612.
304. Ernster L., Siekevitz Ph., Palode G.E. Enzyme-structure relation-shipe in endoplasmatic reticulum of rat liver. A morphological and biochemical study // J. Molek. Biol. 1962.-V.15,№3.-P. 541-562.
305. Haves A.G. Vitamin E deficiency and far stress in the dog // J.Nutr. 1969. -№2. -P. 196-209.
306. Hirata F., Axelrod J. Enzymatic synthesis and rapid translocation of phosphatidylcholine by two methyltransferases in erythrocyte membrane // Proc. Nath. Acad. Sci. USA. 1978. - V. 75. - P. 2348-2352.
307. Horton E.W. Prostaglandins. Berlin, New York:Heidelbergs Spinger -Verlag, 1972.- 197 p.
308. Howard J.M. Serum nickel in myocardial infarction // Clin. Chem. 1980. -V.26. - № 10.-P. 1515.
309. Howe J.R., Yaksh T.L. Characterization of H-rauwolsine binding to alpha-2-adrenoreceptor sites in the lumbar spinal cord of the cat-comparison to such binding sites in the cat frontal cerebral cortex // Brain Res. 1986. - V. 1. - P. 368-373.
310. Jerne N.K., Nordin A.A. Plaque-formation in agar by single antibody producing cells // Science. 1963. - V. 140. - P. 405-406.
311. Jondal M. Surtace markers an human T and B-lymphocytes a large population of lymphocytes, forming non-immune rosettes with sheep red blood cells // J.Exp.Med. - 1978. - № 2. - P. 207-215.
312. Kebabian J.W., Calne D.B. Multiple receptor for dopamine // Nature. 1979. -V. 27.-P. 93-96.
313. Komoth S.A., Narayan K.A. Interaction of Ca2+ with endoplasmic reticulum of rat livery a standardized procedure for the isolation of rat liver microsoms // Analyt. Biochem. 1972. - V. 48, № 1. - P. 53-61.
314. Laemli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T 4 // Nature. 1970. - V. 227. - P. 680-685.
315. Leaf C.W. Toxicology of some (Block Polymer) nonionic surfaces // Soap and Chem. Spec. 1967. -V. 43. - P. 48.
316. Lee J., Chin Sen, Wilsen Th. Oxide in chemilluminiscence. A comparative pathway of dioxetane decomposition catalyzed by electron donors // Chemilluminiscence and Biolluminiscence: Proc. Sympos., 1972. New York, London, 1973.-P. 265-287.
317. Lim R.K., Rink K.C., Class H.G. A method for the evaluation of cumulation and tolerance by the determination of acute and subakute medium effective doses // Arch. Int. Pharmac. Et Ther. 1961. - № 30. - P. 336-339.
318. Lymdsten T. Studies of functional subpopulations of B-cell in mice correction of the immene defect of CBA/N mice by transfer of C 3 receptor-bearing B-cells // Cellular Immunology. 1981. - V.61, № 2. - P. 386-396.
319. Marston H.A., Allen S.H. Function of copper in the metabolism of iron // Nature. 1967.-V. 215.-P. 645-647.
320. Miyama M. Immunological properties of Fc receptor on lymphocytes. A functional differences between Fc receptorpositive and negative limphocytes in humoral immune responses // Cellular. Immunol. 1978. - V. 35, № 2. - P. 253-265.
321. Moore R.L., Osborne L.L., Davies R.W. The mutagenic activity of a section of the sheep river alberta, receiving a chlorinated sewage effluent. Wat. Res., 1980.-V. 14, №7.-P. 917-920.
322. Omura T., Sato R. The carbon monooxidebinding pigment of liver microsoms // Biol. Chem. 1964. - V. 239, № 7. - P. 2379-2385.
323. Parker M.W. The use of animals in toxicity studies // Lab.Pract. 1963. - V. 12, №7.-P. 634-637.
324. Prichard D.C., Bechtel W.D., Rouot B.M. Multiple apparent alpha-noradrergic receptor binding sites in rat braineffect of 6-ohda // Molec. Pharmac. 1986. -№ 16.-P. 47-60.
325. Ravin H.A. Effect of ceruloplasmin on plasma iron in copper deficit swine // Amer.J.Phisiol. 1961. - V. 217, №5. -P. 1320-1323.
326. Ringelhann B. Metabolism of iron and copper. Orvozkepe. 1966. - № 2. - P. 110-112.
327. Samuelsson B., Dahlen S.E., Lindgren J. Leukotriens and lipoxins structures biosynthesis and biological effects // Science. 1987. - V. 237. - P. 11711176.
328. Sattin A., Rale T.W., Janeilla J. Regulation of cyclic AMP levels in guinea pig cerebral cortex by interaction of alpha-adrenergetic and adenosine receptor activity // J.Pharmacol.Exp.Therap. 1975. -V. 192. - P. 22-32.
329. Satherland E.W., Robinson C.A. The role of cyclic 3,5-AMP in response to catecholamines and of the hormones // Pharmacol. Rev. 1966. - V. 18. - P. 145-161.
330. Selye H. The evolution of the stress concept: Stress and cardiovascular disease // Amer.J.Cardio. 1970. - № 3. - P. 289-299.
331. Sengler J., Peter B., Oberling P., Eber M. Correlation entre le fer plasmatigue et les reserves martiales des sujets agds // Nouv. Presse med. 1978. - № 36. -P. 3261.
332. Seeman P. Nomenclature of central and peripheral dophamiergic sites and receptors//Biochem. Pharmacol. 1982. - V. 31.-P. 2563-2568.
333. Slabo G., Kovacs G.L., Telegdy G.A. A modified sereening method for rapid simultaneous determination of dofamine, noradrenaline and serotonin in the same brain regio // Acta Physiol. Bung. 1983. - V. 61. - P. 51-57.
334. Series P. Biomedical computer programs: BMDP-79 // Edition. 1979.
335. Schick M.J. Nonionic surfactants. London, 1967. - P. 923-927.
336. Schilling R.J., Reitz R.C. A mechanism for ethanol-induced damage to liver mitochondrial structure and function // Biochem. Biophys. Acta. 1980. - V. 603, №2.-P. 226-277.
337. Shiota K., Chou N.J., Nishimura H. Embryotoxin effects of Di-2-Ethylhexyl phthalate (DEHP) and D-n-Butyl-Phathalate (DBP) in mice // Environm. Res. -1960.-№ l.-P. 245-253.
338. Somlyo A.P., Somlyo A.V. Vascular smooth muscle. Pharmacology of norman and hypertensive vessels // Pharmacol. Rev. 1970. - V. 22, № 2. - P. 249253.
339. Taylor E.W. Yorty first reports on the results of the bacteriological, chemical and biological examination in the London water for the years 1963-1964. -London, Metropolitan Water Board.
340. Tappel M.E., Chandiere j., Tappel A.N. Glutathione peroxidase activities of animal tissues // Comp. Biochem. Physiol. 1982. - V. 73, № 4. - P. 945-949.
341. Tappel A.A. Lipids and their oxidation. Westport A.V.J.Publ.Co. Inc., 1962.
342. Triggle D.S., Triggle C.R. Chemical pharmacology of synapse. London:New York. - Acad. Press. - 1976. - 654 p.
343. Van Bogelen R.A., Kelley P.M., Neidhardt F.C. Differential induction of heat shock, SOS and oxidation stress regulons and accumulation of nucleotides in Excherichia coli // J. Bacteriol. 1987. - V. 169, № 1. - P. 26-32.
344. Vashovaky V.E., Terekkive T.A. URTIC of phospholipids micstures containing phosphotidyl glycerol // J.High Res Chromatog. 1979. - V. 2, № 11.-P. 671-672.
345. Weil C.B., Carpenter C.P., West J.B. Reproductivety of single oral doses toxicity testing. Amer.Industr. Hyg.Assoc.J. - 1968. - V. 27, № 6. - P. 483487.
346. Wilson J. Teratology. Principles and techniques. New York, 1965. - P. 216235.313
347. Wilson J. Teratogenic effects of environmental chemicals // Fed. Proc. 1977. -V. 36, №5.-P. 1698-1703.
348. Williams F. The formation of free radicals and the consequences of their reactions in vivo // Protochem. And photobiol. 1972. - V. 28, № 4-5. - P. 737-797.
-
Жуков, Виктор Иванович
-
доктора биологических наук
-
Ростов-на-Дону, 2000
-
ВАК 03.00.04
- Изучение механизма формирования везикулярных структур при реконструкции мембран
- Гемолиз эритроцитов детергентами
- Na, К-АТФаза как интегральный компонент плазматической мембраны эритроцитов и её свойства при некоторых физиологических состояниях
- Детергенты в водах залива Петра Великого и их влияние на морскую биоту
- Исследование влияния экзотоксикантов на некоторые ткани и органы черноморского лосося (Salmo trutta L.P.) в раннем онтогенезе
