Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сравнительная характеристика молекулы клеточной адгезии (N-CAM) и глиального фибриллярного кислого белка (ГФКБ) в головном мозге крыс при неврозе и действии психотропных веществ

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Сравнительная характеристика молекулы клеточной адгезии (N-CAM) и глиального фибриллярного кислого белка (ГФКБ) в головном мозге крыс при неврозе и действии психотропных веществ"

дувивтцровиш ордаи тргдозоги крлззого ашсши 1ХХЗУДА№Та2ШШ,ЙЙ1ВЕРС)ИТ£Т яЫс 30Û -ЛШЯ ВО&ХЭДНБШМ УКРШШ G FOCCKEä

На правах p^kje-'or

У1ШША Гагяна Агетавдрокда

срлшшЕлышг хлр^жиютт модшзш мшточнсй

ДДЕВЗМ (К-сач) И ШШОГО ШБШШЩШОЮ ШЖОГО ЕЕДКА (Ш\Б) В ГСЙОШОМ ШЗГЗ КРЫС 1Ш1 НЕВРОЗЕ и Й&СТШИ ШйОТГСШШ ВЕЩЕСТВ

03.C0.04 - Сжшвшя

АВТОРЕФЕРАТ

ддоссртацк на ссшзкаиш учёиоа сгонеп*. зеалмяячв. бкодогзчаûkex

Днепропетровск - IS9I

»

• Работа выполнена иа ка^дре биофизика в биохимии Днепропетровского Орыена Трудового Красного Зиаменя государетввшого университета имени 300-двтия воссоединения Украина о Россией.

Научные руководители - доктор биалогических наук

профессор Березкн В.А»

- доктор медицинских наук Скибо Г.Г.

О^идиашше оппоненты

Вздуйте учреждение

- доктор биодогичеокил наук .Кончен ко Г.В.

- доктор биологических наук Стародуб Н.Ф.

- Институт аейрохирургвл ИЗ УССР г. Каев

.Завдта состоится р/г^аг^У^' 1991 года в Ц? чат-

сов на заседании спе^ашазяргаанногс/'совета К 053.24.06 по ирисуадешш учёное степени каадздата биологическая наук ира днепропетровской государственной унлвереггеха по адресу: 32С625, г. .Днепропетровск, 1СП-10, пр. Гагарка. 72, университет, бао-лого-акодогическии. у^акудьтет, корп. 17, суд. 407.

С диссертациен можно ознакомится в научной, библиотеке днепропетровского госуниверситета. .

Автореферат разослан "Х£" 1991 года

Учонки секретарь специализированного совета, доцент

Чёрная ВЛ1.

0ШМ1 ХШШГИСТШ. РДЗЗО'Ш

Адтуадьисои. ирсблещ. Деятельность мозга основат на дииа-инческсн штграровшши функциональных сЕетеа различного аерар-2£4eCiU)ro уровня , приводящем к пзлсиапрзвденвого

доведения, тонко адаптированного к с-сСакност:;» шеане! и заутренний преды. длительное тоническое 'дзрвно-псагаческои напряженна, ооьшо яйсяхшгееоя следствхси ксллд-зкея гвдиьццууг-л з акст-рсивмгоз уолоачя, трудно pt^pecae^fa кон&зктаую слтугц&э, ие-;здг.о привод1« i* разватаэ разнообразии <xoiu па'жлсгйчозкях на-livüsaa iUíTerp:tí-j^BiiOi! деятельности ксзга. Рхпростржечтс:а норманн нарушения «^яятивеого поведения являются аеврози я кеврозо • подобные расстройства»

Основное вшжяшв иссио^оватглен ври язучеиса неврогешиа сеотоянаи и влияния психотрсших пренаратоз еоарсдоточсно ка диаторикх системах в головной козге ( цедчагора, ах рацеатег-ц, Феркенты синтеза а распада и т.д.) . Однако неврогешш-з факторы затрагивают и другие кгеточииа системы к ккшоыенты, ••^торке jíü-гут оказывать иеаооргцстегнное шш опосредованное вдр-г.чде на неиро?,.едиаторяке процессы ( Аксшш П.К., 1970, Меерсок ¿,8.,, 1981, Бштеу B.S., 198';-, Layaen J.S., 1"33 ).

К такиы комаоноатш, в последние го ¿-я Bjaaásiwosws вое больше внимание неирохиаааоз, «носятся, врезде всего хюверяюотнне ысшзкудярные структуры, обеспечиваю:: ие аагез-ио ч слзидачеокне межкдеточхще контакты к взашдэдекзтвак, а такте цдтссхзлетние структуры, участвующее в передаче оагнадеа внутрь глеткя.

Молекула швтоедсл адгезии Ы-С/13, cszaasaaa г.орш кал сие-цдагоеани bev.opü«i:íii ЕднкоарО'хеГ'Л Д2 нозга крыз f,»org<msea,l97A). оша обнаружена во всех клешах неирззшишнпиького происхождения С Rutiahouser, '¡9?6, Granarini, 19ÜA- ).

В ьюзге крыс xl-tí.'lí представлена тренд г-'одехулярньм дормиак А, В, G (18Ü, 140, 120 соответственно ) , синтезирующимися • рязличшат »юточниш тад«4Я а на различных этац«х онтогенеза как результат аньтернатклюго сшшйсьига. единственного гена ( Goridis, 1988; 'rfalah, 1999 ) . íí-C&i может В значитель-

ной степеня влиять на различные внутриклеточные процессы, включая асиощада нксона с ыишеньо, сигналы, ко торив увелгтвайт уровень неиротранояатдараа ^рейтов, дкухсрсначрсзку ^леток. Эти неиротрошша з-дакш отр?хею? еаоообнос» Ы-С/Ы рвхударо-

в а» мажыеыбрашша контакты, требующих инядаащя спещдаческых взиилодействш мезду клетками. В головном коз га Ы-СЛЫ обзспечква-ет Си^-нсзависшую £^цгезва типа нейрон-нейрон, гатроиз-г-гоДроа, а0тр0№т-астрдит ( Edelпlan, 1908 ).

Глиальнын цдЮралляршш хшслып белок К>КБ - наименее язучев-ныл компонент промежуточных ^иламентов цитоске.ягта. Это вздона-спеца^ическал, но неироспацкфичесюш белок азтроглЕа 1Д1С (тгаиЪ, ' 19В5; ОаЪога,. 1985 ) . Фшхшеншша а ростворамш ГйКБ

мозга крыс представляет собой недеградировашув щор-'У о елка е молекулярной массой 49-50 цЦ, С ВаЫ, 1982 ) „ Предполагай юя участие Са^-зависших нейтральных прозеинез 1;шц>напнов в процессе сборки-разборки промежуточных ^нламеитов глхоскелета ( Кепе-ьйоу, 1989 ") . ГФКБ является слощушческш маркером «яроглия. В ответ на повреждение ЩС 1МБ аккумулируется в астро1©тах, концентрирующихся в нервных ишах и рубцах. Азярогдналыша рубщ активно участвуют в регениращди нервной щкана к восетсзшвлшнд уункдИП ЫОЗГа ( О'СаПаеЬоа, 1933 ).

Изучение Л&-0Ш н ГфКБ нрн эшюриыешгашюы ииьроав п дойсг» вди психотропных препаратов и<ж<$5 быть иаяеашн ь нохтаиета ишн генсза. иевровпевках состояния.

• 1'й-чь неетолк-ои работы здодхмагсш« а юигеше- "

глкоспецхи^чеокях оолкоа ]>1-С_М.1 к 1\уКБ соол«1*виьал:«> : пых отделах мозга крнз пгя оглые^чспу-шх-ысн а н дспс^^'-'Д

психотропных препаратов. В связк с яа! задачи иадзгоящзи ряЗохн сводились к следушщску:

1. Изучать относительной содоркениз 1-1-САМ и 1\еКБ в еятн отделах головного. 1доага крыс (гора боюшзс пшгушьрии, моззш'юк, гиппок^аш, полосатое тело, средам мозг) в норн к ирг, аисперк-мептальном неврозе.

2. Определить с .поыопдао спець^ическЕХ антител особакиасхя ко-локулярах ц<ори -Ы.-СЛМ и ГщКБ в различных отделах годошого мозга крыс в норде и при экспериментальном неврозе.

3.Исследовать влияние психотрохшшс препаратов на содерхшшо и стгапльность молекулярных «¿орм нейрон- и глиоспащ^ичеокях балков и различных отделах головного мозга крыс.

4. Кммуноьнтохпыичоски изучить ультраотруктурнкс особенности топографии ЫЧШа на поверхности нервных клеток х-олоиаого козга мшшышх аморионов после воздействия психотропного препарата вальпроата натрия.

- d -

Научная новизна и практическая ценность уайоти. Яодуче'чшо в ьастояшеи райсто данные существенно долсяжшт сведенкл о гоц-ронаяьноя иалеиулв клеточное адгезия а пшшааои ¡¡мйршляржч кислом овякв. показ suu количественна изменения и искз'.'еигя :,:о-леьуляртшх уярл Ы.-СШ я ГФКБ ара эшперйьентадьном неврозе. Впервые изучена И-CiM в различных отделах головного иозга крыс, подвергнутых экзперкыентадьиоку неврозу. Показано, п-гх океперн-меитадькш! невроз вызывает увеличенге содержания ¡.'.¿коренной цхзрми Ы-GA:;, ео всех исследуемых отделах головного мозга криз. 1> отличие от 11-0Ш для ГФКБ вшшлено сшзжслве содегикнля ц/гла-ьентноа ц.юр.-м u a jsopoú степени увеличение разтворгл'о,. çfop.\:u. üjpn этой степень количественных йзиевеняк Г-ЖБ боле: рь>ррлгена для шри оольших по-г-^арм л для дшонческол ci'caeî/.u. Роследс-ванве иолекуаярйы уорл нейрон- и гдаоспадафачеекнх белков позволило установить стасязлънесть трех фор,! lí-C¿M я резко выра-кениз'ю дегрддапща основного мвтактлого воливентгла Т\еКБ, нас ту-пеюьую у неврогазированных животных.

Вдерше исследовано влияние психотропных, препаратов ( галоне-рвдола и ваяьпропта натрия ) на содарканке а подхпептзды а 1\оКЬ. Виершг: ©характер* (звена топограиая недрспалши молекулы клеточной адгезии на совердаосга нервных клеток после воздействия атшлелсина зшпьпроата. Выявлена различная чувствительность неирональных и ишалышх клеток к вачьпроату.

Показана перспективность использования H-C¿li а'ГЙЖ в качества маркеров нервных меток при нейробиологическсм изучении невротических состоянии.

Апробация раЮта. Материалы дг.оезртацгд представлялись на 20-я ков^ренцаа ФВБО (Будапешт, 1990 ) % Ib-ш Мегдународноу. шохииаческом конгрессе ( Иерусалим, 199итоговых научных конференциях ДГУ 1ЭЭО, 1931.

На защиту выносятся следующие водохения:

I» Закономерность азиенениа. содержания H-CJffl а 1Ч>КБ в различных отелах головного мозга крыс upa экспериментальном пв-втоза.

'¿. Особзнвоств измевошы молекулярных чорл Ы-СА.Ч и IVKL в различных отделах головного ыозга крыс при акапервлымазъ-ном неврозе.

3. Особенности изкенешш содержания и молекулярных (¿ори Ы-САМ и 1Шэ при воздействии психотрошшх препаратов»

4. Закономерности /топографии Ы-САМ на поверхности диссоц&в-рсвашых меток гшшокшпа эмбрионов шл при воздействия вань-дроата натрия.

Структура и объем диссертационной работы, Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав (обзор литературы, материал и и методы исследования, результаты исследования, обсуждение результатов исследования ) , выводов. диссертация иллюстрирована 13 тайднцша и 39 рисунками. Список литературы содержит 165 наименований на русском и иностранкогл языках.

ШЗШШШ И МЕТОДЫ ШШ^ОВАНШ

ддц проведения экспериментов исдользоватся мозг 380 половозрелых крыс лиши! Впстар весом 2СС~л50 г. 3 Еешга^состп ох эксперимента &озг разделяли на различные охц&ш (мозжечок, гашло-кылп, и др. ) . дда получения очищенного препарата ГФКБ исасшь-зовулл 50 г белого вещества цозга человека -> "•' . ..¡.'»„^ ща-1И«1 жертв несчастных случаев череа 8 чаоов досде смри;. фату ры диссоциированных меток гиппокилна эмбрионов шя (лгош.ц СШ/ИАС ) ошш получов институте физиолога» им, Богомольца ¿Н УССР, г.Киев.

Кевротизадя животных проводилась согшо ьоделм Ведяева Ф. на оазе кь^йдры фармакологии Днеприетровского медицинского института (доц. Неде а II.А.) .

Специфическую антисыворотку к 1\»%КБ получали путей ккмуниза-ции кролеи очищенным препаратом ВЖБ. Иммунизацию. проводили по методу Ра оке - Очшцешшд препарат Л-САЧ и контрольная

штисьшорома оида любезно предоставлена про^. йлнзаоет Бок (лопеигаевскш университет В серииыкх анализах исюльзова--дьеъ «да.сыворотха, гюгученная аспирантом кафедры оиозшлши Д1У Крько К.Ы. Оцеьк^йчаость антисывороток тестирована перекрестив: щиуковлектро^орезсы и шгмунобдомшгом.

для пмыушхшжческого исследования Ы-СШ и 1\1(КБ при невротических отклонениях и действии психотропных веществ получадп экстракты мозга согласно об«зи схема выделения, представленной

на риа. I. Используемые психотропные препараты - галоперэдод н валъпроат натрия.

100 г:г ткаии иоэга гошгенизврувт н I luí сгдара А (25 ыМ тркс, IIGI, 1« 7,4; I мМ ЕГТА; I мМ ВДТА; I Ш ссввыи ингибитор трипсина; ü,I ыМ BIS Г; I Ш 3- меркиптоэтанол)

SI растворшые белая

S2

я ч

РI

F3

З'ХОО в , 90 VJSÍ + 7 Ш1 буфера А; промывка / 2 раза / с посдедугсшим. цоня-рздтироважем прл 30000 g 90 imi

+ I мл буфера А, содерж. . 2/j тритои-Х ICO

3C00Q в , PG кап

7 ил буфера А: промывза / Z раза / п последующим дент-ришугигоранием пра 3CL00 g

90'ЫШ v I "Л буфера А, содерк. 4 У f-'очевщщ

ЗОССО в , SQ Ш1Н

Рас. I. Общая схема получены адакцаа тканей мозга крао для ккмунохямического определения JM-CASÍ а Г*>К5: а - суператант, Р - осадок

Анализ содвр&ения Ы-САМ S ГуКЬ в различных отделах головного ¡.'.о а г а крыс проводила с- помощна ракзтного н лияййыа-ра-кетного кымуноалектроаорззоа. Балоа в пробах определяли ыато-

лещ Лоура и Бре^^ощ с модификациями.

Колекулярше <±юрыы K-GM и Г^ЕБ в различных отделах головного мозга крыс при эгсшериментальном неврозе к действии кся-хотропннх препаратов' исследовал* электрофорезом в плоскости 7,5 % 11ААГ и в плоскости градиентного 5 #-17,5 % ЙМГ соответственно ь присутствии доденрдсуль^ата латряя ко Лашлх с носда-дувцда ш.щ'цойл отнятом.

исследования деградации. 1Ч?КБ выделяли Са^-зависшув нейтральную пртеннаэу хадъпаин II согласно методике Xawashiaa, с последующей очисткой ионообменном хроматографией на ДЗ-52 и гмдро^оонои хроыатогра^ей на ухашл-сс^арозе. Активность ч>ер-мента определяли по Gopalafcriahna н. . Деградацию ШКБ кальцитом II анализировали шцунойяотингоы.

Топографии H-(JA!i на поверхности диссоциированных клеток пшдакашш эмбрионов мшш, «ульташровышых in vitro ь условиях ионослоя после воздействия вадьпроата натрвя, ксследоваг-ли 1ащуноэлектрошошифоскош1чисша методом с ясполхзовсияем. аам-и-САМ 1! вротеина А, меченного коялокднш оолоа-ом.

КаЖЬТАТЫ ШИВДШаНМ И ИХ 0iCy&.jSHJ2S .

Изучение молекулы щеточной ачгезки Н-СА.Ч т> клзличпых отделах головного мозга крыа гри зксперя.'.еиталгпоы неврозе

Цоогольву аевроа является ^уннулонядышм зйбодсшшие^ .пера-ноа система, вкзвашш нарушением- основных норвинх вродессов-возОулийннн и торшаення, возникает вопрос, что происходит с оелкшц мембрац нервных ыеток при поихогенаих патологически poaioiinx. ащ©кти психической травма во многом определяются структурными взмеиениши нервных клеток. • В настоящей работе в качество маркерного белка нейронов нс-слвдовилась молеедла клеточной адгезии Н-САУ в тех отделах головного мозга, которые в тон или иной мерз затрагивается щунк-дконьлъко цсихогеинши воздештьинми: кора оолыдих полушарии, fcoroj«Ad контролирует всю внешую нервную деятельность; ыоз&ечок, ответственный за координацию движения; гшшокьмп и цогюЬатое тело - образование лимсическои системы, ответственные за д/зр-мирование змодашалыщх состоянии; средний мозг, контролирую-

щва инуррмадо, поступаюцув от вегетативной нервной системы и управляющий организмом с помощью вегетативных нервов и гипофиза.

Анализ содержания Н-ОАМ провалила ракетным мммунозлектро-форегом. Результаты нших исследований показала опрэдвлсаяуэ ' закономерность палачестве иных изменения, Ы.-ОШ при авзпсрикек-тадьном неврозе.

Результаты представлены в веде диаграмм на рисунках 2-4. В связа с трудностью получения л хранения высокоочнщишшс препаратов оеляов, дда удобства анализа результатов содержание М-GM выражалось в условных единицах, представляющих осйой ст~ ношение длощздд дика шмунодрецшштата / ракетка. / it общему со-дераццшю белка в ярое?., достоверность изменении, проверялась согласно "t - критерию Стыцдента.

Содержание &L-ÜM в мембранных экстрактах различных отделов головного мозга контрольных крио примерно одинаково и составляет з среднем 6,57 * 1,35 y.ñ./ur белка. При экспергшенталь-иоц неврозе дрогохо.чнт существенное увеличение содержания мембранной. iцорш гшароаагшол молекулы клеточкой адгезии: в среднем в 1,59 раз во всех исследуемых о-дизлах гахсошого моага { пас. Z ) .

Параллельно с определением количественного содержания проводились исследования молекулярных щэра Ы-САМ методом ккыуцо-бдоишга. Мояехдглярн«! спектр Ы-СД! при эиззергмеасальисм невроза практичесш! на нзиеилегоя и представлен "кдасоачесаяки'' воишпепэддта с ыолекулярнои массса 180, КС ж 120 гД. Однако, модекулярнал. уяриа Л-СДМ в о(5лазтл 120 кД в ыезгз гевротазкро-вшгаых жввоошх ».-.ада Сояев дг ¿«!р.чщ. характер. Pro может ови-детельекзовать об увзявчеяви количества полисы?-овше кислот на поверхности долпшептида. ¿Южно провала**!;::., что в ответ па во-змоанна наружная махклагочнкх взагсгодейотвдд, ври энзперпманга-льнои неврозе тишчшгсх компенсаторные ивх£шлз:.ш за счет уьв-личендя содерммкд jM-OAU. денное увеличение. леиронаиьной «оде-кулн ¿'.паточнои адгезии иохат онособоталвать сьерхадгезивности я ai'para¡,"3 нервных клеток, нарушение передача возбуждения, и связи с атач арвдатавлявх иктерео ллтэратурше даиньа об увела-чещщ уровня ганглиозндоз на поверхности мзморш ко^жих меток

о

УЕ 12 i

Л

12 34 1235 кора Оодыжх полушарие

I 2 3 4 I 2 3 S

гнддокаш *

Ж 12

I

Л

1234 1235 В03ЖВЧ0К

УВ

12

6 -

А

12 3 4 1235

Л ОЯС- V ¿¡»X ~ 'i'ßJiO

» в

rh

1234 1235

Bio» 2. диагракш язиеаении ссдоршшя Ж-С.Ш при ыат-p;'s;sjtxaKUio« неврозе и доиотвиа доахогрошшх препаратов: А - красы, ас подвергнутые невротизадш; В ™ ^евроткзироыашые Ч "оu; 1 " Ооз введения препарата; 2 - "сишоразовое hbsacmiío га-локьрадойа 1,5 мг/иг за 40 tiiai до декапатшда»; 3 - -/- за 24 часа до ^икапктахдя; 4 - хроническое введение rasoEspnvvsa, екь-дкевио Ib iít/ег-З лед.;. 5 - одноразовое введеаиз ваяьпроато паз-piiíi ¿i'u яг/кг; * - достоверные -взионеши по отношению л; noj~.e; - .*озт«шр»ы8 изменения по oiuosjcîïkjo к неврозу.

В

*

6

УЕ

20

Ib -

А

шра сольших полушарад В А

X

2 3 4 12 3 5

растворения

УВ ZU ■

10

козавчоя

®

1

12 3 4 1235 'удяЕменояыа.

А it »

1

В„

(í, «

-r^'l

i'/j IIj

г 3 i 12 3 5 píí02B0pS.Vi5t

1234 12 3 5 1сда»с-ницД

,YB 20

m

гашоисча

3

I 2 3 4 12 3 5 ргчтпорташ

гЬ

ff

-j

12 3 4 I 2 a 5

ц^н'мг/нтпж!

F»:c. 3, дазгрг;>-:ш |:з;ло«";»ш соли решил КЫ> пр т-поятаяьяоч нсврэзя к двшглг". х^г.хотройиа артт«} ад->9: ( оооэжпопм.ч см. pro. Р. ).

В

«г

водоемов тело

УВ

20

10

х

© ® ®

1234 1235 рштворжщ.

1234 1236 фвлдаентный

УЕ 20

10

средам исзг В А

1234' 1235 растворами

1234 1235

1£аД££1еИ1НШ1

Рас. 4. Анаграими коваче с твегаш* яшеиелмй 1ОДБ при акспаршеитальцои неврозе а деистам психотропных препаратов: £ - красы, не подвергнутые невротизации; В - невротизяроваа-ныа крыои; I - баз введенвя арапаратов; 2 - одноразовое введение гадопериАОла 1,5 иг/к- за 40 юшут ло двкапятащиж^ 3 - одноразовое аазденис гадоперидсла 1,5 иг/кг за 24 чша до декаддтшри; 4 - хронической введение гаяоперндода, ежедневно по 1,5 кг/кг в течение 3 недель; 5 - одноразово® вве-лваке ЬЁЛЬпроата натрля 200 кг/кг; * - достоверные Езканыша ш отношению к норме; ^ - доотоверше языенешш по отиокд-шш к неврозу.

прз невротических состояниях { Гуляева Н., 1982; n&pport , 1983),

Иссладовакда ГФКЬ в различных о вдел ах головного мозга

крыс пря экспериментальном неврозе.

В ходе изучеаая нввротаческои! патологии в качестве специфического маркера глналъных ivistok мозга исследовался - елирдь-иыи цшбрзллярннл квелый село и промежуточных уялсментеа ияоеив-лдта. РостЕорс'>.че и tjauiBLSimiue экяраиш 1Ч-КБ аа гатя кссжздув • mux отслои кш>>лого уозга врио выделяли согласно o6s»tt ох заде niAv.oTajv.4ftt'uo>i ita pao. I. Кшшчеозэенноа содержала ГчгКВ в эк-С!]:1й\тчл. мог) г.; ярые сире^еляла лпю&кнргкзтнм гае^иорлектро-•i-op^r-'i. г^зупьстен ев здзтегьса-вукт о знагптелыюч иенгодоа npeí■ -í• 'у -т^чт• (.4 сетроняяаи.ных к'атоя пра

т-зро*!. >чаoE!i состояния. В голивпом козг? глптральнш крае пая-оо.'йЕса содэржт Г£КЬ ^вр^ч-зрис? дяя cpwiero глада з гшпхо-шжч. lipa эюперим>н«шлоа каврозч арог.охедит содвр-

даная алихы'внтаоа уор-'л ]ЛЬКБ л увеличений ого рэотзоргмои черт, Одкрво ^аш-гтя затоиоадоргг-зть отавчеша но дая лсох ясазде^'-и? o£¿í¿-io3 мозга кг'.'З. во.1:*'- ачплптельзшл г?г.еке?шя характерны для гору оользпх iicjiyrjapsi-t ;а .м-б/Пеекэя скатам, которые а оолг-вчч г-успзая иесуг (¿ушшцоиааьпуя аагтузгт/ нрл нзвротячеоких всз.\ои~ «r^'.ix (рул. 3, ■' ,).

Результат лаодадовшмя основного аятаятпого no.rsmenTív.a рс~ оггорхМ я '¡'"лг'.'.онтной шзрл ГФКБ показал.*, что еяецг.,д';аскги

/V'рэгляйшси. озлок осло", .л'я.т.г'орхяц с7|)у7лурл1лд рз'йегзнтшч год гоглв1«отя?.>< гззподопод по о, '"лети о н-САМ.

Ii eojí-a рлстлоршш, гак а '.гг^г'поянд зредсписши яп~ лтоатчмсп с ."олл^дярт'ол шюсол кд. Прд на прогуле;: о': СО-

СТОЯЛ?®, ПО-Т'.ЧдК-ОП'/, арОГСХОДК5 дегрздшрш ОСНОВНОЮ toxx,ur-u-

тйда ¿9 до бате* к^зге.чодокулярчах «sopr-j в обласк! -Í9-4I нд л 30, 16 í'vj,. Тщ'-'м ур.д..,овшя оя-'епеиа во зозх плтя ¿саледуегнх dUift-'ita голоЕчою мозга крыс а для рг-зхворшж, а для вяяа.в.>№> яоа чпр'н 1'ЛКВ. Однако в глппокампе я полосатом т-чдв она в оаи-пед степени выреяена,

В работах х;ослсдних десяти лот показана вагл?ч роль Са^-зи-воддои сист®лы деградадал ряда iieiipoonoia^fiecuax белков. Воз- • маю дйшая Аегра.^ащм являотсл одкол кз рсауляторных роалгдая клетки, üpr¿5H;53í-.a в х^лоы.

¡¿¿следование в различных отделах головного мозга

• ,KffHQ при действии психотропных веществ (гадопарадода и

вадьпроата цат „ия ) .

Согласно литературный данный ведущая роль в генезе невротических состоянии отводится домашнергическш кеханнзк.ам. достаточно ощутЕИнй вклсд в ато вносят такхе ГАЫК-, Ai- и пепвдд-оршчвскиа нейроны. Изшшровшное вмешательство ь работу какой-либо ка вша указанных скски не дазт надекнш. клинических результанта. до настоящего времени нет никаких сведении о роли адгезивных белков нейронов в генезе неврозов и их поведение при. воздействия психотровных препаратов. В данное раооте в качестве иепрояентичесжого препарата бал выбрал гаполервдол (4-/пар&-хлозденил/-!- [э-/нара;уаор0ензоид/-вро1шд ] -шшераджая-4 ; G^E^CiaMO^) . Галопервдрл относится к производным оутирсщюко-на, обладающих сильной нейролептической активностью. Газшперн-дод применяется уае , оволхно длительное время, но до сих пор не до конца ясен механизм его действия. Особенно большой интерес вшивает генез оквграпирзмддных расстройств. В ходе исследовании галсшерндод вводили животным в доае 1,5 иг/кг (Х-еувек ) Контролем служили крысы, которым не вводили галоперпдад, a так-se крысы, у которых не вызывался невроз, ео которым вводшш препарат. Количественное содержание Ж-САЫ через 40 ш и 24 часа после .одноразовой инъекции галоперддеша в дозе 1,5 иг/кг, а. тгака при хроническом введешш препарата в различных овделах головного мозга интактных и навротизвровашшх 1фнс поставлено на рис .2. Уна чзреа 40 шщут после введения галоперадола наблюдалось резкое сшивенде возросшего при неврозе содершш* мембранной íi-СШ. Спектр молекулярных tyopw Ш~СШ характеризовался тремя "классическими" полипептидши 180, 140, 120 кД. Ира действии поихотропнцх препаратов молекулярные (¿орлы Ы-Ш т изменялись. Общепринято, что основным мгханвзыои действия галопе-радона является блокирование дофшииергических рецепторов. Вадь-проат натрия в терапевтической дозе .200 иг/кг, действующий ча-рез ШКергическр с ко тему, не окьзываа влияние на содеркаике Ы-ОШ в различных отелах ыозга неврс-изировашшх крыс. Воз-кокно увеличение на во ве радости нервных клеток контроли-

руется cooiojíKHüii до^шштрвчесюп системы.

- -

Иоелядоведив дл^КБ в различных отделах головного мозга крыс пра доистп"?, дспхотродных вацсств (галспошдсла и вальпроата натрия ) .

Как я пра эжпсргс.'.оитаоьнои неврозе ГФЙБ мозга крчс йолеа чувствителен к впадении аатипсихотяческлх средств. При изучена^ шаянЕя на различных. псяхетрОЕииз. иедикшентоа выбирались те хе срока м дозн ирераратов, которнч ошхсыганэ в цредщущпА главе. I зультатн прадс*;г,чдени на ргс. 3 а 4. Одноразовые янъ~ екцчк нсиуочртш препаратов но достаточен для восстгг.овлзнля морального содеркеазч Ю, что ет.е раз шдтгорадаег ссркззииз отклс:-,енгш в ц-ункидашрсгакл" элементов датезаелета при сслха-чеоко-ч заоодевзала. йитерсо-ю, чго хроническое введиаа^ гвлоае-рн.лода мнтактнги крлгош (С-азнввротЕзацпи) егрднекно по 1,5 мг/Чг в течения 3-х недель нраводит к нарул'анг» го.кчэствегсюго о.одер-хгизя ГЛФ в мсзезчко и оссоенно в среднем иозга, в ?о эрег'Я кал в ко г-« сольашх пешуиарт я лнмоячесый зхюсекв отхюнетш пэ оамеч^ны. Нвэданьд гачодзрадола я ваньпроата натрия маю изменяла шишватодьд сиолтр 1ч£»КБ у нивроачзнрев^чнга арвз. Однако после сицюрйзовых ¿шъйхидн. препарате»! молекулярные диривиты Г '!'.1-' н»,к.: 30 ад м РлентЕ'1)И14ировЕлксь. }.!о.?.ио отеетать, что ьельер??', ро-р.^чмому, окмьваэ® бшт суи'естврлщоо здгязхв на о ее э ему ярамиуго'ншх '¿илшонтов (Г'1>КБ) , га Ог^-везазес»? ть с^зте-

..•П'т;1,П-КБ Са^'-зависгшдл'л тггхнвяв гзекч. »альасгашз» В гослвдд>яв год.ч 1шогдх иссд0ч0чгтйл9н ент"::-зсует >/0><3!т?» л'йХ'амш'л пл«у<»атов цдтоскелета. Предполагается, ч:\> " г-тем прокосе ^нунг-рт участие циотеяновыс нейтральные вротехнези-лйльиаин I, кальппин II, а такка ях эццогекяш юаггбзхор ксльпа-отат-ж < КмгасЫ , 1983 ) . В наглея работа в основу .рзэдалеаея готададоов х. и II от ингибитора к да~>лолосш очиоткя воложек катод, опиомкшй Кеготма,

Дегреигшг'» каиьпш«н»я определяла тдгнойг'сгчич.,;» посла накубчцч« препарата ]дЛф аз иозга зрцец Ери з аече.ше 60 минут с ^ариетт-д препаратом кадьпеона I и II соответственно. Результаты »-¿згисалоханга воваз&яд какоодздуы степень дегрг^г.им основного лоланептидн 1\уКБ 42 (VI на н;окоыол«1\улярчл1а дорквьзи до 20 лтл ».чулвиден вадьвдипа П .5 "Л Са(Л0.

Результаты подтвергдаиг Са-зависшшй процесс деградации ЗЖБ^ дршшз литературы свидетельствует ой уЕедгаеввн свободного при невродогдчасии. заболеваниях, что_ ведет к нецродегенирацкк. Однако ыехашзи пассивного выбрх-а Са*-+ не совсем ясен. Известно, что ненротрансшттарц шгут непосредственно регулировав клеточную кшщнтрапэв свободного Са"+. данная система включает в себя меабранвиз hohhhû канаш, каяьдаа-содеркаяио органел-лн и кадьгрд-связцвшщне белка. В атих процессах, пэ-вздшску, активное участие npmmisaa и каяыщА-эависюше протешазы-кальпаины.

Илуьцгаопатохвмячеокоо исследование распре,целения Ы-С.Ш. на поверхности нервных кдеток при воздействия. психотропного препарата.

ддя к^ауноцатохшического исследования распределения К-САЦ на воверхностЕ нервных клеток била использовала культура дкссодароваиных ;леток гившкампа аибриона мыта (линия СБА/С АС ) , .выращенная в условиях иояоолсл. О распределении Ь-GASA на поверхности ¿¡деток судшш. во лоншшзада частичек золота (коныогат протеина А'с коллоидный золотой любезно предоставлен д.б.н. Луданш Ы.д., институт биохимии Ш УССР ).

Топография Ы.-СШ на поверхности нервных меток язучшшсь при воздействии вадьнроата натрия. Беременной ыыше (17 дней) внутраорсшнно вводилась терапевтическая доза препарата 200 иг/ кг» Через 40 шшут гшшокяып эмбрионов данной мыши использоваш для культивирования клеток. Контролем служили эмбриона интактной мыши, без введения препарата. Распределение Н-САМ на поверхности нервных щёток опрадшш на 5-в. 12 дай развитая in vitre Иденти^икаадю клеток проводили согласно ультраструктурному кре-тершз ittcge . дрл воздействии ваяьпроата на 5 день развития культуры отмечалась деструкндя цитоплазматичеокой мембраны нейронов, в то время как глиадыше клетки и нейриты харантора-зовшшсь целостной отруктурой. Однако на гднадьвых клетках образовывались вдтевадые отростки, на поверхности которых разно повышалось количество К-ОШ. В. норьае гдиакыше клетка содерашг-ли очень мало warwa. На 12 день разыгчя нервных клеток, нодве-ргмшшх .действию препарата, цшечилась тенденция к норлализа-адш л^тоархитектури клеток, что еще раз говорит о пластичности

i5 -

нервное систомы. однако в некоторых местах мембрана нейроноа зад ©ляда "диздуэную* структуру. В утях зонах наблюдалось увалй-MeHSís чкаиа метм JM-CAM. Таккв отмечена высокое садерхшшз H-í!¿?i на повврдюстй'нз-йрлтов я в местах сплетения отростков

глтпъпсго,, так я иенронаяьиого происхоядшшя. Hps допслнл-ííuwích усяле"й.ч дозы вачьпроата (введение в среду культлвзро-вшия Ю-6!} препарзза ) вшшллатся резкие изменения ультраст-румуш клеток, осооенно штосквлета, резко падает содержанка JM-ÜAM на аоверхности всех исследуемых клеток. На основоши-: ио-луэдшшх дшша кэзшо предполоявть, что подобные садзкты могут спеть мзсто к в условиях Енутрйугробного развития плода в случаа, если беременная ягчязша в гцязапеоякв пзряодн развитая кершои с нотами плода ( дар^огзне'?, синйдтогеиез ) приншада ниахотроч-::дргпарах.

ВЫЮДН

1. '-еврэвдзнцпя аикотпнх ояазшзаът значительное влияътз на содчткшез нолй1г/,"н алото'з:сн рдгез!П íí-CA'i а г.таалъиого б<?д~ дрс""-'?'/'ro'P'ín; " 7лг-,',1.Ч'7сп л P'i3/;.TH:.:JX о/Ч'?го.':'"":ого i-nu Ст.и^-.: уaojvu I£-(Jf',¡ кечр^стязт, ] : C'~oi'ir: ' ••гплой л p-í:TiíCi;ir:on hojm TYK5.

::■;:•; r'"?ov:;!>: из г.т*.пг на ¡-олзкулярчио ''ОП'н ".г.г;г7"а гчгго'кгсл ^а-еэ-л Н-С.'М, э то врэп »да оплок про?-/:— сдие-'.зитсз Ш\Б подвергается деградации с ооразовеш-■"S ¡шзкомолзкуляргшх полглзнтщюв.

3. 01*^-0авет.чмая протезназа яаяьшшз II дегрдчкруот оелок глкад&них, ароиез^ючних $злшэнтов МКБ с образованном ш-зко-.•.ове^датада. иолапсптадоэ, среда которых выявляются" дервваяш Г''КВ, imopuo характерам для головного мозга вевротизлровешшх

4. О.-лор'опвсе введете ненролептака гчлсне^дояа иор»шт~ oyo? содс.;."^)'!:;'! *,е«:0ро*шон Ы-П/Л во bqvx ¡'ислс^уон;;* ох~ делах ivnvnnvo шзгя нопрохизйровьшшх крчо, а то ррвкн оодертшно Ий'.Ь оугрствешм по изменяется.

б. Сдиоразогос введение нскхотрсшюго Б«'«естич вашароата олюкваат льзнатасольное элшшм на содержание Г1--0АМ к IVKB в рпзлкчачх. отделах головного мозга «евротпзщоисщга жпт»тинх.

Хропдчеекоü введение галоперидола не изменяет структуру шяе-кулярных (¿.ори Ы-САМ, однако приводит к появлению деградированных (¿ори 1^КБ в г.. ¿зге крыс, не водЕаргенашхся невроткзалди.

С. Введение вальпроата беременной ише (на I? день) значительно нарушает лишиизоцил Ы-СМ! на плазматической wer,брава кяетоп иашокшяа мшвннюс эшелонов, аырагцаншл. в мовоодсйиих вульа^'рах In vitro .. Введений вальцроата в Аозг вш терапевтической 200 ит/кт приводят к развитии яеидокагвнврадвш-» них нродессов.Нейронаяьные структуры в большей степени подвергаются воздействии препарата в отличие от глиальных.

сашок рмп , шишвшш по м дясвтда

1. Ьерезка В.А.» Шевченко Г.Ы., Неда П.А., Ушакова Г.А., Пс-лииенко 0.В. Характеристика конкзнаваяик-А-связывйЕЩйх вей-* роспзцшузческих т^дикопротекнов в различных отделах головного козга крыс при экспериментальном неврозе //

Уя®, блохим. аура.- 1983.- T.6I, & 6.- С.81-84.

2. Немецкой B.C., Ушакова Г.А., Бусыгина С.Г., Беразиы В.А., Лрорацкий А.И. Влияние малых доз ионизирующей радиапдг на промежуточные ^иламенты й Са^-активируе^ую систему прсхео-лиза головного мозга крысы //

Гелиобиология,- ISSI.- Т.31, вкп.З,- С.333-340.

3. БзЬькота С.А., Nadzvesiy V.S., Bisigina 3.G., B»oret3'y А.Х., Bereain Y,A. On. ths role of Cs-dependent protelnaaaa calpa-Ina ia rearranseients of Bllal intsraedlat^ filaaenta of fr~ radfßted rata //

Abatr. 20 th Meeting of I'2B3, Budapest, Hun^aiy, ¿u^unt; 10-34, 1980.- r.tSE, •l. Ushakova G.A., Esruab P.A., Berezln V.A. Strong rearrange-aanto of glUl lnteraedlate fllauisnta In the bratn of rata foilowjna experlaflctal nsiarocle //

Abstr. 16 th Intern. Oongr. of Bloohea. Ierusalen, lSSi, Auöuat 4-6.- Г-477.