Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сравнительная характеристика реакции непрямой гемаглютинации и иммуноферментного анализа на эхинококкозы в клинической практике и при сероэпидемиологических исследованиях (с примением коммерческих диагностикумов)

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Сравнительная характеристика реакции непрямой гемаглютинации и иммуноферментного анализа на эхинококкозы в клинической практике и при сероэпидемиологических исследованиях (с примением коммерческих диагностикумов)"

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ САЛИТАРНОЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКО ГО НАДЗОРА российской ФЕДЕРАЦИИ

ИНСТИТУТ ИЕДИЦИНСКОИ ПАРАЗИТОЛОГИИ И ТРОПИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЫ имени Е.И.НАРЦИНОВСКОГО

На правах рукописи

СТАРКОВА Татьяна Владимировна

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛИТИНАЦИИ И ИИМУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА НА ЭХИНОКОККОЗЫ В клинической ПРАКТИКЕ И ПРИ СЕРОЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ (с применением коммерческих диагностмкумов)

Специальность 03.00.19 - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание ученой степей* кандидата биологических нале

МОСКВА, 1994

Работа выполнена в Институте медицинской паразитологии и тропической медицины им.Е.И.Марциновского ГКСЭН РФ

Научные руководители: доктор иедицикских наук

В.И.ЗОРИХИНА

доктор медицинских наук Г.И.ПОДОПРИГОРА

Офяцяалыта оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Э.X.ДАУГАЛИЕВА

. доктор медицинских наук, старший

научныя сотрудник

В.Д.ЗАВОИКИН

Ведут я организация: Московская медицинская академия им. И. 1С. Сеченова

Зацита диссертации состоятся "_'.'_1994г.

в_часов на заседании диссертационного совета при Институте

медицинский паразитологии и тропической медицины им.Е.И.Марцн-яоаского. Адрес: 119433. г.Москва, ул.Палая пироговская, 20.

С диссертацией косно ознакомиться в библиотеке ШЛнТМ.

Автореферат разослан "_"_1994г.

Учения секретарь Диссертационного Совета кандидат нвджцннскях наук

А.А.Фролов»

В ВЕЛЕНИЕ

Актуальность работы.

ЭХИНОК.ОК.КОЭЫ относятся к числу параэнтозов. вызывающих тяжелую патологию у населения эндемичных территория, и причиняющих значительный ущерб животноводству и эпероводству. в свяэи с чем представляют весьма актуальную проблему здравоохранения и народного хоэлясртва.

На территории нашей страны эхиискоккоэы имеют неравномерное распространение . Высокая заболеваемость однокамерным эхиног.окозом отмечается во многих регионах России таких как Краснодарский и Ставрополь-скип края, в Наживи и среднем Поволжье, в Башкирии. Татарии. Калмыкии, на Северном Кавказе, в Республике Саха (Якутии), в Чукотском автономном округе и других территориях Крайнего Севера и дальнего Востока (в оленеводческих районах). Кроме того широкое распространение эти заболевания имеют и на территории бывших республик СССР: в Республиках Закавказья. в Молдавии и некоторых районах Украины. Срелнея Азии н Казахстане. Это в значительной степени связано с интенсивник развитием овцеводства, которому способствуют климатические условия, обширность территория, наличие вормових баз и т.д. (Шакаров А.Г. с соавт..1Э88: Акмагов Б.А.,1989; Горбунова Д.Е. с соавг.,1989; Ыагдей М.В. с со-авт.,1989; Иахтумова М.С. с соавт.,1939; и др.). Очаги многокамерного эхинококкоза расположены на территории Дальнего Востока и Восточной Сибири, что. в первую очередь, предопределено развитыми охотничьим промыслом, обработкой пушнины, массовым сбором и заготовкой дикоросов (Мартыненко В.Б.. 1984: Яковлев П.Н. с соавт..19В7: Полосьмак Л.П. с соавт.,1909: Чернышева Л.Г. с соаэт.,1989 и др.).

проблема эхинококкозов на современном этапа приобретает особое значение в свяэи с опасностью ухудшения эпидемической и эпизоотической обстановки, обусловленной, главным образок, влиянием антропогенных Факторов. К числу последних относится приток населения во вновь осваиваемые районы, развитие животноводства и звероводства, акклиматизация и расселение животных - потенциальных хозяев многокамерного и однокамерного эхинококков, а также увеличения поголовья скота в частных хозяйствах и ослабление ветеринарного надзора за его подворным убоем.

Несмотря на успехи в борьба с эхинококкозами, в большинстве случаев проводимые мероприятия не достигают значительного успеха иэ-за недостаточных знаний по эпидемиологии и эпизоотологии этих параэитоэов, в частности, критериев выявления групп населения, подвергающихся повышенному риску инвазии, а также недостаточной отработанности тактики применения иммунологической диагностики с целью раннего выявления больных и оценки течения патологического процесса. Клиническая диагностика эхинококкозов. особенно на ранней (субклинической) стадии раз-вития паразита, представляет значительные трудности и осуществляется в основном иммунологическими методами с последующей Физикалыюй верификацией заболевания. Затруднена также и борьба с- этими гельмиитозами, так как их распространение и уровень заболеваемости людей связаны в значительной степени с антропогенным влиянием на эти процессы, а также с битовыми привычками и гигиеническими навыками населения эндемичных территорий.

В СССР ' с 198S по 1990 гг. осуществлялась Всесоюзная отраслевая' программа С-16 "Разработать и внедрить эффективные методы диагностик*, лечения и профилактики основных мараэнтарних болезней человека (опис-торхоа, лейшманиозы. охинококкоаи, малярия)". непременная, в той чнс~

ле. на создание системы эпиднадзора за эхинококкоэами. Представленное исследование проводилось в рамках этой программы. Она включала в себя, среди прочих задач, раннее выявление и лечение больных. Иммунологические методы дифференциальной диагностики эхинококкозов могут оказать больную помощь в решении этих задач, поскольку они позволяют определять ранние (бессимптомные) Формы заболевания, заражаемость населения и. на основании заражаемости и выявления больных, определять группы лиц инегщих повышенный риск, заражения эхинококкоэами. В лаборатории иммунологии ИЫПити в течение последних 15 лет разрабатывались методики приготовления диагностикумов и постановки реакции непрямой гемагглюти-нации (РИГА) и иммуноФерментного анализа (ИФА). По этим разработкам с 1987 года Ставропольским НПО "Аллерген" освоен промышленный выпуск ди-агностнкума эритроцнтарного сухого для РИГА, а с 1988 - тест-систем кнмуноферментных для ИФА с антигеном эхинококка однокамерного (АГ E.g.) и с антигеном эхинококка многокамерного (АГ Е.т.). Б связи с началом их широкого применения в лачабно-профилактических учреждениях возникла необходимость оценки информативности коммерческих диагностикумов для кассового применения в клинической практике и для сероэпиде-миологии. чему и посвящена эта работа.

Цель и задачи.

Целью настоящая работы явилась оценка сравнительной эффективности коммерческих диагностических препаратов для РИГА и ИФА в клинической практике и для сероэпидемиологических исследований.

Для достижения поставленной цели нами решались следующие задачи:

1. Изучить возможности оценки эпидемиологической ситуации в отношении эхинококкоэов на модельных территориях в очагах эхинококкозов разного типа: антропогенный очаг однокамерного эхинококкоза в Джамбул-скоя области Казахстана и смешанный очаг однокамерного и многокамерного эхинококкозов в Республике Саха (Якутия);

2. Уточнить и оптимизировать тактику и схему применения иммунодиагностических тестов при проведении массовых обследований населения в очагах эхинококкоэов;

3. Определить иммунологические критерии выявления групп населения. подвергающихся повывенному риску заболевания эхинококкоэами;

4. Определить ценность изучаемых иммунодиагностических препаратов для определения возможности раннего выявления рецидива заболевания.

Научная новизна.

В результате проведенных исследований:

- Обоснована и уточнена схема применения иммунодиагностических тестов РИГА и ИФА с промышленными сериями диагностикумов для раннего активного выявления больных в очагах эхинококкозов и других эпидемиологических исследований;

- Предложено использование показателя величины иммунной прослойки населения, включающей в себя всех лиц с противоэхинококковыми антителами в крови в эпидемиологически значимом титре, для оценки напряженности эпидемического процесса и эффективности профилактических мероприятий в синантропных очагах эхинококкозов:

- Установлена равная диагностическую эффективность коммерческих икмунодиагностических препаратов для РНГА и ИФА, для клинической дифференциальной диагностик» эхинококкозов. а также для оценки эффективности оперативного лечения этих заболеваний и проведения свроэпиденио-

логических исследования

- Разработан микрометод РИГА с коммерческим диагностикумон.

Практическая значимость.

1. Уточнена и предложена к применению в лечебно-профилактических учреждениях схема и тактик-а проведения массовых иммунологических обследований в очагах эхинококкозов с коммерческими диагностикуиами.

2. Разработан микрометод РИГА и оценена его эффективность в сравнении с макровариантом и ИФА.

3. Разработаны иммунологические критерии для определения групп населения очагов, подвергающихся повышенному риску заболевания эхино-коккозами, при применении коммерческих диагностикумов.

4. Показана высокая диагностическая эффективность и перспективность генно инженерных антигенных диагностикунов нового поколения (на примере коммерческого генно инженерного диагностического препарата для ИФА Em2pI us производства ввейцарскоЯ фирми "AFFINITY PRODUCTS").

Апробация работы.

Основные Фрагмента диссертации доложены на: 4-Я Всесоюзной научно-практической конференции "Эпидемиологический надзор за эхииококко-эами" (Чимкент.19Э9): Всесоюзной околе-сенинаре "Фундаментальные и прикладные проблемы медицинской паразитологии" (Москва. 1990г.). Всесоюзной школе "Биология в медицине" (Ленинград. 1990г.). на V Объединенном съезде гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов Казахстана (Алма-Ата, 1991г.), Конференции ВОГ "Методы профилактики и борьбы с эхинококкозами и другими цестодоэами человека и животных" (Москва, 1993г.), на ученой совете в ИМПиТМ. на коллоквиумах отдела медицинской гельминтологии.

Положения, выносимые на защиту.

1. Критерий эпидемиологически значимого уровня регистрируемых лротивозхинококковых антител при проведении массовых серозпидемиологи-ческих исследований с помощью коммерческих диагностикунов

2. Схема и тактика применения инмунодиагностическнх методов для раннего выявления больных а очагах эхинококкозов.

3. Необходимость одновременного использования двух тестов с промышленными сериями диагностикунов и совокупного учета результатов по ним при проведении специфического иммуномониторинга в очагах эхинококкозов .

Структура диссертации.

Работа изложена на 138 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, трех глав собственных исследований, заключения. выводов. Иллюстрирована 29 таблицами и 1 приложением. Библиографический указатель вкличавт 131 работу, в том числе 78 отечественных и 53 зарубежных авторов.

Содержание работы МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИИ.

Объекты исследования. Для проведения клинической дифференциальной знагностики и массового обследования населения пользовались двумя тес-гами - РИГА и ИФА с коммерческими диагностикумаии. производимыми Ставропольским НПО "Аллерген". В начальном периоде работы (1903-19в3гг.) (спользовали диагностические препараты лабораторного изготовления, яо юскольку приготовление их ив отличалось по технологии в условиях кои-

мерческого производства - результаты исследований расценивались нами как идентичиие такоаим с коммерческими препаратами. Всего в массовых обследованиях было использовано 5 серия диагностикума для ЯНГА и 8 серия тест-систем для ИФА. Для каждого обследования брали одну серию препарата.

Материалом для массового обследования населения служили сыворотки и сухие капли крови от лиц. проживающих в очагах эхинококковое. карты эпидобследовання населения, разработанные сотрудниками отдела эпидемиологии и экологии нетрансмиссивных паразитарных болезней ИМПиТМ. от жителей 4 населенных пунктов (пп. Нахара. Тюнгюлп. Павловск и Россоло-да) Мегино-Кангалласского района и 2 насаленных пунктов (пп. Тикси и Кюсюр) Булунского района Якутии, 2 населенных пунктов Свердловского и 1 - Таласского района Джанбулской области Казахстана, полученные при массовом обследовании населения. Всего било обследовано: 2293 жителя Казахстана, из них 566 повторно 4 раза в течение 2 лет с целью изучения показателя заражаемости населения в очагах, периода угасания титров при нереализованном заражении, а также раннего выявления больных; 1902 жителя Якутии, из них - 374 дважды в течение года с целью выявления основных территорий, где происходит заражение эхинококкозами.

Всего было исследовано 4195 лиц и поставлено 17466 серологических реакций.

При разработке архивных материалов лаборатории иммунологии ИМПиТМ были проанализированы данные по 1752 сывороткам от больных однокамерным, 452 - от больных многокамерным эхинококкозами и 182 - от больных другими заболеваниями со сходным клиническим течением. 2.2. Методы исследования. Сыворотки и сухие капли крови были исследованы в двух иммунологических реакциях - РИГА и ИФА. При проведении работы на базе Якутской Респ.СЭС учет ИФА проводился визуально, а при работе в ИМПиТМ - инструментально с использованием многоканального спектрофотометра фирмы IABSYSTEMS Multiscan НСС/340.

Серологические методы исследования. РИГА и ИФА ставили по методике, описанной в инструкции по применению, приложенной к каждому препарату .

Учет РИГА проводили по стандартной 4-х крестовой системе. Диагностическим титром реакции считали разведение исследуемой сыворотки или сухой капли крови 1:320 с интенсивностью реакции не менее +++. При разведениях 1.-320 с интенсивность!) -к- и 1:160 и 1:80 с интенсивностью ■М+ реакцию оценивали как эпидемиологически значимую.

Результат ИФА оценивали при помощи Multiecan НСС/340 по Формуле для тест-системы с АГ E.g. Д-1.6М-Ю.13 (положительный результат) и Э»1.24*0,1 (эпидемиологически значимый результат), с АГ Е.го. Д-1.54М+0.16 и Э-1,03+0.11 соответственно. Диагностическим титром реакции служило разведение сыворотки 1:200. При массовых обследования пробы исследовали в однон разведении.

Сероположительной считали сыворотку или сухую каплю крови, в которой обнаруживали противоэхннокохковые антитела в диагностическом титре и выше в одной из двух или в двух реакциях (РИГА и ИФА). Как эпидемиологически значимую оценивали любую пробу, в которой обнаруживали протхвоэхинококковые антитела в любой из реакций или в обеих одновременно в эпидемиологически значимом титре или в болев высоком. Соответственно в число эпидемиологически оначимих входили й все положи-

талыша пробы.

В связи с изменениями политико-географических наименований районов проведения работ а диссертации ми решили применить географические названия этих регионов.

Статистическая обработка результатов исследований проводилась по критерию Стьюдента.

ИЗУЧЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ И СПЕЦИФИЧНОСТИ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕЫАГГЛЮТИНАЦИИ (РИГА) И И1ШУНОФЕРМШГНОГО АНАЛИЗА (ИОЛ) У БОЛЬНЫХ ЭХИНОКОККОЗАЫИ В КЛИНИЧЕСКОИ ПРАКТИКЕ.

Для уточнения значения чувствительности и специфичности РИГА и ИФА проводился анализ результатов этих методов эа период с 1976 г. по 1990 г.. полученных от больных эхинококкоэами с диагнозом, подтвержденным на операции, а также на сыворотках больных другими заболеваниями с подтвержденным диагнозом отличным от эхинококковое (таблица 1);

Таблица 1

Результаты обследования болышх эхинококкозамн и другими заболеваниями из ЛПУ г.Москвы

Группы сывороток Число сывороток Положительных Отрицательных :

РИГА ИФА «А ИФА* Э РИГА ИФА А ИФА э:

абс.ч. М+га абс.ч. М+т абс.ч. М+т абс.ч. М+т абс.ч. К+т абс.ч.: м+т" :

Больных эхинокок-козом однокамерным 1732 1473 84.1 + 0.9 - 1462 83.4+ 0.9 279 15,9+ 0,9 - 290 : 16.6+ : о.9 :

Больных зхинокок-козом многокамерным 452 406 89,8+ 1,4 418 92,5+ 1.2 - 46 10.2+ 1,4 34 7,3+ 1,2 — :

Больных 182 20 3 20 162 178 162 :

непарази-

тарными 11,0+ 2,7+ 11.0+ 89.0+ 97.3+ 69.о+:

болезнями 2.3 1.2 2.3 2.3 1.2 2,э :

» - Учитывались результаты исследования сывороток в ИФА только

с гомологичным АГ Выявляемость больных многокамерным эхинококковом в обоих тестах несколько выше, чем однокамерным, что можно объяснить, достаточно частой гибелью паразита с последующим обызвествлением или нагноением кисти, приводящая к уменьшению выделения антигенов паразита п кровь. Кроме того редкие локализации эхинококка (в костях, мышцах, сердце, мозгу, глаз у и др.) часто дают лолноотрицатальныв результаты. Специфич-

ность РИГА и ИФА с АГ E.g. практически одинакова - 89,0*. С АГ Е.ш. несколько выше - 97.3%. что объясняется более высокой очисткой антигена н преимущественно печеночной локализацией паразита, что также способствует более эффективному его выявление.

Следующим этапом обработки полученного материала было определение совпадения и несовпадения результатов двух тестов. Лоля совпадений результатов двух тестов (РИГА и ИФА) среди больных многокамерным и однокамерным эхинококкоэами практически одинаковая (90,3+1.4% и 69.6+0.7% соответственно), в тоже время, при несовпадениях результатов ИФА с АГ Е.ш. выявляет большее количество больных альвеолярным эхинококкозом 6.2+1.3% против Э.5+0,9% в РИГА, хотя различия статистически не достоверны (t-1.7). Для больных с однокамерным эхинококкозом выявляемость больных только одной из реакций в обоих тестах практически одинаковая 5,5+0.2 и 4.9+0.5 соответственно. Следует отметить, что доля совпадения результатов среди контрольной группы (больные непараэитарными заболеваниями со сходкой этиологией и здоровые доноры) близка по величине к таковой среди больных эхинококкоэами. Среди больных эхинококкоэами в основном совпадают положительные результаты реакций (78.5+1,0 и 66.3+1.6% соответственно), а среди больных другими заболеваниями - отрицательные результаты - 80.8+2.9*. При несовпадении результатов РИГА несколько чаще дает ложноположительные результаты, чем ИФА с АГ Е.т. 9.3+2,1* и 1,1+0.8* соответственно (различия статистически достоверны t-3.7). тогда как доли ложноположительных результатов в РИГА и ИФА с АГ E.g. совпали и составили 8.7+0,9%.

Отрицательные и сомнительные результаты реакция в основном отмечаются у больных, у которых зхикококкозы были в анамнезе, т.е. через несколько лет после проведения радикальной операции, или в случав гибели или обызвествления паразита, а также при его редкой локализации (мозг, сердце, кости и т.д.). Больных, прооперированных по поводу эхинококков однокамерного без клинических проявлений рецидива, было 41 из них отрицательный результат в РИГА имели 26 (63.4%) и в ИФА с АГ E.g. 20 (48,8*;). Отсюда следует, что при отсутствии клинических проявлений рецидива заболевания РИГА чаще дает отрицательный результат реакции , чем ИФА.

Результаты исследования сывороток больных однокамерным эхинококкозом в зависимости от локализации паразита в организме хозяина свидетельствуют. что наименьшая доля сероположителышх и в РИГА (50.0%) и в ИФА (43,5%) наблюдается при редких локализациях паразита (в костях, в глазу, в почках и т.д.). При эхинококкозе легких доля сароположитель-ных соответственно составила 77.0 и 82,7%. Наибольшая доля серополояи-тельных отмечается среди больных с однокамерным эхинококкозом печени или брюшной полости и при сочетанной (печень+легкие, печень+брюшная ПОЛОСТЬ) локализации: 95,1% (285 нэ 300) В РИГА и 96,0% (283 из 295) В ИФА.

Следует отметить, что обработка такого обширного материала, полученного в течение длительного периода, позволяет считать полученные данные по чувствительности и специфичности исследуемых методов достаточно достоверными, т.к. в этих условиях нивелируются индивидуальные особенности каждой конкретной серии диагностического препарата. Кроме этого, свободная выборка больных позволяет усреднить показатели, получаемые от Солышх иэ разных очагов, разного пола, возраста и проФас-

сии. то есть мы получаем объективные параметры саних используемых методов .

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МАКРО- И ИИКРОМЕТОДОВ Г'НГА.

В ходе проводимых исследований в целях облегчения постановки реакции непрямой гемагглютинации и«ускорения получения ее результатов был разработан микровариант данного теста с применением коммерческого препарата, выпускаемого Ставропольским НПО "АЛЛЕРГЕН".

Методика постановки микрометода РИГА.

1. Приготовление разведения сывороток - сыворотки разводят в фос-Фатно-солевом буферном раствора рн-?.2 с добавлением нормальной кроличьей сыворотки в соотношении 1:2. В этом разведении сыворотки икактивируют на водяной бане при температуре 56' С в течение 30 мин. Затем готовят двукратные последовательные разведения сыворотки (титруют) на планшетах с 1:4 до 1:8192 в обьене 0,025 мл с помощью аппарата Такачи или микропипетки. Делают 2 ряда разведения - длинный (12 лунок) и короткий (6 лунок).

2. В длинный ряд раститрованноЯ сыворотки добавляют по 0.025 мл диагностикума эритроцитарного сухого в каждую лунку (опытный ряд). а а короткий ряд - такое же количество танизированных эритроцитов барана (контрольный ряд). Концентрация диагностикума и эритроцитов - 0.В*, т.е. каждую ампулу диагностикума и эритроцитов разводят в б мл дистиллированной воды.

3. Учет результатов проводят через 1,5 часа по стандартной 4-х крестовой системе. Диагностическим титром считается разведение сыворотки 1:32 с интенсивностью реакции не ниже 3-х крестов.

Оба варианта РИГА сравнивали на сыворотках 149 больных эхинокок-козом однокамерным, 115 - эхинококкозом многокамерным и 197 лиц контрольной группы, в которую вошли больные с поражениями печени и легких непараэитарной этиологии (онкологические заболевания, туберкулез, цирроз печени и др.) и доноры крови.

При однокамерном эхинококхоэе чувствительность двух методов оказалась одинаковой и составила для какрометода 85.2+2,5*. для микрометода - 86.6+2.7%. При многокамерном эхинококкоэе прослеживалось некоторое превышение чувствительности микрометода по сравнению с макрометодом - 82.6+3.5 и 73.9+4,1* соответственно, однако выявляюциеся различия не достоверны (при р<0,05 t-2). Специфичность микрокетояа, установленная на сыворотках контрольной группы, соответствовала таковой макрометода (различия статистически недостоверны) и равнялась 97,9+1.0 и 94,4+1.6* соответственно.

Совпадение результатов макро и иикронетода РИГА достаточно велико, особенно в контрольной группе - 97.5+1,1*. Несовпадение результатов наблюдалось в среднем в 3.0+1.0* случаен, причем с сыворотками контрольной группы ложноположительние результаты в обоих методах встречались примерно с одинаковой частотой (3 в макро- и 2 в микроието-де). Сыворотки больных в микрометоде чаце давали положительный результат. чем в макрометоде, хотя различия статистически недостоверны.

Сравнение ИФА и микро PITA било проведено на сыворотках больных с подозрением на эхинококкозы, поступавших в лабораторию иммунологии из ЛПУ г.москвы. Степень совпадения результатов достаточно высока -91,0+1,5*. что вполне соответствует результатам совпадения с накроие-тодом РИГА.

Ыикрометод является не менее эффективным, чем макрометод РИГА, а с учетом его большая экономичности (1 комплект коммерческого диагнос-тикума может быть использован для 36 обследуемых вместо 12 в мак-ро-РНГЛ) и быстроты получения результатов (1.5 часа вместо 18). он может бить рекомендован к широкому применению в клинической диагностике, а особенно при массовых иммунологических обследованиях в очагах эхинококковое. Для постановки РИГА микрометодом может применяться автоматическое оборудование, разработанное для ИФА. в частности "А^ойгор", а также многоканальные микропипетки, что повышает быстроту и точность проведения анализа.

РЕЗУЛЬТАТЫ СРАВНИТЕЛЬНОГО ИЗУЧЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ТЕСТ-СИСТЕМ ИММУНОФЕРМЕНТКЫХ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К АНТИГЕНАМ ЭХИНОКОККОВ ОТЕЧЕСТВЕННОГО И ШВЕШАРСКОГО ПРОИЗВОДСТВА.

Исследования, предпринятые нами совместно с коллегами из Института паразитологии в г.Цюрихе (Швейцария), были направлены на изучение сравнительной эффективности тест-систем иммуноферкентных для определения антител к антигенам эхинококков отечественного и швейцарского производства с иельс выяснения возможности перекрестного применения данных тест-систем в Швейцарии и на территории России и проверки влияния ■такмовых различия эхинококков на диагностические возможности тест-систем, приготовленных из антигенов, полученных из . лабораторных культур эхинококка многокамерного, а также генно инженерным путем. В задачи исследования входила сравнительная.эффективность ИФА тест-систем для дифференциальной диагностики однокамерного и многокамерного эхинококков.

Работа проводилась в два этапа. На первом этапе исследовали сыворотки от 407 практически здоровых жителей очагов эхинококкоза, нахо-. дящихся на территории Якутии, а также сыворотки - 13 проб - больных зхинококкозами (диагноз установлен на операции) и лиц с диагнозом "эхинококкоз". установленным на основании клинических проявлений заболевания. - 10 проб. В группе сывороток от практически здоровых жителей очага совпадение результатов отличных от отрицательного при сравнении отечественной и швейцарской тест-систем наблюдалось лишь в 3-х случаях (0.7+0.4*). тогда как совпадение отрицательных результатов было отмечено у 371 человека, что составило 91,2+1,4%. Доля результатов положительных и сомнительных результатов в сумме составила для отечественных тест-систем с АГ однокамерного эхинококка - В, с АГ многокамерного -16. в швейцарских тест-системах с Ет2 - 13. с неочищенным АГ Е.ти1111оси1аг]в (СН-10) - А. как видно из представленных данных различия недостоверны, поэтому нельзя отдать предпочтение какому-либо ди-агностикуму.

Наибольший интерес на первом этапе работы представили результаты исследований, полученные с сыворотками больных с оперативным или клиническим диагнозом "эхинококкоз". Из 4 сывороток больных многокамерным эхинококкозом с оперативно подтвержденным диагнозом в отечественной тест-системе все дали положительный результат с обоими антигенами, две из них дали также положительный результат и в швейцарской тест-системе с АГ Ет2. У больных с оперативно подтвержденным диагнозом однокамерного эхинококкоза бил получен положительный результат с обоими антигенами в отечественной тест-системе во всех девяти случаях, в швейцарской тест-системе с АГ Ет2 был получен положительный результат в 7 случаях.

Эти данные свидетельствуют о том. что даже высокая очистка антигенов к сожалению не дает достаточно достоверной диФФеренцировки двух видов паразитов.

На втором этапе работы исследовались сыворотки от больных с диагнозом эхинококкоз (альвеолярный или гидатидозный). подтвержденным на операции, с другими точно установленными диагнозами "(трихинеллез, описторхоэ. Фасциолеэ, онкологические заболевания печени и головного мозга), взятые иэ банка лаборатории иммунологии, а также от практически здоровых лиц - всего 92 пробы.

На этом этапе исследования с использованием коммерческих ИФА тест-систем НПО "Аллерген" (г.Ставрополь) для диагностики эхинококка однокамерного и многокамерного, а также для диагностики эхинококка многокаморного, основанной на применении комплексного антигена E.multilooularis Em2plug Фирмы "AFFINITY PRODUCTS" (Швейцария). Антиген Em2plu9 представляет собой смесь генно инженерного антигена II/3-10 и аФФинно очищенного антигена E.multi locularis Eni2.

Большинство результатов у больных альвеолярным эхинококкозом совпали во всех трех тестах - в одном случае Ет2р1из тест-систена показала отрицательный результат при положительном результате в обеих отечественных тест-системах и в одном случае результат бил прямо противоположным - Em2plus - показала положительный результат при отрицательном с АГ однокамерного и многокамерного эхинококков отечественного производства. При исследовании сывороток больных гидатидоэним эхинококкозом все. кроме одного результаты в отечественных тест-системах совпали (в случае несовпадения, положительный результат был получен с антигеном гидатидоэного эхинококкоза).

Как видно из таблицы 2 чувствительность тест-систем с АГ Е.muí tilocu)aria одинаковая. Специфичность их в отношении сывороток больных другими гельминтозаки и непараэитарными заболевания также близкая (различия статистически недостоверны - р>0.5). однако следует отметить, что Era2plus дал перекрест только с сыворотками больных онкологическими заболеваниями (2 иэ 18; 11,1+7.4%). Основным отличием является высокая перекрестная реактивность антигенов эхинококков обоих видов в отечественных тест-системах. выявляемая по совпадению положительных результатов тестирования сывороток больных различными видами эхинококков в гетерогенных тестах. В этих случаях уровень положительных реакций сывороток больных практически одинаков в обеих тест-системах не зависимо от вида эхинококка, т.е. мы наблюдаем практически абсолютный перекрест. Доля серогголожительиых среди больных альвеолярным эхинококкозом в тест-системе ИФА E.g. составляет 90+4,5», доля лиц с гидатидоэним эхинококкозом положительно реагируваих с АГ Е.т. 64+9,6*. тогда как в тест-система Bn2plus таких больных только 16+7,3* (различие статистически достоверно р<0.05, t-З.б). Таким образом очевидным преимуществом антигена Вп2р]ив является возможность дифференциальной диагностики двух видов паразитов - уровень перекреста в ней гораздо ниже.

Проведенные исследования показали, что все три иммуноферментных тест-системы являются достаточно чувствительными и высоко специфичными при проведении дифференциальной диагностики при наличии клинических проявлений заболеваний. Причем тест-систена швейцарского производства позволяет даже проводить дифференциальную диагностику двух видов эхи-

Таблица 2

Сравнительная оценка специфичности тест-систем ИФА на эхииококкозы производства НПО"АЛЛЕРГЕН" и Фирмы "AFFINITY PRODUCTS"

: í Результаты в ИФА

группы : :_

исследованных : ;тест-систени НПО"Аллерген ¡тест-система Фирмы

сывороток .'Число:--------------------------¡AFFINITY PRODUCTS

¡cubo-! АГ Е.mult.! АГ E.gron. ! АГ Em2plus

: ¡абс.ч.: % ¡абс.ч.! % ¡абс.число! X

ГРУППА БОЛЬНЫХ ЭХИН0К0КК03АМК Больные альвеоляр- 20 1В 90+4,5 18 90+4.5 18 90+4.5

ним эхинококкозом

Больные гндатидоэ- -25 . 16 64+9,6 17 68+9,3 4 16+7,3

ним эхинококковом

КОНТРОЛЬНАЯ ГРУППА Контрольная 47 е 17,0+5,5 8 17,0+5.5 2 4.3+2,9

группа(всего)

Больные трихинеллезом 11 0 0 2 18,2+11,6 0 0

Больные Фасциоле-

зЬм 3 1 33.3+27,9 0 0 0 0

Больные опистор-

хозом 9 3 33.3+15,7 2 22,2+13,9 О О

Больные непара-

зитарнымн боле- 18 4 22,2+9,4 4 22.2+9.8 2 .-11.1+7

зняки

Практически 6 0 0 0 0 о О

здоровые

нококков. Следует также отметить, место жительства больных альвеолярным эхинококкозом никак не повлияло на чувствительность тест-системы с АГ Ет2р1иэ. что делает возможным ее применение при массовых обследованиях в очагах многокамерного эхинококкоэа, расположенных на Чукотке и в других Северных и Восточных регионах России. Однако остается открытым вопрос о возможности ранней диагностики эхинококкозов при помощи тест-системы Ет2р1ив до появления у больного клинически выраженных признаков болезни.

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ ВОДОПОЛЬЗОВАНИЯ НА ТЕЧЕНИЕ ЭПИДЕМИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ В ОЧАГАХ ЭХИНОКОККОЗОВ В ЯКУТИИ С ПОИОЩЬЮ СЕРОЭПШЮЖОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ В коде исследований, проводимых в очагах ахинококкоэоо в раолич-

них регионах страны, решался вопрос о путях и Факторах передачи ккла-зии в них. Одним ил критериев, по которым оценивали контакт населения очага с инвазионным материалом, являлись данное массового иммунологического обследования.

По данным литературы чаше всего инвазируются лица, имеющие прямой контакт с собаками (В.Б.Мартыненко и соавт.. 1983г.: И.Г.СаФронов, С.И.Исаков. 1981г.). Существует также предположение, что риск заражения местного населения этими гельминтами существенно возрастает при использовании в качестве источников водоснабжения мелких бессточных водоемов (а частности термокарстовых озер в Якутии). в которых могут накапливаться и длительное время сохраняться онкосФеры эхинококков.

Работа проводилась в Ыегино-Кангаласскон районе Якутии, где различные группы населения используют в качестве источников водоснабжения воду термокарстовых озер и воду р.Лена.

Более трети жителей обследованных поселков (Павловск, Нахара. Тюнгюлю и Россолода) содержат собак, которые днем содержатся ча привязи, а ночью их спускают. Собаки имеют возможность ловить грызунов как на территории поселка, так и в близь лежащей тайге, что дает им возможность заражаться многокамерным эхинококковом и делает их опасным источником инвазии для населения.

По архивным материалам в Иегино-Кдигалассом районе Якутии за период с 1970 по i960 гг. частота регистрации эхинококкоэов на_10000 населения в поселках с озерным типом водопользования составила 34.9. а с речным - 10,4 (различия статистически достоверны, р<0,05, t-3.9).

По результатам массового иммунологического обследования населения видно, что в поселках Павловске и Нахарв лица, положительно реагирующие в РИГА и ИФА, встречаются с близкими по значению частотами (В.4+1.2 и 12,1+2,0*. t<2) . Для выявления роли води как Фактора передачи инвазии в очаге были проанализированы результаты иммунологического обследования лиц наименее тесно контактирующих с источником инвазии (в данном случае собаками). а именно у женщин не содержащих собак и не связанных с обработкой мехового сырья. В Нахаре у этих лиц, противоэ-хинококковые антитела регистрировались в 2.2 раза чаще (t-2.7: Р-0,05). чем у аналогичного контингента в Павловске. Эти данные с учетом одинакового хозяйственно-бытового уклада жизни населения обоих поселков могут с болыаой степенью вероятности свидетельствовать о болов высокой степени загрязнения инвазионным материалом элементов овруюин щей среды в п.Нахара по сравнению с Павловском.

Поскольку источником инвазии в населенных пунктах Якутии являются в основном собаки (В.В.Мартыненко и соавт., 1984г.), то. изучая загрязнение элементов внешней среды испражнениями собак, можно с известной степенью вероятности охарактеризовать и особенности распространения во внешней среде инвазионного материала.

При копро-овоскопическом исследовании Фекалий 81 собаки яйца гельминтов обнаружены у 19 животных. Причем яйца аскаридат плотоядных Toxocara canis и Toxocara leonino зарегистрированы в 15.9* случаев, онкосФеры тениид в- 9,6*.

Источником оккосфер тениид на территории населенных пунктов, помимо собак, в Якутии могут быть люди и птицы, а указанных аскаридат -только собаки (кошки в изучавшихся поселках встречались крайне редко). Принимал во внимание ото условие, им попытались использовать ляца

- и -

T.cnniB и Т.leonina в качестве маркеров для оценки закономерности распределения онкосФер эхинококков на территории данных поселков.

Данные показывают. что в Нахаре яйца гельминтов, в том числе и аскаридат плотоядных, встречаются значительно чаще (различие статистически достоверно) в донных отложениях озер, чем в почве селитебной зоны. В противоположность этому в донных отложениях р.Лены вблизи Павловска обнаружено только одно яйцо токсокар в то время как в почве этого населенного пункта яйца аскаридат плотоядных встречались часто и в более высоких концентрациях. Мы предположили, что онкосферы. сохраняющиеся в воде до нескольких месяцев, накапливаются в донных отложениях. При попадании в реку (р.Лена в Павловске) они выносятся за территорию населенного пункта. При существующем способе взятия воды иэ открытых водоемов, она интенсивно перенашивается с донными отложениями и в таком виде доставляется потребителю.

Озерная вода, как показал опрос населения, не употребляется для питья в сыром виде, ко ее широкое использование для хозяйственно бытовых нужд повитает вероятность попадания инвазионного материала жителям поселков. Этим в определенной степени можно объяснить различия в частоте обнаружения противоэхинококковых антител и заболеваемости эхи-нококкоэани населения поселков с озерным и речным видами водопользования.

При более широком рассмотрении результатов массовых иммунологических обследований населения пп. Нахара. Павловск. Россолода и Тюнгю-лю. проведенных в Мегино-Кангаласском районе Якутии, мы попытались подучить результата позволяющие определить группы населения, подвергаю-вие повышенному риску заражения эхинококкозами,

При сравнении полученных результатов в зависимости от пола, возраста и рода занятий статистически значимых различий между показателями серопозитивности различных групп населения получено не было, что может свидетельствовать либо о том. что как таковых групп риска среди населения рассмотренных очагов не существует, либо о том. что взятые для обследования выборки иэ популяции были недостаточно репрезентативны.

Различия в показателях РИГА и ИФА и в данном случав не дают возможности выделить какую-либо из реакции как более информативную. В этом можно убедиться если рассматривать данные полученные по каждому из обследованных поселков, т.к. различия полученные при применении этих методов статистически не достоверны.

ИЗУЧЕНИЕ ЭПИДЕМИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ В ОЧАГАХ ЗХИНОКОККОЭОВ РАЗНОГО ТИПА ПУТЕМ ДИНАМИЧЕСКИХ СЕРОЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИХ ОБСЛЕДОВАНИИ НАСЕЛЕНИЯ.

Экологическая структура очагов однокамерного и многокамерного зхинококкоэов. а также характер протекающих в них эпидемических и эпизоотических процессов имеют свои особенности на территориях различных клинатогеограФических зон. Их изучение возможно только с использованием данных серозпкдемиологических обследований полученных в динамике. Нами было проведено два таких обследования.- в Булуиском р-не Якутии 1983 - 86гг. - массовое иммунологическое обследование детей школьного возраста в п.п.Кюсир и Тикси .• в Джамбулской обл. Казахстана в 1988-90гг било обследовано население п.п. Тагистык. . Талапты и им.40-летня Октября. В результате этой работы были получены следующие результаты.

В Якутии обследование проводилось трехкратно. В апреле 1985 г. било первично обследовано 465 учащихся и было выявлено 22 человека положительно реагировавших в иммунологических тестах (учет велся по совокупности 3-х тестов РИГА. ИФА С АГ эхинококка однокамерного и ИФА с антигеион эхинококка многокамерного) .

В у лиц с отрицательными результатами первого- обследования, во втором обследовании било выявлено 43 (14,1%) человека с положительными титрами антител хотя бы в одной из реакций. У школьников проводивших каникулы в тундровой зоне, положительные результаты в РИГА регистрировались с той же частотой, а в ИФА - чаще, чем у выезжавших в таежную зону. На основании этих исследований можно предположить, что во время летних каникул школьники контактировали с инвазионным материалом, на что указывает появление в их крови антител к антигенам эхинококков. Среди школьников, отдыхавших в таежной зоне Якутии, зарегистрировано большее число лиц с противозхинококковыми антителами, выявленными в ИФА.

Весной 1986 года удалось обследовать в третий раз 54 человека. имевших противоэхинококковые антитела в крови при первичном или повторном обследовании. Повторно антитела были зарегистрированы в ИФА 2 человек, дававших положительный результат при первом обследовании, в РИГА на было получено положительных результатов. Из 43 человек имевних положительный результат реакции при повторном обследовании 10 дали положительный результат в ИФА и 1 в обеих реакциях. Таким образом положительный результат через год сохранился в 9% случаев, а через 7 месяцев - около 25%. Эти результаты совпадают с ранее проведенными многолетними наблюдениями за жителями энденичной по многокамерному эхино-коккозу зоны Якутии (среднее течение р.Вилюй! (А.Г.Шакаров, В.Б.Марти-ненко.19В4г.).

Проведенные исследования подтвердили предположение выдвинутое А.Г.Макаровым в 1985г. о том. что положительные результаты, полученные при однократном иммунологическом обследовании населения эндемичной территории свидетельствуют о возможной встрече паразита и хозяина. Для доказательства реализации заражения в патологический процесс говорят только стабильные или нарастающие значения титров антител.

При изучении совпадения двух тестов выяснилось, что оно чаще наблюдается среди отрицательных результатов, и эти показатели практически не зависят от применяемого антигеиа. На основании этого можно предложить при массовом обследовании брать только одну иэ ИФА тест-систем в зависимости от преобладающей нозоФормы (эхинококкоз однокамерный или многокамерный) в конкретной очаге.

Несовпадения в показаниях РИГА и ИФА выявляются, по навему мнению, в результаты различий в антигенном составе тех компонентов цельного антигена эхинококка, который адсорбируется на различных носителях (таииэированные и Форналиэированные эритроциты барана и полистироловые планшеты), используемых в данных тестах. Принимая во внимание этот Факт, при массовых обследованиях следует использовать параллельно оба теста. Но по экономическим соображениям можно рекомендовать в качестве скринингового теста ИФА с гомологичным антигеном, а РИГА использовать в качества уточняющего с раститровкой сывороток. Так в Якутии, где в структуре очагов, расположенных в таежной зоне, преобладает многокамерный эхинококк (1.-9 по данным А. И. Немировской с соавт.. 1980). пред-

почтительнее использовать гомологичную тост-систему ИФА с антигеном многокамерного эхинококка.

Продолжением описанной работы явилось изучение эпидемиологической ситуации в еинангропном очаге однокамерного эхинококкоэа в Джамбулской области Казахстана, проводившаяся на протяжении 1988-1990 гг. Исследования проводились с целью проварки возможности раннего активного выявления больных в очаге этой инвазии. Для этого били выбраны три поселка

- в Свердловском района - к/з 40 лет Октября (центральная усадьба) и с/х им .Б.И.Чапаева (п.Тегистык). а также п.Талапты Таласского района Джамбулской области КаэССР.

Регистрируемая заболеваемость эхинококкозом на этой территории за последние 10 лет: в п. Талапты составила 5 больных (1500 жит.) в к/х-эе 40 лет Октября - 2 больных (2100 жит.) в с/х-эе им.В.И.Чапаева

- 3 больных (2500 жит.). При сравнении результатов иммунологических исследований, по каждому поселку, установлено, что различия между результатами отдельных обследованиями в них не существенны (р>0.05). Этот Факт позволил нам усреднить результаты по всем четырем обследованиям. проведенным в каждом поселке, и на их основании сделать вывод о различиях в эпидемиологической ситуации. Наибольшая доля эпидзначимых результатов иммунологических реакций была отмечена в п.Талпты - в среднем она составила по данным РИГА - 16.5-ю.8*. ИФА - 7.8+1,5%, в двух других поселках зарегистрирована меньшая доля эпидзначимых - в с/х.им В.И.Чапаева - 4.6+0.8% и 5.1+0.8%. в к/х им. 40 лет Октября -4,5+0.9* и 6,2+1,1* соответственно (р<0,05). При сравнении результатов. полученных в к/х дм. 40-летия Октября и с/х им. В.И.Чапаева, таких различий не выявлено. Таюнм образом, очаг инвазии в п.Талапты можно считать более напряженным, чем в двух других поселках (им.В.И Чапаева и км.40-летия Октября).

Отсутствие статистически значимых различий в результатах РИГА и ИФА при полевых исследованиях, а также их близкая диагностическая эффективность позволяет рекомендовать оба теста для скринингового обследования населения с целью раннего выявления больных в очаге.

При проведении работы мы попытались установить, как часто следует проводить дообследование сароположительных лиц для выявления реверсии титров. Обследования проводились со следующей периодичностью: май 1988г.- были обследованы п.п. 40 Лет Октября и им.В.И.Чапаева (Свердловский р-н); октябрь 1988г. (4 мес.) - те же поселки,- май 1989г. (6 мес.) - те же поселки + п.Талапты {Таласский р-н); сентябрь 1989г. (4 нес.) - те же поселки; январь 1990 (3 мес.) - только п.Талапты. Часть населения (в основном школьники) обследована в динамике. Четырехкратно обследовано 586 человек. Из них положительную реакцию в РНГА давали 83 "человека, в ИФА - 101 (хотя бы в одном обследовании). Как правило у большинства ссроположительных наблюдалась реверсия титров в течении этих сроков, однако у некоторых лиц титры антител оказались более стабильными: для ИФА в среднем у 1* во всех 4-х обследованиях и для РНГА в среднем - у 0.5*. Клиннко-инструментальноа дообследование после повторного иммунологического обследования было проведено у 12 человек и у одного из них (девочка 1981 г. р.) обнаружена эхинококковая киста печени диаметром 3 см.

Чаце всего повторяются отрицательные результаты обоих методов, значительно реже повторяется положительные результаты, однако следует

отметить, что однократное появлонио положительных результатов и в РИГА и в ИФЛ встречается значительно чацв, чем двух-, трех- или четырехкратное их появление - в среднем от 1 до 3.1"* в РИГА и от О. 2 до 2.5* в ИФЛ. Полученные данныо позволяют говорить о взаимозаменяемости ИФА и РИГА для изучения эпидемиологической ситуации, а также для проведения иммуномонигоринга очага. Поскольку неоднократное появление' антител в крови встречается достаточно редко - это облегчает диспансерный учет лиц с подозрением на заболевание эхинококкозами.

Совпадение результатов РИГА и ИФА среди больных эхинококкозом однокамерным встречается в 89.6+0,7* случаев среди больных с другими диагнозами 82.4+2.8*. Нами была проделана работа по определению степени совпадения используемых тестов при массовом обследовании населения 88.7+0.4*. Различия между данными величинами статистически недостоверны <р<0.05Ь следовательно, можно утверждать, что характер выборки (больные эхинококкозами. больные другими заболеваниями или практически здоровые лица) на влияет на долю совпавших результатов по двум реакциям. Однако если сравнить долю совпадения положительных и отрицательных результатов, то станет очевидно, что среди лиц обследованных в очаге в основном присутствуют здоровые - так доля совпавших положительных (в диагностическом титре) результатов среди больных 89.6+0,7*. а среди жителей очага - 0,5+0.03*.

Поскольку доля совпадений положительных результатов 2-х реакций среди больных эхинококкозами не достигает 100*, то при проведении эпидемиологических исследований целесообразно не только брать в расчет эпидемиологически значимые результаты совпавшие в обоих тестах, но и рассматривать как эпидемиологически значимые любые пробы, в которых получен эпидемиологически значимый результат хотя бы в одном из тестов. Это необходимо как для оценки эпидситуации, так и для раннего выявления больных, так как появление антител в эпидемиологически значимом количестве может свидетельствовать о контакте с инвазионным материалом, а следовательно и о риска заболевания эхинококкозами.

С целью унификации исследуемых показателей была разработана карта эпидемиологического обследования жителя очага и схема проведения иммунологического мониторинга (данные представлены в статье Г.И.Подоприго-ра. Т.В.Старкова "Метод иммунологического мониторинга при массовых обследованиях населения в очагах эхинококкозов" в книге "Эхинококкоэы. Методы исследований, лечения, профилактики" 11, 1990г.)

ВЫЯВЛЕНИЕ КОРРЕЛЯЦИОННЫХ СВЯЗЕЙ МЕЖДУ ОСНОВНЫМИ ПОКАЗАТЕЛЯМИ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩИМИ ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС ПРИ ЭХИНОКОККОЗАХ.

Исследования проводились в синантропных очагах, расположенных на территории ДжамбулскоЯ области в выше перечисленных поселках

Основными показателями, характеризующими эпидемический процесс при эхинококкоэах в синантропных очагах были избрани: пораженность эхинококками основных источников инвазии (собак). степень обсеменен-ности объектов внешней среды онкосФерами тениид. а также уровень серо-позитивности населения и пораженность промежуточных хозяев (овец).

Для выявления корреляционных связей между основными источниками (собаками) и промежуточными хозяевами (овцами) инвазии а очагах эхинококкозов нами проведен анализ данных по пораженности молодняка убойных овец, а также зараженности поселковых и чабанских собак в зависимости от сезона года. Исследования проводились сотрудниками Отдела эпидемио-

логин и экологии нетралсмнссивных паразитарных болезней ИИПиТМ им.Е.И.Ыарциновского. Дхамбулского отдела ВИГИС и Джамбулской областной ветеринарной станции. Обследование собак проводилось в соответствие с Инструкцией Госагропрома СССР (1989). путем диагностической дегельминтизации 1%-м раствором бронисто-водородного ареколина. Всего было исследовано 2940 туш убояных овец и продегельмкнтизировано 129 собак.

Наибольшая поражеиность эхинококкозом овец отмечается в летний период (2Э.2*+4.4). а наименьшая - в весенний (12.8**3,1). Осенью (16.7**3.4). по сравнению с летом, происходит резкое снижение поражен-ности животных, а затем - постепенное повышение этого показателя к зимнему периоду (до 19.0**2,9).

Наибольшая пораженность эхинококкозом собак отмечается осенью (12,7+3.4«) и весной (11,5+3,0*). В момент массового убоя овец (весна, осень), нх внутренние органы скармливают собакам, что приводит к заражению последних. Учитывая сроки преимагинального развития Е.дгапи1озиа у собак (48,3+2,4 дня) (В.Б.Ястреб,®.К.Скворцова,1990). разница между временем убоя овец и максимальной' зараженностью собак должна в среднем составлять 1,5 месяца, что и отмечено в наших исследованиях: апрель-май и сентябрь-октябрь, соответственно.

Существует прямая зависимость лоражекности окончательных хозяев от промежуточных с временным интервалом в 1-1,5 месяца (г - +0,36).

Из объектов внешней среди наибольшему обсеменению в синантропном очага зхинококкоза подвергаются почва н шерсть собак. Поэтому они и были выбраны нами в качестве основных показателей, характеризующих степень обсеменения внешней среды онкосФерами тениид (исследования проводились сотрудниками Отдела' эпидемиологии и экологии нетрансмиссивных паразитарных болезней ИИПиТМ).

Анализ полученных данных показывает, что наибольшая экстенсивность их обсеменения отмечается в осенний (почва - 51.4+6.1*. шкуры -33.7+5.1* положительных проб) и весенний (почва - 42,3+6.1*, шкуры -29,6+4,8* положительных проб) периоды. Сопоставляя данные обследования животных и обследования объектов внешней среды можно отметить, что. при максимальной степени пораженности собак в осенний и весенний периоды (31,7* и 28.0*. соответственно) отмечается и наибольшая степень обсеменения онкосФерали почвы и шкур собак, т.е. существует прямая зависимость между этими показателями (г - +0.42).

Для выявления корреляционных связей между показателями уровня се-ропоэитивности населения и другими Факторами нами проведен анализ результатов кассовых серологических обследований с применением РНГА и ИФА в синантропных очагах зхинококкоза в течение 3-х летнего периода. Пробы крови отбирались у лиц. подверженных повышенному риску заражения: у чабанов, членов их семей, ветработников, стригалей, а также у проживающего в очаге населения в 25%-ной свободной выборка. Анализ полученного материала проводили по совокупности диагностических и положительных результатов а двух реакциях. Всего проведен анализ 2990 проб.

Наибольшего значения этот показатель'достигает зимой' (29.9+5,8*), а наименьшего - весной (7,5+2,7*) и осенью (10,7+3.1*). Таким образом, отмечается прямая зависимость показателя уровня серопоэитивности населения от поражакностм окончательных хозяев и степени обсемоненности

объектов вношной среди с временным интервалом в 2-3 косяка (г • ♦0.29).

Параллельно были проведены исследования по определению зависимости уровня серопоэитивности населения в очагах от наличия и способа содержания собак. При свободном содержании животных данный показатель составляет 21.2+9.0%. при привязном - 21,3+7.3%. а у не имёющйх их в личной собственности - 13.3+4.3%.

Данные, характеризующие риск заражения различных групп населения в зависимости от способа содержания собаки показывают, что иаибольвему риску подвержены дети (21,3+4.6% положительных результатов), а наименьшему - взрослое мужское население (7.9+2.9% положительных результатов) . Причем, у детей отмечаются наивысшие показатели при всех способах содержания собак-. 22.7+4.3% - свободное, 19.5+4.9% - привязное и 17.1+4.6% -'при отсутствии собаки, а у мужчин - наименьпие (9.4+4.2%. 5.7+2,1% и а.6+2.6%, соответственно).

В связи с этим была изучена зависимость уровня серопоэитивности различных групп населения от характера и вида их деятельности. Установлено. что уровень серопоэитивности населения в зависимости от профессий как по взрослым (чабаны и животноводы - 25.0+8.0%. колхозники и служащие - 22,1+9,4%). так и по детям (32,3+8,8% и 38.9+7.3% соответственно) не имеет достоверной разницы. Таким образом, не представляется возможным выделить профессиональные группы повышенного риска заражения эхинококкоэом. Практически все население, имеющее контакт с собаками в подобных очагах имеет реальную возможность заражения данной инвазией.

ВЫВОДЫ

1. Установлена одинаково высокая эффективность двух наиболее широко применяемых коммерческих иммуиодиагностических препаратов для диагностики эхинококкозов в реакции непрямой гемагглютинации и иммуно-ферментного анализа. Показатели чувствительности и специфичности составили соответственно: а РИГА для больных однокамерным эхинококкоэом 84,1+0,9% и 89,0+2.3%, а для больных многоканерним эхинококкоэом -89,8+1.4% и 89,0+2,3%. Эти же показатели в ИФА составляли соответственно для больных однокамерным эхинококкоэом соответственно 83,4+0.9% и 89,0+2.3%. а для больных многокамерным эхинококкоэом -92,5+1,2% и 97,3+1,2% ^<1,96/ р>0.03).

2. Оба изученных коммерческих диагностикума показали наибольшую вФФвктииноеть при дифференциалшЛ млт<ьгм€ <мишйяерй«г# мшш-коэа печени, брюшной.полости. сочетаниой локализации (печень+легкие, печень+брюиная полость) и множественном поражении легких - 95.1+1.3* (в РИГА), и 96.0+1,2% (в ИФА) случаев. Чувствительность РИГА и ИФА ограничена (около 50%) при диагностике солитарного поражения легких и при редко встречающейся локализации паразита (мозг, сердце, кости и т.п.) .

3. Однократное послеоперационное иммунологическое обследование больного с помощью РИГА и ИФА не дает достоверной оценки радикальности лечения (доля положительны* а РИГА составляет около 30*. а в ИФА около 50%). Наличие рецидива можно установить при достаточно длительной, свыше 2-х лет. послеоперационном иммуномониторинге. выявляющем стойкое сохранении титров антител.

4. организация массовых иммунологических обследований населения

очагов эхинококкезов должна предусматривать ежегодное наблюдение в динамике за выявленными в скрининге сероположительными лицами. Наличие стойкого^ увеличивающегося титра антител (в РИГА и (или) в ИФА) указывает на реализацию инвазии в патологический процесс.

5. Установлен эпидемиологически значимый уровень противоэхикоко*;-кових антител н крови (для РИГА - титр >1:80. и для ИФА вычисляемый по Формуле ЗУ»1.2И+0.1 для ИФА Е.g. и ЭУ-1,1+0.11 для ИФА Е.ш. или ЭУ-И+26). характеризующий лиц с трудно выявляемыми Фирмами эхинококковой инвазин. необходим при изучении особенностей эпидемиологического процесса в очагах эхинококкоэов и анализе результатов.

6. выявлена положительная корреляция (Г-+0.29) показателей серологических и санитарно-гельминтологичаских показателей, позволяющая рекомендовать использование данных иммуномониторинга населения для оценки эпидемической ситуации в очагах эхинококкоэов; при этом важно использовать совокупные данные двух тестов (РИГА и ИФА),

7. Разработан микрометод постановки РИГА со стандартными коммерческими диагностикумамн. существенно ускоряющий (учет результатов микро РИГА через 1.5 часа вместо 1В часов для макро РИГА) и упрощающий (можно использовать оборудование для ИФА) проведение специфической иммунодиагностики эхинококкоэов и повышающий эффективность полевых скри-нинговых сероэпидемиологических исследований.

8. Применение высокочувствительных коммерческих препаратов позволяет унифицировать результаты- иммунодиагностическнх исследования и обеспечивает сравнимость данных, получаемых в различных очагах этих инвазий.

Параллельное применение коммерческих тест-систем, основанных на высоко специфичных генно инженерных антигенах Е.multilocularis, в значительной степени повышает эффективность дифференциальной иммунодиагностики двух козоформ эхинококкоэов, что является перспективным направлением совершенствования диагностикуиов.

Результаты исследований использованы для:

1. Коллективной монографии "Эхинококкозы: методы исследований, лечения, профилактики" Москва, 1990.

2. Обучения специалистов сети практического здравоохранения.

3.Проведения массовых мероприятия по борьбе с эхинококкозамн (раннее выявление больных, оценка эффективности лечения собак) в очагах эхинококкоэов.

Л. В организации практической клинической диагностики эхинококкоэов в лаборатории иммунологии ИЛПиГК (кикрометод РИГА).

Публикации.

Основные положения диссертации опубликованы в печатных 12 работах, из них 3 в центральной печати.

Основные публикации по теме диссертации:

1. В.Б.Иартиненко. Н.А.Романенко. Т.В.Старкова. т.А.Лосева. Н.Е.Баллад, л.В.Русак. В.И.Суворина. Н.Г.Андреева. (1986) Особенности эпидемиологии эхинококкоэов в населенных пунктах Якутской АССР с различным типом водопользования. //Над.паразитология и паразитарные болезни. N 3. с.

2. Леяккка Е.С.. Зорихина В.И.. Баллад Н.Е., Старкова Т.В. (1987)

Иммунологические методы диагностики эхинококкоаов// В сл "Диагностика и лечение эхинококкоза" Тез. докладов Всесоюэ. науч. конФ. 12-13 октября. Баку. С. 27-29.

3. Старкова Т.В., Зорихина В.И. (1987) Сравнительная характеристика макро- и микрометода реакции непрямой гемагглютинации при эхино-коккозе и альвеококкоэе.//В сб. "Диагностика и лечение эхинококкоза" Тез.докладов Всесоюз. науч. конФ, 12-13 октября. Баку. С.10.

4. Ыартыненко В.Б.. Старкова Т.В.. Баллад Н.Е.. Зорихина В.И.. Суворина В.И.. Орехов И.В.. Швец В.И. (1987) Динамика показателей реакции непрямой гемагглютинации и иммуноФерментного анализа с антигенами эхинококков у учащихся интерната из тундровой и таежной зон Якутии. // Ыед.паразитол. и паразитар.болезни.- N 2. - С.10-12.

5. Т.В.Старкова. В.И.Зорихина (1988) Эффективность микрометода реакции непрямой гемагглютинации с диагностикумом промышленного изготовления при зхинококкозах.//Мед.паразитология и паразитарные болезни.- N 4. - С.83-34.

6. Подопригора Г.И.. Старкова Т.В., Яроцкий Л.С.. Никифорова Т.Ф.. Калачев В.Н. (1989) Разработка компьютеризованного иммуномонито-ринга эпидситуации по паразитозам на примере эхинококкоза.// В сб. Эпидемиологический надзор за эхинококкоэами. К.. 113-121.

7. Баллад Н.Е.. Зорихина В.И.. Белова И.Н.. Куприна H.H.. Майорова Л.А., мартыненко В.Б.. Старкова т.В.. Шакароа А.Г.. Фатхулина Г.З. (1989) Эффективность иммуноФерментного тестов и реакции непрямой гемагглютинации в диагностике эхинококкоза и их использование в оценка эпидемиологической ситуации в Якутской АССР и Чукотском национальном округе.//В сб. Эпидемиологический надзор за эхинококкоэами. П.. 33-43.

8. Подопригора Г.И., Старкова Т.В. (1990) Метод иммунологического мониторинга при массовых эпидемиологических обследованиях населения в очагах эхинококкоэов.// В кн. Эхинококкозы.- методы исследований, лечения. профилактики, Ы., 62-71.

9. Никифорова Г.Ф.. Ыаслов С.С.. Старкова Т.В. (1990) Основные показатели, используемые для эпидемиологического надзора за эхинококкоэами // В кн. Эхинококкозы: методы исследований, лечения, профилактики, Ы.. 18-26.

10. Старкова Т.В. (1990) Тактика применения иммунологических тестов при массовых сероэпидемиологиччских обследованиях населения очагов паразитарных инвазий (на примере эхинококкоэов).// В сб. "Молекулярная биология и медицина" Тез. докладов Всесоюз. иколы-семинара, 12-18 мая 1990г. г.Ленинград., II.

11. Старкова Т.В., Касмакасов С.Х., Яроцкий Л.С. (1993) Опыт применения иммунологических показателей для оценки эффективности борьбы с гидатидоэным эхинококкозом в Дхамбулской области !Сазахстана//В сб. Тез. докладов науч. конф. ВОГ 16-17 июня 199Э. . Ы. - е.- 81-82.

12. Подопригора Г.И., Старкова Т.В.. Дж.Эккерт. В.Готстеян (1994). Сравнительные исследования российского и ивейцарского коммерческих им-муноФерментных тестов для определения антител к антигенам эхинококков. //Мед. паразитология я паразитарные болезни. - Н 3.- С. 31-32.