Иммунобиологические свойства стрептомицинрезистентного штамма B. abortus 82-Srи его применение при сочетанной защите животных от бруцеллеза

Крючков, Роман Александрович

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Иммунобиологические свойства стрептомицинрезистентного штамма B. abortus 82-Srи его применение при сочетанной защите животных от бруцеллеза
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Иммунобиологические свойства стрептомицинрезистентного штамма B. abortus 82-Srи его применение при сочетанной защите животных от бруцеллеза"

На правах рукописи

КРЮЧКОВ РОМАН АЛЕКСАНДРОВИЧ

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА СТРЕПТОМИЦИНРЕЗИСТЕНТНОГО ШТАММА 82-SR В. ABORTUS И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ СОЧЕТАННОЙ ЗАЩИТЕ ЖИВОТНЫХ ОТ БРУЦЕЛЛЁЗА

06.02.02- ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология " ~

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Г\ К]

Казань - 2010

003490908

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» - (ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»)

Научный руководитель: Заслуженный ветврач РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Фомин Алексей Максимович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Хисматуллина Наиля Анваровна доктор ветеринарных наук, профессор Харитонов Михаил Васильевич

Ведущее учреждение: Всероссийский научно-исследовательский

институт бруцеллёза и туберкулёза животных, г. Омск

Защита состоится «_» _2010 года в _ "часов на заседании

диссертационного совета Д-220.012.01 при - ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (420075, г. Казань, Научный городок-2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань)

Электронный вариант автореферата и текст объявления о защите размещен на сайте организации: www.vnivi.ru

Автореферат разослан «_»_2010 года.

Учёный секретарь диссертационного совета

В.И. Степанов

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальность проблемы. Инфекционные болезни, в частности бруцеллёз, являются одним из факторов, сдерживающих развитие животноводства. Экологические особенности возбудителя бруцеллёза крупного рогатого скота, обусловленные хроническим течением болезни, способствуют, при отсутствии должного контроля, его широкому территориальному распространению, которое сопровождается огромным экономическим ущербом и угрожает здоровью людей.

Меры борьбы с этим заболеванием основаны на выявлении больных животных, носителей возбудителя, с последующей их изоляцией, убоем и выполнением всего комплекса организационно-хозяйственных, ветеринарно-санитарных и специальных мероприятий, направленных на уничтожение бруцелл на объектах внешней среды, в продуктах, получаемых от скота, и создания специфической защиты поголовья (Ощепков, В. Г., 1990; Королёва Л. и др., 2002; Кассал Б. Ю., Новицкий А. А., 2002).

Бруцеллёз относиться к одной из наиболее опасных болезней, вызывающая большие потери среди домашних и сельскохозяйственных животных и представляющая серьёзную угрозу здоровью человека (Иванов A.B., Салмаков K.M. и др., 2009).

В случае использования патогенных штаммов возбудителя бруцеллёза необходима экстренная защита животных. Известно, что после применения существующих противобруцеллёзных вакцин иммунитет вырабатывается в течение 2-х недель, что не соответствует требованиям экстренности. Использование только антибиотикотерапии не предохраняет животных от последующего заражения или перезаражения. При одновременном применении специфической профилактики с антибиотиками, последние губительно действуют не только на вирулентную, но и на вакцинную культуру бруцелл. Отсюда возникает необходимость в получении вакцинного штамма бруцелл, который был бы устойчив к антибиотику, применяемому для защиты животного, и сохранил при этом иммуногенные свойства.

Работа по получению таких штаммов проводится в ФГУ "ФЦТРБ-ВНИВИ" путём пассирования исходного штамма В. abortus 82 на средах, содержащих

антибиотики в увеличивающейся концентрации. В результате были получены и изучены различные антибиотикорезистентные штаммы бруцелл (Фомин A.M., Салмаков K.M. и др., 2006, 2007, 2008, 2009), в том числе был получен стрептомицинрезистентный штамм 82-Sr и изучена его стабильность по сохранению устойчивости к антибиотику при посевах на искусственных питательных средах без содержания стрептомицина. Однако другие свойства штамма 82-Sr и его пригодность в качестве вакцины при экстренной защите животных от бруцеллёза требуют изучения.

Всё вышеуказанное определило направление наших исследований.

1.2 Цель и задачи исследований. Цель исследований - изучить иммунобиологические свойства стрептомицинрезистентного штамма 82-Sr В. abortus и определить его пригодность в качестве вакцины при сочетанной защите животных от бруцеллёза.

Для достижения' поставленной цели решались следующие задачи:

1. Изучить иммунобиологические свойства штамма 82-Sr В. abortus.

2. Определить абортогенность штамма 82-Sr В. abortus.

3. Разработать способ сочетанной защиты морских свинок от бруцеллёза с помощью противобруцеллёзной вакцины из штамма 82-Sr и стрептомицина.

1.3 Научная новизна. Впервые в лабораторных условиях изучены иммунобиологические свойства штамма 82-Sr В. abortus, установлена, его слабая агглютиногенность по S-антигену, приживаемость в организме морских свинок в течение 3-х месяцев, невысокая остаточная вирулентностью. Указанный штамм бруцелл вызывает генерализованный вакцинный процесс в дозе 100 тыс. м.к., сохраняет стабильность свойств при 10-кратных пассажах через организм морских свинок и 52-кратных пассажах - на искусственных питательных средах, обладает достаточно высокой иммуногенной активностью и отсутствием абортогенных свойств на крупном рогатом скоте.

Разработан способ сочетанной защиты морских свинок от бруцеллёза.

1.4 Практическая значимость. Всестороннее и детальное изучение штамма 82-Sr В. abortus позволило считать его вакцинным. Полученные данные по изучению иммунобиологических свойств стрептомицинустойчивого штамма 82-Sr

В. abortus послужили основой при разработке модели экстренной сочетанной защиты лабораторных животных от бруцеллёза.

1.5 Основные положения, выносимые на защиту:

- Иммунобиологические свойства вакцинного штамма 82-SrB. abortus;

- Влияние иммуномодулятора тиосульфата натрия на иммуногенез и иммуногенные свойства штамма 82-Sr В. abortus в условиях эксперимента;

- Отсутствие абортогенности противобруцеллйзной вакцины из штамма 82-Sr;

- Способ экстренной сочетанной защиты морских свинок от бруцеллёза.

1.6 Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на заседаниях ученого совета ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» в виде ежегодных отчётов о НИР (2006-2008); Республиканском конкурсе научных работ студентов на соискание премии им. Н.Э. Лобачевского (Казань, КГАВМ им. Н.Э. Баумана, 2006); научно-практической конференции молодых учёных и специалистов (Казань, ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», 2007); научно-практической конференции «Научный потенциал - аграрному производству (Ижевск, 2008);

1.7 Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 7 научных работ, в том числе 2 - в реферируемых ВАК РФ изданиях.

1.8 Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 158 страницах компьютерного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов собственных исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы (всего 213 источников, в том числе 47 - иностранных) и приложения. Диссертация иллюстрирована 25 таблицами.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы исследовании

Работа выполнена в 2005-2009 гг. согласно государственному плану научных исследований (№ госрегистрации 01200202602) в лаборатории по изучению

бруцеллёза ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», а также в производственных условиях в Самарской области.

В экспериментах использовали 481 морскую свинку, живой массой 350-400 г и 6 голов крупного рогатого скота, 450-550 кг.

В ходе проведения исследований применяли культурально-морфологические, серологические, бактериологические, иммунологические методы.

С целью изучения показателей гуморального иммунитета в исследованиях применяли серологические реакции: роз - бенгал пробу (РБП) с роз - бенгал антигеном, агглютинации (РА) и связывания комплемента (РСК) с единым бруцеллёзным и R-антигенами. Использовали роз - бенгал и единый бруцеллёзный антигены Щёлковского биокомбината и R-антиген, приготовленный в ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» из штамма R-1096 В. abortus.

Культурально-морфологические свойства штамма изучали по общепринятой схеме ФАО/ВОЗ. В число рекомендованных ФАО/ВОЗ методов вошли комплекс тестов: микроскопия, скорость и характер роста на элективных питательных средах - печеночно-пептонном глюкозо-глицериновом агаре (ППГГА), печеночно-пептонном глюкозо-глицериновом бульоне (ППГГБ), потребность в повышенном содержании ССЬ, способность образовывать H2S, лизис фагом «Тб», рост на питательных средах с красками (тионин 1:25, 50 и 100 тыс., фуксин 1:50 и 100 тыс.), окраска колоний по Уайт-Вилсону, чувствительность к стрептомицину, антигенные свойства культур с использованием специфических бруцеллезных S- и R-сывороток и монорецепторных «А» и «М» сывороток, проба термоагглютинации, проба с акрифлавином (трипафлавином), проба с эритритолом.

Бактериологический метод исследований использовали для выделения культур из организма привитых и зараженных животных. Для этого от опытных и контрольных животных после умерщвления делали высевы из парных подчелюстных, заглоточных, паховых лимфатических узлов, парааортального лимфатического узла, печени, селезенки, костного мозга на питательные среды: ППГГА, ППГГБ, эритрит - агар. Посевы инкубировали в термостате при (37,0±0,5)°С в течение 2-х недель. Выделенные культуры бруцелл идентифицировали в реакции агглютинации на стекле с применением S- и R-

сывороток. Определяли индекс инфицированности (ИИ), индекс веса селезенки (ИВС) и процент иммунных животных.

Исследования клеточного звена иммунитета проводили с использованием реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ), предложенной М.М. Авербахом с соавт. (1974) в нашей модификации (бруцеллин вместо туберкулина, талцефт вместо пенициллина).

Исследования проводили в 7 этапов. На первом этапе экспериментов изучали культурально-морфологические свойства штамма 82-Sr В. abortus и разрабатывали методику дифференциации культур бруцелл из штамма 82-Sr от культур вирулентных штаммов и вакцинного штамма 82. На втором этапе исследований в опытах на морских свинках определяли остаточную вирулентность, длительность приживаемости, антигенные свойства и контагиозность штамма. Третий этап работь! заключался в изучении стабильности штамма В. abortus 82-Sr при его последовательных пассажах через организм морских свинок и искусственных питательных средах. На четвёртом этапе исследований определяли оптимальную иммунизирующую дозу вакцины из штамма 82-Sr В. abortus для морских свинок. На пятом этапе экспериментов провели изучали иммуногенез и иммуногенные свойства штамма 82-Sr В. abortus при вакцинации и ревакцинации конвенциональных и морских свинок свободных от патогенной микрофлоры (СПФ) и влияния иммуномодулятора на эти показатели. Шестой этап работы заключался в изучении абортогенных свойств противобруцеллёзной вакцины из штамма 82-Sr на крупном рогатом скоте в производственных условиях. На седьмом этапе работы провели эксперименты по экстренной сочетанной защите морских свинок от экспериментального бруцеллёза путём санации организма заражённых животных стрептомицином и одновременного создания иммунитета введением вакцины из штамма 82, резистентного к стрептомицину.

Все полученные данные подвергали статистической обработке по методике, описанной М.П. Ашмариным и А.Н. Воробьёвым (1962), с выведением среднего арифметическою (VI), квадратического отклонения (5-сигма) и ошибки среднего арифметического (±м).

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Культурально-морфологические к биохимические свойств штамма 82-Sr В. abortus. Изучение свойств вакцинного штамма 82-Sr В. abortus проводили по общепринятой схеме ФАО/ВОЗ. В качестве контроля использовали культуры бруцелл вакцинных (В. abortus 19 (S-форма), 82 (SR-форма), R-1096 (R-форма), вирулентного В. abortus 54-М ВГНКИ и референтных (В. abortus 544, В. suis 1330, В. melitensis 16 М) штаммов.

В результате исследований установлено, что штамм 82-Sr В. abortus хорошо растёт на печёночных средах в аэробных условиях, не образуя при этом сероводород. Показывает отрицательную пробу термоагглютинации и положительную с акрифлавином. Реагирует положительно в РА на стекле с S- и R-бруцеллёзными и "А" монорецепторной сыворотками, при отрицательных показателях с "М"-сывороткой. Растёт в разведениях тионина 1:25, 1:50, 1:100 и фуксина 1:50, 1:100, с концентрациями пенициллина 0,5, 5,0, 10,0, 50,0 ЕД/мл и со стрептомицином 5 мг/мл. А с рифампицином и тетрациклином рост отсутствует. Показывает рост в присутствии эритритола, лизируется фагом "Тб" и образует SR-форму колоний при росте на питательной среде в чашках Петри. Основными отличительными признаками штамма 82-Sr от штамма 82 является его способность расти на средах со стрептомицином и отсутствие сероводородообразования.

3.2 Остаточная вирулентность, антигенные свойства, длительность приживаемости и коитагиозность штамма 82-Sr В. abortus. Для изучения остаточной вирулентности и антигенных свойств штамма 82-Sr В. abortus провели опыт на 40 морских свинках, разделенных на 8 групп, по 5 голов в группе. Животных первой группы иммунизировали вакциной из штамма 82-Sr подкожно в области паха в объеме 1 мл с содержанием 10 м.к., второй - 100 м.к., третьей - 1000 м.к., четвертой - 10 тыс. м.к., пятой - 100 тыс. м.к., шестой - 500 тыс. м.к., седьмой - I млн. м.к., восьмой - 1 млрд. м.к. Спустя 1 месяц после вакцинации, животных подвергали умерщвлению с проведением серологического и бактериологического исследований.

Результаты исследований показали, что штамм 82-Sr В. abortus обладает невысокой остаточной вирулентностью, начинает приживаться в организме морских свинок лишь с дозы 1000 м.к. Генерализованный вакцинный процесс наблюдался от дозы 100 тыс. м.к. бруцелл.

Серологические исследования морских свинок показали иннагглютиногенность штамма по S-антигену, то есть все реакции с S-антигенами были отрицательными (РБП, РА, РСК). Реакция же с R-антигеном в РСК была положительной., что является важным показателем при дифференциации больного животного от вакцинированного. Как и при бактериологическом исследовании, здесь также не установили прямо пропорциональной зависимости между дозой культуры и уровнем антител, но, тем не менее, наиболее высокий титр антител в сыворотках крови, был у животных, которым вводили максимальную дозу бруцелл - 1 млрд. м.к.

Для изучения длительности приживаемости культуры вакцинного штамма 82-Sr в организме морских свинок, его безвредности и контагиозности использовали 26 морских свинок, из них 13 привили культурой бруцелл из штамма 82-Sr подкожно в области паха в дозе 1,5 млрд. м.к. в объеме 1 мл. С целью изучения миграции культуры бруцелл от привитых к непривитым, в клетку с вакцинированными животными подсадили 13 голов интактиых морских свинок.

Во все сроки исследований сыворотки как иммунизированных морских свинок, так и подсаженных в реакции с единым бруцеллёзным антигеном давали отрицательный результат. При этом титры антител в РСК с R-антигеном были положительными во все сроки исследования у иммунизированных животных и имели тенденцию к снижению. Проведённое бактериологическое исследование показало, что штамм выделялся в течение трёх месяцев. Все подсаженные морские свинки во всех сроках исследований показывали отрицательные результаты серологического и бактериологического контроля.

Таким образом, культура вакцинного штамма 82-Sr приживалась в организме в течение 3-х месяцев. Изучаемый штамм бруцелл не контагиозен. Миграция его от привитых животных на непривитых не отмечена.

3.3 Стабильность свойств штамма 82-Sr В. abortus при пассажах на искусственных питательных средах и через организм морских свинок. Для

изучения биологических свойств стрептомицинрезистентного штамма 82-Sr В. abortus, его 52-х кратно пассировали через питательные среды, не содержащие стрептомицин. Для контроля антибиотикорезистентности штамма, после каждого пассажа, пересевали на среду с концентрацией стрептомицина 5 мг на 1 мл.

Культуры 52-го пассажа проверяли в РА на стекле с S- и R-бруцеллезными сыворотками. После проведенных пассажей проводили сравнительное изучение культурально-морфологических свойств исходной культуры и культуры 52-го пассажа.

Было установлено, что штамм 82-Sr в процессе 52-х кратных пассажей через питательные среды без содержания стрептомицина сохранил способность расти на средах, содержащих стрептомицин в количестве 5 мг/мл. Исходная культура и культура 52-го пассажа по культурально-морфологическим показателям не отличались.

Параллельно проводили последовательные пассажи его через организм морских свинок. Использовали 22 головы морских свинок. Животным в количестве 2-х голов подкожно в области паха вводили взвесь культуры штамма 82-Sr в дозе 1, 5 млрд. м.к. в объеме 1 мл. Спустя 21 день после вакцинации, морских свинок убивали с проведением серологического и бактериологического исследований. Выделенную от морских свинок культуру вводили вновь другим животным и т.д. Всего проведено 10 пассажей.

Совместно с этими исследованиями проводилась РБТЛ, данные которой сравнивали с показателями серологических реакций.

После проведенных пассажей проводили сравнительное изучение культурально-морфологических свойств исходной культуры и пассажных культур. При исследовании различий между ними выявлено не было.

При 10-кратных пассажах через организм морских свинок было установлено, что штамм B.abortus 82-Sr стабильный. Как исходная культура, так и культура 10-го пассажа не вызывали в организме привитых морских свинок синтеза S-антител. Все выделенные культуры реагировали положительно в РА на стекле как с S-, так и

с R-бруцеллёзными сыворотками, а также сохранялся относительно ровный уровень количественных показателей бластных клеток в РБТЛ.

Сравнительный анализ показал, что при сопоставлении данных РБТЛ и РСК с R-антигеном за период проведения опыта отмечена их коррелятивная зависимость.

3.4 Разработка оптимальной иммунизирующей дозы штамма 82-Sr В. abortus для морских свинок. Целью четвёртого этапа работы было определить оптимальную иммунизирующую дозу вакцины из штамма 82-Sr В. abortus для морских свинок. Животных в количестве 40 голов разделили на 4 группы, по 10 голов в группе. Животных первой группы иммунизировали вакциной из штамма 82-Sr подкожно в области паха в объеме 1 мл, в дозе 100 тыс. м.к., второй группы -в дозе 1 млрд. м.к., третьей - 1,5 млрд. м.к. и четвёртой - 2 млрд. м.к. на голову.

Через 15 и 30 дней с момента прививки у 3-х животных из каждой группы брали кровь из ушной вены для проведения серологического исследования, а через 2 месяца поводили их умерщвление, с проведением серологического и бактериологического исследований.

Через 3 месяца после вакцинации оставшихся морских свинок заражали культурой вирулентного штамма 54-М ВГНКИ В. abortus в дозе 50 м.к. в качестве контроля использовали 5 интагстных морских свинок. Умерщвление морских свинок проводили через 30 дней после заражения с проведением серологического и бактериологического исследований.

В результате экспериментов установлено, что вакцинный штамм 82-Sr В. abortus, взятый для иммунизации морских свинок в дозах 100 тыс., 1 и 2 млрд. м.к., показал слабый защитный эффект биопрепарата. Доза вакцинного штамма 1,5 млрд. м.к. создаёт иммунитет более высокой напряжённости, равный 60% (через 2 месяца после иммунизации), при заражении их вирулентным штаммом 54-М ВГНКИ В. abortus.

3.5 Иммуногенные свойства штамма 82-Sr В. abortus при вакцинации и ревакцинации конвенциональных и СПФ морских свинок и влияние иммуномодулятора на эти показатели. На пятом этапе в задачу исследований входило изучение иммуногенеза и иммуногенных свойств

стептомицинрезистентного штамма 82-Sr В. abortus при вакцинации и ревакцинации конвенциональных морских свинок.

Морских свинок в количестве 52 голов разделили на 4 группы, по 13 голов в группе. Животных первой и второй групп прививали противобруцеллёзной вакциной из штамма 82-Sr подкожно в области паха в дозе 1,5 млрд. м.к. в объёме 1 мл на фосфатном забуференном физиологическом растворе хлористого натрия. Морских свинок третьей и четвёртой групп иммунизировали вакциной из штамма 82 в дозе 1 млрд. м.к. в 1 мл. Через 15 дней, I. и 2 месяца после вакцинации у 3-х животных из каждой группы брали кровь из ушной вены для серологического исследования. Через 2 месяца после вакцинации животных первой и третьей групп повторно вакцинировали (ревакцинировали). Животных первой группы - вакциной из штамма 82-Sr в дозе 1,5 млрд. м.к. в 1 мл, а третью - вакциной из штамма 82 в дозе I млрд, м.к. в 1 мл. Через 15 дней и 1 месяц после ревакцинации у 3 животных из каждой группы брали кровь из ушной вены для серологического исследования. По истечении 2 месяцев после ревакцинации и 4 месяцев после вакцинации (перед заражением) по 3 животных из каждой группы подвергали умерщвлению с проведением серологического и бактериологического исследований. Оставшихся и контрольную группу интактных морских свинок заражали культурой вирулентного штамма 54 - М ВГНКИ В. abortus в дозе 50 м.к. Умерщвление животных проводили через 30 дней после заражения с проведением серологического и бактериологического исследований.

Исходя из полученных результатов, пришли к заключению, что однократная иммунизация морских свинок вакциной из штамма 82-Sr В. abortus создаёт иммунитет у 50% животных (через 4 месяца после иммунизации), а ревакцинация повышает количество иммунных животных до 77,7%.

Следующей задачей данного этапа было изучение напряжённости иммунитета к бруцеллёзу у конвенциональных и СПФ морских свинок.

Животных иммунизировали суспензиями, полученными с 3-х суточных агаровых культур штаммов В. abortus 82-Sr и 82, приготовленных на фосфатном забуференном растворе. Каждой вакциной было привито по 20 СПФ и по 18 конвенциональных морских свинок. Вакцинацию проводили подкожно в область правого паха в объёме 1 мл в дозе 1,5 млрд. м. к. Через 15 дней, 1, 2 и 3 месяца

после вакцинации у 3-х животных каждой группы брали кровь из ушной вены для серологического исследования. По истечении 4-х месяцев после прививки (перед заражением) по 3 животных из каждой группы подвергали умерщвлению с проведением серологического и бактериологического исследований. Оставшихся морских свинок заражали культурой вирулентного штамма 54-М ВГНКИ В. abortus в дозе 50 м. к. Умерщвление животных проводили через 30 дней после заражения с проведением серологического и бактериологического исследований.

В результате проведённых экспериментов установлена достаточно высокая иммуногенная активность вакцинного штамма 82-Sr В. abortus: 71,4% конвенциональных и 62,5% СПФ морских свинок противостояло заражению, через 4 месяца после иммунизации.

На следующем этапе исследований изучали воздействие тиосульфата натрия в качестве иммукомодулятора на иммуногенез и иммуногенные свойства вакцины из штамма 82-Sr В. abortus при сочетанном их введении морским свинкам.

Морских свинок в количестве 50 голов разделили на 5 групп, по 10 голов в группе. Первую группу животных прививали вакциной из штамма 82 подкожно в области паха в дозе 1 млрд. м.к. Вторую группу прививали этой же вакциной с тиосульфатом натрия. С этой целью брати 1 мл 2-х млрд. взвеси бруцелл и 1 мл 30% стерильного раствора тиосульфата натрия на фосфатном забуференном физиологическом растворе, смешивали их и 1 мл смеси, вводили морским свинкам подкожно в области паха. В итоге, каждое животное получало 1 млрд. м.к. бруцелл и 150 мг тиосульфата натрия в пересчёте на сухое вещество. Животных третьей группы иммунизировали вакциной из штамма 82-Sr в дозе 1,5 млрд. м.к. в 1 мл, четвёртой группы - этой же вакциной с тиосульфатом натрия. Морских свинок пятую группу оставляли интактными. Через 15 дней, 1 и 3 месяца после вакцинации у 3-х животных каждой группы брали кровь из ушной вены для серологического исследования. По истечении 3-х месяцев оставшихся морских свинок заражали культурой вирулентного штамма 54-М ВГНКИ В. abortus в дозе 50 м. к. Умерщвление животных проводили через 30 дней после заражения с проведением серологического и бактериологического исследований. Обсеменённость органов и лимфатических узлов в контрольной группе составляла 91,3±4,0%, в группе животных, иммунизированных вакциной из штамма 82-Sr с

тиосульфатом натрия 43,3±19,5%, а в группе привитых вакциной из штамма 82 с тиосульфатом натрия 24,0±9,4%. Вакцины из штаммов 82-Sr и 82 без тиосульфата натрия создавали 100%-ую невосприимчивость животных к бруцеллёзу.

По итогам определения индекса инфицированное™ организма животных вирулентной культурой бруцелл вычисляли иммуногенность биопрепаратов.

Полученные данные свидетельствуют о том, что тиосульфат натрия, введенный совместно с вакциной, не влияет на показатели серологических реакций с S-антигенами, но снижает титры антител с R-антигеном и значительно снижает иммуногенные свойства вакцины.

В целом считаем, что применение тиосульфата натрия на морских свинках сочетано с вакциной из штамма 82-Sr нецелесообразно.

3.6 Изучение абортогенности штамма 82-Sr В. abortus для крупного рогатого скота. На шестом этапе работы изучали наличие абортогенных свойств нового антибиотикорезистентного штамма 82-Sr В. abortus на беременных животных, не иммунизированных ранее противобруцеллёзными вакцинами, а также динамику антителообразования с применением S- и R-антигенов.

В опыте использовали 6 нетелей, разделенных на 2 равные группы. Перед введением вакцины всех животных проверили на беременность путём ректального исследования (на втором месяце беременности), а также исследовали кровь в серологических реакциях на бруцеллёз. В качестве контроля использовали противобруцеллёзную вакцину из штамма 82. Вакцины вводили подкожно в область средней трети шеи в объёме 5 мл в дозах 150 млрд. м. к. для вакцинного штамма 82-Sr и 100 млрд. м.к. для вакцины из штамма 82, разводили их биофабричным разбавителем для сухих бруцеллёзных вакцин. Наблюдения за животными осуществляли в течение 5-ти месяцев, обращали внимание на наличие или отсутствие абортов. Кровь брали для серологического исследования через 15 дней, 1, 2, 3, 4 и 5 месяцев после иммунизации. Ставили РА и РСК с единым бруцеллёзным антигеном, а также РСК с R-антигеном.

Изучение динамики антителообразования показало, что штамм 82-Sr, как и исходный штамм 82 В. abortus, является слабоагглютиногенным по S-антигену. Так, у нетелей, привитых противобруцеллёзной вакциной из штамма 82-Sr, через

15 дней после вакцинации сыворотки крови двух животных реагировали по РА в титрах 100 ME, одного в титре 200 ME, в среднем - 133,0±33,4 ME. РСК с сыворотками крови животных в этот срок была отрицательной. А в РСК с R-антигеном уровень антител составил от 1:160 до 1:1280, в среднем - 693,0±324,8 ME.

Спустя месяц после вакцинации сыворотки крови этих животных практически перестали реагировать с единым бруцеллёзным антигеном. Лишь у одной нетели результаты были сомнительными по РА и РСК, у двух других - эти реакции показывали отрицательный результат. Значительно снизился в этот срок и титр антител в РСК с R-антигеном. Активность антител составила 1:40 - 1:160, в среднем 93,3±35,3 ME, то есть в 7,5 раз меньше.

В последующие сроки исследования, через 2, 3, 4 и 5 месяцев с момента введения вакцины, показания РА и РСК с единым бруцеллёзным антигеном всегда были отрицательные. РСК с R-антигеном была положительной до конца опыта. Активность антител при этом колебалась в зависимости от сроков исследования. Так, через 2 месяца титр их составлял 8,3±6,0. Через 3 месяца 40,0±0,0, а затем наблюдалось постепенное снижение до 36,7±21,9 через 4 месяца и 18,3±10,9 - через 5 месяцев.

Ни у одного животного, привитого вакциной из штамма 82-Sr, не было отмечено случаев абортов. Однако, в группе животных, привитых вакциной из штамма 82, одна нетель под №81 абортировала через 3,5 мес. после иммунизации. Абортированный плод исследовать не удалось, но при исследовании сыворотки крови данного животного после аборта, был установлен высокий титр антител в РСК с R-антигеном, равный 1:160, при низких титрах РА и РСК с единым бруцеллёзным антигеном: РА-100 ME, РСК-1:20, что свидетельствует о поствакцинальном характере аборта.

Таким образом, на нетелях было показано отсутствие абортогенных свойств у антибиотикорезистентного штамма 82-Sr В. abortus и его слабоагглютиногенные свойства.

3.7 Разработка способа сочетанной зашиты морских свинок от бруцеллёза. На седьмом этапе работы провели экстренную сочетанную защиту

морских свинок от экспериментального бруцеллёза путём санации организма заражённых животных стрептомицином и одновременного создания иммунитета введением противобруцеллёзной вакцины из штамма 82, резистентного к стрептомицину.

В опыте применяли 99 голов морских свинок живой массой 350-400 граммов. Эксперимент провели в два этапа.

На первом этапе исследовали, животных в количестве 42-х .голов заражали культурой вирулентного штамма 54-М ВГНКИ В. abortus подкожно в области паха в дозе 50 м. к. в объёме 1 мл на фосфатно-буференном физиологическом, растворе. Заражённых морских свинок делили на 4 группы. Спустя 3 часа после заражения животным первой группы в количестве 11 голов вводили однократно подкожно с внутренней стороны бедра, противоположной месту введения культуры штамма 54, вакцину из штамма 82-Sr в дозе ¡,5 млрд. м. к. в объёме I мл. Одновременно им вводили внутримышечно стрептомицин в дозе 25 мг на голову в объёме 1 мл на 0,5 %-ном растворе новокаина один раз в день в течение !5-ти суток. Морских свинок 2-й группы в количестве 10 голов подвергали только лечению стрептомицином так же, как и животных первой группы. Животных третьей группы - 10 голов, только иммунизировали однократно вакциной из штамма 82-Sr в дозе 1,5 млрд. м. к. Животных 4-й группы, заражённых культурой вирулентного штамма бруцелл в количестве 11 голов, оставляли в качестве контроля.

Через 2 месяца после заражения и окончания экстренной сочетанной зашиты, у 3 животных из каждой группы брали кровь для проведения серологического исследования и подвергали эвтаназии для бактериологического исследования с целью изучения эффективности проведенных мероприятий. В этот же срок оставшихся морских свинок 1-3 групп подвергли повторному заражению культурой бруцелл вирулентного штамма 54 в дозе 50 м. к. с целью изучения эффективности сочетанного применения антибиотикотерапии и вакцинопрофилактики на фоне повторного заражения.

Через 1 месяц после повторного заражения морские свинки первой группы не реагировали в серологических реакциях с S-антигеном. В то время животные 2-4 групп реагировали положительно серологически в высоких титрах антител, и у них

был высокий индекс инфицированности лимфатических узлов и внутренних органов культурой заражающего штамма бруцелл.

Во втором эксперименте, защиту животных начали проводить за 5 суток до их заражения. Морских свинок в количестве 57 голов разделили на 4 группы. Животных первой группы в количестве 14 голов однократно иммунизировали подкожно в область паха в дозе 1,5 млрд. м. к. в объёме 1 мл нативной живой вакциной из штамма 82-Sr на фосфатно-забуференном физиологическом растворе. В течение 5-ти дней, один раз в сутки, им вводили внутримышечно стрептомицин в дозе 25 мг на голову в объёме 1 мл на 0,5%-ном растворе новокаина. Морским свинкам второй группы в количестве 14 голов в течение 5-ти дней вводили только стрептомицин. Животных третьей группы в количестве 14 голов однократно прививали только вакциной из штамма 82-Sr. Животных четвёртой группы в количестве 15 голов оставили интактной в качестве контроля.

Через 5 дней после сочетанной защиты морских свинок всех четырёх групп заразили культурой вирулентного штамма 54-М ВГНКИ В. abortus в дозе 50 м. к. После заражения животным 1-й и 2-й групп ещё в течение 9-ти дней, один раз в сутки, продолжали внутримышечное введение стрептомицина в дозе 25 мг на голову в объёме 1 мл на 0,5%-ном растворе новокаина, со стороны, противоположной месту заражения. Через 15 и 40 дней после заражения, животных исследовали серологически, а в целях изучения эффективности сочетанной защиты их от заражения бруцеллёзом, по 3 животных из каждой группы подвергали умерщвлению с последующим исследованием отобранного биоматериала бактериологическим методом. Через 2 месяца после первого заражения оставшихся животных повторно заражали культурой штамма 54-М ВГНКИ в той же дозе для определения устойчивости их к повторному заражению. Через 1 месяц после заражения морских свинок умерщвляли, проводили серологическое и бактериологическое исследования. По результатам этих исследований определяли процент иммунных животных в той или иной группе.

Испытание средств и метода экстренной защиты морских свинок от экспериментального бруцеллёза, примененных за 5 дней до заражения животных, показало, что как сочетанное применение вакцины из штамма 82-Sr со стрептомицином, так и только введение стрептомицина приводит к освобождению

организма заражённых животных от возбудителя бруцеллёза. Все посевы от морских свинок, убитых с диагностической целью, в обеих группах были отрицательными на наличие заражающего штамма бруцелл. Однако у животных первой группы, подвергнутых сочетанной защите, было выделено значительное количество культур бруцелл вакцинного штамма 82-Sr.

Одна вакцина из штамма 82-Sr, примененная за 5 дней до заражения морских свинок, не защищала животных от бруцеллёза.

Результаты повторного заражения морских свинок показали преимущество способа сочетанной защиты животных. При этом применение стрептомицина приводит к освобождению организма заражённых морских свинок от возбудителя бруцеллёза, в то время как противобруцеллёзная вакцина из штамма 82-Sr В. abortus создаёт иммунитет к повторному заражению, чего не наблюдается при использовании только одного стрептомицина. Иммунитет составил 77,8%.

4 ВЫВОДЫ

1. Изучением иммунобиологических свойств вакцинного штамма 82-Sr В. abortus, установлена агглютинация его в пластинчатой РА на стекле с S- и R-бруцеллёзными и "А" монорецепторной сыворотками и отрицательная реакция его с "M''-сывороткой. Культура этого штамма лизируется фагом "Тб", показывает отрицательную пробу термоагглютинации и положительную с акрифлавином, растёт в присутствии эритритола, не нуждается в повышенном содержании углекислого газа, не продуцирует сероводород и растёт на питательных средах со стрептомицином.

2. Минимальная инфицирующая доза штамма 82-Sr В. abortus для морских свинок составляет 1000 м.к. Очищение организма привитых животных от культур вакцинного штамма 82-Sr отмечается через один месяц, а к трём месяцам он полностью элиминирует из организма.

3. Установлена стабильность штамма 82-Sr В. abortus при 52-х кратных пассажах на искусственных питательных средах и 10-ти кратных - через организм морских свинок, а также отсутствие кантагиозности при совместном содержании привитых морских свинок с интактными.

4. Иммунизация морских свинок и крупного рогатого скота вакциной из штамма 82-Sr сопровождается отрицательными или слабоположительными показателями серологических реакций с бруцеллёзными S-антигенами, при высоких титрах антител с R-антигеном в РСК, что свидетельствует о слабоагглютиногенных свойствах штамма.

5. Противобруцеллёзная вакцина из штамма 82-Sr в дозе 1,5 млрд. м.к. обладает выраженной иммуногенной активностью. В опытах на морских свинках, при заражении их через 2 месяца после иммунизации, количество иммунных животных составляет 77,8%, через 4 месяца - снижается до 50%, а ревакцинация повышает на 20-25%.

6. Введение вакцины из штамма 82-Sr B.abortus нетелям на ранних стадиях беременности не вызывает у них аборты, что свидетельствует об отсутствии абортогенных свойств вакцины.

7. Разработан способ экстренной сочетанной защиты лабораторных животных от бруцеллёза путём санации организма стрептомицином (в дозе 25 мг на голову) и иммунизации стрептомицинрезистентным штаммом 82-Sr B.abortus (в дозе 1,5 млрд. м.к. на голову), в результате происходит одновременно освобождение организма заражённого животного от возбудителя бруцеллёза и создание иммунитета к повторному заражению.

5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты проведённых исследований вошли в следующие нормативные документы:

- Методические указания по дифференциации культур бруцелл штамма В. abortus 82-Sr от культур вирулентных штаммов и вакцинного штамма 82, утверждены директором ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».

Методические указания по применению живой вакцины из антибиотикорезистентного штамма В. abortus 82-Sr для экстренной защиты лабораторных животных от бруцеллёза, утвержденные директором ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».

Основные положения диссертационной работы рекомендуется использовать при разработке способов сочетанной защиты сельскохозяйственных животных от бруцеллёза.

6 СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Крючков, P.A. Абортогенные и антигенные свойства антибиотикорезистентных вариантов штамма В. abortus 82 / A.M. Фомин, K.M. Салмаков, Г.М. Сафина, Г.М. Галимова, P.A. Крючков // Ветеринарный врач. -2006. № 1.-С. 18-20;

2. Крючков, P.A. Иммунобиологические свойства стрептомицин резистентного штамма В. abortus 82-Sr при бруцеллёзе / P.A. Крючков // Респ. конкурс научных работ студентов на соискание премии им. Н.И. Лобачевского. - Сб. материалов. -2006. - Т. 1, Казань. - 2006. - С. 31 -33;

3. Крючков, P.A. Остаточная вирулентность и антигенные свойства стрептомицин устойчивого вакцинного штамма В. abortus 82-Sr / P.A. Крючков // Материалы научно-практической конференции молодых учёных и специалистов «Актуальные проблемы ветеринарии». - 29 июня 2007 г. - Казань. - 2007. - С. 115117;

4. Крючков, P.A. Иммуногенность живой вакцины из штамма 82-Sr при вакцинации и ревакцинации морских свинок / P.A. Крючков, A.M. Фомин, K.M. Салмаков, P.A. Свинцов // Ветеринарный врач. - 2007. - № 4. - С. 25-27;

5. Крючков, P.A. Применение реакции бласттрансформации лимфоцитов для изучения стабильности антигенных свойств штамма бруцелл 82-Sr при пассаже через организм морских свинок / P.A. Свинцов, Ф.З. Авзалов, A.M. Фомин, P.A. Крючков // Материалы научно-практической конференции, посвящённой 135-летию академии «Современные подходы развития АПК». - Учёные записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана -2008.-Т. 192.-С. 143-147;

6. Крючков, P.A. Результаты изучения иммуногенных свойств антибиотикорезистентного штамма В. abortus 82-Sr на СПФ и конвенциональных морских свинках / P.A. Крючков, A.M. Фомин // Материалы докл. Всероссийской

науч.-практич. конф. «Научный потенциал-аграрному производству; посвященная 450-летию вхождения Удмуртии в состав России», 26-29 февраля 2008 г. - Ижевск, 2008. - Том 3.-С. 137-141;

7. Крючков, P.A. Определение стабильности антигенных качеств антибиотикоустойчивых вакцинных штаммов бруцелл при пассаже через организм лабораторных животных с помощью серологических и иммунологических тестов / P.A. Свинцов, А.Ф. Авзалова, P.A. Крючков // Материалы международной научно -практической конференции молодых учёных и аспирантов «Молодые учёные агропромышленному комплексу», посвященной 90-летию Горского ГАУ 21-22 октября 2008 г. - Владикавказ, 2008. - С. 72-74;

Отпечатано в ООО «Печатный деор». г. Казань, ул. Журналистов, 1/16, оф.207

Тел: 272-74-59, 541-76-41, 541-76-51. Лицензия ПД №7-0215 от 01.11.2001 г. Выдана Поволжским межрегиональным территориальным управлением МПТР РФ. Подписано в печать 11.11.2009 г. Усл. п.л 1,0 Заказ М К-6802. Тираж 100 экз. Формат 60x841/16. Бумага офсетная. Печать - ризография.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Крючков, Роман Александрович

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Бруцеллёз. Общие сведения о возбудителе заболевания.

1.2. Диагностика бруцеллёза крупного рогатого скота.

1.3. Дифференциальная диагностика бруцеллёза.

1.4. Специфическая профилактика бруцеллёза крупного рогатого скота.

1.5. Антибиотико- и химиотерапия бруцеллёза.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Культурально-морфологические и биохимические свойства штамма В. abortus 82-Sr.

3.2. Разработка методики дифференциации культур бруцелл штамма 82-Sr от культур вирулентных штаммов и вакцинного штамма 82.

3.3. Остаточная вирулентность, антигенные свойства, длительность приживаемости и контагиозность штамма 82-Sr

В. abortus.

3.4. Стабильность свойств штамма 82-Sr при пассажах на искусственных питательных средах и через организм морских свинок.

3.5. Разработка оптимальной иммунизирующей дозы вакцины из штамма 82-Sr В. abortus для морских свинок.

3.6. Иммуногенные свойства штамма 82-Sr В. abortus при вакцинации и ревакцинации конвенциональных и СПФ морских свинок и влияние иммуномодулятора на эти показатели.

3.7. Абортогенность штамма 82-Sr В. abortus для крупного рогатого скота.

3.8. Разработка способа сочетанной защиты морских свинок от бруцеллёза.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ

ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Иммунобиологические свойства стрептомицинрезистентного штамма B. abortus 82-Srи его применение при сочетанной защите животных от бруцеллеза"

Актуальность темы. Инфекционные болезни, в частности бруцеллёз, являются одним из факторов, сдерживающих развитие животноводства. Экологические особенности возбудителя бруцеллёза крупного рогатого скота, обусловленные хроническим течением болезни, способствуют, при отсутствии должного контроля, его широкому территориальному распространению, которое сопровождается огромным экономическим ущербом и угрожает здоровью людей.

Меры борьбы с этим заболеванием основаны на выявлении больных животных, носителей возбудителя, с последующей их изоляцией, убоем и выполнением всего комплекса организационно-хозяйственных, ветеринарно-санитарных и специальных мероприятий, направленных на уничтожение бруцелл на объектах внешней среды, в продуктах, получаемых от скота, и создания специфической защиты поголовья (Королёва Л. и др., 2002; Кассал Б. Ю., Новицкий А. А., 2002).

В последние годы в Российской Федерации (РФ) заметно ухудшились условия содержания и кормления животных. С одной стороны реорганизация колхозов и совхозов привела к увеличению числа малых ферм, росту поголовья скота на личных подворьях. Учёт животных в этих категориях хозяйств зачастую не проводится, и они выпадают из сферы постоянного контроля. Соответственно снижаются и возможности действенного эпизоотологического надзора. Возрастают масштабы бесконтрольных перемещений животных. С другой стороны, сократилось финансирование профилактических и противоэпизоотических мероприятий из федерального бюджета.

JI. А. Малышева и др. (2000, 2002), Г. Г. Онищенко (2004) сообщают об обострении в настоящее время в РФ эпизоотической ситуации по бруцеллёзу крупного рогатого скота в, частном секторе и тенденции роста заболеваемости бруцеллёзом частных владельцев животных.

В этих условиях неизмеримо возросла опасность возникновения и распространения бруцеллёза, и назрела необходимость реформирования сложившейся в стране системы специальных ветеринарных противобруцеллезных мероприятий (Филлипов Н. В., 1994; Иванов А. В.,

Авилов В. М. и др., 2000; Никитин И. Н., 2002; Фомин А. М., Салмаков К. М. и др., 2000, 2001, 2003; Салмаков К. М., Фомин А. М., 2005).

Кроме того, в мировом сообществе всё большее беспокойство вызывает возможность использования биологических агентов с целью террористических актов (Сафонов Г. А., Гаврилов В. А., 2002). Вся сельскохозяйственная отрасль практически не защищена от биотерроризма.

Биотерроризм является серьёзной проблемой. В качестве биологического оружия могут применяться Bacillus anthracis, В. suis и др. (Int. Labmate, 2002). Эти возбудители представляют серьёзную опасность для животных и людей. Поэтому актуальной задачей является разработка мер защиты против биологического оружия.

Бруцеллёз относится к одной из наиболее опасных болезней, вызывающей большие потери среди домашних и сельскохозяйственных животных и представляющая серьёзную угрозу здоровью человека (Иванов А.В., Салмаков К.М. и др., 2009).

В случае использования в качестве особо опасного патогена возбудителя бруцеллёза необходима экстренная защита животных. Вместе с тем, известно, что после применения существующих противобруцеллёзных вакцин иммунитет вырабатывается в течение 2-х недель, что не соответствует требованиям экстренности. В то же время использование только антибиотикотерапии не предохраняет животных от последующего заражения или перезаражения. При сочетанной антибиотикотерапии заболевания и его специфической профилактике антибиотики губительно действуют не только на вирулентную, но и на вакцинную культуру бруцелл. Отсюда возникает необходимость в получении вакцинного штамма бруцелл, который был бы устойчив к антибиотику, применяемому для защиты животного, и сохранил при этом иммуногенные свойства.

В ФГУ "ФЦТРБ-ВНИВИ" был получен стрептомицинрезистентный штамм 82-Sr, установлена его стабильность по сохранению устойчивости к антибиотику при посевах на искусственных питательных средах без содержания стрептомицина. Однако другие свойства штамма 82-Sr и его пригодность в качестве вакцины при экстренной защите животных от бруцеллёза требуют изучения.

Всё вышеуказанное определило направление наших исследований.

Цель и задачи исследований. Цель исследований - изучить иммунобиологические свойства стрептомицинрезистентного штамма В. abortus 82-Sr и его пригодность в качестве вакцины при сочетанной защите животных от бруцеллёза.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Изучить иммунобиологические свойства штамма 82-Sr В. abortus.

2. Определить абортогенность штамма 82-Sr В. abortus.

Научная новизна. Впервые в лабораторных условиях изучены иммунобиологические свойства штамма 82-Sr В. abortus. Установлена его слабая агглютиногенность по S-антигену, приживаемость в организме морских свинок в течение 3-х месяцев, невысокая остаточная вирулентность. Указанный штамм бруцелл вызывает генерализованный поствакцинальный процесс в дозе 100 тыс. м.к., сохраняет стабильность свойств при 10-кратных пассажах через организм морских свинок и 52-кратных пассажах на искусственных питательных средах, обладает достаточно высокой иммуногенной активностью и отсутствием абортогенных свойств на крупном рогатом скоте.

Разработан способ экстренной сочетанной защиты морских свинок от бруцеллёза.

Практическая значимость. Всестороннее и детальное изучение штамма 82-Sr В. abortus позволило считать его вакцинным. Полученные данные по изучению иммунобиологических свойств стрептомицин устойчивого штамма 82-Sr В. abortus послужили основой при разработке модели экстренной сочетанной защиты лабораторных животных от бруцеллёза.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Иммунобиологические свойства вакцинного штамма 82-Sr В. abortus;

2. Влияние иммуномодулятора тиосульфата натрия на иммуногенез и иммуногенные свойства штамма 82-Sr В. abortus в условиях эксперимента;

3. Отсутствие абортогенности противобруцеллёзной вакцины из штамма 82-Sr;

4. Способ экстренной сочетанной защиты морских свинок от бруцеллёза.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на заседаниях ученого совета ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» в виде ежегодных отчётов о НИР (2006-2008); Республиканском конкурсе научных работ студентов на соискание премии им. Н.Э. Лобачевского (Казань, КГАВМ им. Н.Э. Баумана, 2006); научно-практической конференции молодых учёных и специалистов (Казань, ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», 2007); научно-практической конференции «Научный потенциал — аграрному производству (Ижевск, 2008).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 7 научных работ, в том числе 2 - в реферируемых ВАК РФ изданиях.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 158 страницах компьютерного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов собственных исследований, выводы, практические

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Крючков, Роман Александрович

ВЫВОДЫ

1. Изучением иммунобиологических свойств вакцинного штамма 82-Sr В. abortus, установлена агглютинация его в пластинчатой РА на стекле с S- и R-бруцеллёзными и "А" монорецепторной сыворотками и отрицательная реакция его с "М"-сывороткой. Культура этого штамма лизируется фагом "Тб", показывает отрицательную пробу термоагглютинации и положительную с акрифлавином, растёт в присутствии эритритола, не нуждается в повышенном содержании углекислого газа, не продуцирует сероводород и растёт на питательных средах со стрептомицином.

1 к

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты проведённых исследований вошли в следующие нормативно-технические документы:

Методические указания по дифференциации культур бруцелл штамма В. abortus 82-Sr от культур вирулентных штаммов и вакцинного штамма 82, утверждены директором ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».

- Методические указания по применению живой вакцины из антибиотикорезистентного штамма В. abortus 82-Sr для экстренной защиты лабораторных животных от бруцеллёза, утвержденные директором ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Крючков, Роман Александрович, Казань

1. Авилов, В. М. Борьба с бруцеллёзом крупного рогатого скота с применением вакцины из штамма 82 / В. М. Авилов, К. М. Салмаков, А. А. Новицкий // Ветеринария. 2000. - № 3. - С. 3-7.

2. Авилов, В. М. Прогнозирование эпизоотического процесса при бруцеллёзе крупного рогатого скота в Российской Федерации : автореф. дис.канд. вет. наук : 16.00.03 / Авилов Вячеслав Михайлович. С.- Петербург, 1992. - 21 с,

3. Акачурин, Б. С. Изучение эпизоотологического значения крупного рогатого скота, длительно сохраняющего поствакцинальные реакции (РА и РСК) / Б. С. Акачурин // Тр. ВИЭВ. 1967. - В. 33. - С. 167-194.

4. Алимов, А. М. Молекулярная ДНК/ДНК гибридизация для идентификации возбудителей зоонозов / А. М. Алимов, Т. X. Фаизов // Тез. докл. респ. науч.-произв. конф. «Актуальные вопр. вет. и зоотехн.». Казань. - 1992. - С. 7.

5. Ашмарин, И. П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И. П. Ашмарин, А. А. Воробьёв // Гос. изд. мед. литер.-Л. 1962. -№9. -С. 34-37.

6. Баландин, Г. А. О поствакцинальной патергии при бруцеллезе / Г. А. Баландин, С. П. Сазыкин //ЖМЭИ. 1963. - № 8. - С. 44-49.

7. Баландин, Г. А. Экстренная профилактическая антибиотикотерапия экспериментального бруцеллёза при аэрозольном заражении / Г. А.

8. Баландин II Сб. научн. трудов НИИЭиМ им Н. Ф. Гамалеи. М. 1964. -В. 7. - С. 306-309.

9. Белобаб, В. И. Пути совершенствования диагностики и профилактики бруцеллёза у животных : автореф. дис.док. вет. наук : 16.00.03 / Белобаб Виктор Иванович. Алма-Ата, 1998. - 52 с.

10. Бессмертный, Б. С. Математическая статистика в клинической и экспериментальной медицине / Б. С. Бессмертный. М. : - 1967. - С. 4756.

11. Билибин, А. Ф. Современные антибиотики в клинике инфекционных болезней / А. Ф. Билибин, Ю. А. Ильинский, Н. М. Грачёва // Антибиотики. 1980. - Т. 25, № 8. - С. 615-618.

12. Бойко, А. Т. Опыт вакцинации против бруцеллеза вакциной из штамма № 19 / А. Т. Бойко // Ветеринария. 1957. - № 8. - С. 55-56.

13. Бронников, В. С. Совершенствование противобруцеллёзных мероприятий в Томской области / B.C. Бронников, Б. Ю. Кассал // Сб. науч. тр. ВАСХНИЛ. Сиб. отд-е, ИЭВС и ДВ.- Новосибирск.- 1990.- С. 89-95.

14. Ваненков, М. В. Эффективность противобруцеллезных мероприятий с применением вакцины из штамма № 19 / М. В. Ваненков // Матер. Межвед. конф. по борьбе с бруцеллезом. Кавсельхозгиз, 1963. - 14. -С. 136-139.

15. Васюренко, 3. П. Жирнокислотные профили бактерий, патогенных для человека и животных / 3. П. Васюренко, А. Ф. Фролов, В. В. Смирнов, Н. М. Рубан. Киев : Наукова думка, 1992. С. 34-38.

16. Вершилова, П. А. Бруцеллез / П. А. Вершилова. М. : Медицина. -1972.- С. 15.

17. Вершилова, П. А. Бруцеллёз / П. А. Вершилова.- М. : Медицина. -1972. 439 с.

18. Вершилова, П. А. Диагностическая оценка реакции непрямой гемагглютинации при бруцеллёзе / П. А. Вершилова, М. И. Чернышёва, Р. Г. Асланян // Матер, совет.-француз. симп. по бруц., Бюл. ВИЭВ. -1971.-Вып. 10.-С. 18

19. Вершилова, П. А. Морфологическая и бактериологическая характеристика вакцинного процесса при бруцеллезе / П. А. Вершилова, И. Н. Кокорин //ЖМЭИ. 1964. - № 1. - С. 7-13.

20. Вершилова, П. А. Опыт иммунизации морских свинок и белых мышей против бруцеллеза авирулентной культурой бруцелл и полисахаридно-липоидным комплексом / П. А. Вершилова // ЖМЭИ: -1947.- №7.-С. 17-21.

21. Вершилова, П. А. Патогенез и иммунология бруцеллёза / П. А. Вершилова, М. И. Чернышёва, Э. Н. Князева. М. : Медицина. - 1974. — С. 235.

22. Вершилова, П. А. Патогенез и иммунология бруцеллёза / П. А. Вершилова, М. И. Чернышёва, Э. Н. Князева.- М. : Медицина 1974. -С. 245.

23. Вершилова, П. А. Патогенез и иммунология бруцеллёза / П. А. Вершилова, М. И. Чернышёва, Э. Н. Князева // М: Медицина. 1974. -С. 271.

24. Вершилова, П. А. Течение бруцеллезной инфекции в иммунном организме / П. А. Вершилова, И. Н. Кокорин // ЖМЭИ. 1954. - № 1. -С. 27-31.

25. Гордиенко, JI. Н. Индикация L-вариантов бруцелл, выделенных от крупного рогатого скота на территории Амурской области / JI. Н. Гордиенко, О. Г, Герман // Тез. докл. Всесоюз. конф. Новосибирск. -1989. - С. 135-136.

26. Горелов, В. Н. О возможности создания вакцинного штамма В. abortus 19-ВА с множественной устойчивостью к антибиотикам / В.Н. Горелов и др. // ЖМЭИ. 1991. - № 9. - С. 2-4.

27. Григорьева, Г. И. Антигенная структура бруцелл / Г. И. Григорьева, П. Е. Игнатов // Успехи современной биологии. — 1991. — Т. III. — Вып. 6.-С. 890-904.

28. Гринин, А. С. Динамика иммунобиологических реакций у крупного рогатого скота после прививки вакциной из штамма №19 / А. С. Гринин, А. А. Новицкий // Сб. науч. раб. СибНИВИ. 1966. - В. 14. - С. 198-202.

29. Губина, Е. А. Иммуногенные свойства мутанта бруцеллёзного вакцинного штамма, резистентного к рифампицину / Е. А. Губина, Г.

30. И. Кононенко // Сб. научн. трудов НИИЭиМ им. Н. Ф. Гамалеи. М. -1981.-В. 30.-С. 286-289.

31. Губина, Е. А. Состояние иммунитета к бруцеллёзу при иммунизации живой бруцеллёзной вакциной в инкубационный период инфекционного процесса / Е. А. Губина // Вопросы противоэпидемической защиты населения. 1974. - В. 24. - С. 420-427.

32. Давыдов, Н. И. К изучению бруцеллёза у северных оленей / Н. И. Давыдов // Ветеринария. 1961. - № 5. - С. 48-54.

33. Даныпев, И. А. Эпизоотическое значение прививок животным вакцины из штамма №19 в отдаленные сроки / И. А. Даныпев, А. П. Ростов // Ветеринария. 1975. - № 7. - С. 46-60.

34. Дегтяренко, JI. В. Дифференциальная диагностика бруцеллёза крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82 / Л. В. Дегтяренко, А. А. Новицкий и др. // Ветеринария. 2002. - № 1. - С. 17-20.

35. Дегтяренко, Л. В. Изыскание оптимальных диагностических реакций с молоком при бруцеллёзе крупного рогатого скота / Л. В. Дегтяренко, Г. В. Разницына // Диагн. и спец. профил. бруц. и туб. жив-х.- М., 1988. С. 19-23.

36. Димов, С. К. Теория и практика управления эпизоотическим процессом: автореф. дис.док. вет. наук : 16.00.03 / Димов Сергей Константинович. Новосибирск., 1993. - 45 с.

37. Ельчинова, Е. А. Иммунологические сдвиги у инфицированных бруцеллами животных после применения вакцинотерапии / Е. А. Ельчинова, М. Д. Журба // ЖМЭИ. -1971. № 2. - С. 75-80.

38. Ефременко, В. И. К проблеме повышения эффективности этиотропной и патогенетической терапии бруцеллеза / В. И. Ефременко и др. // II Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Тез. докл. М., - 1995. - С. 67-71.

39. Иванов, А. В. В ногу со временем / А. В. Иванов, И. Н. Никитин // "Ветеринарный врач". Казань. - 2002. - № 3. - С. 3-16.

40. Иванов, А. В. Совершенствование системы биологической защиты в научно-исследовательских центрах / А. В. Иванов // Матер. Всероссийской научно- практической конференции, посвящённой 45-летию ФГНУ ВНИВИ, 14-15 апреля 2005 г. Казань. - 2005. - С. 7-9.

41. Иванов, М. М. Итоги изучения вакцинных штаммов бруцелл / М. М. Иванов, Т. И. Малахова, У. Э. Ниязов и др. // Тр. ВГНКИ. М. - 1977. -Т. 23.-С. 94-103.

42. Иванов, Н. П. Изучение диагностической ценности аллергена из вакцинных штаммов бруцелл / Иванов Н. П. и др. // Науч. основы техн. промыш. пр-ва вет. биол. преп. Москва, 23-25 апр. 1991 г. - М. -1991.-С. 135-136.

43. Игнатов, П. Е. Изучение активности иммуномодуляторов / П.Е. Игнатов и др. // Ветеринария. 1983. - № 9. - С. 30-31.

44. Игнатов, П. Е. Изыскание протективных антигенов против инфекции, -'г* вызываемой Brusella ovis: автореф. дис.канд. биол. наук : 16.00.03. / Игнатов Пётр Евгеньевич. -М., 1981.-13с.

45. Игнатов, П. Е. Синтетические полимеры в качестве стимуляторов и пролонгаторов иммунного действия бруцеллезной химической вакцины / П. Е. Игнатов // Бюллетень ВИЭВ. 1980. - В. 38. - С. 38-40.

46. Исхаков, О. 3. Система мер борьбы с бруцеллёзом животных в РСФСР и её эффективность / О. 3. Исхаков // Тезисы докл. 4-й Всесоюзной конференции по эпизоотологии, Новосибирск, 24-26 сент. 1991 г. Новосибирск. - 1991. - С. 17-18.

47. Кайтмазова, Е. И. Быстрый метод диагностики бруцеллёза у людей / Е. И. Кайтмазова // ЖМЭИ. 1945. - № 7-8. - 57 с.

48. Кайтмазова, Е. И. Изучение лечебного действия сочетаний антибиотиков при экспериментальной бруцеллезной инфекции / Е. И. Кайтмазова // Антибиотики. 1962. - Т. 7. - № 4. - С. 325-326.

49. Калмыков, В. В. Профилактическая эффективность иммунизации крупного рогатого скота адъювант вакциной из штамма В.abortus KB 17/100 / В. В. Калмыков, А. Н. Бобылев // Тез. докл. Междунар. научн. конф., 30-31 мая 2000 г. - Казань. - 2000. - С. 69-71.

50. Кассал, Б. Ю. Бруцеллёз крупного рогатого скота в Западной Сибири / Б. Ю. Кассал, А. А. Новицкий // Ветеринария. М., 2002. - № 10. - С. 6-11.

51. Касьянов, А. Н. Бруцеллин ВИЭВ при диагностике бруцеллёза у крупного рогатого скота / А. Н. Касьянов, В. С. Дуранов // Тр. ВИЭВ. -1984. 61 с.

52. Касьянов, А. Н. Диагностика бруцеллёза северных оленей методом иммунофлуоресценции / А. Н. Касьянов, Р. Б. Вашкевич // Диагн., профил. и тер. болез. жив. на Кр.Севере. 1983. - С. 9-13.

53. Касьянов, А. Н. Комплексная серо-аллергическая диагностика бруцеллёза крупного рогатого скота / А. Н. Касьянов // Бюл. Всесоюзн. н-и. и-та эксп. вет. им. Коваленко Я. Р. 1983. - С. 9-13.

54. Коляков, Я. Е. Ветеринарная иммунология / Я. Е. Коляков. М. -Агропромиздат, 1986. - 271 с.

55. Королёва, Л. Средства и способы борьбы с туберкулёзом и бруцеллёзом / Л. Королёва и др. // "Практикум". Журнал практикующего специалиста. - 2002. - № 1. - С. 32-36.

56. Косилов, И. А. Бруцеллёз сельскохозяйственных животных / И. А. Косилов. Новосибирск : 1992. - 260 с.

57. Косилов, И. А. Изменчивость бруцелл и её значение в проблеме бруцеллёза с-х. животных / И. А. Косилов // Сб. научн. работ. Омск, 1974.-Вып. 21.-С. 30-34.

58. Косилов, И. А. Иммуногенные свойства вакцины из штамма В. abortus 104-М в опыте на коровах / И. А. Косилов, Л. В. Дегтяренко, А.

59. П. Константинов, К. В. Шумилов // Научно-технический бюллетень ИЭВСиДВ. Новосибирск, 1985. - В. 32. - С. 41-45.

60. Косилов, И. А. Некоторые результаты применения вакцины из штамма В. abortus 104-М телятам в производственных условиях / И. А. Косилов, А. И. Попов, Ш. А. Байгазинов // Сб. науч. раб. СибНИВИ. -1975.-В. 22.-С. 18-22.

61. Косилов, И. А. Опыт применения противобруцеллёзной вакцины из штамма В-1 в производственных условиях / И. А. Косилов, Э. Г. Карпов, Р. М. Сыртланов // Сб. науч. тр. СибНИВИ. Омск. - 1970. - В. 18.-С. 16-21.

62. Косилов, И. А. Противоэпизоотическая эффективность вакцины из штамма 82 в общем комплексе противобруцеллёзных мероприятий / И. А. Косилов, С. К. Димов, А. Г. Падалица // РЖВ. 1987. - № 5. - С. 27.

63. Косилов, И. А., Иммунитет сельскохозяйственных животных / И. А. Косилов, Р. М. Сыртланов, И. Н. Яковлев. М. : Колос, 1973. - С. 1116.

64. Котурга, JI. Н. Сравнительная характеристика патоморфологических изменений, вызываемых вакцинными штаммами бруцелл №19, 19 Б А и М-104 при накожном и подкожном применении в эксперименте / JI. Н. Котурга // ЖМЭИ. 1963. - В. 3. - С. 39-45.

65. Красиков, А. П. Влияние иммунорегуляторов на иммуногенность противобруцеллёзных препаратов / А. П. Красиков, В. С. Бронников // Бруцеллёз с.-х. животных. М., 1989. - С. 75-78.

66. Курманова, Г. М. Оценка иммунного статуса и дифференцированная иммунокоррекция при бруцеллезе: Методические рекомендации / Г. М. Курманова, А. К. Дусейнова, К. Б. Курманова, Н. X. Спиричева // Алма-Ата: Наука, 2002. 11 с.

67. Львов, В. Л. Соматические антигены рода Brucella. Строение О-специфической полисахаридной цепи липополисахарида Brucellamelitensis / В. JI. Львов, В. Е. Маликов, А.С. Шашков // Биоорганическая химия. 1985. - Т. 2. - 87. - С. 963-969.

68. Малышева, Л. А. Иммунный статус коров частного сектора и бруцеллёзная искусственная вакцина / Л. А. Малышева и др. // Вестник ветеринарии. М., 2002. - № 22. - С. 8-12.

69. Малышева, Л. А. Мероприятия по бруцеллёзу крупного рогатого скота в частном секторе и фермерских хозяйствах / Л. А. Малышева и др. // Вестник ветеринарии. М., 2000. - № 16 (2). - С. 20-21.

70. Мельниченко, В. И. Антигенные и вирулентные свойства вакцинных штаммов бруцелл в эксперименте на морских свинках / В. И. Мельниченко // Пути ликвид. инфекц, и инваз. болезней с.-х. животных. Сиб. отд. ВАСХНИЛ, Новосибирск, 1985. - С. 22-23.

71. Морякова, О. И. Изучение иммунобиологических реакций у крупного рогатого скота, вакцинированного штаммом 19 в различных эпизоотических условиях / О. И. Морякова, Г. С. Заседателева // Тр. ВИЭВ. 1962. - Т. 24. - С. 90-97.

72. Морякова, О. И. Изучение иммунобиологических реакций у крупного рогатого скота, ревакцинированного бруцеллёзной вакциной из штамма 19 / О. И. Морякова // Бюлл. научно-техн. информации ВИЭВ. 1957. - № 2. - С. 24-25.

73. Муковозова, Л. А. Сравнительная эффективность различных антибактериальных препаратов при бруцеллёзе / Л. А. Муковозова, Г. И. Нуралинова// Здравоохранение Казахстана. 1988. - № 8. - С. 45-47.

74. Навашин, С. М. Рифампицин в современной химиотерапии бактериальных инфекций / С. М. Навашин, П. С. Навашин // Антибиотики и химиотерапия. М., 1992. - Т. 37. - № 6. - С. 41-48.

75. Никифоров, И. П. и др. Реактогенность и эпизоотическая безопасность противобруцеллёзной вакцины из штамма 82 / И. П. Никифоров и др. // Диагн. и профилакт. инфекц. болезней животных.-Сб. научн. тр. СибНИВИ. Омск. - 1980. - С. 34-39.

76. Новицкий, А. А. Комплексная система противобруцеллёзных мероприятий на современном этапе / А. А. Новицкий // Тезисы докл. научной конференции. Баку, 1989. - С. 9-10.

77. Онищенко, Г. Г. Об эпидемиологической обстановке по опасным, природно-очаговым и другим инфекциям на территории Южного федерального округа / Г. Г. Онищенко // ЖМЭИ. 2004. - № 3. - С. 2330.

78. Ощепков, В. Г. R-, L-формы бруцелл значение их в эпизоотологии и диагностике бруцеллёза животных: автореф. дис.док. вет. наук : 16.00.03. / Ощепков Владимир Георгиевич. JI. - 1990. - 38 с.

79. Перегудов, Т. А. Морфологические изменения у животных, привитых вакциной из штамма В. abortus 82 / Т. А. Перегудов, Н. С. Вождаев, П. Ф. Бричук, К. Б. Мун // Ветеринария. 1987. - № 9. - С. 28-30.

80. Пинигин, А. Н. Прививки крупного рогатого скота против бруцеллеза вакциной из штамма № 19 в племенном совхозе "Чалобай" / А. Н. Пинигин // Матер, межвед. конф. по борьбе с бруцеллезом. Алма-Ата, 1963.-С. 141-142.

81. Попова, Т. Г. Связь бруцеллоносительства с выраженностью кольцевой реакции с молоком / Т. Г. Попова, А. А. Новицкий, Н. Н. Мамаев // Сб. науч. тр. ВНИИБТЖ. Омск. 1990. - С. 33-39.

82. Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств.2004. 11.- ООО "ГЛС-2004", - С. 809, 843, 1143.

83. Рену, Ж. Применение убитой вакцины против бруцеллеза из культуры Н.38 / Ж. Рену//Бюлл. ВИЭВ. 1971. - В. 1. - С. 79-94.

84. Ростов, А. П. Иммунизация крупного рогатого скота малыми дозами противобруцеллёзной вакцины из штамма 82 с целью профилактики абортогенного действия этой вакцины / А. П. Ростов // Ветеринария. -М., 1984.-№ 11.-С. 34.

85. Ростов, А. П. Результаты длительных наблюдений по вакцинации крупного рогатого скота противобруцеллёзной вакциной из штамма 82 / А. П. Ростов, Е. А. Суворов // Тез. докл. Всесоюз. конф. по бруц. и тубер. Омск, 20-23 мая 1980. М. - 1980. - С. 90.

86. Салмаков, К. М. Бруцеллёз животных и его специфическая профилактика / К. М. Салмаков, А. М. Фомин // Ветеринарный врач.2005.-№ 1.-С. 44-47.

87. Салмаков, К. М. Живая вакцина из штамма 82 и её эффективность в профилактике и ликвидации бруцеллёза / К. М. Салмаков, Ю. Ш. Абузаров, Б. А. Киршин // Научн. тр. КВИ. Казань. 1980. - Т. 135. - С. 27-34.

88. Салмаков, К. М. Изыскание и испытание новых вакцинных штаммов бруцелл: автореф. дис.док. вет. наук : 16.00.03. / Салмаков Константин Михайлович. Казань. - 1977. - 30 с.

89. Салмаков, К. М. О результатах широкого апробирования противобруцеллёзной вакцины из штамма 82 / К. М. Салмаков, Ю. Ш. Абузаров, Б. А. Киршин // Тез. докл. Республ. научн.-техн. конф. Казань. 1980. - С. 110-111.

90. Салмаков, К. М. Применение иммуноферментного анализа при ранней диагностике бруцеллёза / К. М. Салмаков, Э. М. Плотникова // Матер, докл. науч.-произв. конф. КВИ по проблемам вет. и жив-ва 2527 мая 1994 г. Казань, 1994. - С. 44.

91. Салмаков, К. М. Способ дифференциальной серологической диагностики бруцеллёза у крупного рогатого скота / К. М. Салмаков, А. М. Фомин // Инф. листок. Тат. УНТИ., Казань - № 431. - С. 89.

92. Сафонов, Г. А. Проблемы биологической безопасности в сельском хозяйстве / Г. А. Сафонов, В. А. Гаврилов // Ветеринария. 2002. - № 11.-С. 3-5.

93. Сочнев, В. В. Проявление бруцеллёза крупного рогатого скота в свежем эпизоотическом очаге / В. В. Сочнев // «Методы профил. и лечения инф. забол. с.-х. жив. в Нечерноземье». Горький, 1984. - С. 21-27.

94. Стеблева, Г. М. Поствакцинальная диагностика бруцеллёза крупного рогатого скота / Г. М. Стеблева, А. Г. Хлыстунов и др. // Пробл. адаптации с.-х. животных. Новосибирск, 1997 (1998). - С. 94-95.

95. Суспицин, А. В. Усовершенствованная схема эпизоотической оценки по бруцеллёзу стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма В. abortus 82: автореф. дис.канд. вет. наук : 16.00.03. / Суспицин Алексей Васильевич. Новосибирск, 2005. - 26 с.

96. Таран, И. Ф. К оценке перспективности исследований по созданию вакцин из инагглютинабельных культур бруцелл / И. Ф. Таран, Е. И. Замахаева//ЖМЭИ. 1971. -№ 6. - С. 53-58.

97. Таран, И. Ф. Сравнительное изучение вакцинного процесса и напряженности иммунитета у морских свинок, привитых В. abortus 19 и 104-М / И. Ф. Таран, Н. М. Недяпин, А. М. Полякова и др. // ЖМЭИ. 1964.-№2. -С. 53-59.

98. Таршис, М. Г. Болезни животных, опасные для человека / М. Г. Таршис, Б. М. Черкасский. М.: Колос, 1997. - С. 53-56.

99. Таршис, М. К. Эпизоотологический прогноз и противоэпизоотологический план / М. К. Таршис. Россельхозизд, 1979.- 112 с.

100. Триленко, П. А. Бруцеллёз с.-х. животных / П. А. Триленко. JI. : Колос: - Лен. отд, 1976. - 280 с.

101. Уласевич, П. С. Состояние и перспективы специфической профилактики бруцеллеза овец: дис.доктора вет. наук : 16.00.03. / Уласевич Пётр Семёнович. Москва, 1965. - 398 с.

102. Уразов, Т. Н. Иммунобиологические свойства рифампицинрезистентного штамма В. abortus 82: автореф. дис.канд. биол. наук : 03.00.07., 16.00.03. / Уразов Тимур Наилевич. Казань, 2005.-18 с.

103. Уралева, В. С. Характеристика свойств антибиотикоустойчивых форм бруцелл / В. С. Уралева // Антибиотики. М, i961. - Т. 6. - № 9. - С. 4651.

104. Урбан, В. П. Методы эпизоотологического исследования / В. П. Урбан, Н. М. Камицин // Л, 1979. 26 с.

105. Филиппов, В. В. Научные и практические аспекты обеспечения ветеринарного благополучия животноводства / В. В. Филиппов // "Ветеринария". 1994. - № 4. - С. 3-8.

106. Фомин А. М. Активность антигенов, полученных из различных штаммов бруцелл / А. М. Фомин // Сборник научных трудов КГВИ / Казань. 1980. - Т. 115. - С. 101-109.

107. Фомин, А. М. Использование набора препаратов ВНИВИ для дифференциальной серологической диагностики бруцеллёза крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82 / А. М. Фомин // Тез. докл. Респ. научно-произв. конф. / Казань. 1990. - С. 56.

108. Фомин, А. М. Роль дифференциальной серологической диагностики в общей системе противобруцеллёзных мероприятий / А. М. Фомин, К. М. Салмаков // Тез. докл. 3-й Всесоюзн. конф. по эпизоотологии, 24-26 сентября 1991 г. / Новосибирск. 1991. - С. 185-186.

109. Фомин, А. М. Система специальных ветеринарных мероприятий по профилактике и ликвидации бруцеллёза крупного рогатого скота / А. М. Фомин, К. М. Салмаков // Ветеринарный врач. 2000. - № 4. - С. 3334.

110. Фомин, А. М. Специфическая профилактика и дифференциальная диагностика при оздоровлении животноводческих хозяйств от бруцеллёза / А. М. Фомин // Тез. докл. научно-произв. конф. / Казань, 25-27 мая 1994 г. С. 16-17.

111. Фомин, А. М. Эффективность новой системы специальных противобруцеллезных мероприятий / А. М. Фомин, К. М. Салмаков // "Ветеринарный врач". 2001. - № 1. - С. 23-26.

112. Фомин, А. М. Оптимизация системы управления процессом борьбы с бруцеллёзом крупного рогатого скота в Самарской области / А. М. Фомин и др. // Ветеринарный врач. 2003. - № 3. - С. 50-55.

113. Фредерик, А. М. Условия разработки современных вакцин / А. М. Фредерик // ЖМЭИ. 1990. - № 11. - С. 83-90.

114. Хитоси, Кума Статистические методы повышения качества / пер. с. англ. Ю. П. Адлера, Л. Конарёвой. / М. : Финансы и статистика, 1990. 301 с.

115. Хлыстунов, А. Г. Противоэпизоотическая эффективность вакцины из штамма В. abortus 104М в уменьшенных дозах для ревакцинации коров / А. Г. Хлыстунов, К. В. Шумилов // Тез. науч.-прак. конф. / Новосибирск. 1995. - С. 45.

116. Хоч, А. А. Бруцеллез и туберкулез сельскохозяйственных животных / А. А. Хоч, А. В. Лысков. М.: Медицина, 1976. - С. 106-109.

117. Церендаш, Ч. Опыт применения вакцины из штамма В. melitensis Rev-1 на крупном рогатом скоте в условиях МНР / Церендаш Ч // Тр. ВИЭВ. 1984. - Т. 61.- С.21-26.

118. Церендаш, Ч. Применение вакцины из штамма Brucella melitensis Rev-1 на крупном рогатом скоте в Монголии / Церендаш Ч // Тр. ВИЭВ. 1960. - Т. 52. - С. 120-125.

119. Губина, М. М. Желудков, Т. И. Перекопская // ЖМЭИ. 1980. - № 6. -С. 84-88.

120. Чернышёва, М. И. Оценка чувствительности непрямой гемагглютинации и других методов диагностики бруцеллёза у людей / М. И. Чернышёва, Р. Г. Асланян, А. Г. Мнацаканян // ЖМЭИ. 1969. -Т. 7. - С. 55.

121. Шахов, А. Г. К вопросу об иммуногенных свойствах штаммов бруцелл, не образующих антител / А. Г. Шахов // Труды Воронеж. НИВС. 1966. - Вып. 5. - С. 57-61.

122. Шмутер, М. Ф. Сравнительная характеристика трех вакцинных штаммов бруцелл (19 В А, 19 и 104М) в эксперименте при подкожном и накожном применении / М. Ф. Шмутер, JT. Г. Лопатухина, А. Н. Сосунова и др. // ЖМЭИ. 1960. - № 6. - С. 12-16.

123. Шнырёва, Е. А. Сравнительная оценка эффективности некоторых антибиотиков и их сочетаний при лечении больных бруцеллёзом / Е. А. Шнырёва // Тр. Казахского института краевой патологии. М., 1965. -Т. 13.-С. 190-199.

124. Шумилов, К. В. Возрастной фактор при иммунизации телок против бруцеллеза / К. В. Шумилов // Тр. ВИЭВ. М., 1977. - Т. 45. - С. 37-40.

125. Шумилов, К. В. Значение дозы бруцелл слабоагглютиногенных и неагглютиногенных штаммов при иммунизации телок против бруцеллеза / К. В. Шумилов // Тр. ВИЭВ. М., 1978. - Т. 47. - С. 58-62.

126. Шумилов, К. В. Изучение вакцинных штаммов В. abortus 104-М, Brucella melitensis Rev-1, В. abortus 82 на крупном рогатом скоте / К. В. Шумилов, А. В. Акулов // Тр. ВИЭВ. М., 1977. - Т. 45. - С. 29-36.

127. Шумилов, К. В. Испытание иммунитета у телок, привитых вакцинами из бруцелл разных видов / К. В. Шумилов // Тр. ВИЭВ. — М., 1976.-Т. 47.-С. 63-70.

128. Шумилов, К. В. Результаты изучения адъювант вакцин из штаммов В. abortus 45/20 и В. melitensis 53Н38 / К. В. Шумилов, В. К. Гринько,

129. P. M. Тен, JI. А. Малышева, В. И. Ким // Тез. докл. Всесоюз. конф. «Актуаль. Вопросы профилактики бруцеллёза и орган, медицин, помощи больным». Новосибирск, 1989. - С. 186-187.

130. Юсковец, М. К. Бруцеллёз сельскохозяйственных животных / М. К. Юсковец. М. : 1960. - С. 67-78.

131. Юсупов, О. Ю. Специфическая профилактика бруцеллеза овец с применением вакцины из штамма В melitensis Rev-1: дис.докт. вет. наук : 16.00.03. / Юсупов Омар Юсупович. М., 1986. - 343 с.

132. Янулевичуте, Н. А. Изучение влияния сывороток больных ревматизмом на бласттрансформацию в смешанной культуре лимфоцитов / Н. А. Янулевичуте // ИЭ и КЛМ Мин. здравоохранения Литовской ССР, Вильнюс. 1977. - № 9. - С. 102-106.

133. Ярославцев, В. П. Эпизоотология бруцеллёза крупного рогатого скота в Условиях Среднего Урала: автореф. дис.канд. вет. наук : 16.00.03 / Ярославцев Владимир Петрович. Новосибирск. - 1990. - 22 с.

134. Abetedo, М. A. Efficacies comparativa enter diferentes metodos serologicos para el diagnostico de la brucel losis bovina / M. A. Abetedo // Rev. Salud. Anim. 1982. - Vol. 4, - 2. - P. 33.

135. Alton, G. The control of bovine brucellosis recent developments / G. Alton // World animal Review. 1981. - Vol. 39. - P. 17-25.

136. Bosseray, H. Laboratory reference vaccines to titre immunogenic activity of antibrucella vaccines in mice / H. Bosseray, M. A. Plomeet // Ann. Rech. Vet. 1983. - Vol. 14 (2). - P. 163-168.

137. Bricker, B. J. Conservation of antigenicity in a 31-kDa Brucella protein / B. J. Bricker, L. B. Tabatabai, B. L. Deyoe, J. E. Mayfield // Veter. Microbiol. 1988. - Vol.18. - № 3/4. - P. 313-325.

138. Chain, P. S. G. Whole-genome analyses of speciation events in pathogenic brucellae / P. S. G. Chain et al. // Infect. Immun. Vol. 73 (12). - 2005. - P. 53-61.

139. Corbel, M. J. Genus Brucella Meyer and Shaw 1920 / M. J. Corbel, W. J. Brinley-Morgan // In: Bergey's manual of systematic bacteriology. Baltimore, Williams and Wilkins Co. 1984. - P 377-388.

140. Corbel, M. J. International committee on systematic bacteriology / M. J. Corbel // Subcommittee on the taxonomy of Brucella. Int. J. Syst. Bacteriol, Vol. 38 (4). 1988. - P. 450-452.

141. Corner, L. Immunisation of cattle with Brucella abortus saltextractable proteins / L. Corner., L. Tabatabai, B. Deyoe // Veter. Microbiol. 1987.-Vol. 15.-№4.-P. 325.

142. Cunningham, B. Immunological characteristics in cattle of allergens derived from smooth Brucella abortus S99 / B. Cunningham et al. // Veter. Rec.- 1980.- 107.- 16.-P. 369.

143. Dufrene, P. Lutt contre la brucellose animal en France / P. Dufrene // III Internat. Symp. Brucellosis. 1983 / Develop. Biol. Standard. - 1984. - Vol: 56.-P. 719-729.

144. Garin, Bastuji B. Antigenes d'interet diagnostique en brucellose / Bastuji B. Garin, G. Dubruy // Bull. Inform. Lab. Serv. Veter. 1986. - Vol. 21. -P. 21-42.

145. Gaumont, R. Immunizationde la brebis contre 1 infection experimentale Brucella melitensis: Comparaison de onze vaccins / R. Gaumont, D. S. Trap, G. Gayot // Inten. Symp. Bruc. (II), Rabat. Devel. Biol. Stand. - 1975. -Vol. 3.-№ I. -P. 377-386.

146. Hill, B. D. The cultural and pathological examination of bulls serologically positive for brucellosis / B. D. Hill // Austral. Veter. G. 1983. - Vol. 60. -№ l.-P. 7.

147. Hornitzky, M. The relationship between the isolation of Brucella abortus and serological status of infected, non-vaccinated cattle / M. Hornitzky, Learson G. // Austral. Veter. G. 1986. - Vol. 63. - № 6. - P. 172.

148. Horwell, F. D. Brucella melitensis strain Rev 1 as a vaccine for cattle / F. D. Horwell, G. G. Van Drimmeelen // 1. S. Afr. Vet. Med. Assn. 1971. -Vol. 42 (3). - P. 233-235.

149. Huddlson, G. F. A rapid method for performing the agglutination test in serum diagnosis of Bang's abortion disease in cattle / G. F. Huddlson, E. R. Carlson // G. Am. med. ass. 1927. - Vol. 70. - P. 229.

150. Huddlson, G. F. Rapid microscopic agglutination for serum diagnosis of Bang's abortion disease / G. F. Huddlson, E. Albel // G. Int. dis. 1925. -Vol. 42. - 242 c.

151. Jahans, K. L. The characterization of Brucella strains isolated from marine mammals. / K. L. Jahans, G. Foster, E. S. Broughton // Vet. Microbiol. Vol. 57(4). - 1997. - P. 373-382.

152. Joubert, L. La vaccin antibrucellique inactive H. 38 dans la prophylaxic de la brucelloase des ruminants / L. Joubert, I. Valette // Bull. Soc. Sc. Veter. Med. Сотр. Lyon. 1969. - Vol. 71 (1). - P. 65-92.

153. Kostoula, A. G. The evalution of Rose-Bengal test in the laboratory diagnosis of human brucellosis / A. G. Kostoula, M. A. Dalamaga, E. Deska, С. V. Papadopoulou // Mediterr. G. Infec. and Parasit. Diseasis. 1995. -Vol. 10.-№2.-P. 95.

154. McEven, A. D. Brucella abortus: Heat Stable protective Antigen Revealed by Adjuvant and Present in "Roug" Variant Strain 45/20: Immunisation Experiments on Guinea-Pigs / A. D. McEven, J. Samuel // Vet. Rec. 1955. - Vol. 67 (29). - P. 546-548.

155. McEven, A. D. Experiments of Contagious Abortion. Immunisation studies with vaccines of Craded Virulence / A. D. McEven, F. Pristley // Vet. Rec. 938. - Vol. 50 (25). - P. 1097-1106.

156. McEven, A. D. Experiments on Contagious Abortion I. The Infectivity of Br. abortus strain for Cattle. II. Field Immunisation with a Vaccine prepared from strain 45 / A. D. McEven // Vet. Rec. 1937. - Vol. 49 (51). - P. 15851596.

157. McEven, A. D. The vaccination of Gvinea-pigs against Brucella abortus infection with living and heat-killed suspensions / A. D. McEven, F. Prisstley // Vet. Rec. 1940. - Vol. 52 (42). - P. 743-744.

158. Morris, Anthony Y. Public acceptability of vaccine / Anthony Y. Morris // Pedict. Rec. 1979. - Vol. 13. - № 5. - Part 2. - P. 725.

159. Onate, A. Comparison of protein components of different species and strain of Brucella / A. Onate, H. Folch // J. veter. med. ser. B. 1989. Vol. 36. - № 5. - P. 397-400.

160. Osterman, B. International committee on systematics of prokaryotes; subcommittee on the taxonomy of Brucella / B. Osterman, I. Moriyon // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. Vol. 56 (5). - 2006. - P. 1173-1175.

161. Palmer, M. V. Safety and immunogenicity of Brucella abortus strain RB-51 vaccine in pregnant cattle / M. V. Palmer, S. C. Olsen, N. F. Cheville // Am. veter. rec. 1997. - Vol. 58.- № 5. - P. 472-477.

162. Pappas, G. Brucellosis. / G. Pappas, N. Akritidis, M. Bosilkovski, E.N. Tsianos // Engl. J. Med. 2005. - P. 352.

163. Renoux, G. Etudes sur la Brucellose ovine et caprine XXI1. Vaccination contra 'la brucellose de cheyres-soumiees aux conditions naturelles de l'fection / G. Renoux // Arch. Inst. Past. Tunis. 1959. - XXXVI. - Vol. 36 (l).-P. 143-155.

164. Renoux, G. Immunisation des caprins et ovins contte la Brucellose par un vaccin tue en excipiet huileux / G. Renoux // Rec. Med. Veter. 1960. -Vol. 136 (4).-P. 291-302.

165. Renoux, G. Immunisation des ovins et caprins contre la Brucellose au moyen d'un vaccin tue incorpore a una huite minerale / G. Renoux // Annales de 1' Institut Pasteur. 1962. - Vol. 103 (5). - P. 786-801.

166. Sicre, O. Sensibilisatrice specifique daus les serums des animaux traits par M. melitensis et daus le serum des malades afteints des flevres mediterranennes // Ann. Inst. Past. 1908. - Vol. 22. - 7. - P. 616

167. Sohn, A. H. Human neurobrucellosis with intracerebral granuloma caused by a marine mammal Brucella / A. H. Sohn, W. S. Probert et al. // Emerg. Infect. Dis. 9. 2003. - P. 485-488.

168. Sutherland, S. An enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Brucella abortes in cattle using monoclonal antibodies / S. Sutherland // Austral Veter. G. 1985. - 62. - 8. - P. 264-268.

169. Tabatabai, L. B. Immunogeniciny of Brucella abortus saltextractable proteins / L. B. Tabatabai, B. L. Deyoe, J. M. Patterson // Veter. Microbiol. -1989. Vol. 20. - № 1. - P. 49-58.

170. Thillerot, M. A propos de la Reglamentation de l'utilisation des vaccins Antibrucelliques / M. Thillerot // Bull. Soc. Veter. Practique France. 1971. -Vol. 55 (6).-P. 311-323.

171. Valette, L. Prophylaxis medicate de la brucellosis animal / L. Valette // Rev. Elevage Med. Veter. 1987. - Vol. 40. - 4. - P. 351.

172. Van Drimmelen, G. C. Preliminary findinga with the use of Brucella melitenasis strain Rev 1 as a vaccina against brucellosis in cattle / G. C. Van Drimmelen, F. D. Horwell // Bull, de l'office Internat. Epizoot. 1964. -Vol. 62.-P. 987-995.

173. Verger, J.-M. Brucella, a monospecific genus as shown by deoxyribonucleic acid hybridization / J.-M. Verger, F. Grimont, P. A. D. Grimont, M. Grayon // Ibid. 1985. - Vol. 35 (3). - P. 292-295.

174. Waghela, S. Serological response in cattle, sheep and goats in Kenya vaccinated with Killed Brucella melitensis strain H. 38 adjuvant vaccine / S. Waghela// Vet. Rec. 1983. - Vol. 112 (20). - P. 476-479.

175. White, P. G. Differentiation of smooth and nonsmooth colonies of Brucella / P. G. White, G. B. Wilson // G. Bacteriological. 1951. - V. 61. - P. 239240.

176. Wyckoff, J. H. Comparison of Brucella abortus antigen preparations for in vitro stimulation of immune bovine T-limfocite cell line / J. H. Wyckoff, J. L. Howland, F. W. Confer // Veter. Immunol. Immunopathol. 1993. - Vol. 36.- № 1,-P. 45-64.

Информация о работе

Крючков, Роман Александрович
кандидата биологических наук
Казань, 2009
ВАК 06.02.02

Диссертация

Иммунобиологические свойства стрептомицинрезистентного штамма B. abortus 82-Srи его применение при сочетанной защите животных от бруцеллеза - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы