СРАВНИТЕЛЬНАЯ БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТАБОЛИЧЕСКИХ СВОЙСТВ РАЗЛИЧНЫХ ГЕПАТОПРОТЕКТОРОВ В УСЛОВИЯХ ТОКСИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ (экспериментальное исследование)

Бачко, Сергей Сергеевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
СРАВНИТЕЛЬНАЯ БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТАБОЛИЧЕСКИХ СВОЙСТВ РАЗЛИЧНЫХ ГЕПАТОПРОТЕКТОРОВ В УСЛОВИЯХ ТОКСИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ (экспериментальное исследование)
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "СРАВНИТЕЛЬНАЯ БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТАБОЛИЧЕСКИХ СВОЙСТВ РАЗЛИЧНЫХ ГЕПАТОПРОТЕКТОРОВ В УСЛОВИЯХ ТОКСИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ (экспериментальное исследование)"

Бачко Сергей Сергеевич

СРАВНИТЕЛЬНАЯ БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТАБОЛИЧЕСКИХ СВОЙСТВ РАЗЛИЧНЫХ ГЕПАТОПРОТЕКТОРОВ В УСЛОВИЯХ ТОКСИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ (экспериментальное исследование)

03.01.04 - биохимия

1 0 ноя 2011

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Краснодар 2011

4859388

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО КубГМУ Минздравсоцразвития России)

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (г.Москва).

Защита состоится «'З3> // 2011г. в /часов на заседании диссертационного совета Д 208.038.02 при ГБОУ ВПО КубГМУ Минздравсоцразвития России (350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4, тел. (861) 26273-75).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО КубГМУ Минздравсоцразвития России

Автореферат разослан «.¿'1» / О 2011 г.

Быков Илья Михайлович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Никулина Дина Максимовна

доктор медицинских наук, профессор Курзанов Анатолий Николаевич

диссертационного совета Д 208.038.02 профессор

Ученый секретарь

Л.А. Скорикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Печень является барьером на пути всех чужеродных веществ, попадающих в организм человека [А.Е.Вермель, 2005; С.А.Белякин и соавт., 2011]. Изменение активности печеночных ферментов ведет к снижению детоксикационной функции печени. На фоне этого чужеродные вещества могут оказывать значительное воздействие на печень, приводящее к формированию ее токсического поражения [А.М.01 Г^зссдНе е1 а1., 2007; Н.И.Калетина, 2008; В.С.Камышников, 2009; С.А.Белякин, А.Н.Бобров, С.В.Плюснин, 20116]. В связи с этим проблема изучения молекулярных механизмов регуляции функциональной активности печени и ее метаболической адаптации к воздействию токсических агентов остается важным направлением современной экспериментальной и клинической гепатологии [С.А.Белякин, А.Н.Бобров, С.В.Плюснин, 2011а].

Лечение поражений печени средствами, обладающими антиоксидантными и гиполипидемическими свойствами, широко исследуется в настоящее время [В.И.Пилипенко и соавт., 2008; В.М.Покровский, О.Г.Компаниец, 2008; Л.В.Кравченко и соавт., 2008]. Особое место в профилактике и лечении гепатитов занимает использование фосфолипидных концентратов и растительных масел, обогащенных полиненасыщенными жирными кислотами и жирорастворимыми витаминами [Л.Б.Стрелкова и соавт., 2008; Е.А.Сухосырова, З.К.Никитина, М.Б.Яковлева, 2008; И.В.Шилова и соавт., 2008; В.В.Амосов и соавт., 2009].

В современной литературе обсуждаются эффекты как широко известных препаратов природного происхождения на основе фосфолипидов (ФЛ) и триацилглицеринов (ТАГ) (эссенциале, фосфоглив, эссливер, омакор), так и менее известных (льняное масло, пальмовое масло), содержащих в своем составе полиненасыщенные жирные кислоты, жирорастворимые витамины и другие соединения, нормализующие метаболические процессы в печени и восстанавливающие целостность мембран гепатоциатов [Н.Б.Демина и соавт., 2007; Ж.Б.Дашинамжилов и соавт., 2008; С.Н.Жаров, Б.И.Санин, 2009].

Однако как известные соединения, широко применяющиеся в настоящее время в медицине, так и менее распространенные на российском рынке препараты изучены не в полной мере. В этой связи представляется актуальным исследование по уточнению биохимических механизмов гепатопротективного действия известных лекарственных средств, а также по обнаружению и исследованию механизма действия новых гепатопротекторов.

Цель исследования: подобрать наиболее эффективные гепатопротекторы растительного происхождения и дать сравнительную биохимическую характеристику выраженности их метаболических эффектов в эксперименте, используя модель токсического поражения печени.

В связи с поставленной целью необходимо решить следующие задачи:

1) Дать сравнительную биохимическую характеристику выраженности метаболических нарушений, возникающих у экспериментальных животных (крыс) при создании токсического поражения печени, вызванного воздействием четыреххлористого углерода.

2) Провести сравнительное изучение химического состава и физико-химических свойств различных липофильных продуктов растительного происхождения с известными и предполагаемыми гепатопротективными свойствами, используя современные методы количественного анализа.

3) Оценить в искусственно созданных модельных тест-системах in vitro антиоксидантную и антирадикальную активность изучаемых продуктов.

4) Изучить выраженность гепатопротективных свойств исследуемых растительных продуктов у экспериментальных животных, подвергнутых интоксикации четыреххлористым углеродом.

5) Оценить состояние ферментов антирадикальной защиты, активность процессов перекисного окисления липидов, направленность изменений липидного, углеводного и белкового спектров сыворотки крови при экспериментальном токсическом гепатите на фоне приема тестируемых растительных продуктов.

6) С учетом полученных данных дать рекомендации по эффективному

использованию различных продуктов растительного происхождения, обладающих гепатопротективными свойствами, для лечения заболеваний печени.

Научная новизна. Проведен комплексный анализ выраженности нарушений в обмене липидов, углеводов, белков и в системе про-/антиоксиданты, возникающих у экспериментальных животных при моделировании токсического поражения печени, вызванного введением четыреххлористого углерода.

В рамках представленного исследования впервые проведено сравнительное изучение липидного состава и физико-химических свойств новых растительных масел (черного и грецкого орехов).

Впервые на большом экспериментальном материале проведено сравнительное изучение антиоксидантной активности различных продуктов растительного происхождения с известными и предполагаемыми гепатопротективными свойствами на доклиническом этапе с применением липосомальной модельной тест-системы.

Впервые доказано наличие гепатопротективных свойств у некоторых растительных масел (черного и грецкого орехов, льняного), исследована выраженность их гепатопротективного эффекта.

Научно-практическая значимость работы. В ходе проведенного исследования изучены растительные масла, обладающие выраженными гепатопротективными свойствами, описан их химический состав и основные метаболические эффекты, что позволяет рекомендовать их для лечения токсического поражения печени у человека.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Введение в организм лабораторных животных (крыс) четыреххлористого углерода способствует выраженному повреждению мембран гепатоцитов, активации процессов липопероксидации, дисбалансу в работе ферментантивного звена антиоксидантной системы организма, нарушению метаболизма липидов, белков, углеводов.

2. Первичный скрининг липофильных продуктов растительного

происхождения, основанный на анализе их химического состава и антирадикальной активности в опытах in vitro, является эффективным инструментом для поиска новых гепатопротекторов.

3. Использование льняного масла, масел черного и грецкого орехов, а также препарата фосфоглив для лечения токсического поражения печени способствует снижению интенсивности процессов липопероксидации, нормализации работы ферментов антирадикальной защиты, восстанавливает нарушения липидного, белкового и углеводного обменов, что позволяет рекомендовать исследуемые продукты для лечения токсического гепатита.

4. Апробация результатов исследования. Материалы диссертации были представлены и обсуждались на II съезде физиологов СНГ (Кишенев, Молдова, 2008); 15 Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Краснодар, 2008); Научно-практической конференции стоматологических кафедр КГМУ «Вопросы организации и образования в стоматологии» (Краснодар, 2009); на III съезде физиологов СНГ (Ялта, Украина, 2011).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 научных работ, в том числе 2 статьи в центральной медицинской печати, рекомендованной Высшей аттестационной комиссией при Министерстве образования и науки Российской Федерации.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 166 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 18 рисунками, содержит 21 таблицу. Список литературы включает 309 источников, из них 260 отечественных и 49 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для выполнения работы была разработана структурная схема исследования. В экспериментах использовано 175 белых беспородных крыс самцов весом 150200 г. В каждой опытной и контрольной группе животные были одного возраста и веса. Они содержались в стандартных условиях, с соблюдением всех правил и международных рекомендаций Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях [1986].

В экспериментах на крысах in vivo было изучено влияние четырех наиболее перспективных продуктов (масло льна, черного и грецкого орехов, препарата фосфоглив) на метаболические процессы и функцию печени. В связи с этим опытные животные были распределены на следующие группы. Первая группа (25 крыс) - интактные животные. Вторая группа (25 крыс) - животные с моделью токсического поражения печени, вызванного введением CCU, исследование биохимических параметров у которых производилось на 7 сутки после начала эксперимента. Третья группа (25 крыс) - животные с моделью токсического поражения печени вызванного введением ССЦ, исследование биохимических параметров у которых производилось на 30 сутки после начала эксперимента. Четвертая группа (100 крыс) - животные с предварительно созданным экспериментальным токсическим гепатитом, которым по гастральному зонду вводили изучаемые гепатопротекторы: масло черного ореха -подгруппа IVa (п=25), масло грецкого ореха - подгруппа IVе (п=25), льняное масло - подгруппа IVB (п=25), фосфоглив - подгруппа IVr (п=25).

Для создания модели острого токсического поражения печени крысам подкожно вводили 50% масляный раствор CCI4 из расчета 0,5 мл на 100 г массы тела животного один раз в сутки в течение трех суток. Забор крови и внутренних органов (печени) для исследования у животных опытных и контрольной групп проводили на 7 и на 30 сутки после начала эксперимента путем декапитации под нембуталовым наркозом (35 мг/кг). Забой крыс производили после их 14-часового голодания, в утренние часы, согласно принятым на этот счет инструкциям и законодательным актам. Все исследования были выполнены в день забора крови и внутренних органов.

Для морфологического подтверждения развития моделируемого патологического процесса проводили патогистологическое исследование печени опытных животных с окраской гематоксилином и эозином по общепринятой методике [Д.Э.Коржевский, 2005].

Тестами биохимического исследования служили: индикаторные ферменты-аланинаминотрансфераза (AJIT), аспартатаминотрансфераза (АСТ), экскреторные

- у-глутамилтранспептидаза (у-ГТП) и щелочная фосфатаза (ЩФ) печени, содержание билирубина и его фракций в сыворотке крови. О состоянии углеводного обмена судили по концентрации глюкозы, пировиноградной (ПВК) и молочной кислот в сыворотке крови; белкового обмена - по содержанию общего белка, альбумина и а-, 0-, у-глобулинов. Показателями липидного обмена служили: общий холестерин (ОХС), холестерин липопротеинов высокой (ХС ЛПВП), низкой (ХС ЛПНП) и очень низкой (ХС ЛПОНП) плотности, эфиры холестерина (ЭХС, неэтерифицированный холестерин (НЭХС), триацилглицеролы (ТАГ) сыворотки крови. Определение проводили с использованием наборов реагентов фирмы «Vital Diagnostics SPb» и по стандартным методикам [В.С.Камышников, 2009]. Об активности процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) судили по количеству вторичных продуктов липопероксидации, вступающих в реакцию с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-РП) [И.Д.Стальная, 1977; В.С.Камышников, 2004]. Активность супероксидцисмутазы (СОД) в гемолизате эритроцитов оценивали по методу В.А. Костюка и соавт. [1990], каталазы - по М.А. Королюку и соавт. [1988]. Содержание гемоглобина (НЬ) в гемолизате эритроцитов определяли гемиглобинцианидным методом. Исследование общих липидов (общих фосфолипидов, холестерина (ХС)) и фосфолипидов (ФЛ) (лизофосфатидилхолина (ЛФХ), лизофосфатидилэтаноламина (ЛФЭА), фосфатидилхолина (ФХ), сфингомиелина (СМ), фосфатидилэтаноламина (ФЭА), фосфатидилсерина (ФС), фосфатидилинозитола (ФИ)) эритроцитов проводили методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии.

Методы извлечения липидов из продуктов растительного происхождения с предполагаемыми гепатопротективными свойствами и изучения их химических свойств включали: получение липидных экстрактов, определение йодного числа, массовой доли неомыляемых липидов, жирнокислотного состава липидных экстрактов методом газожидкостной хроматографии [Лабораторный практикум по химии жиров, 2004].

Изучение антиокеидантной активности липофильных продуктов растительного происхождения проводили в экспериментах in vitro с использованием в качестве субстрата ПОЛ мелких моноламеллярных липосом, полученных из яичного ФХ методом инжекции этанольного раствора липида в водную фазу. Уровень ПОЛ в суспензии липосом оценивали по нарастанию ТБК-РП [В.Г.Зайцев, 2001].

В работе был произведен анализ 10 растительных продуктов, как полученных экспериментально, так и входящих в состав лекарственных препаратов, с целью отбора наиболее перспективных для использования в качестве гепатопротекторов и антиоксидантов: масло черного ореха (Juglans nigra), масло грецкого ореха (Juglans regia), масло льняное (производство «ИП Цыпляков А.Н.», Россия. Сертификат соответствия № РОСС RU.Af044.B03616), масло оливковое («LOWARI», Италия), масло подсолнечное (производство ООО «Родник-98», Россия. ГОСТ 1129-93), масло кукурузное (производство ООО «Кубанская долина», Россия. ГОСТ 8808-2000), Эссенциале форте Н (A. Nattermann & Cié. GmbH, Германия), Эссливер форте (Nabros Pharma, Индия). Фосфоглив (ОАО «Фармстандарт-УфаВИТА», Россия), Ретинола ацетат (АЙ СИ ЭН Октябрь, Россия).

Статистическую обработку экспериментального материала проводили в соответствии с методами, принятыми в вариационной статистике [А.Н. Герасимов, 2007]. За достоверные различия в сравнении средних величин в парных сравнениях брали t-критерий Стьюдента при р<0,05. Статистический анализ результатов исследования был проведен с использованием программ: «STATISTIKA 6.0» и «Microsoft Office Excel 2003».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Для диагностики степени и глубины повреждения печени в данном исследовании было использовано определение активности ферментов АЛТ, ACT, ЩФ, у-ГТП в крови крыс. На 7 сутки после введения токсического вещества в сыворотке крови животных 2 группы отмечалось резкое увеличение активности ферментов ACT и АЛТ - в среднем в 3,7 (р<0,001) и 6,2 раза (р<0,001)

соответственно, активность у-ГТП и Щф возросла в 8,3 (р<0,001) и 1,2 раза (р<0,001) соответственно, по сравнению данными, полученными в группе интактных животных. На 30 сутки после введения ССЦ наблюдалась тенденция к снижению активности ACT, AJ1T, у-ГТП и ЩФ в сыворотке крови животных, однако активность ни одного из изучаемых ферментов не достигала значений, сопоставимых с группой здоровых крыс.

Обнаруженные биохимические нарушения в организме животных подтверждались анализом гистологической структуры печени крыс (рис. 1).

Рис. 1. Микроскопическая картина печени интактных крыс (А) и подвергнутых интоксикации ССЦ: 7 сутки эксперимента (Б), 30 сутки эксперимента (В). (Окраска гематоксилин-эозин; объектив ano- 40х, окуляр

КЮх).

Как показали исследования, у крыс с моделью токсического поражения печени на 7 сутки эксперимента наблюдалось увеличение содержания билирубина в крови за счет его прямой фракции. Тогда как уровень непрямого билирубина статистически не отличался от контроля (р>0,5). На 30 сутки эксперимента концентрация общего билирубина в крови крыс III экспериментальной группы снизилась, однако не достигала контрольных значений.

Повышение активности трансаминаз в сыворотке крови животных подвергнутых интоксикации ССЦ свидетельствует о повреждении мембран гепатоцитов, повышении их проницаемости, а также гибели клеток печени, вследствие чего наблюдается выход внутриклеточных субстанций в кровь. Преимущественное увеличение активности AJ1T - цитоплазматического фермента, в отличие от ACT, имеющего митохондриально-цитоплазматическую локализацию, свидетельствует о преимущественном повреждении внешних мембран гепатоцитов под действием ССЦ. Увеличение активности у-ГТП и ЩФ

также указывает на массивный некроз гепатоцитов, возникающий под воздействием на организм крыс СС14. Однако повышение концентрации билирубина, преимущественно за счет его прямой фракции, на фоне высокой активности у-ГТП и ЩФ указывает не только на формирование синдрома цитолиза у подопытных животных, но и на развитие синдрома внутрипеченочного холестаза и позволяет диагностировать паренхиматозный тип желтухи.

Одним из наиболее вероятных механизмов, позволяющих объяснить биохимические изменения в крови подопытных животных, является активация процессов ПОЛ. Согласно полученным данным, при интоксикации СС14, в крови животных наблюдалось накопление вторичных продуктов липопероксидации, реагирующих с ТБК (рис. 2). Свободные радикалы, образующиеся из СС14, способствуют повреждению мембран клеток, модуляции апоптоза, развитию окислительного стресса.

I группа П группа Ш группа

(контроль)

Рис. 2. Содержание ТБК-РП в сыворотке крови крыс при моделировании токсического поражения печени, вызванного введением четыреххлористого углерода. Примечание: *-р<0,001. В ходе проведенных исследований установлено, что у животных II и III

опытных групп на момент обследования наблюдался значительный дисбаланс в

работе ферментативного звена антиоксидантной системы (АОС) крови. В

гемолизате эритроцитов крыс II группы (7 суток от начала эксперимента) по

сравнению с группой здоровых животных наблюдалось снижение активности как

СОД (на 37,2%, р<0,001), так и каталазы (на 57,1%, р<0,001). Вследствие более

выраженного ингибирования каталазы, коэффициент каталаза/СОД во II группе

был ниже на 30,3% (р<0,001) по сравнению с контролем. В крови животных III группы (30 суток от начала эксперимента) активность СОД снижалась на 56,2% (р<0,001) по сравнению с данными в контрольной группе и на 30,2% (р<0,01) по сравнению с показателями во II группе. Изменения активности каталазы носили однонаправленный характер по отношению к СОД. Так, в гемолизате эритроцитов крыс III группы активность каталазы снижалась на 60,2% (р<0,001) по сравнению с данными в контрольной группе и на 7,0% (р<0,001) по сравнению с показателями во II группе. Коэффициент каталаза/СОД в III экспериментальной группе составило 2,75±0,08, что на 8,3% (р<0,02) ниже по сравнению с данными в контрольной группе (3,00±0,06) и на 36,1% (р<0,001) выше по сравнению с данными во II группе (2,09±0,08).

Снижение активности СОД и каталазы в крови животных с моделью острого токсического поражения печени, по-видимому, связано с окислительной модификацией функциональных групп ферментов, возникающей под действием избыточного количества активных форм кислорода и свободных радикалов. Образующиеся при этом конформационные перестройки молекулы фермента, диссоциация белков на субъединицы, а также увеличение скорости их деградации может быть причиной наблюдаемого нами явления. Увеличение коэффициента каталаза/СОД в III группе животных по сравнению со II группой, по нашему мнению, следует рассматривать как положительную тенденцию, направленную на восстановление сбалансированности в работе ферментов первой (СОД) и второй (каталаза) линии антирадикальной защиты организма.

Исследование состояния липидного обмена на фоне интоксикации CCI4 (II и III группы) показало увеличение содержания ОХС и ХС ЛПНП, снижение концентрации ХС ЛПВП и ТАГ, а также угнетение процесса этерификации ХС.

У подопытных животных наблюдалась выраженная гиперхолестеринемия, которая была связана с увеличением содержания ХС в проатерогенной фракции ЛПНП, при одновременном снижении его содержания в антиатерогенной фракции ЛПВП, что свидетельствует о формировании у экспериментальных животных вторичной дислипопротеидемии IIa типа по D.S.Fredrickson [1967].

Таблица 1.

Биохимические показатели липидного обмена в сыворотке крови крыс при _острой интоксикации чегыреххлористым углеродом (М±т)_

Исследуемый показатель Группы животных

I (контрольная) II (7 суток от начала эксперимента) III (30 суток от начала эксперимента)

ТАГ, ммоль/л 1,29±0,07 0,55±0,02 Р2.1<0,001 0,43±0,02 рз-г<0,001 Рз-2<0,001

ОХС, ммоль/л 2,90±0,08 3,12±0,05 р2-1<0,02 3,77±0,06 Рз-1<0,001 Рз-2<0,001

ХС ЛПВП, ммоль/л 0,91 ±0,04 0,68±0,02 ри<0,001 0,50±0,02 рз.,<0,001 Рз-2<0,001

ХС ЛПОНП, ммоль/л 0,59±0,03 0,25±0,01 р2.,<0,001 0,20±0,01 рз-1 <0,001 Рз-2<0,001

ХС ЛПНП, ммоль/л 1,40±0,08 2,18±0,06 р2-1<0,001 3,08±0,07 рз-1<0,001 рз-2<0,001

ЭХС, ммоль/л 1,79±0,03 1,39±0,02 Р2-1<0,001 1,23±0,01 рз-1<0,001 рз-2<0,001

НЭХС, ммоль/л 1,11 ±0,08 1,73±0,05 рг-г<0,001 2,54±0,06 Рз-1<0,001 Рз.2<0,001

ЭХС/НЭХС, усл. ед. 1,81±0,14 0,82±0,03 р2-г<0,001 0,49±0,01 Рз.,<0,001 Рз-2<0,001

В эритроцитах лабораторных животных на 7 сутки эксперимента наблюдался процесс уменьшения содержания ФЛ (на 24,2%, р<0,001) и увеличение количества НЭХС (на 19,3%, р<0,001) по сравнению с контролем. На 30 сутки после введения ССЦ концентрация ФЛ в эритроцитах была ниже на 29,2% (р<0,001) по сравнению с данными, полученными во II группе, и на 46,3% (р<0,001) по сравнению с показателями в группе интактных животных. Содержание НЭХС при этом увеличилось на 9,9% (р<0,001) по сравнению с животными II опытной группы и на 31,2% (р<0,001) по сравнению с контролем.

НЭХС, присутствующий в мембранах эритроцитов, вызывает уменьшение подвижности жирнокислотных остатков ФЛ, снижает латеральную диффузию

липидов и белков, следовательно, способен влиять и на функции мембранных белков.

120

И фи □ ФС а лфэа ■ фэа □ см □ лфх □ фх

st s ■■■■■ •

ч ЯШ ШЛ

I группа П группа Ш группа (контроль) (7 суток) (30 суток)

Рис. 3. Фосфолнпидный спектр эритроцитов крыс опытных групп.

В эритроцитах также наблюдались выраженные изменения в содержании ФЛ наружного слоя (рис. 3): снижение содержания ФХ компенсировалось увеличением уровня СМ по сравнению с контролем. Это связано с процессом уменьшения жидкостных свойств мембраны и увеличением ее микровязкости. Одновременно был обнаружен рост содержания ЛФХ в опытных группах по сравнению с данными, полученными в группе интактных крыс. Что свидетельствует об активации фосфолипазы А2 в эритроцитах крыс, подвергнутых воздействию четыреххлористого углерода.

При исследовании изменений фосфолипидных фракций, характеризующих внутренний монослой мембраны эритроцитов (ФЭА, ЛФЭА, ФС, ФИ), также отмечались изменения в их соотношении (рис. 3).

При токсическом поражении печени, вызванном введением СС14, наблюдались изменения углеводного обмена, которые определяли по уровню глюкозы, молочной и пировиноградной кислот в сыворотке крови.

На 7 сутки эксперимента у крыс 2 группы наблюдалось снижение содержания глюкозы в сыворотке крови на 27,8% (р<0,001) по сравнению с данными, полученными в группе здоровых крыс. К концу эксперимента на 30 сутки содержание глюкозы составило 2,83±0,06 ммоль/л, что было ниже показателей во II группе на 14,8% (р<0,001) и ниже контрольных значений на

38,5% (р<0,001). Концентрация лактата и ПВК в сыворотке крови животных опытных групп также снижалась (табл. 2).

Таблица 2.

Содержание пировиноградной и молочной кислот в сыворотке крови животных с моделью острого токсического поражения печени

(М±ш)

Группы крыс п Лактат, ммоль/л ПВК, ммоль/л Лактат/ПВК, усл.ед.

I(контрольная) 25 2,02±0,06 0,36±0,01 5,82±0,23

II (7 суток от начала эксперимента) 25 1,90±0,02 P2-I<0,5 0,30±0,01 Р2-Г<0,001 6,49±0,14 Р2-,<0,02

III (30 суток от начала эксперимента) 25 1,75±0,02 рз-, <0,001 р3.2<0,001 0,23±0,01 рз., <0,001 Рз-2<0,001 7,75±0,24 рз-1<0,001 рз-2<0,001

Обнаруженная в ходе проведенного исследования гипогликемия у лабораторных животных, подвергнутых интоксикации СС14, по-видимому, связана с торможением гликонеогенеза. Снижение концентрации молочной и пировиноградной кислот (продуктов, преимущественно образующихся из глюкозы) в сыворотке крови животных опытных групп отражает общую тенденцию к гипогликемии у крыс при интоксикации ССЦ. Увеличение значения коэффициента лактат/ПВК во II и III группах свидетельствует о преобладании в тканях анаэробного гликолиза над аэробным и характеризует степень тканевой гипоксии.

Согласно результатам проведенного исследования у крыс II и III опытных групп имели место значительные нарушения в метаболизме белков. Так, на 7 сутки эксперимента в сыворотке крови животных, подвергнутых токсическому воздействию СС14, наблюдалось снижение концентрации общего белка на 20,9% (р<0,001) и альбумина на 24,4% (р<0,001) по сравнению с контролем. На 30 сутки эксперимента содержание общего белка и альбумина увеличилось на 9,6% (р<0,001) и на 15,4% (р<0,001) соответственно по сравнению с результатами, полученными во II группе, но было ниже (на 13,3%, р<0,001 и на 12,8%, р<0,001) контрольных значений. Обращает также на себя внимание снижение

концентрации глобулинов в сыворотке крови крыс II и III групп на 19,5% (р<0,001) и 15,2% (р<0,001) соответственно относительно контроля. Изучение содержания отдельных фракций глобулинов в сыворотке крови животных опытных групп показало снижение фракции а- и у-глобулинов и увеличение фракции ß-глобулинов.

Таким образом, при токсическом воздействии CCU на печень крыс у животных возникала абсолютная гипопротеинемия, связанная с непосредственным повреждением гепатоцитов свободными радикалами.

Как показали наши исследования, острая интоксикация CCI4 приводила к значительному изменению структуры и функции гепатоцитов, что требовало коррекции.

Рядом экспериментальных и клинических работ было показано, что количество и состав липидов крови, а также клеточных мембран определяется количеством и качеством принятых с пищей жирных кислот, входящих в состав продуктов растительного и животного происхождения.

Особый интерес представляет анализ жирнокислотного состава ранее практически не изученных масел черного и грецкого орехов. К особенностям их состава следует отнести высокое содержание линолевой кислоты (более 60%, как у подсолнечного масла). Масло черного ореха по сравнению с маслом грецкого ореха содержало больше олеиновой жирной кислоты. В отличие от оливкового масла орехи содержали в значительно большем количестве полиненасыщенные линолевую и линоленовую кислоты и значительно уступали в доле мононенасыщенной олеиновой кислоты. По содержанию линолевой жирной кислоты масла черного и грецкого орехов также превосходили масла подсолнечника и кукурузы. Основу используемых в данном исследовании фосфолипидных концентратов (эссенциале форте, эссливер форте, фосфоглив) составляли ФЛ (преимущественноФХ), получаемые из сои. Их жирнокислотный состав представлен полиненасыщенными жирными кислотами, в основном линолевой кислотой (около 70%).

Изучение особенностей влияния на интенсивность ПОЛ отобранных для исследования растительных масел и лекарственных препаратов показало наличие у них антиоксидантных свойств. Исследуемые продукты достоверно снижали содержание ТБК-РП в липосомах в течение первых 12 часов окисления, но при большей длительности процесса ПОЛ выраженность антиоксидантного действия заметно снижалась, а у ретинола проявлялись прооксидантные свойства. Высокая антиоксидантная активность исследуемых продуктов на начальном этапе ПОЛ связана с наличием в структуре их компонентов ненасыщенных связей, которые перехватывают свободные радикалы - инициаторы ПОЛ, конкурируя за них с мембранными липидами и тем самым защищая последние от интенсивного окисления. По-видимому, отсутствие у растительных масел и фосфолипидных концентратов прооксидантных свойств обусловлено наличием в их составе различных компонентов, обладающих антиоксидантными свойствами. В целом, по величине антиоксидантного эффекта исследуемые продукты можно расположить следующим образом: ретинола ацетат < оливковое масло < кукурузное масло < подсолнечное масло < эссливер форте < эссенциале форте < масло грецкого ореха < фосфоглив < масло черного ореха < льняное масло. В связи с этим для дальнейших исследований были отобраны четыре наиболее перспективных продукта (льняное масло, масло черного и грецкого орехов, фосфоглив), обладающие наиболее выраженными антиоксидантными свойствами.

Согласно проведенному нами исследованию, на фоне лечебного введения экспериментальным животным изучаемых растительных продуктов наблюдалась общая тенденция к уменьшению активности индикаторных и экскреторных ферментов печени в сыворотке крови (табл. 3).

Несмотря на значительное уменьшение гиперферментемии, обнаруженное во всех группах крыс, получавших лечение изучаемыми продуктами, на 30 сутки эксперимента активность ферментов крови не достигала контрольных значений.

Таблица 3.

Активность некоторых ферментов сыворотки крови крыс с моделью токсического поражения печени на фоне лечебного действия растительных _ масел и препарата фосфоглив (М±т)_

Группы Исследуемый показатель

п ACT, U/л АЛТ, U/л АСТ/АЛТ, усл. ед. у-ГТП, U/л ЩФ, U/л

IVA 16,35±0,52 32,75±0,48 0,5±0,04 63,74±1,24 89,63 ±0,52

(масло черного ореха) 25 рм-з<0,001 Р4А-1<0,001 Р4А-3<0,001 Р4А-1<0,001 Р4А-З<0,05 Р4А-1<0,001 Р4А-з<0,001 Р4А-1<0,001 Р4А-)<0,02 Р4А-1<0,01

IVЕ (масло грецкого ореха) 17,43±0,52 35,55±0,48 0,49±0,02 65,44±1,26 91,67±0,51

25 Р4Б-3<0,001 Р4Б-1<0,001 Р4Б-4Л<0,5 Р4Б.З<0,001 Р4Б-1<0,001 Р4Е-4А<0,001 Р4Б-3<0,001 Р4Б-1<0,001 Р4Б-4А>0.5 Р4Б-3<0,001 Р4Б-1<0,001 Р4Б-4А>0,5 Р4Б-З<0,5 Р4Б-1<0,001 Р4Б-4А<0,01

12,87±0,61 28,47±0,42 0,45±0,02 54,85±1,11 89,78±0,47

IV" (фосфоглив) 25 Р4в-з<0,001 P4B-i<0,00I р4В-4А<0,001 Р4В-4Б<0,001 Р4в-з<0,001 Р4в-1<0.001 Р4В-4А<0,001 Р4В-4Б<0,001 Р4В-З<0,05 P4B-i<0,00i Р4В-4А<0,5 р4В-4Б<0,5 Р4в-з<0,001 P4B-I<0,001 Р4В-4А<0,001 Р4В-4В<0,001 Р4В-З<0,02 Р4В-1<0,001 Р4В-4А>0,5 Р4В-4Б<0,01

14,76±0,56 30,81±0,48 0,48±0,02 61,22±1,1 90,12±0,5

IVr (льняное масло) 25 Р4г-з<0,001 р4г-1<0,001 Р4Г-4А<0,05 Р4Г-4Б<0,001 Р4ЫВ<0,05 р4г-з<0,001 pir-i<0.001 Р4Г-4А<0,01 Р4Г-4Б<0,001 Р4Г-4В<0,0001 р4г-з<0,001 Р4г-}<0,001 Р4Г-4А<0,5 Р4Г-4Б>0,5 Р4Г-4В<0,5 р4г-з<0,001 р4г-1<0,001 Р4Г-4А<0,5 Р4Г-4В<0,05 Р4Г-4В<0,0001 Р4г-з<0,5 р4г-1<0,001 Р4Г-4А<0,5 р4Г-4Б<0,05 Р4Г-4В<0,5

III (СС14,30 суток от начала эксперимента) 25 24,06±0,68 41,19±0,44 0,59±0,02 108,67±1,02 91,21±0,46

I (контрольная) 25 8,78±0,27 8,62±0,25 1,02±0,01 1б,60±0,48 87,51±0,49

Согласно результатам проведенных исследований, у животных на фоне введения растительных масел и препарата фосфоглив наблюдалось снижение содержания общего билирубина в сыворотке крови преимущественно за счет его прямой фракции. Так, у животных IVA группы (масло черного ореха) концентрация общего билирубина была ниже показателей III группы на 19,3% (р<0,001); IVе (масло грецкого ореха) - на 15,9% (р<0,001); IVB (фосфоглив) - на 36,2% (р<0,001); IVr (льняное масло) - на 28,8% (р<0,001).

Таким образом, все исследуемые масла (черного и грецкого орехов, льна), а также препарат фосфоглив проявили выраженные гепатопротекгивные свойства,

способствовали уменьшению выраженности цитолитического, холестатического и токсического синдромов у лабораторных животных. По степени выраженности гепатопротективных свойств растительные продукты можно расположить в следующем порядке: фосфоглив > льняное масло > масло черного ореха = масло грецкого ореха.

Согласно полученным данным, в сыворотке крови наиболее выраженное снижение содержания ТБК-РП относительно группы сравнения было зарегистрировано в 1УГ группе (на 34,9%, р<0,001). В 1УА уровень ТБК-РП снизился на 17,6% (р<0,001), в IVе - на 21,9% (р<0,001), в IV8 - на 11,1% (р<0,001) по сравнению с данными, полученными у крыс III группы. Изменение активности ферментов антирадикальной защиты эритроцитов в группах IV4, IVе, IVй, IV1 носили однонаправленный характер: наблюдалось выраженное увеличение активности как СОД, так и каталазы по сравнению с данными, полученными в группе III.

Биохимические изменения крови сопоставимы с изменениями в клетках других органов, поэтому снижение содержания ТБК-РП в плазме крови, а также выраженная тенденция к нормализации работы ферментов первой и второй линий антирадикальной защиты эритроцитов во всех опытных группах, получавших лечение растительными продуктами, отражает процесс инактивации процессов ПОЛ в периферических тканях и органах. Наиболее выражен этот эффект был в группе 1УГ.

Согласно проведенному нами исследованию, уровень ТАГ повышался во всех опытных группах по сравнению с группой сравнения (III группа). Однако максимальное увеличение этого показателя наблюдалось в 1УА и 1УГ группах (в среднем на 195%, р<0,001 и 202%, р<0,001 соответственно по сравнению с III опытной группой) и статистически не отличалось от данных, полученных в контрольной группе.

При анализе содержания ОХС в сыворотке крови крыс опытных групп обращает на себя внимание значительное его снижение в IV1 группе (на 17,5% по сравнению с группой сравнения).

При анализе распределения ХС между ЛП частицами отмечается снижение его содержания в проатерогенной фракции ЛПНП в группах 1УА, IVе, IVй, I Уг (на 40,6%, р<0,001; 36,7%, р<0,001; 20,5%, р<0,001; и 47,4%, р<0,001 соответственно) по сравнению с группой крыс, не получавших лечение. Наибольшее содержание ХС ЛПОНП было зарегистрировано в 1УА (0,59±0,02 ммоль/л) и IV1 (0,59±0,02 ммоль/л) группах, Содержание холестерина в антиатерогенной фракции ЛПВП было максимальным в группе 1УГ (0,90±0,02 ммоль/л.

Таким образом, в группах 1УА, IVе, IV8, IV1 биохимические сдвиги носили противоположный характер, по отношению к крысам с моделью токсического поражения печени, не получавших лечения. Наиболее выраженные эффекты, направленные на восстановление липидного обмена, были в группе животных, получавших в качестве лечебного средства льняное масло (1УГ группа).

В плазме крови крыс 1УА, IVе, IV0, 1УГ групп наблюдалось увеличение содержания ФЛ и снижение концентрации НЭХС по сравнению с группой сравнения (крысы с моделью токсического поражения печени, не получавшие лечения) (рис.4).

Рис. 4. Содержание фосфолипидов в эритроцитах у крыс опытных групп

Таким образом, наиболее выраженное увеличение содержания фосфолипидов и снижение доли холестерина наблюдалось в 1УГ (льняное масло).

У крыс опытных групп наблюдались также выраженные изменения в ФЛ спектре эритроцитов. В группах 1УА, IVе, 1УВ, 1УГ имело место повышение содержания ФХ, сопровождающееся уменьшением доли СМ, что отражает процесс увеличения текучести мембраны. Коэффициент ФХ/СМ в этих группах

был выше, чем в группе сравнения. В мембранах эритроцитов крыс с моделью токсического поражения печени, получавших лечение растительными маслами и препаратом фосфоглив, наблюдалось увеличение доли ФЭА и снижение относительного содержания ФС. Обращает на себя внимание также снижение содержания лизоформ фосфолипидов (ЛФХ и ЛФЭА) в эритроцитах животных под действием исследуемых продуктов.

Таким образом, в группах IVA, IVе, IVb, IVr под действием растительных масел и лекарственного препарата фосфоглив происходило насыщение эритроцитов ФЛ, замещение СМ на ФХ и ФС на ФЭА, уменьшение доли ЛФХ и ЛФЭА. Это характеризует улучшение их реологических свойств, увеличение текучести мембраны, нормализацию ее проницаемости. Описанные изменения наиболее выражены были в группе крыс, получавших льняное масло (IVr группа).

Согласно полученным результатам, во всех группах крыс, получавших лечение растительными маслами и препаратом фосфоглив, наблюдалось увеличение содержания глюкозы в сыворотке крови по сравнению с данными, полученными в группе сравнения. Наиболее выраженное увеличение уровня глюкозы крови по сравнению с данными, полученными в III группе, было зарегистрировано в IVr группе (на 48,4%, р<0,001), затем следовали IVA (на 44,9%, р<0,001), IVе (на 37,1%, р<0,001) и IVB (на 29,3%, р<0,001) группы.

Согласно полученным результатам, у животных IVA, IVе, IV8, IVr опытных групп, по сравнению с группой III, наблюдалось увеличение содержания ПВК при статистически недостоверном изменении уровня лактата в сыворотке крови, что сопровождалось изменением коэффициента лактат/ПВК. В IVA группе этот коэффициент был на 20,8% (р<0,001) ниже, чем в группе сравнения, в IVе - на 12,1% (р<0,02), в IVB - на 17,3% (р<0,001), в IVr - на 30,1% (р<0,001).

Таким образом, под действием изучаемых растительных масел и препарата фосфоглив наблюдалась тенденция к нормализации параметров углеводного обмена у лабораторных животных с моделью токсического поражения печени. Это выражалось в увеличении концентрации глюкозы в сыворотке крови, а также

преобладании аэробного пути окисления глюкозы над анаэробным, о чем свидетельствовало увеличение доли ПВК и снижение коэффициента лактат/ПВК. Наиболее выражены обнаруженные изменения были зарегистрированы в группе IVr (льняное масло).

Как показали результаты исследования, у экспериментальных животных под действием растительных масел и лекарственного препарата фосфоглив наблюдалось увеличение содержания общего белка в сыворотке крови как за счет фракции альбуминов, так и за счет глобулинов. Имело место увеличение фракции а-глобулинов в IVA группе на 54,8% (р<0,001), в IVе - на 47,3% (р<0,001), в IV0 -на 69,5% (р<0,001), в IVr - на 100,6% (р<0,001) по сравнению с данными, полученными в III ipynne. Фракция ß-глобулинов на фоне лечения уменьшилась в группе IVB - на 14,7% (р<0,001), в IVr - на 27,0% (р<0,001) по сравнению с данными, полученными в группе сравнения. Содержание ß-глобулинов в IVA и IVе группах статистически не отличалось от III опытной группы. Содержание у-глобулинов в сыворотке крови животных IVA группы было выше, чем в группе сравнения на 7,3% (р<0,05), в IVB - на 10,6% (р<0,01), в IV1" - на 7,9% (р<0,02). В группе IVе концентрация у-глобулинов статистически не отличалась от III группы.

Таким образом, под действием исследуемых масел и препарата фосфоглив наблюдалась тенденция к восстановлению белоксинтезирующей функции печени.

ВЫВОДЫ

1. У крыс при создании токсического поражения печени, вызванного воздействием четыреххлористого углерода, наблюдается формирование синдромов цитолиза, внутрипеченочного холестаза, а также активация процессов перекисного окисления липидов, формирование вторичной дислипидемии, абсолютной гипопротеинемии, гипогликемии, диспротеинемии и дислипопротеидемии.

2. Проведенный анализ химического состава изучаемых липофильных продуктов растительного происхождения с известными и предполагаемыми гепатопротективными свойствами показал наличие в их составе значительного

количества moho- и полиненасыщенных жирных кислот, жиро- и водорастворимых витаминов.

3. Изучение особенностей влияния на интенсивность свободнорадикального окисления отобранных для исследования растительных масел и лекарственных препаратов в опытах in vitro показало наличие наиболее выраженных антиоксидантных свойств у льняного масла, масел черного и грецкого орехов, препарата фосфоглив.

4. Исследуемые масла черного и грецкого орехов, льна, а также препарат фосфоглив проявили выраженные гепатопротективные свойства, о чем свидетельствовало снижение активности ряда индикаторных (AJ1T, ACT) и экскреторных (у-ГТП, ЩФ) ферментов печени и концентрации билирубина в сыворотке крови крыс с экспериментальным токсическим гепатитом. Наиболее выраженный гепатопротективный эффект был обнаружен у препарата фосфоглив и льняного масла.

5. Применение исследуемых липофильных продуктов для лечения животных с моделью острого токсического поражения печени способствовало снижению интенсивности процессов липопероксидации, нормализации работы ферментов антирадикальной защиты, а также характеризовалось тенденцией к восстановлению нормального протекания липидного, белкового и углеводного обменов.

6. Использование льняного масла, масел черного и грецкого орехов, а также препарата фосфоглив для лечения токсического поражении является мощным и эффективным патогенетическим фактором в терапии данного заболевания. У подопытных животных наблюдалась выраженная гиперхолестеринемия, которая была связана с увеличением содержания ХС в проатерогенной фракции ЛПНП при одновременном снижении его содержания в антиатерогенной фракции ЛПВП, что свидетельствует о формировании у лабораторных животных вторичной дислипопротеидемии На типа по D.S.Fredrickson [1967].

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ВНЕДРЕНИЯ В ПРАКТИКУ

1. Определение в крови больных токсическим поражением печени интегральных биохимических показателей ЭХС/НЭХС, лактат/ПВК, каталаза/СОД предлагается внедрить и использовать в качестве ранних, достоверных диагностических и прогностических тестов для оценки тяжести метаболических нарушений и контроля лечения при остром токсическом поражении печени.

2. Для комплексного патогенетического лечения больных токсическим поражением печени целесообразно рекомендовать масла льна, черного и грецкого орехов.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Быков И.М., Ладутько A.A., Есауленко Е.Е., Бачко С.С., Маланьина Н.С. Влияние интоксикации четыреххлористым углеродом на липидный спектр сыворотки крови крыс // Научные труды II съезда физиологов СНГ,- Кишинев, Молдова, 2008. - С. 250.

2. Есауленко Е.Е., Быков И.М., Ладутько A.A., Бачко С.С., Маланьина Н.С., Щербакова Е.В. Влияние масла ореха черного (Juglands nigra L.) на анаболическую функцию печени в условиях экспериментального токсического гепатита // Конгресс «Человек и лекарство»: тезисы докладов.- Краснодар, 2008. - С. 33.

3. Быков И.М., Ладутько A.A., Есауленко Е.Е., Бачко С.С. Влияние масла ореха черного (Juglands nigra L.) на процессы восстановления липидного спектра сыворотки крови крыс при токсическом поражении печени // Юбилейный сборник научных трудов «Вопросы организации и образования в стоматологии». - Краснодар, 2009. - С. 85-88.

4. Есауленко Е.Е., Быков М.И., Ладутько A.A., Бачко С.С., Волкова Н.К., Еремина Т.В. Морфофункциональная характеристика гепатоцитов при экспериментальном токсическом гепатите // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2009. -T.XIX, № 1. Приложение №33. - С.75.

5. Ладутько A.A., Есауленко Е.Е., Быков М.И., Бачко С.С., Волкова Н.К., Еремина Т.В., Щербакова Е.В. Изучение эффективности масла ореха черного (Juglands nigra L.) в лечении экспериментального токсического гепатита // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2009. - T.XIX, № 1. Приложение №33. — С. 76.

6. Есауленко Е.Е., Ладутько A.A., Бачко С.С., Быков М.И., Быков И.М. Активность процессов перекисного окисления липидов и состояние ферментов антирадикальной защиты при экспериментальном токсическом гепатите // Аллергология и иммунология. - 2009. - Т. 10, № 1.-С.145.

7. Ладутько A.A., Есауленко Е.Е., Бачко С.С., Быков М.И., Быков И.М. Оценка антиоксидантных свойств масла ореха черного (Juglands nigra L.) с использованием модели токсического гепатита П Аллергология и иммунология. - 2009. - Т. 10, № 1. - С. 154.

8. Есауленко Е.Е., Быков М.И., Ладутько A.A., Бачко С.С. Динамика показателей липидного обмена у крыс с моделью токсического гепатита без лечения и на фоне приема масла ореха черного (Juglands nigra L.) // Аллергология и иммунология. - 2009. - Т. 10, № 2. -С.289.

9. Есауленко Е.Е., Быков М.И., Ладутько A.A., Бачко С.С., Хильчук М.А., Быков И.М., Щербакова Е.В. Оценка степени выраженности окислительного стресса при токсическом

поражении печени и методы его коррекции // Вестник новых медицинских технологий.- 2009,Т. XVI, №1,- С.261-262.

*10. Быков И.М., Ладутько A.A., Есауленко Е.Е., Быков М.И., Бачко С.С., Хильчук М.А. Оценка степени выраженности метаболических нарушений в крови при экспериментальном токсическом гепатите и разработка путей их коррекции // Кубанский научный медицинский вестник. -2009,-№ 3 (108). - С.21-26.

11. Ладутько A.A., Есауленко Е.Е., Быков И.М., Щербакова Е.В., Маланьина Н.С., Бачко С.С. Влияние масла ореха черного (Juglands nigra L.) на процессы восстановления липопротеинового спектра эритроцитов крыс при токсическом поражении печени // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2010. - Т.ХХ, № 1. Приложение №35. - С.95.

12. Бачко С.С., Есауленко Е.Е., Хильчук М.А., Быков М.И., Ладутько A.A. Особенности антиоксидантного действия масла ореха черного (Juglands nigra L.) в условиях токсического поражения печени // Научные труды III съезда физиологов СНГ. - Ялта, Украина, 2011. - С. 175-176.

*13. Есауленко Е.Е., Бачко С.С., Ладутько A.A., Быков М.И. Сравнительная биохимическая характеристика липидного спектра мембран эритроцитов при различных видах токсического поражения печени //Фундаментальные исследования. - 2011. - № 7. - С.54-56.

* - работа опубликована в журнале, включенном Высшей аттестационной комиссией при Министерстве образования и науки Российской Федерации в Перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий.

Список сокращений

АЛТ - аланинаминотрансфераза

ACT - аспартатаминотрансфераза

ЛП - липопротеиды

ЛПВП - липопротеиды высокой плотности

ЛПНП - липопротеиды низкой плотности

лпонп - липопротеиды очень низкой плотности

ЛХАТ - лецитинхолестеринацилтрансфераза

нэхс - неэтерифицированный холестерин

охс общий холестерин

пвк - пировиноградная кислота

пол - перекисное окисление липидов

сод - супероксиддисмутаза

ТАГ - триацилглицерины

ТЕК - тиобарбитуровая кислота

ТБК-РП - ТБК-реактивные продукты

ФЛ - фосфолипиды

хс - холестерин

ЩФ - щелочная фосфатаза

эхе - эфиры холестерина

Бачко Сергей Сергеевич

03.01.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 26.10.2011 г. Набор компьютерный. Гарнитура Times. Усл. п.л. 1,07

Тираж 100 экз. Отпечатано на копировально-множительной технике ИП Калашников, г. Краснодар, пр-т Чекистов,22. dusya95@yandex.ru

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Бачко, Сергей Сергеевич

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ТОКСИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ И МЕТОДЫ ЕГО МЕДИКАМЕНТОЗНОЙ КОРРЕКЦИИ.

1.1. Общие представления о механизмах гепатотоксического действия химических веществ.

1.2. Характеристика физико-химических свойств четыреххлористого углерода. Механизм его гепатотоксичности. Влияние CCU на протекание обменных процессов в организме.

1.3. Фармакотерапия заболеваний гепатобилиарной системы.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В

СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЯХ.

2.1. Характеристика экспериментальных животных.

2.2. Методика создания модели токсического поражения печени.

2.3. Патогистологическое исследование печени крыс.

2.4. Биохимические методы исследования.

2.4.1. Определение концентрации общего и прямого билирубина в сыворотке крови методом Ендрассика-Грофа.

2.4.2. Определение активности аланинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке крови унифицированным методом Райтмана-Френкеля.1.

2.4.3. Определение активности аспартатаминотрансферазы (ACT) в сыворотке крови унифицированным методом Райтмана-Френкеля.

2.4.4. Определение активности у-глутамилтранспептидазы (у-ГТП) в сыворотке крови унифицированным колориметрическим методом.

2.4.5. Определение активности щелочной фосфатазы (ЩФ) в сыворотке крови унифицированным методом.

2.4.6. Определение концентрации глюкозы в сыворотке крови энзиматическим колориметрическим методом.

2.4.7. Определение концентрации пировиноградной кислоты (ПВК) в сыворотке крови модифицированным колориметрическим методом Умбрайта.

2.4.8. Определение концентрации молочной кислоты в сыворотке крови энзиматическим колориметрическим методом.

2.4.9. Определение содержания общего белка в сыворотке крови.

2.4.10. Определение содержания альбумина в сыворотке крови.„.

2.4.11. Определение белковых фракций сыворотки крови турбидиметрическим методом Олла и Маккорда в модификации С.А. Карпюка.

2.4.12. Определение содержания общего холестерина (ОХС) в сыворотке крови энзиматическим колориметрическим методом.

2.4.13. Определение содержания холестерина липротеидов высокой плотности (ХС ЛПВП) в сыворотке крови энзиматическим колориметрическим методом.

2.4.14. Определение содержания триацилглицеринов в сыворотке крови энзиматическим колориметрическим методом.

2.4.15. Определение концентрации ХС ЛПОНП и ХС ЛПНП в сыворотке крови расчетным методом.

2.4.16. Определение содержания эфиров холестерина (ЭХС) и неэтерифицированного холестерина (НЭХС) в сыворотке крови.

2.4.17. Использование коэффициентов атерогенности для оценки патологии липидного обмена в условиях токсического поражения печени.

2.4.18. Определение содержания ТБК-реактивных продуктов (ТБК-РП) в сыворотке крови.

2.4.19. Определение активности супероксиддисмутазы

СОД) в гемолизате эритроцитов.

2.4.20. Определение активности каталазы в гемолизате эритроцитов.

2.4.21. Определение содержания гемоглобина (НЬ) в гемолизате эритроцитов гемиглобинцианидным методом.

2.5. Методика исследования липидов эритроцитов методом высокоэффективной тонкослойной хроматогафии (ВЭТСХ).

2.5.1. Экстракция липидов из эритроцитов.

2.5.2. Фракционирование общих липидов эритроцитов.

2.5.3. Фракционирование фосфолипидов эритроцитов.

2.6. Методы извлечения и изучения химических свойств липидов из продуктов растительного происхождения с предполагаемыми гепатопротективными свойствами.

2.6.1. Определение йодного числа в липидных экстрактах.

2.6.2. Определение массовой доли неомыляемых липидов в экстрактах.

2.6.3. Определение жирнокислотного состава липидных экстрактов методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ).

2.7. Модельные системы перекисного окисления липидов, применяемые для оценки антиоксидантной активности исследуемых продуктов растительного происхождения в опытах in vitro.

2.7.1. Приготовление липосом.

2.7.2. Определение содержания ТБК-РП в суспензии липосом.

2.7.3. Оценка эффективности антиоксидантного действия исследуемых продуктов растительного происхождения.

2.7.4. Исследованные в модельных системах in vitro продукты растительного происхождения.

2.8. Статистические методы исследования.

3. БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ ФОРМИРОВАНИИ МОДЕЛИ ТОКСИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ, ВЫЗВАННОГО ВВЕДЕНИЕМ ЧЕТЫРЕХХЛОРИСТОГО УГЛЕРОДА.

3.1. Маркеры нарушений функции печени и активности патологического процесса.

3.2. Морфологические изменения паренхимы печени, возникающие при введении лабораторным животным тетрахлорметана.

3.3. Интенсивность протекания процессов свободнорадикального окисления и состояние ферментов антирадикальной защиты крови при' моделировании острого токсического поражения печени, вызванного введением четыреххлористого углерода.69!

3.4. Особенности изменения параметров липидного обмена у лабораторных животных при моделировании острого токсического поражения печени, вызванного четыреххлористым углеродом.

3.5. Особенности изменения параметров углеводного и белкового обменов у лабораторных животных при моделировании острого токсического поражения печени, вызванного четыреххлористым углеродом.

4. АНАЛИЗ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА ПРОДУКТОВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ С ПРЕДПОЛАГАЕМЫМИ ГЕПАТОПРОТЕКТИВНЫМИ СВОЙСТВАМИ.

5. ИЗУЧЕНИЕ АНТИОКСИДАНТНЫХ СВОЙСТВ ИССЛЕДУЕМЫХ ПРОДУКТОВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ В ОПЫТАХ

IN VITRO.

6. КОРРЕКЦИЯ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ, ВОЗНИКАЮЩИХ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ТОКСИЧЕСКОМ ПОРАЖЕНИИ ПЕЧЕНИ, С ПОМОЩЬЮ РАСТИТЕЛЬНЫХ МАСЕЛ И ПРЕПАРАТА ФОСФОГЛИВ.

6.1. Выраженность гепатопротекгивных свойств растительных масел и лекарственного препарата фосфоглив в условиях острого токсического поражения печени.

6.2. Влияние некоторых растительных масел и лекарственного препарата фосфоглив на интенсивность протекания процессов свободнорадикального окисления и состояние ферментов антирадикальной защиты крови при моделировании острого токсического поражения печени.

6.3. Влияние некоторых растительных масел и лекарственного препарата фосфоглив на липидный обмен крыс в условиях острого токсического поражения печени.

6.4. Влияние некоторых растительных масел и лекарственного препарата фосфоглив на параметры углеводного и белкового обменов крыс с моделью токсического поражения печени.

Введение Диссертация по биологии, на тему "СРАВНИТЕЛЬНАЯ БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТАБОЛИЧЕСКИХ СВОЙСТВ РАЗЛИЧНЫХ ГЕПАТОПРОТЕКТОРОВ В УСЛОВИЯХ ТОКСИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ (экспериментальное исследование)"

Актуальность исследования. Печень является барьером на пути всех чужеродных веществ, попадающих в организм человека [А.Е.Вермель, 2005]. Изменение активности печеночных ферментов (вследствие наследственных энзимопатий, воздействия неблагоприятных экологических факторов и др.) ведет к снижению детоксикационной функции печени. На фоне этого чужеродные вещества могут оказывать значительное воздействие на печень, приводящее к формированию ее токсического поражения [РХ)екепге, ХНеппоп, У.Сапуа, 2004; З.М.БеКап, М.О.Б\уат, Б.ДЛгЬапзЫ, 2004; А.МХИ Bisceglie & а1., 2007; Н.И.Калетина, 2008; В.С.Камышников, 2009].

Неблагоприятная экологическая обстановка, опасность химического загрязнения окружающей среды проявляется в прямом и опосредованном токсическом действии на живые организмы значительным количеством веществ техногенного происхождения. Техногенные загрязняющие вещества приводят к возникновению химических реакций в объектах окружающей среды и изменению биохимических реакций, протекающих в организме человека, что приводит к развитию разнообразных патологических процессов [Я.В. Зайцева, О.В.Долгих, Х.В.Нурисламова, 2004; В.Н.Зиновьева, А.А.Спасов, 2005; П.Ф.Забродский и соавт., 2006; 2008; П.Е.Шкодич и соавт., 2006].

В связи с этим, проблема изучения молекулярных механизмов регуляции функциональной активности печени и ее метаболической адаптации к воздействию токсического агента остается важным направлением современной экспериментальной и клинической гепатологии [М.Э. Шубина, О.И. Яхонтова, 2008].

Лечение поражений печени средствами, обладающими антиоксидантными и гиполипидемическими свойствами, широко исследуется в настоящее время [М.М.Ибрагимова и соавт., 2003; 8.Вп11апй,

2004; ХВгок, Ь.ОЬиа, СвШи^ 2005; Н.В.Печерская и соавт., 2006; В.И.Пилипенко и соавт., 2008; В.М.Покровский, О.Г.Компаниец, 2008; Л.В.Кравченко и соавт., 2008]. Особое место в профилактике и лечении гепатитов занимает использование фосфолипидных концентратов и растительных масел, обогащенных ненасыщенными жирными кислотами и жирорастворимыми витаминами [Р.Бте^ 2002; Н.Н.Прозоровская и соавт., 2003; Э.Н.Трушина, О.К.Мустафина, М.Н.Волгарев, 2003; П^Вготошпи, Ь.З.Бгсгерашак, К.БоЬЫп8, 2004; Д.М.Собчак, О.В.Корочкина, 2005; Л.Б.Стрелкова и соавт., 2008; Е.А.Сухосырова, З.К.Никитина, М.Б.Яковлева, 2008; И.В.Шилова и соавт., 2008; В.В.Амосов и соавт., 2009].

Наиболее широкое распространение среди препаратов с гепатопротективными свойствами получили эссенциальные фосфолипиды (ЭФЛ). Механизм их защитного действия связан с восстановлением клеточных мембран гепатоцитов, которые на 2/3 состоят из фосфолипидов. Помимо структурной функции, ЭФЛ участвуют в процессах молекулярного транспорта, делении и дифференцировке клетки, стимулируют активность различных ферментных систем, обладают антиоксидантным действием, замедляют синтез коллагена и повышают активность коллагеназы, что лежит в основе их антифибротического эффекта [В.Д.Белоногова и соавт., 2003; Ю.Л.Шевченко, И.Н.Денисов, Э.Г.Улумбеков, 2003; С.В.Ковалева и соавт., 2003; Н.П.Пальмина и соавт., 2004; С.О.Ключников, 2005; К.ОЬ, 2005; О.И.Киселев и соавт., 2006; Н.И.Гейвандова и соавт., 2008; С.С.Соколовская и соавт., 2008].

Особый интерес представляют гепатопротекторы, получаемые на основе растительного сырья и морских организмов, многие из которых богаты полиненасыщенными жирными кислотами (ПНЖК), которые необходимы для поддержания жидкостности клеточных мембран, участвуют в адаптации организма к окружающей среде, являются эссенциальными факторами пищи животных и человека, обладают разнообразной биологической активностью [J.Christensen, H.Skou, L.C.Fog, 2001; R.De Caterina, G.Basta, 2001; Albert G., Campos H., 2002; F.B.Hu, L.Bronner, W.C.Willett, 2002; P.C.Calder, 2003; W.W.Koo, 2003; W.Harris, C.von Schacky, 2004; О.К.Нетребенко, 2005, 2008; О.И.Кириллов и соавт., 2006; В.С.Моисеев, 2006, 2008; S.H.Caldwell, C.K.Argo, A.M.Al-Osaimi, 2006; Д.В.Аксенов и соавт., 2007; Е.А.Рожкова и соавт., 2007; Е.А.Абизов, О.Н.Толкачев, 2008; Е.С.Киселева, 2008; А.В.Самойлова и соавт., 2008; В.В.Цуканов и соавт., 2008].

В литературе описаны механизмы действия ПНЖК семейства ю-3, содержащихся в рыбьем жире (эйкозапентаеновая, докозапентаеновая, t докозагексаеновая кислоты), на липидный обмен человека и животных. Большинство авторов пришли к выводу, что регулярный прием рыбьего жира вызывает торможение синтеза триацилглицеринов (ТАГ) в печени, активацию окисления жирных кислот в тканях, снижение уровня холестерина, нормализацию обмена липопротеиновых частиц крови, а < также торможение образования свободных радикалов и активных форм кислорода [C.Camma, S.Bruno, F.Schepis, 2002; Alberti A., Benvegnu L., 2003; A.Alberti, N.Clumeek, S.Collins, 2005; Н.Д.Бунятян и соавт., 2004; В.А.Исаев и соавт., 2004; В.А.Куликов, А.А.Чиркин, 2004; А.Е.Вермель, 2005; Е.Е.Краснова и соавт., 2005; И.Я.Конь и соавт., 2006а, б; В.И.Кузнецов, В.Р.Моррисон, 2006; Т.ПНовгородцева и соавт., 2006; Т.А.Ажунова, С.М.Николаев, В.Г.Банзаракшеев, 2007; С.В.Оковитый и соавт., 2007; Н.В.Перова и соавт., 2007; Е.А.Абизов, О.Н.Толкачев, 2008; Ю.В.Перевалова, П.И.Цапок, 2008].

В современной литературе обсуждаются эффекты как широко известных препаратов природного происхождения на основе фосфолипидов и ТАГ (эссенциале, фосфоглив, эссливер, омакор), так и менее известных (льняное масло, пальмовое масло), содержащих в своем составе ПНЖК, жирорастворимые витамины и другие соединения, нормализующие метаболические процессы в печени и восстанавливающие целостность мембран гепатоциатов [М.М.Джанашия и соавт., 2001; Л.А.Гойкова и соавт., 2004; С.Н.Жаров и соавт., 2005, 2006, 2007а, б; С.В.Оковитый, С.Н.Шуленин, А.В.Смирнов, 2005; С.В.Оковитый и соавт., 2006; Н.Б.Демина и соавт., 2007; Ж.Б.Дашинамжилов и соавт., 2008; С.Н.Жаров, Б.ИСанин, 2009].

Однако, как известные соединения, широко применяющиеся в настоящее время в медицине, так и менее распространенные на российском рынке препараты, изучены не в полной мере. В этой связи представляются актуальным исследование по уточнению биохимических механизмов гепатопротекгивного действия известных лекарственных средств, а также обнаружению и исследованию механизма действия новых гепатопротекторов.

В связи с поставленной целью необходимо решить следующие задачи:

1. Дать сравнительную биохимическую характеристику выраженности метаболических нарушений, возникающих у экспериментальных животных (крыс), при создании токсического поражения печени, вызванного воздействием четыреххлористого углерода.

2. Провести сравнительное изучение химического состава и физико-химических свойств различных липофильных продуктов растительного происхождения с известными и предполагаемыми гепатопротективными свойствами, используя современные методы количественного анализа.

3. Оценить в искусственно созданных модельных тест-системах in vitro антиоксидантную и антирадикальную активность изучаемых продуктов.

4. Изучить выраженность гепатопротективных свойств исследуемых растительных продуктов у экспериментальных животных, подвергнутых интоксикации четыреххлористым углеродом.

5. Оценить состояние ферментов антирадикальной защиты, активность процессов перекисного окисления липидов, направленность изменений липидного, углеводного и белкового спектров сыворотки крови при экспериментальном токсическом гепатите на фоне приема тестируемых растительных продуктов.

6. С учетом полученных данных дать рекомендации по эффективному использованию различных продуктов растительного происхождения, обладающих гепатопротективными свойствами, для лечения заболеваний печени. j

Основные положения, выносимые на защиту

1. Введение в организм лабораторных животных (крыс) четыреххлористого углерода способствует выраженному повреждению мембран гепатоцитов, активации процессов липопероксидации, дисбалансу в работе ферментативного звена антиоксидантной системы организма, нарушению метаболизма липидов, белков, углеводов.

2. Первичный скрининг липофильных продуктов растительного происхождения, основанный на анализе их химического состава и антирадикальной активности в опытах in vitro, является эффективным инструментом для поиска новых гепатопротекторов.

3. Использование льняного масла, масел черного и грецкого орехов, а также препарата фосфоглив для лечения токсического поражения печени способствует снижению интенсивности процессов липопероксидации, нормализации работы ферментов антирадикальной защиты, восстанавливает нарушения липидного, белкового и углеводного обменов, что позволяет рекомендавать исследуемые продукты для лечения токсического гепатита.

Апробация результатов исследования. Материалы диссертации были представлены и обсуждались на П съезде физиологов СНГ (Кишенев, Молдова, 2008); 15 Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Краснодар, 2008); Научно-практической конференции стоматологических кафедр КГМУ «Вопросы организации и образования в стоматологии» (Краснодар, 2009); на Ш съезде физиологов СНГ (Ялта, Украина, 2011).

Сведения о практическом использовании результатов исследования

На основании полученных данных предложены практические рекомендации по использованию результатов исследования в качестве ранних, достоверных диагностических и прогностических тестов для оценки тяжести метаболических нарушений и контроля лечения при остром токсическом поражении печени, а также использованию масел льна, черного и грецкого орехов для комплексного патогенетического лечения больных токсическим поражением печени на кафедре клинической иммунологии, аллергологии и лабораторной диагностики ФПК и ППС ГБОУ ВПО КубГМУ Минздравсоцразвития России (350063, г.Краснодар, ул.Седина, 4); на кафедре фармации ГБОУ ВПО КубГМУ Минздравсоцразвития России (350063, г.Краснодар, ул.Седина, 4); в ГУЗ «Клинический госпиталь для ветеранов войн» (350063, г.Краснодар, ул. Кирова, 9).

Материалы диссертации используются в учебном процессе при чтении лекций, на теоретических и практических занятиях при обучении студентов, клинических интернов, ординаторов и аспирантов на кафедрах ГБОУ ВПО КубГМУ Минздравсоцразвития России: фундаментальной и клинической биохимии, общей и клинической патофизиологии, клинической иммунологии, аллергологии и лабораторной диагностики ФПК и ППС, фармации. По результатам исследования опубликовано 13 печатных работ, из них 2 в научных изданиях, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией при Министерстве образования и науки Российской Федерации.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Бачко, Сергей Сергеевич

ВЫВОДЫ

1. У крыс, при создании токсического поражения печени, вызванного воздействием четыреххлористого углерода, наблюдается формирование синдромов цитолиза, внутрипеченочного холестаза, а также активация процессов перекисного окисления липидов, формировие вторичной дислипидемии, абсолютной гипопротеинемии, гипогликемии, диспротеинемии и дислипопротеидемии.

2. Проведенный анализ химического состава изучаемых липофильных продуктов растительного происхождения, с известными и предполагаемыми гепатопротективными свойствами, показал наличие в их составе значительного количества моно- и полиненасыщенных жирных кислот, жиро- и водорастворимых витаминов.

3. Изучение особенностей влияния на интенсивность свободнорадикального окисления отобранных для исследования растительных масел и лекарственных препаратов в опытах in vitro показало наличие наиболее выраженных антиоксидантных свойств у -льняного масла, масел черного и грецкого орехов, препарата фосфоглив.

4. Исследуемые масла черного и грецкого орехов, льна, а также ; препарат фосфоглив проявили выраженные гепатопротективные свойства, регистрируемые на основании снижения активности ряда индикаторных (AJIT, ACT) и экскреторных (у-ГТП, ЩФ) ферментов печени, а также снижения концентрации билирубина в сыворотке крови крыс. Наиболее выраженный гепатопротективный эффект был обнаружен у препарата фосфоглив и льняного масла.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В ходе проведенного исследования у лабораторных животных после введения четыреххлористого углерода были обнаружены значительные морфо-функциональные изменения в печени и крови. Выраженная гиперферментемия свидетельствовала о повреждении гепатоцитов и проникновении значительного количества ферментов в кровь. Преимущественное увеличение активности AJIT - цитоплазмотического фермента, в отличие от ACT, имеющего митохондриально-цитоплазматическую локализацию, свидетельствовало о повреждении внешних мембран гепатоцитов под действием CCI4. Увеличение активности у-ГТП и ЩФ в крови лабораторных животных также указывало на массивный некроз гепатоцитов, возникающий под воздействием на организм крыс четыреххлористого углерода. Однако повышение концентрации билирубина, преимущественно за счет его прямой фракции, на фоне высокой активности у-ГТП и ЩФ указывала не только на формирование синдрома цитолиза у подопытных животных, но и на развитие синдрома внутрипеченочного холестаза, а также позволяла диагностировать паренхиматозный тип желтухи.

Одним из наиболее вероятных механизмов, объясняющих подобные биохимические изменения в крови подопытных животных, является активация процессов перекисного окисления липидов. Это связано с тем, что свободные радикалы, образующиеся из CCU, способствуют повреждению мембран клеток, модуляции апоптоза, развитию окислительного стресса. Согласно полученным данным, при интоксикации тетрахлорметаном, в крови животных наблюдалась активация процессов ПОЛ, регистрируемая по нарастанию концентрации вторичных продуктов липопероксидации, реагирующих с ТБК. Обнаруженное при этом снижение активности СОД и каталазы в крови животных с моделью острого токсического поражения печени, по-видимому, связано с окислительной модификацией функциональных групп ферментов, возникающей под действием избыточного количества АФК и свободных радикалов. Образующиеся при этом конформационные перестройки молекулы фермента, диссоциация белков на субъединицы, а также увеличение скорости их деградации может быть причиной наблюдаемого нами явления.

Изучение параметров липидного обмена в крови лабораторных животных, подвергнутых интоксикации СО,, обнаружили наличие у них выраженной гиперхолестеринемии, которая была связана с увеличением содержания ХС в проатерогенной фракции ЛПНП, при одновременном снижении его содержания в антиатерогенной фракции ЛПВП. На основании полученных биохимических данных у крыс была диагностирована вторичная дислипопротеидемия Па типа по В.Б.РгесккЖзоп [1967]. Вследствие того, что основная масса эфиров ХС образуется в крови под действием фермента ЛХАТ, то по соотношению " ,, ь >

ЭХС/НЭХС можно было судить об активности данного фермента. Низкая ч > активность ЛХАТ обуславливает накопление НЭХС в ЛП частицах крови, 11 изменяя их физико-химические свойства. Так, НЭХС, накапливаясь в ЛПВП, значительно снижает их холестеринакцепторные свойства, а также нарушает обмен ЭХС между ЛП частицами, вследствие чего в комплексе ЛПНП+ЛПОНП возрастает относительное содержание НЭХС [Л.Н.Лесникова, 2005]. Данные процессы нарушают «обратный» транспорт ХС, тем самым, задерживая его в организме животного. Снижение концентрации ТАГ в сыворотке крови подопытных животных, по-видимому, связан с блокированием синтеза эндогенных ТАГ в печени, возникающий при введении токсина в организм.

В связи со сложностью исследования липидного спектра мембран внутренних органов, в качестве диагностического эквивалента использовались эритроциты, так как изменения их липидного спектра коррелируют с изменениями, происходящими в мембранах клеток паренхиматозных органов [В.С.Камышников, 2009].

В эритроцитах крыс с моделью острого токсического поражения печени, вызванном введением ССи наблюдались процессы потери ФЛ, увеличения содержания НЭХС, замене ФХ на СМ, что характеризовало усиление жесткости мембраны, уменьшение ее проницаемости, повышение микровязкости, нарушение процесса микроциркуляции эритроцитов, гипоксии, повреждению эндотелия сосудов.

Обнаруженная в ходе проведенного исследования гипогликемия у лабораторных животных, подвергнутых интоксикации тетрахлорметаном, по-видимому, связана с нарушением протекания процессов гликогенолиза и гликонеогеназа в печени, а именно с торможением гликонеогенеза. Снижение концентрации молочной и пировиноградной кислот (продуктов, преимущественно образующихся из глюкозы) в сыворотки крови , животных опытных групп отражали общую тенденцию к гипогликемии у , крыс при интоксикации СС14. Увеличение значения коэффициента , ; лактат/ПВК во II и III группах свидетельствовало о преобладании в тканях анаэробного гликолиза над аэробным и характеризовало степень тканевой гипоксии.

Таким образом, при токсическим воздействии тетрахлорметана на печень крыс, у животных возникала абсолютная гипопротеинемия, связанная с непосредственным повреждением гепатоцитов свободными радикалами. Увеличение содержания рассматриваемых метаболитов в крови крыс в динамике, по-видимому, следует рассматривать как положительный прогностический признак, направленный на восстановление белоксинтезирующей функции печени.

Обнаруженные биохимические изменения, касающиеся соотношения отдельных белковых фракций сыворотки крови, позволяли диагностировать у подопытных животных диспротеинемию. Снижение фракций а- и у-глобулинов, по-видимому, отражало общую тенденцию к ингибированию синтеза белков печенью под действием CCI4. Относительное возрастание фракции р-глобулинов, по нашему мнению, связано с описанным выше нарушением катаболизма Л11Ш1 ф-липопротеидов), их задержки в кровеносном русле в следствие окисления и снижения аффинности ano Вюо к клеточным рецепторам.

Как показали наши исследования, острая интоксикация CCI4 приводила к значительному изменению структуры и функции клеточных мембран гепатоцитов вследствие чего нарушаелась как синтетическая функция печени, так и ее способность к обезвреживанию чужеродных веществ, что требовало проведения метаболической коррекции. Рядом экспериментальных и клинических работ было показано, что количество и состав липидов крови, а также клеточных Мембран определяется количеством и качеством принятых с пищей жирных кислот, входящих в состав продуктов растительного и животного происхождения.

Проведенный анализ жирнокислотного состава изучаемых масел показал, что масла кукурузы и подсолнечника из насыщенных жирных кислот содержат пальмитиновую и стеариновую кислоты. Причем пальмитиновой кислоты больше, чем стеариновой. Из ненасыщенных жирных кислот в данных маслах были обнаружены в наибольшем количестве олеиновая и линолевая кислоты. В среднем содержание линолевой кислоты было в 2 раза больше, чем олеиновой Оливковое масло содержало приемущественно олеиновую жирную кислоту (до 83%). Другие жирные кислоты ненасыщенные - линолевая, линоленовая, пальмитолеиновая и насыщенные - пальмитиновая, стеариновая, арахиновая были представлены в незначительных количествах. Особенностью жирнокислотного состава льняного масла явилось наличие большого количества ю-6 жирных кислот. В некоторых из этих масел содержание триеновой а-линоленовой жирной кислоты достигало 57,5%.

Масло льна содержало не более 10% насыщенных жирных кислот, из которых в среднем 5,5% приходится на пальмитиновую и 4,5% - на стеариновую кислоты. Вместе с тем уровень олеиновой кислоты изменялся от 21,7 до 28,4%, а линолевой - от 12,2 до 20,7%. Таким образом, высокая степень ненасыщенности льняного масла определена тем, что более 70% жирных кислот, входящие в его состав имеют от одной до трех двойных связей.

Особый интерес представлял анализ жирнокислотного состава ранее практически не изученных масел черного и грецкого орехов. К особенностям их жирнокислотного состава следует отнести высокое содержание линолевой кислоты (более 60%) как у подсолнечного масла. Масло черного ореха, по сравнению с маслом грецкого ореха, содержало больше олеиновой жирной кислоты. В отличие от оливкового масла орехи содержали в значительно большем количестве полиненасыщенные линолевую и линоленовую кислоты, и значительно уступали в доле мононенасыщенной олеиновой кислоты. По содержанию линолевой жирной кислоты масла черного и грецкого орехов также превосходили масла подсолнечника и кукурузы.

Используемые в данном исследовании фосфолипидные концентраты широко распространены на российском рынке. Основу их составляют фосфолипиды (преимущественно фосфатидилхолин), получаемые из сои. Их жирнокислотный состав представлен полиненасыщенными жирными кислотами, в основном линолевой (около 70%) кислотой Согласно приведенным данным, препараты Эссенциале форте Н и Эссливер форте имели одинаковый химический состав и кроме фосфолипидов содержали комплекс водо- и жирорастворимых витаминов. Содержание фосфолипидов в составе препарата Фосфоглив было значительно ниже, чем в других фосфолипидных концентратах, однако в данное лекарственное средство входила глицирризиновая кислота, обладающая противовоспалительными свойствами, а также за счет детергентного действия обеспечивала эмульгирование фасфатидилхолина в кишечнике, что усиливало его переваривание и всасывание.

Высокая антиоксидантная активность исследуемых продуктов на начальном этапе ПОЛ согласуется с известными данными о механизме антиоксидантного действия химических соединений, содержащих в своем составе ненасыщенные связи (фосфолипиды, триглицериды, жирорастворимые витамины и др.). Имея в своем составе реакционноспособные двойные связи, они перехватывают свободные радикалы - инициаторы ПОЛ, конкурируя за них с молекулами липидов и тем самым защищая последние от интенсивного окисления. Однако такая ситуация сохраняется лишь до тех пор, пока содержание антиоксиданта описанного типа достаточно для перехвата основного количества образующихся в ходе СРО радикалов. После истощения пула антиоксидантов с ненасыщенными связями скорость СРО существенно возрастает. Кроме того, при определенных условиях продукты окисления самих антиоксидантов этой группы могут вовлекаться в дальнейшее развитие реакций СРО, что определяет наличие у антиоксидантов с ненасыщенными связями прооксидантных свойств. По-видимому, отсутствие у растительных масел и фосфолипидных концентратов прооксидантных свойств было обусловлено наличием в их составе различных компонентов, обладающих антиоксидантными свойствами.

В целом, по величине антиоксидантного эффекта исследуемые продукты можно расположить следующим образом: ретинола ацетат < оливковое масло < кукурузное масло < подсолнечное масло < эссливер форте < эссенциале форте < масло грецкого ореха < фосфоглив < масло черного ореха < льняное масло. В связи с этим для дальнейших исследований были отобраны четыре наиболее перспективных продукта (льняное масло, масло черного и грецкого орехов, фосфоглив), обладающие наиболее выраженными антиоксидантными свойствами.

Согласно проведенному нами исследованию, на фоне лечебного введения экспериментальным животным изучаемых растительных продуктов, наблюдалась общая тенденция к уменьшению активности патологического процесса в печени. Все исследуемые масла (черного и грецкого орехов, льна), а также препарат фосфоглив проявили выраженные гепатопротективные свойства, регистрируемые на основании снижения активности ряда индикаторных (AJIT, ACT) и экскреторных (у-ГТП, ЩФ) ферментов печени, а также снижения концентрации билирубина в J * сыворотке крови крыс. Использование указанных растительных продуктов,; способствовало уменьшению выраженности цитолитического, холестатического и токсического синдромов у лабораторных животных. По степени выраженности гепатопротективных свойств растительные продукты можно расположить в следующем порядке: фосфоглив > льняное масло > масло черного ореха = масло грецкого ореха.

При введении изучаемых продуктов растительного происхождения в организм животных с моделью острого токсического поражения печени, было обнаружено снижение содержания ТБК-РП в плазме крови, а также выраженная тенденция к нормализации работы ферментов первой и второй линий антирадикальной защиты, что отражало процесс инактивации процессов ПОЛ в периферических тканях и органах. Наиболее выражен этот эффект был в группе 1УГ.

Липидный спектр крови крыс с моделью токсического поражения печени под воздействием растительных масел и лекарственного препарата фосфоглив также имел тенденцию к восстановлению. Уровень ТАГ повышался, а содержание ОХС снижалось в сыворотке крови крыс всех опытных группах по сравнению с группой сравнения. При анализе распределения ХС между ЛП частицами отмечалось снижение его содержания в проатерогенной фракции Л11Ш1. В эритроцитах крыс 1УА, 1УБ, IVе, 1Уг групп под действием растительных масел и лекарственного препарата фосфоглив происходило насыщение эритроцитов ФЛ, замещение СМ на ФХ, и ФС на ФЭА, уменьшение доли ЛФХ и ЛФЭА. Что характеризует процессы улучшения их реологических свойств, увеличение текучести мембраны, нормализации ее проницаемости. Наиболее выражены описанные изменения были в группе крыс получавших льняное масло (1УГ группа).

Под действием изучаемых растительных масел и препарата фосфоглив, наблюдалась тенденция к нормализации параметров углеводного и белкового обменов у лабораторных животных с моделью токсического поражения печени. Это выражалось в увеличении концентрации глюкозы в сыворотке крови, а также преобладании аэробного пути окисления глюкозы над анаэробным, о чем свидетельствовало увеличении доли ПВК и снижение коэффициента лакгат/ПВК, увеличение содержания общего белка в сыворотке крови как за счет фракции альбуминов, так и за счет глобулинов. Изучение содержания отдельных фракций глобулинов в сыворотке крови животных опытных групп на фоне терапии гепатопротекторами показало увеличение фракции а-глобулинов и у-глобулинов, снижения фракция Р-глобулинов на фоне лечения исследуемыми продуктами. Наиболее выражены обнаруженные г» изменения были зарегистрированы в группе IV (льняное масло).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Бачко, Сергей Сергеевич, Краснодар

1. 2000 болезней от А до Я / под ред. Ю.Л. Шевченко, И.Н. Денисова, Э.Г. Улумбекова.- М.: ГЭОТАР-Медиа, 2003- 1600с.

2. Абаев Ю.К., Аверин В.И. Абсцессы печени у новорожденных // Педиатрия.- 2004.- № 1.- С. 46-49.

3. Абдуллаев С.М. Асцит и его осложнения у больных циррозом печени: от патогенеза к эффективному лечению // Клиническая фармакология и терапия 2007.- Т.16, №1 - С.16-21.

4. Абдурахманов Д.Т. Алкогольная болезнь печени // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии 2007- Т. 17, № 6 - С.4-10.

5. Абдурахманов Д.Т. Нуклеозидные/нуклеотидные аналоги в лечении хронического гепатита В: плюсы и минусы, перспективы // Клиническая фармакология и терапия 2005- Т. 14, №1- С.24-30.

6. Абдурахманов Д.Т. Противовирусная терапия хронического , гепатита В // Клиническая фармакология и терапия 2004- Т. 13, №1-С.13-18.

7. Абдурахманов Д.Т., Некрасова Т.П. Клинико-морфологическая характеристика НВеАё-негативной HBV-инфекции с нормальным уровнем аминотрансфераз // Клиническая медицина.- 2003,- №5.- С.43-46.

8. Абизов Е.А., Толкачев О.Н. Жирнокислотный состав липидной фракции плодов лоха многоцветкового (Elaeganus multiflora thumb.) // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии-2008.- №3.- С. 7-9.

9. Авдеева М.Г., Бондаренко И.Н., Передирий И.Р. Клиническое значение активности синтазы оксида азота у больных лептоспирозом // Клиническая лабораторная диагностика 2008 - №1.- С.40-43.

10. Ажунова Т.А., Николаев С.М., Банзаракшеев В.Г. Гиполипидемическое и сахароснижающее действие комплексногорастительного средства // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии.- 2007.- №2- С.27-29.

11. Акбашева O.E., Загромова Т.А., Серебров В.Ю. Показатели протеолиза и фенотипы ах-протеиназного ингибитора при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии 2007.- №2 - С.41-44.

12. Акимкин В.Г., Ледин Е.В., Скворцов C.B., Рукавицин O.A. Характеристика инфицированности вирусом гепатита В пациентов с заболеваниями системы крови // Терапевтический архив 2007.- №11.- С. 28-31.

13. Аксенов Д.В., Каплун В.В., Тертов В.В., Собенин И.А., Орехов А.Н. Влияние экстрактов растительного происхождения на активность транс-сиалидазы плазмы крови человека // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2007.- Т.143, №1.- С.52-56.

14. Аксенова Т.А., Пархоменко Ю.В., Горбунов В.В. Перекисное окисление липидов при гипертонической болезни в сочетании с хронической обструктивной болезнью легких // Клиническая лабораторная диагностика-2008.- №8.- С.17-19.

15. Алматов К.Т., Кулмаматова Н.Э., Клемешева Л.С., Ширинова И.А., Алматов Ш.К. Влияние бензонала на обмен фосфолипидов митохондрии сердца крыс при гипертермии // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии.- 2004.- №1.- С.47-50.

16. Аль-Названи Н., Фельдман Н.Б., Луценко C.B., Дигтярь A.B., Макаров В.А., Гороховец Н.В., Фаттахова Г.В., Захарова И.В., Киселев

17. С.М., Северин С.Е. Сравнительное исследование возможностей использования белковых векторов в составе противоопухолевых препаратов // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии.- 2004.- №3.- С.6-10.

18. Аляутдин Р.Н., Романов Б.К., Гусейнов М.Д., Лопатин П.В., Зилфикаров И.Н. Экспериментальная скрининговая оценка стресспротекторного действия фитопрепаратов // Российский медицинский журнал 2008.- №3.- С.29-32.

19. Амосов В.В., Лапин А.А., Марков М.В., Зеленков В.Н. Антиоксидантная емкость водных и водно-спиртовых экстрактов лабазника камчатского (Filipéndula kamtschatica maxim.) // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии.- 2009 №1-С.25-26.

20. Арямкина О.Л. Клинические аспекты хронических вирусных гепатитов В,С и В+С // Российский медицинский журнал.- 2006.- №4-С.8-10.

21. Арямкина О.Л. Осложнения и исходы хронического гепатита и цирроза печени вирусного генеза // Российский медицинский журнал-2005.- №5 С.13-14.

22. Багирова B.JL, Сатаева Л.Г. Разработка инновационных препаратов основа повышения качества лекарственного обеспечения в республике Казахстан // Российский медицинский журнал- 2008.- №3.-С.ЗЗ.

23. Бакаева З.В., Самонина Г.Е., Чудаков Л.И. Влияние глипролинов на базальное и стимулированное выделение кислоты и бикарбонатов в желудке крыс // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии.- 2004.- №2.- С.30-34.

24. Барбакадзе Б.Б., Пипия Г.В., Камкамидзе Г.К. Лечение пегилированным интерфероном а больных хроническим гепатитом С // Терапевтический архив. - 2005. - Т.77, №2. С.73 - 75.

25. Белобородова Э.И., Гайсаев P.O., Саратиков A.C. Влияние фитогепатопротектора Максара на морфофункциональное состояние печени у больных хроническим гепатитом // Клиническая медицина-2004.- №12 С.39-42.

26. Белякин С.А., Бобров А.Н., Плюснин С.В.тРоль биопсии печени в диагностике алкогольного гепатита // Воен.-мед. журн. 2011. -№5.-С. 68-69.

27. Бобров А.Н., Белякин С.А., Плюснин C.B. Особенности фиброза печени при алкогольной болезни // Военно-медицинский журнал. -2011.-№6. -С. 78-79.

28. Бобров А.Н., Белякин С.А., Плюснин C.B. Этиологическая структура циррозов печени по результатам пятнадцатилетнего наблюдения //Вестн. Рос. воен.-мед. акад. -2011. -№ 1 (33). С. 76-80.

29. Богдарин Ю.А., Козин В.В., Менькова И.Э., Широкова Н.Ю. Поглощение жирных кислот сердцем крыс при аритмии // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.- 2008,- № 4.- С. 14-16.

30. Боев В.М., Красиков С.И., Лейзерман В.Г., Бугрова О.В., Шарапова Я.В., Свистунова Н.В. Влияние окислительного стресса на распространенность гиперхолестеринемий в условиях промышленного города // Гигиена и санитария.- 2007.- №1- С.21-25.

31. Борисов Ю.А., Спиридонов В.Н., Суглобова Е.Д. Резистентность эритроцитарных мембран: механизмы, тесты, оценка (обзор литературы) // Клиническая лабораторная диагностика- 2007-№12.- С.36-140.

32. Бунятян Н.Д., Власов А.П., Литвиненко A.B., Меркушкина И.В., Григорьева Т.Н., Тюрина Е.П., Дрожжина К.А. Фармакокоррекция липидного обмена при токсическом поражении печени // Бюллетень экспериментальной биологии медицины,- 2004.- №7.- С.94.

33. Вермель А.Е. Применение Шз.житрных кислот (рыбий жир) в клинической практике // Клиническая медицина 2005.- №10 - С.51-57.

34. Викторова Е.В., Кулакова С.Н., Гаппаров М.М. Комбинированные жировые продукты: подходы к оценке качества // Вопросы питания.- 2005.- Т.74, №2.- С.36-38.

35. Гарбузенко Д.В. Механизмы компенсации структуры и функции печени при ее повреждении и их практическое значение // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии-2008 Т. 18, № 6 - С. 14-21.

36. Герасимов А.Н. Медицинская статистика: учеб. пособие,- М.: Мед. информ. Агентство, 2007.- 480с.

37. Гойкова JI.A., Зорян Е.В., Анисимова E.H., Гуревич К.Г. Фармакологические методы коррекции стресса // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии.- 2004.- №3,- С.3-5.

38. Дегтерев Е.В., Тяглов Б.В., Красиков В.Д., Малахова И.И.,

39. Гаевский А.В. Применение тонкослойной хроматографии в анализе биологически активных веществ // 100 лет хроматографии / Отв. ред. Б.А. Руденко- М.: Наука, 2003.- С. 233-269.

40. Демина Н.Б., Луняк Н.К., Бабанов А.А., Виноградов Д.В. Фармакотерапия заболеваний гепатобилиарной системы // Российский медицинский журнал 2007.- №2.- С.43-46.

41. Джанашия М. М. Антиоксиданты в физиологических и патологических процессах жизнедеятельности организма / М. М. Джанашия и др., под ред. Э. К. Айламазяна. СПб. : Изд-во Н-Л, 2001. -64 с.

42. Долгов В.В. Национальный приоритетный проект «Здоровье». Второй этап оснащения лабораторной техникой клинико-диагностических лабораторий амбулаторно-поликлинического звена здравоохранения // Клиническая лабораторная диагностика 2007 - №11.- С.25-32.

43. Досон Р., Эллиот Д., Джонс К. Справочник биохимика: пер. с англ.,- М.: Мир, 1991.- 544 с.

44. Европейская Конвенция о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (Страсбург, 18 марта 1986 г.)ЕТ8Ы123

45. Жаров С.Н. Альтернативные направления в терапии больных вирусными гепатитами // Лечащий врач.- 2007а.- №9,- С.50-53.

46. Жаров С.Н., Лучшев В.И. Клинические особенности течения и лечение вирусных гепатитов у наркоманов // Российский медицинский журнал 20076.- №6.- С.25-28.

47. Жаров С.Н., Лучшев В.И. Комплексная терапия больных хроническим гепатитом С с применением препарата Рибавирин медуна // Российский медицинский журнал 2006- №2 - С.37-38.

48. Жаров С.Н., Лучшев В.И., Помазанов В.В., Рабинович Э.З. Глицирризиновая кислота в комплексной терапии больных хроническим гепатитом С // Российский медицинский журнал 2005,- №1- С.33-35.

49. Жаров С.Н., Санин Б.И. Терапия вирусных гепатитов // Лечащий врач.- 2009.- №2.- С.31-36.

50. Жаров С.Н., Санин Б.И., Лучшев В.И. Гепатит С // Лечащий врач.- 2008.-№2.- С.50-54.

51. Жаров С.Н., Чернобровкина Т.Я., Лучшев В.И. Гепатит С: диагностика и лечение больных // Российский медицинский журнал-2007.- №4.- С.7-9.

52. Жерновков В.Е., Пальмина Н.П. Сравнительное изучение структурного состояния плазматических мембран головного мозга и печени мышей под действием тиролиберина in vitro // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2007- Т.144, №8.- С.151-154.

53. Журавлев А.И., Закотеев Ю.А. Спонтанное сверхслабое свечение растительных масел в определении их антиокислительного потенциала // Вопросы питания.- 2008.- Т.77, №1.-С.52-58.

54. Забродский П.Ф., Мандыч В.Г., Германчук В.Г. Иммуностимулирующие свойства полиоксидония при остром отравлении антихолинэстеразными токсичными химикатами // Экспериментальная и клиническая фармакология 2006.- Т.69, №6- С.37-39.

55. Зайцев В.Г. Модельные системы перекисного окисления липидов и их применение для оценки антиоксидантного действия лекарственных препаратов: Автореф. дис. . канд. биол. наук-Волгоград, 2001.-22с.

56. Зайцева Я.В., Долгих О.В., Нурисламова Х.В. Диагностические аспекты идентификации опасности алифатических хлорированных углеводородов для здоровья детей // Гигиена и санитария.- 2004.- №1.-С.66-67.

57. Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П. Механизмы развития болезней и синдромов.- СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2005.- 507с.

58. Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П. Общая патофизиология с основамииммунопатологии.- СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2008 656 с.

59. Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П. Патохимия (эндокринно-метаболические нарушения).- СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2007 768с.

60. Зарубина И.В., Шабанов П.Д. Молекулярная фармакология антигипоксантов.- СПб.: Изд-во Н-Л, 2004.- 368с.

61. Зиновьева В.Н., Спасов A.A. Коррекция мутагенного действия кварцетина природными и синтетическими фенолсодержащими антиоксидантами // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии.- 2005,- №1.- С.45-47.

62. Ибрагимова М.М., Абдурахманов Д.Т., Крель П.Е., Лопаткина Т.Н., Игнатова Т.М., Попова И.В. Эффективность ламивудина при HBeAg-негативном хроническом гепатите В // Клиническая медицина- 2003.-. №6.- С.49-52.

63. Ивашкин В.Т., Буеверов А.О. Токсический гепатит, вызванный суррогатами алкоголя // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии- 2008.- Т. 18, № 1- С.4-8.

64. Ивашкин В.Т., Герман E.H., Маевская М.В. Скрытая инфекция вирусом гепатита В // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии 2008 - Т. 18, №2 - С.4-11.

65. Ивашкин В.Т., Маевская М.В., Лапшин А.В., Павлов Ч.С. Стандартный интерферон-а в лечении больных хроническим гепатитом С // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии-2007.- Т.17, № 1.- С.14-18.

66. Ильченко Л.Ю. Алкогольный гепатит: клинические особенности, диагностика и лечение // Лечащий врач,- 2007.- №6.- С. 14-19.

67. Исаев В.А., Панченко В.М., Лютова Л.В., Карабасова М.А. Применение биологически активной добавки, содержащей полиненасыщенные жирные кислоты семейства со-3 у больных сахарным диабетом 2 типа // Вопросы питания,- 2004.- Т.73, №1.- С.16-19.

68. Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. М.: МЕДпресс-информ, 2009. - 896с.

69. Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. М.: МЕДпресс-информ, 2009. - 896с.

70. Кейтс М. Техника липидологии,- М.: Мир, 1975.- 322 с.

71. Кириллов О.И., Тюпелеев П.А., Касьянов С.П., Блинов Ю.Г. Влияние полиненасыщенных жирных кислот на развитие искусственно вызванных экссудативных некрозов кожи у крыс // Вопросы питания.-2006.- Т75, №1,- С. 16-18,

72. Киселева Е.С. Длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты в питании детей первого года жизни // Педиатрия.- 2008.- Т.87, №2.- С.75-82.

73. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения. СПб: Питер Ком, 1999. 512 с.

74. Ключников С.О. Антиоксидантное средство, проверенное временем // Лечащий врач.- 2005.- №1.- С.72-73.

75. Ковалева C.B., Исаева И.В., Пихтарь A.B., Евтушенко Н.С. Пептидные препараты // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии.- 2003,- №3.- С.5-12.

76. Козлова И.В., Сафонова М.В. Клинико-морфологические особенности поражения желудка и двенадцатиперстной кишки при хронических гепатитах // Клиническая медицина 2008.- №9 - С.46-50.

77. Конь И.Я., Шилина Н.М., Вольфсон С.Б. Омега-3 полиненасыщенные жирные кислоты в профилактике и лечении болезней детей и взрослых // Лечащий врач.- 2006а.- №4.- С.55-59.

78. Конь И.Я., Шилина Н.М., Вольфсон С.Б., Георгиева О.В. Использование полиненасыщенных жирных кислот в питании здоровых детей // Лечащий врач.- 20066.- №1.- С.42-47.

79. Коржевский Д.Э. Краткое изложение основ гистологической техники для врачей и лаборантов-гистологов.- СПб.: Кроф, 2005.- 48с.

80. Корой П.В. Система протеина С при хронических заболеваниях печени и противовирусная терапия // Клиническая медицина 2008.- №2.-С.63-66.

81. Корой П.В., Ягода А.В. Регуляторы соединительнотканного гомеостаза и гистологическая картина печени при хроническом вирусном гепатите и циррозе // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии 2007 - Т. 17, № 5 - С.35 - 40.

82. Королева, Л. Р. Современные гепатопроекторы // Российский медицинский журнал. 2005. - N 2. - С. 35-37

83. Короленко Т.А., Филатова Т.Г., Юзько Ю.В., Савченко Н.Г., Волошина Н.Б., Гончарова Н.В. Цистатин С биологическая роль и нарушения секреции при вирусном гепатите С и циррозе печени // Клиническая лабораторная диагностика - 2007 - №12,- С. 18-20.

84. Короток М.А., Иванов Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.П. Метод определения активности каталазы // Лаб. дело.- 1988.- № 1.- С. 1619.

85. Косарев В.В., Лотков B.C., Бабанов С. А. Испытания лекарственных средств и их оценка с позиции медицины, основанной на доказательствах // Клиническая фармакология и терапия.- 2006- Т. 15, №5- С.92-96.

86. Костюк В.А., Потапович А.И., Ковалева Ж.И. Простой и чувствительный метод определения супероксиддисмутазы, основаный на реакции окисления кверцитина // Вопр. мед. химии.- 1990.- №2.- С.88-91.

87. Кравченко Л.В., Гладких О.Л., Авреньева Л.И., Тутельян В.А. Исследование антиоксидантных свойств индол-3-карбинола in vitro и in vivo//Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии-2008.-№4.-С. 18-23.

88. Краснова Е.Е., Чемоданов В.В., Акайзин Э.С., Егорова Е.Ю. Перспективы исследования короткоцепочечных жирных кислот у детей с заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки // Педиатрия.- 2005.-№5.-С. 16-18.

89. Крепкова Л.В., Шкаренков A.A., Сокольская Т.А. Экспериментальное и клиническое изучение фитопрепаратов из расторопши пятнистой // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии 2008 - №4- С. 3-6.

90. Крехова М.А., Чехранова М.К. Фракционное определение эфиров холестерина в крови и тканях с помощью хроматографии в тонкомслое // Вопросы медицинской химии.- 1971.- Т.17, №1.- С. 93-98.

91. Крылова С.Г., Ефимова JI.A., Вымятнина З.К., Зуева Е.П. Влияние экстракта корня цикория на морфофункциональное состояние печени у крыс с токсическим гепатитом // Экспериментальная и клиническая фармакология 2006.-Т.69, №6 - С.34-36.

92. Кузнецов В.И., Моррисон В.Р. Патогенетическое значение липидного спектра при некоторых инфекционных заболеваниях // Терапевтический архив.- 2006.- №11- С.27-30.

93. Куликов В. А., Чиркин A.A. Особенности метаболизма липопротеинов у крыс // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.- 2004.- №1.- С. 26-27.

94. Курбанов С.К. Влияние пищевых нагрузок на послепищевую гликемию у больных жировым гепатозом в сочетании с ожирением // Вопросы питания.- 2003.- Т.72, №1.- С.17-20.

95. Кусков М.В., Афанасьев С.А., Репин А Н. Изучение активности изоферментов лактатдегидрогеназы лейкоцитов у людей разного возраста // Физиология человека 2006 - Т.32, №2.- С. 137-140.

96. Кушнерова Н.Ф., Рахманин Ю.А. Влияние интоксикации оксидами азота на метаболические реакции печени и профилактика поражений // Гигиена и санитария,- 2008.- №1.- С.70-72.

97. Кушнерова Н.Ф., Спрыгин В.Г., Фоменко С.Е., Рахманин Ю.А. Влияние стресса на состояние липидного и углеводного обмена печени, профилактика // Гигиена и санитария.- 2005.- №5,- С.17-21.

98. Кушнерова Я.Ф., Спрыгин В.Г., Рахманин Ю.А. Регуляция метаболизма этилового спирта в организме олигомерными проантоцианидинами как способ профилактики его токсического воздействия // Гигиена и санитария.- 2003.- №5.- С.58-61.

99. Лабораторный практикум по химии жиров / Н.С. Арутюнян, Е.П. Корнена, Е.В. Мартовщук и др. Под ред. проф. Н.С. Арутюняна и проф. Е.П. Корненой.- 2-е изд., перераб. и доп.- СПб.: ГИОРД, 2004.- 264с.

100. Лебедева С.Н., Жамсаранова С.Д. Использование пептидных биорегуляторов при отравлении гербицидом 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты // Гигиена и санитария.- 2004.- №4,- С.68-70.

101. Лунева С.Н., Стогов М.В., Ерофеева Т.Н., Ерофеева С.А. Влияние биологически активной добавки «Пектибон» на показатели перекисного окисления липидов // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии.- 2003.- №2.- С.43-45.

102. Лучшев В.И., Санин Б.И., Жаров С.Н. Вирусный гепатит С -глобальная проблема нашего времени // Российский медицинский журнал,- 2004.- №3- С.40-45.

103. Маев И.В., Никулин И.Н., Самсонов A.A., Аксельрод А.Г. Особенности сочетанного (HBV/HCV инфекция) вирусного поражения печени // Терапевтический архив.- 2008.- №2.- С.57-61.

104. Маев И.В., Никушкина И.Н., Самсонов A.A., Вьючнова Е.С., Андреев Н.Г. Ранняя симптоматика печеночной энцефалопатии у больных хроническими диффузными заболеваниями печени // Клиническая медицина 2007.- №8.- С.55-57.

105. Макаров В.Г., Макарова Н.М., Селезнева А.И. Изучение механизма антиоксидантного действия витаминов и флавоноидов // Вопросы питания.- 2005,- Т.74, №1.- С.10-13.

106. Макаров В.К., Мохов Е.М., Мосягин A.B. Фосфолипиды сыворотки крови в диагностике генеза механической желтухи // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии.- 2008.- №2- С. 29-31.

107. Малахов А.Б. Вакцинопрофилактика гепатита В // Лечащий врач.- 2006.-№9,- С.57-61.

108. Малахов В.М., Ромасенко Л.В., Турко Т.В. Доброкачественные очаговые образования печени: возрастные психосоматические аспекты // Лечащий врач.- 2005.- №2.- С.24-28.

109. Малахова М.В., Ильина E.H., Говорун В.М., Шутько С.А., Дудина K.P., Знойко О.О., Климова Е.А., Ющук Н.Д. Массспектрометрическое генотипирование вируса гепатита В // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2009.- Т.147, №2.- С.181-186.

110. Малаховский Ю.Е., Котович М.М. Хронические болезни печени у детей: взгляд через поколение // Педиатрия.- 2005,- № 3 С. 107109.

111. Мальцева E.JL, Гуревич К.Г., Пальмина Н.П. Возможный механизм бимодального действия а-токоферола на активность протеинкиназы с in vitro // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии.- 2003.- №4.- С.44-48.

112. Малявская С.И., Торопыгина Т.А., Терновская В.А., Триль В.Е. Диетотерапия при сочетанном нарушении пуринового и липидного обмена у детей // Вопросы питания.- 2003.- Т72, №5.- С.13-17.

113. Маркарян A.A., Даргаева Т.Д., Мондодоев А.Г. Антиоксидантная активность нового растительного сухого экстракта «Нефрофит» // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-2004.-Т.137, №1- С.39-41.

114. Мартинчик А.Н., Батурин А.К., Мартинчик Э.А., Пескова Е.В., Старовойтов М.Л. Фактическое потребление населением России витаминов-антиоксидантов // Вопросы питания,- 2005.- Т.74, №4,- С.9-22.

115. Мартынов А.М., Собеин А.М. Фенольные соединения и аминокислоты травы Viola Langsdorffii Fisher ex Ging // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии,- 2008,- №4,- С, 37-39.

116. Марченко М.М., Шмараков И.А., Пасайлюк М.В. Зависимость противоопухолевой резистентности крыс от обеспеченности их витамином А // Вопросы питания,- 2008.- Т.77, №6,- С.4-8.

117. Машковский М.Д. Лекарственные средства: В 2 т. Т.2.- 14-е изд.- М.: Новая волна, 2001.- 608с.

118. Машковский М.Д. Лекарственные средства: В 2 т. Т.2.- 14-е изд.- М.: Новая волна.- 608с.

119. Медицинские лабораторные технологии. Справочник / Под ред. А.И. Карпищенко.- СПб: Интермедика, 2002.- 600с.

120. Мельников A.A., Викулов А. Д. Липидный профиль и деформируемость эритроцитов у спортсменов // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.- 2004.- №1.- С.13-15.

121. Меныцикова Е.Б. Окислительный стресс: патологические состояния и заболевания / Б. Е. Меньшикова и др.. Новосибирск : APTA, 2008. - 284 с.

122. Мехтиев С.Н., Гриневич В.Б., Кравчук Ю.А., Бращенкова A.B. Неалкогольная жировая болезнь печени: клиника, диагностика и лечение // Лечащий врач.- 2008.- №2.- С.29-37.

123. Мехтиев С.Н., Гриневич В.Б., Кравчук Ю.А., Карпов C.B., Широких A.B. Острый алкогольный гепатит: прогноз и подходы к терапии // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии-2008 Т.18, № 6.-С.43 - 50.

124. Минушкин О.Н. Гастрин-17 и пепсиноген I в оценке состояния слизистой оболочки желудка // Российский медицинский журнал 2006.-№2 - С.9-11.

125. Мироджов Г.К., Авезов С.А., Абдуллаева З.М., Сатторова М.И., Гиясов М.М. Клеточный иммунитет и апоптоз гепатоцитов при хронических холестатических гепатитах // Клиническая медицина 2005.-№10,- С.30-33.

126. Мискевич Д.А., Петушок Н.Э., Герасимчик П.А., Бородинский А.Н. Влияние перфторана на свободнорадикальный гомеостаз при алкогольном абстинентном синдроме // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 2007- Т.143, №1 С.49-51.

127. Миханов В. А. Сравнительная оценка информативности параллельных цитологических и гистологических исследований гастробиоптатов в диагностике различных заболеваний желудка // Клиническая лабораторная диагностика 2008 - №12.- С.43-45.

128. Моисеев B.C. Должен ли терапевт лечить нарушения углеводного обмена? // Клиническая фармакология и терапия.- 2005-Т.14, №2 С.40-44.

129. Моисеев B.C. Полиненасыщенные ю-З жирные кислоты (Омакор) в кардиологии // Клиническая фармакология и терапия 2006-Т.15, №3.- С.48-50.

130. Моисеев B.C. Проблемы клинических исследований новых лекарств как основы современной медицины, основанной на доказательствах // Терапевтический архив 2008,- Т.80, №12.- С.5-10.

131. Моисеев C.B. Лекарственная гепатотоксичность // Клиническая фармакология и терапия,- 2005,- Т. 14, №1.- С.10 14.

132. Молодых О.П., Лушникова Е.Л., Клинникова М.Г., Непомнящих Л.М. Внутриклеточная реорганизация гепатоцитов при воздействии доксорубицина // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 2007.- Т.144, №10.- С.464-472.

133. Морозова В.Т., Луговская С.А., Почтарь М.Е. Эритроциты: структура, функции, клинико-диагностическое значение (лекция) // Клиническая лабораторная диагностика 2007,- №10,- С.21-35.

134. Муштакова В.М., Фомина В.А., Роговин В.В. Действие некоторых ксенобиотиков на окислительный метаболизм нейтрофилов крови человека // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины-2007.- Т.143, №3.- С.315-317.

135. Накусов Т.Т., Шортанова Т.Х., Конь И.Я., Самойлик Н.И., Кубардиев М.М. Влияние антиоксидантов на морфологическую структурувнутренних органов крыс при острой гипоксии // Вопросы питания.- 2005.-Т.74, №5.- с.22-23.

136. Нетребенко O.K. К вопросу о роли длинноцепочечных жирных кислот в питании детей грудного возраста // Педиатрия- 2005.- № 4-С.66-70.

137. Нетребенко O.K., Украинцев С.Е. Кисломолочные продукты и кисломолочные смеси: что использовать в питании грудных детей? // Педиатрия.-2008 Т.87, №2.- С.82.

138. Новгородцева Т.П., Касьянов С.П., Виткина Т.Н., Гвозденко Т.А. Биологические эффекты препарата природных алкил-диацилглицеридов при экспериментальной кардиовазопатии у крыс // Экспериментальная и клиническая фармакология 2005 - Т.68, №2- С.55-58.

139. Обухов A.A., Зыкова Е.С., Косенков Д.А. Белки теплового шока и апоптоз // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии 2007 - №2.- С.52-56.

140. Огурцов П.П., Гармаш И.В., Мазурчик Н.В., Кобалава Ж.Д., Моисеев B.C. Гепаторенальный синдром (перспективы лечения терлипрессином) // Клиническая фармакология и терапия 2005.- Т. 14, №1.- С.31-34.

141. Оковитый C.B., Шуленин С.Н., Смирнов A.B. Клиническая фармакология антигипоксантов и антиоксидантов.- СПб.: ФАРМиндекс, 2005.-72с.

142. Пашинский В.Г., Гайдамович H.H., Поветьева Т.Н., Ветошкина Т.В., Нестерова Ю.В., Пушкарский C.B. Действие лекарственных средств из аконитов на развитие хронического воспаления // Экспериментальная и клиническая фармакология.- 2006 Т.69, №2.- С.55-57.

143. Перевалова Ю.В., Цапок П.И. Воздействие продуктов, содержащих бифидобактерии и лактит, на процессы липопероксидации и состояние кишечной микрофлоры у крыс // Вопросы питания.- 2008.- Т.77, №2.- С.36-39.

144. Перфилова В.Н., Тюренков И.Н., Берестовицкая В.М., Васильева О.С. Кардиопротекторные свойства производных ГАМК в условиях острой алкогольной интоксикации // Экспериментальная и клиническая фармакология 2006- Т.69, №4- С.23-27.

145. Перцов С.С., Пирогова Г.В. ПОЛ в головном мозге и печени крыс при острой стрессовой нагрузке и введении мелатонина // Бюллетень экспериментальной биологии медицины.- 2004.- №7.- С.19-23.

146. Печерская Н.В., Байков В.Г., Кочеткова A.A., Бессонов В.В. Сравнительная характеристика антиоксидантов растительного происхождения в составе жировых эмульсионных продуктов // Вопросы питания.- 2006.- Т.75, №4.- С.20-22.

147. Пилипенко В.И., Шаховская А.К., Мальцев Г.Ю., Исаков В.А. Влияние таблетированного зелёного чая на показатели антиоксидантногостатуса пациентов с заболеваниями органов пищеварения // Вопросы питания.- 2008.- Т.11, №4.- С.58-62.

148. Подымова С.Д. Болезни печени: Руковадство.- 4-е изд., перераб. и доп.-М.: Медицина, 2005.- 768с.

149. Покровский В.М., Компанией О.Г. Оценка эффективности лекарственных препаратов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2008.- Т. 145, №6.- С.668-670.

150. Потапова A.A., Богуш П.Г., Редченко Е.Б., Дронова В.М. Способы оптимизации внутрилабораторного контроля качества при массовом скрининговом исследовании на антитела к вирусу гепатита С // Клиническая лабораторная диагностика 2008.- №3.- С.35-38.

151. Прозоровская H.H., Русина И.Ф., Лупинович В.Л., Бекетова H.A., Сорокин И.В., Ипатова О.М., Левачев М.М. Антиоксидантная активность льняного масла // Вопросы питания,- 2003.- Т.72, №2.- С.13-18.

152. Раджабова Н.И., Мансурова Х.Х., Мироджов Г.К. Дифференциально-диагностические критерии врожденного фиброза печени гепатопортального склероза // Клиническая медицина 2003,- №1 .-С.67-69.

153. РЛС Доктор. М.: ООО «РЛС-2004», 2004. - 960 с.

154. Рогозина Н.В., Мукомолова А.Л., Горячева Л.Г., Тихомирова И.В., Аксенов O.A., Грудинин М.П., Колобов A.A. Клинико-лабораторная характеристика вирусного гепатита С у детей // Педиатрия 2004.- №6.-С.25-29.

155. Рывняк В.В., Рывняк Е.И., Тудос Р.В. Электронно-гистохимическая локализация катепсина L в печени // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 2004.- Т. 137, №1- С. 104-105.

156. Саватеева М.В., Константинова C.B., Кузнецова Е.М., Гнучев Н.В. Лактоферрин: многофункциональность в основе противоракового действия // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии.- 2008.- №6.- С.7-11.

157. Савельев B.C., Петухов В.А., Стернина Л.Ф., Травкин А.Е. ФИШант-С новое направление в лечении нарушений липидного метаболизма // Клиническая фармакология и терапия - 2004.- Т. 13, №3,-С.65-68.

158. Савилов П.Н. Состояние аммиакобезвреживающей функции печени при хроническом активном гепатите // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.- 2004.- № 1.- С.24-26.

159. Савилов П.Н., Кузьмина Н.И., Дьячкова С.Я. Лизоцимобогащающая функция печени после частичной гепатэктомии и гипербарической оксигенации // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии,- 2005.- №4,- С.35-39.

160. Савченко О.В., Щур Э.В., Гафарова О.В., Гайнулина Т.М. Использование биологически активной добавки к пище, приготовленной на основе альгината кальция, в коррекции нарушений печени при вирусных гепатитах // Вопросы питания,- 2004,- Т.73, №5.- С.24-26.

161. Сазонтова Т.Г., Архипенко Ю.В. Значение баланса прооксидантов равнозначных участников метаболизма // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.- 2007.- №3.- С.2-18.

162. Самойлова A.B., Кочеткова A.A., Севериненко С.М., Байков

163. B.Г. Некоторые аспекты моделирования сбалансированного жирнокислотного состава спредов // Вопросы питания.- 2008.- Т.77, №3.1. C.74-78.

164. Саратиков A.C., Новожеева Т.П. Эффективность фермент индуцирующих средств при токсическом поражении печени D-галактозамином простаты // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии.- 2003.- №1.- С.26-28.

165. Серебров В.Ю., Кузьменко Д.И., Буров П.Г., Новицкий C.B. Функциональная активность сфингомиелинового цикла печени крыс прихроническом токсическом гепатите // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2008 - Т. 146, №12 - С.634-637.

166. Ситников И.Г., Скалев В.З., Шалин А.А. Оптимизация гепатопротекгивной терапии вирусных гепатитов с учетом нейромедиаторного звена патогенеза // Терапевтический архив- 2006.-№11.- С.12-17.

167. Собчак Д.М., Корочкина О.В., Э.А.Монакова Оценка показателей цитокинового спектра у больных хроническим гепатитом С при лечении препаратами интерферона а //Терапевтический архив 2005,-№2.- С.70-72.

168. Соколовская С.С., Варус В.И., Брюзгина Т.С., Белов А.А., Иванов Д.А. Оценка состава жирных кислот в поте // Клиническая лабораторная диагностика.- 2008.- №5.- С.20-21.

169. Стальная И. Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты // Современные методы в биохимии.- М., 1977,- С.66-68.

170. Старцев О.Н., Белоусов В.В., Фролова О.В., Гильманов А.Ж. Особенности некоторых показателей липидного и белкового обмена у пришлого населения регионов крайнего севера // Клиническая лабораторная диагностика.- 2008.- №8.- С.22-34.

171. Стрелкова Л.Б., Минеева В.Ф., Багинская А.И., Леонидова Ю.А., Колхир В.К., Ребров Л.Б., Климахин Г.И., Быков В.А. Растительные масла как перспективные объекты разработки антитоксических препаратов

172. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии-2008.-№3,- С.10-14.

173. Сухарева Г.В., Царегородцева Т.М., Петраков А.В., Нилова Т.В., Сильвестрова С.Ю., Лазебник Л.Б Поражения печени у больных с гепатоцеребральной дистрофией // Терапевтический архив 2006.- Т.78, №2.- С.52-57.

174. Сухосырова Е.А., Никитина З.К., Яковлева М.Б. Выделение, очистка и некоторые свойства коллагенолитических ферментов, секретируемых Aspergillus flavus // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии 2008.- №2,- С.46-49.

175. Сычев Д.А., Кукес В.Г., Ших Е.В., Булаев В.М., Раменская Г.В., Колхир С.В. Клиническое значение фармакокинетическогоУвзаимодействия лекарственных средств и фитопрепаратов // Экспериментальная и клиническая фармакология.- 2006 Т.69, №2.- С.75-79.

176. Сюткин В.Е. Стратегия лечения больных хроническим гепатитом С на современном этапе // Клиническая фармакология и терапия.- 2008.- Т.17, №2.- С.16-18.

177. Темнов А.А., Онищенко Н.А. Контроль продукции активных форм кислорода лейкоцитами позволяет прогнозировать устойчивость организма к стрессорному повреждению // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.- 2007.- №2- С.9-11.

178. Терехина Н.А., Заривчацкий М.Ф., Солдатенко Н.В. Анализ ферментов в слезной жидкости в диагностике механической желтухи подпеченочного холестаза // Клиническая лабораторная диагностика-2008.- №11.- С.13-15.

179. Терехина Н.А., Зорин М.Г., Терехин Г. А. Влияние сапропелевых связей на показатели окислительного стресса и антиоксидантной защиты при остром отравлении карбофосом //

180. Патологическая физиология и экспериментальная терапия.- 2007.- №1.-С.6-7.

181. Титов В.Н., Лисицын Д.М. Жирные кислоты. Физическая химия, биология и медицина.- М.-Тверь: Триада, 2006.- 672с.

182. Токаев Э.С., Блохина Н.П., Некрасов Е.А. Биологически активные вещества // Вопросы питания.- 2007- Т.76, №4,- С.4-9.

183. Токсикологическая химия: Метаболизм и анализ токсикантов: учебное пособие / Под ред. Н.И. Калетиной.- М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008,-1016с.

184. Токсикологическая химия: учебник для вузов / под ред. Т.В.Плетеневой.- 2-е изд.- М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005,- 512с.

185. Трушина Э.Н., Мустафина O.K., Волгарев М.Н. О механизмах действия полиненасыщенных жирных кислот на иммунную систему // Вопросы питания,- 2003.- Т.72, №3.- С.35-40.

186. Трушина Э.Н., Мустафина O.K., Кулакова С.Н. Влияние полиненасыщенных жирных кислот рациона на функциональную активность фагоцитов у крыс // Вопросы питания.- 2003,- Т.72, №4.- С.9-11.

187. Фалер Д.М., Шилдс Д. Молекулярная биология клетки: рук. для врачей: пер. с англ.- М.: БИНОМ, 2006 256с.

188. Харкевич Д.А. Фармакология: учеб. 8-е изд., перераб., доп. и испр. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - 736с.

189. Ходосовский М.Н. К механизму протекторного влияния L-аргинина на печень при ишемии-реперфузии // Экспериментальная и клиническая фармакология,- 2006 Т.69, №3- С.40-43.

190. Хотимченко М.Ю., Коленченко Е.А. Эффективность низкоэтерифицированного пектина при токсическом поражении печени, вызванном введением свинца // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины,- 2007,- Т. 144, №7.- С.65-67.

191. Циммерман Я.С. Хронический алкогольный и неалкогольный стеатогепатиты // Клиническая медицина.- 2004.- №7- С.9-14.

192. Цуканов В.В., Купернштейн Е.Ю., Тонких Ю.Л, Бронникова Е.П. Ассоциация жирнокислотного состава сыворотки крови с липидным составом желчи у больных холелитиазом // Терапевтический архив.- 2008.-№2.- С.71-75.

193. Чудных С.М., Шулутко A.M., Анчиков Г.Ю., Соловьёв H.A., Краснецков А.Г. Антиоксидантная терапия печеночной недостаточности при механической желтухе неопухолевого генеза // Российский медицинский журнал 2005,- №1- С. 14-17.

194. Чуйкова К.И., Вожаков C.B. Оценка клинико лабораторной эффективности препарата «Литовит» как нового средства V патогенетической терапии при острых вирусных гепатитах // Терапевтический архив - 2005 - Т.77, №11.- С.29-31.

195. Чуракова Г.В., Бондаренко А.Е., Крикова A.B., Ивашев М.Н. Влияние липофильной фракции хмеля обыкновенного на гемодинамику бодрствующих крыс при профилактическом введении // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии.- 2005.- №1.-С.54.

196. Шамычкова A.A., Никушкин E.B. Оценка внешнесекреторной функции поджелудочной железы у больных вирусными гепатитами В и/или С // Клиническая лабораторная диагностика.2007 №2.- С.47-49.

197. Шанин Ю.Н., Шанин В.Ю., Зиновьев Е.В. Антиоксидантная терапия в клинической практике.- СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2003.- 128с.

198. Шейбак В.М., Смирнов В.Ю., Горецкая М.В., Кравчук Р.И. Применение лейцина и цинка сульфата для коррекции нарушений метаболизма, вызванных парацетамолом // Экспериментальная и клиническая фармакология.- 2007 Т.70, №3.- С.40-42.

199. Шкодич П.Е., Демидова С.А., Максимова Е.Ю., Масленников A.A. Экспериментальное обоснование предельно допустимых концентраций фосфорорганических отравляющих веществ в почве // Гигиена и санитария.- 2006.- №6.- С.72.

200. Шубина М.Э., Яхонтова О.И. Поражение двенадцатиперстной кишки при хроническом вирусном гепатите В // Клиническая медицина-2008.-№8.- С.53-56.

201. Шубина М.Э., Яхонтова О.И. Поражение двенадцатиперстной кишки при хроническом вирусном гепатите В // Клиническая медицина-2008.-№8.- С.53-56.

202. Юшков Б.Г., Данилова И.Г., Храмцова Ю.С. Влияние иммуномодуляторов на регенерацию печени // Экспериментальная и клиническая фармакология 2006 - Т.69, №1- С.53-55.

203. Ющенко A.A., Даудова А.Д., Аюпова А.К. , Урлянова Н.Г. Использование морфоструктурной реакции сыворотки крови в токсологической оценке лекарственных средств // Бюллетень экспериментальной биологии медицины.- 2004.-№7.- С.113-117.

204. Ющук Н.Д., Дудина K.P., Знойко О.О., Мальков И.Г., Кузина JI.E., Чешик Д.С., Исагулянц М.Г. Имунный статус больных с различными исходами острого гепатита С // Терапевтический архив,- 2005 Т.77, №11.- С.32-37.

205. Ягода A.B., Корой П.В. Влияние интерферонтерапии на функциональную активность тромбоцитов при хроническом вирусном гепатите и циррозе печени // Терапевтический архив 2004а - Т.76, №8.-С.72-75.

206. Ягода А.В., Корой П.В. Тромбодитарные дисфункции и возможности их дифференцированной коррекции при хроническом вирусном гепатите // Клиническая медицина.- 20046.- №10 С.41-45.

207. Ягода А.В., Корой П.В., Гейвандова Н.И., Никитина О.А., Касторная И.В. Ростовые факторы и гистологическая картина печени при хроническом вирусном гепатите и циррозе // Клиническая медицина.-2006.-№8.- С.44-47.

208. Akriviadis Е., Botla R., Briggs W. Pentoxifylline improves short-term survival in severe acute alcoholic hepatitis: a double-blind placebo-controlled trial // Gastroenterology.- 2000.- №119.- P. 1637-1648.

209. Albert C., Campos H. Blood levels of long chain n-3 fatty acids and the risk of sudden death//N. Engl. J. Med.-2002.-№346.-P.l 113.

210. Alberti A., Benvegnu L. Management of hepatitis С // J. Hepatol.-2003.- №28.- P.l-15.

211. Alberti A., Clumeek N., Collins S. Short statement of the first European Consensus Conference on the treatment of chronic hepatitis В and С in HIV coinfected patients // J. Hepatol.- 2005.- №42.- P.615-624.

212. Argwal N., Pallos J., Slepko N. Identification of combinational drug regimens for treatment of Huntingtons's disease using Drosophila // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2005.- Vol.102, №10.- P.3777-3781.

213. Botaller R., Brenner D. Liver fibrosis // J. Clin. Invest.- 2005.-№115.- P.209-218.

214. Boyer T.D.Transjugular intrahepatic portosystemic shunt: current status.// Gastroenterology.- 2003.- №124.- P.1700-1710.

215. Briltanti S. Role of amantadine and other adjuvant therapies in the treatment of hepatitis С // Semin. Liver Dis.- 2004.- №24.- P.89-95.

216. Brok J., Gluud L., Gluud C. Effects of adding ribavirin to interferon to treat chronic hepatitis С infection: A systematic review and meta-analysis ofrandomized trials. // Arch. Intern. Med.-2005.- №165.- P.2206-2212.

217. Browning J.D., Szczepaniak L.S., Dobbins R. Prevalence of Hepatic Steatosis in an Urban Population in the United States: Impact of Ethnicity // Hepatology-2004.- Vol.40, №6.- P. 1387-1395.

218. Calder P.C. N-3 polyunsaturated fatty acids and inflammation: from molecular biology to the clinic // Lipids.- 2003.- Vol.38., №4.- P.343-352.

219. Caldwell S.H., Argo C.K., Al-Osaimi A.M. Therapy of NAFLD: insulin sensitizing agents // J. Clin. Gastroenterol 2006 - №40.- P.61-66.

220. Camma C., Bruno S., Schepis F. Retreatment with interferon plus ribavarin of chronic hepatitis C non-responders to interferon monotherapy: a meta-analysis of individual patient data // Gut.- 2002.- №51.- P.864-869.

221. Canbay A., Friedman S., Gores G.J. Apoptosis- the nexus of liver injury and fibrosis // Hepatology.- 2004.- №39.- P.273-278.

222. Cardenas A., Arroyo V. Refractory ascites // Dig. Dis.- 2005.-Vol.23, №1.- P.30-38.

223. Cardenas A., Gines P. Management of complication of cirrhosis in patients awaiting liver transplantation // J. Hepatol 2005.- №42.- P.124-133. , :

224. Chen C.J., Yang H.I., Su J. Risk of Hepatocellular Carcinoma Across a Biological Gradient of Serum Hepatitis B Virus DNA Level // JAMA.-2006.-№295.- P.65-73.

225. Christensen J., Skou H., Fog L. Marine n-3 fatty acids, wine intake, and heart rate variability in patients referred for coronary angiography // Circulation.- 2001.- №103.- P.651-657.

226. Christensen M., Andersson R. N., Per Dalen M. D. The Karolinska cocktail for phenotyping of five human cytochrome P450 enzymes // Clin. Pharmacol. Ther.- 2003.- №73.- P.517-528.

227. Colle I., Durand F. Clinical course, predictive factors and prognosis in patients with, cirrhosis and type I hepatorenal syndrome treated withterlipressin: a retrospective analysis // Gastroenterol. Hepatol.- 2002.- №17.-P.882-888.

228. Colonno R.J., Rose R.E., Baldick C. Entecavir Resistance is Rare in Nucleoside Naive Patients with Hepatitis B // Hepatology.- 2006,- №44,-P. 1656-1665.

229. Conjeevaram H., Lok A. Management of chronic hepatitis B // J. Hepatol. 2003. - Vol. 38.- P.90-103.

230. Cooksley W. Treatment with interferons (including pegylated interferons) in patients with hepatitis B // Semin. Liver Dis.- 2004.- №24.- P.45-53.

231. Dalgatd O., Bjoro K., Helium K. Treatment with pegylated interferon and ribavarin in HCV infection with genotype 2 or 3 for 14 weeks: a pilot study // Hepatology.- 2004.- №40.- 1260-1265.

232. De Caterina R., Basta G. n-3 Fatty acids and the inflammatory response-biological background // Eur. Heart J.- 2001.- №3.- P.42-49.

233. Deltenre P., Henrion J., Canva V. Evaluation of amantadine in chronic hepatitis C: a meta-analysis // Hepatology.- 2004.- Vol.41.- №3.- P.462-473.

234. Delvin S.M., Swain M.G., Urbanski S.J. Mycophenolate mofetil for the treatment of autoimmune hepatitis in patients refractory to standart therapy // Can. J. Gastroenterol-2004.-№18.-P.321-326.

235. Fredrickson D.S., Levy R.I., Lees R.S. Fat transport in lipoproteins an integrated approach to mechanisms and disorders // N. Engl. J. Med.-1967.- V.276.-P. 34-44,94-103, 148-156,215-224,273-281.

236. Fridwald W.T., Levy R.J., Fredrickson D.S. Estimation of the concentration of lowdensitylipoprotein cholesterol in plasma, without use of the preparative ultracentrifuge. Clinical Chem. 1972. Vol. 18. P. 499-502.

237. Friedman S. L. Liver fibrosis from bench to bedside // Hepatology.- 2003.- №38.- P.38-53.

238. Gunavan B., Kaplowitz N. Clinical perspectives on xenobiotic-induced hepatotoxicity.// Drug Metab. Rev.- 2004,- №36.- P.301-312.

239. Guyader D., Thirouard A., Erdtmann H. Liver iron is a surrogate marker of severe fibrosis in CHC // J. Hepatology.- 2007 Vol.46, №4.- P.587-595.

240. Hadziyannis S. Adefovit dipivoxil for the treatment of hepatitis B y antigen-negative chronic hepatitis B // N. Engl.J. Med.- 2003.- №348.- P.800-807.

241. Hadziyannis S. Three year study of adefovir dipivoxil demonstrates sustained efficacy in presumed precore mutant chronic hepatitis B patients in long term safety and efficacy study // J. Hepatology.-2004.- Vol. 40,- P. 17.

242. Harris W., von Schacky C. The Omega-3 index: a new risk factor for death from coronary heart disease? // Preventive Medicine.- 2004.- №39.-P.212-220.

243. Hickman L., Clouston A., Macdonald G. Effect of weight reduction on liver histology and biochemistry in patients with chronic hepatitis C // Gut.-2002.-№51.- P.89-94.

244. Hu F.B., Bronner L., Willett W.C. Fish and omega-3 fatty acid intake and risk of coronary heart disease in women // J.A.M.A.- 2002.- №287.-P.1815-1821.

245. Jaeschke H., Gores G., Cederbaum A. Mechanisms of hepatoioxicity // Toxicol. Sci.- 2002,- №66.- P.166-176.

246. Jarmay K., Karacsony G., Ozsvar Z. Assessment of histological features in chronic hepatitis C // Hepatogastroenterology.- 2002.- №49.- P.239-243.

247. Koo W. W. Efficacy and safety of docosahexaenoic acid and arachidonic acid addition to infant formulas: can one buy better vision and intelligence? // J. Am. Coll. Nutr.- 2003.- №22.- P.101-107.

248. Kountouras J., Chatzopoulos D., Zavos C. Apoptosis in hepatitis C // J. Viral. Hepat.- 2003.- №10.- P.335-342.

249. Oh R. Practical applications of fish oil (Omega-3 fatty acids) in primary care // J. Am. Board. Fam. Pract.- 2005.- №18.- P.28-36.

250. Rylander-Rudqvist T., Wedren S., Granath F. Cytochrome P450 1B1 gene polymorphisms and postmenopausal breast cancer risk // Carcinogenesis.- 2003.- №24.- P. 1533-1539.

251. Smet P. Herbal medicines // N. Engl. J. Med.- 2002,- Vol.347, №25.-P.2046-2056.

252. Stedman C. Herbal totoxicity // Semin. Liver Dis.- 2002.- №22.-P.195-206.

253. Valentovic M., Terneus M., Harmon R.C., Carpenter A.B. S-adenosylmethionine (SAMe) attenuates acetaminophen hepatotoxicity in C57BL/6 mice // Toxicol. Lett.- 2004.- №154.- P. 165-174.

254. Yilleneuve J., Pichette V. Cytochrome P450 and liver diseases // Curr. Drug Metab.- 2004.- №5.- P.273-282.

255. Zhang T., Li Y., Lai J.P. Alcohol potentates hepatitis C virus replicon expression // Hepatobgy- 2003.- Vol.38.- № 1. P.57-65.

Информация о работе

Бачко, Сергей Сергеевич
кандидата медицинских наук
Краснодар, 2011
ВАК 03.01.04

Диссертация

СРАВНИТЕЛЬНАЯ БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТАБОЛИЧЕСКИХ СВОЙСТВ РАЗЛИЧНЫХ ГЕПАТОПРОТЕКТОРОВ В УСЛОВИЯХ ТОКСИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ (экспериментальное исследование) - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы