Изучение роли лектинов Paenibacillus Polymyxa в регуляции метаболизма животных

Неверова, Наталья Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изучение роли лектинов Paenibacillus Polymyxa в регуляции метаболизма животных
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Изучение роли лектинов Paenibacillus Polymyxa в регуляции метаболизма животных"

На правах рукописи.

Неверова Наталья Николаевна

ИЗУЧЕНИЕ РОЛИ ЛЕКТИНОВ РАЕЖВАСШУБ РОЬУШХА В РЕГУЛЯЦИИ МЕТАБОЛИЗМА ЖИВОТНЫХ

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Саратов - 2008

OG34593Ü1

003459301

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова»

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Карпунина Лидия Владимировна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Тихомирова Елена Ивановна, доктор биологических наук, профессор Тараненко Татьяна Михайловна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Ульяновский государственный университет»

Защита диссертации состоится « 29 » января 2009 года в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 220.061.04 при ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им Н.И. Вавилова» по адресу: г. Саратов, ул. Соколовая, 335, диссертационный зал.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И. Вавилова»

сайте: wvwv.sgau.ru

Отзывы на автореферат направлять по адресу: 410012, г. Саратов, Театральная пл., 1, ученому секретарю диссертационного совета.

Автореферат диссертации разослан

размещен на

Ученый секретарь диссертационного сов< доктор биологических наук, профессор

Л.В. Карпунина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Лектины представляют собой углеводсвязывающие белки неиммунной природы. Специфически связываясь с углеводными рецепторами, они способны участвовать во многих внутриклеточных метаболических процессах растений, . животных, микроорганизмов. Среди лектинов различного происхождения в этом плане менее изученными являются лектины бактерий. К настоящему времени имеется' довольно широкий набор бактерий, синтезирующих лектины разнообразной углеводной специфичности (Никитина и др., 1989; Карпунина, 1989, 2002; Коваленко, 1990; Лахтин, 1992;). Благодаря высокой биологической активности они могут обладать иммуномодулирующими свойствами (Никитина и др., 2002; Тихомирова и др., 2003), изменять адгезивную функцию фагоцитирующих клеток, цитокиновую активность (Абросимова и др., 2002; Горельникова, 2006). Работ по влиянию лектинов непатогенных бактерий на метаболизм животного организма, судя по имеющимся публикациям, не так много. В последнее время установлено, что одним из наиболее эффективных способов повышения резистентности организма при патологиях, в том числе и к различным видам стрессов, является применение 'разнообразных биологически активных веществ, в том числе и лектинов бактерий (Мосейнюк, 1982; Коваленко, 1997; Мухачева,. 2001). Изучение влияния лектинов бактериального происхождения на внутриклеточные процессы организма животных, как в норме, так и при некоторых нарушениях являются интересной и актуальной задачей, поскольку это открывает новые возможности коррекции нарушенного метаболизма.

Цель работы состояла в изучении роли лектинов Л1 и ЛИ Paenibacillus polymyxa 1460 в регуляции некоторых метаболических процессов в организме экспериментальных животных в норме и при стрессовых воздействиях различной природы.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние лектинов Л1 и ЛИ P.polymyxa 1460 на активность глутатион-S-трансферазы экспериментальных животных (крыс) in. vivo в норме и в условиях холодового, иммобилизационного и этанолового стрессов.

2. Определить специфичное взаимодействие лектина ЛИ Р.polymyxa 1460 с глутатион-8-трансферазой эритроцитов крови iv vitro.

3. Определить влияние лектинов Л1 и ЛИ на активность аланин-аминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (ACT) крыс в условиях холодового и этанолового стресса.

4. Исследовать влияние лектинов Л1 и ЛИ на содержание мочевины- и холестерина в организме крыс в норме, а также при холодовом и этаноловом стрессах.

5; Изучить действие лектинов бацилл Л1 и ЛИ на содержание церулоплазмина в крови крыс при стрессах.

6. Исследовать влияние лектина бацилл ЛИ на микрофлору кишечника крыс в норме и в стрессовых условиях.

Научная новизна

Впервые выявлена регуляторная роль лектина ЛИ, выделенного с поверхности почвенных азотфиксирующих P.polymyxa 1460, в условиях патологических нарушений организма, вызванных Холодовым и этаноловым стрессами в отношении фермента глутатион-Б-трансферазы и церулоплазмина in vivo. Обнаружена способность лектина ЛИ специфически связываться с рецепторами глутатион-S-трансферазы in vitro.

Показано, что лектин ЛИ нормализует активность аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы, нарушение в активности которых было вызвано Холодовым и этаноловым стрессом. Обнаружено влияние лектина бацилл ЛИ на азотистый обмен веществ в организме животных. Показано, что ЛИ способствует нормализации мочевины в сыворотке крови при этаноловом стрессе.

-------- 'Установлено, что лектин ЛИ способен оказывать влияние на микрофлору

кишечника, регулируя количество молочнокислых бактерий в условиях иммобилизапионного, холодового и этанолового стрессов.

Практическая значимость работы

Способность лектина бацилл регулировать активность некоторых ферментов, а . также коррекция важных показателей разнообразных обменных процессов при патологических состояниях организма на фоне различных видов стресса открывает перспективы их возможного использования в практике медицинских и биологических исследований. По материалам диссертационной работы опубликованы методические рекомендации «Изучение влияния лектина бацилл на активность глутатион-S-трансферазы эритроцитов крови крыс при стрессе» (в соавторстве с Т.П. Кикаловой, Л.В. Карпуниной и М.Д. Сметаниной, 2008) для практических занятий студентов старших курсов, а также для работы аспирантов и научных работников,' специализирующихся в области микробиологии, биохимии, физиологии человека и . животных, рекомендованные Учебно-методической комиссией и одобренные Ученым советом ветеринарного факультета Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова (протокол № 42 от 3 апреля 2008 г.). Результаты диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций и

написании дипломных работ в Саратовском государственном университете им. Н.Г. Чернышевского и в Саратовском государственном аграрном университете им. Н.И. Вавилова.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Лектин ЛИ P.polymyxa 1460 способен регулировать активность птутатион-S-трансферазы эритроцитов крови крыс в условиях стресса: понижая активность фермента при этаноловом и повышая при холодовом стрессе от vivo. Лектин Л1 не изменяет активность фермента в организме крыс при данных видах стресса.

2. Лектин ЛИ специфически взаимодействует с глутатион-8-трансферазой эритроцитов крови животных in vitro.

3. Введение лектина бацилл ЛИ в организм крыс влияет на аминотрансферазную активность сыворотки крови, регулируя активность ACT при холодовом стрессе и активность АЛТ при этаноловом стрессе.

4. Лектин ЛИ оказывает влияние на уровень мочевины и холестерина в организме интактных и подвергшихся холодовому и этаноловому стрессам животных; приводит к норме содержание мочевины в организме экспериментальных животных при этаноловом стрессе.

5. Лектин бацилл ЛП способствует нормализации содержания церулоплазмина in vivo при стрессовых воздействиях (холодового, этанолового).

6. Лектин бацилл ЛН ■нормализует-содержание молочнокислы;; бактерий б организме экспериментальных животных, подвергнутых иммобилизационному, холодовому и этаноловому стрессу, приводя количество бактерий к норме, а в случае холодового стресса - к увеличению.

Работа выполнена на кафедре микробиологии ' и ветсанэкспертизы, переименованной впоследствии (20.09.2006) в кафедру микробиологии, вирусологии и иммунологии факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова» в рамках научно-исследовательской темы: «Изучение биологически активных веществ (лектинов) в регуляции метаболизма растений и животных» и при частичной поддержке грантом CRDF (CR-006-xl).

Апробация работы

Материалы диссертации были представлены на: конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова» по -итогам научно-исследовательской и учебно-методической работы (Саратов, 2005; 2006; 2007); региональных конференциях молодых ученых «Вавиловские чтения - 2005, 2006, 2007» (Саратов, 2005; 2006; 2007); десятой Путинской школе-конференции молодых

ученых «Биология - наука XXI века» (Россия, Пущино, 2006); третьей межрегиональной конференции .молодых ученых «Стратегия взаимодействия микроорганизмов и растений с окружающей средой» (Саратов, ИБФРМ РАН, 2006), III Международной школе-конференции «Актуальные аспекты микробиологии» (Москва, 2007).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 12 работ, из них 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из ■ введения, двух глав: обзора литературы и экспериментальной части, включающей материалы и методы исследования, результаты исследований и их обсуждение, а также заключения, выводов и списка используемых литературных источников. Работа изложена на 104 страницах, содержит 22 таблицы. Список использованных литературных источников включает 174 наименования, в том числе 71 зарубежное.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Материалы и методы

...... ..Объекгом-исследования явились лектины Л1 и ЛП, выделенные с поверхности

почвенных азотфиксирующих бактерий Paenibacillus polymyxa 1460 по методу (Карпушша и др., 1993). Количественное содержание белка определят! по методу М. Bradford (1976).

Лектины бацилл вводили интраперитонеально самцам беспородных белых крыс со средней массой тела 210 г в дозе 2 мкг/животное. По характеру. воздействия животные были поделены на 9 групп, по 10 крыс в каждой. 1 группа - контрольные животные; 2 группа - животные, которые получали раствор лектина JII; 3 группа -животные, которьщ вводили раствор лектина ЛП; 4 и 5 группы - животные, которых подвергали воздействию холодового стресса в течение 10 и 60 минут соответственно; 6 группа - животные, подвергавшиеся иммобилизационному стрессу, в течение 10 минут; 7 группа - животные, которые получали раствор лектина ЛП за сутки перед Холодовым стрессом (10 минут); 8 группа - животные, подвергавшиеся иммобилизационному стрессу в течение 10 минут через сутки после' введения ЛИ; 9 группа - животные, подвергавшиеся влиянию этанолового стресса в течение 10 и 60 минут. Кровь из организма крыс отбирали через 24 часа после введения лектина и сразу после стресса. ■

Определение активности.глутатион-Б-трансферазы (GST) проводили по.методу-(Habigl Jakoby, 1981).

Определение активности аспартатаминотрансферазы (ACT) и аланинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке крови, проводили по методу С. Райтманда-Френкеля (1957), применяя набор реагентов фирмы «Lachema».

Содержание мочевины и холестерина в сыворотке крови определяли с помощью набора реактивов фирмы "Агат" (г. Москва).

Содержание церулоплазмина (ЦП) в сыворотке крови определяли по методу (Ravin, 1961).

Количество молочнокислых микроорганизмов в кишечнике крыс определяли методом серийных разведений (Костенко, 2001).

Полученные результаты обрабатывали методами вариационной статистики с применением t - критерия Стыодента (Зайцев, 1991).

Изучение влияния бактериальных лектинов Л1 и ЛИ P. polymyxa 1460 на активность глутатион-8-грансферазы при различных видах стресса

Изучали влияние лектинов P. polymyxa 1460 Л1 и ЛИ на активность GST, являющегося дезинтоксикационным ферментом, и осуществляющим метаболическую защиту организма от экзогенньтх и эндогенных токсических метаболитов, как контрольных крыс, так и подвергавшихся различным видам стресса (иммобилизационный, холодовой, этаноловый).

Было обнаружено, что лектин Л1 не вызывал изменений в активности глутатион-S-трансферазы эритроцитов крыс по сравнению с контролем. Активность GST составляла 19,9 мкмоль/мин-л. При введении же лектина ЛИ в организм крыс активность GST эритроцитов крыс понижалась на 24 % относительно интактных животных. В связи с этим для дальнейшей работы был выбран лектин ЛИ.

Действие иммобилизационного стресса на экспериментальных животных в течение 10 минут не вызывало существенных изменений в активности GST (табл.1). В связи с этим мы попытались найти модель стресса, при которой активность GST эритроцитов крови самцов крыс изменялась бы уже при 10-минутном воздействии стрессора. При моделировании холодового стресса, крысы находились на льду в течение 10 и 60 минут. Было показано, что активность GST при этом воздействии значительно снижалась относительно контроля. Холодовой стресс в течение 10 минут вызывал понижение активности фермента относительно интактных животных на 19 % и составил 16,1 мкмоль/мин-л; при действии в течешю 60 минут происходило еще более существенное снижение активности GST - на 33 % (табл. 1).

Таблица 1

Влияние иммобилизационного, холодового и этанолового стресса на активг.ость глутатион-Э-трансферазы эритроцитов крови крыс

Характер воздействия Активность фермента

мкмоль/мин-л %

М±т М±т

контроль . 19,9 ±0,6 100,0 ±3,2

иммобилизационный стресс 10 мин 19,5 ±0,8 98,4 ±3,9

холодовой стресс 10 мин 16,1 ±0,9' 80,9 ±5,3'

60 мин 13,4 ± 0,6*А 67,4 ± 4,7'д

этаноловый стресс 12,5 % 10 мин 21,7 ± 1,0* 109,4 ±4,6*

60 мин .18,6 ±0,4 . 93,7 ±4,0

25 % 10 мин 22,7 ± 0,9* 114,4 ± 1,9*

60 мин 20,1 ± 0,4Ло 101,4 ± 0,9 Ао

Примечанже: * - Р < 0,05 относительно контрольной группы;

А - Р < 0,05 относительно холодового стресса (10 мин); А - Р < 0,05 относительно этанола 12,5 % (60 мин); о - Р < 0,05 относительно этанола 25 % (10 мин).

Для датьнейших исследований было выбрано десятиминутное холодовое воздействие, поскольку, как видно из полученных данных, даже кратковременного холодового стресса достаточно для изменения активности фермента, и оно оказывает меньший вред животным. В качестве следующего стрессорного фактора была взята алкогольная интоксикация. При кратковременном воздействии 12,5 % этанола активность глутатион-Б-трансферазы имела незначительное увеличение и составила 21,7 мкмолъ/мин-л, а при концентрации 25 % - 22,7 мкмоль/мшгл, то есть повысилась примерно на 14 % относительно контроля (табл. 1). При часовом воздействии спирта (12,5 %, 25 %) активность фермента практически не изменялась.

Введение лектина ЛИ, а затем стрессирование крыс оказало разное влияние его на активность 08Т (табл. 2). Так, при иммобилизационном стрессе обнаружено понижение активности фермента на 15 % по сравнению с активностью. фермента, определяемой при иммобилизации крыс. То есть, отмечен тот же эффект, что и при воздействии только лектина ЛИ. При холодовом и этаноловом- стрессах, не было замечено существенных изменений в активности фермента.по сравнению с показате-

лями у интактных животных. . ■

Таблица 2

' Влияние лектина ЛИ на активность глутатион-Б-трансферазы эритроцитов крови крыс в условиях различных видов стресса

Активность фермента

Характер воздействия мкмоль/мин-л %

М±т М±т

контроль 19,9 ±0,6 100,0 ±3,2

лектин ЛИ 15,0 ±0,4" 75,8 ±2,6'

ЛИ +иммобилизационный 16,9 ±0,7'А 92,6 ± 8,1 А

стресс 10 мин

ЛИ + холодовой стресс 18,4± 1,5Л 84,9 ±4,5"А

10 мин

ЛИ + этаноловый стресс 20,4 ± 0,9 Ло 102,7 ± 4,6 ДАо

(25 %) 10 мин

Примечание: * -Р < 0,05 относительно контрольной группы;

Д - Р < 0,05 относительно лектина;

А - Р < 0,05 относительно иммобилизационного стресса (10 мин);

о - Р < 0,05 относительно спирта 25 % (10 мин).

Таким образом, результаты эксперимента свидетельствовали о том, что лектин ЛИ при введении в организм крыс перед действием стрессовых факторов нормализует активность GST только в з'словиях холодового и этанолового стрессов. У крыс, подвергавшихся иммобилизационному стрессу, ферментативная активность под влиянием лектина ЛИ не изменялась.

Изучение специфичного взаимодействия лектина ЛИ P.polymyxa 1460 с глутатион-в-трансферазой при различных видах стресса in vitro

Для доказательства специфического взаимодействия лектина ЛИ с GST проводили эксперимент с лектином, блокированным специфичными к нему углеводами. Для этого к лектииу ЛИ добавляли: глюкуроновую кислоту (19 мМ), фруктозо-1,6-дифосфат (30 мМ), галактозамин (15 мМ) и глюкозамин (80 мМ), в соотношении 1:1 и инкубировали 30 минут при 37 °С. Затем 0,1 мл данного лектина соединяли с 2 мл крови крыс, инкубировали 60 минут при 37 °С и определяли активность фермента.

При исследовании крови крыс, которым предварительно вводили неблокированный специфичными углеводами ЛИ, обнаружили достоверное снижение активности GST с 19,1 до 16,1 мкмоль/мин-л (табл.3). У животных, которые получали

Таблица 3

Влияние лектина JIII P. polymyxa 1460 на активность глутатион-8-трансферазы эритроцитов крови крыс in vitro

Характер воздействия Активность фермента, мкмоль/мин-л

М±т

контроль 19,1 ±1,2

ли- . 16,1 ±0,4*

ли + специфические 21,5 ± 1,2Л

углеводы

специфические 20,3 ±2,0

углеводы

Примечание: * - Р < 0,05 относительно контрольной группы;

л - Р < 0,05 относительно лектина ЛИ. лектин ЛИ, заблокированный специфическими углеводами активность фермента была сопоставима с контрольными значениями и составляла 21,5 мкмоль/мин-л. Полученные данные позволяли говорить о специфическом взаимодействии ЛИ с поверхностными рецепторами GST. Исследуя действие самих углеводов (глюкуроновая кислота, фруктозо-1,6-дифосфат, галактозамин, глюкозамин) на активность фермента в крови животных, мы не обнаружили достоверных изменений в активности GST, которая составила 20,3 мкмоль/мин-л, что было сопоставимо с контрольным значением (табл. 3).

Таким образом, возможно, что лектин ЛИ P. polymyxa 1460, специфически связываясь с рецепторами этого фермента, способен регулировать активность глутатион-Б-трансферазы эритроцитов крови крыс, что и было показано в предыдущем разделе.

Влияние лектинов бацилл на активность аминотрансфераз в сыворотке крови при стрессе

Показано, что у животных, которые получали Л1 P.polymyxa 1460 происходило повышение аланинаминотрансферазной активности на 57 % по сравнению с контрольной группой. Уровень аспартатаминотрансферазной активности практически не отличался от исходных значений и составил 3,63 мкмоль/мин-л (в контроле 3,34 мкмоль/ мин-л). Снижение коэффициента Де Ритиса, которое наблюдали в данном случае, свидетёльствовало о нарушении соотношения ферментов ACT и АЛТ (табл. 4). В то время как лектин ЛИ снижал активности как ACT, .так и АЛТ в сыворотке крови крыс. Повышение коэффициента Де Ритиса в данном случае,

свидетельствовало о нормализации соотношения ACT и АЛТ (табл. 4). Снижение активности аминотрансфераз" под влиянием лектина ЛИ возможно происходит вследствие затрудненного выхода ферментов из клеток в кровяное русло. Причиной этого может являться либо упрочнение структуры мембран клеток под влиянием бактериального лектина ЛИ (за счет взаимодействия со специфичными к лектину углеводами мембраны), либо ингибирование синтеза данных внутриклеточных ферментов лектином бацилл.

Действие холодового стресса в течение 10 минут на организм крыс оказывало существенное влияние на активность ACT. Было замечено понижение активности ACT примерно на 40 % относительно интактных животных, и отсутствие каких-либо изменений в активности АЛТ. Уменьшение коэффициента Де Ритиса говорило о преобладании АЛТ в сыворотке крови крыс. Воздействие холодом на крыс в течение 60 минут практически не приводило к изменению активности ACT и АЛТ.

При изучении влияния этанола (25 %) на активность аминотрансфераз в крови крыс было показано, что и 10-минутное и 60-минутное воздействие вызывало увеличение активности АЛТ и незначительно изменяло активность ACT. Коэффициент Де Ритиса понижался с 1,93 до 0,88, что свидетельствовало о нарушении соотношения активности аминотрансфераз. Повышение АЛТ возможно, объясняется тем, что молекулы этилового спирта пропитывают липидный слой мембраны, разжижая ее, в результате чего ферментные белки из клетки поступают в кровь. Через 60 минут после'введения этанола наблюдали снижение активности АЛТ относительно группы крыс, получавших только этанол через 10 минут, но окончательный нормализации не происходило (табл. 4). Возможно, это связано с тем, что через час после введения этанола происходит его нейтрализация защитными силами организма, и активность данного фермента приближается к значениям нормы.

В условиях предварительного введения лектина ЛИ в организм крыс перед Холодовым стрессом, существенных изменений активности ACT и АЛТ по отношению к контрольным животным не наблюдали. Предварительное введение лектина ЛИ перед этаколовым стрессом способствовало нормализации активности как АЛТ, так и ACT. В данном случае бактериальный лектин способствовал нормализации этого показателя в сыворотке крови крыс, что также подтверждается значениями коэффициента Дс Ритиса (табл. 4).

Исходя из приведенных данных, можно говорить о том, что лектин бацилл ЛИ способен регулировать активность аминотрансфераз при некоторых стрессовых воздействиях (этаноловом стрессе).

Таблица 4

Влияние лектинов Ш и ЛИ PaenibaciHuspolymyxa на активность ферментов АЛТ и ACT при холодовом и этаноловом стрессах

Характер воздействия Активность ферментов Коэффициент Де Ритиса

АСТ АЛТ

М ± т М± т

мкмоль/мин-л % мкмоль/мин-л %

контроль 3,34 ±0,32 100,01 ±9,58 1,73 ± 0,17 100,01 ± 10,19 1,93 ±0,19 .

лектин Л1 3,63 ±0,31 108,63 ±8,34 2,72 ± 0,32* 157,03 ± 11,78* 1,33 ±0,11*

лектин ЛИ 2,12 ±0,28* 63,64 ± 13,24* 0,82 ± 0,12* 47,31 ± 14,83* 2,58 ± 0,28д

холодовой стресс 10 мин 1,97 ± 0,19* 58,91 ± 9,64* 1,56 ±0,08 84,23 ± 8,85 1,26 ±0,13*

60 мин 4,1 Г± 0,20й 122,99+ 5,99д 2,22 ± 0,41 128,27 ±23,46 1,85 ± 0,21л

этаноловый стресс (25%) 10 мин 3,66 ±0,19 103,54 ±5,22 4,72 ±0,31* 272,83 ± 7,52* 0,88 ±0,07*

60 мин 3,54 ±0,51 •95,88 ± 14,62 3,61 ± 0,33* д 208,71± 9,22*л 0,98 ± 0,08* д

лектин ЛП+холодовой стресс 10 мин 2,74 ±0,11 82,04 ± 3,39 1,62 ±0,16 93,5 ±9,13 1,81 ± 0,11л

лектин ЛП+зтаноловый стресс (25 %) 10 мин 3,26 ±0,19 98,03 ± 4.30 1,96 ±0,24 120,05 ±8,16 1,51 ± 0,12л •

Примечание: * - р < 0,05 относительно значений контрольной группы; Д - р < 0,05 относительно значений группы лектин ЛИ; • - р < 0,05 относительно значений группы этанол 25 % - 10 мин.

Влияние лектпнов бацилл на содержание мочевины и холестерина в сыворотке крови при различных видах стресса

При исследовании влияния лектинов бацилл на содержание мочевины былопоказано, что после введения лектина Л1 крысам концентрация мочевины практически не изменялась и составляла 3,7 ммоль/л; незначительное изменение было замечено в отношении ЛИ (3,4 ммоль/л).

В группе животных, которые были подвержены холодовому стрессу, в течение 10 минут, содержание мочевины не изменялось относительно контрольных животных, (табл. 5). При действии холодового стресса в течение 60 минут уровень мочевины снижался по сравнению с контрольными значениями на 61,7 % и составил 1,440 ммоль/л. Возможно, это объясняется снижением обменных, процессов, при длительном действии холода и, концентрация мочевины в крови уменьшается. Изучение влияния этанолового стресса показало, что при 10-минутном действии этанола (12,5 %) на организм крыс концентрация мочевины повышалась на 60 %, а при 60-минутном действии показатель азотистого обмена увеличивался на 138 % от исходного уровня (табл.5).

Таблица 5

Влияние холодового и этанолового стресса на содержание мочевины в сыворотке крови крыс

Характер Мочевина

воздействия ммоль/л %

М±т М±т

контроль 3,8 ±0,2 100,0 ±5,0

холодовой 10 мин 3,5 ±0,3 94,4 ±9,1

стресс 60 мин 1,4 ± 0,3*° 38,3 ± 20,1*°

12,5 % 10 мин 6,0 ± 0,6* 160,1 ± 10,3*

этаноловый 60 мин 8,9 ± 0,8*а 238,0 ±9,2*г

стресс 25 % 10 мин 5,3 ± 0,2* 140,0 ± 4,9*

60 мин 4,0 ± 0,4а . 107,7 ± 10,8а

Примечание: * - Р < 0,05 относительно значений контрольной группы;

° - Р < 0,05 относительно значений группы холодовой стресс 10 мин; " - Р < 0,05 относительно значений группы: этанол 12,5 % 10 мин; □ - Р < 0,05 относительно значений группы: этанол 12,5 % 60 мин. Концентрация мочевины при 10-минутном воздействии этанола в концентрации 25 % была выше контрольных значений на 40 %. При 60-минутной экспозиции концентрация данного параметра снижалась практически до исходного контрольного уровня и составила 4,0 ммоль/л. Возможно, такие изменения связаны с тем, что при

действии алкоголя на организм тормозится синтез белков, происходят изменения в структуре и функциях мембран рибосом - нарушается активность ферментов аминоацил-тРНК-синтетаз, участвующих- в реакциях активирования аминокислот— первичного звена синтеза белков (Мосейнюк и др., 1982). В результате этого в крови происходит увеличение концентрация аммиака и, соответственно, мочевины При введении лектина ЛИ Р. ро1утуха 1460. в организм крыс до их 10-минутного холодового стрессировашм наблюдали понижение уровня мочевины. Количество мочевины составило 59 % от исходного контрольного, уровня; 55,4 % относительно холодового стресса и 52,2 % относительно группы крыс, которым вводили только лектин ЛИ. То есть, лектин не способствовал нормализации мочевины в организме крыс. В то время как введение ЛИ в организм крыс при этаноловом стрессе вызывало понижение уровня мочевины практически до контрольных значений (табл. 6).

Таблица 6

Влияние лектина ЛИ на содержание мочевины в сыворотке крови крыс в условиях холодового и этанолового стресса

Характер воздействия Мочевина

ммоль/л' %

. М±ш М±т

контроль 3,8 ± 0,2 100,0 ± 5,0

лектин ЛИ 3,4 ± 0,3 91,2 ± 10,2

холодовой стресс 10 мин 3,5 ±0,3 94,4 ±9,1

этаноловый стресс (25 %) 10 мин 5,3 ± 0,2* 140,0 ± 4,9*

лектин ЛИ + холодовой стресс 10 мин 2,4± 0,1*°л 59,0 ± 11,2*ол

лектинЛП + этаноловый стресс (25 %) 10 мин 3,2 ± 0,3 □ 88,7 ± 10,5п

Примечание: * - Р < 0,05 относительно значений контрольной группы;

л - Р < 0,05 относительно значений группы лектин ЛИ; 0 - Р < 0,05 относительно значений группы холодовой стресс 10 мин; □ - Р < 0,05 относительно значений группы: этанол 25 % 10 мин. Введение лектинов бацилл в организм крыс не. однозначно сказывалось и на содержании холестерина в сыворотке крови крыс. Так, лектин Ш не вызывал никаких изменений в содержании холестерина, а введение лектина -ЛИ, приводило к

повышению данного показателя в крови на 38 % по сравнению с контрольной группой. Вполне возможно предположить, что лектин ЛИ, стимулирует дополнительный синтез и выход холестерина из депо в кровь, где он используется в качестве строительного материала для укрепления структуры мембран клеток. Пребывание крыс lia холоде в течение 10 минут приводило к увеличению содержания холестерина. При 60-минутном холодовом стрессе уровень холестерина не изменялся по сравнению с контрольными показателями. Очевидно, это связано с тем, что охлаждение неадаптированных к холоду животных ведет к мобилизации депонированных жиров, а мышечная ткань обеспечивается субстратом окисления для нормального функционирования нервной системы (Эмирбеков, 1985) (табл.7).

Таблица 7

Влияние холодового и этанолового стресса на содержание холестерина в сыворотке крови крыс

Характер воздействия Холестерин

Ммоль/л %

М±т М±т

контроль 1,0 ±0,2 100,0 ± 13,0

холодовой стресс 10 Mini 1,3 ±0, Г 133,0 ±6,0*

холодовой стресс 60 мин 1,2 ±0,1 121,4 ±7,7

этаноловый стресс 12,5% 10 мин 1,1 ±0,1 106,7 ±7,3

60 мин 2,4 ± 0,2*а 232,4 ± 10,5*а

25% 10 мин 1,2 ±0,2 121,3 ±20,6

60 мин 1,1 ± 0До 116,0± 12,1п

Примечание: * - Р < 0,05 относительно значений контрольной группы;

0 - Р < 0,05 относительно значений группы холодовой стресс 10 мин; а - Р < 0,05 относительно значений группы: этанол 12,5 % 10 мин; □ - Р < 0,05 относительно значений группы: этанол 12,5 % 60 мин. При изучении действия этанолового стресса на организм крыс было показано, что при однократном введении 12,5% этанола в течение первых 10 минут не происходило достоверных изменений уровня холестерина (1,1 ммоль/л по сравнению

с ■ контрольными значениями 1,0 ммоль/л). При действии этанола этой же концентрации в течение 60 минут отмечено увеличение концентрации холестерина, что составляло 132,4 % от исходного уровня (табл. 7). Это хорошо согласуется с литературными' данными, согласно которым организм, сопротивляясь алкогольной интоксикации, укрепляет мембрану нейрона с помощью увеличения содержания в ней холестерина (Вагош, Магисс!, 1994; Кипке, Н^шЫ, М1ига, 1997). Следовательно, повышение уровня холестерина в крови при этаноловом стрессе - это результат выхода его из депо для укрепления мембран клеток. При увеличений концентрации этилового спирта до 25 % не наблюдалось достоверных изменений уровня холестерина, как при 10-минутной экспозиции, так и при 60-минутном действии на организм крыс. Данный факт, возможно, объясняется тем, что с увеличением концентрации этанола до 25 % увеличивается и скорость использования холестерина, находящегося в крови, для укрепления структуры мембран клеток. При введении лектина ЛП в организм крыс перед их 10-минутным Холодовым стрессированием не отмечено достоверных отличий в содержании холестерина по сравнению с контрольной группой, но по сравнению с группой крыс, которой вводили лектйн ЛИ и без последующего стресса, содержание холестерина уменьшилось на 33 % (табл. 8).

Таблица 8

Влияние лектина ЛП на содержание холестерина в сыворотке крови крыс в условиях холодового и этанолового стресса

Характер воздействия Холестерин

ммоль/л %

М±ш М±т

контроль 1,0 ±0,1 100,0 ±13,0

лектин ЛП 1,4 ± 0,1* 138,0 ± 6,1*

холодовой стресс 10 мин 1,3 ±0,1' 121,4 ±7,7

этаноловый стресс (25%) 10 мин 1,2 ±0,2 121,3 ±20,6

лектин ЛИ + холодовой стресс 10 мин 1,0 ±0,Г 105,0 ± 7,9Л

лектин ЛП + этаноловый стресс (25 %) 10 мин ■ 0,9 ± 0,1л 88,6 ± 16,0Л

Примечание: * - Р < 0,05 относительно значений контрольной группы;

л - Р < 0,05 относительно значений группы лектин ЛП.

В группе животных, которым вводили лекггин, а затем этанол 25 % (10 мин), происходило снижение концентрации холестерина на 49,4 % по сравнению с группой, которым вводили только леетин.ЛИ.

Таким образом, из приведенных данных видно, что'лектин бацилл ЛИ способен регулировать азотистый илипидный обмены веществ, приводя такие показатели как мочевина и холестерин к норме, после воздействия некоторых стрессовых факторов на крыс, таких как холодовой иэтаноловый.

Влияние лектинов Л1 и ЛИ на содержание церулоплазмина в сыворотке крови жнвотных при различных видах стресса

Дальнейшие исследования были связаны с изучением воздействия лектинов бацилл Л1 и ЛИ на содержание церулоплазмина (ЦП), являющегося сывороточным гликолротеином, имеющим в своем составе углеводородные компоненты, представленные олигосахаридными цепями, содержащими глюкозамин, галактозу, • мальтозу, сиаловые кислоты (Емельянов и др., 2004). Было показано, что при интраперитонеальном введении Л1 содержание ЦП составляло 514,0 мг/л, что практически не отличалось от контрольных значений. При введении ЛИ в организм крыс отмечено достоверное понижение содержания ЦП до 469,8 мг/л (табл. 9).

Таблица 9

Влияние иммобилизационкого и холодового стресса на содержание

церулоплазмина в сыворотке крови крыс

Характер воздействия Содержание церулоплазмина

мг/л %

М±т М±т

контроль 595,9 ±50,2 100,0 + 8,4

иммобилизационный стресс 10 мин 405,4 ±33,1* 68,1 ± 5,5*

холодовой стресс 10 мин 416,2 + 33,0^ 69,8 ± 5,5*7

60 мин 516,2 + 26,5 86,8 ±4,4

Примечание: * -Р < 0,05 относительно контрольной группы;

Р < 0,05 относительно иммобилизационного стресса.

■При действии стрессорных факторов данный показатель изменялся. Так, в группе животных, которые были подвержены иммобилизапионному стрессу продолжительностью 10 минут, происходило понижение концентрации ЦП на 32 % (табл. 9). При холодовом стрессе было также обнаружено уменьшение концентрации

ЦП в сыворотке крови крыс. Причем, если при 60-минутном воздействии наблюдалась лишь тенденция к уменьшению ЦП, то при 10-минутном, стрессе показатель достоверно уменьшался (табл. 9). Уменьшение количества ЦП при холодовом стрессе может быть связано с его функционированием как антиоксиданта, поскольку он входит, как один из основных элементов, в адаптационно-защитную систему организма (Емельянов и др., 2004). При охлаждении животного организма активируются процессы теплопродукции за счет интенсификации обмена веществ. Вследствие этого усиливается перекисное окисление липидов (Прайрс, 1979). Можно предположить, что при этом активируются и системы антиоксидантной защиты. Как уже было отмечено выше, степень снижения содержания ЦП в сыворотке-крови при охлаждении зависит от длительности стресса. Вероятно, при более сильном воздействии синтез церулоплазмина отстает от его потребления.

При изучении этанолового стресса было показано, что через 10 мин после однократного введения в желудок крыс 1 мл 12,5 % этанола концентрация ЦП практически не изменилась. Более длительное воздействие спирта той же концентрации также не вызывало достоверных изменений по изучаемому показателю (табл.10).

Таблица 10

Изменение содержания церулоплазмина в сыворотке крови крыс под влиянием этанола

Характер воздействия Содержание церулоплазмина

мг/л %

М±т М± т

контроль 595,9+ 50,2 100,0 + 8,4

этаноловый стресс 12,5 % 10 мин 535,0 ±58,8 89,9+13,5

60 мин 536,4 ± 56,9 90,0 ± 10,6

этаноловый стресс 25% 10 мин 383,2 + 11,3* 64,3+2,9*

60 мин 294,0 + 26,7*^ 49,3 ± 9,0*'

Примечания: * - Р < 0,05 относительно контрольной группы;

Р < 0,05 относительно этанолового стресса (10 мин).

Увеличение концентрации этилового спирта до 25 % приводило к достоверным изменениям содержания ЦП. При 10-минутном воздействии было выявлено снижение концентрации ЦП в крови крыс в 1,5 раза по сравнению с контролем. Через 60 мин после введения этанола содержание ЦП понижалось еще значительнее - до

294,0 мг/л, что было вдвое меньше нормы (табл. 10). Данный факт можно объяснить тем, что, сопротивляясь алкогольной интоксикации, организм укрепляет мембраны клеток за счет ЦП, который способен ингибировать липидную пероксидазу и тем самым обеспечивает сохранность мембран клеток. Уменьшение содержания ЦП в сыворотке крови при нагрузке организма этанолом может быть связано с затратами этого белка на антиокислительные процессы.

При иммобилизации животных, которым предварительно вводили лектин ЛИ, происходило достоверное уменьшение содержания ЦП, которое составляло 474,7 мг/л. Предварительное введение лектина ЛИ, а затем действие холодового стресса не вызывало изменений в содержании ЦП в сыворотке крови крыс. В группе животных, которые получали предварительно лектин, а через сутки 1 мл 25 % этанола, также не происходило значительного изменения концентрации ЦП в сыворотке крови (табл. 11).

Таблица 11

Влияние лектина ЛИ на содержание церулоплазмина в сыворотке крови крыс при стрессе

Характер воздействия Содержание церулоплазмина

- мг/л %

М ± ш М±т

контроль 595,9 ±50,2 100,0 ±8,4

лектин ЛИ 469,8 + 58,7* 78,9+12,5*

лектин ЛИ + иммобилизационный стресс 10 мин . 474,7 ± 33,7* 66,8 ± 7,2

лектин ЛИ -ь холодовой стресс 10 мин 580,6 ±31,2 91,0 ± 12,4

лектин ЛИ + этаноловый стресс (25 %) 10 мин . - - - 520,1 ±43,7 83,3 ± 9,3

Примечание: *— Р < 0,05 относительно контрольной группы.

Таким образом, показано, что иммобилизационный, холодовой и этаяоловый стресс вызывают существенное снижение содержания сывороточного ЦП, а эти же воздействия на фоне предварительного введения лектина ЛИ не оказывают на организм столь сильного влияния. Это позволяет нам говорить о том, что лектин ЛИ способен регулировать содержание ЦП при действии холодового и этанолового стрессов.

Влияние лектина ЛИ на содержание молочнокислых бактерий кишечника крыс при различных видах стресса

Снижение количества молочнокислых бактерий или даже их полное исчезновение ведет к нарушению минерального обмена, процессов кишечного всасывания, белкового и жирового обмена, к формированию хронических расстройств пищеварения (Доронин, Шендеров, 2002). В отношении лектинов, применяемых в качестве возможных регуляторов молочнокислой микрофлоры, каких либо сведений в литературе мы не встретили. В связи с этим интересно было изучить влияние бактериальных лектинов, в частности лектина ЛИ Р. ро1утуха 1460, на содержание молочнокислых микроорганизмов в организме крыс при различных видах стресса.

В процессе исследований было показано,. что при введении лектина ЛИ в организм животных количество молочнокислых микроорганизмов уменьшалось и составляло 1,6Т05 КОЕ/г относительно контрольных значений (табл. 12).

Таблица 12

Влияние лектина Р.ро1утуха 1460 ЛИ и действие различных видов стресса на молочнокислую микрофлору толстого кишечника крыс

Характер воздействия Количество клеток ТО^КОЕ/г

М±ш

контроль 7,2 ± 0,4

ЛИ 1,6±0,1*

иммобилизационный стресс 10 мин 0,7± 0,1*

холодовой стресс 10 мин 1,4 ±0,1*

этаноловый стресс 10 мин 5,0 ± 0,2*

ЛИ + иммобилизационный стресс 10 мин 8,0 ± 0,1д

ЛИ + холодовой стресс 10 мин 14,2 ± 0,2*А

ЛИ + этаноловый стресс 10 мин 8,0 ± 0ДЛ

Примечание: * - Р< 0,05 относительно контрольной группы;

л - Р< 0,05 относительно лектина ЛИ.

Различные виды стресса (иммобилизационный, холодовой, этаноловый) влияют на количество молочнокислых бактерий - происходит их уменьшение в разной степени. Так, у крыс, подвергавшихся иммобилизационному стрессу, количество молочнокислых бактерий составило 0,7Т0' КОЕ/г. При воздействии холода на животных в течение 10 минут происходило уменьшение количества молочнокислых

бактерий до 1,4Т05 КОЕ/г относительно контрольных значений. Действие на организм этанолового спирта в концентрации 25 % также, сопровождалось уменьшением количества- молочнокислых микроорганизмов, их количество составляло 5,ОТО5 КОЕ/г. Такой эффект, возможно, объясняется тем, что стрессовое воздействие на организм, в зависимости от своей природы, вызывает целый каскад изменений в ферментативной системе организма, обменных процессах, защитных функций организма, что в свою очередь опосредованно влияет и на микрофлор)' кишечника животных.

Предварительное введение лектина бацилл ЛИ в организм крыс, а затем их стрессирование (иммобилизационный, этаноловый стресс) приводило к нормализации количества молочнокислых бактерий. Так, при действии иммобшшзационного и этанолового стресса лектин способствовал увеличению количество бактерий до 8,0-105 КОЕ/г, что было сопоставимо с контрольными значениями - 7,2-105 КОЕ/г. При действии холодового стресса на фоне предварительного введения лектина ЛИ, наблюдали достоверное увеличение количества молочнокислых микроорганизмов, превышающее контрольные значения в 2,1 раза (табл. 12).

На основании полученных результатов можно говорить о том, что лектин ЛИ P.polymyxa 1460 выступает в роли регулятора микрофлоры кишечника крыс в условиях негативного воздействия, в данном случае, иммобшшзационого н этанолового, приводя количество молочнокислых бактерий к норме, а в случае холодового стресса даже к превышению контрольных значений.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что предварительное введение лектина ЛИ P. polymyxa 1460 в организм крыс вызывает у них нормализацию активности глутатион-8-трансферазы при холодовом и эганоловом стрессе. Введение лектина Л1 не вызывает изменений в активности фермента.

2. Обнаружена способность лектина ЛИ специфически связываться, с рецепторами глутатион-8-трансферазы in vitro.

3. Установлено, что лектин ЛИ при действии in vivo изменяет активность аминотрансфераз в сыворотке крови крыс, нормализуя активности ACT при холодовом стрессе и АЛТ при этан оловом стрессе.

4. Показано, что лектин ЛИ оказывает влияние на азотистый обмен крыс, нормализуя содержание мочевины при этаноловом стрессе, но не оказывает влияния на уровень холестерина, нарушение которого связано с действием холодового стресса.. .

5. Обнаружено, что предварительное введение лектина ЛИ в организм -крыс нормализует содержание церулоплазмина, нарушение которого вызвано влиянием таких стрессовых факторов как холод и этанол.

■ 6. Впервые показано влияние лектина ЛП Р. polymyxa 1460 на молочнокислую микрофлору кишечника крыс; введение лектина перед иммобилизационным и этаноловым стрессированием животных способствует нормализации, а при холодовом - увеличению количества молочнокислых бактерий в кишечнике животных.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Неверова H.H., Кикалова Т.П., Сметанина М.Д., Карпунина Л.В. Изучение активности глутатион-Б-трансферазы в крови у крыс при стрессе на фоне введения лектина Paenibacilhis polymyxa 1460 // Вавиловские чтения - 2005: Материалы конференции посвященной 118-й годовщине со дня рождения академика Н.И. Вавилова, 23 - 25 ноября 2005. - Саратов, 2005. - С. 76-78.

2. Неверова H.H., Кикалова Т.П., Сметанина М.Д., Карпунина Л.В. Влияние лектина ЛИ на активность глутатион-8-трансферазы в крови крьгс при стрессе // Биология - наука 21 века: Тез. 10 Путинской школы-конференции молодых ученых, посвященной 50-летию Путинского научного центра, Пущино, 17-21 апреля 2006. -Пущино,"2006.'-С. 156.

3. Неверова H.H., Афонькина Е.А., Сметанина М.Д., Карпунина Л.В. Изменение активности церулоплазмина в крови крыс при стрессе на фоне введения лектина Paenibacillus polymyxa И Биология — наука 21 века: Тез. 10 Пущинской школы-конференции.молодых ученых, посвященной 50-летию Пущинского научного центра, Пущино, 17-21 апреля 2006. - Пущино, 2006. - С. 155.

4. Неверова H.H., Кикалова Т.П., Афонькина Е.А., Сметанина М.Д., Шорина Л.Н., Карпунина Л.В. Изменение активности глутатион-Б-трансферазы и церулоплазмина в крови крыс при стрессе на фоне введения лектина Paenibacillus polymyxa II Стратегия взаимодействия микроорганизмов и растений с окружающей средой: Тез. третьей межрегиональной конференции молодых ученых, Саратов, 10 -12 октября 2006.-С.ЗЗ.

.5. Неверова H.H., Кикалова Т.П., Сметанина М.Д., Карпунина Л.В. Влияние лектинов Paenibacillus polymyxa на активность глутатион-8-трансферазы эритроцитов крови самцов крыс в условиях этанолового стресса // Современные наукоемкие технологии. - 2007. —.№ 5. — С. 73.

6. Неверова H.H., Кикалова Т.П., Сметанина М.Д., Карпунина.Л.В. Влияние лектина Paenibacillus polymyxa 1460 на молочнокислую микрофлору кишечника крыс

под действием стрессовых факторов // Вавиловскле чтения - 2007: Материалы конференции, посвященной 120-й годовщине со дня рождения академика Н.И. Вавилова, 26 - 30 ноября 2007. - Саратов, 2007. - С. 329.'-

7. Неверова H.H., Кикалова Т.П., Сметанина М.Д.; Карпунина Л.В. Роль лектинов бацилл в регуляции активности глутатион-Б-трансферазы в условиях этанолового стресса// Материалы Всероссийской научно-практической конференции, 29 января - 2 февраля, 2007, секция «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и животноводства». - Саратов, 2007. - С. 58-59.

8. Неверова H.H., Кикалова Т.П., Сметанина М.Д., Карпунина Л.В. Изменение молочнокислой микрофлоры кишечника под действием лектина бацилл в условиях стресса // Вестник Саратовского госагроуниверситета им Н.И. Вавилова. - 2007. — № 5.-С.20-22.

9. Неверова H.H., Кикалова Т.П., Сметанина М.Д., Карпунина Л.В. Лектин Paenibacillus polymyxa как регулятор молочнокислой микрофлоры кишечника // Актуальные аспекты современной микробиологии: Тез. третьей международной школы - конференции, Москва. 22-23 ноября 2007. - Москва, 2007. - С. 84.

10. Кикалова Т.П., Неверова H.H., Сметанина М.Д., Карпунина Л.В. Роль лектина бацилл в регуляции активности глутатион-Б-трансферазы // Актуальные аспекты микробиологии: Тез. третьей международной школы - конференции, Москва, 22-23 ноября 2007. - Москва, 2007. - С.48 - 49.

11. Кикалова Т.П., Неверова H.H., Сметанина М.Д., Карпунина Л.В. Определение активности глутатион-8-трансферазы эритроцитов крови самцов крыс в условиях кратковременного и продолжительного холодового стресса на фоне введения лектинов бацилл // Современные наукоемкие технологии. - 2008. - № 1. - С. 93.

12. Неверова H.H., Кикалова Т.П., Сметанина М.Д., Карпунина Л.В. Влияние лектина Paenibacillus polymyxa на активность глутатион-Б-трансферазы в крови крыс при стрессе // Вестник Оренбургского государственного университета. - 2008. - № 80. -С. 117-120.

Считаем необходимым выразить глубокую благодарность доктору биологических наук, профессору Анищенко Татьяне Григорьевне и кандидату биологических наук, доценту Сметаниной Марии Даниловне за консультации и большую помощь в экспериментах с животными.

Подписано в печать 18.12.200S. Формат 60*84 Vi6. Бумага офсетная. Гарнитура Times.

Печ. л. 1,2. Тираж 100. Заказ 7S0/20Q3______

Типография ОООл «Орион» 410031 г.Саратов, ул. Московская 62 тел.: (S452) 23-60-18

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Неверова, Наталья Николаевна

Список условных сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

1. Обзор литературы.

1.1. Общие сведения о лектинах.

1.2. Роль лектинов в метаболизме живых организмов.

1.3. Стресс и его действие на организм.

2. Экспериментальная часть.

2.1. Объект, материалы и методы исследования.

2.1.1. Выделение, очистка лектинов JII и JET Paenibacillus polymyxa 1460.

2.1.2. Моделирование различных стрессовых воздействий.

2.1.3. Определение активности глутатион-8-трансферазы ш vivo.

2.1.4. Определение активности аминотрансфераз.

2.1.5. Определение содержания мочевины в сыворотке крови.

2.1.6. Определение содержания холестерина в сыворотке крови.

2.1.7. Определение содержания церулоплазмина в сыворотке крови.

2.1.8. Определение количества молочнокислых микроорганизмов в кишечнике животных.

2.1.9. Методы статистической обработки.

2.2. Результаты исследований и их обсуждение.

2.2.1. Изучение влияния бактериальных лектинов JII и ЛИ Р.polymyxa 1460 на активность глутатион-8-трансферазы при различных видах стресса.

2.2.2 Изучение специфичного взаимодействия лектина ЛИ Р.polymyxa с глутатион-8-трансферазой при различных видах стресса.

2.2.3. Влияние лектинов бацилл на активность аминотрансфераз в сыворотке крови при стрессе.

2.2.4. Исследование влияния лектинов бацилл Л1 и ЛИ на содержание мочевины и холестерина в сыворотке крови при различных видах стресса.

2.2.5. Влияние дектинов Л1 и ЛИ на содержание церулоплазмина в сыворотке крови животных при различных видах стресса.

2.2.6. Влияние лектина ЛИ на содержание молочнокислых микроорганизмов кишечника крыс при стрессах.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение роли лектинов Paenibacillus Polymyxa в регуляции метаболизма животных"

Лектины представляют собой углеводсвязывающие белки неиммунной природы. Специфически связываясь с углеводными рецепторами, они способны участвовать во многих внутриклеточных метаболических процессах растений, животных, микроорганизмов. Среди лектинов различного происхождения в этом плане менее изученными являются лектины бактерий. К настоящему времени имеется довольно широкий набор бактерий, синтезирующих лектины разнообразной углеводной специфичности (Карпунина, 1989, 2002; Никитина и др., 1989; Коваленко, 1990; Лахтин, 1992). Благодаря высокой биологической активности, они могут обладать иммуномодулирующими свойствами (Никитина и др., 2002; Тихомирова и др., 2003), изменять адгезивную функцию фагоцитирующих клеток, цитокиновую активность (Абросимова и др., 2002; Горельникова, 2006). Работ по влиянию лектинов непатогенных бактерий на метаболизм животного организма, судя по имеющимся публикациям, не так много. В последнее время установлено, что одним из наиболее эффективных способов повышения резистентности организма при патологиях, в том числе и к различным видам стрессов, является применение разнообразных биологически активных веществ, в том числе и лектинов бактерий (Мосейнюк, 1982; Коваленко, 1997; Мухачева, 2001). Изучение влияния лектинов бактериального происхождения на внутриклеточные процессы организма животных, как в норме, так и при некоторых нарушениях, являются интересной и актуальной задачей, поскольку это открывает новые возможности коррекции нарушенного обмена веществ.

Цель работы состояла в изучении роли лектинов JTI и JIII Paenibacillus polymyxa 1460 в регуляции некоторых метаболических процессов в организме экспериментальных животных в норме и при стрессовых воздействиях различной природы.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние лектинов JII и ЛТТ P.polymyxa 1460 на активность глутатион-8-трансферазы экспериментальных животных (крыс) in vivo в норме и в условиях холодового, иммобилиза-ционного и этанолового стрессов.

2. Определить специфичное взаимодействие лектина ЛИ Р.polymyxa 1460 с глутатион-Б-трансферазой эритроцитов крови /V vitro.

3. Определить влияние лектинов JTT и ЛИ на активность аланин-аминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (ACT) крыс в условиях холодового и этанолового стресса.

Л. Исследовать влияние лектинов Л1 и ЛИ на содержание мочевины и холестерина в организме крыс в норме, а также при хо-лодовом и этаноловом стрессах.

5. Изучить действие лектинов бацилл Л1 и ЛИ на содержание це-рулоплазмина в крови крыс при стрессах.

6. Исследовать влияние лектина бацилл ЛИ на микрофлору кишечника крыс в норме и в стрессовых условиях.

Научная новизна

Впервые выявлена регуляторная роль лектина ЛИ, выделенного с поверхности почвенных азотфиксирующих P.polymyxa 1460, в условиях патологических нарушений организма, вызванных Холодовым и этаноловым стрессами в отношении фермента глутатион-8-трансферазы и церулоплазми-на in vivo. Обнаружена способность лектина специфически связываться с рецепторами глутатион-Б-трансферазы in vitro.

Установлено, что лектин Л1Ь способен оказывать влияние на микрофлору кишечника, регулируя количество молочнокислых бактерий в условиях иммобилизационного, холодового и этанолового стрессов.

Практическая значимость

Способность лектина бацилл регулировать активность некоторых ферментов, а также коррекция важных показателей разнообразных обменных процессов при патологических состояниях организма на фоне различных видов стресса открывает перспективы их возможного использования в практике медицинских и биологических исследований. По материалам диссертационной работы опубликованы методические рекомендации «Изучение влияния лектина бацилл на активность глутатион-8-трансферазы эритроцитов крови крыс при стрессе» (в соавторстве с Т.П. Кикаловой, Л.В. Карпуниной и М.Д. Сметаниной, 2008) для практических занятий студентов старших курсов, а также для работы аспирантов и научных работников, специализирующихся в области микробиологии, биохимии, физиологии человека и животных, рекомендованные Учебно-методической комиссией и одобренные Ученым советом ветеринарного факультета Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова (протокол № 42 от 3 апреля 2008 г.). Результаты диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций и написании дипломных работ в Саратовском государственном университете им. Н.Г. Чернышевского при написании и в Саратовском государственном аграрном университете им. Н.И. Вавилова.

На защиту выносятся следующие положения: 1. Лектин ЛИ Р.ро1утуха 1460 способен регулировать активность глута-тион-8-трансферазы эритроцитов крови крыс в условиях стресса: понижая активность фермента при этаноловом и повышая при холодовом стрессе in vivo. Лектин JII не изменяет активность фермента в организме крыс при данных видах стресса.

2. Лектин ЛИ специфически взаимодействует с глутатион-8-трансферазой эритроцитов крови животных in vitro.

3. Введение лектина бацилл ЛИ в организм крыс влияет на аминотрансфераз-ную активность сыворотки крови, регулируя активность ACT при холодовом стрессе и активность АЛТ при этаноловом стрессе.

5. Лектин бацилл ЛИ способствует нормализации содержания церулоплазми-на in vivo при стрессовых воздействиях (холодового, этанолового).

6. Лектин бацилл ЛИ нормализует содержание молочнокислых бактерий в организме экспериментальных животных, подвергнутых иммобилизацион-ному, холодовому и этаноловому стрессу, приводя количество бактерий к норме, а в случае холодового стресса - к увеличению.

Работа выполнена на кафедре микробиологии и ветсанэкспертизы, переименованной впоследствии (20.09.2006) в кафедру микробиологии, вирусологии и иммунологии факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова» в рамках научно-исследовательской темы: «Изучение биологически активных веществ (лектинов) в регуляции метаболизма растений и животных» и при частичной поддержке грантом CRDF (CR-006-xl). Апробация работы

2007); региональных конференциях молодых ученых «Вавиловские чтения -2005, 2006, 2007» (Саратов, 2005; 2006; 2007); десятой Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология — наука XXI века» (Россия, Пущи-но, 2006); третьей межрегиональной конференции молодых ученых «Стратегия взаимодействия микроорганизмов и растений с окружающей средой» (Саратов, ИБФРМ РАН, 2006), III Международной школе-конференции «Актуальные аспекты микробиологии» (Москва, 2007).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 12 работ, из них 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, двух глав: обзора литературы и экспериментальной части, включающей материалы и методы исследования, результаты исследований и их обсуждение, а также заключения, выводов и списка используемых литературных источников. Работа изложена на 104 страницах, содержит 22 таблицы. Список использованных литературных источников включает 174 наименования, в том числе 71 зарубежное. ,

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Неверова, Наталья Николаевна

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что предварительное введение лектина Jill P.polymyxa 1460 крысам вызывает нормализацию активности глутатион-Б-трансферазы при холодовом и этаноловом стрессе в организме животных. Введение лектина JII не вызывает изменений в активности фермента.

2. Обнаружена способность лектина ЛИ специфически связываться с рецепторами глутатион-Б-трансферазы in vitro.

5. Обнаружено, что предварительное введение лектина ЛИ в организм крыс нормализует содержание церулоплазмина, нарушение которого вызвано влиянием таких стрессовых факторов как холод и этанол.

6. Впервые показано влияние лектина ЛИ P. polymyxa 1460 на молочнокислую микрофлору кишечника крыс; введение лектина перед иммобилиза-ционным и этаноловым стрессированием животных способствует нормализации, а при холодовом - увеличению количества молочнокислых бактерий в кишечнике животных.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Благодаря своим уникальным свойствам, лектины и их лиганды - углеводы занимают важное место в метаболической регуляции организма. Специфическое связывание лектинов с углеводными рецепторами клеточных поверхностей является одним из видов углевод-белкового узнавания, которое приводит к изменению сигналов в биологической системе. Способ передачи биологической информации посредством углевод-белкового узнавания является одним из основных на уровне клетки (Ве^о^еуа е1 а1., 2005).

В этой связи более перспективным является изучение лектинов микробного происхождения, выделенных из непатогенных бактерий (Никитина, 2001; Карпунина, 2002; 2005). Поэтому все большее внимание уделяется изучению биологической активности лектинов, особенно лектинов бактериального происхождения в силу их высокой активности и малой токсичности.

Несмотря на то, что в настоящее время выделено и охарактеризовано значительное количество лектинов бактериальных лектинов, их регулирующая функция при взаимоотношениях с макроорганизмами остается недостаточно изученной.

Первоначальным этапом наших исследований явилось изучение воздействия лектина ЛТ Р.ро1утуха 1460, специфичного к глюкуроновой кислоте и фруктозо-1-6-дифосфату, и Л11 Р.ро1утуха 1460, специфичного к О-галактозамину, глюкуроновой кислоте, фруктозо-1,6-дифосфату и Э-глюкозамину, на ферментативный статус белых крыс, как контрольных, так и подвергнутых негативным воздействиям (различные виды стрессовых воздействий). При длительном стрессировании организма происходит усиления действия гормонов, участвующих в формировании реакции стресса, и наблюдаются серьезные нарушения в обмене липидов, углеводов, электролитов (Эверли, 1981). Следствием этого является развитие патологического состояния, определяемое в итоге одним из главных факторов регуляции метаболизма - взаимоотношением антиоксидантных и прооксидантных механизмов, иными словами, способностью АОС защитить клетку от свободных радикалов и перекисей (Левицкий, Губский, 1994).

Исходя из этого интересным было изучить влияние негативных факторов и биологически активных веществ, таких как лектины Л1 и ЛИ, на активность фермента глутатион-8-трансферазы, который является универсальным дезинтоксикационным ферментом, осуществляющим метаболическую защиту организма от эндотоксикантов.

Нами было выявлено, отсутствие достоверных изменений при введении бактериального лектина Л1 в активности GST. Мы объясняем этот факт особенностью свойств данного белкового соединения, а именно его специфичностью только к двум углеводам глюкуроновой кислоте и фруктозе-1,6-дифосфату. В случае лектина ЛИ ферментативная активность GST достоверно понижалась относительно контрольных значений. Такой же эффект был замечен и при воздействии на организм животных холодового стресса. При действии же иммобилизационного и этанолового видов стресса отмечено повышение активности данного фермента также относительно контрольных значений. Основываясь на этих результатах можно говорить, что различные виды стресса по-разному влияют на активность фермента GST, при этом так же важна длительность воздействия стрессора.

Как показали экспериментальные данные, в условиях предварительного введения лектина в организм крыс и дальнейшего стрессирования животных (холодового и этанолового) происходила нормализация активности GST. Полученные данные подтверждают результаты других авторов, показавших выраженное мембранно-протекторное действие бактериального лектина (Королев, 1984; Ильин и др., 2000; Сметанина и др., 2001).

Для доказательства специфического действия лектина ЛИ проводили исследования in vitro, предварительно блокируя лектин специфичными к нему углеводами. Было показано, что лектин ЛИ способен регулировать активность глутатион-8-трансферазы эритроцитов крови крыс in vitro, специфически связываясь с рецепторами этого фермента.

При изучении активности ферментов в клинико-диагностических лабораториях наиболее часто исследуют аминотрансферазы, которые имеют принципиальное значение в процессе метаболизма животного и растительного организмов, являясь связующим звеном взаимопревращения белков и углеводов. В имеющейся литературе нам не удалось обнаружить достаточно сведений об изменении аминотрансферазной активности при холодовом и этаноловом стрессах. Имеются данные лишь о влиянии лектина ЛИ P.polymyxa 1460 на аминотрансферазную активность в крови крыс. Отмечено более эффективное снижение активности аминотрансфераз сыворотки крови у самцов при однократном введении и при пролонгированном - у самок (Мухачева и др., 2002). Исходя из этого, представляло значительный интерес изучить влияние холодового и этанолового стрессов на изменение активности аминотрансфераз в крови самцов белых крыс в условиях предварительного введения лектина ЛИ.

Показано, что при введении лектина Л1 уровень аспартатаминотранс-феразной активности в крови крыс не отличался от исходных значений. Возможно, это связано с тем, что на мембране митохондрий нет рецепторов, способных связаться с лектином Л1. Лектин ЛИ приводил к снижению активности аминотрансфераз. Мы предполагаем, что это является следствием затрудненного выхода АЛТ и ACT из клеток в кровяное русло. Причиной этого может являться упрочнение структуры мембран клеток под влиянием препарата лектина, либо ингибирование синтеза данных внутриклеточных ферментов лектином ЛИ. Воздействие стрессовых факторов, так или иначе, вызывали отклонения от нормы активности аминотрансфераз. В случае предварительного воздействия лектина и двух видов стресса (этанолового и холодового) показатели активности приходили к норме, что подтверждалось значениями коэффициента Де Ритиса. Учитывая результаты исследования можно предположить, что лектин обладает положительным эффектом и способен регулировать метаболические процессы, а именно активность некоторых ферментов.

В дальнейших экспериментах нами были изучено влияние бациллярных лектинов на показатели азотистого и липидного обменов — мочевину и холестерин. При рассмотрении проблем холодового стресса и алкогольной интоксикации важно знать, как изменяются параметры азотистого и липидного обменов при данных воздействиях. Конечные продукты азотистого обмена выводятся в виде мочевины во внешнюю среду, которая также участвует во внутриклеточных и межмолекулярных процессах в организме (Марри, Ген-нер,1993). Повышение уровня холестерина в крови считается одним из механизмов адаптации организма к неблагоприятным факторам.

В ходе исследований было обнаружено, что бактериальный лектин J1I не вызвал никаких изменений в содержании мочевины и холестерина, а в случае с лектином JIII P. polymyxa 1460 отмечено повышение содержания холестерина в крови, при этом уровень мочевины оставался в норме. Очевидно, этот лектин стимулировал дополнительный синтез и выход холестерина в кровь, где он использовался в качестве строительного материала для укрепления мембран клеток.

Оценивая предварительное введение бактериального лектина ЛИ P. polymyxa 1460 на показатели сыворотки крови замечено снижение содержания мочевины на фоне холодового стресса через 10 минут, уровень холестерина при этом не изменялся. Этот факт также служит основанием для ранее высказанного предположения о мембранно-протекторном действии лектина (Ильин и др., 2000).

В ходе дальнейших экспериментов мы определяли количественное содержание церулоплазмина, как одного из важнейших звеньев адаптационно-защитной системы организма. Нами было выявлено, что у контрольных животных содержание ЦП в сыворотке крови составляло 595,9 мг/л. При действии стрессорных факторов данный показатель изменялся в зависимости от вида и продолжительности воздействия. Так, при кратковременном холодо-вом стрессе содержание ЦП в сыворотке уменьшалось. При охлаждении животного организма активировались процессы теплопродукции за счет интенсификации обмена веществ. Можно предположить, что при этом активировались и системы антиоксидантной защиты. В случае, когда животных подвергали иммобилизационному и этаноловому стрессу, наблюдали сходные изменения, несмотря на разную природу и продолжительность воздействия.

При предварительном введении лектина с последующем действием трех видов стресса (холодового, иммобилизационного и этанолового) не было замечено достоверных изменений в результатах содержания ЦП относительно контрольных значений. Таким образом, результаты исследований свидетельствовали о том, что лектин бацилл ЛИ способен восстанавливать адоптационно-защитную систему животных, нарушенную в результате различных видов стресса, приводя содержание ЦП в сыворотке крови к норме.

В дальнейших экспериментах представляло интерес оценить действие лектина ЛИ Р. ро1утуха 1460 на количественное содержание молочнокислых микроорганизмов кишечника животных на фоне стрессовых воздействий различной природы. Результаты данных исследований показали, что введение лектина ЛН приводит к уменьшению количества молочнокислых микроорганизмов, как впрочем, и действие стрессовых факторов. Предварительное введения лектина ЛИ, а затем стрессирование (иммобилизационное и этано-ловое) увеличивает количество микроорганизмов до 8,0-105 КОЕ/г, приводя данные значения к уровню контроля, а в случае холодового стресса количество молочнокислых микроорганизмов даже превышает в два раза о контрольные значения.

На основании полученных результатов можно говорить о том, что бактериальный лектин ЛИ способствует нормализации микрофлоры кишечника крыс в условиях негативного воздействия на организм, а именно стрессовых факторов; в случае холодового стресса приводит к увеличению числа микроорганизмов.

Таким образом, представленные исследования свидетельствуют о том, что лектин бацилл ЛИ Р. ро1утуха 1460 оказывает влияние на метаболические процессы в организме животного, регулируя активность глутатион-Бтрансферазы, ACT, AJIT в условиях стрессовых воздействий и нормализуя их; регулирующее действие на азотистый обмен в организме крыс, тем самым мобилизует метаболизм, способствуя быстрой адаптации организма к различным неблагоприятным воздействиям. Возможно, такая регулирующая физиологическая функция лектина бацилл связана с его протекторным действием на мембраны клеток, после чего силы стресс-воздействия уже не достаточно для нарушения их целостности.

Полученные результаты вносят существенный вклад в понимание природы и свойств лектинов, расширяют наши представления о влиянии лекти-нов микробного происхождения на метаболизм животного организма и их регуляторную роль.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Неверова, Наталья Николаевна, Саратов

1. Абросимова О.В., Тихомирова Е.И., Карпунина Л.В. Изучение функциональной активности макрофагов на фоне действия лектина Paenibacillus polymyxa II Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. -2006.-№1.-С. 3-6.

2. Александровский Ю.А. Перекисное окисление липидов при эмоциональном напряжении и невротических расстройствах // Журнал невропатии и психиатрии им. Корсакова. 1988. - Т.88, № 11. - С. 95-101.

3. Аленькина С.А., Никитина В.Е. Влияние лектина Azospirillum brasilence Sp7 на активность гетерогенной ß-галактозидазы // Сборник статей 2-го Биохимического съезда, Москва, 19-23 мая, 1997. Москва, 1997. - С. 166.

4. Анищенко Т.Г. Половые аспекты проблемы стресса и адаптации // Успехи современной биологии. 1991. - Т. 111, Вып.З. - С. 460-475.

5. Антонюк В.А. Некоторые аспекты поиска лектинов в растениях // Ученые записки Тартуского университета. — Тарту, 1989. Т.1. - С. 53-60.

6. Ассонов Н.Р. Микробиология. М.: Колос, 2001. - 352с.

7. Афанасьев С.А., Алексеева Е.Д., Бордамова И.Б. Изменение элетрофизио-логических свойств микокардиоцитов при остром холодовом воздействии // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины — 1994. — № 11.— С. 480-483.

8. Бестужева C.B. Клиническая биохимия. Минск: Высшая школа, 1976 -228с.

9. Бойд В. Введение в иммунохимическую специфичность / Под ред. А.Е. Гурвича. — М.: Изд-во иностр. лит., 1963. — 184с.

10. Борисова H.H. Субмитохондриальное распределение лектиновой активности и ее изменение с возрастом растений: Дис.канд. биол. наук. -Москва, 1999.- 182с.

11. Броновицкая В.Г. Мочевина в живых организмах. Ростов-на-Дону: изд-во Ростовского университета, 1970. - 80с.

12. Васильев В.Б., Качурин А.М., Рокко Д.Ж. Спектральные исследования активного центра церулоплазмина при удалении и возвращении в него ионов меди // Биохимия. 1996. - Т. 61, № 2. - С. 296-307.

13. Васин A.B., Платонов H.A., Похвалихин Р.Г. Митохондриальный церу-лоплазмин млекопитающих // Молекулярная биология. — 2005. Т.39, № 1.-С. 48-60.

14. Войтенюк H.H. Некоторые свойства митогенного фактора, продуцируемого лимфоцитами человека под влиянием фитогемагглютинина // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1975. - № 9. — С. 7679.

15. Горельникова Е.А. Влияние лектина бацилл на цитокиновую активность фагоцитов: Дис.канд. биол. наук. Саратов, 2006. - 123с.

16. Горудко И.В., Тимошенко A.B. Действие сигнальных ингибиторов на выход лизоцима из нейтрофилов человека, активированных лектином из коры бузины черной // Биохимия. 2000. - Т.65, № 8. - С. 1107-1113.

17. Горюшкин И.И. Изучение влияния ампулированного мексидола, введенного в период абстинентного синдрома, на нарушенный длительным введением этанола и его отменой процесс обучения условному рефлексу // Журн. невропат, психиатр. — 1986. — № 6. С. 58-64.

18. Губский Ю.И., Левицкий Е.Л., Волков Г.Л. Жирнокислотный состав фракций хроматина печени крыс в условиях стимуляции перекисного окисления липидов // Укр. биохим. журн. — 1991. Т. 63, № 1. — С. 87-91.

19. Гуляева Н.В. Стадия ингибирования перекисного окисления липидов при стрессе // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1991.-Т. 106,№ 12.-С. 20-27.

20. Гурин В.Н., Семененя И.Н. Изменение липидного состава липопротеи-дов крови при остром эмоциональном стрессе // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1998. - № 5. — С. 57-59.

21. Гурин В.Н. Центральные механизмы терморегуляции. М.: Наука, 1980. -254 с.

22. Доронин А.Ф., Шендеров Б.А. Функциональное питание. — М.:ГРАНТЪ, 2002. 296с.

23. Држевицкая И.А. Основы физиологии обмена веществ и эндокринной системы. -М.: Высшая школа, 1977. -255с.

24. Дудник Е. Влияние иммобилизации на иммунологические показатели на фоне введения меланотропина // Вопр. мед. химии. 1997. - Т. 20, Вып. 2.-С. 75-78.

25. Душкин М.И., Зыков A.A., Пивоварова E.H. Влияние природных поли-фенольных соединений на окислительную модификацию липопротеинов низкой плотности // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1993. -Т. 116, № 10. -С. 393-395.

26. Езепчук Ю.В. Патогенность как функция биомолекул. — М.: Медицина, 1985.-240с.

27. Емельянов Д.Н., Скворцов В.В., Мязин Р.Г., Лешина O.A. Влияние внутреннего лазерного облучения крови на общую активность церулоплазина у больных хроническими дисфузными заболеваниями печени // Гепато-логия. 2004. - № 3. - С. 37-39.

28. Зайцев Т.Н. Математический анализ биологических данных М.: Наука, 1991.-268 с.

29. Капралов A.A., Петрова Г.В., Левицкий Е.Л. Локализация альфа-токоферола в составе клеточного ядра и его возможные функции // «Теоретические и прикладные аспекты молекулярной биологии»: Материалы конференции. 1997. -№ 816. - С. 197-214.

30. Карпунина Л.В., Никитина В.Е., Трихачева У.Ю. Лектины почвенных бактерий рода Bacillus // Регуляция микробного метаболизма: Тез. докл. Всесоюзной конф, Пущино, 12-14 июня 1989. Пущино, 1989. - С. 2627.

31. Карпунина Л.В., Вишневецкая O.A., Никитина В.Е., Мельникова У.Ю. Лектины Bacillus polymyxa: локализация, участие во взаимодействии с корнями пшеницы // Микробиология. 1993. - Т. 62, № 2. - С. 307-313.

32. Карпунина Л.В., Пономарева Е.Г., Соболева Е.Ф., Никитина В.Е. Изучение бактерицидных и фунгицидных свойств белков агглютининов (лек-тинов) почвенных азотфиксирующих бактерий // Биотехнология. 1997. -Т.З.-С. 10-13.

33. Карпунина Л.В. Роль агглютинирующих белков азотфиксирующих бацилл и ризобий в жизнедеятельности бактерий и при взаимодействии с растениями: Дис.док. биол. наук. Саратов, 2002. — 315с.

34. Карпунина Л.В., Мельникова У.Ю., Суслова Ю.В., Мухачева Е.С., Игнатов В.В. // Бактерицидные свойства лектинов азотфиксирующих бацилл // Микробиология. 2003. - Т. 72, № 3. - С. 343-347.

35. Карпунина Л.В. Роль агглютинирующих белков ризобий и азотфиксирующих бацилл при взаимодействии с растениями // В кн.: Молекулярные основы взаимодействия ассоциативных микроорганизмов с растениями / Под ред. В.В. Игнатова. М.: Наука, 2005. - С. 98-117.

36. Кендыш И.Н. Регуляция углеводного обмена. М.: Медицина, 1985. -272с.

37. Ковалева Г.Г. Холестеролэстеразы: свойства и возможное диагностическое значение // Вопросы медицинской химии. 1989. - № 8. - С. 4-11.

38. Коваленко Э.А. Внеклеточные лектин бактерий // Микробиологический журнал. 1990. -Т.52, № 3. - С.240-241.

39. Коваленко Э.А. Углеводная специфичность внеклеточных лектинов бактерий рода Bacillus II Микробиологический журнал. 1997. - Т. 39, № 5.- С.7-36.

40. Королев Н.П. Функции лектинов в клетках // Итоги науки и техники. Сер. общ. пробл. физ-хим. биологии. 1984. — № 1. - С. 347-348.

41. Королев Н.П., Выскребенцева Э.И. Функции эндогенных лектинов // Ученые записки Тартуского университета. 1989. — Т.1. - С. 19-50.

42. Косенко JI.B. Рангелова В.Н., Антипчук А.Ф. Влияние лектина гороха на рост Rhizobium leguminosarum // Микробиологический журнал. — 1993. — Т.55, № 1. С.65-70.

43. Костенко Т.С., Радионова В.Б., Скородумов Д.И. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии. — М.: Колос, 2001. 344с.

44. Кощеев B.C. Физиология и гигиена индивидуальной защиты человека от холода. М.: Медицина, 1981. - 287 с.

45. Климов А.Н. Атеросклероз и пути его профилактики. -М.: Знание, 1981. -85с.

46. Лахтин В.М. Очистка ферментов с помощью лектинов // Биотехнология.- 1985. — № 5. С.11-27.

47. Лахтин В.М. Лектины регуляторы метаболизма // Биотехнология. -1986.-№6.-С. 66-72.

48. Лахтин В.М. Энзимологические аспекты использования лектинов // Биотехнология. 1989. - Т.5 - С.676-687.

49. Лахтин В.М. Специфичность лектинов микроорганизмов // Прикладная биохимия и микробиология. 1992. - Т.28, № 4. — С. 483-501.

50. Левицкий Е.Л. Биохимические характеристики фракционированного хроматина печени крыс в условиях экспериментального Д-гиповитаминоза и при введении препаратов стероидов // Укр. биохим. журн. — 1993. — Т. 65, № 1.-С. 28-36.

51. Левицкий Е.Л., Губский Ю.И. Свободнорадикальные повреждения ядерного генетического аппарата клетки // Укр. биохим. журн. 1994. — Т. 66, №4.-С. 18-30.5 5. Ленинджер А. Биохимия. М.: Мир, 1976. - 387с.

52. Ленкова Р.И. Изменение содержания мочевины в крови и тканях при мышечной деятельности в зависимости от адаптированности организма // Физиологический журнал СССР им. Сеченева. 1973. - Т. 59, №7. - С. 1097-1107.

53. Линевич Л.И. Роль лектинов в формировании живых систем разных уровней организации // Ученые записи Тартуского университета. 1989. -Т. 2, № 870. -С.39-43.

54. Луцик М.Д., Панасюк E.H., Луцик А.Д. Лектины. Львов.: Высшая школа, 1981.-256с.

55. Луцик М.Д. Лектины: биологические свойства и применение в иммунологии // Биохимия человека и животных. 1985. - № 9. - С. 69-76.

56. Луцик А.Д., Ященко A.M., Детюк Е.С. Связывание лектинов структурами поднижночелюстной слюнной железы крыс в постнатальном онтогенезе при тиреоидной паталогии // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1987. - Т.92, № 2. - С.40-48.

57. Луцик А.Д., Детюк Е.С., Луцик М.Д. Лектины в гистохимии. Львов.: Высшая школа, 1989. - 144с.

58. Магалиф А. Ю. О клинико-биологических корреляциях при алкоголизме // Бюлл. экспер. биол. мед. — 1998. № 8. - С. 51-56.

59. Макаревич О.П., Трахтангерц М.И., Голиков П.П. Значение определения активности ферментов сыворотки крови в диагностике инфаркта миокарда и при оценке функционального состояния печени // Лаб. дело. — 1984. -№ 10.-С. 593-597.

60. Мальцева H.H. Активность азотфиксации и азотфиксирующие микроорганизмы ризосферы озимой ржи // Микробиологический журнал. — 1992. -Т. 54, №6.-С. 10-16.

61. МарриР., Геннер Д. Биохимия человека. -М.: Мир, 1993. — Т.1. -384с.

62. Марцонь Л. В., Коржуна Н. А. Медь как возможный фактор нарушения эмбрионального развития // Проблемы токсикологии. — 2002. — №4. — С. 22-25.

63. Мельников В.В. Обмен веществ у человека. М.: Мир, 1985. - 221с.

64. Мельникова У.Ю. Лектины Bacillus polymyxa: физико-химические и биологические свойства: Дис.канд. наук. Саратов, 2000. - 120с.

65. Меньшикова Е.Б., Зенков H.H., Шерлен С.Н. Биохимия окислительного стресса. М.: Наука, 1994. - 203с.

66. Методы исследований в профпатологии / Под ред. О.Г. Архиповой. М.: Медицина, 1988.-С.153-154.

67. Мецлер Д. Биохимия. М.: Мир, 1980. - Т.2. - 485с.

68. Мосейнюк А.Г., Пронько П.С., Рыбалко М.А. и др. Этанол и обмен веществ. — Минск: Наука и техника, 1982. С. 118 - 142.

69. Мухачева Е.С., Карпунина Л.В., Сметанина М.Д. Влияние лектина ЛИ

70. Paenibacilliis polymyxa 1460 на углеводный и белковый метаболизм самцов и самок белых крыс при стрессе // Вестник Саратовского госагро-университета. 2003. - № 4. - С. 55-58.

71. Мухачева Е.С. Влияние лектина Paenibacilliis polymyxa на некоторые метаболические процессы животных: Дис.канд. биол. наук. — Саратов, 2004. 139с.

72. Нарыжная Н.В., Маслов Л.Н., Лишманов Ю.Б. Процессы биосинтеза белка в сердечной мышце и кардиопротекторное действие лигандов т-опиатных рецепторов при иммобилизационном стрессе // Вопросы медицинской химии. 2000. - № 2. - С. 14-27.

73. Никонова М.Ф., Кондратенко И.В., Кузьмина Е.Г., Ярилин A.A., Хаха-лин Л.Н., Шахтарина C.B. Фенотипическая характеристика лимфоцитов крови с помощью определения рецепторов к лектинам // Иммунология" -1991.-№5.-С. 27-30.

74. Никитин Д.Н., Васильева Л.В., Лохмачева P.A. Новые и редкие формы почвенных микроорганизмов. М.: Наука, 1996. — С. 38-40.

75. Никитина В.Е., Итальянская Ю.В., Карпунина Л.В. Изучение роли ге-магглютининов (лектинов) почвенных азотфиксирующих бактерий // Ученые записки Тартусского университета, 1989. Т. 2. - С. 25-31.

76. Никитина В.Е., Богомолова Н.В., Бугаева И.О., Пономарева Е.Г., Тихомирова Е.И. Лектины в иммунологии: науч.-информ. пособие. -Саратов, 2001.-28с.

77. Панин Л.Е. Биохимические механизмы стресса. — Новосибирск : Наука, 1983.-205 с.

78. Полянская О.В. Влияние алкоголя на нервную ткань // Вопр. мед. химии. 1998.-№7.-С. 27-29.

79. Пономарева Е.Г., Никитина В.Е., Емельянова., Захарова Н.Б. // Иммуно-модулирующие свойства лектина Azospirillum brasîlense Sp 7 // Микробиология. 1997. -T. 1, № 4 - С 83-86.

80. Прайрс У. Свободные радикалы в биологии. -М.: Мир, 1979. 272с.

81. Пучкова JT. В., Денежкина В. В, Захарова Е. Т., Гайцхоки В. С. Биосинтез церулоплазмина в различных органах крысы // Биохимия. 1990. -Т.55, Вып. 11.-С.2095-2102.

82. Сахаров Н.Ю., Лахтин В.М. Применение иммобилизованных лектинов для изучения щелочной фосфатазы тюленя // Изучение и применение лектинов // Ученые записки Тартуского университета. — Тарту, 1989. -Вып. 4, Т.2.-С. 134-139.

83. Сметанина М.Д., Самохвалов В.А., Лямзаев К.Г. Влияние растительного и бактериального лектинов на структурно-функциональные свойства мембран // Известия Саратовского государственного университета. -2001.-С. 27-31.

84. Соболева Е.Ф., Карпунина Л.В. Участие агглютининов Rhizobium leguuminosarum 252 в адгезивном процессе // Проблемы общей биологии и прикладной экологии: Сб. тез. молодых ученых / Г.В. Шляхтин. — Изд-во СГУ, 1997. Вып. 3. - С. 13-15.

85. Соболева Е.Ф. Агглютинины Rhizobium leguuminosarum 252 и их роль во взаимодействии с растениями: Дис.канд. биол. наук. Саратов, 1999. -120с.

86. Соколовский В.В. Антиоксиданты и адаптация. Л.: ЛСГМИ, 1984.62с.

87. Соколовский B.B. Свободнорадикальное окисление и его роль в патогенезе, воспалении, ишемии и стрессе Н Вопр. мед химии. 1998. - Т. 6, № 34 - С. 2-11.

88. Степанова J1.B., Никитина В.Е., Бойко A.C. Выделение и характеристика лектина с поверхности мицелия Grifóla frondosa (Fr) S.F.Gray // Микробиология. 2007. - T.76, № 4. - С. 488-493.

89. Столбов A.JI. Коррелятивные связи биохимических показателей крови // Физиология человека. 1994. - Т. 20, № 1. - С. 102-108.

90. Тихомирова Е.И., Заднова С.П., Волох O.A., Карпунина JI.B., Щербаков A.A. Лектин вакцинного штамма Yersinia pestis EV и изучение его иммунобиологических свойств // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2003. - № 1. - С. 51-55.

91. Франц X. Лектины: свойства, функции и возможности применения // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1996. - № 3. -С. 3-6.

92. Чардымова Л.Р. Коррекция анемии у детей с хирургической патологией: Автор. Дис. кандидата наук. — Н. Новгород, 2005. 24с.

93. Шамрай Е.Ф., Пащенко А.Е. Клиническая биохимия. — М.: Медицина, 1970.-335с.

94. Шендеров Б.А., Манвелова М.А. Функциональное питание и пробиоти-ки: микробиологические аспекты. — М.:Агар, 2002. — 192с.

95. Эверли Дж.С., Резенфельд Р. Стресс: природа и лечение. М.: Наука, 1981,- 185с.

96. Эмирбеков Э.З., Львова С.П. Механизмы биохимических изменений при низких температурах тела. Ростов:— Изд-во Ростовского университета, 1985.-80с.

97. Barondes S.H. Soluble lectins: a new class of extracellular proteins // Science. 1984. - V.223, N.4642. - P. 1259-1264.

98. Baroni G.S., Marucci L.B., Benedetti A. Chronic ethanol feeding increases apoptosis and cell proliferation in rat liver // J. Hepatol. 1994. - V. 20. - P. 508-513.

99. Baroni G.S., Marucci L.B., Benedetti A. Oxidative stress mediated apoptosis of hepatocytes exposed to acute etanol intoxication // Hepatology. -1997.-V.25.-P. 368-378.

100. Belogorteva N., Molchanova V., Glasunov V., Evtushenko E., Luk'yanov P. N-Acetyl-glucosamine-specific lectin from the ascidian Didemnum ternata-num // Biochem. Biophys. Acta. 1998. - V.1380. - P. 249-256.

101. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology / Ed.C.Garrity. Springer N.Y., 2001. - V.I.- 776p.

102. Bhattacharya L., Das P.K., Sen A. // Arch. Biochem. Biophys. 1981. -V.211, N 1. - P.459-470.

103. Booth B.A., Sciortino C.V., Finkelstein R.A. Adhesins of Vibrio cholerae II Microbial lectins and agglutinins / Ed. D. Miulman. John Wiley and sons. New York, 1986.-P. 169-182.

104. Bradford M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding // Anal. Biochem. 1976. -V.72. - P. 248-254.

105. Brunins G., Bolin J. Interaction between Yersinia pseudotuberculosis and the Hela cell surface II J.Med.Microbiol. 1983. - N. 16. - P. 245-261.

106. Chen S. Relationship hetween phosphatidylcholine biosynthesis and cellutar commitment in concanavalin A stimulated lymphocytes. - Exper. Cell. -1979.-V. 121, N2.-P. 283-289.

107. Collier W. de Miranda. Bacterien hemagglutination // J. Microbiol. Serol. -1955.-V.21.-P. 133-140.

108. Cuatrecasas P. Interaction of west germagglutinin and concanavalin A with isolated fat cells // Biochemistry. 1973. - V.12, N 7. - P. 1312-1323.

109. Cunningham B. Lectins: a chemical approach to the surface // Pure and Appl. Chem. — 1975. — V.41, N 12. — P. 31-46.

110. Czech M., Lynn W. Stimulation of glucose metabolism by lectins in insolated with fat cells // Biochem. Biophys. Acta. 1987. - V. 297, N 2. - P. 368-377.

111. De Ley J. DNA Base Composition, Flagellation and Taxonomy of the Genus Rhizobium II J. Gen Microbiol. 1965. - V.41. - P. 85-91.

112. Denson A.M., Doyle R.J. Stabilization of the glucan-binding lectin Streptococcus sorbinus by specific ligand // Arch. Oral Biol. -1998. V. 43, N 1. -P. 33-38.

113. Dobereiner J. Phisiological aspects of N2 fixation by grass-bacteria assotia-tions // In Resent developments in Nitrogen Fixanion. London: Academic Press, 1977.-P. 513-522.

114. Eshdat Y., Speth V., Jann K. Participation of pili and cell wall adhesion in the yeast agglutination activity of E.coli II Infect. Immun. 1981. - V. 34. - P. 980-986.

115. Eshdat Y., Sharon N. The molecular basis of bacteriae adherence to epithelial cells // Lectins: Biol., Biochem., Clin. Biochem. 1983. - V. 3. - P. 667-675.

116. Fasman G., Foster R. The conformational transition of chymotrypsinogen to chymotrypsin // J. Medic. Biol. 1996. - V. 19, N 1. - P. 240.

117. Gaston S.M., Marchase R.B., Jakol E.R. Brein ligatin: a membrance lectin that binds acetylcholinesterase // J. Cell. Biochem. 1982. - V. 18. - P. 447459.

118. Gilboa-Garber N. Pseudomonas aeruginosa lectins // Methods in enzymol-ogy. 1982. - V. 83. - P. 378-385.

119. Gilboa-Garber N., Garber N. Microbial lectin cofunction with lyfic activities as a model for a general leases lectin role // FEMS Microbial. Rev. — 1989. -V. 63.-P. 211-222.

120. Gilboa-Garber N. Possible application of Pseudomonas aeruginosa lectins //th

121. Abstracts 8 Intern. Congres of bacteriology and applied Microbiology division, August 18-23 1996, Israel. -Ierusalim, Israel, 1996. P. 92.

122. Goswami S., Basu J., Kundu M., Chakrabarti P. Lectinmediated adherence of Mycobacteria to Macrophages // Abstracts 17 Intern. Lectin Meeting, Wurzburg, Germany, September 24-27, 1997. P. 7.

123. Griffiths S.L., Finkelstein R.A., Crichley D.P. Characterisation of the receptor for Cholerae toxin in rabbit intestinal brush Bordere // Biochem. J. 1986. -V. 238.-P. 313-322.

124. Gupta A., Sandhu R. Effect of garlic agglutinin and garlic extracts on the Rat // J.II Nutritional Research. 1998. - V. 18, N 2. - P. 841-850.

125. Guyot G. Uber die bacterille Haemagglutinayion // Azbl. Bakt., 1. Abt Orig. -1908.-V. 47.-P. 640-653.

126. Haataja S., Tikhanen K., Finne J. Molecular basis of streptococcus suis adhesion to host cells // Int. Union of Microbiological Soc. Congress" 96, 18-23 Aug. 1996. Jerusalem, Israel.- P. 91.

127. Habig W.H., Jacoby W.B. Assays for differentiation of glutathione-S-transferases // methods in Enzymol. 1981. - V. 77. - P. 398-402.

128. Hammel G., Scherada H.A. model of ribonuclease based on chemical evidence//Biochem. 1996.-V. 15, N 11.-P. 3690-3691.

129. Hanne L.F., Finkelstein R.A. Characterization and distribution of the haemag-glutins produced by Vibrio cholerae II Infect. Immun. 1982. — V. 36. - P. 209-214.

130. Holey M., Chaplin D., Wedner H. Eearly activation events in lectin stimulation leman lymphocytes: evidence that WGA and metogenic lectins cause similar early changes in lymphocyte metabolism // J. Immunal. 1980. - V. 125, N4.-P. 1544-1550.

131. Holian A., Deutsch C., Holian S. The reactions of lymphocytes on the PHA: in trace leular volume and intracellular K+ // J. Cell. Physiol. 1979. - V. 98, N l.-P. 137-144.

132. Kaddouri S., Rogues C., Michel G. Characterization of hemagglutinin(s) from fusobacterium nucleatum human periodontal strains // 17th Intmational Lectin Meeting, September 24-27. Wiirsburg, Germany, Supplementary Abstracts. -1997.-P. 5.

133. Kanoe M., Nagoi S., Toda M. Adherence of Fusobacterium necrophorum to Vero cell 11 Zbl. Bact. Hyg. — 1985. —V. A260. P. 100-107.

134. Kensh G.T., Donohue-Rolf A., Jacewicz M. Sugar binding bacterial toxins // Microbial lectins and agglutinins / Ed.: Mirelman D, New York: Wiley, 1986. -P. 271-296.

135. Kocourek J., Horejsi V. Lectins: Biology, Biohememistry, and Clinical Biochemistry // Ed. T.C Bog-Hansen. Berlin, New York: Walter de Gruyter, 1983.-V.3.-P. 3-6.

136. Kraus R., Ludwig S. Uber Bakterienhaemagglutinine und Antihaemaggluti-nine // Wiener Klinische Wochenschrift. 1902. - V. 15. - P. 120.

137. Kurose I., Higushi E., Miura K. Chronic ethanol feeding increases apoptosis and cell proliferation in rat liver // J. Hepatol. 1997. - V. 20. - P. 508-513.

138. Lasarus L.L., Trimble L.A., Mjldawerr L.L. The metabolism effects of poke-weed mitogen in mice // Metabolism-Clinical and Experimental. 1998. - Iss. l.-P. 75-82.

139. Lorens-Kubis I., Morawieska B. Lectins Biologi. Berlin, New York, 1981. — 81p.

140. Meflash K., Harb J., Dufios Y., Bernard S. 5'-nucleotidase from bovine caudate nuclens synaptic plasma a membranes specificity for substrate and cotions: stady of the carbohydrate moiety by glacosidases // J. Neurochemistry. 1984.-N42.-P. 1107-1115.

141. Mibu I., Tochigi F. AHCC on Immobilization Stress in the Rat: Beneficial Effects of Active Hexose Correlated Compound // Dokkyo Journal of Medical Sciences.-2001.-V. 4.-P. 559-565.

142. Mirelman d., Altman G., Eshdat Y. Screening of bacteria isolates for man-nose-specific lectin activity by agglutination of yeast's // J. Clin. Microbiol. 1980.-V. 11.-P. 328-331.

143. Mookerjec B., Ferber E., Ernst M. Chemiluminescence and immune cell activation: general featurls of the tymocyte chemluminescent responses to plant lectins // Immunal. Lomm. 1980. V. 9, № 7. - P. 653-676.

144. Moore A.W., Becking Z.H. Nitrogen fixation by Bacillus strains isolated from Nigerian soils // Nature (London). 1963. V. 198. - P. 915-916.

145. Nakao Y., Kozutsumi Y., Kawasaki T., Yamashina I., Van Halbeek H., Vliegenthart L.F.G. Olygosaccharides on cathepsin D from Porcine spleen // Arch. Biochem. Biophys. 1984. - V. 229. - P. 43-54.

146. Ogaard A., Biork K., Bukholm G., Berdal B. Correlation betuen adhesion of Pseudomonas aeruginosa bacteria to cell surface and the presence of somefactors related to virulence // Acta path. Microbiol., Immunol. Scand. 1985, Sect. B.-P. 1203-1117.

147. Olsnes S., Pihl A. Abrin and rizin two toxic lectins // Trends Bioch. Sci. -1978.-V. 3,N l.-P. 7-10.

148. Prado J., Zambtlli S. The hyperinsulinemia produced by Con A in rats is opioid dependent and hormonally regulated // Brazilian Journal of Medical and Biological Research. - 1998.-V. 31, N25.-P. 697-703.

149. Pusztai A., Grant G. Effect of an growth, body composition and insulin levels in yong rats // J. of Nutritional Biochem. 1998. - V. 9, N 21. - P. 33-36.

150. Pusztai A., Grant G., Gelenscer E. Effect of an growth, body composition small intestinal structure, and insulin levels in yong rats // J. of Nutritional Biochem. 1998,-V. 5, Iss. l.-P. 31-36.

151. RAE T.D., Schmidt P.J., Pufahl R.A., Culotta V. Undetectable intracellular free copper the requirement of a copper chaperone for superoxide dismutase // Science. V. 3, N 12. - P. 805-808.

152. Ravin H.A. An improved colorimetric enzymatic assay of ceruloplazmin // J. Lab. Clin. Med. 1961,-V. 7, N2.-P. 161-168.

153. Rennie R.L., Larson R.I. Nitrogen fixation associated with disomic chromo-somic substitution lines of spring wheat // Can. J. Bot. 1979. - V. 57, N 21. -P. 2771-2775.

154. Riordan J., Slavic M. Chemical and physical properties of an hepatic, membrane protein that specifically binds asialoglycoproteins // J. Biol. Chem. -1997. V. 252, N 5. - P. 1296-1302.

155. Sastry V., Gollapudi., Kern H. A novel larly effect of concanavalin A on thymocytes // Biochem. Biophis. Res. Comm. 1979. - V. 88, N 3. - P. 804-809.

156. Sharabi J., Gilboa-Garber N. Methogenis stymylation of human lymphocytes by Pseudomonas aeruginosa galactospecific lectins // FEMS Microbiol. Lett. 1979.-V. 5, N 1. -P. 73-77.

157. Stefanovic Y., Mandel P. Effects of lectins on enzymatic properties // Bio-chemictry. 1979. - V. 18, N 22. - P. 357-361.

158. Suggi S., Horiguchi Y., Uemura T. Haemagglutinating activity of trypsinized Clostridium perfringens enterotoxin // FEMS Microbiol. Lett. 1986. - V. 34, N2.-P. 205-209.

159. Suggi S. Haemagglutinating activity of Vibrio cholerae enterotoxin // FEMS Microbiol. Lett. 1987. - V. 48, N 1. - P. 73-77.

160. Timothy L., McGarr G.A., Abou-Zeid C. Attachment of mycobacteria to fi-bronectincoated surfaces // Gen. Microbiol. 1988. - V. 134, N 5. - P. 13071313.

161. Yenng R., Laux D. Lectin dependent cell mediated cytotoxcity mobility by locally bound concanavalin A // Proc. Natl. Acad. Sei: U.S. - 1985. - V. 72. -P. 1579-1583.

162. Считаем необходимым выразить глубокую благодарность доктору биологических наук, профессору Анищенко Татьяне Григорьевне и кандидату биологических наук, доценту Сметаниной Марии Даниловне за консультации и большую помощь в экспериментах с животными.

Информация о работе

Неверова, Наталья Николаевна
кандидата биологических наук
Саратов, 2008
ВАК 03.00.07

Диссертация

Изучение роли лектинов Paenibacillus Polymyxa в регуляции метаболизма животных - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Изучение роли лектинов Paenibacillus Polymyxa в регуляции метаболизма животных ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Изучение роли лектинов Paenibacillus Polymyxa в регуляции метаболизма животных"

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Неверова, Наталья Николаевна

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение роли лектинов Paenibacillus Polymyxa в регуляции метаболизма животных"

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Неверова, Наталья Николаевна

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Неверова, Наталья Николаевна, Саратов

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изучение роли лектинов Paenibacillus Polymyxa в регуляции метаболизма животных
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология