Иммунобиологические свойства рифампицинрезистентного штамма В. abortus 82

Уразов, Тимур Наилевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Иммунобиологические свойства рифампицинрезистентного штамма В. abortus 82
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Иммунобиологические свойства рифампицинрезистентного штамма В. abortus 82"

На правах рукописи

Уразов Тимур Наилевич

Иммунобиологические свойства рифампицинрезистентного штамма В. abortus 82

03.00.07. - микробиология

16.00.03. - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология.

Автореферат

диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань 2005

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,

Фомин Алексей Максимович

Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор

Галиуллин Альберт Камилович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Алимов Азат Мергасимович

доктор биологических наук, Коксин Владимир Петрович

Ведущее учреждение: Институт ветеринарной медицины

Омского государственного аграрного университета.

Защита состоится «_» _2005 года в часов на заседании

диссертационного совета Д-220.012.01 при Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте (420075, г. Казань, Научный городок-2, ВНИВИ).

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке ВНИВИ.

Автореферат разослан «_»_2005 года.

Ученый секретарь диссертационного совета У В.И. Степанов

^^УУК^ГТГТтП^

гоов-4 2.934

мет

1. Общая характеристика работы

Актуальносгь проблемы. Бруцеллез сельскохозяйственных животных - широко распространенная в недавнем прошлом инфекция, однако продолжающая оставаться актуальной проблемой ветеринарной науки и практики по сей день. Несмотря на то, что в последние десятилетия в стране была проведена большая работа по искоренению данного заболевания, в отдельных регионах все еще сохраняется неблагополучие по бруцеллезу крупного рогатого скота.

Исследователи едины во мнении о том, что наиболее эффективным методом проведения противобруцеллезных мероприятий является метод полной, одномоментной ликвидации эпизоотических очагов бруцеллеза путем замены всего поголовья и санации окружающей природной среды. Вторым по значимости и более широко используемым при оздоровлении от бруцеллеза животных является метод систематических исследований поголовья неблагополучных по бруцеллезу стад с последующей изоляцией и убоем реагирующих животных. В ряде регионов этот метод сочетается с иммунизацией крупного рогатого скота противобруцеллезными вакцинами.

Тем не менее, следует отметить, что после применения существующих средств специфической профилактики иммунитет к заболеванию вырабатывается в течение 2-х недель. Также известно, что ни одна из имеющихся на сегодняшний день вакцин не создает 100%-ного защитного эффекта (B.C. Бронников и др., 1991). Все это не удовлетворяет требованиям экстренности, что на фоне сложившейся в мире ситуации, когда вероятность использования возбудителей инфекционных заболеваний, в т.ч. и бруцеллеза, как опасного зооантропоноза при террористических актах остается актуальной. При этом не следует забывать, что в отдельных случаях применение специальных противобруцеллезных мероприятий недопустимо, в особенности в тех случаях когда речь идет об особо ценных представителях пород сельскохозяйственных животных.

Поэтому, при наличие угрозы возникновения бруцеллеза у животных может возникнуть необходимость экстренного проведения одновременно двух мероприятий, а именно, антибиотикотерапии и специфической вакцинации поголовья животных, находящихся в очаге заражения. Однако, при сочетанном введении антибиотиков с вакциной первые губительно действуют не только на вирулентную, но и на живую вакцинную культуру бруцелл. Отсюда возникает необходимость получения вакцинного штамма, который был бы резистентен к антибиотику, применяемому для защиты животного, и сохранил бы при этом иммуногенные свойства.

библиотека

82-82Rr. Была изучена его стабильность по сохранению устойчивости к антибиотику при пассаже на искусственных питательных средах без содержания рифампицина. Однако другие свойства штамма 82-Rr и его пригодность в качестве вакцины для применения при экстренной защите животных от бруцеллеза требуют своего изучения.

Все вышесказанное определило направление наших исследований. Цель и задачи исследований - изучить свойства рифампицинрезистентного штамма B.abortus 82-Rr и установить их соответствие требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам бруцелл. Для реализации намеченной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить иммунобиологические свойства штамма B.abortus 82-Rr.

2. Выявить абортогенные свойства штамма В. abortus 82-Rr на крупном рогатом скоте в производственных условиях.

3. Исследовать белковые спектры ряда штаммов бруцелл методами электрофореза и иммуноблотинга.

Научная новизна. Впервые в лабораторных условиях изучены:

- иммунобиологические свойства штамма В. abortus 82-Rr. Установлено, что культуры бруцелл этого штамма являются слабоагглютиногенными по S-антигену; приживается в течение 4-х месяцев в организме морских свинок; стабилен, безвреден, иммуногенен;

- стимулирующее влияние тиосульфата натрия на иммуногенные свойства вакцины из штамма 82-Rr;

- абортогенные свойства штамма на крупном рогатом скоте;

- белковые спектры штаммов 82-Rr и 82, они имеют аналогичные наборы белковых и серопозитивных фракций; антиген-экстракты этих штаммов проявляют одинаковую антигенную активность в реакциях ТФ-ИФА; наибольшей антигенной активностью у штаммов бруцелл 82 и 82-Rr обладает белковая фракция с молекулярной массой 1S кД; фракции с молекулярными массами в 24, 11 и 5,8 кД являются специфическими антигенами штамма R-1096.

Практическая значимость. Всестороннее и детальное изучение штамма В .abortus 82-Rr позволило с уверенностью считать его вакцинным.

Полученные данные по изучению иммунобиологических свойств нового антибиотикорезистентного штамма В. abortus 82-Rr будут служить основой при разработке способа экстренной сочетанной защиты животных от бруцеллеза.

Основные положения, выносимые на защиту:

- Штамм B.abortus 82-Rr соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам бруцелл.

- Вакцина из штамма 82-Rr не абортогенна.

- Отработаны практические приемы, позволяющие выявлять антигенные структуры, специфичны? для разных форм бруцелл.

' « ''fl' .и | "•¡vAqji-,!' „

«И ,

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на заседаниях ученого совета ВНИВИ в виде ежегодных отчетов о НИР (2002-2004); международной научно-практической конференции (Покров, ВНИИВВиМ, 2002); Научно-производственной конференции, посвященной 100-летию профессора Н.Г. Кондюрина (Омск, 2004); международной научной конференции, посвященной 100 летию Баева (Казань, КГУ, 2004 г.); опубликованы в ученых записках казанской Государственной академии ветеринарной медицины (Казань, 2004) и журнале «Ветеринарный врач» (2004)

Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, доложены, обсуждены и одобрены на межлабораторном совещание сотрудников ВНИВИ (Казань, 2004).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 5 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 147 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, практические предложения, список использованной литературы и приложения.

Работа иллюстрирована 20 таблицами и 14 фотографиями. Список литературы включает 268 источников, в том числе 77 иностранных. В приложении представлены документы, подтверждающие результаты основных этапов работ.

2. Собственные исследования 2.1 Материалы н методы исследований

Работу выполняли в 2001-2005 г.г. согласно государственному плану научных исследований (номер Госрегистрации 01200202602) на базе лабораторий контроля и индикации возбудителей бактерийных инфекций и музей штаммов ВНИВИ (г. Казань), а также в ветеринарных лабораториях и животноводческих хозяйствах Самарской области.

В опытах использовали 229 морских свинок и 6 голов крупного рогатого скота.

При проведении исследований применяли культурально-морфологические, серологические, бактериологические, иммунологические и другие методы.

С целью изучения гуморального иммунитета в исследованиях использовали серологические реакции: роз-бенгал пробу (РБП), агглютинации (РА), связывания комплемента (РСК), пассивной гемоагглютинации (РГПГА). При постановке реакций применяли единый

бруцеллезный и роч-бенгал антигены Щелковского биокомбината и R-антиген, приготовленный во ВНИВИ.

При изучении клеточного иммунитета использовали опсонофагоцитарную реакцию (ОФР). ОФР ставили по методике В.А. Штритера. При исследовании вычисляли фагоцитарное число.

Культурально-морфологаческие свойства штамма изучали по общепринятой схеме ФАО/ВОЗ. В число рекомендуемых методов вошли комплекс тестов: микроскопия, скорость и характер роста на питательных элективных средах - печеночно-пептоном глюкозо-глицериновом агаре (111111 А), печеночно-пептоном глюкозо-глицериновом бульоне (ППГТБ), потребность в повышенном содержании ССЬ , способность образовывать сероводород, лизис фагом «Тб», рост на питательных средах с красками (тионин 1:25, 50 и 100 тыс.; фуксин 1:50 и 100 тыс.), окраска по Уайт-Вилсону, проба термоагглютинации, проба с трипафлавином, чувствительность к пенициллину, антигенные свойства культур с использованием специфических бруцеллезных S- и R-сывороток и монорецепторных «А» и «М» сывороток.

Бактериологический метод исследований использовали для выделения культур из организма привитых животных (парные подчелюстные, заглоточные, паховые и парааортальные лимфатические узлы, печень, селезенка и костный мозг), делали высевы на питательные среды: lllll 1 А, ППГТБ, эритрит-агар. Посевы инкубировали в термостате при 37°С в течение 2-х недель. Выделенные культуры бруцелл идентифицировали, используя реакцию агглютинации на стекле с применением S- и R-сывороток. Учитывали индекс инфицированности (ИИ), индекс веса селезенки (ИВС) и процент иммунных животных.

Исследования проводили в 6 этапов. На первом этапе изучали культурально-морфологаческие свойства штамма В. abortus 82-Rr. На втором этапе работы в опытах на морских свинках определяли остаточную вирулентность, длительность приживаемости, антигенные свойства и контагиозность штамма. Третий этап работы заключался в изучении стабильности штамма В. abortus 82-Rr при его последовательных пассажах через организм морских свинок. На четвертом этапе работы провели ряд опытов с целью изучения иммуногенеза и иммуногенных свойств штамма В. abortus 82-Rr при вакцинации и ревакцинации морских свинок и влияние иммуномодулятора на эти показатели. Пятый этап работы заключался в изучении абортогенных свойств этого штамма на крупном рогатом скоте в производственных условиях. На шестом этапе работы проводилось сравнительное изучение пептидных карт и антигенного состава ряда штаммов бруцелл.

Все полученные данные подвергали статистической обработке по методике, описанной М.П. Ашмариным и А.Н. Воробьевым (1962), с выведением среднего арифметического (М), квадратичного отклонения (5-сигма) и ошибки среднего арифметического (±м).

2.2 Результаты исследований

2.2.1 Культу рально-морфологические и биохимические свойства штамма В. abortus 82-Rr. Изучение свойств вакцинного штамма В. abortus 82-Rr проводили по общепринятой схеме ФАО/ВОЗ. В качестве контролей при этом использовали вакцинные штаммы В. abortus 19, 82, 82-ПЧ, R-1096 и референтные вирулентные штаммы В. abortus 544, В. suis 1330 и B.melitensis 16 М.

Установили, что вакцинный штамм 82-Rr хорошо растет на печеночных средах в обычной атмосфере, не образуя при этом H2S. Отмечался его рост на средах во всех разведениях тионина и фуксина, колонии окрашивались по Уайт-Вилсону в фиолетовый цвет с радиально отходящими от центра желтыми полосами, он рос на среде, содержащей рифампицин. При постановке РА на стекле давал положительный результат с S-, R- и монорецепторной "А" -сыворотками, лизировался фагом Тб" в двух разведениях и показывал положительные пробы на диссоциацию.

2.2.2 Остаточная вирулентность, антигенные свойства, длительность приживаемости и контагиозиость штамма В. abortus 82-

Rr. Для изучения остаточной вирулентности и антигенных свойств штамма В. abortus 82-Rr был поставлен опыт на 36 морских свинках, разделенных на 9 групп, по 4 головы в группе. Животных первой группы иммунизировали культурой штамма 82-Rr подкожно в области паха в объеме 1 мл. с содержанием 10 м.к., второй - 50 м.к., третьей - 100м.к., четвертой - 500м.к., пятой - 1000 м.к., шестой - 10000 м.к., седьмой - 100 тыс. м.к., восьмой - 1 млн. м.к., девятой -1 млрд. м.к. Спустя 1 месяц после вакцинации животных подвергали убою с проведением серологического и бактериологического исследований.

Была установлена минимальная инфицирующая доза вакцинного штамма 82-Rr, которая составила 500 м. к., способная вызывать генерализованный вакцинальный процесс у большинства морских свинок.

Установили, что ни у одного животного не было положительных реакций с S-антигенами, независимо от дозы микробных клеток все они показывали отрицательный результат в РБП, РА и РСК. При этом РСК с R-антигеном была положительной в группе морских свинок, иммунизированных дозой в 500 м.к. С увеличением дозы культуры бруцелл возрастали и титры антител, но строгой закономерности в увеличении этих показателей отмечено не было.

В опыте 2 изучали длительность приживаемости в организме морских свинок штамма В. abortus 82-Rr, его безвредность и контагиозиость. Использовали 18 морских свинок, из них 9 привили культурой штамма 82-Rr подкожно в области паха в дозе 1 млрд. м. к. в объеме 1 мл. В ту же клетку с вакцинированными животными с целью изучения миграции культуры бруцелл от привитых к непривитым подсадили 9 голов интактных морских свинок.

Во все сроки исследований как иммунизированные морские свинки, так и подсаженные в реакции с единым бруцеллезным антигеном давали отрицательный результат. При этом титры в РСК с R-антигеном были положительными во все сроки исследования у иммунизированных животных и имели тенденцию к снижению. Проведенное бактериологическое исследование показало, что штамм выделялся в течение четырех месяцев. Все подсаженные морские свйнки на всех сроках исследований показывали отрицательные результаты серологического и бактериологического контроля.

Культура вакцинного штамма В. abortus 82-Rr приживалась в организме в течение 4-х месяцев. Штамм не контагиозен. Его миграции от привитых животных на непривитых животных отмечено не было.

2.2.3 Стабильность свойств штамма 82-Rr при пассажах через организм морских свинок и питательные среды. С целью изучения стабильности биологических свойств штамма В. abortus 82-Rr проводили последовательные пассажи его через организм морских свинок. Животным в количестве 2-х голов подкожно в области паха вводили взвесь культуры штамма 82-Rr в дозе 1, 65 млрд. м.к. в объеме 1 мл. Спустя 24 дня после вакцинации морских свинок убивали с проведением серологического и бактериологического исследований. Выделенную от морских свинок культуру вводили вновь другим животным и т.д. Всего проведено 10 пассажей.

Параллельно штамм 50-ти кратно пассировали через питательные среды, не содержащие рифампицин. Для контроля штамм, после каждого пассажа, пересевали на среду с концентрацией рифампицина 50мкг на 1мл.

После пассажей проводили сравнительное изучение культурально-морфологических свойств исходной культуры и пассажных культур, при котором различий между ними выявлено не было.

Как исходная культура, так и культуры от 1-го до 10-го пассажей штамма 82-Rr не вызывали в организме привитых животных синтеза антител, улавливаемых в серологических реакциях с S-антигеном. При этом все морские свинки реагировали в РСК с R-антигеном в среднем титре 1:160.

Бактериологические исследования выявили незначительные колебания ИВС, тогда как ИИ остался неизменным. Полученные результаты исследований дают основание считать штамм В. abortus 82-Rr стабильным.

2.2.4 Иммуногенная активность штамма В. abortus 82-Rr при вакцинации и ревакцинации морских свинок и влияние иммуномодулятора на этот показатель.

В опыте 5 проводили изучение иммуногенных свойств штамма В. abortus 82-Rr и их повышение с помощью иммуномодулятора, в качестве которого мы использовали 30% тиосульфат натрия в расчете 150мг сухого вещества на морскую свинку. Было установлено, что у животных, привитых культурой штамма В. abortus 82-Rr, через 2 месяца после заражения % иммунных животных составлял 80,0, а при совместном введении с

иммуномодулятором иммунными оказались все животные. При заражении же животных спустя 3 месяца после иммунизации, % иммунных животных составил 50, а использование иммуномодулятора в 1,5 раза повысило ее иммуногенную активность.

В задачу следующих исследований входила экспериментальная проверка напряженности иммунитета, создаваемого вакциной из штамма В. abortus 82-Rr, примененной по фону вакцины из штамма 82.

Животных в количестве 35 голов прививали вакциной из штамма 82 в дозе 1 млрд. м.к. Спустя 15 дней, 1 и 2 месяца после вакцинации у них брали кровь из уха для серологического исследования по 3 головы из группы. Через 3 месяца морских свинок ревакцинировали вакциной из штамма 82-Rr, 82-Пч и R-1096 в дозе 1,5 млрд. м. к. У ревакцинированных животных 3-х кратно брали кровь из уха для серологического исследования. Через 3 месяца после ревакцинации морских свинок заражали культурой вирулентного штамма В. abortus 54-М ВГНКИ в дозе 50 м. к. в качестве контроля использовали 5 интактных морских свинок. Спустя 30 дней зараженных животных подвергали убою. По результатам серологических и бактериологических исследований определяли количество иммунных к бруцеллезу морских свинок.

У животных, ревакцинированных вакциной из штамма 82-Rr, % иммунных животных составил 75. Удалось выделить всего лишь одну культуру вирулентного штамма от одной морской свинки из регионарного правого пахового лимфатического узла (место заражения). У одного животного иммунитет был стерильным, а у 2-х морских свинок было выделено по одной культуре бруцелл штамма 82-Rr. ИИ составил 1,12±0,3%, при ИВС, равном 1,77±0,13. В серологических реакциях с S-антигеном в РСК положительно реагировала только одна морская свинка в титре 16,7, а в РСК с R-антигеном в среднем титры антител составили 23,3±8,8.

Таким образом, ревакцинация морских свинок вакциной из штамма В. abortus 82-Rr через 3 месяца по фону вакцины из штамма 82, создает иммунитет у 75% животных.

2.2.5 Абортогенные свойства штамма В. abortus 82-Rr. Целью данного исследования было установить наличие абортогенных свойств у нового антибиотикорезистентного штамма В. abortus 82-Rr на беременных животных, не знакомых ранее с противобруцеллезными вакцинами, и изучить динамику антителообразования с применением S- и R-антигенов.

Изучение динамики антителообразования показало, что опытный штамм, как и исходный штамм 82, является слабоагтлютиногенным по S-антигену. Так, у нетелей, привитых вакциной из штамма 82-Rr, при исследовании через 15 дней после введения биопрепарата РА была положительной лишь у одного животного в титре 100МЕ, у двух других результаты реакции были отрицательными. РСК в эти сроки исследований была отрицательной. Тогда как в РСК с R-антигеном животные реагировали в высоких титрах антител от 1:20 до 1:1280, в среднем 647,0±364,0.

В последующие сроки исследований РЛ и РСК показывали отрицательный результат, а показания РСК с R-аптигеном были положительными до конца опыта. Количество антител также колебалось в различные сроки исследований. Их титр падал от 35,0±22,9 через 1 месяц после прививки до 15,0±5,0 через 3 месяца, а через 4 месяца вновь титр поднялся до 43,3±20,3. В конце опыта, через 5 месяцев, животные реагировали в титре 21,7± 10,1. Ни одно животное, при наблюдении за ними в течение 5 месяцев после прививки, не абортировало, когда как в контрольной группе нетелей, привитых вакциной из исходного штамма 82, одно животное абортировало через 3,5 месяца после вакцинации. Поствакцинальный ,

характер аборта был подтвержден серологическим исследованием с применением S- и R- антигенов.

Таким образом, на беременных нетелях и коровах было показано i

отсутствие абортогенных свойств у антибиотикорезистентного варианта штамма В. abortus 82 - 82-Rr.

2.2.6 Спектр белков бруцелл. Были проведены исследования штамма 82-Rr методами электрофоретического фракционирования и иммуноблотинга. Параллельно исследовали штаммы бруцелл 19, 99, R-1096, 82,82-Rr, 82-Sr и 82-Пч.

Для электрофоретических исследований использовали 72 часовые культуры, выращенные на печеночном агаре в отсутствие каких-либо антибиотиков. Электрофорез белков проводили в пластинчатом полиакриламидном геле по Laemmli. Фракционированию подвергали в основном лизаты интактных микробных клеток, а также антиген-экстракты. При наработке последних руководствовались методами, описанными в «Справочнике по микробиологическим и вирусологическим методам исследования» под редакцией Бергера. Иммуноблотинг проводили с кроличьими гипериммунными сыворотками, полученными против S-, SR и R-форм бруцелл. Гипериммунизацию животных проводили культурами штаммов 19, 82 и R-1096.

С целью выявления различий в спектре антигенов штамма 82-Rr и исходного 82 были получены иммуноблоты в реакции антиген-экстрактов и А

полных клеточных лизатов с сыворотками против S-, SR- и R-форм бруцелл.

На наш взгляд, спектр серопозитивных белков во всех вариантах сходен. Обращает внимание наличие 2 мажорных фракций 12,5 и 15 кД. Одна из них, с молекулярной массой 12,5 кД, которая хорошо представлена на всех иммуноблотах как на антиген-экстрактах, так и на полных клеточных лизатах.

Представляет интерес белок с молекулярной массой 15 кД. Данная белковая фракция четко представлена только с SR-сывороткой на иммуноблоте полного клеточного лизата, слабее на иммуноблоте антиген-экстракта и практически отсутствует на остальных иммуноблотах. Это дает

основание предположить, что данная фракция является уникальной для вК-форм бруцелЛ, в частности для штаммов 82 и 82-Яг.

В пользу этого предположения свидетельствует, на наш взгляд, и то, что на иммуноблотах полного клеточного лизата с сыворотками к 8- и Я-формам бруцелл и иммуноблоте антиген-экстракта с сывороткой к Я-форме наблюдается фракция, близкая по молекулярной массе (чуть менее 15 кД) и по высоте равная ей. Возможно, что эти фракции представляют собой разные формы одного и того же белка или группы белков. Не исключено, что изменение электрофоретической подвижности в области белков с молекулярной массой в 15 кД, является отражением изменений, которыми сопровождаются переход из Б- в БЛ- и Я- формы бруцелл.

В дальнейшем был проведен сравнительный анализ белковых спектров 8 штаммов бруцелл, который показал, что все штаммы имеют практически одинаковый спектр белков. Это справедливо, как для полных лизатов микробных клеток, так и для препаратов антиген-экстрактов.

Исследования в твердофазном варианте ИФА антиген-экстрактов в перекрестных реакциях с кроличьими сыворотками к Б-, вЯ- и Л-формам показали, что наиболее высокие показатели оптической плотности имеют место при взаимодействии сывороток, независимо против каких форм бруцелл они получены, с антигенами из штаммов 19,99 и 82-Пч. Антиген-экстракты из штаммов бруцелл: 82, 82-11г, 82-8г и Я-1096 уступали по активности антигенам, выделенным из перечисленных выше штаммов.

Более низкая активность антиген-экстрактов, выделенных из штаммов 82, 82-Яг и 82-Бг, хорошо согласуется с ранее полученными данными о том, что приобретение бруцеллами БЯ-формы сопровождается потерей части антигенных структур. На этом фоне является удивительным то, антиген-экстракт из штамма 82-Пч достаточно выражено превосходит по активности остальные варианты штамма 82.

Антиген-экстракт из штамма Л-1096 проявлял самую низкую активность по сравнению с антигенами из остальных исследованных штаммов.

По результатам данной серии экспериментов нами был сделан вывод о возможности использования препаратов антиген-экстрактов в качестве исходного материала для наработки специфических антигенов.

Исследования в очередной серии экспериментов проводили с целью выявления как перекрестно реагирующих антигенов, так и антигенов, уникальных для каждой формы бруцелл. Из данных иммуноблотинга, полученных в реакции полных клеточных лизатов 8 штаммов с кроличьими гипериммунными сыворотками к Б- и И-формам бруцелл, видно, что спектры серопозитивных фракций, полученных как с Б-, так и с Я-сыворотками, имеют достаточно большое сходство.

Поэтому, основываясь на данных твердофазного-ИФА, которые показали, что наибольшие различия в антигенной активности наблюдаются

между штаммами 19 и I*-1096, было решено провести отработку приемов выявления межштаммовых различий с использованием указанных штаммов.

В очередной серии экспериментов антиген-экстракт из штамма 11-1096 был фракционирован практически по всей ширине пластинчатого геля, после переноса на НЦМ, последнюю разрезали на полосы шириной 4-5 мм и использовали для подбора условий проведения иммуноблотиига.

Контрольная постановка иммуноблотиига в реакции антиген-экстрактов и полных клеточных лизатов с использованием более высоких концентраций гипериммунных кроличьих сывороток (в разведении 1:10), чем предлагается в методе, была проведена с целью выявления максимального количества серопозитивных фракций и оценить, в какой степени удалось избавиться от балластных (общих для этих двух форм бруцелл) белков в препаратах антиген-экстрактов. При этом установили сильные различия в спектрах серопозитивных фракций между антиген-экстрактами и полными клеточными лизатами.

На иммуноблотах, полученных с сыворотками против Я-формы бруцелл, четко выявляются по меньшей мере 2 мажорные фракции, которые либо отсутствуют на иммуноблотах, полученных с сыворотками против $>-формы, либо не выявляются из-за того, что находятся в области спектра белков бруцелл штамма 19, которые наиболее активны в антигеном отношении.

Иммуноблоты, полученные с сывороткой против Б-формы бруцелл, также демонстрируют различия в спектре серопозитивных фракций у штаммов В. аЫяйю 19 и Я-1096.

Недостатком для использования в иммуноблотинге полного клеточного лизата с целью проведения дифференциации сывороток, на наш взгляд, является излишняя перегруженность иммуноблотов фракциями, которые не несут информации о межштаммовых различиях, но усложняют интерпретацию результатов. В этом отношении значительное преимущество имеют иммуноблоты, полученные при использовании антиген-экстрактов. Серопозитивных фракций в них значительно меньше, а потому различия в реакциях с сыворотками против разных форм бруцелл легко распознаваемы. В частности, на иммуноблоте, полученном с антиген-экстрактом из штамма II-1096 и гомологичной сывороткой, достаточно четко выделяются 7 фракций с молекулярными массами в 31, 24, 22, 21, 11, 7,5 и 5,8 кД. Причем, на иммуноблоте, полученном с сывороткой против Б-формы бруцелл, обнаруживаются только следовые количества фракций с молекулярными массами в 31,22,21 и 7,5 кД. Тогда как фракции с молекулярными массами в 24, 11 и 5,8 кД являются уникальными и обнаруживаются только на иммуноблотах, полученных с Я-сывороткой.

В последующем был проведен повторный эксперимент, который включал: наработку новой серии антиген-экстракта, электрофоретическое фракционирование его, электроперенос белков и последующее проведение реакции иммуноблотиига.

Описанный ниже эксперимент был проведен для лучшей сопоставимости серопозитивных фракций при исследованиях сывороток разных животных: кроличьих и крупного рогатого скота. Для этого препарат антиген-экстракта из штамма R-1096 был фракционирован, как и в предыдущем случае по всей ширине пластинчатого геля. После переноса белков на НЦМ, последнюю разрезали на полосы шириной 4-5 мм и использовали для исследований.

В отношении проявления серопозитивных фракций с кроличьими сыворотками, полученными к S-, SR- и R-формам бруцелл, имеет место совпадение с результатами, полученными в предыдущем эксперименте.

Представляет интерес, что только на двух иммуноблотах из пяти, полученных с сыворотками КРС, обнаруживаются серопозитивные фракции с молекулярными массами в 34,5, 30, 25, 21,5, 8,5 и 5,8 кД.

То есть, только одна сероактивная фракция, полученная в иммуноблоте с сыворотками КРС, с молекулярной массой 5,8 кД наблюдается в иммуноблоте, полученном с кроличьей сывороткой против R-формы бруцелл.

Исследованиями сывороток КРС в реакциях агглютинации (РА) и РСК с применением единого бруцеллезного антигена и РСК с применением липополисахаридного антигена, полученного из штамма R-1096 (А.М. Фомин, ДА. Хузин, 1989) было установлено, что эти две сыворотки являются носителями R-антигенов (иммунизированы R-штаммом). Обращает внимание тот факт, что спектр серопозитивных фракций на треках, полученных с сыворотками КРС, резко отличается от такового с сыворотками кролика. Это подтверждает многочисленные данные о том, что иммуногенные свойства антигенов варьируют. Для одних животных иммуногенами являются одни белки для других - другие.

3. Выводы

1. В лаборатории бактерийных инфекций ВНИВИ получен рифампицинрезистентный штамм В. abortus 82-Rr. Всестороннее изучение его иммунобиологических свойств показало, что он отвечает требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам бруцелл. Штамм 82-Rr отличается от исходного штамма 82 способностью давать рост на питательных средах, содержащих рифампицин в количестве 50 мкг/мл и отсутствием абортогенных свойств.

2. Минимальной инфицирующей дозой штамма 82-Rr для морских свинок, является 500 м.к. У отдельных животных культура может приживаться и в дозе 50 м.к. Бруцеллы этого штамма приживаются в лимфатических узлах и органах, в основном, в пределах 4-х месяцев.

3. Штамм 82-Rr не контагиозен: миграция бруцелл этого штамма от вакцинированных на непривитых животных при совместном их содержании не установлена.

4. Штамм 82-Яг стабилен. Культура этого штамма сохранила свои основные свойства после 10-ти кратного пассирования через организм морских свинок и 50-ти кратного на питательных средах.

5. Штамм слабоагглютиногенен. Иммунизация морских свинок и крупного рогатого скота вакциной из этого штамма сопровождается отрицательными или слабоположительными показателями серологических реакций с бруцеллезными 8-антигенами, при одновременно высоких титрах антител РСК с Я-антигеном. Тиосульфат натрия, введенный совместно с вакциной, в 1,5 - 2,5 раза повышает титры антител с 1?-антигеном.

6. Вакцинный штамм 82-Кг обладает выраженной иммуногенной активностью. В опытах на морских свинках, при заражении их через 2 месяца после иммунизации, процент иммунных животных составил 80,0%. При сочетанном введение морским свинкам тиосульфата натрия с вакциной из штамма 82-Кг иммунными были все морские свинки.

7. Количество иммунных животных после ревакцинации морских свинок вакциной из штамма 82-Яг по фону вакцины из штамма 82, при заражении через 3 месяца, составляет 75,0%.

8. Титрованием антиген-экстрактов 8 штаммов, проведенном методом ТФ-ИФА в перекрестных реакциях с кроличьими сыворотками против 8-, БЛ- и К-форм бруцелл установлено, что по антигенной активности с 8- и Я-сы воротками, эти препараты располагаются в следующем порядке: 19,99, 82-Пч, 82, 82-Кг, 82-811г, 82-8г и К-1096. Методом иммуноблотинга установлено, что белковые фракции с молекулярными массами в 24 кД, 11 кД и 5,8 кД являются специфическими антигенами штамма К-1096. Наибольшей антигенной активностью у штаммов бруцелл 82 и 82-Яг обладает белковая фракция с молекулярной массой 15 кД.

4. Практические предложения

1. Иммунобиологические свойства штамма В.аЬоЛиэ 82-Иг позволяют с уверенностью считать его вакцинным, на основание чего был составлен паспорт на штамм.

2. Разработаны Методические указания по дифференциации культур бруцелл штамма В. аЬоЛш 82-Лг от культур вирулентных штаммов и вакцинного штамма 82, утвержденные директором ВНИВИ (г. Казань).

3. Отработаны практические приемы, позволяющие выявить специфические антигенные структуры, специфичные для разных форм бруцелл.

4. Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Ткачев Т.М., Фомин A.M., Салмаков K.M., Уразов Т.Н. и др. Роль специфической профилактики на заключительном этапе борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота. // Матер, международ, научно-практ. конф., 16-18 апреля 2002г. - Покров: ВНИИВВиМ. - 2002. - С. 347-349.

2. Уразов Т.Н., Сафина Г.М., Фомин A.M., Салмаков K.M. и др. Изучение иммуногенеза и иммуногенных свойств новых вакцинных штаммов бруцелл И Ветеринарный врач, - 2004. -№ 1.-С. 13-17.

3. Сафина Г.М., Уразов Т.Н., Фомин А.М., Салмаков K.M. и др. Проверка иммуногенных свойств новых вакцинных штаммов бруцелл на морских свинках с применением культуры штамма 82 в качестве инфицирующего агента // Ученые записки КГАВМ. - 2004. - т. 178. - С. 117124.

4. Уразов Т.Н., Фомин А.М., Галиуллин А.К. Определение минимальной инфицирующей дозы, антигенных свойств, длительности приживаемости и миграции культуры нового вакцинного штамма В .abortus 82-Rr на морских свинках //Матер, научно-произв. конф., посвящ/100-летию профессора Н.Г. Кондюрина. - Омск. - 2004.- С. 155-158.

5. Уразов Т.Н., Хаертынов К.С., Фомин A.M. Использование методов иммуноферментного анализа и иммуноблотинга для дифференциации антител к S- и R- формам бруцелл // Матер, международ, научно-практ. конф., посвящ. 100-летию Баева, Казань: КГУ. - 2004. - С. 396-397.

Подписано к печати ¿V ¿>i~ Формат 60x84/16

Заказ ff Тираж экз. Усл.-печ. л. ^ ff

Бумага офсетная Печать RISO

Центр информационных технологий КГАВМ 420074, Казань, Сибирский тракт, 35.

РНЬ Русскии фонд

2006-4 2534

-1453

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Уразов, Тимур Наилевич

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Общие сведения о возбудителях бруцеллеза сельскохозяйственных животных.

1.2 Антигенная структура бруцелл.

1.3 Химио и антибиотикотерапия бруцеллеза.

1.4 Специфическая профилактика бруцеллеза крупного рогатого скота.

1.5 Иммуномодуляторы при специфической профилактике бруцеллеза.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2 Культурально-морфологические и биохимические свойства штамма В. abortus 82-Rr.

2.3 Разработка методики дифференциации культур бруцелл штамма 82-Rr от культур полевых штаммов и вакцинного штамма 82.

2.4 Остаточная вирулентность, антигенные свойства, длительность приживаемости и контагиозность штамма В. abortus 82-Rr.

2.5 Стабильность свойств штамма 82-Rr при пассажах через организм морских свинок и питательные среды.

2.6 Иммуногенная активность штамма В. abortus 82-Rr при вакцинации и ревакцинации морских свинок и влияние иммуномодулятора на этот показатель.

2.7 Абортогенные свойства штамма В. abortus 82-Rr.

2.8 Спектр белков бруцелл.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Иммунобиологические свойства рифампицинрезистентного штамма В. abortus 82"

Актуальность проблемы. Бруцеллез сельскохозяйственных животных - широко распространенная в недавнем прошлом инфекция, однако продолжающая оставаться актуальной проблемой ветеринарной науки и практики по сей день. Несмотря на то, что в последние десятилетия в стране была проведена большая работа по искоренению данного заболевания, в отдельных регионах все еще сохраняется неблагополучие по бруцеллезу крупного рогатого скота.

Исследования по получению такого штамма были проведены в ФГНУ Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте (ВНИВИ) путем пассирования исходного штамма В. abortus 82 на средах, содержащих рифампицин в увеличивающейся концентрации. В результате был получен рифампицинустойчивый мутант вакцинного штамма В. abortus 82-82Rr. Была изучена его стабильность по сохранению устойчивости к антибиотику при пассаже на искусственных питательных средах без содержания рифампицина. Однако другие свойства штамма 82-Rr и его пригодность в качестве вакцины для применения при экстренной защите животных от бруцеллеза требуют своего изучения.

Все вышесказанное определило направление наших исследований.

Цель и задачи исследований - изучить свойства рифампицинрезистентного штамма B.abortus 82-Rr и установить их соответствие требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам бруцелл. Для реализации намеченной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить иммунобиологические свойства штамма B.abortus 82-Rr.

2. Выявить абортогенные свойства штамма В. abortus 82-Rr на крупном рогатом скоте в производственных условиях.

3. Исследовать белковые спектры ряда штаммов бруцелл методами электрофореза и иммуноблотинга.

Научная новизна. Впервые в лабораторных условиях изучены:

- стимулирующее влияние тиосульфата натрия на иммуногенные свойства вакцины из штамма 82-Rr;

- абортогенные свойства штамма на крупном рогатом скоте;

- белковые спектры штаммов 82-Rr и 82, они имеют аналогичные наборы белковых и серопозитивных фракций; антиген-экстракты этих штаммов проявляют одинаковую антигенную активность в реакциях ТФ-ИФА; наибольшей антигенной активностью у штаммов бруцелл 82 и 82-Rr обладает белковая фракция с молекулярной массой 15 кД; фракции с молекулярными массами в 24, 11 и 5,8 кД являются специфическими антигенами штамма R-1096.

Практическая значимость. Всестороннее и детальное изучение штамма B.abortus 82-Rr позволило с уверенностью считать его вакцинным.

Основные положения, выносимые на защиту:

- Штамм B.abortus 82-Rr соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам бруцелл.

- Вакцина из штамма 82-Rr не абортогенна.

- Отработаны практические приемы, позволяющие выявлять антигенные структуры, специфичные для разных форм бруцелл.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на заседаниях ученого совета ВНИВИ в виде ежегодных отчетов о НИР (2002-2004); международной научно-практической конференции (Покров, ВНИИВВиМ, 2002); научно-производственной конференции, посвященной 100-летию профессора Н.Г. Кондюрина (Омск, 2004); международной научной конференции, посвященной 100 летию Баева (Казань, КГУ, 2004 г.); опубликованы в ученых записках Казанской Государственной академии ветеринарной медицины (Казань, 2004) и журнале «Ветеринарный врач» (2004)

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 5 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 153 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложения.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Уразов, Тимур Наилевич

ВЫВОДЫ

4. Штамм 82-Rr стабилен. Культура этого штамма сохранила свои основные свойства после 10-ти кратного пассирования через организм морских свинок и 50-ти кратного на питательных средах.

5. Штамм слабоагглютиногенен. Иммунизация морских свинок и крупного рогатого скота вакциной из этого штамма сопровождается отрицательными или слабоположительными показателями серологических реакций с бруцеллезными S-антигенами, при одновременно высоких титрах антител РСК с R-антигеном. Тиосульфат натрия, введенный совместно с вакциной, в 1,5 - 2,5 раза повышает титры антител с R-антигеном.

6. Вакцинный штамм 82-Rr обладает выраженной иммуногенной активностью. В опытах на морских свинках, при заражении их через 2 месяца после иммунизации, процент иммунных животных составил 80,0%. При сочетанном введение морским свинкам тиосульфата натрия с вакциной из штамма 82-Rr иммунными были все морские свинки.

8. Титрованием антиген-экстрактов 8 штаммов, проведенном методом ТФ-ИФА в перекрестных реакциях с кроличьими сыворотками против Б-, БЯ- и Я-форм бруцелл установлено, что по антигенной активности с Б- и Я-сыворотками, эти препараты располагаются в следующем порядке: 19,99, 82-Пч, 82, 82-Яг, 82-8Яг, 82-Бг и Я-1096. Методом иммуноблотинга установлено, что белковые фракции с молекулярными массами в 24 кД, 11 кД и 5,8 кД являются специфическими антигенами штамма Я-1096. Наибольшей антигенной активностью у штаммов бруцелл 82 и 82-Яг обладает белковая фракция с молекулярной массой 15 кД. Данные по серопозитивному белковому спектру открывают перспективу дифференциации поствакциональных и постинфекциональных реакций в стадах животных, привитых против бруцеллеза

6. Практические предложения

1. Иммунобиологические свойства штамма В.abortus 82-Rr позволяют с уверенностью считать его вакцинным, на основание чего был составлен паспорт на штамм.

2. Разработаны Методические указания по дифференциации культур бруцелл штамма В. abortus 82-Rr от культур вирулентных штаммов и вакцинного штамма 82, утвержденные директором ВНИВИ (г. Казань) 26.10.2004

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Уразов, Тимур Наилевич, Казань

1. Авилов В.М. Прогнозирование эпизоотического процесса при бруцеллезе крупного рогатого скота в Российской Федерации // Автореф. дис. канд. вет. наук. Санкт-Петербург. - 1992. - 18с.

2. Авилов В.М., Седов В.А. Актуальные проблемы профилактики особо опасных инфекций животных // Ветеринария. 1994. - №6. - С.З -6.

3. Авилов В.М., Селиверстов В.В., Пышнин В.Ф., Шумилов К.В., Калмыков В.В. Бруцеллез животных и его специфическая профилактика // Ветеринария. 1997. - №4. - С. 3 - 13.

4. Авилов В.М., Косилов И.А., Аракелян П.К. Состояние и перспектива специфической профилактики бруцеллеза овец // Ветеринария. -1999. №3. - С. 8 - 12.

5. Авилов В.М., Салмаков K.M., Новицкий A.A. Борьба с бруцеллезом крупного рогатого скота с применением вакцины из штамма 82 // Ветеринария. 2000. - №3. - С. 3 - 7.

6. Александров И.Д., Степанченко В.И., Луговской В.М. Опыт оздоровления крупного рогатого скота от бруцеллеза // Ставропольский ЦНТИ. Инф. лист. - №373 - 88.

7. Алексеев К.К., Лукин А.К., Жуков П.Ф. Значение специфической профилактики в комплексе противобруцеллезных мероприятий // Сб. науч. тр. КВИ. Казань. - 1980. - Т.135. - С.82 - 84.

8. Алиев Э.А., Тевосов A.M., Садыхов С.Ф., Мирза-заде С.Р., Султанова Ф.Г., Гаджиев Р.Ч. Предварительные результаты производственного испытания вакцины из штамма 82 в Азербайджанской ССР //Тез. докл. науч. конференции. Баку. - 1977. -С. 56 - 57.

9. Алиев Э.А. Результаты изучения противобруцеллезной вакцины из штамма 82 на крупном рогатом скоте и буйволах в Азербайджанской ССР// Тез. докл. Всесоюзной конференции. Омск. -20-23 мая. - 1980. - М. - 1980. - С. 91 - 92.

10. Алимов А.М., Фаизов Т.Х. Молекулярная ДНК/ДНК гибридизация для идентификации возбудителей зоонозов // Тез. докл. респ. науч.-произв. конф. «Актуаль. вопр. вет. и зоотехн.». Казань. -1992. -С. 7.

11. Альбертян М.П. Стабильность свойств вакцинного штамма В. abortus 104-М при пассировании через организм нетелей (по данным патоморфологии) // Бюлл. ВНИИЭВ. 1987. Вып.64. - С. 71 - 73.

12. Аракелян П.К., Барабанова Е.Б., Рукин 'А.Т. Оптимизация методов применения вакцины из штамма 19 при бруцеллезе овец // Ветеринария. 1998. - №8. - С. 12 - 15.

13. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях // Гос. изд. мед. литер. JI. - 1962.

14. Баева A.A., Таран И.Ф. Иммуногенные свойства клеточных компонентов бруцелл // ЖМЭИ. -1975. -т.8. С.71-76.

15. Белобаб В.И. Пути совершенствования диагностики и профилактики бруцеллеза у животных // Автореф. дис. .док. вет. наук. Алма-аты. - 1998. - 52с.

16. Белозеров Е.Г. Бруцеллез. JI. - Медицина. - 1985.- 183с.

17. Белозерова Г.А. Получение и испытание вакцины против бруцеллеза из штамма 82-ПЧ // Дис. .док. вет. наук. Казань. - 1993. -448с.

18. Бельченко В.Б. Эффективность иммунизации крупного рогатого скота в зависимости от кратности применения вакцины из штамма 19 // Тр. КазНИВИ. 1966. -Т.12. - С. 29 - 33.

19. Билибин А.Ф. Новые антибиотики при инфекционных болезнях // Клиническая медицина. -1973. № 12. -С 12-23.

20. Билибин А.Ф., Ильинский Ю.А., Грачева Н.М. Современные антибиотики в клинике инфекционных болезней // Антибиотики. -1990. №18.-Т 25.-С 615-619.

21. Бондаренко В.З., Калмыков В.В., Мельниченко Л.П. и др. Апробация вакцины из штамма 75/79-А В. abortus на крупном рогатом скоте // Ветеринария. 1995. - №8. - С. 20 - 23.

22. Борисов Е.М. Серологические реакции у коров после прививки вакциной из штамма 19 // Сб. научн. трудов Куйбышевской НИВС. -1977. Вып.7. - С. 3 - 6.

23. Бронников B.C., Кассал Б.Ю. Совершенствование противобруцеллезных мероприятий в Томской области // Сб. науч. тр. ВАСХНИЛ. Сиб. отд-е, ИЭВС и ДВ. Новосибирск. - 1990. - С. 89 - 95.

24. Бронников B.C., Новицкий A.A. Особенности ответа иммунной системы на разнотипные химические противобруцеллезные вакцины // Туберкулез и бруцеллез с.-х. животных: методы и средства диагност, и профилакт. Новосибирск. - 1994 (1995). - С. 16 - 23.

25. Вайсберг Г.Е., Липкина Т.Н. Лечение инфекционных патологий // Антибиотики.-1979. №12. -С. 1088-1090.

26. Вершилова П.А., Островская H.H. О классификации бруцелл и методах их классификации // ЖМЭИ. 1964. - №7. - С. 5.

27. Вершилова П.А., Голубева A.A., Кайтмазова Е.И. и др. Бруцеллез. М.: Медицина. - 1972. - 439с.

28. Вершилова П.А., Чернышева М.И., Князева Э.Н. Патогенез и иммунология бруцеллеза. М.: Медицина. - 1974. - 245с.

29. Вершилова П.А., Чернышева М.И. Применение реакции пассивной гемоагглютинации для диагностики бруцеллеза у людей и животных в СССР // Бюлл. ВОЗ. 1975. - Т.51.

30. Вдовиченко O.A. Диагностика бруцеллеза // Ветеринарный врач. -№3(7).-2001.-С. 36.

31. Воробьев A.JI. Сравнительная характеристика генетически однородных штаммов бруцелл, полученных воздействием некоторых мутагенов // «Инфекц. и незар. болезни с.-х. жив-х в Казахстане» Сб. науч. тр. КазНИВИ. Алма-ата. - 1983. - С. 40 - 51.

32. Танеева Г.М. Морфологические аспекты коррекции Т- и В-активинами иммунодефицитных состояний телок, иммунизированных вакциной из штамма 82 // Всерос. науч. конф. «Иммунодефициты с.-х. животных».Тез. докл. -М.- 1994. С. 14 - 21.

33. Голубинский Е.П., Осипенко И.И., Солодун Ю.В. и др. Морфологическая характеристика глобулинпродукции при вакцинальном процессе, вызванном туляремийной и бруцеллезной вакцинами // ЖМЭИ. 1991. - №3. - С. 65 - 67.

34. Гордиенко Л.Н., Гертман О.Г. Индикация L-вариантов бруцелл выделенных от крупного рогатого скота на территории Амурской области // Тез. докл. Всесоюз. конф. Новосибирск.-1989.-С.135-136.

35. Григорьева Г.М., Игнатов П.Е. Антигенная структура бруцелл // Успехи соврем. Биол. -1991. Т.З. - Вып.6. - С. 890 - 904.

36. Гринин A.C. Экспериментальное изучение иммунитета у коров после прививки вакцины из штамма 19 // Сб. науч. тр. Омск. - 1964. -Т.22. Вып.2. - С. 69 - 73.

37. Гринин A.C. Скрытое бруцеллоносительство у скота, привитого вакциной из штамма 19 // Ветеринария. 1964. - №10. - С. 25 - 26.

38. Давыдов Н.И. К изучению бруцеллеза у северных оленей // Ветеринария. 1961. - №5. - С. 48 - 54.

39. Дарданов Б.Э. Оптимизация специальных противобруцеллезных мероприятий в условиях рыночных отношений // Автореф. дис. . канд. вет. наук. М. - 1998.

40. Дегтяренко Л.В., Новицкий A.A., Бажин М.А. Изучение диагностической ценности R-антигенов при бруцеллезе в условияхэксперимента // Сб. научн. работ. Сиб. НИВИ. 1978. - №32. - С. 23 -27.

41. Дегтяренко JI.B., Разницына Г.В. Иммунологические показатели сыворотки крови крови крупного рогатого скота при экспериментальном заражении R-формами бруцелл // Научн.-техн. Бюлл. ИЭВС и ДВ. 1985. -Вып.ЗО. - С. 19 - 24.

42. Доброцветова Т.Я., Узбекова Б.Р., Кутырева И.В. Новые макролиды и пептидные антибиотики на 27-й межатраслевой конференции по микробным агентам и химиотерапии // Антибиотики и химиотерапия. -1991. -Т 36. № 2. -С 52-62.

43. Димов С.К., Аракелян П.К., Мирошнин В.П. Противоэпизоотическая эффективность различных схем иммунизации крупного рогатого скота при бруцеллезе // Вопр. эпизоот., диагн. и мероприят. по ликвид. туб. и бруц. жив-х. 1987. - С. 95 - 97.

44. Димов С.К. Теория и практика управления эпизоотическим процессом // Автореф. дис. .док. вет. наук. Новосибирск. - 1993. -45с.

45. Драновская Е.А. Биологические свойства бруцелл и получение диагностического антигена // Автореф. дисс. . док. биол. наук. М.-1976. - З5.с.

46. Егорова JI.C. Диссоциация бруцелл и ее значение в эпидемиологии бруцеллеза // Тез. докл. Всесоюз. научн.-практ. конф. по бруцеллезу. Алма-ата, май 1978. - Москва. - 1978. - С. 34 - 35.

47. Ефимова М.А., Хабибуллин Ф.Ш., Спиридонов Г.Н., Гаффаров Х.З. Комбинированная стимуляция антителогенеза у быков-продуцентов // Матер, междунар. научн. конф., посвящ. 125-летию КГАВМ. Казань. -1998. - 4.1. - С. 38 - 39.

48. Желудков М.М., Чернышева М.И., Павлова И.П., Уинова Н.С. Антигенемия в динамике инфекционного и вакцинного процессов при бруцеллезе // ЖМЭИ. 1992. - №7(8). - С. 71 - 72.

49. Жунушов А.Т., Ким В.И. Эпизоотологическая и экономическая эффективность противобруцеллезных мероприятий // Ветеринария. -1991.-№2.-С. 35-37.

50. Забродин В.А., Вагина JI.A., Никулина В.И., Забродина Е.Ф. Результаты испытания вакцины против бруцеллеза из штамма 82 на северных оленях // Научн. тр. КВИ. Казань. - 1980. - Т.135. - С. 60 - 70.

51. Здродовский П.Ф. Бруцеллез. -М.: «Медгиз». -1953. -244с

52. Зелененький A.M., Задорожный И.Ф. и др. Опыт применения вакцины из штамма 82 против бруцеллеза крупного рогатого скота // Вестник с.-х. науки Казахстана. 1977. №12. - С. 82 - 86.

53. Иванова О.Н. Средства неспецифической иммунокорекции при бруцеллезе морских свинок // Туберкулез и бруцеллез с.-х. животных: методы и средства диагностики и профилактики. Новосибирск. -1994(1995).-С. 43-47.

54. Иванова О.Н. Изучение иммуностимулирующей активности ковидона при экспериментальном бруцеллезе крупного рогатого скота // Методология мероприятий по профилактике и ликвидации болезней с.-х. животных. Новосибирск. - 1995. - С. 93 - 97.

55. Игнатов П.Е., Блинов Н.И., Кирш Ю.Э., Искандаров М.И. Изучение активности иммуномодуляторов // Ветеринария. 1983. - №9. -С. 30-31.

56. Игнатов П.Е. Обоснование разработки иммуноактивных препаратов для лечения и профилактики инфекционных болезней // Автореф. дисс. док. биол. наук. С.-Пб. - 1994. - 31с.

57. Ильясова Г.Х., Угрюмова B.C., Ситдиков Р.И., Сибгатуллин P.C. Иммуноморфогенез у вакцинированных животных при псевдобешенстве на фоне применения иммуностимуляторов // Матер, международ, научн. конф., посвящ. 125-летию КГАВМ. Казань. -1998.-4.1.-С.45.

58. Исхаков 0.3., Карпенко И.Г., Кузьмин Г.Г. Итоги применения противобруцеллезной вакцины из штамма 82 в хозяйствах РФ // Научн. тр. КВИ. Казань. - 1980. - Т.135. - С. 34 - 44.

59. Какоуллин Т.Е., Маловастый К.С. Пути оздоровления хозяйств Иркутской области от бруцеллеза крупного скота // Научн.-техн. бюлл./ ВАСХНИЛ. Сиб. отд-е. - 1982. - Вып. 10. - С. 16 - 20.

60. Кайтмазова Е.И. Изучение лечебного действия сочетания антибиотиков при эксперементальной бруцеллезной инфекции // Антибиотики. 1978. №4. -Т 7. -С 324-327.

61. Калмыков В.В., Бобылев А.Н. Профилактическая эффективность иммунизации крупного рогатого скота адъювант-вакциной из штамма В abortus KB 17/100 // Тез. докл. Междунар. научн. конф., 30-31 мая 2000г. Казань. - 2000. - С. 69 - 71.

62. Касымов Т.К., Ким В.И. и др. Иммуногенность адъювант-вакцины из штамма В abortus КВ/100 // Ветеринария . 2002. - №5. - С. 10-12.

63. Кожанов К.Н., Омашев А.К., Аманов К.А. Лечение бронхопневмонии телят с использованием тимогена // Повышение продуктивности с.-х. животных и совершенстваование мер борьбы с болезнями. Семипалатинск. - 1992. - 4.1. - С. 199 - 201.

64. Коломыцев А.А., Гаврилов В.А., Евсеев В.М., Срибный Н.И. Двунаправленное действие гуморальных факторов // Ветеринария. -1990. №5. - С. 24 - 28.

65. Коляков Я.Е. Ветеринарная иммунология // М. Агропромиздат. -1986.-271с.

66. Кондауров Б.И., Кузнецова Н.Г. Биостимулирующие факторы лимфоидной ткани при вакцинации штаммом 19 // Бруцеллез с.-х. животных. 1989. - С. 69 - 75.

67. Косилов И.А., Карпов Э.Г., Сыртланов P.M. Опыт применения противобруцеллезной вакцины из штамма В-1 в производственных условиях // Сб. научн. тр. СибНИВИ. 1970. - Вып.18. - С. 16 - 21.

68. Косилов И.А. Изменчивость бруцелл и ее значение в проблеме бруцеллеза с.-х. животных // Сб. научн. работ. Омск. - 1974. -Вып.21.- С. 30-34.

69. Косилов И.А., Тягунина Е.А. Соотношение А- и М- антигенов у Brucella abortus шестого биотипа // Сб. научн. Работ Сиб. НИВИ. -Омск.-1970.-т.17. С.7-9.

70. Косилов И.А., Шадрина М.Н. Стабильность биологических свойств R-форм бруцелл // Сб. научн. работ.-СибНИВИ. Омск. - 1975.- Вып. 17. С. 35-38.

71. Косилов И.А. Изменчивость бруцелл и ее значение в проблеме бруцеллеза сельскохозяйственных животных // Сб. раучн. Работ Сиб. НИВИ. -1974. -т.21. -С.3-14.

72. Косилов И.А., Димов С.К., Падалица А.Г. Противоэпизоотическая эффективность вакцины из штамма 82 в общем комплексе противобруцеллезных мероприятий // РЖВ. 1987. - №5. -С. 27.

73. Косилов И.А. Бруцеллез сельскохозяйственных животных. -Новосибирск. -1992. 260с.

74. Коровицкий JI.K. Бруцеллез. Клиника, лечение // Инфекционные болезни. -Киев. -1971. С. 76-90.

75. Котлярова Х.С. Сравнительные данные о вакцинных штаммах бруцелл коровьего типа в опытах на морских свинках // ЖМЭИ. 1950.- №6.- С.13.

76. Кириллов H.K. Антигенная активность клеточных стенок и цитоплазматических фракций бруцелл // Научн. Тр. КГВИ. 1979. -т. 132. -С.52-55.

77. Красиков А.П., Бронников B.C. Влияние иммунорегуляторов на иммуногенность противобруцеллезных препаратов // Бруцеллез с.-х. животных. 1989. - С.75 - 78.

78. Красиков А.П., Иванова О.Н. Способы повышения напряженности иммунитета при бруцеллезе // Туберкулез и бруцеллез с.-х. животных: методы и средства диагност, и профилакт.-Новосибирск. -1994 (1995). С. 32 - 36.

79. Красиков А.П., Иванова О.Н. Влияние стимуляторов на иммуногенность противобруцеллезной вакцины из штамма 19 В. abortus // Методология мероприятий по профилакт. и ликвидации болезней с.-х. животных Новосибирск. 1995. - С. 84 - 90.

80. Куприна Н.П., Земсков A.M. Клинико-патогенетическое обоснование иммунокоррегируюших терапии при гнойных менингитах у детей // Ж. Эпидемиология и инфекц. болезни. 1999. - №1. — С. 54 -59.

81. Курманова К.Б., Камфыанг С., Юдин С.М. Эффективность пефлоксацина при бруцеллезе // Антибиотики и химиотерапия. -1995. — Т 40. №7.-С 39-43.

82. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. М.: Медицина. - 1985. - 256с.

83. Лим A.A., Касьянов А.Н., Маматова З.П. Перспективы конъюнктивальной вакцинации крупного рогатого скота // Ветеринария. 1989. - №4. - С. 30 - 32.

84. Липкина Г.С., Ликина Т.Н., Савина Г.Д., Лаптева H.H., Фомина Г.С. Изучение сочетанного действия пенициллина, тетрациклина и рифампицина. // Антибиотики. -1985. -Т 28. № 8. -С 276-284.

85. Локтева Ф.П. Оздоровление стад крупного рогатого скота от • бруцеллеза с применением вакцины из штамма 19 // Сб. научн. тр.

86. Лен.НИВИ. Вып. 11. - 1965. - С. 14 - 17.

87. Лутфуллин М.Х. Аллергия у животных, привитых живыми вакцинами против бруцеллеза // Дис. . канд. вет. наук. Казань. -1983. - 194 с.

88. Лутфуллин М.Х. Взаимосвязь аллергии и иммунитета, усовершенствование аллергической диагностики и специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота // Дис. . док. вет. наук.-Казань.-417 с.

89. Лутфуллин М.Х., Лутфуллина H.A. Влияние многократной ревакцинации против бруцеллеза на показатели иммунологической перестройки организма // Тез. докл. респуб. Научн. производ. конф.,29-31 мая 1991. Казань. - 1991. - С. 27.

90. Лютинский, С.И., Кречко и др. Влияние тимогена на иммунную систему поросят при неспецифической бронхопневмонии // Ветеринария. -1991. №9. - С. 30 - 32.

91. Маджидов В.М. Лечение синтомицином при бруцеллезе // ш, Сборник научных трудов Ташкенского мед. Института. -1971. Т. 14.1. С. 89-92.

92. Максимов А.М., Гурьянов С.Н., Черницина Н.Г. Сравнительная характеристика тимогена и этимизола при лечении бронхопневмонии у телят // Физиология и патология животных. Уссурийск. - 1993. - С. 87 -90.

93. Малаев Н.Х., Юсупов О.Ю. и др. Опыт оздоровления молочных ферм от бруцеллеза и туберкулеза И Ветеринария. 1997. - №2. - С. 10 -12.

94. Мельниченко В.И. Антигенные и вирулентные свойства вакцинных штаммов бруцелл в эксперименте на морских свинках //

95. Пути ликвид. инфекц. и инваз. Болезней с.-х. животных».- Сиб. отд.• ВАСХНИЛ. Новосибирск. - 1985. - С. 22 - 23.

96. Морякова О.И. Изучение иммунобиологических реакций у крупного рогатого скота, ревакцинированного бруцеллезной вакциной из штамма 19 // Бюлл. н.-т. инф.ВИЭВ. 1957. - №2. - С. 24 - 25.

97. Муллакаев О.Т. Иммуноморфологическая оценка эффективности вакцины из штамма бруцелл 82-ПЧ в зависимости от дозы, кратности и интервалов между вакцинациями // Автореф. дисс. . канд. вет. наук.-Казань. 1991.-28с.

98. Муллакаев О.Т., Салмаков К.М., Белозерова Г.А. Иммуноморфологические изменения в органах и тканях телок, привитых вакциной из штамма бруцелл 82-ПЧ // Ветеринария. 1993. -№5. - С. 24-26.

99. Муллакаев О.Т., Белозерова Г.А., Мальцев Т.С. Количествобляшкообразующих клеток в крови овец, привитых вакцинами из штаммов бруцелл 19, 82 и 82-ПЧ // Матер, респ. научн.-произв.конф. по акт. проб, ветеринарии и зоотехнии. Казань. - 1996. - С. 25.

100. Муллакаев О.Т. Динамика уровня содержания иммунокомпетентных клеток и концентрации ДНК у привитых животных // Матер, научн.-произв. конф. по акт. проблем, ветер, и зоотех. Казань. - 1996. - 26с.

101. Муллакаев О.Т., Белозерова Г.А., Мальцева Т.С. Иммуноморфологическая оценка эффективности противобруцеллезных вакцин из штаммов 19, 82 и 82-ПЧ на овцах // Матер, междунар.научн.конф., посвящ. 125-летию КГАВМ. Казань. - 1998. - 4.1. - С. 55 -56.

102. Муратов С.И. О длительности сохранения реакций у крупного рогатого скота, вакцинированного штаммом 19 // Ветеринария. 1967. -№1. -С. 33-34.

103. Наставление по применению тимогена в ветеринарии // Ветеринария. -1990. №10. - С. 74.

104. Наставление по применению дибазола в ветеринарии // Ветеринария. 1993. - №10. - С. 63 - 64.

105. Никитин A.B., Смолкина Т.В. и др. Влияние рифампицина на синтез антител к 1 фракции вакцины EV // Антибиотики и химиотерапия. -1992. -Т 37. №10. -С 126-131.

106. Никитенко A.M. Роль иммуномодуляторов в коррекции иммунобиологической реактивности и в профилактике гемобластозов животных // Автореф. дисс. док. вет. наук. Казань. - 1990. - 42 с.

107. Никифоров И.П. и др. Реактогенность и эпизоотическая безопасность противобруцеллезной вакцины из штамма 82 // Диагн. и профилакт. инфекц. болезней животных. Сб. научн. тр. СибНИВИ. -Омск. - 1980.

108. Новицкий A.A., Потапов Т.Г., Маскаев H.H. Серологические показатели у коров после иммунизации противобруцеллезными вакцинами по разным схемам и после заражения // Бруцеллез с.-х. животных. 1989. - С. 33 - 40.

109. Объедков Г.А. Патогенез и диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота. Мн: «Урожай». - 1970. - 168 с.

110. Объедков Г.А. Усовершенствование методов борьбы с бруцеллезом // Дисс. док. вет. наук. М. - 1989. - 473 с.

111. Орлов Е.С., Борисович Ю.Ф. Испытание иммуногенных свойств слабовирулентного штамма В. bovis // Бюлл. научн.-техн. информации ВИЭВ.- 1956.-Т.1.-С. 12.

112. Ощепков В.Г. R-, L-формы бруцелл и значение их в эпизоотологии и диагностике бруцеллеза животных // Автореф. дисс. . док. вет. наук. -Л.- 1990.-38 с.

113. Павловский В.П. Применение противобруцеллезной вакцины из штамма 45/20 в Англии // Ветеринария. 1971. - №12. - 8 с.

114. Первушин Б.П.Вопросы иммунологической и микробиологической диагностики бруцеллеза у человека. -М.: «Мед. литература». -1962. -247с

115. Перегудов Т.А., Вождаев Н.С., Бричук П.Ф., Мун К.Б. Морфологические изменения у животных, привитых вакциной из штамма В. abortus 82 // Ветеринария. 1987. - №9. - С. 28 - 30.

116. Петров Р.В., Шишков В.П., Воронин Е.С., Блохина И.Н. Пробиотики и иммуностимуляторы в ветеринарии // Тез. докл. Всесоюз. научн.-техн. конф., 10-12 октября 1990.- Нижний Новгород. М. - 1990. - С.1 - 2.

117. Погорелов H.A., Таран И.Ф. Итоги изучения инагглютинабельных форм бруцелл // В сб.: Зоонозы / бруцеллез, лептоспироз идр. -Ставрополь-на-Кавказе. 1966. - С. 126 - 134.

118. Попов И.А., Калмыков М.Я. О серологическом контроле в оздоровлении крупного рогатого скота от бруцеллеза с применением вакцины из штамма 19 // Труды Волгоград, с.-х. института. 1971. -Т.38.-С. 119-126.

119. Потапов Н.М. Иммунопрофилактика бруцеллеза крупного рогатого скота в Приморском крае // Научн.-техн. бюлл. ИЭВС и ДВ. 1982. -№Ю.-С. 20-25.

120. Прудников B.C. Применение тиосульфата натрия при вакцинации свиней против сальмонеллеза // Ветеринария. 1980. - №11. - С. 29 - 31.

121. Прудников B.C. Тиосульфат натрия в качестве адъюванта // Ветеринария. -1982. №8. - С. 26 - 28.

122. Прудников B.C. Иммуностимуляторы при профилактике болезней поросят // Ветеринария. 1996. - №11. - С. 13 - 17.

123. Руднев Г.П., Михайлова М.М. Особенности клиники и антибиотикотерапии в комплексном лечении бруцеллеза // В кн.: Лечение инфекционных бол. -1970. Вып. 6. М. -С. 164-188.

124. Ровнейко З.П. Оздоровление хозяйств с применением инагглютиногенной вакцины В. abortus 16/4 // Тез. докл. респ. научн.-произв. конф. Гродно, 8-9 сентября 1982. Мн. - 1982. - С. 102.

125. Ростов А.П., Суворов Е.А. Результаты длительных наблюдений по вакцинации крупного рогатого скота противобруцеллезной вакциной из штамма 82 // Тез. докл. Всесоюз. конф. по бруц. и тубер. Омск, 20-23 мая 1980. М. -1980. - С. 90.

126. Ростов А.П. Иммунизация крупного рогатого скота малыми дозами противобруцеллезной вакцины из штамма 82 с целью профилактики абортогенного действия этой вакцины // Ветеринария. 1984. -№11. -С.34.

127. Салмаков K.M. Изучение антигенных и иммуногенных свойств штаммов бруцелл // Уч. записки КВИ. Казань. - 1964. - Т.90. - С. 170.

128. Салмаков K.M. Изыскание и испытание новых вакцинных штаммов бруцелл // Автореф. дисс. . док. вет. наук. Казань. - 1977. — 30 с.

129. Салмаков K.M., Абузаров Ю.Ш., Киршин Б.А. Живая вакцина из штамма 82 и ее эффективность в профилактике и ликвидации бруцеллеза // Научн. тр. КВИ. Казань. - 1980. - Т.135. - С. 27 -34.

130. Салмаков K.M., Абузаров Ю.Ш., Киршин Б.А. О результатах широкого апробирования противобруцеллезной вакцины из штамма 82 // Тез. докл. Респуб. научн.-техн. конф. Казань. - 1980. - С. 110 - 111.

131. Салмаков K.M., Плотникова Э.М. Применение иммуноферментного анализа при ранней диагностике бруцеллеза // Матер, докл. научн.-произв. конф. КВИ по проблеме вет. и жив-ва, 25-27 мая 1994г. -Казань. 1994. - С. 44.

132. Салмаков K.M. Бруцеллез крупного рогатого скота // Ветеринарный врач. 2000. - №1. - С. 41 - 46.

133. Свиридов Л.П., Степанов A.B., Коникова P.E., Устинов Б .С. Изучение влияния иммуностимуляторе на устойчивость белых мышей к возбудителю брюшного тифа // ЖМЭИ. 1980. - №4. - С. 70 - 73.

134. Селиванов A.B. Иммунизация животных живой противобруцеллезной вакциной через неповрежденные слизистые оболочки // Автореф. дисс . . док. вет. наук. -М. 1963. - 34 с.

135. Сергеев И.С. Проблемы туберкулеза // Антибиотики. -1977. №8. -С. 1218.

136. Сибгатуллин P.C., Макаев Х.Н., Акберов Ф.Г., Сафин М.А., Иванов A.B. Эффективность специфической профилактики туберкулеза в сочетании с иммуномодуляторами // Матер, международ. конф., посвящ. 125-летию КГАВМ. Казань. - 1998. - 4.1. - С. 77 - 78.

137. Силиверстов В.В., Шумилов К.В., Калмыков В.В. и др. Результаты производственного испытания адъювант вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота // Ветеринария. 2001. - №6. - С. 10 - 12.

138. Слепцов Е.С., Бровик Е.А. Реакция торможения миграции лейкоцитов как метод оценки состояния клеточного иммунного ответа у крупного рогатого скота при реиммунизации противобруцеллезными вакцинами // Бюлл. ВНИИЭВ. 1989. - Вып.71. - С. 45 - 49.

139. Соколов В.Д., Андреева H.JI., Соколов A.B. Иммуностимуляторы в ветеринарии // Ветеринария. 1992. - №7(8). - С. 49 - 50.

140. Сочнев В.В., Григорьева Г.И., Бацанов Н.П., Филлипов Н.В. и др. Бруцеллы и бруцеллез. Нижний Новгород. - 1998. - 246 с.

141. Старунова Н.П., Авилов В.М. Прогнозирование эпизоотического процесса при бруцеллезе крупного рогатого скота // Сб. научн. тр. НИВИНЗ РФ.- Нижний Новгород. 1993. - С. 17 - 22.

142. Степанов Е.М., Копейкин И.Г. Опыт ликвидации бруцеллеза крупного рогатого скота в Читинской области // В кн.: Эпизоотол. и иммунопроф. болезни с.-х. животных.-Сиб отд-ние ВАСХНИЛ. -Новосибирск. 1983. - С. 20 - 23.

143. Степин B.C., Исхаков Р.Ш., Лавриненко Г.Е, Серологические реакции * у стельных коров, иммунизированных вакциной из штамма 82 //

144. Совершенствование вет. мероприятий в борьбе с инфекц. болезнями с.-х. животных в Казахстане. Алма-Ата. - 1981. - С. 103 - 107.

145. Степин B.C., Урманов Г.Г. Противоорганные аутоантитела у крупного рогатого скота, вакцинированные против бруцеллеза // Вестник с.-х. науки Казахстана. 1982. - №3. - С. 66 - 67.

146. Студенцова В.К. Изучение иммуногенных средств инагглютинабельных штаммов бруцелл // В кн.: Вопросы инфекционной патологии. Алма-Ата. - 1974. - С. 144 - 145.

147. Таран И.Ф., Замахаева Е.И. К оценке перспективности исследований по созданию вакцин из инагглютинабельных культур бруцелл // ЖМЭИ. 1971. - №. - С. 53 - 58.

148. Теш А.И., Чекишев В.М. Влияние иммуностимуляторов на противосальмонеллезный иммунитет у телят // Ветеринария. 1989. -№5. -С. 35 - 37.

149. Теш А.И., Чекишев В.М. Применение тиосульфата натрия для стимуляции противосальмонеллезного иммунитета у телят.щ Новосибирск: ИЭВС и ДВ. 1991. - 4 с.

150. Третяк Н.Т. Оздоровление маралов от бруцеллеза с помощью прививок вакциной из штамма 82 // «Инфекц. болезни с.-х. животных». Новосибирск. - 1983. - С. 21 - 22.

151. Урбан В.П., Рудаков В.В., Карпенко Л.Ю. Эффективность тимогена при профилактике желудочно-кишечных болезней поросят // Ветеринария. -1991. №10. - С. 59 - 60.

152. Урбан В.П., Буянов В.А., Гречухин А.Н. и др. Иммуностимуляторы в системе профилактики болезней свиней // Ветеринария. 1992. - №9 -12.-С. 21 -23.

153. Филиппов Н.В., Костров В.О. План организационно-хозяйственных ветеринарно-санитарных и специальных мероприятий по профилактитке и ликвидации бруцеллеза с.-х. животных на 1991-1995 гг // Волгоград. 1991. - 10 с.

154. Фомин A.M. Разработка и совершенствование средств и методов диагностики и специфической профилактики при бруцеллезе крупного рогатого скота // Автореф. дисс. . док. вет. наук. Казань. - 2001. -36с.

155. Фомин A.M., Салмаков K.M. Эффективность новой системы специальных противобруцеллезных мероприятий // Ветеринарный врач. 2001. - №1(5). - С. 23 - 26.

156. Хавинсон В.Х., Кожемякин А.Л., Волгаров А.П., Платонов В.Г. Протекторный эффект пептидов тимуса и слизистой оболочки трахеи при экспериментальной респираторной гриппозной инфекции // ЖМЭИ. 1993. - №1. - С. 68 - 73.

157. Хазипов Н.З., Кириллов Н.К. Биохимическая характеристика клеточных фракций бруцелл различной вирулентности // Н. тр. КГВИ. -Казань. -1980. -Т.135. -С. 21-27.

158. Хамзин К.А. Напряженность иммунитета у крупного рогатого скота в зависимости от кратности и интервалов введения живой бруцеллезной вакцины из штамма 82 //

159. Хлопина А.Ф. Действие дибазола на иммунобиологические показатели у цыплят бройлеров // Ветеринария. - 1985. - №3. - С. 33.

160. Чевелев С.Ф., Бакулов И.А., Макаров В.В. и др. Макрофаги в системе иммунитета//Ветеринария. 1983. - №6. - С. 27 - 30.

161. Чекишев В.М., Файзрахманов Ш.Р., Киселев Е.А. и др. Дифференциация вакцинированных и больных бруцеллезом животных // Ветеринария. 1993. - №8. - С. 25 - 29.

162. Черкасов В.В., Ростов А.П. Опыт оздоровления хозяйств от бруцеллеза с применением живой вакцины из штамма 82 // Научн. тр. КВИ. 1980. -Т.135.-С. 80-82.

163. Чернышева М.И. Экспериментальное изучение пррцесса формирования иммунитета при бруцеллезе // Автореф. дисс. . док. мед. наук. М. - 1962. - 36 с.

164. Чудная Л.М., Фролов А.Ф., Оксиюк В.Т., Красюк Л.С., Мороз Л.В., Афанасьева С.М. Влияние иммуномодуляторов на выработку антител к дифтерийному антигену у мышей, вакцинированных АКДС-вакциной // ЖМЭИ. 1998. - №1. - С. 54 - 57.

165. Шахов А.Г. К вопросу об иммуногенных свойствах штаммов бруцелл, не образующих антител // Тр. Воронеж. НИВС. 1966. - Вып.5. -С. 57 -61.

166. Шин Н.Г. К изучению химического состава белковополисахаридного комплекса бруцелл // Тр. Казах. НИИ эпидемиол., микробиол. И инфекц. Болезней. -1978. -Т.15. -С.80-84.

167. Шишлянников В.М. Роль селекционно-генетических методов и иммуностимуляции в повышении эффективности борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота. пос. Лесные Поляны (Моск. обл.). - 1994.-18с.

168. Шумилов К.В. Результаты изучения вакцины из штамма 104-М в экспериментальных и производственных условиях // Тез. докл. Всесоюз. конф. по туберкулезу и бруцеллезу. Омск. - 20-25 мая, 1980. - С. 87 - 88.

169. Шумилов К.В., Клочков A.A. Изучение вакцины из штамма B.abortus 104-М в производственных условиях // Труды ВГНКИ. 1980. -Т.30. -С. 171-174.

170. Шумилов К.В., Кальянов А.Н., Ромахов В.А. Результаты изучения вакцинного штамма B.abortus 104-М // Тр. ВИЭВ. 1984. - №8. - С.27 -28.

171. Шумилов К.В., Альбертян М.П., Клочков A.A., Ромахов В.А, Вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота // Ветеринария. -1984. -№12. С. 26 - 28.

172. Шумилов К.В., Улаеевич П.С., Ромахов В.А., Альбертян М.П., Клочков A.A., Косилов И.А. Результаты изучения вакцины из штамма 104-М // Пути ликвид. инфекц. и инвазион. болезней с.-х. животных/ Сиб. отд-е ВАСХНИЛ. Новосибирск. - 1985. - С. 20 - 21.

173. Шумилов К.В., Разработка и усовершенствование средств и методов специфической профилактики и диагностики бруцеллеза животных // Автореф. дисс. док. вет. наук. М. - 1987. - 48 с.

174. Шумилов К.В., Скляров О.Д., Обухов И.Л., Груздев К.Н., Шипулин Г.А., Шипулина О.Ю. Идентификация бруцелл методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) // Ветеринария. 1996. - №12. - С. 19-23.

175. Шуралев Э.А. Изыскание иммуномодуляторов для повышения эффективности бруцеллезных вакцин // Дисс. . канд. вет. наук. — Казань. 1999. - 198 с.

176. Шуралев Э.А. Влияние иммуномодуляторов на иммуногеннез при вакцинации штамма 82-ПЧ бруцелл // Тез. докл. Междунар. научн. конф., 30-31 мая, Казань. 2000. - С. 166 - 168.

177. Щипко С.Г., Малышева JI.A. Изучение иммуногенных свойств вакцины из штамма 82 на свиньях, ревакцинированных в разные сроки после иммунизации // Ветеринария. 1986. - №4. - С. 21.

178. Ющук Н.Д., Ценева Г.Я., Аленушкина Т.В., Куляшова Л.Б. Эффективность применения тимогена при экспериментальной инфекции, вызванной Yersinia enterocolitica // ЖМЭИ . 1995. - №3. -С. 106 - 108.

179. Яковлев И.Н., Ощепков В.Г. Динамика серологических реакций у крупного рогатого скота, привитого инагглютиногенной вакциной изштамма В. abortus В-1 (ВИЭВ) // Сб. научн. тр. Сиб.НИВИ. 1975. -Вып.21. - С. 3 - 12.

180. Ярославцев В.П., Татарчук А.Т., Бояринцева Г.Г., Кудрюкова Л.И. Бруцеллез крупного рогатого скота: профилактика и меры борьбы // Ветеринария.- 1986. №2. - С. 11 - 12.

181. Abdelrahim A.J., Suliman Н.В., Shommein A.M., Bakheit H.A. Preva lenceof bovine brucellosis in dairy herd pre and post isolation of reactors // Bull. Anim. Health Product in Africa. 1990. - Vol.38. - №1. - P. 19 - 211

182. Adams J.M. The organization and expression of immunoglobulin genes // Immunol. Today. 1980. - №1. - P. 10 -17.

183. Akhtar S., Afzal M., Ali S., Khan M.I. Effect of reactor retention on thespread of brucellosis in Jersey cattle and buffalo herds // Rev. scient. techn. Off. Intern. Epizoot. 1990. - Vol. 9. - № 4. - P. 1179 - 1185.

184. Alton G., Jones L., Garcio-Garrillo G., Faunce T. Brucella melitensis REV-1and Brucella abortus 45/20 vaccines in goats immunity // Am. J. Vet. Ree. -1972. Vol.29. - №9. - P. 1741 - 1750.

185. Alton G. The control of bovine brucellosis recent developments // Worldanimal Review. 1981. - 39. - P.l 7 - 25.

186. Avrameas S., Guilbert B. New Dimensinos in Antimicrobial Therapy // Ed. R.

187. K. Root. -New York, 1984. P. 277-293.

188. Badcoul S., Psrsldi M. Stimulating activity Brucella fractions in humanlyohocyte transformationtest // Immunol. -1976. -V. 31. -P. 717-722.

189. Bang B. Infections abortion in cattle // J. campar. Pathol. Therap. 1906.1. P. 19.

190. Banizzi L., Guttinger M., Lopalo L., Ponti W. Mediatori della immunostimlazione nel bovino : attivita biologica del terreno condizionato da limfociti T (TLCM)// Clin. Vet. 1986. - Vol.109. -№3. - P. 243 - 251.

191. Benedek L. Vergleichende Untersuchungen über die antigenstructur von Brucella abortus und Brucella suis mit neuen metoden und diedaranzzuzichenden foigerungen // Acta Vet. Acad. Sei, hung. -1954. -V.4. -P. 231-237.

192. Berkmann Y. Zur immunochemical der somatischen antigene von Enterobacteriaceae // Biochem. Zeitsch. -1964. -V.339. -P.401-405.

193. Bricker B.J., Tabatabai L.B., Deyoe B.L., Mayfield J.E. Conservation ofantigenicity in a 31-kDa Brucella protein // Veter. Microbiol. 1988. -Vol.18.- №3/4. - P. 313 -325.

194. Buck G.M. Studies of vaccination during calphood to prevent bovineinfection abortion // J. Agric. Res. 1930. - №41. - P.667.

195. Calle lanchez M., Betes alvarez J., Fernandez Juares C., Blasco Romerj B.

196. Valor diagnostico de la immunoflurescenia indurecta la brucellosis // Rev. clin. esp. 1997. - 147. - №2. - P.153 - 157.

197. Confer A.W., Hall S.M., Espe B.H. Transient enhancement of the serumantibody response to Brucella abortus strain 19 in cattle treated with levamisole // Amer. J. Vet. Res. 1985. - Vol.46. - №12. - P.2440 - 2443.

198. Corner L., Tabatabai L., Deyoe B. Immunisation of cattle with Brucellaabortus saltextractable proteins // Veter. Microbiol. -1987. Vol.15. - № 4. -P.325.

199. Cotton W.E., Buck G.M., Smith H.E. Efficacy of an avirulent strain of

200. Brucella abortus for vaccinating pregnant cattle // J. Afric. Res. 1936. — 46. -P.315.

201. Caroff M., M.J. Corbel et. al. Antigenic S-type lipopolysaccharide of B brucell abortus 1119-3 // Infeck. Immun. -1984. -V. 46. -P. 384-388.

202. Eisenschenk F.C., Houle J.J., Hoffmann E.M. Serum sensivity of fieldisolates and laboratory strains of Brucella abortus // Am. J. veter. Res. -1995. Vol.56. - №12. - P.1592 - 1598.

203. Douglas J.T. Porins of Brucella species // Infect, and Immunity. -1984.1. V.44.-P. 16-21.

204. Diaz,R.D., Hinsdall R.,. Berman D.T. Antigenic relationship of Brucella ovisand Brucella melitensis // J. Bacteriol. -1967.-V.93.-P.1262- 1268.

205. Dubray G., Bezard G. Isolations of three Brucella abortus cell-wall antigens protective in murine experimental brucellosis // Ann. Rech. Vet. -1980. -V.ll n.4. -P.367- 373.

206. Elberg S.S. Immunization against Brucella infection // Med. J. -1973. -Vol.52. №4. - P.339 - 342.

207. Fayed A.A., Barson S.A., Eiden Z.V.E. Questionable reactions to Rose

208. Bengal test // Assiut veter. med. J. 1995. - Vol.33. - №65. - P. 159 - 163.

209. Felley J.C. Somatic O antigen relationship of Brucella and Vibriochoierae //J.

210. Bact. -1969. V.99. -P.645-649

211. Fensterbank R. Brucellose des bovines et des petits ruminants: diognostic,prophylaxie et vaccination // Rev. sei. et techn. off. int. epizoot. 1986. -Vol.5. - №3. - P. 587 - 603, 605 - 633.

212. Frahm H., Lembke A. Ergebnisse und Probleme der Brucelloseforschung //

213. Kieler milchwirsch, Forschungsler. 1955. - Vol.7. - №5. - P.505.

214. Galassi D., Galassi P., Pelliccioni A., Semprini Primula Clinical resultsobtained in cattle and swine by means of biological immunostimulators // Comp. Immunol., Microbiol, and Infect. Diseases. 1986. - Vol.9. - №2 — 3.-P. 285-295.

215. Grawford R.P., Huber J.D., Sanders R.B. Brucellosis in heifers weaned fromseropositive dams // J. Amer. veter. med. assoc. 1986. - Vol.189. - №5. -P. 547-549.

216. Glenchur M. Antigenicity of some Brucella melitensis cell fractions // J. Bacteriol. -1963. -V. 85. -P.363-368.

217. Guerra M., Pacetti A.-Brit. Med. J., 1982, v.3, -P. 329-331.

218. Gwynn M.N., Rolinson G.N. Ibid., 1980, v 4, -P.596-601.

219. Hampson E. Vaccination // Austral, veter. pract. 1986. - Vol.16. - №1. - P.33 -36.

220. Hamshimoto K. Diagnosis of brucellosis // Trop. Agr. res. ser. Vatabe,

221. Tsukuba. 1980. -№13. - P. 1 -7.

222. Heckf et al. Serologic profile for a cow experi mentally infected with Brucella abortus // Brit, veter. J. -1937. №5. - P. 520 -526.

223. Hülse E. Strain 19 and ofher Brucella vaccines // Proc. Soc. Med. 1958.51.-№5.-P. 377.

224. Immunostimulants // Comp. Immunol. Microbiol. Dis. 1986. - Vol.9. - №2-3.-P. 99-295.

225. Jacotot H., Vallée A. Quelques observations relatives aux mutations dans legeure brucella // Ann. Inst. Pasteur. 1962. - Vol.102. - №1. - P. 109.

226. Janney G., Berman D. Staining intracellular Brucella organisms by means offluorescent antibodies // Am. J. veter. rec. 1962. - №23. - P. 596 - 598.

227. Joint FAOAVHO Expert Committee on Brucellosis. Geneva. - 1986.

228. Larski Z. Trudnosci serologicznej diagnostyki brucelozy budla // Med. weter.- 1996. R.52. - №12. - S. 755 - 757.

229. Macmillan A.P., Greiser-Wilke I., Moening V., Mathias L.A. A competitionenzyme immunoassay for brucellosis diagnosis // Dt. Tierarztl. Wschr. -1990. Vol.97. - №2. - P. 83-85.

230. Marx A. et. al. Immunochemical studies on Brucella abortus1.popolisacharides // Zbl. Bakteriol. Mikrobiol. 1975. -V. 253. №4.-P. 544553.

231. Mahajan N.K., Knlshreshta R.C. Dot-immunobinding assay and itscomparison with other serological tests for brucellosis in aborting ewens // Indian. J. anim. Sc. 1990. - Vol.60. - №10. - P/ 1190 - 1192.

232. McLean G., Hilbink F. Use of dried blood on filter paper in the ELISA for

233. Brucella abortus // J. Immunol. Meth. 1989. - 123. - №1. - P. 39 - 43.

234. Mittal K.R., Tizard J.R. Agglutination tests and their modifications in thediagnosis of bovine brucellosis // Comp. Immunol., microbiol. and infect, diseases. 1983. - 6. - №1 - 8.

235. Moreno E., Jones L.M., Berman D.J. Immunochemical characterization ofrough Brucella lipopolysaccharides // Infect, and Immunol. 1984. - 43. -№3. - P. 779-782.

236. Morgan W.J.B. The serological diagnosis of bovine brucellosis // Veter. Ree. ^ 1967. - Vol.80. - P. 612 - 619.

237. Morgan W.J.B. Reviews of progress of Dairy Science Section E. Diseases ofdairy cattle. Brucellosis // J. Dairy Ree. 1970. - Vol.37. - P. 301 - 308.

238. Moulton J.E., Meyer M.E. The pathogenesis of B. suis infection in guineapigs. Lesions of the spleen, liver, testis and articulations // Cornell, veter. -1958.-Vol.48.-P. 165 -169.

239. Muskens J.A.M., Bercovich Z., Damen C.P.R.M. Serological response of cattle to Brucella allergen after repeated intradermal applications of this allergen // Veter. Microbiol. 1996. - Vol.48. - №1/2. P. 174 -178.

240. Mylrea P.J. The origins of bovine brucellosis in New South Wales anderadication // Austral, veter. J. 1991. - Vol.68. - №6. - P. 189 - 192.

241. Nicoletti P. Adult vaccination // Bovine brucellosis an internationalsymposium. 1977. - P. 201 -208.

242. Nielsen K.H., Henning M.D. Bovine monoclonal antibody specific for

243. Brucella abortus lipopolisaccharide // Veter. Immunol. Immunopathol. -1989. Vol.21. - №3/4. - P. 363 - 372.

244. Olsen S.C., Bricker B., Palmer M.V. et al. Responses of cattle to two dosageof Brucella abortus strain RB-51 serology, clearance and efficacy // Res. in veter. sc. -1999. Vol.66. - №2. - P. 101 - 105.

245. Onate A., Folch H. Comparison of protein components of different speciesand strains of Brucella // J. veter. med. ser. B. 1989. - Vol.36. -№5. - P. 397-400.

246. Palmer M.V., Olsen S.C., Cheville N.F. Safety and immunogenicity of

247. Brucella abortus strain RB-51 vaccine in pregnant cattle // Am. Veter. rec. -1997. Vol.58. - №5. - P. 472 - 477.

248. Parnas I., Chodkowski A. Zmiennose paleczck Brucella koleke ciji krajowej

249. Acta microbial., polon. 1956. - Vol.5. - №3 - 4. - P. 371.

250. Ralston J., Elberg S. Serum-mediated immune cellular responses to Brucellamelitensis // J. Infect. -1971. -V. 123. P. 507-518.

251. Reaveley D.A., Bürge R.E. Walls and membranes in bacteria// Adv.

252. Microbial. -1972. V. 7. -P. 2-71.

253. Renoux G., Plommet M., Philippon A. Transmission of Brucella abortusinfection from one generation to another by apparently normal heifers //

254. WHO (Bruc.). 1971. - P. 323.«

255. Renoux G., Renoux M. Effect immunostimulant dun imidothiazole dans1 immunisation des souris cotre 1 infection par Brucella abortus // C.R. Acad. Sei. Paris. 1971. - №2720. - P. 349 - 350.

256. Renoux G., Renoux M. Stimulation of anti-Brucella Vaccination in mice bytetramisole, a phenylimidothiazole salt // Infect. Immunol. 1973. - №8. 1. P. 544-548.

257. Rise C.E. Antibodies in brucellosis // Proceed New Zealand Soc. of An.

258. Prod, 1969. - Vol.29. - P. 14 - 16.

259. Rise C.E., Boyes B. Serum immunoglobulins in bovine brucellosis // N. Z.

260. Veter. J. 1971. - Vol. 19. - P. 146 - 151.

261. Rose J.E., Roepke M.H. Physicochemical studies on postvaccinal brucellaagglutinis in bovine serum // Am. J. Veter. Res. 1964. - Vol. 25. - P. 325 -329.

262. Santos J.M., Verstreate D.R. Outer membrane proteins from rough strains offour Brucella species // Infect. Immun. 1984. -V.46. -P.188-194.

263. Tabatabai L.B., Deyoe B.L., Patterson J.M. Immunogeniciny of Brucellaabortus saltextractable proteins // Veter. Microbiol. 1989. - Vol. 20. - №1. -P. 49-58.

264. Ktenidou-Kartali S., PapcUkonomou K., Papanagiotou J. et. al. J.A.M.A., 1974,. 217, -P. 913-915.

265. Kreutzer D. Chemical Chararacterisaeion and biological proteins oflipopolysaccharide isolated from smooth and rough strains of Brucella abortus // Infect. Immun. -1979. -V. 23. -P.811-818.

266. Valette L. Prophylaxie medicate de la brucellose animal // Rev. Elevage

267. Med. Veter. 1987. - 40. - 4. - P. 351.

268. Verstreate D.R., Winter A.J. Comparison of sodium dodecyl suifate

269. Polyacrylamide gel electrofhoresisprofiles and antigenic relatedess among outer mmembrane proteins of Brucella abortus // Infect. And Immunity. -1984.-V. 46.-P. 182-187.

270. Wilkinson P.C. Immunoglobulin patterns of antibodies against Brucella inman and animals // J. Immunol. 1966. - Vol. 96. - P. 457 - 462.

271. Winter A.J. Outer membrane proteins of Brucella // Ann. Inst. Paster. -1987.1. V. 138. -P. 87-90.

272. Wilson J., Miles A.The serological differentiation of smooth strains of the

273. Brucella group // Brit. J. Exp. Pathol. -1932. -V/13. -P. 1-13.

274. Wyckoff J.H., Howland J.L., Confer F.W. Comparison of Brucella abortusantigen preparations for in vitro stimulation of immune bovine T-limfocite cell lines // Veter. Immunol. Immunopathol. 1993. - Vol. 36. - №1. - P. 45 -64.

Информация о работе

Уразов, Тимур Наилевич
кандидата биологических наук
Казань, 2005
ВАК 03.00.07

Диссертация

Иммунобиологические свойства рифампицинрезистентного штамма В. abortus 82 - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно