Сравнительное изучение живых вакцин из различных штаммов B.abortus и влияния иммуномодуляторов на их эффективность

Салмакова, Александра Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Сравнительное изучение живых вакцин из различных штаммов B.abortus и влияния иммуномодуляторов на их эффективность
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Сравнительное изучение живых вакцин из различных штаммов B.abortus и влияния иммуномодуляторов на их эффективность"

На правах рукописи

САЛМАКОВА АЛЕКСАНДРА ВЛАДИМИРОВНА

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЖИВЫХ ВАКЦИН ИЗ РАЗЛИЧНЫХ ШТАММОВ влвоктив И ВЛИЯНИЯ ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ НА ИХ ЭФФЕКТИВНОСТЬ

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология.

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

- 4 МЛР 7010

Казань-2010

003493642

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (г. Казань).

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Фомин Алексей Максимович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Хисматуллина Н.А., доктор ветеринарных наук, профессор Алимов А.М.

Ведущее учреждение: Всероссийский научно-исследовательский институт

бруцеллеза и туберкулеза животных (ВНИИБТЖ, г. Омск)

Защита состоится « » сЛЛ/^Л / О- 2010 года в _ часов на заседании

диссертационного совета Д-220.012.01 при ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», 420075, г. Казань, Научный городок-2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ». Электронный вариант автореферата и текст объявления о защите размещен на сайте организации: www.vnivi.ru.

Автореферат разослан « _» Оэ 2010 года.

Учёный секретарь диссертационного совета,

старший научный сотрудник сгэ^й^угггг^/^— Степанов

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальность темы. Благодаря научно-обоснованной системе специальных мероприятий, бруцеллёз животных в настоящее время ликвидирован в большинстве регионов Российской Федерации. Однако отдельные регионы, районы, хозяйства остаются неблагополучными по бруцеллезу крупного и мелкого рогатого скота по настоящее время, а также появляются новые неблагополучные пункты.

Опыт борьбы с бруцеллезом крупного и мелкого рогатого скота в СССР и РФ доказывает большую роль в оздоровлении хозяйств от этой инфекции специфической профилактики с помощью вакцин из штаммов В.abortus 19 и B.melitensis Rev 1 (И.А.Косилов и др., 1999). Однако привитые ими животные длительное время сохраняют поствакцинальные показатели серологических реакций, что создает большие трудности при диагностике бруцеллеза и оздоровлении стад от этой инфекции. Поэтому исследователи пошли по пути изыскания таких вакцинных штаммов бруцелл, которые бы обладали слабо- или инагглютиногенными свойствами. Так, в РФ по настоящее время в качестве официального препарата против бруцеллеза крупного рогатого скота в основном применяется живая вакцина из слабоагглютиногенного штамма В.abortus 82 (K.M. Салмаков и др., 2008).

В США, наряду с вакциной из штамма 19, для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота и диких животных (бизоны, олени и др.) используют живую вакцину из штамма В.abortus RB51 (S. Olsen and Ph. Marner, 2006).

Совершенствование противобруцеллезных вакцин продолжается и в настоящее время. Так, в ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань) был отобран вариант штамма 82, чувствительный к пенициллину, - штамм В.abortus 82-ПЧ (K.M. Салмаков, Г.А. Белозерова, 1994 г.); путём воздействия специфического бактериофага на культуру исходного вирулентного штамма получен штамм B.abortus R-1096 (Г.М. Сафина и др., 2004). Живые вакцины из штаммов 82-ПЧ и R-1096 испытываются в производственных условиях на крупном рогатом скоте (А.В.Иванов и др., 2006).

За последние годы получен ряд штаммов В.abortus, устойчивых к различным антибиотикам - стрептомицину, рифампицину, тетрациклину и др. Эти штаммы находятся в RS-форме, слабоагглютиногенны и обладают иммуногенными свойствами (А.М.Фомин и др., 2006).

Анализ исследований показывает, что культуры, находящиеся в S- и SR-формах, обладают более выраженными иммуногенными свойствами, чем культуры в RS- и R-формах. Однако штаммы бруцелл в RS- и R-формах и резистентные к различным антибиотикам, обладая слабо- и инагглютиногенными свойствами, также имеют большое практическое значение.

Одним из способов повышения эффективности вакцин является использование иммуномодуляторов - веществ, повышающих специфические иммунные ответы на вводимые антигены. В последние годы многие исследователи уделяют большое внимание разработке новых иммуномодуляторов, способных усиливать как гуморальный, так и клеточный иммунитет с минимальными побочными эффектами или их отсутствием. Также оценивается возможность использования цитокинов в качестве адъювантов вакцин (А.А. Денисов и др., 2008).

1.2 Цель и задачи исследований. Цель исследований - изучить в сравнительном аспекте иммунобиологические свойства вакцин из различных штаммов В.abortus и влияние на эти свойства иммуномодуляторов, отобрать из них наиболее эффективные для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота и других видов животных.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Определить иммуногенную активность культур различных штаммов В.abortus на СПФ- и конвенциональных морских свинках;

2. Изучить морфологические и культурально-биохимические свойства ряда штаммов В.abortus до и после их пассажирования через организм морских свинок;

3. Установить влияние пассажей и иммуномодуляторов на повышение иммунологической эффективности штаммов В. abortus, особенно находящихся в RS- и R- формах.

4. Изыскать более эффективную схему применения иммуномодуляторов при сочетанной иммунизации морских свинок живыми вакцинами из диссоциированных штаммов B.abortus.

1.3 Научная новизна работы. Впервые в сравнительном аспекте изучены иммунобиологические свойства российских и американских вакцинных штаммов В.abortus. При этом установлена наиболее высокая иммунологическая активность штаммов В.abortus 19 (США) и 82 (Россия), находящихся соответственно в S- и SR- форме. Более низкая иммуногенность отмечена у штаммов в RS-форме (82-RTr и 82-ПЧ) и R- форме (75/79-АВ, RB51 и R-1096).

Показано преимущество живой вакцины из штамма В.abortus 82 перед вакциной из штамма 19.

Установлено, что иммуномодуляторы полиоксидоний, фактор некроза опухолей - Р, ларифан и тиосульфат натрия повышают иммуногенную активность культур вакцинных штаммов бруцелл, особенно при применении культур, находящихся в RS-форме.

Установлена более выраженная иммунологическая эффективность живой вакцины из штамма B.abortus 82-RTr при двукратном применении иммуномодулятора полиоксидония (при одновременном введении с вакциной и затем повторно через 1 месяц) и отдаленном однократном (только через месяц после вакцинации) применении тиосульфата натрия.

1.4 Практическая значимость работы. Живые вакцины из штаммов B.abortus 82-RTr (рифампицин-тетрациклин-резистентный) и 82-ПЧ (пенициллин-чувствительный) в сочетании с иммуномодуляторами - полиоксидонием, фактором некроза опухолей-Р (ФНО-Р), ларифаном и тиосульфатом натрия -рекомендуются для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота и других видов животных разного возраста.

Вакцина из штамма 82-ПЧ не обладает абортогенными свойствами, что позволяет иммунизировать ею также маточное поголовье животных в любой стадии беременности. Вакцина из штамма 82-RTr может быть применена отдельно и сочетано с антибиотиками рифампицином и тетрациклином при экстренной защите животных при угрозе заражения в неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах.

1.5 Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на научных сессиях Ученого совета ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» в виде ежегодных отчетов о НИР (2006-2009 гг.); на 6-ой региональной научно-практической

конференции, посвященной 85-летию СИБНИВИ-ВНИИБТЖ, «Естественная и специфическая резистентность населения и животных в условиях Сибири» (Омск, 2007); научно-практических конференциях молодых ученых и специалистов ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (Казань, 2007, 2008); на Международном Рабочем Совещании «Бруцеллез - пограничная инфекция животных и человека, требующая общих усилий разных стран»» (Серпухов, Московская область, 2008).

1.6 Публикации результатов исследований. По теме диссертационной работы опубликовано 11 научных работ, в том числе 4 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

1.7 Основные положения, выносимые на защиту:

-Результаты сравнительного изучения иммунологической активности культур различных штаммов В.abortus на СПФ и конвенциональных морских свинках;

-Морфологические и культурально-биохимические свойства вакцинных штаммов B.abortus до и после их пассажирования через организм морских свинок;

- Влияние пассажей и иммуномодуляторов на повышение иммунологической эффективности культур различных штаммов B.abortus, особенно находящихся в RS- и R- формах;

- Изыскание более эффективной схемы применения иммуномодуляторов при сочетанной иммунизации морских свинок живыми вакцинами из диссоциированных штаммов B.abortus.

1.8 Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 121 странице компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственкые исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложения.

Работа иллюстрирована 26 таблицами. Список литературы включает 210 источников, в том числе 45 иностранных. В приложении представлены документы, подтверждающие результаты основных этапов работы.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работу выполняли в 2006-2009 гг. в лаборатории по изучению бруцеллёза ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».

Для сравнительного изучения были взяты культуры следующих штаммов В. abortus: 19 и RB51 (США); 82, 82-ПЧ, 82-RTr и R-1096 (Россия, ВНИВИ); 75/79-АВ (ВГНКИ). В качестве контроля при изучении культурально-морфологических и биохимических свойств использовали референтные штаммы: В. abortus 544, В.suis 1330 и В. melitensis 16-М.

В экспериментах использовали 115 СПФ и 456 конвенциональных морских свинок. Исследования проводили с применением культурально-морфологических, серологических, бактериологических, иммунологических и других методов. С целью изучения гуморального иммунитета использовали серологические реакции: агглютинации (РА), Роз-бенгал пробу (РБП), связывания комплемента (РСК). При этом применяли единый бруцеллёзный и роз-бенгал антигены Щелковского биокомбината и R-антиген, изготовленный во ВНИВИ.

Вначале был поставлен эксперимент по сравнительному изучению иммуногенности культур штаммов 19, 82, 82-ПЧ, 75/79-АВ и RB51 В.abortus. Морских свинок иммунизировали суспензиями на фосфатном забуференном растворе из 3-суточных агаровых культур вакцинных штаммов бруцелл. Каждой вакциной было привито по 20 СПФ и 18 конвенциональных морских свинок, подкожно в область паха в дозе 1 млрд. м.к. и объеме 1 мл.

Через 15 дней, 1, 2 и 3 месяца после вакцинации у 3-х животных каждой группы брали кровь из ушной вены для серологического исследования в РБП, РА, РСК и РСК с R-антигеном ВНИВИ. По истечении 4-х месяцев по 3 животных из каждой группы подвергали эвтаназии с проведением серологического и бактериологического исследований. Оставшихся привитых и контрольных морских свинок заражали культурой вирулентного штамма В. abortus 54-М ВГНКИ, подкожно в области паха, со стороны, противоположной месту введения вакцины, в дозе 50 м.к. (10 минимальных инфицирующих доз) и объеме 1 мл. Контроль дозы заражения проводили путем высева из взвеси бруцелл на чашки Петри с триптозным агаром. Через 30-35 дней после заражения всех морских свинок подвергали эвтаназии с проведением серологического и бактериологического исследований для установления напряженности иммунитета. Посевы инкубировали в течение 15 суток с 3-х кратным просмотром роста бруцелл с интервалом в 5 суток. Определяли индекс веса селезёнки (ИБС) и индекс

инфицированное™ лимфоузлов и органов вирулентной культурой (ИИ), по данным которых определяли иммуногенные свойства изучаемых вакцин.

Для стабилизации и установления изменений основных свойств проводили 34-кратное пассажирование культур всех 7-ми изучаемых штаммов B.abortus через организм морских свинок и изучали в сравнительном аспекте их культурально-морфологические, биохимические и антигенные свойства. При изучении культурально-морфологических и биохимических свойств использовали тесты, утвержденные Комитетом экспертов ФА О/ВОЗ (1972).

Вакцины вводили подкожно в паховую область в виде суспензий в дозе 1,7 х 109 м.к. и объеме 1 мл. Через 3 недели животных подвергали эвтаназии с проведением серологического и бактериологического исследований. Выделенные от морских свинок культуры проверяли в РА на стекле с S- и R-сыворотками, затем вновь вводили животным и проводили аналогичную работу.

С целью установления влияния различных иммуномодуляторов на повышение иммунологической эффективности культур штаммов 82-RTr, R-1096 и B.abortus 82-ПЧ были проведены 3 эксперимента на морских свинках.

В первом опыте была поставлена задача установить, повышается ли иммуно-генная активность вакцинных штаммов бруцелл, находящихся в различной форме, после пассажей через организм морских свинок и при введении с иммуно-модуляторами. С этой целью было сформировано по принципу аналогов 13 групп по 8 морских свинок и проведена их иммунизация многократно пассированными культурами штаммов B.abortus 19, 82, 82-RTr и R-1096, подкожно, в паховую область, в объёме 1 мл, при этом штаммы 19 и 82 в дозе 1 млрд. м.к., а штаммы R-1096 и 82-RTr - 1,5 млрд. м.к., отдельно и с различными иммуномодуляторами: полиоксидоний и фактор некроза опухолей-Р (ФНО-Р) раздельно от вакцин в объёме 1 мл и количестве 0,04 мг и 1 х 10s ЕД, соответственно, а ларифан и тиосульфат натрия - сочетано, в дозе 0,5 и 150 мг.

Через 15 дней, 1, 2 и 3 месяца после вакцинации у 3-х животных каждой группы брали кровь для серологического исследования. Затем всех привитых и контрольных морских свинок заражали культурой вирулентного штамма B.abortus 54-М ВГНКИ в дозе 50 м.к. Спустя месяц со дня заражения морских свинок

подвергали эвтаназии с соответствующими исследованиями, по результатам которых устанавливали процент иммунных животных в группах.

В следующем опыте, совместно с сотрудниками НИЦ ТБП (г. Серпухов)

A.А. Денисовым и [Р.В. Боровиком], устанавливали влияние указанных выше иммуномодуляторов на иммуногенность слабоагглютиногениого штамма

B.abortus 82-ПЧ, находящегося в RS-форме. В этом случае по 10 морских свинок - альбиносов было привито живой культурой штамма В.abortus 82-ПЧ в дозе 460 млн.м.к. и этой же культурой с иммуномодуляторами полиоксидонием, ФНО-р, ларифаном и тиосульфатом натрия. Иммунизацию морских свинок и их соответствующие исследования проводили сотрудники НИЦ ТБП. Через 3 месяца опытных животных автотранспортом доставили в ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», где они были нами заражены культурой вирулентного штамма В. abortus 54-М ВГНКИ и подвергнуты аналогичным исследованиям, как в первом эксперименте.

В 3-м опыте ставили задачу изыскать более эффективную схему применения иммуномодуляторов при сочетанной иммунизации морских свинок живыми вакцинами из диссоциированных штаммов В.abortus. В этом случае морских свинок поделили на группы по 10 голов в группе и иммунизировали культурами вакцинных штаммов В.abortus 82, а также 82-RTr - отдельно и с иммуномодуляторами - в следующем порядке (дозы - как в предыдущем опыте):

1 гр. - шт. 82; 2 гр. - шт. 82-RTr; 3 гр. - 82-RTr + полиоксидоний, одновременно с введением вакцины, раздельно; 4 гр. - 82-RTr + тиосульфат натрия, одновременно, сочетано; 5 гр. - 82-RTr + полиоксидоний, одновременно, раздельно + через 1 мес. повторно полиоксидоний; 6 гр. - 82-RTr + тиосульфат натрия, одновременно, сочетано + через 1 месяц тиосульфат натрия; 7 гр. - 82-RTr + через 1 мес. полиоксидоний; 8 гр. - 82-RTr + через 1 мес. тиосульфат натрия; 9 гр. - полиоксидоний; 10 гр. - тиосульфат натрия; 11 гр. - интактные животные.

Через 15 суток, I, 1,5 и 2 месяца после вакцинации у морских свинок каждой группы брали кровь из ушной вены для серологического исследования. Спустя 2 месяца животных заражали культурой вирулентного штамма В.abortus 54-М ВГНКИ, аналогично предыдущим опытам. Через месяц со дня заражения проводили эвтаназию морских свинок с проведением соответствующих исследований для установления напряженности иммунитета.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Иммуногенная активность культур различных штаммов В.аЬогШх на СПФ и конвенциональных морских свинках.

Результаты исследований СПФ и конвенциональных морских свинок показали (табл. 1, 2), что все контрольные животные заразились генерализованной формой инфекции с высокими показателями ИИ и ИБС. При этом все они реагировали положительно в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном.

Таблица 1 - Иммуногенные свойства вакцин из штаммов В.abortus в эксперименте на СПФ морских свинках

Вакцина из штамма В. abortus Кол-во жив-х Выделено культур ИИ Заразилось (жив-х) Иммунных (жив-х)

иве (М±ш) вакц. вирул. вирул. культ-й (%) (М±ш) генер. локал. регион. j всего е •а к нестерил. всего

19 14 1,20± 0,06 - - 0,0 - - - - 14 - 14 100

82 17 1,00± 0,07 - - 0,0 - - - - 17 - 17 100

82-ПЧ 15 0,91± 0,03 - 4 2,7± 2,7 1 - 1 2 13 - 13 86,7

75/79-АВ 14 1,34± 0,16 - 20 14,3±9,2 2 - 1 3 11 - 11 78,6

RB51 16 1,3 8± 0,26 - 7 4,4± 4,4 1 - 1 2 14 - 14 87,5

54-М (контроль) 14 3,03± 0,36 - 110 78,6±5,9 14 - - 14 - - - 0,0

Вакцина из штамма В.abortus 19 обеспечивала 100%-ю защиту как СПФ-, так и конвенциональных морских свинок от экспериментального заражения культурой вирулентного штамма. Несмотря на это, все морские свинки реагировали положительно в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном.

Среди морских свинок, привитых вакциной из штамма В.abortus 82, иммунных животных было 100 % на СПФ морских свинках и 92,3% - на конвенциональных. Из 13 животных заразилась только одна морская свинка, которая реагировала положительно в РБП, РА и РСК. Все иммунные животные реагировали отрицательно в этих реакциях.

После иммунизации вакциной из штамма В. abortus 82-ПЧ количество иммунных животных было 86,7 и 60,0 %, соответственно. Более низкую иммуногенность показали вакцины из штаммов В. abortus RB51 (87,5 и 46,7 %) и 75/79-АВ (78,6 и 21,4 %).

Таблица 2 - Иммупогенные свойства вакцин из штаммов В. abortus в эксперименте на конвенциональных морских свинках

Вакцина из штамма В. abortus Кол-во жив- X иве (М±ш) Выделено культур ИИ вирулент. культ-ой (%) (М±ш) Заразилось (жив-х) Иммунных (жив-х)

вакц. вир. генер. локал. регион. всего стерил. не-| стерил. | всего £

19 13 1,64 ±0,16 - - 0,0 - - - - 13 - 13 100

82 13 1,55 ±0,04 2 9 6,9 ±6,9 1 - - 1 11 1 12 92,3

82-ПЧ 15 1,89 ±0,11 - 48 33,3 ±5,8 4 I 1 6 9 - 9 60,0

75/79-АВ 14 2,55 ±0,34 - 74 52,0 ±11,6 9 - 2. П 3 - 3 21,4

RB51 15 2,71 ±0,36 - 69 46,0 ±12,4 7 - 1 8 7 - 7 46,7

54-М (контроль) 12 5,5 ±0,77 - 107 89,2 ±4,9 12 - - ".12 - - - 0,0

Иммунные животные, привитые вакцинами из штаммов 82, 82-ПЧ, 75/79-АВ и ЯВ51, показывали положительные результаты РСК с К-антигеном при отрицательных данных реакций с Б-антигенами. Положительные показатели серологических реакций с Б-антигенами появлялись лишь при прорыве иммунитета. Исходя из этого, одновременное применение РА, РСК и РСК с II-антигеном позволяло дифференцировать здоровых животных, привитых данными вакцинами, от заразившихся.

3.2 Культурально-морфологическис, биохимические и биологические свойства культур различных штаммов В.аЬог^ до и после их пассажей через организм морских свинок.

В мазках, окрашенных по Козловскому, бруцеллы всех штаммов окрашивались в красный цвет и представляли собой мельчайшие бактерии шаровидной, овоидной или незначительно удлинённой формы.

Изучение исходных культур штаммов В. abortus показало, что по окраске колоний методом Уайт-Вилсона и другим культурально-биохимическим свойствам они находятся в различных формах: шт. 19 - в S-, 82 - в SR-, 82-ПЧ и 82-RTr - в RS-, RB51, 75/79-АВ и R-1096 - в R-форме.

Культуры всех штаммов бруцелл при культивировании не нуждались в повышенном содержании углекислого газа. Культура штамма RB51 при росте на агаре не выделяла сероводород. Культуры штаммов 19 и 82 лизировались фагом «Тб», а у штаммов 82-ПЧ, 82-RTr, 75/79-АВ, RB51 и R-1096 лизис отсутствовал.

Культуры штаммов 19 и 82 показывали отрицательную пробу термоагглютинации.

Штаммы В.abortus 19 и 82-ПЧ росли лишь на среде, содержащей 0,5 ед. пенициллина в 1 мл среды. В то же время отмечен рост культур штаммов B.abortus 82, 82-RTr, 75/79-АВ, RB51 и R-1096 на средах с концентрациями антибиотика 0,5-5-10-50 и 100 ед./мл. С рифампицином обильно выросли только культуры штаммов 82-RTr и RB51, а с тетрациклином - лишь 82-RTr.

После окрашивания колонии штамма 19 были одинаковой величины, с неокрашенной (желтой) центральной частью и фиолетовым ободком. Колонии штаммов B.abortus 82 и 75/79-АВ также были одинаковой величины, полностью окрашивались (колонии штамма 75/79-АВ - более интенсивно), в центре имели выраженные трещины, в глубине которых просматривалась желтизна колоний. Колонии штаммов 82-ПЧ, RB51, 82-RTr и R-1096 были также одинаковыми по величине, окрашивались полностью, в центральной части отдельные колонии штаммов RB51 hR-1096 имели очень тонкие неровные радиальные трещины.

При всестороннем изучении стабильности свойств после неоднократного пассирования через организм морских свинок указанных культур штаммов было установлено, что все культуры бруцелл сохранили свои культурально-морфологические, биохимические и биологические свойства (табл. 3).

Как видно из таблицы 3, морские свинки, привитые культурами штамма 19, в серологических реакциях показывали положительные результаты с единым бруцеллезным (S-) антигеном, а выделенные от них культуры бруцелл в РА на стекле реагировали только с S-сывороткой.

В ходе всего срока исследований привитые культурами штаммов 82, 82-ПЧ и 82-R.Tr морские свинки показывали отрицательные результаты серологических реакций с S-антигенами и положительные - с R-антигеном. В РА на стекле во все сроки исследования культуры взаимодействовали с S- и R-сыворотками.

Культуры штаммов В. abortus 75/79-АВ, RB51 и R-1096 в процессе пассажей также сохранили исходные антигенные свойства. Морские свинки на всем протяжении исследований показывали отрицательные результаты в серологических реакциях с S-антигенами и положительные - с R-антигеном. Выделенные культуры в РА на стекле взаимодействовали только с R-сывороткой.

Таблица 3 - Биологические свойства культур вакцинных штаммов В.аЬогШз после пассажей через организм морских свинок

Штамм В. abortus № пассажа Результаты исследований (М± м):

иве серологического бактериологического

с S-антигенами РСК с R-ацтигеном ВНИВИ РА на стекле с сыворотками

РБП единый бруцеллезный антиген

PA (ME) РСК S- R-

19 1 2,31 ±0,07 пол. 40,0 ±0,0 53,3 ±13,3 отриц.' ++++ отриц.

4 2,14 ±0,16 пол. 26,7±6,7 11,7 ±4,4 отриц. ++++ отриц.

82 1 3,23 ±0,46 отр. отриц. отр. 106,7 ±25,3 ++++ +++

4 2,21 ±0,13 отр. отриц. отр. 66,7 ±13,3 ++-Н- +++

82-ПЧ 1 2,39 ±0,25 отр отриц. отр. 40,0 ±0,0 -н-н- +++

4 2,51 ±0,13 отр. отриц. отр. 106,7 ±26,7 +++

82-RTr 1 2,71 ±0,14 отр. отриц. отр. 53,3 ±13,3 ++++ +++

3 1,49 ±0,15 отр. отриц. отр. 93,3 ±35,6 ++++ +++

75/79-АВ 1 1,70 ±0,03 отр. отриц. отр. 26,7 ±6,7 отриц. -1111

4 2,53 ±0,33 отр. отриц. отр. 40,0 ±0,0 отриц. ++++

RB51 1 1,58 ±0,09 отр. отриц. отр. 66,7 ±13,3 отриц. -Ш-+

4 2,53 ±0,13 отр. отриц. отр. 16,7 ±2,4 отриц. ++++

R-1096 I 2,3 ±0,05 отр. отриц. отр. 93,3 ± 35,5 отриц. ++++

4 1,73 ± 0,2 отр. отриц. отр. 16,7 ±2,43 отриц. -н-н-

3.3 Сравнительные показатели иммунологической эффективности вакцин из штаммов B.abortus 82, 19, 82-ПЧ, R-1096 и 82-RTr и влияния на неё различных иммуномодуляторов.

Результаты серологического исследования морских свинок показали, что животные, привитые вакциной из штамма В. abortus 19, в течение 3 месяцев со дня иммунизации реагировали положительно в серологических реакциях. Высокие титры реакций с S-антигенами сохранялись во все сроки исследования.

Таблица 4 - Результаты сравнительного изучения эффективности пассажей и применения иммуномодуляторов для повышения иммуногенных свойств вакцин из штаммов В.аЬоПив R-1096 и 82-Я'Гг на морских свинках

Вакцина, иммуно-модулятор Кол-во жив-х иве (М±ш) Бактериологическое исследование Заразилось (жив-х) Иммунных (жив-х) % иммунных до пассажа

Выделено культур бруцелл ИИ вирул. культурой (%, М±ш) Всего £

Вакц. Вир.

19 6 1,81±0,19 1 1 1,7 ± 1,7 1 5 83,3 81,8

82 6 1,59 ± 0,23 2 3 5,0 ±5,0 1 5 83,3 81,8

R-1096 7 2,60 ± 0,60 - 35 50,0 ±17,9 4 3 42,8 45,5

R-1096 + ФНО-Р 4 1,55 ±0,28 - 6 15,0 ±11,9 2 2 50,0 н/и

R-1096+ поли-оксидоний '5 2,06 ±0,53 - 19 38,0 ±18,6 3 2 40,0

. R-1096+ ларифан 5 1,70 ±0,03 - 8 16,0 ±13,7 2 3 60,0

R-1096+ тиосульфат Na 3 2,30 ±0,50 10 33,3 ±17,7 2 1 33,3

82-RTr 6 1,43 ± 0,34 - 3 5,0 ±5,0 1 5 83,3 . 66,7

82-RTr + ; ФНО-Р 5 1,84 ± 0,34 - 2 4,0 ±4,0 1 4 80,0 н/и

82-RTr + поли-оксидоний 3 1,89 ±0,20 - - 0,0 ±0,0 - 3 100

- 82-RTr + ларифан 7. 1,77 ±0,10 - 0,0 ±0,0 - 7 100

82-RTr + тиосульфат • Na 6 1,65 ±0,1 Ь 1 0,0 ±0,0 - 6 100

Контроль шт. 54-М, 35 КОЕ 5 4i39 ± 0,94 - 29 58,0 ±14,7 5 - 0,0 -

Морские свинки, привитые вакцинами из слабоагглютиногенного штамма 82, инагглютиногенного штамма R-1096 и антибиотико-резистентного штамма 82-RTr, а также штаммов R-1096 и 82-RTr с иммуномодуляторами, во все сроки исследования показывали положительную РСК с R-антигеном в высоких титрах антител. Положительные результаты реакций с S-антигенами отмечались лишь у морских свинок, привитых вакциной из штамма 82-RTr, однако в невысоких титрах антител и не у всех животных.

Результаты изучения иммуногенных свойств пассажных культур бруцелл и этих культур с иммуномодуляторами (таблица 4) показали, что пассаж культур штаммов В. abortus 19, 82 и R-1096 через организм морских свинок практически не изменил их иммуногенные свойства. Иммуногенность культуры штамма 82-RTr после пассажа повысилась на 16,6 %. При этом у культуры сохранилась устойчивость к обоим антибиотикам - рифампицину и тетрациклину.

Иммуномодуляторы ФНО-Р и ларифан повышали иммуногенность культуры штамма R-1096 на 7,2 % и 17,2 %, соответственно. Полиоксидоний, тиосульфат натрия и ларифан повысили иммуногенность культуры штамма 82-RTr на 16,7 %.

Действие иммуномодуляторов зависело от антигенных свойств культур бруцелл. Так, при добавлении к культуре бруцелл штамма R-1Q96 ларифана и ФНО-Р её иммуногенность повышалась, а при добавлении полиоксидония и тиосульфата натрия - снижалась. При применении иммуномодуляторов с культурой штамма 82-RTr полиоксидоний, ларифан и тиосульфат натрия повышали иммуногенность биопрепарата.

Результаты полученных исследований были подтверждены в другом опыте на морских свинках, который проводился нами совместно с сотрудниками НИЦ ТБП (г. Серпухов). Работа была направлена на установление влияния различных иммуномодуляторов на повышение иммунологической эффективности культур слабоагглютиногенного штамма В.abortus 82-ПЧ, находящегося в RS-форме.

Данные серологического и бактериологического исследований морских свинок через 1 месяц после экспериментального заражения (табл. 5) показали, что в первой и второй группах животных, которым вводили только физиологический раствор и ФНО-р, соответственно, произошло полное генерализованное

заражение морских свинок при высоких показателях ИВС и ИИ. Одна вакцина из штамма 82-ПЧ создавала иммунитет к бруцеллезу у 40 % животных.

Все иммуномодуляторы повышали иммуногенные свойства вакцины: тиосульфат натрия на 10 %, ларифан - на 27,7 %. Наиболее эффективными в этом отношении оказались полиоксидоний и ФНО-р, которые повышали иммуногенность биопрепарата на 50 %. Однако среди них преимущество оставалось за ФНО-Р, поскольку в группе морских свинок, привитых вакциной с полиоксидонием одно животное заразилось генерализованно и ИИ составил 9 %, а в группе привитых вакциной с ФНО-р заражение одной морской свинки носило региональный характер.

Таблица 5 - Изучение влияния различных иммуномодуляторов на повышение иммуногенной активности культур штамма В.abortus 82-ПЧ на морских свинках

Группа, штамм, иммуномодулятор Кол-во жив-х ИВС (М±т) Бактериологическое исследование Кол-во зараз-ся жив-х Кол-во иммун. жив-х

выделено культур бруцелл ИИ (%) (М±т) Всего £

вакц. вир.

1. Физ. раствор 9 3,43± 0,44 — 82 91,1 ±2,0 9 — 0,0

2. Раствор ФНО-р 10 2,92± 0,23 — 88 88,0 ±3,9 10 — 0,0

3. 82-ПЧ- 10 1,59± 0,10 — 29 29,0 ±10,9 6 4 40,0

4. 82-ПЧ + ларифан 9 1,70± 0,21 — 17 18,9 ±15,4 2 7 77,7

5. 82-ПЧ + полиоксидоний 10 1,31± 0,15 — 9 9,0 ±9,0 1 9 90,0

6. 82-ПЧ + тиосульфат натрия 10 1,51± 0,12 — 28 28,0 ±16,3 5 5 50,0

7. 82-ПЧ +ФНО-Р 10 1,44± 0,06 — 1 1,0±1,0 1 9 90,0

Результаты серологического исследования показали, что одновременное применение РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном и РСК с 11-антигеном дает возможность дифференцировать здоровых животных от заразившихся, привитых вакциной из штамма 82-ПЧ.

Здоровые, устойчивые к заражению, морские свинки реагировали положительно в РСК с 11-антигеном и отрицательно - в реакциях с единым бруцеллезным антигеном. А у заразившихся животных были положительными РА

и (или) РСК с единым бруцеллезным антигеном и отрицательная или положительная в низком титре антител РСК с R-антигеном.

Результаты исследований морских свинок в эксперименте по изысканию более эффективной схемы применения иммуномодуляторов при сочетанной иммунизации их живой вакциной из штамма В.abortus 82-RTr показали, что все морские свинки, привитые вакциной из штамма 82, в ходе всего эксперимента реагировали положительно в РСК с R-антигеном в относительно высоких титрах антител при отрицательных и слабо положительных результатах РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном.

Во все сроки исследования морские свинки, привитые вакциной из штамма 82-RTr, реагировали отрицательно в РА и PCK-S. В РСК с R-антигеном ВНИВИ отмечалось постепенное снижение тиров антител, и через 2 месяца они были почти отрицательными.

В опыте по изысканию лучшей схемы введения иммуномодуляторов все интактные животные заразились генерализованной формой инфекции. Введение только иммуномодуляторов не обеспечивало защиту от последующего заражения.

Среди морских свинок, привитых вакциной из штамма 82-RTr без иммуномодуляторов, иммунных было 37,5 %. В группе привитых культурой штамма 82 количество иммунных животных составило 80,0 %.

В группах животных с сочетанным применением вакцины из штамма 82-RTr с имуномодуляторами отмечался нестерильный иммунитет, к тому же культур вакцинного штамма в этих группах было выделено больше, по сравнению с животными, привитыми только вакциной.

Иммуномодуляторы полиоксидоний и тиосульфат натрия при двукратном применении (одновременно с вакциной, затем повторно через 1 месяц) повышали иммуногенность вакцины из штамма В.abortus 82-RTr на 48,2 и 5,4 %, соответственно.

При отдаленном однократном применении (только через 1 месяц после иммунизации) полиоксидоний снижал иммуногенность вакцины из штамма 82-RTr на 23,2 %, в то время как тиосульфат натрия - повышал на 12,5 %.

Таким образом, для практического применения с целью повышения иммуногенности вакцины из штамма 82-RTr можно рекомендовать двукратное

введение полиоксидония, а также отдаленное однократное введение тиосульфата натрия.

В результате проведенных исследований нами изучены в сравнительном аспекте основные иммунобиологические свойства живых противобруцеллезных вакцин из штаммов В. abortus: 19 и RB51 (США), 82, 82-ПЧ, 82-RTr, 75/79-АВ и R-1096 (Россия), - в том числе их культурально-морфологические и биохимические, стабильные, антигенные и иммуногенные свойства. Установлена и подтверждена более высокая иммунологическую эффективность не только живой вакцины из штамма В. abortus 82, но и стимулирующее влияние иммуномодуляторов - полиоксидония, тиосульфата натрия, фактора некроза опухолей-бета (ФНО-Р) и ларифана - на иммуногенные свойства живых вакцин, изготовленных из культур слабоагглютиногенных штаммов В.abortus 82-RTr и 82-ПЧ, находящихся в RS-форме.

На СПФ и конвенциональных морских свинках было установлено, что живая вакцина из штамма В. abortus 82, наряду с высокой иммунологической эффективностью, обладает практически инагглютиногенными свойствами, то есть привитые ею иммунные морские свинки не реагируют на бруцеллез в серологических реакциях с единым бруцеллезным антигеном, а положительно реагируют лишь в случае прорыва иммунитета. На основании изложенного считаем перспективным дальнейшее применение живой вакцины из этого штамма для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота, а также возможным и целесообразным изучение ее иммунологической эффективности в экспериментальных и производственных условиях на мелком рогатом скоте (овцах и козах) и диких животных (бизонах, оленях и др.).

Результаты, полученные нами, дают также основание считать возможным и целесообразным дальнейшее, более глубокое изучение иммунобиологических свойств штаммов В.abortus 82-RTr (резистентного к рифампицину и тетрациклину) и 82-ПЧ (чувствительного к пенициллину), а также приступить к испытанию живых вакцин из этих штаммов, в том числе с иммуномодуляторами полиоксидонием и тиосульфатом натрия и антибиотиками рифампицином и тетрациклином в экспериментальных и производственных условиях на крупном рогатом скоте и других видах животных.

4 ВЫВОДЫ:

1. Сравнительным изучением иммунобиологических свойств российских и американских вакцинных штаммов B.abortus установлена наиболее высокая иммунологическая активность штаммов 19 (на СПФ и конвенциональных морских свинках 100%) и 82 (100% и 92,3 %, соответственно), находящихся в S- и SR-форме. Вакцины из штаммов В. abortus 82-RTr и 82-ПЧ (в RS-форме) и 75/79-АВ, RB51 и R-1096 (в R-форме) обладают более низкой иммуногенностью.

2. Вакцина из штамма B.abortus 82 (Россия) имеет преимущество перед вакциной из штамма 19 (США) в том, что, наряду с высокой иммунологической эффективностью, обладает практически инагглютиногенными свойствами. При этом вакцина из штамма 19 вызывает у привитых морских свинок выраженную и продолжительную серопозитивность. Остальные изучаемые штаммы B.abortus -82-ПЧ, 82-RTr, 75/79-АВ, RB51 и R-1096 - также являются инагглютиногенными.

3. Культуры штаммов В. abortus 19, 82, 82-RTr и R-1096, находящиеся соответственно в S-, SR-, RS- и R- формах, после пассажей через организм морских свинок сохраняют свои исхЬдные культурально-морфологические, биохимические и антигенные свойства и не изменяют иммунологическую эффективность.

4. Иммуномодуляторы ФНО-Р и ларифан повышали иммуногенность вакцины из штамма R-1096 (R-форма) соответственно на 7,2 % и 17,2 %.

Иммуногенность вакцины из штамма 82-RTr (RS-форма) повысилась на 16,7 % при сочетанном применении с иммуномодуляторами гтолиоксидонием, ларифаном и тиосульфатом натрия и составила 100 %.

Установлена 90%-ная защита животных от заражения культурой вирулентного штамма при сочетанном применении вакцины из штамма В. abortus 82-ПЧ (RS-форма) с иммуномодуляторами полиоксидонием и ФНО-р при 40 % -без иммуномодуляторов.

5. Наиболее эффективной схемой применения иммуномодуляторов для повышения иммунологической активности живой вакцины из штамма В. abortus 82-RTr является двукратное применение полиоксидония (первый раз при одновременном введении с вакциной, второй - через 1 месяц после вакцинации) и

отдаленное однократное (только через 1 месяц после иммунизации) - тиосульфата натрия.

6. Одновременное применение РА и РСК с единым бруцеллезным и РСК с R-антигеном ВНИВИ даёт возможность дифференцировать животных, привитых вакцинами из штаммов В. abortus 82, 82-ПЧ, 82-RTr, 75/79-АВ, RB51 и R-1096, устойчивых к заражению, от животных, у которых произошёл прорыв иммунитета, поскольку устойчивые к заражению морские свинки реагируют положительно в РСК с R-антигеном и отрицательно - в реакциях с единым бруцеллезным антигеном. Заразившиеся животные, напротив, положительно реагируют в РА и РСК с единым бруцеллёзным антигеном и отрицательно - в РСК с R-антигеном ВНИВИ.

5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. На основании проведенных исследований и комиссионных испытаний составлен паспорт на антибиотикорезистентный штамм В.abortus 82-RTr, разработаны методические указания по дифференциации культур данного штамма от культур полевых (вирулентных) штаммов В. abortus и вакцинного штамма В.abortus 82. -

2. Разработана схема постановки экспериментов на лабораторных животных и крупном рогатом скоте разного возраста по установлению иммунологической эффективности вакцин из штаммов В. abortus 82-RTr и 82-ПЧ при сочетанном их применении с иммуномодуляторами и антибиотиками.

6 СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1.Салмакова, A.B. Сравнительное изучение иммунобиологических свойств противобруцеллезных вакцин // K.M. Салмаков, A.M. Фомин, А.М.Плотникова, A.B. Сапмакова и др. // Матер. 6-ой межрегиональной научно-практич. конф., посвящ. 85-летию СибНИВИ-ВНИИБТЖ «Естественная и специфическая резистентность населения и животных в условиях Сибири». -Омск, 2007.-С. 72-78.

2. Салмакова, A.B. Изучение продолжительности приживления, контагиозности и абортогенных свойств вакцинных штаммов В.abortus / A.B.

Салмакова // Матер, науч. конф. молодых ученых и специалистов «Актуальные проблемы ветеринарии». - Казань: ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», 2007. - С. 128-130.

3. Салмакова, A.B. Культурально-морфологические и биохимические свойства вакцинных штаммов бруцелл / A.B. Салмакова // Матер, науч. конф. молодых ученых и специалистов «Актуальные проблемы ветеринарии». - Казань: ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»,2007.-С. 131-134.

4. Салмакова, A.B. Стабильность свойств вакцинных штаммов В. abortus / A.B. Салмакова // Матер, науч. конф. молодых ученых и специалистов «Достижения молодых ученых - в производство», посвящ. 100-летию со дня рождения профессора Х.Х.Абдуллина. - Казань, 2008. - С. 168-172.

5. Салмакова, A.B. Сравнительное изучение иммунобиологических свойств живых противобруцеллезных вакцин / K.M. Салмаков, A.M. Фомин, A.M. Плотникова, A.B. Салмакова и др. // Матер. Международного Рабочего Совещания «Бруцеллез - пограничная инфекция животных и человека, требующая общих усилий разных стран». - Серпухов, Московская область. 2-4 июня 2008.-С. 65-66.

6. Салмакова, A.B. Иммунобиологические свойства российских и американских вакцинных штаммов B.abortus / K.M. Салмаков, A.M. Фомин, A.M. Плотникова, A.B. Салмакова и др. // Спец. выпуск «Матер. Междунар. конф. «Состояние и перспективы диагностики инфекционных болезней животных»». -Астана, 2008. - С. 417-422.

7. Салмакова, A.B. Живые вакцины из штаммов В. abortus и их иммунобиологическая характеристика / K.M. Салмаков, A.M. Фомин, Э.М. Плотникова, A.B. Салмакова и др. // Матер. Междунар. научно-практич. конф., посвящ. 135-летию академии «Современные подходы развития АПК». - Ученые записки КГАВМим. Н.Э. Баумана.-Казань, 2008.-т. 192.-С. 133-138.

8. Салмакова, A.B. Оптимальные иммунизирующие дозы различных вакцинных штаммов бруцелл для морских свинок / K.M. Салмаков, A.M. Фомин, Э.М. Плотникова, A.B. Салмакова и др. // Труды Междунар. научно-практич. конф., посвящ. 50-летию ВНИИВВиМ «Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных», 13-14 ноября 2008, том 2. - Покров, 2008. - С. 68-70.

9. Салмакова, A.B. Иммунологическая эффективность различных вакцинных штаммов В.abortus / K.M. Салмаков, A.M. Фомин, A.M. Плотникова,

A.B. Салмакова и др. // Ветеринарный врач. - Казань, 2008. - № 6. - С. 27-29.

10. Салмакова, A.B. Иммунобиологические свойства вакцинных штаммов

B.abortus / A.B. Иванов, K.M. Салмаков, A.M. Фомин, Э.М. Плотникова, A.B.Салмакова // Ветеринария. - 2009. - №3. - С. 23-25.

1 ¡.Салмакова, A.B. Повышение иммунологической эффективности диссоциированных вакцинных штаммов бруцелл путем их пассирования через организм морских свинок и введения с различными адъювантами / К.М.Салмаков, A.M. Фомин, A.B. Салмакова, Г.М. Сафина, A.A. Денисов // Ветеринарный врач. -2009.-№4.-С. 16-18.

Сдано в набор 10.02.2010 Подписано в печать 12.02.2010

Заказ №29 Тираж 100 экз. Формат 60x90 1/16 Усл. печ. л 1,5

Типография ФГУ "ФЦТРБ-ВНИВИ" (г. Казань) Адрес: 420075, г. Казань, Научный городок-2

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Салмакова, Александра Владимировна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Краткая характеристика бруцелл и их изменчивость.

1.2 Иммунитет и иммуномодулирующие препараты при бруцеллезе.

1.3 Специфическая профилактика бруцеллеза крупного рогатого скота и других видов животных.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Материалы и методы исследований.

2.2 Результаты собственных исследований.

2.2.1 Иммуногенная активность культур различных штаммов

В.abortus на СПФ и конвенциональных морских свинках.

2.2.2 Морфологические и культурально-биохимические свойства культур различных штаммов В.abortus до и после пассажирования через организм морских свинок.

2.2.3 Сравнительные показатели иммунологической эффективности культур штаммов В.abortus 82, 19, 82-ПЧ, 82-RTr и R-1096 после пассажирования через организм морских свинок и при сочетанном введении с различными иммуномодуляторами.

2.2.4 Изыскание наиболее эффективной схемы применения иммуномодуляторов при иммунизации морских свинок вакциной из штамма B.abortus 82-RTr.

3 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Сравнительное изучение живых вакцин из различных штаммов B.abortus и влияния иммуномодуляторов на их эффективность"

Актуальность темы. Благодаря научно-обоснованной системе специальных мероприятий, бруцеллёз животных в настоящее время ликвидирован в большинстве регионов Российской Федерации. Однако отдельные регионы, районы, хозяйства остаются неблагополучными по бруцеллезу крупного и мелкого рогатого скота по настоящее время, а также появляются новые неблагополучные пункты.

Опыт борьбы с бруцеллезом крупного и мелкого рогатого скота в СССР и РФ доказывает большую роль в оздоровлении хозяйств от этой инфекции специфической профилактики с помощью вакцин из штаммов В.abortus 19 и B.melitensis Rev 1 (И.А. Косилов и др., 1999). Однако привитые ими животные длительное время сохраняют поствакцинальные показатели серологических реакций, что создает большие трудности при диагностике бруцеллеза и оздоровлении стад от этой инфекции. Поэтому исследователи пошли по пути изыскания таких вакцинных штаммов бруцелл, которые бы обладали слабо-или инагглютиногенными свойствами. Так, в РФ по настоящее время в качестве официального препарата против бруцеллеза крупного рогатого скота в основном применяется живая вакцина из слабоагглютиногенного штамма В.abortus 82 (К.М. Салмаков и др., 2008).

Совершенствование противобруцеллезных вакцин продолжается и в настоящее время. Так, в ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань) был отобран вариант штамма 82, чувствительный к пенициллину, - штамм B.abortus 82-ПЧ (К.М. Салмаков, Г.А. Белозерова, 1994 г.); путём воздействия специфического бактериофага на культуру исходного вирулентного штамма получен штамм B.abortus R-1096 (Г.М. Сафина и др., 2004). Живые вакцины из штаммов 82-ПЧ и R-1096 испытываются в производственных условиях на крупном рогатом скоте (А.В.Иванов и др., 2006).

