Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Продуктивные и физиолого-биохимические качества трансгенных свиней

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Продуктивные и физиолого-биохимические качества трансгенных свиней"

■ A'UW

На пржжах руютиси

Шатайло Вячеслав Николаевич

ПРОДУКТИВНЫЕ И ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИГЧЕСКИЕ КАЧЕСТВА ТРАНСГЕННЫХ СВИНЕЙ

03.00.23 - Биотехнология

Автореферат диссертации ва соискание ученой степени кандидата биологических наук

Дубровицы, Московская область 2001 г.

Диссертационная работа выполнена в отделе биотехнологии Всероссийского государственного научно - исследовательского института животноводства (ВИЖ).

Научный руководитель: доктор сельскохозяйственных наук, профессор,

академик Россельхозакадемии Л.К. Эрнст

Официальные «|ш«иты:

доктор биологических наук, профессор, Н.С. Марзанов

кандидат биологических наук, В Л. Рябых

Ведущее учреждение; Всероссийский научно-нссяедователъекиИ

институт свиноводства.

Защита диссертации состоится " 26 " нюня 2001 г. в 10 час, на заседании диссертационного совета Д. 006.013.01 во Всероссийском государственном научно- исследовательском институте животноводства.

Адрес института: 142132, Московская область, Подольский район, п. Дубровицы.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно - исследовательского государственного института животноводства.

Автореферат разослан 25 мая 2001 г.

Ученый секретарь диссертахшоннрлГчзтепО

кандидат биологических наук/^,—Í1 ) В. П. Губанова

-1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Основной целью работ.по геяной инженерии в»-животноводстве является создание и изучение уникальных племенных животных с измененной и устойчивой наследственностью, используемых в ;: ■ ■ больших популяциях для их совершенствования, повышения продуктивности и качества продукции. В последнее время развернут широкий фронт исследований по созданию траисгенных животных с конечной целью повышения продуктивности.

Опыты по получению и изучению трансгенных животных по генам соматотропиновой оси проводятся во многих странах мира. Но несмотря на многочисленность и многообразие этих исследований, многие факторы, определяющие эффективность экспрессии чужеродных генов в клетках ; целостного организма остаются недостаточно изученными. В связи с этим, изучение экспрессии введенных генов н изучение кх взаимосвязи с фнзиолого-морфологическнмн признаками у трансгенных свиней является актуальной задачей как в биотехнологии, так и селекции сельскохозяйственных животных.

Огромный научный и практический интерес для животноводст ва .; представляет получелке особей, устойчивых к заболеваниям (Muller Brem G., 1996). Новая стратегия повышения устойчивости животныхк заболеваниям основана на технологии нуклеиновых кислот (генетическая иммунизация),'.■".'" которая развивается в двух направлениях: дополнительный перенос генов и разработка ДНК вакшш (Зиновьева H.A., Эрнст Л.К., Брсм Г., 2001).

Совместными усилиями российско-германских ученых (Всероссийский . научно-исследовательский институт животноводства, Россия; Институт ; <

животноводства и генетики, вегерипарно-медицинский университет, г. Вена) были получены свиньи, трансгенные по рекомбинантным генным конструкциям рнлизинг-фактору соматотропина (mMTl/hGRF), гормону роста человека с WAP. промотором (WAP/hGH) н дитрансгенныеживотные с интеграцией как гена рилизинг-ф актора гормона роста, так и гена гормона ' роста человека с WAP промотором (mMTl/hGRF + WAP/hGH) одновременно.

ЦЕНТРАЛЬНАЯ |

- НАУЧНАЯ БИБЛИОТЕКА I

Получение этих животных выдвинуло на первый план необходимость изучения ; ~ физиолого-бнохимических, ■ иммунологических - процессов,, хозяйственно-ценных- признаков н их особенностей у вышеприведенных трансгенных свиней четвертого поколения.^ ; : г

■ -V' ' Цели н задачи исследований ■

Мелью исследований было изучение физиолого-биохимических процессов и выявление их особенностей в организме свиней, с интегрированными в геном рекомбинантными генными конструкциями WAP/hGH, niMTl/hGRF и mMTl/hGRF + WAP/hGH четвертого поколения.

Для достижения указанной цели, были поставлены следующие ?адачн:

1) определить динамику среднесуточных привесов при выращивании и откорме свиней с 50 до 160 кг живой массы; "

2) изучить переваримость основных питательных веществ, обмен азота,

углерода и энергии при живой массе 100 кг;

3) вывить ocoSeiiiiocra биохимических процессов в организме трансгенпых свиней;

■ "' i■ ■■ ■.'' - 4) изучить- особенности иммунологического ответа- организма

трансгенных свииеП на раздражение возбудителями острых кишечных

'.заболеваний. ■ ■ ■.' -* .■ ■<-■■;■; -■■■■■■ ■ :-'■■■ ■ -* ■'. :•: *•

5) определить мясо-сальную продуктивность при убое свиней в 160 - 170 кг живой массы, морфологический состав тут, развитие внутренних органов;

6) изучить цнто-морфологические ' особенности ' органов и тканей , трансгенных свиней;

7) выявить корреляционную зависимость уровня соматотропина в кровн с другими физиологическими н хозяйственно-полезными признаками.

Научная новизна н практическая значимость работы

Впервые выявлены особенности физиолого-биохнмическкх процессов, мясо-сааыгой нродуктивности и качества туш, цито-морфологическнх показателей органов и тканей, иммунного ответа при вакцинации бактериальной вислиной в организме свиней, с интегрированными в геном конструкциями \УАР/ЬОН и тМП/ЬСНР + \УАР/ЬОН у четвертого поколения.

Проведен анализ юрреляционной зависимости уровня соматотрокина в крови трансгснных свиней с другими физиологическими и хозяйственно-полезными признаками, .

Положения, выносимые на зыциту

1Л итерированные 'в- геном 'свиней, 'изученные рекомбинанткые конструкции, эффективно экспресс ируют, что ' проявляется по динамике увеличения собственного гормона роста животных, в сравнении с этим показателем животных-сверстников.

2. Секреция собственного гормона роста у трепегенных свиней способствовала повышению уровня среднесуточных: привесов и лучшему иммунному ответу при вакцинации. - 'г ■■■ ■'■■- .

- 3. У трансгенных животных по рекомбинантион генной конструкции WAP/hGHí и рекомбинантной генной конструкция тМП/ЬСКР происходит : улучшение мясо-сальных качеств. :.

4. У днтрансгенных животных происходит ухудшение мясо-сальных качеств в сравнении этими показателями животных-сверстников. •

5. Трансгенные свиньи по рекомбинантной генной конструкции WAP/hGH: V рекомбиЕшггоой генной конструкции тМЛ/КОШ7 являются перспективными для целей селекции, а тр ад стенные по обеим генным конструкциям одновременно, не притоны для селекции.

''-'/-''У-- Апробация работы' ■■ '

. Материалы диссертации были: представлены на заседании; отдела биотехнологии ВИЖа и на 48-Й конференции аспирантов и молодых ученых "Вопросы интенсификации животноводства"/Дубровицы, 1999. ■

По материалам диссертации опубликовано две работы. .'".;

• . . Структура II объем работы

/Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методой исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложения. Диссертация изложена на' 167 стран ицах- машинописного текста, включает, 50 таблиц,. 5 рисушеоигб"' фотографий. Список литературы включает 125 источников, ь том числе 65 на иностранных языках. . .-.'/у],'-';'...

2. МАТЕРИАЛЫ II М ЕТОДЫ

• Для изучения влияния интегрированных. в геном генных конструкций релизинг-фахтора соматотропного гормона человека (mMTI/hGRF), гормона ' роста человека с WAP промотором (WAFVhGH) и интеграцией как гена ршшзинг-фактора гормона роста, так и гена гормона роста человека с WAP промотором (mMTI/hGRF + WAP/hGH) одновременно, на физиолого- -биохимические, иммунологические процессы, хозяйственно-ценные признаки, были проведены исследования на растущих-откармливаемых трансгенных свиньях и их аналогах помесей ландраса с крупной белой породой четвертого поколения в условиях вивария Всероссийского ГОШ животноводства.

Исследования проводили согласно схеме, представленной на рисунке I. :

I •- ■ Продуктивные и фяшолсго-{>ио1имяч«|снс качества трансгеннихевнней --■ )

. . '.< "сН. • •• ¿V'/: •«....'«'-.-.•.»;><.• л - 'у..

,":-' |■ гаМП/ЬПКГ,(д-3)1 \УАРД|СН,<п-3> 1 4 • I ЛУАР/ЬСП+'юМТ1Л|СКГ,<п-2) 1

'с ... . '. -»

' Сравнительная характеристика'параметровтрансгеяяых и летраисгспныт - , : (ввнсв (п=4>,110М«ей 3/4 КБ х 1/4 ЛД,жяшя масса - 50-160 кг - , >

Перемри^ мостыпгг.

ратник«

г Обмен " .

азота и " энергии".'

1 Иммунолог. . пшшыа: , • Т -лимфоциты В - лнмфоцтты Фягоцнприля " актнпп&стъ ' «(Йтрофия»»' С • мммуиогдоб, М-аммуноглоб. Тятры антител:

• кПрОТОО

-кКлН5сиелле ; - к Сальмонелле

• к Эшершшв -.

еомато-тропии

трийоа-тиронин

ЕЕ

■■'."" Вноххинчеетю ■ пекамтсяя ■

; _ _ ■■ , -1 крови:

обшиб белок - 1 общаелноиды

фосфалнпяды ', •мюш ,

креатнк|шя1л / ■ йот мочевины

крести нфосфятм» ,. юлеетцжн.

трнгжпериы * альбумины '

лтюцротши ■ *■ глобулины -'

мыгочаая кя-т» :! .АСГ.АЛТ *'■

глютаматдегцпрог. : , глюком •

ласта тасгвдроген. . креатянян : ..

Са в Фосфор Лактат

КОНТРОЛЬНЫЙ УГЮЛ

' .-. -1 1 п

г"-^.'. | ••.-•г.1.' • •. 4 . ■ л-; - ' 1- - - 1 -

Мясмя прадуктвавотъ,, . . масса преоубоЙмя, убойный. пл№ толщина еццика, масс« »иутр. жнр* к »нутр. органов, \ % сала, % мяса, % костей, . .'' ^ выхода отрубов ц Гпстол»-| ппмкм -■ исследоммнв: '.ППЯП, йод* желудочная а ш«тоаядная хелсш, ниш. пим ' иФизяко- , Х1!МИЧ<С|С. ; хараккркс. миш. тин: ' рН-кяс* ' %%-жкра ■ белка фарша Коррсластп-. пая заав-егь - уроеил сомжто-тропнпа в кро-вя с другими ■шсахат«лямм

\ 1 "т ' - ' • Ч 1 . ! • г/- -

ч ' 1 -Гь Г Г* :

Рис. и Общая схема исследований

Свиньи были получены Л методом искусственного осеменения нетрансгенных помесных маток семенем трансгенных хряков Кг 1236, № 110$ и Ка 1253в экспериментальном хозяйстве ВИЖа (ЭХ) "Кленово-Чегодаево".

Интеграцию чужеродного гена определяли с помощью полимеразной цепной реакции. Для ПЦР геномную ДНК выделяли из' кусочка ушной; раковины родившихся поросят/. Тестирование проводили совместно с-сотрудниками ВИЖа Половым АЛ. и Зиновьевой НА. (Зиновьева НА, Попов А.Н., Эрнст Л.К. и др., 1998). *Г ; V " л: V:

В течение , опыта содержание евнней было индивидуальным, безвыгульным.' Кормление двухразовое (животные получали: влажную мешанку), полнорационным комбикормом СК-1 с повышенным (на 20 %) уровнем протеина в сравнении с детализированными нормами кормления. Температура в свинарнике находилась в пределах от +10 до 20"С. В период опыта ежедневно учитывали по группам количество скармливаемых кормов и их поедаемость, контролировали физиологическое состояние животных, один раз в мссяц поросят взвешивали. ' './-"- •

- Согласно схемы нослелованиН (рисД) в лаборатории нормирования кормления свиней совместно с к. с.-х. н. Б.А. Махаевым были проведены научно-хозяйственны Й, балансовый и респирациоиный опыты по методикам ПИЖа. " ■ ■■

В кормах и экскрементах определяли: содержание общей влаги - методом: высушивания_в_термсстате до• постоянной величины; сырую золу - сухим-озолением в муфельной печи;' общий азот - по Късльдалю; сырой жир по Сокслету; сырую клетчатку - по Геннебергу и Штокману; кальций -трилономстричсским методом; фосфор по ; Фиске-Сиббороу; энергию качорнметрнческим методом; углерод - по методу Тюрина в модификации Лукашек. Содержание кислорода и углекислого газа -, на газоанализаторах "Магнос" и "Урас" фирмы Хартман и Браун. (ФРГ). Обмен энергии и, энергетическую. питательность рационов определяли прямым методом в респирационных опытах на свиньях. Баланс энергии, отложение жира и белка в ! теле свиней рассчитывали по константам й уравнениям, рекомендуемым первым международным симпозиумом по энергии. , '

В начале, середине и в конце научно-хозяйственного опыта от каждого^ животного была взята кровь для гематологических исследований (Кудрявцев

; ■■■ ; ■ / .■■' ; " ; 9 /.■;;■> ■

АА., Кудрявцева ЛАЧЛЭТ4). Биохимический анализ крови проводили в лаборатории биохимии с.-х. животных ВИЖа под рук. проф. Владимирова В-Д.

В пробах крови определяли содержание: ' белка в' сыворотке -рефрактометрическим - - - методом; . мочевины по реакции с диацетилмонокисмосом в присутствии тиосемикарбоцнда; общих липидов, фосфолипидов и холестерина по Покровскому; фосфора но методу Eparca а модификации Усовича; акшвность ■ аминотрансфераз (ACT н АЛТ) - по Пасхмной. Концентрацию гормона роста устанавливали иммуноферментным анализом. , '.. ■■■■..■■

Т-_и В-. клетки,изучали с использованием антниммуноглобулиновых сывороток. Содержание иммуноглобулинов в сыворотке поросят проводили по методу Манчини (Manchlni G., 1965). - -„"■-'

При постановке реакции: определения фагоцитарной , активности, в качестве тест-микроба■ использовали кишечную палочку штамм 020 • в' концентрации 1млрд. м.тЛст. - J

• Кровь для определения титроа, брали » различные сроки, т. е.. до вакцинации; через 2 недели и 1 месяц после 1-оЙ вакцинации. Вакцинировали поросят два раза, согласно наставлению по применению какцнны ОКЗ, т. с. с промежутком В две недели между в&щк нациями. -

Титры специфических антител к Протею, Клебсиелле, Сальмонелле и к Ешерихия определяли при помоши реакции непрямой гемагглютинации." .

По окончании опыта и при достижении свиньями живой массы 160кг, был произведен контрольный убой всех подопытных животных по методике ВИЖа с/детальным изучением'развития внутренних:органов и анатомо-морфологического.. состава туш. ; В мясе' и длиннейшей мышце спины определяли содержание воды, белка, жира, золы. Качество мяса и принадлежность к той или иной группе (PSE, DFD и N) оценивали по величине рН мышечной ткани через I и 24 часе после убоя животных при одновременном определении температуры.' • ' '' \ " .'.'■'" Показатели," полученные в результате исследований, были обработаны биометрическими методами по малой выборке по Е.К. Меркурьевой (1970) с помощью компьютера IBM. ; i -- _ . , , - ; - : ^ . ^ .

■.,'■.■.■; -.....V' ю ; . : : \

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОЬСТВЕН11Ь1Х ИССЛЕДОВА1ШЛ ■

Жнвяя масса н среднесуточные привесы свиней. '*"■''

Динамика живой массы и среднесуточных привесов по группам в

возрастном аспекте и в целом за опыт приведены в таблице I.

: - : Л \ ■. ; ТабЛиЦа I

*■■■.- Дннамкка жявой массы и средясеуточвые при весы по периодам , и в целом за опыт траисгсн пых н контрольных свиней. -

Возраст свиней (дней от рождения) Трансгенные Контроль

п Живая масса, кг Средн. привес ■ ■■ ■■. г ■ ■ • п Живая масса, «■■'' кг Средн. привес, • "Г

173 9 53,б±3,2 ■ .... 4 49,0+3,2 -

190 9 61,3±2,7 626,1 ±90,2 4 53,4*1,7 365,0± 159,2

209 9 74,2±3,0 663,1*19,7 4 66,5*1,6 687,5*22,3 '

- 246 ~ 9 —103,3±3,1 749,1+-10,7 4 95,6±1,7 787^±58,0

274 8 110,7±2,9 ■ 557,91:97,6 4 102,4±1,8 245,0+45,0

287 8 120,0>±3,1 779,4+19.1 4 113,7±2,0 870,0+36,2

303 8 133,9±3,б 753,7±134,6 4 124,0±2,8 572.5+48,9

319 8 142,6±4,б 611,8±123т9 4 137,9+2,5 995,0+108,1

338 8 151г9±5,1 480,7±22,5 4 144.*+3,1 357,5+42,9

353 8 161,3±6,0 ■ 648,8±101,4 4 150,2+4,9 362,5± 156,4

В среднем за весь период опыта: прирост живой массы... " средн. суточяыВ__ привес - 108,5±4,9 663,4136.6 101,2+6,8 ; 582,5±94,1

• 18 февраля снижен уровень кормления до 1 кг в сутки (в возрасте 260 дней) .-

• I - 2 марта увеличен уровень кормления до 2-х и* в сутки (в возрасте 271 день) ■..

• 9 марта увеличен уровень кормления до 3,2 кг в сутки (в возрасте 279 дней)

• 21 апреля произведена экспериментальная вакцинация 4-х валентной вакциной '' '■' ■ ОКЗ(вмзрасте322дал) ■;■-'■'■',*. ; . '

• 7 мая произведена ревакцинация поголовья той же вакциной (в возрасте 338 дней)

Среднесуточные привесы как . у. тран стенных поросят так и у контрольных были высокими и находились на уровне 600 г в сутки. В целом, за период выращивания и откорма с 6 до 12мес. возраста {.с .52 до 160 кг) среднесуточные, принеси составили у трансгенных свиней 663,4 г, а у контрольных 5$2,5 г, что па 13,9 % больше контроля.

;; 4 -'л-;. tt 'kv.;^;;;^ .т".'^

■ .*■'. Переваримость, питательны» веществ рационов, обмеп азота н энергии.. \ .И V у; V; ...•'•л.-;-;.-ч'. Х- - ¡W

" Переваримость питательных веществ; тран степными.. боровками в - ; сравнении с их аналогами приведена в таблице 2. ; , .

; -,Л •.••к \ . .. ..ТаШцаг

"■-■■ Перев»рниостьпкгательныд в«щесгь,, .

Груипа Показатели; - Опыт Контроль Разница опыт - контроль ■ '

■ :: . 1 ■ Оргаиич. ве-во. 77,3 76Д -+1,1 - - :-■ - -

' Первый Протеин - ; 76,6 74,8 '• +1,8

■i . ■' """ тип Жир \ v. ;„: 53Д - 46,6 -, ;- - +«,6 - . .. ..■ -

; raMTl/hGRF.. Клетчатка ^ - > - 20,9 - : 18,9 .-■ - +2,0 г**-1' ■. ■ - . ■

г 1 ^ i БЭ& 784,3 " угУ; 84,1 , +ОД :

Органпч. ве-во ' 77,7 . 7бд '■■ : +1,5 - - -

' .Второй... Протеин : - 80,8 ■ - 74,8 - ■ 'Л

• " тип ■■ ■•' Жир . • •• " 50,6 " 46 fi • +4,о f :; л - , -

WAP/hGH " Клетчатка - , 19,0 Í- 18,9 " ;; -+0,1 ''Ч--'' к

Tí.- ' =•.-; ••• "> БЭВ : . ; ' 83,9' : * - ■

■ Третий ' Оргаиич. ве-во 76,7 " 76,2 ~ Т-™-«' - *; • -+0,5 •• ; л'

f г ■ типJ Протеин .— —.80,1 i -.''i

WAP/bGH""- Жир . ; 53,0 46,6 . ; 4. ^ ' г"

■ \ : ^ f Клетчатка j •V 20,0 4 - - :18,9 :: +м ;

mMTl/hGRF — БЭВ " - 1 82,5 ' V<J 84,11 - ^ : -1,6 •■

' ' ' Трансгенные свиньи переваривали лучше контрольных на 4,4 % протеин и на 5,7 % жир.' Различия ■ но' переваримости других питательньсс - веществ * между трам стенными свиньями и их аналогами были незначительными, ¿: г V' Отложениев теле боровков белка н жира за учеетгый период приведено в : та&тцеЗ'Т.'-';-':^ ••* Чг " :

• ;' •• Табтща* Огложевне в тел «боровков бад ка и жира, в* 1'^ - * ■• - - * "

. . Группа ^ - ^ i ^ г'г1 - - Первый тип mMTlrtiGRF . Второе пш WAP/hGll • J Третий иш • C;,WAP/hGH+ L'"-mMTl/hGRF

;. белка, - ' г ' жира, - белиц жира, л - . белка, ' жира,9

' ; Г1 ОПЫТ • " : 129,1 > • 308,1- г. 315,0 ■ .107^ 329,0,-

; КОВТрОЯЬ; ' 111,6 •332^ ; - 332,8 - V 111,6 i. ■i 332,8 >

. . Опытв%% t ; к контролю ■ '- -7,4 ; : -5.4 - -3^ - •1.1

■ ■ По ^ отложению У в* тспс белка "первыйтип трансгенных "свиней (mMTl/hGRF) превосходил своих аналогов на 17,5 г или на 15,7 %, о по-отложению жира усту пал~н а 24,7 г или на 7,4 %. • •'*'.'•••' • •>/•:•; * ' Биожимкчеекие исследования крови.''1 * '-/ -1, ^

г- Результаты анализа метаболического профиля крови трансгениых н не' Трансгенных свиней представлены в таблице 4. ' : ••'••.•-'-'' _ ..

