Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сравнительная характеристика реакции непрямой гемагглютинации и иммуноферментного анализа на эхинококкозы в клинической практике и при сероэпидемиологических исследованиях. (С применением коммерческих диагностикунов)

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Сравнительная характеристика реакции непрямой гемагглютинации и иммуноферментного анализа на эхинококкозы в клинической практике и при сероэпидемиологических исследованиях. (С применением коммерческих диагностикунов)"

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ САНИТАРНОЭПИДЕМИОЛОГИЧЕС1СОГО НАДЗОРА

российской федерации

ИНСТИТУТ ЦЕДИШШСКОИ ПАРАЗИТОЛОГИИ И ТРОПИЧЕСКИ! МЕДИЦИНЫ имени Е.И.МАРЦИНОВСКОГО

Р Г Б од

На правах рукописи ' О OKI -Я^АРКОВА Татьяна Владимировна

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ И ИКМУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА НА ЭХИНОКОККОЗЫ В КЛИНИЧЕСКО* ПРАКТИКЕ И ПРИ СЕРОЭПИДЕ1ШОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ (с применением коммерческих диагностику»«»)

Специальность оз.00.19 - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА, 1994

Работа выполнена в Институте медицинской паразитологии и тропическое медицин« им.Е.И.Карциновского ГКСЭН РФ

Научные руководителя г доктор медицинских наук

В. И.ЗОРИХИНЛ

доктор медицинских наук Г.И.ПОДОПРИГОРЛ

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Э.X.ДАУГАЛИЕВА

доктор медицинских наук, старший научный сотрудник

В.Д.ЗАВОИКИН

Ведущая организация: Московская медицинская академия им.И.М.Сеченова

Защита диссертации состоится «ЛЬ /о _1994Г.

в /,£.часов на заседании диссертационного совета при Институте медицинской паразитологии и тропической медицины им.Е.И.Нарци-иовского. Адрес: 119433. г.Москва, ул.Малая Пироговская, 20.

С диссертацией мохно ознакомиться в библиотеке ИМПиТМ.

Автореферат разослан "_" 1994Г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета кандидат медицинских наук

А.А.Фролова

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы.

Эхинококкоэы относятся к числу параэитоэов. вызывающих тяжелую патологию у населения эндемичных территорий, и причиняющих значительный ущерб животноводству и звероводству. в связи с чем представляют весьма актуальную проблему здравоохранения и народного хозяйства.

На территории нашей страны эхинококкоэы имеют неравномерное распространение. Высокая заболеваемость однокамерным эхинококоэом отмечается во многих регионах России таких как Краснодарский и Ставропольский края, в Нижнем и Среднем Поволжье, в Башкирии, Татарии, Калмыкии, на Северном Кавказе, в Республике Саха (Якутии). в Чукотском автономном округе и других территориях Крайнего Севера и Дальнего Востока (в оленеводческих районах). Кроме того широкое распространение эти заболевания имеют и на территории бывших республик СССР: в республиках Закавказья, в Молдавии и некоторых районах Украины. Средней Азии и Казахстане. Это в значительной степени связано с интенсивным развитием овцеводства, которому способствуют климатические условия, обширность территорий, наличие кормовых баз и т.д. (Шакаров А.Г. с соавт.,1988: Акматов Б.А..1989; Горбунова Д.Е. с соавт..1989; Магдей И.В. с со-авт.,1989; Махтумова М.С. с соавт.,1989; и др.). Очаги многокамерного эхинококкоэа расположены на территории Дальнего Востока и Восточной Сибири, что, в первую очередь, предопределено развитыми охотничьим промыслом, обработкой пушнины, массовым сбором и заготовкой дакоросов (Иартыненко В.Б.. 1984; Яковлев П.Н. с соавт.,1987; Полосьмак Л.П. с соавт..1989; Чернышева Л.Г, с соавт..1989 и др.).

Проблема эхинококкозов на современном этапе приобретает особое значение в связи с опасностью ухудшения эпидемической и эпизоотической обстановки, обусловленной, главным образом, влиянием антропогенных Факторов. К числу последних относится приток населения во вновь осваиваемые районы, развитие животноводства и звероводства, акклиматизация и расселение животных - потенциальных хозяев многокамерного и однокамерного эхинококков, а также увеличения поголовья скота в частных хозяйствах и ослабление ветеринарного надзора за его подворным убоем.

Несмотря на успехи в борьбе с зхинококкозами, в большинстве случаев проводимые мероприятия не достигают значительного успеха иэ-эа недостаточных знаний по эпидемиологии и эпизоотологии этих параэитоэов, в частности, критериев выявления групп населения, подвергающихся повышенному риску инвазии, а также недостаточной отработанности тактики применения иммунологической диагностики с целью раннего выявления больных и оценки течения патологического процесса. Клиническая диагностика эхинококкозов. особенно на ранней (субклинической) стадии раз-вития паразита, представляет значительные трудности и осуществляется а основном иммунологическими методами с последующей Фиэикальной верификацией заболевания. Затруднена также и борьба с- этими гельминтозами, так как их распространение и уровень заболеваемости людей связаны в значительной степени с антропогенным влиянием на эти процессы, а также с бытовыми привычками и гигиеническими навыками населения эндемичных территорий.

В СССР ' с 1985 по 1990 гг. осуществлялась Всесоюзная отраслевая' программа С-16 "Разработать и внедрить эффективные методы диагностики, лечения и профилактики основных лдраэитарних болезней человека (опис-торхоа, лейшманиоэы. эхинококкоэи, малярия)", направленная, п тон чяс-

ле. на создание системы эпиднадзора эа эхинококкозами. Представленное исследование проводилось в ранкак этой программы. Ока включала в себя, среди прочих задач, раннее выявление и лечение больных, иммунологические методы дифференциальной диагностики эхинококковое могут оказать большую помошь в решении этих задач, поскольку они позволяют определять ранние (бессимптомные) Формы заболевания, заражаемость населения и. на основании заражаемости и выявления больных, определять группы лиц имеющих повышенный риск заражения эхинококкозами. В лаборатории иммунологии ИКПиТЫ в течение последних 15 лет разрабатывались методики приготовления днагностикумов и постановки реакции непрямой генагглюти-нации (РИГА) и иммуноФерментного анализа (ИФА). По этим разработкам с 1967 года Ставропольским НПО"Аллерген" освоен промышленный выпуск, ди-агностикума эритроцитарного сухого для РИГА, а с 1988 - тест-систем кммуноферментних для ИФА с антигеном эхинококка однокамерного (АГ E.g.) и с антигеном эхинококка многокамерного (АГ Е.т.). В связи с началом их широкого применения в лечебно-профилактических учреждениях возникла необходимость оценки информативности коммерческих днагностикумов для массового применения в клинической практике и для сероэпиде-миологии, чему и посвяаена эта работа.

Цель и задачи.

Целью настоящей работы явилась оценка сравнительной эффективности коммерческих диагностических препаратов для РИГА и ИФА в клинической практике и для сероэпидемиологических исследований.

Для достижения поставленной цели нами решались следующие задачи:

1. Изучить возможности оценки эпидемиологической ситуации в отношении эхинококковое на модельных территориях в очагах эхинококкозов разного типа: антропогенный очаг однокамерного зхинококкоза в Джамбул-ской области Казахстана и смешанный очаг однокамерного и многокамерного эхинококкозов в Республике Саха (Якутия);

2. Уточнить и оптимизировать тактику и схему применения иммуноди-агностических тестов при проведении массовых обследований населения а очага* эхинококкозов;

3. Определить иммунологические критерии выявления групп населения, подвергающихся повышенному риску заболевания зхинококкоэами;

4. Определить ценность изучаемых иммунодиагностических препаратов для определения возможности раннего выявления рецидива заболевания.

Научная новизна.

В результате проведенных исследований:

- Обоснована и уточнена схема применения иммунодиагностических тестов РИГА и ИФА с промышленными сериями диагностикумов для раннего активного выявления больных в очагах эхинококкозов и других эпидемиологических исследований:

- Предложено использование показателя величины иммунной прослойки населения, включающей в себя всех лиц с противозхинококковыми антителами в крови в эпидемиологически значимом титре, для оценки напряженности эпидемического процесса и эффективности профилактических мероприятия в синантропных очагах эхинококкозов:

- Установлена равная диагностическую эффективность коммерческих иммунодиагностических препаратов для РИГА и ИФА, для клинической дифференциальной диагностики эхинококкозов, а также для оценки эффективности оперативного лечения этих заболеваний и проведения сероэпидемио-

- s -

логических исследования

- Разработан микрометод РИГА с коммерческим диагностикумом.

Практическая значимость.

1. Уточнена и предложена к применение в лечебно-профилактических учреждениях схема и тактика проведения массовых иммунологических обследований в очагах эхинококкоэов с коммерческими диагностикумами.

2. Разработан микрометод РИГА и оценена его эффективность в сравнении с макровариантом и ИФА,

3. Разработаны иммунологические критерии для определения групп населения очагов, подвергающихся' повышенному риску заболевания эхино-коккозами. при применении коммерческих диагностикумов.

4. Показана высокая диагностическая эффективность и перспективность генно инженерных антигенных диагностикумов нового поколения (на примере коммерческого генно инженерного диагностического препарата для ИФА Em2plua производства швейцарской Фирмы "AFFINITY PRODUCTS").

Апробация работы.

Основные Фрагменты диссертации доложены на: 4-й Всесоюзной научно-практической конференции "Эпидемиологический надзор за эхинококко-эами" (Чимкент,1989): Всесоюзной школе-семинаре "фундаментальные и прикладные проблемы медицинской паразитологии" (Москва. 1990г.). Всесоюзной школе "Биология в медицине" (Ленинград, 1990г.). на V Объединенном съезде гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов я инфекционистов Казахстана (Алма-Ата. 1991г.). Конференции ВОГ "Методы профилактики и борьбы с эхинококкозами и другими цестодоэами человека и животных" (Москва. 1993г.), на ученом совете в ИНПиТМ. на коллоквиумах отдела недицинской гельминтологии.

Положения, выносимые на защиту.

1. Критерий эпидемиологически значимого уровня регистрируемых противоэхинококковых антител при проведении массовых сероэпидениологи-ческих исследований с помощью коммерческих диагностикумов

2. Схема и тактика применения инмунодиагностических методов для раннего выявления больных в очагах эхинококкоэов.

3. Необходимость одновременного использования двух тестов с промышленными сериями диагностикумов и совокупного учета результатов по ним при проведении специфического инмуиомониторинга в очагах эхинококкоэов.

Структура диссертации.

Работа изложена на 158 страницах машинописного текста, состоит иэ введения, обзора литературы, трех глав собственных исследований, заключения, выводов. Иллюстрирована 29 таблицами и 1 приложением. Библиографический указатель включает 131 работу, в том числе 78 отечественных и 53 зарубежных авторов.

Содержание работы МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИИ.

Объекты исследования. Для проведения клинической дифференциальной диагностики и массового обследования населения пользовались двумя тес-гами - РИГА и ИФА с коммерческими диагностикумами, производимыми Став- ■ зопольским НПО "Аллерген". В начальном периоде работы <1983-1983гг.> «спольэовали диагностические препараты лабораторного изготовления, но юокольку приготовление их на отличалось по технологии а условиях ком-

- б -

мерческого производства - результаты исследований расценивались нани как идентичные таковым с коммерческими препаратами. Всего в массовых обследованиях было использовано 5 серий диагностикума для РИГА и 8 серий тест-систем для ИФА. Для каждого обследования брали одну серию препарата.

Материалом для массового обследования населения служили сыворотки и сухие капли крови от лиц. проживающих в очагах эхинококкозов. карты эпидобследования населения, разработанные сотрудниками отдела эпидемиологии и экологии нетрансмиссивных паразитарных болезней ИМПиТМ. от жителей 4 населенных пунктов (пп. Нахара. Тюнгюлю, Павловск и Россоло-да) мегино-Кангалласского района и 2 населенных пунктов (пп. Тикси и Кюсюр) Булунского района Якутии. 2 населенных пунктов Свердловского и 1 - Таласского района Джамбулской области Казахстана, полученные при массовом обследовании населения. Всего было обследовано: 2293 жителя Казахстана, из них 586 повторно 4 раза в течение 2 лет с целью изучения показателя заражаемости населения в очагах, периода угасания титров при нереализованном заражении, а также раннего выявления больных; 1902 жителя Якутии, из них - 374 дважды в течение года с целью выявления основных территорий, где происходит заражение ахинококкоэами.

Всего было исследовано 4195 лиц и поставлено 17466 серологических реакций.

При разработке архивных материалов лаборатории иммунологии ИМПиТМ были проанализированы данные по 1752 сывороткам от больных однокамерным, 452 - от больных многокаморным эхинококкозами и 182 - от больных другими заболеваниями со сходным клиническим течением. 2.2. Методы исследования. Сыворотки и сухие капли крови были исследованы в двух иммунологических реакциях - РИГА и ИФА. При проведении работы на базе Якутской Респ.СЭС учет ИФА проводился визуально, а при работе в ИМПиТМ - инструментально с использованием многоканального спектрофотометра фирмы LABSYSTEMS Multiecan МСС/340.

Серологические методы исследования. РИГА и ИФА ставили по методике, описанной а инструкции по применению, приложенной к каждому препарату .

Учет РИГА проводили по стандартной 4-х крестовой системе. Диагностическим титром реакции считали разведение исследуемой сыворотки или сухой капли крови 1:320 с интенсивностью реакции не менее +++. При разведениях 1-.320 с интенсивностью ++ и 1.-160 и 1:80 с интенсивностью ♦++ реакцию оценивали как эпидемиологически значимую.

Результат ИФА оценивали при помощи Multiecan МСС/340 по Формуле для тест-системы с АГ E.g. Д-1.6МЛ0.13 (положительный результат) и Э«1,2МДО.1 (эпидемиологически значимый результат), с АГ Е.т. Д-1.54М^0,16 и Э-1.03+0.11 соответственно. Диагностическим титром реакции служило разведение сыроротки 1:200. При массовых обследования пробы исследовали в одном разведении.

Сероположительной считали сыворотку или сухую каплю крови, в которой обнаруживали протнвоэхинококковые антитела в диагностическом титре и выае в одной из двух или в двух реакциях (РИГА и ИФА). Как эпидемиологически значимую оценивали любую пробу, в которой обнаруживали противоэхинококковые антитела в любой из реакций или в обеих одновременно в эпидемиологически эначином титре или в более высокой. Соответственно в число впидемиологически вначимых входили я все положи-

тельные пробы.

В связи с изменениями политико-географических наименований районов проведения работ в диссертации мы решили применить географические названия этих регионов.

Статистическая обработка результатов исследований проводилась по критерию Стьюдента.

ИЗУЧЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ И СПЕЦИФИЧНОСТИ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РИГА) И ИЫЫУНОФЕРЫЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА) У БОЛЬНЫХ ЭХИНОКОККОЗАМИ В КЛИНИЧЕСКОИ ПРАКТИКЕ.

Для уточнения значения чувствительности и специфичности РИГА и ИФА проводился анализ результатов этих методов за период с 1976 г. по 1990 г.. полученных от больных эхинококкоэами с диагнозом, подтвержденным на операции, а также на сыворотках больных другими заболеваниями с подтвержденным диагнозом отличным от эхинококковое (таблица 1).

Таблица 1

Результаты обследования больных эхинококкоэами и другими заболеваниями иэ ЛПУ г.Москвы

Группы сывороток Число сывороток Положительных Отрицательных

РИГА ИФА »А ИФА» Э РИГА ИФА А ифа э:

абс.ч. М*га '/_ абс.ч. К±га /, абс.ч. М±т у абс.ч. н+ш^ абс.ч. абс.ч.! М+Л>у.

Больных эхинококковом однокамерным 1752 1473 84.1+ 0,9 - 1462 83.4+ 0.9 279 15,9_+ 0.9~ - 290 : 16,6+ : о.9~ :

Больных эхинококковом многокамерным 452 406 89.8+ 1.4 418 92.5± 1.2 - 46 10.2+. 1.4 34 7.5+. 1.2 —- ;

Больных непараэи-тарными болезнями 182 20 11,0+ 2.3 5 2. 7+ 1.2 20 11.0,+ 2.3 162 89. 0 + 2.3 178 97. 3+. 1.2 162 ; 89. о+; 2.3~!

* - Учитывались результаты исследования сывороток в ИФА только

с гомологичным АГ Выявляемость больных многокамерным эхинококковом в обоих тестах несколько выше, чем однокамерным, что можно объяснить, достаточно частой гибелью паразита с последующим обызвествлением или нагноением кисты, приводящая к уменьшению выделения антигенов паразита в кровь. Кроме того редкие локализации эхинококка (в костях, мышцах, сердце, мозгу. глазу и др.) часто дают ложноотрнцательные результата. Специмч-

- В -

ность РИГА и ИФА с АГ E.g. практически одинакова - 09.0*. С АГ Е.т. несколько выше - 97.3%. что объясняется более высокой очисткой антигена и преимущественно печеночной локализацией паразита, что также способствует более эффективному его выявлении.

Следующим этапом обработки полученного материала было определение совпадения и несовпадения результатов двух тестов. Доля совпадений результатов двух тестов (РИГА и ИФА) среди больных многокамерным и однокамерным эхинококкоэами практически одинаковая (90,3+1.4% и 89,6+0,7% соответственно). в тоже время, при несовпадениях результатов ИФА с АГ Е.т. выявляет большее количество больных альвеолярным эхинококковом б.г+1.3% против 3.5to,9% в РИГА, хотя различия статистически не достоверны (t-1.7). Для больных с однокамерным эхинококковом выявляемость больных только одной из реакций в обоих тестах практически одинаковая 5.5t0.2 и 4.9+0.5 соответственно. Следует отметить, что доля совпадений результатов среди контрольной группы (больные непаразитарными заболеваниями со сходной этиологией и здоровые доноры) близка по величине к таковой среди больных эхинококкоэами. Среди больных эхинококкоэами в основном совпадают положительные результаты реакций (78,5.£1,0 и 66,3+1,6% соответственно), а среди больных другими заболеваниями - отрицательные результаты - 80.8t2.9V При несовпадении результатов РИГА несколько чаще дает ложнополохнтелънив результаты, чем ИФА с АГ Е.т. 9,3+2.1* и 1.1t0.8% соответственно (различия статистически достоверны t-3.7), тогда как доли ложнололоаительных результатов в РИГА и ИФА с АГ E.g. совпали и составили 8,7+0.9%.

Отрицательные и сомнительные результаты реакций в основном отмечаются у больных, у которых эхинококкоэы были в анамнезе, т.е. через несколько лет после проведения радикальной операции, или в случае гибели или обызвествления паразита, а также при его редкой локализации (мозг, сердце, кости и т.д.). Больных, прооперированных по поводу эхинококков однокамерного без клинических проявлений рецидива, было 41 -из них отрицательный результат в РИГА имели 26 (63.4%) и в ИФА с АГ E.g. 20 (48.8%). Отсюда следует, что при отсутствии клинических проявлений рецидива заболевания РИГА чаще дает отрицательный результат реакции. чем ИФА.

Результаты исследования сывороток больных однокамерным эхинококковом в зависимости от локализации паразита в организме хозяина свидетельствуют. что наименьшая доля сероположительних и в РИГА (50,0%) и в ИФА (45,5%) наблюдается при редких локализациях паразита (в костях, в глазу, в почках и т.д.). При эхинококкоэе легких доля сероположитель-ных соответственно составила 77,0 и В2.7%. Наибольшая доля сероположительних отмечается среди больных с однокамерным эхинококковом печени или брюшной полости и при сочетанной (печонь+легкие, печень+брюшная полость) локализации: 95.1% (285 ИЗ 300) В РИГА И 96.0* (283 ИЗ 295) в ИФА.

Следует отметить, что обработка такого обширного материала, полученного в течение длительного периода, позволяет считать полученные данные по чувствительности и специфичности исследуемых методов достаточно достоверными, т.к. в этих условиях нивелируются индивидуальные особенности каждой конкретной серии диагностического препарата. Кроме этого, свободная выборка больных позволяет усреднить показатели, получаемые от больных из разных очагов, разного пола, возраста и проФас-

сии. то есть мы получаем объективные параметры самих используемых методов .

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МАКРО- И МИКРОМЕТОДОВ ГНГА.

В ходе проводимых исследований в целях облегчения постановки реакции непрямой гемагглютинации и «ускорения получения ее результатов был разработан микровариант данного теста с применением коммерческого препарата, выпускаемого Ставропольским НПО "АЛЛЕРГЕН".

Методика постановки микрометода РИГА.

1. Приготовление разведения сывороток - сыворотки разводят в Фос-Фатно-солевом буферном растворе рН-7.2 с добавлением нормальной кроличьей сыворотки в соотношении 1:2. В этом разведении сыворотки инактивируют на водяной бане при температуре 56' С в течение 30 мин. Затем готовят двукратные последовательные разведения сыворотки (титруют) на планшетах с 1:4 до 1:8192 в объеме 0.025 мл с помощью аппарата Такачи или микропипетки. Делают 2 ряда разведения - длинный (12 лунок) и короткий (6 лунок).

2. В длинный ряд раститрованной сыворотки добавляют по 0.025 мл диагностикуна эритроцитарного сухого в каждую лунку (опытный ряд). а в короткий ряд - такое же количество танизированных эритроцитов барана (контрольный ряд). концентрация диагностикума и эритроцитов - 0.8*. т.е. каждую ампулу диагностикума и эритроцитов разводят в б мл дистиллированной воды.

3. Учет результатов проводят через 1.5 часа по стандартной 4-х крестовой системе. Диагностическим титром считается разведение сыворотки 1:32 с интенсивностью реакции не ниже 3-х крестов.

Оба варианта РИГА сравнивали на сыворотках 149 больных эхинокок-коэом однокамерным, 115 - эхинококкоэом многокамерным и 197 лиц контрольной группы, в которую вошли больные с поражениями печени и легких непараэитарной этиологии (онкологические заболевания, туберкулез, цирроз печени и др.) и доноры крови.

При однокамерном эхинококкозе чувствительность двух методов оказалась одинаковой и составила для накрометода 85.2+2.5%. для кнкроме-тода - 86.6+2.7%. при многокамерном эхинококкозе прослеживалось некоторое превышение чувствительности микрометода по сравнению с макрометодом - 82.6,13.5 и 73,914.1* соответственно, однако выявляющиеся различия не достоверны (при р<0.05 t-2) . Специфичность иикрометода. установленная на сыворотках контрольной группы, соответствовала таковой макрометода (различия статистически недостоверны) и равнялась 97.9+1.0 и 94.4Ü.6* соответственно.

Совпадение результатов макро и микрометода РИГА достаточно велико, особенно в контрольной группе - 97,5±1.1*. Несовпадение результат тов наблюдалось в среднем в 5.0+1.0* случаев, причем с сыворотками контрольной группы ложноположительные результаты в обоих методах встречались примерно с одинаковой частотой (3 в макро- и 2 о микрометода) . Сыворотки больных в микрометода чаще давали положительный результат. чем в макрометоде, хотя различия статистически недостоверны.

Сравнение ИОД.и микро РИГА было проведено на сыворотках больных с подозрением на эхинококкоэы. поступавших в лабораторию иммунологии мэ ЛПУ г.Москвы. Степень совпадения результатов достаточно высока -91,Q±l,5*. что вполне соответствует результатам совпадения с макрома-тодом РИГА.

Микрометод является не менее эффективным. чем макрометод РИГА, а с учетом его большей экономичности (1 комплект коммерческого диагнос-тикума может быть использован для 36 обследуемых вместо 12 в мак-ро-ГНГА) и быстроты получения результатов (1.5 часа вместо 1В). он может быть рекомендован к широкому применению в клинической диагностике, а особенно при массовых иммунологических обследованиях в очагах эхинококковое. Для постановки РИГА микрометодом может применяться автоматическое оборудование, разработанное для ИФА. в частности "А^ойгор". а также многоканальные микропипетки, что повышает быстроту и точность проведения анализа.

РЕЗУЛЬТАТЫ СРАВНИТЕЛЬНОГО ИЗУЧЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ТЕСТ-СИСТЕМ ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К АНТИГЕНАМ ЭХИНОКОККОВ ОТЕЧЕСТВЕННОГО И ШВЕЙЦАРСКОГО ПРОИЗВОДСТВА.

Исследования, предпринятые нами совместно с коллегами из Института паразитологии в Г.Цюрихе (Швейцария), были направлены на изучение сравнительной эффективности тест-систем иммуноферментных для определения антител к антигенам эхинококков отечественного и швейцарского производства с целью выяснения возможности перекрестного применения данных тест-систем в Швейцарии и на территории России и проверки влияния втаммовых различий эхинококков на диагностические возможности тест-систем, приготовленных из антигенов, полученных из лабораторных культур эхинококка многокамерного, а также генно инженерным путем. В задачи исследования входила сравнительная.эффективность ИФА тест-систем для дифференциальной диагностики однокамерного и многокамерного эхинококков.

Работа проводилась в два этапа. На первом этапа исследовали сыворотки от 407 практически здоровых жителей очагов эхинококкоза, находящихся на территории Якутии, а также сыворотки - 13 проб - больных зхинококкоэами (диагноз установлен на операции) и лиц с диагнозом "эхинококкоэ", установленным на основании клинических проявлений заболевания, - ю проб, в группе сывороток от практически здоровых жителей очага совпадение результатов отличных от отрицательного при сравнении отечественной и швейцарской тест-систем наблюдалось лишь в 3-х случаях (0,7.1.0,4*), тогда как совпадение отрицательных результатов было отмечено у 371 человека, что составило 91.2±1,4%. Доля результатов положительных и сомнительных результатов в сумме составила для отечественных тест-систем с АГ однокамерного эхинококка - 8. с АГ многокамерного -16. в швейцарских тест-системах с Еш2 - 13. с неочищенным АГ Е.ти1Ъ11оси1аг1а (СН-10) - 4. Как видно из представленных данных различия недостоверны, поэтому нельзя отдать предпочтение какому-либо ди-агностикуму.

Наибольший интерес на первом этапе работы представили результаты исследований, полученные' с сыворотками больных с оперативным или клиническим диагнозом "эхинококкоэ". Иэ 4 сывороток больных многокамерным эхинококковом с оперативно подтвержденным диагнозом в отечественной тест-системе все дали положительный результат с обоими антигенами, две иэ них дали также положительный результат и в швейцарской тест-системе с АГ Ега2. У больных с оперативно подтвержденным диагнозом однокамерного эхинококкоза был получен положительный результат с обоими антигенами в отечественной тест-системе во всех девяти случаях, а швейцарской тест-системе о АГ Ет2 был получен положительный результат в 7 случаях.

Эти данные свидетельствуют о том, что даже высокая очисткл -штигенов к сожалению не дает достаточно достоверной диФФереицировки двух видов паразитов.

На втором этапе работы исследовались сыворотки от больных с диагнозом эхинококкоз (альвеолярный или гидатидозный). подтпержденным на операции, с другими точно установленными диагнозами (трихинеллез, описторхоэ, Фасциолез, онкологические заболевания печени и головного мозга), взятые из банка лаборатории иммунологии, а также от практически здоровых лиц - всего 92 пробы.

На этом этапе исследования с использованием коммерческих ИФА тест-систем НПО "Аллерген" (г.Ставрополь) для диагностики эхинококка однокамерного и многокамерного, а также для диагностики эхинококка многокамерного. основанной на применении комплексного антигена E.multiJocularis Em2plus Фирмы "AFFINITY PRODUCTS" (Швейцария). Антиген Em2plus представляет собой смесь генно инженерного антигена II/3-1О и аФФинно очищенного антигена E.multiloculoris Em2.

Большинство результатов у больных альвеолярным эхинококковом совпали во всех трех тестах - в одном случае Em2pius тест-система показала отрицательный результат при положительном результате в обеих отечественных тест-системах и в одном случае результат был прямо противоположным - Em2piu8 - показала положительный результат при отрицательном с АГ однокамерного и многокамерного эхинококков отечественного производства. При исследовании сывороток больных гидаткдоэным эхинококковом все. кроме одного результаты в отечественных тест-системах совпали (в случае несовпадения, положительный результат был получен с антигеном гидатйдозного эхинококкоза).

Как видно из таблицы 2 чувствительность тест-систем с АГ E.multiJocularis одинаковая. Специфичность их в отношении сывороток больных другими гельминтоэами и непаразитарными заболевания также близкая (различия статистически недостоверны - р>0.5). однако следует отнетить. что Em2plua дал перекрест только с сыворотками больных онкологическими заболеваниями (2 из 18; 11.1.17.4*). Основным отличием является высокая перекрестная реактивность антигенов эхинококков обоих видов в отечественных тест-системах, выявляемая по совпадению положительных результатов тестирования сывороток больных различными видами эхинококков в гетерогенных тестах. В этих случаях уровень положительных реакций сывороток больных практически одинаков в обеих тест-системах не зависимо от вида эхинококка, т.е. мы наблюдаем практически абсолютный перекрест. Доля сероположительных среди больных альвеолярный эхинококкоэом в тест-системе ИФА E.g. составляет 90+4.5*. доля лиц с гидатидоэным эхинококкоэом положительно реагирующих с АГ Е.т. 64£9.б*, тогда как в тест-системе Em2plus таких больных только 16+7.3* (различие статистически достоверно р<0,05. t»3.6). Таким образом очевидным преимуществом антигена Ет2р1ив является возможность дифференциальной диагностики двух видов паразитов - уровень перекреста в ней гораздо ниже.

Проведенные исследования показали, что все три иммуноФерментных тест-системы являются достаточно чувствительными и высоко специфичными при проведении дифференциальной диагностики при наличии клинических проявлений заболеваний. Причем тест-система швейцарского производства позволяет даже проводить дифференциальную диагностику двух видов эхи-

Таблица 2

Сравнительная оценка, специфичности тест-систем ИФА на зхииококкозы производства НПО"АЛЛЕРГЕН" и Фирмы "AFFINITY PRODUCTS"

: : Результаты в ИФА

Группы : :_

исследованных : ¡тест-системы НПО"Аллерген ¡тест-система Фирмы

сывороток ¡Число:--------------------------¡AFFINITY PRODUCTS

¡СЫВО-: АГ E.mult.: АГ E.gran. ¡ АГ Em2plus

: ¡абс.ч.! X ¡абс.ч.; X ¡абс.число! *

ГРУППА БОЛЬНЫХ ЭХИНОКОККОЗАМИ Больные альвеоляр- 20 18 904.4,3 10 90+4.5 18 90+4,5

ним эхинококковом

Больные гидатидоз-ным эхинококковом •25 . 16 64+9.6 17 68+9.3 4 16+7,3

Контрольная группа(всего) 47 8 КОНТРОЛЬНАЯ 17.0+5.5 ГРУППА В 17,0+5.5 2 4,3+2,9

Больные трихинеллезом 11 0 0 2 16,2+11, б 0 0

Больные Фасцноле-ЗЪМ 3 1 ЭЗ.З+,27.9 0 0 0 0

Больные опистор-хозом 9 3 33.3+15.7 2 22.2+13.9 0 0

Больные непаразитарными болезнями 18 4 22.2+9.4 4 22.2+9.8 2 11.1±7

Практически здоровые б 0 0 0 0 0 0

нококков. Следует также отметить, место жительства больных альвеолярным эхинококкозом никак не повлияло на чувствительность тест-системы с АГ Оп2р1иа, что делает возможным ее применение при массовых обследованиях в очагах многокамерного эхинококкоза. расположенных на Чукотке и в других Северных и Восточных регионах России. Однако остается открытым вопрос о возможности ранней диагностики эхинококкозов при помощи тест-системы Ет2р1из до появления у больного клинически выраженных признаков болезни.

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ ВОДОПОЛЬЗОВАНИЯ НА ТЕЧЕНИЕ ЭПИДЕМИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ В ОЧАГАХ ЭХИНОКОККОЗОВ В ЯКУТИИ С ПОМОЩЬЮ СЕРОЭПНДЕМИОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ В ходе исследований, проводимых в очагах эхинококкозов в раэлич-

них регионах страны, решался оопрос о путях и Факторах передачи инна-эии в них. Одним ия критериев, по которым оценивали контакт населения очага с инвазионном материалом, являлись данные массового иммунологического обследования.

По данным литературы чаше всего инваэируются лица, имеющие прямой контакт с собаками (В.Б.Ыартыненко и соавт.. 1983г.: И.Г.Сафронов. С.И.Исаков. 1981г.). Существует также предположение, что риск заражения местного населения этими гельминтами существенно возрастает при использовании в качестве источников водоснабжения мелких бессточных водоемов (в частности термокарстовых озер в Якутии), в которых могут накапливаться и длительное время сохраняться онкосФеры эхинококков.

Работа проводилась в Ыегино-Кангаласском районе Якутии, где различные группы населения используют в качестве источников водоснабжения воду термокарстовых озер и воду р.Лена.

Более трети жителей обследованных поселков (Павловск. Нахара. Тюнгюлю и Россолода) содержат собак, которые днем содержатся на привязи. а ночью их спускают. Собаки имеют возможность ловить грызунов как на территории поселка, так и в близь лежащей тайге, что дает им возможность заражаться многокамерным эхинококковом и делает их опасным источником инвазии для населения.

По архивным материалам в Мегино-Кангалассом района Якутии за период с 1970 по 1980 гг. частота регистрации эхинококкоэов на 10000 населения в поселках с озерным типом водопользования составила 34,9. ас речным - 10,4 (различия статистически достоверны. р<0,05. t-3,9).

По результатам массового иммунологического обследования населения видно, что в поселках Павловска и Нахарв лица, положительно реагирующие в РИГА и ИФА, встречаются с близкими по значению частотами (8,4£1,2 и 12.1+.2.0*, t<2). Для выявления роли воды как Фактора передачи инвазии в очаге были проанализированы результаты иммунологического обследования лиц наименее тесно контактирующих с источником инвазии (в данном случае собаками), а именно у женщин не содержащих собак и не связанных с обработкой мехового сырья. В Пахаре у этих лиц, противоэ-XHHOKOKKORtie антитела регистрировались в 2.2 раза чаще (t»2.7; Р-0,05), чем у аналогичного контингента в Павловске. Эти данные с учетом одинакового хозяйственно-бытового уклада жизни населения обоих поселков могут с большой степенью вероятности свидетельствовать о более высокой степени загрязнения инвазионным материалом элементов оглушающей среды в п.Нахара по сравнению с Павловском.

Поскольку источником инвазии в населенных пунктах Якутии являются в основном собаки (В.В.Мартыненко и соавт., 1984г.), то, изучая загрязнение элементов внешней среды испражнениями собак, можно с известной степенью вероятности охарактеризовать и особенности распространения во внешней среде инвазионного материала.

При копро-овоскопическом исследовании Фекалий 81 собаки яйца гельминтов обнаружены у 19 животных. Причем яйца аскаридат плотоядных Toxocara cania и Toxocara leonina зарегистрированы в 13.9* случаев. онкосФеры тениид в 9.8*.

Источником онкосФер тениид на территории населенных пунктов, помимо собак, в Якутии могут бить люди и птицы, я указанных аскаридат -только собаки (ковки в изучаввихся поселках встречались крайне редко). Приникая во внимание это условие, мы попытались использовать яйца

T.caniu и Т.leonino в качестве маркеров для оценки закономерности распределения онкосфер эхинококков на территории данных поселков.

Данные показывают, что в Нахара яяца гельминтов, в том числе и аскаридат плотоядных, встречаются значительно чаще (различие статистически достоверно) в донных отложениях озер, чем в почве селитебной зоны. В противоположность этому в донных отложениях р.лены вблизи Павловска обнаружено только одно яйцо токсокар в то время как в почве этого населенного пункт.а яйца аскаридат плотоядных встречались часто и в более высоких концентрациях. Мы предположили, что онкосферы. сохраняющиеся в воде до нескольких месяцев, накапливаются в донных отложениях. При попадании в реку (р.Лена в Павловске) они выносятся за территорию населенного пункта. При существующем способе взятия воды из открытых водоемов, она интенсивно перемешивается с донными отложениями и в таком виде доставляется потребителю.

Озерная вода, как показал опрос населения, не употребляется для питья в сиром виде, но ее широкое использование для хозяйственно бытовых нужд повывает вероятность попадания инвазионного материала жителям поселков. Этим в определенной степени можно объяснить различия в частоте обнаружения противоэхинококковых антител и заболеваемости эхи-нококкоэ&ми населения поселков с озерный и речным видами водопользования.

При более широком рассмотрении результатов массовых иммунологических обследований населения пп. Нахара. Павловск. Россолода и Тюнгю-лю. проведенных в Мегино-Кангаласском районе Якутии, мы попытались получить результаты позволяющие определить группы населения, подвергающие повышенному риску заражения эхинококкозами.

При сравнении полученных результатов в зависимости от пола, возраста и рода занятий статистически значимых различий между показателями серопозитивности различных групп населения получено не било, что может свидетельствовать либо о том, что как таковых групп риска среди населения рассмотренных очагов не существует, либо о том. что взятые для обследования выборки иэ популяции были недостаточно репрезентативны.

Различия в показателях РИГА и ИФА и в данном случае не дают возможности выделить какую-либо из реакции как более информативную. В этом можно убедиться если рассматривать данные полученные по каждому иэ обследованных поселков, т.к. различия полученные при применении этих методов статистически не достоверны.

ИЗУЧЕНИЕ ЭПИДЕМИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ В ОЧАГАХ ЭХИНОКОККОЭОВ РАЗНОГО ТИПА ПУТЕМ ДИНАМИЧЕСКИХ СЕРОЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИХ ОБСЛЕДОВАНИИ НАСЕЛЕНИЯ.

Экологическая структура очагов однокамерного и многокамерного * эхинококкоэов. а также характер протекающих в них эпидемических и эпизоотических процессов имеют свои особенности на территориях различных климатогеографических зон. Их изучение возможно только с использованием данных сероэпйдемиологических обследований полученных в динамике. Нами было проведено два таких обследования: в Булунском р-не Якутии 1983 - 8бгг. - массовое иммунологическое обследование детей окольного возраста в п.п.Кюсюр и Тикси; в Джамбулской обл. Казахстана в 1988-90гг било обследовано население п.п. Тегистык. . талапти и им.40-летия Октября. В результате этой работы были получены следующие результаты.

В Якутии обследование проводилось трехкратно. В апреле 1905 г. было первично обследовано 465 учащихся и было выявлено 2 2 человека положительно реагировавших в иммунологических тестах (учет велся по совокупности 3-х тестов РИГА. ИФА С АГ эхинококка однокамерного и ИФА с антигеном эхинококка многокамерного).

В у лиц с отрицательными результатами первого- обследования, во втором обследовании было выявлено 43 (14.1*) человека с положительными титрами антител хотя бы в одной из реакций. У школьников проводивших каникулы в тундровой зоне, положительные результаты в РИГА регистрировались с той же частотой, а в ИФА - чаще, чем у выезжавших в таежную зону. На основании этих исследований можно предположить, что во время летних каникул школьники контактировали с инвазионным материалом, на что указывает появление в их крови антител к антигенам эхинококков. Среди школьников, отдыхавших в таежной зоне Якутии, зарегистрировано большее число лиц с противоэхинококковыми антителами, выявленными в ИФА.

Весной 1986 года удалось обследовать в третий раз 54 человека. имевших противоэхинококковые антитела в крови при первичном или повторном обследовании. Повторно антитела были зарегистрированы в ИФА 2 человек, дававших положительный результат при первом обследовании, в РИГА не было получено положительных результатов. Из 43 человек имевяих положительный результат реакции при повторном обследовании 10 дали положительный результат в ИФА и 1 в обеих реакциях. Таким образом поло' жительный результат через год сохранился в 9* случаев, а через 7 месяцев - около 25*. Эти результаты совпадают с ранее проведенными многолетними наблюдениями за жителями эндемичной по многокамерному эхино-коккоэу зоны Якутии (среднее течение р.Вилюй) (А.Г.Шакаров. В.Б.Марты-ненко.19В4Г.).

Проведенные исследования подтвердили предположение выдвинутое А.Г.Макаровым в 1985г. о том, что положительные результаты, полученные при однократном иммунологическом обследовании населения эндемичной территории свидетельствуют о возможной встреча паразита я хозяина. Для доказательства реализации заражения в патологический процесс говорят только стабильные или нарастающие значения титров антител.

При изучении совпадения двух тестов выяснилось, что оно чаие наблюдается среди отрицательных результатов, и эти показатели практически не зависят от применяемого антигена. На основании этого можно предложить при массовом обследовании брать только одну из ИФА тест-систем в зависимости от преобладающей нозоФорны (эхинококков однокамерный или многокамерный) а конкретном очаге.

Несовпадения в показаниях РНГА и ИФА выявляются, по наяеиу мнению, в результаты различий в антигенном составе тех компонентов цельного антигена эхинококка, который адсорбируется на различных носителях (таниэированные и Формализированные эритроциты барана и гтолистироловые планшеты), используемых в данных тестах. Принимая во внимание этот Факт, при кассовых обследованиях следует использовать параллельно оба теста. Но по экономическим соображениям можно рекомендовать в качестве скринингового теста ИФА с гомологичным антигеном, а РИГА использовать в качестве уточняющего с раститровкой сывороток. Так в Якутии, где в структура очагов, расположенных в таежной зона, преобладает многокамерный эхинококк (1)9 по данным А.И.Нвмировской с соавт.,1900), пред-

почтительнее использовать гомологичную тост-систему ИФА с антигеном нногокамерного эхинококка.

Продолжением описанной работы явилось изучение эпидемиологической ситуации в синантропном очаге однокамерного эхинококкоза в Джамбулской области Казахстана, проводившаяся на протяжении 1988-1990 гг. Исследования проводились с целью проверки возможности раннего активного выявления больных в очаге этой инвазии. Для этого были выбраны три поселка.

- в Свердловском районе - к/з 40 лет Октября (центральная усадьба) и с/х им.В.И.Чапаева (п.Тегистык). а также п.Талапты Таласского района Джамбулской области КазССР.

Регистрируемая заболеваемость эхинококковом на этой территории за последние 10 лет: в п. Талапты составила 5 больных (1500 жит.) в к/х-эе 40 лет Октября - 2 больных (2100 жит.) в с/х-зе им.В.И.Чапаева

- 3 больных (2500 жит.). При сравнении результатов иммунологических исследований, по каждому поселку, установлено, что различия между результатами отдельных обследованиями в них не существенны (р>0,05). Этот Факт позволил нам усреднить результаты по всем четырем обследованиям. проведенным в каждом поселке, и на их основании сделать вывод о различиях в эпидемиологической ситуации. Наибольшая доля эпидзначимых результатов иммунологических реакция была отмечена в п.Тйлпты - в среднем она составила по данным РИГА - 16,510.8%. ИФА - 7,8+1,5*. в двух других поселках зарегистрирована меньшая доля эпидзначимых - в с/х.им В.И.Чапаева - 4,б_+0,8* и 5.Ш).8*. а к/х им. 40 лет Октября -4,5+0,9% и 6.2_+1. 1* соответственно (р<0,05). При сравнении результатов, полученных в к/х им. 40-летия Октября и с/х им. В.И.Чапаева, таких различий не выявлено. Таким образом, очаг инвазии в п.Талапты можно считать более напряженным, чем в двух других поселках (им.В.И Чапаева и им.40-летия Октября).

Отсутствие статистически значимых различий в результатах РИГА и ИФА при полевых исследованиях, а также их близкая диагностическая эффективность позволяет рекомендовать оба теста для скринингового обследования населения с целью раннего выявления больных в очаге.

При проведении работы мы попытались установить, как часто следует проводить дообследование сероположительных лиц для выявления реверсии титров. Обследования проводились со следующей периодичностью: май 1988г.- были обследованы п.п. 40 Лет октября и им.В.И.Чапаева (Свердловский р-н),- октябрь 1988г. (4 мес.) - те же поселки: май 1989г. (6 мес.) - те же поселки + п.Талапты (Таласский р-н).- сентябрь 1989г. (4 мес.) - те же поселки: январь 1990 (3 мес.) - только п.Талапты. Часть населения (в основном школьники) обследована в динамике. Четырехкратно обследовано 586 человек. Из них положительную реакцию в РНГА давали 83 человека, в ИФА - 101 (хотя бы в одном обследовании). Как правило у большинства сероположительйых наблюдалась реверсия титров в течении этих сроков, однако у некоторых лиц титры антител оказались более стабильными: для ИФА в среднем у 1* во всех 4-х обследованиях и для РНГА в среднем - у 0,5*. Клинико-инструментальное дообследование после повторного иммунологического обследования было проведено у 12 человек и у одного из них (девочка 1981 г. р.) обнаружена эхинококковая киста печени диаметром 3 см.

Чаце всего повторяются отрицательные результаты обоих методов, значительно реже повторяются положителиний результаты, однако следует

отметить, что однократное появление положительных результатов и в РИГА и в ИФЛ встречается значительно чаще, чем двух-, трех- или четырехкратное их появление - в среднем от 1 до 3.1* в РИГА и от 0.2 до 2.5* в ИФА. Полученные данные позволяют говорить о взаимозаменяемости ИФА и РИГА для изучения эпидемиологической ситуации, а также для проведения иммуномонигоринга очага. Поскольку неоднократное появление- антител в крови встречается достаточно редко - это облегчает диспансерный учет лиц с подозрением на заболевание эхинококкозами.

Совпадение результатов РИГА и ИФА среди больных эхинококкозом однокамерным встречается в 89.6+0.7* случаев среди больных с другими диагнозами 82.4+2.й*. нами была проделана работа по определению степени совпадения используемых тестов при массовом обследовании населения 88.7+0,4*. Различия между данными величинами статистически недостоверны (р<0.05)1 следовательно, можно утверждать, что характер выборки (больные эхинококкозами, больные другими заболеваниями или практически здоровые лица) не влияет на долю совпавших результатов по двум реакциям. Однако если сравнить долю совпадения положительных и отрицательных результатов, то станет очевидно, что среди лиц обследованных в очаге в основном присутствуют здоровые - так доля совпавших положительных (в диагностическом титре) результатов среди больных 89. <$¿0.7*. а среди жителей очага - 0,5^,0.03*.

Поскольку доля совпадения положительных результатов 2-х реакций среди больных эхинококкозами не достигает 100*. то при проведении эпидемиологических исследований целесообразно не только брать в расчет эпидемиологически значимые результаты совпавшие в обоих тестах, но и рассматривать как эпидемиологически значимые любые пробы, в которых получен эпидемиологически значимый результат хотя бы в одном из тестов, Это необходимо как для оценки эпидситуации. так и для раннего выявления больных, так как появление антител в эпидемиологически значимом количестве может свидетельствовать о контакте с инвазионным материалом. а следовательно и о риске заболевания эхинококкозами.

С целью унификации исследуемых показателей была разработана карта эпидемиологического обследования жителя очага и схема проведения иммунологического мониторинга (данные представлены в статье Г.И.Подоприго-ра. Т.В.Старкова "Метод иммунологического мониторинга при массовых обследованиях населения в очагах эхинококкозов" в книге "Эхинококкоэы. Методы исследований, лечения, профилактики" И, 1990г.)

ВЫЯВЛЕНИЕ КОРРЕЛЯЦИОННЫХ СВЯЗЕЙ МЕЖДУ ОСНОВНЫМИ ПОКАЗАТЕЛЯМИ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩИМИ ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС ПРИ ЭХИН0К0КК03АХ.

Исследования проводились в синантропных очагах, расположенных на территории Джамбулскоя области в выше перечисленных поселках

Основными показателями, характеризующими эпидемический процесс при эхинококкозах в синантропных очагах были избраны: пораженность эхинококками основных источников инвазии (собак), степень обсеменен-ности объектов внешней среды онкосФерами тениид. а также уровень серо-позитивности населения и пораженность промежуточных хозяев (овец).

Для выявления корреляционных связей между основными источниками (собаками) и промежуточными хозяевами (овцами) инвазии в очагах эхинококкозов нами проведен анализ данных по порахенности молодняка убойных овец, а также зараженности поселковых и чабанских собак в зависимости от сезона года. Исследования проводились сотрудниками Отдела эпидемио-

логии и экологии нетрансмиссивных паразитарных болезней НЫПиТи им.Е.И.Нарциновского. Джамбулского отдела ВИГИС и Джамбулской областной ветеринарной станции. Обследование собак проводилось в соответствие с Инструкцией Госагропрома СССР (1969), путем диагностической дегельминтизации 1%-м раствором бромисто-водородного ареколина. Всего было исследовано 2940 туш убойных овец и продегельминтизировано 129, собак.

Наибольшая пораженность эхинококкоэом овец отмечается в летний период (23.2%+4.4). а наименьшая - в весенний (12.6413.1). Осенью (16.7*^3.4). по сравнению с летом, происходит резкое снижение поражен-ности животных, а затем - постепенное повышение этого показателя к зимнему периоду (до 19,0Ч£2.9).

Наибольшая пораженность эхинококкоэом собак отмечается осенью (12.7±3.4%) и весной (11.5.43.0%). В момент массового убоя овец (весна, осень), их внутренние органы скармливают собакам, что приводит к заражению последних. Учитывая сроки преимагинального развития Е.дгапи1озиа у собак (48.3+2.4 дня) (В.Б.Ястреб.Ф.К.Скворцова.1990), разница между временем убоя овец и максимальной' зараженностью собак должна в среднем составлять 1,5 месяца, что и отмечено в наших исследованиях: апрель-май и сентябрь-октябрь, соответственно.

Существует прямая зависимость пораженности окончательных хозяев от промежуточных с временным интервалом в 1-1.5 месяца (г - +0.36).

Из объектов внешней среды наибольшему обсеменению в синантропном очаге эхинококкоза подвергаются почва и шерсть собак. Поэтому они и были выбраны нами в качестве основных показателей, характеризующих степень обсеменения внешней среды онкосферами тениид (исследования проводились сотрудниками Отдела' эпидемиологии и экологии нетрансмиссивных паразитарных болезней ИМПиТЛ).

Анализ полученных данных показывает, что наибольшая экстенсивность их обсеменения отмечается в осенний (почва - 51,4+5.1%, шкуры -ЭЭ.7±5.1% положительных проб) и весенний (почва - 42,3+_б.1%. шкуры -29.6+4.8% положительных проб) периоды. Сопоставляя данные обследования животных и обследования объектов внешней среды можно отметить, что, при максимальной степени пораженности собак в осенний и весенний периоды (31,7% и 28.0%. соответственно) отмечается и наибольшая степень обсеменения онкосферами почвы и шкур собак, т.е. существует прямая зависимость между этими показателями (г - +0.42).

Для выявления корреляционных связей между показателями уровня се-ропозитивности населения и другими Факторами нами проведен анализ результатов массовых серологических обследований с примононием РИГА и ИФА в синантропных очагах эхинококкоза в течение 3-х летнего периода-. Пробы крови отбирались у лиц. подверженных повышенному риску заражения: у чабанов, членов их семей, ветработннков, стригалей, а также у проживающего в очаге населения в 25%-ной свободной выборке. Анализ полученного материала проводили по совокупности диагностических и положительных результатов в двух реакциях. Всего проведен анализ 2990 проб.

Наиболывего значения этот показатель'достигает зимой (29.9&5.8%). а наименьвего - весной (7,5^2,7%) и осенью (Ю.7,+3.1%). Таким образом, отмечается прямая зависимость показателя уровня серопоэитивности населения от пораженности окончательных хозяев и степени обсемененности

объектов внешней среди с временным интервалом в 2-3 месяца (г -♦ 0.29) .

Параллельно были проведены исследования по определению зависимости уровня серопозитивности населения в очагах от наличия и способа содержания собак. При свободном содержании животных данный показатель составляет 21.2t9.89;. при привязном - 21.3_t7.3S;. а у не имеющих их в личной собственности - 13.3_£4.3*.

данные, характеризующие риск заражения различных групп населения в зависимости от способа содержания собаки показывают, что наибольшему риску подвержены дети (21.3+4.6% положительных результатов), а наименьшему - взрослое мужское население (7,9+2.9% положительных результатов) . Причем, у детей отмечаются наивысшие показатели при всех способах содержания собак: 22.7+4.3% - свободное. 19.5+4.9% - привязное и 17.1±.4.б% - при отсутствии собаки, а у мужчин - наименьшие (9.4+4.2%.. 5.^+2,1% и 8,6+2.6%. соответственно).

В связи с этим была изучена зависимость уровня серопозитивности различных групп населения от характера и вида их деятельности. Установлено. что уровень серопозитивности населения в зависимости от профессий как по взрослым (чабаны и животноводы - 25.0+8,0%. колхозники и служащие - 22.1+9,4%). так и по детям (32.3+8.8% и 38.9+7,3% соответственно) не имеет достоверной разницы. Таким образом, не представляется возможным выделить профессиональные группы повышенного риска заражения эхинококкоэом. Практически все население, имеющее контакт с собаками в подобных очагах имеет реальную возможность заражения данной инвазией.

ВЫВОДЫ

1. Установлена одинаково высокая эффективность двух наиболее широко применяемых коммерческих иммунодиагностических препаратов для диагностики эхинококкоэов в реакции непрямой гемагглютинации и иммуно-Ферментного анализа. Показатели чувствительности и специфичности составили соответственнов РИГА для больных однокамерным эхинококкоэом 84.1+0,9% и 89,0+2.3%, а для больных многокамерным эхинококкоэом. -89,8+1.4% и 89,0+2,3%. Эти же показатели в ИФА составляли соответственно для больных однокамерным эхинококкоэом соответственно 83,4+0,9% и 89,0+2.3%, а для больных многокамерным эхинококкоэом -92,5^1,2% и 97.3+172% (Ь<1.96» р>0.05),

2. Оба изученных коммерческих диагностикума показали наибольшую эффективность при дифференциальной дианюегшее «тяканерняги узмпаик-коза печени, брюшной, полости, сочетанной локализации (печень+легкие. печень+брюшная полость) и множественном поражении легких - 95,Щ,3% (в РИГА), и 96.й±1,2% (в ИФА) случаев. Чувствительность РИГА и ИФА ог- • раничена (около 50%) при диагностике солитарного поражения легких и при редко встречающейся локализации паразита (мозг, сердце, кости и т.п.).

3. Однократное послеоперационное иммунологическое обследование больного с помощью РИГА и ИФА не дает достоверной оценки радикальности лечения (доля положительных в РИГА составляет около 30*. а в ИФА около 50%). Наличие рецидива можно установить при достаточно длительной, свыше 2-х лет. послеоперационном иммуномониторинге, выявляющем стойкое сохранении титров антител.

4. Организация массовых иммунологических обследования населения

очагов эхинококкозов должна предусматривать ежегодное наблюдение в динамике за выявленными в скрининге серололожительными лицами. Наличие стойкого, увеличивающегося титра антител (в РИГА и (или) в ИФА) указывает на реализацию инвазии в патологический процесс.

5. Установлен эпидемиологически значимый уровень противоэхинокок-ковых антител в крови (для РИГА - титр >1:80, и для ИФА вычисляемый по Формуле ЗУ"1,2Н+0,1 для ИФА E.g. И ЭУ-1.1+0.11 ДЛЯ ИФА Е.ш. ИЛИ ЭУ-К+26). характеризующий лиц с трудно выявляемыми Фирмами эхинококковой инвазии, необходим при изучении особенностей эпидемиологического процесса в очагах эхинококкозов и анализе результатов.

6. Выявлена положительная корреляция (Г-+0.29) показателей серологических и санитарно-гельминтологических показателей, позволяющая рекомендовать использование данных иммуномониторинга населения для оценки эпидемической ситуации в очагах эхинококкозов: при этом важно использовать совокупные данные двух тестов (РИГА и ИФА).

7. Разработан микрометод постановки РИГА со стандартными коммерческими диагностикумами. существенно ускоряющий (учет результатов микро РИГА через 1.5 часа вместо 18 часов для макро РИГА) и упрощающий (можно использовать оборудование для ИФА) проведение специфической иммунодиагностики эхинококкозов и повышающий эффективность полевых скри-нинговых сероэпидемиологических исследований.

8. Применение высокочувствительных коммерческих препаратов позволяет унифицировать результаты ■ иммунодиагностйческих исследований и обеспечивает сравнимость данных, получаемых в различных очагах этих инвазий.

Параллельное применение коммерческих тест-систем, основанных на высоко специфичных генно инженерных антигенах E.multilocularis, в значительной степени повышает эффективность дифференциальной иммунодиагностики двух ноэоформ эхинококкозов. что является перспективным направлением совершенствования диагностикумов.

Результаты исследований использованы для:

1. Коллективной монографии "Эхинококкозы: методы исследования, лечения, профилактики" Москва. 1990.

2. Обучения специалистов сети практического здравоохранения.

3.Проведения массовых мероприятий по борьбе с эхинококкоэами (раннее выявление больных, оценка эффективности лечения собак) в очагах эхинококкозов.

4. В организации практической клинической диагностики эхинококкозов в лаборатории иммунологии ИМПиТМ (микрометод РИГА).

Публикации.

Основные положения диссертации опубликованы в печатных 12 работах. из них 3 в центральной печати.

Основные публикации по теме диссертации-.

1. В.Б.Мартыненко. Н.А.Романенко. Т.В.Старкова. Т.А.Лосева. Н.Б.Баллад, Л.В.Русак. В.И.Суворина. Н.Г.Андреева. (1986) Особенности эпидемиологии эхинококкозов в населенных пунктах Якутской АССР с различным типом водопользования. //Мед.паразитология и паразитарные болезни, N Э. С.

3. Лойкима К.С., Эорихмна В.И., Баллад Н.Е., Старкова Т.В. (1987)

Иммунологические методы диагностики эхинококкоэов// В об "Диагностика и лечение эхинококкоэа'- Тез. докладов Всесоюэ. науч. конф. 12-13 октября. Баку. С. 27-29.

3. Старкова Т.В.. Зорихина В.И. (1987) Сравнительная характеристика макро- и микрометода реакции непрямой гемагглстинации при эхино-коккоэе и альвеококкозе.//В сб. "Диагностика и лечение эхинококкоэа" Тез.докладов Всесоюэ. науч. конФ. 12-13 октября. Баку. с.40.

4. Ыартыненко В.Б.. Старкова Т.В.. Баллад Н.Е.. Зорихина В.И.. Суворина В.И.. Орехов И.В.. Швец В.Н. (1987) Динамика показателей реакции непрямой гемагглютинации и иммуноФерментного анализа с антигенами эхинококков у учащихся интерната иэ тундровой и таежной зон Якутии. // Ыед.параэитол. и параэитар.болезни.- N2. -С.10-12.

5. Т.В.Старкова. В.И.Зорихина (1988) Эффективность микрометода реакции непрямой гемагглстинации с диагностикумом промышленного изготовления при эхинококкозах.//Нед.паразитология и паразитарные болезни,- N 4. - С.63-84.

6. Подопригора Г.И., Старкова Т.В., Яроцкий Л.е.. Никифорова Т.Ф.. Калачев В.Н. (19В9) Разработка компьютеризованного иммуномонито-ринга эпидситуации по паразитозам на примере эхинококкоэа.// В сб. Эпидемиологический надзор за эхинококкозами. М.. 113-121.

7. Баллад Н.Е.. Зорихина В.И., Белова И.Н.. Куприна H.H.. Майорова Л.А.. Мартыненко В.В.. Старкова Т.В.. Шакаров А.Г.. Фатхулина Г.З. (1989) Эффективность иммуноФерментного тестов и реакции непрямой гемагглютинации в диагностике эхинококкоэа и. их использование в оценке эпидемиологической ситуации в Якутской АССР и Чукотском национальном округе.//В сб. Эпидемиологический надзор за эхинококкозами. М., 33-43.

8. Подопригора Г.И.. Старкова Т.В. (1990) Метод иммунологического мониторинга при массовых эпидемиологических обследованиях населения в очагах эхинококкозов.// В кн. Эхинококкозы: методы исследований, лечения. профилактики. М.. 62-71.

9. Никифорова Т.Ф.. Маслов С.е.. Старкова Т.В. (1990) Основные показатели, используемые для эпидемиологического надзора за эхинококкозами // В кн. Эхинококкозыметоды исследований, лечения, профилактики, М.. 18-26.

10. Старкова Т.В. (1990) Тактика применения иммунологических тестов при массовых сероэпидемиологических обследованиях населения очагов паразитарных инвазий (на примере эхинококкозов).// В сб. "Молекулярная биология и медицина" Тез. докладов Всесоюэ. вколы-семинара, 12-18 мая 1990г. г.Ленинград., М. •

11. Старкова Т.В.. Касмакасов С.Х., Яроцкий Л.С. (1993) Опыт применения иммунологических показателей для оценки эффективности борьбы с гидатидозным эхинококковом в Джамбулской области Казахстана//В сб. Тез. докладов науч. конФ. ВОГ 16-17 июня 1993., М. - С.- 81-82.

12. Подопригора Г.И., Старкова Т.В.. Дж.Эккерт. Б.Готстейи (1994). Сравнительные исследования российского и ввейцарского коммерческих км-муноФерментных тестов для определения антител к антигенам эхинококков.//Мед. паразитология и паразитарные болеэяя. - N 3,- С. 91-32.