Одним из способов повышения эффективности вакцин является использование иммуномодуляторов — веществ, повышающих специфические иммунные ответы на вводимые антигены. В последние годы многие исследователи уделяют большое внимание разработке новых иммуномодуляторов, способных усиливать как гуморальный, так и клеточный иммунитет с минимальными побочными эффектами или их отсутствием. Также оценивается возможность использования цитокинов в качестве адъювантов вакцин (А.А. Денисов и др., 2008).

Цель и задачи исследований. Цель исследований — изучить в сравнительном аспекте иммунобиологические свойства вакцин из различных штаммов В.abortus и влияние на эти свойства иммуномодуляторов, отобрать из них наиболее эффективные для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота и других видов животных.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Определить иммуногенную активность культур различных штаммов В.abortus на СПФ и конвенциональных морских свинках;

2. Изучить морфологические и культурально-биохимические свойства ряда штаммов B.abortus до и после их пассажирования через организм морских свинок;

Научная новизна работы. Впервые в сравнительном аспекте изучены иммунобиологические свойства российских и американских вакцинных штаммов B.abortus. При этом установлена наиболее высокая иммунологическая активность штаммов B.abortus 19 (США) и 82 (Россия), находящихся соответственно в S- и SR- форме. Более низкая иммуногенность отмечена у штаммов в RS-форме (82-RTr и 82-ПЧ) и R- форме (75/79-АВ, RB51 и R-1096).

Показано преимущество живой вакцины из штамма B.abortus 82 перед вакциной из штамма 19.

Установлено, что иммуномодуляторы полиоксидоний, фактор некроза опухолей - (3, ларифан и тиосульфат натрия повышают иммуногенную активность культур вакцинных штаммов бруцелл, особенно при применении культур, находящихся в RS-форме.

Отмечена более выраженная иммунологическая эффективность живой вакцины из штамма B.abortus 82-RTr при двукратном применении иммуномодулятора полиоксидония (при одновременном введении с вакциной и затем повторно через 1 месяц) и отдаленном однократном (только через месяц после вакцинации) применении тиосульфата натрия.

Практическая значимость работы. Живые вакцины из штаммов B.abortus 82-RTr (рифампицин-тетрациклин-резистентный) и 82-ПЧ (пенициллин-чувствительный) в сочетании с иммуномодуляторами — полиоксидонием, фактором некроза опухолей-(3 (ФНО-р), ларифаном и тиосульфатом натрия — рекомендуются для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота и других видов животных разного возраста.

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на научных сессиях Ученого совета ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» в виде ежегодных отчетов о НИР (2006-2009 гг.); на 6-ой региональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию СИБНИВИ-ВНИИБТЖ, «Естественная и специфическая резистентность населения и животных в условиях Сибири» (Омск, 2007); научно-практических конференциях молодых ученых и специалистов ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (Казань, 2007, 2008); на Международном Рабочем Совещании «Бруцеллез - пограничная инфекция животных и человека, требующая общих усилий разных стран»» (Серпухов, Московская область, 2008).

Публикации результатов исследований. По теме диссертационной работы опубликовано 11 научных работ, в том числе 4 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

-Морфологические и культуралыю-биохимические свойства вакцинных штаммов B.abortus до и после их пассажирования через организм морских свинок;

-Изыскание более эффективной схемы применения иммуномодуляторов при сочетанной иммунизации морских свинок живыми вакцинами из диссоциированных штаммов B.abortus.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 121 странице компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложения.

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Салмакова, Александра Владимировна

ВЫВОДЫ

2. Вакцина из штамма B.abortus 82 (Россия) имеет преимущество перед вакциной из штамма 19 (США) в том, что, наряду с высокой иммунологической эффективностью, обладает инагглютиногенными свойствами. При этом вакцина из штамма 19 вызывает у привитых морских свинок выраженную и продолжительную серопозитивность. Остальные изучаемые штаммы B.abortus - 82-ПЧ, 82-RTr, 75/79-АВ, RB51 и R-1096 - также являются инагглютиногенными.

3. Культуры штаммов В. abortus 19, 82, 82-RTr и R-1096, находящиеся соответственно в S-, SR-, RS- и R- формах, после пассажей через организм морских свинок сохраняют свои исходные культурально-морфологические, биохимические и антигенные свойства и не изменяют иммунологическую эффективность.

Иммуногенность вакцины из штамма 82-RTr (RS-форма) повысилась на 16,7 % при сочетанном применении с иммуномодуляторами полиоксидонием, ларифаном и тиосульфатом натрия и составила 100 %.

Установлена 90%-ная защита животных от заражения культурой вирулентного штамма при сочетанном применении вакцины из штамма

В. abortus 82-ПЧ (RS-форма) с иммуномодуляторами полиоксидонием и ФНО-Р при 40 % — без иммуномодуляторов.

5. Наиболее эффективной схемой применения иммуномодуляторов для повышения иммунологической активности живой вакцины из штамма В. abortus 82-RTr является двукратное применение полиоксидония (первый раз при одновременном введении с вакциной, второй — через 1 месяц после вакцинации) и отдаленное однократное (только через 1 месяц после иммунизации) — тиосульфата натрия.

6. Одновременное применение РА и РСК с единым бруцеллезным и РСК с R-антигеном ВНИВИ даёт возможность дифференцировать животных, привитых вакцинами из штаммов В. abortus 82, 82-ПЧ, 82-RTr, 75/79-АВ, RB51 и R-1096, устойчивых к заражению, от животных, у которых произошёл прорыв иммунитета, поскольку устойчивые к заражению морские свинки реагируют положительно в РСК с R-антигеном и отрицательно — в реакциях с единым бруцеллезным антигеном. Заразившиеся животные, напротив, положительно реагируют в РА и РСК с единым бруцеллёзным антигеном и отрицательно - в РСК с R-антигеном ВНИВИ.

5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. На основании проведенных исследований и комиссионных испытаний составлен паспорт на антибиотикорезистентный штамм B.abortus 82-RTr, разработаны методические указания по дифференциации культур данного штамма от культур полевых (вирулентных) штаммов В. abortus и вакцинного штамма B.abortus 82.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Салмакова, Александра Владимировна, Казань

1. Авилов, В.М. Борьба с бруцеллезом крупного рогатого скота с применением вакцины из штамма 82 / В.М. Авилов, К.М. Салмаков, А.А. Новицкий // Ветеринария с.-х. животных. 2006. — № 1. — С. 17-21.

2. Аливердиев, А.А. О самовыздоровлении крупного рогатого скота от бруцеллеза / А.А. Аливердиев // Ветеринария. 1946. - № 4. - С. 2024.

3. Алимов, A.M. Влияние на бруцелл ультрафиолетовых лучей и азотистой кислоты / A.M. Алимов // Науч. труды Казан, вет. ин-та. — 1980 (1981). -Т. 135. -С. 133-136.

4. Алиев, Э.А. Применение вакцины из штамма 82 на крупном рогатом скоте и буйволах / Э.А. Алиев // Научн. труды Казанского вет. ин-та. 1980. - т. 135. - С. 70-74.

5. Алиев, Э.А. Серологические реакции у азербайджанских зебу, привитых противобруцеллезными вакцинами из штаммов Br. abortus 19 и 82 / Э.А. Алиев // Ветеринария. 1986. - № 1. - С. 23-27.

6. Али-Кука. Изучение изменчивости бруцелл при пассаже их через организм нетипового хозяина / Али-Кука // Сб. рефератов ВИЭВ. 1960. -В.1.-С. 28-33.

7. Антипов, В.А. Лечение и профилактика при бронхопневмонии ягнят / В.А. Антипов // Ветеринария. 1993. -№ 1. — С. 11-15.

8. Антонов, В.К. Изменчивость бруцелл под влиянием некоторых биологических и физических факторов / В.К. Антонов // Труды НИВИ Казах. Акад. с/х наук. т.Ю. - 1961. - С. 119-122.

9. Базилевич, Ю.А. Бруцеллез кроликов в связи с их выздоровлением / Ю.А. Базилевич // Труды Воронежской областной НИВС. 1955. - №4. -С. 81-85.

10. Бакулов, В.А. Бруцеллёз животных / В.А. Бакулов // Ветеринария с.-х. животных. 2006. - № 1. - С. 7-12.

11. Белозерова, Г.А. Иммунитет у животных после прививки новой бруцеллезной вакциной / Г.А. Белозерова, К.М. Салмаков // Первый Всесоюзный иммунологический съезд. Тезисы докладов. — Сочи. -1989.-Т.1.-С. 138-142.

12. Белозерова, Г.А. Получение и испытание новой вакцины из штамма В. abortus 82-ПЧ / Г.А. Белозерова // Автореферат дисс. . док. вет. наук Казань. - 1993. - 38 с.

13. Бельченко, В.Б. Дифференциация реакций на бруцеллез у больного и иммунизированного скота / В.Б. Бельченко // Ветеринария. — 1975. № З.-С. 42-46.

14. Бессонов, Д.К. К патогенезу бруцеллеза свиней / Д.К. Бессонов // Ветеринария. 1941. - № 7-8. - С. 27-33.

15. Браун, В.Ш. Генетика бактерий. — М. 1968.

16. Бронников, B.C. Иммунологические реакции крупного рогатого скота на введение химических противобруцеллезных вакцин / B.C.

17. Бронников, А.А. Новицкий // Туберкулез и бруцеллез с.-х. животных: методы и средства диагностики и профилактики: Сб. науч. тр. / РАСХН. Сиб. отд-ние Новосибирск. - 1995. - С. 23-29.

18. Буланов, П.А. Аттенуация бруцелл и получение вакцинных штаммов / П.А. Буланов, Е.Н. Наурызбаев, А.А. Мякушина // Труды Алма-Атинского зоовет. ин-та. т. 11.- 1959. - С. 321-325.

19. Вершилова, П.А. Бруцеллез / П.А. Вершилова, А.А. Голубева, Е.И. Кайтмазова, Н.Н. Островская, Ш.Х Ходжаев, М.И. Чернышева // М. -1972.-439 с.

20. Вершилова, П.А. Живая вакцина против бруцеллеза / П.А. Вершилова // Профилактика инфекции противобруцеллезными вакцинами. Медгиз. - 1960. - С. 270-273.

21. Вершилова, П.А. Значение диссоциации для дифференциации группы Brucella / П.А. Вершилова // Архив биологич. наук. — 1939. — т.53. 1. - С. 48-52.

22. Вершилова, П.А. Изучение клеточных систем, образующих антитела в процессе вакцинального иммуногенеза / П.А. Вершилова, М.И. Чернышева, JI.A. Певницкий // Современные проблемы иммунологии и иммунопатологии. JI. - 1970. - С. 44-47.

23. Вершилова, П.А. Изучение токсических, антигенных и сенсибилизирующих свойств препаратов, выделенных из клеточнойстенки бруцелл / П.А. Вершилова, М.И. Чернышева, Е.А. Драновская // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1971. - № 6. — С. 62-67.

24. Вершилова, П.А. Опыт иммунизации морских свинок и белых мышей против бруцеллеза авирулентной культурой бруцелл и полисахаридно-липоидным комплексом/ П.А. Вершилова // ЖМЭИ. -1947. № 7. - С. 17-23.

25. Вершилова, П.А. Патогенез и иммунология бруцеллеза / П.А. Вершилова, М.И. Чернышева, Э.Н. Князева // М. 1974. - 245 с.

26. Вершилова, П.А. Течение бруцеллезной инфекции в иммунном организме / П.А. Вершилова, И.Н.Кокорин // ЖМЭИ. 1954. - №1. - С. 27-31.

27. Власенко, B.C. Взаимосвязи в системе иммунитета у молодняка крупного рогатого скота, иммунизированного противобруцеллёзными вакцинами / В.С.Власенко, М.А. Бажин // Патология с.-х. животных и пути её профилактики. вып. 2. - С. 44-50.

28. Высоцкий, В.В. Ультраструктура бруцелл. Сообщ. 2. Ультраструктура R-клеток бруцелл / В.В. Высоцкий, Д.С. Курдина, Н.Н. Островская // Микробиология. 1967. - № 3. - С. 19-23.

29. Высоцкий, В.В. Ультраструктура бруцелл. Сообщ. 5. Процесс диссоциации / В.В. Высоцкий // ЖМЭИ. 1968. - № 8. - С. 42-47.

30. Грекова, Н.А. Патоморфологичская характеристика органов морских свинок, зараженных агглютиногенными и инагглютиногенными культурами В. melitensis / Микробиология. 1964. - № 6. - С. 111-114.

31. Драновская, Е.А. К вопросу о структуре и биохимических свойствах антигенов, выделенных от бруцелл / Е.А. Драновская, П.А. Вершилова, М.И. Чернышева, Э.Н. Князева // Микробиология. 1972. -№ 4. - С. 85-88.

32. Дрожевкина, М.С. Опыт применения бруцеллезного бактериофага для идентификации гемокультур, выделенных от больных бруцеллезом людей / М.С. Дрожевкина, B.C. Уралева, Н.А. Черненкова // Труды

33. Ростовск. гос. научно-исслед. противочумн. ин-та. 1955. - т.9. — С. 133136.

34. Дубровская, И.Н. Изменение антигенных комплексов бруцелл под влиянием фага / И.Н. Дубровская, Н.Н. Островская // Биохимия. — 1961. — Т. 26. С. 290-293.

35. Дубровская, И.Н. Наследственно закрепленные изменения в составе варианта бруцелл со стойко ослабленной вирулентностью / И.Н. Дубровская // Вопросы мед. химии. — 1967. — 13. №2. — С. 168-171.

36. Дубровская, И.Н. Состав специфических полисахаридов одного варианта бруцелл типа "abortus" / Биохимия. 1967. - 32. - № 1. - С. 3135.

37. Желудков, М.М. Антигенемия в динамике инфекционного и вакцинного процессов при бруцеллезе / М.М. Желудков, М.И. Чернышева, И.П. Павлова, Н.С. Умнова // ЖМЭИ. 1992. - № 7-8. - С. 71-72.

38. Жованик, П.Н. Убитая вакцина против бруцеллеза / П.Н. Жованик // ЖМЭИ. 1950. - № 6. - С. 9-12.

39. Жованик, П.Н. Дальнейшее испытание противобруцеллезной вакцины УИЭВ на крупном рогатом скоте / П.Н. Жованик //Научные труды УИЭВ. 1957 (1958). - № 24. - С. 79-13.

40. Журнакова, М.А. Дифференциальная диагностика различных вариантов группы Brucella / М.А. Журнакова // Бруцеллез с/х животных. 1935. - С. 5-8.

41. Забродин В.А. Результаты испытания вакцины против бруцеллеза из штамма 82 на северных оленях / В.А. Забродин, JI.A. Вагина, В.И. Никулина, Е.Ф. Забродина // Труды Каз. вет. института. 1980, т. 135, 60-70.

42. Замурий, И.Р. О самовыздоровлении овец, пораженных бруцеллезом / И.Р. Замурий // Ветеринария. 1949. - № 5.

43. Здродовский, П.Ф. Бруцеллез. М.: Медгиз, 1953. - 244 с.

44. Здродовский, П.Ф. Проблемы инфекции, иммунитета и аллергии. -М. 1960. - 344 с.

45. Иванов, А.В. Изыскание и результаты применения новых препаратов для специфической профилактики бруцеллёза крупного рогатого скота / А.В.Иванов, К.М. Салмаков, A.M. Фомин, Э.М. Плотникова // Ветеринарный врач. 2006. -№ 1.-С. 14-18.

46. Иванов, Б.Г. Сравнительное изучение вакцинных штаммов бруцелл / Б.Г. Иванов, П.С. Уласевич, Ю.Ф. Борисович, А.А. Клочков // Труды ВИЭВ, т. 25, 1961.-С. 31-35.

47. Иванов, М.М. Изменение свойств бруцеллезных культур воздействием антибиотиков / М.М. Иванов, JI.B. Кириллов // Труды ГНКИ, 1964, т. 12. С. 199-203.

48. Иванов, М.М. Итоги изучения вакцинных штаммов бруцелл / М.М. Иванов, Т.И. Малахова, У.Э. Ниязов // Труды ВГНКИ. 1977. - т. 23. -С. 94-103.

49. Иванов, М.М. Сравнительная иммуногенная оценка применения бруцеллезных вакцин / М.М. Иванов, Р.В. Складчиков // Ветеринария. — 1970. №4.-С. 53-57.

50. Иванова, О.И. Препараты для повышения иммуногенности противобруцеллезных вакцин / О.А. Иванова // Туберкулез и бруцеллез с.-х. животных: методы и средства диагностики и профилактики. -Новосибирск. 1994. - С. 107-108.

51. Кайтмазова, Е.И. Изучение лечебного действия сочетаний из антибиотиков при экспериментальной бруцеллезной инфекции / Е.И. Кайтмазова // Антибиотики. 1962. - № 4. - С. 324-328.

52. Кассал, Б.Ю. Управление эпизоотическим процессом бруцеллеза крупного рогатого скота / Б.Ю. Кассал, А.А. Новицкий // Ветеринария с.-х. животных. 2006. - № 1. - С. 12-16.

53. Клочков, А.А. Получение слабовирулентного штамма бруцелл воздействием ультрафиолетовых лучей / А.А. Клочков // Ветеринария. — 1964. №2. - С. 31-35.

54. Клочков, А.А. Изучение свойств слабовирулентных и слабоагглютиногенных штаммов бруцелл / А.А. Клочков // Труды ВИЭВ. 1965. - Т. 31.-С. 37-47.

55. Князева, Э.Н. Динамика образования и характеристика неполных антител у морских свинок в процессе иммуногенеза / Э.Н. Князева, М.И. Чернышева // ЖМЭИ. 1972. - № 12. - С. 77-82.

56. Козловский, Е.Н. Методика бактериоскопической диагностики бруцеллеза / Е.Н. Козловский // Сов. ветеринария. 1931. - № 1. - С. 1518.

57. Косилов, И.А. Бруцеллёз сельскохозяйственных животных / И.А.Косилов, П.К. Аракелян, С.К. Димов, А.Г. Хлыстунов; под ред. И.А. Косилова. Новосибирск. - 1999. - 344 с.

58. Котлярова, Х.С. Изучение эффективности иммунизации против бруцеллеза убитыми вакцинами (в опытах на морских свинках) / Х.С. Котлярова, П.А. Вершилова, Е.И. Кайтмазова // ЖМЭИ. 1949. - № 2. -С. 58-64.

59. Котлярова, Х.С. Сравнительные данные о вакцинных штаммах бруцелл коровьего типа в опытах на морских свинках /Х.С. Котлярова // ЖМЭИ. 1950. - № 6. - С. 13-18.

60. Красиков, А.П. Влияние иммунорегуляторов на иммуногенность противобруцеллезных препаратов / А.П. Красиков, B.C. Бронников // Бруцеллез с.-х. животных. 1989. - С. 75-78.

61. Крашенинникова, Л.А. Изучение стабильных свойств вакцинного штамма 82 / Л.А. Крашенинникова, Г.А. Белозерова, К.М. Салмаков // Ученые записки КВИ. 1978. - т. 129. - С. 48-52.

62. Кричевский, Н.Л. Желчный, формалиновый и оптохинный бруцеллезные штаммы типа bovis / Н.Л. Кричевский // ЖМЭИ. 1939. -№ 4. - С. 29-35.

63. Лазарева, Д.Н. Стимуляторы иммунитета / Д.Н. Лазарева, Е.К. Алехин. М.: Медицина. - 1985. - 256 с.

64. Логинов, Ф.С. Характеристика культур бруцелл, выделенных от коров, привитых вакциной из штамма Br. abortus №19 / Ф.С. Логинов // Сб. научн. работ СибНИВИ. В. 9. - 1961. - С. 17-26.

65. Локтева, Ф.П. Диагностика бруцеллеза в стадах коров и телок, привитых вакциной из штамма 19 / Ф.П. Локтева // Сб. научн. работ Северо-Кавказского зональн. НИВИ. 1972. - вып. 15. - С. 3-8.

66. Локтева, Ф.П. Испытание противобруцеллезной формолквасцовой вакцины / Ф.П. Локтева // Ветеринария. 1946. - № 7. - С. 20-23.

67. Макаев, Х.Н. Иммуномодулирующие средства при вакцинации животных против инфекционных болезней / Х.Н. Макаев, Д.А. Хузин, А.Г. Андреева, Э.Г. Зиатдинов, Р.А. Асрутдинова // Ветеринарный врач. — 2007. спецвыпуск. - С. 23-26.

68. Минервин, С.М. Причины изменчивости агглютинабильной способности микробов группы Brucella / С.М. Минервин // Бруцеллез сельскохозяйственных животных. М. - 1934. С. 54-65.

69. Невский, И.Н. Иммунобиологическая характеристика штамма бруцелл № 12 Уз.НИВИ / И.Н. Невский // Сб. научн. трудов научно-исслед. ин-та ветеринарии Узбек, акад. с.-х. наук. — 1959. — вып. 13. — С. 140-143.

70. Никитенко, A.M. Применение препарата тимуса для повышения общей резистентности молодняка / A.M. Никитенко, Л.А. Заика // Ветеринария. 1984. - № 8. - С. 35-37.

71. Никифоров, И.П. Живые слабоагглютиногенные вакцины в системе противобруцеллезных мероприятий: Дис. . д-ра вет. наук (в форме научного доклада). Барнаул, 1996. - 47 с.

72. Новицкий, А.А. Испытание некоторых методов диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота / А.А. Новицкий, К.П. Ворошилов, И.А, Косилов // Сибирский вестник с.-х. науки. — 1975. — в.22. — С. 65-67.

73. Новицкий, А.А. Оптимизация специальных мероприятий против бруцеллеза крупного рогатого скота: Дис. . д-ра вет. наук (в форме научного доклада). Казань. - 1989. - 46 с.

74. Новицкий, А.А. Серологические показатели у коров после иммунизации противобруцеллезными вакцинами по разным схемам / А.А. Новицкий, Т.Г. Попова, Н.Н. Маскаев // Бруцеллез с.-х. животных. -1989. С. 33-40.

75. Новосельцев, Н.Н. Изменчивость бруцелл в организме иммунных животных / Н.Н. Новосельцев // Труды Ростовск. гос. научно-исслед. противочумн. ин-та. 1959. — т.14. - С. 147-151.

76. Омаров, К.С. Опыт заражения рыб Br. melitensis / К.С. Омаров // Изв. АН Казах. ССР, серия краевой патологии / Сб. работ по бруцеллезу. -1951.-в. 5.-С. 37-38.

77. Орлов, Е.С. Изучение морфоквасцовой вакцины при бруцеллезе / Е.С. Орлов, В.Е. Карнеева, О.И. Морякова, М.И. Чернышева // Ветеринария. 1946. - № 7. - С. 20-22.

78. Орлов, Е.С. Испытание иммуногенных свойств слабовирулентного штамма Br. bovis / Е.С. Орлов, Ю.Ф. Борисович // Бюлл. научно-технич. информации ВИЭВ. 1956. - № 1. — С. 12-15.

79. Орлов, Е.С. Изучение иммунитета у овец, вакцинированных различными штаммами бруцелл / Е.С. Орлов, П.С. Уласевич, М.М. Иванов // Труды ВИЭВ. т. 29. - 1962. -С. 31-34.

80. Орлов, Е.С. Изучение напряженности иммунитета у овец, привитых вакцинами из штаммов Br. abortus 19 и Br. melitensis / Е.С. Орлов, М.М.Иванов, П.С. Уласевич // Труды ВИЭВ. т. 31. - 1965. - С. 3-7.

81. Орлов Е.С. К вопросу о самовыздоровлении бруцеллезных овец / Е.С. Орлов // Ветеринария. 1942. - № 10. - С. 19-22.

82. Орлов, Е.С. Сравнительное изучение вирулентных и иммуногенных свойств шести вакцинных штаммов бруцелл / Е.С. Орлов, М.М. Иванов, П.С. Уласевич // Бюлл. ВИЭВ. в.10. - 1971. - С. 160-163.

83. Островская, Н.Н. Распространение бруцеллёзного бактериофага среди культур бруцелл и характеристика последних / Н.Н. Островская,

84. Ф.В.Чистякова // Изменчивость микроорганизмов. М. - 1957. - 2. - С. 88-91.

85. Островская, Н.Н. Изменчивость бруцелл под влиянием бактериофага и перспективы получения новых вакцинных штаммов / Н.Н.Островская // Изменчивость микроорганизмов и бактериофагия. — М.- 1960. С. 300-302.

86. Островская, Н.Н. Изучение стабильности свойств вариантов бруцелл, полученных в результате воздействия бактериофага / Н.Н. Островская // ЖМЭИ. 1961. - № 8. - С. 122-125.

87. Островская, Н.Н. К вопросу об образовании L-форм у бруцелл в условиях искусственной питательной среды / Н.Н. Островская // ЖМЭИ.- 1972. № 4. -С. 108-111.

88. Островская, Н.Н. Экспериментальное изучение вакцинных свойств варианта Br.abortus, полученного под воздействием бруцеллезного фага «Тб» / Н.Н. Островская // ЖМЭИ. 1965. - № 7. - С. 36-39.

89. Ощепков, В.Г. R-, L- формы бруцелл и значение их в эпизоотологии и диагностике бруцеллеза животных: Автореф. дисс. . док. вет. наук. Л. - 1990. - 38 с.

90. Парамонова, Э.И. Изменение свойств штаммов Brucella abortus при пассаже через организм черепах / Э.И. Парамонова // Труды Казах. НИВИ. 1963. - т. 11. - С. 53-57.

91. Парнас, Ю. О возможности трансформации вариантов бруцелл / Ю. Парнас // ЖМЭИ. 1958. - №5. - С. 123-128.

92. Первушин, Б.П. Явление диссоциации в культурах бруцелл и изменчивость типовых признаков / Б.П. Первушин // Сб. научн. трудов Куйбышевского мед. института. 1957. - С. 168-176.

93. Петров, Р.В. Иммунология. М.: Медицина. - 1987. - 414 с.

94. Петровская, В.Г. Генетические основы вирулентности патогенных и условно-патогенных бактерий / В.Г.Петровская // ЖМЭИ.-1984.-№7.-С. 77-85.

95. Пинегин, Б.В. Полиоксидоний — новое поколение иммуномодуляторов с известной структурой и механизмом действия / Б.В. Пинегин // Аллергия, астма и клиническая иммунология. — 2000. — № 1.-С. 27-28.

96. Пинигин, А.Ф. К вопросу изменчивости группы Brucella в процессе их хранения в лабораторных условиях / Пинигин А.Ф. // Известия Иркутск, гос. противочумн. ин-та Сибири и Дальнего Востока. 1951. - Т. 9. - С. 63-72.

97. Плотников, К.И. Бруцелловыделение и бациллоносительство у бруцеллёзного крупного рогатого скота в стадии выздоровления и характеристика выделенных диссоциантов бруцелл / К.И. Плотников // Ветеринария. 1948. - № 11. - С. 19-20.

98. Погорелов, Н.А. Итоги изучения инагглютинабельных форм бруцелл / Н.А. Погорелов, И.Ф. Таран // Зоонозы. Ставрополь. - 1966. -С. 126-129.

99. Ш.Попова, Т.Г. Купирование бруцеллеза с применением химической вакцины ВНИИБТЖ / Т.Г. Попова, B.C. Бронников, В.Г. Ощепков // Мат. междунар. симпозиума, 28-30 ноября 2005 г. Ч. II. - Казань. - 2005. -С. 267-272.

100. Попхадзе, М.З. Изменчивость Br.melitensis на искусственной питательной среде. Живые вакцины / М.З. Попхадзе // Сб. трудов межинститут, научн. конференции. — 1956. Т. 11. — С. 307-312.

101. Ременцова, М.М. Характеристика бруцелл, прошедших через организм клещей / М.М. Ременцова // Труды ин-та зоологии АН Казах. ССР. 1953. - Т. 1. - С. 53-56.

102. Романенко, В.Г. Изучение биологических свойств штаммов бруцелл, выделенных от различных видов животных / В.Г. Романенко // Труды Азово-Черноморской НИВС. 1936. - Вып. 4. - С. 39-56.

103. Пб.Рягузов, B.C. Новый вакцинный штамм бруцелл № 21 / B.C. Рягузов // Сб. научных трудов Донского СХИ. 1967. - Т. 3. - в. 3. - С. 5-8.

104. Салмаков, К.М. Живая вакцина из штамма В. abortus 82 и её эффективность в профилактике и ликвидации бруцеллёза / К.М. Салмаков, Ю.Ш. Абузаров, Б.А. Киршин // Науч. труды Казанского гос.вет. ин-та. т.135. - 1980. - С. 27-34.

105. Салмаков, К.М. Изучение живых и убитых бруцеллезных вакцин на крупном рогатом скоте в экспериментальных условиях / К.М. Салмаков // Материалы конф. молодых ученых. 1970. - С. 70-71.

106. Салмаков, К.М. Изыскание и испытание новых вакцинных штаммов бруцелл: Автореф. дисс. . док. вет. наук. Казань. — 1977. — 32 с.

107. Салмаков, К.М. Изыскание и совершенствование вакцинных препаратов против бруцеллеза / К.М. Салмаков // Сб. научн. трудов. -Новосибирск. 1987. - С. 26-36.

108. Салмаков, К.М. Результаты изучения вакцинного штамма 82 и его испытания на крупном рогатом скоте в производственных условиях /

109. К.М.Салмаков // Материалы докладов Всесоюзной научн. конф. 1974. -т.1. — С. 154-156.

110. Салмаков, К.М. Эффективность применения живой вакцины из штамма 82 на крупном рогатом скоте / К.М. Салмаков, Ю.Ш. Абузаров, Б.А. Киршин // Ученые записки КВИ. 1978. - С. 38-44.

111. Салтыков, Р.А. Стабилизация иммуногенных свойств вакцинных штаммов бактерий / Р.А. Салтыков // ЖМЭИ. 1976. - № 8. - С. 3-9.

112. Свиридов, Л.П. Изучение влияния иммуностимуляторов на устойчивость белых мышей к возбудителю брюшного тифа / Л.П.

113. Свиридов, А.В.Степанов, Р.Е.Коникова, Б.С.Устинов // ЖМЭИ. 1990. -№ 4. - С. 70-73.

114. Селиванов, А.В. Результаты сравнительных исследований патогенных и иммуногенных свойств инагглютинабельного штамма Вг. melitensis № 7270 и Br. abortus 19 / А.В. Селиванов, Л.П. Рыжкова // Сб. научных работ Сибир. НИВИ. 1966. - в. 14. - С. 329-332.

115. Смирнов, И.К. Получение авирулентных культур Brucella bovis / И.К. Смирнов // Совет, ветеринария. 1938. - № 6. - С. 48-55.

116. Спиридонов, Г.Н. Влияние отдельных иммуномодуляторов на показатели противотуберкулезного иммунитета: Автореф. дисс. . канд. вет. наук. Казань. - 1988. - 20 с.

117. Степин, B.C. Сравнительное содержание бруцеллёзных антител в сыворотке крови и регионарной лимфе и их превентивные свойства / В.С.Степин, Ю.Ф. Грамс // Труды Алма-Атинского зоовет. ин-та. 1972. -т. 20.-С. 146-148.

118. Таран, И.Ф. Иммунологическая реактивность морских свинок в условиях взаимных наслоений вакцинного и инфекционного процессов при бруцеллёзе / И.Ф. Таран, Н.А. Погорелов, Н.А. Рыбасов // Проблемы особо опасных инфекций. 1969. - № 4. - С. 63-67.

119. Тевосов, A.M. Длительность иммунитета у животных, привитых вакциной из штамма № 19 / A.M. Тевосов // Ветеринария. 1961. - № 9. -С 25-31.

120. Тимофеев, А.Ф. Изменение бруцелл типов Bovis и Melitensis под влиянием организма иксодовых клещей и тирация бруцеллезных штаммов / А.Ф.Тимофеев // Известия АН Киргиз. ССР. Серия биол. наук. - т. 4. - в. 5. - 1962. - С. 15-26.

121. Третяк, Н.Т. Оздоровление маралов от бруцеллеза с помощью прививки вакцины из штамма 82 / Н.Т. Третяк // Ветеринария. — 1985. -№ 5.-С. 23-25.

122. Триленко, П.А. Особенность иммунитета под влиянием вакцин из инагглютиногенных штаммов бруцелл / П.А. Триленко // Бюлл. ВИЭВ. -1971. в. 10. - С. 43-49.

123. Тульчинская, В.П. Белок бруцелл и его применение для дифференциации иммунизированных от больных бруцеллезом / В.П. Тульчинская, Д.А. Пуверкалов // Научный ежегодник Одесского ун-та. -в. 2. Биологич. фак-т. - 1960. - С. 196-201.

124. Уласевич, П.С. Иммунизация овец вакциной из штамма Вг. melitensis Rev 1 / П.С. Уласевич // Ветеринария. 1975. - № 12. - С. 5761.

125. Уласевич, П.С. Применение вакцины из штамма Rev 1 в целях профилактики бруцеллёза мелкого рогатого скота / П.С. Уласевич // Труды ВИЭВ. 1974. - т.42. - С. 257-262.

126. Уразов, Т.Н. Изучение иммуногенеза и иммунных свойств новых вакцинных штаммов бруцелл / Т.Н. Уразов, Г.М. Сафина, A.M. Фомин,

127. A.К. Галиуллин, К.М. Салмаков, Э.М. Плотникова, Р.А. Салахутдинов,

128. B.П. Ильичев, Г.М. Ахунова, О.Т. Муллакаев, Г.Р. Нурмухаметова // Ветеринарный врач. -2004. №1. - С. 13-17.

129. Уралева, B.C. К вопросу об изменчивости бруцелл типа melitensis / В.С.Уралева // Труды Ростов, гос. научно-исслед. противочумн. ин-та. -т. 8. в. 2. - 1961. - С. 123-128.

130. Уралева, B.C. Характеристика антибиотикоустойчивого штамма Brucella melitensis 599-Т-17 как возможного вакцинного / Уралева B.C. // Спец. профилактика особо опасных инфекций. М. - Медицина. - 1964. -С. 193-199.

131. Фишбейн, В.Я. Получение авирулентной бруцеллёзной культуры и изучение её культурально-биохимических свойств / В.Я. Фишбейн // Вестник с.-х. науки. Ветеринария. - 1940. - № 1. - С. 9-14.

132. Фомин, A.M. Абортогенные и антигенные свойства антибиотикорезистентных вариантов штамма В. abortus 82 / A.M. Фомин, К.М. Салмаков, Г.М. Сафина, Г.М. Галимова, Р.А. Крючков // Ветеринарный врач. 2006. - № 1. - С. 18-20.

133. Харисов, Ш.Х. К вопросу изучения иммуногенных свойств противо бруцеллёзной вакцины ЛенНИВИ / Ш.Х. Харисов, Р.В. Сахарова // Ученые записки Казан, ветинститута. 1964. - вып. 90. — С.235-238.

134. Цэрэндаш, Ч. Опыт применения вакцины из штамма Br. melitensis Рев-1 на крупном рогатом скоте с условиях МНР / Ч. Цэрэндаш // Инфекционная патология сельскохозяйственных животных: Труды ВИЭВ. М. - 1984. - Т. 61. - С. 21-26.

135. Чернышева, М.И. Пигментообразование у бруцеллёзных культур / М.И.Чернышева // Ветеринария. 1950. - № 9. - С. 52-54.

136. Чернышева, М.И. Изучение роли РЭС в иммунитете при бруцеллёзе. Сообщение 1 / М.И. Чернышева // Труды ВИЭВ. 1952. - Т. 19.-С. 171-176.

137. Чернышева, М.И. К гистохимической характеристике морфологических реакций при бруцеллёзной инфекции / М.И. Чернышева // Бюлл. экспер. биологии и медицины. 1957. - т. 44. - Вып. 19. - С. 109-113.

138. Чернышева, М.И. Цитологический метод изучения механизма иммунитета при бруцеллёзе / М.И. Чернышева // Доклады ВАСХНИЛ. —1957.-Т. 9.-С. 11-16.

139. Чернышева, М.И. Цитологический метод изучения формирования прививочного иммунитета при бруцеллёзе / М.И. Чернышева // ЖМЭИ. —1958. № 11. - С. 20-24.

140. Шахов, А.Г. К вопросу об иммуногенных свойствах штаммов бруцелл, не образующих антител / А.Г. Шахов // Труды Воронеж. НИВС. 1966.-в. 5.-С. 57-61.

141. Штритер, В.А. Бактериологическая картина бруцеллёза у морских свинок и белых мышей при подкожном заражении / В.А. Штритер // Архив биологич. наук. 1939. - т. 53. - в. 1. - С. 64-69.

142. Шуралев, Э.А. Изыскание иммуномодуляторов для повышения эффективности бруцеллёзных вакцин. 1999. - 21 с.

143. Щипко, С.Г. Реактогенные и иммуногенные свойства вакцины из штамма 82 на свиньях / С.Г. Щипко // Сб. научн. трудов Казан, вет. инта. 1984. - С. 65-75.

144. Щипко, С.Г. Специфическая профилактика бруцеллеза свиней с помощью живой вакцины из штамма В. abortus 82 / С.Г. Щипко // Автореф. дисс. . канд. вет. наук. Казань. - 1989. - 21 е.

145. Юсковец, М.К. Бруцеллёз сельскохозяйственных животных. — М. — 1960.-С. 67-78.

146. Юсковец, М.К. Вакцинация при бруцеллёзе крупного рогатого скота вакциной из штамма № 19 / М.К. Юсковец // Ветеринария. 1946. -№ 7.-С. 16-18.

147. Юсковец, М.К. Об изыскании вакцинных штаммов бруцелл / М.К.Юсковец, А.И. Колесова // Труды ГНКИ. т. 3. - 1952. - С. 62-71.

148. Alton, G. The occurrence of dissociated strains of Brucella melitensis in the milk of goats in Malta / G. Alton // J. Compar. Pathol, and Therapy. -1969.-70.-N. l.-P. 10-17.

149. Antoni, V. Varizioni della Brucella melitensis nel maleto (Variation de la Br. melitensis cher la malade) / V. Antoni // Policl. sez. pat. 1934. - 4. -P. 131-135.

150. Berger, J. Reproductive Synchrony in Brucellosis-Exposed Bison in the Southern Greater Yellowstone Ecosystem and in Noninfected Populations / J. Berger, S.L. Cain // Conservation Biology. vol. 13. - No. 2, April 1999. -P. 357-366.

151. Braun, W. On the problem of naturally occurring aberrant strains of brucella / W. Braun, G. Oglesby // Proc. Ses. Exp. Biol. Med. 1962. - 109. -P. 875-879.

152. Buck, J.M. Studies of vaccination during calfhood to prevent bovine infection abortion / J.M. Buck // J. agric. ros. 41. - 1930. - P. 667-672.

153. Burnet, E. Sur le paramelitensis et l'emploi de termes "paramelitensis", paratyphique, parameningococcique etc. dans la nomenclature des bacteries / E.Burnet // C.R. Soc. Biol. 1925. - 93. - P. 340-347.

154. Chen, T.H Immunization against Brucella infections: serological and immunological studies on a soluble antigen from Brucella melitensis / Т.Н. Chen, S.S. Elberg // J. Infect. Diseases. 1969. - 120. - N. 2. - P. 143-148.

155. Davis, D.S. Brucella abortus in bison. II. Evaluation of strain 19 vaccination of pregnant cows / D.S. Davis, J.W. Templeton, T.A. Ficht, J,D, Huber, R,D, Angus, L.G. Adams // J. of Wildlife Diseases. 1991. - No. 27 (2). - P. 258-264.

156. Elberg, S.S. Immunity to brucella infection / S.S. Elberg // Medicine. -1973. 52. - N. 4. - P. 339-345.

157. Favilli, G. Die Alcune agglutinazioni specifiche nei Batteri del gruppo abortus-melitensis-paramelitensis effete prodotti sugli stessi batteri dal ripetuto con sieri immuni / G. Favilli // Sperimentale. 1926. - 80. - 4. - P. 395-402.

158. Foster, I.W. Immunological role of Brucella abortus cell walls / I.W. Foster, E. Ribi // J. Bacteriol. 1962. - 84. - N. 2. - P. 258-266.

159. Gwatkin, R. Search for a Brucella bacteriophage / R. Gwatkin // J. Inf. Dis. 1931. -48. - P. 404-411.

160. Hart, G.H. The relation of the subcutaneous administration of living В act. abortus to the immunity and carrier problem of bovine infection abortions / G.H.Hart, G. Frahm // Bacteriology. Ref. - 127. - 84. - P. 7682.

161. Henry, B. Dissociation in genus Brucella / B. Henry // J. Inf. 1933. -52.-P. 374-402.

162. Herriges, J.D. Vaccination to control brucellosis in free-ranging elk on Western Wyoming feed grounds / J/D/ Herriges, E.T. Thorne, S.L. Anderson // The Biology of Deer. Springer-Verlag, New York. - 1992. - P. 107-112.

163. Herzberg, M. Immunization against brucella infection. Effectiveness of a streptomycin-dependent strain of Brucella melitensis / M. Herzberg, S.S. Elberg, K.F. Meyer//J. Bacteriol. 1953. - 66. - N. 5. - P. 600-611.

164. Holland, J.J. A cellular basis of immunity in experimental Brucella infection / J.J. Holland, H.J. Pickett // J. Exp. Med. 1958. - N. 3. - P. 343352.

165. Huddleson, J. The effect of Bacterial cells and sonic extracts from Bacterial cells in Culture Mediums on the Colonial Growth of Brucella Abortus / J.Huddleson // Amer. J. Veter. Res. 1955. - 16. - N. 59. - P. 264268.

166. Jacotot, H. Etude experimentale d'une brucella streptomycine-dependente derive de la sauce B-19 (Olitzki) / H. Jacotot, A. Vallee // Ann. Inst. Pasteur. 1959. - 96. - N. 4. - P. 481-489.

167. Jacotot, H. Quelques observations relatives aux mutations duns le genre brucella / H. Jacotot, A. Vallee // Ann. Inst. Pasteur. 1962. - 102. -N. l.-P. 109-117.

168. Janney, G.C. Staining intracellular Brucella organisms by means of fluorescent antibodies / G.C. Janney, D.T. Berman // Amer. J. Vet. Res. -1962. -23. P. 596-608.

169. Keiter, R.B. Greater Yellowstone bison: unraveling of an early American wildlife conservation achievement / R.B. Keiter // J. Wildl. Manage.-Jan. 1997. 61(1). - P. 1-11.

170. Kreeger, T.J. Safety and efficacy of Brucella abortus strain RB51 vaccine in captive pregnant elk / T.J. Kreeger, M.W. Miller, M.A. Wild, P.H. Elzer, S.C. Olsen // J. of wildlife Diseases. 2000. - No. 36 (3). - P. 477483.

171. Metre, D.C. Brucellosis induced by RB51 vaccine in a pregnant heifer / D.C. Van Metre, G.A. Kennedy, S.C. Olsen, G.R. Hansen, D.R. Ewalt // JAVMA. Vol. 215.-No. 10, November 15, 1999. - P.1491-1493.

172. Olitzki, A. The use of streptomycinresistant and nonresistant strains of the determination of the immunizing effect of living "Br. Abortus" vaccines in white mice / A. Olitzki, D. Sulitzeanu // J. Infect. Dis. 1954. - 94. - P. 213-222.

173. Olsen, S.C. Immune responses of bison to ballistic or hand vaccination with Brucella abortus strain RB51 / S.C. Olsen, T.J. Kreeger, W. Schultz / J. Wildl. Dis. 2002, Oct. - No. 38(4). - P. 738-745.

174. Osterman, B. International committee on systematic of prokaryotes; subcommittee on the taxonomy of Brucella / B. Osterman, I. Moriyon // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. Vol. 56 (5). - 2006. - P. 1173-1175.

175. Parnas, I. Zmiennose paleczck Brucella koleke ciji krajowej / I. Parnas, A. Chodkowski // Acta microbiology. Polon. 1956. - 5. - N. 3-4. - P. 371375.

176. Parnas, I. New studies on the variability of Brucella / I. Parnas, K. Kosakova // Arch. Inst. Pasteur. Tunis. - 1958. - 35. - N. 2. - P. 179-185.

177. Parnas, I. Studies on the antigenic structure of Br. Brucei with the aid of the precipitation reaction in gel and electrophoresis / I. Parnas, K. Burdzy, M. Cegielka // Bull. Acad. Polon. Sci. Ser. Biol. 1961. - 9. - N. 7. - P. 289298.

178. Pickett, M. Speciation within the genus Brucella. Evaluation of differential dye, biochemical and serological tests / M. Pickett, E. Nelson, I. Leberman // J. Bacter. 1953. 66. - 2. - P. 210-217.

179. Renoux, G. Spontaneous lysis and phage carrier state in brucella cultures / G. Renoux, A. Suire // J. Bact. 1963. - 86. - I. - P. 642-648.

180. Sanders, L. The influence of environmental conditions on the growth and dissociation of Brucella abortus / L. Sanders, I. Huddleson // Amer. J. Veterin. Res. 1956. - 17. - N. 63. - P. 324-330.

181. Sergent, E. Immunite et premonition / E. Sergent, L. Parrot // Ann. Inst. Pasteur. 1935. - 55. - N. 4. - P. 385-393.

182. Simon E.M. Patogenity and immunogenity of streptomycin-dependent mutants of Brucella / E.M. Simon, D.T. Berman // J. Bacteriol. 1962. -Мщдю 83. - N. 6. - P. 1347-1354.

183. Smith, H. The chemical basis of the virulence of Brucella abortus. IV. Immunogenic products from Brucella abortus grown in vivo and in vitro / H. Smith, J. Veppie, J.H. Pearce, K. Witt // Brit. J. Exp. Pathol. 1962. - 43. -N. 5. - P. 538-545.

184. Sulitzeanu, D. Immunity against Brucella / D. Sulitzeanu // Nature. -Lond. 1965. - 205. - P. 1086-1094.

185. White, P.G. Differentiation of smooth colonies of Brucellae / P.G. White, I.B. Wilson//J. Bacter. 1951. - 61. - 2. - P. 239-240.

Информация о работе

Салмакова, Александра Владимировна
кандидата биологических наук
Казань, 2010
ВАК 06.02.02

Диссертация

Сравнительное изучение живых вакцин из различных штаммов B.abortus и влияния иммуномодуляторов на их эффективность - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы