Сравнительное изучение иммунобиологических свойств вакционного штамма B.abortus R-1096

Сафина, Гульнара Миннирашитовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Сравнительное изучение иммунобиологических свойств вакционного штамма B.abortus R-1096
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Сравнительное изучение иммунобиологических свойств вакционного штамма B.abortus R-1096"

На правах рукописи

Сафина Гульнара Миннирашитовна

Сравнительное изучение иммунобиологических свойств вакцинного штамма В. abortus R-1096

03.00.07 - микробиология

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Казань-2004

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник А. М. Фомин

Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, заслуженный ветврач РСФСР, доктор ветеринарных наук, профессор К. М. Салмаков

Официальные оппоненты: заслуженный деятель науки РТ, доктор

ветеринарных наук, профессор А. М. Алимов

доктор ветеринарных наук, профессор М. В. Харитонов

Ведущее учреждение: Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулёза животных.

Защита состоится «_<£_» ^СсИ-^тл. 2004 года в /£*ШСОВ на заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте (420075, г. Казань, Научный городок - 2, ВНИВИ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИВИ.

Автореферат разослан 2004 года.

Учёный секретарь диссертационного сов*

Степанов.

2004-4 23833

3 7 /' '

1. Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. В отдельных регионах страны остаётся актуальной проблема бруцеллёзной инфекции, приносящей не только большой экономический ущерб животноводству, но и представляющей угрозу здоровью населения.

На территории России в 50-е годы прошлого столетия широко изучали и применяли для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота и других видов животных вакцину из агглютиногенного штамма B.abortus 19. Использование этой вакцины на крупном рогатом скоте в регионах со сложной эпизоотической обстановкой обеспечивало снижение заболеваемости животных и оказывало благоприятное влияние на эпидемиологическую обстановку. Однако улучшить эпизоотическую ситуацию по бруцеллёзу в целом по стране в результате её применения не удалось. Были обнаружены отрицательные свойства данного биопрепарата, в частности, его высокая агглютиноген-ность (О.И. Морякова, П.А. Триленко).

Более эффективной в данном отношении оказалась вакцина из слабоагг-лютиногенного штамма В. abortus 82, широко применяемая в стране с 1974 года. Так, благодаря её использованию по определенным схемам в Российской Федерации число неблагополучных пунктов сократилось с 5305 в 1974 г. до 83 в 2002 г., т.е. в 64 раза, многие регионы полностью оздоровлены от данного заболевания (В.М. Авилов, К.М. Салмаков, А.А. Новицкий, 2000).

Однако в ряде оздоровленных хозяйствах некоторых областей при многократных ревакцинациях этой вакциной обнаруживается значительное количество животных с положительными поствакцинальными серологическими реакциями на бруцеллёз, которые необходимо дифференцировать, затрачивая время и средства (А.М. Фомин, К.М. Салмаков, 2003).

Поствакцинальная дифференциальная диагностика довольно трудоёмка, но она может быть решена. В связи этим в оздоровленных областях перспективно использование инагглютиногенных вакцин, так как при их применении практически отсутствуют препятствия для поствакцинальной диагностики в любые сроки (П.А. Триленко, 1976; С.К. Димов и др., 1992). Эффективность инагглютиногенных вакцин связана не только с иммунитетом, но и с их провоцирующими свойствами. Но у данных биопрепаратов есть недостаток - низкая иммуногенность. В последнее время появилась возможность повысить иммуно-генность инагглютиногенных вакцин с помощью различных неспецифических иммуностимулирующих средств.

В 1964 году профессором К.М. Салмаковым ВНИВИ с помощью бактериофага был получен штамм В. abortus R-1096. Этот штамм в последние годы изучали исследователи нашего института в качестве антигена, аллергена и как вакцину (A.M. Фомин, 1975; К.М. Салмаков, 1977; М.Х. Лутфуллин, 1983; Д.А. Хузин, 1983 и др.). Их исследования показали, что штамм R-1096 обладает свойствами вакцинного штамма. Однако эти исследования носили не систем-

ный характер. При этом штамм R-1096 авторы использовали также в качестве контроля при изучении других биопрепаратов.

Всё вышесказанное определило направление наших исследований.

Цель и задачи исследований. Цель исследований — изучить иммунобиологические свойства вакцинного штамма В. abortus R-1096, влияние иммуно-модуляторов на формирование и течение противобруцеллёзного иммунитета у лабораторных животных, привитых этой вакцинной, испытать этот биопрепарат на крупном рогатом скоте в производственных условиях. Для реализации намеченной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить культурально-морфологические свойства штамма R-1096.

2. Изучить антигенные свойства, длительность приживаемости, остаточную вирулентность и контагиозность штамма R-1096 на морских свинках.

3. Исследовать стабильность штамма R-1096 при пассажах через организм морских свинок.

4. Изучить иммуногенез и иммуногенные свойства штамма R-1096 при вакцинации и ревакцинации на морских свинках и влияние иммуномо-дуляторов на эти показатели.

5. Испытать вакцину из штамма R-1096 на крупном рогатом скоте в производственных условиях.

Научная новизна. Впервые в лабораторных условиях наиболее полно изучены иммунобиологические свойства вакцинного штамма В. abortus R-1096. Установлено, что культуры бруцелл этого штамма являются инагглютинабиль-ными по S-антигену бруцелл. Приживаются в течение 2-х месяцев в организме морских свинок, сохраняют стабильность свойств при 10-ти кратных пассажах через организм этих животных, вызывают активный вакцинный процесс в дозе 1000 м.к. Не обладают контагиозностью.

Показаны высокие иммуногенные свойства вакцины из штамма R-1096 при ревакцинации морских свинок по фону вакцины из штамма 82.

Установлено стимулирующее влияние тиосульфата натрия на иммуноген-ные свойства этой вакцины на морских свинках.

Получены положительные результаты при производственной апробации вакцины из штамма R-1096 для профилактики бруцеллёза крупного рогатого скота на заключительном этапе борьбы с этой инфекцией.

Практическая значимость. Всестороннее и детальное изучение штамма В. abortus R-1096 позволило с уверенностью считать его вакцинным. Полученные данные облегчили практическое применение вакцины из штамма R-1096 для провокации заболевания при проведении оздоровительных мероприятий в неблагополучных хозяйствах и профилактических мероприятий в оздоровленных хозяйствах с целью поддержания эпизоотического благополучия в стадах по этой инфекции без поствакцинальной серопозитивности.

Основные положения, выносимые на защиту:

- Иммунобиологические свойства вакцинного штамма В. abortus R-1096.

- Влияние иммуномодуляторов на иммуногенез и иммуногенные свойства этого штамма в условиях эксперимента.

- Результаты апробации вакцины из штамма R-1096 в производственных условиях.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на заседаниях ученого совета ВНИВИ в виде ежегодных отчетов (20012003); научно-производственной конференции (Казань, 2001); Межрегиональной научно-практической конференции (Барнаул,2002); Международной научно-практической конференции (Покров, 2002); Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2002).

Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, доложены, обсуждены и одобрены на межлабораторном совещании сотрудников ВНИВИ (Казань, 2003).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 6 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 162 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, практические предложения, список использованной литературы и приложения.

Работа иллюстрирована 22 таблицами. Список литературы включает 170 источников, в том числе иностранных 57. В приложении представлены документы, подтверждающие результаты основных этапов работы.

2. Собственные исследования 2.1. Материалы и методы исследований.

Работу выполняли в 2000-2003 г.г. согласно государственному плану научных исследований (номер Госрегистрации 01200202602) на базе лаборатории контроля и индикации возбудителей бактерийных инфекции с музеем штаммов ВНИВИ (г. Казань) и в ветеринарных лабораториях и животноводческих хозяйствах Самарской области.

В опытах использовали 147 морских свинок и 1107 голов крупного рогатого скота.

При проведении исследований применяли культурально-морфологические, серологические, бактериологические, иммунологические и другие методы.

С целью изучения гуморального иммунитета в исследованиях использовали серологические реакции: роз-бенгал пробу (РБП), агглютинации (РА), связывания комплемента (РСК), пассивной гемагглютинации (РПГА) и имму-ноферментный анализ (ИФА). При постановке реакций применяли единый бруцеллезный и роз-бенгал антигены Щелковского биокомбината и R-антиген, приготовленный во ВНИВИ. ИФА проводили совместно с доцентом лаборатории бактерийных инфекций ВНИВИ Э.М. Плотниковой.

При изучении клеточного иммунитета использовали опсоно-фагоцитарную реакцию (ОФР). ОФР ставили по методике В.А Штритера. При исследовании вычисляли фагоцитарное число.

Культурально-морфологические свойства штамма изучали по общепринятой схеме ФАО/ВОЗ. В число рекомендуемых методов вошли комплекс тестов: микроскопия, скорость и характер роста на питательных элективных средах - печеночно-пептоном глюкозо-глицериновом агаре (ППГГ А), печеночно-пептоном глюкозо-глицериновом бульоне (ППГТБ), потребность в повышенном содержании СО2, способность образовывать H2S, лизис фагом «Тб», рост на питательных средах с красками (тионин 1:25, 50 и 100 тыс.; фуксин 1:50 и 100 тыс.), окраска колоний по Уайт-Вилсону, проба термоагглютинации, проба с трипафлавином, чувствительность к пенициллину (0,5;5;50;100 ЕД/мл.), антигенные свойства культур с использованием специфических бруцеллезных S- и R-сывороток и монорецепторных «А» и «М» сывороток.

Бактериологический метод исследований использовали для выделения культур из организма привитых и зараженных животных. Для этого из 10 объектов от морских свинок (парные подчелюстные, заглоточные, паховые и пара-ортальный лимфатические узлы, печень, селезенка и костный мозг) делали высевы на питательные среды: ППГГА, ППГГБ, эритрит - агар. Посевы инкубировали в термостате при 37°С в течение 2-х недель. Выделенные культуры бру-целл идентифицировали, используя реакцию агглютинации на стекле с применением S- и R-сывороток. Учитывали индекс инфицированности (ИИ), индекс веса селезенки (ИВС) и процент иммунных животных.

Исследования проводили в 5 этапов. На первом этапе изучали культу-рально-морфологические свойства штамма В. abortus R-1096. На втором этапе работы в опытах на морских свинках определяли остаточную вирулентность, длительность приживаемости, антигенные свойства и контагиозность штамма. Третий этап работы заключался в изучении стабильности вакцинного штамма R-1096 при его последовательных пассажах через организм морских свинок. На четвертом этапе работы провели ряд опытов с целью изучения иммуногенеза и иммуногенных свойств штамма R-1096 при вакцинации и ревакцинации морских свинок и влияние иммуномодулятора на эти показатели. Пятый этап работы заключался в испытании вакцины из этого штамма на крупном рогатом скоте в производственных условиях.

Все полученные данные подвергали статистической обработке по методике, описанной И.П. Ашмариным и А.Н. Воробьевым (1962), с выведением

среднего арифметического (М), квадратичного отклонения (6-:игма) и ошибки среднего арифметического (±м).

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Изучение культурально-морфологических свойств вакцинного штамма В. abortus R-1096. Изучение свойств штамма R-1096 проводили по общепринятой схеме ФАО/ВОЗ. В качестве контролей при этом использовали вакцинные штаммы В. abortus 19, 82, 82-ПЧ и референтные вирулентные штаммы В. abortus 544, В. suis 1330, В. melitensis 16 М.

Установили, что вакцинный штамм R-1096 хорошо растет на печеночных средах в обычной атмосфере, образуя при этом сероводород. Отмечается его рост во всех разведениях тионина и фуксина, показывает положительные пробы на диссоциацию: колонии окрашиваются в фиолетовый цвет по Уайт-Вилсону, дает положительную термоагглютинацию и пробу в трипафлавине (++++), слабочувствителен к пенициллину. Культуры этого штамма реагируют положительно в РА на стекле с R-сывороткой и отрицательно с S-сывороткой, не лизируются фагом «Тб».

2.2.2 Определение остаточной вирулентности, длительности приживаемости, антигенных свойств и контагиозности штамма R-1096 на морских свинках. Для изучения остаточной вирулентности и антигенных свойств штамма R-1096 был поставлен опыт на морских свинках, разделенных на 9 групп. Животных первой группы иммунизировали культурой этого штамма подкожно в области паха в объеме 1мл. с содержанием -10 м.к., второй - 50 м. к., третьей - 100 м.к., четвертой - 500 м. к., пятой - 1000 м. к., шестой 10 тыс. м. к., седьмой - 100 тыс. м. к., восьмой - 1 млн. м. к., девятой - 1 млрд. м. к. Морских свинок убивали через 30 дней после введения вакцины с проведением серологического и бактериологического исследований.

В результате установили, что ни у одного животного не было положительных реакций с S-антигенами, независимо от дозы микробных клеток все они показывали отрицательный результат в РБП, РА, РПГА, РСК и ИФА. При этом РСК и ИФА с R-антигеном были положительными уже в первой группе животных, получивших 10 м. к. С увеличением дозы культуры бруцелл возрастали и титры антител, но строгой закономерности в увеличении этих показателей отмечено не было. Строгой закономерности в увеличении показателей ИИ и ИВС также не отмечалось.

Минимальной инфицирующей дозой вакцинного штамма R-1096 является 1000 м. к., способной вызвать активный вакцинный процесс у большинства морских свинок. У отдельных животных культура может прижиться и в меньшем количестве (500, 100 и 10 м. к,).

В опыте 2 изучали длительность приживаемости в организме морских свинок штамма R-1096 его безвредность, контагиозность. Использовали 15 голов животных, 9 голов прививали культурой этого штамма в области паха в до-

зе 1 млрд. м. к. в объеме 1 мл. и в эту же клетку подсаживали 6 голов непривитых (с целью изучения миграции культуры бруцелл от привитых к непривитым).

Во все сроки исследований реакции с единым бруцеллезным антигеном показывали отрицательный результат. Сыворотки крови у вакцинированных животных через 1 месяц после иммунизации положительно реагировали в РСК с Я-антигеном, титры антител при этом были высокими и составили 426,0+108,7. При бактериологическом исследовании выделялись культуры бруцелл, показатели ИИ и ИВС были высокими. Спустя 2 месяца после вакцинации средние титры антител в РСК и ИФА с Я-антигеном у привитых животных снизились. При бактериологическом исследовании культуры бруцелл выделялись только из регионарных лимфатических узлов. Показатели ИИ и ИВС были ниже. А через 3 месяца после иммунизации культур бруцелл выделить не удалось. Была также отрицательными РСК с Я-антигеном, лишь в ИФА реакция была положительной в низком титре антител.

Подсаженные морские свинки показывали отрицательные результаты серологического и бактериологического исследования во все сроки.

Таким образом, культура вакцинного штамма Я-1096 приживалась в организме в течение 2-х месяцев. Штамм не контагиозен. Его миграции от привитых животных на непривитых отмечено не было.

2.2.3. Стабильность свойств штамма Я-1096 при пассажах через организм морских свинок. С целью изучения стабильности биологических свойств штамма Я-1096 проводили последовательные пассажи его через организм морских свинок. Животным в количестве 2-х голов подкожно в области паха вводили взвесь культуры в дозе 1,65 млрд. м. к. в объеме 1 мл. Убой проводили через 24 дня. Выделенные от морских свинок культуры бруцелл вновь вводили следующим морским свинкам. Проведено 10 пассажей.

Из проведенных исследований видно, что показатели серологических реакций при пассажах культуры штамма Я-1096 в количественном выражении отличались у разных животных в различные периоды их убоя, но строгая закономерность в качественных показателях сохранилась. Как исходная культура, так и культуры от 1-го до 10-го пассажей штамма Я-1096 не вызывали в организме привитых животных синтеза антител, улавливаемых в серологических реакциях с 8-антигеном. Все морские свинки реагировали в РСК и ИФА с Я-антигеном, в среднем титры антител колебались от 1:40 до 1:160, а в ИФА они были выше.

Бактериологическое исследование показало, что культуры бруцелл выделялись из различных лимфатических узлов и органов. ИИ при этом колебался в пределах 25-50%, причем он был одинаковым при убое животных, привитых исходной культурой и культурами 9-го и 10-го пассажей. Практически не измененным остался и ИВС. Культуры всех пассажей сохранили положительные результаты в РА на стекле с Я-сывороткой и отрицательные с 8-сывороткой.

Изучение культурально-морфологических свойств культур штамма Я-1096 исходной и 10-ти кратно пассированных через организм морских свинок

показало, что они ведут себя однотипно и представляют коккобактерии, красятся по Козловскому в красный цвет; вызывают образование сероводорода, не нуждаются в повышенном содержании углекислого газа, дают положительную термоагглютинацию, вызывают ярко выраженную пробу (+ + ++) в трипафлави-не, колонии окрашиваются в фиолетовый цвет по Уайт-Вилсону, слабочувствительны к пенициллину, хорошо растут на средах с тионином и фуксином.

Полученные результаты исследований дают основание считать штамм R-1096 стабильным.

2.2.4. Иммуногенная активность штамма В. abortus R-1096 при вакцинации и ревакцинации морских свинок и влияние иммуномодулятора на этот показатель.

Иммуногенез и иммуногенные свойства штамма R-1096 при вакцинации животных и влияние иммуномодулятора на этот показатель изучали в опыте 5 на морских свинках. Первую группу животных прививали вакциной из штамма 82 подкожно в области паха в дозе 1 млрд. м. к. в объеме 1 мл. Вторую группу -этой же вакциной с тиосульфатом натрия. Для этого брали 2-х млрд. взвесь бруцелл и 30% стерильный раствор тиосульфата натрия на фосфатном забуфе-ренном физрастворе, смешивали их в равных количествах и 1 мл. смеси вводили морским свинкам подкожно в области паха. В итоге каждое животное получало 1 млрд. м. к. бруцелл и 150 мг. тиосульфата натрия в пересчете на сухое вещество. Третью группу прививали подобным образом вакциной из штамма R-1096 в дозе 1,5 млрд. м.к., а четвертую группу этой же вакциной с тиосульфатом натрия. Серологическое и бактериологическое исследования проводили через 15 дней, 1 и 2 месяца после вакцинации. Заражали морских свинок через 2 месяца после вакцинации вирулентной культурой штамма В. abortus 54-М ВГНКИ в дозе 50 м. к. (10 минимальных инфицирующих доз).

Изучение иммуногенеза у вакцинированных морских свинок и влияние на него тиосульфата натрия показало, что ни одно животное, ни в одной реакции с S-антигеном во все сроки исследований не дало положительного результата. Тогда как показания РСК и ИФА с R-антигеном говорят о сильно выраженном иммунном ответе. Так, через 15 дней после иммунизации животных вакциной из штамма R-1096 титры антител составили 60,0±20,4. При сочетанном введении с тиосульфатом натрия титры антител были в 2,2 раза выше и составили 133,3±27,2. Подобная закономерность отмечалась и при исследовании животных, привитых вакциной из штамма 82. Через месяц после вакцинации титры антител возросли во всех группах животных, но наивысшее их количество наблюдали в группах с сочетанным введением тиосульфата натрия. Спустя 2 месяца после иммунизации отмечалась постепенное снижение титров антител во всех группах.

Бактериологическое исследование, проведенное через 2 месяца после вакцинации, показало, что ИИ в группе привитых вакциной из штамма R-1096 и в группе с тиосульфатом натрия был равным в обеих группах 20 %. Тогда как

у животных, привитых вакциной из штамма 82 в обеих группах, он оставался на высоком уровне, в первой группе 63,3±16,7%, во второй - 70,0±5,9%.

Изучение иммуногенных свойств вакцин без и с тиосульфатом натрия показало, что процент иммунных животных, зараженных через 2 месяца после вакцинации был высоким в группе, где животные были привиты вакциной из штамма 82, которая создавала 100%-ю невосприимчивость к бруцеллезу без тиосульфата натрия и с таковым.

У морских свинок, привитых вакциной из штамма R-1096, тиосульфат натрия повышал иммуногенные свойства биопрепарата на 20%. Если в группе привитых только вакциной иммунитет составлял 60%, то в группе с иммуномо-дулятором был равен 80%.

Все контрольные животные заразились генерализованной формой инфекции, ИИ у них регистрировался на уровне 86,0±5,1, при ИВС равном 4,28±0,29.

В задачу следующих исследований входила экспериментальная проверка напряженности иммунитета у морских свинок к бруцеллезу, создаваемого вакциной из штамма R-1096, примененной по фону вакцины из штамма 82.

Животных иммунизировали вакциной из штамма 82 в дозе I млрд. м. к. Спустя 3 месяца их разделили на 2 группы. Морских свинок первой группы ре-вакцинировали вакциной из штамма R-1096 в дозе 1,5 млрд. м. к., вторую группу штаммом 82 в дозе 1,5 млрд. м. к. Через 14 дней, 1 и 2 месяца после ревакцинации у них брали кровь для серологического исследования. Спустя 3 месяца убивали по 3 головы из группы с проведением серологического и бактериологического исследований, а оставшихся животных заражали культурой вирулентного штамма В. abortus 54-М ВГНКИ в дозе 50 м. к. Через месяц после заражения морских свинок убивали с проведением серологического и бактериологического исследований. По степени обсеменения организма ревакциниро-ванных и интактных морских свинок культурой вирулентного штамма бруцелл определяли процент иммунных животных.

Показатели антителообразования у морских свинок после ревакцинации их вакциной из штамма R-1096 по фону вакцины из штамма 82 в различные сроки серологического исследования показали, что с единым бруцеллезным антигеном все животные реагировали отрицательно во все сроки исследований.

У животных, ревакцинированных гомологичной вакциной из штамма 82, показатели серологических реакций отличались от показателей у животных первой группы. Во все сроки исследований встречались морские свинки, которые показывали положительный результат в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном в невысоких титрах антител -1:10 -1:40.

С R-антигеном в РСК динамика антителообразования мало отличалась в обеих группах животных. Результаты исследований показали, что через 15 дней после ревакцинации в первой и во второй группах титры антител были одинаковыми, которые составили 93,3±35,3. Спустя месяц со дня ревакцинации в обеих группах титры антител снизились, а через 2 месяца в первой группе титр антител стал еще ниже, а во второй группе, наоборот повысился в почти 2 раза. Спустя 3 месяца после ревакцинации (перед заражением) титры антител в пер-

вой группе незначительно повысились. При бактериологическом исследовании у этих животных, культуры вакцинного штамма не выделили. ИВС был низким. Во второй группе животных, ревакцинированных по гомологичному фону, титры антител понизились и составили 18,3±10,9. Культур бруцелл вакцинного штамма также не выделили и у этих животных.

Изучение напряженности иммунитета у морских свинок, зараженных через 3 месяца после ревакцинации показало, что у животных, ревакцинирован-ных штаммом R-1096, иммунитет составил 87,5 %, при ИИ, равном 1,25 % (в предыдущем исследовании, когда заражение проводили через 2 месяца после вакцинации иммунных было 90 %). А у животных, ревакцинированных гомологичной вакциной из штамм 82, иммунитет составил 80,0 %, при ИИ, равном 2,0.

Все контрольные животные заразились генерализованной формой инфекции, ИИ у них составил 82,9± 7,2%.

Таким образом, ревакцинация морских свинок вакциной из штамма R-1096 через 3 месяца по фону вакцины из штамма 82 создает иммунитет к бруцеллезу высокой напряженности, равный 87,5 %.

2.2.5. Испытание живой вакцины из штамма R-1096 на крупном рогатом скоте. В производственных условиях вакцину из этого штамма испытывали ветспециалисты Самарской области под методическим руководством научных сотрудников ВНИВИ. Изучали абортогенные свойства противобруцеллез-ной вакцины из инагглютиногенного штамма В. abortus R-1096 и ее способность предотвращать абортогенное действие вакцины из штамма 82 у стельных животных.

В СПК «Правда» Сергиевского района отобрали 29 стельных животных и разделили их на две группы. Первую привили вакциной из штамма R-1096, вторую — вакциной из штамма 82. Вакцины вводили подкожно в области средней трети шеи в дозе 150 млрд. м. к. на фосфатно-забуференном физиологическом растворе хлористого натрия. Спустя месяц после вакцинации первую группу рсвакцинировали вакциной из штамма 82. После этого животных подвергали серологическому исследованию по РА, РСК с S- и R-антигенами и отмечали наличие или отсутствие абортов у привитых и ревакцинированных животных.

После ревакцинации этих животных исследование провели через 27 дней. При этом РА была положительной у 7-ми голов в титре 100-400 ME и сомнительной у 2-х. Пять животных реагировали отрицательно. РСК была положительной у 2-х животных в титре 1:5 и у одного - сомнительной. 11 голов показывали отрицательный результат. РСК с R-антигеном была в это же время положительной у 6-ти голов в титрах 1:5 - 1:20 и сомнительной у 3-х. Отрицательные показатели были получены у 5-ти животных.

Поствакцинальных абортов в этой группе до конца опыта отмечено не

было.

Во второй группе животных, привитых вакциной из штамма 82, через 2 месяца после вакцинации показания серологических реакций с единым бруцел-

лезным антигеном были отрицательными. РСК с Я-антигеном стала положительной лишь у одной коровы в титре 1:10+++. Через 6 месяцев после вакцинации эта корова абортировала на 7-м месяце стельности. Абортированный плод был подвергнут бактериологическому исследованию с отрицательными результатами. Сыворотка крови от абортировавшей коровы была прислана для исследования в областную ветлабораторию. При этом были получены отрицательные результаты по РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном, а РСК с Я-антигеном была в титре 1:160, что свидетельствует о поствакцинальном аборте от вакцины из штамма 82.

На шестом месяце стельности абортировала еще одна корова, аборт произошел на пастбище. Исследованию не подвергали ни абортированный плод, ни абортировавшую корову. Ее сдали на мясокомбинат.

Таким образом, работой проведенной в СПК «Правда» Сергиевского района на беременных коровах, незнакомых с бруцеллезными вакцинами, показали, что вакцина из штамма Я-1096 не обладает абортогенными свойствами.

После иммунизации животных вакциной из штамма Я-1096 не было отмечено случаев абортов. Не были также аборты у этих животных после ревакцинации их вакциной из штамма 82. В то время как после применения вакцины из штамма 82 на интактных беременных животных были отмечены аборты.

В дальнейшем был апробирован двухэтапный способ иммунизации крупного рогатого скота против бруцеллеза при возникновении неблагополучия по данной инфекции.

Для этого в колхозе им. Калинина Кинельского района на общественном скоте на первом этапе вводили вакцину из штамма Я-1096. Через 15 и 30 дней проводили дифференциально-серологические исследования, больных животных удаляли, а остальных ревакцинировали полной дозой вакцины из штамма 82. Пострсвацинальные исследования начинали спустя 2-3-6-8 месяцев после применения вакцины.

В своей работе мы установили, что вакцина из штамма Я-1096 в неблагополучном по бруцеллезу хозяйстве вызывает провокацию заболевания у скрыто больных животных, которых мы обнаруживали путем исследования в серологических реакциях с применением 8- и Я- антигенов. У больного скота титры в РА с единым бруцеллезным антигеном после иммунизации достигали 1600 МЕ, РСК - 1:1280, при отрицательной или слабоположительной РСК с Я-антигеном. У здорового скота при этом РА и РСК с 8-антигеном показывали отрицательный результат, а РСК с Я-антигеном - положительный.

Абортов поствакцинального характера после ревакцинации коров вакциной из штамма 82 по фону вакцины из штамма Я-1096 не отмечали, где скот до введения вакцины из штамма Я-1096 не был привит против бруцеллеза. Удаление из стада спровоцированных животных, введение вакцины из штамма 82 без учета стельности ускорило оздоровление хозяйства.

В следующем опыте проводили производственную апробацию разработанной системы специальных ветеринарных мероприятий на заключительном

этапе борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота в МСПП «Юбилейный» Волжского района Самарской области.

Для этого телок 4-5 месячного возраста прививали вакциной из штамма 82, спустя 10 месяцев, или за 2-3 месяца до осеменения, их ревакцинировали той же вакциной. Через 10-15 дней после ревакцинации у животных проверяли поствакцинальный иммунный ответ с помощью Я-антигена в РСК. В дальнейшем коров ежегодно ревакцинировали вакциной из штамма Я-1096. Серологическое исследование поголовья на бруцеллез проводили по РА и РСК перед очередной ревакцинацией и спустя 10-15 дней после ревакцинации. В этот же срок сыворотки крови всех коров проверяли в РСК с Я-антигеном с целью контроля их иммунного ответа. Отрицательно реагирующих в РСК с Я-антигеном животных допрививали вакциной из штамма Я-1096..

Результаты серологического исследования на бруцеллез и контроля поствакцинального иммунного ответа у коров, ревакцинированных вакциной из штамма Я-1096 показали, что через 14 дней после введения биопрепарата все животные реагировали отрицательно на бруцеллез по РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном. Иммунный ответ в РСК с Я-антигеном дали 99,26 % голов. Средний титр антител, определенный у 20-ти голов, сыворотки крови которых разводили до предельного титра, составил 41,0+15,5.

Для серологического исследования на бруцеллез и контроля иммунного ответа в более поздние сроки после ревакцинации коров вакциной из штамма Я-1096 брали кровь от 14-20 животных стада (выборочно) и сыворотку, исследовали в РА, РСК и РСК с Я-антигсном до предельных титров антител. В результате было отмечено, что все животные во все сроки исследований показывали отрицательные результаты серологического исследования на бруцеллез по РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном.

Количество животных, давших положительный иммунный ответ на введение вакцины из штамма Я-1096 в РСК с Я-антигеном, и высота титров антител колебались в зависимости от сроков исследований. Через 14 суток после ревакцинации иммунный ответ составлял 100 %. Животные реагировали в титрах от 1:5 до 1:320, в среднем 41,0+15,47. Спустя 1 месяц с момента введения вакцины также реагировало 100 % животных, но титры антител незначительно снизились, показывая колебания от 1:10 до 1:160, в среднем 35,33+10,18. В более поздние сроки количество положительно реагирующих животных в РСК с Я-антигеном снижалось, а также уменьшались и титры антител.

Таким образом, производственная апробация разработанной нами системы специальных противобруцеллезных мероприятий на заключительном этапе борьбы с этой инфекцией, проведенная в МСПП «Юбилейный» Волжского района, показала положительные результаты. Во-первых, предложенный комплекс специальных профилактических мероприятий позволил сохранить эпизоотическое благополучие хозяйства по бруцеллезу крупного рогатого скота. Во-вторых, ежегодная ревакцинация коров вакциной из инагглютиногенного штамма Я-1096 дала возможность освободиться от поствакцинальной серопози-

тивности, которая имеет место после ревакцинации животных вакциной из сла-боагглютиногенного штамма 82.

3. Выводы

1. Всесторонне изучены иммунобиологические свойства вакцинного штамма В. abortus R-1096. Установили, что культуры этого штамма хорошо растут на печеночных средах в обычной атмосфере, образуя при этом сероводород, а также на средах с тионином и фуксином, показывают положительные пробы на диссоциацию: колонии окрашиваются в фиолетовый цвет по Уайт-Вилсону, дают положительные термоагглютинацию и пробу в растворе три-пафлавина (+ + ++), слабочувствительны к пенициллину. Культуры реагируют положительно в РА с R-сывороткой и отрицательно с S-сывороткой, не лизиру-ются фагом «Тб».

2. Минимальной инфицирующей дозой штамма R-1096 для морских свинок является 1000 м. к. У отдельных животных культура может приживаться и в меньшем количестве (500, 100 и Юм. к.). Бруцеллы этого штамма хорошо расселяются и приживаются в лимфатических узлах и органах в течение 2-х месяцев, к третьему месяцу они элиминируют из организма.

3. Штамм R-1096 не контагиозен. Миграция бруцелл этого штамма от вакцинированных на непривитых животных при совместном их содержании в течение 3-х месяцев не установлена.

4. Штамм R-1096 стабилен. Культура этого штамма сохраняет свои исходные свойства после 10-ти кратного пассирования через организм морских свинок.

5. Штамм R-1096 инагглютиногенен. Иммунизация морских свинок вакциной из этого штамма сопровождается отрицательными показателями серологических реакций с бруцеллезными S-антигенами, при одновременно высоких титрах антител РСК и ИФА с R-антигеном. Тиосульфат натрия, введенный совместно с вакциной, не влияет на показатели серологических реакций с S-антигенами, но в 1,5 - 2,5 раза повышает титры антител с R-антигеном.

6. Вакцинный штамм R-1096 обладает достаточно выраженной иммуноген-ной активностью. В опытах на морских свинках через 2 месяца вызывал образование иммунитета у них в пределах 40,0 - 60,0 %. Сочетанное введение морским свинкам тиосульфата натрия с вакциной из штамма R-1096 повышает ее имму-ногенные свойства на 20%. С увеличением сроков заражения после вакцинации животных стимулирующее действие иммуномодулятора возрастает.

7. При ревакцинации морских свинок вакциной из штамма 82 по фону гомологичной вакцины у отдельных животных отмечаются положительные результаты серологических реакций в невысоких титрах антител. Ревакцинация морских свинок вакциной из штамма R-1096 по фону вакцины из штамма 82, сопровождается отрицательными показателями серологических реакций с единым бруцеллезным антигеном во все сроки исследований и созданием у них иммунитета высокой напряженности, равной 87,5-90 %.

8. Вакцина из штамма В. abortus R-1096 не обладает абортогенными свойствами. Кроме того, она предотвращает абортогенное действие вакцины из штамма 82, вводимой беременным животным спустя 1 месяц после применения первой вакцины.

9. Вакцина из штамма R-1096, апробированная в производственных условиях на заключительном этапе борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота по фону вакцины из штамма 82, показывает высокую профилактическую эффективность в общий системе противобруцеллезных мероприятий. Она позволяет сохранить благополучие хозяйства без поствакцинальной серопозитивности у коров.

4. Практические предложения.

Результаты проведенных исследований вошли в следующие нормативно-технические документы:

- Рекомендации по профилактике бруцеллеза крупного рогатого скота на заключительном этапе борьбы с данной инфекцией (на примере Самарской области). Утверждены директором ВНИВИ (г. Казань) 04.04.2002г.

- Рекомендации по контролю поствакцинального иммунного ответа у крупного рогатого скота, привитого противобруцеллезной вакциной из инагглюти-ногенного штамма В.abortus R-1096 (в порядке производственного опыта). Согласованы 05.03.2003г. Начальником отдела ветеринарии ДСХиП администрации Самарской области и утверждены директором ВНИВИ (г. Казань) 22.05.2003г.

»-203 4

5. Список опубликованных работ по теме диссертации

12004-4

1. Фомин А.М., Сафина Г.М., Салмаков К.М. и др. Влияние КС

23833

иммуногенез и иммуногенные свойства противобруцеллезной вакцины из штамма R-1096 при совместном введении их морским свинкам // Матер, науч-но-произв. конф. КГАВМ. Ч.1., 31 мая - 1 июня 2001г., г. Казань. - Казань. -2001.-С. 95-96.

2. Фомин A.M., Салмаков К.М., Сафина Г.М. и др. Стабилизация биологических свойств культуры бруцелл штамма 82 с целью изготовления эталонной серии вакцины // Матер. межрегиональной научно-практ. конф., 29-30 августа 2001г. - Барнаул. - 2001. - С. 166-168.

3. Ткачев Т.М., Локтионов В.А., Сафина Г.М. и др. Роль специфической профилактики на заключительном этапе борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота // Матер. международ. научно-практ. конф., 16-18 апреля 2002г. -Покров: ВНИИВВиМ. - 2002. - С. 347-349.

4. Фомин А.М., Салмаков К.М., Сафина Г.М. и др. Изучение на морских свинках иммуногенных свойств вакцины из иннагглютиногенного штамма В. abortus R-1096 с использованием культуры вакцинного штамма 82 в качестве заражающего агента // Матер. всерос. научно-произв. конф. по акт. пробл. ветеринарии и зоотехнии, ч.1, 30-31 мая 2002г., г. Казань. - 2002. - С. 117-119.

5. Сафина Г.М. Культурально-морфологические свойства нового вакцинного штамма В. abortus R-1096 // Матер. всерос. научно-произв. конф. по акт. пробл. ветеринарии и зоотехнии, ч.1, 30-31 мая 2002г., г. Казань. - 2002. - С. 104-105.

6. Фомин А.М., Сафина Г.М., Салмаков К.М. и др. Влияние иммуномоду-лятора ксимедона на иммуногенез // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана, - 2003. -Т. 174.- С. 154-161.

Подписано к печати 12.01.04 г., формат бумаги 60x90 7]в. Усл. печ. л. 1. Заказ № 41. Тираж 100 экз. Отпечатано на офсетном участке ВНИВИ. Адрес 420075, г. Казань, Научный городок - 2.

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Сафина, Гульнара Миннирашитовна

1 .ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Общие сведения о возбудителях бруцеллеза.

2.2. Иммуногенез при применении живых противобруцеллезных вакцин.

2.3. Иммуномодуляторы и их влияние на иммуногенные свойства противобруцеллезных вакцин.

2.4. Специфическая профилактика бруцеллеза крупного рогатого скота.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4.1. Культурально-морфологические свойства штамма В. abortus R-1096.

4.2. Остаточная вирулентность, длительность приживаемости, антигенные свойства и контагиозность штамма R-1096 на морских свинках.

4.3. Стабильность свойств штамма R-1096 при пассажах через организм морских свинок.

4.4. Иммуногенная активность штамма В. abortus R-1096 при вакцинации и ревакцинации морских свинок и влияние иммуномодуляторов на эти показатели.

4.5 . Испытание живой вакцины из штамма В. abortus R-1096 на крупном рогатом скоте.

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

6. ВЫВОДЫ.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сравнительное изучение иммунобиологических свойств вакционного штамма B.abortus R-1096"

Актуальность проблемы. В отдельных регионах страны остается актуальной проблема бруцеллеза крупного рогатого скота, приносящего большой экономический ущерб народному хозяйству.

В основе борьбы с бруцеллезной инфекцией лежит проведение комплекса ветеринарно-санитарных и специальных мероприятий, среди которых важное место занимает специфическая профилактика заболевания с применением живых вакцин, приготовленных из различных штаммов бруцелл.

На территории нашей страны в 50-е годы широко изучали и применяли вакцину из штамма 19. Использование в комплексе противобруцеллезных мероприятий вакцины из этого штамма на крупном рогатом скоте в регионах со сложной эпизоотической обстановкой обеспечивало снижение заболеваемости животных и оказывало благоприятное влияние на эпидемиологическую обстановку (А.Т. Жунушов, В.И. Ким, 1991). Улучшить эпизоотическую ситуацию по бруцеллезу в целом по стране в результате применения данной вакцины не удалось. Были обнаружены отрицательные свойства этой вакцины, в частности, ее высокая агглютиногенность (О.И. Морякова, 1957).

Более эффективной в данном отношении оказалась вакцина из слабоагглю-тиногенного штамма 82, широко применяемая в стране с 1974 года. Благодаря ее использованию по определенным схемам некоторые регионы полностью оздоровлены от данного заболевания (В.М. Авилов, K.M. Салмаков, A.A. Новицкий, 2000). Однако и в оздоровленных областях при многократных ревакцинациях коров этой вакциной обнаруживается значительное количество животных с поствакцинальными серологическими реакциями на бруцеллез, которые необходимо дифференцировать (Т.Е. Какоуллин, 1982; Н.М. Потапов, 1982; A.M. Фомин, K.M. Салмаков, 2001). Кроме того, недостатком данной вакцины является ее абортогенность при первичном применении на беременных животных (К.С. Маловастый, 1982; A.M. Фомин, K.M. Салмаков, 2003).

В связи с трудностями дифференциации поствакцинальных и постинфекционных иммунологических реакций в последние годы все большее внимание исследователей стали привлекать культуры бруцелл с атипичными свойствами которые, по их мнению, и должны служить исходным материалом для создания вакцин, не вызывающих образования специфических агглютининов, выявляемых при помощи стандартных диагностикумов в серологических реакциях (И.Ф. Таран, Е.И. Замахаева, 1971; В.В. Калмыков, А.Н. Бобылев, 2000; В.В.Селиверстов, К.В. Шумилов и др.,2001; Т.К. Касимов, В.И. Ким и др., 2002; S.C. Olsen, В. Bricker et. al, 1999).

В 1964 году в лаборатории по изучению бруцеллеза ВНИВИ (г. Казань) профессором K.M. Салмаковым путем воздействия специфического бактериофага на популяцию исходного вирулентного штамма, выделенного из абортированного плода коровы, был получен инагглютиногенный штамм B.abortus R-1096. Этот штамм в лабораторных условиях за последние годы изучали многие исследователи института в качестве антигена, аллергена и как вакцину (В.П. Корунов, 1974; A.M. Фомин, 1975; K.M. Салмаков, 1977; М.Х. Лутфулин, 1983; Н.Ш. Зайнеев, 1984; Д.А. Хузин, 1983).

Однако все эти исследования носили не системный, а отрывочный характер. Штамм R-1096 авторы использовали в качестве контроля при изучении других биопрепаратов, как типичную R-форму бруцелл.

Известно, что ни одна из имеющихся на сегодняшний день вакцин не создает 100%-ного защитного эффекта от бруцеллезной инфекции и поэтому для коррекции иммунного ответа при инфекционных заболеваниях предложены и изучены различные иммуномодуляторы.

B.C. Бронников, A.A. Новицкий (1994-1995) отмечают, что использование иммуностимуляторов снижает часто защитные свойства вакцин. В частности, Э.А. Шуралев (1999) установил на морских свинках, что при сочетанноу введении бруцеллезной вакцины из штамма 82-ПЧ с'ксимедоном и левамизо-лом ее иммуногенные свойства несколько снижались.

Специалисты отмечают, что препараты, относящиеся к иммуномодулято-рам, способствуют модуляции возникающего иммунного ответа, которая может проявляться в его усилении или, наоборот, ослаблении при использовании одного и того же препарата. Эффект зависит от схемы, дозы введения, соотношения во времени между антигеном и препаратом.

Все вышесказанное определило направление наших исследований.

Цель и задачи исследований. Цель исследований - изучить иммунобиологические свойства вакцинного штамма B.abortus R-1096 и влияние имму-номодуляторов на формирование и течение противобруцеллезного иммунитета у лабораторных животных, привитых этой вакциной, испытать этот препарат на крупном рогатом скоте в производственных условиях. Для реализации намеченной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить культурально-морфологические свойства штамма B.abortus R-1096.

3. Исследовать стабильность штамма R-1096 при пассажах через организм морских свинок.

4. Изучить иммуногенез и иммуногенные свойства штамма R-1096 при вакцинации и ревакцинации на морских свинках и влияние иммуномодулято-ров на эти показатели.

5. Испытать живую вакцину из инагглютиногенного штамма В. abortus R-1096 на крупном рогатом скоте производственных условиях.

Научная новизна. Впервые в лабораторных условиях наиболее полно изучены иммунобиологические свойства вакцинного штамма В. abortus R-1096. Установлено, что культуры бруцелл этого штамма являются инагглютинабиль-ными по S-антигену бруцелл. Приживаются в течение 2-х месяцев в организме морских свинок, сохраняют стабильность свойств при 10-ти кратных пассажах через организм этих животных, вызывают активный вакцинный процесс в дозе 1 ООО м.к. Не обладают контагиозностью.

Установлено стимулирующее влияние тиосульфата натрия на иммуногенные свойства этой вакцины на морских свинках.

Основные положения, выносимые на защиту:

- Изучение иммунобиологических свойств вакцинного штамма В.abortus R-1096;

- Влияние иммуномодуляторов на иммуногенез и иммуногенные свойства этого штамма в условиях эксперимента;

- Результаты апробации вакцины из штамма R-1096 в производственных условиях;

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на заседаниях ученого совета ВНИВИ в виде ежегодных отчетов (2001

2003); научно-производственной конференции (Казань, 2001); Межрегиональной научно-практической конференции (Барнаул, 2002); Международной научно-практической конференции (Покров, 2002); Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2002).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 6 научных работ.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Сафина, Гульнара Миннирашитовна

выводы

1. Всесторонним изучением иммунобиологических свойств вакцинного штамма В. abortus R-1096, установили, что штамм R-1096 хорошо растет на печеночных средах в обычной атмосфере, образуя при этом сероводород, а также на средах с тионином и фуксином, показывает положительные пробы на диссоциацию: колонии окрашиваются в фиолетовый цвет по Уайт-Вилсону, дает положительную термоагглютинацию и пробу в растворе трипафлавина (++++), слабочувствителен к пенициллину. Культуры этого штамма реагируют положительно в РА с R-сывороткой и отрицательно с S-сывороткой, не лизируются фагом «Тб».

2. Минимальной инфицирующей дозой штамма R-1096 для морских свинок является 1000 м. к. У отдельных животных культура может приживаться и в меньшем количестве (500, 100 и 10 м. к.). Бруцеллы этого штамма хорошо расселяются и приживаются в лимфатических узлах и органах в течение 2-х месяцев, к 3 месяцам они элиминируют из организма.

4. Штамм R-1096 стабилен. Культура этого штамма сохранила свои исходные свойства после 10-ти кратного пассирования через организм морских свинок.

6. Вакцинный штамм R-1096 обладает достаточно выраженной иммуно-генной активностью. В опытах на морских свинках через 2 месяца вызывал образование иммунитета у них в пределах 40,0-60,0 %. Сочетанное введение морским свинкам тиосульфата натрия с вакциной из штамма R-1096 повышает ее иммуногенные свойства на 20%. С увеличением сроков заражения после вакцинации животных стимулирующее действие иммуномодулятора возрастает.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты проведенных исследований вошли в следующие нормативно-технические документы:

- Рекомендации по контролю поствакцинального иммунного ответа у крупного рогатого скота, привитого противобруцеллезной вакциной из инагг-лютиногенного штамма В.аЬогШэ 11-1096 (в порядке производственного опыта). Согласованы 05.03.2003г. Начальником отдела ветеринарии ДСХиП администрации Самарской области и утверждены директором ВНИВИ (г. Казань) 22.05.2003г.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Сафина, Гульнара Миннирашитовна, Казань

1. Авилов В.М. Прогнозирование эпизоотического процесса при бруцеллезе крупного рогатого скота в Российской Федерации // Автореф. дис. . канд. вет. наук. Санкт-Петербург. - 1992. - 18с.

2. Авилов В.М., Седов В.А. Актуальные проблемы профилактики особо опасных инфекций животных // Ветеринария. 1994. - №6. - С.З - 6.

3. Авилов В.М., Селиверстов В.В., Пышнин В.Ф., Шумилов К.В., Калмыков В.В. Бруцеллез животных и его специфическая профилактика // Ветеринария. 1997. - №4. - С. 3 - 13.

4. Авилов В.М., Косилов И.А., Аракелян П.К. Состояние и перспектива специфической профилактики бруцеллеза овец // Ветеринария. 1999. -№3.-С. 8-12.

5. Авилов В.М., Салмаков K.M., Новицкий A.A. Борьба с бруцеллезом крупного рогатого скота с применением вакцины из штамма 82 // Ветеринария. 2000. - №3. - С. 3 - 7.

6. Александров И.Д., Степанченко В.И., Луговской В.М. Опыт оздоровления крупного рогатого скота от бруцеллеза // Ставропольский ЦНТИ. Инф. лист. - №373 - 88.

7. Алексеев К.К., Лукин А.К., Жуков П.Ф. Значение специфической профилактики в комплексе противобруцеллезных мероприятий // Сб. науч. тр. КВИ. Казань. - 1980. - Т.135. - С.82 - 84.

8. Алиев Э.А., Тевосов A.M., Садыхов С.Ф., Мирза-заде С.Р., Султанова Ф.Г., Гаджиев Р.Ч. Предварительные результаты производственного испытания вакцины из штамма 82 в Азербайджанской ССР // Тез. докл. науч. конференции. Баку. - 1977. - С. 56 - 57.

9. Алиев Э.А. Результаты изучения противобруцеллезной вакцины из штамма 82 на крупном рогатом скоте и буйволах в Азербайджанской

10. ССР// Тез. докл. Всесоюзной конференции. Омск. - 20-23 мая. - 1980. -М.- 1980. -С. 91 -92.

11. Алимов A.M., Фаизов Т.Х. Молекулярная ДНК/ДНК гибридизация для идентификации возбудителей зоонозов // Тез. докл. респ. науч.-произв. конф. «Актуаль. вопр. вет. и зоотехн.». Казань. - 1992. -С. 7.

12. Альбертян М.П. Стабильность свойств вакцинного штамма В. abortus 104-М при пассировании через организм нетелей (по данным пато-морфологии) // Бюлл. ВНИИЭВ. 1987. Вып.64. - С. 71 - 73.

13. Аракелян П.К., Барабанова Е.Б., Рукин А.Т. Оптимизация методов применения вакцины из штамма 19 при бруцеллезе овец//Ветеринария. -1998.-№8.-С. 12-15.

14. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях // Гос. изд. мед. литер. JI. - 1962.

15. Белобаб В.И. Пути совершенствования диагностики и профилактики бруцеллеза у животных // Автореф. дис. .док. вет. наук. Алма-аты. - 1998. - 52с.

16. Белозеров Е.Г. Бруцеллез. JI. - Медицина. - 1985. - 183с.

17. Белозерова Г.А. Получение и испытание вакцины против бруцеллеза из штамма 82-ПЧ // Автореф. дис. .док. вет. наук. Казань. - 1993. -38с.

18. Бельченко В.Б. Эффективность иммунизации крупного рогатого скота в зависимости от кратности применения вакцины из штамма 19 // Тр. КазНИВИ. 1966. -Т.12. - С. 29 - 33.

19. Бондаренко В.З., Калмыков В.В., Мельниченко Л.П. и др. Апробация вакцины из штамма 75/79-А В. abortus на крупном рогатом скоте // Ветеринария. 1995. - №8. - С. 20 - 23.

20. Борисов Е.М. Серологические реакции у коров после прививки вакциной из штамма 19 // Сб. научн. трудов Куйбышевской НИВС. -1977. Вып.7. - С. 3 - 6.

21. Бронников B.C., Кассал Б.Ю. Совершенствование противобруцел-лезных мероприятий в Томской области // Сб. науч. тр. ВАСХНИЛ. Сиб. отд-е, ИЭВС и ДВ. Новосибирск. - 1990. - С. 89 - 95.

22. Бронников B.C., Новицкий A.A. Особенности ответа иммунной системы на разнотипные химические противобруцеллезные вакцины // Туберкулез и бруцеллез с.-х. животных: методы и средства диагност, и профилакт. Новосибирск. - 1994 (1995). - С. 16-23.

23. Вершилова П.А., Островская H.H. О классификации бруцелл и методах их классификации // ЖМЭИ. 1964. - №7. - С. 5.

24. Вершилова П.А., Голубева A.A., Кайтмазова Е.И. и др. Бруцеллез. -М: Медицина. 1972. - 439с.

25. Вершилова П.А., Чернышева М.И., Князева Э.Н. Патогенез и иммунология бруцеллеза. М.: Медицина. - 1974. - 245с.

26. Вершилова П.А., Чернышева М.И. Применение реакции пассивной гемоагглютинации для диагностики бруцеллеза у людей и животных в СССР // Бюлл. ВОЗ. 1975. - Т.51.

27. Вдовиченко O.A. Диагностика бруцеллеза // Ветеринарный врач. -№3(7).-2001.-С. 36.

28. Воробьев А.Л. Сравнительная характеристика генетически однородных штаммов бруцелл, полученных воздействием некоторых мутагенов // «Инфекц. и незар. болезни с.-х. жив-х в Казахстане» Сб. науч. тр. КазНИВИ. Алма-ата. - 1983. - С. 40 - 51.

29. Танеева Г.М. Морфологические аспекты коррекции Т- и В- активи-нами иммунодефицитных состояний телок, иммунизированных вакциной из штамма 82 // Всерос. науч. конф. «Иммунодефицита с.-х. живот-ных».Тез. докл. -М.- 1994. С. 14 - 21.

30. Голубинский Е.П., Осипенко И.И., Солодун Ю.В. и др. Морфологическая характеристика глобулинпродукции при вакцинальном процессе, вызванном туляремийной и бруцеллезной вакцинами // ЖМЭИ. 1991 . - №3. - С. 65 - 67.

31. Гордиенко JI.H., Гертман О.Г. Индикация L-вариантов бруцелл выделенных от крупного рогатого скота на территории Амурской области // Тез. докл. Всесоюз. конф. Новосибирск.-1989.-С.135-136.

32. Григорьева Г.М., Игнатов П.Е. Антигенная структура бруцелл // Успехи соврем. Биол. 1991. - Т.З. - Вып.6. - С. 890 - 904.

33. Гринин A.C. Экспериментальное изучение иммунитета у коров после прививки вакцины из штамма 19 // Сб. науч. тр. Омск. - 1964. - Т.22. Вып.2. - С. 69-73.

34. Гринин A.C. Скрытое бруцеллоносительство у скота, привитого вакциной из штамма 19 // Ветеринария. 1964. - №10. - С. 25 - 26.

35. Давыдов Н.И. К изучению бруцеллеза у северных оленей // Ветеринария. 1961. - №5. - С. 48 - 54.

36. Дарданов Б.Э. Оптимизация специальных противобруцеллезных мероприятий в условиях рыночных отношений // Автореф. дис. . канд. вет. наук. М. - 1998.

37. Дегтяренко J1.B., Новицкий A.A., Бажин М.А. Изучение диагностической ценности R-антигенов при бруцеллезе в условиях эксперимента // Сб. научн. работ. Сиб. НИВИ. 1978. - №32. - С. 23 - 27.

38. Дегтяренко JI.B., Разницына Г.В. Иммунологические показатели сыворотки крови крови крупного рогатого скота при экспериментальном заражении R-формами бруцелл // Научн.-техн. Бюлл. ИЭВС и ДВ. 1985. -Вып.30. - С. 19-24.

39. Димов С.К., Аракелян П.К., Мирошнин В.П. Противоэпизоотиче-ская эффективность различных схем иммунизации крупного рогатого скота при бруцеллезе // Вопр. эпизоот., диагн. и мероприят. по ликвид. туб. и бруц. жив-х. 1987. - С. 95 - 97.

40. Димов С.К. Теория и практика управления эпизоотическим процессом // Автореф. дис. .док. вет. наук. Новосибирск. - 1993. - 45с.

41. Драновская Е.А. Биологические свойства бруцелл и получение диагностического антигена // Автореф. дисс. . док. биол. наук. М.- 1976. -35.с.

42. Егорова JI.C. Диссоциация бруцелл и ее значение в эпидемиологии бруцеллеза // Тез. докл. Всесоюз. научн.-практ. конф. по бруцеллезу. -Алма-ата, май 1978. Москва. - 1978. - С. 34 - 35.

43. Ефимова М.А., Хабибуллин Ф.Ш., Спиридонов Г.Н., Гаффаров Х.З. Комбинированная стимуляция антителогенеза у быков-продуцентов // Матер, междунар. научн. конф., посвящ. 125-летию КГАВМ. Казань. -1998.- 4.1.-С. 38-39.

44. Желудков М.М., Чернышева М.И., Павлова И.П., Уинова Н.С. Ан-тигенемия в динамике инфекционного и вакцинного процессов при бруцеллезе // ЖМЭИ. 1992. - №7(8). - С. 71 - 72.

45. Жунушов А.Т., Ким В.И. Эпизоотологическая и экономическая эффективность противобруцеллезных мероприятий // Ветеринария. 1991. -№2.-С. 35 -37.

46. Забродин В.А., Вагина J1.A., Никулина В.И., Забродина Е.Ф. Результаты испытания вакцины против бруцеллеза из штамма 82 на северных оленях // Научные труды КВИ. Казань. - 1980. - Т. 135. - С. 60 - 70.

47. Зелененький A.M., Задорожный И.Ф. и др. Опыт применения вакцины из штамма 82 против бруцеллеза крупного рогатого скота // Вестник с.-х. науки Казахстана. 1977. №12. - С. 82 - 86.

48. Иванова О.Н. Средства неспецифической иммунокорекции при бруцеллезе морских свинок // Туберкулез и бруцеллез с.-х. животных: методы и средства диагностики и профилактики. Новосибирск. - 1994 (1995).-С. 43-47.

49. Иванова О.Н. Изучение иммуностимулирующей активности кови-дона при экспериментальном бруцеллезе крупного рогатого скота // Методология мероприятий по профилактике и ликвидации болезней с.-х. животных. Новосибирск. - 1995. - С. 93 - 97.

50. Игнатов П.Е., Блинов Н.И., Кирш Ю.Э., Искандаров М.И. Изучение активности иммуномодуляторов // Ветеринария. 1983. - №9. - С. 30 - 31.

51. Игнатов П.Е. Обоснование разработки иммуноактивных препаратов для лечения и профилактики инфекционных болезней // Автореф. дисс. . док. биол. наук. С.-Пб. - 1994. - 31с.

52. Исхаков 0.3., Карпенко И.Г., Кузьмин Г.Г. Итоги применения противобруцеллезной вакцины из штамма 82 в хозяйствах РФ // Научные труды КВИ. Казань. - 1980. - Т. 135. - С. 34 - 44.

53. Какоуллин Т.Е., Маловастый К.С. Пути оздоровления хозяйств Иркутской области от бруцеллеза крупного скота // Научн.-техн. бюлл./ ВАСХНИЛ. Сиб. отд-е. - 1982. - Вып. 10. - С. 16 - 20.

54. Калмыков В.В., Бобылев А.Н. Профилактическая эффективность иммунизации крупного рогатого скота адъювант-вакциной из штамма В abortus KB 17/100 //Тез. докл. Междунар. научн. конф., 30-31 мая 2000г. -Казань.-2000.-С. 69-71.

55. Касымов Т.К., Ким В.И. и др. Иммуногенность адъювант-вакцины из штамма В abortus КВ/100 // Ветеринария . 2002. - №5. - С. 10 - 12.

56. Кожанов К.Н., Омашев А.К., Аманов К.А. Лечение бронхопневмонии телят с использованием тимогена // Повышение продуктивности с.-х. животных и совершенстваование мер борьбы с болезнями. Семипалатинск. - 1992. - 4.1. - С. 199 - 201.

57. Коломыцев A.A., Гаврилов В.А., Евсеев В.М., Срибный Н.И. Двунаправленное действие гуморальных факторов // Ветеринария. 1990. -№5. - С. 24 - 28.

58. Коляков Я.Е. Ветеринарная иммунология // М. Агропромиздат. -1986.-271с.

59. Кондауров Б.И., Кузнецова Н.Г. Биостимулирующие факторы лимфоидной ткани при вакцинации штаммом 19 // Бруцеллез с.-х. животных. 1989. - С. 69 - 75.

60. Косилов И.А., Карпов Э.Г., Сыртланов P.M. Опыт применения противобруцеллезной вакцины из штамма В-1 в производственных условиях // Сб. научн. тр. СибНИВИ. 1970. - Вып. 18. - С. 16 - 21.

61. Косилов И.А. Изменчивость бруцелл и ее значение в проблеме бруцеллеза с.-х. животных // Сб. научн. работ. Омск. - 1974. - Вып.21.- С. 30-34.

62. Косилов И.А., Шадрина М.Н. Стабильность биологических свойств R-форм бруцелл // Сб. научн. работ.-СибНИВИ. Омск. - 1975. - Вып. 17. -С. 35 - 38.

63. Косилов И.А., Димов С.К., Падалица А.Г. Противоэпизоотическая эффективность вакцины из штамма 82 в общем комплексе противобру-целлезных мероприятий // РЖВ. 1987. - №5. - С. 27.

64. Косилов И.А. Бруцеллез сельскохозяйственных животных. Новосибирск. - 1992. - 260с.

65. Котлярова Х.С. Сравнительные данные о вакцинных штаммах бруцелл коровьего типа в опытах на морских свинках // ЖМЭИ. 1950. -№6.- С. 13.

66. Красиков А.П., Бронников B.C. Влияние иммунорегуляторов на иммуногенность противобруцеллезных препаратов // Бруцеллез с.-х. животных. 1989. - С.75 - 78.

67. Красиков А.П., Иванова О.Н. Способы повышения напряженности иммунитета при бруцеллезе // Туберкулез и бруцеллез с.-х. животных: методы и средства диагност, и профилакт.- Новосибирск. -1994 (1995). -С. 32-36.

68. Красиков А.П., Иванова О.Н. Влияние стимуляторов на иммуногенность противобруцеллезной вакцины из штамма 19 В. abortus // Методология мероприятий по профилакт. и ликвидации болезней с.-х. животных Новосибирск. 1995. - С. 84 - 90.

69. Куприна Н.П., Земсков A.M. Клинико-патогенетическое обоснование иммунокоррегируюших терапии при гнойных менингитах у детей // Ж. Эпидемиология и инфекц. болезни. 1999. - №1. - С. 54 - 59.

70. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. М.: Медицина. - 1985.-256с.

71. Лим А.А., Касьянов А.Н., Маматова З.П. Перспективы конъюнктивальной вакцинации крупного рогатого скота // Ветеринария. -1989.-№4.-С. 30-32.

72. Локтева Ф.П. Оздоровление стад крупного рогатого скота от бруцеллеза с применением вакцины из штамма 19 // Сб. научных трудов Лен.НИВИ. Вып.11.- 1965.-С.14 -17.

73. Лутфуллин М.Х. Аллергия у животных, привитых живыми вакцинами против бруцеллеза // Автореф. дис. . канд. вет. наук. Казань. -1983.- 19 с.

74. Лутфуллин М.Х. Взаимосвязь аллергии и иммунитета, усовершенствование аллергической диагностики и специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота // Автореф. дис. . док. вет. наук.- Ка-зань.-39с.

75. Лутфуллин М.Х., Лутфуллина Н.А. Влияние многократной ревакцинации против бруцеллеза на показатели иммунологической перестройки организма//Тез. докл. респуб. Научн. произвол, конф.,29-31 мая 1991.- Казань. 1991.- С. 27.

76. Лютинский, С.И., Кречко и др. Влияние тимогена на иммунную систему поросят при неспецифической бронхопневмонии // Ветеринария.- 1991.-№9.-С. 30-32.

77. Максимов A.M., Гурьянов С.Н., Черницина Н.Г. Сравнительная характеристика тимогена и этимизола при лечении бронхопневмонии у телят// Физиология и патология животных. Уссурийск. - 1993. - С. 87 - 90.

78. Малаев Н.Х., Юсупов О.Ю. и др. Опыт оздоровления молочных ферм от бруцеллеза и туберкулеза // Ветеринария. 1997. - №2. - С.10 -12.

79. Мельниченко В.И. Антигенные и вирулентные свойства вакцинных штаммов бруцелл в эксперименте на морских свинках // «Пути ликвид. инфекц. и инваз. Болезней с.-х. животных».- Сиб. отд. ВАСХНИЛ. Новосибирск. - 1985. - С. 22 - 23.

80. Морякова О.И. Изучение иммунобиологических реакций у крупного рогатого скота, ревакцинированного бруцеллезной вакциной из штамма 19 // Бюлл. н.-т. инф.ВИЭВ. 1957. - №2. - С. 24 - 25.

81. Муллакаев О.Т. Иммуноморфологическая оценка эффективности вакцины из штамма бруцелл 82-ПЧ в зависимости от дозы, кратности и интервалов между вакцинациями // Автореф. дисс. . канд. вет. наук.-Казань. 1991.-28с.

82. Муллакаев О.Т., Салмаков K.M., Белозерова Г.А. Иммуноморфологи-ческие изменения в органах и тканях телок, привитых вакциной из штамма бруцелл 82-ПЧ // Ветеринария. 1993. - №5. - С. 24-26.

83. Муллакаев О.Т., Белозерова Г.А., Мальцев Т.С. Количество бляш-кообразующих клеток в крови овец, привитых вакцинами из штаммов бруцелл 19, 82 и 82-ПЧ // Матер, респ. научн.-произв.конф. по акт. проб, ветеринарии и зоотехнии. Казань. - 1996. - С. 25.

84. Муллакаев О.Т. Динамика уровня содержания иммунокомпетент-ных клеток и концентрации ДНК у привитых животных // Матер, научн.-произв. конф. по акт. проблем, ветер, и зоотех. Казань. - 1996. - 26с.

85. Муллакаев О.Т., Белозерова Г.А., Мальцева Т.С. Иммуноморфоло-гическая оценка эффективности противобруцеллезных вакцин из штаммов 19, 82 и 82-ПЧ на овцах // Матер, междунар. научн. конф., посвящ. 125-летию КГАВМ. Казань. - 1998. - 4.1. - С. 55 - 56.

86. Муратов С.И. О длительности сохранения реакций у крупного рогатого скота, вакцинированного штаммом 19 // Ветеринария. 1967. - №1. -С. 33-34.

87. Наставление по применению тимогена в ветеринарии // Ветеринария. 1990. - №10. - С. 74.

88. Наставление по применению дибазола в ветеринарии // Ветеринария. 1993. - №10. - С. 63-64.

89. Никитенко A.M. Роль иммуномодуляторов в коррекции иммунобиологической реактивности и в профилактике гемобластозов животных // Автореф. диссдок. вет. наук. Казань. - 1990. - 42 с.

90. Никифоров И.П. и др. Реактогенность и эпизоотическая безопасность противобруцеллезной вакцины из штамма 82 // Диагн. и профилакт. инфекц. болезней животных. Сб. научных трудов СибНИВИ. - Омск. -1980.

91. Новицкий A.A., Потапов Т.Г., Маскаев H.H. Серологические показатели у коров после иммунизации противобруцеллезными вакцинами по разным схемам и после заражения // Бруцеллез с.-х. животных. 1989. - С. 33 - 40.

92. Объедков Г.А. Патогенез и диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота. Мн: «Урожай». - 1970. - 168 с.

93. Объедков Г.А. Усовершенствование методов борьбы с бруцеллезом // Автореф. дисс. . док. вет. наук. М. - 1989. -38с.

94. Орлов Е.С., Борисович Ю.Ф. Испытание иммуногенных свойств слабовирулентного штамма В. bovis // Бюлл. научн.-техн. информации ВИЭВ.- 1956.-Т.1.-С. 12.

95. Ощепков В.Г. R-, L-формы бруцелл и значение их в эпизоотологии и диагностике бруцеллеза животных // Автореф. дисс. . док. вет. наук. -Л. 1990.-38 с.

96. Павловский В.П. Применение противобруцеллезной вакцины из штамма 45/20 в Англии // Ветеринария. 1971. - №12. - 8 с.

97. Перегудов Т.А., Вождаев Н.С., Бричук П.Ф., Мун К.Б. Морфологические изменения у животных, привитых вакциной из штамма В. abortus 82 // Ветеринария. 1987. - №9. - С. 28 - 30.

98. Петров Р.В., Шишков В.П., Воронин Е.С., Блохина И.Н. Пробиоти-ки и иммуностимуляторы в ветеринарии // Тез. докл. Всесоюз. научн.-техн. конф., 10-12 октября 1990.- Нижний Новгород. М. - 1990. - С.1 - 2.

99. Погорелов Н.А., Таран И.Ф. Итоги изучения инагглютинабельных форм бруцелл // В сб.: Зоонозы / бруцеллез, лептоспироз и др. Ставро-поль-на-Кавказе. - 1966. - С. 126 - 134.

100. Попов И.А., Калмыков М.Я. О серологическом контроле в оздоровлении крупного рогатого скота от бруцеллеза с применением вакцины из штамма 19 // Труды Волгоград, с.-х. института. 1971. - Т.38. - С. 119126.

101. Потапов Н.М. Иммунопрофилактика бруцеллеза крупного рогатого скота в Приморском крае // Научн.-техн. бюлл. ИЭВС и ДВ. 1982. -№10. -С. 20-25.

102. Прудников B.C. Применение тиосульфата натрия при вакцинации свиней против сальмонеллеза // Ветеринария. 1980. - №11. - С. 29 - 31.

103. Прудников B.C. Тиосульфат натрия в качестве адъюванта // Ветеринария. 1982. - №8. - С. 26 - 28.

104. Прудников B.C. Иммуностимуляторы при профилактике болезней поросят // Ветеринария. 1996. - №11. - С. 13 - 17.

105. Ш 111. Ровнейко З.П. Оздоровление хозяйств с применением инагглютиногенной вакцины В. abortus 16/4 // Тез. докл. респ. научн.-произв. конф. Гродно, 8-9 сентября 1982. Мн. - 1982. - С. 102.

106. Ростов А.П., Суворов Е.А. Результаты длительных наблюдений по вакцинации крупного рогатого скота противобруцеллезной вакциной из штамма 82 // Тез. докл. Всесоюз. конф. по бруц. и тубер. Омск, 20-23 мая 1980. -М. 1980. -С. 90.

107. ИЗ. Ростов А.П. Иммунизация крупного рогатого скота малыми дозами ^ противобруцеллезной вакцины из штамма 82 с целью профилактикиабортогенного действия этой вакцины // Ветеринария. 1984. - №11. -С.34.

108. Салмаков K.M. Изучение антигенных и иммуногенных свойств штаммов бруцелл // Ученые записки КВИ. Казань. - 1964. - Т.90. - С. 170.

109. Салмаков K.M. Изыскание и испытание новых вакцинных штаммов бруцелл // Автореф. дисс. . док. вет. наук. Казань. - 1977. - 30 с.

110. Салмаков K.M., Абузаров Ю.Ш., Киршин Б.А. Живая вакцина из штамма 82 и ее эффективность в профилактике и ликвидации бруцеллеза // Научные труды КВИ. Казань. - 1980. - Т. 135. - С. 27 -34.

111. Салмаков K.M., Абузаров Ю.Ш., Киршин Б.А. О результатах широкого апробирования противобруцеллезной вакцины из штамма 82 // Тез. докл. Респуб. научн.-техн. конф. Казань. - 1980. - С. 110 - 111.

112. Салмаков K.M., Плотникова Э.М. Применение иммуноферментно-го анализа при ранней диагностике бруцеллеза // Матер, докл. научн.произв. конф. КВИ по проблеме вет. и жив-ва, 25-27 мая 1994г. Казань. - 1994.-С. 44.

113. Салманов K.M. Бруцеллез крупного рогатого скота // Ветеринарный врач. 2000. - №1. - С. 41 - 46.

114. Свиридов Л.П., Степанов A.B., Коникова P.E., Устинов Б.С. Изучение влияния иммуностимуляторв на устойчивость белых мышей к возбудителю брюшного тифа // ЖМЭИ. 1980. - №4. - С. 70 - 73.

115. Селиванов A.B. Иммунизация животных живой противобруцеллез-ной вакциной через неповрежденные слизистые оболочки // Автореф. дисс . док. вет. наук. М. - 1963. - 34 с.

116. Сибгатуллин P.C., Макаев Х.Н., Акберов Ф.Г., Сафин М.А., Иванов A.B. Эффективность специфической профилактики туберкулеза в сочетании с иммуномодуляторами // Матер, международ, конф., посвящ. 125-летию КГАВМ. Казань. - 1998. - 4.1. - С. 77 - 78.

117. Силиверстов В.В., Шумилов К.В., Калмыков В.В. и др. Результаты производственного испытания адъювант вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота// Ветеринария. 2001. - №6. - С. 10 - 12.

118. Слепцов Е.С., Бровик Е.А. Реакция торможения миграции лейкоцитов как метод оценки состояния клеточного иммунного ответа у крупного рогатого скота при реиммунизации противобруцеллезными вакцинами // Бюлл. ВНИИЭВ. 1989. - Вып.71. - С. 45 - 49.

119. Соколов В.Д., Андреева Н.Л., Соколов A.B. Иммуностимуляторы в ветеринарии // Ветеринария. 1992. - №7(8). - С. 49 - 50.

120. Сочнев В.В., Григорьева Г.И., Бацанов Н.П., Филлипов Н.В. и др. Бруцеллы и бруцеллез. Нижний Новгород. - 1998. - 246 с.

121. Старунова Н.П., Авилов В.М. Прогнозирование эпизоотического процесса при бруцеллезе крупного рогатого скота // Сб. научн. тр. НИВИНЗ РФ.- Нижний Новгород. 1993. - С. 17 - 22.

122. Степанов Е.М., Копейкин И.Г. Опыт ликвидации бруцеллеза крупного рогатого скота в Читинской области // В кн.: Эпизоотол. и иммуно-проф. болезни с.-х. животных.-Сиб отд-ние ВАСХНИЛ. Новосибирск. -1983.-С. 20-23.

123. Степин B.C., Урманов Г.Г. Противоорганные аутоантитела у крупного рогатого скота, вакцинированные против бруцеллеза // Вестник с.-х. науки Казахстана. 1982. - №3. - С. 66 - 67.

124. Студенцова В.К. Изучение иммуногенных средств инагглютина-бельных штаммов бруцелл // В кн.: Вопросы инфекционной патологии. — Алма-Ата. 1974. - С. 144 - 145.

125. Таран И.Ф., Замахаева Е.И. К оценке перспективности исследований по созданию вакцин из инагглютинабельных культур бруцелл // ЖМЭИ.- 1971. №. - С. 53 - 58.

126. Теш А.И., Чекишев В.М. Влияние иммуностимуляторов на проти-восальмонеллезный иммунитет у телят // Ветеринария. 1989. - №5. -С. 35 -37.

127. Теш А.И., Чекишев В.М. Применение тиосульфата натрия для стимуляции противосальмонеллезного иммунитета у телят. Новосибирск: ИЭВС и ДВ. - 1991. - 4 с.

128. Третяк Н.Т. Оздоровление маралов от бруцеллеза с помощью прививок вакциной из штамма 82 // «Инфекц. болезни с.-х. животных». -Новосибирск. 1983. - С. 21 - 22.

129. Урбан В.П., Рудаков В.В., Карпенко Л.Ю. Эффективность тимогена при профилактике желудочно-кишечных болезней поросят // Ветеринария. 1991. - №10. - С. 59-60.

130. Урбан В.П., Буянов В.А., Гречухин А.Н. и др. Иммуностимуляторы в системе профилактики болезней свиней // Ветеринария. 1992. - №9 -12.-С. 21 -23.

131. Филиппов Н.В., Костров В.О. План организационно-хозяйственных ветеринарно-санитарных и специальных мероприятий по профилактитке и ликвидации бруцеллеза с.-х. животных на 1991-1995 гг // Волгоград. -1991.- Юс.

132. Фомин A.M. Разработка и совершенствование средств и методов диагностики и специфической профилактики при бруцеллезе крупного рогатого скота// Автореф. дисс. . док. вет. наук. Казань. - 2001. - 36с.

133. Фомин A.M., Салмаков K.M. Эффективность новой системы специальных противобруцеллезных мероприятий // Ветеринарный врач. 2001. -№1(5).-С.23-26.

134. Хавинсон В.Х., Кожемякин A.J1., Волгаров А.П., Платонов В.Г. Протекторный эффект пептидов тимуса и слизистой оболочки трахеи при экспериментальной респираторной гриппозной инфекции // ЖМЭИ. -1993. -№1.- С. 68-73.

135. Хамзин К.А. Напряженность иммунитета у крупного рогатого скота в зависимости от кратности и интервалов введения живой бруцеллезной вакцины из штамма 82.

136. Хлопина А.Ф. Действие дибазола на иммунобиологические показатели у цыплят бройлеров // Ветеринария. - 1985. - №3. - С. 33.

137. Чевелев С.Ф., Бакулов И.А., Макаров В.В. и др. Макрофаги в системе иммунитета // Ветеринария. 1983. - №6. - С. 27 - 30.

138. Чекишев В.М., Файзрахманов Ш.Р., Киселев Е.А. и др. Дифференциация вакцинированных и больных бруцеллезом животных // Ветеринария. 1993.-№8.-С. 25-29.

139. Черкасов В.В., Ростов А.П. ' Опыт оздоровления хозяйств от бруцеллеза с применением живой вакцины из штамма 82 // Научные труды КВИ. 1980. - Т.135. - С. 80 - 82.

140. Чернышева М.И. Экспериментальное изучение процесса формирования иммунитета при бруцеллезе // Автореф. дисс. . док. мед. наук. -М.- 1962.-36 с.

141. Чудная JI.M., Фролов А.Ф., Оксиюк В.Т., Красюк JI.C., Мороз JI.B., Афанасьева С.М. Влияние иммуномодуляторов на выработку антител к дифтерийному антигену у мышей, вакцинированных АКДС-вакциной // ЖМЭИ. 1998. -№1. - С. 54 - 57.

142. Шахов А.Г. К вопросу об иммуногенных свойствах штаммов бру-целл, не образующих антител // Труды Воронеж. НИВС. 1966. - Вып.5. -С. 57-61.

143. Шишлянников В.М. Роль селекционно-генетических методов и иммуностимуляции в повышении эффективности борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота. пос. Лесные Поляны (Моск. обл.). - 1994.-18с.

144. Шумилов К.В. Результаты изучения вакцины из штамма 104-М в экспериментальных и производственных условиях // Тез. докл. Всесоюз. конф. по туберкулезу и бруцеллезу. Омск. - 20-25 мая, 1980. - С. 87 - 88.

145. Шумилов К.В., Клочков A.A. Изучение вакцины из штамма B.abortus 104-М в производственных условиях // Труды ВГНКИ. 1980. -Т.ЗО.-С. 171-174.

146. Шумилов К.В., Кальянов А.Н., Ромахов В.А. Результаты изучения вакцинного штамма B.abortus 104-М // Труды ВИЭВ. 1984. - №8. - С.27 -28.

147. Шумилов К.В., Альбертян М.П., Клочков A.A., Ромахов В.А, Вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота // Ветеринария. 1984. -№12.-С. 26-28.

148. Шумилов К.В., Улаеевич П.С., Ромахов В.А., Альбертян М.П., Клочков A.A., Косилов И.А. Результаты изучения вакцины из штамма 104-М // Пути ликвид. инфекц. и инвазион. болезней с.-х. животных/ Сиб. отд-е ВАСХНИЛ. Новосибирск. - 1985. - С. 20 - 21.

149. Шумилов К.В., Разработка и усовершенствование средств и методов специфической профилактики и диагностики бруцеллеза животных // Автореф. дисс. док. вет. наук. М. - 1987. — 48 с.

150. Шумилов К.В., Скляров О.Д., Обухов И.Л., Груздев К.Н., Шипулин Г.А., Шипулина О.Ю. Идентификация бруцелл методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) // Ветеринария. 1996. - №12. - С. 19 - 23.

151. Шуралев Э.А. Изыскание иммуномодуляторов для повышения эффективности бруцеллезных вакцин // Автореф. дисс. . канд. вет. наук. -Казань. 1999.-22 с.

152. Шуралев Э.А. Влияние иммуномодуляторов на иммуногенез при вакцинации штамма 82-ПЧ бруцелл // Тез. докл. Междунар. научн. конф., 30-31 мая, Казань. 2000. - С. 166 - 168.

153. Щипко С.Г., Малышева Л.А. Изучение иммуногенных свойств вакцины из штамма 82 на свиньях, ревакцинированных в разные сроки после иммунизации // Ветеринария. 1986. - №4. - С. 21.

154. Ющук Н.Д., Ценева Г.Я., Аленушкина Т.В., Куляшова Л.Б. Эффективность применения тимогена при экспериментальной инфекции, вызванной Yersinia enterocolitica // ЖМЭИ . 1995. - №3. - С. 106 - 108.

155. Яковлев И.Н., Ощепков В.Г. Динамика серологических реакций у крупного рогатого скота, привитого инагглютиногенной вакциной из штамма В. abortus В-1 (ВИЭВ) // Сб. научных трудов Сиб.НИВИ. 1975. -Вып.21. - С. 3 - 12.

156. Ярославцев В.П., Татарчук А.Т., Бояринцева Г.Г., Кудрюкова Л.И. Бруцеллез крупного рогатого скота: профилактика и меры борьбы // Ветеринария.- 1986. №2. - С. 11 - 12.

157. Abdelrahim A.J., Suliman H.B., Shommein A.M., Bakheit H.A. Preva lence of bovine brucellosis in dairy herd pre and post isolation of reactors // Bull. Anim. Health Product in Africa. 1990. - Vol.38. - №1. - P. 19 - 21.

158. Adams J.M. The organization and expression of immunoglobulin genes // Immunol. Today. 1980. - №1. - P. 10 - 17.

159. Akhtar S., Afzal M., Ali S., Khan M.I. Effect of reactor retention on the spread of brucellosis in Jersey cattle and buffalo herds // Rev. scient. techn. Off. Intern. Epizoot. 1990. - Vol. 9. - № 4. - P. 1179 - 1185.

160. Alton G., Jones L., Garcio-Garrillo G., Faunce T. Brucella melitensis REV-1 and Brucella abortus 45/20 vaccines in goats immunity // Am. J. Vet. Rec.- 1972.-Vol.29.-№9.-P. 1741 1750.

161. Alton G. The control of bovine brucellosis recent developments // World animal Review. 1981. - 39. - P. 17 - 25.

162. Bang B. Infections abortion in cattle // J. campar. Pathol. Therap. -1906.-P. 19.

163. Banizzi L., Guttinger M., Lopalo L., Ponti W. Mediatori della immu-nostimlazione nel bovino : attivita biologica del terreno condizionato da limfo-citi T (TLCM)// Clin. Vet. 1986. - Vol.109. -№3. - P. 243 - 251.

164. Bricker B.J., Tabatabai L.B., Deyoe B.L., Mayfield J.E. Conservation of antigenicity in a 31-kDa Brucella protein // Veter. Microbiol. 1988. -Vol.18.- №3/4. - P. 313 -325.

165. Buck G.M. Studies of vaccination during calphood to prevent bovine infection abortion // J. Agric. Res. 1930. - №41. - P.667.

166. Calle lanchez M., Betes alvarez J., Fernandez Juares C., Blasco Romerj B. Valor diagnostico de la immunoflurescenia indurecta la brucellosis // Rev. clin. esp. 1997. - 147. - №2. - P.153 - 157.

167. Confer A.W., Hall S.M., Espe B.H. Transient enhancement of the serum antibody response to Brucella abortus strain 19 in cattle treated with levami-sole // Amer. J. Vet. Res. 1985. - Vol.46. - №12. - P.2440 - 2443.

168. Corner L., Tabatabai L., Deyoe B. Immunisation of cattle with Brucella abortus saltextractable proteins // Veter. Microbiol. -1987. Vol.15. -№ 4. - P.325.

169. Cotton W.E., Buck G.M., Smith H.E. Efficacy of an avirulent strain of Brucella abortus for vaccinating pregnant cattle // J. Afric. Res. 1936. - 46. -P.315.

170. Eisenschenk F.C., Houle J.J., Hoffmann E.M. Serum sensivity of field isolates and laboratory strains of Brucella abortus // Am. J. veter. Res. 1995. - Vol.56. - №12. - P. 1592 - 1598.

171. Elberg S.S. Immunization against Brucella infection // Med. J. -1973. -Vol.52. №4.-P.339-342.

172. Fayed A.A., Barson S.A., Eiden Z.V.E. Questionable reactions to Rose Bengal test // Assiut veter. med. J. 1995. - Vol.33. - №65. - P. 159 -163.

173. Fensterbank R. Brucellose des bovines et des petits ruminants: diognos-tic, prophylaxie et vaccination // Rev. sei. et techn. off. int. epizoot. 1986. -Vol.5. - №3. - P. 587 - 603, 605 - 633.

174. Frahm H., Lembke A. Ergebnisse und Probleme der Brucellosefor-schung // Kieler milchwirsch, Forschungsler. 1955. - Vol.7. - №5. - P.505.

175. Galassi D., Galassi P., Pelliccioni A., Semprini Primula Clinical results obtained in cattle and swine by means of biological immunostimulators // Comp. Immunol., Microbiol, and Infect. Diseases. 1986. - Vol.9. - №2 - 3. -P. 285 - 295.

176. Grawford R.P., Huber J.D., Sanders R.B. Brucellosis in heifers weaned from seropositive dams // J. Amer, veter. med. assoc. 1986. - Vol.189. - №5.- P. 547 549.

177. Hampson E. Vaccination II Austral, veter. pract. 1986. - Vol.16. - №1.- P. 33 -36.

178. Hamshimoto K. Diagnosis of brucellosis // Trop. Agr. res. ser. Vatabe, Tsukuba. 1980. - №13. - P. 1 -7.

179. Heckf et al. Serologic profile for a cow experi mentally infected with Brucella abortus II Brit, veter. J. -1937. №5. - P. 520 -526.

180. Hülse E. Strain 19 and ofher Brucella vaccines // Proc. Soc. Med. -1958.-51.-№5.-P. 377.

181. Immunostimulants // Comp. Immunol. Microbiol. Dis. 1986. - Vol.9. -№2-3.-P. 99-295.

182. Jacotot H., Vallée A. Quelques observations relatives aux mutations dans le geure brucella // Ann. Inst. Pasteur. 1962. - Vol.102. - №1. - P. 109.

183. Janney G., Berman D. Staining intracellular Brucella organisms by means of fluorescent antibodies // Am. J. veter. rec. 1962. - №23. - P. 596 -598.

184. Joint FAO/WHO Expert Committee on Brucellosis. Geneva. - 1986.

185. Larski Z. Trudnosci serologicznej diagnostyki brucelozy budla // Med. weter. 1996. - R.52. - №12. - S. 755 - 757.

186. Macmillan A.P., Greiser-Wilke I., Moening V., Mathias L.A. A competition enzyme immunoassay for brucellosis diagnosis // Dt. Tierarztl. Wschr. -1990. Vol.97. - №2. - P. 83-85.

187. Mahajan N.K., Knlshreshta R.C. Dot-immunobinding assay and its comparison with other serological tests for brucellosis in aborting ewens // Indian. J. anim. Sc. 1990. - Vol.60. - № 10. - P/ 1190 - 1192.

188. McLean G., Hilbink F. Use of dried blood on filter paper in the ELISA for Brucella abortus // J. Immunol. Meth. 1989. - 123. - №1. - P. 39 - 43.

189. Mittal K.R., Tizard J.R. Agglutination tests and their modifications in the diagnosis of bovine brucellosis // Comp. Immunol., microbiol. and infect, diseases. 1983. - 6. - №1 - 8.

190. Moreno E., Jones L.M., Berman D.J. Immunochemical characterization of rough Brucella lipopolysaccharides // Infect, and Immunol. 1984. - 43. -№3. - P. 779-782.

191. Morgan W.J.B. The serological diagnosis of bovine brucellosis // Veter. Rec. 1967. - Vol.80. - P. 612 - 619.

192. Morgan W.J.B. Reviews of progress of Dairy Science Section E. Diseases of dairy cattle. Brucellosis // J.' Dairy Rec. 1970. - Vol.37. - P. 301 -308.

193. Moulton J.E., Meyer M.E. The pathogenesis of B. suis infection in guinea pigs. Lesions of the spleen, liver, testis and articulations // Cornell, veter. 1958. - Vol.48. - P. 165 -169.

194. Muskens J.A.M., Bercovich Z., Damen C.P.R.M. Serological response of cattle to Brucella allergen after repeated intradermal applications of this allergen // Veter. Microbiol. 1996. - Vol.48. - №1/2. P. 174 -178.

195. Mylrea P.J. The origins of bovine brucellosis in New South Wales and eradication // Austral, veter. J. 1991. - Vol.68. - №6. - P. 189 - 192.

196. Nicoletti P. Adult vaccination // Bovine brucellosis an international symposium. 1977. - P. 201 -208.

197. Nielsen K.H., Henning M.D. Bovine monoclonal antibody specific for Brucella abortus lipopolisaccharide // Veter. Immunol. Immunopathol. 1989. - Vol.21. - №3/4. - P. 363 - 372.

198. Olsen S.C., Bricker B., Palmer M.V. et al. Responses of cattle to two dosage of Brucella abortus strain RB-51 serology, clearanee and efficacy // Res. in veter. sc.-1999.-Vol.66. -№2.-P. 101-105.

199. Onate A., Folch H. Comparison of protein components of different species and strains of Brucella // J. veter. med. ser. B. 1989. - Vol.36. -№5. - P. 397-400.

200. Palmer M.V., Olsen S.C., Cheville N.F. Safety and immunogenicity of Brucella abortus strain RB-51 vaccine in pregnant cattle // Am. Veter. rec. -1997. Vol.58. - №5. - P. 472 - 477.

201. Parnas I., Chodkowski A. Zmiennose paleczck Brucella koleke ciji kra-jowej // Acta microbial., polon. 1956. - Vol.5. - №3 - 4. - P. 371.

202. Renoux G., Plommet M., Philippon A. Transmission of Brucella abortus infection from one generation to another by apparently normal heifers // WHO (Bruc.). 1971. - P. 323.

203. Renoux G., Renoux M. Effect immunostimulant dun imidothiazole dans 1 immunisation des souris cotre 1 infection par Brucella abortus // C.R. Acad. Sei. Paris. 1971. - №2720. - P. 349 - 350.

204. Renoux G., Renoux M. Stimulation of anti-Brucella Vaccination in mice by tetramisole, a phenylimidothiazole salt // Infect. Immunol. 1973. - №8. -p. 544-548.

205. Rise C.E. Antibodies in brucellosis // Proceed New Zealand Soc. of An. Prod, 1969. - Vol.29. - P. 14 - 16.

206. Rise C.E., Boyes B. Serum immunoglobulins in bovine brucellosis // N. Z. Veter. J.-1971.-Vol. 19.-P. 146-151.

207. Rose J.E., Roepke M.H. Physicochemical studies on postvaccinal brucella agglutinis in bovine serum // Am. J. Veter. Res. 1964. - Vol. 25. - P. 325-329.

208. Tabatabai L.B., Deyoe B.L., Patterson J.M. Immunogeniciny of Brucella abortus saltextractable proteins // Veter. Microbiol. 1989. - Vol. 20.- №1. P. 49-58.

209. Valette L. Prophylaxie medicate de la brucellose animal // Rev. Elevage Med. Veter. 1987.- 40. - 4. - P. 351.

210. Wilkinson P.C. Immunoglobulin patterns of antibodies against Brucella in man and animals // J. Immunol. 1966. - Vol. 96. - P. 457 - 462.

211. Wyckoff J.H., Howland J.L., Confer F.W. Comparison of Brucella abortus antigen preparations for in vitro stimulation of immune bovine T-limfocite cell lines // Veter. Immunol. Immunopathol. 1993. - Vol. 36. - №1.- P. 45 -64.

Информация о работе

Сафина, Гульнара Миннирашитовна
кандидата ветеринарных наук
Казань, 2004
ВАК 03.00.07

Диссертация

Сравнительное изучение иммунобиологических свойств вакционного штамма B.abortus R-1096 - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы