Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сравнительное исследование биологических и продуктивных особенностей свиней, трансгенных по гену релизинг-фактора гормона роста, 3-го и 9-го поколений

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Сравнительное исследование биологических и продуктивных особенностей свиней, трансгенных по гену релизинг-фактора гормона роста, 3-го и 9-го поколений"

003064084

На правах рукописи

ПАРХОМЕНКО Елена Григорьевна

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ И ПРОДУКТИВНЫХ ОСОБЕННОСТЕЙ СВИНЕЙ, ТРАНСГЕННЫХ ПО ГЕНУ РЕЛИЗИНГ-ФАКТОРА ГОРМОНА РОСТА, 3-ГО И 9-ГО ПОКОЛЕНИЙ

03.00.23 - Биотехнология 03.00.13 - Физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Дубровицы - 2007 г.

003064084

Диссертационная работа выполнена в центре биотехнологии и молекулярной диагностики Всероссийского государственного научно-исследовательского института животноводства.

Научный руководитель - академик РАСХН

Л К Эрнст

- доктор биологических наук, профессор, член-корреспондент РАСХН

НА Зиновьева

Официальные оппоненты. - - д б.н , профессор

ЛП Дьяконов

- д б н, профессор Ю.Д Клинский

Ведущее учреждение - Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К И Скрябина

Защита состоится «17» июля 2007 г в 10 00 на заседании диссертационного совета Д 006 013.02 во Всероссийского государственном научно-исследовательском институте

животноводства

Адрес института: 142132, Московская область, Подольский район, п Дубровицы, ВИЖ Факс. 8(4967) 651101

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ВИЖа Автореферат разослан «•/£>> июня 2007 г

Ученый секретарь Диссертационного совет; Кандидат биологических нйу

^ Щ Губанова

1.0бщая характеристика работы

1.1. Актуальность работы. Прикладное использование трансгенных животных с измененными биологическими и хозяйственно-полезными признаками предусматривает создание линий трансгенных животных, стабильно передающих по наследству чужеродный ген и обусловленные интеграцией и экспрессией трансгена признаки (Эрнст Л К, 2005) Несмотря на то, что во всем мире сегодня получено большое число трансгенных животных с интеграцией и экспрессией чужеродных генов (Зиновьева Н А, Эрнст Л К , 2006), вопросам стабильного сохранения рекомбинантных генов и влияния таких генов и продуктов их экспрессии на организм животных в ряде поколений не уделяется должного внимания Результаты многолетних исследований, проводимых во Всероссийском НИИ животноводства, показали, что в процессе разведения трансгенных свиней с интеграцией генной конструкции тМТ1-ЬОЯР (ген релизинг-фактора гормона роста под контролем промотора меташтотионеина мыши), происходит нивелирование действия трансгена на ряд биологических и хозяйственно-полезных признаков (Эрнст Л К , Шатайло В Н , 2001, Эрнст Л К , Чабан И М, 2001, Эрнст Л К, Полгавцева Р А, 2001, Эрнст Л К и др, 2004) Однако, в связи с тем, что исследования трансгенных животных разных поколений проводились с существенным временным разрывом (более 10 лет), не ясно, является ли такое нивелирование действия трансгена на организм следствием саморегуляции организма или обусловлено влиянием изменившихся условий внешней среды С целью более объективной оценки действия трансгена на организм свиней разных поколений в 2004 году методом внутритрубного осеменения глубоко замороженным семенем, хранившимся в криобанке более 10 лет, было получено 2-ое поколение трансгенных свиней (Багиров В А, 2005), которое послужило основой для воссоздания последующих поколений свиней (3-, 4-го и т д)

1.2. Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение физиолого-биохимических процессов и продуктивных качеств свиней, трансгенных по генной конструкции тМТ1-Ь011Р, 3-го и 9-го поколений

Для достижения указанной цели, были поставлены следующие задачи'

1 Выполнить сравнительное исследование уровня соматотропина в крови трансгенных и контрольных свиней

2 Изучить особенности роста и развития экспериментальных групп свиней, в том числе под воздействием вакцинации

3 Изучить клиническую картину крови и особенности иммунного ответа опытных групп свиней на раздражение возбудителями острых кишечных заболеваний

4 Выявить особенности биохимических процессов, протекающих в организме трансгенных свиней, в сравнении с животными-аналогами

5 Определить показатели мясной и откормочной продуктивности трансгенных свиней и их аналогов

6 Изучить весовые характеристики, гистологичесие и цитоморфологические особенности органов и тканей трансгенных свиней

7 Изучить систему морфологических корреляций в организме трансгенных и контрольных свиней

1.3. Научная новизна работы. Впервые выполнена оценка действия интеграции трансгена на организм свиней, трансгенных по тМТ1-ЬОКР, разных поколений В одинаковых условиях внешней среды (кормление, содержание и тп) изучены особенности физиолого-биохимических процессов, мясная и откормочная продуктивность, цитоморфологические показатели органов и тканей, иммунный ответ при вакцинации бактериальной вакциной у трансгенных свиней 3-го восстановленного и 9-го поколений в сравнении с животными-аналогами

1.4. Практическая значимость работы. По результатам исследований трансгенных свиней 3- и 9-го поколений и их аналогов определены биологические особенности развития трансгенных свиней разных поколений, изучены особенности гематологических показателей и иммунологического ответа организма трансгенных свиней на раздражение возбудителями острых кишечных заболеваний, определены показатели мясной и откормочной продуктивности при убое в 120-130 кг живой массы, изучены цитоморфологические особенности органов и тканей трансгенных свиней, выявлена корреляционная зависимость уровня соматотропина в крови с другими физиологическими и хозяйственно-полезными признаками

1.5. Основные положения, выносимые на защиту.

• Повышенный уровень соматотропина в крови трансгенных свиней 3-го и 9-го поколений как результат интеграции и экспрессии гена релизинг-фактора гормона роста

• Изменения в динамике роста трансгенных свиней по сравнению с аналогами

• Лучшая иммунологическая реактивность трансгенных свиней 3- и 9-го поколений по результатам вакцинации к возбудителям острых кишечных заболеваний

• Изменение морфометрических показателей внутренних органов (щитовидной железы, поджелудочной железы, печени) у трансгенных свиней 3- и 9-го поколений как реакция организма на интеграцию трансгена

• Изменение некоторых морфологических корреляций в организме трансгенных свиней

• 1.6. Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлены на научных конференциях центра биотехнологии и молекулярной диагностики ВИЖ в 2005, 2006 гг, на 5-й международной школе-конференции «Новые методы генодиагностики и генотерапии современное состояние и перспективы использования в сохранении генофонда сельскохозяйственных животных», Дубровицы, 2005

По материалам диссертации опубликовано 5 работ, в том числе 2 - в журналах «Свиноводство» и «Зоотехния», рекомендованных ВАК РФ

1.7. Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы

Диссертация изложена на 124 страницах, включает 26 таблиц, 35 рисунков Список литературы включает 150 источников, в том числе 77 на иностранных языках

2. Материал и методы исследований.

Исследования проводили на откармливаемых трансгенных свиньях 3-го (восстановленного) и 9-го поколений и их аналогах — помесных свиньях пород ландрас и крупная белая в условиях физиологического двора ВИЖ, согласно схеме исследований, представленной на рисунке 1.

Свиньи были получены методом искусственного осеменения нетрансгенных маток семенем трансгенных хряков № 231-г, № Збб-г, № 398-г в экспериментальном хозяйстве ВИЖ «Кленово-Чегодаево» (отв исполнитель - вис, кс-хн Данч С С) Интеграцию чужеродного гена определяли с помощью ПЦР в лаборатории молекулярной генетики и цитогенетики животных ВИЖ (отв исполнитель — с н с , к б н Коновалова Е Н.) В течение научно-хозяйственного опыта от животных отбирали кровь для гематологических исследований Биохимический анализ крови проводили в лаборатории биохимии животных (отв исполнитель Гусев ИВ) Иммунологические исследования крови проводили на кафедре клинической диагностики и болезней молодняка МГАВМиБ им К И Скрябина

По окончании опыта и при достижении свиньями живой массы 120 -130 кг, был произведен контрольный убой по методике ВИЖ с детальным изучением развития внутренних органов, анатомо-морфологического состава туш и гистологической картиной некоторых органов и тканей организма Результаты обрабатывали биометрическими методами по малой выборке по Е К Меркурьевой с помощью компьютера За минимальный порог достоверности разницы между показателями принимали Р < 0,05

3. Результаты собственных исследований

3.1. Изучение уровня соматотропина в крови трансгенных и контрольных свиней.

Содержание в крови трансгенных свиней соматотропина - важнейший показатель, определяющий изменение фенотипа Как показано в таблице 1, в среднем уровень соматотропина в крови трансгенных особей, как 3-го, так и 9-го поколений был существенно выше по сравнению с контролем Так, у свиней опытных групп 3- и 9-го поколений этот показатель составил, соответственно, 1,8 и 0,85 нг/мл, что было, соответственно, в 4,5 и 2,1 раза выше, чем в контроле Сопоставляя средние значения уровня соматотропина в крови трансгенных животных изучаемых поколений, следует отметить, что уровень гормона в крови трансгенных свиней 3-го поколения был выше в 2,1 раза по сравнению с трансгенными свиньями 9-го поколения

Рисунок 1. Общая схема исследований.

Продуктивные и фииншел (^ешехнминсские осооепноеги

;п\П 1-hi '¡¡и Jawom.

ÜH, ^

1 .m^m-1íGRF':9 поке

M^LÍmm

Л

.,,,.,,, - г.- ' - •' "71 "" "' ""*.........\ ¿ ~ Л^*-'"-' -fe, у^щ j

Сриш;;тк\>п.'тя характеристика транс Теш üfe сииией ím^-ix) поколений :

11И ЯНЯ.ППГЙ^ГИ ' .

г

Рос г И . :Г.Н1ИС. j

СПСЯ&Г. ■ Ш Ш ■ "■'тфив.сс'

X

Иммунолог, показатели:

■И'РЬ! .

- антител к Щ? Протею. : ; Сальмонелле' ■ КлебЫе'яле, '.)шеои\ш(

Конур.н-трация солтато-тропипа й крон»

.... '38ÜB

~Т

К.мшпчсскин asitfife крови: í <>'}. I !и, ¡É ЦП, '

ЭрифОЦИ 17.!.

['Лейкоциты

Ьиохтщи-ческие показатели

1Г~

i <

ш

Контрольный

ш

т

ií_

^ жргеная продуктивность:

дВмфсеа, убойийй выход, тодщщт шпика,

внутреннего ||| : жира,

¡внутренних органов.*--'"Зомяса, %ч?аяа5 ' %.шстей, имхо.-ч '"руГит

4_

Гистологические

■'■■.'■"■'печень, но джелу до; шая

щитовидная "■'■

железа.

; üííf мышечная

ткань

■Физико-химические х.|р.-1кте- . ■ раетики

МШШЧ1ГОЙ

■ ■ ¡клип: |м| рН мяса, "о жира. % ё-елкл фарша

НЕ&МШБ ■

рКйрреля- ;

ннонные чл в не и мои и в

ошанигме

i

■ - ~ | ш 1

.¿¡Шш»

$■ * ¿i ^ I щей

i ШЙУм

; к*

I i

ЯЯ ЯШ®

' ■ • ' ■ --fe.-:, к :-;-asi v

Изучение концентрации соматотрошша в крови свиней в динамике, выявило значительные колебания этого показателя на протяжении всего откорма. Следует отметить, что трана енные свиньи характеризовались большей индивидуальной изменчивостью этого показателя.

Таблица 1

Содержание гормона роста в крови трансгенных свиней и их аналогов.

№ животного Уровень соматотропина в крови (нг/мл)

1 взятие 2 взятие 3 взятие 4 взятие 5 взятие в среднем

135 дн 170 дн 190 дн 205 дн 220 дн

Трансгенные свиньи (3 поколение)

№719 1,4 0,5 1,2 4 1,3 1,7

№736 3 3,5 1,2 4 0 2,3

№720 1,4 0,5 1,2 3 1,3 1,5

В среднем (М) 1,9 1,5 1,2 3,7 0,9 1,8

Трансгенные свиньи (9 поколение)

№753 0 0,8 0,6 0,5 1,3 0,6

№761 1,4 0,8 2,8 0,5 0 1Д

В среднем (М) 0,7 0,8 1,7 0,5 0,65 0,85

Контроль

№716 0 0,5 0,5 0,25 0 0,3

№721 0 0,25 0,8 0 0 0,2

№732 0 0 0,8 0 1,3 0,4

№765 1,4 0,5 0,25 0 0 0,4

№715 1,4 0,25 0,1 0 0 0,4

№750 1,4 0 0,25 0 1,3 0,6

В среднем (М) 0,7 0,3 0,5 0 0,4 0,4

3.2. Особенности роста трансгенных свиней.

По данным ряда исследований, проведенных на лабораторных животных, известно, что повышенный уровень соматотропина в крови приводил к ускорению темпов роста Поскольку изучаемые нами свиньи, трансгенные по гену релизинг-фактора гормона роста, также характеризовались повышенным уровнем гормона роста в крови, следовало ожидать заметных изменений в темпах роста трансгенных свиней по сравнению с аналогами

В результате изучения темпов роста трансгенных и контрольных животных было установлено, что за весь период опыта трансгенные животные 3-го поколения по среднесуточному приросту массы превосходили контрольных свиней на 36 грамм, в то время как трансгенные свиньи 9-го поколения — на 81 грамм

Если в начале откорма свиньи 9-го поколения по среднесуточным привесам уступали контрольным животным и животным 3-го поколения, соответственно, на 9,2 и 21,0%, то во второй половине откорма среднесуточные привесы данной группы оказались выше, чем в других группах. Наиболее ярко это проявлялось, начиная с 215 дня максимальная разница по отношению к контрольной группе -16,2 % (225 день), к группе 3-го поколения - 53,7 % (215 день) Свиньи 3-го поколения, наоборот, в первую

половину откорма по среднесуточным привесам превышали животных других групп, однако после 215 дня их привесы значительно снизились.

Совершенно неизученным является вопрос о влиянии па обмен веществ и процессы роста вакцинация животных против различных заболеваний, которая, несомненно, вызывает Существенные изменения обмена веществ и, как следствие, изменения в темпах роста. ГС нашем опыте проводилась двукратная вакцинация трансгенных и контрольных свиней вакциной ОКЗ па 175 и 190 дни откорма.

Как показано на рисунке 2, вакцинация в обоих случаях приводила к заметному снижению темпов роста свиней, однако степень снижения в разных группах подопытных животных варьировала.

Рисунок 2

Влияние вакцинЩКН на привесы трансгснных и контрольных свиней в период откорма (дни вакцинации указаны стрелками)

пр№ессну кентропьньк итрэмегснньк в период

моо

123 135 165 166 172 1В5 195 355 215 235 Ж

тт

Как показано на рисунке 2, снижение среднесуточных привесов в ответ на первую вакцинацию в большей степени наблюдалось у трансгснных свиней: на 13,2% у евшгей 3-го поколения и на 6,9% - у животных 9-го поколения, в то время как у контрольных - на 3,7%. При повторной вакцинации существенных различий в изменениях темпов роста между трансгениыми и контрольными свиньями не наблюдалось.

В целом следует отметить., что интеграция в геном свиней генов, связанных с экспрессией факторов роста, приводит к некоторым изменениям в характере роста и развития животных, однако однозначной тенденции а направлении таких изменений у свиней 3- и 9-го поколений не выявлено.

3.3. Иммунологический статус трансгенных свиней.

Генетические исследования ряда лабораторий мира показали дестабилизирующее действие чужеродных генов на состояние хромосомного аппарата и появление, связанных с этим генных мутаций Возможно, что экзогенная конструкция в результате синтеза чужеродного продукта и мутагенного взаимодействия прямо или опосредованно влияет на состояние иммунной системы трансгенных животных Для характеристики иммунного статуса трансгенных свиней были исследованы особенности гуморального иммунитета в норме и при повышенной иммунной нагрузке В качестве показателя, отражающего резистентность организма, был использован титр антител к бактериальным антигенам в сыворотке крови до и после вакцинации

Были проведены исследования по изучению динамики образования специфических антител к Протею, Клебсиелле, Сальмонелле, Эшерихии при вакцинации животных вакциной ОКЗ (вакцина ассоциированная инактивированная против колибактериоза, сальмонеллеза, клебсиеллеза и протейной инфекции молодняка сельскохозяйственных животных и пушных зверей), серия №21, контроль №21 В нашем опыте проводилась двукратная вакцинация с интервалом 14 дней

Как показано в таблице 2, у всех животных до вакцинации отмечалось наличие антител ко всем антигенам, входящим в вакцину ОКЗ Это свидетельствует о соответствующем антигенном раздражении исследуемых свиней на протяжении жизни, предшествующей вакцинации Это могло происходить естественным путем от матери с колостральными антителами, алиментарным и другими За период до вакцинации уровень антител против клебсиеллы был выше у контрольных животных Однако титр антител против других антигенов был выше у трансгенных свиней.

Таблица 2

Значения титров антител к клебсиелле, протею, сальмонелле, эшерихии в различные сроки вакцинации свиней_

Период клебсиелла протей

контроль 3 поколение 9 поколение контроль 3 поколение 9 поколение

1 40,0 33,3 30,0 48 53,3 60,0

2 56,0 33,3 100,0 320 186,7 100,0

3 144,0 240,0 200,0 1808 960,0 240,0

4 112,0 160,0 120,0 1024 533,3 400,0

Период сальмонелла эшерихия

контроль 3 поколение 9 поколение контроль 3 поколение 9 поколение

1 40,0 93,3 80,0 72,0 133,3 120,0

2 168,0 266,7 160,0 128,0 266,7 320,0

3 320,0 533,3 320,0 224,0 266,7 480,0

4 320,0 746,7 320,0 288,0 426,7 400,0

1 -до вакцинации,

2 —до вакцинации,

3 — через две недели после первой вакцинации, 4 — через две недели после второй вакцинации

В периоды после вакцинации титры антител к каждому антигену возрастали, но динамика изменения уровней в группах была различной Резкие изменения уровня антител к клебсиелле после первой вакцинации отмечены в группе свиней 3 поколения - в 7,2 раза Однако после второй вакцинации титр антител к клебсиелле во всех группах снизился Уровень антител к протею наиболее стабильно увеличивался в группе свиней 9-го поколения в 2,4 раза после первой вакцинации и в 1,7 раза - после второй В других группах после первой вакцинации титр антител резко увеличивался, а после второй снижался в 1,8 раза Стабильное увеличение титра антител к сальмонелле показали свиньи 3-го поколения в 2 раза после первой, и в 1,4 раза - после второй вакцинации В группах контрольных свиней и трансгенных свиней 9-го поколения титр антител после первой вакцинации увеличился, соответственно, в 1,9 и 2 раза После второй вакцинации титры антител у этих групп остались на том же уровне Титры антител к эшерихии после первой и второй вакцинаций увеличились у контрольных животных, соответственно, в 1,7 и 1,3 раза В группе 3-го поколения титры антител увеличились только после второй вакцинации - в 1,6 раза Животные 9-го поколения показали увеличение титра антител в 1,5 раза после первой вакцинации, однако после второй вакцинации произошло снижение - в 1,2 раза

Таким образом, результаты исследований по установлению специфического иммунитета к антигенам протею, сальмонелле, клебсиелле и эшерихии в результате вакцинации животных вакциной ОКЗ показали, что трансгенные животные характеризуются не только высокой степенью специфического иммунного ответа к бактериальным возбудителям, но и подтвердили ранее полученные данные о готовности таких животных к специфической защите при встрече с любым инфекционным агентом на ранней стадии вакцинации

3.4. Биохимические особенности обмена веществ трансгенных свиней и аналогов.

Исследования обмена веществ трансгенных и не трансгенных свиней показали некоторые отличия в интенсивности протекания процессов метаболизма Так, уровень глюкозы в группе свиней 9-го поколения был выше, чем в контрольной группе и группе свиней 3-го поколения, соответственно, на 38,2 и 24,6% Азотистый обмен характеризовался увеличением общего белка в крови свиней 9-го поколения по сравнению с контрольной группой и группой свиней 3-го поколения, соответственно, на 13,9 и 10,6% Было отмечено снижение уровня альбуминов в крови у свиней 3-го поколения на 4,9% по сравнению с другими группами По концентрации

глобулинов животные 9-го поколения превосходили контрольную группу и группу 3-го поколения, соответственно, на 31,4 и 31,0% Отмечая некоторые различия в биохимических показателях крови трансгенных и контрольных свиней, следует отметить, что во всех группах свиней биохимические показатели находились в пределах физиологической нормы 3.5. Мясная продуктивность.

Изучение состава туш опытных свиней показало, что при практически равном весе полутуш у трансгенных животных 9-го поколения отмечается тенденция к увеличению мяса в туше по сравнению с группой 3 поколения и контрольной группой, соответственно, на 5,5 и 2,8% Отмечено снижение веса сала в группе 9-го поколения по сравнению группой 3 поколения и контрольной группой, соответственно, на 10,0 и 6,1% Вес костей в группе 3 поколения снизился на 2,3% по сравнению с контролем, в то время как в группе 9-го поколения, наоборот, увеличился на 7,3%

Таблица 3

Состав туш трансгенных свиней 3- и 9-го поколений и их аналогов.

Показатель Группы свиней

Контр 3 поколение 9 поколение

кг кг К контролю кг К контролю К 3 покол

кг % кг % кг %

Вес полутуши 41,6 44,8 +3,2 +7,7 46,0 +4,37 +10,5 +1,2 +2,6

Вес мяса 22,5 23,7 +1,2 +5,1 25,6 +3,06 +13,6 +1,9 +8,1

% мяса 54,1 52,7 -1,4 -2,5 56,0 +1,52 +2,8 +2,9 +5,5

Вес сала 15,1 17,0 +1,9 +12,4 15,7 +0,58 +3,8 -1,3 -7,6

%сала 36,4 37,9 +1,6 +4,4 34,1 -2,21 -6,1 -3,8 -10,0

Вес костей 3,98 4,19 +0,2 +5,2 4,7 +0,75 +18,7 +0,5 +12,8

% костей 9,6 9,4 -0,2 -2,3 10,3 +0,7 +7,3 +0,9 +9,8

Показательными и более объективными критериями оценки полномясности туш являются «индекс мясности» - соотношение мясо/кость и

«индекс постности» - соотношение мышечная/жировая ткань (табл 4)

Таблица 4

_Показатели качества отдельных частей туш свиней._

Группа животных Индекс «мясности» Индекс «постности»

Части туши Части туши

Передняя Задняя Средняя Передняя Задняя Средняя

Контроль 5,42 5,81 5,32 4,77 2,64 1,23

3 поколение 5,07 5,72 6,64 3,83 2,34 1,03

9 поколение 4,99 5,77 5,72 3,9, 2,30 1,27

Как видно из таблицы 4, значения индексов мясности и постности для туш изучаемых групп свиней очень близки Так, по индексу мясности передние, задние и средние части туши контрольных и трансгенных животных оказались практически идентичными, значение этого индекса

колебалось в пределах 5,0-5,8 Лишь у свиней 3-го поколения индекс мясности средней части туши был значительно выше - 6,6 По среднему индексу постности все соответствующие части туш свиней 3- и 9-го поколений трансгенных свиней так же очень близки У контрольных животных индекс постности передней и задней частей выше, чем у опытных Однако вследствие значительного разброса данных, особенно в контрольной группе, разница не достоверна По средним значениям индекс мясности свиней 3- и 9-го поколений составил, соответственно, 5,7 и 5,4, контрольных свиней - 5,5, индекс постности, соответственно, - 2,0,2,2 и 2,4

Выход жира-сырца у всех экспериментальных свиней был невысокий от 1 до1,6% от массы туши Если в группах аналогов и трансгенных свиней 3-го поколения выход жира-сырца составил 1,6%, то у свиней 9-го поколения этот показатель был существенно ниже и составил 1,0% (табл 5)

Таблица 5

Выход основных субпродуктов I категории.

Номер животного жир-сырец почки печень сердце

кг | % кг 1 % кг I % кг 1 %

Контрольная группа

1 0,84 1,25 0,29 0,43 1,39 2,07 0,31 0,46

2 1,63 2,16 0,26 0,34 1,39 1,84 0,38 0,50

3 1,50 1,97 0,28 0,37 1,24 1,63 0,37 0,48

4 0,78 1,03 0,31 0,41 1,45 1,92 0,38 0,50

М 1Д9 1,60 0,29 0,39 1,37 1,87 0,36 0,49

Опытная группа 3-е поколение

5 0,986 1,19 [_ 0,31 0,38 1,57 1,90 0,39 0,47

6 1,57 2,01 0,23 0,29 1,57 2,01 0,37 0,47

7 1,44 1,64 0,28 0,32 1,59 1,80 0,42 0,48

М 1,33 1,61 0,27 0,33 1,58 1,90 0,39 0,47

Опытная группа 9-е поколение

8 0,92 1,14 0,40 0,49 1,56 1,93 0,35 0,43

9 0,80 0,87 0,35 0,43 1,78 3,46 0,47 0,51

М 0,86 1,01 0,38 0,46 1,67 2,70 0,41 0,47

Заметные различия были установлены по выходу почек и печени (табл 5) Более высоким выходом этих субпродуктов характеризовались животные 9-го поколения соответственно, 0,46 и 2,7% В двух других группах выход почек и печени был существенно меньше и составил, соответственно, 0,39 и 1,87% у контрольных свиней и 0,33 и 1,9% у трансгенных свиней 3-го поколения По выходу сердца животные разных групп практически не различались Следует отметить, что если разброс данных по соответствующим показателям между индивидуальными животными контрольной и опытной (3-е поколение) групп был незначительный, то трансгенные свиньи 9-го поколения характеризовались высокой

индивидуальной изменчивостью по выходу основных субпродуктов, в частности печени (1,93—3,46%) и сердца (0,43-0,51%)

Анализ химического состава длиннейшей мышцы спины показал, что содержание основных составных компонентов влаги, белка и жира во всех группах было характерным для этой мышцы Содержание влаги колебалось в среднем от 71,7% в группе трансгенных свиней 9-го поколения до 74,0% в контрольной группе, жира - от 2,1% в контрольной группе до 4,4% в опытной группе 9-го поколения, белка - от 22,9% в контрольной группе до 23,3% в опытной группе 3-го поколения Различия в показателях между группами были недостоверны

Анализируя химический состав мякотной части туши в целом (табл б), следует отметить несколько большее содержание белка в группах трансгенных свиней 17,4% у свиней 3-го поколения и 17,6% у свиней 9-го поколения по сравнению с контрольными свиньями (17,1%) Минимальным средним содержанием жира в мясе характеризовались свиньи 9-го поколения (17,2%), однако вследствие высокой индивидуальной изменчивости этого показателя в группе, разница была недостоверной (табл б)

Таблица 6

Химический состав свинины (мякотной части туши _экспериментальных групп свиней) _

Номер животного Влага, % Жир, % Белок, %

Контрольная группа

1 63,3 18,5 17,4

2 59,6 22,9 16,6

3 61,6 19,8 16,2

4 65,80 15 18,1

М 62,6 19,1 17,1

Опытная группа 3-е поколение

5 62,8 18,2 18,1

6 58,9 23,4 16,5

7 63,6 18 17,7

М 61,8 19,9 17,4

Опытная группа 9-е поколение

8 68,4 12,4 18,6

9 62,8 19,2 16,5

М 64,7 17,2 17,6

Таким образом, в целом по общему химическому составу мяса не установлено существенных и достоверных различий между опытными животными и контрольными аналогами

3.6. Исследование гистоструктуры внутренних органов.

Анализ весовых характеристик внутренних органов показал увеличение массы некоторых внутренних органов у свиней 9-го поколения

по сравнению с контрольными животными и животными 3-го поколения. Так у свийей 9-го поколения масса печени была больше па 6.4%, чем у свиней 3-го поколения и на 17,7 %, чем у аналогов; масса селезенки была больше на 29.6%, чем у контрольных животных; масса сердца была больше ira 13,9%, чем у контрольных животных и на 5,1%, чем у животных 3-го поколения.

Гистологическое исследование внутренних органов свиней показало заметную реакцию животных в ответ на интеграции трансгена в геном. По-видимому. регуляторные механизмы, отражением которых служит картина развития щитовидной железы, печени и островков Лангсрганеа, участвуют в компенсаторных процессах межуточного обмена. На ранних генерациях исследуемого типа животных (3-е поколение) происходит активное изменение в структуре и функции фолликулярного аппарата щитовидной желез г.!, фолликулы увеличиваются (средний диаметр равен 223,6 мкм против 188,2 мкм в контроле), а на поздних генерациях (9-е поколение), этот фактор компенсируется и ^е проявляет столь значительного влияния (средний диаметр равен 193,4 мкм) (табл. 7).

Таблица 7.

Мцрфомггричеекие показатели фолликулов щитовидной железы

опытных свиней

Показатели а гч г- и П L - ¿г ■ к - : (и S ■ с* h о (Ч г^ чс № 1-, ¡ gj Ъ 223,6 Й г-, 213,3 X S t m s ■ e. и ;

Диаметр, мкм 2J 6,8 1.59,5 1Щ 183,'; 2й2,7 2 24.} [73,4 193,4

ст.откл. 97,4 36,0 Ы,9 61,8 96.0 1 й2,3_] 113,39 109,0 71,6 ■■■90,3

14,0 5,1 9,6 8,8 13,7 26.0 15,6 10.2 12.9..

Cv 45 23 33.8 34 37 81,3 "50,49 51 41 46.2

Se A4., мкм1 3813Й 18435 ШШ 25648 53328 «,213 45063 37328 2282(i : ЗШ177

СТ. ОГК л. 40298 Ш2 21565 20297 43370 [15028 59565, 62723 27468 45096

±т 5757 1262 3509 2<№ 61% 16433 S 960 3924 6442

Cv 106 48 76 79 81 205 тш 168 120 J44

В поджелудочной железе наблюдается заметное снижение плотности размещения клеток в островках Лангерганеа: 24 и 27 клеток на 100 мкм' площади у трансгенных животных 3' и 9-го поколений, соответственно, против 32 клеток на 100 мкм2 в контроле. Это. по-видимому, связано с укрупнением клеток, повышением их функциональной активности.

Пищеварительные процессы, в которых значительный удельный вес принадлежит печени, у трансгенных свиней так же активизированы, о чем свидетельствует увеличение толщины печеночных балок у трансгенных животных (25,4 и 24,9 мкм у свиней 3-го и 9-го поколений, соответственно, против 20,7 мкм и контроле), что является нормальной реакцией на интеграцию гена релизинг-фактора гормона роста, однако уровень пищеварительных процессов сбалансирован и не вызывает особых отклонений от физиологической нормы.

В скелетной мускулатуре, на образцах длиннейшей мышцы спины, прослеживается некоторая дифференцировка, выразившаяся в снижении диаметра мышечных волокон у трансгенных свиней (табл 8) Эти явления наблюдались и раньше при исследовании трансгенных животных По-видимому, указанные процессы связаны с дополнительными сигналами со стороны генетического аппарата и являются ответом на стимуляцию анаболизма, обусловленную модификацией организма за счет внедрения рекомбинантной конструкции

Таблица 8

Морфометрические показатели волокон длиннейшей мышцы

спины опытных свиней

Показатели 721 К И г* Р И V) г~ И V) ■л и.. 719 III 1 720 III 736 III — = г ■ 0« и-. 753 IX 761IX — & в. и-

Диаметр, мкм 66,7 73,2 79,7 58,9 69.6 62,1 73,0 70,6 68.6 60,2 51,1

стоткл 11,7 14,8 16,8 11,6 13,7 9,9 13,6 14,3 12,6 10,4 6,9

±П1 1,7 2,1 2,4 1,7 2,0'. 1,4 1,9 2,0 1 X 1,5 1,0 1,2

СУ 17,6 20,3 21,1 19,7 19,6 15,9 18,6 20,2 18,2. 17,2 13,5 I8- !

5 сеч, мкмг 5126 6282 7799 4081 5X22 3857 6021 5413 5096 3952 2724 3338

стоткл 1464 2378 3316 1370 1096 1916 2071 1694 1222 673 947;

209 340 474 196 ■"304 157 274 296 242 175 96 135,

СУ 29 38 43 34 , 35 28 32 38 5 2 31 25 27

3.7. Корреляционные зависимости в организме свиней.

Анализ корреляционных зависимостей показал, что развитие органов и тканей в организме свиней происходит скоординировано, по некоторым из

них отмечаются достоверные связи (табл 9)

Таблица 9

_Корреляционные зависимости в организме опытных животных

показатели Вес туши голова сердце печень селезенка почки легкие

Голова контроль 0,42 0,26 -0,36 -0,26 0,03 0,3

трансген -0,73 -0,53 -0,34 -0,36 -0,41 -0,21

Сердце контроль 0,95 0,26 0,11 0,65 0,13 0,07

трансген 0,92 -0,53 0,9 0,79 0,02 0,33

Печень контроль 0,13 -0,36 ОД X 0,52 0,87 0,56

трансген 0,79 -0,34 0,9 0,55 0,25 0,66

Селезенка контроль 0,62 -0,26 0,65 0,52 0,51 -0,05

трансген 0,82 -0,36 0,79 0,55 -0,18 -0,05

Почки контроль 0,27 0,03 0,13 0,87 0,51 0,57

трансген 0,27 -0,41 0,02 0,25 -0,18 0,83

Легкие контроль 0,07 0,3 0,07 0,56 -0,05 0,57

трансген 0,38 -0,21 0,33 0,66 -0,05 0,83

Б мышечных волокон контроль -1,0 -0,36 0,97 -0,28 0,68 -0,27 -0,91

трансген -0,31 -0,23 -0,43 -0,74 -0,18 -0,39 -0,8

Так, по диаметру мышечных волокон в длиннейшей мышце спины и общему весу туши отмечается высокая отрицательная связь Размер фолликулов щитовидной железы положительно связан с диаметром мышечных волокон, следовательно, накопление тироксина в фолликулах может быть связано с некоторой задержкой его выброса и соответственным понижением активности процессов расщепления и умножения мышечных волокон в изучаемом мускуле Наиболее высокая положительная связь устанавливается между развитием сердца и массой туши Масса туши слабо коррелирует с массой головы, но каждая из этих масс весьма высоко связана обратной связью с показателем диаметра мышечных волокон

Все это указывает на разносторонний характер взаимозависимостей между органами в их развитии Указанные корреляции помогают в расшифровке особенностей развития органов и тканей трансгенных свиней

4. ВЫВОДЫ.

1 Синтез соматотропина в крови трансгенных свиней 3- и 9-го поколений в среднем составил 1,8 и 0,85 нг/мл, что, соответственно, в 4,5 и 2,1 раза выше по сравнению с контрольными свиньями

2 Установлено, что трансгенные свиньи 9-го поколения характеризовались более высокими темпами роста на поздних стадиях развития (начиная с 215-го дня) Максимальная разница по отношению к контрольной группе составила 16,2% (225-ый день), к группе 3-го поколения - 53,7% (215-ый день)

3 По результатам вакцинации свиней к возбудителям острых кишечных заболеваний показано, что трансгенные животные характеризуются не только высокой степенью специфического иммунного ответа к бактериальным возбудителям, но и лучшей по сравнению с контролем готовностью к специфической защите при встрече с любым инфекционным агентом на ранней стадии вакцинации

4 Биохимический анализ крови экспериментальных групп свиней показал соответствие всех биохимических показателей крови, за исключением глюкозы (во всех группах), физиологической норме Концентрация глюкозы в крови трансгенных свиней 9-го поколения составила 7,6±3,2 ммол/л, что было, соответственно, на 38,2 и 24,6% выше, чем в контрольной группе и в группе свиней 3-го поколения Активность ACT и АЛТ в группе 9-го поколения составила, соответственно, 87,4±23,6 и 63,3±2,5 МЕ/л, что было на 63,1 и 23,4% выше по сравнению с группой свиней 3-го поколения и на 24,3 и 11,8% выше по сравнению с контрольной группой Содержание общего белка и глобулинов в крови свиней 9-го поколения составило, соответственно, 84,2±0,1 и 43,1±1,9 г/л, что было выше на 13,9 и 31,4% по сравнению с контролем и на 10,6 и 31,0% - по сравнению с группой 3-го поколения

5 Выявлена тенденция к увеличению содержания мяса и снижения содержания сала в тушах трансгенных свиней 9-го поколения по сравнению с контролем (соответственно, на 2,8 и 6,1%) и группой трансгенных свиней 3-го поколения (соответственно, на 5,5 и 10,0%) Анализ показателей мясной продуктивности выявил снижение веса сала у трансгенных животных 9-го поколения по сравнению с контролем и группой 3-го поколения, соответственно, на 6,1% и 10,0% Выявлена тенденция повышенного содержания белка в мясе трансгенных свиней 17,4% у свиней 3-го поколения и 17,6% у свиней 9-го поколения по сравнению с 17,1% у контрольных свиней

6 Установлено изменение морфометрических показателей некоторых внутренних органов у трансгенных свиней 3- и 9-го поколений Средний диаметр фолликулов щитовидной железы у трансгенных свиней 3- и 9-го поколений был выше и составил, соответственно, 223,6 и 193,4 мкм против 188,2 мкм в контроле Плотность размещения клеток в островках Лангерганса в поджелудочной железе трансгенных животных 3-й 9-го поколений снизилась и составила, соответственно, 24 и 27 клеток на 100 мкм2 площади против 32 клеток на 100 мкм2 в контроле Выявлено увеличение толщины печеночных балок у трансгенных животных по сравнению с контрольными 25,4 и 24,9 мкм в группах свиней 3-го и 9-го поколений против 20,7 мкм в контроле

7 Показано изменение некоторых морфологических корреляций в организме трансгенных свиней по сравнению с контрольными животными

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ.

Лабораториям, занимающимся вопросами трансгенеза в животноводстве, рекомендуем учитывать полученные нами данные, при создании и разведении стабильных линий трансгенных сельскохозяйственных животных

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ, В ТОМ ЧИСЛЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1) Эрнст, Л К Влияние интеграции гена релизинг-фактора гормона роста на некоторые хозяйственно-ценные признаки свиней/ Л К Эрнст, Н А Зиновьева, Н А Волкова, Е Г Пархоменко, И А Ралков, Г Брем Г // Зоотехния, 2007, №5 - с 2-5

2) Волкова, Н А Динамика роста трансгенных свиней в эмбриональный и постнатальный периоды развития / НА Волкова, ЕГ Пархоменко, Л А Волкова, Н А Зиновьева // Молодые ученые в решении актуальных проблем современной науки - Чебоксары, изд ЧГСХА, март 2006 г, - стр 179-180 — Материалы межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых

3) Пархоменко, ЕГ Особенности иммунного статуса трансгенных свиней / Е Г Пархоменко, Н А Волкова, Н А Зиновьева, Л А Волкова // Молодые ученые в решении актуальных проблем современной науки -Чебоксары, Изд ЧГСХА, март 2006 - стр 217-218 - Материалы межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых, аспирантов и студентов)

4) Эрнст, Л К Мясные и откормочные качества трансгенных свиней / Л К Эрнст, Е Г Пархоменко, Н А Зиновьева, В А Багиров, И А Рапков // Свиноводство, 2007, №3 - с 2-5

5) Пархоменко, ЕГ Проблемы получения трансгенных кроликов / Материалы международной научно-практической конференции по проблеме-«Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения», Вып 9 —РАМЖ - Быково -2003

6) Грезина, Н М Получение трансгенных кроликов методом микроинъекции в пронуклеус зигот / НМ Грезина, ЕГ Пархоменко // Методы исследований в биотехнологии сельскохозяйственных животных, Дубровицы, 2003 - (Сб материалов школы-практикума, под ред профессора, доктора биологических наук Зиновьевой НА)

7) Пархоменко, Е Г Эффективность получения трансгенных кроликов методом микроинъекции в пронуклеус зигот / ЕГ Пархоменко, НМ Грезина // Материалы 4-й Международной научной конференции «Новые методы генодиагностики и генотерапии современное состояние и перспективы использования в сохранении генофонда сельскохозяйственных животных» ВИЖ 21 декабря, Дубровицы, 2004

8) Пархоменко, ЕГ. Сравнительный анализ некоторых показателей оценки качества туш и массы внутренних органов трансгенных свиней 3-го, 9-го поколений и животных аналогов / Материалы 5-й Международной научной конференции «Новые методы генодиагностики и генотерапии современное состояние и перспективы использования в сохранении генофонда сельскохозяйственных животных» ВИЖ 21 декабря, Дубровицы, 2005,стр 125-127

Издательство РУЦ ЭБТЖ 142132, Московская обл, Подольский р-н, п Дубровицы Тел (8 -27) 65-14-24, (8 - 27) 65-14-07

Сдано в набор 14 Об 2007 Подписано в печать 15 06 2007 Заказ №12 Печ л 1,0 Тираж 100 экз

Отпечатано в типографии РУЭЦ

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Пархоменко, Елена Григорьевна

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Генная инженерия - оптимальное решение проблем животноводства.

1.2. Методы получения трансгенных животных.

1.3. Разведение трансгенных животных.

1.4. Особенности иммунного статуса свиней.

1.5. Общая характеристика гормона роста.

1.6. Влияние гормона роста на обмен веществ в организме.

1.7. Действие гормона роста в организме.

1.8. Особенности фенотипа свиней, трансгенных по гену mMTl-hGRF.

1.9. Идентификация трансгенности и определение экспрессии рекомбинантных генных конструкций.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сравнительное исследование биологических и продуктивных особенностей свиней, трансгенных по гену релизинг-фактора гормона роста, 3-го и 9-го поколений"

Актуальность темы. Современное развитие животноводства немыслимо без использования последних достижений молекулярной биологии и молекулярной генетики, благодаря которым получили развитие новые направления биотехнологии сельскохозяйственных животных -генная, клеточная инженерия (29). Основной целью работ по генной инженерии является создание и изучение уникальных племенных животных с измененной и устойчивой наследственностью, используемых в больших популяциях для их совершенствования, повышения продуктивности и качества продукции (68). Особое внимание уделяется трансгенным животным, включающих в геном чужеродных последовательностей ДНК (трансгенов) с последующей их устойчивой наследуемостью в ряде поколений (146). Вместе с тем, экспрессия трансгенов может обуславливать изменения в системе тканевой специфичности, физиологических реакциях, а иногда и во всем развитии организма (122).

Целями создания трансгенных животных являются повышение продуктивности и устойчивости к инфекционным заболеваниям, использование их как продуцентов биологически-активных веществ, в качестве биомоделей и как потенциальных доноров для ксенотрансплантации органов и тканей (70,127,145, 148).

Опыты по получению и изучению трансгенных животных проводятся во многих странах мира. Несмотря на многочисленность и многообразие этих исследований, многие факторы, определяющие эффективность экспрессии чужеродных генов в организме остаются мало изученными. В этой связи, изучение экспрессии введенных генов и ее влияние на физиолого-морфологические признаки трансгенных животных является актуальной задачей современной биотехнологии в животноводстве.

Совместными усилиями российско-германских ученых (Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства,

Россия; Институт молекулярного животноводства, Ун иверситет имени Людвига-Максимилиана, Г. Мюнхен) были получены свиньи, трансгенные по рекомбинантной генной конструкции mMTl-hGRF, содержащей структурную часть гена релизинг-фактора гормона роста человека (hGRF) и металлотионеиновый промотор 1 мыши (mMTl). Исследование таких животных в ряде поколений показало, что интеграция и экспрессия трансгена оказывала заметное влияние на биологические и продуктивные особенности трансгенных животных. Однако в ряде поколений наблюдалось нивелирование действия трансгенов. В этой связи, изучение физико-биохимических процессов и хозяйственно- полезных признаков у трансгенных свиней девятого возрастного поколения является актуально задачей биологии и биотехнологии животных, решение которой позволит выявить ряд закономерностей во взаимодействии интегрированных генов с организмом трансгенных животных.

Цель и задачи. Целью настоящей работы явилось изучение физиолого-биохимических процессов и продуктивных качеств свиней, трансгенных по генной конструкции mMTl-hGRF, 3-го и 9-го поколений.

Для достижения указанной цели, были поставлены следующие задачи:

1. Выполнить сравнительное исследование уровня соматотропина в крови трансгенных и контрольных свиней.

2. Изучить особенности роста и развития экспериментальных групп свиней, в том числе под воздействием вакцинации.

3. Изучить клиническую картину крови и особенности иммунного ответа опытных групп свиней на раздражение возбудителями острых кишечных заболеваний.

4. Выявить особенности биохимических процессов, протекающих в организме трансгенных свиней, в сравнении с животными-аналогами.

5. Определить показатели мясной и откормочной продуктивности трансгенных свиней и их аналогов.

6. Изучить весовые характеристики, гистологичесие и цитоморфологические особенности органов и тканей трансгенных свиней.

7. Изучить систему морфологических корреляций в организме трансгенных и контрольных свиней.

Научная новизна работы. Впервые выполнена оценка действия интеграции трансгена на организм свиней, трансгенных по mMTl-hGRF, разных поколений. В одинаковых условиях внешней среды (кормление, содержание и т.п.) изучены особенности физиолого-биохимических процессов, мясная и откормочная продуктивность, цитоморфологические показатели органов и тканей, иммунный ответ при вакцинации бактериальной вакциной у трансгенных свиней 3-го восстановленного и 9-го поколений в сравнении с животными-аналогами.

Практическая значимость работы. По результатам исследований трансгенных свиней 3-го и 9-го поколений и их аналогов определены биологические особенности развития трансгенных свиней разных поколений; изучены особенности гематологических показателей и иммунологического ответа организма трансгенных свиней на раздражение возбудителями острых кишечных заболеваний; определены показатели мясной и откормочной продуктивности при убое в 120-130 кг живой массы; изучены цитоморфологические особенности органов и тканей трансгенных свиней; выявлена корреляционная зависимость уровня соматотропина в крови с другими физиологическими и хозяйственно-полезными признаками.

Положения, выносимые на защиту.

• Повышенный уровень соматотропина в крови трансгенных свиней 3-го и 9-го поколений как результат интеграции и экспрессии гена релизинг-фактора гормона роста.

• Изменения в динамике роста трансгенных свиней по сравнению с аналогами.

• Лучшая иммунологическая реактивность трансгенных свиней 3- и 9-го поколений по результатам вакцинации к возбудителям острых кишечных заболеваний.

• Изменение морфометрических показателей внутренних органов (щитовидной железы, поджелудочной железы, печени) у трансгенных свиней 3- и 9-го поколений как реакция организма на интеграцию трансгена.

• Изменение некоторых морфологических корреляций в организме трансгенных свиней.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлены на научных конференциях центра биотехнологии и молекулярной диагностики ВИЖ в 2005, 2006 гг., на 5-й международной школе-конференции «Новые методы генодиагностики и генотерапии: современное состояние и перспективы использования в сохранении генофонда сельскохозяйственных животных», Дубровицы, 2005.

По материалам диссертации опубликовано 5 работ, в том числе 2 - в журналах «Свиноводство» и «Зоотехния», рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Пархоменко, Елена Григорьевна

5. Выводы

1. Синтез соматотропина в крови трансгенных свиней 3-й 9-го поколений в среднем составил 1,8 и 0,85 нг/мл, что, соответственно, в 4,5 и 2,1 раза выше по сравнению с контрольными свиньями.

2. Установлено, что трансгенные свиньи 9-го поколения характеризовались более высокими темпами роста на поздних стадиях развития (начиная с 215-го дня). Максимальная разница по отношению к контрольной группе составила 16,2% (225-ый день), к группе 3-го поколения - 53,7% (215-ый день).

3. По результатам вакцинации свиней к возбудителям острых кишечных заболеваний показано, что трансгенные животные характеризуются не только высокой степенью специфического иммунного ответа к бактериальным возбудителям, но и лучшей по сравнению с контролем готовностью к специфической защите при встрече с любым инфекционным агентом на ранней стадии вакцинации.

4. Биохимический анализ крови экспериментальных групп свиней показал соответствие всех биохимических показателей крови, за исключением глюкозы (во всех группах), физиологической норме. Концентрация глюкозы в крови трансгенных свиней 9-го поколения составила 7,6±3,2 ммол/л, что было, соответственно, на 38,2 и 24,6% выше, чем в контрольной группе и в группе свиней 3-го поколения. Активность ACT и AJ1T в группе 9-го поколения составила, соответственно, 87,4±23,6 и 63,3±2,5 МЕ/л, что было на 63,1 и 23,4% выше по сравнению с группой свиней 3-го поколения и на 24,3 и 11,8% выше по сравнению с контрольной группой. Содержание общего белка и глобулинов в крови свиней 9-го поколения составило, соответственно, 84,2±0,1 и 43,1±1,9 г/л, что было выше на 13,9 и 31,4% по сравнению с контролем и на 10,6 и 31,0% - по сравнению с группой 3-го поколения.

5. Выявлена тенденция к увеличению содержания мяса и снижения содержания сала в тушах трансгенных свиней 9-го поколения по сравнению с контролем (соответственно, на 2,8 и 6,1%) и группой трансгенных свиней 3-го поколения (соответственно, на 5,5 и 10,0%). Анализ показателей мясной продуктивности выявил снижение веса сала у трансгенных животных 9-го поколения по сравнению с контролем и группой 3-го поколения, соответственно, на 6,1% и 10,0%. Выявлена тенденция повышенного содержания белка в мясе трансгенных свиней: 17,4% у свиней 3-го поколения и 17,6% у свиней 9-го поколения по сравнению с 17,1% у контрольных свиней.

6. Установлено изменение морфометрических показателей некоторых внутренних органов у трансгенных свиней 3- и 9-го поколений. Средний диаметр фолликулов щитовидной железы у трансгенных свиней 3- и 9-го поколений был выше и составил, соответственно, 223,6 и 193,4 мкм против 188,2 мкм в контроле. Плотность размещения клеток в островках Лангерганса в поджелудочной железе трансгенных животных 3-й 9-го поколений снизилась и составила, соответственно, 24 и 27 клеток на 100 мкм2 площади против 32 клеток на 100 мкм2 в контроле. Выявлено увеличение толщины печеночных балок у трансгенных животных по сравнению с контрольными: 25,4 и 24,9 мкм в группах свиней 3-го и 9-го поколений против 20,7 мкм в контроле.

7. Показано изменение некоторых морфологических корреляций в организме трансгенных свиней по сравнению с контрольными животными.

6. Практические предложения.

Лабораториям, занимающимся вопросами трансгенеза в животноводстве, рекомендуем учитывать полученные нами данные, при создании стабильных линий трансгенных сельскохозяйственных животных.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Пархоменко, Елена Григорьевна, п. Дубровицы Московской обл.

1. Андреева, JIB. Микроинъекция гена релизинг фактора гормона роста человека в зиготы и эмбрионы свиней / J1.B. Андреева, Н.В. Хайдарова // Доклады ВАСХНИЛ.- 1990.- №.7.- С.46 -51.

2. Аршавский, И. А. Биология периода новорожденности у млекопитающих / И.А. Аршавский.- Москва, Наука, 1968, с.7-16.

3. Балаболкин, М.И. Секреция гормона роста в норме и патологии / М.И. Балаболкин.- М.: Медицина, 1978.- 173 с.

4. Балаболкин, М.И. Эндокринология / М.И. Балаболкин.- М.: Медицина, 1989.-416 с.

5. Берман, В.М. Возрастная реактивность в инфекционных процессах. В кн.: Вопросы возрастной реактивности в инфекционных и иммунологических процессах / В.М. Берман.- Л.: Медицина, 1955, с.5-12.

6. Блинов, Н.П. Основы биотехнологии / Н.П. Блинов.- СПб: Наука, 1995.- 600 с.

7. Богатырев, А.Н. Генная инженерия сельскохозяйственных животных -мощный рычаг селекции XXI века/ А.Н. Богатырев, Л.К. Эрнст// Генноинженерные сельскохозяйственные животные /Сб. науч. тр. -1995.- Вып.1.- С. 3-13.

8. Брем, Г. Генные формы новый путь производства биологически активных протеинов трансгенными животными / Г. Брем, Н.А. Зиновьева, Л.К. Эрнст // Сельскохозяйственная биология.- 1993.- №.6-С.З- 27.

9. Брем, Г. Трансгенные свиньи (mMTl- hGRF ): оценка качества туш и химического состава мяса при убое животных / Г. Брем, Л.К. Эрнст, Л.А. Андропов // Генноинженерные сельскохозяйственные животные / Сб. науч. тр.- 1995.- Вып.1,- С.26- 33.

10. Ю.Брондз, Б.Д. Иммунологическое распознавание и реакции клеточного иммунитета / Б.Д. Брондз // Успехи современной биологии, 1972, т.73, вып.1, с.42-58.

11. Верховский, О.А., Федоров Ю.Н., Сологуб В.К. Использование моноклональных антител для оценки антигенных свойств иммуноглобулинов животных / О.А. Верховский, Ю.Н. Федоров, В.К. Сологуб //Сельскохозяйственная биология.- 1995,-№.4.- С.94-100.

12. Волкова, О.В., Основы гистологии с гистологической техникой / О.В. Волкова, Ю.К. Елецкий.- М.: Медицина, 1982.

13. Волкова, О.В. Гистология, цитология и эмбриология: Атлас / О.В. Волкова, Ю.К. Елецкий, Т.К. Дубовая.- М.: Медицина, 1996.

14. Воловинская, В.П. Определение влагоудерживающей способности мяса

15. В.П. Воловинская, Б.Я. Кельман // Мясная индустрия СССР. 1960. -№ 6. - с.47.

16. Газарян, К. Трансгенные животные: перспективы использования в животноводстве / К. Газарян // Сельскохозяйственная биология.- 1988.-№.2.- С.31-39.

17. Гоголевский, П. Исследование экспрессии гена В галактозидазы в трансгенных ранних эмбрионах кроликов / П. Гоголевский, И. Гольдман, В. Гусев // Доклады ВАСХНИЛ.-1991.- №.10.- С.38-42.

18. Гольдман, И.Л. Прогрессивная технология получения трансгенных овец / И.Л. Гольдман, Е.Д. Башкеев, П.А. Гоголевский // Доклады РСХА 1992.- №.9-10.- С.25-30.

19. Гольдман, И.Л. Теоретические вопросы получения трансгенных животных. Эксперименты на кроликах / И.Л. Гольдман, Л.К. Эрнст,

20. П.А. Гоголевский // Генноинженерные сельскохозяйственные животные / Сб. науч.тр.-Вып. 1.-1995.-С.93-102.

21. ГОСТ 19496-93. Мясо. Метод гистологического анализа. М., «Стандарты», 1993.

22. Дворянчиков, Г.А. Идентификация и анализ интегрированного в геном животных трансгена методом ПЦР- амплификации и с помощью блот-гибридизации / Г.А. Дворянчиков, Л.Ю. Иванов, Н.П. Рудько // Сельскохозяйственная биология.- 1993.- №.4.- С.39- 46.

23. Доклад научной группы ВОЗ №448. Факторы, регулирующие иммунный ответ.// Женева, 1971.

24. Држевицкая, И.А. Основы физиологии обмена веществ и эндокринной системы / И.А. Држевицкая.- М.: Высшая школа, 1983.- 272 с.

25. Дыбан, А.П. Трансгенные млекопитающие: изучен: фенотипических эффектов гормона роста человека, индуцированного животным / А.П. Дыбан, С.И. Городецкая // Биотехнология.- 1987.-№.3.- С.352-357.

26. Зиновьева, Н.А. Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве / Н.А. Зиновьева, А.Н. Попов, J1.K. Эрнст.- Дубровицы, 1998.- 47 с.

27. Зиновьева, Н.А. Проблемы биотехнологии и селекции сельскохозяйственных животных / Н.А. Зиновьева, JI.K. Эрнст.-Дубровицы,2004.- 316с.

28. Зиновьева, Н.А. Трансгенные животные и возможности их использования: молекулярно- генетические аспекты трансгенеза в животноводстве / Н.А. Зиновьева, JI.K. Эрнст, Г. Брем.- ВИЖ, 2000.128 с.

29. Иванов, И.Ф. Цитология, гистология, эмбриология / И.Ф. Иванов, П.А. Ковальский.- М.: Колос, 1969.- 695 с.

30. Калашникова, JI.A. Получение и размножение трансгенных животных / JI.A. Калашникова // Современные аспекты селекции, биотехнологии, информатизации в племенном животноводстве /Сб. ВНИИПЛЕМ.-1997.- С.257-264.

31. Калашникова, JI.A. Проблемы и перспективы использования генетически модифицированных сельскохозяйственных животных / JI.A. Калашникова // Аграрная Россия.- 2000.- №5.- С.11-19.

32. Карпуть, И.М. Динамика Т и В - лимфоцитов у свиней в онтогенезе / И.М. Карпуть // Ветеринария, 1977.- №4.

33. Карпуть, И.М. Кроветворение и иммунологическая реактивность у свиней / И.М. Карпуть // Ветеринария, 1975, №2.

34. Карпуть, И.М. Возрастная реактивность кроветворно лимфоидных органов у вакцинированных и больных паратифом поросят и влияние на нее антибиотиков / И.М. Карпуть // Тр. 5 Всесоюз. Конф. по патологической анатомии с/х. жив., 1973, с.268-271.

35. Кленовицкий, П.М. Мутационные изменения у трансгенных животных / П.М. Кленовицкий, А.А. Некрасов // Актуальные проблемы развития животноводства. Дубровицы, 1998, с. 184-191.

36. Кудрявцев, А.А. Клиническая гематология животных / А.А. Кудрявцев, JI.A. Кудрявцева.- М.: Колос, 1974.- 405 с.

37. Лапшин, С.А. Особенности жирнокислотного состава тканей трансгенных свиней / С.А. Лапшин, Л.К. Эрнст, В.И. матяев // Генноинженерные сельскохозяйственные животные / Сб. науч. тр.-1995.- Вып.1.- С.58- 61.

38. Лашас, Л.В. Соматотропин человека / Л.В. Лашас, Д.Г. Лашене.-Вильнюс: Мокслас, 1981.- 143 с.

39. Медведев, С.Ю. Рост и развитие трансгенных кроликов и свиней с перенесенным геном релизинг- фактора гормона роста человека / С.Ю. Медведев, Л.В. Козикова, В.Г. Бавин, А.Ф. Яковлев // Сельскохозяйственная биология,- 1995.- №.6.- С. 43- 48.

40. Меркурьева, Е. К. Биометрия в селекции и генетике е.- х. животных / Е.К. Меркурьева.- М.: Колос, 1970.- 424 с.43 .Мертвецов, Н.П. Гормональная регуляция экспрессии генов / Н.П. Мертвецов.- М.: Наука, 1986.- 207 с.

41. Методические указания по изучению качества туш, мяса и подкожно-то жира убойных свиней. М., 1978.- 26 с.

42. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: справочник / Под ред. проф. И. П. Кондрахина.- М.: КолосС, 2004.- 520 е., 4. л. ил.: ил.

43. Петров, Р.В. Иммунология и иммуногенетика / Р.В. Петров.- М.: Медицина, 1976.

44. Петров, Р.В. Иммунология / Р.В. Петров.- М.: Медицина, 1978.

45. Попов, А.Н. Экспресс- метод тестирования новорожденных поросят на интеграцию в геном чужеродных генов / А.Н. Попов, Н.А. Зиновьева, Г.Брем // Сельскохозяйственная биология.- 1995.- №6.- С. 136- 138.

46. Росохатский, С. Повышение скорости роста кроликов, трансгенных по гену РФГР человека/ С. Росохатский, А.Ф. Смирнов, А.Ф. Ефимов // Доклады РАСХН.- 1994.- №.2.- С.24-26.

47. Рядчиков, В. Трансгенные свиньи с геном mMTl- hGRF и перспективыих использования в селекции / В. Рядчиков, JL Солодухина, Н. Соколов // Генноинженерные сельскохозяйственные животные / Сб. науч. тр.- 1995.- Вып.1С.73- 84.

48. Сиротинин, Н.Н. Реактивность и резистентность организма: многотомное руководство по патологической физиологии / Н.Н. Сиротинин,- Москва, Медицина, 1966.

49. Скалинский, Е.И. Микроструктура мяса / Е.И. Скалинский, А.А. Белоусов.- М.:Пищевая промышленность, 1978.

50. Тейлор, Д. Биология / Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут.- М.: Мир, 2002.-Т.З.- С.234- 235.

51. Томмэ, М.Ф. Методика изучения убойных выходов и мяса / М.Ф. Томмэ.- М., 1956,- 16 с.

52. Учитель, И.Я. Макрофаги в иммунитете / И.Я. Учитель,- М.: Медицина, 1978.

53. Фаворская, Ю.Н. Поверхностная структура макрофагов и лимфоцитов при их взаимодействиях / Ю.Н. Фаворская, Л.Д. Крымский, Г.В. Нестойко // Архив патологии, 1975.- № 8.- С.33-39.

54. Федоров, Н.А. Полимеразная цепная реакция (ПЦР): методическое пособие / Н.А. Федоров, Ю.С. Суханов, А.Х. Асади Мобархан, М.И. Артемьев.- М., 1996.

55. Фриденштейн, А.Я. Клеточные основы иммунитета / А.Я. Фриденштейн, H.J1. Чертков.- М.: Медицина, 1969.

56. Хвыля, С.И. Практическое применение гистологических методов анализа / С.И. Хвыля, В.В. Авилов, Т.Г. Кузнецова // Мясная промышленность.- 1994.- №.6. С. 9-11.

57. Хвыля, С.И. Компьютерная приставка к человеческому глазу / С.И. Хвыля, В.В. Авилов, Т.Г. Кузнецова, Е.Н. Тимин // Мясная промышленность.- 1995.- №.1.- С.23-25.

58. Хвыля, С.И. Оценка мясного сырья и определение состава мясопродуктов микроструктурными методами / С.И. Хвыля, Т.Г. Кузнецова, В.В. Авилов.- РАСХН. М.,1998.-с.38.

59. Чабан И.М. Продуктивные и биологические особенности свиней с интегрированным в геном чужеродным геном релизинг-фактора соматотропного гормона : дис.канд. биол. наук, п. Дубровицы Моск. обл., 2000.- 141 е.- Библиогр.: с. 129-141.

60. Шатайло В.Н. Продуктивные и физиолого-биохимические качества трансгенных свиней : дис.канд. биол. наук, п. Дубровицы Моск. обл., 2001.- 163 е.-Библиогр.: с. 152-163.

61. Эрнст, JI.K. Проблемы селекции и биотехнологии сельскохозяйственных животных / JI.K. Эрнст.- М.,1995.- 359 с.

62. Эрнст, JI.K. Генно-инженерные технологии новый путь развития животноводства / JI.K. Эрнст, Г. Брем, Н.А. Зиновьева // Зоотехния.-1994.- №.5.- С.2-4.

63. Эрнст, JI.K. Генная инженерия в животноводстве: трансгенные животные, кормовые растения, микроорганизмы рубца / JI.K. Эрнст, И.Л. Гольдман, С.Г. Кадулин // Биотехнология.- 1993.- №5.- С.2-14.

64. Эрнст, Л.К. Современное состояние и перспективы использования трансгенных технологий в животноводстве / Л.К. Эрнст, Н.А. Зиновьева, Г. Брем.- М., РАСХН, 2002.- 341 с.

65. Agellon, L.B., Davies S.L., Chen Т.Т., Powers D.A. Structure of fish (rainbow trout) grows hormone gene and its evolutionary implications // Proc.Nat.Acad.Sci. USA., 1988

66. Ausubel, F.M., Brent R., Kingston R.E. et al. Current protocols in molecular biology // Join Wiley and Sons.- New York.- 1987.

67. Baker, A.R., Hellingshead P.G., et al. Osteoblastspecific expression of growth hormone stimulates bow growth in transgenic mice // Moll. And Cell. Biol.- 1992.- V.12.-P.5541- 5547.

68. Behringer, R.R., Ryan T.M., Reilly M.P. et al. Synthesis of functional hyman hemoglobin in transgenic mice // Science 245.- 1989.- P.971-973.

69. Bennis, R.M. /Cellular immunology in the pig.// Proc. Roy. Soc. Med., 1963, v.66, №12, p.l 155-1160.

70. Bishop, J., Smith R. Mechanism of chromosomal integration of microinyection DNA // Mol. Biol. Med. 1989.- V.6.- P.283-298.

71. Brameld, J.M., Weller P.A., et al. Hormonal control of insulin- like growth factor-1 and growth hormone receptor mRNK expression by porcine hepatocytes in culture // J. Endocrinol.- 1995.- 146.- P.239- 245.

72. Brem, G. lnterifance and tissue-specific expression of transgenes in rabbits and pigs // Mol. Deprod. and Dev.- 1993.- 36.- N.2.- P.242-244.

73. Brem, G. Production of transgenic mice, rabbit and pigs by microinjection into pronuclei // Zuchtyniene.- 1995.- V.20.- N.5.- P.134-139.

74. Brem, G. Transgene Nutztiere // Zuchtungkunde.- 1988.- V.60.- N.3.-P.248-262.

75. Brem, G. Transgenic animals In Biotechnology. A Multy Volume Comprehensive Treatise. Edited by H.J.Rehm and G.Reed in cooperation with A.Puhler and. P.Stadtler. VCH. Weinhein,New York, Basel, Cambridge. P.745-832.

76. Brem, G., Brening В., Goodman H.M. et.al. Production of transgenic mice, rabbits and pig by microinjection into pronuclei // Zuchthug.- 1985.- V.20.-P.251-252.

77. Brem, G., Brenning В., Salamons B. et al. Unerwartets transgene Expression eines gesaengespezifischen Wachstumshormon Genkonstruktes in den Bergmann- Gliazellen der Maus // Tiwrarztl. Prax.-1991.- V. 19. P.l- 6.

78. Brem, G., Muller M. Large transgenic mammals // Animals with novel genes / by Ed.N.Maclean,- Cambridge University Press.- 1994,- P. 179-224.

79. Cantor, H., Simpson E. /Regulation of the immune response by subclasses T lymphocytes.//EuropJ. Immunol., 1975, v.5, №4, p.330-336.

80. Church, R.B. / Possibilities for genetic engineering of animals // Inf. J. Anim. Sci. 1989.- V.4.-H.1-6.

81. Church, R.B. Embryo manipulation and gene transfer in domestic animal. Trends Biotechnol. 5.- 1987.- P. 13-19.

82. Clark, A., Bissinger P., Bullock D. et.al. Chromosomal position effects and modulation of transgene expression // Reprod. Fertil. Dev. 1994.-V.6.- N.5.- P.589-598.

83. Eriksen, E.F., Kassem M., et al. Growth hormone, insulin-like growth factors and bone remodulling // Braz. J.Med, and Biol. Res.- 1996.- 29.-№6.- P.525- 534.

84. Erlich, H.A. PCR technology: principles and application for DNA amplification. Stocton press, New york. 1989.

85. Eva, D., Hans Т., Hans E., et al. Growth hormone signaling in hepatocytes // (Abstr.) Keystone Symp. "Adipose Cell".- Park City. Utah.- Jan. 14- 21.1994.- J.Cell.Biochem.- Suppl.l8a.- P. 152.

86. Evans, M.J., Bradley A., Robertson E.J. Genetic manipulation of the mammalian ovum and early embryos // Bandbury Report.- Gold Spring Harbor, New York, 1985.

87. Evans, M.J., Kaufman M.H. Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos //Nature 292.- 1981.- P. 154- 156.

88. Fuh, G., Cunningham B.C., et al. Rational design of potent antagonists to the human growth hormone receptor // Science.- 1992.- V.256.- N.5064.-P.1677- 1680.

89. Gavora, J.S., Benkel В., Sasada H. et.al. An attempt at sperm mediated gene transfer in mice and chikens //Can.J. Anim.Sci. 71.- 1991.- P.287-291.

90. Glosser, A., Doetschman Т., Korn R. et.al. Transgenessis by means of blastocyst derived embrionic stem cell lines // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986.-V.83.-P.9065-9069.

91. Good, R.A. et al. /The role of the thimus in development of immunologic capacity in rabbits and mice.//Exp. Med., 1962, v. 116, №5, p.773-781.

92. Gordon, J.W., Ruddle F. Integration and stable germ line transmission of genes injected into mouse pronuclei // Science.-1981.- V.214.- P. 12441246.

93. Grumet, F.C., McDevitt H.O. / Nature of the represponding organism. // Contemp. Topics Immunobiol., 1973, v.2, p.63-76.

94. Hammer, R.E., Palmiter R.D., Brinster R.L. Partial correction of murine hereditary growth disorder by germ line incorporation of a new gene // Nature.-V.311.-1984.-P.65-67.

95. Hammer, R.E., Pursel V., Rexroad С et.al. Production of transgenic rabbits, sheep and pigs by microinjection// Nature.- 1985.- V.315.- P.680-683.

96. Hammerling, G.J., McDevitt H.O. /Antigen binding T and В -lymphocytes.// Immunol., 1974.- V. 112.- №5.-P.1726-1733.

97. Hettiarachchi, M., Watkinson A., et al. Growth hormone- induces insulin resistance and its relationship to lipid aviability in the rat // Diabetes.- 1996.- 45,- N4.- P.415- 421.

98. Huzar, D., Balling R., Kothary R. et al. Insertion of a bacterial gene into the mouse germ line using an infections retro virus vector // Proc. Natl. Acad. Sci. 82.- 1985.- P.8587- 8591.

99. Jaehner, D., Haase K., Mulligan R. et al. Insertion of the bacterial gpt gene into germ of mice by retro viral infection // Proc. Natl. Acad. Sci. 82.1985.- P.6927- 6931.

100. Jaroskova, L. et al. /Immunoglobulin determinants on lymphocytes in germfree piglets.// Eur. J. Immunol., 1973, v.3.- №12.- P.818- 824.

101. Kostyo, L.J. Rapid effect of growth hormone on amino acid transport and protein synthesis // Ann. N.Y. Acad.Sci.- V.148.- P. 284- 312.

102. Kostyo, L.J., Nutting D.K. Grows hormone and protein metabolism. In: Handbook of physiology.- 1979.- P. 187- 210.

103. Lavitrano, M., Camaioni A., Fazio V.M. et.al. Sperm cells as vectors for introducing foreign DNA into eggs: genetic transformation of mice. Cell 57. 1989.- P.717-723.

104. Mannino, R.J. and Gould-Fogerite S. Liposome mediated gene transfer // Bio Technigues 6.- 1988.- P.682-690.

105. Manon, K., Overbeek P. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1988, 85, p.l 165-1168.

106. Mansour, S.L. Gene targeting in mouse embryonic stem cells: introduction of specific alteration into the mammalian genome // Gene-Anal. Tech. 7,- 1990.- P.219- 227.

107. Mansour, S.L., Thomas K.R. and Capecchi M.R. Diruption of the proto- oncogene int -2 in the mouse embrio derived stem calls; a general strategy for targeting mutations to nonselectable genes // Nature 336.-1988.- P.348-352.

108. Mehtali, N., LeMeur V., Lathe R. The methylationfree ststus of a houskeeping transgene is lost at high copy number // Gene.- 1990.-V.91.-P. 179- 184.

109. Nazario, E. Petits on glands: Une histoire d'hormone? // Rev. Palais decouv.- 1996.- V.24.- N. 237.- P.53- 60

110. Okada, S., Kopchich J.J. Anti- diabetogenic effect of growth hormone antagonists //J. Cell. Biochem.- 1994.- P.171-178.

111. Palmiter, R.D., Brinster R.L. Germ- line transformation of mice // Ann. Rev. Genet.- 1986.- V.20.- P.465- 499.

112. Palmiter, R.D., Brinster R.L., Hammer R.E. et al. Dramatic growth of mice that develop from eggs microinjected with metallothionein-growth hormone fusion genes//Nature.- 1982.- V.306.-P.611-615.

113. Palmiter, R.D., Norstedt R.E., Gelinas R.E. et al. Metallothionein-human GH fusion genes stimulate growt of mice // Science.- 1983.- V.222.-P.809-814.

114. Panthier, J .J., Condamine H. and Jacob F. Inoculation of newborn SWR/J gemales nith an ecotropic murine llucemia virus can produce transgenic mice//Proc. Natl.Acad. Sci. 85.- 1988.-P.I 156-1160.

115. Pohja, M.S., Niinivaara F.P. Determination of the water holding of meat by constant pressure method.// Fleischwirtschaft/ 1957. - v. 9. - N 4 -p. 193.

116. Pursel, V.G. et al. II- th International Congress on Animal Reproduction and Artificial Insemination, Dublin, 1988.

117. Pursel, V.G., Bolt D.J., Mileer K. Expression and performance in transgenic pigs // J.Reprod. Fert. Suppl.- 1990.- V.40.- P.235-245

118. Pursel, V.G., Pincert C, Mileer K. et al. Genetic engineering of livestock //Science.-1989.- V.244.- P.1281-1288.

119. Pursel, V.G., Pinkert C, Rexroad C, Mileer K. Animal growth regulation // Et by D.K.Campion, C.J.Hausman, KJ.Martin. New York.-London. 1989.

120. Pursel, V.G., Rexroad C, Pincert C. et al. Progress on gene transfer in animals // Vet.Immunol. Immunopathol.- 1987.- V. 17.- P.303-312.

121. Pursel, V.G., Rexroad C. Status of research with transgenic farm animals //J. Anim.Sci,- 1993 .-V.71 .-P. 10-19.

122. Rexroad, C.E. Transgenic technology in animal agriculture // Animal Biotechnology.- 1992,-V.3.-N. l.-P. 1 -13.

123. Rexroad, C.E., Pursel V.G. Status of gene transfer in domestic animals

124. Proc. of 11th inter, congress on animal reproduction and artifical insemination. Dublin, 1988.-V.5.-P.28-35.

125. Saiki, R.K., Gelfand D.H., Stoffel S., et al. Primer- directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA- polymerase // Science. -1988.-V.239.- P.487- 491.

126. Saiki, R.K., Scharf S., Faloona F. et al. Enzymatic amplification of B-globulin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia// Science.- 1985.- V.230.- P. 1350- 1354.

127. Schoenenberger, C.F., Andres A.C., Groner B. et.al. Targeted c-mys gene expression in mammary glands of transgenic mice induces mammar у tumors with constitutive milk protein gene transcription//EMBO J.- 1988.7.- P. 169-175.

128. Sippel, A.E., Saueressing K, Winter D. et.al. Transgenic animals. N.Y.L: Academic Press Inc.- 1992.- P.3-26.

129. Taussing, M.J. /Т cell factor which can replace T cells in vivo.// Nature, 1974.-V.248.- №5445.- P.234-236.

130. Thompson, S., Clarke A.R., Row A.M. et. all. Germ line transmission and expression of corrected HPRT gene produced by gene targeting in embryonic stem cells//Cell 56.- 1989.-P.313-321.

131. Tyrreil, H.F., Brown A.C., Peynolds P.J. Effect of bovinesomatotropin on metabolism of lactating dairy cows: energy and nitrogenutilization as determined by respiration calorimetry // J.Nutr. 1988. -V.118.-N.8.-P.1024- 1030.

132. Vernon, R.G. Influence of somatotropin on metabolism // Use Somatotropin Livestock -Prod. Semin. Brussels.- 27-29 Sept.- 1988.-London.- 1989,- P.31-50.

133. Wagner, E .F. Of transferring genes into sprem cells and mice // EMBOJ.9.-1990.-P.3025-3052.

134. Wall, R.J., Hawk H.W., Nel Neil. Varking transgenic livestok: genetic engineering on a large seale // J.Cell. Biochem.- 1992.- 49.- N.2.- P.I 13-120.

135. Wall, R.J., Pursel V.G. et al. High- level synthesis of a heterologous milk protein in the mammary glands of transgenic swine // Proc. Natl. Acad. Science USA.-1991.- P. 1696- 1700.

136. Ward, K.A., Nancarrow CD. The genetic engineering of production traits in domestic animals // Experienta.-1991.- V.47.- P.913-922.

137. Wilmut, I., Archibald A.L. et al. Production pharmaceutical proteins in milk // Experientia.-1991.- V.47.- P.905- 912.

138. Wilmut, I., Archibald A.L., Harris S. et.al. Metods of gene transfer and their and their potential use to modify milk composition // Theriogenology.- 1990.- V.33.-N.l.-P. 113-123.