Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование гепатозащитной эффективности оксиметилурацила при экспериментальной интоксикации полихлорированными бифенилами и алкоголизации

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Исследование гепатозащитной эффективности оксиметилурацила при экспериментальной интоксикации полихлорированными бифенилами и алкоголизации"

^ На правах рукописи

Оч

N

ВОЛКОВА Екатерина Станиславовна

ИССЛЕДОВАНИЕ ГЕПАТОЗАЩИТНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ОКСИМЕТИЛУРАЦИЛА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ ПОЛИХЛОРИРОВАННЫМИ БИФЕНИЛАМИ И АЛКОГОЛИЗАЦИИ

03.00.04-биохимия 14.00.25-фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Уфа-1997

Работа выполнена в Уфимском научно-исследовательском

институте медицины труда и экологии человека и Башкирском государственном медицинском университете

Научный руководители:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

член-корреспондент АН РБ, доктор медицинских наук, профессор Камилов Ф.Х.

кандидат медицинских наук, доцент Мышкин В.А.

член-корреспондент РАЕН, доктор медицинских наук, профессор Рубин В.И.

академик МАНЭБ, доктор биологических наук, профессор Колла В.Э.

Челябинская государственная медицинская академия

Защита диссертации состоится в Ю часов на заседании диссертационного совета^ 084.35.01 при Башкирском государственном медицинском университете по адресу: 450000, г.Уфа, ул. Ленина, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Башкирского государственного медицинского университета (450000, г.Уфа, ул.Ленина, 3).

Автореферат разослан

г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук,профессор,

член-корреспондент АН РБ Давлетов Э.Г.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Полихлорированные бифенилы относятся к особо опасным и широко распространенным загрязнителям окружающей среды, которые отличаются высокой кумулятивной способностью и токсичностью. Вместе с тем, данные последних лет показывают, что опасность диоксинсодержащих хлорорганических ксенобиотиков не столько в острой токсичности, сколько в постоянном воздействии на организм (Майстреико В.Н., Хамитов Р.З., Будни-ков Т.К., 1996; Galio М.А., 1991; Федоров JI.A., 1993). Важным патогенетическим звеном токсического действия ксенобиотиков на организм является поражение печени, поскольку именно этот орган играет ведущее значение в процессах их превращений (Измеров Н.В., 1988). В литературе имеются сведения о влиянии полихлорированных бифенилов на индукцию ряда ферментов в печени (Хан A.B., 1985; Тутельян В.А. и др., 1985-1991), но конкретные механизмы повреждения органа ■ изучены недостаточно.

Не менее актуальной остается и проблема алкоголизма, так как уровень напряженности алкогольной ситуации в стране продолжает нарастать (Шамота А.З., 1994). Хорошо известно разрушающее действие • алкоголя на печень, приводящее к нарушению многообразных функций органа (Пауков B.C., 1996; Логинов A.C. и др., 1987).

Анализ работ отечественных и зарубежных авторов позволяет сделать вывод, что лидирующим патогенетическим фактором при токсических поражениях печени является развитие печеночной недостаточности в результате нарушения метаболических процессов и повреждения гепатоцитов. Особое значение имеют изменения липидных компонентов эиомембран в результате интенсификации процессов перекисного окис-пения ненасыщенных жирных кислот, и как следствие - нарушение регу-пяции проницаемости плазматической и субклеточных мембран, активности мембраносвязанных ферментов и др.

Исходя из этого остается актуальным поиск новых эффективных :редств профилактики и лечения интоксикаций печени с учетом извест-чых патогенетических механизмов. Несмотря на многочисленные экспериментальные исследования большого количества различных веществ в сачестве гепатопротекторов, клиника практически не имеет эффективных средств для лечения гепатологических больных (Блюгер А.Ф., Май- ' )ре А.Я., 1982; Насыров Х.М., 1995) Наиболее перспективными направ-1ениями в этом плане следует считать изучение соединений, обладаю-

щих способностью нормализовать структуру и функции мембран клеток. Разработанный в Башкирском государственном медицинском универси: тете оригинальный иммуномодулятор и анаболик - оксиметилурацил оказывает стабилизирующее действие на биологические мембраны, способствует нормализации метаболических процессов при экзогенных отравлениях химическими веществами с нейротропным, кардиотропным действием, а также кровяными ядами (Лазарева Д.Н., 1975; Мышкин В.А., 1995). Однако, практически не изучена его эффективность при отравлении гепатотоксинами.

Цель исследования. Оценка гепатозащитной эффекивности оксиметилурацила при острой и хронической интоксикации полихлориро-ванными бифенилами и этанолом.

Для достижения указанной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Разработка моделей <гоксического поражения печени, вызванного острой и хронической интоксикацией полихлорированными бифенилами.

2. Исследование влияния на биохимические, морфо-стереометрические и функциональные показатели оксиметилурацила при повреждении печени в условиях острой и хронической интоксикации полихлорированными бифенилами.

3. Изучение гепатозащитного действия оксиметилурацила при острой алкоголизации.

Научная новизна состоит в том, что впервые изучены особенности цитолитического синдрома поражений печени полихлорированными бифенилами в зависимости от уровня и интенсивности воздействия. При однократном введении полихлорированных бифенилов (1/2 ЬД50) в организм, изменения метаболических процессов в ткани печени и ферментативной активности крови носят колебательный характер, отражая реакцию организма на сильное однократное воздействие.

При многократном введении полихлорированных бифенилов (1/50 ЬД50 в течение 4-х недель) тяжесть морфофункциональных нарушений в ткани печени существенно возрастает. Выявлено определенное сходство в картине цитолитического синдрома'поражения печени, вызванного введением полихлорированных бифенилов и этанола, в основе которого лежит усиление процессов перекисного окисления липидов.

Впервые показано, что антиоксидант оксиметилурацил (5-окси-6-метилурацил) является эффективным корректором морфофунк-

циональных нарушений в печени, а также метаболических показателей крови при интоксикации полихлорированными бифенилами и алкоголизации.

Практическая значимость состоит в том, что предложены новые модели поражения печени полихлорированными бифенилами, которые могут быть использованы для скрининга новых фармакологических, средств, обладающих гепатопротекторной активностью.

Результаты проведенных исследований обосновывают перспективу дальнейшего расширения клинического применения оксиметилура-цила в качестве гепатопротектора. Различная эффективность оксимети-лурацила и карсила на исследованных моделях поражения печеии позволяет более дифференцированно рекомендовать препараты, обладающие гепатозащитным действием для клинического применения.

Препарат оксиметилурацил ,может быть рекомендован для включения его в комплексную терапию токсических поражений печени, в том числе алкогольного гепатита.

Основные положения, выноснмые на защиту.

1. Тяжесть метаболических- и морфофункциональных нарушений в печени зависит от уровня и интенсивности воздействия полихлориро-ванных бифенилов.

2. Оксиметилурацил является эффективным средством коррекции биохимических и морфофункциональных нарушений в печени при интоксикации полихлорированными бифенилами и алкоголизации/

3. В механизме гепатозащитного действия оксиметилурацила при интоксикации полихлорированными бифенилами и алкоголизации важную роль играют его антиоксидантные и мембраностаби-лизирующие эффекты.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на международном симпозиуме "Проблемы экологии в нефтепеработке и нефтехимии" (Баку-Уфа, 1995); на I Всероссийской конференции 'Актуальные проблемы теоретической и прикладной токсикологии" 'Санкт-Петербург, 1995); на научно-практической конференции, посвященной 40-летию Уфимского НИИ МТ и ЭЧ (Уфа, 1995); на III Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1996); на совместном заседании кафедр фармакологии №1 и №2, биологической шмии, биоорганической и клинической химии, военной и экстремальной медицины Башкирского государственного медицинского университета Уфа, 1997).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, обсуждение полученных результатов, заключения, выводов и списка литературыв ключающего _ íes источников из них . УО зарубежных. Диссертация иллюстрирована ЯЛ- таблицами,

49 _рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Экспериментальные исг следования проведены на 310 беспородных крысах-самцах массой 180230 г. Все животные содержались в одинаковых условиях на стандартной диете вивария, соответствующих методическим рекомендациям (Лоскутова З.В., 1980). Согласно поставленной цели, животные были разделены на 4 экспериментальные серии (таблицы 1,2,3,4).

таблица 1

Распределение животных по группам в зависимости от дозы и длительности введения полихлорированных бифенилов

Сроки исследований Сутки после отравления ' Всего

Условия опыта 2 7 15 30 животных

1 гр. Интактные животные (контроль) ' 6 6 ' 6 6 24

II гр. 500 мг/кг однократно 6 6 6 ' 6 24

III гр. 1500 мг/кг однократно 6 6 6 ' 6 24

IY гр. 3000 мг/кг однократно 6 6 6 6 24

Y. гр. 1/50 ЦЦго в течение 4-х недель - 5 - 10 15

таблица 2

Распределение животных, по группам и срокам исследования в условиях фармакологической коррекции острого отравления совтолом

Сроки исследований Условия опыта Сутки после отравления Всего животных

7 15

1 гр.Контроль (интактные животные) 6 6 12

II гр. Совтоп 1500 мг/кг 6 6 12

III гр. Сотол+ оксиметилурацил 6 6 12

IY гр. Совтол+карсил ■ 6 6 12

таблица 3 Распределение животных по группам и срокам исследования в условиях фармакологической коррекции острого отравления этанолом

Сроки исследований Условия опыта Сутки после отравления Всего

7 15 животных

I гр.Контроль (интактные животные) 6 ' 6 12

II гр. Этанол 6 6 12

III гр. Этнол+ оксиметилурацил 6 6 12

IY гр. Этанол+карсил 6 6 12

таблица 4

Распределение животных по группам исследования в условиях фармакологической коррекции хронического отравления совтолом

j- | Характер исследований Условия опыта Морфофункцион альная оценка печени Оценка желчевыд. и желчесекреторной функции Всего животных

| I гр. Контроль I (интактные животные) 10 5 15

II гр. Совтол 15 15 30

' III гр. Соол+ | оксиметилурацил 15 15 30

! !Y гр. Совтол+карсил 10 15 25

Для моделирования острого и хронического отравления животных использовали "совтол-10", представляющий собой смесь полихло-рированных бифенилов с некоторым содержанием трихлорбензола.

Острое поражение печени вызывали путем однократного внутри-желудочного введения 10% раствора совтола в оливковом масле в дозе 1500мг/кг массы тела животного (1/2 ЬД50). Забой животных и исследования проводили на 7-е и 15-е сутки после введения совтола.

Моделирование хронического поражения печени вызывали введением раствора совтола в оливковом масле внутрижелудочно из расчета 60 мг/кг (1/50 ЬД50) 5 раз в неделю в течение четырех недель. Забой животных и исследования проводили на 28-е сутки с начала затравки.

Модель острого алкогольного повреждения печени, создавали путем внутрижелудочного введения животным 40% раствора этанола из расчета 7 мл/кг массы в течение 7-и дней (Сальников С.И., и др. 1990).3абой животных и исследования проводили на 7-е и 15-е сутки опыта.

В качестве фармакологического препарата сравнения при оценке гепатозащитного действия оксиметилурацила использовали широко известный гепатопротектор "карсил" (НРБ). Эффективность исследуемых препаратов изучали при внутрижелудочном введении в виде суспензии на крахмальной слизи. Препараты в дозе 50 мг/кг вводили в течение 7-и дней. Введение препаратов начинали через 24 часа после острого отравления. В случае хронического отравления препараты вводили одновременно с ксенобиотиком, начиная с 7-го дня после введения совтола.

Общая характеристика проведенного исследования представлена в таблице 5.

таблица 5

Этапы исследования Объект исследования Методы исследования

1. Оценить выраженность цитоли-тического и холестатического синдромов ткань печени сыворотка крови гистохимические и биохимические методы

2. Оценить функциональное состояние гелатоцитов ткань печени срезы (880 ст.) методы количественной гистохимии

3. Морфологический анализ экспериментального материала ткань печени срезы (150 ст.) морфо-и стереометрические методы

4. Оценить процессы ПОЛ (ТБК-реагирующие продукты) гомогенаты печени реакция с тиобарби-туровой кислотой

5. Оценить функциональное состояние печени суммарное количество желчи и скорость ее отделения функциональные методы исследования

Используемые в эксперименте биохимические показатели определены спектрофотометрически на химической системе "Encore", Chemistry System (Австрия), с помощью наборов "Encore System II", согласно прилагаемым рекомендациям.

В сыворотке крови определяли следующие параметры:

- активность аланинаминотрансферазы (АлАТ; КФ 2.6.1.2), аспар-татаминотрансферазы (АсАТ; КФ 2.6.1.1)', лактатдегидрогеназы (ЛДГ; КФ 1.1.1.27), щелочной фосфатазы (Щ.Ф.; КФ3.1.3.1), кислой фосфатцзы (К.Ф.;КФ 3.1.3.2)

- содержание общего белка, триглицеридов, холестерина

Активность ферментов выражали в миллимолях субстрата, подвергшегося превращению за 1 час в результате катализа 1 л. сыворотки. Концентрацию исследуемых веществ выражали в ммоль/л.

