Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Лакказа и Mn-пероксидаза базидиомицета Cerrena maxima

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Явметдинов, Ильдар Самиуллович

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Грибы белой гнили. Характеристика субстрата.

1.1.1. Особенности строения лигнина - природного субстрата грибов белой гнили.

1.1.2. Общая характеристика лигнинразрушающих грибов.

1.1.3. Факторы, влияющие на селективность деградации лигнина.

1.2. Общая характеристика ферментов лигнолитической системы.

1.2.1. Лигниназа.

1.2.2. Мп-пероксидаза.

1.2.3. Лакказа.

1.3. Физиологические функции ферментов лигнолитической системы.

1.4. Биосинтез ароматических соединений грибами, возбудителями белой гнили.

1.5. Образование гуминовых веществ в природе. Гуминоподобные вещества грибов - предшественники гуминовых кислот.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Материалы и объекты исследования.

2.2. Жидкофазное культивирование Cerrena maxima и

Coriolus hirsutus.

2.2.1. Поверхностное культивирование Cerrena maxima и

Coriolus hirsutus.

2.2.2. Глубинное культивирование Cerrena maxima и

Coriolus hirsutus.

2.3. Твердофазное культивирование индивидуальных штаммов

Cerrena maxima и Coriolus hirsutus и их совместное культивирование на природном лигнинсодержащем субстрате - овсяной соломе.

2.3.1. Изучение совместимости Cerrena maxima и Coriolus hirsutus при культивировании.

2.3.2. Совместное и раздельное твердофазное культивирование данных штаммов.

2.4. Очистка лакказы и Mn-пероксидазы Cerrena maxima.

2.5. Методы определения активности лигнолитических ферментов.

2.6. Определение биохимических и кинетических характеристик лакказы и Mn-пероксидазы Cerrena maxima.

2.7. Выделение и очистка ГПВ грибов белой гнили.

2.8. Синтез ГПВ in vitro с помощью лакказы С. maxima.

2.9. Определение основных количественных и качественных хапактеоистик ГПВ.

2.9.1. Элементный анализ.

2.9.2. Определение молекулярных масс ГПВ методом эксклюзионной хроматографии.

2.9.3. Спектрофотометрический и ИК- спектроскопический анализ ГПВ.

2.9.4. 13С ЯМР спектроскопия препаратов ГПВ.

2.10. Методы определения содержания основных компонентов растительного сырья.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Скрининг культуры Cerrena maxima.

3.2. Культивирование и биосинтез лигнолитических ферментов базидиомицета Cer. maxima.

3.3. Выделение, очистка и изучение лакказы и Мп-зависимой пероксидазы Cer. maxima.

3.3.1. Выделение и очистка лакказы и

Мп-зависимой пероксидазы.

3.3.2. Характеристика физико-химических свойств лакказы Cer. maxima.

3.3.3. Характеристика физико-химических свойств

Мп- пероксидазы Cer. maxima.

3.3.4. Субстратная специфичность лакказы и

Mn-пероксидазы Cer. maxima.

3.4. Изучение роли лакказы и Mn-пероксидазы Cer. Maxima в процессе деградации лигнина на природных лигноцеллюлозных субстратах.

3.5. Структурная характеристика и исследование роли лигнолитического комплекса в биосинтезе ГПВ.

3.5.1. Получение ГПВ.

3.5.2. Структурная характеристика ГПВ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Лакказа и Mn-пероксидаза базидиомицета Cerrena maxima"

В настоящее время во всем мире ведется интенсивная разработка биотехнологий на основе лигнолитических грибов и ферментов как для обработки лигноцеллюлозных материалов, так и для утилизации лигнинсодержащих отходов. Лигнин - полимер ароматической природы, составляющий 25% сухого веса фотосинтезирующей биомассы. Для него насчитывается не менее десяти типов связей между фенилпропановыми структурными единицами, которые обуславливают высокую степень разветвленности молекулы и недоступность для действия большинства микроорганизмов.

Базидиальные грибы, возбудители белой гнили древесины, принадлежат к немногочисленной группе микроорганизмов, способных разрушать лигнин и обладающих уникальной системой лигнолитических ферментов: лигнинпероксидазы, лакказы и Mn-пероксидазы. Несмотря на то, что проблемой биоконверсии лигнина последние 20-25 лет активно занимаются многие научные коллективы, окончательного решения данного вопроса еще не найдено. Это связано со значительной сложностью строения лигноцеллюлозного субстрата, а также с недостаточной изученностью метаболизма грибов-лигнолитиков, в том числе механизма действия разлагающих лигнин ферментов. Для эффективного использования биотехнологических подходов весьма актуальным представляется изучение лигнолитического потенциала грибов белой гнили и физиологических функций основных лигнолитических ферментов. Известно, что некоторые виды высших базидиальных грибов, деструкторов древесины, обладают уникальными механизмами детоксификации как продуктов деградации лигнина, так и ксенобиотиков. Для грибов белой гнили некоторыми исследователями показано образование из продуктов деструкции лигноуглеводного комплекса гуминоподобных веществ (ГПВ), обладающих физиологической активностью. Однако до настоящего времени практически отсутствуют данные о механизме образования, структуре и биологических свойствах ГПВ; поэтому представляется актуальным исследование 7 особенностей синтеза подобных полимеров и их характеристика, а также выяснение функций лигнолитического комплекса в этом процессе.

Понимание роли лигнолитических ферментов в процессе деградации лигнина открывает возможные пути оптимизации переработки этого полимера и сопутствующий синтез на основе продуктов его деструкции таких соединений, как гуминоподобные вещества. Исследование ГПВ представляет несомненный интерес как с точки зрения изучения метаболизма грибов белой гнили, так и с позиции применения данных микроорганизмов для получения препаратов, которые могут использоваться в медицине.

Основными целями настоящей работы являлись:

- изучение лигнолитического потенциала смешанной культуры грибов белой гнили Cerrena maxima и Coriolus hirsutus при росте на различных лигноцеллюлозных субстратах по сравнению с индивидуальными штаммами грибов, синтезирующих различные доминирующие лигнолитические ферменты.

- характеристика ферментов лигнолитической системы Cer. maxima: лакказы и Мп-пероксидазы

- изучение физиологической роли данных ферментов в процессе деградации лигнина и образовании ГПВ

- исследование структуры полученных ГПВ и подтверждение их гуминовой природы.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Явметдинов, Ильдар Самиуллович

115 Выводы.

1. Показана возможность совместного культивирования штаммов Cerrena maxima (активный продуцент Mn-пероксидазы) и Coriolus hirsutus (активный продуцент лакказы). Впервые выделены и охарактеризованы по физико-химическим свойствам лигнолитические ферменты базидиомицета Cer. maxima - Mn-пероксидаза и лакказа. Установлено, что при различных условиях культивирования Cer. maxima может синтезировать в качестве основного лигнолитического фермента или Mn-пероксидазу или лакказу.

2. Показано, что грибы белой гнили Cer. maxima и С. hirsutus являются активными делигнификаторами при культивировании на растительном сырье - овсяной соломе и березовом лигнине. Эффект синергизма деградации лигнина смешанной культурой Cer. maxima и С. hirsutus наблюдался только при твердофазном культивировании на березовых опилках.

3. Твердофазное культивирование индивидуальных и смешанной культур на березовых опилках сопровождалось высокой активностью ферментов лигнолитического комплекса: лакказы и Мп-пероксидазы. Установлено, что ключевым ферментом при разложении лигноцеллюлозного комплекса овсяной соломы являлась лакказа при обоих температурных режимах культивирования (28° С и 37° С). Повышение температуры культивирования до 37° С приводило к полному исчезновению Мп-пероксидазной активности.

4. Впервые проведена комплексная характеристика гуминоподобных веществ, образованных грибами белой гнили, при культивировании на растительном субстрате (овсяной соломе). Установлено, что по элементному, структурно-групповому и молекулярно-массовому составу изученные ГПВ близки к почвенным ГК. Показано, что предшественниками ГПВ являются продукты деструкции лигнина.

5. Путем ферментативного синтеза, инициированного лакказой Cer. maxima из низкомолекулярных соединений - продуктов деструкции лигнина, а также аминокислот, синтезированы гуминоподобные вещества. По своим характеристикам данные ГПВ были близки природным ГК и ГПВ грибов

116 белой гнили. Таким образом, установлена новая физиологическая функция лакказы грибов белой гнили - участие в образовании гуминоподобных веществ.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Явметдинов, Ильдар Самиуллович, Москва

1. Tuomela ML, Vikman М., Hatakka A., Itavaara М. Biodegradation of lignin in a compost environment: a review. Bioresource Technol. 72: 169-183, 2000.

2. Рабинович M.JI., Болобова A.B., , Кондращенко В.И. Теоретические основы древесных композитов. Кн. I. Древесина и разрушающие ее грибы. М.: Наука, 2001.264 с.

3. Никитин Н.И. Химия древесины и целлюлоза. М.: Лесная промышленность, 1973, с. 115-150.

4. Брауне Ф., Брауне Д. Химия лигнина. М.: Лесная промышленность, 1964, с. 98-162.

5. Vares Т. Ligninolytic enzymes and lignin-degrading activity of taxonomically different write-rot fungi. Academic dissertation in microbiology. Helsinki, 1996.

6. Медведева С. А. Превращения ароматической компоненты древесины в биохимических процессах делигнификации. Диссертация на соиск. уч. степ, д.х.н. Иркутск, 1995.

7. Tuor U., Winterhalter К., Fiechter A. Enzymes of white-rot fungi in lignin degradation and ecological determinants for wood decay. J. of Biotechnol. 41: 117, 1995.

8. Головлева Л. А., Леонтьевский А.А. Биодеградация лигнина. В кн.: Успехи микробиологии. М.: Наука. 1990. Т.24, с. 128-156.

9. Leatham G., Kirk Т. FEMS Microbiol. Lett. 16: 65-67, 1983.

10. Sjostrom E. Wood chemistry: fundamentals and application. N.Y., London, Toronto, Sydney: Acad. Press, 1981, 223 p.

11. Dorado J., Claassen F.W. Van Beek T. A., Lenon G., Wijnberg J. B.P.A., Sierra-Alvarez R. Elimination and detoxification of softwood extractives by white-rot fungi. J. of Biotechnol. 80: 231-240, 2000.

12. Рипачек В. Биология дереворазрушающих грибов. М.: Лесная пром-сть, 1967, 258 с.118

13. Tien M., Kirk Т. Lignin-degrading enzyme from the hymenocete Phanerochaete chrysosporium. Science. 221: 661-663, 1983.

14. Glenn J. Morgan M., Mayfield M. An extracellular H202-requiring enzyme preparation involved in lignin biodegradation by the white rot basidiomycete Phanerochaete chrysosporium. Biochem. Biophys. Res. Commun. 114: 1077-1083, 1983.

15. Tien M. Properties of ligninase from Phanerochaete chrysosporium and their possible applications. Crit. Rev. Microbiol. 161: 141-168, 1987.

16. Tien M., Kirk T. Lignin peroxidase from Phanerochaete chrysosporium. Methods Enzymol. 161: 238-249, 1988.

17. Tonon F., Odier E. Influence of veratryl alcohol and hydrogen peroxide on ligninase activity and ligninase production by Phanerochaete chrysosporium. Eur. J. Biochem. 233: 650-658, 1995.

18. Kuwahara M., Glenn J.K., Morgan M.A., Gold M'.H. Separation and characterization of two extracellular H^CVdependent oxidases from ligninolytic culture of Phanerochaete chrysosporium. FEBS Letters. 169(2): 247-250, 1984.

19. Hofrichter M. Review: lignin conversion by manganese peroxidase (MnP). Enzyme Microb. Technol. 30: 454-466, 2002.

20. Hatakka A. Lignin-modifying enzymes from selected white-rot fungi: production and role in lignin degradation. FEMS Microbiol. Rev. 13: 125-135,1994.

21. Lobos S, Larram J., Salas L., Cullen D., Vicuna R. Isoenzymes of manganese dependent peroxidase and laccase produced by the lignin degrading basidiomycete Ceriporiopsis subvermispora. Microbiology. 14: 2691-2698, 1994.

22. Kawai S., Jensen K.A., Hammel K.E. New polymeric model substrates for the study of microbial ligninolysis. Appl. Environ. Microbiol. 61: 3407-3414,1995.

23. Hilden L., Johansson G., Pettersson L.J., Ljungquist P., Henriksson G. Do the extracellular enzymes cellobiose dehydrogenase and manganese peroxidase form a pathway in lignin biodegradation? FEBS Lett. 477: 79-83, 2000.

24. Reinhammer В. Purification and properties of laccase and stellacyanin from Rhus vernicifera. Biochem. Biophys. Acta. 205(1): 35-47, 1970.

25. Branden R., Deinum J. Effect of pH on oxygen intermediate and dioxygen reduction site in blue oxidases. Biochem. Biophys. Acta. 524(2): 297304, 1978.

26. Bligny R., Douce R. Excretion of laccase by sycamore (Acer pseudoplatanus) celles. Purification and properties of the enzyme. Biochem. J. 209(2): 489-496, 1983.

27. LaFayette P.R., Eriksson K.-E.L., Dean J.F.D. Nucleotide sequence of a cDNA clone encoding an acidic laccase from sycamore maple (Acer pseudoplatanus). Plant Physiol. 107(2): 667-668, 1995.

28. Driouich A., Laine A.-C., Yian В., Faye L. Characterization and localization of laccase forms in stem and cell-cultures of Sycamore. Plant J. 2(1): 13-24, 1992.

29. Bao W., O'Malley D.M., Whetten R., Sederoff R.R. A laccase associated with lignification in Loblolly pine xylem. Science. 260: 672-674, 1993.

30. Youn H.-D., Kim K.-J., Maeng J.-S., Han Y.H, Jeong I.-B., Jeong G., Kang S.-O., Hah Y. C. Single electron transfer by an extracellur laccase from the white-rot fungus Pleurotus ostreatus. Microbiology. 141(2): 393-398, 1995.

31. Гиндилис А., Жажина E., Баранов Ю., Карякин А., Гаврилова В., Ярополов А. Выделение и свойства лакказы из базидиального гриба Coriolus hirsutus (Fr.) Quel. Биохимия. 53(5): 735-739, 1988.120

32. Lerch К., Deinum J., Reinhammer B. The state of copper in Neurospora laccase. Biochem. Biophys. Acta. 534(1): 7-14, 1978.

33. German U.A., Muller G., Hunziker P.E., Lurch K. Characterization of two allelic form of Neurospora crassa laccase. Ammino and carboxil-terminal processing of a precursor. J. Biol. Chem. 263(2): 885-896. 1988.

34. Fahraeus G., Reinhammer B. Large scale production and purification of laccase from cultures of fungus Polyporus versicolor and some properties of laccase A. Acta Chem. Scand. 21(9): 2367-2378, 1967.

35. Agostinelli E.A., Cervoni L., Morpurgo L. Stability of japanese-lacquer-tree (Rhus vernicifera) laccase to thermal and chemical denaturation: comparison with ascorbat oxidase. Biochem. J. 306(3): 697-702, 1995.

36. Solomon E.I., Sundaram U.M., Machonkin Т.Е. Multicopper oxidases and oxygenases. Chem. rev. 96(7): 2563-2605, 1996.

37. Yaropolov A.I., Skorobogat'ko O.V., Vartanov S.S., Varfolomeyev S.D. Laccase: propeties, catalytic mechanism, and applicability. Appl. Biochim. Biotech. 49(3): 257-280, 1994.

38. Sannia G., Bionocore V., Guardina P, Lina M., Rossi M. Laccase from Pleurotus ostreatus. Biotechnol. Letters. 8(11): 797-800, 1986.

39. Zonazi N., Romette J.-L., Thomas D. Purification and properties of two laccase isoenzymes produced by Botrytis cinerea. Appl. Biochem. Biotech. 15(3): 213-225, 1987.

40. Geiger J.P., Nandris D., Nicole M., Rio B. Laccases of Rigidoporus lignosus and Phellinus noxius. Purification and some physicochemical properties. Appl. Biochem. Biotech. 12(2): 121-133, 1986.

41. Reinhammer B. Oxidation-reduction potentials of electron acceptors in laccase and stellacyanin. Biochem. Biophys. Acta. 534(1): 7-14, 1978.

42. Messerschmidt, A. In Multicopper oxidases. Ed. by Messerschmidt A. World Scientific, Singapore, New Jersey, London, Hong Kong. 1997, pp. 23-80.

43. Farver, O., Pecht, I. In Multicopper oxidases. Ed. by Messerschmidt A. World Scientific, Singapore, New Jersey, London, Hong Kong. 1997, pp. 355-390.

44. Варфоломеев С.Д., Наки А., Ярополов А.И., Березин И.В. Кинетика и механизм каталитического восстановления молекулярного кислорода в присутствии лакказы. Биохимия. 50(9): 1411-1420, 1985.

45. Варфоломеев С.Д., Наки А., Побочин А.С., Ярополов А.И. Функциональная активность ферментов и пути ее регулирования. М: Изд-во МГУ, под ред. Северина С.Е., 1997, с. 97-124.

46. Naki A., Varfolomeev C.D. Inhibition mechanism of Poliporus laccase by fluoride ion. FEBS Letter. 113: 157-160, 1980.

47. Piontek K., Antorini M., Choinowski Th. Crystal structure of a laccase from the fungus Trametes versicolor at 1.90-A resolution containing a full complement of coppers. J. Biol. Chem. 277(40(4)): 37663-37669, 2002.

48. Ярополов A.M., Гиндилис А.Л., Гаврилова В.П. Лакказа из базидиального гриба Cerrena maxima. Некоторые свойства и кинетический механизм действия. Биохимия. 55(2): 315-319, 1990.

49. Ярополов А.И., Маловик В. Ферментный электрод на основе иммобилизованной лакказы для определения полифенолов и полиаминов. Журнал аналитической биохимиии. 38(3): 503-508, 1983.

50. De Vries О.М.Н., Kooistra W.H.C.F, Wessels J.G.H. Formation of an extracellular laccase by a Schizophyllum commune Dicaryon. J. General Microbiol. 132:2817-2826, 1986.

51. Shutteworth K.L., Bollag J.-M. Soluble and immobilized laccase as catalysts for the transformation of substituted phenols. Enzyme Microbiol. Technol. 8(3): 171-177, 1986.122

52. Youn H.-D., Yung Yung C.H., Sa-Ouk K. Role of laccase in lignin degradation by white-rot fungi. FEMS Microbiol. Letters. 132: 183-188, 1995.

53. Eggert C., Temp U., Jeffrey F.D.D., Eriksson K.-E.L. A fungal metabolite mediates degradation of non-phenolic lignin structures and synthetic lignin by laccase. FEBS Letters. 391: 144-148, 1996.

54. Wariishi H., Valli K., Gold M.H. In vitro depolymerization of lignin by manganese peroxidase of Phanerochaete chrysosporium. Biochem. Biophys. Res. Commun. 176: 269-275, 1991.

55. Wariishi H., Valli K., Gold M.H. Manganese(II) oxidation by manganese peroxidase from basidiomycete Phanerochaete chrysosporium. J. Biol. Chem. 267: 23688-23695, 1992.

56. Болобова A.B., Аскадский A.A., Кондращенко В.И., Рабинович M.Jl. Теоретические основы древесных композитов. Кн. И. Ферменты, модели, процессы. М.: Наука, 2002. 344 с.

57. Jensen К.А., Bao W., Kawai S. Manganese-dependent cleavage of nonphenolic lignin structures by Ceriporiopsis subvermispora in the absence of lignin peroxidase. Appl. Environ. Microbiol. 62: 3679-3686, 1996.

58. Thurnston C.F. The structure and function of fungal laccases. Microbiol. 140(1): 19-26, 1994.

59. Ander P., Eriksson K.-E. The importance of phenol oxidase activity in lignin degradation by the white-rot fungus Sporotrichum pulverulentum. Arch. Microbiol. 109(1): 1-21, 1976.

60. Eggert C., Temp U., Eriksson K.-E.L. Laccase is essential for lignin degradation by white-rot fungus Pycnoporus cinnabarinus. FEBS Letters. 407: 8992, 1997.

61. Leonowicz A., Szklarz G., Wojtas-Wasilewska M. The effect of fungal laccase on fractionated lignosulphonates. Phytochem. 24(3): 393-396, 1985.

62. Kirk Т.К., Harkin J.M., Cowling E.B. Degradation of the lignin model compound syringyl-glycol-(3-guaiacyl ether by Polyporus versicolor and Stereum frustulatum. Biochem. Biophys. Acta. 165(1): 145-153, 1968.123

63. Clutterbuck A.J. Absence of laccase from yellow spored mutants of Aspergillus nidulans. J. Gen. Microbiology. 70(3): 423-435, 1972.

64. Scherer M., Fischer R. Molecular characterization of a blue-copper laccase, TILA, of Aspergillus nidulans. FEMS Microbiology Letters. 199: 207213,2001.

65. Temp U., Eggert C. Novel interaction between laccase and cellobiose degidrogenase during pigment synthesis in the white rot fungus Pycnoporus cinnabarinus. Appl. Environ. Microbiol. 65(2): 389-395, 1999.

66. Edens W.A., Goins T.Q., Dooley D., Henson J.M. Purification and characterization of a secreted laccase of Gaeumannomyces graminis var. tritici. Appl. Environ. Microbiol. 65 (7): 3071-3074, 1999.

67. Bar Nun N., Mayer D.M. Cucubitacins repressors of induction of laccase formation. Phitochem. 28: 1369-1371, 1992.

68. Viterbo A., Yagen В., Mayer A.M. Cucubitacins, "attack" enzymes and laccase in Botrytis cinerea. Phytochem. 32: 61-62, 1993.

69. Williamson P.R. Biochemical and molecular characterization of the diphenol oxidase of Cryptococcus neoformans: identification as a laccase. J. of Bacteriol. 176: 656-664, 1994.

70. Sarkanen S. Enzymatic lignin degradation. An extracurricular view. ACS Semp. Ser. 460: 247-269, 1991.

71. Guissani A., Henry Y., Gilles L. Radical scavenging and electron-transfer reaction in Poliporus versicolor laccase a pulse radiolyses study. Biophys. Chem. 15(2): 177-190, 1982.

72. Ruttimann-Johnson C., Lamar R.T. Polymerization of pentachlorophenol and ferulic acid by fungal extracellular lignin-degrading enzymes. Appl. Environ. Microbiol. 62(10): 3890-3893, 1996.

73. Ruttimann-Johnson C., Lamar R.T. Binding of pentachlorophenol to humic substances in soil by the action of white rot fungi. Soil Biol. Biochem. 29 (7): 1143-1148, 1997.

74. Шиврина A.H., Низковская О.П., Фалина H.H., Маттисон Н.Л.,124

75. Ефименко О.М. Биосинтетическая деятельность высших грибов. JL: Наука, 1969. 244 с.

76. Феофилова Е.П. Современные направления в изучении биологически активных веществ из базидиальных грибов. Прикл. биохим. микробиол. 34 (6): 597-608, 1998.

77. Fogarty R. V., Tobin J. М. Fungal melanins and their interactions with metals. Enzyme Microbiol. Technol. 19: 311-317, 1996.

78. Bell A.A., Wheeler M.H. Biosynthesis and functions of fungal melanins. Ann. Rev. Phytopathol. 24: 411-451, 1986.

79. Лях C.H. Микробный меланиногенез и его функции. М.: Наука, 1981.274 с.

80. Knicker Н., Almendros G., Gonzalez-Vila F.J., Ludemann H.-D., Martin F. 13C and 15N NMR analysis of some fungal melanins in comparison with soil organic matter. Org. Geochem. 23: 1023-1028, 1995.

81. Шиврина A.H., Низковская О. П., Платонова Е.Г. Кормовые белки и физиол. активн. вещества для животнов. М.-Л.: Наука, 1965. С. 80-87.

82. Шиврина А.Н., Ловягина Е.В., Платонова Е.Г. К вопросу о природе и происхождении водорастворимого пигментного комплекса, образуемого трутовым грибом чага. Биохимия. 24(1): 67-72, 1959.

83. Шиврина А.Н. Химическая и спектрофотометрическая характеристика воднорастворимых гуминоподобных соединений,образуемых грибом Inonotus obliguus (pers.) pil. Почвоведение. 1962. Т. 11. С. 51-60.

84. Shimada М., Higuchi L. Degradation of lignin. In Wood and cellulosic chemistry Ed. by D.N.-S. Hon and N. Shiraishi. N.Y. and Basel: Marcel Dekker. 1991, pp. 525-591.

85. Jacobson E.S. Pathogenic roles for fungal melanins. Clinic. Microbiol. Reviews. 13(4): 708-717.

86. Бабицкая В.Г., Щерба В.В., Иконникова Н.В. Меланиновый комплекс гриба Inonotus obliguus. Прикл. биохим. микробиол., 36(4): 439-444, 2000.

87. Bollag J.-M., Shuttleworth K. L., Anderson D. H. Laccase-mediated detoxification of phenolic compounds. Appl. Environ. Microbiol. 54 (12): 30863091, 1988.

88. Sjoblad R. D., Bollag J.-M. Oxidative coupling of aromatic compounds by enzymes from soil microorganisms. In Soil Biochemistry. Vol. 5. Ed by E. A. Paul and J. N. Ladd . Marcel Dekker, Inc., N. Y., 1991.

89. Bollag J.-M., Sjoblad R. D., Liu Sh.-Y. Characterization of an enzyme from Rhizoctonia praticola which polymerizes phenolic compounds. Can. J. Microbiol. 25: 229-233, 1979.

90. Chefetz В., Chen, Y., Hadar Y. Purification and characterization of laccase from Chaetomium thermophilium and its role in humification. Appl. Environ. Microbiol. 64(9): 3175-3179, 1998.

91. Kataze Т., Bollag J.-M. Transformation of trans-4-hydroxycinnamic acid by a laccase of the fungus Trametes versicolor, its significance in humification. Soil Sci. 151:291-296, 1991.

92. Орлов Д.С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации. М.: Изд-во МГУ, 1990. 326 с.

93. Христева JI. А. Гуминовые удобрения. Теор. и практ. их примен. Тр. Херсонск. с.-х. инст. 1957, с. 75-108.

94. Севостьянова Н. В. Антимутагенный эффект гумизоля в культурах Т-лимфоцитов крови, находящихся в циклофосфане. Вопр. курортол. физеотер. леч. физ. культ. 4: 46-47, 1998.

95. Ferrara G., Loffredo Е., Simeone R., Senesi N. Evaluation of antimutagenic and desmutagenic effects of humic and fulvic acids on root tips of Viciafaba. Environ. Toxicol. 15(5): 513-517, 2000.

96. Sato Т., Ose Y., Nagase H. Desmutagenic effect of humic acid. Mutation Res. 162: 173-178, 1986.

97. Dekker J., Medlen C.E. Humic acid and its use in the treatment of various conditions. WO 00/016,785 (March 30, 2000).

98. Dekker J., Medlen C.E. Oxihumic acid and its use in the treatment of various conditions. WO 00/016,786 (March 30, 2000).

99. Мистерски В., Логинов В. Исследование некоторых физико-химических свойств гуминовых кислот. Почвоведение. 2: 39-51, 1959.

100. Комиссаров И.Д., Логинов Л.Ф. Молекулярная структура и реакционная способность гуминовых кислот. Гуминовые вещества в биосфере. 4: 36-45, 1993.

101. Кононова М.М. Проблема органического вещества на современном этапе. Органическое вещество целинных и освоенных почв. М.: Наука, 1972, с. 17-19.

102. Александрова Л.Н. Органическое вещество почвы и процессы его трансформации. Д.: Химия, 1980.

103. Stevenson F. J. Humus Chemistry. Genesis, Composition, Reactions. N Y: Wiley, 1988, pp. 264-270.

104. Linhares L.F., Martin J.P. Decomposition in soil of the humic acid-type polymers (melanins) of Eurotium echinulatum, Aspergillus glaucus sp. and other fungi. Soil Sci. Soc. Amer. J. 42(5): 738-743, 1978.

105. Шиврина A.H., Маслова P. А. Аминокислотный состав гуминоподобных комплексов образуемых некоторыми древоразрушающими грибами. Почвоведение. 11: 63-67, 1963.

106. Запрометова К., М. Мирчинк Т.Г., Орлов Д.С., Юхнин А.А. Характеристика черных пигментов темноокрашенных почвенных грибов. Почвоведение. 7: 22-30, 1971.

107. Ковалевский Д.В., Пермин А.Б., Перминова И.В., Петросян B.C. Вестник МГУ, сер. 2. Химия. 41: 39-42, 2000.

108. Malkin R., Malmstrom B.G., Vanngard Т. The reversible removal of one specific copper(II) from fungal laccase. Eur. J. Biochem. 7(2): 253-259, 1969.

109. Шлеев C.B., Кузнецов С.В., Топунов А.Ф. Прикладная биохимия и микробиология. 36: 354-358, 2000.127

110. Карякин Ю.В., Ангелов И.И. Чистые химические вещества. М.: Химия, 1974.

111. Paszczynski A., Crawford R.L., Huynh V.-B. In: Methods Enzymol. Ed. by Wood, W.A., Kellogg, S.T. AP: New York, 1988, 161: 264-271.

112. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr I.L. and Randall R.J. Protein mesurement with the Folin phenol reagent. J. Biol.Chem. 193(2): 265-275, 1951.

113. Орлов Д.С., Гришина JI.A., Ерошичева Н.Л. Практикум по биохимии гумуса. М.: Изд-во МГУ, 1969, 106 с.

114. Беллами Л. Инфракрасные спектры сложных молекул. М.: Изд-во иностр. литер., 1963, 590 с.

115. Перминова И.В. Анализ, классификация и прогноз свойств гумусовых кислот: Автореф. дис. докт. хим. наук. М.: МГУ им. Ломоносова, 2000, 50 с.

116. Оболенская А.В., Щеголев В.П., Аким Г.Л., Аким Э.Л., Коссович Н.Л., Емельянова И.З. Практические работы по химии древесины и целлюлозы. М.: Изд-во: Лесная промышленность, 1965, с. 50-95.

117. Методы экспериментальной микологии. Справочник под ред. Билай В.И. Киев.: Наукова Думка, 1982, с. 106-165.

118. Соловьев В.А., Малышева О.Н., Малева И.Л., Саплина В.И. Изменение химического состава древесины под действием лигнинразрушающих грибов. Химия древесины. 6: 94-100, 1985.

119. Xu F. Laccase. In Encyclopedia of bioprocess technology: fermentation, biocatalysis, bioseparation. Ed. by Flickinger M. C., Drew S. W.; John Wiley & Sons, Inc., 1999.

120. Степанова E. В. Сравнительная характеристика лакказ высших грибов и возможность их практического применения. Автореф. дисс. на соиск. уч. ст. канд. биол. наук. М.: ИНБИРАН, 1999.

121. Dedeyan В., Klonowska A., Tagger S., Tron Th., Iacazio G., Gil G., le Petit J. Biochemical and molecular characterization of a laccase from marasmius quercophilus. Appl. Environ. Microbial. 66(3): 925-929, 2000.

122. Galhaup С., Haltrich D. Enhanced formation of laccase activity by the white-rot fungus Trametes pubescens in the presence of copper. Appl. Microbiol. Biotechnol. 56(1/2): 225-232, 2001.

123. Coll P.M., Ternandez-Abalos J.M., Villanueva J.R., Santamaria R., Perez P. Appl. Environ. Microbiol. 59(8): 2607-2613, 1993.

124. Fortina M.G., Acquati A., Rossi P., Manachini P.L., Gennaro C.Di. Production of laccase by Botrytis cinerea and fermentation studies with strain F226. J. Industr. Microbiol. 17(2): 69-72, 1996.

125. Yoshiyama M., Iton Y. Poliphenol oxidase production in a jar fermentor by Coriolus versicolor. J. Ferment. Bioengeneering. 78(1): 188-190, 1994.

126. Staszczak M., Nowak G., Grzywnowicz K., Leonowicz A.: Proteolytic activities in cultures of selected white-rot fungi. J. Basic Microbiol. 36: 193-203, 1996.

127. Staszczak M., Zdunek E., Leonowicz A. Studies on the role of proteases in the white-rot fungus Trametes versicolor: Effect of PMSF and chloroquine on ligninolytic enzymes activity. J. Basic Microbiol. 40: 51-63, 1996.

128. Iwahara K., Honda Y., Watanabe Т., Kuwahara M. Polymerization of guaiacol by lignin-degrading manganese peroxidase from Bjerkandera adusta in aqueous organic solvent. Appl. Microbiol. Biotechnol. 54(1): 104-111, 2000.

129. Salas C., Lobos S., Larrain J., Salas L., Cullen D., Vicuna R. Properties of laccase isoenzymes produced by the basidiomycete Ceriporiopsis subvermispora. Biotechnol. Appl. Biochem. 21(3): 323-333, 1995.

130. Kojima Y., Tsukuda Y., Kawai Y., Tsukamoto A., Sugiura J., Sakaino M., Kita Y. Cloning, sequence analysis, and expression of ligninolytic phenoloxidase genes of the white-rot basidiomycete Coriolus hirsutus. J. Biol. Chem. 265(25): 15224-15230, 1990.

131. Nishizawa Y., Nakabayashi K., Shinagawa E. Purification and characterization of laccase from white rot fungus Trametes sanguinea. J. Ferment. Bioengeneering. 80(1): 91-93, 1995.

132. Geiger J.P., Nandris D., Nicole M., Rio B. Laccases of Rigidoporus lignosus and Phellinus noxius. Purification and some physicochemical properties. Appl. Biochem. Biotech. 12(2): 121-133, 1986.

133. Malkin R., Malmstrom B.G., Vanngard T. The reversible removal of one specific copper (II) from fungal laccase. Eur. J. Biochem. 7(2): 253-259, 1969.

134. McMillin R., Eggleston M.K. Bioinorganic chemistry of laccase. In Multicopper oxidases. Ed. by Messerschmidt A. World Scientific, Singapore, New Jersey, London, Hong Kong., 1998, pp. 129-166.

135. Беккер Е.Г., Пирцхалаишвили Д.О., Элисашвили В.И., Синицин А.П. Mn-пероксидаза из Pleurotus ostreatus: выделение, очистка и некоторые свойства. Биохимия. 57(8): 1248-1254, 1992.

136. Sarkar S., Martynez А.Т., Martynez M.J. Biochemical and molecular characterization of a manganese peroxidase isoenzyme from Pleurotus ostreatus. Biochim. Biophys. Acta. 1339: 23-30, 1997.

137. Варфоломеев С.Д., Наки А., Ярополов А.И., Березин И.В. Кинетика и механизм каталитического восстановления молекулярного кислорода в присутствии лакказы. Биохимия. 50(9): 1411-1420, 1985.130

138. Shutteworth K.L., Bollag J.-M. Soluble and immobilized laccase as catalysts for the transformation of substituted phenols. Enzyme and Microbiol. Technol. 8(3): 171- 177, 1986.

139. Смирнов C.A., Королева O.B., Гаврилова В.П., Белова А.Б., Клячко H.JT. Лакказы базидиомицетов: физико-химические характеристики и субстратная специфичность по отношению к метоксифенольным соединениям. Биохимия. 66(7): 774-779, 2001.

140. Galliano H., Gas G., Seris J.L., Boudet A.M. Lignin degradation by Rigidoporus lignosus involves synergistic action of two oxidizing enzymes: Mn peroxidase and laccase. Enzyme Microbiol. Technol. 13: 478-482, 1991.

141. Калабин Г.А., Каницкая Л.В., Кушнарев Д.Ф. Количественная спектроскопия ЯМР природного органического сырья и продуктов его переработки. М.: Изд-во: Химия, 2000, 407 с.

142. Dorado J., Almendros G., Camarero S., Martinez A.T., Vares Т., Hatakka A. Transformation of wheat straw in the course of solid-state fermentation by four ligninolytic basidiomycetes. Enzyme Microbiol. Technol. 25: 605-612, 1999.

143. Sanchez-Ferrer A., Rodriguez-Lopez J.N., Garcia-Canovas F., Garcia-Carmona F. Tyrozinase: a comprehensive review of its mechanism. Biochim. Biophys. Acta. 1247: 1-11, 1995.

144. Mester Т., Field J.A. Optimization of manganese peroxidase production by the white rot fungus Bjerkandera sp. strain BOS55FEMS. Microbiol. Letters. 155: 161-168, 1997.

145. Hofrichter M., Lundell Т., Hatakka A. Conversion of milled pine wood by manganese peroxidase from Phlebia radiata. Appl. Environ. Microbiol. 67(10): 4588-4593,2001.

146. Екабсоне М.Я., Крейцберг 3.H., Сергеева B.H., Киршбаум И.З. Исследование энзиматически разрушенной древесины. Химия древесины. 2: 61-64, 1978.

147. Rice J.A., MacCarthy P. Org. Geochem. 17: 635-648, 1991.

148. Visser S.A. Environ. Sci. Technol. 17: 412-417, 1983.

149. Perminova I.Y., Frimmel F.H., Kovalevskii D.V, Abbt-Braun G., Kudryavtsev A.V, Hesse S. Wat. Res. 32: 872-881, 1998.

150. Perminova I.V. Size exclusion chromatography of humic substances: complexities of data interpretation attributable to non-size exclusion effects. Soil Sci. 164(11): 834-840, 1999.

151. Kudryavtsev A.V., Perminova I.V., Petrosyan V.S. Size-exclusion chromatographic descriptors of humic substances. Analyt. Chim. Acta. 407: 193202, 2000.

152. Куликова H. А. Связывающая способность и детоксицирующие свойства гумусовых кислот по отношению к атразину. Диссертация на соиск. уч. степ. к. б. н. М.: МГУ им. Ломоносова, 1999.

153. Martin J. P., Haider К. Microbial activity in relation to soil humus formation. Soil Sci. 111(1): 54-63, 1971.