Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Иммунологическая эффективность живых и гамма-инактивированных противобруцеллезных вакцин для мелкого рогатого скота

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Иммунологическая эффективность живых и гамма-инактивированных противобруцеллезных вакцин для мелкого рогатого скота"

На правах рукописи

КОСАРЕВ МАКСИМ АРКАДЬЕВИЧ

ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ЖИВЫХ И ГАММА-ИНАКТИВИРОВАННЫХ ПРОТИВОБРУЦЕЛЛЕЗНЫХ ВАКЦИН ДЛЯ МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА

4854465

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

I О ¿о ¿и(1

Казань-2011

4854465

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»).

Научный руководитель:

заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Иванов Аркадий Васильевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Н.А. Хисматуллина доктор ветеринарных наук О.Д. Скляров

Ведущее учреждение: Всероссийский научно-исследовательский

институт бруцеллеза и туберкулеза животных (ВНИИБТЖ, г. Омск).

Защита состоится «» февраля 2011 года в 10°° часов на заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при Федеральном государственном учреждении «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (420075, г. Казань, Научный городок-2 ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»

Электронный вариант автореферата и текст объявления о защите размещен на сайте организации: www.vnivi.ru.

Автореферат разослан «Я^ » января 2011 года.

Учёный секретарь диссертационного совета,

старший научный сотрудник <=?&г}е1?ггггп~/&гёпанов В.И.

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 1.1 Актуальность темы. Бруцеллез овец и. коз, несмотря на достишутые успехи в его ликвидации в РФ, все еще представляет серьезную эпизоотологическую и, следовательно, эпидемиологическую проблему. В борьбе с бруцеллезом мелкого рогатого скота использовали различные вакцины и схемы их применения. В 1955-1960 гг. практически в масштабе всей страны стали широко использовать живую вакцину из агтлютиногенного штамма В. abortus 19. В последующие годы широкое использование вакцины из штамма 19 продолжалось.

В период с 1980 по 1986 год в порядке широкого производственного опыта, а затем в масштабе всей страны дня иммунизации овец стали использовать вакцину из штамма B.melitensis Rev 1 только на ярках текущего года рождения. В 1986 -1988 годах была официально регламентирована реиммунизация этой вакциной овцематок с интервалом в два года.

В связи с ухудшением эпизоотической обстановки (1981-1989 гг.) с 1990 года вновь широко начали использовать вакцину из штамма 19. Однако с начала 90-х годов начали накапливаться тенденции, которые негативно влияли на, эффективность проводимых противобруцеллезных мероприятий. Поэтому, чтобы повысить противоэпизоотическую эффективность специальных противобрунеллезиых мероприятий, некоторые исследователи рекомендуют вакцину из штамма 19 применять в уменьшенной дозе коньюнктивально ежегодно на всем поголовье овец и коз без предварительного их исследования на бруцеллез (И.А. Косилов и др.,1999; П.К. Аракелян и др., 2010).

Всё изложенное указывает, что существующие меры борьбы с бруцеллезом мелкого рогатого скота с применением живых вакцин из штаммов B.abortus 19 и B.melitensis Rev 1 требуют своего принципиального изменения и совершенствования. В нашей стране и за рубежом продолжаются исследования по изысканию. более совершенных вакцин и способов их применения. При этом исследования проводятся в разных направлениях. Изыскиваются живые, химические и инактивированные корпускулярные бруцеллезные вакцины, а также различные иммуномодуляторы и полимерные носители (A.B. Иванов и др., 2008, 2009,2010; K.M. Салмаков и др., 2007, 2010; А.М. Фомин и др., 2001; В.Г. Ощепков и др., 2009; О.Д. Скляров и др., 2005; A.A. Денисов и др., 2006).

1.2 Цель н задачи исследований. Целью настоящей работы явилось провести сравнительное изучение иммунологической эффективности живых и гамма-инактивированных. противобруцеллезных вакцин для мелкого рогатого скота.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Изучить в сравнительном аспекте культурально-морфолошческие, биохимические и агглютинабельные свойства культур вакцинных штаммов B.abortus 19, 82, B.melitensis Rev 1 и вирулентного штамма B.suis 86;

2. Испытать влияние различных доз гамма-облучения на инактивацию взвесей культур штаммов B.abortus 82, B.melitensis Rev 1 и B.suis 86; провести контрольные исследования полученных убитых вакцин на стерильность и безвредность;

3. Изучить антигенные и иммуногенные свойства живых вакцин из штаммов B.abortus 19, 82 , B.melitensis Rev 1 и гамма-инакгивированных вакцин из штаммов B.abortus 82, B.melitensis Rev 1 и B.suis 86 на морских свинках;

4. Установить иммуногенную активность гамма-инактивированных вакцин из штаммов B.abortus 82 и B.suis 86 в сравнении с живыми вакцинами из штаммов B.abortus 19 и 82 на овцах.

1.3 Научная новизна работы. В сравнительном аспекте изучены вакцинные штаммы B.abortus 19, 82, B.melitensis Rev 1 и вирулентный штамм B.suis 86. Указанные штаммы различаются по культурально-морфологическим, биохимическим и агглютинабельным свойствам, штамм 82 находится в SR-, остальные штаммы - в S-форме.

Проведены исследования по установлению влияния гамма-облучений на инактивацию взвесей культур штаммов 82, Rev 1 и 86. Все дозы облучения (5-1020-30 кГр) вызывали полную инактивацию бруцелл указанных штаммов.

В экспериментальных условиях изучены антигенные и иммуногенные свойства живых вакцин из штаммов B.abortus 19, 82, B.melitensis Rev 1 и гамма-инактивированных вакцин из штаммов B.abortus 82, B.melitensis Rev 1 и B.suis 86 на морских свинках, а также живых вакцин из штаммов B.abortus 19 и 82 и гамма-инактивированных вакцин из штаммов B.abortus 82 и B.suis 86 на овцах.

Высокую иммунологическую эффективность показала живая вакцина из штамма 82, в том числе впервые на овцах. При этом данная вакцина обладала слабыми ахтлютиногенными и практически равными иммуногенными свойствами с живыми вакцинами из высокоагглютиногенных штаммов 19 и Rev 1. Наиболее высокая иммуногенная активность установлена у гамма-инактивированных

вакцин, подвергнутых гамма-облучению в дозе 30 кГр, и у диалогичной вакцины из штамма 82.

1.4 Практическая значимость работы. Живая вакцина из штамма B.abortus 82, обладая выраженными и практически равными иммуногенными свойствами с живыми вакцинами из высокоагглютиногенных штаммов В. abortus 19 и B.melitensis Rev 1, на первично привитых и ревакцинированных овцах показывает слабые аггаютиногенные свойства. Поэтому, имея такое преимущество, живая вакцина из штамма B.abortus 82 вполне может применяться для специфической профилактики бруцеллеза мелкого рогатого скота.

..... Гамма-инактивированная вакцина из штамма B.abortus 82, обладающая

слабыми агглютиногенными свойствами и несколько в меньшей степени . иммуногенной активностью в сравнении с живой вакциной из этого штамма, также может иметь практическое значение, но для этого требуется ее доработка и дополнительные испытания на овцах, в том числе с применением различных иммуномодуляторов.

1.5 Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты сравнительного изучения, культурально-морфологических, биохимических и аглютинабелышх свойств вакцинных штаммов B.abortus 19, 82, B.melitensis Rev 1 и вирулентного штаммаB.suis 86; ;

2. Влияние различных доз гамма-облучения на инактивацию, взвесей культур штаммов 82, Rev 1 и 86;

3. Антигенные и иммуногенные свойства живых вакцин из штаммов 19, 82 и Rev 1 и гамма-инактивированных вакцин из штаммов 82, Rev 1 и 86 на морских свинках; ,

4. Иммунологическая эффективность живых вакцин из штаммов 19 и 82 в сравнении с гамма-инактивированными вакцинами из штаммов 82 и 86 на овцах.

1.6 Апробация полученных результатов. Основные положения диссертационной работы представлены на: заседаниях Ученого совета ФГУ «ФЩРБ-ВНИВЙ» в виде ежегодных отчетов о НИР (2006-2010 гг.); 6-ой региональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию СибНИВИ-ВНИИБТЖ «Естественная и специфическая резистентность населения и животных в условиях Сибири» (Омск, 2007); научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные проблемы ветеринарии» (Казань, 2007); научно-практической конференции молодых ученых и специалистов

«Достижения молодых ученых - в производство», посвященной 100-летию со дня рождения профессора Х.Х. Абдуллина (Казань, 2008); международном рабочем совещании «Бруцеллез - пограничная инфекция животных и человека, требующая общих усилий разных стран»» (Серпухов, Московская область, 2008); международной научно-практической конференции, посвященной 50-летию ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (Казань, 2010).

1.7 Публикации результатов исследований. По теме диссертационной работы опубликовано 9 научных работ, в том числе 5 - в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ.

Диссертация изложена на 117 страницах компьютерного текста и включает общую характеристику работы, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложение.

Работа иллюстрирована 14 таблицами. Список литературы включает 218 источников, в том числе 54 зарубежных. В приложении представлены документы, подтверждающие результаты основных этапов работы.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в лаборатории по изучению бруцеллеза ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» в 2006 - 2010 гг.

Для решения поставленных задач для исследований были взяты вакцинные штаммы B.abortus 19, 82 и B.melitensis Rev 1 и вирулентный штамм B.suis 86. При изучении культур бруцелл указанных штаммов применяли следующие тесты: окрашивание и микроскопия мазков; выращивание культур на печёночно-пептонном глюкозо-глицериновом агаре и бульоне; определение потребности в углекислом газе; образование сероводорода; фаготипирование; способность роста на средах с пенициллином, а также с эритритолом; пробы термоагглютинации и с акрифлавином; окрашивание колоний по Уайт-Вилсону; агглютинабельность в бруцеллезных S-и R- антисыворотках и монорецепторных «А» и « М» сыворотках; способность роста на средах с фуксином и тионином.

С целью установления влияния различных доз гамма-облучения на инактивацию бруцелл вначале проводили смыв культур штаммов 82, Rev 1 и 86 с поверхности агара фосфатным забуференным физраствором, затем фасовали полученные взвеси во флаконы по 10 мл, закрывали их резиновыми пробками и обкатывали алюминиевыми колпачками. После этого флаконы облучали на

гаммаустановке «Исследователь», Со60 с экспозиционной мощностью 14 кГр/час в дозах 5-10-20 и 30 кГр в отделе радиобиологии ФГУ «ФЦГРБ-ВНИВИ». Качество инактивации гамма-облученных взвесей бруцелл определяли путём высева их на печеночный агар, эритрит агар, среды Сабуро и Китг-Тароцци. Посевы выдерживали в термостате в течение 10 суток и определяли наличие или отсутствие роста бруцелл.

Для изучения антигенных и иммуногенных свойств в 1-ом эксперименте морских свинок иммунизировали взвесями культур штаммов 82 и 86, подвергнутыми гамма-облучению в дозах 5-10-20 и 30 кГр, по 10 голов в груше. Вводили культуры подкожно в области паха в дозе 10 млрд. м.к. в объёме 1 мл. В качестве контроля использовали нативную живую вакцину из штамма 82 в дозе 1 млрд. м.к. по отраслевому стандарту мутности. 10 интактных животных служили контролем при последующем заражении. Через 1 и 2 месяца после иммунизации у животных по 3 из группы брали кровь из ушной вены, и проводили серологическое исследование в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном и РСК с R-антигеном ВНИВИ. По прошествии 2-х месяцев со дня иммунизации морских свинок заражали культурой вирулентного штамма В. abortus 54-М ВГНКИ в дозе 50 м.к. (10-ти кратная минимальная инфицирующая доза). Спустя месяц с момента заражения, животных подвергали эвтаназии с проведением серологического и бактериологического исследований.

В задачу второго опыта, на морских свинках входило изучить иммунологическую активность гамма-инактивированных культур бруцелл из штаммов 82, Revi и 86, а также установить влияние иммуномодуляторов на их иммунологическую эффективность. Морских свинок иммунизировали взвесями, подвергнутыми гамма-облучению в дозе 30 кГр, и этими взвесями с иммуномодуляторами ларифаном и тиосульфатом натрия, по 8 голов на группу. Вводили культуры подкожно в области паха в дозе 10 млрд. м.к. в объеме 1 мл. В качестве контролей использовали нативные живые вакцины из штаммов 19 и 82 в дозе 1 млрд. м.к. и живую вакцину из штамма Revi в дозе 100 тыс. м.к. При последующем заражении 8 интактных животных служили контролем. Через 1 и 2 месяца после прививки у животных, по 3 из группы, брали кровь из ушной вены и проводили серологическое исследование в РА, РСК и РСК с R-антигеном ВНИВИ. По истечении 2-х месяцев со дня иммунизации морских свинок заражали культурой вирулентного штамма B.abortus 54-М ВГНКИ в дозе 50 м.к. Контроль

дозы заражения осуществляли путем высева взвеси бруцелл на чашки Петри с триптозным агаром и подсчета количества выросших колоний. Через 1 месяц с момента заражения животных подвергали эвтаназии с проведением серологического и бактериологического исследований, по результатам которых определяли процент иммунных морских свинок в той или иной группе.

В первом опыте на овцах изучали антигенные и иммуногенные свойства противобруцеллёзных гамма-инактивированных вакцин из штаммов 82 и 86 в сравнении с живыми вакцинами из штаммов 82 и 19. Овец иммунизировали по следующей схеме: 1 гр. - культура штамма 86 гамма-инакгавированная в дозе 50 млрд. м.к. подкожно с внутренней стороны за локтевым суставом, на фосфатном забуференном физиологическом растворе хлористого натрия, в объёме 2,2 мл; 2 гр. - культура штамма 86 гамма-инактивированная в дозе 50 млрд. м.к., сочетало с иммуномодулятором тиосульфатом натрия, в дозе 750 мг на голову, в объёме 3 мл; 3 гр. - культура штамма 82 гамма-инактивированная в дозе 50 млрд. м.к. в объёме 2 мл; 4 гр. - культура штамма 82 гамма-инакгавированная в дозе 50 млрд. м.к., сочетано с тиосульфатом натрия, в объёме 3 мл; 5 гр. - культура штамма 82 живая в дозе 40 млрд. м.к. в объёме 2 мл; 6 гр. - культура штамма 19 'живая в дозе 40 млрд. м.к. в объёме 2 мл; 7 гр. - интактные.

До и после иммунизации в течение 3-х суток проводили термометрию животных. Через 1,2,3 и 4 месяца после иммунизации у животных брали кровь для серологического исследования в РА, РСК и РСК с Я-антигеном ВНИВИ. Спустя 4 месяца овец заражали культурой вирулентного штамма В-теШегшз 102-Н подкожно в дозе 200 тыс. м.к. Убой овец проводили через 30-35 дней после заражения с проведением серологического и бактериологического исследований.

Во втором опыте на овцах изучали иммунологическую эффективность инактивированных культур бруцелл из штаммов 82 и 86 и живую вакцину из культуры штамма 82.

Овец иммунизировали по следующей схеме: 1 гр. - живая вакцина из штамма 82, в дозе 40 млрд. м.к. и объёме 2 мл, подкожно за левым локтевым суставом; 2 гр. - гамма-инактивированная культура бруцелл штамма 82, в дозе 400 млрд.м.к. и объёме 3,4 мл; 3 1р. - гамма-инактивированная культура бруцелл штамма 86, в дозе 400 млрд.м.к. и объёме 4,3 мл; 4 гр. - интактные.

Через 15 суток, 1,2,3 и 4 месяца после иммунизации у животных брали кровь для серологического исследования в РА, РСК и РСК с К-антигеном ВНИВИ.

Спустя 4 месяца иммунизированных и интактных овец заражали культурой вирулентного штамма B.melitensis 102-Н, подкожно, в дозе 0,5 млн.м.к. Убой заражённых животных проводили через 30 суток после заражения с проведением серолошческого и бактериологического исследований.

В следующем опыте в сравнительном аспекте устанавливали иммуногенную активность живых вакцин из штаммов 82 и 19 и гамма-инактивированной вакцины из штамма 82 на ревакцинированных овцах. Для этого Овец иммунизировали по следующей схеме: 1 гр. - живая вакцина из штамма 82 в дозе ,40 млрд. м.к. в объеме 2 мл; 2 гр. -т инактивированная культура бруцелл штамма, 82, в дозе 400 млрд. м.к., в объеме 4 мл; 3 гр. - живая вакцина из штамма 19 в дозе 40 млрд. м.к., в объеме 2 мл; 4 гр. - интактные.

. Через 15 суток, 1, 2 и 3 месяца после иммунизации: овец исследовали на бруцеллез в PA, PQKи РСК с R-антигеном ВНИВИ. Спустя 3 месяца животных ревакцинировали указанными вакцинами в тех же дозах. После ревакцинации исследование животных проводили через 15 суток, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 и 9,5 мес. Затем ревакцинированных и интактных овец заражали культурой вирулентного штамма В. melitensis 16-М в дозе 1,5 млн.м.к., а затем: через 25 суток подвергали эвтаназии с проведением серологического и бактериологического исследований.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 Культурально-морфологнческие, биохимические и аглютинабельиые свойства вакцинных штаммов B.abortus 19, 82 и B.melitensis Rev 1, а также вирулентного штамма B.suis 86

Изучение морфологии мшфобов исходных культур штаммов B.abortus показало, что в мазках, окрашенных по Козловскому, они имели, красный цвет и представляли собой мельчайшие бактерии шаровидной, : овоидной или незначительно удлинённой формы. На ППГГА культуры штамма В. abortus 19 росли в виде выпуклых, прозрачных колоний, которые не изменялись в течение 3-х суток. При,росте,.¡бруцелл в бульоне наблюдалось его равномерное помутнение. Рост культур штаммов 82, 86 и Rev 1 на агаре и бульоне практически не отличался от роста культур штамма Д9.

В целом исследования показали, что по окраске колоний и другим кулыурально-биохимическим свойствам штаммы 19, Rev 1 и 86 находятся в S-, 82 - в SR-форме и имеют соответствующие отличительные признаки. .

Все пггаммы бруцелл при культивировании не нуждались в повышенном содержании углекислого газа. Они обильно росли на твердых питательных средах в пробирках под ватно-марлевыми пробками. Штаммы 19, 82 и 86 в процессе метаболизма при росте на агаре выделяли сероводород. Отрицательный результат при росте на агаре по данному показателю был получен только со штаммом Rev 1.

Не росли на средах, содержащих тионин в разведениях 1:25000 и 1:50000, культуры штамма 19, но росли на агаре с фуксином, а культуры пггамма 86, напротив, росли с тионином и не росли с фуксином. Культуры штамма 82 росли во всех разведениях тионина и фуксина, а, штамма Rev 1 не росли на средах с обеими красками.

Культуры штаммов 19 и 82 лизировались фагом «Тб», а у штаммов 86 и Rev 1 лизис отсутствовал. Интенсивность фаголизиса у штамма 19 была сильно выраженной, с оценкой на «++-Н-», а у штамма 82 - слабовыраженной, с оценкой на «+», и только с цельным фагом. Не росли культуры штаммов 19 и Rev 1 на среде, содержащей 5 и 10 ед. пенициллина в 1 мл среды, а штаммов 82 и 86 росли на среде с этой концентрацией антибиотика.

Рост бруцелл штаммов 19 и Rev 1 из разведений 103 на агаре с эритритолом отсутствовал, тогда как на агаре без эритритола отмечался их обильный рост. Культуры штаммов 82 и 86 росли на средах с эритритолом и без него, хотя в последних рост был интенсивнее. Отрицательную пробу термоагтлютинации давали культуры штаммов 19, 82, 86 и Rev 1. Не агглютинировали в растворе

акрифлавина культуры штаммов 19, 86 и Rev 1, а штамма 82 агглютинировали на «+++».

После окрашивания колонии штамма 19, 86 и Rev 1 были одинаковой величины, центральная их часть не окрашивалась и была желтой. Ободок колоний был фиолетового цвета и несколько шире, чем это обычно отмечается при классическом окрашивании. Колонии штамма 82 также были одинаковой величины, полностью окрашивались, в центре имели выраженные трещины, в глубине которых просматривалась желтизна колоний.

Культуры штамма 19 агглютинировали в S- и «А» сыворотках и не вступали в реакцию с R- и «М» сыворотками, штамма 82 агглютинировали в S-, R- и «А» сыворотках и не вступали в реакцию с «М» сывороткой, штамма Rev 1 давали положительную реакцию лишь с S- и «М» сыворотками, а штамма 86 только с S-сывороткой.

3.2 Получение гамма-инактивнрованных противобруцеллезных вакцин из штаммов B.abortus 82, B.melitensis Rev 1 и B.suis 86

Результаты исследований показали, что все дозы гамма-облучения (5-10-20 и 30 кГр) приводят к полной инактивации взвесей бруцелл штаммов 82, Rev 1 и 86. Из нативных, не инактивированных взвесей наблюдали чистый рост бруцелл на питательных средах.

3.3 Изучение антигенных и иммуногенных свойств живых и гамма-инактивированных нротивобруцеллезных вакцин на морских свинках

Результаты первого опыта показали, что через 1 месяц после иммунизации гамма-инакгивированными вакцинами из штаммов 82 и 86 в дозах от 5 кГр до 30 кГр, а также живой вакциной из штамма 82, все морские свинки в РА реагировали отрицательно. В РСК единым бруцеллезным антигеном (PCK-S) в основном показывали отрицательные и сомнительные результаты. Лишь одна морская свинка, привитая культурой 82-гамма30, реагировала положительно в титре 1:5. В РСК с R-антигеном все животные реагировали положительно в титрах 20,0±0 -26,7±6,7. Из 3-х морских свинок, привитых живой вакциной из штамма 82, одна показывала положительную PCK-S в Титре 1:5. Высокими были у этих животных титры антител в РСК с R-антигеном (133,3±26,7). Морские свинки, привитые культурами 86-гамма5, 86-гаммаЮ, 86-гамма20 и 86-гамма 30 в PCK-S также не показывали высоких титров антител, но всё же положительных результатов было получено больше, чем в группе животных, привитых культурами шт. 82-гамма. Титры антител были невысокими - от 1:5 до 1:10.

Через 2 месяца все морские свинки, привитые культурами 82-гамма, показывали отрицательный результат в РА и PCK-S й невысокие титры антител в РСК с R-антигеном. Увеличилось количество антител в PCK-S у морских свинок, привитых живой вакциной из штамма 82, до титра 18,3 ±10,9, одновременно с уменьшением показателей РСК с R-антигеном до 53,3 ± 13,3 (в 2,5 раза). Снизились показания РСК с S и R-антигеном у животных, вакцинированных культурами 86-гамма.

После заражения все контрольные интактные животные показывали генерализованную форму инфицирования. У них был высоким индекс веса селезёнки (ИВС), равный 3,13 ± 0,57, и индекс инфицированности (ИИ) - 91,7 ± 3,1. Все они реагировали положительно в РА и РСК в титрах 16,0 ± 2,6 и 27,5 ± 11,7, соответственно. От 6-ти морских свинок выделили 55 культур бруцелл

заражающего п^гамма. В группе морских; свинок, привитых живой вакциной из штамма 82, количество иммунных животных составило 83,3 %. Из 6-ти морских свинок 5 противостояли заражению. У 2-х из них иммунитет был стерильным, у 3-х - нестерильным. От 6-ти животных выделили 9 культур вакцинного штамма и 7 -вирулентного. Среди морских свинок, привитых культурами 82-гамма, наиболее высокие иммуногенные свойства показала культура 82-гамма 30 кГр. В этой группе из 6 голов заразилась всего одна морская свинка, лишь она показывала положительную РСК в титре 1:80, иммунные животные в РА и РСК реагировали отрицательно. У других свинок этой группы, привитых культурами 82-гамма 5, 82-гамма 10 и 82-гамма 20, иммунитет был слабый, равный соответственно 14,3; 16,7 и 25,0 %. У морских свинок, привитых культурами 86-гамма, наиболее высокий процент иммунных животных (60,0) был в группах, привитых культурами 86-гамма 10 и 30.

Во втором эксперименте морские свинки, привитые вакциной из штамма 19, через 1 месяц после иммунизации положительно реагировали в РА и РСК -S и РСК с R-антигеном. Через 2 месяца показатели серологических реакций в этой группе животных были отрицательными. У морских свинок, привитых живой вакциной из штамма Revi, были положительными РА с единым антигеном и РСК с R-ашигеном. Через 2 месяца положительных результатов серологического исследования в этой группе получено не было. В той же закономерности проявлялись серологические реакции и у свинок, привитых живой вакциной из штамма 82, с той лишь разницей, что у них были высокими титры антител в РСК с R-ангигеном (66,7 ± 13,3), которые сохранились высокими и через 2 месяца (46,7 dt 17,7). Морские свинки, привитые гамма-инактивированной культурой бруцелл из штамма 82, не давали положительных результатов РА и РСК с S антигеном через 1 и 2 месяца. У них в эти сроки была положительной лишь РСК с R-антигеном.

Сочетанное введение гамма-инакпшированныой культуры бруцелл штамма 82 с ларифаном спровоцировало положительные результаты РА через 1 месяц в титре антител 20,0±0,0. Еще более высокие показатели РА были в группе привитых сочетано 82-гамма + тиосульфат натрия. При исследовании животных этих групп через 2 месяца РА и РСК были отрицательными. В группе морских свинок, привитых гамма-инактивированными культурами бруцелл штамма Revi w вакциной с ларифаном и тиосульфатом натрия, положительна результаты РА и РСК были не у всех животных через 1 месяц после вакцинации и в невысоких

титрах антител, а через 2 месяца все животные реагировали по этим реакциям отрицательно. У животных, которым вводили гамма-инактивированную культуру бруцелл из штамма 86 и эту вакцину с иммуномодуляторами, через 1 месяц была у всех положительная РА в сравнительно высоких титрах антител. У отдельных морских свинок отмечались положительные результаты РСК с обоими антигенами. Спустя 2 месяца после иммунизации РА и РСК были отрицательными.

Результаты изучения иммуногенных свойств живых и гамма-инаюшвированных противобруцеллезных вакцин отражены в таблице 1.

Из таблицы 1 видно, что все контрольные интактные животные заразились. У них отмечался высокий индекс веса селезенки (ИВС), положительные РА и РСК, и высокие показатели индекса инфицированности (ИИ). Все живые вакцины (19, Rev 1, 82) показали высокую иммуногенносгь (100%). Из радиовакцин наиболее иммуногенную эффективность показала гамма-инакггивированная вакцина из штамма 82 (50%). Влияние иммуномодуляторов на иммуногенные свойства биопрепаратов было различным. Например, ларифан повышал иммуногенность вакцины шт. 82-гамма и снижал ее у Rev 1-гамма и 86-гамма вакцин. Тиосульфат натрия повышал защитные свойства вакцины 82-гамма и не влиял на таковые у Revi -гамма и 86-гамма вакцин.

Таблица 1 — Иммуногенные свойства живых и гамма-инактивированных противобруцеллезных вакцин на морских свинках.

Ксш-во жяв-х Серологическое исследование (титры антител М ± т) Бактериологическое исследование Заразилось окив-х) Иммунных (ЖИЙгХ) "

Вакцина, иммуномодулатор иве (М±т) единый бруцеллезный антиген R-антиген РСК ; выделено культур 3 •а a * ! нестерил. «

РА(МЕ) РСК ват вирул. ИИ(%) я п ■ •а . i я 3 •а з « 3 - £

19 живал 7 1,72 ± 0,13 14,3*7,2 9,3 ±3,9 2-1:5; 2-сомн. 3-отр. 2 - 0,0 - - 5 2 7 100

Revi живая б 1,66 i 0,18 отр. 1-1:5; 1-сомн.; 4-отр. отр. - 0,0 _ - - - 6 - 6 100

82 живая 7 4,89 ± 0,31 отр. 1-1:5 6-отр. 42,8 ±0,4 21 - 0,0 - - - 7 7 100

82-гамма б 1,31 ±0,1 отр. 1-1:5,1-сомн. 4-отриц. 10,8 ±3,28 - 8 13,3 ± 6,7 2 1 3 3 - 3 50

82-гамма + ларифан 7 1,35 ±0,1 2-пол. 5-отр. 3-1:10; 4-<ггр. 5,7 ± 1,8 - 15 21,4 ±12,1 з 3 4 4 57,1

82-гамма + тиосульфат Na S 2,33 ± 0,52 30,0 ±21,1 41,3 ±26,0 4-1:5; 3-сомн. 1-отр. - 20 25,0 ±12,9 3 3 5 - 5 62,5

Revi-гамма 7 1,64 ± 0,16 17,1 ±11,9 23,6 ±10,6 3-нол.; 2-сомн. 2-отр. г 38 54,3 ± 14,8 5 1 6 1 - 1 14,3

Revi-гамма + ларифан 5 1,55 ± 0,12 16,0 ±16,0 32,0 ±32,0 32,0 ±4,9 -ё 22 44,0 ±14,4 3 2 5 - - - 0

Revl-гамма + тиосульфат Na 7 1,73 ± 0,19 31,4 ± 13,0 46,4 ±21,5 5,7 ±3,0 - 49 70,0 ±15,8 6 - б 1 - I 14,3

86-гамма 7 1,29 ± 0,16 11,4± 11,4 25,0 ±22,6 3-1:5; 3-сомн. 1-отр. - 21 30,0 ± 14,0 3 1 4 3 - 3 42,9

8б-гамма + ларифан 7 1,87 ± 0,32 48,6 ±23,1 50,0 ±22,6 2-пол.; 5-отр. - 41 58,6 ±14,4 5 1 6 ,1 - 1 14,3

86-гамма + тиосульфат Na 7 1,91 ± 0,13 17,1 ±11,9 30,7 ±22,3 5,0 ±1,5 - 25 35,7± 16,2 3 Г 4 .3 - 3 42,9

Контроль шт. 54 7 3,12± 0,41 77,1 ±24,1 30,0 ±13,3 н/и - 53 75,7 ±12,7 ' 6 1 ; 7 - - 0,0

3.4 Сравнительные показатели иммунологической эффективности живых и гамма-инактивированных противобруцеллезных вакцин на овцах

В первом опыте результаты термометрии овец показали, что после введения гамма-инактивированных культур бруцелл только в группе животных, привитых культурой штамма 86-гамма, температура в первые двое суток поднималась на 1,5°С. Наиболее высокое повышение температуры тела было в группе овец, привитых культурой штамма 82, - до 41,2 °С на 2-е сутки после вакцинации. У этих животных и на 3-й сутки температура не приходила в норму. Несколько ниже были показатели температуры у овец, привитых живой вакциной из штамма 19, но у них так же, как и в предыдущей ipynne, она была повышенной и на 3-й сутки.

Через 15 суток после иммунизации у животных были высокие титры антител в РА. Наибольшее количество их обнаруживали у овец, привитых вакциной из штамма 19 (1000 МЕ). Практически в 2 раза были ниже татры антител в группах привитых культурой 86-гамма. Самыми низкими были титры у животных, привитых культурами из штамма 82-гамма. Показания РСК в этот же срок исследований были низкими во всех группах овец. В РСК с R-антигеном все животные реагировали примерно одинаково - от 1:20 до 1:30. В последующие сроки количество антител быстро снижалось и к моменту заражения, через 4 месяца после иммунизации, РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном показывали отрицательный результат у всех животных. РСК с R-антигеном была положительной в низких титрах (1:5-1 ¡10) у отдельных животных.

При изучении иммуногенных свойств было установлено, что живые вакцины из штаммов 19 и 82 в этом плане показали наиболее высокие показатели - в 50% случаев. На таком же уровне была невосприимчивость к заражению в группе животных, привитых культурой 86-гамма 30. В котрольной группе из 4-х овец одна не заразилась. Все заразившиеся животные положительно реагировали на бруцеллез в серологических реакциях. ' •

Результаты второго эксперимента на овцах представлены в таблицах 2 и 3. Из таблицы 2 видно, что через 15 суток после иммунизации все животные реагировали положительно в РА, РСК и РСК с R-антигеном. Наиболее низкие тигры антител в РА и PCK-S (100±0,0 и 8,3±0,6, соответственно) были в группе овец, привитых живой вакциной из штамма 82. Через 1 месяц овцы, привитые этой вакциной, в РА и PCK-S реагировали отрицательно, а РСК с R-антигеном сохранялась положительной в течение 3-х месяцев.

Таблица 2 — Серологическое исследование на бруцеллёз овец, привитых живой вакциной из штамма 82 и радиовакцинами из штаммов 82 и 86, в различные сроки после иммунизации (титры антител М ± т, п=3).

С у гг: с; V Результаты серологического исследования через:

15 суток 1 месяц 2 месяца 3 месяца 4 месяца

Вакцина из штамма ~ ед. бруц. антиген ед. бруд. антиген Я- ед. бруц. антиген Я- ед. бруц. антиген Я- ея-бруц. антиген я-

РА (МЕ) РСК Я-антиген РСК РА (МЕ) РСК антя-ген РСК РА(МЕ) РСК антиген РСК РА (МБ) РСК антиген РСК РА (МЕ) РСК; анти -ген РСК

82 живая 100 ±0,0 8,3 ±0,6 20.0 ±0,0 отр. отр. 20,0 ±0,0 отр. отр. 6,7 ±1,7 отр. отр. 5,0 ±0,0 отр. отр. отр.

82- гамма 400,0 ±200,0 21,7 ±10,1 23,3 ±8,8 100,0 ±50,0 2-1:5 1- сомн. 18,3 ±10,9 охр. 5,0 ±0,0 10,0 ±5,0 отр. отр. 6,7 ±1,7 отр. отр. охр.

86-гамма 266,7 ±66,7 26,7 ±6,7 2-1:5 1- сомн. 58,3± 22,1 2-1:5 1-сомн. отр. 1-50; 1-сомн. 1-огр. 2-1:5 1-сомн. отр. 2-сомн.; 1 - отр. отр. одз. отр. отр. отр.

Таблица 3 - Иммуногенные свойства живой вакцины из штамма 82 и радиовакцин из штаммов 82 и 86 на овцах (п=3)._ "' с_'■

Серологическое исследование (тигры антител М ± ш) Бактериология, исследование Заразилось (жив-х) ' "-Иммунных . (жив-х)

Вакцина из единый бруцеллезный антиген Я- выдел, культур Я § 7 8,3:; 3 нестерйл.

штамма РБП РА (МЕ) РСК ген РСК вакц. вирул. ИИ •8 Я м ■а £ 8 %

82 живая отр. отр. 8,3± 1.7 13,3± 3,3 0 3 - 3 100

82-гамма 2-пол. 1-отр. 1-25 2- отр. 30,0 ±10,0 13,3 ± 3,3 - 2 2,8 1 - - 1 2 2 66,7

'86-/ гамма пол. отр. 33,3± 6,7 8,3 ± 1,7 - 4 5,6 1 1 - 2 1 - 1 33,3

Контроль пол. 1-100 2-отр. 36,7 ±21,9 5,0 ± 2,9 - 6 8,3 2 1 - 3 - - - 0

Животные, привитые радиовакциной из штамма 82, перестали реагировать положительно в РА через 2 месяца, РСК - через 3 месяца. РСК с Я-антигеном также сохранялась положительной в течение 3-х месяцев. У овец, иммунизированных радиовакциной из штамма 86, РА и РСК с единым бруцеллёзным антигеном были отрицательными через 3 месяца

Результаты изучения иммуногенных свойств вакцин показали (таблица 3), что наибольшей иммуногенностью обладала живая вакцина из штамма 82 (100%). Радиовакцина из штамма 82 оказалась менее иммуногенной (66,7%). Иммунных животных после применения радиовакцины из штамма 86 составляло 33,3%. Контрольные овцы при этом все заразились.

В третьем эксперименте овцы, привитые 82-гамма-инактивированной вакциной, с единым бруцеллезным антигеном в РА реагировали положительно только через 15 суток, через 1 и 2 месяца РА была отрицательной. РСК была отрицательной во все сроки исследований. В РСК с Л-антигеном реакции были положительными в невысоких титрах антител - 7,5 ± 4,8 Через 15 суток, 5,0 ± 2,9 через 1 месяц, а через 2 месяца положительно реагировала только одна овца в тигре 1:5. У овец, привитых живой вакциной из штамма 82, РА'отмечалась в высоких титрах антител через 15 суток, равных 440,0 ± 188,4. Затем титр антител снижался и составил через 1 месяц 95,0 ± 30,1, а через 2 месяца - 25,0 ± 11,2. РСК у этих животных, как и в 1-й группе, была отрицательной во все сроки исследований. РСК

с Я-антигеном показывала положительный результат в невысоких титрах антител, равных через 15 суток 10,0 ± 4,5, через 1 месяц 11,0 ± 7,5, через 2 месяца - 20,0 ± 7,1. Иными были показатели серологических реакций у овец, привитых вакциной из штамма 19. У них были высокими титры антител в РА, которые к 2 месяцам снижались от 800,0 ± 0,0 до 83,3 ± 16,7. Низкими, но положительными во все сроки исследований, были показатели РСК. А РСК с Я-антигеном была положительной в низком титре антител, равном 8,3 ± 6,0, только через 15 суток.

Через 3 месяца после иммунизации овцы, привитые радиовакциной из штамма 82 и живой вакциной из этого штамма, реагировали отрицательно в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном. В РСК с Я-антигеном они реагировали положительно в титрах соответственно 7,5 ± 4,3 и 60,0 ± 50,0, что свидетельствует о более активной иммунологической перестройке организма животных, привитых живой вакциной из штамма 82. Овцы, иммунизированные живой вакциной из штамма 19, в этот срок в РА реагировали в титре 50 МЕ и РСК 1:5, а РСК с Я-антигеном показывала лишь сомнительный результат.

Спустя 2,4, 6 и 9,5 месяцев после ревакцинации животные, привитые радио- и нативной вакциной из штамма 82, показывали отрицательные серологические показатели с единым бруцеллезным антигеном, а в РСК с 11-антигеном реагировали через 4 и 6 месяцев после ревакцинации. В эта сроки после ревакцинации вакциной из пггамма 19 овцы сохраняли положительные показатели серологических реакций.

Таблица 4 - Иммуногенные свойства живых вакцин из штаммов В.аЬогШэ 19, 82 и 82-гамма при ревакцинации овец.__

X о Серологич. иссл. (тигры М±т) антител Бактериол. иссл. Заразилось (жив-х) Иммунных (%)

Группа жив-х и 8 ед. бруц. антиген я- анти ген РСК выделено культур Я ¡а в 3 о я а 1

Л РШ РА (МЕ) РСК I и 1 ИИ 1 ■а § %

82-гамма +82-гамма 4 пол. 75,041 4,4 27,5± 7,5 3-отр 1-1:10 - 5 5Д 1 1 2 2 2 50

82+82 живая 4 3- огр. 1-пол. 168,8± 86,2 25,0± 5,0 6,3 ±2,4 - 1 1 - 1 1 3 3 75

19+19 живая 3 пол. 200,0± 115,6 70,0± 45,9 охр. - - 0 - - - 3 3 100

В-теШегт 16-М 3 пол. 106,74 26,7 1-отр 2-1:10 отр. - 21 43,8 3 - - - - 0

Результаты изучения напряженности иммунитета у овец, зараженных через 9,5 месяцев после ревакцинации отражены в таблице 4.

Данные таблицы свидетельствуют о том, что все контрольные животные заразились генерализованной формой инфекции. Наиболее выраженный иммунный ответ показали овцы, привитые живыми вакцинами из штаммов 19 и 82 (100 и 75%). При этом от овцы, привитой живой вакциной из штамма 82, была выделена всего одна культура заражающего штамма. Более слабый иммунитет, по сравнению "с живыми вакцинами, создавала радиовакцина из штамма 82 (50%).

4 ВЫВОДЫ

1. Впервые в экспериментальных условиях установлена высокая иммунологическая эффективность живой вакцины из слабоагглютинагенного штамма B.abortus 82 на овцах.

2. Впервые получены и изучены гамма - инахтивированные вакцины из вакцинных штаммов B.abortus 82, B.melitensis Rev 1 и вирулентного штамма B.suis 86. В опытах на морских свинках и овцах наиболее высокую иммунологическую эффективность показывает гамма - инактивированная вакцина из штамма B.abortus 82.

3. Вакцинные пггаммы B.abortus 19, B.melitensis Rev 1 и вирулентный штамм B.suis 86 в S- форме, штамм B.abortus 82 - в SR-форме по культуралыго-морфологическим, биохимическим и антигенным свойствам имеют свой отличительные признаки.

4. При получении убитых вакцин инактивация бруцелл штаммов B.abortus 82 и B.melitensis Rev 1, а также вирулентного штамма B.suis 86 гамма-лучами отмечается в дозах 5, 10, 25 и 30 кГр. На морских свинках наиболее высокая иммунологическая активность имеет место у, культур, подвергнутых гамма -облучению в дозе 30 кГр. j

5. На морских свинках живая вакцина из; слабоагглютиногенного штамма B.abortus 82 показывает высокую и равную иммунологическую эффективность с живыми вакцинами из штаммов B.abortus 19 и B.melitensis Rev 1, обладающих выраженными агглютиногенными свойствами. При применение вакцины из штамма 82 нестерильный иммунитет отмечается в б'ой£Йёй степени, чем при введении вакцин из штаммов 19 и Rev 1.

6. У овец, первично привитых живой вакциной из штамма 82 и зараженных культурой вирулентного штамма B.melitensis через 4 месяца после иммунизации,

> установлена 100%-ная иммуногенность. Из радиовакцин наиболее высокую иммуногенную эффективность показывает радиовакцина из штамма 82 - 66,7 %.

7. При заражении культурой вирулентного штамма B.melitensis через один год после ревакцинации наиболее выраженный иммунный ответ показывают овцы, привитые живыми вакцинами из штаммов 19 и 82 (100 и , 75% соответственно). При ревакцинации гамма - инактивированной вакциной из штамма 82, по сравнению с живыми вакцинами, у овец отмечается более слабый иммунитет (50%). ,

8. Преимущество живой и гамма — инактивированной вакцин из штамма 82 заключается в том, что они обладают слабыми агглютиногенными свойствами, после их применения иммунизированные животные значительно быстрее утрачивают поствакцинальные положительные показатели РА и РСК, по сравнению с вакцинами из агглютиногенных штаммов 19 и Rev 1. Овцы, после первичной иммунизации и ревакцинации указанными вакцинами из штамма 82, отрицательно реагируют в РА и РСК через 2-3 месяца.

9. Морские свинки и овцы после иммунизации живой и гамма -инактивированной вакцинами из штамма B.abortus 82 отрицательно реагируя в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном, более длительное время сохраняют положительные показатели РСК с R-антигеном ВНИВИ, что указывает на наличие в организме этих животных достаточно высокой поствакцинальной

■У4" •' " ■

иммунобиологической перестройки.

5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основании проведенных исследований разработаны:

1. Рекомендации по иммунизации овец против бруцеллеза живой вакциной из штамма В .abortus 82, утвержденные директором ФГУ «ФЦГРБ-ВНИВИ;

2. Схема постановки экспериментов на лабораторных животных и овцах разного возраста по установлению иммунологической эффективности гамма-инактивированной вакцины из штамма В. abortus 82 в том числе с различными иммуно модуляторами.

6 СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ 1. Косарев, М.А. Состояние и перспективы специфической профилактики бруцедаё^а. редкого рогатого скота в Российской Федерации / K.M. Салмаков, A.M. Фомин, Р.Х. Юсупов, М.А. Косарев, A.B. Иванов // Матер. Всероссийской

науч. конф. «Актуальные проблемы здоровья скота завозимого в Россию в рамках нац. проекта «Развитие АПК»». - Казань: ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ». - 2007. - С. 112-116. f

2. Косарев, М.А-Изучение антигенных и иммуногенных свойств гамма-инактивированных культур бруцелл штаммов В. abortus 82 и 86 на овцах / М.А. Косарев, K.M. Салмаков II Матер, науч. конф. молодых ученых и специалистов «Достижения молодых ученых - в производство», лосвящ. 100-летию со дня

- рождения профессора Х.Х. Абдуллина. - Казань. - 2008. - С. 153-158.

3.Косарев, М.А. Специфическая профилактика бруцеллёза мелкого рогатого скота в Российской Федерации / A.B. Иванов, K.M. Салмаков, А.М. Фомин, М.А. Косарев // Матер. Международного Рабочего Совещания «Бруцеллез - пограничная инфекция животных и человека, требующая общих усилий разных стран». - Серпухов, Московская область. 2-4 июня 2008. - С. 77-78.

4. Косарев, М.А. Изыскание наиболее эффективной живой и гамма инактивированной противобруцеллезной вакцины для мелкого рогатого скота I A.B. Иванов, Р.Х. Юсупов, K.M. Салмаков, А.Н. Чернов, М.А. Косарев, Г.М. Сафина // Ветеринарный врач. - Казань, 2009. - № 4. - С. 19-22.

5. Косарев, М.А. Антигенные и иммуногенные свойства гамма-инактивированных культур штаммов B.abortus 82 и 86 на морских свинках / A.B. Иванов, М.А. Косарев, В.П. Шашкаров // Ветеринарный врач. - Казань, 2010. - № 1.-С. 19-22.

6. Косарев, М.А. Результаты изыскания более современных живых и инактивированных вакцин против бруцеллёза крупного и мелкого рогатого скота / K.M. Салмаков, А.М. Фомин, Г.М. Сафина, A.B. Салмакова, М.А. Косарев // Ветеринарный врач. - Казань, 2010. - № 5. - С. 41-44.

7. Косарев, М.А Изучение антигенных и иммуногенных свойств инактивированных радиовакцин из штаммов В. abortus 82 и 86 и живой вакцины из штамма 82 на овцах / М.А. Косарев, А.М. Фомин, A.B. Салмакова, Г.М. Сафина // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - Казань. - 2010. -т. 201. - С. 51-56.

8. Косарев, М.А. Изучение влияния пассажа и адъювантов на иммуногенные свойства культур диссоциированных вакцинных штаммов бруцелл / A.B. Салмакова, А.М. Фомин, Г.М. Сафина, М.А. Косарев II Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. -Казань. - 2010. -т. 201. - С. 100-105.

9. Косарев, М.А. Установление минимальной заражающей дозы культур бруцелл штаммов В. melitensis 16 М, А-89 и 102-Н на морских свинках/ K.M.

Салманов, A.M. Фомин, М.А. Косарев, Г.М. Сафйна, A.B. Салмакова // Матер. Международной научно-практич. конф. «Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность России», посвящ. 50-летйю Федерального центра токсикологической и радиационной безопасности животных (ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»). - Казань: ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ». - 2010. - С. 465467. ;

Подписано к печати 20 О/. //. Заказ 8 Тираж ЮО Бумага офсетная

Формат 60x84/16 Усл. печ.л. f ö Печать RISO

Цент информационных технологий КТАВМ 4200074, Казань, Сибирский тракт, 35

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Косарев, Максим Аркадьевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Номенклатура и классификация бруцелл.

1.2 Иммунитет при бруцеллезе.

1.3 Специфическая профилактика и меры борьбы с бруцеллезом мелкого рогатого скота.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Материалы и методы исследований.

2.2 Результаты собственных исследований.

2.2.1 Культурально-морфологические, биохимические и агглютинабельные свойства вакцинных штаммов B.abortus 19, 82 и B.melitensis Rev 1 и вирулентного штамма В.suis 86.

2.2.2 Получение гамма-инактивированных вакцин из штаммов B.abortus 82, B.melitensis Rev 1 и В. suis 86.

2.2.3 Изучение антигенных и иммуногенных свойств живых и гамма-инактивированных противобруцеллезных вакцин на морских свинках.

2.2.4 Сравнительные показатели иммунологической эффективности живых и гамма-инактивированных противобруцеллезных вакцин на овцах.

3 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Иммунологическая эффективность живых и гамма-инактивированных противобруцеллезных вакцин для мелкого рогатого скота"

Актуальность темы. Бруцеллез овец и коз, несмотря на достигнутые успехи в его ликвидации в РФ,, все еще представляет серьезную эпизоотологическую и, следовательно, эпидемиологическую проблему. В борьбе с бруцеллезом мелкого рогатого скота использовали различные вакцины и схемы их применения. В 1955-1960 гг. практически в масштабе всей страны стали широко использовать живую вакцину из агглютиногенного штамма В. abortus 19. В последующие годы широкое использование этой вакцины продолжалось.

В период с 1980 по 1986 год в порядке широкого производственного опыта, а затем в масштабе всей страны для иммунизации овец стали использовать вакцину из штамма B.melitensis Rev 1 только на ярках текущего года рождения. В 1986 и 1988 годах была официально регламентирована реиммунизация этой вакциной овцематок с интервалом в два года.

В связи с ухудшением эпизоотической обстановки (1981—1989 гг.) с 1990 года вновь широко начали использовать вакцину из штамма 19. Однако с начала 90-х. годов начали накапливаться тенденции, которые негативно влияют на эффективность проводимых противобруцеллезных мероприятий. Поэтому, чтобы повысить противоэпизоотическую эффективность специальных противобруцеллезных мероприятий, некоторые исследователи рекомендуют вакцину из штамма 19 применять в уменьшенной дозе конъюнктивально ежегодно на всем поголовье овец и коз без предварительного их исследования на бруцеллез (И.А. Косилов и др., 1999; П.К. Аракелян и др., 2010).

Все изложенное указывает, что существующие меры борьбы с бруцеллезом мелкого рогатого скота с применением живых вакцин из штаммов В.abortus 19 и B.melitensis Rev . 1 требуют своего принципиального изменения и совершенствования. В нашей стране и за рубежом продолжаются исследования по изысканию более совершенных вакцин и способов их применения. При этом исследования проводятся в разных направлениях. Изыскиваются живые, химические и инактивированные корпускулярные бруцеллезные вакцины, а также различные адъюванты и полимерные носители (A.B. Иванов и др., 2006, 2008, 2009, 2010; K.M. Салмаков и др., 2007, 2010; В.Г.Ощепков и др., 2009; О.Д.Скляров и др.,2005; A.M. Фомин и др., 2001; A.A. Денисов и др., 2006).

Цель и задачи исследований. Цель работы - провести сравнительное изучение иммунологической эффективности живых и гамма-инактивированных противобруцеллезных вакцин для мелкого рогатого скота.

Для достижения указанной цели решались следующие задачи:

1. Изучить в сравнительном аспекте культурально-морфологические, биохимические и аглютинабельные свойства культур вакцинных штаммов В.abortus 19;82; B.melitensis Rev 1 и вирулентного штамма В.suis 86;

2. Испытать влияние различных доз гамма—облучения на инактивацию взвесей культур штаммов B.abortus 82, B.melitensis Rev 1 и В.suis 86; провести контрольные исследования полученных убитых вакцин на стерильность и безвредность;

3. Изучить антигенные и иммуногенные свойства живых вакцин из штаммов B.abortus 19, 82 , B.melitensis Rev 1 и гамма-инактивированных вакцин из штаммов B.abortus 82, B.melitensis Rev 1 и В.suis 86 на морских свинках;

4. Установить иммуногенную активность гамма-инактивированных вакцин из штаммов B.abortus 82 и B.suis 86 в сравнении с живыми вакцинами из штаммов B.abortus 19 и 82 на овцах.

Научная, новизна. Впервые в сравнительном аспекте изучены вакцинные штаммы B.abortus 19 и 82, B.melitensis Rev 1 и вирулентный штамм B.suis 86. Указанные штаммы различаются по культурально-морфологическим, биохимическим и агглютинабельным свойствам, штамм 82 находится в SR-, остальные штаммы — в S-форме.

Проведены исследования по установлению влияния гамма-облучений на инактивацию взвесей культур штаммов B.abortus 82, B.melitensis Rev 1 и B.suis

86. Все дозы облучения (5-10-20-30 кГр) вызывали полную инактивацию бруцелл указанных штаммов.

В экспериментальных условиях изучены антигенные и иммуногенные свойства живых вакцин из штаммов B.abortus 19 и 82, B.melitensis Rev 1 и гамма-инактивированных вакцин из штаммов B.abortus 82, B.melitensis Rev 1 и В.suis 86 на морских свинках, а также живых вакцин из штаммов B.abortus 19 и 82 и гамма-инактивированных вакцин из штаммов B.abortus 82 и В.suis 86 на овцах.

Высокую иммунологическую эффективность показала живая вакцина из штамма B.abortus 82. При этом данная вакцина обладала слабыми агглютиногенными и практически равными иммуногенными свойствами с живыми вакцинами из высоко агглютиногенных штаммов 19 и Rev 1. Наиболее высокая иммуногенная активность установлена у инактивированных вакцин, подвергнутых гамма-облучению в дозе 30 кГр, и у аналогичной вакцины из штамма 82.

Практическая значимость работы. Живая вакцина из штамма B.abortus 82, обладая выраженными и практически равными иммуногенными свойствами с живыми вакцинами из высокоагглютиногенных штаммов В. abortus 19 и B.melitensis Rev 1, на первично привитых и ревакцинированных овцах показывает слабые агглютиногенные свойства. Поэтому, имея такое преимущество, живая вакцина из штамма B.abortus 82 вполне может применяться для специфической профилактики бруцеллеза мелкого рогатого скота.

Гамма-инактивированная вакцина из штамма B.abortus 82, обладающая слабыми агглютиногенными свойствами и в несколько меньшей степени иммуногенной активностью по сравнению с живой вакциной из этого штамма, также может иметь практическое значение, но для этого требуется ее доработка и дополнительные испытания на овцах, в том числе с применением различных иммуномодуляторов.

Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации представлены на научных сессиях Ученого совета ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» в виде ежегодных отчетов о НИР (2006-2010 гг.); научно-практических конференциях молодых ученых и специалистов ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (Казань, 2007, 2008); на Международном Рабочем Совещании «Бруцеллез -пограничная инфекция животных и человека, требующая общих усилий разных стран»» (Серпухов, Московская область, 2008); на международной научно-практической конференции «Биотехнология: токсилогическая, радиационная и биологическая безопасность России», посвященной 50-летию ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (Казань, 2010).

Публикации результатов исследований. По теме диссертационной работы опубликовано 9 научных статей, в том числе 5 - в изданиях, рецензируемых ВАК РФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Сравнительное изучение культурально-морфологических, биохимических и агглютинабельных свойств культур вакцинных штаммов B.abortus 19, 82, B.melitensis Rev 1 и вирулентного штамма Bisuis 86;

2. Влияние различных доз гамма-облучения на инактивацию взвесей культур штаммов B.abortus 82, B.melitensis Rev 1 и B.suis 86, контрольные исследования полученных убитых вакцин на стерильность и безвредность;

3. Антигенные и иммуногенные свойства живых вакцин из штаммов B.abortus 19, 82 и B.melitensis Rev 1 и гамма-инактивированных вакцин из штаммов B.abortus 82, B.melitensis Rev 1 и B.suis 86 на морских свинках;

4. Иммунологическая эффективность живых вакцин из штаммов B.abortus 19 и 82 в сравнении с гамма-инактивированными вакцинами из штаммов B.abortus 82 и B.suis 86 на овцах.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 117 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Косарев, Максим Аркадьевич

ВЫВОДЫ

1.Впервые в экспериментальных условиях установлена высокая иммунологическая эффективность живой вакцины из слабоагглютиногенного штамма В.abortus 82 на овцах.

2. Впервые получены и изучены гамма-инактивированные вакцины из вакцинных штаммов В.abortus 82, B.melitensis Rev 1 и вирулентного штамма. В.suis 86. В опытах на морских свинках и овцах наиболее высокую иммунологическую эффективность показывает гамма-инактивированная вакцина из штамма В.abortus 82.

3. Вакцинные штаммы В.abortus 19, B.melitensis Rev 1 и вирулентный штамм B.suis 86 в S-форме, штамм В.abortus 82 - в SR-форме по культурально—морфологическим, биохимическим и антигенным свойствам имеют свои отличительные признаки.

4. При получении убитых вакцин инактивация бруцелл штаммов В.abortus 82 и B.melitensis Rev 1, а также вирулентного штамма B.suis 86 гамма-лучами отмечается в дозах 5, 10, 25 и 30 кГр. На морских свинках наиболее высокая иммунологическая активность имеет место у культур, подвергнутых гамма-облучению в дозе 30 кГр.

5. На морских свинках живая вакцина из слабоагглютиногенного штамма B.abortus 82 показывает высокую и равную иммунологическую эффективность с живыми вакцинами из штаммов B.abortus 19 и B.melitensis Rev 1, обладающих выраженными агглютиногенными свойствами. При применении вакцины из штамма 82 нестерильный иммунитет отмечается в большей степени, чем при введении вакцин из штаммов 19 и Rev 1.

6. У овец, первично привитых живой вакциной из штамма 82 и зараженных культурой вирулентного штамма B.melitensis через 4 месяца после вакцинации, установлена 100%-ная иммуногенность. Из радиовакцин наиболее высокую иммуногенную эффективность показывает гамма-инактивированная вакцина из штамма 82 — 66,7 %.

7. При заражении культурой вирулентного штамма B.melitensis через один год после ревакцинации наиболее выраженный иммунный ответ показывают овцы, привитые живыми вакцинами из штаммов 19 и 82 (100 и 75% соответственно). При ревакцинации гамма-инактивированной вакциной из штамма 82, по сравнению с живыми вакцинами, у овец отмечается более слабый иммунитет (50%).

8. Преимущество живой и гамма-инактивированной вакцин из штамма 82 заключается в том, что они обладают слабыми агглютиногенными свойствами, после их применения иммунизированные животные значительно быстрее утрачивают поствакцинальные положительные показатели РА и РСК, по сравнению с вакцинами из агглютиногенных штаммов 19 и Rev 1. Овцы после первично иммунизированные и ревакцинированные указанными вакцинами из штамма 82, отрицательно реагируют в РА и РСК через 2-3 месяца.

9. Морские свинки и овцы после иммунизации живой и гамма-инактивированной вакцинами из штамма В.abortus 82, отрицательно реагируя в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном, более длительное время сохраняют положительные показатели РСК с R-антигеном ВНИВИ, что указывает на наличие в организме этих животных достаточно высокой поствакцинальной иммунобиологической перестройки.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основании проведенных исследований разработаны:

1. Рекомендации по иммунизации овец против бруцеллеза живой вакциной из штамма B.abortus 82, утвержденные директором ФГУ «ФЦТРБ—ВНИВИ;

2. Схема постановки экспериментов на лабораторных животных и овцах разного возраста по установлению иммунологической эффективности гамма-инактивированной вакцины из штамма В. abortus 82, в том числе с различными иммуномодуляторами.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Косарев, Максим Аркадьевич, Казань

1. Абиджанов, М.С. Применение противобруцеллезной вакцины из штамма «Невский 12» / М.С. Абиджанов // Бруцеллез и туберкулез с.-х. животных. М. - 1967. - С. 175-177.

2. Авилов, В.М. Борьба с бруцеллезом крупного рогатого скота с применением вакцины из штамма 82 / В.М.Авилов, K.M. Салмаков, A.A. Новицкий // Ветеринария. 2000. - №3. - С. 3-7.

3. Авилов, В.М. Бруцеллез животных и его специфическая профилактика / В.М. Авилов, В.В. Селиверстов, В.Ф. Пышнин, К.В. Шумилов, В.В. Калмыков // Ветеринария. 1997. - №4. - С. 3-13.

4. Авилов, В.М. Состояние и перспектива специфической профилактики бруцеллеза овец / В.М. Авилов, И.А. Косилов, П.К. Аракелян // Ветеринария. 1999. - №3. - С. 8-12.

5. Адамбеков, Д.А. Влияние иммунокоррекции Т—активином на течение экспериментального туберкулеза и противотуберкулезный иммунитет / Д.А. Адамбеков, В.И. Литвинов // Микробиол., эпидимиолог. и иммунология. 1994. -В.1.- 5. -С. 79-80.

6. Алимов, A.M. Молекулярная ДНК/ДНК гибридизация для идентификации возбудителей зоонозов / A.M. Алимов, Т.Х. Фаизов // Тез. докл. респ. науч.-произв. конф. «Актуальн. вопр. вет. и зоотехн.». Казань. -1992.-С. 7.

7. Альбертян, М.П. Иммунологическая, патоморфологическая оценка эффективности противобруцеллезных вакцин и совершен—ствование средств и методов специфической профилактики бруцеллеза животных // Автореф. дисс. . док. вет. наук. М., 1996. — 50с.

8. Альбертян, М.П. Стабильность свойств вакцинного штамма В. abortus 104—М при пассировании через организм нетелей (по данным патоморфологии) // Бюлл. ВНИИЭВ. 1987. - Вып.64. - С. 71-73.

9. Апалькин, В.А. Разработка нового поколения инактивированной вакцины для иммунизации новорожденных телят против бруцеллеза /В.А. Апалькин, A.B. Иванов, Р.Х.Юсупов// Ветеринарный врач. 2005. - №3. — С. 8-11.

10. Аракелян, П.К. Дифференциация больных и вакцинированных против бруцеллеза овец // Ветеринария. 1996. - №11. - С. 10-13.

11. Аракелян, П.К. Использование вакцины B.abortus 19 при бруцеллезе овец / П.К. Аракелян, Е.Б. Барабанова, А.Т. Рукин // Ветеринария. 1997. -№4.-С. 19-21.

12. Аракелян, П.К. Оптимизация методов применения вакцины из штамма 19 при бруцеллезе овец / П.К. Аракелян, Е.Б. Барабанова, А.Т. Рукин // Ветеринария. 1998. - №8. - С. 12-15.

13. Арзымбетов, Д.Е. Оптимизация дозы противобруцеллезных вакцин из штаммов В. abortus 19, 104-М и В. melitensis REV-1 для иммунизации коз: Автореф. дис. . канд. вет. наук. Алма-Ата. - 1990. - 24 с.

14. Асланян, Р.Г. Предварительные результаты исследования вакцины "абортокс" из штамма Br. abortus 45/20 на северных оленях / Р.Г. Асланян, С.Е. Лапшин // Магадан: Оленевод. 1986. - Вып. 38. - С. 30-31.

15. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин, A.A. Воробьев // Гос. изд. Мед. Литер. Л. -1962.

16. Баева, A.A. К изучению иммуногенности клеточных компонентов бруцелл трех видов в опытах на лабораторных животных / A.A. Баева // Тез. докл. III науч.-практ. конф. противочумн. учрежд. — Ставрополь, 1974. — Вып. И.-С. 149-159.

17. Баженов, Н.И. Опыт предохранительных прививок против бруцеллеза различными вакцинами / Н.И. Баженов // Тр. Воронеж. ВОС. — 1995.-Т. 4.-С. 81-87.

18. Бажин, М.А. Иммунное состояние и морфологические изменения у телят, привитых вакциной из штамма 82 / М.А. Бажин, Б.И. Кондауров //' Хронич. инфекцииvжив-x. Новосибирск. - 1989. - С. 10-16.

19. Бажин, М.А. Иммунологические реакции у телят из неблагополучного по бруцеллезу стада после иммунизации и экспериментальном заражении / М.А. Бажин, В.А. Мироненко // Сб. научн. работ ВНИИБТЖ. Омск. - 1989. - С. 56-62.

20. Базалей, Ф.К. Применение вакцин из штаммов В.abortus 19 и B.melitensis Rev 1 для профилактики бруцеллеза у овец / Ф.К. Базалей, К.П. Евстафиади, И.Ф. Таран, Б.П. Цыбин // Ветеринария. — 1985. №4. - С. 32.

21. Белобаб, В.И. Пути совершенствования диагностики и профилактики бруцеллеза у животных // Автореф. дис. . док. вет. наук. -Алма-Ата. 1998. - С. 52.

22. Белозерова, Г.А. Получение и испытание вакцины против бруцеллеза из штамма 82-ГТЧ: Дис. . док. вет. наук. Казань. - 1993. - С. 448.

23. Бельченко, В.Б. Эффективность иммунизации крупного рогатого скота в зависимости от кратности применения вакцины из, штамма 19 // Тр. КазНИВИ. 1966. - Т. 12. - С. 29-33.

24. Быков В.П. Противоэпизоотические мероприятия при инфекционном эпидидимите баранов // Ветеринария. — 1998. — №1. С. 12—14.

25. Боровик, Е.А. Иммунологическая реактивность овец при различных методах введения вакцины из штамма Brucella melitensis REV 1: Автореф. дисс. . канд. вет. наук. М., 1991. - 24с.

26. Брауде, Н.И. Роль клеточных и гуморальных факторов противобруцеллезного иммунитета в фагоцитозе: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. М., 1966. - 22с.

27. Бронников, B.C. Совершенствование противобруцеллезных мероприятий в Томской области / В.С.Бронников, Б.Ю. Кассал // Сб. науч. тр. ВАСХНИЛ. Сиб. отд-е, ИЭВС и ДВ. Новосибирск. - 1990. - С. 89-95.

28. Василевский, Н.М. Влияние ротивобруцеллезных вакцин на фагоцитарную реакцию у морских свинок / Н.М. Василевский, Н.З. Хазипов // Разработка средств и методов борьбы с бруцеллезом (Сб. науч. тр.). — Казань, 1984.-С. 30-37.

29. Вершилова, П.А. Бруцеллез: Медгиз. Москва. - 1961. - С. 435.

30. Вершилова, П.А. Патогенез и иммунология бруцеллеза / П.А. Вершилова, М.И. Чернышева, Э.Н. Князева // Москва. Медицина. — 1974. — С. 245.

31. Галактионов, В.Г. Зависимость функциональной активности "иммунных" макрофагов от Т-клеток/ В.Г. Галактионов, Д.В. Скатов, Р.Н. Василенко // ЖМЭИ. 1991. - №4. - С.61-63.

32. Танеева, Г.М. Морфологические аспекты коррекции Т— и В— активинами иммунодефицитных состояний телок, иммунизированных вакциной из штамма 82 // Всерос. науч. конф. «Иммунодефициты с.-х. животных». Тез. докл. - М., 1994. - С. 14-21.

33. Голубинский, Е.П. Морфологическая характеристика глобулин-продукции при вакцинальном процессе, вызванном туляремийной и бруцеллезной вакцинами / Е.П. Голубинский, И.И. Осипенко, Ю.В. Солодун //ЖМЭИ. 1991.-№3.-С. 65-67.

34. Гринин, A.C. Скрытое бруцеллоносительство у скота, привитого вакциной из штамма 19 // Ветеринария. — 1964. №10. - С. 25-26.

35. Гринин, A.C. Экспериментальное изучение иммунитета у коров после прививки вакцины из штамма 19 // Сб. науч. тр. Омск. - 1964. - Т.22.- Вып.2. С. 69 - 73

36. Давыдов, Н.И. К изучению бруцеллеза у северных оленей // Ветеринария. 1961. - №5. - С. 48-54.

37. Дарданов, Б.Э. Оптимизация специальных противобруцеллезных мероприятий в условиях рыночных отношений // Автореф. дис. . канд. вет. наук.-М.- 1998.-22 с.

38. Дегтяренко, Л.В. Некоторые морфологические и антигенные свойства R-форм бруцелл и иерсиний // Эпизоот., диагн. и меры борьбы с инф. болезнями. Новосибирск. - 1986. - С. 135-142.

39. Джупина, С.И. Контроль эпизоотического процесса. Новосибирск.- 1994.-С. 164.

40. Джупина, С.И. Мониторинг эпизоотической ситуации бруцеллеза в условиях превентивного применения вакцины из штамма 82 наоздоровленных фермах // Диагностика инфекц. болезней животных. -Новосибирск, 1993. С. 3-12.

41. Джупина, С.И. Опыт оздоровления крупного рогатого скота от бруцеллеза // Ветеринария. 1997. - №10. - С.6-11.

42. Димов, С.К. Теория и практика управления эпизоотическим процессом // Автореф. дис. . док. вет. наук. Новосибирск. — 1993. — С. 45.

43. Димова, A.C. Оценка технологичности различных противо-бруцеллезных вакцин и схема их применения на крупном и мелком рогатом скоте // Дис. . .канд. вет наук. Новосибирск. - 2003. - С. 133.

44. Драновская, Е.А. Биологические свойства бруцелл и получение диагностического антигена // Автореф. дис. . док. биол. наук. М. — 1976. — С. 35.

45. Драновская, Е.А. Изучение синтетических полимеров и качество стимуляторов и пролонгаторов иммунного действия бруцеллезного протективного антигена / Е.А. Драновская, П.Е. Игнатов // ЖМЭИ. 1982. -№3. - С. 69-73.

46. Желудков, М.М. Антигенемия в динамике инфекционного и вакцинного процессов при бруцеллезе / М.М. Желудков, М.И. Чернышева, И.П. Павлова, Н.С. Уинова // ЖМЭИ. 1992. - №7(8). - С. 71-72.

47. Жованик, П.Н. Изучение иммунитета против бруцеллеза без поствакцинальной серопозитивности/ П.Н. Жованик, Н.И. Ерж // Иммунитет с/х животных. -М., 1973.-С. 135-137.

48. Жунушов, А.Т. Инфекционный эпидидимит баранов / А.Т. Жунушов, Ж.М: Дадыбаев, В.И Ким // Ветеринария. 1998. - №12. - С.11-12.

49. Жунушов, А.Т. Эпизоотологическая и экономическая эффективность противобруцеллезных мероприятий / А.Т. Жунушов, В.И. Ким // Ветеринария. 1991. - №2. - С. 35-37.

50. Здродовский, П.Ф. Современные данные об образовании защитных антител, их регуляции и неспецифической стимуляции: Микробиология. —1964.-№5.-С. 6.

51. Иванов, A.A. Сравнительная характеристика противоэпизоотической эффективности некоторых противобруцеллезных вакцин в овцеводческих хозяйствах: Автореф. дисс. . канд. вет. наук. — Омск, 1996.-24 с.

52. Иванов, A.A. Эффективность различных методов иммунизации овец вакциной из штамма Blmelitensis РЕВ-1 // Сб. науч. тр. ВНИИБТЖ. — Омск, 1991. — С.69-75.

53. Иванов, A.B. Антигенные и имуногенные сваойства у— инактивированных культур штаммов B.abortus 82 и 86 на морских свинках / A.B. Иванов; М.А. Косарев, В.П. Шашкаров // Ветеринарный врач. Казань, 2010: -№ 1.- С. 19-22.

54. Иванов, A.B. Изыскание и результаты применения новых препаратов для специфической профилактики бруцеллёза крупного рогатого скота / А.В.Иванов, K.M. Салмаков, A.M. Фомин, Э.М. Плотникова // Ветеринарный врач. 2006. - № 1. - С. 14-18.

55. Иванов, A.B. Изыскание наиболее эффективной живой и гамма инактивированной противобруцеллезной вакцины для мелкого рогатого скота / A.B. Иванов, Р.Х. Юсупов, K.M. Салмаков, А.Н. Чернов, М.А.

56. Косарев, Г.М. Сафина // Ветеринарный врач. Казань, 2009. - № 4. — С. 1922.

57. Иванов, A.B. Иммунобиологические свойства вакцинных штаммов B.abortus / A.B. Иванов, K.M. Салмаков, A.M. Фомин, Э.М. Плотникова, A.B. Салмакова // Ветеринария. 2009. - №3. - С. 25-27.

58. Иванов, A.B. Состояние и перспективы специфической профилактики бруцеллеза мелкого рогатого скота в Российской Федерации/ A.B. Иванов, Р.Х. Юсупов, K.M. Салмаков, A.M. Фомин // Ветеринарный врач. — 2007. —Спецвыпуск. С. 16-18.

59. Игнатов, П.Е. Изучение активности иммуномодуляторов / П.Е. Игнатов, Н.И.Блинов, Ю.Э. Кирш, М.И. Искандаров // Ветеринария. 1983. — №9.-С. 30-31.

60. Игнатов, П.Е. Изыскания протективных антигенов против инфекции, вызванной Br. Ovis // Автореф. дис. . канд. вет. наук. — М. — 1981. С. 26.

61. Игнатов, П.Е. Обоснование разработки иммуноактивных препаратов для лечения и профилактики инфекционных болезней // Автореф. дис. . док. биол. наук. С.-Пб. — 1994. — С. 31.

62. Игнатьева, O.A. Изучение иммунобиологических изменений белковых фракций в сыворотке крови морских свинок при заражении культурой бруцелл штамма 19 / O.A. Игнатьев, Г.Г. Нуриев // Ученые записки Каз. вет. ин-та 1967. - №90. - С. 107-109.

63. Искаков, Р.Ш. Двухэтапный способ применения вакцины из штамма Бруцелла абортус 82 с целью предотвращения ее абортогенных свойств. Новосибирск, ИЭВСиДВ. - 1989. - 17с.

64. Исхаков, О. 3. Система мер борьбы с бруцеллёзом животных в РСФСР и её эффективность / О. 3. Исхаков // Тезисы докл. 4-й Всесоюзной конференции по эпизоотологии, Новосибирск, 24-26 сент. 1991 г. — Новосибирск. 1991. - С. 17-18.

65. Какоулин, Т.Е. Бруцеллез овец в Иркутской области и испытание новых противобруцеллезных вакцин в экспериментальных и производственных условиях: Автореф. дисс. . канд. вет. наук. Улан-Удэ, 1975.-28с.

66. Калмыков, В.В. Профилактическая эффективность иммунизации крупного рогатого скота адъювант—вакциной из штамма В abortus KB 17/100 / B.B. Калмыков, А.Н. Бобылев // Тез. докл. Междунар. научн. конф., 30-31 мая 2000 г. Казань. - 2000. - С. 69-71.

67. Касылов, Т.К. Иммуногенность адыовант-вакцины из штамма В abortus КВ/100 / Т.К. Касымов, В.И. Ким // Ветеринария. 2002. - №5. - С. 10-12.

68. Клочков, A.A. Изучение свойств слабовирулентных и слабо-агглютиногенных штаммов бруцелл / A.A. Клочков // Труды ВИЭВ. — 1965. — Т. 31.-С. 37-47.

69. Коляков, Я.Е. Ветеринарная иммунология // М. — Агропромиздат. — 1986.-С. 271.

70. Коромыслов, Г.Ф. Научные исследования по инфекционной патологии животных // Ветеринария. — 1995. — №8. — С. 3—7.

71. Косилов, И.А. Бруцеллёз сельскохозяйственных животных / И.А. Косилов, П.К. Аракелян, С.К. Димов, А.Г. Хлыстунов; под ред. И.А. Косилова. Новосибирск. - 1999. - 344 с.

72. Косилов, И.А. Оптимизация противоэпизоотических мероприятий при инфекционном эпидидимите баранов / И.А. Косилов, П.К. Аракелян // Ветеринария. 2000. - № 4. - С. 15-18.

73. Косилов, И.А. Опыт применения противобруцеллезной вакцины из штамма В-1 в производственных условиях / И.А. Косилов, Э.Г. Карпов, P.M. Сыртланов // Сб. научн. тр. СибНИВИ. 1970. - Вып. 18. - С. 16-21.

74. Косилов, И.А. Особенности диагностики бруцеллеза животных в связи с изменчивостью бруцелл / И.А. Косилов, A.A. Новицкий // Матер, научно-произв. конф. Иркутск. - 1987. - С. 100-105.

75. Красиков, А.П. Влияние стимуляторов на иммуногенность противобруцеллезной вакцины из штамма 19 В. abortus / А.П. Красиков, О.Н. Иванова // Методология мероприятий по профилакт. и ликвидации болезней с.-х. животных. Новосибирск. — 1995. — С. 84-90.

76. Красиков, А.П. Способы повышения напряженности иммунитета при бруцеллезе / А.П. Красиков, О.Н. Иванова // Туберкулез и бруцеллез с.-х. животных: методы и средства диагност, и профилакт. Новосибирск. — 1994 (1995).-С. 32-36.

77. Кузьмин, Г.Г. Важный фактор оздоровления хозяйств от бруцеллеза / Г.Г. Кузьмин, В.М. Авилов, А.И. Ионесян // Ветеринария . -1975.-№7.-С. 12-14.

78. Куприна, Н.П. Клинико-патогенетическое обоснование иммуно— коррегирующей терапии при гнойных менингитах у детей / Н.П. Куприна, A.M. Земсков // Эпидемиология и инфекц. болезни. — 1999. — №1. — С. 54—59.

79. Лазарева, Д.Н. Стимуляторы иммунитета / Д.Н. Лазарева, Е.К.

80. Алехин // М.: Медицина. 1985. - С. 256.

81. Лим, A.A. Перспективы конъюнктивальной вакцинации крупного рогатого скота / A.A. Лим, А.Н. Касьянов, З.П. Маматова // Ветеринария. -1989.-№4.-С. 30-32.

82. Литвинов С.К. и др. ЖМЭИ.-1984.-№4.-С.96-101

83. Лихолатов, С.М. Современные аспекты разработки вакцин, адъювантов и иммуностимуляторов // Успехи современной биологии. — 1998. Т. 105. - Вып. 1. - С. 83-99.

84. Лутфуллин, М.Х. Аллергия у животных, привитых живыми вакцинами против бруцеллеза // Дис. . канд. вет. наук. — Казань. — 1983. -С. 194.

85. Мамаев, Н.Х. Опыт оздоровления молочных ферм от бруцеллеза и туберкулеза / Н.Х. Мамаев, О.Ю. Юсупов, М.Х. Халиков, С.Г. Хаиров // Ветеринария. 1997. -№3. - С. 10-12.

86. Мельниченко, В.И. Идентификация L-форм бруцелл реакций ДНК-ДНК гибридизации- / В.И. Мельниченко, С.К. Артюхин, Б.А. Фомин, Е.А. Тягунина, А.П. Кузьмиченко, Т.А. Толмачева // Бюлл. ВИЭВ. 1987. - № 64. - С. 75-78.

87. Минжасов, К.И. Пути повышения эффективности применения противобруцеллезных вакцин // Автореф. дисс. . док. вет. наук. Алматы, 1996.-54 с.

88. Мироненко, В.А. Состояние иммунной системы у крупного рогатого скота при иммунизации штаммами В. abortus 104—М и 19 в уменьшенных дозах и при бруцеллезе // Иммунол., диагност, и лечение инфекц. болезней с.-х. животных. Новосибирск. — 1986. — С. 63-70.

89. Муллакаев, О.Т. Иммуноморфологическая оценка эффективности вакцины из штамма бруцелл 82—ПЧ в зависимости от дозы, кратности и интервалов между вакцинациями.: Автореф. дисс. . канд. вет. наук. — Казань, 1991.-28 с.

90. Муллакаев, О.Т. Иммуноморфологические изменения в органах и тканях телок, привитых вакциной из штамма бруцелл 82—ПЧ / О.Т. Муллакаев, K.M. Салмаков, Г.А. Белозерова // Ветеринария. — 1993. — №5. — С. 24 26.

91. Никифоров, И.П. Реактогенность и эпизоотическая безопасность противобруцеллезной вакцины из штамма 82 // Диагн. и профилакт. инфекц. болезней животных. Сб. научн. тр. СибНИВИ. - Омск. - 1980.

92. Объедков, Г.А. Усовершенствование методов борьбы с бруцеллезом // Дис. . док. вет. наук. М. - 1989. - С. 473.

93. Орлов, Е.С. Испытание иммуногенных свойств слабовирулентного штамма В. abortus/ Е.С.Орлов, Ю.Ф.Борисович// Бюлл. научно-техн. инф. ВИЭВ. 1956. - 1. - С. 12-14.

94. Островская, H.H. К биологической характеристике инагглюти-набельных культур Br. melitensis // ЖМЭИ. — 1963. — №7. С. 125.

95. Ощепков, В.Г. R—, L-формы бруцелл и значение их в эпизоотологии и диагностике бруцеллеза животных // Автореф. дис. . док. вет. наук. Л., 1990. - С. 38.

96. Павловский, В.П. Применение противобруцеллезной вакцины из штамма 45/20 в Англии // Ветеринария. — 1971. №12. — С. 8.

97. Перегудов, Т.А. Морфологические изменения у животных, привитых вакциной из штамма В. abortus 82 / Т.А. Перегудов, Н.С. Вождаев, П.Ф. Бричук, К.Б. Мун // Ветеринария. 1987. - №9. - С. 28-30.

98. Петров, P.B. Изучение иммуногенной активности искусственных бруцеллезных антигенов / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, П.Е. Игнатов и др. // ЖМЭИ.- 1988.-№3.-С. 39-43.

99. Петров, Р.В. Иммунология. М.: Медицина, 1982. - 368 с.

100. Петров, Р.В. Пробиотики и иммуностимуляторы в ветеринарии / Р.В. Петров, В.П. Шишков, Е.С. Воронин, И.Н. Блохина // Тез. докл. Всесоюз. научн.-техн. конф., 10-12 октября 1990, Нижний Новгород. М. — 1990.-С. 1-2.

101. Петров, Р.В. Пропуск в мир. Москва. - 1984. - С. 52-57.

102. Прудников, B.C. Тиосульфат натрия в качестве адъюванта // Ветеринария. 1982. - №8. - С. 26-28.

103. Проскурина Л.И. Антигенреактивные клетки в крови телок, вакцинированных против бруцеллеза // Ветеринария. 1985. — №5. — С 37-38

104. Резников, Б.Ф. Некоторые свойства вакцинного штамма Вг. Abortus 82 / Б.Ф. Резников, K.M. Мукашев, A.JI. Воробьев // Инф. и незаразные бол. с.-х. жив—х в Казахстане. — Алма-Ата. 1983. - С. 89—94.

105. Ростов, А.П. Иммунизация крупного рогатого скота малыми дозами противобруцеллезной вакцины из штамма 82 с целью профилактики абортогенного действия этой вакцины // Ветеринария. — 1984. №11. — С. 34.

106. Русаков, Ю.В. Антигенность, иммуногенность и противо-эпизоотическая эффективность агглютиногенных вакцин в разных дозах при бруцеллезе крупного рогатого скота: Автореф. дисс. . канд. вет. наук. — Новосибирск, 1991. 16 с.

107. Рягузов, B.C. Изучение на овцах иммуногенности жидкой и сухой вакцины из штамма B.abortus 21 / B.C. Рягузов, JI.M. Потатуркин // Тр. ДонСХИ. 1976. - Т. 11. - В. 2. - С. 105-109.

108. Салмаков, K.M. Бруцеллез крупного рогатого скота // Ветеринарный врач. 2000. - №1. - С. 41-46.

109. Салмаков, K.M. Живая вакцина из штамма 82 и ее эффективность в профилактике и ликвидации бруцеллеза / K.M. Салмаков, Ю.Ш. Абузаров, Б.А. Киршин // Научн. тр. КВИ. Казань. - 1980. - Т. 135. - С. 27-34.

110. Салмаков, K.M. Изыскание и испытание новых вакцинных штаммов бруцелл // Автореф. дис. . док. вет. наук. — Казань. — 1977. — С. 30.

111. Свиридов, Л.П. Изучение влияния иммуностимуляторов на устойчивость белых мышей к возбудителю брюшного тифа / Л.П. Свиридов, A.B. Степанов, P.E. Коникова, Б.С. Устинов // ЖМЭИ. 1980. - №4. - С. 7073.

112. Селиванов, A.B. Иммунизация животных живой противо-бруцеллезной вакциной через неповрежденные слизистые оболочки: Автореф. дисс. . док. вет. наук. — М. 1963. — 34 с.

113. Селиверстов, В.В. Результаты производственного испытания адъювант вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота / В.В.

114. Силиверстов, K.B. Шумилов, B.B. Калмыков // Ветеринария. 2001. — №6. -С. 10-12.

115. Скляров, О.Д. Бруцеллез животных в России и его специфическая профилактика / О.Д. Скляров, К.В. Шумилов // Сб. научн. трудов ВГНКИ. -т. 65.-С. 150-182.

116. Степин, B.C. Компоненты клеточного иммунитета в зависимости от способа введения вакцины / B.C. Степин, Л.И. Проскурина // Вестник сельскохоз. науки Казахстана. 1986. - № 4. - С. 66-67.

117. Студенцова, В.К. Изучение иммуногенных средств инагглютина-бельных штаммов бруцелл // Вопросы инфекционной патологии. — Алма-Ата. 1974. - С. 144-145.

118. Султанов, A.A. Оптимизация специальных противобруцеллезных мероприятий в овцеводстве.: Автореф. дисс. . док. вет. наук. Новосибирск, 1992.-44 с.

119. Таран, И.Ф. Влияние иммуномодуляторов на развитие инфекционного и вакцинального процессов, а также на эффективность лечебных препаратов при бруцеллезе / И.Ф. Таран, Н.М. Швецова, В.М. Сафронова // ЖМЭИ. 1993. - № 6 - С. 88-89.

120. Таран, И.Ф. К оценке перспективности исследований по созданию вакцин из инагглютинабельных культур бруцелл / И.Ф. Таран, Е.И. Замахаева // ЖМЭИ. 1971. - С. 53 - 58.

121. Таршис, М.Г. Болезни животных, опасные для человека / М.Г. Таршис, Б. М. Черкасский. М.: Колос, 1997. - С. 53-56.

122. Триленко, П.А. Бруцеллез с.-х. жив—х. — Л. — Колос. — Лен. отд. — 1976.-С. 280.

123. Уласевич, П.С. О вакцинации овец против бруцеллеза // Пробл. инфекц. патологии с.-х. животных. / Тр. ВИЭВ, 1978, т.47. — С. 53 57.

124. Уласевич, П.С. Применение вакцины из штамма РЕВ-1 в целях профилактики бруцеллеза мелкого рогатого скота // Тр. ВИЭВ. 1974. — Т. 42.-С. 217-219.

125. Урбан, В.П. Иммуностимуляторы в системе профилактики болезней свиней / В.П. Урбан, В.А. Буянов, А.Н. Гречухин // Ветеринария. -1992,-№9.- 12.-С. 21-23.

126. Фомин, A.M. Разработка и совершенствование средств и методов диагностики и специфической профилактики при бруцеллезе крупного рогатого скота // Автореф. дис. . док. вет. наук. Казань. - 2001. - С. 36.

127. Фомин, A.M. Эффективность новой системы специальных противобруцеллезных мероприятий / A.M. Фомин, K.M. Салмаков // Ветеринарный врач. 2001. - №1(5). - С. 23-26.

128. Фрейдлин, И.С. Система мононуклеарных фагоцитов. М.: Медицина, 1984.-272 с.

129. Хазипов, Н.З. Биохимическая характеристика клеточных фракций-бруцелл различной вирулентности / Н.З. Хазипов, Н.К.Кириллов // Н. тр.-КГВИ. Казань. - 1980. - Т. 135. - С. 21-27.

130. Хазипов, Н.З. Фагоцитарная реакция макрофагов морских свинок, иммунизированных против бруцеллеза/ Н.З. Хазипов, Н.М. Василевский, О.П. Ионова, В.А. Шошокин // Ветеринария. 1985. -№12. - С. 27-30.

131. Чевелев, С.Ф. Макрофаги в системе иммунитета / И.А. Бакулов, В.В. Макаров, О.П. Вишнякова, Г.А. Котлярова, В.М. Котляров // Ветеринария. 1983. - №6. - С. 27-30.

132. Черемисин, Г.Г. Специфическая профилактика крупного рогатого скота и овец // Матер. I науч.-произв. конф. по проблемам ветеринарии зоны Северного Кавказа. Ростов-на—Дону, 1971. - С. 56-58.

133. Черкасов, В.В. Опыт оздоровления хозяйств от бруцеллеза с применением живой вакцины из штамма 82 / В.В.Черкасов, А.П. Ростов // Научн. тр. КВИ. 1980. - Т. 135. - С. 80-82.

134. Чернышева, М.И. Экспериментальное изучение процесса формирования иммунитета при бруцеллезе // Автореф. дис. . док. мед. наук. -М.- 1962.-С. 36.

135. Шахов, А.Г. К вопросу об иммуногенных свойствах штаммов бруцелл, не образующих антител // Тр. Воронеж. НИВС. 1966. - Вып.5. - С. 57-61.

136. Шумилов, K.B. Вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота / К.В. Шумилов, М.П. Альбертян, A.A. Клочков, В.А. Ромахов // Ветеринария. 1984. - №12. - С. 26-28.

137. Шумилов, К.В. Разработка и усовершенствование средств и методов специфической профилактики и диагностики бруцеллеза животных // Автореф. дис. . док. вет. наук. М., 1987. - С. 48.

138. Шумилов, К.В. Роль специфической профилактики в системе мер борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота / К.В. Шумилов, В.В. Калмыков, А.Н. Бобылев // Сб. научн. тр. ВГНКИ. 2001. - Т.62. - С. 136142.

139. Шуралев, Э.А. Изыскание иммуномодуляторов для повышения эффективности бруцеллезных вакцин //Дис. . канд. вет. наук. — Казань, 1999.-С. 198.

140. Юсупов, О.Ю. Результаты испытания вакцины из штамма B.melitensis REV-1 для иммунизации овцематок и ярок / О.Ю. Юсупов, Л.В. Малушко, С.Г. Хаитов // Тр. ДагНИВИ, 1984. С. 7-9.

141. Яковлев, И.Н. Динамика серологических реакций у крупного рогатого скота, привитого инагглютиногенной вакциной из штамма В. abortus В-1 (ВИЭВ) / И.Н. Яковлев, В.Г. Ощепков // Сб. научн. тр. СибНИВИ.- 1975.-Вып. 21.-С. 3-12.

142. Alton, G. Brucella melitensis REV-1 and Brucella abortus 45/20 vaccines in goats immuniti / G. Alton, L. Jones, G. Garcio-Carrillo, T. Faunce // Am. J. Vet. Ree. 1972. - vol. 29.' - № 9. - P. 1741-1750.

143. Alton, G. The control of bovine brucellosis recent developments // World animal Review. 1981. - №39. - P. 17-25.

144. Alton, G. Vaccination of goats with reduced doses of Rev-1 Brucella melitensis 11 Res. vet. ser. 1970. - vol. 11. - № 1. - P. 54-59.

145. Avrameas, S. New Dimensions in Antimicrobial Therapy / S. Avrameas, B. Gilbert // Ed. R. K. Root. -New York. 1984. - P. 277-293.

146. Bang, B. Infections abortion in cattle // J. amper. Pathol. Therap. — 1906.-P. 19.

147. Buck, G.M. Studies of vaccination during calphood to prevent bovine infection abortion // J. Agric. Res. 1930. - №41. - P. 667.

148. Blasco, J. A note on adult sheep vaccination with reduced dose of Brucella melitensis Rev-1 / J. Blasco, A. Estrada, M. Mercadal // Äff. rech. vet. -1984.-vol. 15.-№4.-P. 553-556.

149. Bricker, B.J. Conservation of antigenicity in a 31-kDa Brucella protein / B.J. Bricker, L.B. Tabatabai, B.L. Deyoe, J.E. Mayfield // Veter. Microbiol. -1988.-vol. 18.-№3/4.-P. 313-325.

150. Caroff, M. Antigenic S-type lipopolysaccharide of B brucella abortus 1119-3 / M. Caroff, M.J. Corbel et al. // Infeck. Immun. -1984. V. 46. -P. 384388.

151. Chen, T.H Immunization against Brucella infections: serological and immunological studies on a soluble antigen from Brucella melitensis / T.H. Chen, S.S. Elberg // J. Infect. Diseases. 1969. - 120. -N 2. - P. 143-148.

152. Corner, L. Immunisation of cattle with Brucella abortus saltextractable proteins / L. Corner, L. Tabatabai, B. Deyoe // Veter. Microbiol. -1987. — Vol.15. -№4.-P. 325.

153. Davis, D.S. Brucella abortus in bison. II. Evaluation of strain 19 vaccination of pregnant cows / D.S. Davis, J.W. Templeton, T.A. Ficht, J,D, Huber, R,D, Angus, L.G. Adams // J. of Wildlife Diseases. 1991. - No. 27 (2). -P. 258-264.

154. Denisov, A.A. Immunopotentiation of live brucellosis vaccine by adjuvants/ A.A. Denisov, Y.S. Korobovtseva, O.M. Karpova, A.V. Tretyakova, L.V. Vikhina, A.V. Ivanov, K.M. Salmakov, R.V. Borovich // Vaccine. 2010. -P. F17-F22.

155. Drazek, E.S. Deletion of pure attenuates B.melitensis 16 M for growth in human monocyte-derived macrophages / E.S. Drazek, H.S. Houng, M. Gravwford, T.L. Hadfe, D.L.Hoover, R.L. Warren // Infect. Immune. 1995. - P. 297-301.

156. Eisenschenk, F.C. Serum sensivity of field isolates and laboratory strains of Brucella abortus / F.C. Eisenschenk, J.J. Houle, E.M. Hoffmann // Am. J. veter. Res. 1995. - Vol. 56. - №12. - P. 1592-1598.

157. Elberg, S.S. Immunization against Brucella infection / S.S. Elberg // Med. J. 1973. - Vol. 52. - №4. - P. 339-342.

158. Fensterbank, R. Brucellose des bovins et des petits ruminants: diagnostic, prophylaxie et vaccination // Rev. sei. et techn. off. int. epizoot. — 1986.- vol. 5. № 3. - P. 587-603, 605-633.

159. Fensterbank, R. Vaccination of ewer by a single conjunctival administration of Brucella melitensis Rev—1 vaccine / R. Fensterbank , P. Pardon, J. Marley //Ann. Ree. vet. 1987. - № 16. - P. 351-356.

160. Cotton, W.E. Efficacy of an avirulent strain of Brucella abortus for vaccinating pregnant cattle / W.E. Cotton, G.M. Buck, H.E. Smith // J. Afric. Res.- 1936.-46.-P. 315.

161. Galassi, D. Semprini Primula Clinical results obtained in cattle and swine by means of biological immunostimulators / D. Galassi, P. Galassi, A.

162. Pelliccioni // Comp. Immunol., Microbiol, and Infect. Diseases. 1986. - Vol. 9. -№2-3.-P. 285-295.

163. Hampson, E. Vaccination // Austral, veter. pract. 1986. - Vol.16. - № l.-P. 33-36.

164. HellmanE. Zur Frage der Erregenspezifitat der Immunitat bei Brucellose // Berliner und Munchener Tierarzt Wochen sehr. 1962. - vol. 75. -№ 9. - P. 168-171.

165. Herzderg, M. Immunisation against brucella infection. 1. Isolation and characterization of a streptomicin-dependent mutant / M. Herzderg, S. Elberg // J. Bacterid. 1953. - vol. 66. - №5. - P. 585.

166. Hülse, E. Strain 19 and of her Brucella vaccines // Proc. Soc. Med.- 1958.-51.-№5.-P. 377.

167. Immunostimulants // Comp. Immunol. Microbiol. Dis. — 1986. — Vol. 9. -№2-3.-P. 99-295.

168. Jacotot, A. Vallec / A. Jacotot // Ann. Inst. Pasteur. 1962. - Vol. 102. -№1. — P. 109.

169. Janney, G. Staining intracellular Brucella organisms by means of fluorescent antibodies / G. Janney, D. Berman // Am. J. veter. rec. 1962. — № 23.- P. 596-598.

170. Joint FAO/WHO Expert Committee on Brucellosis. Geneva. — 1986.

171. Jones, L. Brucella melitensis Rev-1 and Brucella abortus 45/20 vaccines in goats. Serological tests / L. Jones , G. Garcio-Carillo, G. Alton // Am. J. Vet. Ree. 1973. - vol. 34. - №2. - P. 199-202.

172. Lord, V.R. Field study of vaccination of cattle with Brucella abortus strains RB-51 and under high and low disease prevalence / V.R. Lord, J.J. Schurig, J.N. Chervongradzky // Am. J. Veter. Res. 1998. - Vol.59. - № 8. - P. 10161020.

173. Moulton, J.E. The pathogenesis of B. suis infection in guinea pigs. Lesions of the spleen, liver, testis and articulations / J.E. Moulton, M.E. Meyer // Cornell. Veter. 1958. - Vol.48. - P. 165 -169.

174. Muskens, J.A.M. Serological response of cattle to Brucella allergen after repeated intradermal applications of this allergen / J.A.M. Muskens, Z. Bercovich, C.P.R.M. Damen // Veter. Microbiol. 1996. - Vol.48. - №1/2. P. 174-178.

175. Nicoletti, P. The effects of adult cattle vaccination with strain 19 on the incidence of brucellosis in dairy herds in Florida and Puerto-Rico // Ann. Meet. Procced. 1979. - vol.83. -№1. - P. 65-69.

176. Olsen, S.C. Responses of cattle to two dosage of Brucella abortus strain RB-51 serology, clearance and efficacy / S.C. Olsen, B. Bricker, M.V. Palmer // Res. in veter. sc. 1999. - Vol.66. - №2. - P. 101-105.

177. Onate, A. Comparison of protein components of different species and strains of Brucella / A. Onate, H. Folch // J. veter. med. ser. B. 1989. — Vol.36. -№5. - P. 397-^400.

178. Phillips, R.W A Brucella melitensis high-temperatiire-requirement A (htr A) deletion mutant is attenuated in goats and protects against abortion / R.W. Phillips, P.H. Elzer, G.T. Robertson // Res. in veter. Sc. 1997. - vol. 63. - № 2. -P. 165-167.

179. Plomet, M. Vaccination against bovine and Brucella melitensis infection administered by the conjunctival route / M. Plomet, R. Fensterbank // Development in Biological Standartisation. 1984. - vol. 56. - №7. - P. 568-572.

180. Renoux, G. Effect immunostimulant d'un imilothiazole dans l'immunization des souris cotre l'infection par Brucella abortus / G. Renoux, M. Renoux // C.R. Acad. Sei. Paris. 1971. - № 2720. - P. 349-350.

181. Renoux, G. Stimulation of anti-Brucella Vaccination in mice by tetramisole, a phenylimidothiazole salt / G. Renoux, M. Renoux // Infect. Immunol. 1973. - №8. - P. 544-548.

182. Renoux, G. Transmission of Brucella abortus infection from one generation to another by apparently normal heifers / G. Renoux, M. Plommet, A. Philippon // WHO (Bruc.). 1971. - P. 323.

183. Renoux, G. Immunization des genesis coutre la Brucella par le vaccine H38 / G. Renoux, Z. Valette // Bull. Acad. vet. Er. 1967. - P. 41-53.

184. Rise, C.E. Serum immunoglobulins in bovine brucellosis / C.E. Rise, B. Boyes//N.Z. Veter. J. 1971.-Vol. 19.-P. 144-151.

185. Rose, J.E. Physicochemical studies on postvaccinal brucella agglutinins in bovine serum / J.E. Rose, M.H. Roepke // Am. J. Veter. Res. — 1964. -Vol. 25.-P. 325-329.

186. Salmakov, K.M. Comparative stsdy of the immunobiological properties of live brucellisis vaccines / K.M. Salmakov, A.M. Fomin, E.M. Plotnikova, G.M.

187. Galimova, A.V. Salmakova, A.V. Ivanov, A.N. Panin, O.D. Sklyarov, K.V. Shumilov, A.I. Klimanov // Vaccine. 2010. -P. F35-F40.

188. Santos, J.M. Outer membrane proteins from rough strains of four Brucella species / J.M. Santos, D.R. Verstreate // Infect. Immun. 1984. - Y.46. -P.188—194.

189. Sklyarov, O. Targeted prevention of brucellosis in cattle, sheep and goats in the Russian Federation / O. Sklyarov, K. Shumilov, A .Klimanov, A. Denisov // Vaccine. 2010. - P. F54-F58.

190. Tabatabai, L.B. Immunogeniciny of Brucella abortus saltextractable proteins/ L.B.Tabatabai, B.L. Deyoe, J.M. Patterson // Veter. Microbiol. 1989. -vol. 20. -№1. - P. 49-58.

191. Wilkinson, P.C. Immunoglobulin patterns of antibodies against Brucella in man and animals // Immunol. 1966. - Vol. 96. - P. 457-462.

192. Winter, A.J. Outer membrane proteins of Brucella // Ann. Inst. Paster. — 1987.-V. 138.-P. 87-90.