Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сравнительная характеристика лакказ высших базидиальных грибов и возможность их практического применения

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Степанова, Елена Владимировна

Введение

Обзор литературы

1.1 Лакказа- распространение в природе и физиологические функции

1.2 Некоторые физико - химические характеристики и субстратная специфичность лакказ

1.3 Окислительно востановительные свойства и структура активного центра

1.4 Механизм катализа лакказы.

1.5 Практическое применеие лакказ 41 Материалыи и методы

1.1 Материалы

1.2 Методы 50 Результаты исследования и их обсуждение

1. Культивирование базидиомицетов СогЫш ЫгзиШ и СогЫш 10пШш

1.1. Изучение поверхностного и глубинного культивирования базидиомицетов СогЫш ЫгбШш и СогЫш гопШш в колбах

1.2. Оптимизация условий культивирования базидиомицета СогМш МгбШш в ферментере.

1.3 Влияние индукторов на биосинтез лакказ

2. Получение лакказы из базидиальных грибов Сопо1т Мгш1ш и СогМш 1опаШ. Определение их некоторых физико - химических характеристик.

2.1. Выделение и очистка лакказы из базидиомицета СопоШб ктШш.

2.2 Некоторые физико - химические свойства базидиомицетов СогШш ктШш и СогЫш zonatus.

2.3 Субстратная специфичность лакказ

3. Стабильность ферментных препаратов.

3.1 рН и термостабильность лакказ. 116 3.2. Стабилизация ферментных препаратов путем лиофилизации

4. Изучение доменной структуры лакказы методом дифферинциальной сканирующей микрокалориметрии

4.1. Сравнительная характеристика методов удаления Си (II) из активного центра лакказ грибного происхождения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сравнительная характеристика лакказ высших базидиальных грибов и возможность их практического применения"

В настоящее время ферментные препараты находят широкое применение в различных отраслях промышленности, медицине, сельском хозяйстве и ряде других областей. В связи с этим возникает задача получения значительных количеств ферментных препаратов с использованием достаточно простых технологических операций.

Источниками ферментов могут служить высшие растения, ткани различных животных, микроорганизмы. В последние годы особенно интенсивно развиваются микробиологические способы получения ферментов, в частности, из базидиальных грибов. Эти грибы синтезирует как внеклеточные, так и внутриклеточные ферменты различного спектра действия при культивировании на жидких питательных средах. Таким образом, они могут быть весьма доступными источниками ферментов в промышленном масштабе.

Основными подходами для получения значительных количеств ферментных препаратов являются скрининг штаммов, создание штаммов-суперпродуцентов, а также использование индукторов, повышающих продуктивность штамма. Следует отметить, что создание штаммов-суперпродуцентов с использованием методов генной инженерии является весьма дорогостоящим подходом. С другой стороны, одним из наиболее простых путей повышения выхода ферментов является применение индукторов. Обычно эти соединения сходны по структуре с субстратами исследуемого фермента, либо сами являются субстратами, либо соединениями, аналогичными ростовым природным субстратам диких штаммов данных грибов.

Для широкого иползования ферментов необходимо получение их в значительных количествах и одним из путей решения этой задачи является переход к глубинному культивированию продуцента, являющемуся технологичным и производительным методом. При этом важным этапом в исследовании является разработка условий ферментации. Именно на этой стадии имеются резервы для увеличения продуктивности микробных и грибных культур.

Для базидиальных грибов, относящихся к белой гнили, характерна способность синтезировать значительное количество и широкий спектр оксидоредуктаз и, в частности, лакказ. Лакказа /монофенол, дигидроксифенилаланин: кислород оксидоредуктаза КФ 1.14.18.1/ относится к классу медьсодержащих оксидаз и катализирует реакцию восстановления молекулярного кислорода различными органическими и неорганическими соединениями непосредственно до воды, минуя стадию образования перекиси водорода. Эта реакция приводит к образованию свободных радикалов, которые могут вызывать расщепление алкил-арильных связей, окисление бензиловых спиртов и расщепление как ароматических колец, так и боковых цепей в модельных компонентах лигнинов. В присутствии соответствующих редокс-медиаторов лакказа может окислять нефенольные субстраты, что значительно увеличивает субстратную специфичность фермента. Кроме того, лакказа является представителем группы редокс-ферментов, способных катализировать безмедиаторный перенос электронов с электрода непосредственно на кислород. Каталитические и электрокаталитические свойства данного фермента обеспечивают возможность его широкого применения в различных областях, как-то: иммуноферментный анализ, биосенсорные технологии, системы преобразования энергии, органический синтез и системы биологической деградации лигнинов.

В последние годы количество публикаций о свойствах и практическом применении данного фермента значительно возросло. Проводимые различными группами ученых исследования можно подразделить на три основных направления: фундаментальные исследования структуры и механизма действия лакказ; изучение физиологической роли лакказ, при этом особое внимание уделяется роли фермента в биодеградации лигнина; практическое применение фермента в вышеперечисленных областях биотехнологии. Большое количество работ посвещено поиску новых штаммов-продуцентов, и, как следствие, получению новых лакказ с различными физико-химическими свойствами.

В связи с вышеизложенным, расширение круга лакказ, сравнительное изучение их кинетических и биохимических свойств представляет интерес как в плане установления общности и различий механизма действия, так и в плане поиска лакказы, в наибольшей степени отвечающей требованиям практического применения. ■ - - ■ ■

В настоящей работе ставились следующие задачи: 1) увеличение продуктивности базидиомицета Сопо1т ШюШия путем оптимизации условий глубинного культивирования в колбах и ферментере, подбор индукторов; 2) выделение в гомогенном состоянии внеклеточной конститутивной формы лакказ и их физико-химическая характеристика; 3) изучение субстратной 9 специфичности ферментов и кинетического механизма их действия; 4) изучение структуры лакказ; 5) разработка подходов к стабилизации полученных ферментных препаратов на основе данных изучения их структуры; 6) использование лакказы как фермента-маркера в иммуноферментном анализе.

Обзор литературы

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Степанова, Елена Владимировна

Выводы

1. Оптимизированы условия культивирования базидиомицета С. ЪтЫт. Показана возможность использования полунепрерывного метода культивирования, обеспечивающего высокий выход лакказ. Установлено, что серингалдазин является наиболее эффективным индуктором биосинтеза лакказы, повышающий выход фермента примерно в 10 раз.

2. Лакказы С. гопаШ и С. ктШш представляют собой с мономерные гликопротеины. Были изучены их некоторые физико-химические свойства (молекулярная масса, р1, аминокислотный и углеводный составы, рН и термооптимумы). Лакказа С. 10паШз стабильнее и имеет рН-оптимум, незначительно сдвинутый в нейтральную область по сравнению с лакказой С. ктШш, и обладает более высокой рН- и термостабильностью. Отличительной чертой лакказы С. 1опШш является необычайно высокое содержание остатков глицина на молекулу фермента.

3. Установлено, что исследованные лакказы имеют широкую субстратную специфичность, окисляя орто- и пара-дифенолы; аминофенолы; полиамины; другие азотсодержащие соединения; некоторые неорганические ионы; а также модельные компоненты лигнинов (например, синаповую кислоту). Эффективность катализа обеими лакказами была значительно выше аналогичных параметров по сравнению с другими грибными лакказами. Механизм действия этих ферментов относится к группе "пинг - понг" механизмов.

4. Температуры плавления белковых частей молекул лакказ С. ШгбШш и С. 10пШш составляют 87°С и 92°С, соответственно, что свидетельствует о том, что исследованные ферменты являются самыми термостабильными лакказами из описанных в литературе. Разработан метод удаления из грибных лакказ ионов меди второго типа с сохранением нативной конформации белковой молекулы. Используя полученные производные ферментов показана их трехдоменная структура.

5. Изучена возможность использования лакказы в качестве фермента-маркера в ИФА для определения человека и инсулина с использованием как хромогенного, так и флуоресцентного субстратов. Использование флуоресцентного субстрата (ГВК) повышает чувствительность ИФА почти на порядок. Таким образом, лакказа как фермент маркер может быть успешно использована в различных вариантах ИФА, с флоуресцентной детекцией продукта.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Степанова, Елена Владимировна, Москва

1. Barret F.M. In physiology of the insect Epidermis.// Eds.: Binnington K, Retnakaram A., CISRO: East Melbournan, Australia, 1991, P. 195.

2. Barrett F.M., Anderson S.O. Phenoloxidases in larval cuticule of the blowfly, Calliphora vicina // Insect Biochen., 1981, V.ll, P. 17-23.

3. Thomas B.R., Yonekura M., Morgan T.D., Czapla Т.Н., Hopkin T.L., Kramer K.J. A tripsin-solubilized laccase from pharate pupal integument of the tobacco hornworm И Insect Biochem., 1989, V.19, P.611-622.

4. Reinhammer B. //Purification and properties of laccase and stellacyanin from Rhus vernicifera.// Biochem. Biophys. Acta., 1970, V.205 N 1, P.35-47.

5. Branden R., Deinum J. //Effect of pH on oxygen intermediate and dioxygen reduction site in blue oxidases.// Biochem. Biophys. Acta., 1978, V.524, N 2, P.297-304.

6. Bligny R., Douce R. Excretion of laccase by sycamore ( Acer pseudoplatanus) celles. Purification and properties of the enzyme. // Biochem. J., 1983, V.209, N 2, P.489-496

7. LaFayette P.R., Eriksson K.-E.L., Dean J.F.D. Nucleotide sequence of a cDNA clone encoding an acidic laccase from sycamore maple (Acer pseudoplatanus).// Plant Physiol., 1995, V.107, N 2, P. 667-668.

8. Driouich A., Laine A.-C., Vian В., Faye L. Characterization and Localization of Laccase Forms in Stem and Cell-Cultures of Sycamore // Plant J., 1992, V. 2, Iss 1, P. 13-24.

9. Bao W., O'Malley D.M., Whetten R., Sederoff R.R. A laccase Associated with lignification in Loblolly Pine Xylem // Science, 1993, V.260, P.672-674.

10. Youn H.-D., Kim K.-J., Maeng J.-S., Han Y.H, Jeong I.-B., Jeong G., Kang S.-O., Hah Y. C. Single electron transfer by an extracellur laccase from the white-rot fungus Pleurotus ostreatus// Microbiology, 1995, V.141, Pt.2, P. 393-398.

11. Гиндилис А., Жажина Е., Баранов Ю., Карякин А., Гаврилова В., Ярополов А. Выделение и свойства лакказы из базидиального гриба Coriolus hirsutus (Fr.) Quel. // Биохимия, 1988, Т. 53, N 5, С. 735 739.

12. Lerch К., Deinum J., Reinhammer В. The state of copper in Neurospora laccase // Biochem. Biophys. Acta, 1978, V. 534, N 1, P.7-14.

13. German U.A., Muller G., Hunziker P.E., Lurch K„ Characterization of two allelic form of Neurospora crassa laccase. Ammino and carboxil-terminal processing of a precursor.// J. Biol. Chem., 1988 , V.263, N 2, P.885-896.

14. Thurnston C.F. The structure and function of fungal laccases // Microbiol., 1994, V. 140, N 1, P. 19-26.

15. Ander P., Eriksson K.-E. The importence of phenol oxidase activity in lignin degradation by the white-rot fungus Sporotrichum pulverulentum //Arch. Microbiol, 1976, V. 109, N 1, P. 1- 21.

16. Leonowicz A., Szklarz G., Wojtas-Wasilewska M. The effect of fungal laccase on fractionated lignosulphonates // Phytochem., 1985, V.24, N 3, P. 393-396.

17. Kirk Т.К., Harkin J.M., Cowling E.B. Degradation of the lignin model compound syringy 1-glycol- (3-guaiacyl ether by Polyporus versicolor and Stereum frustulatum // Biochem. Biophys. Acta, 1968, V. 165, N 1, P.145-153.

18. Clutterbuck A.J. Absence of laccase from yellow spored mutants of Aspergillus nidulans // J. Gen. Microbiology, 1972, V.70, N 3, P.423-435.

19. Bar Nun N., Mayer D.M. Cucubitacins repressors of induction of laccase formation.// Phitochem., V. 28, P. 1369-1371

20. Viterbo A., Yagen В., Mayer A.M. Cucubitacins, "attack"enzymes and laccase in Botrytis cinerea. // Phytochemistry 1993, V. 32, P.61-62.

21. Sarkanen S. Enzymatic lignin degradation. An extracurricular view. // ACS Semp. Ser., 1991, V.460, P. 247-269.

22. Guissani A., Henry Y., Gilles L. Radical scavenging and electron-transfer reaction in Poliporus versicolor laccase a pulse radiolyses study.// . Biophys. Chem., 1982 ,V.15, N 2, P. 177-190.

23. Fahraeus G., Reinhammer B. Large scale production and purification of laccase from cultures of fungus Polyporus versicolor and some properties of laccase A // Acta Chem. Scand., 1967, V.21, N 9, P.2367-2378.

24. Agostinelli E.A., Cervoni L., Morpurgo L. Stability of japanese-lacquer-tree (Rhus vernicifera) laccase to thermal and chemical denaturation: comparison with ascorbat oxidase.// Biochem. J., 1995, V. 306, Pt. 3, P. 697-702.

25. Solomon E.I., Sundaram U.M., Machonkin Т.Е. Multicopper oxidases and oxygenases.// Chem. rev., 1996, V.96, N 7, P.2563-2605

26. Yaropolov, A.I., Skorobogat'ko O.V., Vartanov S.S., Varfolomeyev S.D. Laccase: propeties, catalytic mechanism, and applicability. Appl. Biochim. Biotech., 1994, V.49, N 3, P.257-280.

27. Sannia G., Bionocore V., Guardina P, Lina M., Rossi M. Laccase from Pleurotus Ostreatus.// Biotechnol. Letters, 1986, V. 8, Iss.ll, P. 797-800.

28. N. Zonazi, J.-L.Romette, D. Thomas. Purification and properties of two Laccase Isoenzymes Produced by Botrytis cinerea.// Appl. Biochem. Biotech., 1987, V.15, N 3, P. 213 225.

29. Geiger J.P., Nandris D., Nicole M., Rio B. Laccases of Rigidoporus Lignosus and Phellinus Noxius. 1. Purification and some physicochemical properties.// Appl. Biochem. Biotech., 1986, V. 12, Iss. 2, P. 121-133.

30. Reinhammer B. Oxidation-reduction potentials of electron acceptors in laccase and stellacyanin // Biochem. Biophys. Acta., 1978, V.534, N 1, P.7-14.

31. Marcus R. A., Sutin N. Electron transfers in chemistry and biology// Biochem. Biophys. Acta., 1985, V. 811, N 2, P.265-322.

32. Ярополов А.И., Гиндилис A.JI., Гаврилова В.П. Лакказа из базидиального гриба Cerrena maxima . Некоторые свойства и кинетический механизм действия.// Биохимия, 1990, Т.55, N 2, С.315-319.

33. Варфоломеев С.Д., Наки А., Ярополов А.И., Березин И.В. Кинетика и механизм каталитического восстановления молекулярного кислорода в присутствии лакказы. // Биохимия 1985, Т.50, N 9, С.1411 1420.

34. Гиндилис А.Л., Баранов Ю.А., Жажина Е.О., Гаврилова В.П., Верзилов В.В., Ярополов А.И. Лакказа из базидиального гриба Cerena maxima. Свойства и кинетический механизм действия.// Биохимия, 1990, т. 55, вып.2, С.315 322.

35. Варфоломеев С.Д., Наки А., Побочин А.С., Ярополов А.И. Функциональная активность ферментов и пути ее регулирования// Изд-во МГУ, под ред. Северина С.Е., 1997, С.97-124

36. Naki A., Varfolomeev C.D. Inhibition mechanism of Poliporus laccase by fluoride ion // FEBS Letter., 1980, V.113, P. 157-160

37. Ярополов А.И., Маловик В. Ферментный электрод на основе иммобилизованной лакказы для определения полифенолов и полиаминов. // Журнал аналитической биохимиии, 1983, Т.38, вып.З, С.503-508.

38. De Vries О.М.Н., Kooistra W.H.C.F, Wessels J.G.H. Formation of an Extracellular Laccase by a Schizophyllum commune Dicaryon.// J. General Microbiol, 1986, V.132, P.2817 2826

39. K.L.Shutteworth and J.-M.Bollag. Soluble and immobilized laccase as catalysts for the transformation of substituted phenols.// Enzyme and Microbiol. Technol., 1986, V.8, N3, P. 171- 177.

40. Geiger J.P., Huguenin В., Nandris D., Nicole M. Laccases of Rigidoporus lignosus and Phellinus noxis. 2. Effect of Rigidoporus-Lignosis Laccase LI on

41. Thioglicolic Lignin of Hevea(English).// Appl. Biochem. Biotech., 1986, V. 13, Iss. 2., P. 97-110.

42. Jonsson L., Sjostrom K., Haggstrom I., Nyman P.O. Characterization of a laccase gene from the white-rot fungus Trametes versicolor and structural features of basidiomycete laccases // Biochem. Biophys. Acta, 1995, V. 1251, N 2, P.210-215.

43. Berka R.M., Xu F., Thompson S.A. International Patent Application PCT/US95/06816, 1995.

44. Koschinsky M.L., Funk W.D., Oost B.A., MacGillivray R.T.A. Complete cDNA Sequence of Human Preceruloplasmin// Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1986, V.83, N 14, P. 5086-5090.

45. Hsieh C.-J., Jones G.H. Nucleotide-Sequence, transcriptional analysis, and glucose regulation of the phenoxazinone synthase gene (Phsa) from streptomyces-antibioticus.// J. Bacteriol., 1995, V.177, P.5740.

46. Koikeda S., Ando K., Kaji H., Inoue T., Murao S. Takeuchi K., Samejima T. Molecular cloning of the gene for bilirubin oxidase from Myrothecium verrucaria and its expression in yeast // J. Biol. Chem., 1993, V. 268, N 25, P.18801-18809.

47. Huang K.-X,, Fujii I., Ebizuka Y., Gomi K., Sankawa U. Molecular cloning and heterologous expression of the gene encoding dihydrogeodin oxidase, a multicopper blue enzime from Aspergillus terreus.// J. Biol. Chem., 1995, V. 270, N 37, P.21495-21502.

48. DeSilva M.D., Askwidth C., Eide D., Kaplan J. The FET3 Gene product required for high affinity Iron Transport in yeast is a cell surface ferroxidase // J. Biol. Chem. 1995, V. 270, N 3, P. 1098-1101.

49. Malmstrom B.G., Reinhammer B., Vanngard T. Two forms of copper (II) in fungal laccase.// Biochim. Biophys. Acta, 1968, V.156, N 1, P.67-71.

50. Aramayo R., Timberlake W.E. Sequanse and molecular structure of the Aspergillus nidulance yA (laccase I) gene nucleic.// J. Am. Chem. Soc., 1990, V.18, N 11, P.3415.

51. Guckert J.A., Lowery M.D., Solomon E.I. Electronic-structure of the reduced blue copper active-site contributions to reduction potentials and geometry.// J. Amer.Chem.Soc. 1995, V. 117, Iss 10, P. 2817-2844

52. Pascher T., Karlsson G., Malmstrom B.G., Vanngard T. Reduction potentials and their pH dependence in site-directed-mutant forms of azurin from Pseudomonas aeruginosa// Eur. J. Biochem., 1993, V.212, N 1, P.289-296.

53. Langen R., Jensen G.M., Jacob U., Stephens P.J., Warshel A. Protein control of iron-sulfur cluster redox potentials.// J. Biol.Chem., 1992, V.267, P.25625-25627.

54. Stephens P.J., Jollie D.R., Warshel A. Protein control of redox potentials of iron-sulfur proteins. // Chem. rev., 1996, V.96, N 7, P.2491-2513.

55. Lowery M.D., Guckert J.A., Gebhard M.S., Solomon E.I. Active-site electronic-structure contributions to electron-transfer pathways in rubredoxin and plastocyanin direct versus superexchange.// J. Amer.Chem.Soc., 1993, V.115, P. 3012.

56. Malkin R., Malmstrom B.G., Vanngard T. The requirement of the "non-blue" copper (II) for the activity of fungal laccase // FEBS Lett., 1968, V.l, P.50.

57. Branden R., Malmstrom B.G., Vanngard T. Effect of fluoride on spectral and catalitic properties of 3 copper containing oxidases.// Eur. J. Biochem., 1973, V36, N1, P. 195-200.

58. Dawson J.H., Dooley D.M., Gray H.B. Coordination environment and fluoride binding of type 2 copper in the blue copper oxidase ceruloplasmin // Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A., 1978, V.75, N9, P.4078-4081.

59. Айказян В.Т., Напбандян P.M., Взоимодействие аскорбатоксидазы с неорганическими анионами.// 1977, Т.42, вып.11, С.2027-2034.

60. Branden R., Reinhammer В. EPR studies on the anaerobic reduction of fungal laccase. Evidence for participation of type 2 copper in the reduction mechanism.// Biochem. Biophys. Acta., 1975, V.405, N 2, P.236-242.

61. Morie-Bebel M.M., McMillin, D.R., Antholine W.E. Multi-frequensy e.p.r. studies of a mercury-contaning mixed-metal derivative of laccase.// Biochem-J., 1986, V.235, N 2, P.415-420

62. Graziani, M.T., Morpurgo L., Rotilio, G., Mondovi В.,Selective remuvel of type 2 copper from Rhus vernicifera laccase // FEBS Lett., 1976, V.70, N "1, P.87-90.

63. Ярополов А.И. Кинетические закономерности действия биокатализаторов в электрохимических системах. Докт. дис., Москва, 1986.

64. Spira-Solomon D.J., Allendorf M.D., Solomon E.I. Low-temperature magnetic circular dichroism studies of native laccase: conformation of a trinuclear copper active site // J. Amer. Chem. Soc., 1986, V.108, N 10, P. 5318-5328.

65. Messerschmidt A., Ladenstein R., Huber R., Bolognesi M. Refined crystal structure of ascorbat oxidase at 1,9 A resolution.// J Mol.-Biol., 1992, V.225, N 1, P. 179-205.

66. Cole J.L., Tan G.O., Yang E.K., Hogson K.O., Solomon E.I. Reactivity of the laccase trinuclear copper active-site with dioxygen.An X-ray absorption-edge study.// J. Amer. Chem. Soc. 1990, V.l 12, N 10, P. 2248- 2249.

67. Lindley P., Zaitseva I., Zaitsev V., Ralph A., Card G. The Structure of Human Ceruloplasmin at 3.0-Angstrom Resolution The Beginning of the End of an Enigma // Biochemistry 1996, V. 35, N 28, P. 109-109.

68. Messerschmidt A., Huber R. The blue oxidases: ascorbat oxidase, laccase and ceruloplasmin. Modelling and structural relationship.// Eur. J. Biochem.,1990, V.187, N 2, P.341-352.

69. Morie-Bebel M.M., Morris M.C., Menzie J.L., McMillin, D.R. A mixes-metal derivatives of laccase containing mercury (II) in the typy 1 binding site. // J.Amer.Chem.Soc., 1984, V.106, N 12, P. 3677-3678.

70. Morie-Bebel M.M., Menzie J.L., McMillin, D.R. //In Biological and Inorganic Copper Chemistry, Proceedings of the Conference on Copper Coordination Chemistry, 2nd, Karlin K.D., Zubieta J., Eds.; Adenine Press; Guilderland, NY, 1986, V.l, P.89.

71. Severans J.C., McMillin D.R. Temperature and anation studies of the type 2 site in Rhus vernicifera laccase.// Biochemistry, 1990, V.29, N 37, P.8592-7

72. Larrabee J.A., Spiro T.G. Cobalt II substitution in the type 1 site of the multi-copper oxidase Rhus laccase.// Biochem.Biophys.Res.Comm., 1979, V.88, P.7531.

73. Li J.-B., MacMillin D.R. The electronic spectrum of Co (II) in the type 1 site of Rhus vernicifera laccase. // Inorg. Chem. Acta, 1990, V.167, N 1, P.119-122.

74. Morpurgo L., Desideri A., Rotilio G., Mondovi B. pH Dependence of redox properties of the type 2 Cu-depleted tree laccase // FEBS Lett., 1980, V. 113, N 1, P. 153-156.

75. Hanna P.M., McMillin D.R., Pasenkiewicz-Gierula M., Antholine W.E., Reinhammar. Type 2 depleted fungal laccase.//Biochem.J, 1988, V.253, N 2, P. 561568.

76. Morpurgo L., Savini I., Mondovi B., Avigliano L. Removal of type 2 Cu from Ascorbate Oxidase and Laccase by reaction with N,N' Diethyldithiocarbamate. //J.Inorg.Biochem., 1987, V. 29, N 1, P. 25-31.

77. Frank P., Pecht I. Redox titrations of type-2 copper-depleted Rhus laccase. Reductive decoupling and oxidative reconstitution of the type-3 site// J.Phys.Chem., 1986, V. 90, P. 3809-3814.

78. Klemens A.S., McMillin D.R. New method for removing type 2 copper from Rhus laccase. // J. Inorg. Biochem., 1990, V. 38, N 2, P. 107-115.

79. McMillin R., Eggleston M.K. Bioinorganic chemistry of laccase// Multi copper oxidases, 1998, P. 129-166

80. Reinhammar B. Kinetic studies on Poliporus and tree laccases.// Multi copper oxidases, 1998, P. 167-200

81. Santussi R., Ferri T., Morpurgo L., Savini I., Avigliano L. Unmediated heterogenious electron transport reaction of ascorbate oxidase and laccase at a gold electrode // Biochem. J. 1998, V. 332, Pt. 3, P. 611-615.

82. Andreasson L.-E., Reinhammar B. Kinetic studies of Rhus vernicifera laccase. Role of metal centers in electron transfer.// Biochim. Biophys. Acta, 1976, V. 445, N 3, P. 579 597.

83. Branden R., Deinum J. Type 2 copper (II) as a component of the dioxygen reducing site in laccase: evidence from EPR experiments with 170.// FEBS-Lett., 1977, V.73, N 2, P. 144-146

84. Petersen L.C., Degn H. Steady state kinetics of laccase from Rhus vernicifera. // Biochim. Biophys. Acta, 1978, V. 526, N 1, P. 85 92.

85. Andreasson L.-E., Reinhammar B. Mechanism of electron transfer in laccase catalysed reactions.// Biochim. Biophys. Acta, 1979, V. 568, N 1, P. 145 -156.

86. Meyer Т.Е., Marchesini A., Cusanovich M.S., Tollin G. Direct measurement of intermolecular electron transfer between type I and type III copper centers in the multicopper enzyme ascorbate oxidase // Biochemistry, 1991, V. 30, P. 4619-4623.

87. Farver O., Pecht I. Low activation barriers characterize intramolecular electron transfer in ascorbate oxidase //Proc. Natl. Acad., 1992, V. 89, N 9, P. 82838287.

88. Clark P.A., Solomon E.I. Magnetic Circular-dichroism spectroscopic definition of the intermediate produced in the reduction of dioxygen to water by native laccase.// J. Am. Chem. Soc., 1992, V.114, N 3, P. 1108-1110

89. Hensen F.B., Koudelka G.B., Noble R.W., Ettinger M.J. Effect of single reduction. Reoxidation cycle on the kinetics of copper reduction. // Biochemistry, 1984, V.23, N 9, P. 2057-2066.

90. Smith M., Thurnston C.F. Fungal laccases: role in delignification and possible industrial application. // 1998, Multi copper oxidases, P. 253-259

91. Ghindilis A.L., Atanasov P., Wilkins E. Enzyme catalyzed direct electron transfer: fundamentals and analytical applications // Electroanalysis, 1997, V. 9, N 9, P. 661-674.

92. Peter M.G., Wollenberger U. Phenol-oxidizing enzymes: mechanism and application in biosensors// Frontiers in Biosensors. Fundamental Aspects. Ed. by F.W. Scheller, F. Shubert, J. Fedrowitz. Birkhauser Verlag Basel/ Switzerland., 1997, P. 6382.

93. Varfolomeev S.D., Kurochkin I.N., Yaropolov A.I. Direct electron transfer effect biosensor.// Biosensor and bioelectronics, 1996, V.ll, N 9, P. 867-871.

94. Скоробогатько O.B., Гиндилис A.JI., Троицкая E.H., Шустер A.M., Ярополов А.И. Конъюгат для иммуноферментного анализа и метод проведения иммуноферментного анализа // Патент N 5020557 (Россия), от 27.05.92.

95. Скоробогатько О.В., Гиндилис А.Л., Троицкая Е.Н., Шустер A.M., Ярополов А.И. Лакказа Coriolus hirsutus новый фермент-маркер для иммуноферментного анализа. // Прикладная биохимия и микробиология, 1993, Т. 29, N 3, С. 354-361.

96. O.V. Skorobogat'ko, A.L. Gindilis, E.N. Troitskaya, A.M.Shuster, A.I.Yaropolov. Laccase as a new enzymatic label for enzyme immunoassay.// Anal.letters., 1994, V. 27, N 15, P. 2997-3012.

97. Березин И.В., Богдановская B.A., Варфоломеев С.Д. Биоэлектрокатализ, равновесный потенциал в присутствии лакказы// ДАН СССР, 1978, Т. 240, N 3, С. 615-618.

98. Ghindilis A., Gavrilova V., Yaropolov A. Laccase-based biosensor for determination of polyphenols. Determination of catechols in tea.// Biosensors and Bioelectronics, 1992, V. 7, P. 127 131.

99. Yaropolov A.I., Kharybin A.N., Emneus J., Marko-Varga G., Gorton L. Flow-injection analysis of phenols at graphite electrode modified with co-immobilised laccase and tyrosinase.// Anal. Chim. Acta, 1995, V.308, N 1, P. 137-144.

100. Ghindilis A.L., Skorobogat'ko O.V., Yaropolov A.I. Immunopotentiometric electrodes based on bioelectrocatalysis in the absence of mediators.// Biomedical Science, 1991, V.2, P. 520-522.

101. Ghindilis A., Skorobogat'ko O., Gavrilova V., Yaropolov A. A new approach to the constraction of potentiometric immunosensors, Biosensors and Bioelectronics, 1992, V.7, N 4, P. 301 304.

102. Semenov A.N., Gordeev K.Y. A novel oxidation lable linker for solid phase peptide synthesis // Internation. J. of Peptide and Protein Resear. 1995, V. 45, N 3, P. 303-304.

103. Lugaro G., Carrea G., Cremonesi P., Casellato M.M., Antonini E. The oxidation of steroid hormones by fungal laccase in emulsion of water and organic solvents // Arch. Biochem. Biophys. 1973, V. 159, N. 1, P. 1-6.

104. Ярополов А.И., Гиндилис A.JI., Борман E.A. Использование биоэлектрохимических систем для синтеза стероидов. // Биохимия, 1986, Т. 51, N 9, С. 1442 1445.

105. Ikeda R., Sugihara I., Uyama H., Kobayashi S. Enzimatic oxidative polymerization of 2,6 dimethylphenol.// Macromolecules, 1996, V.29, N 27, P. 87028705.

106. Ikeda R., Uyama H., Kobayashi S. Novel synthetic pathway to a poly(phenylene oxide). Laccase-catalyzed oxidative polymerization of syringic acid.// Macromolecules, 1996, V.29, N 8, P. 3053-3054.

107. Семенов A.H. He протеолитические ферменты в пептидном синтезе // Биоорганическая химия 1994, Т. 20, N 11, С. 1141-1149.

108. Семенов А.Н., Ломоносова И.В., Березин В.И., Титов М.И. Катализируемое пероксидазой и лакказой удаление фенилгидразидной защитной группы в мягких условиях.// Биоорганич. химия, 1991, Т.17, N 8, С. 1074-1076.

109. Molitoris-HP; Esser-K. Die Phenoloxydasen des Ascomyceten Podospora anserina. V. Eigenschaften der Laccase I nach weiterer Reinigung // Arch-Mikrobiol., 1970, V.72, N 3, P.267-96.

110. Minuth W., Klischies M., Esser K. The phenoloxidases of the ascomycete Podospora anserina. Structural differences between laccases of high and low molecular weight.// Eur. J. Biochem., 1978, V.90, N 1, P.73-82

111. Molitoris-HP; Reinhammar-B The phenoloxidases of the ascomycete Podospora anserina. XI. The state of copper of laccases I, II and III. // Biochim. Biophys. Acta., 1975, V. 386, N 2, P. 493-502

112. Оболенская A.B., Щеголев В.П., Аким Э.Л., Коссович Н.Л., Емельнова И.З. Практические работы по химии древесины и целлюлозы// М., "Лесная промышленность", 1965, С. 60-89.

113. Методы биохимического исследования растений. / Под ред. Ермакова

114. A.И.//Л. Колос, 1972. С.136-141.

115. Lowry, О.Н., Rosebrough, N.J., Farr, I.L. and Randall, R.J. Protein mesurement with the Folin phenol reagent.// J.Biol.Chem. 1951, V. 193, N 2, P. 265275.

116. Методы экспериментальной микологии./ Справочник под ред. Билай

117. B.И.// Киев, Наукова Думка, 1982, С. 106-165.

118. Malkin R., Malmstrom B.G., Vanngard Т. The reversible removal of one specific copper(II) from fungal laccase.// Eur. J. Biochem. 1969, V. 7, N 2, P.253-259

119. Филиппович Ю.Б., Егорова T.A., Севастьянова Г.А. Практикум по общей биохимии.// М., Просвещение. 1982.

120. Towbin Н., Staehelin Т., Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrilamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1979, V. 76, N 9, P. 4350 4354.

121. Hamilton R.G., Wilson Т., et al. Monoclonal Antibody-based immunoenzymetric assays for quantification of human IgG and its four subclasses // J. Immunoassay, 1988, V.9, N 3-4, P. 275-296.

122. Ishikava E., Imagawa M., Hashida S., Yoshitake S.H., Hamaguchi Y., Ueno T. Enzyme-labeling of antibodies and their fragments for enzyme immunoassay and immunohystochemical // J. of Immunoassay, 1983, V.4, N 3, P. 209 329.

123. Tijssen P. Practice and theory of enzyme immunoassays. Laboratory Techniques.// N.Y. Elsevier Sci., Publishing Co., 1985. P. 31 127.

124. Скоробогатько О.В., Джафарова А.Н., Ярополов А.И. Влияние условий синтеза иммунолакказных конъюгатов на характеристики и состав получаемых соединений // Прикл. биохимия и микробиология, 1994, Т. 30, N 3, С. 477 482.

125. Ishikava Е., Hashida S., Kohno Т., Tanaka Т. Methods for enzyme-labeling of antigens antibodies and their fragments // Monosotopic immunoassay. N.Y.: Acad. Press, 1988, P. 27 55.

126. Джафарова A.H., Скоробогатько O.B., Степанова E.B., Ярополов А.И. Иммуноферментный анализ на основе лакказных конъюгатов с флуориметрической детекцией продукта ферментативной реакции // Прикл. биохимия и микробиология. 1995, Т. 31, N 1, С. 128 133.

127. Егоров A.M., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа.// М., Высшая шк., 1991, С. 226-265.

128. Яковлева Н.С., Гаврилова В.П., Соловьева В.А., Николаев С.В., Малышева О.Н. Рост и активность оксидоредуктаз Picnoporus Sanquineus ( L.: Fr.) Murr при поверхностном культивировании. // Микология и фитопатология, 1993, Т.27, N 6, С. 48-51.

129. Гаврилова В.П., Григорьева Н.К. Рост и образование окислительных фкрментов дереворазрушающими грибами из рода Coriolus Quel. // Микология и фитопатология, 1983, Т. 17, N 1-2, С. 127-130.

130. Fortina M.G., Acquati A., Rossi P., Manachini P.L., Gennaro C.Di. Production of laccase by Botrytis cinerea and fermentation studies with strain F226.// J. Industr. Microbiol., 1996, V.17, N 2, P. 69-72

131. Yoshiyama M., Iton Y. Poliphenol oxidase production in a jar fermentor by Coriolus versicolor. // J. Ferment. Bioengeneering, 1994, V. 78, N 1, P.188-190.

132. Fahraeus G. // Physiol. Plant, 1952, V. 5, P. 284-290.

133. Kozlik I. Vliv fenolickych latek na aktivitu oxidaz drevokaznych hub. // Drev. vysk., 1981, V. 25, N 2-3, P. 91-96.

134. Ardon O., Kerem Z., Hadar Y. Enhancement of laccase activity in liquid cultures of the lignolitic fungus Pleurotus ostreatus by cotton stalk extract. // J. Biotechnol., 1996, V.51, N 3, P.201-207

135. Piatt M.W., Hadar Y.,Chet I. Fungul activities in lignocellulose degradation by Pleurotas. // Appl. Microbiol. Biotechnol., 1984, V. 20, N 2, P. 150154.

136. Salas C., Lobos S., Larrain J., Salas L., Cullen D., Vicuna R. Properties of laccase isoenzymes produced by the basidiomycete Ceriporiopsis subvermispora.// Biotechnol. Appl. Biochem., 1995, V. 21, Pt 3, P. 323-333

137. Вайткявичус Р.К., Вельжите В.А.,Ченас Н.К. Выделение и кинетические параметры лакказы Polyporus anicoporus. // Биохимия, 1984, Т.49, N 6, С. 1000-1003.

138. Cullen D. Recent advances on the molecular genetics of ligninolytic fungi. // J.Biotechnol., 1997, V. 53, N 2-3, P. 273-289.

139. Graziani M.T., Antonilli L., Sganga P., Citro G., Mondovi В., Rosei M.A. Biochemical and immunological studies of deglycosylated Rhus vernicifera laccase.// Biochem. Int., 1990, V. 21, N 6, P. 1113-1124.

140. Nishizawa Y., Nakabayashi K., Shinagawa E. Purification and characterization of laccase from white rot fungus Trametes sanguinea. // J. Ferment. Bioengeneering, 1995, V. 80, N 1, P. 91-93.

141. Guillen F., Martinez M.J., Munoz C., Martinez A.T. Quinone redox cycling in the ligninolytic fungus Pleurotus eryngii leading to extracellular production of superoxide anion radical.// Arch. Biochem. Biophys., 1997, V. 339, N 1, P. 190-199.

142. Bourbonnais R., Leech D., Paice M.G. Electrochemical analysis of the interactions of laccase mediators with lignin model compounds. // Biochim. Biophys. Acta, 1998, V. 1379, N 3, P. 381-390.

143. Archibald F.S., Bourbonnais R., Jurasek L., Paice M.G., Reid I.D. Kraft pulp bleaching and delignification by Trametes versicolor.// J. Biotechnol., 1997, V. 53, N 2-3, P. 215-236.

144. Xu F. Oxidation of phenols, anilines, and benzenethiols by fungal laccases: correlation between activity and redox potentials as well as halide inhibition.// Biochemistry, 1996, V. 35, N 23, P. 7608-7614

145. Химическая энзимология.// Под ред. Березина И.В. и Мартинека К. Изд-во Московского университета, 1983, С. 276

146. Березин И.В., Клесов А.А. Практический курс химической и ферментативной кинетики. // Изд-во Московского университета, 1976, С. 320.

147. Fagain С.О. Understanding and increasing protein stability.// Biochim. Biophys. Acta, 1995, V. 1252, N 1, P. 1-14.

148. Gibson T.D., Woodward J.R. Protein stabilization in biosensor systems.// Chapter 5 in Biosensors and Chemical Sensors, ed. Eldman P.G.&Wang J., ACS Books, P. 40-55.

149. Gibson T.D., Hulbert J.N., Parker S.M., Woodward J.R., Higgins I.J. Extended shelf life of enzyme-based biosensors using a novel stabilization system. // Biosensors&Bioelectronics, 1992, N 3, P.701-708.

150. Wong S.S., Wong L.-J.C. Chemical crosslinking and the stabilization of protein and enzymes.// Enzyme Microb.Technol., 1992, V. 14, N 3, Р.866-874.

151. Murphy К.Р., Freire E. Thermodynamics of structural stability and cooperative folding behavior in proteins. // Adv.Protein Chem., 1992, V. 43, N1, P. 313-363.

152. Messerschmidt A., Ladenstein R., Huber R., Bolognesi-M; Avigliano-L; Petruzzelli-R; Rossi-A; Finazzi-Agro-A Refined crystal structure of ascorbate oxidase at 1.9 A resolution. // J. Mol. Biol., 1992, V. 224, N 1, P. 179-205.

153. Farver O., Goldberg M., Lancet D., Pecht I. Oxidative titration of Rhus vernicifera laccase and its specific interaction with hydrogen peroxide.// Biochem. Biophys. Res. Com., 1976, V. 73, N 2, P. 494 500.

154. Coll P.M., Perez P., Villar E., Shnyrov V.L. Domain Structure of laccase I from the lignin degrading Basidiomycete РМ1 revealed by differential scanning calorimetry. // Biochem. and Molecul. Biol., 1994, V. 34, N 6, P. 1091-1098.

155. Sjodal L. Structural studies on the four repetitive Fc-binding regions in Protein A from Staphylococcus aureus. // Eur. J. Biochem., 1977, V. 78, N2, P. 471-490.

156. Langone J.J. Protein A of Staphylococcus aureus and related immunoglobulin receptors produced cy Streptococci and Pneumococci // Adv. Immunol., 1982, V. 32, N 1, P. 157-253.

157. Hemmila I.A. Application of fluorescence in immunoassays. // Chem. Analysis, 1991, V. 117, N. 1, P. 1-37.

158. Gould B.J., Marks V. Recent developments in enzyme immunoassays. // Monosotopic immunoassay. N.Y.: Acad. Press, 1988, P. 3-26.