*. ... -'."г-*" ■"' ■ ■ ■■ -' .у; "Vi ■■ Таблица 4~

• " ; : г " Биохимические показатели крови трансгенных • • .¿.'.и-/.■',.

у" и контрольных свиией общиеза три взятия» ;.--. ;

. Показатели^ Ел.-- • ;.,.< , •• Группы , ■■

'■ V ■ 1: ■ ■ V" - . - - Г. hi ■ Изм. - Контроль >" 'п=4 ' - 1 тип mMTl/hGRF - M+m," n=3 - 2 тип у: iWAP/hGH, М+ш, пгЗ - ; ЗТИП /Ьгграксгекы, ■ М+ш, rv»2

Общий белок -: ' г% 7,5±ОД5 8,26±0,62 - 8,44±0,73: • 7,S1±0,31 "

Альбумин : ' " Г%' 3,7б±0ДЭ ' 3,9±<U3 ' 4,27±0,23 •

ACT IE/Jr 46,4±6?03- 41,46±2,04 • 43,6±9,61 37,67±3^4

АЛГ - 1. IE/Л 5«,5±б,68 57,77±4,16 49,77±8,04 * 54^3±8,97

Амилаза. . < - ЕЛГ 43U±91f6 605^±40,0 607,14,1 525,5±10^

Глюкоза мг% 71,67±6,42 72|6± 19,7 • 54,0±11,7 *71,9±8,5

Фосфор *,.. • мг% 7,33±0,93 S,57±0,47 7,45 ±1,1 • 7J5±0,46

Как видно из таблицы '4, азотистый обмен • в" организме свиней : : характеризовался повышением в крови трансгенных животных уровня общего белка на 8,9 %. Повышение общего белка произошло в значительной степени -■.'. У за счет альбуминовой . фракции. Концентрация" альбуминов у „■ трансгенных -свиней выше контроля на 7,2 %. Активность амилазы в крови трапегенных ; свиней выше; на 34,3 %. Амилаза расщепляет альфа-1,4- гликозидные связи -полисахаридов;(гликогена) в , результате чего., повышается концентрация ^ ; :

ГЛЮКОЗЫ."' ', "." 1, '.•• ■—/■.-..:.. V.'-'i-.V .

- / Анализ активности ферментов трансаминирования (ACT и AJIT), а также ; креатинфосфокнназы показал, что в крови трансгенных животных активность /; : ' ' ",1АСГи АЛТ ниже на 11,7 и 7,8 % соответственно,'чем в контроле. Активность*, 'i ■ . ферментов трансаминировааия тем ниже,, чем полноценнее аминокислотный _ .: состав. поступающий из. пишеварнтельного тракта. ¡Таким образом > можно _ , .предположить,f что{ биосинтез белка; в : организме1 трансгенных', животных :

^протекает интенсивнее чем. в контроле, на что указывает повышение _ концентрации альбуминов и снижение концентрации азотамочевины.-Х'< 'Г-'/;

Минеральныйобменхарактернзовалсяповышеннемвкровнтрансгенных;; * свиней фосфора на 7% ¿ сравнении с нетрансгенными животными, причем у ■ Ч > „трансгенов первого типа эта разница составляла 16,9 % в пользу трансгенов.; :. Повышение "концентрации ^фосфора' на' фоне увеличения :в крови' белка • указыкаетнаактивпое использование :данного метаболита" в процессах * фосфорилирования. " • Л'-'-5- \

Гормональный статус трансгенных животных. ' ' . ' ' - ; ■ ; В гормональном статусе трансгенных животных произошли изменения. ' ; - Показатели уровней некоторых гормонов,1 в крови опытных свиней показаны в таблице5? -3'' л"; '-,>••• , ^^;

'''ХХХХХ!У1;^—■ :"'*: 'XX-ХшмтзХ.

•'-' ■■■;■ Содержание некоторых гормонов в крови. . ..,. • '..¿л-;,..--..'

, •', » трапсгенных животных в сравнении с контролем (иг/мл) ■ '

- ^^ - Я X М

:: ~ Группа .. Гормоны Опыт . , м+то ."у,!. ■у Контроль -*" М+то, ' - Опыт в п . к . •• контролю

Первый тип тМЛ/ЫЗИР, п=3 * ."" ■ Тироксин ■*• «,93±4Д0 ■ ' 45.63*3,58

Инсулин ^ - 4бЗ,77± 125,49 -473,1±3*,54

Кортизол - 81,07±9?90 ■ ' 193^8123,9 -58,06 ,

Соматотропин г- 738±2,67 ■3,0*0^0- - - -+146,00 "

Второй тип 1УАР/Ы1Н ■ п-3 ; _ Тироксин . • • - 54,042,97 - . 45,63*3^8 +1834

Инсулин 397,93*148,19 473,1*38^4 -15,89 -

Коршзол 109,17128,6» 193^8*23,9 -43,32

Соматотропив 9,25±2,72 ■ 3,0*0,50 - +208,33

Третий тип \УАР/ЫШ+ . «МИЛОМ»'-д=2 ~ Тироксин ^ .. 51.10*5,23 - 45,63*3^8 +11,99

Инсулин - - 333,45±39336 473,1*38^4 - -29,52

Кортизол - ; 10б,8± 15,56 193^8*23,9 . -44,74:

Соматотропив - 11.88*12^7- . +296,00 .

] : •

В среднем уровень сомэгтотропина в крови всех трех типов трансгенных; . свиней Нравен - 9,2 ^ кг/мл,': т.е.средний уровень; соматоропного ■ гормона у. трансгенов в 3,1 раза выше контроля.'''- X -Х-'- ^ ~- - :4- -- - - XX X Утрамсгенных животных снизился уровень кортизола в крови, до 99,01* вг/мл, что меньше контроля на 48,77 % или в 1,95 раза1~;,. ^

*. .'V .• ■'.V--' ••• • '. г" • ' «л •'•' ; .•"• " V

'. .Л' >' V 1 ■ ■■ ' I Г ■ - ; -- - ------^7-/1

У трансгенов всех трех типов было превышение содержания в крови тироксина на 12,53 % в сравнении с ветранстенными животными. Однако у ; свиней первого типа превышение тироксина было всего лишь на 7,23 % а у . двух других типов на 15,17 %. :, Л д.:

- У трансгенных животных произошло снижение содержания инсулина в крови па 15,79 % в сравнен« ис аналогами. Причем у трансгенных свиней первого типа всего лишь на 1,97 94, у свиней трапсгснных по генной конструкция ЛУАР/ЪОН на 15,89 %, а у дитрансгенов на 29,52 % в сравнении с контрольными свиньями. . ; .

Иммунологический статус трансгеяяых животных. , -

Были проведены исследования по изучению ряда показателей клеточного (Г и В лимфоциты, фагоцитарная активность нейтрофилов), гуморального (уровень иммуноглобулинов С н М) иммунитета,, определению динамики образования специфическихантител к Протею, Клебсиеле, Сальмонелле, Эшерхии при вакцинации животных вакциной ОКЗ. "/' " :. .

Из проведенных исследований следует, что практически все показатели количественного содержания как Т-, так и В- лимфоцитов, представленные в таблице й, у свиней опытных групп достоверно выше соответствующих показателе контрольных животных. - Что свидетельствует о стимуляция клеточных иммунных реакций гормонами соматотропкнового ряда. -

. ч .">"-'.■-''■ ■■ ■■ '■■■'■ >■'... ' : Таблица б

• Содержат» Т- и В- лимфоцита у подопытных поросят

Группа : Показатели : Опыт ' М+т, п*3 : Контроль М< т,п=41 Разность с - контролем

"" " " Т- лимфоциты -- - - ■

Первый тип тМЛ/ЬОКР абсолют, число 10*/л 933±03б «,95±1,27 2,3$±0,50*

относит, ко-во в ) мкл 44,3*0,44 37,3±1,09 7,0±1,17*

Второй тип УГАР/ИОН абсолют, число 1(Лл 8,53±0,40 6,95±1 XI 1,58±0,52*

относит, ко-во в 1 мкл 44,8±2,95 37,3±1,09 7,5±3,12*

В -лимфоциты

Первый тип тМП/ЬОКР абсолют, число 10 /л - 4,5б±0,18 2,72±0,15 1,84±0,23*

относит, ко-во в 1 мкл 21,6±0,37 ■ 14,6±0,44 7,0±0,57*

Второй тип ШАР/ЬОН абсолют, число 10у/л 3,96*0,17 2^72*0,15 1,2440,23*

относит, ко-во в 1 мкл 20,0±0,76 14б±0 44 5,4±0,87*

*Р<0,05

Результаты определения специфических антител ктаким антигенам как Протей, Клебсиелла, Сальмонелла, Эшерихияпредставлен ы в таблице 7.

. '"_>'"' ; '■■■ ■ - Таблица?

Усредненные значения титров антител кпротею, клебсиелле, сальмонелле, * эшерхин в различные сроки вакцинации опытных поросят

Группа Сроки взятия крови* ' Опыт-.: М+т ; Контроль М+т, п=4 Отношение опыт / контроль

1 2 ■ 3 4 - 5

Титры антител к Протею -

Первый тип гакт/юат, п~3 1 133,3±32,7 120.0*26,7 1,1

2 . В53,3±261,3 200,0±46,2 4,3

, 3 746,6±345,6 300,0± 143 2,5

Второй тип п»3 ' - 1 13373±32,7 120г0±2б,7 1,1

• 2 533,3±130,7 200,0±46,2 2,7

з ■ 1066,61261,3 ; зоо,о±мз . 3,6

Третий тип ; -РЛОН + тМП/ИОЯР, п»2 1 120,0±56,6 120,0±2б,7 1,0

• 2 ■ ■ 1280,0±0 200,0*46,2 6.4

3 1280,0±0 300,0±143 4,3 - -

" ' ; ■ ■ ■'■Титры антител к Клебсиелле ->■■-■■-■.■

Первый пш тМТШСЙР, п=3 г ' ■ : 1 - 66,6±16,3 40,0±0 1,8

2 320,0±196 140,0*69,3 23

3 533,3^457,2 140,0±23,1 3,8

Второй тип ^АРЛЮН, ■> -п-3 • - „ ! - 66,6± 16,3 • - 40,0±0 1,8

■.■:..г.- . 320,0±0 140,0*69,3 2^

■ ■ 3 ■ 586,б±429,3 140^0+23,1 4,2

Третий тип тМЛ/ЬвКР, и«2 1 60,0±28,Э 40,0±0 и

2 320,0±0 - 140,0±69,3 2Д

. - -3 . - 480,0±226,3 Н0,0±23,1 3,4

■ ' ■■ - Титры антител к Сальмоиелле

Первый тип , . тМПЛЮШ7. 1 80,0±0 40,0±0 2,0

2 58б,6±428,3 340,0*132,7 1,7

■ • 3 480,0± 196,0 300,0± 143.0 1,6

Второй тнп WAPЛlC.H, . п-3 - 1 ■ 106,0±32,7 40,0+0 2,7

■ 2 . ■ 320,0±0 340,0*132,7 0,9

3 640?0±392,0 300,0±143,0 2,1

Третий тип Ч^АР/ЮН+ ~ тМТ1ЛИЗЯР, »-2 1 . ■ 120,0±56,6 40,0±0 3,0

- - ■■ 2 - ■ ■ 320,0±0 340,0*132,7 ,0,9

■<■■.■ .3 • . 320 0±0 300,01143,0 1,1

-А • ! • - 2 ' ' ■ - з 1 ■-■-л. ..- 5 • ■..-.■-

■ - Титры антител к Етерихии • г " " -.'-.Г'" ' ^ .'

Первый тип 1 • 106,6432,7 •70,0411,6 -> ," ! • 1,5

тМЛ/ЫЗЫч ■ 2 -- 266,6465,3 "160,040 1,7

п=3 .. • .... .- 3 ■..,-. 2133465,3 180,0±58,2 1,2 -

Второй тш'. ■ .- 1 133,0±32,7 ,70,0±И,б ' 1,9 ■

^арлюн,;:' 1 ■ г • 426,б±130,6 • 160.010 • 2,7

И=3 Л: :-.,;■. г . з 693,34397,3 180,0*58,2: ■ : • 3,9 " -

Третий тип 1.; • - 1 -80,0±0-у. -70,0411.6 ■■■ 1,1

■2 ' • 240,04113,1 - 160,040 п 1,5 ■ -

п>МТ1/ЬОКР, №>2 480,0*226,3 ■ 180,0458;2 . . 2.7 • -

"р'

*1 ^ до вакцинации . • ; •.. : '•..

■ 2 - через две надели, после 1 вакцинации '■ ; 3 •через две педели, носле 2 вакцинацни

• Из таблицы 7 следует, что у всех животных до вакцинации отмечали 1 • наличие- антител ; ко,':'всемг антигенам, входящим ;"в вакцину ОКЗ, что-1; ■ свидетельствует о соответствующем антигенном раздражении исследуемых'' Г . животных на протяжении жизни, предшествующем вакцинации, естественным ^; . путем: от матери, алиментарным и другими. Во веспериоды кзучения уровни антител против каждогоантягенау трансгенных.животных были выше, чему г; контрольных,'причем титр антител к,каждому антигену-возрастал во время вакцинации, но динамика изменения уровней в каждой группе была различна. ;.

Наиболее динамические изменения уровней значений антител наблюдали у 3 '; в группе поросят, трансгенных по гормону роста с.Ч^АР промотором: резкое, ?;;

почти в 3-4 раза' повышение уровней антител после 1-ой вакцинации, затем, | , после 2-ой вакцинации его повышедие было почта в 2 раза. ' ' л 0 . V >,> ■ .

' -В группе.жнлогаых, транегенных по рнлиэйнг-фаюору гормона роста \ первоначальный ' уровень.'также," ррко^'-' возрастал, - однако после'-' второй: ! -вакцннации изменялся незначительно. При лтом ^ абсолютные значения титров; |: антител к каждому антигену в группе ШАР/ЬС51 I был вьаие, чем:в группах";^ ~. тМТШСЯР и- гшМТ1ЛСКР+Т^АР/ЬОН.■-У ..поросят, ;; трансгевных '■::по \ - шМП/ЬСКР+Ч^АР/ЬОН,-;,,к резкие изменения V уровня: антител после - первой ^ ^, ; вакцинации отмеченьГ прежде" всего' к протек» (в 10 раз) я клебсиелле (в 5 раз),' -г " к другим антигенам изменение уровня было менее значительным. В результате.

второй вакцинации значения титра антител "менялись незначительно.: Что ^ касается контрольных животных, то у.них уровень антител после первого ''

введения вакцины, животным возрастал, гораздо в меньшей степени, чем в опыте; _ исключение ;составляет возрастание „титра антител в 8,5 «раз' к

- сальмонеллам. После второй вакцинации значения уровней антител изменялись незначительно, к тому же сами абсолютные значения титров у контрольных

■ поросят были заметно ниже, чем у опытных групп животных. * •' ;

>.'..* Мясная продуктивность н качество туш трансгенньи и контрольных свиней. . Л;.\.' :. ,:-' ■ V'■ '- ■

В .таблице; 8 приведены данные, ,< характеризующие качество: туш

■ различных групп животных по преду бой ной живой массе й убойному выходу. Как видно из таблицы 8 предубойная масса всех экспериментальных групп животных довольно высокая и составляет, в среднем в контрольной группе 165,25 кг,. в опытных "тМП/ЬОКГ,* ТУАРЛЮН, тпМПЛСЯР + ЛУАР/ЬСН соответственно 166,0; 174,О и 172,0 кг, при этом пред убойная масса отдельных животных в каждой фуппе существенно не различается. Следует отметить, что

: выход туш в опытных группах свиней значительно выше (на 0,55 - 2,68 %) по сравнению с контрольной группой. Наибольший; выход туши имели свиньи второй опытной группы 70,5%." - . =. ' ■"' V .: V. ;г

■ - ■ " '-. У','-1'*' - -/ - ..Тоблйча 8

" ■':-,* ■■ ■ Характеристика тущ свиней по убойному выходу :.'■ ; '' ;* ''

■'';--'■ . Группа.- ' Показатели, г^ .... ' • - Опыт 1 ' • М+т ~ " ¿.Контроль; • М+т, ; , - .■ п—4 г"-'- : Опыт в < %% к'/' контролю

Первый тип ' тМТ1/ЬСКР, и»3, ; ■ Пред убойная живая масса, кг 166,0± 13,64 165,25±3,38 • +0,45

■ Убойный выход ■69,04*0,34 ■68,6611,06 . +0,55,.

Второй тип WAP/ЬGH,n-3 ■ Пред убойная живая масса, кг t74.0il2.06 165,25*3,38 +5,30 •

Убойный выход 70,5±1,38. 68,66±1,06 .+2,68

Третий тип л гаМТ1/ЬСМ\ п=2" ..Предубойная ; живая масса, кг - ; 172,0±5»,90' 165£5±3,38 - +4,09

.Убойный выход , 69,57±1,9б 68,6б±1,06 +1.33 .

Сравнение параметров мясносгн животных ■ первой группы С контролем ( Таблица 9 ) показывает,' что при практически равном весе полутуш у

,-18

1 V .. ■

трансгенных животных отмечается существенная тенденция;к увеличению; ' - • мяса в туше на'6,4 % и снижений" ве«а сала - на 5,9%,по весу; костяка ■ ■ ' > ' практичесю! ! различий не "отметено,'Следует1, отмстить^ , что: аналогичная -- тенденция отмечена и ¿фи1" изучении этих' трансгенных животных ; в ; , . предшествующихпоколеутях.'1';* ' •::• • • •> •• -•. .у--

. ..'• •• •-.л Таблица 9

; ,- " ; Мясные качества трансгенных свиней в сравнении с контролем, (кг) ;

; Группа ^ Показатели , Опыт ^ Контроль : Опытв%% к;.

•" М+го * • " М+т, »^4 'контролю *- - ■■

•••••• - 2 ' ••• - з . . * 4 > ■ ■ - 5 ■:"

^ ' * > ' Вес полугущи: ' 57,2714,54 ■ : 5б,64±1,3б +1,1

Первый " У Веемяса' -28,10*2,88* • 26,40±2,02 4 •' - ' +6,4' • ••

% писай': ;><;;:~- -48,9411,4Ь, ■ 46,68±3,74 •• г +4,8 ,

Вес сала, : 21,20*1,37 ; 22^8±1,59; ' ' ^ '

■ п-3~ %сала ! -/ ;■'" : 37,1011,32 39,4412,10 • >5,9

Вес костей. ■; л - .7,98*0,53 . ..7,8611,09;.

% костей . 13,87±!,84 ' +0,6 ; 'У.г-.*

Вес полутуши ' - 61,2013,43 "56,64±иб •' :+8,1 •

Бес мяса ; , 29,6710,97 26,4012,02 . . +12,4 .

;'' Второй . % ыяса ; 48,5711,50 46,6813,74 ' +4.0 " 1. .

гац ■:.'. Вес сала "- 24,081237 22,3811^9^ +7,6 ...

УГАШЗП, % сала / ■ 39,2311,88 39,4412,10 ..

•• п-3 Вес костей Л 7,45±0,Э 7,8611,09

% жосгей 12,1910,59 ' 13,8711,84 V • -12,1 •.

ТУ V"-''.'' Весполугуши ^ 59,88±5,13? '56,0411,36 у.";.^ 45,7.......

;'— Третий ~т Весмяса у} V-., . ; 21,3314,99 26,4012,02 . '' -19,2 ;

■ "пш ■ - ; %мяса 35,3915.3 46,6815,74 ' " ' -24Д • V-'

; ШАР/ЬШ г Вес сала г .' 4^1 ;-27ДЗ±1,63 22^811,59* • .+21,8 —

%сала ." 43,80±б,64 • 39,4412,10 . +16,1 ;

шМТШЗКР* Вес костей' ; . Г 7,86±0,9, . . +43,8. »-V. -

: п=2 %костеЙ- -- 18,8211,34 - - 13,8711,84 +35,7 '

• ; I ^ / ;

, Весьма ■ важным - показателем - мясных',"качеств животных является1 содержание "жира ? в г'_ фарше" после I обвалки ^ туши.- - Этот показатель - в -значительной степени определяет содержание жира в составе мышечной ткани ;■ СГабл. 10). -уV - У'—.'- : ;

. : Из табшщы10 вндно, что трансгены первого типа" характеризуются . существенно д более- низким ^ содержанием ^ жира; в" туте повышенным; содержанием - у белка. .■ дГрансгены» . второго „^типа; характеризуются ■ незначительными различиями по этим параметрам между опытом и контролем."

* Дитрэсгены характеризуются значительным увеличением содержания жира в фарше на 24,59 % и резким снижением белка в фарше на 29,38 %. Это еще раз ■ подтверждает, что интегрированное действие двух генов вызывает усиление лнпогенсза и снижение синтеза протеина. : . ..

■■ ■ ■ '.'■'■■■ ■'"■'.■у) *■" ■;...";■■'. '■■.■.' Таблица 10

- - Содержание жира и белка в фарше трансгенныхжиботыых и нх аналогов

Группа Показатели ' Опыт ■ М+т Контроль М+т, п=4 Опыт в %% к контролю

Первый тип тМТ! /ЬСШч п=3 % жира фарша 19,90±0,01 23,02±3,35 -13,55

% белка фарша 20,19±1,14 18,99±1,40 +6,32

Второйтип . . > ЧУЛРЛЮН, и-з ; , % жира фарша 2Э,52±ЗДЗ 23,12±2,4 ; +1,73

% белка фарша. 18,72±0,58 . 18,99±1,40 -1,44

Третий тип тМТ1/ЬСШ% п-2 % жира фарша 23,66±Г8,34 15,99±1,4Э +24,59 .

% белка фарша 13,51 ±0,82 -29,38

, Другим существенным показателем мясных качеств является вес внутреннего жира (Табл. 11).

• .■■■■'■■■".'■ " ' Таблица II

Вес внутреннего жира у трансгенных евшей в сравнении с контролем, (кг)

" Группа .:;,;■■ Опыт ■ •М+т Контроль М+т, п=4 Опытв%% к контролю

Первый тип (шМП/ЬОЩ7), п=3 . - 3,73±1,03 5, ЮЛ,99 -27,56

Второй тип О^АШвН), п=>3 5,47±0Д9 5.15±0,99' +6,21

Третий тип ■ ■ {ШАРЛСН + тМТМЮЫЪл-г. ■ 6,6511,91 5,15±0,99 +29,13

I

Анализ данной таблицы показывает, что трансгены первого типа характеризуются значительным уменьшением веса внутреннего жира, у трансгенов второго типа эта разница не существенна, но в виде тенденции отмечается увеличение содержания' жира, - в сравнении с - контролем. И, наконец, у дитрансгедов отмечено заметное увеличение количества внутреннего жира в сравнении с контролем на 29,13%.

Из приведенной ниже таблицы 12 видно увеличение массы основных - внутренних органов сердца, легких, селезенки у .трансгенных животных, где; присутствует генная конструкция тМЛ/ЬСНи1. Тале увеличение массы сердца у, , трансгенных свиней первого и третьего типов произошло на 29,17 %, легких на 34,48 % и селезенки на 22,61 % в сравнении с контрольными животными. У .. трзнсгенных животных по генной конструкции ^/АРЛЮН было уменьшение . данных показателей в сравнении с контролем. Масса печени, была больше контроля только у трансгенных свиней третьего типа (дитрансгены) на 10,12%. ' ■

■'.' ' "'У'*" : : Та&якца12

Масса внутренних органов трансгенных свиней а сравнении с контролем, (г)

^ Группа Масса органов - Опыт . ' Контроль . Опыт в %% К ,1

М+ш - - М+тп, вр=4 ' контролю -

....' ...' . Сердце -,.-. 563,33*20,41 460,00+30,91 . +22,46 -

Первый' Легкие • ' * ' 830,0±163,10 652^0*44,06 +27,2 •

тип . Печень , 2223,33*39,5 2247,5*160,9 -1,08

шМП/ЬОЩ1, Почки 513,33*4,08 532^0*32,10 -3,6

. . П"3.. Селезенка \ 300,00*18,71 252,75±38Д8 " +18,69,

Матка 1186.67*89,5 855,00*124,4 +38,79

Сердце 413,33*67,21 460,00*30,91 -10,15

Легкие : 623,33*88,41 652^0*44,06 -4,47

Второй . Печень.;; 2240,0*212,9 2247,3*160,9 -ОЗЗ ;

тип С- Почки. ., ... , 500,00*44,16 532,50*32,10 -6,1 '

ЛАГАРМШ, Селезенка1-' * 236,67*35,59 252,75*38Д8 ... -6,36 "."

••• п=3 Матка ■ . 1000,0*181,8 855,00*124,4 +16,96

Третий Сердце ' 625,00*35,36 460,00*30,91 +35,87

тип Легкие ."'.. 925,0*176,78 652,50*44,06 +41,76 ■

. \УАР/ЬСН Печень^. . , .2475,0*176,8 2247,5*160,9 - +10,12

Почки 495,00*63,64 532,50*32,10 •7,04 , ;

шМП/ЬСЕР, Селезенка „ 320,00*70,71 252,75*38,28 +26,61 •

п=2 : Матка 1205,0*49,50 855,00*124.4 +40,94

■ Нельзя не заметить существенные различия между трансгенными, и контрольными животными по воспроизводительным органам самок, а именно массе матки с яичниками. У трансгенных свинок в сравнении с контрольными, произошло увеличение этого показателя на 32^3 %. „V.-..'-

Риулиатыгасгшгаческшимлмований, > г

" -. Данные, полученные при морфометрии фолликулов щитовидной железы

приведены в таблице 13. ; ■ ' 1 ■ " -

■ -. ■ -г ■ <: : - ■ ■ ■ '.""""'" '• '• ' Таблица 13

\ Морфометрвя фолликулов щитовидки трапегенных •

. Группа \ ■ Показатели Опыт Контроль Опыт в %% к

- -■' . .-■ ■■ >' ' М+т-- М+т, 1>=4 - - контролю

Первый тип Площадь, (тыс. ц1) 42,0±б,7 ., 38,5±5,4 ... 9,1

mMTI/hGRF, Периметр, (д) 7б5,7±57,2 72М±58Д

(1=3 Диаметр,(ц) 251,3±22,7 231 ¿±19,6 8,7

Второй тип : Площадь, (тыс. 31,3±11,5 - 36,5+5,4 -18,7

WAP/hGH, Периметр, { ц ) 644,7±113,7 721,3*38,2 -10,6

n=3 'V Диаметр, ( ц ) 204,0±35Д 23!,3±19,б -11,8

Третий тип ' Площадь, (тыс. ц3) 29,8± 13,01 : 38,5±5,4 ♦22,6 ■

WAP/bGH + Периметр, ( ц ) 607±165,5' 7213±53Д -И,9

mMTl/hGRF, n-2 Диаметр, (ц) 199 5±47,4 231,3±19,б -13,8

- У свиней трансгенов первого типа (тМТ1/Ь011Г) площадь, периметр н диаметр фолликулов выше контроля на 9,1; 6,2 и 8,7 % соответственно, а у трансгенов второго и третьего типов отмечено обратное соотношение, что соответствует установленным ранее особенностям обмена веществ.

' ■ ■ ; ,..,.'.■,■ ■ л." ,'-■-..■■'"'. Таблица 14

Морфомстрия мышечных- волокон траксгсиных свиней * ".':""" .'■■■-■■ в сравнении с контрольными (мкч). *

Группа - : Показатели - ; Опыт Контроль Опыте %% к

' М+т - М+тп, ir=4 контролю

Первый тип - , Длиннейшая - 75,8±2,8 77,8 ±2,1 -2,6 . -

тмл/ьвю, . мышца спины -

п-3 Четырехглавая . - 77,1 ±5,2 57,6±7,5 ' 33,9

мышца бедра .. ...

Второй тип ■,-:■■: Длиннейшая 74,518,9 77,8*2,1

ШАРЖШ, мышца спины

п=3 Четырехглавая 62,1 ±7^ ; 57,6±7,3 , 7.8

мышца бедра -V-

Третий тип Длиннейшая 76,0±17,1 77,8±2Д >

\улрлан +' мышца спины

тамп/ьакр. Четырехглавая ■.'■'■" <1,7±103 57,б±7,5

п=2 мышца бедра

; В результате .. полученных данных,. приведенных в : таблице - 14, ■ морфометрического анализа мышечной ткани было установлено, что диаметр . . 7 ^ волокон. четырехглавой мышцыбеяра у трансгенных'свиней первого ¿типа / " , .(п»МТ1/ЬСКР) превышает таковой, контрольных животных на 33,9 У». : V

; У животных второго и■ третьего типов 'превышение.диаметра было незначительным,- По диаметру мышечных волокон длиннейшей мышцы спины • среди опытных и контрольной групп различия были также небольшими., ";. ; ■ ■ Корреляционный анализ.:' . ^: ■; > • ...",

^ - . Для оценки характера, шшяния соматотрошща ^ на биологические , и .' - ^ хозяйственно-ценные^ признаки животных- было г. целесообразно; изучить' 'V ;: достоверные' корреляционные ' связи * уровня ' соматотропика' с другими ^ количественными признаками животных (^Таблица15). При этом в расчетбыла Ч взята вся популяция трансгенных и контрольныхживотных. ' . ч V ¡: ;

Таблица 15 :

■■*. ■ Корреляция между уровнем соматотрогпша ■ и рядом физиологических показателей грансгснных свиней.

№п\п- • Показатели - ■ '. г М

1. ■ альбумины " ■ ;' ~'■ 0,67 0.95

2. Т-гдобулины 1 ... •' ■*-' 0,92 • 0,999 -

3. тироксин ■ ■"■ ■ ■ ■ ■ » .- 0,63 0,93

4. антитела к протек» ' . 0,65 - • 0.95

5. аититсла к клебсиелле ■ - 0,93 0,999 ■ ■

6. антитела к сальмонелле" 0,78 • - 0,99 = -

7- антитела к эшерихии -------— -- ----*0,44 г--.- — "/л '

8. трийодтиронин 0,82 - 0.95 -

9. триглипериды *■■■■'-'■ —------- - - 0.83 "" ■ 0,95

10. АЛТ ■ - ■ • - ■ • 0,74 0.95 • -•

11. вес почек • . • ••. ' 0,92 0,999 <•

12. , весселеэешш :-■ V. > - 0,94 ...... 0,95 ^

Г"

! . . . Таким- образом ' установлена' четкая- положительная статистически; достоверная корреляционная связь ' между ; уровнем г.. оомзтотропина и " важнейшими: показателями обмена' веществ альбуминами,; у-глобулияами, | тироксином, трийодтяронином, .триглицеридами, ' АЛТ, уровнем антител к. . таким возбудителям болезней как протей, клебсиелла, сальмонелла, эшерихия, "весом почек и селезенки. ."V- - V ' . ' . . ■ . .'. : * '"■;. - / I;

V.;.-./..гз ■.;■ л;"':/.'.

V."Установлено,чго в результате транегенеза существенно изменился не. только уровень соматогропина, в результате экспрессии введенных в геном-генных конструкций, изменяются и сложившиеся корреляционные связи в организме.;'■ _; ■ ■* ■ ■'-:.'.'.-.■..;.'■..■■■;■■

Табтяф 16

Сравнительные характеристики корреляций между биохимическими

показателями трансгенных и контрольных животных ...

Показатели Транмекы , Контроль '

Креатннин - креатн якиваза -0,64 +0,58

Общий белок - мочевина -0,46 -0,83

Глюкоза - инсулин +0,43 - -0,13

Глюкоза - трнглицерилы -0,66 -0,99

ACT - общий белок +0,50 +0,50

АЛТ - общий белок „ ■ - +0,51 +0,21

Тироксин - мочевина -0,66 : -0,78

Тироксин - инсулин ■ -039 +0,02

Амилаза - глюкоза +0,03 +0^2

Трийодтиронкн - тироксин +0,10 -0,76

Лактатдегидрокиназа • холестерин -0,87 . +0,33

Кортизол - мочевина +0,01 +0,88

Лактатдегидроккшза - молочная кислота +0,39 -0,07

' Из тринадцати пар признаков, представленных в таблице 16, в шести парах разница а корреляции характеризовалась обратным знаком. Так если корреляция между креатннином н креатинкиназой у трансгенов была равна -0,64, то в контроле +0,58; между глюкозой и инсулином соответственно +0,49 и . -0,13. Там где знак коэфициента корреляции был одинаковым в большинстве случаев величина корреляции была существенно меньшей у трансгенных животных в сравнении с контролем. Так, например, корреляция между общим белком и мочевиной у трансгенов была равна -0,46, а у контроля -0,83; между глюкозой и триглицеридами соответственно -0,66 и -0,99; между амилазой и глюкозой +0,03 и +0,52 и т.д.

Были изучены коррелятивные связи н некоторых других признаков трелегенных животных и их аналогов.

Таким образом, становится очевидным, что: интеграция в геном конструкций еомагготропинового цикла приводит не только к изменению ряда

фенотипических ' признаков, . но одновременно существенно изменяет направление н величину многих корреляций в организме животных, - . -

Трансгенные живопше характеризутотся перестройкой сложившихся коррелятивных связей, которые несомненно оказывают влияние на прцессы развития животных. ,

Все это свидетельствует о том что интеграция и последующая экспрессия генов соматогропинового цикла существенным образом меняет характер обмена веществ животных, затрагивает величину важнейших биохимических факторов. Разумеется сейчас еще трудно определить значение каждого из этих' факторов для развития хозяйственно-ценных признаков, это будет предметом дальнейших исследований в этом направлении. • ; "

Л*/../ "1: 4. ВЫВОДЫ /-;: V>.'

; 1. Животные-траксгены изучаемых трех типов характеризуются несколько более высокими темпами роста, особенно в более поздние стадии ■' развития. .. ■ ■"■""-, '"„'А,.' ' *.., ■

. 2. Отмечено отрицательное влияние вакцинации на темпы - роста животных, при этом реакция трансгенных особей была существенно слабее. \ 3. Отмечена тенденция к повышенной переваримости протеина и жира у трансгенных животных.

_ 4. У трансгенных животных первого типа отмечен более высокий уровень отложения белка и пониженный уровень отложения жира в сравнении с контролем И другими типами трансгенов.

5. В сыворотке крови трансгевов отмечен более высокий уровень общего белка, альбуминов, фосфора и амилазы и повышенная активность ACT.

. 6. Трансгенез повлек за собой существенные изменения гормонального статуса организма, в среднем содержание соматотропина у трансгенов в 3,1 раза выше контроля, уровень кортизола ниже в 1,95 раза^ несколько повышен уровень тироксина и снижен уровень инсулина. : ,".-. г':'-'. "■

7. У трансгенных животных повышено содержание Т и В лимфоцитов. : Вакцинация свиней к Протею, Клебсиелле, Сальмонелле и Эшерихии показали, что уровень соответствующих антител превосходит контроль в несколько раз. Все это свидетельствует о более эффективных механизмах защиты от болезней у трансгенных животных. . ~. " ":

8. Трансгенные животные отличаются от контрольных по ряду признаков мясной продуктивности. Они характеризуются большим убойным выходом.

Трансгены с геном рилизинг-фактора гормона роста (первый тип) характеризуются большим удельным весом мяса и меньшим жира в туше, меньшим содержанием внутреннего жира. Животные второго и третьего типов характеризуются большим содержанием жира в организме. . ,

■ 9. В результате изучения гистологии мышечной ткани было установлено, что диаметр мышечного волокна в длиннейшей мышце спины не имеет различий у трансгенных и контрольных животных. В четырехглавой мышце бедра был отмечен больший средний диаметр волокон (па 33,9 %) у трансгенов ' первого типа.: . '

10. Отмечены определенные различия в массе внутренних органов.. Характерным для всех типов трансгенов является значительно большая масса матки с яичниками свинок.

11. Установлены определенные различия в гистоструктуре щитовидной железы. У трансгенов первого типа площадь, периметр и диаметр фолликулов выше контроля, а у трансгенов второго и третьего типов отмечено обратное соотношение, что соответствует установленным ранее особенностям обмена веществ.

12. Корреляционный анализ ряда морфологических и физиологических параметров показал, что трансгекез вызвал существенные изменения сложившихся в' организме корреляций, что расширяет сферу воздействия интегрированной генной конструкции на многие фенотнпическне признаки.

ПРЕДЛОЖЕНИЕ

Установленное влияние интегрированных чужеродных генов на динамику роста, отложение в теле белка, на вес сала,. мяса, костей - н внутреннего жира и устойчивость - к острым кишечным заболеваниям рекомендуем, изучить на большем поголовье животных и при получении подтверждающих результатов предлагается использование трансгенных свиней по генным конструкциям тМТШОЯР и ШАРЛЮН в селекционных программах свиноводческих хозяйств в качестве исходных животных для создания сшггетических линий свинсй. -

26 .

Список работ, опубликованных по теме диссертации: ' - -

- 1,ШатаЙло В.Н.' Мясная продуктивность и качество туш-свиней, траксгенных по МТ1-Ъ<ЗЯР - гену, Ч/АРЬОН - гену и но обоим генам // Вопросы интенсификации животноводства. Материалы 48 • научной конференции. п.Дуброяицы,Московская область: 1999.С. 167-173.: *

' - 2. Эркст Л.К.," Лисицын А.Б., Татулов Ю.В., Шатаило ВЛ., Чабан ИЛ1. Генно-инженерная селекция свиней // Мясная индустрия - 1999. — № 3.- С. 1114

'.'г V

Издательство РУ1Д ЭБГЖ 142132, Московская обл.. Подольский р-н, л. Дубровины Тел. (8 - 27) «5-14-24, (8 - 27) 65-14-07

Лицензия ЛР16 021248 от 21.12,97

Сдано в набор 24.05.200t. Подписано в печать 24.05.2001 _Заказ Л? 19. Тираж 80 эта._

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шатайло, Вячеслав Николаевич

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Генноинженерные технологии - новый путь в селекции сельскохозяйственных животных Ю

1.2. История получения трансгенных животных

1.3. Методы получения трансгенных животных

1.4. Разведение трансгенных животных

1.5. Идентификация трансгенности и определение экспрессии рекомбинантных генных конструкций

1.6. Некоторые особенности иммунной реактивности свиней

1.7. Гормон роста в нейрогипофизарной системе организма

1.7.1. Общая характеристика гормона роста

1.7.2. Влияние гормона роста на обмен веществ в организме

1.8. Характеристика животных, трансгенных по генам mMTl/hGRF и WAP/hGH

1.8.1. Особенности фенотипа свиней, трансгенных по гену mMTl-hGRF

1.8.2. Экспрессия чужеродных генов в молочной железе трансгенных животных (WAP/hGH)

Введение Диссертация по биологии, на тему "Продуктивные и физиолого-биохимические качества трансгенных свиней"

Возникновение и бурное развитие биотехнологии и ее основных ветвей клеточной и генной инженерии создает возможности более быстрого и радикального воздействия на организм животных, расширения и ускорения их селекции. Основной целью работ по генной инженерии в животноводстве является создание и изучение уникальных племенных животных с измененной и устойчивой наследственностью, используемых в больших популяциях для их совершенствования, повышения продуктивности и качества продукции.

Наступает совершенно новый этап в развитии животноводства, когда традиционный ассортимент продуктов животноводства будет постепенно расширятся за счет продуктов биотехнологии.

Включение чужеродных последовательностей ДНК в геном организма — реципиента с последующей устойчивой их наследуемостью в ряде поколений обеспечивает получение так называемых трансгенных животных (122). Включившись в геном данного организма, такие чужеродные последовательности, называемые трансгенами, устойчиво наследуются в ряде поколений. Весьма важное значение имеет тот факт, что трансгены часто экспресируются и при этом вызывают изменения в системе тканевой специфичности, физиологических реакциях, а иногда и во всей программе развития организма (102).

В последнее время развернут широкий фронт исследований по созданию трансгенных животных с конечной целью повышения продуктивности, использования их как продуцентов биологически-активных веществ, получения трансгенных животных с повышенной устойчивостью к инфекционным заболеваниям, применения этих животных в качестве биомоделей в медицине, а также для ксенотрансплантации органов и тканей (71, 124)

Многочисленные успешные работы Палмиттера, Гордона, Брема и ряда других исследователей по получению трансгенных животных, как лабораторных, так и сельскохозяйственных, продемонстрировали широчайшие возможности использования метода генетической трансформации генома организма (94, 118,100).

Опыты по получению и изучению трансгенных животных проводятся во многих странах мира. Но несмотря на многочисленность и многообразие этих исследований, многие факторы, определяющие эффективность экспрессии чужеродных генов в клетках целостного организма остаются недостаточно изученными. В связи с этим, изучение экспрессии введенных генов и изучение их взаимосвязи с физиолого-морфологическими признаками у трансгенных свиней является актуальной задачей как в биотехнологии, так и селекции сельскохозяйственных животных.

Совместными усилиями российско-германских ученых (Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства, Россия; Институт животноводства и генетики, ветеринарно-медицинский университет, г. Вена) были получены свиньи, трансгенные по рекомбинантным генным конструкциям WAP/hGH, mMTl/hGRF и mMTl/hGRF + WAP/hGH. Рекомбинантная генная конструкция mMTl/hGRF содержит структурную часть гена релизинг фактора гормона роста человека (hGRF) и металлотионеиновый промотор 1 мыши (mMTl). Конструкция WAP/hGH состоит из структурной части гена гормона роста человека (human growth hormon, hGH) и промотора гена кислого белка сыворотки молока мышей (whey acidic protein, WAP) длиной 2,6 kb.

Получение этих животных выдвинуло на первый план необходимость изучения физиолого-биохимических процессов и хозяйственно-ценных признаков и их особенностей у вышеприведенных трансгенных свиней четвертого возрастного поколения.

Цель и задачи исследований:

Целью исследований было изучение физиолого-биохимических процессов и выявление их особенностей в организме свиней, с интегрированными в геном рекомбинантными генными конструкциями WAP/hGH, mMTl/hGRF и mMTl/hGRF + WAP/hGH четвертого возрастного поколения.

Для достижения указанной цели, были поставлены следующие задачи:

1) определить динамику среднесуточных привесов при откорме свиней с 50 до 160 кг живой массы;

2) изучить переваримость основных питательных веществ, обмен азота, углерода и энергии при живой массе 100 кг;

3) вывить особенности биохимических процессов в организме трансгенных свиней;

4) изучить особенности иммунологического ответа организма трансгенных свиней на раздражение возбудителями острых кишечных заболеваний.

5) определить мясо-сальную продуктивность при убое свиней в 160 -170 кг живой массы, морфологический состав туш, развитие внутренних органов;

6) изучить цито-морфологические особенности органов и тканей трансгенных свиней;

7) выявить корреляционную зависимость высокого уровня соматотропина в крови с другими физиологическими и хозяйственно-полезными признаками.

Научная новизна работы

Впервые выявлены особенности физиолого-биохимических процессов, мясо-сальной продуктивности и качества туш, цито-морфологических показателей органов и тканей, иммунного ответа при вакцинации бактериальной вакциной, в организме свиней, с интегрированными в геном конструкциями WAP/hGH и mMTl/hGRF + WAP/hGH у четвертого возрастного поколения.

Проведен анализ корреляционной зависимости высокого уровня соматотропина в крови трансгенных свиней с другими физиологическими и хозяйственно-полезными признаками.

Практическая значимость работы

1. Определены биологические особенности развития трансгенных свиней.

2. Установлены особенности гематологических показателей трансгенных свиней.

3. Изучены особенности иммунологического ответа организма трансгенных свиней на раздражение возбудителями острых кишечных заболеваний.

4. Определена мясо-сальная продуктивность при убое свиней в 160 -170 кг живой массы, морфологический состав туш, развитие внутренних органов.

5. Изучены цито-морфологические особенности органов и тканей трансгенных свиней.

6. Выявлена корреляционная зависимость высокого уровня соматотропина в крови с другими физиологическими и хозяйственно-полезными признаками.

Положения, выносимые на защиту

1. Интегрированные в геном свиней, изученные рекомбинантные конструкции, эффективно экспрессируют, что проявляется по динамике увеличения собственного гормона роста животных, в сравнении с этим показателем животных-сверстников.

2. Секреция собственного гормона роста у трансгенных свиней способствовала повышению уровня среднесуточных привесов и лучшему иммунному ответу при вакцинации.

3. У трансгенных животных по рекомбинантной генной конструкции WAP/hGH и рекомбинантной генной конструкции mMTl/hGRF происходит улучшение мясо-сальных качеств.

4. У дитрансгенных животных происходит ухудшение мясо-сальных качеств в сравнении этими показателями животных-сверстников.

5. Трансгенные свиньи по рекомбинантной генной конструкции WAP/hGH и рекомбинантной генной конструкции mMTl/hGRF являются желанными для целей селекции, а трансгенные по обеим генным конструкциям одновременно не пригодны для селекции. 9

Апробация работы

Материалы диссертации были представлены на заседании отдела биотехнологии ВИЖа и на 48-й конференции аспирантов и молодых ученых "Вопросы интенсификации животноводства", Дубровицы, 1999.

По материалам диссертации опубликовано две работы.

Структура и объем работы:

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы. Диссертация изложена на 163 страницах машинописного текста, включает 50 таблиц, 5 рисунков, 5 фотографий. Список литературы включает 125 источников, в том числе 65 на иностранных языках.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шатайло, Вячеслав Николаевич, п. Дубровицы, Московской обл.

1. Аршавский И. А. /Биология периода новорожденности у млекопитающих. В кн.: Биологические основы периода новорожденности.// Москва, Наука, 1968, с.7-16.

2. Балаболкин М.И. Секреция гормона роста в норме и патологии. М.:Медицина, 1978.- 173 с.

3. Балаболкин М.И. Эндокринология. М.:Медицина, 1989.- 416 с.

4. Берман В.М. /Возрастная реактивность в инфекционных процессах. В кн.: Вопросы возрастной реактивности в инфекционных и иммунологических процессах.// Л., Медицина, 1955, с.5-12.

5. Богатырев А.Н., Эрнст Л.К. Генная инженерия сельскохозяйственных животных мощный рычаг селекции XXI века // Генноинженерные сельскохозяйственные животные /Сб. науч. тр. - 1995.- Вып.1.- С. 3-13.

6. Брем Г., Зиновьева Н.А., Эрнст Л.К. Генные формы новый путь производства биологически активных протеинов трансгенными животными // Сельскохозяйственная биология.- 1993.- №.6 - С.3-27.

7. Брем Г., Эрнст Л.К., Андропов Л.А. и др. Трансгенные свиньи (mMTl-hGRF): оценка качества туш и химического состава мяса при убое животных // Генноинженерные сельскохозяйственные животные /Сб. науч. тр. 1995.-Вып.1.-С. 26-33.

8. Брондз Б.Д. /Иммунологическое распознавание и реакции клеточного иммунитета.// Успехи современной биологии, 1972, т.73, вып.1, с.42-58.

9. Газарян К. Трансгенные животные: перспективы использования животноводстве // Сельскохозяйственная биология.- 1988.- №.2.- С.31-39.

10. Герберт У.Д. /Ветеринарная иммунология.//М.: Колос, 1974.

11. Гольдман И.Л., Башкеев Е.Д., Гоголевский П.А. Прогрессивная технология получения трансгенных овец // Докл. РСХА 1992.- №.9-10.-С.25-30.

12. Гольдман И.Л., Разин С.В., Эрнст Л.К. и др. Молекулярно-биологические аспекты проблемы позиционно-независимой экспрессии чужеродных генов в клетках трансгенных животных // Биотехнология.1994.-№.2.- С.3-8.

13. Гольдман И.Л., Эрнст Л.К., Гоголевский П. и др. Теоретические вопросы получения трансгенных животных. Эксперименты на кроликах // Генноинженерные сельскохозяйственные животные / Сб. науч. тр. Вып.1.1995.- С.93-102.

14. ГОСТ 19496-93. Мясо. Метод гистологического анализа. М., "Стандарты", 1993.

15. Григорян Г.Ш. Биотехнологические основы повышения производства говядины, свинины и сокращения потерь в процессе переработки. ВНИИплем. М., 1993.- 239 с.

16. Дворянчиков Г.А., Иванов Л.Ю., Рудько Н.П. и др. Идентификация и анализ интегрированного в геном животных трансгена методом ПЦР-амплификации и с помощью блот-гибридизации // Сельскохозяйственная биология.- 1993.- №.4.- С.39-46.

17. Дозорцев Д.И., Сорокин А.В., Курышев В.Ю., Перевозчиков А.П. и др. /Трансгенные кролики как модель некоторых форм атеросклероза.// Тез.Докл. Всесоюзн. Конф.: "Новые направления биотехнологии", Пущино, 1990.

18. Доклад научной группы ВОЗ №448. Факторы, регулирующие иммунный ответ.// Женева, 1971.

19. Дразнин Н.М., Мережинский М.Ф. Основы эндокринологии / Минск. — 1963. 420 с. 1

20. Држевицкая И. А. Основы физиологии обмена веществ и эндокринной системы// М.: Высшая школа, 1983. — 272 с.

21. Дыбан А.П., Городецкая С.И. Трансгенные млекопитающие: изучение фенотипических эффектов гормона роста человека, индуцированного животным // Биотехнология.- 1987.- №.3.- С.352-357.

22. Карпуть И.М. /Возрастная реактивность кроветворно лимфоидных органов у вакцинированных и больных паратифом поросят и влияние на нее антибиотиков.// Тр. 5 Всесоюз. Конф. по патологической анатомии с/х жив., 1973, с.268-271.

23. Карпуть И.М. /Динамика Т и В - лимфоцитов у свиней в онтогенезе.//Ветеринария, 1977, №4.

24. Карпуть И.М. /Кроветворение и иммунологическая реактивность у свиней.//Ветеринария, 1975, №2.

25. Кудрявцев А.А. Методы исследования газового и энергетического обмена с.-х. животных. М.:Колос, 1974,- 405 с.

26. Кудрявцев А.А., Кудрявцева Л.А. Клиническая гематология животных. М.:Колос, 1974.- 405 с.

27. Лашас Л.В., Лашене Д.Г. Соматотропин человека. Вильнюс:Мокслас, 1981.- 143 с.

28. Медведев С.Ю., Козикова Л.В., Бавин В.Г., Яковлев А.Ф. Рост и развитие трансгенных кроликов и свиней с перенесенным геном релизинг-фактора гормона роста человека // Сельскохозяйственная биология.- 1995.-№.6.- С.43-48.

29. Меркурьева Е.К. Биометрия в селекции и генетике с.-х. животных. М.Колос, 1970.-424 с.

30. Мертвецов Н.П. Гормональная регуляция экспрессии генов. М.:Наука, 1986,- 207 с.

31. Науменко П.А., Владимиров В.Л., Фридберг Р.В., Школьник Г.С. Биохимические показатели крови, органов и тканей у трансгенных (МТ1-hGRF) и интактных свиней // Генноинженерные сельскохозяйственные животные /Сб. науч. тр. 1995.- Вып.1.- С. 54-57.

32. Ноздрин Н.Т., Мысик А.Т. Обмен веществ и энергии у свиней. М.Колос, 1975.- 240 с.

33. Петров Р.В. /Иммунология и иммуногенетика.// М.: Медицина,

34. Петров Р.В. /Иммунология.// М.: Медицина, 1978.

35. Попов А.Н., Зиновьева Н.А., Брем Г. Экспресс- метод тестирования новорожденных поросят на интеграцию в геном чужеродных генов // Сельскохозяйственная биология.- 1995.- №.6.- С. 136-138.

36. Рядчиков В., Солодухина Л. Соколов Н. и др. Трансгенные свиньи с геном mTl/hGRP и перспективы их использования в селекции // Генноинженерные сельскохозяйственные животные /Сб. науч. тр. 1995.-Вып.1.- С. 73-84.

37. Сиротинин Н.Н. /Реактивность и резистентность организма. Многотомное руководство по патологической физиологии.// Москва, Медицина, 1966, т. 1.

38. Татулов Ю.В., Борткевич Л.Л. Транспортировка и стресс свиней // Обзорная информация. М., АгроНИИТЭИмясомолпром.- 1990.- 32 с.

39. Татулов Ю.В., Ивашов В.И., Немчинова И.П. Особенности качества свинины, производимой по интенсивной технологии выращивания и откорма // XXXVI Международный конгресс по проблемам науки и технологии мяса и мясопродуктов.- Куба, Гавана.- 1990.

40. Томмэ М.Ф. Методика взятия образцов корма для химического анализа. М., 1969.- 34 с.

41. Томмэ М.Ф. Методика изучения убойных выходов и мяса. М., 1956.- 16 с.

42. Томмэ М.Ф. Методика определения переваримости кормов и рационов. М., 1961.- С.245-250.

43. Учитель И .Я. /Макрофаги в иммунитете.// М.: Медицина, 1978.

44. Фаворская Ю.Н., Крымский Л.Д., Нестойко Г.В. / Поверхностная структура макрофагов и лимфоцитов при их взаимодействиях.// Архив патологии, 1975, № 8, с.33-39.

45. Федоров Н.А., Суханов Ю.С., Асади Мобархан А.Х., Артемьев М.И. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) / Методическое пособие.- М., 1996,-С.ЗЗ.

46. Фриденштейн А.Я., Чертков И.Л. /Клеточные основы иммунитета.// М.: Медицина, 1969.

47. Эрнст Л.К., Брем Г., Махаев Е.А. Результаты выращивания и изучения обмена веществ трансгенных по гену релизинг-фактора гормона роста свиней 1 поколения // Генноинженерные сельскохозяйственные животные /Сб. науч. тр. 1995.- Вып.1.- С. 48-57.

48. Эрнст Л.К., Гольдман И.Л., Кадулин С.Г. Генная инженерия в животноводстве: трансгенные животные, кормовые растения, микроорганизмы рубца//Биотехнология,- 1993.- №.5,- С.2-14.

49. Эрнст Л.К., Гольдман И.Л., Семенова В.А. Фенотипический эффект трансгенности по гену гормона роста крупного рогатого скота у кроликов // Доклады ВАСХНИЛ.- 1990.- №.6.- С.32-36.

50. Agellon L.B., Davies S.L., Chen Т.Т., Powers D.A. Structure of fish (rainbow trout) growth hormone gene and it s evolutionary implications // Proc.Nat.Acad.Sci. USA., 1988.

51. Ausubel F.M., Brent R., Kingston R.E. et.al. Current protocols in molecular biology // Join Wiley and Sons.- New York.- 1987.

52. Baker A.R., Hellingshead P.G., et al. Osteoblastspecific expression of growth hormone stimulates bow growth in transgenic mise// Moll. And Cell. Biol. 1992.-V. 12.-P. 5541-5547.

53. Bayna Е.М., Rosen J.M./ Tissue-specific, high level expression of the rut whey acidic protein gene in transgenic mice// Nucleic Acids Res.- 1990.-V. 18.- P. 2977-2985.

54. Bennis R.M. /Cellular immunology in the pig.// Proc. Roy. Soc. Med., 1963, v.66, №12, p.l 155-1160.

55. Brameld J.M., Weller P.A., et al. Hormonal control of insulin-like growth factor-I and growth hormone receptor mRNA expression by poreine hepatocytes in culture// J. Endocrinol. 1995. - 146. - P. 239-245.

56. Brem G. Interifance and tissue-specific expression of transgenes in rabbits and pigs // Mol. Deprod. and. Dev.- 1993.- 36.- N.2.- P.242-244.

57. Brem G. Production of transgenic mice, rabit and pigs by microinjection into pronuclei // Zuchtyniene.- 1995.- V.20.- N.5.- P.134-139.

58. Brem G. Transgene Nutztiere // Zuchtungkunde.- 1988.- V.60.- N.3.-P.248-262.

59. Brem G. Transgenic animals. In Biotechnology. 1993a. A Multy -Volume Comprehensive Treatise. Edited by H.J.Rehm and G.Reed in cooperation with A.Puhler and. P.Stadtler. VCH. Weinhein,New York, Basel, Cambridge. P.745-832.

60. Brem G., Brening В., Salamons B. et.al. Unerwartets transgene Expression eines gesaengespezifischen Wachstumshormon Genkonstruktes in den Bergmann-Gliazellen der Maus // Tiwrarztl. Prax.- 1991.- V.19.- P. 1-6.

61. Cantor H., Simpson E. /Regulation of the immune response by subclasses T lymphocytes.// Europ.J. Immunol., 1975, v.5, №4, p.330-336.

62. Church R.B. Embryo manipulation and gene transfer in domestic animal. Trends Biotechnol. 5.- 1987.- P.13-19.

63. Church R.B./ Possibilities for genetic engineering of animals // Inf. J. Anim. Sci.- 1989.-V.4.-H.1-6.

64. Clark A.J., Simons P. et al./ Pharmaceuticals from transgenic livestok// Trends-Biotechnol. 5. 1987 - P. 20-24.

65. Eriksen E.F., Kassem M., et al. Growth hormone, insulin-like growth factors and bone remodulling// Braz. J. Med. And Biol. Res. 1996. - 29. - №6. -P.525-534.

66. Erlich H.A. PCR technology: principles and applications for DNA ampflication. Stocton Press, New York. 1989.

67. Eva D., Hans Т., Hans E., et al. Growth hormone signalng in hepatocytes// (Abstr.) Keystone Symp. "Adipose Cell". Park City. - Utah. - Jan. 14-21, 1994. - Suppl. 18A. - 152p.

68. Fuh G., Cunningham B.C., et al. Rational design of potent antogonists to the human growth hormone receptor// Science. 1992. - V.256. - N5064. - P. 16771680.

69. Gannon F., Powell R. et al./ Transgenic farm animals// J. Biotechnol. 1990.- V.16. P. 155-170.

70. Glosser A., Doetschman Т., Korn R. et.al. Transgenessis by means of blastocyst derived embrionic stem cell lines // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986.-V.83.- P.9065-9069.

71. Good R.A. et al. /The role of the thimus in development of immunologic capacity in rabbits and mice.// Exp. Med., 1962, v.l 16, №5, p.773-781.

72. Gordon J., Ruddle F. Integration and stable germ line transmission of genes injected into mouse pronuclei // Scince.- 1981.- V.214.- P.1244-1246.

73. Gordon J.W., Lee E., Vitale J.A. et.al. Production of human tissue plasminogen activator in transgenic mouse milk // Biotechnology 5.- 1987.-P.l 183-1187.

74. Grumet F.C., McDevitt H.O. / Nature of the represponding organism. // Contemp. Topics Immunobiol., 1973, v.2, p.63-76.

75. Hammer R.E., Pursel V., Rexroad C. et.al. Production of transgenic rabbits sheep and pigs by microinjection //Nature.- 1985.- V.315.- P.680-683.

76. Hammerling G.J., McDevitt H.O. /Antigen binding T and В -lymphocytes.// Immunol., 1974, v.l 12, №5, p. 1726-1733.

77. Heninghausen L.G. / The mammary gland as a bioreactor : production of foreign proteins in milk // Protein Expressiom and Purification. -1990. V. 1. - P. 3-8.

78. Heninghausen L.G. and Sippel A.E. / Mouse whey acidic protein is a novel member of the family of "four-disulfide core" proteins // Nucleic Acids Res. 10.- 1982.-P. 2677-2684.

79. Hettiarachchi M., Watkinson A., et al. Growth hormone-induced insulin resistance and its relationship to lipid availability in the rat // Diabetes. 1996. -45.-N4.-P.415-421.

80. Jaroskova L et al. /Immunoglobulin determinants on lymphocytes in germfree piglets.//Eur. J. Immunol., 1973, v.3,№12, p.818-824.

81. Kostyo J.L. Rapid effect of growht hormone on amino acid transport and protein synthesis // Ann. N.Y. Acad.Sci.- V.148.- P.284-312.

82. Kostyo L.J., Nutting D.K. Growth hormone and protein metabolism. In: Handbook of physiology.- 1979.- P. 187-210.

83. Lee K. -F., DeMayo F.J. et. al./ Tissue-specific expression of the rut |3-casein gene in transgenic mice//Nucleic Acids Res, 16. 1988. - P. 1037-1041.

84. Mannmo R.J. and Gould-Fogerite S. Liposome mediated gene transfer // Bio Technigues 6.- 1988.- P.682-690.

85. Mansour S.L. Gene targeting in mouse embrionic stem cells: introduction of specific alteration into the mammalian genome // Gene-Anal. Tech. 7,- 1990.- P.219-227.

86. Nazario E. Petits on grands: Une histoire d'hormone? // Rev. Palais decouv.- 1996.- V.24.- N.237.- P.53-60.lOl.Okada S., Kopchich J.J. Anti-diabetogenic effect of growth hormone antagonists // J. Cell. Biochem. 1994. - (supl. 18a). - P.171-178.

87. Palmiter R.D., Brinster R.L. Germ-line transformation of mice // Ann. Rev. Genet. 1986.- V.20.- P.465-499.

88. Palmiter R.D., Brinster R.L., Hammer R.E. et.al. Dramatic growth of mice that develop from eggs microinjected with metallothionein-growth hormone fusion genes //Nature.- 1982.- V.306.- P.611-615.

89. Palmiter R.D., Norstedt R.E., Gelinas R.E. et.al. Metallothionein-human GH fusion genes stimulate growt of mice // Science.- 1983.- V.222.- P.809-814.

90. Persuy M.A., Stinnakre M.G. et. al. / High expression of the carpine (3-casein gene in transgenic mice//Eur. J. Biochem. 205. 1992.- P. 887-893.

91. Pursel V.G. et.al. II-th International Congress on Animal Reproduction and Artificial Insemination, Dublin, 1988.

92. Pursel V.G., Bolt D.J., Mileer K. Expression and performance in transgenic pigs // J.Reprod. Fert. Suppl.- 1990.- V.40.- P.235-245.

93. Pursel V.G., Pincert C., Mileer K. et.al. Genetic engineering of livestok // Science.- 1989.- V.244.- P.1281-1288.

94. Pursel V.G., Pinkert C., Rexroad C., Mileer K. Animal growth regulation // Et by D.K.Campion, C.J.Hausman, K.J.Martin. New York.- London. 1989.

95. Pursel V.G., Rexroad С. Status of research with transgenic farm animals // J.Anim.Sci.- 1993.- V.71.- P.10-19.

96. Pursel V.G., Rexroad C., Pincert C. et.al. Progress on gene transfer in animals // Vet.Immimol. Immunopathol.- 1987.- V. 17.- P.303-312.

97. Rexroad C.E. Transgenic technology in animal agriculture // Animal Biotechnology.- 1992.-V.3.-N.I.-P.l-13.

98. Rexroad C.E., Pursel V.G. Status of gene transfer in domestic animals // Proc. of 11th inter.congress on animal reproduction and artifical insemination. Dublin, 1988.-V.5.- P.28-35.

99. Saiki R.K., Gelfand D.N., Stoffel S. et.al. Primer-directed enzymatic ampflication of DNA with a thermostable DNA polymerase // Science, 239.1988,- P.439-491.

100. Saiki R.K., Scharf S., Faloona F. et.al. Enzymatic amplification of (3-globulin genomic seguenes and restriction site analysis for diagnosis of sockle cell anemia// Science, 230.- 1985,- P. 1350-1354.

101. Saiki R.K., Scharf S., Faloona F. et.al. Enzymatic amplification of b-globulin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia//Science.- 1985.-V.230.-P. 1350-1354.

102. Taussing M.J. /Т cell factor which can replace T cells in vivo.// Nature, 1974, v.248, №5445, p.234-236.

103. Tyrreil H.F., Brown A.C., Peynolds P.J. Effect of bovine somatotropin on metabolism of lactating dairy cows: energy and nitrogen utilization as determined by respiration calorimetry // J.Nutr. 1988.- V. 118.- N.8.- P.1024-1030.

104. Van Brunt J. / Molecular farming: transgenic animals as bioreactors // Bio/Technology. V.6. - 1988. - P. 1149-1154.

105. Vernon R.G. Influence of somatotropin on metabolism // Use Somatotropin Livestock -Prod. Semin. Brussels. 27 - 29 Sept. - 1988. - London. - 1989.-P. 31-50.163

106. Wall R.J., Pursel V.G. et. al. / High-level synthesis of a heterologous milk protein in the mammary glands of trancgtnic swine // Proc. Natl. Acad. Sci USA 88. 1991.-P. 1696-1700.

107. Wall R.J., Siedel G.E. Transgenic farm animals a criti- cal analysis // Theriogenology. - 1992. - V. 38. - P. 337-357.

108. Ward K.A. Nancarrow C.D. The genetic engineering of production traits in domestic animals // Experienta.- 1991.- V.47.- P.913-922.

109. Wilmut I., Archibald A.L., et.al./ Producnion pharmaceutical poteins in milk //Experientia.- 1991.- V.47. P.905-912.