Максимальная стандартизация забора и обработки материала для гистохимических исследований позволили использовать методы количественной гистохимии (Журавлева Т.Б. и др., 1978; Прочуха-нов P.A., 1975). Определялись следующие гистохимические показатели: Содержание общих жиров (липидов) определяли с помощью окраски Суданом черным (Берстон М., 1965; Пирс Э., 1962). Содержание гликогена определяли по методу Мак-Мануса-Хочкиса (Пирс Э., 1962) на парафиновых срезах. Активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ; КФ 1.3.99.1) определяли по методу Нахлас (Берстон М., 1965; Пирс Э., 1962). Активность НАД-диафоразы (КФ 1.6.99.3), лактатдегидрогеназы (ЛДГ) по методу Берстона (Берстоу М., 1965; Журавлева Т.Б., 197S). Активность кислой и щелочной фосфатаз определяли методом азосочетания по Берстону (Пирс Э., 1962). Выявление Na+ и К+ зависимой АТФ-азы (КФ 3.6.1.4) проводили свинцовым методом по Wachstein, Meisel в модификации Fakquhar и Palade (Луппа X., 1980).

Измерение и оценку гистохимических реакций проводили на микроскопе с телевизионным анализатором МТ-9, выпущенном на оптико-механическом объединении им.В.И.Ленина в 1987 году (Санкт-Петербург). Замеры проводили в 40 полях зрения стандартных площадей срезов для каждого животного.

У животных определяли относительную массу печени и производили расчет весового коэффициента органа (В.К.О.) (Рыло-ва М.Л., 1964). ■ -

Для гистологического изучения печень фиксировали в 10% заб\-ференном формалине ц заливали в парафин. Срезы толщиной 5 мкм <

рашивали гематоксилин-эозином. Определяли следующие стерео-и мор-фометрические параметры: ядерно-цитоплазматические отношения, отношение стромы к паренхиме, содержание купферовских клеток.

Данные показатели подсчитывали на срезах с помощью сетки Вейбеля в 10-и полях зрения на каждое стекло при общем'увеличении 400 (Ташкэ К., 1980; Weibel E.R., 1979;Автандилов Г.Г., 1990). Количество двуядерных и безъядерных гепатоцитов рассчитывали на 500 клеток при общем увеличении 630.

Желчесекреторную и желчевыделительную функцию печени у крыс оценивали по общепринятой методике (Скакун Н.П., Олейник А.Н., 1967). О функциональном состоянии печени судили по скорости секреции желчи (в мг/мин на 100,0 г массы животного) и общему количеству выделенной желчи за каждый час, и в сумме за 4 часа наблюдения (в мг на 100,0 г массы).

Полученный в результате исследований цифровой материал подвергали статистической обработке с использованием критерия t Стыо-дента (Плохинский H.A., 1970). Различия считали достоверными при Р<0,05 (Автандилов Г.Г. и др., 1981).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние различных доз полнхл'орированных бифснилов на выживаемость, весовые коэффициенты печени крыс н активность сывороточных трансаминаз.

В ходе отработки моделей токсической гепатопатии, вызванной однократным и многократным введением полнхлорированных бифени-лов, выявлена определенная зависимость показателен выживаемости в зависимости от дозы и срока введения (Рисунок 1).

100% 60% 40%

а б в

Рисунок 1. Выживаемость животных (%) а) Доза 500 и 1500 мг/кг б) Доза 3000 мг/кг в) Доза 60 мг/кг в течение 28 дней

Как однократное, так многократное введение совтола вызывало статистически значимое увеличение весового коэффициента печени (Р<0,01). Значительные изменения активности сывороточных трансами-наз в крови при однократном воздействии токсиканта, свидетельствовали о выраженном цитолитическом эффекте. При многократном введении .совтола животным - динамика активности ферментов АсАТ и АлАТ менялась. Гиперферментемия АлАТ и АсАТ отмечаемая к 7-м суткам эксперимента сопровождалась падением активности АлАТ в конце опыта.

Представленные данные позволяют сделать заключение о выраженном гепатотоксическом действии различных доз совтола как при однократном, так и многократном введении его в организм крыс. В последующем, нами для острой интоксикаций полихлорированными бифе-нилами была использована доза 1500 мг/кг.

Влияние оксиметилурацила на метаболическое и морфо-функционалыюе состояние печени при острой интоксикации полихлорированными бифеннлами.

Гистохимическими, биохимическими и морфометрическими методами исследованы ткань печени и сыворотка, крови после однократного воздействия совтолом (1500 мг/кг) и в условиях фармакологической коррекции. Полученные данные свидетельствуют, что при остром отравлении полихлорированными бифенилами, в печени происходят существенные нарушения метаболических процессов, следствием которых являются некротически-дистрофические изменения печеночной паренхимы. Обзорная гистологическая картина печени на препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином, свидетельствует о нарушении обычного строения органа. Выявлены дистрофические явления, преимущественно жирового типа, что подтверждается показателями гистохимической реакции на общие липиды. При этом установлено резкое (почти в 3 раза) увеличение количества безъядерных гепатоцитов. Метаболические изменения, установленные гистохимическими методами исследования (СДГ, ЛДГ, К.Ф., Щ.Ф.) и ферментативной активности крови (АлАТ, АсАТ, Щ.Ф.) носят колебательный характер, отражая реакцию организма на сильное однократное воздействие, и вероятно, являются суммированием токсического действия самого яда и защитно-приспособительных реакций организма.

Введение оксиметилурацила ограничивало многие патологические изменения, вызванные введением 1/2 ЬД50 полихлорированных бифенилов.Это выражалось в стабилизации окислительно-

восстановительных процессов в клетке - СДГ, НАД-диафоразы, ЛДГ,ограничении резкого накопления жиров, а также в сохранении уровня гликогена и целостности цитоплазматической мембраны (К,№ -АТФ-аза,Щ.Ф.). Введение лекарственных препаратов усиливало активность К.Ф. (Р<0,05). При этом, применение оксиметилурацила обнаруживало больший эффект чем лечение карсилом. Преимущество оксиметилурацила перед карсилом проявлялось и в существенном рграничении ядерно-цитоплазматического отношения по сравнению с нелечеными животными, а также в снижении процентного содержания безъядерных гепатоцитов (Р<0,05). (Рисунок 2, 3, 4).

Отставание к 7-м и 15-м суткам опыта итогового результата регенерации - восстановления нормальной структуры печени - показывает отсутствие полной компенсации дистрофических процессов к указанным срокам.

а

I II • III IV I II III IV

Рисунок 2. Влияние оксиметилурацила и карсила на активность ЛДГ (а) и активность К,Ыа-АТФ-азы (б) в ткани печени при остром отравлении совтолом.

Достоверность отличий Р<0,05

* - по сравнению с I группой (интактные животные)

* * - по сравнению со II группой (совтол)

*** - между III (совтол+оксиметилурацил) и 1У группой (совтол+карсил)

4 t.

я. «

¿rfi*

■Ji*/

** *•»

i

4 IS

II

7 ts III

"У f5* сутки

IY

IÄB1

i 1

V 1S (¿W

1Y

Рисунок 3. Влияние оксиметилурацила и карсила на содержание гликогена (а) и липидов (б) в ткани печени при остром отравлении сов-толом.

Достоверность отличий Р<0,05 * - по сравнению с I группой (интактные животные) ** - по сравнению со II группой (совтол) *** - между III (совтол+оксиметилурацил) и IY группой совтол+карсил)

0,2» 1

15~ сути

IY

Уе-

4Ш

fi

Шщ> St ZL

<5"

* Ч

сутки

I и" III . 1У Рисунок 4. Влияние оксиметилурацила и карсила на ядерно-цитоплазматические отношения в печени (а) и процентное содержание безъядерных гепатоцитов (б) в ткани печени при остром отравлении сов-

толом.

Достоверность отличий Р<0,05.

- по сравнению с I группой (интактные животные) ** - по сравнению со II группой (совтол) *** - между III (совтол+оксиметилурацил) и IY группой (совтол+карсил)

Влияние оксиметилурацила на метаболическое и морфо функциональное состояние печени при хроническом отравлении совтолом.

В условиях длительного воздействия полихлорированных бифе-нилов (1/50 ЬД;-0 в течение 4-х недель) тяжесть нарушений морфофунк-ционального состояния печени существенно возрастает. Выявлены изменения активности СДГ и НАДН-дегидрогеназ, которые позволяют судить о поражении функций митохондрий с падением уровня энергообразования. На фоне длительной гипоксии указанные нарушения могут привести к необратимым последствиям. Дезорганизация этих органелл ведет к нарушению многочисленных функций гепатоцитов: метаболических, детоксикационной, синтети-ческой и др. Снижение активности К.Ф., КД^а-АТФ-азы при увеличении активности ЛДГ, Щ.Ф. и накоплении жиров в ткани печени, в определенной мере подтверждают это (таблица 6).

таблица 6

Влияние оксиметилурацила на гистохимические показатели в печени крыс при хроническом отравлении совтолом, М+т.

Группы показатели 1 гр. Интактные животные п=5 II гр. Совтол п=5 Шгр.Совтол+ок симетилурацил п=5 IY гр. Совтол+карси л п=5

СДГ (у.е.) 8,33+0,2 * 6,15+1,15 ** 8,15+0,1 5,1+0,15

ЛДГ (у.е.) 5,87+0,14 * 6,35+0,1 * 6,3+0,12 5,95+0,4

НАДН-д/г (у.е.) 5,5+0,18 3,7+0,2 ** 5,0+0,5 * ** 2,9+0,2

К.Ф. (у.е.) 8,15+0,05 * 7,4+0,19 ** 8,25+0,1 8,0+0,15

Щ.Ф. (у.е.) 8,7+0,15 * ' 9,3+0,1 ** 8,6+0,17 * ** 9,35+0,1

АТФ-аза (у.е.) 8,5+0,15 * 6,75+0,25 ** 8,2+0,18 * ** 4,8+0,08

Яипиды (у.е.) 7,0+0,1 * 8,9+0,1 ** 8,15+0,2 * ** 8,9+0,04

Примечание: Достоверность отличий (Р<0,05) * - по сравнению с I гр. животных ** - по сравнению со II гр. животных *** - между III и IY гр. животных.

Результаты исследования активности К,Ыа-АТФ-азы свидетельствуют и о нарушении целостности клеточной мембраны. Данные биохимических исследований в крови - уменьшение активности АлАТ, ЛДГ, К.Ф., Щ.Ф., наряду с увеличением содержания холестерина согласуется с результатами гистохимических исследований. Одним из патохимических механизмов, приводящих к нарушениям функций гепатоцитов при многократном введении полихлорированных бифенилов, является интенсификация свободно-радикального окисления, о чем свидетельствует повышение ТБК-реагирующих продуктов в гомогенатах печени (Р<0,05). .

Таким образом, в печени выявляются изменения метаболизма, которые приводит к значительной перестройке всех ее клеточных элементов, ответственных за нормальное функционирование органа. Увеличение печени (Р<0,05) сопровождалось заметным снижением количества двуядерных и возрастанием безъядерных .гепатоцитов. Одновременно наблюдалось развитие холестаза с нарушением образования и оттока желчи (Рисунок 5).

"гАоог

•sf-tf-

I II III ,IY

Рисунок 5. Влияние оксиметилурацила и карсила на желчевы-делительную функцию печени п|эи хроническом отравлении совтолом. •

Примечание: Достоверность отличий (Р<0,05) * - по сравнению с I гр. животных ** - по сравнению со II гр. животных *** - между III и IY гр. животных.

Введение оксиметилурацила, в определенной степени, препятствовало реализации токсического действия полихлорированных бифени-лов, существенно ограничивая выраженность холестатического и цито-литического синдромов в фазу обратимых биохимических и функциональных проявлений. Лечение оксиметилурацилом эффективно восстанавливало активность митохондриальных окислительно-восстановительных ферментов- СДГ и НАДН д/г до уровня интактных животных. Сохраняя в определенной мере функции энергообразования, препарат ограничивал мембранотоксическое действие полихлорированных бифенилов, что проявлялось в сохранении АТФ-азной активности. У крыс, получавших оксиметилурацил, в печени отмечалось снижение количества общих липидов, уменьшение числа безъядерных и увеличение двуядерных гепатоцитов (Р<0,05). Важно подчеркнуть выраженный эффект влияния оксиметилурацила на желчевыделительную функцию печени. У этой группы животных, увеличение скорости секреции желчи было более чем в 2 раза выше по сравнению с нелечеными крысами. Использование карсила при многократном введении совтола не оказывало заметного терапевтического действия практически по всем исследуемым нами показателям. Оксиметилурацил, в этих условиях, обладал определенным преимуществом перед карсилом.

Влияние оксиметилурацила на метаболические показатели в ткани печени в условиях форсированной алкоголизации.

На основе комплексного количественного гистохимического исследования ткани печени, биохимического изучения сыворотки крови выявлены следующие изменения. Поражение печени при остром отравлении алкоголем фиксируется на уровне метаболических сдвигов, сопровождающихся активацией процессов свободно-радикального окисления (Р<0,05). При этом ярко выраженного синдрома цитолиза не обнаруживается, что не противоречит мнению ряда исследователей (Хазанов А.И. и др., 1988; Окороков А.Н. и др., 1982). Вместе с тем, выявленное нарушение окислительно-восстановительных процессов в гепагоцитах (изменения активности ЛДГ, СДГ, НАДН-д/г) свидетельствует о потенциальной возможности развития более тяжелых поражений органа. В этом отношении полученные нами данные согласуются с литературными (Глотов H.A., и др., 1977; 1978; Сыров В.Н., 1988; Логинов A.C., и др. 1987; Шамота А.З., 1995).

Гепатозащитное действие оксиметилурацила и карсила проявлялось в положительном влиянии препаратов на метаболические наруше-

ния. Указанные вещества ограничивали накопление ТБК-реаги-рующих продуктов и/или усиливали их детоксикацию (Р<0,05). Судя по степени сохранения активности К,Na-АТФ-азы, препараты оказывали положительный эффект на целостность цитоплазматической мембраны (Р<0,05).

В целом, проведенные нами исследования показывают, что окси-метилурацил обладает гепатопротекторным действием при интоксикации полихлорированньши бифенилами и этанолом. При этом, оксиметилура-цил по целому ряду исследуемых нами показателей, оказывал более выраженный положительный терапевтический эффект, чем общеизвестный препарат карсил. Обсуждая возможные механизмы гепатозащитного действия оксиметилурацила необходимо отметить следующие его свойства. .

Оксиметилурацил, по данным В.А.Мышкина(1992-1995), обладает выраженным антиоксидантным действием, в основе которого лежит его антирадикальная активность. Препарат оказывает мощное ингиби-рующее действие на реакции перекисного окисления, проявляет выраженный антагонизм к радикалам кислорода в модельных системах различной сложности. Показана также его высокая антиоксидантная эффективность в условиях in vivo. Важным компонентом действия оксиметилурацила является его анаболический эффект со стимуляцией регенераторных процессов (Камилов Ф.Х., Лазарева Д.Н., Плечев В.В., 1992). Данное свойство является очень ценным при поражениях печени, особенно в фазе репарации. В определенной мере оксиметилурацил может усиливать процессы образования уридиловых нуклеотидов в печени с последующим усилением детоксикации различных соединений с использованием глюкуронилтрансферазного пути' коныогирования. Это тем более актуально, если учесть, что одним из путей детоксикации этанола и полихлорированных бифенилов является коныогирование с УДФ-глюкуроновой кислотой с последующим выведением образовавшихся парных уроновых соединений как с желчью, так и с мочой (Ляхович В.В., Цырлов И.Б., 1981).

Различный терапевтический эффект оксиметилурацила и карсила на использованных нами моделях, может быть связан с некоторыми различиями в их фармакологических свойствах. По данным О.С.Радбиля (1991), А.Д.Гордиенко (1990) карсил обладает мембраностабилизирую-щим действием, опосредованным регуляторным влиянием на уровень белкового синтеза и некоторым стимулирующим действием на репара-

тивную функцию соединительной ткани,а также сильным желчегонным эффектом.

Указанные особенности фармакологических свойств карсила, в некоторой степени объясняют его действие при патологии печени, обусловленной длительным введением полихлорированных бифенилов. Данное предположение не противоречит мнению П.Я.Григорьева и Э.П. Яковенко (1990), которые считают, что такой широко известный фитопрепарат как легалон (аналог - карсил) не эффективен при холеста-тических гепатитах.

Завершая анализ полученных данных, можно констатировать, что оксиметилурацил как при остром, так и хроническом воздействии полихлорированных бифенилов оказывает выраженный терапевтический эффект на метаболические функции и морфологическое состояние печени. Карсил, возможно, наиболее эффективен при применении его на более ранних этапах воздействия токсикантов и при менее тяжелых поражениях печени. На это, в частности, указывают данные полученные при изучении терапевтической эффективности оксиметилурацила и карсила в условиях форсированной алкоголизации.

ВЫВОДЫ

1. Оксиметилурацил обладает выраженным гепатопротёкторным действием при острой и хронической интоксикации полихлорированными

• ' бифенилами и алкоголизации.

2. Оксиметилурацил при остром отравлении полихлорированными бифенилами ограничивает развитие цитолитического синдрома: корректирует метаболические нарушения в гепатоцитах, нормализует уровень гликогена, препятствует накоплению жиров. Установлено положительное влияние препарата на ядерно-цитоплазматические отношения, отношение стромы к паренхиме, на содержание безъядерных ге-патоцитов.

3. Оксиметилурацил при хроническом отравлении полихлорированными бифенилами существенно ограничивает выраженность хол'естатиче-ского и цитолитического синдромов в фазу обратимых биохимических и функциональных проявлений.

4. Оксиметилурацил оказывает гепатозащитное действие в, условиях форсированной алкоголизации, выражающееся в более быстром восстановлении нарушенных метаболических сдвигов в органе.

5. Защитно-восстановительное действие оксиметилурацила при повреждении печени полихлорированными бифенилами и алкоголем определяется сочетанием его антиоксидантной активности и мембраноста-билизирующим эффектом.

6. Результаты выполненной работы позволяют рекомендовать оксимети-лурацил для дальнейшего экспериментального и клинического изучения в качестве гепатопротектора.

7. Разработанные модели поражения печени полихлорированными бифенилами могут быть рекомендованы для скрининга новых фармакологических средств обладающих гепатопротекторной активностью.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Оценка гепатотоксического действия совтола //Эколого-гигиенические проблемы Уральского региона.- Уфа,. 1995,- С. 338-343. (Соавторы: Бахтизина Г.З., МышкинВ.А., Варламова Т.Н.). -

2. Разработка лекарственных методов коррекции мембраноток-сического действия экотоксикантов // Тезисы докладов Международного симпозиума "Проблемы экологии в нефтепереработке и нефтехимии",-Баку, 1995. - С.35. (Соавторы: Мышкин В.А., Башкатов С.А., Наймушин A.C., Пахомов.Д.В.).

3. Перекисное окисление липидов и состояние биомембран при отравлении различными химическими веществами //Материалы конференции "Актуальные проблемы теоретической и прикладной токсикологии". - Санкт - Петербург, 1995. - С. 185. (Соавторы: Мыш-кин В.А., Башкатов С.А.).

4. Метилпроизводные 5-гидроксиурацила как средства коррекции постинтоксикационных повреждений //-Тезисы докладов III Российского национального конгресса "Человек и лекарство".-Москва, 1996.- С. 276. (Соавторы: Мышкин В.А., Вакарица А.Ф.).

5. Применение препарата оксиметацил для профилактики и лече1 ния химических повреждений печени //Тезисы докладов III Российского национального конгресса "Человек.и лекарство".--Москва, 1996.- С. 172. (Соавторы: Мышкин В.А., Зарудий Ф.А.).

6. Влияние оксиметилурацила и карсила на метаболические процессы в печени при отравлении крыс пентахлорбифенилом //Тезисы докладов IY Российского национального конгресса "Человек и лекарст-

во". - Москва, 1997.- С. 278. (Соавторы: Мыш-кин В.А„ Зарудий Р.Ф., Алехин В.Е.).

7. Коррекция алкогольных повреждений печени оксиметил-урацилом //Здравоохранение Башкортостана. - 1997. N1-2,- С.18-21. (Соавторы: Мышкин В.А.).

8. Влияние оксиметилурацила и карсила на метаболические и морфофункциональные показатели в печени при экспериментальной интоксикации полихлорированными бифенилами / /Эколого-гигиенические проблемы Уральского региона. - Уфа, 1997- С. 155-157. (Соавторы: Мышкин В.А., Камилов Ф.Х., Тимашева Г.В.).

9. Гепатозащитная эффективность оксиметилурацила и карсила при воздействии полихлорированными бифенилами / /Эколого-гигиенические проблемы Уральского региона. - Уфа, 1997- С. 158-159. (Соавторы: Мышкин В.А., Камилов Ф.Х.,).