Серологический мониторинг цистного эхинококкоза и тенуикольного цистицеркоза овец в Кабардино-Балкарской Республике

Хайдарова, Амина Аслановна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Серологический мониторинг цистного эхинококкоза и тенуикольного цистицеркоза овец в Кабардино-Балкарской Республике
ВАК РФ 03.02.11, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Серологический мониторинг цистного эхинококкоза и тенуикольного цистицеркоза овец в Кабардино-Балкарской Республике"

На правах рукописи

005532175

ХАЙДАРОВА Амина Аслановна

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ ЦИСТНОГО ЭХИНОКОККОЗА И ТЕНУИКОЛЬНОГО ЦИСТИЦЕРКОЗА ОВЕЦ В КАБАРДИНО-БАЛКАРСКОЙ РЕСПУБЛИКЕ

Специальность 03.02.11 - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 2 АВГ 2013

Москва -2013 г

005532175

Работа выполнена в лаборатории иммунодиагностики и клеточной технологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина» Россельхозакадемии

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор БЕРЕЖКО ВЕРА КУЗЬМИНИЧНА

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

ВЕНЕДИКТОВ Игорь Иванович,

ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина» Россельхозакадемии,

ведущий научный сотрудник лаборатории биохимии и биотехнологии

доктор биологических наук, профессор БИТТИРОВ Анатолий Мурашевич, ФГБОУ ВПО «Кабардино-Балкарский государственный аграрный университет им. В.М. Кокова»,

заведующий кафедрой микробиологии, гигиены и санитарии

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «ФГБОУ «Пермская государственная сельскохозяйственная академия им. академика Д.Н. Прянишникова»

Защита диссертации состоится «18» сентября 2013 г. в 1432 часов на заседании совета по защите диссертаций на соискание учёной степени кандидата наук, на соискание учёной степени доктора наук Д 006.011.01, созданного на базе ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии имени К.И. Скрябина» Россельхозакадемии

Адрес: 117218, Москва, ул. Б. Черемушкинская, д. 28 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВИГИС Автореферат разослан у/$ъ ЩтНг^&й 2013 г.

Учёный секретарь совета по защите диссертаций на соискание учёной степени кандидата наук, на соискание учёной степени доктора наук, д.б.н., профессор

Бережко Вера Кузьминична

ВВЕДЕНИЕ

Ларвалъные цестодозы, к числу которых относится эхшюкоккоз и тенуикольный цистицеркоз, являются широко распространенными гельминтозами мирового масштаба, наносящими ощутимый экономический ущерб животноводческим хозяйствам. Помимо этого, ларвальный эхинококкоз представляет значительную социальную проблему, которая с годами не только не уменьшается, а наоборот ухудшается, поскольку, по мнению многих исследователей, количество больных цистным эхинококкозом становится больше и больше (Н.Е. Муранов, АЛ. Сапунов, 1994; H.A. Романенко и др., 1994; A.B. Стреляев и др., 2012; G. Grosso et al., 2012; G. Nunnari et al., 2012).

Ущерб от цестодозов, как впрочем и других гельминтозов, складывается из падежа, вынужденного убоя, снижения количества и качества продукции, недополучения приплода, значительных материальных затрат на проведите профилактических и оздоровительi1ых мероприятий и т д. (Г.М. Маруашвили и др., 1989; Р.Т. Сафиуллин, 1997; Л.Е. Мельникова, 2008).

Что касается тенуикольного цистицеркоза, то сложилось мнение о безвредности Cysticercus tenuicollis и отсутствии существенного патогенного воздействия возбудителя на организм животных. Ошибочность такого суждения была доказана экспериментальными исследованиями Ю.К. Студенцова (1974), который показал, что у ягнят 2-2,5-месячного возраста эта инвазия не только проявляется клинически с гематологическими и биохимическими нарушениями, но часто приводит к смертельному исходу. Нарушения, происходящие в организме инвазированных животных, подтверждены работами других авторов (В.П. Федотов, 1979; Ф.И. Василевич с соавт., 1980; А.М. Матчанов, 1990; А. Yildirim et al., 2006).

О широком распространении этих цестодозов в Южном Федеральном округе и, в частности, в хозяйствах Кабардино-Балкарской Республики, имеются сообщения АЛ! Битгирова (1996); A.M. Атаева (1997); В.М. Шамхалова (1998); A.M. Битгирова и др. (2009); 3.3. Елкановой (2010).

Поскольку паразитологическая диагностика этих гельминтозов у животных не представляется возможной и установить их зараженность можно только при убое, то серологический мониторинг с использованием соответствующих антигенов цесгод может дать конкретную информацию по степени проявления реакции, что в конечном итоге позволит в определенной степени охарактеризовать эпизоотологическую ситуацию.

♦> Провести серологический мониторинг при ларвальном эхинококкозе и тенуикольном цистицеркозе овец в хозяйствах Кабардино-Балкарской Республики и сопоставить данные иммунотеста с зараженностью животных этими гельминтами.

Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

определить уровень зараженности овец эхинококками и тенуикольными цистицерками в хозяйствах разных зон республики; •S установить экстенсивность и интенсивность инвазии собак К granulosus и Т. hydatigena;

■S приготовить антигенные препараты из протосколексов К granulosus, Е. multilocularis, С. tenuicollis и провести их физико-химическую характеристику;

■S оценить диагностическую эффективность приготовленных антигенных препаратов;

У собрать банк сывороток убойных овец, инвазированных К granulosus, С. temiicollis и условно здоровых, из хозяйств разных природно-климатических зон республики; ■/ провести серологический мониторинг ларвального эхинококкоза и тенуикольного цисгицеркоза иммуноферментной реакцией; сопоставить результаты серологического мониторинга с данными вскрытия убойных овец.

Научная новизна. Впервые проведен серологический мониторинг ларвального эхинококкоза и тенуикольного цистицеркоза овец иммуноферментной реакцией (ИФР) с использованием гомологичных антигенов паразитов, результаты которого подтверждены данными послеубойного вскрытия тестированных животных.

Показано, что серологический мониторинг является важным критерием оценки эпизоотологической ситуации по этим паразитозам. Сопоставимость иммуноферментного анализа сывороток овец при ларвальном эхинококкозе с результатами послеубойной оценки их зараженности эхинококками составила в среднем 90,3%, а тенуикольными цистицерками - 86,5%.

Выявлены незначительные различия в экстенсивности и интенсивности инвазии овец эхинококками и тенуикольными цистицерками как в зональном аспекте, так и в зависимости от породы животных; более устойчивыми к заражению К gramäosus были овцы карачаевской породы.

Впервые получен диагностический антиген при тенуикольном цистицеркозе культивированием клеток протосколексов С. temiicollis в искусственной питательной среде RPM-1640 и проведена его физико-химическая характеристика электрофорезом в полиакриламидном геле.

Получено фракционированием соматического экстракта протосколексов С. tenuicollis 8 диагностически эффективных белковых компонентов с минимальным содержанием перекрестно-реагирующих белков с К granulosus и высокими сорбционными свойствами, повышающие чувствительность и специфичность иммуноферментной реакции.

Практическая значимость. По материалам исследований разработаны: «Технологический регламент получения диагностического антигена при ларвальном эхинококкозе из протосколексов С. tenuicollisy> и «Методические положения по диагностике тенуикольного цистицеркоза клеточным антигеном», одобренные секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной

медицины Россельхозакадемии, 23.09.2011 г., протокол № 3 и 27.09.2012 г., протокол № 4.

Предложена иммуноферментная реакция на основе антигенов протосколексов Е granulosus, Е. multilocularis и С. tenuicollis для проведения серологического мониторинга при цистном эхинококкозе и тенуикольном цистицеркозе овец.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы представлены и доложены на заседаниях Ученого совета ВИГИС 2008-2011 гг.;

на научных конференциях ВОГ «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями человека и животных» (г. Москва, 2010; 2011; 2012).

секции «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии.

Личный вклад. Представленная диссертационная работа является результатом 4-летних научных исследований автора. Работа по получению инвазионного материала, сывороток крови убойных животных, приготовлению и характеристике диагностических антигенов из Е granulosus, Е. multilocularis и С. tenuicollis, проведению серологического мониторинга иммуноферментпой реакцией выполнены самостоятельно под руководством доктора биологических наук, профессора Бережко В.К., которая оказывала научно-методическую помощь в проведении исследований, анализе и обобщении полученных результатов. Статьи, написанные в соавторстве, включают более 80% материалов исследований соискателя.

Основные положения, выносимые на защиту:

■S получаше и физико-химическая характеристика антигенов из эхинококков и

тенуикольных цистицерков; •/ диагностическая эффективность антигенов из протосколексов Е granulosus, Е multilocularis и С. tenuicollis при цистном эхинококкозе и тенуикольном цистицеркозе овец;

■S распространение цисгного эхинококкоза и тенуиколыюго цистицеркоза в разных природно-климатических зонах Кабардино-Балкарской Республики, зараженность собак разного назначения гельминтами семейства Taeniidae; ■S проведение серологического мониторинга при цистном эхинококкозе и тенуикольном цистицеркозе овец, сопоставление полученных результатов с данными вскрытия животных.

Публикации. По материалам исследований опубликовано 10 статей, в которых изложены основные положения и выводы, 5 из них в рекомендованных ВАК РФ изданиях.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 150 страницах компьютерного текста. Состоит из введения, обзора литературы и собственных исследований, включающих материалы и методы, результаты, обсуждение, выводы, практические предложения. Список литературы включает 325 источников, в том числе 192 отечественных и 133 иностранных. Работа иллюстрирована 22 таблицами, 8 рисунками. Приложение на 26 страницах.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В данном разделе анализируются научные работы по серологическим исследованиям, по распространенности и зараженности животных ларвальными эхинококками и тенуикольными цистицерками, иивазированности собак Echinococcus granulosus и Taenia hydatigena.

Особое внимание уделено публикациям по сероэпизоотологическому мониторингу при этих паразитозах, которых в ветеринарной паразитологии очень мало, что подтверждает актуальность выбранной темы.

П. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 2.1.1. Сбор II подготовка паразитарного материала для приготовления антигенов

Материалами исследования служили соматический экстракт из протосколексов С. tenuicollis, 3-дневные экскреторно-секреторные продукты протосколексов К granulosus, Е. multilocularis, клеточные антигены протосколексов С. tenuicollis.

Протосколексы С. tenuicollis и Е granulosus выделяли соответственно из тенуикольных пузырей и цист эхинококка, полученных от убойных естественно инвазированных овец.

Протосколексы Е multilocularis получали из вторичных ларвоцист паразита от крыс-доноров. Перед приготовлением антигенных препаратов выделенные протосколексы паразитов тщательно промывали стерильным физраствором с антибиотиками из расчета 2000 БД/мл пенициллина и 1 мг/мл стрептомицина.

2.1.2. Методы приготовления антигенов из эхинококков и тенуикольных цистицерков, определение в них содержат« белка

Трехдневные экскреторно-секреторные продукты протосколексов Е. granulosus и Е multilocularis получали культивированием их в питательной среде RPM-1640, в течение 3 суток в СОг инкубаторе с заданными параметрами газовой среды. Соматический экстракт из протосколексов С. tenuicollis получали путем гомогенизации биоматериала, многократного замораживания и оттаивания, что позволяло получать однородную гомогенную массу. Экстрагирование белков осуществляли в фосфатно-солевом буферном растворе pH 7,2-7,4 в соотношении 1:10 в течение 36-48 часов на магнитной мешалке при 4°С.

Надосадочную жидкость — экстракт, полученный после центрифугирования при 15 тыс. об/мин в течение 15-20 мин в центрифуге с охлаждением использовали в дальнейшей работе после определения в нем белка на спектрофотометре СФ-26 при 280 нм по методу Layne (1957).

Клеточные антигены С. tenuicollis получали культивированием суспензии клеток протосколексов паразита после предварительной подготовки биоматериала к культуральной работе в стерильных условиях бокса.

Жизнеспособность выделенных клеток определяли окрашиванием 0,4%-ным раствором трипанового синего при увеличении микроскопа 20* 10.

Концентрацию клеток в суспензии доводили до 600-800 тыс/мл, вносили в питательную среду RPM-I640 для культивирования в ССЬ-инкупаторе с заданными параметрами температуры, влажности и газового состава.

В полученных клеточных метаболитах определяли содержание белка и проводили характеристику белкового спектра методом электрофореза в полиакриламидном геле.

2.13. Отбор антигеноактивных серий метаболитов культивируемых клеток протосколексов Cysticercus tenuicollis

Антигеноактивпые серии клеточных метаболитов культивируемых клеток протосколексов С. tenuicollis определяли в ИФР, используя для этой цели референс положительные сыворотки овец, инвазированных тенуикольными цистицерками и эхинококками (диагноз подтвержден при вскрытии).

В качестве отрицательного контроля использовали сыворотки убойных овец, у которых при вскрытии не регистрировали С tenuicollis и К granulosus.

Отбор проводили на основании показателей оптической плотности (ОП) реакции между контрольными сыворотками, который был принят не ниже 0,2. Диагностическую эффективность выбранных антигеноактивных серий, оценку их специфичности проводили с использованием большего числа сывороток овец без видимых паразитарных изменений и инвазированных другими гельминтами. Предварительно экспериментально определяли оптимальную концентрацию белка-антигена в клеточных метаболитах для сорбции на полистироловые планшеты и разведение антиввдового конъюгата, что позволяло более объективно оценивать диагностические препараты из клеточных метаболитов протосколексов С. tenuicollis для проведения дальнейших исследований при тенуикольном цисгицеркозе и эхинококкозе.

2.1.4. Фракционирование соматического экстракта протосколексов Cysticercus tenuicollis, оценка диагностической эффективности фракций и полученных антигенных препаратов

Полученный из протосколексов С. tenuicollis соматический экстракт после определения в нем белка подвергали гельхроматографии на носителе TSKCel HW-50 (тонкий) для повышения его диагностических качеств. Регистрацию белковых фракций проводили на Увикорде (LKB) при 280нм, сбор фракций в коллекторе Мультирак. Полученные белковые фракции исследовали на антигенную активность в реакции ИФА, используя в качестве контроля сыворотки инвазированных С. tenuicollis овец и клинически здоровых животных.

Диагностическую эффективность соматического экстракта и выделенных антигеноактивных фракций оценивали в ИФР с сыворотками овец естественно инвазированных С. tenuicollis и £ granulosus.

Для этой цели использовали 87 сывороток, включая 29 проб сывороток овец с подтвержденным диагнозом тенуиколыюго цистицеркоза; 23 — с подтвержденным диагнозом ларвального эхинококкоза, И — с очаговыми изменениями печени и 24 - без видимых паразитарных изменений. С этим набором сывороток оценили также диагностическую эффективность 3-дневных экскреторно-секреторных продуктов протосколексов Е. granulosus и

К multilocularis. Чувствительность и специфичность фракционированного антигена протосколексов С. tenuicollis оценили в ИФР с набором из 93 проб сывороток овец, в том числе 36-е подтвержденным диагнозом тенуикольного цистицеркоза; 17 - ларвалыгого эхинококкоза; 9 — с очаговыми изменениями печени и 31 — без видимых паразитарных изменений.

2.1.5. Белковый спектр трехдневных экскреторно-секреторных продуктов культивируемых протосколексов Echinococcus granulosus,

Echinococcus multilocularis, соматического экстракта и клеточного антигена протосколексов Cysticercus tenuicollis

Анализ белкового спектра 3-дневных метаболитов культивируемых протосколексов двух видов эхинококков (Е granulosus и Е multilocularis), соматического экстракта и клеточного аитигена протосколексов С. tenuicollis проводили в ПААГ методом денатурирующего электрофореза в вертикальной камере «Хеликон» в стеклах 10x8 см по методу U.K. Laemmli (1970) в градиенте концентрации полиакриламидного геля 10-15% в присутствии додецилсульфата натрия.

Электрофорез проводили при силе тока 25мА на один гель, разделение контролировали по выходу красителя бромфенолового синего из геля. По окончании электрофореза фореграммы окрашивали 1% раствором амидочерного 10В на 7%-ной уксусной кислоте в течение 15-20 мин и отмывали 7%-ной уксусной кислотой.

В качестве маркеров для определения молекулярной массы компонентов в составе исследуемых биоматериалов использовали белки с известной молекулярной массой от 6500 Да до 200000 Да.

2.1.6. Распространение цистного эхинококкоза и тенуикольного цистицеркоза овец в природно-климатических зонах Кабардино-Балкарской Республики, зараженность собак Echinococcus granulosus и Taenia hydatigena

Распространение ларвальных цестодозов в разных природно-климатических зонах республики устанавливали на основании зараженности убойных овец путем полных гельминтологических вскрытий паренхиматозных органов и брыжейки. С этой целью на зараженность цистными эхинококками исследовали 215 убойных овец: 75 из равнинной, 89 - предгорной и 51 — горной зоны.

Помимо этого, определили влияние на зараженность эхинококками овец разных пород, а именно северокавказской в количестве 52; ставропольской — 50; лезгинской - 50; андийской - 52; карачаевской - 60 голов.

Аналогично инвазированность овец тенуикольными цистицерками устанавливали методом вскрытия 235 убойных животных, в том числе 88 из равнинной, 79 - предгорной и 68 - горной зоны.

В процессе работы обращали также внимание на зараженность овец обоими видами паразитов и определяли ЭИ и ИИ овец Е. granulosus и С. tenuicollis в среднем по республике.

Учитывая, что основным источником распространения инвазионного начала при этих паразитозах являются собаки разного назначения и особенно приотарные, безнадзорные, одичавшие особи, мы провели копроскопические исследования 128 собак на зараженность тешшдами, в том числе: в равнинной - 41,

предгорной - 44 и горной зоне - 43. Помимо этого из каждой зоны исследовали на зараженность тениидами соответственно: 29,21 и 20 собак.

Для определения видового состава гельминтов собак провели гельминтофаунистический анализ 19 трупов путем вскрытия, подсчета обнаруженных паразитов, их видовой принадлежности, ЭИ и ИИ каждым видом.

2.1.7. Сбор сывороток овец, ннвазированиых

Echinococcus granulosus и Cysticercus tenuicollis, в хозяйства* разных, зон Кабардино-Балкарской Республики

Для проведения серологических мониторинговых исследований были собраны сыворотки убойных овец в хозяйствах разных зон республики с последующим исследованием печени, легких и других паренхиматозных органов убойных животных с целью определения гельминтологического статуса биоматериала и, в первую очередь, установить зараженность эхинококками и тенуикольными цистицерками. Одновременно в этих хозяйствах исследовали копроскопически фекалии собак и проводили по возможности вскрытие обнаруженных трупов для уточнения видового состава паразитов и ИИ. В первую очередь обращали внимание на зараженность собак Taenia hydatigena и Е. granulosus.

В общей сложности было собрано 450 проб сывороток крови убойных овец, инвазированных Е granulosus, С. tenuicollis с подтвержденным гельминтологическим статусом для проведения серомониторинговых исследований. Сыворотки получали от овец из хозяйств разных природно-климатических зон республики.

2.1.8. Серологический мониторинг при эхинококкозе и тенуикольном цистицеркозе иммуноферменгной реакцией

Собршшые сыворотки убойных овец, инвазированных Е granulosus, в количестве 215 проб, в том числе 75 из хозяйств равнинной, 89 — предгорной и 51 - горной зоны, исследовали ИФР с использованием экскреторно-секреторных антигенов протосколексов Е granulosus, Е multilocularis. Предварительно перед проведением реакции, используя контрольные положительные и отрицательные сыворотки овец, определяли концентрацию антигена для сорбции на полистироловые планшеты, титр сывороток и разведение антивидового конъюгата. Конъюгатом в ИФР служили антитела диагностические против IgG сыворотки крови барана, меченные пероксидазой.

Аналогичным образом провели серологический мониторинг с сыворотками убойных овец, инвазированных С. tenuicollis, в количестве 235 проб, в том числе 88 из равнинной, 79 - предгорной и 68 — горной зоны, с использованием в ИФР клеточного и фракционированного антигена протосколексов паразита.

Конъюгатом в ИФР служили антитела кроличьи, аффинно-очщценные специфичные к иммуноглобулинам овцы (Jg, IgA, IgM) меченные пероксидазой фирмы «ИМТЕК». В сравнительных испытаниях с ларвальным эхипококкозом использовали экскреторно-секреторный антиген протосколексов Е granulosus.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Белково-антигенная характеристика экстрактов и метаболитов

культивируемых клеток протосколексов Echinococcus granulosus, Echinococcus multilocularis и Cysticercus tenuicollis

Соматический экстракт и экскреторно-секреторные продукты гельминтов независимо от источника и способа их получения имеют многокомпонентый состав, включающий белки различной молекулярной массы, электрофоретической подвижности и специфичности.

Так, в белковом спектре 3-дневных метаболитов культивируемых протосколексов Е granulosus и Е multilocularis регистрировали соответственно 18 и 16 компонентов, отличающихся по электрофоретической подвижности, степени окрашивания и молекулярной массе.

Белковые компоненты 3-дневных экскретов и секретов протосколексов Е granulosus проявлялись наэлектрофореграмме в диапазоне белков молекулярной массы от 14,4 до 200,0 кДа. Наиболее четко выраженные и интенсивно окрашенные 4 компонента располагались в области подвижности белков, имеющих молекулярную массу 200,0 кДа - 1; 66,0 кДа - 2 и один компонент в диапазоне белков молекулярной массы между 45,0 и 66,0 кДа. Остальные компоненты представлены на электрофореграмме более слабо выраженными полосами в области белков молекулярной массы 116,0; 97,0; 31,0 и 21,5 кДа.

Аналогичный электрофоретический анализ 3-дневных продуктов метаболизма протосколексов Е. multilocularis позволил определить не менее 16 компонентов, проявившихся в диапазоне белков мол. массы 21,5-200,0 кДа. В этом биоматериале 3 мажорных компонента располагались в области белков молекулярной массы между 66,0 и 45,0 кДа.

При детальном анализе было установлено, что 3 наиболее четко выраженных и интенсивно окрашенных белковых компонента в обоих биоматериалах располагались в области подвижности белков молекулярной массы 45,0 и 66,0 кДа. Однако, два четко выраженных белковых компонента в биоматериале Е. granulosus в зоне белков молекулярной массы 14,4 и 200 кДа отсутствовали в белковом спектре Е multilocularis.

Аналогичный анализ, проведенный с биоматериалом из протосколексов С. tenuicollis показал, что в белковом спеюре соматического экстракта протосколексов паразита проявляется не менее 15, а в клеточном антигенном препарате - 11 компонентов, располагающихся в диапазоне белков молекулярной массы от 6500 до 200000 Да. Проявленные белковые компоненты отличались по степени окрашивания и электрофоретической подвижности, что свидетельствует об их разной концентрации.

В белковом спектре соматического экстракта протосколексов паразита не менее 4 компонентов, наиболее четко выраженных и интенсивно окрашенных, проявилось в области подвижности белков молекулярной массы 14,4 кДа и 66,0 кДа. Еще 5 белковых компонентов располагались в диапазоне белков молекулярной массы 21,0; 31,0; 45,0 кДа. В спектре белков высокой мол. массы (97,0; 116,0; 200 кДа) в экстракте из протосколексов тенуикольпых цистицерков проявилось не менее 4-5 компонентов средней и слабой интенсивности окрашивания.

Аналогичный более детальный анализ электрофореграммы с проявленными белковыми компонентами клеточного антигенного препарата также показал, что большинство из них располагалось в спектре низкомолекулярных белков, не более 14,4 кДа. Наиболее четко выраженные и интенсивно окрашенные 2 компонента проявились в области подвижности белков мол. массы 31,0 и 45,0 кДа. Не менее 3-х белковых компонентов в клеточном антигене, недостаточно четко выражешгых, регистрировали на электрофореграмме в спектре белков высокой молекулярной массы - 97,0 и 116кДа. Остальные 6 компонентов располагались в области подвижности белков мол. массы 21,0 и 31,0кДа, причем все они проявились в виде тонких слабо окрашенных полос. Судя по окраске можно заключить, что количественное содержание этих белков в общей массе клеточного антигена протосколексов С. tenuicollis незначительно.

Резюмируя полученные данные по электрофоретической подвижности и молекулярной массе белковых компонентов в каждом исследуемом биоматериале можно отметить общую закономерность, а именно в количестве белковых компонентов, проявившихся в спектре белков-маркеров высокой молекулярной массы, не превышающих 3-5 компонентов.

Следующим этапом нашей работы было изучение антигенной активности и диагностической эффективности полученных белковых материалов из эхинококков и тенуикольных цистицерков. Эти исследования провели ИФР с сыворотками убойных овец с подтвержденным диагнозом эхинококкоза и тенуиколыюго цистицеркоза. Результаты этого анализа, показали, что антигены эхинококков и тенуикольных цистицерков в определенной степени реагируют перекрестно с сыворотками с гетерологичной инвазий, что является следствием антигенного родства между возбудителями этих паразитозов.

Экскреторно-секреторный антиген К granulosus в ИФР показал положительный результат с 18 сыворотками инвазированных эхинококками овец из 23, что определило чувствительность теста-78 Д%.

Аналогичные испытания с экскреторно-секреторным антигеном К multilocularis и этими же сыворотками подтвердили возможность использования этого биоматериала в серологических исследованиях, чувствительность ИФР составила 73,9 (из 23 - 17 прореагировали положительно). Специфичность теста, которую определяли на основании результатов реакции с сыворотками овец с очаговыми изменениями печени и без водимых паразитарных изменений в количестве 3 5 проб, составила с гомологичным антигеном 74,3%, с гетерологичным 77,1%. Исхода из этих данных заключили, что оба антигена могут быть использованы в серологических мониторинговых исследованиях при эхинококкозе овец.

Эти антигены были проверены также с 29 сыворотками убойных овец с подтвержденным диагнозом тенуикольного цистицеркоза. Результаты этого анализа, показали чувствительность иммунотеста с экскреторно-секреторным антигеном Е graimlosus-34,5%,К multilocularis-31,10%.

Сравнивая результаты ИФР в гомологичной и гетерологичной системе установили четкие различия в показателях чувствительности, которые более чем в 2 раза были выше с гомологичным антигеном.

Аналогичные испытания с соматическим экстрактом и клеточным антигеном протосколексов С. temiicollis с использованием набора сывороток от 29 убойных овец с подтвержденным диагнозом тенуиколыюго цистицеркоза и 23 — с подтвержденным диагнозом ларвального эхинококкоза показали чувствительность ИФР соответственно 62,06% и 72,4%, специфичность - 65,7% и 74,3%.

Соматический экстракт протосколексов С. tenuicollis, проверенный в ИФР с сыворотками убойных овец с подтвержденным диагнозом эхинококкоза показал, положительный результат в 43,4% случаев, что свидетельствует о достаточно большом количестве серологически идентичных антигенных компонентов у этих паразитов. С клеточным антигеном протосколексов С. temiicollis чувствительность теста с сыворотками овец, инвазированных К granulosus, составила 26,08%.

Исходя из этого, в дальнейшем мы попытатись улучшить диагностические качества соматического экстракта из протосколексов паразита его очисткой методом гельхроматографии и выделением диагностически эффективных фракций при тенуикольном цистицеркозе.

2.2.2. Антигенная характеристика фракционированного соматического экстракта протосколексов Cysticercus tenuicollis

В процессе гель-хроматографического разделения соматического экстракта протосколексов С. tenuicollis было получено 60 белковых фракций с различным содержанием белка и антигенной активности. Минимальное содержание белка составило 0,008 мг/мл, максимальное 1,23 мг/мл. Анализ количественного распределения белка-антигена протосколексов С. tenuicollis по фракциям показал, что большая его часть находится в сравнительно низкомолекулярном спектре фракции, в то время как диагностическую эффективность проявили компоненты высокой молекулярной массы (фракции 27-34). Особенно четко это было продемонстрировано при анализе серологической активности каждой белковой фракций исследуемого экстракта.

Результаты этого анализа показали, что значительное количество белковых фракций в исследуемом экстракте не представляют интереса в диагностическом плане, в их составе не регистрировали антигенные компоненты, способные выявлять противопарзитарные антитела. Только в 8 (12,3%) была зарегистрирована антигенная активность, позволяющая по разнице оптической плотности между положительными и отрицательными контрольными сыворотками дифференцировать зараженных и незараженных животных.

Отобранные в процессе фракционирования антигенно-активные белковые фракции были объединены и подвергнуты предварительному испытанию в ИФР как с сыворотками овец, зараженных С. tenuicollis, так и К granulosus. Набор сывороток в этом случае включал 36 проб сывороток от овец с естественной инвазией тенуиколыюго цистицеркоза; 17 - ларвального эхинококкоза; 9 — с очаговыми изменениями печени и 31 — без вццимых паразитарных изменений (табл. 1).

Результаты этого анализа показали, что 7 проб сывороток из группы овец с естественной инвазией тенуиколыюго цистицеркоза дали ложноотрицательный ответ, а наибольшее число (5 проб) ложнеположительных ответов регистрировали в группе животных, инвазированных К granulosus.

Таблица 1

Оценка чувствительности и специфичности иммуноферментной реакции с фракционированным экстрактом протосколексов Cysticercus ienuicollis при тенункольном цистицеркозе овец

Сыворотки животных Кол-во проб Результаты реакции Ч,% С,%

+ Полож. ± Сомн. Отриц.

Цистицеркоз тенуикольный 36 29 - 7 80,6 77,5

Эхинококкоз 17 5 1 11 29,4

ОИП 9 3 1 5

Без видимых паразитарных изменений 31 3 2 26

Всего 93 42 4 47

«Ч» — чувствительность С - специфичность ОИП - очаговые изменения печени

Анализ полученных данных показал, что фракционированный антиген из протосколексов С. tenuicollis также не обладал строгой специфичностью и в определенной степени давал положительную реакцию с сыворотками овец, инвазированных как К granulosus, так и без видимых паразитарных поражений внутренних органов. Полученные 29,4% ложноположительных ответов при эхинококкозе дают основание склоняться к тому, что на определенном этапе инвазионного процесса при этих цестодозах вырабатываются антитела на идентичные иммуногены, что не позволяет проводить в этот период строгую дифференциацию этих гельминтозов, несмотря на достаточно высокие диагностические качества очищенного антигена при тенуикольном цистицеркозе.

Чувствительность ИФР с этим набором сывороток и фракционированным антигеном протосколексов С. tenuicollis составила 80,6%, специфичность - 77,5%. Очищенный антиген из протосколексов С. tenuicollis может использоваться для проведения сероэпизоотологических исследований и изучения иммунного статуса животных в различных регионах. Причем для большей объективности такие исследования лучше проводить одновременно с эхинококковым антигеном, что позволит конкретизировать ситуацию по этим гельминтозам.

2.23. Распространение ларвалыюго эхннококкоза и тенуикольного цистицеркоза овец в хозяйствах республики, зараженность овец смешанной инвазией Echinococcus granulosus и Cysticercus tenuicollis

В процессе проведения исследований на убойных пунктах разных зон республики установили, что эхинококкоз и тенуикольный цистицеркоз овец регистрируется во всех хозяйствах. Причем различия по ЭИ и ИИ этими видами гельминтов в зональном аспекте и в зависимости от породы овец были незначительными, хотя по показателям ЭИ и ИИ овцы карачаевской породы

оказались более устойчивыми. В среднем ЭИ эхинококками по республике по нашим данным составила 33,0%.

Что касается данных в зональном аспекте, то зараженность овец в хозяйствах равнинной зоны была в пределах 34,7%, предгорной - 32,6% и горной - 31,4%, при интенсивности инвазии соответственно 13,7; 17,8 и 14,8 ларвоцист/животное.

Как правило, количество эхинококковых цист, обнаруженных в легких овец, несколько превышало таковые в печени.

При исследовании зараженности эхинококками овец разных пород также установили незначительную разницу в ЭИ среди животных северо-кавказской (23,1), лезгинской (26) и андийской (21,1) пород. Наибольшую ЭИ регистрировали среди овец ставропольской породы (30%), наименьшую у овец карачаевской породы (18,2%). ИИ эхинококками варьировала от 14,2±2,4 у овец карачаевской до 22,3±2,7 у овец ставропольской породы.

Эхинококковые пузыри, выделенные от убойных овец, независимо от породы и возраста животных, содержали протосколексы и являлись фертильными. Количественная оценка содержимого эхинококковой жидкости ларвоцист паразита варьировала в пределах 82,7±7,3-87,4±7,2 экзУмл, что является характерным для всех исследованных хозяйств региона. Такая обстановка является результатом отсутствия в регионе планомерных профилактических мероприятий, включающих своевременную дегельминтизацию приотарных, отлов и помещение в специализированные приюты безнадзорных собак, проведение санитарно-просветительской работы среди обслуживающего персонала и населения. Игнорирование выполнения этих требований значительно усугубляет также эпидемиологическую ситуацию по эхинококкозу.

По данным медицинской статистики заболеваемость эхинококкозом за последние 20 легг выросла в 7,5 раза

Что касается данных по республике, то заболеваемость человека по результатам санитарно-эпидемиологической службы в расчете на 100 тыс. населения с 2008 по 2010 гг. увеличилась с 0,00046 до 0,0061.

Исследования по зараженности овец эхинококками в зависимости от технологии содержания фактически также не показали существенных различий, поскольку при любой технологии контакт с зараженными собаками не исключался, особенно, если учесть, что основные технологии в масштабе республики базируются на отгонно-пастбищном и пастбищно-сгойловом содержании. Высокая ЭИ и ИИ собак К granulosus в регионе при наличии объекта заражения обеспечивает динамичность, биологическую активность и защищенность паразитарной системы в течение длительного времени.

Аналогичные исследования, проведенные в хозяйствах республики по оценке эпизоотологической ситуации по тенуикольному цистицеркозу овец показали, что по ЭИ и ИИ он почти не уступает ларвальному эхинококкозу и является также широко распространенным гельминтозом в регионе. Такая обстановка поддерживается высокими показателями зараженности собак Т. hydatigena.

При исследовании паренхиматозных органов убойных овец в хозяйствах разных зон республики установили, что ЭИ тенуикольными цистицерками в

равнинной зоне составляет 27,3%, предгорной и горной соответственно 25,3%; 20,6% при ИИ от 4,8±0,6 до 6,2±0,4 экзУголову.

В среднем ЭИ была 24,6%, однако в отдельных, хозяйствах равнинной и предгорной зоны эти показатели доходили до 35,7%-47,8%, ИИ во всех исследованных хозяйствах не превышала 1-9 цист/животное.

Безусловно, наибольшее значение в распространении инвазии имеют приотарные и бесхозные одичавшие собаки, хотя не исключается и роль диких плотоядных, особенно волков, лисиц и шакалов, у которых, по данным отдельных авторов, в некоторых регионах инвазированность Т. hydatigena составляет соответственно 33,7% и 58,3% (В.Д. Некрасов и др., 2008). Однако имеется также ранее высказанное мнение о том, что роль волков в распространении инвазии в местах нахождения сельскохозяйственных животных по сравнению с зараженными собаками незначительная (В.П. Кондратьев, 1966). При вскрытии мы обращали также внимание на наличие у овец смешанной инвазии эхинококками и тенуикольными цистицерками. Как правило, количество таких животных составляло 5-10% от общего числа исследованных.

2.2.4. Зараженность собак разного назначения Echinococcus granulosus и Taenia hydatigena в зональном аспекте Кабардино-Балкарской Республики

Учитывая, что основным источником распространения инвазионного начала при эхинококкозе и тенуикольном цистицеркозе являются инвазированные собаки, мы провели исследования в этом направлении в разных природно-климатических зонах республики, уделив особое внимание трем категориям животных: приотарным, дворовым и бродячим собакам.

Копроскопические исследования в равнинной зоне республики показали, что зараженность приотарных собак гельминтами семейства Taeniidae составляет 72,2%; предгорной - 75,0% и горной - 80,9%. Аналогично проведенный зональный анализ данных с дворовыми и бродячими собаками показал их зараженность тениями соответственно 35,7; 47,05; 53,8% и 88,9; 81,8 и 100%. Эти результаты являются убедительным доказательством значительной зараженности собак, особенно приотарных и бродячих, различными видами тений. Учитывая, что приотарные собаки являются неотъемлемой частью овцеводства, то можно с большей долей уверенности говорить о значительной зараженности овец ларвальными цестодами. Исходя из этого, мы пропели аналогичные исследования по определению зараженности приотарных собак тениями в хозяйствах разных зон, где брали кровь от убойных овец для проведения серологического мониторинга

Дшшые копроскопического анализа показали, что ЭИ тениями в равнинной зоне составляла 75,9%, в предгорной - 71,4% и горной - 70,0%, в среднем 72,8%. Поскольку наши последующие серологические исследования предусматривали проведение мониторинга при ларвальном эхинококкозе и тенуикольном цистицеркозе необходимо было определить, какими видами гельминтов заражены собаки и насколько их инвазированность Т. hydatigena и Е granulosus может представлять эпизоотологическую опасность. Результаты вскрытия 19 трупов собак позволили ответить на эти вопросы и показать, что собаки в регионе заражены не только разными видами тений, среди которых особенно распространены

Т. hydatigena (ЭИ - 73,7%; ИИ - 3,0±0,2 экзУголову); Е. granulosus (ЭИ - 57,9%; ИИ - 2,4±0,2 экзУголову); М. multiceps (ЭИ - 31,5%; ИИ - 1,9±0,3 экз./голову); но довольно значительная ЭИ и ИИ зарегистрирована при токсокарозе — Т. canis (ЭИ - 47,3%; ИИ - 6,2±0,4 экзУголову) и токсаскаридозе - Т. leonine (ЭИ - 36,8%; ИИ - 4,1±0,3 экзУголову).

Таким образом, наши исследования показали наличие всех составляющих для поддержания эпизоотического процесса как при эхинококкозе, так и при тенуикольном цистицеркозе в хозяйствах всех природно-климатических зон республики. Высокая ЭИ и ИИ собак Е granulosus и Т. hydatigena поддерживается фактически круглый год, четкой сезонности не наблюдается, хотя по некоторым наблюдениям можно отметить увеличение этих показателей особенно осенью, в период массового убоя овец и бесконтрольного скармливания им пораженных этими гельминтами органов животных, усугубляя, таким образом, эпизоотологическую ситуацию.

2.2.5. Серологический мониторинг ларвальиого эхппококкоза и тенуиколыюго цисгицеркоза овец Для проведения серологического мониторинга при эхинококкозе и тенуикольном цистицеркозе необходимо было, прежде всего, подобрать банк сывороток убойных овец с установленным гельминтологическим статусом по отношению к этим инвазиям, сыворотки клинически здоровых животных и выбрать иммунологический тест.

Результаты серологического мониторинга при цистном эхинококкозе овец, проведенного ИФР с 215 пробами сывороток крови убойных животных, взятых из хозяйств разных зоны республики, с использованием экскреторно-секреторного антигена протосколексов Е. granulosus и Е multilocularis (табл. 2,3).

Таблица2

Серологический мониторинг при эхинококкозе овец (диагноз подтвержден) на основе иммуноферментной реакции с экскреторно-секреторным антигеном Echinococcus granulosus

Исследуемые сыворотки овец § «= 3 С .3 п Результаты ИФР

из них Ч,% С,%

Полож-х | Отриц-х

Равнинная зона

Инвазированных Е granulosus 26 23 3 88,5 75,5

Клинически здоровых 49 12 37

Предгорная зона

Инвазированных £ granulosus 29 26 3 89,6 73,3

Клинически здоровых 60 16 44

Горная зона

Инвазированных Е granulosus 16 14 2 87,5 77,1

Клинически здоровых 35 8 27

В среднем 88,5 75,3

Перед постановкой ИФР предварительно определили оптимальную концентрацию белка-антигена для сенсибилизации твердой фазы, которая составила соответственно 9 и 11 мкг/мл, разведение сывороток - 1:100 и титр видоспецифического конъюгата- 1:6000.

Представленные в таблицах данные показали, что оба антигена при правильном подборе концентраций ингредиентов можно использовать в мониторинговых серологических испытаниях.

Из 26 сывороток овец равнинной зоны, инвазированных Е granulosus, с гомологичным и гетерологичным антигенами прореагировали 23 пробы. Таким образом, чувствительность ИФР составила 88,5%. Из группы условно здоровых овец с антигеном Е. granulosus положительную реакцию регистрировали в 12, а с Е multilocularis — в 11 пробах. Исходя из этих результатов, специфичность теста была соответственно 75,5 и 77,6%. В среднем чувствительность ИФР составила 88,5%, специфичность - 76,5%.

Таблица 3

Серологический мониторинг при эхинококкозе овец (диагноз подтвержден) на основе нммунофсрмс1ггной реакции с

экскреторно-секреторным антигеном Echinococcus multilocularis

Исследуемые сыворотки овец Результаты ИФР

Число проб из них Ч,% С,%

Полож-х | Отриц-х

Равнинная зона

Инвазированных Е granulosus 26 23 3 88,5 77,6

Клинически здоровых 49 11 38

Предгорная зона

Инвазированных Е. granulosus 29 25 4 86,2 75,0

Клинически здоровых 60 15 45

Горная зона

Инвазированных £ granulosus 16 13 3 81,3 77,1

Клинически здоровых 35 8 27

В среднем 85,3 76,6

Аналогичные исследования, проведенные с сыворотками овец из предгорной и горной зоны, также показали незначительные различия в чувствительности и специфичности теста как с гомологичным, так и с гетерологичным антигеном.

Чувствительность ИФР в первом случае составила 89,6%, во втором - 86,2%, специфичность соответственно 73,3% и 75,0%.

Исследование в ИФР 16 проб сывороток инвазированных эхинококками овец из горной зоны с антигеном Е granulosus и Е. multilocularis показало соответственно 14 и 13 положительно реагирующих проб. Таким образом, чувствительность реакции составила соответственно 87,5% и 81,3%. Специфичность теста с обоими антигенами была 77,1%.

Аналогичным образом был сформирован банк сывороток убойных овец, инвазированных тенуикольными цистицерками, из тех же природно-климатических зон республики в количестве 235 проб, в том числе 88 - из равнинной, 79 - предгорной и 68 - горной зоны. Серологический мониторинг при тенуикольном цистицеркозе провели также ИФР с использованием фракционированного и клеточного антигенов протосколексов С. temiicollis.

Как и при эхинококкозе, предварительно определили оптимальную концентрацию антигенов для сорбции на полистироловых планшетах, которые составила 40 мкг/мл, а для клеточного 12 мкг/мл фракционированного антигена, титр сывороток-1:100 и видоспецифического конъюгата 1:6000.

Результаты серологического исследования показали, что большинство сывороток овец инвазированных С. temiicollis реагировали положительно со специфическими антигенами с высокими показателями оптической плотности (0,422-0,917). Чувствительность иммунотесга с клеточным антигеном протосколексов паразита составила в среднем 81,3% (табл. 4).

Таблица 4

Серологический мониторинг при тенуикольном цистицеркозе овец с клеточным антигеном протосколексов Cysticercus tenuicollis

Результаты ИФР

ю из них ч?

Исследуемые сыворотки овец 1 о S £ 4 р 4 •е*

3 к о я е- Ö ä о

ЕГ 1=1 и ¡X1 с и

Равнинная зона

Инвазированных Cysticercus tenuicollis 23 19 4 82,6 76,9

Клинически здоровых 65 15 50

Предгорная зона

Инвазированных Cysticercus tenuicollis 20 16 4 80,0 76,3

Клинически здоровых 59 14 45

Горная зона

Инвазированных Cysticercus tenuicollis 16 13 3 81,3 75,0

Клинически здоровых 52 13 39

В среднем 813 76,1

По отдельным зонам эти показатели были следующие: в равнинной зоне -82,6% (из 23 инвазированных С. 1етйсо11Ь овец 19 прореагировали положительно); в предгорной - 80,0% (из 20 инвазированных овец у 16 реакция была положительной); в горной - 81,3% (из 16 зараженных овец у 13 регистрировали положительный ответ). Специфичность ИФР составила по зонам соответственно 76,9%, 76,3% и 75,0%, в среднем - 76,1%.

Количество ложноположительных результатов среди условно здоровых овец было во всех природно-климатических зонах в сопоставимых количествах, что и определило специфичность ИФР в диапазоне 75,0-76,9%. Вполне допустимо,

что из числа реагирующих овец в группе клинически здоровых некоторые могли быть заражены тенуикольными цисгицерками, но на стадии инвазии, когда ларвоцисты паразита не достигли размеров визуального обнаружения. В то же время выделяемые в процессе развития паразита антигены действовали на иммунную систему хозяина выработкой специфических антител, выявляемых в ИФР.

Аналогичным образом все эта сыворотки овец были проанализированы ИФР с использованием фракционированного антигена из протосколексов С. tenuicollis.

Результаты этого анализа показали, что в среднем чувствительность ИФР с этим антигеном составила 83,0%, а специфичность - 77,9%, что фактически незначительно отличается от результатов иммунореакций с клеточным антигеном. Чувствительность ИФР с сыворотками убойных овец в равнинной, предгорной и горной зонах составила соответствешю 82,6; 85,0 и 81,3%; специфичность - 76,9; 77,9 и 78,8% (табл. 5). Сопоставимость полученных результатов с обоими антигенами позволяет сделать заключение о возможности их использования в серологических мониторинговых исследованиях.

Таблица 5

Серологический мониторинг при тенуикольном цисгицеркозе овец иммуноферментной реакцией с фракционированным антигеном из протосколексов Cysticercus tenuicollis

Результаты ИФР

ю 1 из них Чувств-ть,%

Исследуемые сыворотки овец ä У & Полож-х Отриц-х О С и

Равнинная зона

Инвазированных Cysticercus tenuicollis 23 19 4 82,6 76,9

Клинически здоровых 65 14 50

Предгорная зона

Инвазированных Cysticercus tenuicollis 20 17 4 85,0 77,9

Клинически здоровых 59 13 46

Горная зона

Инвазированных Cysticercus tenuicollis 16 13 3 81,3 78,8

Клинически здоровых 52 11 41

В среднем 83,0 77,9

Однако, для объективной оценки эпизоотологической ситуации на основе серологических исследований с возможной дифференциацией этих паразитозов одновременно на одном планшете провели дополнительные испытания ИФР с 92 сыворотками убойных овец, в том числе 23 - с подтвержденным диагнозом эхинококкоза; 23 - тенуикольного цистицеркоза; 23 - эхинококкоза и тенуиколыюго цистицеркоза и 23 - клинически здоровых животных.

Результаты этих исследований подтвердили отсутствие строгой видовой специфичности антигенов Е granulosus и С. tenuicollis. Оба антигена реагировали в гетерологичной системе реакции с чувствительностью 21,7% в реакции с АГ из протосколексов С. tenuicollis и сыворотками зараженных Е granulosus овец и 26,1% с антигеном Е granulosus и сыворотками овец, инвазированных С. tenuicollis. Однако в гомологичной системе ИФР оба антигена показали достаточно высокую чувствительность 82,6%.

При определении специфичности на основе тестирования клинически здоровых овец также установили, что как с гомологичным, так и с гетерологичным антигеном 5 проб сывороток из этой группы реагировали положительно.

Хотя количество ложноположительных результатов с обоими антигенами было одинаковым, не все положительно реагирующие пробы сывороток принадлежали одним и тем же животным. Не исключено, что в этой группе клинически здоровых овец могли быть животные с мигрирующей стадией инвазий. Тем не менеё результаты этого анализа показали, что специфичность обоих антигенов была в пределах 78.3%.

При анализе сывороток овец со смешанной инвазией также установили ложнотрицательный результат в пяти случаях из 23 как с антигеном Е granulosus, так и с антигеном С. tenuicollis. В данной ситуации две пробы сывороток, показавшие отрицательную реакцию с обоими антигенами, принадлежали одним и тем же животным, а три — разным. Такой результат может быть, с одной стороны, следствием разной ИИ эхинококками и тенуикольными цистицерками и соответственно разным уровнем синтезируемых специфических антител, а с другой, индивидуальной реактивностью животных.

Проведенные исследования с сыворотками убойных животных с определенным гельминтологическим статусом показали возможность использования антигенов Е granulosus и С. tenuicollis в серологическом мониторинге ларвального эхинококкоза и тенуиколыюго циспщеркоза овец. Необходимо было подтвердить этот результат, используя в ИФР сыворотки овец из хозяйств, трех природно-климатических зон республики с последующим убоем и исследованием паренхиматозных органов и брыжейки овец с целью сопоставления результатов серологического анализа с зараженностью животных эхинококками и теиуикольпыми цистицерками.

С этой целью ИФР исследовали сыворотки крови овец в количестве по 45 проб из каждой зоны, помимо этого для оценки специфичности иммунореакции включили в банк испытуемых сывороток 45 проб сывороток клинически здоровых животных после забоя, у которых при вскрытии эхинококки и тенуикольные цистицерки не регистрировали.

Результагы этого анализа показали, что из 45 проб сывороток овец равнинной зоны 35 реагировали положительно с антигеном протосколексов Е. granulosus и 34 - с антигеном протосколексов С. tenuicollis. Таким образом, чувствительность ИФР составила соответственно 77,8% и 75,6%. Аналогичный анализ, проведенный с таким же количеством сывороток овец из предгорной и горной зон показал положительный результат соответственно с первым антигенным препаратом в обоих случаях в 34 пробах, со вторым—в 32 и 33 пробах. Исходя из полученных результатов, установили чувствительность ИФР с

антигеном протосколексов эхинококков 75,6; 75,6%, а тенуикольных цистицерков -71,1 и 73,3%.

Специфичность реакции, которую определяли на основании результатов анализа сывороток клинически здоровых животных, составила с эхинококковым антигеном—73,3%, а с антигеном тенуикольных цистицерков — 71,1% (табл. 6).

Таблица 6

Результаты серологического мониторинга ларвалъного эхинококкоза и тенуикольного цистицеркоза иммупоферменгной реакцией

Исследуемые сыворотки овец Количество исследованных проб Результаты ИФР

С АГ Е. granulosus С АГ С. tenuicollis

Полож-х Отриц-х Чувств-ть, % Специф-ть,% Полож-х ¥ ! Чувств-ть, % Специфи-ть,%

Сыворотки овец равнинной зоны 45 35 10 77,8 73,3 34 и 75,6 71,1

Сыворотки овец предгорной зоны 45 34 11 75,6 32 13 71Д

Сыворотки овец горной зоны 45 34 И 75,6 33 12 73,3

Сыворотки клинически здоровых овец 45 12 33 13 32

В среднем 76,3 73,3

Результаты вскрытия серологически исследованных овец показывают, что количество положительно реагирующих в ИФР проб сывороток животных с эхинококковым антигеном несколько отличается от данных вскрьггия. Так, с антигеном протосколексов К granulosus из 45 овец положительную реакцию регистрировали у 35, но по результатам вскрытия только у 32 овец обнаружили эхинококки. Причем у 5 овец из этой группы регистрировали смешанную инвазию (эхинококки и тенуикольные цистицерки), одна из которых также реагировала положительно в ИФР, 2 другие с ложноположительным результатом были из группы овец, у которых инвазию не обнаружили.

В предгорной зоне из 45 исследованных в ИФР сывороток овец в 34 реакция была положительной, однако по результатам вскрытия у 30 обнаружили эхинококки. У 4 овец регистрировали смешанную инвазию, причем сыворотки двух овец из этой группы также положительно реагировали в ИФР. Помимо этого 2 ложноположительных результата отметили в группе овец, у которых цисты эхинококков и тенуикольных цистицерков не находили.

Аналогичные исследования, проведенные в горной зоне, также несколько отличались от результатов иммуноферментного анализа. Так, из 45 серологически тестированных овец положительную реакцию в ИФР регистрировали с

сыворотками 34 животных, при вскрытии же цисты эхинококков обнаружили у 31 овцы.

У 6 овец находили по одной или две цисты К granulosus и С. tenuicollis, но серологическая реакция с сыворотками этих животных была отрицательной. Из группы же животных, у которых инвазию не регистрировали, 3 показали ложноположительный результат в ИФР.

Аналогичное сопоставление данных иммуноанализа сывороток овец с антигеном протосколексов С. tenuicollis с результатами вскрытия также показало различия количественного характера.

Так, число положительно реагирующих в ИФР проб сывороток овец с этим антигеном составило в равнинной зоне 31 из 45, в то время как при вскрытии цисты С. tenuicollis обнаружили у 29 животных.

Помимо этого у 3 овец было найдено по одной цисте К granulosus и С. tenuicollis, а еще у 5 овец регистрировали смешанную инвазию эхинококками и тенуикольными цисгицерками с преобладанием последних. Из пяти овец сыворотки двух показали положительную реакцию в ИФР с антигеном С. tenuicollis.

У овец предгорной зоны из 45 проб сывороток положительную реакцию в ИФР с антигеном протосколексов С. tenuicollis регистрировали в 32, а цисты паразита обнаружили при вскрытии у 26 овец. Остальные 6 овец, сыворотки которых показали положительный результат, были из числа животных со смешанной инвазией (2 пробы) и без клинических проявлений (4 пробы).

Что касается овец горной зоны, то из 45 положительную серологическую реакцию регистрировали у 33, а при вскрытии цисты С. tenuicollis обнаружили у 28 овец. У 7 овец при вскрытии регистрировали смешанную инвазию, но обнаруженные у них цисты были перерожденными.

Исходя из полученных данных, можно с уверенностью констатировать, что сыворотка крови большинства зараженных эхинококками или тенуикольными цисгицерками овец положительно реагирует в ИФР с гомологичными антигенами, что позволяет по степени проявления иммунореакции оценивать эпизоотологическую ситуацию по этим цестодозам.

При сопоставлении данных иммуноанализа с результатами вскрытия серологически исследованных овец процент совпадений при эхинококкозе составляет 88,2-91,4%, в среднем 90,3%, при тенуикольном цистицеркозе - 81,393,5%, в среднем 86,5%.

Причем, сопоставляя результаты иммуноферментного тестирования сывороток овец с данными послеубойного анализа и ЭИ по региону мы пришли к определенному заключению, а именно при чувствительности и специфичности ИФР в пределах соответственно 75,6-77,6 и 71,1-73,3% ЭИ овец эхинококками и цисгицерками будет в диапазоне 25-30%.

При более высоких показателях ИФР, особенно по чувствительности, ЭИ этими паразитозами, как правило, превышает 50%.

выводы

1. Эхинококкоз и тенуиколышй цистицеркоз овец регистрируется во всех природно-климатических зонах Кабардино-Балкарской Республики с экстенсивностью инвазии соответственно: в равнинной зоне 34,7 и 27,3%; предгорной 32,6 и 25,3%; горной 31,4 и 20,6%.

Наиболее устойчивыми к заражению этими видами цестод оказались овцы карачаевской породы. Эпизоотический процесс при эхинококкозе и тенуикольном цистицеркозе поддерживается в регионе высоким уровнем зараженности собак Е. granulosus и Т. hydatigena.

2. Установлено, что экстенсивность инвазии собак гельминтами семейства Taeniidae в равнинной зоне была в пределах 75,9%; предгорной - 71,4%; горной - 70,0%; экстенсивность инвазии собак Е. granulosus по данным вскрытия составила 57,9%, а Т. hydatigena - 73,7%.

3. Приготовлены и охарактеризованы методом электрофореза в полиакриламидном геле антигены из протосколексов Е. granulosus, Е. multilocularis и С. tenuicollis R 3-дневных экскреторно-секреторных продуктах культивируемых протосколексов Е. granulosus и Е. multilocularis определено соответственно 18 и 16 белковых компонентов различной электрофоретической подвижности и молекулярной массы. В клеточных метаболитах протосколексов С. tenuicollis регистрировали 11 белковых компонентов, располагающихся в диапазоне белков молекулярной массы от 14,4 до 200 кДа.

4. Гельхроматографией соматического экстракта протосколексов С. tenuicollis получено 60 фракций, отличающихся содержанием белка и антигенной активностью. Иммуноферментным анализом с референс положительными и отрицательными сыворотками определено 8 (12,3%) диагностически эффективных белковых фракций, содержащих минимальный уровень перекрестно-реагирующих компонентов с Е granulosus и обладающих высокими сорбционными свойствами на полистироле Оценка диагностической эффективности ИФР с фракционированным и клеточным антигеном протосколексов С. tenuicollis при серологическом мониторинге сывороток убойных овец с подтвержденным диагнозом тенуиколыюго цистицеркоза показала чувствительность иммунотеста в среднем соответственно 83,0 и 81,3%; специфичность - 77,9 и 76,1%.

5. Серологический мониторинг на основе иммуноферментной реакции с использованием в качестве антигена 3-дневных экскреторно-секреторных продуктов культивируемых протосколексов Е. granulosus и Е. multilocularis и сывороток убойных овец с подтвержденным диагнозом ларвалыюго эхинококкоза показал чувствительность реакции в среднем, соответственно 88,5 и 85,3%; специфичность - 75,3 и 76,6%.

6. Оценка диагностической эффективности ИФР с фракционированным и клеточным антигеном протосколексов С. tenuicollis при серологическом мониторинге сывороток убойных овец с подтвержденным диагнозом

тенуикольного цистицеркоза показала чувствительность иммунотеста в среднем соответственно 83,0 и 81,3%; специфичность - 77,9 и 76,1%.

7. Серологический мониторинг при эхинококкозе и тенуиколыюм цистицеркозе, проведенный ИФР с сыворотками овец с последующим убоем и вскрытием иммунотестируемых животных, показал в среднем, соответственно чувствительность — 76,3 и 73,3%; специфичность — 73,3 и 71,1%.

8. Установлено незначительное расхождение в количестве положительно реагирующих в ИФР сывороток овец с числом животных, у которых при вскрытии обнаружили цисты эхинококков и тенуикольных цистицерков. Сопоставимость результатов серологического мониторинга с данными вскрытия при цистном эхинококкозе овец составила в среднем 90,3%, при тенуикольном цистицеркозе 86,5%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Предлагается для оценки эпизоотологической ситуации по ларвальному эхинококкозу и тенуикольному цистицеркозу овец проводить серологический мониторинг 15-20% поголовья животных ИФР с одновременным использованием антигенов протосколексов Е. granulosus или Е. multilocularis и С. tenuicollis. При проведении иммунной реакции в набор испытуемых сывороток необходимо включать пробы от клинически здоровых животных и по возможности инвазированных другими гельминтами для оценки специфичности теста. Зараженность животных определяется по количеству положительно реагирующих проб сывороток овец с каждым антигенным препаратом.

При чувствительности реакции 60-70% экстенсивность инвазии находится в пределах 25-30%.

На основании материалов исследований разработаны: «Технологический регламент получения диагностического антигена при ларвальном эхинококкозе из протосколексов С. tenuicollis» и «Методические положения по диагностике тенуикольного цистицеркоза клеточным антигеном», одобренные секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Тхакахова A.A. Сравнительная физико-химическая характеристика клеточных метаболитов протосколекеов Echinococcus granulosus и Echinococcus multilocularis// Бережко В.К., Тхакахова A.A., Сасикова М.ЮУ Материалы докладов научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». -2010.-вып. 11.-с. 58-61.

2. Тхакахова A.A. Белковый спектр 3-дневных экскреторно-секреторных продуктов культивируемых ггротосколексов Echinococcus granulosus и Echinococcus multilocularis!У Бережко В.К., Тхакахова A.A., Сасикова М.Ю./ Российский паразиголошческий журнал. — 2010.—№ 4. — с.83-88.

3. Тхакахова A.A. Антиген из протосколекеов Cysticercus tenuicollis в диагностике тенуикольного цистицеркоза и эхинококкоза овец// Бережко В.К., Тхакахова А.АУ Материалы докладов научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезиями».—2011. - вып. 12.-е. 62-66.

4. Тхакахова A.A. Белково-антигенный спектр экстракта из протосколекеов Cysticercus tenuicollis// Материалы докладов научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями».-2011.-вып. 12.-е. 516-519.

5. Тхакахова АА. Белково-антигенный спектр экстракта из протосколекеов Cysticercus tenuicollis и его эффективность в диагностике тенуикольного цистицеркоза// Тхакахова A.A., Бережко В.К./ Российский паразитологпческий журнал. - 2011. - № 3. - с. 81-85.

6. Тхакахова A.A. Зараженность собак эхинококками в разных природно-климатических зонах Кабардино-Балкарской Республики// Материалы докладов научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». — 2012.-вып. 13.-с. 421-423.

7. Тхакахова A.A. Технологический регламент получения диагностического антигена при ларвальном эхинококком из протосколекеов Cysticercus tenuicollis// Тхакахова A.A., Бережко В.К., Написанова JI.A./ Росашский паразитологпческий журнал. - 2012. -№ 1.-е. 126-129.

8. Тхакахова АА. Сероэпгооотолопгческий мониторинг эхинококкоза овец в Кабардино-Балкарской Республике// Тхакахова A.A., Бережко В.К./ Российский паразитологпческий журнал. -2012. -№ 3. — с. 103-109.

9. Хайдарова A.A. Методические положения по диагностике тенуикольного циепщеркоза клеточным антигеном», одобренные секцией «Инвазионные болезни животных// Бережко В.К., Руднева О.В., Хайдарова A.A., Написанова JI.A., Малахова Е.ИУ Российский иаразитологический журнал. - 2013. - № 1. - с. 106-112.

10. Тхакахова A.A. Взаимосвязь эпизоотологии эхинококкоза овец и собак с учетом вертикальной поясности Северного Кавказа// Берсанукаева Р.Б., Шахбиев И.Х., Тохаева А.И., Тхакахова A.A., Шахбиев Х.Х., Мантаева С.Ш., Белиев С-М.МУ Материалы докладов научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - 2013. - вып. 14. - с. 60-62.

Для заметок

Подписано в печать:

13.08.2013

Заказ № 8659 Тираж - 100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Текст научной работыДиссертация по биологии, кандидата биологических наук, Хайдарова, Амина Аслановна, Москва

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ГОСУДАРСТВЕННОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЕЛЬМИНТОЛОГИИ имени К.И. СКРЯБИНА

(ГНУ ВИГИС Россельхозакадемии)

На правах рукописи

04201361029

ХАЙДАРОВА Амина Аслановна

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ ЦИСТНОГО ЭХИНОКОККОЗА И ТЕНУИКОЛЬНОГО

ЦИСТИЦЕРКОЗА ОВЕЦ В КАБАРДИНО-БАЛКАРСКОЙ РЕСПУБЛИКЕ

Диссертация

на соискание ученой степени кандидата биологических наук Специальность 03.02.11 - паразитология

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор БЕРЕЖКО Вера Кузьминична

Москва - 2013 г

СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ 4

I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9

7 7 Распространение эхинококкоза, сероэпизоотологический,

сероэпидемиологический мониторинг.................... 9

7 2 Распространение тенуикольного цистицеркоза,

серологические исследования........................... 31

II СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 40 2 1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 40

2 1 1 Сбор и подготовка паразитарного материала для

приготовления антигенов................................ 40

2 1 2 Методы приготовления антигенов из эхинококков и

тенуикольных цистицерков, определение в них содержания белка 41

2 1 3 Отбор антигеноактивных серий метаболитов культивируемых

клеток протосколексов Cysticercus tenuicoins 43

2 1 4 Фракционирование соматического экстракта протосколексов Cysticercus ten и І СОІI IS, оценка диагностической эффективности фракций и полученных антигенных препаратов 44

2 1 5 Белковый спектр трехдневных экскреторно-секреторных продуктов культивируемых протосколексов Echinococcus

granulosus, Ech inococcus multilocularis, СОМаТИЧеСКОГО

экстракта и клеточного антигена Протосколексов Cysticercus

ten и ICO Iiis

2 1 6 Распространение цистного эхинококкоза и тенуикольного цистицеркоза овец в природно-климатических зонах Кабардино-Балкарской Республики, зараженность собак

Ее hinococcus granulosus и Та enia hydatigena

2 1 7 Сбор сывороток овец, инвазированных Echinococcus

granulosus И Cysticercus tenuicolhs, В ХОЗЯЙСТВО* раЗНЫХ ЗОН

Кабардино-Балкарской Республики..............................47

2 1 8 Серологический мониторинг при эхинококкозе и

тенуикольном цистицеркозе иммуноферментной реакцией ... 58

2 2 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 50

22 1 Белково-антигенная характеристика экстрактов и метаболитов культивируемых клеток Протосколексов Echinococcus

granulosus, Ее h / п о с ос с us multilocularis И Су st і се г с и s t є п и / с о 11 / s

222 Антигенная характеристика фракционированного

соматического экстракта протосколексов Cysticercus

ten и icon IS

22 3 Распространение ларвального эхинококкоза и тенуикольного

цистицеркоза овец в хозяйствах республики 68 22 4 Зараженность собак разного назначения Ее h/л ос о сс и s

granulosus И Taenia hydatigena В ЗОНЭЛЬНОМ аСПвКТв

Кабардино-Балкарской Республики 73 22 5 Серологический мониторинг ларвального эхинококкоза и тенуикольного цистицеркоза овец, сопоставимость

результатов иммуноанализа с уровнем зараженности........ 78

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 97

ВЫВОДЫ 111

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 113

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 114

ПРИЛОЖЕНИЕ 151

ВВЕДЕНИЕ

Ларвальные цестодозы, к числу которых относится эхинококкоз и тенуикольный цисгицеркоз, являются широко распространенными гельминтозами мирового масштаба, наносящими ощутимый экономический ущерб животноводческим хозяйствам. Помимо этого, ларвальный эхинококкоз представляет значительную социальную проблему, которая с годами не только не уменьшается, а наоборот ухудшается, поскольку, по мнению многих исследователей, количество больных цистным эхинококкозом становится больше и больше (Н.Е. Мурашов, А.Я. Сапунов, 1994; H.A. Романенко, 1994; A.B. Стреляев и др., 2012; G. G rosso et al., 2012; G. N u п п а г I et а I., 2012).

Ущерб от цестодозов, как впрочем и других гельминтозов, складывается из падежа, вынужденного убоя, снижения продуктивности и качества продукции, недополучения приплода, значительных материальных затрат на проведение профилактических и оздоровительных мероприятии и т.д. (Г.М. Маруашвили и др., 1989; Р.Т. Сафиуллин, 1997; JI.E. Мельникова, 2008, W Samuel, G.G. Zewde, 2010).

Что касается тенуикольного цисгицеркоза, то, несмотря на широкое распространение этой инвазии, в последние годы значительно сократились научные исследования по этой проблеме во всем мире.

Сложилось мнение о безвредности С. tenuicoihs и отсутствии существенного патогенного воздействия возбудителя на организм животных. Ошибочность такого суждения была доказана еще в 1974 г. экспериментальными исследованиями Ю.К. Студенцова, который показал, что у ягнят 2-2,5-месячного возраста эта инвазия не только проявляется клинически с гематологическими и биохимическими нарушениями, но часто приводит к смертельному исходу. Нарушения, происходящие в организме инвазированных животных, подтверждены работами других авторов

(В.П. Федотов, 1979; Ф.И. Василевич с соавт., 1980; А.М. Матчанов, 1990; А. Yildirim et al., 2006).

Имеются также данные об ухудшении качества мясной продукции у инвазированных тенуикольными цистицерками животных (В. Литвинов, 1975; Н.Ф. Карасев, 1987).

О широком распространении этих цестодозов в Южном Федеральном округе и, в частности, в хозяйствах Кабардино-Балкарской Республики, имеются сообщения A.M. Биттирова (1996); A.M. Атаева (1999; 2003); В.М. Шамхалова (1998); А.М. Биттирова и др. (2009); 3.3. Елкановой (2010).

Поскольку паразитологическая диагностика этих гельминтозов у животных не представляется возможной и установить их зараженность можно только при убое, то серологический мониторинг с использованием соответствующих антигенов цестод может дать конкретную информацию по степени проявления реакции, что в конечном итоге позволит в определенной степени охарактеризовать эпизоотологическую ситуацию.

Исходя из этих соображений и учитывая отсутствие конкретных целенаправленных исследований по серологическому мониторингу ларвального эхинококкоза и тенуикольного цистицеркоза в плане использования полученных данных в оценке эпизоотологической ситуации по этим паразитозам, мы поставили цель: ❖ Провести серологический мониторинг при ларвальном эхинококкозе и тенуикольном цистицеркозе овец в хозяйствах Кабардино-Балкарской Республики и сопоставить данные иммунотеста с зараженностью животных этими гельминтами.

Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

•S определить уровень зараженности овец эхинококками и тенуикольными цистицерками в хозяйствах разных зон республики;

•S установить экстенсивность и интенсивность инвазии (ИИ) собак

/Г, granulosus и Т. hydatigen а,

S приготовить антигенные препараты из протосколексов Е. granuiosus, Е. multilocularis, С tenuicoiiis и провести их физико-химическую характеристику;

S оценить диагностическую эффективность приготовленных антигенных препаратов;

S собрать банк сьшороток убойных овец, инвазированных Е. granuiosus, С. tenu,coins и условно здоровых, из хозяйств разных природно-климатических зон республики;

•S провести серологический мониторинг ларвального эхинококкоза и тенуикольного цистицеркоза иммуноферментной реакцией; S сопоставить результаты серологического мониторинга с данными вскрытия убойных овец.

Выявлены незначительные различий в экстенсивности и интенсивности инвазии овец эхинококками и тенуикольными цистицерками как в зональном аспекте, так и в зависимости от породы животных; более устойчивыми к заражению Е. granuiosus были овцы карачаевской породы.

Впервые получен диагностический антиген при тенуикольном цистицеркозе культивированием клеток протосколексов С. tenu ICOI Iis в искусственной питательной среде RPMI-1640 и проведена его физико-химическая характеристика электрофорезом в полиакриламидном геле.

Получено фракционированием соматического экстракта протосколексов С. tenuicoins 8 диагностически эффективных белковых компонентов с высокими сорбционными свойствами и минимальным содержанием перекрестно-реагирующих белков с Е. granulosus, ПОВЫШЭЮЩИХ чувствительность и специфичность иммуноферментной реакции.

Практическая значимость. По материалам исследований разработаны:

• Технологический регламент получения диагностического антигена при ларвальном эхинококкозе из протосколексов Cyst icercus tenuico Iiis, одобренный секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии, 23.09.2011 г., протокол № 3.

• «Методические положения по диагностике тенуикольного цистицеркоза клеточным антигеном», одобренные секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии, 27.09.2012 г., протокол №3.

• Предложена иммуноферментная реакция на основе антигенов протосколексов Е. granulosus, L. multilocular is И С. tenи/соins для проведения серологического мониторинга при цистном эхинококкозе и тенуикольном цистицеркозе овец.

— на научных конференциях ВОГ «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями человека и животных» (г. Москва, 2010; 2011; 2012; 2013 ).

— секции «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии.

И Характеристике ДИаГНОСТИЧеСКИХ аНТИГеНОВ ИЗ Е. granulosus, Е, multilocularis

и С. tenuicoins, проведению серологического мониторинга иммуноферментной реакцией выполнены самостоятельно под руководством доктора

биологических наук, профессора Бережко В.К., которая оказывала научно-методическую помощь в проведении исследований, анализе и обобщении полученных результатов. Статьи, написанные в соавторстве, включают более 80% материалов исследований соискателя. Основные положения, выносимые на защиту:

> Получение и физико-химическая характеристика антигенов из эхинококков и тенуикольных цистицерков;

> диагностическая эффективность антигенов из протосколексов Е, granulosus, Е. multilocularis и С. tenuicoiiis при цистном эхинококкозе и тенуикольном цистицеркозе овец;

> распространение диетного эхинококкоза и тенуикольного цистицеркоза в разных природно-климатических зонах Кабардино-Балкарской Республики, зараженность собак разного назначения гельминтами семейства Тает id ае;

> проведение серологического мониторинга при цистном эхинококкозе и тенуикольном цистицеркозе овец, сопоставление полученных результатов с данными вскрытия животных.

/ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Распространение эхинококкоза, сероэпизоотологический, сероэпидемиологический мониторинг

Цистный эхинококкоз - широко распространенный паразитарный зооноз на всех континентах. По данным отечественных и зарубежных исследователей эхинококкоз был и остается серьезной проблемой ветеринарии и медицины. Сведения о распространенности эхинококкоза как в республиках бывшего СССР, так и в других странах мира, широко представлены в монографии A.C. Бессонова (2007) по цистному эхинококкозу и гидатидозу, где автор подчеркивает, что глобальное значение паразитарных зоонозов и, в частности, эхинококкоза и гидатидоза складывается из социального ущерба и экономических потерь, которые могут достигать ощутимых размеров: до 20 млрд. лир в год на Сардинии (Италия); 22,1 млн. долларов в Уругвае; 7,9 млн. долларов в Иордании (Цитировано по A.C. Бессонову, 2007).

Ущерб от цистного эхинококкоза среди животных складывается из падежа, вынужденного убоя, снижения продуктивности, недополучения приплода, значительных потерь на проведение противоэхинококкозных мероприятий (В.И. Полищук, 1975; В.Т. Рамазанов, Р.Г. Исмагилова, 1979).

Имеются сообщения об огромных потерях от цистного эхинококкоза животных в Ростовской области, Ставропольском и Краснодарском краях (О.В. Теплов, А.К. Журавец, 1980); Дагестане (В.М. Шамхалов, 1980, 1986); Узбекистане (И.А. Данияров, И.И. Истамов, 1978; И.А. Данияров, 1979); Казахстане (В.Т. Рамазанов, 1975; Н.Ж. Жанузаков, 1979; В.А. Боровский, 1989).

Поскольку в опубликованной монографии A.C. Бессонова (2007) по цистному эхинококкозу и гидатидозу проанализировано большое количество научных публикаций, мы в обзоре литературе постараемся наибольшее внимание уделить более поздним работам и тем, которые в основном, касаются регионов Северного Кавказа, граничащих или

близлежащих к Кабардино-Балкарской Республике - региону наших исследований. Тем не менее не оставим без внимания более информативные работы, проведенные в других регионах РФ, ближнего и дальнего зарубежья.

При мониторинге эпизоотической ситуации по основным гельминтозам сельскохозяйственных животных в Можайском районе Московской области за период 2002-2006 гг. JI.E. Мельникова (2008) отметила, что по приблизительным подсчетам экономический ущерб от выбраковки туш и органов, пораженных эхинококками и другими гельминтами, составил 2,7 млн. рублей.

О значительном снижении продуктивности животных и экономическом ущербе при эхинококкозе отмечали В.И. Полищук (1975), О.В. Теплов, А.К. Журавец (1980), Т.В. Ямпольский (1984), Н.Е. Ковалев Л.Н. Шипкова (1987), Г.С. Пулатов, В.А. Середкин (1987), В.А. Ромашов, В.Б. Ромашов (1987), А.С. Бессонов (1988), Р.Т. Сафиуллин (1991, 1997).

В Российской Федерации эхинококкоз распространен повсеместно -от Дальнего Востока до западных районов Европейской части. Этот паразитарный зооноз был предметом изучения многочисленных отечественных и иностранных исследователей, работы которых включали изучение вопросов морфологии и биологии (В.И. Полищук, 1978; Ф.В. Леонов и др., 1987; И.Х. Лумедзе, 1989; Ф.К. Скворцова, В.Б. Ястреб, 1990 а; N. Casado et ai., 1992; G. В orto I etti et al., 1990; P. Wang, X.H. Feng, 1993; E.A. Eiamm et ai., 2001; M. A m ram et ai., 2000); эпизоотологии и эпидемиологии (В.И. Кикоть, 1980; Л.В. Скрипова и др., 1992; Ю.Г. Артеменко, Л.И. Чикулова, 1986; Ю.Г. Артеменко, В.Б. Ястреб, 1987; Л.Ф. Бондарь, 1987; Н.Н. Агеева, 1989; С.И. Исаков, М.Г. Сафронов, 1990; В.А. Ромашов и др., 1994; 2002; Н.Е. Ковалев, Л.Н. Шипкова, 1987; Н.Е. Мурашов, А.Я. Сапунов, 1994; В.М. Шамхалов, 1986; В.Н. Шустов, 1998; A.M. Плиева, 2006, 2007; С.Н. Забашта, 2001; С.Д. Дурдусов, 1999; А.К. Журавец, 1999; Г.М. Лазарев, 2001; С.О. Мовсесян, 1999а, б;

Т.И. Тамаев с соавт., 2003; A.M. Биггиров, 2002, 2004, 2007; И.Г. Ирьянов, 2008, И.В. Сафронов и др., 1972; М.Г. Сафронов, 1980, М.Г. Сафронов и др.,

1986, M Bezzar, et al , 2000, H D N othdurft et a I , 1995, H Worbes, 1992, С S o uie et al , 1989, H Auer, H Aspok, 2001, N C.uca, 1998, P D u b i n s к y et al , 1993, С A H,monas et al, 1986; В.Б. Ястреб, 19946, 2009, A Varcas.a et al, 2003, F Tanner et al., 2006; S.B. Sikô,2011,S Attmdehou,S Sahfou, 2012), иммунодиагностики (J J Feng, 1993а,ь, X Q Zhu et ai , 1994, А.Г. Шакаров и др., 1989, B.K. Сапач и др., 1993; M Campos-Ponce et ai, 2004, В.К. Бережко, 1999; 2004; A Vatankhab et ai , 2003, J L. et a, , 2004, R В Gasser et a. , 1994, P Deplazes et al , 1994, R Malgor et al , 1997, 1998, T Так euch i, 2001, A S chweiger et al 2012 и др.); профилактики (А.С.Бессонов, 1986; 1998, M Am,njanov, 1981, M G Roberts et al., 1986 и др.).

По данным отечественных исследователей ларвальная стадия эхинококкоза регистрируется на территории Российской Федерации и стран СНГ более, чем у 100 видов животных и у человека.

Одним из массовых заболеваний у плотоядных, как отмечает В.Б. Ястреб (2009), является также эхинококкоз, который регистрируется у собак и диких псовых в 137 странах.

Аналогичное мнение высказывал И.Г. Ирьянов (2008), который считает наиболее неблагополучным регионом по цистному эхинококкозу в Российской Федерации Южный Федеральный округ, где, по его данным, эхинококкоз среди цестодозов собак занимает первое место, в среднем ЭИ составляет 25,2%.

Судя по литературным источникам в распространении цистного эхинококкоза в разных регионах роль отдельных видов животных неоднозначна.

Так, в Республике Беларусь основным источником заражения собак Е granulosus являются свиньи, у которых ЭИ достригает 12,8% по сравнению с крупным рогатым скотом (ЭИ - 0,003%) и овцами (0,6%) (И.В Сафронов, 1972)

Однако более поздние исследования, проведенные в этом регионе JI.B. Скриповой и др. (1992), свидетельствуют о более низкой ЭИ эхинококками жвачных и свиней (крупный р�

Информация о работе

Хайдарова, Амина Аслановна
кандидата биологических наук
Москва, 2013
ВАК 03.02.11

Диссертация

Серологический мониторинг цистного эхинококкоза и тенуикольного цистицеркоза овец в Кабардино-Балкарской Республике - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы