Сравнительный биохимический анализ лектинов головного мозга человека и животных

Епифанова, Светлана Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Сравнительный биохимический анализ лектинов головного мозга человека и животных
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Сравнительный биохимический анализ лектинов головного мозга человека и животных"

На правахрукописи

ЕПИФАНОВА Светлана Владимировна

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ БИОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЛЕКТИНОВ ГОЛОВНОГО МОЗГА ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ)

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Курск - 2004

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Курский государственный университет»

Защита состоится 23 ноября 2004 г. в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д.220.040.03 при ФГОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова» по адресу: 305021, г. Курск, ул. К. Маркса, 70.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова»

Автореферат разослан «22» октября 2004 г.

Фурман Юрий Васильевич

Горшков Григорий Иванович

доктор биологических наук, профессор Шапошников Андрей Александрович

Ученый секретарь диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Важной проблемой современной биологической и медицинской науки является изучение механизмов информационного взаимодействия между клетками нервной ткани. Большая роль в процессе белок-углеводного узнавания принадлежит лектинам, так как именно они, обладая углеводной специфичностью, являются наиболее активными эффекторами адгезии и обеспечивают согласованную работу органов и тканей в единой биологической системе.

Лектины представляют собой соединения, способные узнавать и специфически связывать сахара и углеводные компоненты сложных молекул, вызывая агглютинацию клеток или преципитацию полисахаридных конъюгатов; в свою очередь, поверхностные углеводы мембран принято рассматривать как детерминанты клеточного узнавания (I.J. Goldstein et al., 1986; S. Barondes, 1988; А.Д. Луцик и др., 1989; М.А. Пальцев и др., 1995; и др.). Патология в процессе межклеточных взаимодействий, возникающая при нарушении белок-углеводного узнавания, приводит к изменению эмбриогенеза, ослаблению местных и общих защитных реакций, развитию онкологических и инфекционных заболеваний.

В настоящее время накоплены многочисленные данные о лектинах, выделенных из почек, печени, сыворотки крови, определена их углеводная специфичность к моносахаридам. Биологически активные вещества - лектины - содержатся в любом живом организме, что открывает перспективы для дальнейшего изучения эволюционных процессов. Несмотря на многочисленность исследований о роли лектинов как углеводузнающих молекул, остается еще достаточно неизученных вопросов. В частности, отсутствие в литературе сведений об олигосахаридной специфичности и свойствах нейролектинов не позволяет в полной мере использовать их в биологии, гистологии и медицине. В связи с этим представляется важным выделение лектинов головного мозга млекопитающих, изучение их углеводсвязывающих и биохимических свойств.

Цель и задачи исследования. Целью нашей работы явилось комплексное исследование по выделению и идентификации гликозаминогликансвязываю-щих лектинов головного мозга человека и кролика, изучение их биохимических свойств, а также разработка методов качественного и количественного определения гепаринсвязывающих лектинов в экстрактах мозговой ткани и сыворотке крови.

Поставленная цель реализовалась при решении следующих задач:

1. Изучить влияние различных способов получения экстрактов мозговой ткани на активность взаимодействия со следующими гликозаминогликанами: нефракционированным, низкомолекулярным и десульфатированным гепарином, гиалуроновой кислотой, хондроитинсульфатом.

2. Установить зависимость активности лектин-углеводных взаимодействий от реакции среды.

3. Исследовать влияние различных концентраций карбамида и натрия хлорида на взаимодействие нефракционированного гепарина с лектинами головного мозга и сыворотки крови при изменении реакции среды.

4. Сравнить биохимические свойства гепаринсвязывающих лектинов го-

ловного мозга и сыворотки крови.

uillUAliiJII>H\4 ■

Научная новизна. На основании комплексных исследований впервые выявлено наличие нейролектинов с общей олигосахаридной специфичностью к гликозаминогликанам у человека и животных. Впервые установлена углеводная специфичность нейролектинов человека и кролика к низкомолекулярному, десульфатированному гепарину, хондроитинсульфату, гиалуроновой кислоте. Изучено влияние реакции среды, натрия хлорида и карбамида на углеводсвя-зывающие свойства лектинов головного мозга.

Теоретическая и практическая значимость работы. Углевод-ферментный анализ позволил выявить нейролектины с общими биохимическими свойствами и углеводной специфичностью к гликозаминогликанам у эволюционно удаленных классов млекопитающих (человека и кролика), что важно для понимания процесса эволюции нервной системы. Полученные данные вносят существенный вклад в изучение молекулярных механизмов межклеточного взаимодействия в нервной системе и могут использоваться в качестве нормативных показателей при лабораторной диагностике заболеваний нервной системы. Материалы исследования могут быть использованы для разработки научно обоснованных рекомендаций при изучении курсов биохимии, гистологии и цитологии в высших учебных заведениях.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Зависимость концентрации водорастворимых белков и гликозаминогликан-связывающей активности лектинов от способа получения экстракта.

2. Влияние реакции среды на активность связывания исследуемых экстрактов головного мозга человека и кролика с гликозаминогликанами (неф-ракционированным, низкомолекулярным и десульфатированным гепарином, хондроитинсульфатом, гиалуроновой кислотой).

3. Влияние натрия хлорида и карбамида на активность взаимодействия экстрактов головного мозга с нефракционированным гепарином.

4. Установленное сходство биохимических свойств гепаринсвязывающих лектинов экстрактов головного мозга человека и кролика.

5. Влияние реакции среды, натрия хлорида и карбамида на активность взаимодействия сыворотки крови человека и кролика с нефракционированным гепарином.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертации отражены в 5 научных публикациях.

Результаты работы изложены в выступлениях на международной научно-практической конференции «Технологические аспекты производства продукции растениеводства и животноводства» (Брянск, 2004), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Сорбенты как фактор качества жизни и здоровья» (Белгород, 2004), межвузовской научно-практической конференции «Проблемы экологии в науке и образовании» (Курск, 2004), научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава Курской государственной сельскохозяйственной академии имени профессора И.И. Иванова (Курск, 2004).

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложений. Работа изложена на 134 страницах компьютерного текста, содержит 3 таблицы и 27 рисунков. Список использованной литературы включает 240 источников, в том числе 107 - иностранных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования по теме диссертационной работы выполнены в 2001-2004 гг. на базе кафедры физиологии и зоогигиены и кафедры органической и биологической химии Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова», иммунологической лаборатории Муниципального учреждения здравоохранения «Больница скорой медицинской помощи», иммунологической лаборатории Федерального государственного унитарного предприятия «Курская биофабрика - фирма Биок» и клинико-биохимической лаборатории Муниципального учреждения здравоохранения «Противотуберкулезный диспансер».

Объектом исследования были выбраны гликозаминогликансвязывающие лектины головного мозга человека и кролика, полученные методом экстрагирования из нейронов и нейроглии.

В рамках поставленных задач настоящего исследования биохимическому анализу подвергались экстракты нервной ткани головного мозга (ГМ) 12 практически здоровых мужчин, погибших в результате несчастных случаев (средний возраст 41+6,3), и экстракты нервной ткани ГМ 15 клинически здоровых кроликов. Экстракцию нервной ткани больших полушарий головного мозга проводили физиологическим (0,15М) раствором натрия хлорида, 2М раствором натрия хлорида и 4М раствором карбамида. Также исследовали гепаринсвязы-вающие свойства сыворотки крови 30 клинически здоровых людей и сыворотки крови 15 кроликов.

В работе с полученными экстрактами головного мозга человека использовали следующие индексы системы обозначений:

51 - экстракт головного мозга человека, содержащий белки, растворимые в изотоническом (0,15М) растворе натрия хлорида;

52 - экстракт головного мозга человека, содержащий белки, растворимые в 2М растворе натрия хлорида;

S4 - экстракт головного мозга человека, содержащий белки, растворимые в 4М растворе карбамида.

В работе с полученным экстрактами головного мозга кролика использовали следующие индексы системы обозначений:

K1 - экстракт головного мозга кролика, содержащий белки, растворимые в изотоническом растворе натрия хлорида;

К2 - экстракт головного мозга кролика, содержащий белки, растворимые в 2М растворе натрия хлорида;

К4 - экстракт головного мозга кролика, содержащий белки, растворимые в 4М растворе карбамида.

Концентрацию белка определяли по методу Лоури. Способность лектинов связываться с гликозаминогликанами изучали методом углевод-ферментного анализа. Он проводился по модифицированной для углевод-ферментного анализа методике, используемой при иммуноферментном анализе с применением аналогичного оборудования и реактивов (X. Фримеля, 1979; Т.Т. Нго и др., 1988; М. Тертон, 1991; A.M. Егоров и др., 1991).

С целью регистрации результатов углевод-ферментного анализа проводили конъюгацию исследуемых гликозаминогликанов с пероксидазой, которая

играла роль маркера, и по ее активности судили о количестве связавшегося лектина. В нашей работе использовалась методика конъюгации гликозаминог-ликанов с пероксидазой A. Staines (1980) в нашей модификации. Окисление углеводного компонента пероксидазы осуществляли натрия перйодатом. Затем растворы окисленной пероксидазы и гликозаминогликанов перемешивали и добавляли натрия боргидрид. Методом диализа синтезированный конъюгат освобождали от примеси боргидрида. Изготовленные конъюгаты смешивали 1:1с глицерином и хранили при -20°С не более 18 месяцев.

В работе использовали следующие гликозаминогликаны (ГАГ): нефрак-ционированный, низкомолекулярный и десульфатированный гепарин, хонд-роитинсульфат, гиалуроновую кислоту.

Цифровой материал обработан статистическими методами с вычислением среднеарифметической (М), ошибки средней (m), аргумента Стьюдента (td) в описании Г.Ф. Лакина (1990). Разница между сравниваемыми величинами считалась достоверной при р < 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Влияние реакции среды на активность взаимодействия гликозаминогликанов с лектинами головного мозга

В рамках задач настоящего исследования было проведено изучение изменения уровня активности лектин-углеводного взаимодействия в зависимости от реакции среды. В опыте исследовали экстракты головного мозга человека (Б^ Б2 и Б4) и экстракты головного мозга кролика (К1, К2 и К4).

Со всеми исследуемыми экстрактами проводили углевод-ферментный анализ с гликозаминогликанами, конъюгированными с пероксидазой. Использовали углевод-ферментные конъюгаты ГАГ: нефракционированный, низкомолекулярный и десульфатированный гепарин, хондроитинсульфат и гиалу-роновую кислоту, разведенные 1:80 буферными растворами с рН от 2 до 9.

1. Анализ результатов лектин-углеводных взаимодействий экстрактов головного мозга человека с нефракционированным гепарином (рис. 1) показал, что наибольшая лектиновая активность у экстракта зарегистрирована в кислом диапазоне при рН 5 (В = 0,792) и в щелочной среде при рН 9 (В = 1,445). Оптическая плотность при рН 5 ниже чем при рН 9 на 55%. В нейтральной среде при рН 7 отмечается незначительная тенденция к усилению связывания лектинов (В = 0,591). В присутствии буферных растворов с рН 2-4 связывание лектинов экстракта с гепарином происходило на самом низком уровне, показатели оптической плотности составили 0,135-0,209.

Экспериментальные данные, полученные при изучении гепаринсвязы-вающих свойств экстракта Б2, имеют те же закономерности, что и лектины экстракта но обладают большей активностью. Оптическая плотность Б2 при рН 5 выше на 27 (В = 1,008), а при рН 9 - на 15% (В = 1,665).

У экстракта отмечается более низкая по сравнению с экстрактами Б2 и активность лектин-гепаринового взаимодействия. Так, при рН 5 показатели оптической плотности относительно экстракта ниже на 22 (В = 0,618), а при рН9-на10%(В = 1,288).

—■—Б2 —*——•——»-вг —

Рис. 1. Взаимодействие хстрактсв ГМ Рис. 2. Взаимодействие жстржтов ГМ

человека с гепарином человека сНМГ

2. В реакции с низкомолекулярным гепарином (рис. 2), в отличие от связывания с нефракционированным гепарином, наблюдали активность лектин-углеводного взаимодействия со всеми экстрактами в кислой среде при рН 2 и 3 ф = 0,627-1,147). В зоне рН от 4 до 9 лектиновая активность у всех видов экстрактов мозговой ткани сохранялась на минимальном уровне (Б = 0,1310,411). При рН 8 регистрировалась тенденция к усилению связывания, показатель оптической плотности при взаимодействии с экстрактом составил 0,365 и с S2 - 0,535. При данном значении рН у экстракта S4 увеличения показателя оптической плотности зарегистрировано не было ф = 0,175).

3. В опыте с хондроитинсульфатом В (рис. 3) выявлено, что для всех экстрактов мозга человека характерен один диапазон оптимального связывания в кислой среде при рН 2-4, наиболее активно связывание происходило при рН 3 ф = 2,015-2,214). В присутствии буферных растворов с рН от 5 до 9 зарегистрированы низкие показатели оптической плотности ф = 0,227-0,517), что свидетельствует о снижении способности лектинов связываться с гликозаминог-ликанами в данных условиях.

4. Усиление активности гликозаминогликан-лектинового взаимодействия наблюдалось и в реакции экстрактов мозга человека с гиалуроновой кислотой (рис. 4) в кислой среде при рН 2-4 ф = 0,634-1,289). В отличие от реакции с хондроитинсульфатом при рН 3 уровень активности у всех экстрактов был на 61% ниже.

5. Из всех проанализированных гликозаминогликанов наименьшим уровнем активности лектин-рецепторного взаимодействия обладал десульфатиро-ванный гепарин (рис. 5). У исследуемых экстрактов головного мозга человека при проведении углевод-ферментного анализа с десульфатированным гепарином при рН от 2 до 9 величина оптической плотности не превышала 0,403.

Анализ полученных экспериментальных данных показал, что активность связывания лектинов ГМ зависит от способа получения экстракта и вида ГАГ. Изменение реакции среды может вызывать как усиление, так и полное блокирование углеводсвязывающих свойств лектинов головного мозга.

Результаты проведенного углевод-ферментного анализа с экстрактами ГМ кролика показали, что исследуемые нейролектины обладают способностью связываться с гепарином. Способ получения экстракта и изменение реакции среды оказывают существенное влияние на лектин-углеводные взаимодействия.

Сравнение показателей уровня активности взаимодействия с гепарином исследуемых экстрактов головного мозга кролика представлено на рис. 6. Наиболее активно во взаимодействие с гепарином вступал экстракт К2, значительное увеличение показателей оптической плотности отмечалось в кислой среде при

рН 5 (В = 0,602) и в щелочном при рН 9 (В = 1,362). Оптическая плотность при рН 9 выше чем при рН 5 в 2 раза.

Экспериментальные данные, полученные при анализе лектиновой активности экстракта К1, имели те же закономерности, что и лектины экстракта К2, но обладали меньшей активностью. Оптическая плотность К4 при рН 5 ниже на 12 (В = 0,532), а при рН 9 - на 11% (В = 1,205). У экстракта К4 активность лектинов была снижена относительно двух предыдущих экстрактов. При рН 5 показатели оптической плотности по сравнению с экстрактом К2 оказались ниже на 18, а при рН 9 - на 22%.

Таким образом, на основании проведенных экспериментов можно заключить, что в реакции с нефракционированным гепарином лектины экстрактов ГМ человека и кролика проявляют сходные углеводсвязывающие свойства, что свидетельствует о наличии лектинов с общей олигосахаридной специфичностью у эволюционно удаленных классов млекопитающих.

Влияние натрия хлорида на взаимодействие гликозаминогликанов с белками экстрактов головного мозга

В данном эксперименте с целью изучения влияния различных концентраций натрия хлорида на активность лектин-углеводных взаимодействий при изменении реакции среды провели углевод-ферментный анализ с исследуемыми экстрактами ГМ человека (Б1, и Б4) и кролика (К1). Для углевод-ферментного анализа использовали нефракционированный гепарин, конъюги-рованный с пероксидазой, разведенный 1:80 растворами натрия хлорида следующих концентраций: 0,2; 0,3; 0,5; 1; 2; 3; 3,8; 4М. Натрия хлорид растворяли в 0,001М буферных растворах с рН от 2 до 9.

Полученные результаты углевод-ферментного анализа в присутствии натрия хлорида с экстрактами ГМ человека представлены в таблице 1.

1. Способность экстракта связываться с гепарином в присутствии натрия хлорида зависела от концентрации соли и реакции среды. При добавлении натрия хлорида в кислой среде при рН 2-4 происходило значительное усиление связывания лектинов с гепарином. Так, показатели оптической плотности без добавления №С1 в данном диапазоне колебались от 0,135 при рН 2 до 0,209 при рН 4, а в присутствии №С1 увеличивались до 1,448-2,074. При рН 5 в присутствии 0,2; 0,3 и 0,5М отмечалось снижение оптической плотности в среднем в 2 раза. Большие концентрации КаС1 усиливали лекти-новую активность (В = 1,265-1,453). При рН 6 только высокие концентрации натрия хлорида от 3 до 4М оказывали усиливающее влияние на связывание лектинов с гепарином, показатели оптической плотности возрастали в среднем в 3 раза и составляли 0,696-0,822. В нейтральной и слабощелочной зоне натрия хлорид не оказывал существенного влияния. При рН 9 зарегистрирована тенденция к ослаблению связывания нейролектинов с гепарином в присутствии КаС1.

2. В присутствии №С1 при рН 2-6 отмечалось усиление гепаринсвязы-вающих свойств экстракта Б2. В нейтральной и слабощелочной зоне натрия хлорид не оказывал существенного влияния. При рН 9 зарегистрирована тенденция к ослаблению связывания экстракта с гепарином в среднем на 32%.

1. Влияние натрия хлорида на взаимодействие гликозаминогликанов с белками экстрактов мозга человека

рН2 рНЗ РН4 РН5 рне РН7 рН 8 РН9

Экстракт

Без №01 0,171±0,021 0,135±0,024 0,209±0,031 0,792±0,018 0,238±0,039 0,378±0,041 0,297±0,044 1,445±0,058

0,2М 2,074±0,124 1,448±0,106 1,488±0,074 0,441±0,097 0,361±0,042 0,444±0,051 0,419±0,087 1,241±0,107

0,ЗМ 1,861±0,104 1,775±0,112 1,463±0,085 0,399±0,105 0,311 ±0,056 0,476±0,048 0,346±0,078 1,070±0,056

0,5М 1,736±0,087 1,737±0,096 0,817±0,062 0,391 ±0,084 0,318±0,035 0,441±0,054 0,396±0,089 1,212±0,086

1М 1,857±0,095 1,949±0,089 1,598±0,091 1,329±0,095 0,306±0,041 0,359±0,031 0,354±0,061 1,123±0,071

2М 1,516±0,119 1,505±0,090 1,561 ±0,047 1,265±0,078 0,385±0,022 0,389±0,029 0,466±0,083 1,101±0,028

ЗМ 1,610±0,086 1,722±0,087 1,590±0,098 1,441 ±0,071 0,696±0,054 0,410±0,043 0,360±0,025 1,123±0,094

3,8М 1,995±0,107 1,778±0,119 1,567±0,101 1,453+0,119 0,821±0,069 0,385±0,037 0,428±0,069 1,346±0,031

4М 2,012±0,092 1,760±0,067 1,540±0,078 1,430±0,085 0,822±0,071 0,426±0,018 0,514±0,057 1,165±0,105

Экстракт Эг

Без №С1 0,171±0,019 0,127±0,034 0,217±0,042 1,088±0,027 0,395±0,042 0,591±0,052 0,470±0,026 1,665±0,016

0,2М 1,921±0,120 1,898±0,074 1,526±0,082 0,295±0,031 0,308±0,021 0,518±0,34 0,569±0,074 1,162±0,010

0,ЗМ 1,652±0,095 1,571±0,107 1,461 ±0,097 0,337±0,028 0,243±0,037 0,392±0,029 0,351±0,068 1,281±0,083

0,5М 1,954±0,114 1,873±0,117 0,796±0,107 0,263±0,018 0,191±0,015 0,229±0,015 0,255±0,057 1,207±0,095

1М 1,161±0,117 1,601 ±0,087 1,709±0,079 1,342±0,068 0,178±0,014 0,207±0,012 0,142±0,049 0,850±0,089

2М 2,119±0,135 1,784±0,049 1,719±0,109 1,508±0,097 0,313±0,054 0,257±0,017 0,188±0,017 1,009±0,120

ЗМ 2,168±0,086 2,164±0,081 1,760±0,061 1,492±0,103 0,696±0,067 0,272±0,031 0,268±0,026 1,096±0,077

3,8М 2,168±0,092 2,114±0,098 1,830±0,071 1,498±0,083 0,604±0,053 0,293±0,025 0,203±0,018 1,156±0,058

4М 2,151±0,058 2,135±0,134 1,884±0,118 1,553±0,117 0,728±0,078 0,375±0,048 0,439±0,037 1,273±0,065

Экстракт

Без МаС1 0,178±0,027 0,15±0,017 0,189±0,016 0,618±0,015 0,308±0,050 0,510±0,048 0,390±0,036 1,288±0,024

0.2М 1,330±0,095 1,140±0,056 0,701±0,086 0,242±0,011 0,207±0,025 0,237±0,018 0,181±0,015 0,763±0,081

0,ЗМ 1,032±0,075 0,679±0,081 0,690±0,109 0,188±0,017 0,183±0,031 0,227±0,021 0,192±0,043 0,851±0,128

0,5М 1,391 ±0,084 0,829±0,024 0,281±0,018 0,154 ±0,034 0,132±0,019 0,196±0,010 0,249±0,028 1,029±0,146

1М 1,122±0,068 0,841±0,108 1,287±0,117 0,361 ±0,022 0,140±0,010 0,152±0,016 0,150±0,012 1,056±0,053

2М 1,792±0,057 1,152±0,093 1,555±0,103 0,748±0,019 0,163±0,023 0,200±0,025 0,166 ±0,045 1,056±0,073

ЗМ 1,924±0,066 1,491 ±0,052 1,613±0,054 1,022+0,014 0,204±0,041 0,175±0,032 0,173±0,038 1,096±0,086

3,8М 1,876±0,051 1,534±0,045 1,804±0,072 1,172±0,059 0,192±0,037 0,185±0,064 0,162±0,019 0,982±0,068

4М 1,936±0,104 1,548±0,038 1,812±0,041 1,188*0,093 0,303±0,018 0,252±0,038 0,237±0,105 1,084±0,059

2. Влияние натрия хлорида на взаимодействие гепарина с белками экстракта ГМ кролика (К,)

рН 2 рНЗ рН 4 рН 5 рИ 6 рН 7 рН 8 рН 9

Без №С1 0,162±0,031 0,146±0,019 0,181±0,014 0,532±0,018 0,266±0,012 0,312±0,022 0,286±0,015 1,205±0,022

0.2М 2,025±0,141 1,926±0,037 1,459±0,074 0,560±0,098 0,405±0,019 0,699±0,054 0,438±0,032 1,254±0,117

0,ЗМ 2,037±0,148 2,031±0,125 1,559±0,063 0,545±0,081 0,445±0,015 0,682±0,069 1,381±0,024 1,254±0,134

0.5М 1,986±0,068 1,987±0,086 1,595±0,104 0,496±0,014 0,378±0,023 0,479±0,071 0,469±0,047 1,358±0,092

1М 2,058±0,096 1,821 ±0,081 1,652±0,108 1,470±0,036 0,392±0,020 0,455±0,089 0,470±0,013 1,379±0,068

2М 2,229±0,105 2,014±0,118 1,679±0,045 1,511 ±0,077 0,542±0,034 0,800±0,071 0,422±0,038 1,393±0,074

ЗМ 2,081 ±0,084 2,066±0,108 1,832±0,066 1,569±0,061 0,828±0,067 0,483±0,056 0,730±0,052 1,353±0,103

3,8М 2,089*0,093 2,109±0,139 1,806±0,105 1,564±0,053 0,947±0,058 0,471 ±0,074 0,53±0,049 1,533±0,118

4М 2,095±0,112 2,117±0,107 1,869±0,034 1,682±0,049 1,005±0,072 0,484±0,097 0,605±0,062 1,574±0,089

3. Сравнение полученных результатов взаимодействия экстракта с гепарином в присутствии натрия хлорида с зарегистрированными показателями оптической плотности экстрактов и Б2 позволило установить, что в кислом диапазоне при рН 2-6 натрия хлорид оказывает однотипное влияние на все виды исследуемых экстрактов ГМ человека, при рН 7-9 отмечалось супрессивное влияние №С1 на лектиновую активность. Так, при рН 7 показатели оптической плотности в среднем снижались на 58, при рН 8 - на 51, при рН 9 - на 23%.

В таблице 2 представлены результаты исследования влияния натрия хлорида на лектиновую активность экстракта К1. В кислом диапазоне при рН 2-4 отмечалось значительное увеличение показателей оптической плотности (В = 1,4592,089). При рН 5 и 6 низкие концентрации натрия хлорида (менее 1М) не оказывали существенного влияния, а более высокие концентрации усиливали взаимодействие с гепарином. В нейтральном и щелочном диапазоне (рН 7-9) натрия хлорид усиливал связывание гепарина с лектинами экстракта головного мозга кролика К1.

Таким образом, в данном эксперименте установлено, что в кислом диапазоне рН от 2 до 5 влияние натрия хлорида на связывание лектинов ГМ человека и кролика однотипно, а в диапазоне рН от 6 до 9 - индивидуально для каждого вида исследуемых экстрактов.

Влияние карбамида на взаимодействие гликозаминогликанов с белками экстрактов головного мозга

Изучение влияния высоких концентраций карбамида (5М и 7,5М) и одновременного добавления карбамида и натрия хлорида (1М, 3,8М и 4М) на гепа-ринсвязывающую способность экстракта ГМ человека и кролика показало, что в присутствии карбамида происходит снижение гепаринсвязывающей способности исследуемых экстрактов. 7,5М раствор карбамида в большей степени снижает показатели оптической плотности, чем 5М раствор. Одновременное добавление карбамида и высоких концентраций натрия хлорида также оказывает супрессивное воздействие на углеводсвязывающую способность лекти-нов. В работе использовали экстракты головного мозга человека (Б1, Б2 и Б4) и кролика (К1).

Зарегистрированные показатели оптической плотности при проведении углевод-ферментного анализа экстрактов ГМ человека представлены в таблице 3.

1. Для экстракта в присутствии 5М раствора карбамида характерно снижение гепаринсвязывающей способности в щелочной среде при рН 9 в 2,5 раза (В = 0,522 против В = 1,445) без добавления карбамида. При рН от 2 до 8 достоверных изменений гепаринсвязывающих свойств нейролектинов экстракта в присутствии 5М раствора карбамида не выявлено.

Добавление 7,5М раствора карбамида независимо от присутствия натрия хлорида почти в 3 раза снижало показатели оптической плотности в щелочной среде при рН 9 (В = 0,498) ив 2 раза - в кислой среде при рН 5 (В = 0,424). При остальных исследуемых значениях рН достоверных различий в показателях оптической плотности не выявлено.

2. При взаимодействии экстракта Б2 с гепарином в присутствии 5М карбамида в кислой среде при рН 5 регистрируется резкое уменьшение

3. Влияние карбамида и №0 на взаимодействие гепарина с белками экстрактов головного мозга человека

РН2 РЙЗ рН4 рН 5 рН6 РН7 рН6 рН9

Экстракт

5М карбамида 0,241 ±0,034 0,118±0,007 0.259±0,045 0,739±0,026 0,302±0,019 0,333±0,047 0,340±0,029 0,522±0,031

1М №С1 0,184±0,023 0,158±0,021 0,246±0,024 0,731 ±0,033 0,354±0,024 0,410±0,049 0,364±0,014 0,537±0,019

3,8М №С1 0,211 ±0,038 0,113±0,043 0,268±0,037 0,722±0,064 0,378±0,014 0,454±0,034 0,392±0,08 0,5^6±0,014

4М ЫаС1 0,220±0,012 0,136±0,050 0,228±0,015 0,734±0,058 0,396±0,010 0,450±0,028 0,387±0,011 0,602±0,023

7.5М карбамида 0,198±0,017 0,167±0,034 0,145±0,011 0,424±0,049 0,307±0,017 0,411 ±0,037 0,406±0,036 0,498±0,025

1М ЫаС1 0,209±0,025 0.193±0,018 0,277±0,072 0,439±0,016 0,347±0,025 0,435±0,012 0,448±0,038 0,510±0,015

3,8М №С1 0,290±0,021 0,200±0,023 0,299±0,018 0,414±0,032 0,362±0,017 0,451 ±0,031 0,452±0,025 0,508±0,022

4М ЫаС! 0,240±0,014 0,167±0,017 0,360±0,083 0,412±0,027 0,372±0,032 0,439±0,031 0,447±0,032 0,499±0,013

Экстракт Эр

5М карбамида 0,127±0,031 0,162±0,014 0,355±0,024 0,268±0,012 0,154 ±0,021 0,160±0,032 0,160±0,022 0,379±0,048

1М МаС1 0,100±0,015 0,103±0,027 0,294±0,031 0,259±0,045 0,176±0,004 0,224±0,041 0,596±0,012 0,444±0,018

3,8М №С1 0,154 ±0,028 0,127±0,033 0,281±0,018 0,256±0,032 0,246±0,032 0,244±0,019 0,338±0,053 0,476±0,041

4М ЫаС1 0,233±0,036 0.176±0,026 0,374±0,017 0,360±0,011 0,224±0,103 0,312±0,054 0,309±0,019 0,479±0,014

7,5М карбамида 0,063±0,018 0,118±0,019 0,250±0,026 0,175±0,023 0,142±0,022 0,134±0,038 0,226±0,027 0,252±0,012

1М ЫаС1 0,140±0,017 0.154 ±0,036 0,211 ±0,022 0,224±0,028 0,176±0,043 0,189±0,024 0,206±0.035 0,325±0,028

3,8М ЫаС! 0,079±0,043 0,077±0,010 0,242±0,039 0,272±0,034 0,121 ±0,023 0,095±0,022 0,086±0,024 0,295±0,035

4М ЫаС! 0,176±0,013 0,176±0,021 0,303±0,042 0,268±0,018 0,167±0,021 0,158 ±0,036 0,154 ±0,017 0,325±0,032

Экстракт Бд

5М карбамида 0,073±0,005 0,074±0,020 0,355±0,038 0,182±0,019 0,163±0,011 0,160±0,006 0,233±0,013 0,379±0,019

1М ЫаС1 0,154±0,013 0,118±0,006 0,268±0,016 0,233±0,009 0,224±0,012 0,244±0,037 0,231 ±0,005 0,316±0,001

3.8М ЫаС1 0,079±0,008 0.077±0,008 0,134±0.004 0,082±0,007 0,140±0,014 0,259±0,011 0,105±0,027 0,292±0,019

4М МаС1 0,246±0,026 0.224±0,042 0,409±0,040 0,224±0,024 0,189±0,033 0,224±0,015 0,162±0,010 0.360±0,038

7,5М карбамида 0,200±0,031 0,211±0,016 0,251±0,009 0,175±0,048 0,145±0,006 0,134 ±0,020 0,233±0,006 0,374±0,007

1М N801 0,162±0,021 0,233±0,008 0,224±0,013 0,246±0,017 0,303±0,021 0,246±0,005 0,189±0,019 0.406±0,005

3.8М ЫаС1 0,189±0,044 0,092±0,012 0,259±0,027 0,281±0,015 0,246±0,010 0,211±0,018 0,233±0,015 0,303±0,033

4М ЫаС1 0,162±0,017 0,127±0,031 0,281 ±0,054 0,316±0,63 0,316±0,029 0,338±0,077 0,325±0,025 0,409±0,023

4. Влияние карбамида и №С1 на взаимодействие гепарина с белками экстракта головного мозга кролика

рН 2 рНЗ рН 4 рН5 рН 6 рН 7 рН 8 рН 9

5М карбамида 0,074±0,009 0,076±0,011 0,422±0,022 0,407±0,031 0,233±0,017 0,259±0,020 0,111 ±0,015 0,316±0,043

1М ЫаС1 0,105±0,020 0.092±0.027 0.352±0,036 0,325±0,028 0,211±0,015 0,233±0,017 0.162±0.011 0,246±0,018

3,8М №С1 ^,064^,024 0,065±0,018 0,303±0,042 0,233±0,021 0,154 ±0,010 0,219±0,023 0,073±0,024 0,111 ±0,038

4М N801 0,070±0,018 0,105±0,040 0,259±0,039 0,224±0,025 0,189±0,016 0,268±0,032 0,162*0,013 0,105±0,026

7,5М карбамида 0,064±0,028 0.065±0,035 0,070±0,015 0,180±0,017 0,066±0,008 0,068±0.029 0,073±0,016 0,199±0,008

1М ЫаС1 0,069±0,016 0,071±0,015 0,114±0,017 0,145±0,033 0,082±0,009 0,079±0,006 0,079±0,023 0,265±0,019

3,8М ЫаС1 0,065±0,010 0,070±0,008 0,136 ±0,048 0,180±0,026 0,084±0,011 0,084±0,016 0,075±0,014 0,244±0,010

4М ЫаС! 0,071±0,023 0,073±0,011 0,135±0,014 0,200±0,012 0,078±0,016 0,083±0,012 0,077±0,037 0,245±0,033

гепаринсвязывающей способности исследуемого экстракта. Показатели оптической плотности (В) снижались с 1,088 до 0,268. В зоне рН 6-9 также регистрировалось достоверное снижение показателей оптической плотности. В кислой среде при рН 2-4 гепаринсвязывающая способность не отличалась от исходной и оставалась минимальной (В = 0,127-0,233). Одновременное добавление 5М раствора карбамида и 1; 3,8М №С1 также оказывало подавляющее влияние на экстракт Б2. В присутствии 4М раствора натрия хлорида отмечалась положительная тенденция к восстановлению гепаринсвязывающей способности в кислой среде при рН 4 и 5.

7,5М раствор карбамида независимо от присутствия натрия хлорида подавлял связывание гепарина с экстрактом Б2. Показатели оптической плотности снижались до 0,063-0,252 независимо от реакции среды.

3. Добавление карбамида и натрия хлорида оказывало аналогичное влияние на гепаринсвязывающую способность экстрактов Б2 и Б4.

4. В результате проведения второй серии опытов с экстрактом ГМ кролика (табл. 4) было установлено, что 5М раствор карбамида при добавлении к экстракту К1 незначительно усиливал связывание с гепарином при рН 4 (Ь = 0,422 против D = 0,181 без добавления карбамида). В кислой среде при рН 2 и 3 в присутствии карбамида гепаринсвязывающая способность полностью подавлялась (В = 0,074-0,076). При рН 5 связывание с гепарином несколько снижалась - с 0,532 до 0,400. При рН 9 добавление 5М карбамида почти в 4 раза уменьшало способность лектинов связываться с гепарином. Показатели оптической плотности уменьшились с 1,205 до 0,316. В диапазоне рН от 6 до 8 в присутствии 5М раствора карбамида достоверных различий между показателями оптической плотности не выявлено. Одновременное добавление натрия хлорида и 5М раствора карбамида оказывало влияние, сходное с действием 5М раствора карбамида.

7,5М раствор карбамида независимо от изменений реакции среды и присутствия натрия хлорида оказывал подавляющее влияние на гепаринсвязы-вающую способность экстракта ГМ кролика.

Сравнение гепаринсвязывающих свойств сыворотки крови

Для проведения углевод-ферментного анализа использовали сыворотку крови человека и кролика. Непосредственно перед проведением исследования полученные сыворотки разводили 0,01М фосфатным буфером с рН 7,4 до концентрации белка 800 нг/мл. Затем проводили углевод-ферментный анализ. В данном эксперименте использовали конъюгированный нефракционированный гепарин, разведенный 1:80 буферными растворами с рН от 2 до 9.

На рис. 7 представлены показатели оптической плотности при взаимодействии сыворотки крови человека с гепарином. В зоне рН от 2 до 8 белки сыворотки крови не взаимодействовали с гепарином. Гепаринсвязывающая активность выявлена лишь при рН 9 (В = 0,640), причем связывание происходило в 2 раза менее интенсивно, чем с лектинами, экстрагированными из ГМ человека. Гепаринсвязывающая активность сыворотки крови человека и кролика была схожа (рис.8), но при рН 9 показатели оптической плотности у кролика оказались на 23% ниже. Гепаринсвязывающие свойства сыворотки крови кролика при рН 9 были в 3 раза ниже, чем у экстрактов головного мозга.

Таким образом, анализ гепаринсвязывающей способности сыворотки крови человека и кролика показал, что способность связываться с гепарином у исследуемых сывороток проявляется только в щелочной среде при рН 9

и показатели оптической плотности в данной зоне рН в несколько раз ниже показателей гепаринсвязывающей активности экстрактов ГМ в тех же условиях.

Влияние натрия хлорида и карбамида на гепаринсзязывающую способность сыворотки крови

Для изучения влияния осмотического градиента на гепаринсвязывающие свойства сыворотки крови использовали растворы натрия хлорида с концентрацией от 0,2 до 4М. Натрия хлорид растворяли в 0,001М буферных растворах с рН от 2 до 9. В данном эксперименте проводили углевод-ферментный анализ в соответствии с методикой, применявшейся для изучения влияния №С1 и карбамида на экстракты головного мозга человека и кролика. С этой целью нефрак-ционированный гепарин, конъюгированный с пероксидазой в соотношении 1:80, разводили буферными растворами с рН от 2 до 9. К разведенным конъюгатам добавляли натрия хлорид в концентрации от 0,2 до 4М; карбамид в концентрации 5 и 7,5М; одновременно карбамид (5 и 7,5М) и натрия хлорид (1; 3,8 и 4М).

Анализ полученных экспериментальных данных (табл. 5-6) показал следующее.

1. Влияние натрия хлорида на взаимодействие сыворотки крови человека с гепарином (табл. 5) зависит от концентрации раствора и реакции среды. Так, в присутствии буферных растворов с рН 2-3 и 6-8, содержащих от 0,2 до 4М №С1, активизация связывания с гепарином не происходила, показатели оптической плотности были зарегистрированы на уровне 0,100-0,187. При рН 4 все исследуемые концентрации №С1 усиливали связывание с гепарином, но в присутствии 0,2; 0,3; 0,5 и 1М №С1 показатели оптической плотности увеличивались до Б = 0,195-0,325, а при более высоких концентрациях - до 0,991-1,325. При рН 5 низкие концентрации №С1 не влияли на гепаринсвязы-вающую способность. Добавление 2; 3; 3,8 и 4М №С1 усиливали взаимодействие сыворотки крови с гепарином в 3,5 раза (Б = 0,283-0,465). В щелочной среде при рН 9 зарегистрировано значительное усиление связывания с гепарином пропорционально увеличению концентрации №С1. Так, в присутствии 0,2М раствора Б было равно 0,946, а при добавлении 4М -1,777.

5 Влияние натрия хлорида на взаимодействие гепарина с белками сыворотки крови человека

рН 2 рН 3 рН 4 рН 5 рН 6 рН 7 рН 8 рН 9

Без МаС1 0,102±0,007 0,177±0,011 0,325±0,045 0,169±0,025 0,057±0,003 0,066±0,017 0,176±0,013 0,946±0,052

0.2М 0,100±0,007 0,150±0,040 0,195±0,023 0,057±0,002 0,070±0,003 0,055±0,008 0,101±0,024 1,038±0,031

0,ЗМ 0,098±0,011 0,145±0,024 0,294±0,030 0,084±0,010 0,072±0,011 0,059±0,009 0,127±0,017 1,010±0,063

0,5М 0,104±0,010 0,164±0,018 0,325±0,008 0,134±0,014 0,088±0,005 0,071±0,005 0,109±0,008 1,557±0,095

1М 0,126±0,003 0,171±0,012 0,991 ±0,069 0,283±0,022 0,101±0,015 0,095±0,023 0,103±0,027 1,593±0,116

2М 0,133±0,022 0,188±0,036 1,408±0,105 0,374±0,029 0,121±0,019 0,102±0,035 0,083±0,011 1,662±0,107

ЗМ 0,118±0,019 0,154 ±0,027 1,298±0,094 0,426±0,037 0,110±0,021 0,100±0,013 0,162±0,036 1,755±0,118

3.8М 0,152±0,044 0,187±0,014 1,325±0,078 0,465±0,031 0,146±0,035 0,088±0,024 0,147 ±0,028 1,777±0,081

4М 0,102±0,007 0,177±0,011 0,325±0,045 0,169±0,025 0,057±0,003 0,066±0,017 0,176±0,013 0,946±0,052

6 Влияние карбамида и натрия хлорида на взаимодействие гепарина с белками сыворотки крови человека

рН 2 рН 3 рН 4 рН 5 рН 6 рН 7 рН 8 рН 9

5М карбамида 0,179±0,037 0,070±0,005 0,134±0,028 0,177±0,058 0,084±0,006 0,121 ±0,032 0,042±0,002 0,117±0,034

1М ЫаС1 0,104±0,025 0,098±0,011 0,107±0,034 0,100±0,029 0,086±0,006 0,071 ±0,019 0,084±0,011 0,109±0,038

3.8М ЫаС1 0,082±0,007 0,088±0,018 0,127±0,016 0,071 ±0,008 0,062±0,003 0,061 ±0,005 0,058±0,006 0,102±0,025

4М МаС1 0,085±0,005 0,131±0,032 0,140±0,015 0,120±0,017 0,070±0,009 0,121±0,014 0,129±0,009 0,123±0,031

7,5М карбамида 0,152±0,025 0,095±0,019 0,145±0,023 0,170±0,057 0,079±0,015 0,094±0,017 0,056±0,005 0,107±0,017

1М N801 0,132±0,014 0,095±0,017 0,103±0,017 0,081 ±0,008 0,069±0,017 0,101±0,015 0,058±0,005 0,084±0,028

3,8М №0 0,131±0,010 0,099±0,008 0,121±0,025 0,141 ±0,024 0,073±0,010 0,085±0,008 0,062±0,003 0,091 ±0,024

4М ЫаС1 0,107±0,013 0,081 ±0,006 0,117±0,039 0,100±0,018 0,062±0,002 0,072±0,003 0,065±0,012 0,078±0,008

7. Влияние натрия хлорида на взаимодействие гепарина с белками сыворотки крови кролика

8. Влияние карбамида и натрия хлорида на взаимодействие гепарина с белками сыворотки крови кролика

рН 2 рНЗ рН 4 рН 5 рН6 рН 7 рН 8 рН 9

5М карбамида 0,064±0,019 0,075±0,006 0,098±0,005 0,109±0,012 0,086±0,004 0,057±0,010 0,050±0,010 0,192±0,012

1М №С1 0,056±0,0017 0,070±0,013 0,088±0,017 0,063±0,008 0,074±0,09 0,062±0,016 0,072±0,015 0,131±0,047

3,8М МаС1 0,075±0,008 0,074±0,002 0,136±0,023 0,058±0,003 0,072±0,013 0,093±0,027 0,058+0,008 0,110±0,038

4М №С1 0,081±0,015 0,089±0,011 0,126±0,029 0,095±0,025 0,082±0,022 0,078±0,005 0,061±0,006 0,139±0,024

7,5М карбамида 0,087±0,007 0,089±0,016 0,112±0,012 0,076±0,011 0,079±0,018 0,072±0,014 0,051±0,017 0,153 ±0,041

' 1М ЫаС1 0,068±0,014 0,074±0,004 0,095±0,005 0,082±0,023 0,117±0,030 0,051 ±0,003 0,057±0,002 0,127±0,021

3,8М №С1 0,055±0,006 0,056±0,017 0,089±0,005 0,084±0,019 0,082±0,008 0,062±0,002 0,068±0,004 0,109±0,023

4М ЫаС! 0,083±0,009 0,076±0,015 0,081 ±0,006 0,091 ±0,032 0,080±0,010 0,072±0,011 0,066±0,003 0,114±0,008

2. Анализ результатов, полученных при проведении углевод-ферментного анализа гепаринсвязывающей способности сыворотки крови в присутствии 5 и 7,5М карбамида (табл. 6), показал, что при всех исследуемых концентрациях карбамида независимо от реакции среды отмечалось супрессивное влияние на взаимодействие с гепарином белков сыворотки крови. В присутствии 5 и 7,5М раствора карбамида при рН от 2 до 8 гепаринсвязывающая способность сыворотки крови человека сохранялось на минимальном уровне (Б = 0,042-0,179). В щелочной среде при рН 9 отмечалось снижение показателей оптической плотности до 0,117. Добавление натрия хлорида не приводило к усилению связывания с гепарином.

3. Действие натрия хлорида на сыворотку крови кролика (табл. 7) сходно с влиянием на сыворотку крови человека. При рН 2-3 регистрируется незначительная тенденция к усилению лектин-гепариновых взаимодействий. При рН 4 добавление натрия хлорида в концентрации от 1 до 4М приводило к увеличению показателей оптической плотности. Так, в присутствии 1М №01 Б = 0,692, в присутствии 4М -1,104 (без добавления №С1 Б = 0,091). При рН 5 также регистрируется усиление гепаринсвязывающей способности сыворотки крови кролика в присутствии более чем 0,5М натрия хлорида, но менее выраженное, чем при рН 4. При рН 6-8 добавление натрия хлорида не приводит к усилению гепаринсвязывающей способности сыворотки крови кролика. В щелочной среде при рН 9 в присутствии 0,2; 0,3 и 0,5М №С1 гепаринсвязываю-щие свойства сыворотки крови не изменялись, в присутствии более высоких концентраций отмечалось увеличение оптической плотности пропорционально нарастанию концентрации.

4. Добавление всех исследуемых концентраций карбамида независимо от присутствия натрия хлорида приводило к тому, что лектины сыворотки крови кролика теряли способность связываться с гепарином (табл. 8).

ВЫВОДЫ

1. Гепаринсвязывающая способность лектинов головного мозга зависит ' от способа получения экстракта, реакции среды и химической структуры гли-козаминогликанов. С нефракционированным гепарином связывание происходит при рН 5 и 9. С низкомолекулярным гепарином, хондроитинсульфатом и гиалуроновой кислотой нейролектины взаимодействуют только в кислой среде при рН 2-4. Нейролектины человека и кролика при взаимодействии с нефрак-ционированным гепарином проявляют одинаковую углеводную специфичность, что свидетельствует о наличии лектинов с общими биохимическими свойствами у эволюционно удаленных классов млекопитающих.

2. Экстракты головного мозга человека и кролика, полученные с использованием 2М раствора натрия хлорида, содержат больше водорастворимых белков, чем при использовании 4М раствора карбамида. При применении 0,15М раствора натрия хлорида в качестве экстрагента концентрация белков была достоверно ниже, чем в двух предыдущих растворах.

3. Добавление натрия хлорида к экстрактам головного мозга человека приводит к изменению гепаринсвязывающих свойств нейролектинов, при этом имеет место усиление лектин-углеводного взаимодействия в кислой среде при рН 2-5 и ослабление в щелочной среде при рН 9.

4. В присутствии натрия хлорида при концентрации от 0,2 до 4М регистрируется достоверное усиление связывания нейролектинов головного мозга кролика с нефракционированным гепарином при рН от 2 до 9.

5. Влияние карбамида на гепаринсвязывающую способность экстрактов головного мозга человека и кролика характеризуется значительным снижением активности лектин-углеводных взаимодействий пропорционально увеличению концентрации карбамида. Добавление натрия хлорида не приводит к восстановлению гепаринсвязывающих свойств лектинов сыворотки крови.

6. Сыворотка крови обладает более низкими гепаринсвязывающими свойствами по сравнению с экстрактами головного мозга. Связывание лекти-нов с гепарином зарегистрировано при рН 9. Добавление натрия хлорида приводит к изменению углеводсвязывающих свойств лектинов, характеризующемуся появлением способности взаимодействовать с гепарином в кислой среде при рН 4 и 5 и усилением гепаринсвязывающих свойств в щелочной среде при рН 9. Взаимодействию гепарина с лектинами сыворотки крови препятствуют 5 и 7,5М растворы карбамида.

7. Лектины сыворотки крови кролика характеризуются более низкой ге-паринсвязывающей способностью по сравнению с лектинами сыворотки крови человека. В действии натрия хлорида и карбамида на углеводсвязывающую способность лектинов сыворотки крови человека и кролика достоверных различий не выявлено.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные в настоящем исследовании данные о содержании гепа-ринсвязывающих лектинов в экстрактах головного мозга и сыворотке крови могут использоваться в качестве нормативных показателей при исследовании функционального состояния нервной системы.

2. Выявленную разницу в количественном содержании и биохимических свойствах гепаринсвязывающих лектинов головного мозга и сыворотки крови следует рассматривать как основу для разработки новых методов лабораторной диагностики заболеваний нервной системы.

3. Материалы исследования могут быть использованы для создания научно обоснованных рекомендаций при изучении курсов биохимии, гистологии и цитологии в высших учебных заведениях.

Основные положения диссертации отражены в следующих публикациях автора:

1. Епифанова, С.В. Гепаринсвязывающие лектины головного мозга человека / СВ. Епифанова // Медицинские науки. - 2004. - № 5. - С 48-49.

2. Епифанова, СВ. Гепаринсвязывающие лектины головного мозга кролика / С.В. Епифанова // Материалы международной научно-практической конф. молодых ученых «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». -Щелково, 2004. - С. 117-120.

3. Епифанова, СВ. Нейрональные адгезивные лектины и их гликозаминогликан-связывающие свойства / СВ. Епифанова, Ю.В. Фурман // Материалы международной научно-практической конф. «Производство экологически безопасной продукции растениеводства и животноводства». - Брянск, 2004. - С. 379-382.

4. Епифанова, СВ. Влияние хлорида натрия на адгезивные свойства гепаринсвязы-вающих лектинов головного мозга / С.В. Епифанова // Материалы международной научно-практической конф. «Состояние проблем по санитарии, зоогигиене, экологии и ветеринарной экспертизе». - Чебоксары, 2004. - С. 285-287.

5. Епифанова, СВ. Использование углевод-ферментного анализа для изучения ге-паринсвязывающих лектинов / Ю.В. Фурман, СВ. Епифанова // Материалы Всероссийской научно-практической конф. с международным участием «Сорбенты как фактор качества жизни и здоровья». - Белгород, 2004. - С 170-172.

Формат 60x84 1/16. Бумага для множительных аппаратов. Печать на копировальном аппарате КГСХА. Уел печ л. 1,0. Уч.-изд л. 1,0. Тираж 100 экз.

Ni 19 6 66

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Епифанова, Светлана Владимировна

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общие представления о лектинах.

1.1.1. Строение.

1.1.2. Классификация.

1.1.3. Локализация в организме млекопитающих.

1.1.4. Биологическая роль.

1.2. Молекулы клеточной адгезии и их роль в организме.

1.2.1. Механизмы адгезии.

1.2.2. Особенности структуры и функциональные категории

1.2.2.1. Мембраноассоциированные молекулы адгезии.

1.2.2.2. Растворимые факторы адгезии.

1.3. Молекулярное моделирование взаимодействия «лектин - рецептор»

1.4. Основные направления практического применения лектинов.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИИ

3.1. Получение экстрактов головного мозга.

3.2. Получение конъюгатов гликозаминогликанов с пероксидазой.

3.3. Методика проведения углевод-ферментного анализа.

3.4. Влияние реакции среды на активность взаимодействия гликозаминогликанов с лектинами головного мозга.

3.5. Влияние натрия хлорида на взаимодействие гликозаминогликанов с белками экстрактов головного мозга.

3.6. Влияние карбамида на взаимодействие гликозаминогликанов с белками экстрактов головного мозга.

3.7. Сравнение гепаринсвязывающих свойств сыворотки крови.

3.8. Влияние натрия хлорида и карбамида на гепаринсвязывающую способность сыворотки крови.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сравнительный биохимический анализ лектинов головного мозга человека и животных"

Цель и задачи исследования. Целью нашей работы явилось комплексное исследование по выделению и идентификации гликозаминогликансвязы-вающих лектинов головного мозга человека и кролика, изучение их биохимических свойств, а также разработка методов качественного и количественного определения гепаринсвязывающих лектинов в экстрактах мозговой ткани и сыворотке крови.

Поставленная цель реализовалась при решении следующих задач:

2. Установить зависимость активности лектин-углеводных взаимодействий от реакции среды.

4. Сравнить биохимические свойства гепаринсвязывающих лектинов головного мозга и сыворотки крови.

Научная новизна. На основании комплексных исследований впервые выявлено наличие нейролектинов с общей олигосахаридной специфичностью к гликозаминогликанам у человека и животных. Впервые установлена углеводная специфичность нейролектинов человека и кролика к низкомолекулярному, десульфатированному гепарину, хондроитинсульфату, гиалуроновой кислоте. Изучено влияние реакции среды, натрия хлорида и карбамида на уг-леводсвязывающие свойства лектинов головного мозга.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Зависимость концентрации водорастворимых белков и гликозаминог-ликансвязывающей активности лектинов от способа получения экстракта.

4. Установленное сходство биохимических свойств гепаринсвязываю-щих лектинов экстрактов головного мозга человека и кролика.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертации отражены в 5 научных публикациях. Результаты работы изложены в выступлениях на международной научно-практической конференции (Брянск, 2004), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием (Белгород, 2004), межвузовской научно-практической конференции (Курск, 2004), научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава Курской государственной сельскохозяйственной академии имени профессора И.И. Иванова (Курск, 2004).

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Епифанова, Светлана Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Гепаринсвязывающая способность лектинов головного мозга зависит от способа получения экстракта, реакции среды и химической структуры гликозаминогликанов. С нефракционированным гепарином связывание происходит при рН 5 и 9. С низкомолекулярным гепарином, хондроитинсульфа-том и гиалуроновой кислотой нейролектины взаимодействуют только в кислой среде при рН 2-4. Нейролектины человека и кролика при взаимодействии с нефракционированным гепарином проявляют одинаковую углеводную специфичность, что свидетельствует о наличии лектинов с общими биохимическими свойствами у эволюционно удаленных классов млекопитающих.

6. Сыворотка крови обладает более низкими гепаринсвязывающими свойствами по сравнению с экстрактами головного мозга. Связывание лектинов с гепарином зарегистрировано при рН9. Добавление натрия хлорида приводит к изменению углеводсвязывающих свойств лектинов, характеризующемуся появлением способности взаимодействовать с гепарином в кислой среде при рН 4 и 5 и усилением гепаринсвязывающих свойств в щелочной среде при рН 9. Взаимодействию гепарина с лектинами сыворотки крови препятствуют 5 и 7,5М растворы карбамида.

7. Лектины сыворотки крови кролика характеризуются более низкой гепаринсвязывающей способностью по сравнению с лектинами сыворотки крови человека. В действии натрия хлорида и карбамида на углеводсвязы-вающую способность лектинов сыворотки крови человека и кролика достоверных различий не выявлено.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Ill

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Епифанова, Светлана Владимировна, Курск

1. Азарова, Л.А. Механизмы противосвертывающей активности новых полусинтетических гепариноидов / Л.А. Азарова, В.А. Сятковский, Ф.Н. Калуцкий // Гематология и трансфузиология. 1991. - Т. 36, № 4. — С. 23-35.

2. Акатов, B.C. Адгезия клеток и регуляция роста клеточных культур: Дис. . .док-pa. физ.-мат. наук / B.C. Акатов. Пущино, 1995. - 256 с.

3. Александров, А.В. Анализ механизма модуляции межклеточных молекул адгезии 1С AM / А.В. Александров, A.M. Джексон, А.Г. Румянцев // Иммунология. 1997. -№1. - С. 4-13.

4. Аленькина, С.А. Физико-химические и адгезивные свойства лектинов азоспирилл: Дис. .канд. биол. наук / С.А. Аленькина. Саратов, 1994. -120 с.

5. Альберте, Б. Молекулярная биология клетки / Б. Альберте, Б. Брейд, Дж. Льюис. М.: Медицина, 1987. - С. 23-34.

6. Анисимов, А.Г. Модуляция неспецифической цитотоксичности сплено-цитов крыс лектинами и активаторами G-белков (AjE4) / А.Г. Анисимов, И.А. Болотников // Иммунология. 1995. - № 6. - С. 26-29.

7. Антонюк, Л.П. Регуляция метаболизма бактерий Azospirilum brasilense SP 245: особенности азотного обмена и влияние лектина пшеницы: Дис. . .док-pa биол. наук. / Л.П. Антоню. Саратов, 2002. - 374 с.

8. Аронов, Д.М. Гиполипидемический эффект низкомолекулярного гепарина сулодексида у больных ИБС / Д.М. Аронов, М.Г. Бубнова, Н.В. Перова // Клиническая фармакология и терапия. 1995. - Т. 4, № 3. - С. 24— 26.

9. Баландин, И.Г. Гемагглютинирующая активность гистонов / И .Г. Баландин, Л.Г. Лазинская, Г.Е. Добрецов // Вопросы мед. химии. 1969. - № 2. -С. 132-138.

10. Баркаган, З.С. Сравнительный анализ влияния нефракционных и низкомолекулярных гепаринов на процесс полимеризации фибрина / З.С. Бар-каган, Т.А. Соломина // Бюл. экспериментальной биологии и медицины. 1997. - Т. 124, № 9. - С. 346-347.

11. Безрукова, М.В. Гормональная регуляция содержания лектина пшеницы в стрессовых условиях: Дис. . .канд. биол. наук / М.В. Безрукова. Уфа, 1997.- 167 с.

12. Белик, Я.В. Особенности состава, обмена и функций нервной ткани. Исследование нейроспецифических белков / Я.В. Велик // Тез. Всесоюзного симпозиума. Днепропетровск, 1978.-С. 13-15.

13. Березин, В.А. Дополнительный иммунохимический тест в пренатальной диагностике дефектов развития нервной трубки / В.А. Березин, К.В. Воронин, Т.В. Демченко, А.И. Шевцова // Лабораторное дело. 1985. - № 7. -С. 403-405.

14. Березин, В.А. Молекулы клеточной адгезии нервной ткани / В.А. Березин // Успехи соврем, биол. 1986. - Т. 101, № 1. - С. 54-68 .

15. Борисова, Н.Н. Субмитохондриальное распределение лектиновой активности и ее изменение с возрастом растений: Дис. .канд. биол. наук / Н.Н. Борисова. -М., 1999. 182 с.

16. Васин, С.А. Методика получения и цифровой обработки изображения адгезивных клеток / С.А. Васин, И.А. Титушкин, Р.А. Прокопенко // Мед. техника. 1998. - № 1. - С. 6-9.

17. Васильев, С.А. Эффективность аутофибронектина, полученного методом гепаринофракционирования у пациентов с трофическими язвенными поражениями кожи / С.А. Васильев, Г.Ю. Беленин, Е.Е.Ефремов // Терапевтический архив. 1998. - Т. 70, № 2. - С. 67-69.

18. Галанина, О.Е. Специфичность моноклональных антител и лектинов, взаимодействующих с антигенами крови ABO, lewis и Р: Дис. .канд. хим. наук / О.Е. Галанина,- М., 1993. 149 с.

19. Голынская, E.J1. Лектины лекарственных растений в диагностике и фитотерапии / Е.Л. Голынская, И.С. Карпова, Н.В. Корецкая // Тез. докл. и выступ. IV международной конференции по медицинской ботанике. — Киев, 1997.-С. 503-505.

20. Гомазков, О.А. Молекулярные механизмы регуляции нейрохимических процессов. История и современные взгляды / О.А. Гомазков // Успехи физиологических наук. 2003. - Т. 34, №3. - С. 42-54.

21. Гринфельдт, М.Г. Прикрепление эритроидных клеток к твердым подложкам в присутствии лектинов / М.Г. Гринфельдт, А.Ю Кроль, В.В. Малеев // Цитология. 1996. - Т. 38, №10. - С. 1062-1068.

22. Дранник, Г.Н. Иммунотропные препараты / Г.Н. Дранник, Ю.А. Грине-вич, Г.М. Дизин. Кшв: Здоров'я, 1994. - 288 с.

23. Епифанова, С.В. Гепаринсвязывающие лектины головного мозга человека / С.В. Епифанова // Медицинские науки. 2004. - № 5. - С. 48-49.

24. ЗО.Зубаиров, Д.М. Влияние лектина GLYCINE МАХ на взаимодействие протромбина с эритроцитами / Д.М. Зубаиров, С.В. Киселев, А.И. Булатова // Вопросы мед. химии. 1997. - Т. 43. - Вып. 4. - С. 226-232.

25. Игнатов, В.В. Углеводсвязывающие белки лектины / В.В. Игнатов // Соросовский образовательный журнал. - 1997. - №2. - С. 14-20.

26. Иосипенко, О.А. Лектины в процессе взаимодействия пшеницы с ассоциативными микроорганизмами рода Azospirilum: Дис. .канд. биол. наук / О.А. Иосипенко. Саратов, 1996. - 97 с.

27. Итальянская, Ю.В. Влияние условий культивирования на лектиновую активность и прирост биомассы клеток Azospirillum brasilense Sp 7 / Ю.В. Итальянская, В.Е. Никитина // Биотехнология. 1995. - №12. -С. 29-31.

28. Калинин, Н.Л. Специфичность маннасвязывающего белка сыворотки крови человека: использование биосенсора для исследования кинетики слабоаффинных белок-углеводных взаимодействий / Н.Л. Калинин,

29. A.В. Пронин // Иммунология. 1997. - №6. - С. 51-53.

30. Калинин, Ф.А. Справочник биохимика / Ф.А. Калинин, В.П. Лобов,

31. B. А. Жидков. Киев: Наукова думка, 1971. - С. 882-892.

32. Каркунина, Л.В. Значение углевод-белкового узнавания и роль лектинов при формировании различного рода азотфиксирующих систем /

33. Jl.В. Каркунина // Успехи современной биологии. 2002. - Т. 122, №6. — С. 548-556.

34. Касперчик, В.П. Ультрафильтрация модельных растворов гепарина /

35. B.П. Касперчик, А.В. Бильдюкевич // Хим. фарм. журнал. 1995. - № 4. -С. 62-64.

36. Козлов, Н.Б. Состояние и обмен белков головного мозга в условиях воздействия на организм высокой внешней температуры / Н.Б. Козлов, Т.В. Аленина, Н.М. Стунжас // Тез. Всесоюзного симпозиума. — Днепропетровск, 1978. С. 13-15.

37. Королев, Н.П. Функция лектинов в клетке / Н.П. Королев // Итоги науки и техники. Сер. «Общие пробл. физ.-хим. биологии». 1984. - Т. 1. —1. C. 8-27.

38. Киричук, В.Ф. Влияние некоторых лектинов на агрегацию тромбоцитов здоровых людей / В.Ф. Киричук, Н.В. Воскобой // Цитология. 2000. — Т. 42, №11. -С. 1094-1096.

39. Киричук, В.Ф. Влияние некоторых лектинов на агрегацию тромбоцитов у больных нестабильной стенокардией / В.Ф. Киричук, И.В. Воскобой, А.П. Ребров // Кардиология. 2001. - Т.41, №7. - С. 59.

40. Киселевский, М.В. Иммуномоделирующее действие чины посевной (Lathyrus sativus L.) / М.В. Киселевский, С.Г. Зайчикова // Хим,-фармацевтический журнал. 2002. - Т. 36, №6. - С. 30-31.

41. Кульберг, А.Я. Сыворотчный IgG как ингибитор активности лектинов: новый подход к изучению функционального взаимодействия естественного и приобретенного иммунитета / А.Я. Кульберг, Ю.Б. Беркун // Иммунология. 1998. -№1. - С. 7-10.

42. Лабзо, С.С. Стимуляция интерферонообразования природными и синтетическими индукторами в культуре клеток миндалин человека / С.С. Лабзо, А.С. Новохатский, Ш.К. Кабиров // Вопросы вирусологии. — 1980.-№ 1.-С. 81-85.

43. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М.: Высшая школа, 1990. - 352 с.

44. Лахтин, В.М. Лектины регуляторы метаболизма / В.М. Лахтин // Биотехнология. - 1986. - №6. - С.66-79.

45. Лахтин, В.М. Лектины в исследовании белков и углеводов / В.М. Лахтин // Биотехнология. М.:ВИНИТИ, 1987. - Т.2. - С.4 -40.

46. Лахтин, В.М. Лектины в исследовании углеводной части гликопротеинов и других природных гликоконъюгатов / В.М. Лахтин // Биохимия. — 1995. Т.60, №2. - С. 187-217.

47. Лахтин, В.М. Очистка и характеристика множественных форм лизоцима латекса папайи / В.М. Лахтин, Е.А. Костанова, Н.П. Арбатский // Прикладная биохимия и микробиология. 1995. - Т. 31, №2. - С. 247-254.

48. Ленинджер, А. Основы биохимии. В 3-х томах / A.M. Ленинджер. М.: Мир, 1985.-Т. 1. -340с.

49. Линевич, Л.И. лектины и углевод-белковое узнавание на разных уровнях организации живого / Л.И. Линевич // Успехи биологической химии. — 1979.-Т. 20.-С. 71-94.

50. Лисяный, Н.И. Содержание нейроспецифических аутоантигенов в крови больных с черепно-мозговой травмой / Н.И. Лисяный, Т.М. Черенько, С.В. Комиссаренко // Иммунология. 1991. - №2. - С. 60-62.

51. Луцик, А.Д. Лектины в гистохимии / А.Д. Луцик., Е.С. Детюк, М.Д. Луцик. Львов: Вища шк. Изд-во при Львов. Гос. ун-те, 1989. -140 с.

52. Луцик, А.Д. Гистохимическое исследование гликоконъюгатов клеток и тканей с помощью лектинов / А.Д. Луцик. Львов: Вища шк., 1987. -С. 6-34.

53. Луцик, А.Д. Применение лектинов в патоморфологии: итоги и перспективы / А.Д. Луцик, Д.Д. Зебрино // Архив патологии. 1987. - Т. 49, № 10.-С. 68-75.

54. Луцик, А.Д. Связывание лектинов структурами поднижнечелюстной слюнной железы крыс в постнатальном онтогенезе при тиреоидной патологии / А.Д. Луцик, A.M. Ященко, Е.С. Детюк // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1987. - Т. 92, № 2. - С. 40-48.

55. Луцик, Б.Д. Лектиногистохимия микроглии головного мозга человека при бактериальных менингоэнцефалитах / Б.Д. Луцик, И.В. Смехновин, А.Д. Луцик // Журнал невропатологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 1991. - Т. 91, № 2. - С.41—44.

56. Луцик, М.Д. Лектины / А.Д. Луцик, Е.С. Детюк, М.Д. Луцик. Львов: Вища шк., Изд-во при Львов. Гос. ун-те, 1981. - 155 с.

57. Луцик, М.Д. Методы поиска лектинов (фитогемагглютининов) и определение их иммунологической специфичности: Методические рекомендации / М.Д. Луцик, Е.Н. Панасюк, В.А. Антонюк. Львов, 1980. - С.20.

58. Ляхович, А.В. Изучение топографии молекул клеточной адгезии CD9, CD24, L1, и NCAM на поверхности нейробластомных клеток с помощью метода химических сшивок / А.В. Ляхович А.В., Н.Л. Аксенов // Цитология. 2000. - Т.42, №4. - С. 399^03.

59. Максименко, А.В. Регулирование ингибирования гепарином гиалурони-дазы посредством ее химической модификации / А.В. Максименко // Биоорганическая химия. 2000. - Т. 26, № 5. - С. 357-361.

60. Манохина, Л.А. Растворы: Учебное пособие для студентов факультетов ветеринарной медицины / Л.А. Манохина. Белгород: Изд-во БГСХА, 2001.- 100 с.

61. Мантейфель, В.М. Реакция митохондриального аппарата на облучение He-Ne-лазером и на митоген фитогемааглютинин / В.М. Мантейфель, Т.Н. Андрейчук, Т.И. Кару // Молекулярная биология. 1991. - Т. 25, №1. - С. 273-280.

62. Манько, В.М. Влияние иммуномодулирующих препаратов на индуцированную фитогемагглютинином пролиферацию спленоцитов мышей / В.М. Манько, Т.Б. Мастернак // Иммунология. 1997. - №4.

63. БЯё&Ънйкова, У.Ю. Лектины Bacillus polymyxa: физико-химические и биологические свойства: Дис. .канд. биол. наук / У.Ю. Мельникова. -Саратов, 2000. 120 с.

64. Мельникова, У.Ю. Протеолитическая активность лектинов азотфикси-рующих бактерий Bacillus Polymyxa. / У.Ю. Мельникова, Л.В. Каркунина // Микробиология. 2001. - Т. 70, №2. - С. 259-262.

65. Михайлов, А.Т. Влияние конканавалина А и ионофора Са на диффе-ренцировку эктодермы гаструлы травяной лягушки in vitro / А.Т. Михайлов, Н.А. Горголюк // Докл. АН СССР. 1986. - Т. 287, № 2. - С. 435438.

66. Моисеев, B.C. Низкомолекулярные гепарины / B.C. Моисеев // Клиническая фармакология и терапия. 2000. - № 1. - С. 72-79.

67. Мударисова, Р.Х. Состав и фармакологическая активность хондроитин-сульфата, полученного из трахеи северного оленя / Р.Х. Мударисова, Н.П. Зимина, Е.А. Глухов // Хим. фарм. журнал. 1997. - № 2. - С. 2527.

68. Насонов, Е.Л. Растворимые молекулы адгезии (Р-селектины, ICAM-1 и ICAM-3) при ревматоидном артрите / Е.Л. Насонов, М.Ю. Самсонов, Г.П. Тилз // Терапевтический архив. 1999. - №5. - С. 17-20.

69. Насонова, В.А. Итоги многоцелевого клинического исследования препарата Структум в России / В.А. Насонова, Л.И. Алексеева, Г.С. Архангельская // Терапевтический архив. 2001. - Т. 73, № 11. - С. 84 - 87.

70. Нго, Т.Т Иммуноферментный анализ / Т.Т. Нго, Г.М. Ленгофф. -М.: Мир, 1988.-С. 12-24.

71. Немец, Е.А., Взаимодействие гепарина с аминосодержащими материалами / Е.А. Немец, Д.А. Касатов, В.И. Севастьянов // Вопросы мед. химии. 2001. - Т. 47, № 5. - С. 526-536.

72. Никитина, В.Е. Лектины азоспирилл свойства, биологическая активность и перспективы практического использования: Дис. .док-pa биол. наук / В.Е. Никитина. - Саратов, 2001. - 310 с.

73. Пальцев, М.А. Межклеточные взаимодействия / М.А. Пальцев, А.А. Иванов. М.: Медицина, 1995. - 224 с.

74. Полевщиков, А.В. Лектины в защитных реакциях хордовых животных / А.В. Полевщиков // Иммунология. 1996. - №1. - С.48-56.

75. Подгорский, B.C. Лектины бактерий / B.C. Подгорский, Э.А. Коваленко, И.А. Симоненко. Киев: Наукова думка, 1992. - С. 9-19.

76. Польнер, А.А., Минин Д.С., Польнер С.А. Роль молекул адгезии в аллергическом воспалении при бронхиальной астме, аллергическом рините и других заболеваниях / А.А. Польнер, Д.С. Минин, С.А. Польнер // Иммунология. 1998. - №2. - С. 13-17.

77. Пономарева, Е.Г. Биологическая активность лектинов бактерий рода Azospirilum: Дис. .канд. биол. наук / Е.Г. Пономарева. Саратов, 1997. -105 с.

78. Пономарева, Е.Г. Воздействие неблагоприятных факторов на лектино-вую активность Azospirillum brasilense Azospirillum lipoferum / Е.Г. Пономарева, С.А. Аленькина // Биотехнология, 2000. -№5. - С. 19-24.

79. Португалова, В.В. иалуроновая кислота и ее роль в жизнедеятельности организмов / В.В. Португалова, K.JI. Ерзинкян // Успехи современной биологии. 1986. - Т. 101, № 3. - С. 344-356.

80. Поспелов, С.В. Лектины в цветковых растениях Украины / С.В. Поспелов, В.Н. Самородов // Тез. доклада и выступ. III международной конференции по медицинской ботанике. Киев. - 1992. - Ч. 1. - С. 119-120.

81. Потапов, М.И. Лектины как один из показателей антигенно-серологического единства и многообразия органической природы / М.И. Потапов // Вестн. АМН СССР. 1966. - Т. 5. - С. 86-95.

82. Практикум по биохимии / Под ред. Мешковой Н.П., Северина С.Е. М.: МГУ, 1979.-430 с.

83. Преображенский, А.А. Онтогенетическая экспрессия нейрохордина D -специфического гликопротеина мозга человека / А.А. Преображенский, А.С. Воронина, Е.Н. Калиберда // Биохимия. 1995. - Т. 60, №11. - С. 1838-1843.

84. Равид, С. Адгезивные молекулы и их роль в воспалительном процессе / С. Равид, А. Эциони // Международный мед. журнал. 1998. - №11-12. -С. 942-947.

85. Радаева, И.Ф. Гиалуроновая кислота: очистка, свойства и применение / И.Ф. Радаева, Г.А. Костина // Биотехнология. 1995. - № 12. - С. 32-35.

86. Ракитина, Т.В. Молекулы адгезии нервных клеток из мозга быка: клонирование и определение нуклеотидной последовательности ДНК: Дис. .канд. хим. наук / Т.В. Ракитина. -М., 1993. 106 с.

87. Рапопорт, Е.М. Лектины: разработка методов выделения, первичная структурная характеристика и углеводная специфичность: Дис. .канд. хим. наук / Е.М Рапопорт. М., 1997. - 116 с.

88. Рогаткин, С.О. Перспективы использования нейроиммунологических методов диагностики при перинатальных поражений ЦНС у новорожденных / С.О. Рогаткин, А.В. Хачатрян // Южно-Российский медицинский журнал. 1999. - №2. - С. 45-51.

89. Родникова, А.А. Взаимодействие IgG с гепарином / А.А. Родникова, А.Я. Кульберг, Е.Е. Бабаева // Иммунология. 1995. - № 5. - С. 24-26.

90. Румянцев, С.Н. Онтогенез клеточных рецепторов адгезии менингококков и вируса гриппа / С.Н. Румянцев, М.Ф. Пясецкая, Н.М. Рогочева // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1995. №5. — С. 30-32.

91. Рупейников, С.Н. Структурные аспекты углеводной специфичности лектинов: Дис. .канд. физ.-мат. наук / С.Н. Рупейников. -М., 1999 . 130 с.

92. Серов, В.В. Соединительная ткань / В.В. Серов, А.Б. Шехтер. М.: Медицина, 1981.-С. 69-83.

93. Степаненко, Б.Н. Химия и биохимия углеводов. Полисахариды / Б.Н. Степаненко. М.: Высшая школа, 1978. - С. 9-21.

94. Теория и практика иммуноферментного анализа // Под ред. A.M. Егорова, А.П. Осипова, Б.Б. Дзантиева, Е.М. Гаврилова. М.: Высшая школа, 1991. - С. 153-154.

95. Темяков, Д.П. Активность иммунотоксинов: Роль антигенов-маркеров и структурные особенности токсических лектинов: Дис. . .канд. биол. наук / Д.П. Темяков. М., 1996 . - 97 с.

96. Тертон, М. Новые методы иммуноанализа / М. Тертон. М.: Мир, 1991.-С. 12-21.

97. Тимощенко, А.В. Генерация Н2Ог и агрегация нейтрофилов человека под действием лектинов / А.В. Тимощенко, С.Н. Черенкевич // Гематология и трансфузиология. 1995. - № 4. - С. 32-35.

98. Топевицкий, А.Г. Взаимодействие изоформ лектина из омелы белой с моноклональными антителами против каталитической субъединицы / А.Г. Топевицкий, Ю.О. Алексеев, Д.В. Темяков // Биотехнология. -1995.-Хо 11.-С. 25-30.

99. Топевицкий, А.Г. Исследование растительных лектинов из омелы белой с помощью моноклональных антител / А.Г. Топевицкий, В.А. Рахманова, А.Т. Шамшиев // Молекулярная биология. 1995. - Т. 29, №3. -С. 619-626.

100. Трифонова, Т.В. Лектиновый ответ растений на действие низкой температуры и инфицирование микоплазмами: Дис. .канд. биол. наук / Т.В. Трифонова. Казань, 2002. - 134 с.

101. Туманова, Н.Б. Разработка новых подходов к исследованию клеточной адгезии в печени: Дис. .канд. биол. наук / Н.Б. Туманова. М.,1995.- 133 с.

102. Утешев, Д.Б. дгезивные молекулы как лекарственные препараты и объекты фармакологического воздействия при ишемии миокарда и ре-перфузии / Д.Б. Утешев, Б.С. Утешев // Экспериментальная и клиническая фармакология. 1997. - Т. 60, №3. - С. 83-88.

103. Фалькович, Т.Н. Лектиноподобные белки хлорофилл-белковых комплексов Dimaliella salina: Дис. .канд. биол. наук / Т.Н. Фалькович. -М„ 1995.- 125 с.

104. Федоров, Н.А. Фибронектин как полифункциональный регулятор клеток крови и тканей / Н.А. Федоров // Вестник АМН СССР. 1991. -№2. - С.26-28.

105. Фомина, Н.Р. Влияние лектина пшеницы на метаболизм Azospirilum brasilens: Дис. .канд. биол. наук / Н.Р. Фомина. Саратов,1996.- 135 с.

106. Франц, X. Лектины: свойства, функции и возможности применения / X. Франц // Журнал микробиологии, эпидемиологии, эпидемиологии. -1980. № 1.-С. 3-10.

107. Фримеля, X. Иммунологические методы / X. Фримеля. М.: Мир, 1979.-520 с.

108. Фуртак, В.А. Гистопатология рецепторов лектина СС в спинномозговых ганглиях крыс / В.А. Фуртак, Я.Н. Тихонов, И.В. Чикаловец // Тихоокеанский мед. журнал. 2000. - № 4. - С. 41—43.

109. Хайрулин, P.M. Исследование роли лектина пшеницы в защитных реакциях растений при грибном патогенезе: Дис. .канд. биол. наук / P.M. Хайрулин. Уфа, 1994. - 127 с.

110. Хомутовский, О.А. Электронная гистохимия рецепторов клеточных мембран / О.А. Хомутовский, М.Д. Луцик, О.Ф. Передерей. Киев, 1986. -С. 6-14.

111. Хьюз, Р. Гликопротеины / Р. Хьюз. М.: Мир. - 1985. - 143 с.

112. Цегельский, А.А. Идентификация и функциональная характеристика рецепторов лектина улитки на поверхности клеток нейробластомы С 1300 №18 / А.А. Цегельский, Р.Г. Микитюк // Биополимеры и клетка. -1991-Т. 7, №1. С. 94-100.

113. Черепанова, О.А. Сравнительный анализ вклада различных лиганд-рецепторных комплексов в процесс адгезии эпидермальных клеток к изоформам ламинина: Дис. .канд. биол. наук / О.А. Черепанова. -СПб., 2003.-136 с.

114. Чеснокова, В.Л. Штамм Escherichia coli М 17: анализ фактора колонизации макроорганизма и/или патогенности // Бюллетень эксперим. биологии и медицины / В.Л. Чеснокова, Э.Г. Кравцов, Е.В. Сокуренко. -1999. Т. 127, №4. - С. 424-428.

115. Чулкова, Ю.Ю. Активность лектинов при модификации цитоскеле-та и Са2+-кальмодулированной системы в связи с низкотемпературным закаливанием растений озимой пшеницы: Дис. .канд. биол. наук / Ю.Ю. Чулкова. Казань, 2002. - 146 с.

116. Шагин, Д.А. Система генов полидоменных лектинов С-типа плана-рий Dugesia tigrina: Дис. .канд. биол. наук / Д.А. Шагин. -М., 2001 . -97 с.

117. Шапирова, Ф.М. Участие фитогормонов и лектинов в ответе растений на стрессовые воздействия: Дис. .док-pa биол. наук / Ф.М. Шапирова. Уфа, 1999 . - 274 с.

118. Шепелева, И.И. Нейрональные молекулы клеточной адгезии (структура, функции, клинико-диагностические перспективы) / И.И. Шепелева, В.П. Чехонин // Журнал неврологии, психиатрии им. С.С. Корсакова. 1996.-Т. 56, №5.-С. 113-118.

119. Шкуматов, В.М. Сравнительный анализ комплексообразования пентозанполисульфата и гепарина с белками различной природы / В.М. Шкуматов, Ю.А. Лесникович, Е.А. Чернявский // Химико-фармацевтический журнал. 2003. - Т. 37, № 9. - С. 45-48.

120. Шмаров, Д.А. Пролиферативная активность лимфоцитов в культуре с фитогемагглютинином и показатели иммунитета при острых пневмониях / Д.А. Шмаров, Б.А. Никулин, Г.И. Козиней // Клин. лаб. диагностика. 1997. - №4. - С. 36-39.

121. Шубич, М.Г. Адгезивные межклеточные взаимодействия / М.Г. Шубич, М.Г. Авдеева, А.Д. Вакуленко // Арх. патологии. 1997. -Т. 59, №6. - С. 3-9.

122. Ямалеева, А.А. Лектины растений и их биологическая роль: Дис. . .док-а биол. наук / А.А. Ямалеева. Уфа, 2001. - 349 с.

123. Ямская, В.П. Адгезивные белки тканей млекопитающих: Дис. . .док-pa биол. наук / В.П. Ямская. М., 2003. - 304 с.

124. Ященко, A.M. Лектиногистохимия плаценты в норме и при слабости родовой деятельности / A.M. Ященко, Е.С. Детюк, А.Д. Луцик // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1991. - Т. 100. - №4. — С. 9— 14.

125. Akiyama S.H., Nagata К., Yamada K.M. Cell surface receptors for extracellular matrix components // Biochem. biophys. Acta. 1990. - V. 1031. -P. 91-110.

126. Alen M.J., Sucato D., Gottstine S., Kisailus E., Nava H., Petielli N., Castillo N., Wilson D. Localization of endogenous p-galactoside-binding lectin in human cells and tissues, Tumor Biol. 1991. - V. 12. - P. 52-60.

127. Alvogt P., Fogel M., Cheinsong-Popov R. Different patterns of lectin binding and cell surface sialylation detected on related high and low metastatic tumor lines // Cancer Res. 1983. - V. 43, № 11. - P. 5138-5144.

128. Balint G. Ricin. A toxic protein of castor oil seeds // Toxicology. — 1974.-№2.-P. 77-102.

129. Barondes S.H. Lectins: Their multiple endogenous cellular function // Ann. Rev. Biochem. 1981. - V. 50. - P. 207-231.

130. Barondes S.H. Soluble lectins: a new class of extracellular proteins // Science. 1984. -V. 223, № 4. - P. 1259-1264.

131. Barondes S.H. Bifunctional properties of lectins: lectins redefined. -TIBS, 1988.-V. 13.-P. 480-484.

132. Beyer E.C., Barondes A.H. Chicken tissue binding sites for a purified chicken lectin 11 J. Supramol. Struct. 1981. - V. 13, № 3. - P. 219-227.

133. Bladier D., Joubert R., Avellana-Adalid V., Kemeny J.L., Doinel C., Amouroux J., Caron M. Purification and characterization of a p-galactoside-binding lectin from human brain // Arch.Biochem.Biophys. 1989. - V. 269. -P. 433-439.

134. Bladier D., Le Caer J.P., Joubert R., Caron M., Rossier J., fi-galactoside soluble lectin from human brain: complete amino acid sequence // Neurochem Int. 1991. -V. 18. - P. 275-281.

135. Boid W., Everhart D., Mc Master M. The anti-N lectin of Bauhinia purpurea // J. Immunol. 1958. - V. 81. - P. 414-418.

136. Bowman B.H., Acute phase reactants in "Hepatic plasma proteins. Mechanism of function and regulation", 1993, (Acad. Press, Inc., San-Diego, California, USA), p. 47 49, 62 - 71.

137. Brown J., Hunt R. Lectins // Int. Rev. Cytol. 1978. - V. 52. - P. 277349.

138. Brysk M.M., Rajaraman S., Penn P. Endogenous lectin from terminally differentiated epidermal cells // Differentiation. 1986. - V. 32, № 3. - P. 230-237.

139. Burger M. Isolation of a receptor complex for a tumor specific agglutinin from the neoplastic cell surface // Nature. 1968. - V. 219. - P. 499-500.

140. Caron M., Bladier D., Joubert R. Soluble galactoside-binding vertebrate lectins: a protein family with common properties // Int. J .Biochem. 1990. -V. 22.-P. 1379-1385.

141. Catt J.W., Harrison F.L. Selective association of an endogenous lectin with connective tissues // J. Cell. Sci. 1985. - V. 73. - P. 347-359.

142. Chamow S.M., Hedrick J.L. Subunit structure of cortical granule lectin involved in the block to polyspermy in Xenopus laevis eggs // FEBS Lett. -1986. V. 206, № 2. - P. 353-357.

143. Collier W., de Miranda J.C. Bacterien hemagglutination // J. Microbiol. Serol.- 1955.-V.21.-P. 133- 146.

144. Cronstein B.N. Weissmann G. The adhesion molecules of inflammation // Arthr. and Rheum. 1993. - V. 36. - P. 147-157.

145. Cuatrecasas P. Membrane receptors // Ann Rev. Biochem. 1974. - V. 43.-P. 166-214.

146. Cuatrecasas P. Interaction of wheat germ agglutinin and concanavalin A with isolated fat cell //Biochemistry. 1983. -V. 12, № 7. - P. 1312-1323.

147. Cunningham B. Lectins a chemical approach to the cell surface // Applied Chem. 1975. - V. 41, № 1-2. - P. 31-46.

148. Czech M., Lynn W. Stimulation of methabolism by lectins in isolated white fat cells // Biochem. Biophys. Acta. 1980. - V. 297. - P. 368-377.

149. De George J.J., Carbonetto S. Wheat germ agglutinin inhibits nerve fiber growth and concanavalin A stimulates nerve fiber initiation in cultures of dorsal root ganglia neurons // Dev. Brain Res. 1986. - V. 28, № 2. - P. 169175.

150. Delauney J. Les proprietes de la membrane erythrocytaire // Ann. Biol. Clinique. 1977. - V. 35, №4. - P. 283-295.

151. De Waard A., Hickman S., Kornfeld S. Isolation and properties of p-galactose binding lectins of calf heart and lung // J. Biol. Chem. 1976. - V. 251, № 23. - P. 7581 -7587.

152. Dicou E., Hurez D., Nerriere V. Natural autoantibodies against the nerve growth factor in autoimmune diseases // J.neuroimmunol. 1993. - V. 47. - P. 159-168.

153. Dinarello C.A. Inflammatory cytokines: interleukin-1 and tumor necrosis factor as effector molecules in autoimmune diseases // Curr. Opin. Immunol. 1991. -V. 3. - P. 941-948.

154. Dinarello C.A. Interleukin-1 and interleukin-6 antagonism // Blood. -1991.-V. 77-P. 1627-1652.

155. Dontenwill M., Roussel G., Zanetta J.P. Immunohistochemical localization of a lectin-like molecule RI, during the postnatal development of the rat cerebellum // Dev. Brain Res. 1985. - V. 17, № 1-2. - P. 245-252.

156. Driskamer К. Two distinct classes of carbohydrate-recognation domains in animal lectins // J. Biol. Chem. 1988. - V. 263. - P. 9557-9560.

157. Edelman G.M. Morphoregulatory molecules // Biochemistry 1988. -V. 27.-P. 3533-3543.

158. Eloumani H., Caron M., Joubert R., Doinel C. Human brain lectin im-munoreactive material in cerebrospinal fluid determined by enzyme immunoassay (EFA) // J.Neurol.Sci. 1991. - V. 105. - P. 6-11.

159. Eshdat J., Speti V., Jann R. Participation of pili and cell wall adhesin in the vests agglutination activity of E.coli // Infect. Immunol. 1981. - V.34. -P.980-986.

160. Estruch R., Damjanov I. Lectin histochemistry applied to human nerves // Arch. Pathol. Lab. Med. 1986. - V. 110, № 8. - P. 730 - 735.

161. European pharmacopeia (4th Edition). Edot, 2002. - P. 1295-1299.

162. Font J., Bourillon R. Les constituants glucidiques de la PHA de Robiniaipseudoaccacia et leur role dans lactivite erythroagglutinate // Bioch. Bioph. Acta. 1971.-V. 243, №1.-P. 111-116.

163. Funatsu G., Yoshitake Sh., Funatsu M. Primary structure of alanin chain of ricin D // Agric. Biol. Chem. 1978. - V. 42, №2. - P. 501-503.

164. Goldstein I.J., Hughes R.C., Monsigny M., Osawa Т., Sharon N. What should be called a ltcnin? // Nature. 1980. - V. 66. - P. 285.

165. Goldstein I.J., Poretz D.D. Isolation and chemical properties of lectins in "The Lectins. Properties, function and application in biology and medicine" (I.E. Liener, N. Sharon, I.J. Goldstein as editors, Academic Press, Orlando, USA), 1986, P. 35-247.

166. Grunz H. Information transfer during embryonic induction in amphibians // Early Amphibian Dev. / Pap. Meet. Brit. Soc. Dev. Biol. Cambridge, 1985. P. 349-364.

167. Hammarstrom S., Kabat E. Purification and characterisation of blood group A reactive hemagglutinin from the snail Helix pomatia and a study of its combining site // Biochemistry. 1989. - V. 8, №7. - P. 2696-2705.

168. Harrison F.L., Fitzgerald J.E., Catt J.W. Endogenous p-galactoside-specific lectins in rabbit tissues // J. Cell. Sci. 1984. - V. 72. - P. 147-162.

169. Hart C.E., Wood J.G., A comparative study of intracellular binding sites of neurons in culture with neurons in situ // J. Сотр. Neurol. 1985. - V. 239, №2.-P. 155-162.

170. Hart L.A. Lectins in biological systems: Applications to microbiology // Amer // J. Clin. Nutr. 1980. - V.33, № 11. - P. 2416-2425.

171. Ikeda K., Sannoh Т., Kawasaki N., Kawasaki Т., Yamashina I., Serum lectins with known structure activates complement through the classical pathway // J. Biol. Chem. 1987. - V. 262. - P. 7451-7454.

172. Inohara H., Raz A. Identification of human melanoma cellular and secreted ligands for galectin-3 // Biochem.Biophys.Res.Com. 1994. - V. 201. -P. 1366-1375.

173. Johnson L.V., Calarco P.G. Mannalian preimplantation development: the cell surface // Anat. Rec. 1980. - V. 19, № 2. - P. 201-219.

174. Kajikawa Т., Nacajima Y., Hirabayashi J., Kasai K., Yanazaki M. Release of cytotoxin by macrophages on treatment with human placenta lectin. // Life Sci.- 1986.-V. 39.-P. 1177-1181.

175. Kawasaki Т., Ashwell G. Chemical and physical properties of an hepatic membrane protein that specifically binds asialoglycoproteins // J. Biol. Chem. 1976.-V. 251, №5.-P. 1296-1302.

176. Klagsbrun M. The fibroblast growth factor family: structural and biological properties // Progr. Crowth Factor Rec. 1989. - V. 46. - P. 149-182.

177. Kobiler D., Mirelman D. Lectin activity in Entamoeba hislytica tropho-soites // Infec. Immunol. 1980. -V. 29, № 1. - P. 221-225.

178. Kocourek J., Horejsi V. Anote on the recent discussion on definition of the term «lectin»//Ibid. 1983.-P. 3-6.

179. Kolb-Bachofen V., Puchta-Teundt N., Egenhofer Ch. Expression of membrane-associated C-reactive protein by human monocytes: indications for a selectin-like activity participating in adhesion // Glycoconjugate J. 1995. — V. 12.-P. 122-127.

180. Kuhlman M., Joiner K., Ezekowitz R.A.B. The human mannose-binding protein functions as an opsoninn // J. Exp. Med. 1989. - V. 169. - P. 1733— 1745.

181. Laing J.C., Robertson M.W., Gritzmacher Ch.A., Wang J.L., Liu F.-T. Biochemical and immunological comparisons of carbohydrate-binding protein 35 and IgE-binding protein // J. Biol. Chem. 1989. - V. 264. - P. 19071910.

182. Liotta L.A., Roo C.N. Tumor invasion and metastasis. New Concepts in Neoplasia as Applied to Diagnostic Pathology /Eds. M. Cecilia, F. Preiser, R.S. Weinstein, N. Kanfman. Willams and Wilkins. - Baltimore. - 1986. — P. 183-192.

183. Lipsick J., Beyer E., Barondes S. Lectins from chicken tissue are mito-genic for thy-1 negative murine spleen cells // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1980. - V. 97, № l.-P. 56-61.

184. Logan A. Intracrine regulation at the nucleus a further mechanism growth factor activity? // J. Endocr. - 1990. - V. 125. - P. 339-343.

185. Lotan R., Nicolson G. Purification of cell membrane glycoprotein by lectin affinity chromatography // Bioch. Bioph. Acta. 1979. - V. 559, №4. — P. 329-376.

186. Lutomski D., Caron M., Bourin Ph., Lefebure Ch., Bladier D., Joubert-Caron R. Purification and characterization of natural antibodies that recognize a human brain lectin // J.Neuroimmunol. 1994. - V. 57. - P. 9-15.

187. Makela O. Studies in hemagglutinins of leguminose seeds // Ann. Med. Exp. et Biol. Fenniae. 1957. - V. 35. - P. 11-53.

188. Mannoji H., Yeger H., Besker L.E. A specific hictochemical marker (lectin Ricinus communis agglutinin 1) for normal human microglia and application to routine histopathology // Acta Neuropathol. - 1986. - V. 71, № 3-4.-P. 341-343.

189. Marchalonis J., Edelman G. Isolation and characterization of a hemagglutinin from Limulus polyphemus // J. Mol. Biol. 1968. - V. 32, № 2. - P. 453-465.

190. Martin J., Davies M., Thomas G.J., Lovett D.L. The control of glomerular matrix turnover: the characterization of a neutral proteinases and specific inhibitor secreated by human mesangial cells // Kidney Int. 1989. - V. 36. -P.790-801.

191. Method in Molecular Biology / Edited by: S. Doonan. V. 59: Protein Purification Protocols. - Humana Press. - Totowa, New Jersey, 1996. - P. 17— 29, 157-168.

192. Mookerjee В., Ferber E., Ernst M. Chemiluminescese and immune cell activation general features of the thymocyte chemiluminescent responces to plant lectins // Immunol. Comm. 1980. - V. 9, № 7. - P. 653-676

193. Moscona A.A., Hausman R.E. In: Cell and Tissue Interactions (Lash J.W., Burger M.M.), Raven Press, New York. 1977. - P. 173-185.

194. Muegge K., Durum S.K. Cytokines and transcription factors // Cytokine. 1990. - V. 2.-P. 1-8.

195. Muller E., Schroder С., Franco M.M. Involvement of a P-galactose-p specific macrophage lectins in binding and phagocytosis of erytrocytes //1.ctins biol., biochem., clinical biochem. Proc. V lectin meeting. - Berlin. -1983. - V. 3.-P. 435—442.

196. Nakagawa F., Schulte B.A., Spicer S. Selective cytochemical demonstration of glycoconjugate-containing terminal N-acetylgalactosamine on some brain neurons // . Сотр. Neurol. 1986. - V. 243, №2. - P. 280-290.

197. Nakagawa F., Schulte B.A., Spicer S. Lectin cytochemistry of cell types in human and canine pituitary // Histochemistry. 1986. - V. 85, №1. - P. 5766.

198. Nakane P.K., Pierce G.B. Enzyme lobelled antibodies preparation andapplication fon the locoliration of antigens // J. Histochem. Cytochem. 1966. -V. 14, №12.-P. 929-931.

199. Nakane P.K., Kawagi A. Peroxidase-labeled antibody. A nev method of conjugation // J. Histochem. Cytochem. 1974. - V.22, № 12. - P. 10841090.

200. Nathan C., Sporn M.B. Cytokines in context // J. cell. biol. 1991. - V. 113.-P. 981-986.

201. Osmand A.P., Mortensen R.F., Siegel J., Gewurz H. Interactions of C-reactive protein with the complement system III. Complement-dependent pas

202. Ф sive hemolysis initiated by CRP // J.Exp.Med. 1975. - V. 142. - P. 10651077.

203. Pandolfino E., Chrisite D., Munske G. Activation of cancanavalin A by

204. Cd2+ // J. Biol. Chem. 1980. - V. 255, №18. - P. 8772-8775.

205. Pepys M.B., Baliz M.L., Acute-phase proteins with special reference to C-reactive protein and related proteins (Pentraxins) and serum amyloid A protein // Adv.Immunol. 1983. - V. 34. - P. 141-212.

206. Pustai A., Stewart J. Isolectins of Phaseolus vulgaris. Physico-chemical studies // Biochem. Biophis. Acta. 1978. - V. 536, № 1. - P. 38-49.

207. Raedler A., Raedler E. The use of lectins to study normal differentiation and malignant transformation // J. Cancer Res. Clin. Oncol. 1985. - V. 109, № 109.-P. 245-251.

208. Rees D.A. Polysaccharide shapes. London: Chapman and Hall, 1977. -P. 12-24.

209. Regan L.J., Dodd J., Barondes H., Jessell T.M. Selective expression of endogenous lactose-binding lectins and lactoseries glycoconjugates in subsets of rat sensory neurons // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. - V. 83, № 7. -P. 2248-2252.

210. Schwechheimer K., Weiss G., Moller P. Concanavalin A binding and neuronal differetiation. A light microscopic study on neuronal tumor // Vir-chows Arch. 1984. - V. 402, №3. - P. 297-300.

211. Simpson D.L., Thorne D., Loh H. Lectins: endogenous carbohydratebinding proteins from vertebrates tissues/ Functional role in recognition processes? // Life Sci. 1978. - V. 22, № 9. - P. 727-748.

212. Srehel J., Waterfield M. Primarystructure of the influenza virus hemag-p glutinin 11 Proc. Natl. Acad. Sci. US. 1975. - V. 72, № 1. - P. 93-97.

213. Staines A., Kimura N., Fibiger H. Peroxydase-labelled lectin as a neuro-anatomical tracer: evaluation in a CNS pathway // Brain Res. 1980. - V. 197, №2.-P. 485-490.

214. Thomopoulos G.N., Schulte B.A., Spicer S.S. Postembedment staining of complex carbohydrates: influence of fixation and embedding procedures // J. Electron. Microsc. Techn. 1987. - V. 5, № 1. - P. 17-44.

215. Tseng J., Mortensen R.F. Binding of human C-reactive protein (CRP) to plasma fibronectin occurs via the phosphorylcholine-binding site //

216. Mol.Immunol. 1988. - V. 25. - P. 679-688.

217. Vogt D., Kolb H. Analysis of the recycling behaviour of galactose-specific lectins on rat liver cells // Lectins biol., biochem., clinical biochem. Proc. IV lectin meeting. Berlin. 1982. V. 2. P. 57-65.

218. Webb M., Gallo V., Schneider A., Balazs R. The expression of conca-navalin A binding the development of cerebellar granule neurons in vitro // Int. J. Dev. Neurosci. 1985. - V. 3, № 2. - P. 199-208.

219. Williams L.T. Signal transduction by the platelet derived growth factor receptor// Science. 1989. -V. 243. -P. 1564-1570.

220. Woo H.-J., Shaw M., Messier J.M., Mercurio A.M. The major nonintegrin laminin binding protein of macrophagfs is identical to carbohydrate binding protein 35 (Mac-2) // J. Biol. Chem. 1990. - V. 265. - P. 70977099.

221. Wright C. The crystal structure of wheat garm agglutinin at 2,2 A resolution // J. Biol. Chem. 1977. - V. 111, №23. - P. 205-211.

222. Yamaguchi Y., Mann D.M., Ruoslahti E. Negative regulation of growth factor activities // Cell. 1991. - V. 64. - P. 864-869.

223. Zuzack J.S., Tasca R.J. Lectin-induced blockage of developmental proc-& esses in preimplantation mouse embryos in vitro // Gamete Res. 1985. - V.12. №3.-P. 275-290.

Информация о работе

Епифанова, Светлана Владимировна
кандидата биологических наук
Курск, 2004
ВАК 03.00.04

Диссертация

Сравнительный биохимический анализ лектинов головного мозга человека и животных - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Сравнительный биохимический анализ лектинов головного мозга человека и животных ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Сравнительный биохимический анализ лектинов головного мозга человека и животных"

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Епифанова, Светлана Владимировна

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сравнительный биохимический анализ лектинов головного мозга человека и животных"

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Епифанова, Светлана Владимировна

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Епифанова, Светлана Владимировна, Курск

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Сравнительный биохимический анализ лектинов головного мозга человека и животных
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия