Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологическая активность лектина Paenibacillus Polymyxa in vitro и в организме животных

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Биологическая активность лектина Paenibacillus Polymyxa in vitro и в организме животных"

На правах рукописи

Кикалова Татьяна Петровна

БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ЛЕКТИНАPAENIBACILLUSPOLYMYXA IN VITRO И В ОРГАНИЗМЕ ЖИВОТНЫХ

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Саратов-2009

003481470

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова»

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Карпуннна Лидия Владимировна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Васильев Дмитрий Аркадьевич кандидат биологических наук Соболева Елена Федоровна

Ведущая организации: Российский государственный аграрный университет -МСХА им. К.А. Тимирязева

Защита диссертации состоится «26» ноября 2009 года в Г^часов на заседании диссертационного совета Д 220.061.04 при ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова» по адресу: г. Саратов, ул. Соколовая, 335, диссертационный зал.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И. Вавилова»

Автореферат диссертации разослан г. и размещен на сайте:

www.sgau.ru

Отзывы на автореферат направлять по адресу: 410012, г. Саратов, Театральная пл., 1, ученому секретарю диссертационного совета.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор Л.В. Карпуннна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Акту альность темы

Лектины представляют собой углеводсвязываюгцие белки, способные участвовать во многих внутриклеточных метаболических процессах растений, животных, микроорганизмов. Ни один биологический процесс в клетке не может обойтись без механизмов «персональной идентификации» молекул. Центральные, ключевые процессы, такие как репликация, транскрипция, трансляция, тоже целиком основаны на взаимном узнавании молекул и молекулярных комплексов. Несмотря на эту всепроникающую и всеобъемлющую значимость процессов молекулярного «узнавания», многие его аспекты по-прежнему остаются неясными, гипотетическими. Это относится и к работе огромного класса белковых молекул, способных обратимо и избирательно связывать разнообразные углеводы (Шакирова, Безрукова, 2007), которые называют локтинами.

Наименее изученными среди лектинов различного происхождения являются лектины бактерий. К настоящему времени известно достаточно микроорганизмов, способных синтезировать лектины разнообразной углеводной специфичности (Uhlen-bruck, 1987; Лахтин, 1986; Карпунина, Никитина, Трихачева, 1989; Никитина, Итальянская, Карпунина, 1989; Коваленко, 1990; Карпунина, 2002; Sharon, 2007 и др.). Среди бактериальньгх лектинов наиболее хорошо исследована биологическая активность лектинов патогенных бактерий (Jacevviez et al., 1986; Adam et al., 1997; Тихомирова и др., 2003). Несмотря на имеющиеся публикации в отношении лектинов пепатогенных бактерий (Никитина и др., 2002; Абросимова, Новоселова, Мухачева, 2002; Мухачева, 2004; Неверова и др., 2006; Горельникова, 2006; Неверова и др., 2007), их биологическая активность и роль в живых организмах не является до конца изученной.

• Для возможности практического применения лектинов непатогенных бактерий в качестве диагностических или лечебных препаратов в медико-биологических исследованиях и ветеринарии, необходимы более глубокие знания об их биологической активности и влиянии на живой организм. Поэтому исследования в этой области являются актуальными и имеют научное и практическое значение.

Цель работы состояла в изучении биологической активности лектина ЛИ Paeni-bacillus polymyxa 1460 in vitro и в организме животных: его влияния на некоторые показатели метаболизма и кишечную микрофлору животных в норме и в условиях стресса; оценке токсических, бактерицидных, фунгицидных и ранозаживляющих свойств.

Задачи исследования:

1. Исследовать токсичность пектина Jill P.polymyxa 1460 на биотест-объектах Colpoda steinii,

2. Оценить влияние лектина Jill P.polymyxa 1460 на морфо-функциональное состояние органов лабораторных белых мышей.

3. Определить воздействие лектина ЛИ P.polymyxa 1460 in vivo на активность глутатион-5-трансферазы, аланин- и аспартатаминотрансферазы, на концентрацию церулоплазмина в эритроцитах и сыворотке крови крыс в норме и в условиях принудительного неизбегаемого плавания.

4. Изучить воздействие лектина ЛИ P.polymyxa 1460 in vivo на некоторые показатели азотистого, липидного (концентрацию мочевины и холестерина) и углеводного (концентрацию глюкозы) обменов у крыс в норме и в условиях принудительного неизбегаемого плавания.

5. Выявить влияние лектина ЛИ P.polymyxa 1460 на микрофлору толстого кишечника крыс в норме и при различных видах стресса (иммобилизационный, холодо-вой и этаноловый).

6. Исследовать бактерицидные, фунгицидныс и ранозаживляющие свойства лектина ЛII P.polymyxa 1460.

Научная новизна

Получены новые данные, характеризующие биологическую активность лектина ЛИ P.polymyxa 1460 in vitro и in vivo. Изучено его влияние на метаболические процессы и кишечную микрофлору в организме животных в норме и в условиях стресса. Впервые показано, что предварительное введение лектина в организм экспериментальных животных в условиях принудительного плавания как стресс-фактора, увеличивает их выносливость в два раза. Установлено, что лектин ЛИ в условиях патологических нарушений в организме, вызванных стрессированием плаванием, нормализует активность глутатион-8-трансферазы и аланинаминотрансферазы, снижает активность аспартатаминотрансферазы и содержание мочевины в сыворотке крови крыс. Выявлено, что лектин ЛИ P.polymyxa 1460 способен стимулировать рост некоторых молочнокислых бакгерий и подавлять рост энтеропатогенной кишечной палочки и стафилококков в толстом кишечнике при холодовом, этаноловом и иммобилизацион-ном стрессах.

Впервые проведена оценка токсических, бактерицидных, фунгицидных и рано-заживляющих свойств лектина ЛИ P.polymyxa 1460. На биотест-объекгах С. steinii и лабораторных белых мышах показано отсутствие его токсичности в концентрациях от 4-10"4 до 4 мкг/мл. В условиях in vitro исследованы бактерицидные свойства лектина ЛИ в тех же концентрациях в отношении Escherichia coli 01, Staphylococcus aureus

209-P, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27533 и фунгицидные в отношении Candida albicans 130. Установлена способность лектина бацилл и экзополисахаридных гелей с его добавлением влиять на заживление ранений резаного типа у крыс.

Практическая значимость

Выявленные свойства лектина ЛИ активизировать некоторые процессы метаболизма, способствуя тем самым устойчивости животных к стрессовым воздействиям, проявлять бактерицидные, фунгицидные, ранозаживляющие и тканепротекгорные свойства, открывают перспективы возможного применения данного биологически активного вещества в медико-биологических исследованиях и ветеринарной практике.

По материалам диссертационной работы опубликованы методические рекомендации «Изучение влияния лектина бацилл на активность глутатион-Б-трансферазы эритроцитов крови крыс при стрессе» (в соавторстве с H.H. Неверовой, Л.В. Карпу-ниной и М.Д. Сметаниной, 2008) для практических занятий студентов старших курсов, а также для работы аспирантов и научных работников, специализирующихся в области микробиологии, биохимии, физиологии человека и животных, рекомендованные Учебно-методической комиссией и одобренные Ученым советом ветеринарного факультета Саратовского государегвенного аграрного университета им. Н.И. Вавилова (протокол № 42 от 3 апреля 2008 г.). Результаты диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций по микробиологии и написании дипломных работ в Саратовском государственном университете им. Н.Г. Чернышевского и в Саратовском государственном аграрном университете им. Н.И. Вавилова.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Лектин ЛН P.polymyxa 1460 не является токсичным, не изменяет активность, характер передвижения инфузорий и их внешний вид в концентрациях 4-Ю"4, 4-Ю"3, 4-Ю'2, 410"' мкг/мл, а в концентрации 4 мкг/мл увеличивает двигательную активность C.steinii, не влияя на другие показатели.

2. Введение лектина бацилл ЛН в дозе 0,2 мкг/животное не оказывает негативного влияния на морфо-функциональное состояние органов лабораторных белых мышей, активирует функции гепатоцитов и тканей головного мозга, стимулирует сперматогенез у самцов по результатам гистологических исследований.

3. Лектин ЛИ P.polymyxa 1460 регулирует метаболические процессы в организме экспериментальных животных, нормализуя активность глутатион-S-трансферазы и аланинаминотрапсферазы, понижая активность аспартатаминотранс-феразы и содержание мочевины в сыворотке крови в условиях патологических нарушений в организме, вызванных стрессированием плаванием.

4. Лектин ЛИ P.polymyxa 1460 стимулирует рост некоторых молочнокислых бактерий и подавляет рост энтеропатогенной кишечной палочки и стафилококков в

толстом кишечнике в условиях холодового, этанолового и иммобилизационного стрессов.

5. Лектин ЛИ в различных концентрациях, в том числе и в чрезвычайно низких (4-10"4 мкг/мл), способен проявлять in vitro бактерицидные и фунгицидные свойства в отношении E.coli 01, S.aureus 209-Р, P.aeruginosa АТСС 27533 и C.albicans 130.

6. Лектин ЛИ в составе некоторых экзополисахаридных гелей в концентрации 4 мкг/мл способствует более быстрому заживлению ранений резаного типа у экспериментальных животных.

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова» в рамках научно-исследовательской темы: «Изучение биологически активных веществ (лектинов) в регуляции метаболизма растений и животных» и при частичной поддержке грантом CRDF (CR-006-xl).

Апробация работы

Материалы диссертации были представлены на: III Международной школе-конференции «Актуальные аспекты микробиологии» (Москва, 2007); региональных конференциях молодых ученых «Вавиловские чтения -2007, 2008» (Саратов, 2007; 2008); всероссийской научно-практической конференции, посвященной 90-летию факультета (института) ветеринарной медицины (Саратов, 2009); VI межрегиональной конференции молодых ученых «Стратегия взаимодействия микроорганизмов и растений с окружающей средой» (Саратов, ИБФРМ РАН, 2008).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 9 работ, из них 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК РФ.

Струюура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, двух глав: обзора литературы и экспериментальной части, включающей объект и методы исследований, результаты исследований и их обсуждение, а также заключения, выводов и списка использованных литературных источников. Работа изложена на 143 страницах, содержит 18 таблиц и 6 рисунков. Список использованных литературных источников включает 329 наименований, в том числе 211 зарубежных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Материалы и методы

Объектом исследований явился лектин ЛП различной концентрации (от 4-Ю"4 до 4 мкг/мл), выделенный с поверхности почвенных азотфиксирующих бактерий Paetii-bacilluspolymyxa 1460, полученных из Чешской коллекции микроорганизмов (СММ).

Для выделения лектина JIII с поверхности P.polymyxa 1460, клетки выращивали в течение 72 часов при температуре 28°С на синтетической среде Moore (Moore, Becking, 1963). Биомассу клеток P.polymyxa 1460 осаждали центрифугированием (6000g, 10 мин), многократно пропускали через иглу шприца диаметром 0,1 мм в 1% растворе NaC!. Неочищенный агглютинин получали путем осаждения белка 2,5 объемами ацетона, .анализировали против дистиллированной воды в течение 15-20 часов и очищали методом гель-фильтрации на колонке размером 25x1,5 см, используя в качестве носителя Toyopearl HW-55. Белок с колонки элюировали 0,05 н глицин-HCl буфером (pH 3,0). Выход белковых фракций регистрировали на приборе Uvicord SU (LKB) при 280 нм, спектрофотометре СФ-26, спектрофлюориметре «Флюорат-02 Панорама» в диапазоне длин волн 265-280 нм (Карпунина, 1993; 2002). Количественное содержание белка определяли по методу М.А. Bradford (1976). Гемагглютинирующуго активность лектина ЛИ определяли реакцией гемагглютинации с самопроизвольным осаждением эритроцитов на стандартных планшетах для иммунологических реакций с использованием 2% суспензии трипсинизированных кроличьих эритроцитов (Lis, Sharon, 1972). Углеводную специфичность определяли по ингибированию реакции гемагглютинации (Луцик, Панасюк, Луцик, 1981).

В работе использовали инфузории - C.steinii, полученные из музея культур кафедры биологии, экологии, физиологии и фармакологии Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова; бактерии - E.coli 01, S.aureus 209-Р, P.aeruginosa АТСС 27533, полученные из коллекции бактериальных культур кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии СГАУ им. Н.И. Вавилова и грибы -C.albicans 130, полученные из м>-зея культур Государственного научного учреждения «Саратовская научно-исследовательская ветеринарная станция» Россельхознадзора (Саратов).

Для выращивания микроорганизмов использовали: капустную среду, синтетической среде Moore (Moore, Becking, 1963), мясо-пептонный агар, гидролизованное молоко, среду Эндо и желточпо-солевой агар (Лабинская, 1978).

Определение токсичности проводили по стандартной экспресс-методике определения общей токсичности с использованием простейших в качестве биотест-объектов (Виноходов, 1995; Виноходов, Пожаров, 2006).

В работе использовали самцов белых нелинейных мышей со средней массой тела 21 г, а также самок и самцов беспородных белых крыс со средней массой 210 г. Экспериментальные исследования выполнены в соответствии с требованиями Федерального закона от 01.01.1997 г. «О защите животных от жестокого обращения» и положениями Европейской конвенции по защите позвоночных животных (Страсбург, 18.03.1986 г). Всех животных содержали в стандартных условиях вивария.

Гистологический анализ органов мышей с окраской срезов гематоксилин-эозином проводили по методике (Меркулов, 1969).

Определение активности глуташон-5-трансферазы (GST) в эритроцитах крови крыс проводили по методу (Habig, Jakoby, 1981); активности аспартат- (ACT) и ала-нинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке крови - по методу (Reitman, Frankel, 1957), применяя набор реагентов фирмы «Lachema»; содержание церулоплазмина (ЦП) в сыворотке крови - по методу (Ravin, 1961), а содержание мочевины и холестерина в сыворотке крови - с помощью набора реактивов фирмы «Агат» (Москва). Концентрацию глюкозы в сыворотке крови определяли с использованием набора реагентов «Глюкоза-ФКД» (Москва).

Количество микроорганизмов в толстом кишечнике крыс определяли методом серийных разведений (Костенко, Радионова, Скородумов, 2001). Идентификацию бактерий проводили по определителю бактерий Берджи (Определитель бактерий..., 1997).

Бактерицидные и фунгицидные свойства лектина ЛИ P.polymyxa 1460 и экзопо-лисахаридных (ЭПС) гелей изучали методом диффузии в агар (Лабинская, 1978).

При получении гелей использовали ЭПС бактерий: лаксаран 1596*, лаксаран 1936*, лаксаран Z*, полимиксан 88А" и ЭПС Xanlhomonas campestris В-610"*, атакже коммерческие полисахариды: ксантан" и карбокси-метил-окси-этил-целлюлозу (КМОЭЦ)**.

В качестве сгрессирующих процедур применяли принудительное неизбегаемое плавание («forced swimming») с грузом (5% от массы тела) до утомления в воде при температуре 25°С, регистрируя время плавания по методу (Porsolt et al., 1978) в модификации E.B. Щетинина с соавт. (1989); холодовой стресс, который моделировали путем помещения крыс на лед на 60 минут; иммобилизационный стресс (фиксировали животных на спине с использованием мягкой лигатуры) в течение 60 минут; этаноло-вый стресс - с помощью зонда вводили 25 % раствор этилового спирта в желудок экспериментальных животных (Анищенко, 1991).

При исследовании ранозаживляющих свойств лектина и экзополисахаридных гелей in vivo, самок белых беспородных крыс контрольной и опытных групп в первые сутки эксперимента фиксировали на специальных планшетах и под эфирным наркозом в межлопаточной области наносили с помощью скальпеля параллельные резаные линейные раны спины длиной до 1 см (Брайловская, 2009). На одно из параллельных ранений наносили экзополисахаридный гель (50 мкл), а на параллельное ранение -

* Выражаем глубокую благодарность аспирантам Е.В. Полукарову, Г.Е. Рьгсмухамбетовой***

и к.б.н. E.H. Бухаровой" за любезно предоставленные препараты полисахаридов.

такой же объем ЭПС геля идентичного состава с добавлением лектина ЛП (4 мкг/мл). Наблюдение проводили в течение семи суток.

Полученные результаты обрабатывали методами вариационной статистики с применением I - критерия Стьюдента (Зайцев, 1991).

Оценка токсичности лектина бацилл на биотест-объекте СМетИ

Анализ токсичности лектина бацилл ЛП проводили, используя в качестве индикаторного организма инфузории - С.$1етИ. Наблюдение осуществляли сразу и по истечении 5 и 15 минут после добавления лектина ЛИ различной концентрации (410"1, 4-10'3, 4-Ю*2, 4-Ю"1 и 4 мкг/мл) в опытные пробы. При микроскопировании опытных проб с добавлением лектина в концентрации от 4-Ю"4 до 4-10"1 мкг/мл, количество, активность и характер передвижения инфузорий, их внешний вид не изменялись относительно контрольных показателей. Однако, после добавления в опытные пробы лектина в концентрации 4 мкг/мл, наблюдали увеличение двигательной активности инфузорий без изменения их морфологических характеристик. Возможно, увеличение активности инфузорий связано с усилением каких-либо метаболических процессов в организме простейших. По истечении 15 минут активность передвижения инфузорий снижалась и была сопоставима с активностью передвижения инфузорий в контрольной группе.

Все вышеизложенное позволяет говорить об отсутствии признаков токсичности бактериального лектина ЛИ во всех взятых в опыт концентрациях.

Влияние лектина ЛН Р.ро1утуха 1460 на морфо-функциональное состояние органов мышей

Для подтверждения данных о нетоксичности лектина ЛП Р.ро!утуха 1460 представлялось интересным изучить его влияние на морфо-функциональное состояние внутренних органов мышей.

Лектин вводили белым беспородным мышам интраперитонеально в дозе по 0,2 мкг/животное в течение 5 суток. На 6 сутки животных выводили из эксперимента передозировкой эфира и производили вскрытие и забор органов для гисгоанализа. При сравнении гистопрепаратов органов животных интактной и контрольной групп с гис-топрепаратами органов опытной группы мышей, каких-либо морфологических изменений выявлено не было. При исследовании гистопрепаратов селезенки, почек, щитовидной железы, желудка и желудочно-кишечного такта, легких, сердца и скелетных мышц мышей опытной группы, каких-либо отклонений от нормы (от показателей интактной и контрольной группы мышей) выявлено не было.

При изучении гистопрепаратов печени, долек семенников и тканей головного мозга животных опытной группы были обнаружены некоторые изменения, свидетельствующие об активизации работы этих органов. Так при исследовании срезов печени животных опытной группы выявлено, что балочная структура долек печени была менее четко выражена, чем у животных контрольной группы. Гепатоциты были слегка увеличены в объеме, границы их слабо заметны. Никаких резко выраженных дистрофических изменений обнаружено не было. Набухание гепатоцитов свидетельствовало об активизации функций печени животных опытной группы. Возможно, это было связано с синтезом клетками печени ферментов в ответ на введение лектина ЛИ в организм мышей.

При анализе гистопрепаратов долек семенников животных опытной группы, в извитых семенных канальцах была отмечена активизация сперматогенеза, наблюдалось усиленное размножение сперматогенных клеток внутренней части стенок извитых канальцев. Во многих семенных канальцах оформляющиеся сперматозоиды полностью заполняли их просветы. При этом в семенных канальцах животных опытной группы формирующиеся спермии обнаруживались в ббльшем количестве, чем у контрольных животных. Таким образом, можно говорить о стимулирующем действии препарата лектина ЛИ на сперматогенез у самцов мышей.

На гистопрепаратах тканей головного мозга наблюдали четкую структуру всех клеточных элементов, особенно клеток мозжечка. Также на гистопрепарате мозжечка животных опытной группы четче, чем в контрольной группе можно было выявить клетки Пуркинье и зернистый слой мозжечка. В глии мозга мышей опытной группы выявлена пролиферация ее клеток, что указывает на активизацию функций тканей головного мозга под действием лектина ЛИ.

Таким образом, в результате проведенных исследований было доказано, что лек-тин бацилл ЛИ не оказывал негативного влияния на морфо-функционалыюе состояние внутренних органов мышей, активизируя работу некоторых из них. Нами было сделано предположение, что это могло быть также следствием воздействия данного лектина на какие-либо биохимические процессы в организме животных, что и явилось предпосылкой для проведения дальнейших исследований в этой области.

Изучение влияния лектина бацилл ЛИ на некоторые биохимические параметры крови крыс при стрессировании плаванием

Ранее в работах H.H. Неверовой (2008) было показано, что предварительное введение лектина ЛИ P.polymyxa 1460 крысам вызывало нормализацию активности фермента глутатион-З-трансферазы в крови животных при холодовом и этаноловом стрессах; оказывало влияние на азотистый обмен, нормализуя содержание мочевины

и

при этаноловом стрессе и содержание церулоплазмина в сыворотке крови, нарушение которого было вызвано влиянием таких стрессовых факторов как холод и этанол, но не оказывало влияния на уровень холестерина, нарушение которого связано с действием холодового стресса. Исходя из всего сказанного, представляло интерес продолжить изучение влияния данного лектина на некоторые биохимические параметры крови животных в условиях другого классического вида стресса - принудительного плавания.

В результате проведенных исследований было обнаружено, что время плавания крыс с предварительно введенным лектином бацилл в дозе 2 мкг/животное оказалось в два раза больше, чем время плавания контрольных животных, и составило 83 мин (табл. 1).

Таблица 1 - Влияние лектина JIII на время плавания крыс

Характер воздействия Время плавания, мин

(М±т)

Плавание 45,01 ± 1,38

Лектин ЛИ + плавание 83,35 ± 1,18*

Примечание:

* - р < 0,05 относительно значений группы животных после плавания.

Мы предположили, что увеличение времени плавания могло быть связано с активацией лектином ЛИ каких-либо процессов метаболизма в организме опытных животных. Поэтому следующим этапом исследований явилось определение активности некоторых ферментов (GST, АЛТ, ACT), а также содержания ЦП, холестерина, мочевины и глюкозы в сыворотке крови экспериментальных животных.

Было показано, что введение экспериментальным животным лектина ЛИ само по себе снижало активность GST на 25% (табл. 2). Снижение активности глутатион-S-трансферазы при введении лектина ЛИ крысам свидетельствовало о нетоксичности лектина, поскольку GST является в первую очередь детоксикационным ферментом. Можно предположить, что бактериальный лектин ЛИ, попав в организм животного, специфически связывался с углеводными рецепторами на поверхности клеток, изменяя тем самым их проницаемость. А так как GST является внутриклеточным ферментом, его выход из клетки затруднялся, что приводило к снижению активности данного фермента в крови животных.

При этом стрессирование плаванием также достоверно снижало активность данного фермента в эритроцитах крови крыс на 58% - до 9,19 мкмоль/мин-л относительно показателей интактных животных, активность фермента в крови которых составила 19,90 мкмоль/мин-л. Можно предположить, что через 83 минуты принудительного

плавания, большая часть детоксикационного фермента GST была потрачена организмом на борьбу против свободных радикалов, образующихся при стрессах и участвующих в перекисном окислении липидов и деструкции мембран клеток, и его концентрация в крови животных значительно снижалась.

Таблица 2 - Влияние лектина ЛП на активность некоторых ферментов и содержание церулоплазмина в норме и при стрессе

Характер воздействия Активность, мкмоль/мин-л Коэф-т ДеРитиса ЦП, мг/л

OST, АЛТ ACT

(М±ш)

Интактные животные 19,90±0,63 1,73±0,02 1,99±0,02 1,15±0,01 595,90+5,02

Лектин ЛИ 15,12±0,42* 0,82±0,02* 2,12±0,09 2,58±0,11* 469,80±5,87*

Плавание 9,19±1,70*0 2,39±0,13* 3,34±0,03* 1,38±0,01* 739,87±1,28*

Лектин ЛП + плавание 18,79±0,414 l,57±0,09i° l,23±0,06*io 0,78±0,04*4" 727,71±5,23*°

Примечание:

* - р < 0,05 относительно значений животных интактной группы; л - р < 0,05 относительно значений группы животных после плавания; 0 - р < 0,05 относительно значений животных с инъекцией лектина ЛИ.

При предварительном введении бактериального лектина ЛИ в организм животных ферментативная активность ОБТ повышалась относительно показателей животных в группе плавания на 48% (до 18,79 мкмоль/мин-л) и приближалась к норме, т.е. к значениям активности фермента животных интактной группы (19,90 мкмоль/мин-л). Таким образом, приведенные экспериментальные данные, позволяют говорить о том, что лектин бацилл ЛП, вводимый в организм крыс перед действием данного стрессового фактора, оказывает нормализующее воздействие на активность 05Т в крови животных.

В ходе дальнейших экспериментов было показано, что введение крысам лектина ЛИ без воздействия стрессора, вызывало понижение активности АЛТ в сыворотке крови животных на 50%. Возможно, в данном случае лектин ЛП также стабилизировал структуру мембран, изменяя ее проницаемость для фермента АЛТ, либо происходило ингибирование синтеза данного внутриклеточного фермента под действием лектина ЛИ. При этом активность этого фермента повышалась на 40% при воздействии стрессового фактора в виде принудительного плавания и составляла 2,39 мкмоль/мин-л против 1,73 мкмоль/мин-л у интакгных животных (табл. 2). Повышение активности АЛТ в сыворотке крови крыс при стрессе можно объяснить повреждением структуры мембран клеток под действием сильного стрессора на организм и выхо-

дом внутриклеточных ферментов в кровь.

Уровень активности ACT в сыворотке крови животных с инъекцией лектина достоверно не повышался относительно контрольных значений. При стрессировании животных плаванием активность ACT повышалась относительно исходных значений на 70% и составляла 3,34 мкмоль/мин-л против 1,99 мкмоль/мин-л у животных ин-тактной группы. Наши данные согласуются с литературными источниками, из которых известно, что при различных стрессорных и патологических состояниях в организме животных изменяется способность клеток вырабатывать аминотрансфера-зы (Jung et aL, 1985).

При введении крысам лектина ЛИ до (премирования, активность АЛТ в сыворотке крови животных снижалась на 40% относительно активности данного фермента у животных после плавания и была сопоставима со значениями активности в контрольной группе. Также наблюдалось снижение активности ACT более чем в 2,5 раза относительно активности у животных, стрессированных плаванием без предварительного введения лектина. Таким образом, можно говорить о нормализующем действии лектина ЛИ на активность АЛТ и о снижении активности ACT под влиянием лектина ЛИ при стрессе.

Далее нами было рассмотрено влияние лектина ЛИ и стресса на содержание це-рулоплазмина. Показано, что введение лектина ЛИ в организм животных приводило к снижению концентрации данного фермента в сыворотке крови крыс на 20%, то есть был отмечен тот же эффект действия лектина ЛИ как и в случае ранее исследованных внутриклеточных ферментов. Стрессирование плаванием вызывало увеличение содержания ЦП на 24%, концентрация фермента составила 739,87 мг/л против 595,90 мг/л у контрольных животных. Предварительное введение лектина ЛИ не приводило к снижению содержания ЦП в сыворотке крови крыс при стрессе. Повышенная концентрация церулоплазмина в крови при стрессе можсг рассматриваться в данном случае как компенсаторная реакция организма, направленная на стабилизацию клеточных мембран или ферментативное окисление биогенных аминов и других медиаторов, образующихся при стрессе (Курочкин, Воробьева, 2006).

В ходе дальнейших экспериментов было обнаружено, что введение лектина в организм животных не повлияло на концентрацию мочевины, холестерина и глюкозы в сыворотке крови крыс (табл. 3). При изучении некоторых показателей азотистого и липидного обменов при стрессе, было обнаружено, что содержание мочевины в сыворотке крови животных достоверно увеличивалось в 2,5 (до 8,74 ммоль/л против 3,76 ммоль/л в контроле), а содержание холестерина - в 6 раз относительно контрольных значений (до 6,54 ммоль/л против 1,03 ммоль/л в контроле). Полученные нами данные подтверждаются литературными источниками, согласно которым уровень моче-

вины и холестерина повышается после сильных физических нагрузок и при стрессе (Ленкова, 1973).

Таблица 3 - Влияние лектина ЛИ на концентрацию мочевины, холестерина и глюкозы в сыворотке крови крыс в норме и при стрессе

Характер воздействия Концентрация, ммоль/л

Мочевина Холестерин Глюкоза

(М±т)

Интактные животные 3,76±0,19 1,03±0,13 7Д8±0,65

Лектин ЛИ 3,46*0,31 1,42±0Д2 9,64±1,08

Плавание 8,74±0,21* 6,54±0,37* 18,22±1,55*

Лектин ЛИ + плавание 7,65±0,30+Ло 6,35±0,31*° 18,24±2Д5*°

Примечание:

* - р < 0,05 относительно значений животных интактной группы; А - р < 0,05 относительно значений группы животных после плавания; ° - р < 0,05 относительно значений животных с инъекцией лектина ЛИ.

Предварительное введение лектина ЛИ вызывало снижение уровня мочевины на 12% у животных после плавания относительно животных контрольной группы, в то время как содержание холестерина в сыворотке крови крыс оставалось повышенным.

Повышенная концентрация холестерина в сыворотке крови крыс может быть следствием увеличения активности синтеза общего холестерина печенью и повышенного расходования его на уплотнение клеточных мембран, проницаемость которых нарушается под действием продуктов перекисного окисления липадов во время стресса. Высокое содержание холестерина в крови также может быть связано с тем, что при стрессе возрастают потребности организма в глюкокортикоидах, которые являются важными, необходимыми для жизни гормонами, принимающими участие в регуляции обмена веществ и адаптации организма при неблагоприятных условиях.

При исследовании концентрации глюкозы в сыворотке крови животных опытной группы с инъекцией лектина ЛИ показано, что количество данного углевода достоверно не отличалось от значений животных интактной группы, что согласуется с литературными данными (Гаврилова, Сметанина, Карпунияа, 2001). Содержание глюкозы у животных группы плавания оказалось в 2,5 раза больше, чем у животных интактной группы (табл. 3). При этом предварительное введение лектина ЛИ не повлияло на концентрацию глюкозы у животных после плавания, которая оставалась повышенной относительно контрольных значений.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что лектин ЛИ способствует повышению выносливости животных в экстремальных условиях, вы-

званных в данном случае стрессом в виде плавания, регулирует метаболические процессы и приводит к норме некоторые важные биохимические параметры в организме крыс. Можно предположить, что бактериальный лектин действует как цитопротектор, стабилизируя и предохраняя мембраны клеток от повреждений при стрессорных воздействиях. Надо отметить, что наши данные согласуются с предыдущими исследованиями (Неверова и др., 2006; 2007), согласно которым лектин ЛИ обладал сходным действием на некоторые биохимические параметры крови животных в условиях других видов стресса (холодовой, этаноловый, иммобилизационный), что говорит о широком спектре действия лектина в различных стресс-условиях.

Изучение влияния лектина ЛИ на микрофлору толстого кишечника крыс в норме и при различных видах стресса

Ранее нами было показано, что интраперитонеальное введение лектина ЛН животным перед иммобилизационпым и этаноловым стрессами способствовало нормализации, а при холодовом - увеличению количества молочнокислых бактерий в кишечнике животных (Неверова и др., 2007). В настоящей работе было исследовано непосредственное действие лектина ЛИ на микрофлору толстого кишечника крыс при ректальном введении препарата.

В ходе проведенных экспериментов было установлено, что количество молочнокислых бактерий (стрептококков и лактобацилл) у животных контрольной группы (ректальное введение 200 мкл стерильной дистиллированной воды за сутки до забора проб) достоверно не отличалось от количества бактерий у животных интактной 1руп-пы и составило 3,15-105 КОЕ/г (табл. 4). Поэтому дальнейшие сравнения производили с показателями животных контрольной группы.

Через сутки после ректального введения крысам 200 мкл лектина ЛИ (в концентрации 4 мкг/мл), количество молочнокислых бактерий в толстом кишечнике достоверно повышалось относительно значений у животных контрольной группы до 4,65-105 КОЕ/г.

В группах животных после холодового и этанолового стресса, через сутки было отмечено уменьшение количества молочнокислых бактерий на 35% и 32% соответственно (табл. 4). Возможно, в данном случае холодовой стресс приводил к замедлению общих процессов метаболизма в организме и к замедлению роста молочнокислых бактерий в толстом кишечнике крыс. Пероральное введение крысам этилового спирта могло привести к частичной стерилизации микрофлоры толстого кишечника, и, в частности, к снижению количества молочнокислых бактерий.

Таблица 4 - Влияние лектина ЛИ и действие различных видов стресса на

молочнокислую МИКрО( шору толстого кишечника крыс

Характер воздействия Количество клеток ■ 1СР КОЕ/г

М±т

Интактная группа 3,90 ±0,21

Контроль 3,15 ±0,40

ЛИ 4,65 ±0,16'°

иммобилизаниогшый стресс 0,60 ±0,20"°

холодовой стресс 2,10 ±0,12'°

этанодовый стресс 2,15 ±0,10"

ЛИ + иммобилизационный стресс 3,60 ± 0,10Л

ЛИ + холодовой стресс 3,00 ±0,12'^

ЛИ + этаноловый стресс 2,70 ± 0,21*л

Примечание:

* - Р< 0,05 относительно интактной группы животных; 0 - Р< 0,05 относительно контрольной группы; А - Р< 0,05 относительно лектина ЛИ.

У крыс после иммобилизационного стресса через сутки также происходило снижение количества молочнокислых бактерий в толстом кишечнике на 80% относительно количества данных бактерий у животных контрольной группы. Наши данные согласуются с литературными, согласно которым различные виды стрессов приводили к уменьшению количества молочнокислой микрофлоры в кишечнике животных (Петровская, 1976;Лизько, 1983; Наумов, 1989).

Предварительное введение лектина ЛИ Р.ро1утуха 1460 в организм животных при всех видах стресса способствовало нормализации количества молочнокислых бактерий до значений у животных контрольной группы.

Также было отмечено, что количество энтеропатогенной кишечной палочки в толстом кишечнике животных контрольной группы достоверно не отличалось от количества данных бактерий у животных интактной группы и составляло 0,80Т05 КОЕ/г (табл. 5).

Ректальное введение животным лектина ЛИ приводило к полному отсутствию роста кишечной палочки. У животных опытной группы после воздействия иммобилизационного стресса отмечалось сокращение количества кишечной палочки на 62%. Однако после холодового и этанолового стрессов, численность кишечной палочки в толстом кишечнике крыс увеличивалась в 2,5 и 2 раза соответственно. Усиление роста кишечной палочки происходило, как можно предположить, за счет подавления данными видами стресса роста некоторых молочнокислых бактерий. Из литературных данных также известно, что при подавлении роста облигатной микрофлоры толстого кишечника происходит усиление роста факультативной микрофлоры (Коршунов и др., 1997). Предварительное введение лектина ЛИ в толстый кишечник крыс

при всех стрессовых воздействиях способствовало нормализации количества кишечной палочки (табл. 5).

Таблица 5 - Влияние лектина ЛИ и действие различных видов стресса на

содержание кишечной палочки в толстом кишечнике крыс

Характер воздействия Количество клеток • 10' КОЕ/г

М±т

Интактная группа 1,05 ±0,20

Контроль 0,80 ±0,21

ЛИ 0'°

иммобилизационный стресс 0,30 ±0,21"°

холодовой стресс 2,10 ±0,14'°

этаноловый стресс 1,80 ±0,12'°

ЛИ + иммобипизационный стресс 0,90 ± 0,10Л

ЛИ + холодовой стресс 0,75 ±0,101

ЛИ + этаноловый стресс 0,75 ± 0,22Л

Примечание:

* - Р< 0,05 относительно ингактной группы животных: ° — Р< 0,05 относительно контрольной группы; л - Р< 0,05 относительно лектина ЛИ.

Введение бактериального лектина ЛИ крысам также повлияло и на содержание стафилококков в толстом кишечнике, количество которых сократилось более чем на 60% относительно показателей у контрольных животных (табл. 6).

Таблица 6 - Влияние лектина ЛИ и действие различных видов стресса на

количество стафилококков в толстом кишечнике крыс

Характер воздействия Количество клеток - 10J КОЕ/т

М±т

Интактная группа 1,50 ±0,24

Контроль 1,20 ± 0,20

ЛИ 0,45 ±0,12'°

иммобшппационный стресс 2,85 ± 0,22'°

холодовой стресс 0,45 ± 0,12'°

этаноловый стресс 0,75 ±0,16'°

ЛИ + иммобилизационный стресс 1,50±0,21л

ЛИ + холодовой стресс 1,20 ± 0,10"4

ЛИ + этаноловый стресс 1,35 ± 0,12л

Примечание:

* - Р< 0,05 относительно интактной группы животных; ° - Р< 0,05 относительно контрольной группы; л - Р< 0,05. относительно лектина ЛИ.

Как видно из данных таблицы, различные виды стресса также по-разному повлияли на количество бактерий. После иммобилизационного стресса количество стафилококков у животных опытной группы было в 2,4 раза больше, чем у животных

контрольной группы. Иммобилизадионный стресс является одним из самых сильных видов стресса для животного. Под его действием, как было показано ранее, происходило подавление роста некоторых молочнокислых бактерий и энтеробактерий. Возможно, за счет этого увеличивался рост условно-патогенной микрофлоры (стафилококков), которая оказалась более устойчивой к данному виду стресса.

Количество стафилококков в толстом кишечнике крыс после холодового и эта-нолового стрессов снизилось относительно контрольных значений на 62% и 37% соответственно. Предварительное введение лектина нормализовало рост стафилококков и их количество было сопоставимо со значениями у животных контрольной группы.

На основании полученных результатов можно говорить о том, что лектин ЛИ Р.ро1утуха 1460 способен стимулировать рост ряда молочнокислых бактерий и подавлять рост энтеропатогенной кишечной палочки и стафилококков в толстом кишечнике экспериментальных животных при негативных воздействиях, вызванных Холодовым, этаноловым и иммобилизационным стрессами. Возможно, в данном случае лектин ЛИ проявил не только бактерицидные, но и тканепротекторные свойства, стимулируя пролиферацию клеток слизистой кишечника и контролируя природу и плот-кость выделяемых поверхностных гликоконъюгатов, которые являются субстратом для молочнокислых бактерий.

Исследование бактерицидных, фунгицндных и ранозаживляющих свойств лектина ЛИ и экзополисахаридных гелей с добавлением лектина

Следующим этапом наших исследований явилось определение бактерицидных, фунгицидных и ранозаживляющих свойств лектина ЛИ и экзополисахаридных гелей с добавлением данного лектина.

Известно о бактерицидных свойствах лектина ЛИ по отношению к некоторым почвенным бактериям (Карпунина и др., 2003). В процессе наших исследований оказалось, что лектин ЛИ обладает бактерицидными и фунгицидиыми свойствами в отношении ряда условно-патогенных бактерий и грибов, которые, как известно из литературных источников (Шляпников, Рыбкин, 1999; Блатун, 2007), наиболее часто встречаются в ранах с первичным загрязнением. Было обнаружено, что лектин ЛИ в концентрациях от 410"4 до 4 мкг/мл подавлял рост всех взятых в опыт тест-культур (бактериальная взвесь 106 кл/мл): Е.соИ 01, Б.аигеив 209-Р, Р.аепфпояа АТСС 27533 и С.а1Ысаю 130 (табл. 7). Мы предположили, что подавление роста микроорганизмов могло осуществляться благодаря связыванию лектина со специфичными рецепторами клеточной стенки. В случае грамположительных бактерий таковыми, возможно, является глюкозамин, входящий в состав пептидогликана, основного компонента клеточной стенки; в случае грамотрицательных бактерий, возможно взаимодействие со спе-

цифичными рецепторами, находящимися непосредственно на внешней мембране бактериальной клетки.

Таблица 7 - Влияние лектина ЛИ на рост некоторых микроорганизмов

Лектин ЛИ, мкг/мл Культуры бактерий

E.coli 01 S.aureus 209-Р P. aeruginosa АТСС 27533 C.albicans 130

4 + + + +

0,4 + + + +

0,04 + + + +

0,004 + + + +

0,0004 + + + +

Примечание: (+) - подавление роста

В результате исследований также было обнаружено, что гели, созданные на основе коммерческого ксантана, а также полимиксана (ПМ) 8 8А, лаксарана Z и ЭПС X.campestris В-610, никак не повлияли на рост и развитие тест-бактерий, а коммерческий ксаптан подавлял рост только С.albicans 130 (табл. 8).

Таблица 8 - Влияние экзополисахаридов на рост некоторых микроорганизмов

Экзополисахарвды Культуры бактерий

E.coli 01 S. aureus 209-Р P.aeruginosa АТСС 27533 C.albicans 130

Ксантан - - - +

Полимиксан 88А - - - -

КМОЭЦ + + + +

ЭПС X.campestris В-610 - - - -

Лаксаран 1596 + + + +

Лаксаран Z - - - -

Лаксаран 1936 + + + +

Примечание: (+) - подавление роста, (-) - отсутствие подавления роста.

Гели, созданные на основе КМОЭЦ, лаксарана 1596 и 1936 подавляли рост всех взятых в опыт культур.

При добавлении в состав гелей лектина ЛИ (4 мкг/мл), бактерицидными и фун-гицидными свойства по отношению к тест-культурам обладали все гели, за исключением гелей, приготовленных на основе ксантана и ЭПС X. сатре$1г13 В-610 (табл. 9).

Таблица 9 - Влияние экзополисахаридных гелей с добавлением лектина J1II на

рост некоторых микроорганизмов

Экзополисахариды + ЛИ Культуры бактерий

E.coli 01 S. aureus 209-Р P.aeruginosa АТСС 27533 С. albicans 130

Ксанган + ЛИ - - - -

Полям иксан 88А + ЛИ + + + +

КМОЭЦ + ЛИ + + + +

ЭПС X.campestris В-610 + ЛИ - - - -

Лаксаран 1596 +ЛИ + + + +

Лаксаран Z + ЛИ + + + +

Лаксаран 1936 + ЛИ + + + +

Примечание: (+) - подавление роста, (-) - отсутствие подавления роста.

Возможно лектин бацилл ЛИ, в случае с гелями, приготовленными на основе ПМ 88А и лаксарала Z, и явился тем компонентом, который определял бактерицидные свойства этих гелей, а в случае же ксантана и ЭПС X.campestris В-610 лектин был заблокирован специфичными к нему углеводами, поскольку, как известно, в состав ксантана наряду с глюкозой и маннозой входит и глюкуроновая кислота (Southwick et al., 1980), являющаяся специфичным углеводом для лектина ЛИ.

В ходе дальнейшего эксперимента были исследованы ранозаживляющие свойства лектина ЛИ и гелей, приготовленных на основе бактериальных ЭПС с добавлением лектина. У животных контрольной группы в течение первых суток после нанесения ран отмечали небольшое увеличение тканевого дефекта, который был наполнен сгустком крови. Вокруг зоны повреждения было выявлено нарушение микроциркуляции (гиперемия и резкий отек) и небольшая воспалительная реакция. На третьи сутки опыта эпидермис по краям раны под струпом начинал загибаться, плотно прилегая к стенке раневого канала. При этом края ранения оставались широкими по сравнению с первым днем эксперимента. К шестым суткам эпидермис не полностью перекрывал раневую щель, заполненную молодой грануляционной тканью, т.е. отмечалось частичное заживление раны с помощью рубца. По истечении семи дней эксперимента рубец на кожи животных был четко виден.

При нанесении на поверхность ранения животных геля с добавлением лаксарана 1936 процесс заживления ранения заметно не ускорялся. При добавлении в гель данного ЭПС лектина ЛИ, образование корочки и в дальнейшем рубца происходило быстрее (на сутки). Сходные результаты были отмечены нами и в отношении гелей (с добавлением лектина ЛИ), приготовленных на основе лаксарана Z, лаксарана 1596 и ПМ 88А. При этом во многих случаях рубец становился незаметным уже на 6 сутки эксперимента. При добавлении лектина в состав гелей, приготовленных на основе

ЭПС X.campestris В-610, коммерческих экзополисахаридов КМОЭЦ и ксантана, процесс заживления ранений ускорялся незначительно относительно контроля и гелей без лектина JIII. Анализ и обобщение представленных результатов позволяют считать, что добавление лектина ЛИ в состав гелей на основе лаксарана 1936, лаксарана Z, лаксарана 1596 и ПМ 88А стимулирует и ускоряет процесс регенерации эпителия крыс. Возможно, это объясняется тем, что лектин обладает высокой бактерицидной и фунгицидной активностью относительно ряда микроорганизмов, которые могут присутствовать в загрязненных ранениях.

Таким образом, в результате проведенных экспериментов были получены новые данные о биологической активности лектина ЛИ P.polymyxa 1460 in vitro и in vivo, которые открывают перспективы возможного применения этого биологически активного вещества в медико-биологических исследованиях и ветеринарной практике.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что лектин ЛИ P.polymyxa 1460 не является токсичным в концентрациях от 4-Ю"4 - до 4 мкг/мл по данным исследований на инфузориях C.síeinii и белых лабораторных мышах. Лектин бацилл ЛИ не оказывает негативного влияния на морфо-функциональное состояние внутренних органов мышей, стимулируя работу некоторых из них.

2. Обнаружено, что лектин ЛИ при предварительном интраперитонеальном введении в дозе 2 мкг/животное способен регулировать метаболизм животных в условиях патологических нарушений в организме, вызванных стрессированием плаванием, приводя активность глутатион-8-трансферазы, аланинаминотрансферазы к норме и достоверно снижая активность аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови крыс при стрессировании плаванием; лектин ЛИ повышает выносливость животных при стрессе, увеличивая время принудительного плавания в два раза.

3. Показано, что введение лектина ЛИ P.polymyxa 1460 в дозе 2 мкг/животное снижает повышенное содержание мочевины, но не влияет на концентрацию холестерина и глюкозы в сыворотке крови экспериментальных животных при стрессировании плаванием.

4. Выявлено влияние лектина ЛИ P.polymyxa 1460 на микрофлору толстого кишечника белых крыс в норме и при стрессах (иммобилизационный, холодовой и эта-ноловый). Обнаружено положительное влияние лектина на рост некоторых представителей молочнокислой микрофлоры и на снижение присутствия энтеропатогенной кишечной палочки и стафилококков в толстом кишечнике.

5. Показано, что лектин ЛИ в различных концентрациях и в составе полисаха-рндных гелей в концентрации 4 мкг/мл проявляет бактерицидные и фунгицидные

свойства по отношению к некоторым микроорганизмам in vitro, а также способствует ускорению заживления резаных ранений экспериментальных животных.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Кикалова, Т.П. Исследование влияния лектина бацилл на некоторые органы мышей / Т.П. Кикалова, H.H. Неверова, Г.П. Демкин, Л.В. Карпунина // Вавиловские чтения - 2007: Мат. конф., посвящ. 120-й годовщине со дня рождения академика Н.И. Вавилова, 26-30 ноября, 2007. - Саратов, 2007. - С. 305.

2. Кикалова, Т.П. Лектин бацилл и его действие в условиях стресса / Т.П. Кикалова, H.H. Неверова, М.Д. Сметанина, Л.В. Карпунина // Стратегия взаимодействия микроорганизмов и растений с окружающей средой: IV-я Межрегиональная конференция молодых ученых, 14-16 октября 2008. - Саратов, 2008. - С. 68.

3. Кикалова, Т.П. Влияние лектина бацилл на белковый и липидный обмен у самцов крыс при стрессе / Т.П. Кикалова, М.Д. Сметанина, Л.В. Карпунина // Фундаментальные исследования. - 2008. - № 11. - С. 63-64.

4. Кикалова, Т.П. Изучение бактерицидных свойств экзополисахаридных гелей с добавлением лектина бацилл / Т.П. Кикалова, Е.В. Полукаров, Л.В. Карпунина // Фундаментальные исследования. - 2008. — № 12. - С. 41-42.

5. Кикалова, Т.П. Влияние лектина Paenibacillus polymyxa на морфо-функцио-нальное состояние органов животных / Т.П. Кикалова, H.H. Неверова, Г.П. Демкин, Л.В. Карпунина // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. -2009,-№2.-С. 18-22.

6. Кикалова, Т.П. Биопроба лектина бацилл на мышах и инфузориях Colpoda / Т.П. Кикалова, Л.В. Карпунина//Успехи современного естествознания. -2009. 4. -С. 57

7. Кикалова, Т.П. Биологическая активность лектина бацилл в составе экзополисахаридных гелей / Т.П. Кикалова, Л.В. Карпунина // Фундаментальные исследования. - 2009. -№ 7. - С. 14.

8. Кикалова, Т.П. Влияние лектина бацилл на рост микрофлоры толстого кишечника / Т.П. Кикалова, М.Д. Сметанина, Л.В. Карпунина // Успехи современного естествознания. - 2009. - Хв 8. - С. 99-100.

9. Кикалова, Т.П. Биологическая активность и возможное применение лектина бацилл в ветеринарии / Т.П. Кикалова, М.Д. Сметанина, Л.В. Карпунина // Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехнологии и селекции животных. Современные технологии переработки сельскохозяйственной продукции: Сб. матер, всерос. науч.-практ. конф. 2-6 февраля 2009 года, посвящ. 90-легию факультета (института) ветеринарной медицины. - Саратов, 2009. - С. 50-54.

Считаем необходимым выразить глубокую благодарность кандидату биологических наук, доценту Сметаниной Марии Даниловне и доктору биологических наук, профессору Анищенко Татьяне Григорьевне за консультации и большую помощь в экспериментах с животными.

Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Подписано в печать 20.10.2009

Гарнитура Times. Печать Riso. _Усл. печ-л. 1,00. Тираж 100 экз. Заказ 0298_

Отечатано с готового ориптал-макега в типографии ИП <Окспресс тиражирование» 410005, Саратов, Пугачёвская, 161, офис 320 S 27-26-93

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кикалова, Татьяна Петровна

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. Обзор литературы.

1.1. Лектины - белки неиммуноглобулиновой природы.

1.2. Биологическая активность лектинов.

1.3. Использование лектинов.

2. Экспериментальная часть.

2.1. Объект и методы исследований.

2.1. 1. Объект исследований.

2.1. 2. Выделение и очистка лектина ЛИ P.polymyxa 1460.

2.1. 3. Исследование возможной токсичности лектина ЛИ P.polymyxa 1460 на биотест-объекте Colpoda steinii.

2.1. 4. Исследование гистологического и морфо-функционального состояния органов животных.

2.1. 5. Воспроизведение экспериментального стресса.

2.1. 6. Определение активности глутатион-Б-трансферазы.

2.1. 7. Определение активности аминотрансфераз.

2.1. 8. Определение концентрации мочевины в сыворотке крови.

2.1. 9. Определение концентрации холестерина в сыворотке крови

2.1.10. Определение концентрации церулоплазмина в сыворотке крови.

2.1.11. Определение концентрации глюкозы в крови.

2.1.12. Определение микрофлоры толстого кишечника животных.

2.1.13. Определение бактерицидных и фунгицидных свойств лектина бацилл и экзополисахаридных гелей с добавлением лектина in vitro.

2.1.14. Определение ранозаживляющих свойств лектина бацилл и экзополисахаридных гелей с добавлением лектина.

2.1.15. Статистическая обработка.

2.2. Результаты исследований и их обсуждение.

2.2.1. Оценка токсичности лектина бацилл на биотест-объекте Colpoda steinii.

2.2.2. Влияние лектина ЛИ P.polymyxa на морфо-функциональное состояние органов мышей.

2.2.3. Изучение влияния лектина бацилл ЛИ на некоторые биохимические параметры крови самцов крыс при стрессировании плаванием.

2.2.4. Изучение влияния лектина ЛИ на микрофлору толстого кишечника крыс в норме и при различных видах стресса.

2.2.5. Исследование бактерицидных, фунгицидных и ранозажив-ляющих свойств лектина ЛИ P.polymyxa 1460 и экзополисахаридных гелей с добавлением лектина.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологическая активность лектина Paenibacillus Polymyxa in vitro и в организме животных"

Лектины представляют собой углеводсвязывающие белки, способные участвовать во многих внутриклеточных метаболических процессах растений, животных, микроорганизмов. Ни один биологический процесс в клетке не может обойтись без механизмов «персональной идентификации» молекул. Центральные, ключевые процессы, такие как репликация, транскрипция, трансляция, тоже целиком основаны на взаимном узнавании молекул и молекулярных комплексов. Несмотря на эту всепроникающую и всеобъемлющую значимость процессов молекулярного «узнавания», многие его аспекты по-прежнему остаются неясными, гипотетическими. Это относится и к работе огромного класса белковых молекул, способных обратимо и избирательно связывать разнообразные углеводы (Шакирова, Безрукова, 2007), которые называют лектинами.

Наименее изученными среди лектинов различного происхождения являются лектины бактерий. К настоящему времени известно достаточно микроорганизмов, способных синтезировать лектины разнообразной углеводной специфичности (Uhlenbruck, 1987; Лахтин, 1986; Карпунина, Никитина, Три-хачева, 1989; Никитина, Итальянская, Карпунина 1989; Коваленко, 1990; Карпунина, 2002; Sharon, 2007 и др.). Среди бактериальных лектинов наиболее хорошо исследована биологическая активность лектинов патогенных бактерий (Pathogenesis of., 1986; Pseudomonas aeruginosa., 1997; Лектин вакцинного., 2003). Несмотря на имеющиеся публикации в отношении лектинов непатогенных бактерий (Влияние лектина., 2002; Абросимова, 2002; Мухачева, 2004; Изменение активности., 2006; Горельникова, 2006; Влияние лектина., 2007), их биологическая активность и роль в живых организмах не является до конца изученной.

Для возможности практического применения лектинов непатогенных бактерий в качестве диагностических или лечебных препаратов в медико-биологических исследованиях и ветеринарии, необходимы более глубокие знания об их биологической активности и влиянии на живой организм. Поэтому исследования в этой области являются актуальными и имеют научное и практическое значение.

Цель работы состояла в изучении биологической активности лектина JTII Paenibacillus polymyxa 1460 in vitro и в организме животных: его влияния на некоторые показатели метаболизма и кишечную микрофлору животных в норме и в условиях стресса; оценке токсических, бактерицидных, фунгицид-ных и ранозаживляющих свойств.

Задачи исследования:

1. Исследовать токсичность лектина Jill P.polymyxa 1460 на биотест-объекте Colpoda steinii.

2. Оценить влияние лектина JTII P.polymyxa 1460 на морфо-функциональное состояние органов лабораторных белых мышей.

3. Определить воздействие лектина Ш1 P.polymyxa 1460 in vivo на активность глутатион-Б-трансферазы, аланин- и аспартатаминотрансферазы, на концентрацию церулоплазмина в эритроцитах и сыворотке крови крыс в норме и в условиях принудительного неизбегаемого плавания.

4. Изучить воздействие лектина Ш1 Р.polymyxa 1460 in vivo на некоторые показатели азотистого, липидного (концентрацию мочевины и холестерина) и углеводного (концентрацию глюкозы) обменов у крыс в норме и в условиях принудительного неизбегаемого плавания.

5. Выявить влияние лектина JTII P.polymyxa 1460 на микрофлору толстого кишечника крыс в норме и при различных видах стресса (иммобилиза-ционный, холодовой и этаноловый).

6. Исследовать бактерицидные, фунгицидные и ранозаживляющие свойства лектина JTII P.polymyxa 1460.

Научная новизна

Получены новые данные, характеризующие биологическую активность лектина JIII P.polymyxa 1460 in vitro и in vivo. Изучено его влияние на метаболические процессы и кишечную микрофлору в организме животных в норме и в условиях стресса. Впервые показано, что предварительное введение лектина в организм экспериментальных животных в условиях принудительного плавания как стресс-фактора, увеличивает их выносливость в два раза. Установлено, что лектин JIII в условиях патологических нарушений в организме, вызванных стрессированием плаванием, нормализует активность глутатион-8-трансферазы и аланинаминотрансферазы, снижает активность аспартатаминотрансферазы и содержание мочевины в сыворотке крови крыс. Выявлено, что лектин JIII P.polymyxa 1460 способен стимулировать рост некоторых молочнокислых бактерий и подавлять рост энтеропатогенной кишечной палочки и стафилококков в толстом кишечнике при холодовом, эта-ноловом и иммобилизационном стрессах.

Впервые проведена оценка токсических, бактерицидных, фунгицидных и ранозаживляющих свойств лектина JIII P.polymyxa 1460. На биотест-объектах С. steinii и лабораторных белых мышах показано отсутствие его токсичности в концентрациях от 4-10"4 до 4 мкг/мл. В условиях in vitro исследованы бактерицидные свойства лектина JIII в тех же концентрациях в отношении Escherichia coli 01, Staphylococcus aureus 209-P, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27533 и фунгицидные в отношении Candida albicans 130. Установлена способность лектина бацилл и экзополисахаридных гелей с его добавлением влиять на заживление ранений резаного типа у крыс.

Практическая значимость

Выявленные свойства лектина ЛИ активизировать некоторые процессы метаболизма, способствуя тем самым устойчивости животных к стрессовым воздействиям, проявлять бактерицидные, фунгицидные, ранозаживляющие и тканепротекторные свойства, открывают перспективы возможного применения данного биологически активного вещества в медико-биологических исследованиях и ветеринарной практике.

По материалам диссертационной работы опубликованы методические рекомендации «Изучение влияния лектина бацилл на активность глутатион-S-трансферазы эритроцитов крови крыс при стрессе» (в соавторстве с H.H. Неверовой, JI.B. Карпуниной и М.Д. Сметаниной, 2008) для практических занятий студентов старших курсов, а также для работы аспирантов и научных работников, специализирующихся в области микробиологии, биохимии, физиологии человека и животных, рекомендованные Учебно-методической комиссией и одобренные Ученым советом ветеринарного факультета Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова (протокол № 42 от 3 апреля 2008 г.). Результаты диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций по микробиологии и написании дипломных работ в Саратовском государственном университете им. Н.Г. Чернышевского и в Саратовском государственном аграрном университете им. Н.И. Вавилова.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Лектин Ш1 P.polymyxa 1460 не является токсичным, не изменяет активность, характер передвижения инфузорий и их внешний вид в концентрациях 4-10"4, 4-10"3, 4-10"2, 4-10"1 мкг/мл, а в концентрации 4 мкг/мл увеличивает двигательную активность C.steinii, не влияя на другие показатели.

2. Введение лектина бацилл JIII в дозе 0,2 мкг/животное не оказывает негативного влияния на морфо-функциональное состояние органов лабораторных белых мышей, активирует функции гепатоцитов и тканей головного мозга, стимулирует сперматогенез у самцов по результатам гистологических исследований.

3. Лектин ЛП P.polymyxa 1460 регулирует метаболические процессы в организме экспериментальных животных, нормализуя активность глутатион-S-трансферазы и аланинаминотрансферазы, понижая активность аспартатаминотрансферазы и содержание мочевины в сыворотке крови в условиях патологических нарушений в организме, вызванных стрессированием плаванием.

4. Лектин Ш1 P.polymyxa 1460 стимулирует рост некоторых молочнокислых бактерий и подавляет рост энтеропатогенной кишечной палочки и стафилококков в толстом кишечнике в условиях холодового, этанолового и иммобилизационного стрессов.

5. Лектин Ш1 в различных концентрациях, в том числе и в чрезвычайно низких (4-10"4 мкг/мл), способен проявлять in vitro бактерицидные и фун-гицидные свойства в отношении E.coli 01, S. aureus 209-Р, P.aeruginosa АТСС 27533 и С.albicans 130.

6. Лектин Ш1 в составе некоторых экзополисахаридных гелей в концентрации 4 мкг/мл способствует бол ее, быстрому заживлению ранений резаного типа у экспериментальных животных.

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова» в рамках научно-исследовательской темы: «Изучение биологически активных веществ (лектинов) в регуляции метаболизма растений и животных» и при частичной поддержке грантом CRDF (CR-006-xl).

Апробация работы

Материалы диссертации были представлены на: III Международной школе-конференции «Актуальные аспекты микробиологии» (Москва, 2007); региональных конференциях молодых ученых «Вавиловские чтения —2007, 2008» (Саратов, 2007; 2008); всероссийской научно-практической конференции, посвященной 90-летию факультета (института) ветеринарной медицины (Саратов, 2009); VI межрегиональной конференции молодых ученых «Стратегия взаимодействия микроорганизмов и растений с окружающей средой» (Саратов, ИБФРМРАН, 2008).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 9 работ, из них 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК РФ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, двух глав: обзора литературы и экспериментальной части, включающей объект и методы исследований, результаты исследований и их обсуждение, а также заключения, выводов и списка использованных литературных источников. Работа изложена на 143 страницах, содержит 18 таблиц и 6 рисунков. Список использованных литературных источников включает 329 наименований, в том числе 211 зарубежных.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Кикалова, Татьяна Петровна

108 ВЫВОДЫ

1. Установлено, что лектин ЛИ P.polymyxa 1460 не является токсичным в концентрациях от 4-10"4 - до 4 мкг/мл по данным исследований на инфузориях C.steinii и белых лабораторных мышах. Лектин бацилл ЛИ не оказывает негативного влияния на морфо-функциональное состояние внутренних органов мышей, стимулируя работу некоторых из них.

2. Обнаружено, что лектин ЛИ при предварительном интраперитоне-альном введении в дозе 2 мкг/животное способен регулировать метаболизм животных в условиях патологических нарушений в организме, вызванных стрессированием плаванием, приводя активность глутатион-Б-трансферазы, аланинаминотрансферазы к норме и достоверно снижая активность аспарта-таминотрансферазы в сыворотке крови крыс при стрессировании плаванием; лектин ЛИ повышает выносливость животных при стрессе, увеличивая время принудительного плавания в два раза.

3. Показано, что введение лектина ЛИ P.polymyxa 1460 в дозе 2 мкг/животное снижает повышенное содержание мочевины, но не влияет на концентрацию холестерина и глюкозы в сыворотке крови экспериментальных животных при стрессировании плаванием.

4. Выявлено влияние лектина ЛИ P.polymyxa 1460 на микрофлору толстого кишечника белых крыс в норме и при стрессах (иммобилизационный, холодовой и этаноловый). Обнаружено положительное влияние лектина на рост некоторых представителей молочнокислой микрофлоры и на снижение присутствия энтеропатогенной кишечной палочки и стафилококков в толстом кишечнике.

5. Показано, что лектин ЛИ в различных концентрациях и в составе по-лисахаридных гелей в концентрации 4 мкг/мл проявляет бактерицидные и фунгицидные свойства по отношению к некоторым микроорганизмам in vitro, а также способствует ускорению заживления резаных ранений экспериментальных животных.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Углеводсвязывающие белки - лектины - широко распространены в природе и обнаруживаются на всех уровнях жизни — от вирусов до млекопитающих, что говорит о важности их функций. Лектины принимают участие в таких биологически важных процессах, как оплодотворение, проникновение инфекции в клетки хозяина, миграция лейкоцитов к месту воспаления, а также в экзо- и эндогенной регуляции различных сторон клеточного метаболизма. Благодаря способности распознавать углеводные структуры на поверхности клеток, а также влиять на клеточные процессы, лектины нашли широкое применение в экспериментальной биологии и медицине. В настоящее время в основном лектины растительного происхождения используются как противовирусные препараты, для определения групп крови, очистки биологических жидкостей и выделения определенного типа клеток, в частности, незрелых форм лимфоцитов при пересадке костного мозга и т.д. Несмотря на то, что лектины микробного происхождения имеют ряд преимуществ перед животными и растительными лектинами в силу их высокой активности и малой токсичности, они остаются наименее изученной группой биологически активных веществ. Поэтому все большее внимание многочисленные исследователи уделяют изучению биологической активности лектинов, выделенных из непатогенных бактерий. В этой связи целью работы было изучить биологическую активность белка - лектина ЛИ P.polymyxa 1460, специфичного к D-галактозамину, глю-куроновой кислоте, фруктозо-1,6-дифосфату и D-глюкозамину, in vitro и в организме животных. Более ранними работами было показано, что лектин ЛИ P.polymyxa 1460 оказывает влияние на метаболизм животного организма, повышая интенсивность углеводного и белкового и регулируя азотистый обмен в организме крыс, тем самым мобилизуя метаболизм и способствуя быстрой адаптации организма к различным неблагоприятным воздействиям; приводит к нормализации содержание в плазме крови ряда белков у животных с медикаментозным гипотиреозом, вызывает увеличение активности кислых гидролаз (кислой фосфатазы и катепсинов) печени и повышает интенсивность белкового катаболизма, оказывает стимулирующее воздействие на активность адгезии бактерий при фагоцитарном процессе.

Таким образом, проведенные ранее исследования позволяют говорить о значительном влиянии бациллярного лектина на метаболизм животного организма, и каждое по-своему расширяют наши представления о биологической активности экзогенных лектинов. Однако ни в одних из исследований не затронут важный вопрос о степени и возможной токсичности лектина ЛИ Р.ро1утуха 1460. Поэтому первоначальным этапом наших исследований явилось изучение возможной степени токсичности бактериального лектина на биотест-объекте Со1рос1а Б1етп. В аналитическом аспекте инфузории интересны тем, что могут рассматриваться как простые рецепторно-эффекторные системы, обладающие способностью реагировать на химическое воздействие целым комплексом биологических, физиологических и биохимических изменений. Подвижность инфузорий является весьма чувствительным параметром к действию как физических (электрических и магнитных полей), так и химических факторов среды обитания. Нами было обнаружено, что лектин ЛИ в концентрациях от до 4"1 мкг/мл не оказывал негативного влияния на подвижность и морфологические признаки тест-обекта. При добавлении в опытные пробы лектина ЛИ в концентрации 4 мкг/мл, активность передвижения инфузорий кратковременно увеличивалась, постепенно приходя к норме. При этом, характер передвижения и внешние морфологические признаки инфузорий в опытных группах не изменялись. Таким образом, можно говорить об отсутствии токсичности лектина в концентрациях от 4"4 до 4 мкг/мл.

Для подтверждения полученных результатов, исследования проводили и на других тест-объектах - здоровых самцах белых беспородных мышей со средней массой 21 г. Лектин ЛИ в дозе 0,2 мкг/животное вводили интрапери-тонеально. При проведении детального гистологического анализа наиболее важных органов мышей, было показано, что лектин бацилл ЛИ не только не оказал негативного влияния, но ц стимулировал работу некоторых из них.

Дальнейшие исследования были связаны с выяснением возможных изменений ряда биохимических параметров крови при введении лектина в ор ганизм животных в норме и в условиях стресса. В качестве стресс-процедуры было выбрано принудительное неизбегаемое плавание («forced swimming») в воде при температуре 25°С. Этот вид стресса является одним из наиболее сильных, поскольку в процессе опыта животное доходит до пределов своих возможностей. Было показано, что лектин ЛИ повышает выносливость животных при стрессе, увеличивая время принудительного плавания в два раза. Также оказалось, что бактериальный лектин при предварительном интрапе-ритонеальном введении способен регулировать метаболизм животных, повышая активность GST эритроцитов крови животных, понижая активность АЛТ, ACT и нормализуя содержание мочевины в сыворотке крови при данном виде стресса.

Далее нами было исследовано влияние лектина ЛИ на микрофлору толстого кишечника крыс в норме и при стрессах. При воздействии стрессоров на организм животных было отмечено снижение количества молочнокислых бактерий и возрастание в некоторых случаях количества энтеропатогенной кишечной палочки и стафилококков в толстом кишечнике экспериментальных животных. Предварительное введение лектина способствовало нормализации количества молочнокислых бактерий и сокращению* условно-патогенной микрофлоры. На основании полученных данных можно говорить о том, что лектин ЛИ P.polymyxa 1460 выступал в данном случае в роли регулятора микрофлоры кишечника крыс в условиях негативного воздействия стрессовых факторов на организм животных.

Следующим этапом наших исследований стало выявление бактерицидных и ранозаживляющих свойств лектина ЛИ. В последние годы применение находят пленочные и гелевые раневые покрытия на основе полисахаридов с добавлением биологически активных веществ. В качестве основы гелей нами были взяты экзополисахариды некоторых молочнокислых бактерий и коммерческие полисахариды. Было показано, что лектин сам по себе и в составе экзополисахаридных гелей обладает бактерицидными и функицидными свойствами в различных концентрациях по отношению к некоторым условно-патогенным микроорганизмам. Однако в одних случаях лектин привносил бактерицидные и фунгицидные свойства гелям на основе ЭПС, а в других случаях при добавлении данного белка в состав гелей, лектин не проявлял бактерицидных и фунгицидных свойств, видимо связываясь со специфическими углеводами и теряя свою активность.

При исследовании ранозаживляющих свойств лектина ЛИ и экзополи-сахаридных гелей было показано, что добавление в состав гелей лектина ЛИ бацилл практически во всех случаях значительно ускоряло процесс заживления ранений животных. Образование корочки и ее отпадение у животных опытной группы происходило быстрее, чем у контрольных животных, а в некоторых случаях через семь дней рубец полностью исчезал. Возможно, это связано с тем, что лектин обладает высокой бактерицидной активностью относительно ряда условно-патогенных микроорганизмов, которые в том числе присутствуют в загрязненных ранениях.

В ходе наших исследований были получены новые данные о биологической активности лектина ЛИ P.polymyxa 1460 in vitro и in vivo, которые открывают перспективы возможного применения этого биологически активного вещества в медико-биологических исследованиях и ветеринарной практике. Было показано, что лектин ЛИ проявил себя как вещество с высокой биологической активностью, с широким спектром бактерицидных свойств и как возможный тканевой протектор. Из литературных источников также известно об использовании растительных лектинов в качестве тканевых протекторов в медицине и ветеринарии. Однако тот факт, что большинство растительных лектинов в высоких концентрациях являются токсичными для человека и животных, ставит перед исследователями вопрос о применении бактериальных лектинов ввиду их высокой активности в низких концентрациях. Поэтому дальнейшие исследования бактериальных лектинов и их применения будут иметь важное научное и практическое значение в медико-биологических исследованиях и ветеринарии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кикалова, Татьяна Петровна, Саратов

1. Абаев, Ю.К. Справочник хирурга. Раны и раневая инфекция / Ю.К. Абаев. Ростов-на-Дону : Феникс, 2006 - 427 с.

2. Аленькина, С.А. Влияние лектина Azospirillum brasilence Sp7 на активность гетерогенной ß-галактозидазы / С.А. Аленькина, В.Е. Никитина // Сборник статей 2-го Биохимического съезда, Москва, 19-23 мая, 1997. Москва, 1997.-С. 166.

3. Альциванович, К.К. О питании при занятии спортом. 1000 + 1 совет / К.К. Альциванович. Минск : Современный литератор, 2001. - 287с.

4. Аничков, H.H. Морфология заживления ран 7 H.H. Аничков, К.Г. Волкова, В.Г. Гаршин. -М. : АМН СССР, 1951.-127 с.

5. Анищенко, Т.Г. Половые аспекты проблемы стресса и адаптации /Т.Г. Анищенко // Успехи современной биологии. -1991.-Т. 111, вып. 3. -С. 460-475.

6. Бабаянц, P.C. Противовоспалительные мази в дерматологической практике/ P.C. Бабаянц, A.B. Константинов // Медицина. 1974. - № 6. - С. 19-23.

7. Бабоша, A.B. Лектины и проблема распознавания фитопатогенов растением-хозяином / A.B. Бабоша // Журнал общей биологии. — 2008. — Т. 69, № 5. С. 379-396.

8. Бактерицидные свойства лектинов азотфиксирующих бацилл / Л.В. Карпунина и др. // Микробиология. 2003. - Т. 72, № 3. - С. 343-347.

9. Биоритмологический подход к оценке принудительного плавания как экспериментальной модели «депрессивного» состояния / Е.В. Щетинини др. // Журн. высшей нервной деятельности. 1989. - Т. 39, № 5. - С. 958964.

10. Бифидофлора у человека в экстремальных условиях и пути ее коррекции / H.H. Лизько и др. // Бифидобактерии и их использование в клинике, медицинской промышленности и сельском хозяйстве : сб. тр. / МНИИ-ЭМ им. Г.Н. Габричевского. 1986. - С. 20-25.

11. Блатун, Л.А. Местное медикаментозное лечение ран. Проблемы и новые возможности их решения / Л.А. Блатун // Хирургия. 2007. - Т. 9, № 1.-С. 119-25.

12. Бобылев, Р.В. Технология лекарственных форм / Р.В. Бобылев // Медицина. 1989. - С. 28-33.

13. Бондаренко, В.М. Новые подходы к моделированию, диагностике и лечению дисбактериозов кишечника / В.М. Бондаренко, Е.М. Горская // Медицинские аспекты микробной экологии. 1992. - № 6. - С. 23-26.

14. Брайловская, Т.В. Патологическая анатомия резаной и огнестрельной раны приротовой области свиней в эксперименте / Т.В. Брайловская // Стоматология. 2009. - № 3. - С. 23-27.

15. Бухарова, E.H. Экзополисахарид Paenibacillus polymyxa 88-А: получение, характеристика и перспективы использования в хлебопекарной промышленности : дис.канд. биол. наук / E.H. Бухарова. Саратов, 2004. -189 с.

16. Васильев, В.Б. Спектральные исследования активного центра це-рулоплазмина при удалении и возвращении в него ионов меди / В.Б. Васильев, А.М. Качурин, Д.Ж. Рокко //Биохимия. 1996. - Т. 61, № 2. - С. 296-307.

17. Взаимодействие агглютинина Rhizobium leguminosarum 252 с ау-то- и растительными рецепторами / Л.В. Карпунина и др. // Микробиол. журнал. 1995. - Т. 57, № 1. - С. 64-70.

18. Взаимодействие фукозоспецифичного лектина с компонентами плазмы крови / В.Е. Никитина и др. // Гомеостаз и инфекционный процесс : материалы второй всерос. конф., Саратов. 1998. - С. 52.

19. Виноходов, Д.О. Токсикологические исследования кормов с использованием инфузорий / Д.О. Виноходов. СПб., 1995. — 80с.

20. Виноходов, Д.О. Методологические особенности токсикологических тестов с инфузориями / Д.О. Виноходов, A.B. Пожаров // Известия СПбГЭ-ТУ «ЛЭТИ». Серия «Биотехнические системы в медицине и экологии». 2006. - №. 3. - С. 60-67.

21. Влияние внутреннего лазерного облучения крови на общую активность церулоплазина у больных хроническими дисфузными заболеваниями печени / Д.Н. Емельянов и др. // Гепатология. 2004. - № 3. - С. 37-39.

22. Влияние иммобилизационного и ультразвукового стрессов на некоторые иммунологические показатели белых мышей / В.Г. Подсеваткин и др. // Тр. Мордовской республиканской клинической психиатрической больницы. Саранск, 2001. - Т. 20, Вып. 2. - С. 75-78.

23. Влияние лектина на активность глутатион-8-трансферазы эритроцитов крови самцов крыс в условиях этанолового стресса / H.H. Неверова и др. // Современные наукоемкие технологии. 2007. - № 5. - С. 73.

24. Влияние лектина Paenibacillus polymyxa 1460 на молочнокислую микрофлору кишечника крыс под действием стрессовых факторов / H.H. Неверова и др. // Вавиловские чтения 2007 : материалы конференции, 26-30 ноября, 2007. - Саратов, 2007. - С. 329.

25. Влияние лектина Paenibacillus polymyxa на активность глутатион-S-трансферазы в крови крыс при стрессе / H.H. Неверова и др. // Вестник Оренбургского государственного университета. 2008. - № 80. - С. 117-120.

26. Воробьева, A.A. Церулоплазмин сыворотки крови у больных язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки в период обострения иремиссии / A.A. Воробьева, A.B. Курочкин // Фундаментальные исследования. 2006. - № 9. - С. 98-99.

27. Галаев, И.Ю. Термоактивные гидрогели в биотехнологии и медицине / И.Ю. Галаев // Биохимия. 1994. - № 18. - С. 20-26.

28. Горельникова, Е.А. Влияние лектина бацилл на цитокиновую активность фагоцитов : дис.канд. биол. наук / Е.А. Горельникова. Саратов, 2006.- 123с.

29. Горская, Е.М. Изменение кишечной микроэкологии при воздействии голодания / Е.М. Горская, A.A. Наумов, H.H. Лизько // Антибиотики и колонизационная резистентность : сб. тр. ВНИИ антибиотиков. — М., 1990. — Вып. 19. С. 112-117.

30. Губайдуллин, И.И. Гибридные лектины с измененными углево-дсвязывающими свойствами и их влияние на бобово-ризобиальный симбиоз : автореф. дисс. . канд. биол. наук / И.И. Губайдуллин. Уфа : ГОУ ВПО Башгосмедуниверситет РОСЗДРАВА, 2005. - 23 с.

31. Гурин, В.Н. Центральные механизмы терморегуляции / В.Н. Турин. М. : Наука, 1980. - 254 с.

32. Дятлова, К.Д. Микробные препараты в растениеводстве / К.Д. Дятлова // Соросовский Образовательный журнал. 2001. - № 5. - С. 17-22.

33. Зайцев Т.Н. Математический анализ биологических данных / Т.Н. Зайцев. М.: Наука, 1991. - 268с.

34. Зайцева, Л.Г. Функциональная активность макрофагов при экспериментальных дисбактериозах кишечника крыс / Л.Г. Зайцева, Е.И. Васильева, Е.М. Горская//ЖМЭИ. 1991. -№ 8. - С. 68-71.

35. Изменение молочнокислой микрофлоры кишечника под действием лектина бацилл в условиях стресса / H.H. Неверова и др. // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. — 2007. № 5. - С. 20-22.

36. Изучение активности глутатион-8-трансферазы в крови у крыс при стрессе на фоне введения лектина Paenibacillus polymyxa 1460 / H.H. Неверова и др. // Вавиловские чтения-2005 : материалы конференции. — Саратов, 2005. С. 76-78.

37. Изучение влияния кисломолочного бифидумбактерина на микрофлору кишечника у летчиков-испытателей / Л.И: Кафарская и др. // ЖМЭИ. -1992.-№4.-С. 12-14.

38. Иммуномодулирующие свойства лектина Azospirillum brasilense Sp 7/Е.Г. Пономарева и др. //Микробиология.- 1997.-Т. 1, № 4-С 83-86.

39. Карпунина, Л.В. Нитрогеназная активность иммобилизованных клеток Bacillus polymyxa / Л.В. Карпунина, В.Е. Никитина, Г.И. Стадник // Биотехнология. 1986. - № 2. - С. 97-101.

40. Карпунина, Л.В. Лектины почвенных бактерий рода Bacillus / Л.В. Карпунина, В.Е. Никитина, У.Ю. Трихачева // Регуляция микробного метаболизма : тез. докл. Всесоюзной конф., Пущино, 1989. -Пущино, 1989. -С. 26-27.

41. Карпунина, Л.В. Изучение влияния агглютининов Rhizobium leguminosarum 252 на активность некоторых ферментов растительной клетки / Л.В. Карпунина, Е.Ф. Соболева // Микробиология. 2001. - Т. 70, № 3. - С. 348-351.

42. Карпунина, Л.В. Роль агглютинирующих белков азотфиксирую-щих бацилл и ризобий в жизнедеятельности бактерий и при взаимодействиис растениями : дис.док. биол. наук / JI.B. Карпунина. Саратов, 2002. -315с.

43. Коваленко, Э.А. Внеклеточные лектин бактерий / Э.А. Коваленко // Микробиол. журнал. 1990. - Т. 52, № 3. - С. 240-241.

44. Коваленко, Э.А. Углеводная специфичность внеклеточных, лек-тинов бактерий рода Bacillus / Э.А. Коваленко // Микробиол. журнал. 1997. - Т. 39, № 5. — С.7-36.

45. Кокс, Т. Стресс / Т. Кокс. М. : Медицина, 1981. - 216 с.

46. Корсун, В.Ф. Фитолектины и вирусная инфекция : метод, пособие / В.Ф. Корсун, Е.В. Корсун. М. : Рос. ун-т дружбы народов, 2003. - 12 с.

47. Косенко, Л.В. Влияние лектина гороха на рост Rhizobium leguminosarum / Л.В. Косенко, В.Н. Рангелова, А.Ф. Антипчук // Микробиол. журнал.-1993.-Т. 55, № 1.-С. 65-70.

48. Костенко, Т.С. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии / Т.С. Костенко, В.Б. Радионова, Д.И. Скородумов. М. : Колос, 2001.-344 с.

49. Кощеев, B.C. Физиология и гигиена индивидуальной защиты человека от холода / B.C. Кощеев М. : Медицина, 1981. - 287 с.

50. Кулешов, С.М. Ранозаживляющее действие биологически активных препаратов органического происхождения / С.М. Кулешов, P.C. Кулешов // Научный журнал Кубанского государственного аграрного университета. 2007. - № 26. - С. 21-25.

51. Лахтин, В.М. Очистка ферментов с помощью лектинов / В.М. Лахтин // Биотехнология. 1985. - Т. 1, № 5. - С. 11-27.

52. Лахтин, В.М. Лектины регуляторы метаболизма / В.М. Лахтин // Биотехнология. - 1986. - Т. 2, № 6. - С. 66-79.

53. Лахтин, В.М. Лектины в исследовании белков и углеводов / В.М. Лахтин // Итоги науки и техники. Сер. Биотехнология. М. : ВИНИТИ.1987.-Т. 2.-С. 4-40.

54. Лахтин, В.М. а-галактозидаза СерИа1озрогшт асгетотит 237 и ее лектиновые свойства / В.М. Лахтин, О.М. Запромётова // Биохимия.1988. -Т. 53, № 8. С. 1270-1277.

55. Лахтин, В.М. Лектины и аспекты их изучения / В.М. Лахтин // Микробиологический журнал. 1989. - Т. 51, № 3. - С. 69-74.

56. Лахтин, В.М. Энзимологические аспекты использования лектинов / В.М. Лахтин // Биотехнология. 1989. - Т. 5, № 5. - С.676-687.

57. Лахтин, В.М. Лектины в исследовании рецепторов / В.М. Лахтин, И.А. Ямсков // Успехи химии. 1991. - Т. 60, вып. 8. - С. 1777-1816.

58. Лахтин, В.М. Специфичность лектинов микроорганизмов / В.М. Лахтин // Прикладная биохимия и микробиология. — 1992. — Т. 28, № 4. С. 483-501.

59. Лахтин, В.М. Молекулярная организация лектинов/ В.М. Лахтин // Молекулярная биология. 1994. - Т. 28, вып. 2. - С. 345-273.

60. Лахтин, В.М. Лектины в исследовании углеводной части глико-протеинов и других природных гликоконъюгатов / В.М. Лахтин // Биохимия. 1995. - Т. 60, вып. 2. - С. 187-217.

61. Левицкий, Е.Л. Свободнорадикальные повреждения ядерного генетического аппарата клетки / Е.Л. Левицкий, Ю.И. Губский // Укр. биохим. журн. 1994. - Т. 66, № 4. - С. 18-30.

62. Лектин вакцинного штамма Yersinia pestis EV и изучение его иммунобиологических свойств / Е.И. Тихомирова и др. // ЖМЭИ. 2003. - № 1.-С. 51-55.

63. Лектин Paenibacillus polymyxa как регулятор молочнокислой микрофлоры кишечника / H.H. Неверова и др. // Актуальные аспекты современной микробиологии : тез. третьей международной школы-конференции, 2007. — Москва, 2007. — С. 84.

64. Лектины, адгезины и лектиноподобные вещества лактобацилл и бифидобактерий / В.М. Лахтин и др. // Вестн. РАМН. 2006. - № 1. - С. 2834.

65. Лектины в иммунологии : науч.-информ. пособие / В.Е. Никитина и др.. — Саратов, 2001. — 28 с.

66. Лектины Bacillus polymyxa: локализация, участие во взаимодействии с корнями пшеницы / Л.В. Карпунина и др. // Микробиология. 1993. -Т. 62,№2.-С. 307-313.

67. Ленкова, Р.И. Изменение содержания мочевины в крови и тканях при мышечной деятельности в зависимости от адаптированности организма / Р.И. Ленкова // Физиологический журнал СССР им. Сеченева. 1973. - Т. 59, №7.-С. 1097-1107.

68. Лизько, H.H. Видовой пейзаж бифидофлоры кишечника в норме и при дисбактериозе / H.H. Лизько // Проблемы клинич. микробиол. в неин-фекцион. Клинике : тез. докл., 1983, Винница. Москва, 1983. - С. 180-181.

69. Лизько, H.H. Новые экспериментальные модели в микроэкологии / H.H. Лизько // Антибиотики и химиотерапия. — 1989. Т. 34, № 6. - С. 443447.

70. Лизько, H.H. Проблемы микробной экологии у человека в космическом полете / H.H. Лизько // Тезисы докладов 6-го Всероссийского съезда микробиологов, эпидемиологов и паразитологов, 1991, Нижн. Новгород. -М., 1991.-С. 107.

71. Луцик, М.Д. Лектины: биологические свойства и применение в иммунологии / М.Д. Луцик // Биохимия человека и животных. 1985. - № 9. -С. 69-76.I

72. Луцик, М.Д. Лектины / М.Д. Луцик, E.H. Панасюк, А.Д. Луцик. -Львов : Вища школа, 1981. 156 с.

73. Мальцева, H.H. Активность-азотфиксации и азотфиксирующие микроорганизмы ризосферы озимой ржи / H.H. Мальцева // Микробиологический журнал. 1992. - Т. 54, № 6. - С. 10-16.

74. Мельникова У.Ю. Лектины Bacillus polymyxa: физико-химические и биологические свойства: дис.канд. биол. наук / У.Ю. Мельникова. Саратов, 2000. — 120 с.

75. Меркулов, Г.А. Курс патологогистологической техники / Г.А. Меркулов. СПб.: Медицина, 1969. - 423 с.

76. Микробиология с техникой микробиологических исследований / под ред. A.C. Лабинской. М. : Медицина, 1978. - 349 с.

77. Митогенная активность фукозоспецифичного лектина / В:Е. Никитина и др. // Гомеостаз и инфекционный процесс : материалы второй Всерос. конф., Саратов, 1998. 1998. - С. 52.

78. Мутагенная и митогенная активность фукозоспецифичного лектина азоспирилл / Ю.В. Итальянская и др. // Изучение и применение лекти-нов. Тарту, 1989: - Т. 2. - С. 205-208.

79. Мухачева, Е.С. Влияние лектина Paenibacillus polymyxa на некоторые метаболические процессы животных : дис.канд. биол. наук / Е.С. Мухачева. Саратов, 2004. - 139 с.

80. Наумов, A.A. Влияние некоторых физиологических и экстремальных факторов на микроэкологию кишечника : автореф. дисс. М., 1989. -24 с.

81. Неверова, H.H. Изучение роли лектинов Paenibacillus polymyxa в регуляции метаболизма животных : дис.канд. биол. наук / H.H. Неверова. -Саратов, 2008. 104 с.

82. Никитин, Д.Н. Новые и редкие формы почвенных микроорганизмов / Д.Н. Никитин, Л.В. Васильева, P.A. Лохмачева. М. : Наука. - 1996. -70 с.

83. Никитина, В.Е. Изучение биологической роли агглютининов (лектинов) почвенных азотфиксирующих бактерий / В.Е. Никитина, Ю.В. Итальянская, Л.В. Карпунина // Изучение и применение лектинов. Лектины в биологии и медицине. Тарту, 1989. - Т. 2. - С.25-31.

84. Определение локализации лектинов, агглютининов почвенных азотфиксирующих бактерий / JI.B. Карпунина и др. // Микробиология. -1995. Т.64, № 4. - С. 453-457.

85. Определитель бактерий Берджи : пер. с англ. В 2-х т. Т. 1 / под ред. Дж. Хоулта и др.. М.: Мир, 1997. - 432 с.

86. Особенности фагоцитоза патогенных бактерий и индукция цито-кинов на фоне действия бактериального лектина / Е. И. Тихомирова и др. // Русский журнал иммунологии. 2004. - Т. 9. - С. 55.

87. Панин, JI.E. Биохимические механизмы стресса / JI.E. Панин. -Новосибирск : Наука, 1983.-205 с.

88. Петровская, В.Г. Микрофлора человека в норме и патологии / В .Г. Петровская, О.П. Марко. М. : Медицина, 1976. - С. 104-111.

89. Пономарева, Е.Г. Биологическая активность бактерий рода Azospirillum : автореф. дис. . канд. биол. наук. / Е.Г. Пономарева. Саратов, 1997.-16 с.

90. Протеолитическая активность лектинов азотфиксирующих бактерий Bacillus polymyxa / У.Ю. Мельникова и др. // Микробиология. 2001. -Т. 70, №2.-С. 259-262.

91. Роль агглютининов клеточной поверхности Rhizobium leguminosarum в прикреплении к корням гороха / Л.В. Карпунина и др. // Микробиология. 1996. - Т. 65, № 4. - С. 512-516.

92. Серов, В.В. Соединительная ткань / В.В. Серов, А.Б. Шехтер. -М. : Медицина, 1981. -312 с.

93. Соболева, Е.Ф. Агглютинины Rhizobium leguuminosarum 252 и их роль во взаимодействии с растениями : дис.канд. биол. наук. / Е.Ф. Соболева. Саратов, 1998. - 120 с.

94. Соколовский, В.В. Свободнорадикальное окисление и его роль в патогенезе, воспаления, ишемии и стресса /В.В. Соколовский // Вопр. мед. химии. 1998. - Т. 6, № 34 - С. 2-11.

95. Физиология человека / под ред. В.М. Покровского, Г.Ф. Короть-ко. М. : Медицина, 2007. - 656 с.

96. Шакирова, Ф.М. Современные представления о предполагаемых функциях пектинов растений / Ф.М. Шакирова, М.В. Безрукова // Журналобщей биологии. 2007. - Т. 68, № 2. - С. 109-125.

97. Шаповалов, С.Г. Современные раневые покрытия в комбустиоло-гии / С .Г Шаповалов // ФАРМиндекс-Практик. 2005. - № 8. - С. 38-46.

98. Шендеров, Б.А. Антимикробные препараты и нормальная микiрофлора. Проблемы и возможные пути их решения / Б.А. Шендеров // Антибиотики и химиотерапия. 1988. - Т. 33, № 12. - С. 921-926.

99. Шкарупета, М.М. Влияние представителей нормальной микрофлоры и их компонентов на антиинфекционную резистентность : автореф. дисс. / М.М. Шкарупета. М., 1990. - 25 с.

100. Шляпников, С.А. Роль цефалоспорина IV поколения цефепима в лечении больных с хирургическим сепсисом / С.А. Шляпников, А.К. Рыбкин // Антибиотики и химиотерапия. 1999. - № 11. - С. 34-36.

101. Энтеробактерии / И.В. Голубева и др.. М. : Медицина, 1985.265 с.

102. Этанол и обмен веществ / А.Г. Мосейнюк и др.. Минск : Наука и техника, 1982. - 142. с.

103. A segment of the cartilage proteoglycan core protein has lectin-like activity / D.F. Halberg et al. // J. Biol. Chem. 1988. - V. 263, N 19. - P. 94869490.

104. Abe, Y. Multiple forms in the subunit structure of concanavalin A / Y. Abe, M. Iwabuchi, S.-I. Ishii // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1971. - V. 45. -P. 1271-1278.

105. Abraham, S.N. Assembly of a chemically synthesized peptide of Escherichia coli type 1 fimbriae into fimbria-like antigenic structures / S.N. Abraham, E.M. Beachey // J. Bacteriol. 1987. - V. 169, N 6. - P. 2460-2465.

106. Affinity sorbent containing Con A immobilized via cobalt (3+) complex / B.B. Berezin et al. / Proceedings of the 11th International Lectin Conference (June 4-9, 1989, Tartu-Tallinn). Book of Abstracts. Tartu, 1989. - P. 7.

107. Agglutination of an arbovirus by concanavalin A. Nat New Biol / J.D. Oram et al. // Nature. 1971. - V. 233. - P. 50-51.

108. Ahmad, A. Strategies for designing antibody-toxin conjugates / A. Ahmad, K. Law // Trends in Biotechnol. 1988. - V. 6, N 10. - P. 246-251.

109. Allen, A.K. Purification of the glycoprotein lectin from the broad bean (Vicia faba) and a comparison of its properties with lectins of similar specificity / A.K. Allen, N.N. Desai, A. Neuberger // Biochem. J. 1976. - V. 155. - P. 127135.

110. Analytical high-performance affinity chromatography of ovalbumin-derived glycopeptides on columns of concanavalin A-and wheat germ agglutinin-immobilized gels / S. Honda et al. // J. Chromatogr. 1988. - V. 438, N L. - P. 73-84.

111. Antigenic determinants of the cholera/coli family of enterotoxins / R.A. Finkelstein et al. // Rev. Infect. Diseases. 1987. - V. 6 (Suppl. 5). - P. 490-502.

112. Ashwell, G. The role of surface carbohydrates in the hepatic recognition and transport of circulating glycoproteins / G. Ashwell, A.G. Morell // Advanc. Enzymol. 1974. - V. 41. - P. 99-128.

113. Assay of glycosidase by lectin affinity high-performance liquid chromatography / H. Harada et al. // J. Chromatogr. 1987. - V. 407 Complete. -P. 299-304.

114. Avrameas, S. Emploi de la Concanavalin A pour l'isolement, la détection et la mesure des glycoprotéines et glucides extra ou endocellulaires / S. Avrameas // CR Acad. Sci. Paris, 1970. - V. 270. - P. 2205-2208.

115. Barkhan, P. Phytohasmagglutinin: separation of hsemagglutinating and mitogenic principles / P. Barkhan, A. Ballas // Nature. 1963. - V. 200. - P. 141142.

116. Barondes, S.H. Microbial lectins and agglutinins: properties and biological activity / S.H. Barondes. New York : John Wiley & Sons, 1986. - 4431. P

117. Becht, H. Effect of Concanavalin A on cells infected with enveloped RNA viruses / H. Becht, R. Rott, H.D. Klenk // J. Gen. Virol. 1972. - V. 14. - P. 1-8.

118. Beckett, G.J. Glutathione-S-transferase measurements and liver disease in man / G.J. Beckett, J.D. Hayes // J. of Clinical Biochem. and Nutrition. -1987.-V. 2.-P. 1-24.

119. Behavioral despair in rats: a new model sensitive to antidepressant treatments / R.D. Porsolt et al. // Eur. J. Pharmacol. 1978. - V. 47. - P. 379391.

120. Bergey's manual of systematic bacteriology : V. 1 / Ed. C. Garrity. -New York : Springer, 2001. 776 p.

121. Bernhard, W. Ultrastructural visualization of cellular carbohydrate components by means of concanavalin A / W. Bernhard, S. Avrameas // Exp. Cell Res. 1971. -V. 64. - P. 232-236.

122. Biochemical evidence that the type II insulin-like growth factor receptor is identical to the cation-independent mannose 6-phosphate receptor / W. Kiess et al. // J. Biol. Chem. 1988. - V. 263, N 19. - P. 9339-9344.

123. Bittiger, H. Concanavalina a tool / H. Bittiger, H.P. Schnebli // London and New York: John Wiley and Sons. 1976. - V. 15, N 639. - P. 19-50.

124. Blood appearance of rat alkaline phosphatase originating from the duodenum in vitro /1. Koyama et al. // J. Chromatogr. 1987. - V. 420, N 2. - P. 275-286.

125. Bocci, V. The role of sialic acid in determining the life-span of circulating cells and glycoproteins / V. Bocci // Experientia. 1976. - V. 32. - P. 135-140.

126. B0g-Hansen, T.C. Identification and quantification of glycoproteins by affinity electrophoresis / T.C. B0g-Hansen, OJ. Bjerrum, C.-H. Brogren // Analyt. Biochem. 1977. - V. 81. - P. 78-87.

127. Bradford, M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding / M. Bradford // Anal. Biochem. 1976. -V.72. - P. 248-254.

128. Chan, K.-F.I. Ganglioside-modulated protein phosphorylation / K.-F.I. Chan // J. Biol. Chem. 1988. - V. 263, N 1. - P. 568-574.

129. Change in membrane fluidity induced by lectin-mediated phase separation of the membrane and agglutination of phospholipid vesicles containing glycopeptides / T. Ohtoyo et al. // Biochemistry. 1988. - V. 27, N 17. - P. 6458-6463.

130. Chronic ethanol feeding increases apoptosis and cell proliferation in rat liver / G.S. Baroni et al. // J. Hepatol. 1994. - V. 20. - P. 508-513.

131. Cieplak, W. Specific cleavage of diphtheria toxin by human urokinase / W. Cieplak, L. Hasemann, L. Eidels // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1988. -V. 157.-P. 747-754.

132. Cloning and expression of a functional fucose-specific lectin from an orange peel mushroom, aleuria aurantia / F. Fukumori et al. // FEBS Lett. 1989. -V. 250.-P. 153-156.

133. Cloning of the carbohydrate-binding portion of the toxin A gene of Clostridium dificile / S.B. Price et al. // Curr. Microbiol. 1987. - V. 16, N 50. -P. 55-60.

134. Comoglio, P.M. Two dimensional distribution of concanavalin-A receptor molecules on fibroblast and lymphocyte plasma membranes / P.M. Comoglio, R. Guglielmone // FEBS Letters. 1972. - V. 27. - P. 256-258.

135. Cuatrecasas, P. Insulin-like activity of concanavalin A and wheat germ agglutinin-direct interactions with insulin receptors / P. Cuatrecasas, G.P.E. Tell // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1973. - V. 70. - P. 485-489.

136. Cunningham, B.A. Analysis of lymphocyte stimulation by lectins and lectin derivatives / B.A. Cunningham // Arm. N.Y. Acad. Sci. 1974. - V. 234. — P. 219.

137. Czech, M.P. Stimulation of glucose metabolism by lectins in isolated white fat cells / M.P. Czech, W.S. Lynn // Biochom. Biophys. Acta. 1973. - V. 297.-P. 368-377.

138. De Graaf, F.K. The fimbrial adhesins of Escherichia coli / F.K. De Graaf, F.R. Mooi // Advances in Microbial Physiology / eds. A.H. Rose, D.W. Tempest. London : Academic Press, 1986. - V. 28 - P. 65-143.

139. De Ley, J. DNA base composition, flagellation and taxonomy of the genus Rhizobium / J. De Ley // J. Gen Microbiol. 1965. - V. 41. - P. 85-91.

140. Dey, P.M. Occurrence of glycoprotein glycosidases in mature seeds of mung bean (Vigna radiata) / P.M. Dey // Phytochemistry. 1984. - V. 23, N 2. -P. 257-260.

141. Diphtheria toxin receptor binding domain substitution with interleukin-2: genetic construction and properties of a diphtheria toxin-related interleukin-2 fusion protein / D.P. Williams et al. // Protein Engin. 1987. - V. 1, N6.-P. 493-498.

142. Dobryszycka, W. Structural similarities among concanavalin A, haptoglobin, and trypsin / W. Dobryszycka, B. Przysiecki // FEBS Lett. 1984. -V. 171,N1.-P. 85-88.

143. Dodd, R.B. Lectin-like proteins in model organisms: implications for evolution of carbohydrate-binding activity / R.B. Dodd, K. Drickamer // Glycobiology. 2001. - V. 11, N 5. - P. 71R-79R.

144. Dorner, F. Interferon: Evidence for its giycoprotein nature / F. Dorner, M. Scrib, R. Weil // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1973. - V. 70. - P. 1981.

145. Douglas, S.D. Human lymphocyte response to phytomitogens in vitro: normal, agammaglobulinemic and paraproteinemic individuals / S.D. Douglas, R.M. Kamin, M.M. Fudenberg // J. Immunol. 1969. - V. 103. - P. 1185-1195.

146. Drickamer, K. Two distinct classes of carbohydrate-recognition " domains in animal lectins / K. Drickamer // J. Biol. Chem. 1988. - V. 263, N 20.-P. 9557-9560.

147. Drickamer, K. Evolving views of protein glycosylation / K. Drickamer, M.E. Taylor// Trends. Biochem. Sci. 1998. - V. 23. - P. 321-324.

148. D'Souza, S.F. Continuous conversion of sucrose to fructose and gluconic acid by immobilized yeast cell multienzyme complex / S.F. D'Souza, G.B. Nadkarni // Biotechnol. and Bioengin. 1980. - V. 227, N 10. - P. 21792189.

149. Dufau, M.L. Interaction of glycoprotein hormones with agarose-concanavalin A / M.L. Dufau, T. Tsuruhara, K.J. Catt // Biochem. Biophys. Acta. -1972.-V. 278.-P. 281-292.

150. Effect of agglutinins from Rhizobium leguminosarum strain 252 on the activity of hydrolytic enzymes / L.V. Karpunina et al. // Current Microbiology. 2000. - Vol. 42. - P. 73-75.

151. Effects of lectins on enzymatic properties plant acid phosphatases and ribonucleases / I. Lorens-Kubis et al. // Lectins: Biology, Biochemistry, Clinical Biochemistry / ed. T.C. Bog-Hansen. Berlin : Walter de Gruyter, 1981. - V. 1. -P. 169-178.

152. Ehrlich, P. Experimentelle Untersuchungen über immunität / P. Ehrlich//Med. Wschr. 1891. -Bd. 17.-S. 1218-1222.

153. Elad, Y. Possible role of lectins in mycoparasitism / Y. Elad, R. Barak, I. Chet//J. Bacteriol. 1983. - V. 154, N3.-P. 1431-1435.

154. Endogenous lectin from cultured soybean cells. Chemical characterization of the lectin of SB-1 cells / S. Malek-Hedayat et al. // J. Biol. Chem. 1987. -V. 262, N. 16. -P. 7825-7830.

155. Enhanced immunogenicity of chemically-coated syngeneic tumor cells / WJ. Martin et al. // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 1971. - V. 68. - P. 469.

156. Enzyme activity of lectins from the nitrogen-fixing soil bacterium, Bacillus polymyxa / U. Yu. Mel'nikova et al. // Current Microbiol. 2000. -V.41.-P. 246-249.

157. Evidence that serum amyloid P component binds to mannose-terminated sequences of polysaccharides and glycoproteins / B.M. Kubak et al. // Mol. Immunol. 1988. - V. 25, N 9. - P. 851-858.

158. Exopolysaccharides produced by Lactococcus lactis: from genetic engineering to improved rheological properties / M. Kleerebezem et al. // Antonie van Leeuwenhoek. 1999. -V. 76, N 1. - P. 357-365.

159. Expression, glycosylation and secretion of fungal hydrolases in yeast / H. Yoshizumi et al. // J. Jap. Soc. Starch Sci. 1987. - V. 34, N 2. - P. 148-154.

160. Expression of a biologically active diphtheria toxin fragment B in Escherichia coli / V. Cabiaux et al. // Mol. Microbiol. 1988. - V. 2, N 3. - P. 339-346.

161. Expression of functional Ricin B Chain in Xenopus Oocytes / P.T. Richardson et al. // Bio/Technology. 1988. - V. 6, N 5. - P. 565-570.

162. Expression of the cell-binding domain of human fibronectin in E. coli: Identification of sequences promoting full to minimal adhesive function / M. Obara et al. // FEBS Lett. 1987. - V. 213, N 2. - P. 261-264.

163. Expression of ricin A chain in Escherichia coli / M. O'Hare et al. // FEBS Lett. 1987. - V. 216, N L. - P. 73-78.

164. Fisher, R.F. Rhizobium-plant signal exchange / R.F. Fisher, S.R. Long //Nature. 1992. -V. 357, N. 6380. - P. 655-660.

165. Fractionation of human T lymphocytes on wheat germ agglutinin-sepharose / U. Hellstrôm et al. // J. Exp. Med. 1976. - V. 144. - P. 1381-1385.

166. Fractionation of membrane proteins on immobilized lectins by highperformance liquid affinity chromatography / D. Renauer et al. // Anal. Biochem. 1985.-V. 151, N. 2. - P. 424-427.

167. Franz, H. Preparation of carbohydrateiron complexes as electron dense receptors for membrane bound lectins / H. Franz, J. Roth // Histochemistry and Cell Biology. 1975. - V. 41. - P. 361-363.

168. Franz, H. Heavy metal carbohydrate complexes for demonstration of lectin surface receptors. The preparation of a galactan-iron complex / H. Franz, P. Ziska, J. Roth // Acta histochem. (Jena). 1976. - V. 57. - P. 165-166.

169. Franz, H. Combination of immunological and lectin reactions in affinity histochemistry: Proposition of the term affinitin / H. Franz, P. Bergmann, P. Ziska // Histochemistry and Cell Biology. 1979. - V. 59. - P. 335-342.

170. Franzusoff, A.J. Insulinomimetic homology of concanavalin A / A.J. Franzusoff// Med. Hypothesis. 1983. - V. 10, N 3. - P. 223-228.

171. Gallagher, J.T. Carbohydrate-binding properties of lectins: a possible approach to lectin nomenclature and classification / J.T. Gallagher // Biosci. Rep. — 1984.-V. 4.-P. 621-632.

172. Genetic construction, expression, and melanoma-selective cytotoxicity of a diphtheria toxin-related a-melanocyte stimulating hormone fusion protein / Murphy J.R. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. - V. 83, N 21. - P. 8258-8262.

173. Gilboa-Garber, N. Pseudomonas aeruginosa lectins as a model for lectin production, properties, applications and functions / N. Gilboa-Harber // Zentralblatt Bakter. Hygiene. 1988. - V. 270. - P. 3-15.

174. Gilboa-Garber, N. Microbial lectin cofunction with lytic activities as a model for a general leases lectin role / N. Gilboa-Garber, N. Garber // FEMS Microbial. Rev. 1989. - V. 63. - P. 211-222.

175. Gilboa-Garber, N. Possible application of Pseudomonas aeruginosathlectins / N. Gilboa-Garber // Abstracts 8 Intern. Congress of bacteriology and applied Microbiology division, August 18-23 1996, Israel. Ierusalim, 1996. - P. 92.

176. Goldman, R. Induction of vacuolation in the mouse peritoneal macrophage by concanavalin / R. Goldman // FEBS Letters. 1974. - V. 46. - P. 203-208.

177. Goldstein, I.J. Precipitation and carbohydrate-binding specificity studies on wheat germ agglutinin / I.J. Goldstein, S. Hammarstrom, G. Sundblad // Biochem. biophys. Acta. 1975. - V. 405. - P. 53-61.

178. Grant, M.A. A new membrane filtration medium for simultaneous detection and enumeration of Escherichia coli and total coliforms / M.A. Grant // Appl. Environ. Microbiol. 1997. - N 63. - P. 3526-3530.

179. Habig, W.H. Assays for differentiation of glutathione-S-transferases / W.H. Habig, W.B. Jacoby // Methods in Enzymol. 1981. - V. 77. - P. 398-402.

180. Harada, H. Assay of glycosidase by lectin affinity high-performance liquid chromatography / H. Harada, F. Koyama // Bio Industry (Japan). 1987. -V. 4, N8.-P. 39-46.

181. Herscovics, A. A rapid method for assay of glycosidases involved in glycoprotein biosynthesis / A. Herscovics, S. Jelinek-Kelly // Anal. Biochem. -1987.-V. 166, N 1. P. 85-89.

182. Highly efficient solubilization of natural lignocellulosic materials by a commercial cellulase immobilized on various solid supports / M.B. Fadda et al. // Appl. Microbiol, and Biothechnol. 1984.- V. 19, N 5.-P. 306-311.

183. High-performance concanavalin A affinity chromatography of liver and hepatoma membrane proteins / D. Josic et al. // J. Chromatogr. 1988. - V. 444 Complete. - P. 29-39.

184. Hincha, D.K. A role for lectins in plant frost hardy ness / D.K. Hincha, U. Pfuller, L.M. Schmitt // 17th Intern. Lectin. Meeting: Suppl. Abstr., 2427 September 1997, Germany. Wiirzburg, 1997. - P. 14.

185. Hirsch, A.M. Role of lectins (and rhizobial exopolysaccharides) in legume nodulation / A.M. Hirsch // Curr. Opin. Plant Biol. 1999. - V. 2. - P. 320-326.

186. Hodgkiris cell lectin: an ectosialyltransferase and lymphocyte agglutinant related to the hepatic asialoglycoprotein receptor / E. Paietta et al. // Cancer Res. 1987. -V. 47, N9. - P. 2461-2467.

187. Hoffman, L.M. Synthesis of mitogenic phytohemagglutinin-L in Escherichia coli / L.M. Hoffman, D.D. Donaldson // Bio/Technology. 1987. - V. 5, N2.-P. 157-160.

188. Hughes, R.C. Membrane glycoproteins. A review of structure and function / R.C. Hughes // Butterworth. London, 1976. - P. 214-228.

189. Human lymphocyte Fc receptor for IgE: sequence homology of its cloned cDNA with animal lectins / K. Ikuta et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1987. Y. 84, N 3. -P. 819-823.

190. Hussain, Q. Entrapment of concanavalin A-glycoenzyme complexes in calcium alginate gels / Q. Hussain, J. Iqbal, M. Saleemuddin // Biotechnol. and Bioengin. 1985.-V. 27, N8.-P. 1102-1107.

191. Hussain, Q. Immobilization of glycoenzymes using crude concanavalin A and glutaraldehyde / Q. Hussain, M. Saleemuddin // Enzyme Microbiol. Technol. 1986. - V. 8, N 50 - P. 686-690.

192. Inbar, M. A specific metabolic activity on the surface membrane in malignant cell-transformation / M. Inbar, H. Ben-Bassat, L. Sachs // Proc Natl Acad Sci USA. 1971. - V. 68. - P. 2748-2751.

193. Inhibition of N-linked complex oligosaccharide formation by 1-deoxynojirimycin, an inhibitor of processing glucosidases / B. Saunier et al. // J. Biol. Chem. 1982. -V. 257,N23.-P. 14155-14161.

194. Interaction between lipopolysaccharide and intracellular serine protease zymogen, factor C, from Horseshoe crab (Tachypleus tridentatus) Hemocytes / T. Nakamura et al. // J. Biochem. 1988. - V. 103, N 2. - P. 370374.

195. Iqbal, J. Activity and stability of glucose oxidase and invertase immobilized on Concanavalin A sepharose: Influence of lectin concentrations / J. Iqbal, M. Saleemuddin // Biotechnol. and Bioengin. 1984. - V. 25, N 12. - P. 3191-3195.

196. Isolierung und Charakterisierung von inhaltsstoffen der mistel (Viscum album L). II. Wirkung von agglutinierenden und zytotoxischen fraktionen auf mäuse-aszites-tumorzellen / P. Luther et al. // Acta Biol. Med. Germ. 1977. -Bd. 36. - S. 119-125.

197. Jaffe, W.G. Immunology of plant agglutinila / W.G. Jaffe // Immunological Aspects of Foods / W.G. Jaffe. Westport: A.V.I. Publishing Co., 1977.-P. 170-181.

198. James, D.W. Production of a lectin in tissue cultures of Dolichos biflorus / D.W. James, M. Ghosh, M.E. Etzler // Plant Physiol. 1984. - V. 77, N. 3.-P. 630-634.

199. Janzen, D.H. Insecticidal action of the phytohemagglutinin in black beans on a bruchid beetle / D.H. Janzen, H.B. Juster, I.E. Liener // Science. 1976. -V. 192.-P. 795-796.

200. Jimenez, A. Plant and fungal toxins inhibiting eukaryotic protein synthesis / A. Jimenez, D. Vazquez // Annu. Rev. Microbiol. 1985. - V. 39. - P. 649-672.

201. Kaartinen, V. Hemoglobin binding to deglycosylated haptoglobin / V. Kaartinen, L. Mononen // Biochim. et Biophys. Acta. 1988. - V. 953, N 3. - P. 345-352.

202. Kaper, J.B. Progress towards a vaccine against enterotoxigenic Escherichia coli / J.B. Kaper, M.M. Leuine // Vaccine. 1988. - V. 6, N 2. - P. 197-199.

203. Kaplowitz, P.B. Lectin-mediated stimulation of DNA synthesis in cultures of embryonic neural retina cells / P.B. Kaplowitz, A.A. Moscona // Exp. Cell. Res.- 1976. -V. 100.-P. 177-189.

204. Keil-Dlouha, V. Potential proteolytic activity in human plasma fibronectin / V. Keil-Dlouha, T. Planchenault // Proc. Natl. Acad. Sei. US. 1986. -V. 83, N15.-P. 5377-5381.

205. Keusch, G.T. Sugar-binding bacterial toxins / G.T. Keusch, A. Donohue-Rolfe, M. Jacewicz // Microbial Lectins and Agglutinins / ed. D. Mirelman. New York : Wiley, 1986. - P. 271-295.

206. Khare, S.K. Preparation of Con A-ß-galactosidase and its application in lactose hydrolysis / S.K. Khare, M.N. Gupta // J. Biosci. 1988. - V. 13, N 1. -P. 47-54.

207. Kocourek,' J. A note of the recent discussion on definition of the term "lectin" / J. Kocourek, V. Horejsi // Lectins: Biology, Biochemistry and Clinical Biochemistry. 1983. - V. 3. - P. 3-6.

208. Röttgen, E. Lectine. Struktur-funktion und analytischer einsatz in biologischen systemen / E. Köttgen // Klin. Wschr. 1977 - Bd. 55 - S. 359-373.

209. Knowles, J. Cellulose families and their genes / J. Knowles, P. Lehtovaara, T. Teeri // Trends in Biotechnology. 1987. - V. 5, N 9. - P. 255-261.

210. Lectins: a possible basis for specific recognition in interaction of Trichoderma and Sclerotium rolfsii / R. Barak et al. // Rhytopathology. — 1985. — V. 75,N4.-P. 458-462.

211. Liautard, J.P. Controlled binding of liposomes to cultured cells by means of lectins / J.P. Liautard, M. Vidal, J.R. Philippot // Cell Biol. Intern. -1985. V. 9, N 12. - P. 1123-1137.

212. Limdi J.K. Evaluation of abnormal liver function tests / J.K. Limdi, G.M. Hyde // Postgrad. Med. J. 2003. - V. 79. - P. 307-312.

213. Lis, H. Soya bean agglutinin / H. Lis // Methods in enzymology / eds. S.P. Colowick, N.O. Kaplan. New York ; London : Acad. Press. - 1972. - P. 360-368.

214. Lobel, P. Cloning and sequence analysis of the cation-independent mannose 6-phosphate receptor / P. Lobel, N.M. Dahms, S. Kornfeld // J. Biol. Chem. 1988. - V. 263, N 5. - P. 2563-2570.

215. Loor, F. Binding and redistribution of lectins on lymphocyte membrane / F. Loor // Eur. J . Immunol. 1974. - V. 4. - P. 210-220.

216. Lutsik, M.D. Antitumor properties of phytohem-agglutinin from mistletoe / M.D. Lutsik // Rep. Ukr. Acad. Sci. SSR. 1975. - Ser. B., V. 6. - P. 541-544.'

217. Mandenius, C.F. Detection of biospecific interactions using amplified ellipsometry / C.F. Mandenius, K. Mosbach // Anal. Biochem. 1988. - V. 170, N• 1.-P. 68-72.

218. Mansson, J.-E. Binding specificities of the lectins from Helix pomatia, soybean and peanut against different glycosphingolipids in liposome membranes / J.-E. Mansson, S. Olofsson // FEBS Lett. 1983. - V. 156, N 2. - P. 249-252.

219. Marchialonis, J.J. Isolation and characterization of a hemagglutinin from Limulus polyphemus / JJ. Marchialonis, G.M. Edelman // J. Mol. Biol. — 1968.-V. 32.-P. 453-465. .

220. Martin, B.J. Concanavalin A-iron dextran technique for staining cell surface mucosubstances / B.J. Martin, S.S. Spicer // J. Histochem. Cytochem.• 1974.-V. 22.-P. 206-207.

221. Marx, J.L. Looking at Lectins: Do they function in recognition processes? / J.L. Marx // Science. 1977. - V. 196. - P. 1429-1430.

222. Mattiasson, B. An analytical flow system based on reversible immobilization of enzymes and whole cells utilizing specific lectin-glucoprotein interactions / B. Mattiasson, C. Borrebaeck // FEBS Lett. 1978. -V. 85, N 1. - P. 119-123.

223. Mattiasson, B. Reversible immobilization of enzymes with special reference to analytical applications / B. Mattiasson // J. Appl. Biochem. 1981. -V. 3,N3.-P. 183-194.

224. Mattiasson, B. A simple rapid method for quantifying microorganisms by their metabolic activity when bound to a specific adsorbent / B. Mattiasson, P.A. Johansson // J. Immunol. Meth. 1982. - V. 52, N 2. - P. 233-240.

225. Mattiasson, B. Analytical applications of immobilized cells. Immobilized cells and organelles / B. Mattiasson // Florida: CRC Press, Boca Raton. 1983. -V. 2 - P. 95-123.

226. Mattiasson, B. Affinity immobilization / B. Mattiasson // Methods in Enzymology. 1988. -V. 137. - P. 647-656.

227. Merkle, R.K. Lectin affinity chromatography of glycopeptides / R.K. Merkle, R.D. Cummings // Methods in Enzymology. 1987. - V. 138. - P. 232259.

228. Monis, E. Characterization of a mannosidase acting on alpha 1-3-and alpha 1-6-linked mannose residues of oligomannosidic intermediates of glycoprotein processing / E. Monis, P. Bonay, R.C. Hughes // Eur. J. Biochem. — 1987. V. 168, N 2. - P. 287-294.

229. Moore, A.W. Nitrogen fixation by Bacillus strains isolated from Nigerian soils / A.W. Moore, Z.H. Becking // Nature. 1963. - V. 198. - P. 915916.

230. Muchmore, A.V. Evidence that recombinant IL-1 alpha. exhibits lectin-like specificity and binds to homogeneous uromodulin via N-linked oligosaccharides / A.V. Muchmore, J.M. Decker // Immunol. 1987. - V. 138, N 8.-P. 2541-2546.

231. Neville, D.M. Transmembrane transport of diphtheria toxin, related toxins, and colicins / D.M. Neville, T.H. Hudson // Annu. Rev. Biochem. 1986. -V.55.-P. 195-224.

232. Nicolson, G.L. Ferritin-conjugated plant agglutinins as specific saccharide stains for electron microscopy: application to saccharides bound to cell membranes / G.L. Nicolson, S.J. Singer // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1971. - V. 68.-P. 942-945.

233. Nowell, P.C. Phytohemagglutinin: an initiator of mitosis in cultures of normal human leukocytes / P.C. Nowell // Cancer Res. 1960. - V. 20. - P. 462. 466.

234. Ohsawa, T. Effects of ganglioside GM1 on DNA synthesis in isolated nuclei and on the activity of DNA polymerase alpha derived from S-phase HeLa cells / T. Ohsawa, H. Ikeda, T. Senshu // Biochim. et Biophys. Acta. 1988. - V. 949, N3.-P. 305-310.

235. Okamuro, J.K. Soybean seed lectin gene and flanking nonseed protein genes are developmentally regulated in transformed tobacco plants / J.K. Okamuro, K.D. Jofuku, R.B. Goldberg // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. - V. 83, N. 21. -P. 8240-8244.

236. Oliver, J.M. Concanavalin A cap formation on polymorphonuclear leukocytes of normal and beige (Chediak-Hiagashi) mice / J.M. Oliver, R.B. Zurier, R.D. Berlin // Nature. 1975. - V. 253. - P. 471-473.

237. Olsnes, S. Isolation and comparison of galactose-binding lectins from Abrus precatorius and Ricinus communis / S. Olsnes, E. Saltvedt, A. Pihl // J. Boil. Chem. 1974. -V. 249. -P. 803-810.

238. Olsnes, S. Abrin and rizin two toxic lectins / S. Olsnes, A. Pihl // Trends Bioch. Sci. - 1978. - V. 3, N 1. - P. 7-10.

239. Osawa, T. Fractionation and structural assessment of oligosaccharides and glycopeptides by use of immobilized lectins / T. Osawa, T. Tsuji // Annu. Rev. Biochem. 1987. - V. 56. - P. 21-42.

240. Patthy, L. Homology of pancreatic stone protein with animal lectins / L. Patthy // Biochem. J. 1988. - V. 253, N 1. - P: 309-311.

241. Pseudomonas aeruginosa II lectin stops human ciliary beating: therapeutic implications of fucose / E.C. Adam et al. // Am J Respir Crit Care Med.-1997.-V. 155,N 6.-P. 2102-4.

242. Purification of Sarcophaga (fleshfly) lectin and detection of sarcotoxins in the culture medium of NIH-Sape-4, an embryonic cell line of Sarcophaga peregrina / H. Komano et al. // Biochem. J. 1987. - V. 248, N. L. -P. 217-222.

243. Pusztai, A. Biological effects of plant lectins on the gastrointestinal tract: metabolic consequences and applications / A. Pusztai, S. Bardocz// Trends in Glycoscience and Glycotechnology. 1996. -V. 41. - P. 149-165.

244. Ravin, H.A. An improved colorimetric enzymatic assay of ceruloplazmin / H.A Ravin // J. Lab. Clin. Med. 1961. - V. 7, N 2. - P. 161-168.

245. Reitman, S. A calorimetric method for the determination of serum glutamic oxalacetic and glutamic pyruvic transaminases / S. Reitman, S. Frankel // Amer.J.Clin.Pathol. 1957. -V. 28. - P. 56.

246. Rennie, R.L. Nitrogen fixation associated with disomic chromosomic substitution lines of spring wheat / R.L. Rennie, R.I. Larson // Can. J. Bot. 1979. - V. 57, N 21. - P. 2771-2775.

247. Reversible and irreversible immobilization of Carboxypeptidase Y using biospecific adsorption / J. Turkova et al. // J. Chromatogr. 1986. - V. 376,N1.-P. 315-321.

248. Roth, J. Ultrastructural detection oflectin receptors by cytochemical affinity reaction using mannan-iron complex / J. Roth, H. Franz // Histochemistry.- 1975.-V. 41.-P. 365-368.

249. Rudiger, H. Preparation of plant lectins / H. Rudiger // Advances in Lectin Research / ed. H. Franz. Berlin et al. : Springer-Verlag, 1988. - V. 1. - P. 26-72.

250. Selective killing of HIV-infected cells by recombinant human CD4-Pseudomonas exotoxin hybrid protein / V.K. Chaudhary et al. // Nature. 1988.- V. 335, N 6188. P. 369-372.

251. Self-Association of xanthan in aqeous solvent-systems / J.G. Southwick et al. // Carbohydrate Research. 1980. - V. 84. - P. 287-295.

252. Sharon, N. Lectins as cell recognition molecules / N. Sharon, H. Lis // Science. 1989. - V. 246. - P. 227-234.

253. Sharon, N. Lectins: Carbohydrate-specific reagents and biological recognition molecules / N. Sharon // J. Biol. Chem. 2007. - V. 282. - P. 27532764.

254. Sherblom, A.P. The lectin-like interaction between recombinant tumor necrosis factor and uromodulin / A.P. Sherblom, J.M. Decker, A.V. Muchmore // J. Biol. Chem. 1988. - V. 263, N 11. -P 5418-5424.

255. Slifkin, M. Lectins and their use in clinical microbiology / M. Slifkin, R.J. Doyle // Clin. Microbiol. 1990. - V. 3, N 3. - P. 197-218.

256. Smith, C.W. The pattern of binding of fluorescein-labelled concanavalin A to the motile lymphocyte / C.W. Smith, J.C. Hollers // J. Reticuloendoth. Soc. 1970. -V. 8. - P. 458-464.

257. Structural aspects of lectin-ligand interactions, animal lectins: a functional view / M. Bianchet et al.. CRC Press. - Boca Raton, 2008. - 558 p.

258. Stubbs, M J. Production of Pea Lectin in Escherichia coli / M.J. Stubbs, J.P. Carver, RJ. Dunn // J. Biol. Chem. 1986. - V. 261, N 14. - P. 61416144.

259. Studies on human peripheral blood lymphocytes in vitro. I. Biological and physiochemical properties of the pokeweed mitogen / J. Borjeson et al. // J. Exp. Med.-1966.-V. 124.-P. 859-872.

260. Studies on the "mitogenic" effect of agglutinin containing extracts from various plants on the small lymphocytes of the peripheral blood in vitro / M. Kriipe et al. // Z. Immun.-Forsch. 1968. - Bd. 135. - S. 19-42.

261. Studies on the structure and properties of the lectins from Abrus precatorius and Ricinus communis / S. Olsnes et al. // Biochim Biophys Acta. — 1975.-V. 405.-P. 1-10.

262. Szumilo, T. A simple and reliable assay for glycoprotein processing / T. Szumilo, A.D. Elbein // Anal. Biochem. 1985. - V. 151, N 1. - P. 32-40.

263. Tague, B.W. The plant vacuolar protein, phytohemagglutinin, is transported to the vacuole of trasgenic yeast / B.W. Tague, M.I. Chrispeels // J. Cell Biol.-1987.-V. 105, N5.-P. 1971-1979.

264. Taylor, G. Changes in the fungal autoflora of Apollo astronauts / G. Taylor, M. Henney, W. Ellis // Appl. Microb. 1973. - V. 26, N 5. - P. 804.

265. The elastin receptor: a galactoside-binding protein / A. Hinek et al. // Science. 1988. -V. 239,N 4847. -P. 1539-1541.

266. The expression of functional ricin B-chain in Saccharomyces cerevisiae / P.T. Richardson et al. // Biochim. Biophys. Acta. 1988. - V. 950, N 3.-P. 385-394.

267. The function of the human factor V carbohydrate moiety in blood coagulation / T. Bruin et al. // Eur. J. Biochim. 1987. - V. 170, N 1-2. - P. 305310.

268. The interaction of protein and cells with affinity ligands covalently coupledto silicon surfaces / C.F. Mandenius et al. // Anal. Biochem. 1984. - V. 137, N 1. - P. 106-114.

269. The major, lung surfactant protein is a calcium-dependent, carbohydrate-binding protein / Haagsman H.P. et al. // J. Biol. Chem. 1987. -V. 262, N 29. - P. 13877-13880.

270. Thomas, P. The hepatic clearance of circulating native and asialo carcinoembronic antigen by the rat / P. Thomas, D.A. Hems // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1975. - V. 67. - P. 1205-1209.

271. Thoss, K. Histochemical lectin affinity technique by means of FITC-labeled serum protein fractions / K. Thoss, J. Roth // Histochemistry and Cell Biology. 1976. - V. 49. - P. 67-72.

272. Till, G. Chemotactic activity of lectins in vitro / G. Till, V. Lenhard, D. Gemsa // Z. Immun.-Forsch. 1978. -Bd. 154. - S. 173-185.

273. Topfer-Petersen, E. Acrosin shows zona and fucose binding, novel properties for a serine protease / E. Topfer-Petersen, A. Henschen // FEBS Lett. -1987.-V. 226, N1.-P. 38-42.

274. Uhlenbruck, G. Bacterial lectins: mediators of adhesion / G,. Uhlenbruck // Zentralblatt fur Bakteriologie, Mikrobiologie und Hygiene. 1987. -V. 263.-P. 497-508.

275. Vitetta, E.S. Immunotoxins / E.S. Vitetta, J.W. Uhr // Annu. Rev. Immunol.-1985.-V.3.-P. 197-212.

276. Voelker, T.A. Secretion of phytohemagglutinin by monkey COS cells / T.A. Voelker, R.Z. Florkiewicz, M.J. Chrispeels // Eur. J. Cell Biol. 1986. - V. 42,N2.-P. 218-223.

277. Voelker, T. Differences in expression between two seed lectin alleles obtained from normal and lectin-deficient beans are maintained in transgenic tobacco / T. Voelker, A. Sturm, MJ. Chrispeels // EMBO J. 1987. - V. 6, N 12. -P. 3571-3577.

278. Voynow, J.A. A quantitative method for GDP-L-Fuc:N-acetyl-beta-D-glucosaminide alpha 1-6-fucosyltransferase activity with lectin affinity chromatography / J.A Voynow., T.F. Scanlin, M.C. Glick // Anal. Biochem. -1988,-V. 168. -N 2. -P. 367-373.

279. Wagner, M. Elektronenmikroskopischer nachweis der blutgruppensubstanz a auf menschlichen erythrozyten mit ferritinund goldmarkiertem protektin von Helix pomatia / M. Wagner, B. Wagner // Z Immun-Forsch.-1976.-Bd. 151. S. 117-125.

280. Wang, J.L. Unusual fragments in the subunit structure of concanavalin A / J.L. Wang, B.A. Cunningham, G.M. Edelman // Proc. nat. Acad. Sci. — 1971. — V. 68.-P. 1130-1134.

281. Watts, C. Isolation and expression of cDNA clones for a rat liver asialoglycoprotein receptor / C. Watts // Biosci. Rep. 1986. -N 6. - P. 527-534.

282. Wiezba-Arabska, E. Purification and properties of lectin from potato tubers and leaves: interaction with acid phosphatase from potato tuber / E. Wiezba-Arabska, B. Morawiecka // Acta Biochim. Pol. 1987. - V. 34, N. 4. - P. 407-420.

283. Wilce, M.C. Structure and function of glutathione-S-transferases / M.C. Wilce, M.W. Parker // Biochim. Biophys. Acta. 1994. - V. 1205, N 1. - P. 1-18.

284. Wong, S.S. Use of concanavalin A as a topographical probe for protein-protein interaction. Application to lactose synthase / S.S. Wong, T.E. Malone, T.K. Lee // Biochim. et Biophys. Acta. 1983. - V. 745, N 1. - P. 90-96.

285. Woodwards, J. Immobilization of cellulase through its carbohydrate side chains-a rationale for its recovery and reuse / J. Woodwards, G.S. Zachry // Enzyme and Microbiol. Technol. 1982. - V. 4, N 4. - P. 245-248.

286. Yahara, I. Modulation of lymphocyte receptor mobility by locally bound concanavalin A /1. Yahara, G.M. Edelman // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1975.-V. 72.-P. 1579-1583.