Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Иммунологическая реактивность организма северных оленей при разных схемах реиммунизации слабоагглютиногенными вакцинами против бруцеллеза из щтаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-AB

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Иммунологическая реактивность организма северных оленей при разных схемах реиммунизации слабоагглютиногенными вакцинами против бруцеллеза из щтаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-AB"

На правахрукописи

005007028

ЕВГРАФОВ ГРИГОРИЙ ГРИГОРЬЕВИЧ

ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ РЕАКТИВНОСТЬ ОРГАНИЗМА СЕВЕРНЫХ ОЛЕНЕЙ ПРИ РАЗНЫХ СХЕМАХ РЕИММУНИЗАЦИИ СЛАБОАГГЛЮТИНОГЕННЫМИ ВАКЦИНАМИ ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ИЗ ШТАММОВ BR. ABORTUS 82 И BR. ABORTUS 75/79-АВ

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология.

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

1 2 ННВ 2012

Якутск, 2011

005007028

Работа выполнена в ГНУ «Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства» СО Россельхозакадемии.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук

Слепцов Евгений Семенович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Решетников Александр Дмитриевич

доктор ветеринарных наук, профессор Димов Сергей Константинович

Ведущая организация: ГНУ Всероссийский научно-

исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных СО РАСХН

Защита состоится «30» января 2012 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета ДМ 220.071.02 при ФГБОУ ВПО «Якутская государственная сельскохозяйственная академия» по адресу: 677007, г. Якутск, ул. Красильникова, 15. Тел. (4112) 35-78-45, факс (4112) 35-78-13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Якутская государственная сельскохозяйственная академия».

Автореферат размещен на сайте академии (http://ysaa.ru). отправлен на официальный Интернет-сайт ВАК «Система ЭБД» и разослан

2011г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, ^^

доктор ветеринарных наук 7 Н.И. Прокопьева

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Важнейшим условием подъема животноводства и обеспечения населения продуктами питания является снижение, а затем полная ликвидация инфекционных болезней сельскохозяйственных животных. Одной из таких болезней, наносящих значительный ущерб экономике страны, является бруцеллез. Бруцеллез северных оленей на Крайнем Севере Российской Федерации имеет широкое распространение и является значительным сдерживающим фактором дальнейшего развития оленеводства и продолжает представлять серьезную социальную опасность. В настоящее время бруцеллез северных оленей в Российской Федерации регистрируется на территории Республики Саха (Якутия), Ямало-Ненецкого и Чукотского автономных округов, Хабаровского и Красноярского краев, Тюменской, Магаданской, Камчатской и Амурской областей. По данным ВОЗ и МЭБ, за последние годы произошли существенные изменения в эпизоотической ситуации по бруцеллезу во многих странах мира, 38 государств освободились от этой болезни, в 5 странах болезнь встречается как исключение, в 50 - в виде единичных вспышек, а в 38 - как эпизоотия.

Не менее важным, является ликвидация бруцеллеза в эпидемиологическом отношении, так как больные бруцеллезом животные являются источником инфекции для людей. Болезнь представляет большую проблему, требует значительных трудозатрат и материальных средств на проведение комплекса ветеринарно-санитарных и организационно-хозяйственных мероприятий.

Исследователями Таймыра, Ямала, Магаданской области и Якутии (И.М. Голосов, 1956; В.А. Забродин, 1957, 1973; H.H. Давыдов, 1967, 1969; А.Ф. Пинигин, 1970; A.B. Лысков, 1981; Р.Б. Вашкевич, 1975; Р.Б. Вашкевич, 1975; К.А. Лайшев, 1990, 1998; A.A. Хоч, 1996; Е.С. Слепцов, 1999 и др.) К.А. Лайшев, (1990), Н.Т. Кобяков, (1995); К.А. Лайшев, 1998; Е.С. Слепцов, 1999; A.A. Васильева, 2000; A.A. Хоч, Е.С. Слепцов (2001); Л.Н. Гордиенко (2005); К.А Лайшев, В.А. Забродин, С.К. Димов, (2006); Г.Г. Аммосов, (2006); Н.В. Винокуров, (2010 и др.), проведено изучение распространения, методов диагностики, общей и специфической профилактики бруцеллеза северных оленей. Проведение противобруцеллезных мероприятий требует постоянного совершенствования в целях повышения её эффективности и надежности. При этом наряду с общими профилактическими мероприятиями приоритетным направлением в этой системе остается создание у животных высокой специфической защиты от бруцеллеза.

Для увеличения эффективности специфической профилактики в системе мер борьбы с бруцеллезом северных оленей разработана

возможность применения уменьшенных доз вакцин и различные методы их применения (A.A. Хоч, 1990; Н.Т. Кобяков, 1995; К.А. Лайшев, 1998; Е.С. Слепцов, 1999; A.A. Васильева, 2000; A.A. Хоч 2001). Тем не менее, проблема усовершенствования иммунопрофилактики бруцеллеза остается актуальной и требует дальнейшей разработки.

Цель исследований - изучение иммунологической реактивности организма северных оленей при первичной и вторичной реиммунизациях слабоагглютиногенными вакцинами против бруцеллеза из штаммов Вг. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ и разработка оптимальной схемы иммунопрофилактики бруцеллеза северных оленей в условиях Якутии.

Задачи исследований.

1. Выяснить эпизоотическую ситуацию по бруцеллезу северных оленей в Республике Саха (Якутия).

2. Изучить реактогенные свойства вакцин из слабоагглютиногенных штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ в разных дозах подкожным методом.

3. Выявить динамику антителообразования и аллергическую перестройку у северных оленей при первичной и вторичной реиммунизациях вакцинами из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ.

4. Разработать оптимальную схему иммунопрофилактики бруцеллеза северных оленей в оленеводческих хозяйствах горно-таежной зоны Якутии.

Научная новизна. Впервые проведено сравнительное изучение иммунологической реактивности и состояния иммунитета у северных оленей при первичной и вторичной реиммунизациях в зависимости от дозы введения вакцин из штаммов Br.abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ. Предложены новые данные по эпизоотической ситуации в оленеводческих хозяйствах Якутии с учетом современных теорий эпизоотического процесса, природной очаговости и особенностей ведения отрасли. Впервые проведено изучение реактогенных, антигенных и вирулентных свойств вакцины из штамма Br.abortus 75/79-АВ на северных оленях первичной и вторичной реиммунизациях. Впервые изучена динамика специфических антител в сыворотке крови северных оленей в зависимости от дозы введения вакцин из штаммов Br.abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ при первичной и вторичной реиммунизациях. При иммунизации подкожным методом введения вакцин из слабоагглютиногенных штаммов Br. abortus 82 в дозе 25 млрд.м.к., через 12 месяцев - первичной реиммунизации в дозе 10 млрд.м.к. и через год - вторичной реиммунизации в дозе 5 млрд.м.к. и Br. abortus 75/79-АВ в дозах 50, 25 и 10 млрд.м.к. соответственно, получен достаточно напряженный иммунитет у животных в течение одного года.

Разработана оптимальная схема иммунопрофилактики бруцеллеза северных оленей в оленеводческих хозяйствах горно-таежной зоны Якутии.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследований открывают возможность повышения эффективности специфической профилактики против бруцеллеза северных оленей.

Материалы научных исследований включены в методические рекомендации: «Применение вакцины из штамма Brucella abortus 75/79-АВ при профилактике и борьбе с бруцеллезом северных оленей» (утв. Ученым советом ГНУ ЯНИИСХ, СО Россельхозакадемии, прот. №11 от 22 ноября 2011 г.).

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на: III международной научно-практической конференции «Наука в аграрном вузе: инновации, проблемы и перспективы» (Якутск, 2007 г.), международной научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы исследований по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел», посвященной 110-летию ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко (Москва, 2008 г.), международной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики хронических инфекций животных», посвященной памяти И.А. Косилова (Омск, 2009 г.), заседаниях Ученого Совета ГНУ ЯНИИСХ СО РАСХН за 2006-2010 гг.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе три статьи в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ («Ветеринария и кормление», «Аграрный вестник Урала»),

Объем н структура диссертации. Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложения, иллюстрировано 15 таблицами и 9 рисунками. Список литературы включает 210 источников, в т. ч. 119 отечественных и 91 иностранных авторов.

Основные положения, выносимые на защиту:

- материалы по изучению эпизоотической ситуации по бруцеллезу северных оленей в Республике Саха (Якутия);

- результаты исследования реактогенных свойств вакцин из слабоагглютиногенных штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ в разных дозах подкожным методом;

- результаты динамики антителообразования и аллергическая перестройка у северных оленей при первичной и вторичной реиммунизациях в разных дозах вакцинами из штаммов Br. abortus 82 и Вг. abortus 75/79-АВ;

- оптимальная схема иммунопрофилактики бруцеллеза северных оленей в оленеводческих хозяйствах горно-таежной зоны Якутии.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материал и методы

Работа была выполнена в период с 2005 по 2010 гг. в лаборатории бруцеллеза и туберкулеза животных ГНУ «Якутский НИИ сельского хозяйства» СО Россельхозакадемии, Якутской республиканской ветеринарно-испытательной лаборатории, Момской районной ветеринарно-испытательной лаборатории, а также в оленеводческих хозяйствах Республики Саха (Якутия).

Исследования проведены в соответствии с тематическими планами НИР, утвержденными ГНУ ЯНИИСХ СО РАСХН в период с 2006 по 2010 гг. по заданию 08.02.01, гос. регистрации № 017821.06.8.0 01.4/010.

Ретроспективную оценку эпизоотической ситуации по бруцеллезу, а также изучение эффективности противобруцеллезных мероприятий, проводили на основании эпизоотических данных Департамента ветеринарии МСХ Республики Саха (Якутия), дополнительно по первичным документам ветеринарного учета и отчетности и по материалам эпизоотического обследования оленеводческих хозяйств республики.

Изучение культурально-морфологических, тинкториальных, агглютинабельных и других свойств культур проводили по методикам, рекомендованным Комитетом экспертов по бруцеллезу ФАО/ВОЗ (6-й доклад, 1986 г.). Для определения степени диссоциации культур использовали реакцию термопреципитации, пробу на агглютинацию в водном растворе акрифлавина (1:1000) и окраску колоний по Уайт-Вильсону.

Для бактериологического исследования пробы брали из 20-25 лимфатических узлов и 6-7 органов от каждого убитого оленя. Из каждого объекта материал высевали в одну пробирку с мясо-пептонно-печеночным бульоном (МППБ) и в две пробирки на мясо-пептонно-печеночно-глюкозо-глицериновым агар (МППГГА). За посевами наблюдали 25-30 дней. Чтобы получить рост отдельных ограниченных друг от друга колоний культуру каждого из изучаемых штаммов высевали в чашках Петри на МППГГА. Выросшие колонии бруцелл просматривали визуально, под малым увеличением микроскопа или через лупу при естественном или искусственном освещении в прямом и косопроходящем свете. Отмечали колонии бруцелл, отличающиеся по форме и прозрачности, затем их окрашивали раствором кристалл-виолета (1:2000) для дифференциации 8- и 11-форм.

В качестве диагностических тестов в опытах при исследовании сыворотки крови северных оленей применяли РБП, РА (классическую), пластинчатую РА, РСК и РИД с О-ПС антигеном. Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ) изучали путем постановки пальпебральной

аллергической пробы с бруцеллином ВИЭВ. Проверку напряженности иммунитета у привитых северных оленей проводили путем ввода вакцинированных животных в неблагополучное по бруцеллезу стадо северных оленей. При анализе материалов использованы общепринятые методы корреляционного анализа и статистической обработки по методу Ю.К. Баюна (1986).

2.2. Схемы постановки опытов.

Опыт №1 был поставлен в октябре 2006 г. в ПК «Малтан» Момского улуса. В опыт было взято 60 голов молодняка северных оленей текущего года рождения (6-8 месяцев после рождения). В качестве не привитого контроля служили 20 оленей аналогичного возраста. Всех животных опытных групп перед иммунизацией слабоагглютиногенными вакцинами исследовали в РБП, РА, РСК и РИГА. При постановке общепринятых реакций РА и РСК использовали единый бруцеллезный антиген, а РБП -розовый бенгальский. При постановке РИГА применяли эритроцитарный диагностикум ВНИИБТЖ (г. Омск) и пластиновые планшеты. Вакцину из штамма Br. abortus 82 получили из Шелковского биокомбината, а вакцину штамма Br. abortus 75/79-АВ - из Приволжского. В сыворотке крови определяли уровень специфических антител в зависимости от дозы введения вакцин из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ. В октябре 2006 г. первой и второй вакцинами были иммунизированы по 30 оленей, согласно схеме постановки опытов (табл. 1). В октябре следующего 2007 года провели первичную реиммунизацию, а в октябре 2008 года - вторичную. Для определения сроков появления, максимального подъема и угасания титров антител применяли РА, а комплементсвязывающих антител - РДСК на холоду с титрованием гемолитической системы.

Опыт №2 был поставлен в октябре 2007 года в СХПК «Искра» Момского района. Схема постановки опыта №2 была аналогична опыту №1. После иммунизации в течение 2-х недель определяли местную и общую реакцию организма северных оленей на введение вышеуказанных вакцин путем наблюдения за общим состоянием организма северных оленей.

Таблица 1 - Схема опытов по иммунологической реактивности оленей

№№ груп п Иммунизированы вакцинным штаммом Количество животных Метод вакцинации Иммунизация в млрд.м.к. Первичная реиммуни-зация в млрд.м.к. Вторичная реиммуни зация в млрд.м.к.

1 Вг.аЬогШэ 82 10 Подкожно 25 10 5

2 Вг.аЬо11ш 82 10 Подкожно 50 25 10

3 Вг.аЬойш 82 10 Подкожно 100 50 25

4 Вг.аЬоПиэ 75/79-АВ 10 Подкожно 25 10 5

5 Вг.аЬоЛш 75/79-АВ 10 Подкожно 50 25 10

6 Вг.аЪоЛш 75/79-АВ 10 Подкожно 100 50 25

7 Не привитый 20 Не Не Не

контроль привиты привиты привиты

Через 7 месяцев, после проведения вторичной реиммунизации оленей опыта №2 водили в неблагополучное по бруцеллезу стадо № 9. Животных опытных групп после 12-ти месячного совместного содержания в неблагополучном стаде подвергали убою. Бактериологические исследования были проведены в Момской ветеринарно-испытательной лаборатории. Лимфатические узлы и паренхиматозные органы от каждого животного были отобраны в количестве 15-20 объектов. Высевы были проведены на пробирку с МППБ и две пробирки с МППГГА. Высевы проводили стерильной пастеровской пипеткой после предварительного прижигания места укола патологического материала разогретым над пламенем спиртовки шпателем. Пробирки с засеянным материалом инкубировали в термостате при 37°С до 30 суток с периодическим просмотром характера роста культур.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Краткие сведения о природно-климатических условиях и особенностях ведения животноводства в разных зонах Якутии Республика Саха (Якутия) по территории является крупнейшим в России регионом. Она расположена на Северо-Востоке Азии в пределах 73,3-55,29 северной широты и 105,30-162,51 восточной долготы. Площадь Якутии (3130,2 тыс. кв. км.) занимает 18 или почти 1/5 часть территории всей России. По суровости климата - это область полюса холода северного полушария и крайне резких колебаний температуры. Сумма температур воздуха за период, когда она выше +10°С, характеризует термические ресурсы теплого времени года. С наступлением этого периода связано начало активной вегетации большинства растений.

На Северо-Восточной зоне почвы под лесами горных склонов относятся к горным глеево-мерзлотным с мощной торфянистой 8

подстилкой, а почвы лесов на дне горных долин и на плато с замедленным стоком вод к горным мерзлотным, полуболотным. Хорошо выражена вертикальная поясность (зональность). Верхний предел древесной растительности находится на высоте около 1000-1200 м. над уровнем моря. На высоте от 1100 до 1400 м. над уровнем моря располагаются горные тундры. Основу травостоя образуют ряд осок и злаков. По склонам формируется лишайниковая тундра, а на более выровненных переувлажненных местах развиваются моховые и кочкарные пушицевые тундры пригодные для разведения домашних северных оленей (М.Ф Габышев, 1966, 1972; М.Н. Караваев, С.З. Скрябин, 1971; И.А. Матвеев, 1989).

3.2. Эпизоотическое состояние по бруцеллезу северных оленей в Республике Саха (Якутия) за 2000-2010 гг.

Одной из задач наших исследований явилось изучение эпизоотического состояния по бруцеллезу северных оленей в целом по республике и в частности в Момском улусе. При анализе на глубине 11 лет (с 2000 до 2010) отмечено, что количество неблагополучных пунктов (административных улусах) имеет неуклонную тенденцию к снижению - с 21 улуса в 2000 году к 10 (Абыйский, Аллаиховский, Булунский, Жиганский, Момский, Нижнеколымский, Оленекский, Оймяконский, Эвено-Бытантайский, Кобяйский) в 2010 г. (рис. 1).

Зараженность оленей тундровой зоны Якутии (Булунский, Аллаиховский и Нижнеколымский улусы) заметно снизилась (на 1,4-3,9%) и составляет 0,6-1,3%, благополучными являются Анабарский и Усть-Янский улусы. Лесотундровой и горно-таежной зонах зараженность оленей бруцеллезом составляет от 0,1-2,2%, неблагополучными являются Абыйский, Жиганский, Момский, Оленекский Оймяконский Эвено-Бытантайский и Кобяйский улусы. У оленей таежной зоны (Алданского, Вилюйского, Верхнеколымского, Горного, Усть-Майского, Олекминского, Мирнинского, Нерюнгринского и других улусах) бруцеллез не установлен. Проводимые противоэпизоотические мероприятия в Момском улусе оказывают заметное влияние в сторону постепенного уменьшения количества животных реагирующих на бруцеллез. По результатам мониторинга (2005-2008 гг.) по бруцеллезу оленей проведенных в ПК «Малтан» и «Искра» выявлено снижение количества на 2,44%, в разрезе первого хозяйства на 2,08%, второго - на 4,08%.

В структуре реагирующих на бруцеллез животных процент важенок снижается. В распространении бруцеллеза снизилась роль хоров, процент зараженности составляет от 0 до 0,33% от числа исследованных быков производителей.

Годы

Рис. 1 — Динамика снижения количества неблагополучных по бруцеллезу северных оленей административных улусов Республики Саха (Якутия).

3.2.1. Причины длительного неблагополучия поголовья стад по бруцеллезной инфекции по бруцеллёзной инфекции северных оленей в Республике Саха (Якутия)

В условиях Якутии бруцеллез северных оленей носит природно-очаговый характер. При этом основными источниками инфекции бруцеллеза являются больные домашние и дикие северные олени, а факторами передачи инфицированные пастбища, места отелов, корали и другие объекты внешней среды. Инфицирование оленей, главным образом, происходит во время гона и отела, при абортах, бесконтрольных обменах быками-производителями и транспортными оленями, вводе в маточные стада молодых важенок, корализационных работах и при контактах на путях миграции с дикими оленями. Управлением ветеринарии при МСХ PC (Я) совместно с ЯНИИСХ утвержден и внедрен с 1998 года план постадного оздоровления от бруцеллеза северных оленей. Наиболее оптимальная схема иммунизации оленей была предложена с применением вакцины из штамма Br. abortus 82. Внедрение данной схемы начиная с 1997 г. позволило уменьшить процент реагирующих северных оленей в 2 раза. Экономический эффект оздоровления только одного неблагополучного стада составил более 800 тысяч рублей. В 2001-2010 г. в Томпонском улусе проведена апробация неабортогенной вакцины Br.abortus 75/79-АВ.

Таблица 2 — Результат заболеваемости бруцеллезом в оленеводческих стадах ПК «Малтан» и СХПК «Искра»

(2005-2007 гг.)

№ стад Иссле- Выявл. /о Исследо- Выявлено % В срав- Исследова- Выяв- % В срав- В срав-

довано реагиру- заболев; вано реагируют заболев; нении но лено заболев; нении нении 200'/

в 2005 г. ющих смости в 2006 г. их СМОСТИ 2006 г. с 2005 г. (%) в 2007 г. реагирующих СМОСТИ 2007 г. с 2006 г. (%) г. с 2005 г. (%)

ПК «Малтан»

№ 1 1210 25 2,06 1230 26 2,11 + 0.05 968 19 1,96 -0,15 -0.1

№2 521 49 8,9 492 24 4,87 - 4,03 483 21 4,34 -0,53 -4.56

.№3 1227 34 2,77 1211 47 3,88 - 1.03 1158 35 3,02 -0,86 +0.25

№4 566 10 1,76 689 20 2,90 + 1.25 587 7 1,19 -1,71 -0.57

№5 529 16 3,02 679 10 1,47 - 1,62 689 10 1,45 0,02 -1,57

№6 565 60 10,6 715 7 0,97 - 9,63 678 5 0,73 -0,24 -9,87

Итого: 4618 194 4,2 5016 134 2,67 -1,53 4563 , 97 2,12 -0,55 -2.08

СХПК «Искра»

№7 428 5 11,6 621 11 1,77 + 6 596 7 1,17 -0.60 -10,43

№8 467 48 10.27 1093 30 2,74 - 18 1135 25 2,20 -0,54 -8.07

Итого 895 53 5,92 1714 41 2.39 -3,53 1731 32 1.84 -0,55 -4.08

Всего по 5513 247 4,48 6730 175 2,6 -1,88 6294 129 2,04 -0,56 -2,44

СХПК

«Малтан»

и СХПК

«Артык»

Одной из причин низкой эффективности противоэпизоотических мероприятий является ветхость или отсутствие коралей для проведения зооветеринарных мероприятий и несоблюдение требований о запрете ввоза и вывоза животных в неблагополучные хозяйства. Также, имеются большие трудности с доставкой медикаментов и специалистов в оленеводческие стойбища, из-за отсутствия транспортных средств (воздушных и наземных), в связи со сложной транспортной схемой, а также со многими стадами отсутствует радиосвязь. Бесконтрольный обмен оленями способствует широкому распространению бруцеллеза. По этой причине в 2008 году было открыто 5 неблагополучных пунктов, а в 2009 г. - 2.

Таким образом, для решения проблемы необходимы изучение иммунологической реактивности организма северных оленей при первичной и вторичной реиммунизациях слабоагглютиногенными вакцинами против бруцеллеза из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ и разработка оптимальной схемы иммунопрофилактики бруцеллеза северных оленей в условиях Якутии.

3.3. Иммунологическая реактивность и состояние иммунитета у северных оленей в зависимости от дозы введения вакцин из штаммов Br.abortus 82 и Br.abortus 75/79-АВ при первичной и вторичной реиммунизациях

3.3.1. Реакгогенные свойства вакцины из штаммов Br. abortus 82 и 75/79-АВ в организме северных оленей

В опыте на 70 северных оленях всех половозрастных групп нами были изучены реактогенные свойства вакцин из штаммов Br.abortus 82 и 75/79-АВ в организме северных оленей (6 опытных и 1 контрольная группы по 10 животных). Результаты учета состояния местной реакции организма животных перед началом опыта и после подкожного введения представлены в табл. 3.

При учете реакции через 24 часа после подкожного введения вакцины на месте инокуляции отмечали умеренно выраженную припухлость плотной и горячей на ощупь консистенции. В последующем развивался отек, достигающий максимальных размеров на 7 день после иммунизации. При этом у оленей привитых дозами в 25 и 50 млрд.м.к. разница отека в зависимости от вакцин (штаммов Br.abortus 82 и 75/79-АВ) составлял в среднем 1,1-1,4 мм, а собственно размер отека соответственно составлял 21,3±1,8 и 27,2±1,7 мм, Р<0,05. В то же время, доза в 100 млрд.м.к. вызывает отек более разлитой и ее размер достигает от 30,7±1,8 до 33,4±1,7 мм (Р<0,05). При учете в последующие сутки размеры отека снижались и на 14 день составили в дозе 25 млрд.м.к. - 21,0±1,5-23,7±1,6; 50 млрд.м.к. - 23,5±1,0-26,3±2,5; и 100 млрд.м.к. - 29,9±2,6-31,8±2,5. Общая реакция организма оленей не отмечалась снижением аппетита и угнетенного состояния.

Таблица 3 - Показатели местной реакции, привитых подкожно разными дозами вакцинами из штаммов Вг.аЬогШэ 82 и Вг.аЬогив 75/79-АВ

Сроки после вакцпнаци и (дин) Размеры воспалительного отека при вакцинации Br. abortus 82 (мм) Размеры воспалительного отека при вакцинации Br.abortus 75/79-АВ (мм)

До вакцинацп и 0 0 0 0 0 0

После иммунизации в дозе (млрд.м.к.) После иммунизации в дозе (млрд.м.к.)

25 50 100 25 50 100

1 2 3 4 7 14 8.9±1.6 11,5±1,5 16,2±1,4 19,5±1,7 24,2±1,5 23,7±1,6 14,3±1,5 16,1 ±2,0 19,6+1,8 24,4±1,5 27,2±1,7 2б.3±2,5 18,7±1,9 22,0±2,0 25,4±1.8 28,6±1,5 33,4±1,7 31.8±2.5 8,1±1,1 11,0±1,3 15,4±1,5 18,4±1,4 23,1±1,8 21,0±1.5 12,1±1.8 14.8±2,1 16,1±1.7 19,5±1,5 25,8±1.3 23,5±1.0 17,5±2,0 19,0±2,3 23,5±1,5 26,0±1,8 30,7±1,8 29,9±2,6

3.3.2. Гуморальный иммунный ответ

У иммунизированных животных была изучена динамика серологических реакций в РБП, РА и РДСК на 7, 15, 30, 45, 70, 90 и 120 дни после иммунизации, первичной и вторичной реиммунизаций.

При исследовании сыворотки крови подопытных животных в реакции агглютинации (РА) была отмечена определенная закономерность сроков появления, максимального подъема и угасания титров антител в зависимости от дозы вакцин из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ (25, 50 и 100 млрд.м.к.). Так, на 7 день после иммунизации агглютинины были выявлены во всех группах (4,1-10,0 ME), с 15 дня наблюдался резкий рост уровня антител (табл. 9). Самый высокий титр выявлен на 30 день в дозе 100 млрд.м.к. вакцин из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ в (58,3 и 75,0 ME), в дозах 25 и 50 млрд.м.к. первой вакцины титр антител составил 45,0 и 54,0 ME, второй - 42,0 и 47,8 соответственно. Снижение уровня агглютинирующих антител, было отмечено в крови северных оленей, привитых подкожно в дозе 25, 50 и 100 млрд.м.к. через 60 дней. Резкое снижение уровня антител в крови оленей в дозе 25 млрд.м.к. наблюдался с 90 по 120 дня, а при дозе 50 и 100 млрд.м.к. происходит постепенное понижения титра антител - 180 дня независимо от примененной вакцины (Р<0,05). Через год после иммунизации антитела в крови северных оленей не выявлялись.

В тех же группах было проведено первичная реиммунизация в дозах 10, 25 и 50 млрд.м.к. вакцинами из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ (табл. 10). На 7 день наблюдался резкий подъем титра антител независимо от дозы и примененной вакцины до 23,0-32 ME. Самый

высокий титр выявлен на 15 день в дозе 50 млрд.м.к. вакцин из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ в (75,5 и 75,0 ME), в дозах 10 и 25 млрд.м.к. первой вакцины титр антител составил 45,0 и 55,0 ME, второй -47,0 и 54,0 соответственно. Постепенное снижение уровня агглютинирующих антител в крови оленей было отмечено через 30 дней, независимо от дозы примененной вакцины. К 180 дню титр антител в дозах по 10, 25 и 50 млрд.м.к. вакцины из штамма Br. abortus 82 составлял 14,8, 16,6 и 21,0, вакцины из штамма Br. abortus 75/79-АВ - 14,0, 14,6 и 19,6 соответственно. К 360 дню во всех группах северных оленей в крови сохраняется низкий титр антител (4,0- 8,0 ME).

Вторичная реиммунизация проводилось в дозах 5, 10 и 25 млрд.м.к. вакцинами из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ (табл. 11). На 7 день наблюдался подъем титра антител независимо от дозы и примененной вакцины до 10,4-27,4 ME. Самый высокий титр выявлен на 15 день при иммунизации вакцинами из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ. При первой вакцине в дозах 5, 10 и 25 млрд.м.к. титр антител составили 54,5, 72,9 и 60,0, второй - 54,5, 60,0 и 72,0 ME соответственно. Постепенное снижение уровня агглютинирующих антител, в крови оленей было отмечено через 30 дней независимо от дозы примененной вакцины и к 180 дню титр антител при применении вакцины из штамма Br. abortus 82 составлял 4,1, 8,3 и 13,6, вакцины из штамма. Br. abortus 75/79-АВ-4,3,9,3 и 14,8 соответственно.

В сыворотки крови подопытных животных в реакции длительного связывания комплемента (РДСК) на холоду с титрованием гемолитической системы была отмечена определенная закономерность сроков появления, максимального подъема и угасания комплементсвязывающих антител в зависимости от дозы вакцин из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ (25, 50 и 100 млрд.м.к.). Так, на 7 день после иммунизации комплементсвязываюшие антитела были выявлены во всех группах (табл. 12). В дозах 25 и 50 млрд.м.к. вакцин из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ титр антител в 7-15 дни был невысоким и составлял 3,8-6,0 ME, а в дозе 100 млрд.м.к. высоким - 25,3-28,4. Постепенное снижение уровня комплементсвязывающих антител, в дозах 25 и 50 млрдм.к. вакцин из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ наблюдается с 30 дня, а в дозе 100 млрд.м.к- с 60. К 360 дню низкий титр антител (0,8-1,0 ME) сохраняется в крови северных оленей, привитых вакциной из штамма Br. abortus 75/79-АВ, а у животных иммунизированных вакциной из штамма Br. abortus 82 антитела не выявляются (Р<0,05).

В тех же группах было проведено первичная реиммунизация в дозах 10, 25 и 50 млрд.м.к. вакцинами из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ (табл. 13). На 7 день наблюдался подъем титра антител. Независимо от дозы рост уровня комплементсвязывающих антител при первичной реиммунизации вакциной из штамма Br. abortus 82 в дозах 10 и 25 млрд.м.к. отмечался в 30-60 дни, в дозе 50 млрд.м.к. - 7-30 сутки на уровне 16,0-27,0 ME; а при иммунизации вакциной из штамма Br. abortus 75/79-АВ в первой дозе - в 15 день, во второй и третей дозах - в 30 сутки на уровне 16,0-26,0. С 90 дня

комплементсвязывающие антитела выяапялись в низких титрах продолжительное время, к 360 дню сохраняются в крови северных оленей на уровне 0,4-1,0 МБ, привитых вакциной из штамма Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ в дозах 10 и 25 млрд.м.к., а у животных иммунизированных в дозе 5 млрд.м.к. антитела не выявляются (Р<0,05).

Вторичная реиммунизация проводилась в дозах 5, 10 и 25 млрд.м.к. вакцинами из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ (табл. 14). На 7 день наблюдался подъем титра антител независимо от дозы и примененной вакцины 0,4-6,0 ME. С 30 дня реиммунизации вакцинами из штаммов Вг. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ а дозах 5, 10 млрд.м.к. выявлен низкий уровень титра антител (2,1-4,8 ME), а в дозе 25 млрд.м.к. высокий (16,0 ME). Снижение уровня комплементсвязывающих антител постепенный и продолжается до 90-180 дня (Р>0,05).

Таким образом, изучение гуморального иммунного ответа при иммунизации, первичной и вторичной реиммунизациях различными дозами вакцин из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ в наших опытах показало, что сроки появления, максимального подъема, угасания агглютинирующих и комплементсвязывающих антител выявила определенную закономерность. При иммунизации динамика агглютинирующих и комплементсвязывающих антител находится в прямой зависимости от дозы вакцины. Высокий уровень и длительное сохранение поствакцинальных антител отмечается из испытанных доз - в 100 млрд.м.к. вакцин из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ в (агглютинирующих 58,3-75,0, комплементсвязывающих 25,3-28,4 ME). Антитела в низком титре обнаруживаются более 180 дней. В дозах 25 и 50 млрд.м.к. титр агглютинирующих и комплементсвязывающих антител значительно ниже, сохранение короче (до 90-120 дней).

При первичной реиммунизации вакцинами из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ в дозах 10, 25 и 50 млрд.м.к. наблюдается резкий подъем титра антител агглютинирующих (75,5 и 75,0 ME) и комплементсвязывающих (16,0-27,0 ME) антител независимо от дозы применяемой вакцины. Высокий уровень агглютининов сохраняется до 180 дня, комплементсвязывающих - до 90, низкий титр антител сохраняется более года.

При вторичной реиммунизации уровень агглютинирующих антител независимо от дозы вакцин составляет 54,5-72,0 ME и комплементсвязывающих - 6,0-16 ME, сохраняемость первых и вторых антител до 90-180 дней.

3.3.3. Гиперчувствительность замедленного типа

Аллергическое исследование северных оленей пальпебральной пробой проводили бруцеллином ВИЭВ, приготовленным на Херсонской биофабрике (серия №7, ГОСТ 25-134-82, изготовлен 15.02.2009 г.) через 1, 3 и 4 месяца после вторичной ревакцинации и через 6 месяцев после введения опытных животных в неблагополучное стадо. Как видно из таблицы 4, наблюдается определенная зависимость числа положительно

реагирующих северных оленей от дозы вводимой вакцины. Так, на 30 день после вторичной ревакцинации аллергические реакции были отмечены у всех привитых животных вакцинами из штамма Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ. В тоже время, на 90 день аллергические реакции были отмечены только у северных оленей привитых в дозе 50 млрд. м.к. вышеуказанными вакцинами. Через 4 месяца после вторичной ревакцинации положительно реагирующих северных оленей в пальпебральной пробе не обнаружено. Таким образом, гиперчувствительность замедленного типа после вторичной реиммунизации была более выраженной у животных на 30 день, а аллергические реакции угасали к 4 месяцам после повторной реиммунизации. Вместе с тем, через 6 месяцев после введения опытных животных в неблагополучное стадо не было отмечено положительно реагирующих животных на пальпебральную пробу.

Таблица 4 - Результаты аллергических исследований северных

оленей после вторичной реиммунизации и ввода их в неблагополучное стадо

№№ группы Вакцина из штаммов Br.abortus Метод введения вакцины Доза (млрд.м.к.) Сроки после реиммунизации (дни)

30 90 120 180

1 82 подкожный 5 40,0% 0 0 0

2 82 подкожный 10 40,0% 0 0 0

3 82 подкожный 25 70,5% 20,0% 0 0

4 75/79-АВ подкожный 5 55,0% 0 0 0

5 75/79-АВ подкожный 10 60,0% 15,0% 0 0

6 75/79-АВ подкожный 25 70,5% 20,0% 0 0

3.3.4. Результаты испытания состояния иммунитета у северных оленей

При изучении состояния иммунитета у северных оленей, в зависимости от дозы введения вакцин из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ через 7 месяцев после вторичной реиммунизации были использованы эти же животные (табл. 1), распределенные на 6 опытных и 1 контрольную группы. К этому времени из 60 животных были потеряны 7.

Заражение проводили путем ввода поголовья опытных групп в неблагополучное по бруцеллезу стадо №9 (зараженность - 1,2 %). Через год совместного содержания в стаде животных опытных групп подвергали убою. Из каждой группы было отобрано по 3 оленя, которые были подвергнуты контрольному убою.

Бактериологические исследования были проведены в Момской ветеринарно-испытательной лаборатории. От каждого животного были отобраны по 15-20 проб из лимфатических узлов и паренхиматозных органов.

Высевы были проведены в пробирки с МИНЬ и с ML 11111 А. Все результаты бактериологического исследования дали отрицательный результат.

При экспериментальной проверке иммунитета через 12 месяцев после повторной ревакцинации было установлено, что все привитые олени оказались устойчивыми к заражению (100% иммунны). Таким образом, проверка иммунитета через 6 месяцев показало, что северные олени, вторично реиммунизированные вакцинами из штамма Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ в разных дозах противостояли заражению контактным методом.

На основе полученных данных, нами разработана оптимальная схема иммунопрофилактики бруцеллеза северных оленей в оленеводческих хозяйствах горно-таежной зоны Якутии. Схема включает иммунизацию вакциной из штамма Br. abortus 75/79-АВ в дозе 50 млрд.м.к., первичную реиммунизацию - 25 млрд.м.к. через 12 месяцев и вторичную реиммунизацию - 10 млрд.м.к. и в течение года вызывает достаточно напряженный иммунитет у животных.

Применение указанной схемы иммунизации является перспективным, так как создает у ревакцинированных северных оленей продолжительный иммунитет достаточно высокой напряженности и позволяет избежать длительного сохранения в сыворотке крови поствакцинальных антител, препятствующих проведению диагностических исследований на бруцеллез.

4. ВЫВОДЫ

1. Результаты эпизоотологического исследования свидетельствуют о том, что количество неблагополучных пунктов по бруцеллезу северных оленей (административные улусы) имеет неуклонную тенденцию к снижению - с 21 улуса в 2000 году к 10 (Абыйский, Аллаиховский, Булунский, Жиганский, Момский, Нижнеколымский, Оленекский, Оймяконский, Эвено-Бытантайский, Кобяйский) в 2010 г.

2. Зараженность оленей бруцеллезом тундровой зоны Якутии (Булунский, Аллаиховский и Нижнеколымский улусы) снизилась на 1,43,9% и составляет 0,6-1,3%, благополучными являются Анабарский и Усть-Янский улусы. В лесотундровой и горно-таежной зонах зараженность оленей бруцеллезом составляет от 0,1-2,2%. Неблагополучными являются Абыйский, Жиганский, Момский, Оленекский Оймяконский Эвено-Бытантайский и Кобяйский улусы. У оленей таежной зоны (Алданского, Вилюйского, Верхнеколымского, Горного, Усть-Майского, Олекминского, Мирнинского, Нерюнгринского и других улусах) бруцеллез не установлен.

3. Проводимые противоэпизоотические мероприятия в Мо иском районе оказывают заметное влияние в сторону постепенного уменьшения количества животных реагирующих на бруцеллез. По результатам мониторинга (2005-2008 гг.) по бруцеллезу оленей в ПК «Малтан» и СХПК «Искра» выявлено снижение количества реагирующих животных соответственно на 2,08% и 4,08%, в среднем - на 2,44%. В распространении бруцеллеза снизилась роль хоров,

процент их зараженности составляет от 0 до 0,33% от числа исследованных быков производителей.

4. Изучение реактогенных свойств вакцин из штаммов Br.abortus 82 и Br.abortus 75/79-АВ показало, что размер воспалительного отека северных оленей привитых подкожно вакцинами из штаммов Br.abortus 82 и Br.abortus 75/79-АВ прямо пропорционален величине дозы. На 7 день после иммунизации развивается отек, достигающий максимального размера. При этом у оленей привитых вакциной из штамма Br.abortus 82 в дозе 100 млрд.м.к. размер отека составляет 33,4±1,7 мм, при Br.abortus 75/79-АВ -30,7±1,8 мм (Р<0,05). С 14 дня размер отека начинает уменьшатся.

5. При иммунизации северных оленей против бруцеллеза вакцинами из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ динамика агглютинирующих и комплементсвязывающих антител находится в прямой зависимости от дозы вакцины. Более высокий уровень и длительное сохранение поствакцинальных антител отмечается в дозе в 100 млрд.м.к., уровень агглютинирующих составляет 58,3-75,0, комплементсвязывающих - 25,3-28,4 ME, антитела в низком титре обнаруживаются более 180 дней. В дозах 50 и 25 млрд.м.к. титр агглютинирующих и комплементсвязывающих антител значительно ниже (42,0-54,8 и 3,8-6,0 ME соответственно), сохранение короче (до 90-120 дней).

Первичная реиммунизация вакцинами из штаммов Br. abortus 82 и Вг. abortus 75/79-АВ в дозах 10,25 и 50 млрд.м.к. вызывает резкий подъем титра агглютинирующих (75,5 и 75,0 ME) и комплементсвязывающих (16,0-27,0 ME) антител независимо от дозы применяемой вакцины. Высокий уровень агглютининов сохраняется до 180 дня, комплементсвязывающих - до 90, низкий титр антител сохраняется более года.

При вторичной реиммунизации уровень агглютинирующих антител независимо от дозы вакцин составляет 54,5-72,0 ME и комплементсвязывающих- 6,0-16 ME, сохраняемость до 90-180 дней.

6. Разработана оптимальная схема иммунопрофилактики бруцеллеза северных оленей в оленеводческих хозяйствах горно-таежной зоны Якутии включающая иммунизацию вакциной из штамма Br. abortus 82 в дозе 25 млрд.м.к., первичная реиммунизация через 12 месяцев в дозе 10 млрд.м.к. и через год - вторичная реиммунизация в дозе 5 млрд.м.к. и иммунизация вакциной Br. abortus 75/79-АВ в дозах 50, 25 и 10 млрд.м.к. соответственно, вызывает достаточно напряженный иммунитет у животных в течение одного года.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Материалы научных исследований повысят эффективность противоэпизоотических мероприятий по бруцеллезу северных оленей в оленеводческих хозяйствах республики Саха (Якутия).

2. Результаты научных исследований вошли в методические рекомендации: «Применение вакцины из штамма Brucella abortus 75/79-АВ при

профилактике и борьбе с бруцеллезом северных оленей» (утв. Ученым советом ГНУ ЯНИИСХ СО Россельхозакадемии, прот. №11 от 22 ноября 2011 г.).

З.Результаты диссертационной работы могут быть использованы в учебном процессе студентам вузов и на факультете повышения квалификации ветеринарных специалистов.

6. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статья в журнале из списка, рекомендованного ВАК Минобразования и науки РФ

1. Евграфов, Г.Г. Изучение роли хоров в эпизоотическом процессе бруцеллезной инфекции северных оленей / Г.Г. Евграфов, Е.С. Слепцов // Ветеринария и кормление. - 2007. - №4. - С. 26.

2. Слепцов, Е.С. Изучение абортогенных свойств противобруцеллезной вакцины из штамма В. abortus 75/79-АВ в организме северных оленей / Е.С. Слепцов, В.И Федоров, Г.Г. Евграфов, Н.В. Винокуров // Аграрный вестник Урала. - 2011. - №4 (83). - С. 26-27.

3. Слепцов, Е.С. Иммунологическая реактивность организма северных оленей при повторной реиммунизации вакцинами из штаммов B.abortus 82 и B.abortus 75/79-АВ / Е.С. Слепцов, В.И. Федоров, Г.Г. Евграфов, Н.В. Винокуров // Аграрный вестник Урала. - 2011. - №4 (83). - С. 27-29.

Работы, опубликованные в сборниках научных трудов и материалах конференции

4. Слепцов, Е.С. Предварительные итоги изучения антигенных и иммуногенных свойств вакцины из штамма Brucella abortus 75/79-АВ в организме северных оленей / Е.С. Слепцов, Г.Г. Аммосов, Г.Г. Евграфов // Роль аграрной науки в развитии сельскохозяйственного производства Якутии: Сб. материалов науч.-иракт. коиф., посвящ. 50-летию Якут. НИИСХ СО РАСХН (Якутск, 25 июля 2006 г.) РАСХН. Сиб. отд-ние. Якут. НИИСХ. - Новосибирск, 2007. - С. 249-250.

5. Захарова, О.И. К вопросу о влиянии гельминтов на специфичность диагностических реакций при бруцеллезе северных оленей / О.И. Захарова, Г.Г. Евграфов, Н.В. Винокуров, Е.С. Слепцов // Теория и практика борьбы с инвазионными болезнями: матер, докл. науч.-практ. конф. по краевой паразитологии Якутии, поев, памяти проф. М.Г. Сафронова (Якутск, 22 ноября 2007 г.) - Якутск, 2008. - вып. 3. - С. 67-71.

6. Евграфов, Г.Г. Изучение иммунологической реактивности организма северных оленей при реиммунизации вакцинами из штаммов B.abortus 75/79-АВ / Г.Г. Евграфов // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: X Сибирский ветеринарный конгресс (Новосибирск, 2010 г.) -Новосибирск, 2010.-С. 155-156.

Подписано в печать 26.12.2011. Формат 60x84/16. Гарнитура Тайме. Печать трафаретная. Усл. печ.л. 1,25. Тираж 100 экз. Заказ № 342

Отпечатано в ГНУ ЯНИИСХ РАСХН г. Якутск, ул. Бестужева-Марлинского, 23/1

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Евграфов, Григорий Григорьевич, Якутск

61 12-16/38

ГОСУДАРСТВЕННОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ЯКУТСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИИ

'УКОГШСИ

ЕВГРАФОВ ГРИГОРИЙ ГРИГОРЬЕВИЧ

ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ РЕАКТИВНОСТЬ ОРГАНИЗМА СЕВЕРНЫХ ОЛЕНЕЙ ПРИ РАЗНЫХ СХЕМАХ РЕИММУНИЗАЦИИ СЛАБОАГГЛЮТИНОГЕННЫМИ ВАКЦИНАМИ ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ИЗ ШТАММОВ BR. ABORTUS 82 И BR. ABORTUS

75/79-АВ

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология.

Диссертация на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук Е.С. Слепцов

Якутск, 2012

ОГЛАВЛЕНИЕ

стр.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ...........................................4

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.......................................................9

1.1 Характеристика особенностей эпизоотологии бруцеллеза

северных оленей......................................................................9

1.2 Иммунопрофилактика бруцеллеза северных оленей..................28

1.2. Состояние и перспективы изыскания новых средств и

методов иммунопрофилактики.................................................41

Глава II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.................................50

2.1. Материалы и методы.........................................................50

2.2. Схемы постановки опытов..................................................51

Глава III РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ....................................55

3.1 Краткие сведения о природно-климатических условиях и особенностях ведения животноводства в разных зонах

Якутии..................................................................................

3.2. Эпизоотическое состояние по бруцеллезу северных оленей

в Республике Саха (Якутия) за 2000-2010 гг.................................58

3.2.1. Причины длительного неблагополучия поголовья стад по бруцеллезной инфекции по бруцеллёзной инфекции северных оленей в Республике Саха (Якутия)................................69

3.3. Иммунологическая реактивность и состояние иммунитета северных оленей в зависимости от дозы введения вакцин из штаммов Вг.аЬоЛш 82, и Вг.аЬоЛш 75/79-АВ при первичной и вторичной реиммунизации.......................................................73

3.3.1. Реактогенные свойства вакцины из штамма Вг.аЬоЛш 75/79-АВ в организме северных оленей при первичной и вторичной реиммунизации................................................73

3.3.2. Гуморальный иммунный ответ...................................77

3.3.3.Гиперчувствительность замедленного типа...................93

3.3.4. Результаты испытания состояния иммунитета

у северных оленей..........................................................96

ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.............................98

ВЫВОДЫ..................................................................................103

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.............................................105

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.............................106

ПРИЛОЖЕНИЯ.........................................................................128

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Важнейшим условием подъема животноводства и обеспечения населения продуктами питания является снижение, а затем полная ликвидация инфекционных болезней сельскохозяйственных животных. Одной из таких болезней, наносящих значительный ущерб экономике страны, является бруцеллез. Бруцеллез северных оленей на Крайнем Севере Российской Федерации имеет широкое распространение и является значительным сдерживающим фактором дальнейшего развития оленеводства и продолжает представлять серьезную социальную опасность. В настоящее время бруцеллез северных оленей в Российской Федерации регистрируется на территории Республики Саха (Якутия), Ямало-Ненецкого и Чукотского автономных округов, Хабаровского и Красноярского краев, Тюменской, Магаданской, Камчатской и Амурской областей. По данным ВОЗ и МЭБ, за последние годы произошли существенные изменения в эпизоотической ситуации по бруцеллезу во многих странах мира, 38 государств освободились от этой болезни, в 5 странах болезнь встречается как исключение, в 50 - в виде единичных вспышек, а в 38 - как эпизоотия.

Не менее важным, является ликвидация бруцеллеза в эпидемиологическом отношении, так как больные бруцеллезом животные являются источником инфекции для людей. Болезнь представляет большую проблему, требует значительных трудозатрат и материальных средств на проведение комплекса ветеринарно-санитарных и организационно-хозяйственных мероприятий.

Исследователями Таймыра, Ямала, Магаданской области и Якутии (И.М. Голосов, 1956; В.А. Забродин, 1957, 1973; H.H. Давыдов, 1967, 1969; А.Ф. Пинигин, 1970; A.B. Лысков, 1981; Р.Б. Вашкевич, 1975; Р.Б. Вашкевич, 1975; К.А. Лайшев, 1990, 1998; A.A. Хоч, 1996; Е.С. Слепцов, 1999 и др.) К.А. Лайшев, (1990), Н.Т. Кобяков, (1995); К.А. Лайшев, 1998; Е.С. Слепцов, 1999; A.A. Васильева, 2000; A.A. Хоч, Е.С. Слепцов (2001); Л.Н. Гордиенко

(2005); К.А Лайшев, В.А. Забродин, С.К. Димов, (2006); Г.Г. Аммосов,

(2006); Н.В. Винокуров, (2010 и др.), проведено изучение распространения, методов диагностики, общей и специфической профилактики бруцеллеза северных оленей. Проведение противобруцеллезных мероприятий требует постоянного совершенствования в целях повышения её эффективности и надежности. При этом наряду с общими профилактическими мероприятиями приоритетным направлением в этой системе остается создание у животных высокой специфической защиты от бруцеллеза.

Для увеличения эффективности специфической профилактики в системе мер борьбы с бруцеллезом северных оленей разработана возможность применения уменьшенных доз вакцин и различные методы их применения (АЛ. Хоч, 1990; Н.Т. Кобяков, 1995; К.А. Лайшев, 1998; Е.С. Слепцов, 1999; A.A. Васильева, 2000; A.A. Хоч 2001). Тем не менее, проблема усовершенствования иммунопрофилактики бруцеллеза остается актуальной и требует дальнейшей разработки.

Цель исследований - изучение иммунологической реактивности организма северных оленей при первичной и вторичной реиммунизациях слабоагглютиногенными вакцинами против бруцеллеза из штаммов Вг. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ и разработка оптимальной схемы иммунопрофилактики бруцеллеза северных оленей в условиях Якутии.

Задачи исследований.

1. Выяснить эпизоотическую ситуацию по бруцеллезу северных оленей в Республике Саха (Якутия).

2. Изучить реактогенные свойства вакцин из слабоагглютиногенных штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ в разных дозах подкожным методом.

3. Выявить динамику антителообразования и аллергическую перестройку у северных оленей при первичной и вторичной реиммунизациях вакцинами из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ.

4. Разработать оптимальную схему иммунопрофилактики бруцеллеза северных оленей в оленеводческих хозяйствах горно-таежной зоны Якутии.

Научная новизна. Впервые проведено сравнительное изучение иммунологической реактивности и состояния иммунитета у северных оленей при первичной и вторичной реиммунизациях в зависимости от дозы введения вакцин из штаммов Br.abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ. Предложены новые данные по эпизоотической ситуации в оленеводческих хозяйствах Якутии с учетом современных теорий эпизоотического процесса, природной очаговости и особенностей ведения отрасли. Впервые проведено изучение реактогенных, антигенных и вирулентных свойств вакцины из штамма Br.abortus 75/79-АВ на северных оленях первичной и вторичной реиммунизациях. Впервые изучена динамика специфических антител в сыворотке крови северных оленей в зависимости от дозы введения вакцин из штаммов Br.abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ при первичной и вторичной реиммунизациях. При иммунизации подкожным методом введения вакцин из слабоагглютиногенных штаммов Br. abortus 82 в дозе 25 млрд.м.к., через 12 месяцев - первичной реиммунизации в дозе 10 млрд.м.к. и через год -вторичной реиммунизации в дозе 5 млрд.м.к. и Br. abortus 75/79-АВ в дозах 50, 25 и 10 млрд.м.к. соответственно, получен достаточно напряженный иммунитет у животных в течение одного года.

Разработана оптимальная схема иммунопрофилактики бруцеллеза северных оленей в оленеводческих хозяйствах горно-таежной зоны Якутии.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследований открывают возможность повышения эффективности специфической профилактики против бруцеллеза северных оленей.

Материалы научных исследований включены в методические рекомендации: «Применение вакцины из штамма Brucella abortus 75/79-АВ при профилактике и борьбе с бруцеллезом северных оленей» (утв. Ученым

советом ГНУ ЯНИИСХ, СО Россельхозакадемии, прот. №11 от 22 ноября 2011 г.).

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на: III международной научно-практической конференции «Наука в аграрном вузе: инновации, проблемы и перспективы» (Якутск, 2007 г.), международной научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы исследований по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел», посвященной 110-летию ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко (Москва, 2008 г.), международной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики хронических инфекций животных», посвященной памяти И.А. Косилова (Омск, 2009 г.), заседаниях Ученого Совета ГНУ ЯНИИСХ СО РАСХН за 2006-2010 гг.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе три статьи в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ («Ветеринария и кормление», «Аграрный вестник Урала»).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложения, иллюстрировано 15 таблицами и 9 рисунками. Список литературы включает 210 источников, в т. ч. 119 отечественных и 91 иностранных авторов.

Основные положения, выносимые на защиту:

- материалы по изучению эпизоотической ситуации по бруцеллезу северных оленей в Республике Саха (Якутия);

результаты исследования реактогенных свойств вакцин из слабоагглютиногенных штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ в разных дозах подкожным методом;

результаты динамики антителообразования и аллергическая перестройка у северных оленей при первичной и вторичной реиммунизациях в разных дозах вакцинами из штаммов Br. abortus 82 и Br. abortus 75/79-АВ;

- оптимальная схема иммунопрофилактики бруцеллеза северных оленей в оленеводческих хозяйствах горно-таежной зоны Якутии.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика особенностей эпизоотологии бруцеллеза

северных оленей

Бруцеллез относится к группе инфекционных болезней общих для животных и человека. По этой причине бруцеллез до настоящего времени является одной из актуальнейших проблем ветеринарной науки и практики. Обладая значительной контагиозностью и эпизоотичностью, бруцеллез животных можно отнести к числу трудноискоренимых инфекционных заболеваний. Вопросы иммунитета и специфической профилактики бруцеллеза сельскохозяйственных животных имеют первостепенное, а точнее, решающее значение в системе мер борьбы против этой инфекции.

Изучение бруцеллеза оленей в экспериментальных условиях было начато в 1935 году Ф.А. Турандиным и Н.П. Янушкевичем и продолжено А. Ревнивых (1936) и М.Д. Бахрах (1936). Бруцеллез северных оленей на территории России впервые был зарегистрирован в 1948 году в Таймырском национальном округе Красноярского края И.М. Голосовым, который изучал этиологию абортов, бурситов и орхитов у этого вида животных. Им было установлено, что в сыворотке крови инфицированных особей выявляются антитела, вступающие во взаимодействие с бруцеллезным антигеном, а также возникают позитивные реакции на введение специфического аллергена-бруцеллогидролизата.

Широкое изучение бруцеллеза северных оленей в СССР было начато с 1956 года. Благодаря исследованиям, проведенным В.А. Забродиным (1956,1959); М.И. Рудаковым (1956); В.М. Серовым (1956); И.М. Голосовым (1956, 1963); А.Ф. Пинигиным, Е.С. Орловым (1963), Г.П. Выборовым, О.С. Петуховой (1958, 1960); Л.Д. Николаевским, A.B. Лысковым (1959); H.H. Давыдовым (1961); А.Ф. Пинигиным, О.С. Петуховой (1961, 1964); Г.П. Выборовым (1962,1964); H.H. Давыдовым, A.A. Хоч (1996); Е.С. Слепцовым

(1999, 2002); Л.Н. Гордиенко 2005; К.А Лайшевым, В.А. Забродиным, С.К. Димовым, (2006) и другими, бруцеллез оленей был выявлен в Красноярском и Хабаровском краях, Магаданской, Читинской, Иркутской, Камчатской, Тюменской областях, в Республиках Тыва и Якутия, проведено изучение распространения, методов диагностики, средств и способов специфической профилактики бруцеллеза северных оленей.

A.A. Хоч указывает что, в Якутии бруцеллез северных оленей впервые был установлен в 1955 г. в Оймяконском, в 1958 г. - в Томпонском и в 1961 г. - в Аллаиховском районах. В последующие годы он был зарегистрирован в 17 хозяйствах 14 районов республики, зараженность оленей составлял 70,777% от их общего количества.

В США и Северной Канаде также был обнаружен бруцеллез северных оленей (Corrigan , Hanson, 1955; Hantley et al., 1963).

На ряду с эпизоотическим значением бруцеллез северных оленей имеет серьезную эпидемиологическую опасность. Так, на территории России И.М.Голосовым и В.А. Забродиным (1959), было исследовано на бруцеллез 80 человек. У 10 из них обнаружили положительные реакции с бруцеллезным антигеном, а у 5 - клинические признаки болезни. А.Ф. Пинигин с соавтором (1958) исследовали 2606 человек, из которых на бруцеллез реагировало 9,6%. И.И. Черченко, Н.И. Самсонов, С.Я. Аврукина (1961) в Якутии выявили положительные реакции у 25% обследованных людей. А.Ф. Пинигин (1965) установил, что в районах эпизоотий до 24% людей положительно реагировали на бруцеллез, а у отдельных регистрировали клинические проявления болезни (поражение суставов, увеличение печени и лимфоузлов, поражение нервной системы и др.).

П.Ф. Белов, В.В.Захаров (1978) считают, что степень вирулентности «оленьих» культур бруцелл для человека выше, чем Br.abortus. Однако, В.А. Забродин, А.Ф. Пинигин, Р.Б. Вашкевич (1983) пришли к заключению, что возбудитель бруцеллеза северных оленей менее патогенен для человека, и заражение людей сопровождается иммунобиологической перестройкой

организма. Это утверждение объективно только по отношению к коренным жителям, непосредственно обслуживающим оленеводство.

Разработка средств и методов специфической профилактики бруцеллеза северных оленей была начата еще в шестидесятые годы, как за рубежом, так и в нашей стране. И в 1983 году впервые были разработаны и утверждены Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР "Рекомендации по профилактике и борьбе с бруцеллезом северных оленей". Однако, фактов, указывающих на противоэпизоотическую эффективность проводимых общих мер борьбы с бруцеллезом северных оленей, в литературе мы нашли крайне мало.

В последние годы в Чукотском автономном округе в результате вложения значительных финансовых средств на оздоровление северных оленей от бруцеллеза были получены положительные результаты. На 1 января 2011 года в округе осталось только одно неблагополучное хозяйство, в котором выявляются лишь единичные случаи серопозитивных оленей, без клинических признаков заболевания.

В Якутии за период с 1955 по 2011 годы, несмотря на проведение ежегодных плановых диагностических исследований, изоляций и убоя больных бруцеллезом оленей, оздоровления вели с применением вакцин из штаммов Br. abortus 19, 82, 104 М в разных дозах не удалось добиться полного оздоровления от бруцеллеза.

Таким образом, отсутствие эффективных мер борьбы с бруцеллезом северных оленей и сложность эпизоотической обстановки в регионах Крайнего Севера Российской Федерации поставили перед ветеринарной наукой новые задачи, направленные на изыскание эффективных средств специфической защиты (вакцин), с целью их применения в комплексе мероприятий, обеспечивающих надежную профилактику и ликвидацию данной болезни.

Для иммунизации северных оленей в разное время испытывались агглютиногенные живые вакцины из аттенуированных штаммов 19, 82

Br.abortus, Br.melitensis, Br.sius 61, REV-1 и экспериментальные вакцины, изготовленные из «оленьих» штаммов бруцелл В-209 и ОТ-47. испытание некоторых из них продолжается и в настоящее время. Ниже мы приводим краткие литературные данные о результатах применения различных вакцин.

Первые попытки иммунизации животных против бруцеллеза относится к началу XIX века (Bang, McFabyen, Stockman и другие).

В 20 и 30-е годы нашего столетия Heddleson (1922), DuBois, Sollier (1932, 1939) доказали возможность вакцинации животных культурами бруцелл с пониженной вирулентностью. В то же время были начаты испытания убитых противобруцеллезных вакцин, которые, как правило, заканчивались неудачей.

В дальнейшем в 30 и 40-х годах было начато изучение патогенеза и иммуногенеза, что привело к установлению при бруцеллезе нестерильной и стерильной фаз иммунитета.

В настоящее время, кроме инфекционного и неинфекционного иммунитета, различают видовой и возрастной иммунитет.

Инфекционная (нестерильная) фаза иммунитета является начальной и соответствует периоду острого течения бруцеллеза, для этой фазы характерна выраженная гиперплазия ретикулоэндотелиальных элементов в органах с различной степенью пораженности.

По данным П. А. Вершил овой и М.И. Чернышевой (1957) специфический антиген у морских свинок, �