Биохимические механизмы влияния полихлорированных бифенилов на морфофункциональное состояние сперматогенеза в экспериментальных условиях

Булыгин, Кирилл Владимирович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биохимические механизмы влияния полихлорированных бифенилов на морфофункциональное состояние сперматогенеза в экспериментальных условиях
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биохимические механизмы влияния полихлорированных бифенилов на морфофункциональное состояние сперматогенеза в экспериментальных условиях"

На правах рукописи

Булыгин Кирилл Владимирович

БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ВЛИЯНИЯ

ПОЛИХЛОРИРОВАННЫХ БИФЕНИЛОВ НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ СПЕРМАТОГЕНЕЗА В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ УСЛОВИЯХ

03.01.04 - Биохимия

2 тон 7010

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Уфа-2010

004608252

Работа выполнена на кафедре биологической и биоорганической химии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор Камилов Феликс Хусаинович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Гильманов Александр Жанович

доктор медицинских наук, профессор Радомская Виктория Марковна

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится » 2010 года в час. на заседании

диссертационного совета Д 208.006.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3.

Автореферат разослан «У» /-¿ЛН-иЛ—2010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор

Мирсаева Г.Х.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В связи с неблагоприятной демографической ситуацией в нашей стране разработана Концепция демографической политики Российской Федерации до 2025 года, в которой особое внимание отведено вопросам сохранения и восстановления репродуктивного здоровья мужчин [Указ Президента РФ № 1351 от 9 октября 2007]. В России доля семей, неспособных иметь детей, составляет 15-19% [Кулаков В.И., 2005]. При этом от 30% до 50% случаев семейного бесплодия обусловлено мужским фактором [Sigman М., 2007; Turner Т.Т., 2008]. При обследовании около 3000 мужчин, выполненным в научном Центре акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова РАМН, частота нарушений репродуктивной функции мужчин в структуре бесплодного брака составила 47,2% [Тер-Аванесов Г.В., 2005]. При этом в 22,8% случаев причина патоспермии остается неустановленной. Отмечается высокая частота эндокринопатий (14,8%), среди которых преобладает андрогенная недостаточность.

Результаты широкомасштабных исследований спермограмм здорового населения развитых стран также подтверждают факт снижения фертильности мужчин за последние 50 лет. Выявлено уменьшение объема эякулята в среднем с 3,4мл в 1940 году до 2,7 мл в 1990 году и концентрации гамет со 113 млн/мл до 66 млн/мл [Carlsen Е. et al., 1992]. Согласно популяционным исследованиям, скорость падения концентрации сперматозоидов в сперме здоровых мужчин составляет около 2% в год [Auger J. et al., 1995]. Похожие результаты получены при обследовании мужчин Великобритании, Греции, Италии, Германии, Бельгии, Канады и др. [van Waeleghem К., 1996; Pajarinen J., 1997; De Mouzon J., 1999].

Большинство авторов при попытке объяснения причин данного феномена отмечают связь выявленных тенденций с изменявшимися на протяжении прошлого века внешними факторами и, прежде всего, прогрессивным ростом уровня загрязнения окружающей среды [Hauser R., 2002; Swan S.H., 2003; Comhaire F., 2007]. В пользу этого предположения свидетельствует и тот факт, что абсолютное большинство экополлютантов появились именно в середине прошлого века и имеют искусственное антропогенное происхождение [Майст-ренко В.Н., 2004].

Особое место среди них занимают стойкие органические загрязнители, включающие как отдельный класс полихлорированные бифенилы (ПХБ). Всего, по некоторым оценкам, в мировых масштабах было произведено от 1 до 2 млн. тонн полихлорбифенилов [Майстренко В.Н., 2004]. Благодаря чрезвычайно высокой физико-химической стабильности и исключительным электроизоляционным свойствам, ПХБ в нашей стране использовались в виде технологических смесей «Совол» и «Совтол», предназначавшихся преимущественно для трансформаторов, конденсаторов, рефрижираторов [Ибатуллина Р.Б, 2002; Майстренко В.Н., 2004]. Сейчас их промышленный выпуск, осуществлявшийся на протяжении более половины прошлого столетия, запрещен международны-

ми соглашениями [Стокгольмская конвенция, 2001], однако эксплуатация содержащего хлорированные бифенилы оборудования продолжается до сих пор.

Благодаря высокой липофильности, хлорбифенилы обладают выраженной способность к аккумуляции в звеньях пищевой цепи и в последующем в органах с высоким содержанием липидов и интенсивным стероидогенезом, таких как головной мозг, надпочечники, яичники, яички [Bessmann А., 1981; Andric S.A., 2000; Feshin D.B., 2005]. В результате интоксикации ПХБ выявляются изменения нервной, иммунной, эндокринной, кардиоваскулярной и репродуктивной систем, развитие гепатотоксических, канцерогенных и других эффектов [Майстренко В.Н., 2004; Cooke P.S., 1996; Hauser R., 2002; Lee E., 2003; De Supriyo, 2004; Toft G., 2006].

Наименее изученными на сегодняшний день остаются патохимические механизмы токсического повреждения репродуктивной функции при отравлении хлорированными бифенилами. Имеющиеся в литературе сведения о механизмах токсического поражения стойкими органическими загрязнителями мужской половой системы неоднозначны, противоречивы и требуют углублённого исследования [Barone М.А., 1991; De Guise S., 1995; Thonneau P. et al., 2003; Shimada T. et al., 2003; Colborn T., 2004; Reddy P. et al., 2006; Acharya U.R. et al., 2006; Ishikawa T. et al., 2007; Murugesan P. et al., 2007]. Между тем, без детального и целостного представления о биохимических основах угнетения сперматогенеза при действии указанных экотоксикантов невозможны объективный анализ патогенетических механизмов и разработка на этой основе принципов рациональной терапии и профилактики интоксикаций.

Некоторые исследования показали, что полихлорбифенилы способны индуцировать в организме процессы свободнорадикального окисления [De Supriyo, 2004; Twarovski Т.Р., 2001, Safe S., 1995, McLean M.R., 2000, Murugesan P., 2007]. Вместе с тем известно также, что одним из важных патогенетических факторов снижения мужской фертильности может являться окислительный стресс, развивающийся в результате дисбаланса системы, генерирующей активные формы кислорода, и антиоксидантной защиты в тканях репродуктивной системы [Agarwal А., 2006].

Цель исследования. Охарактеризовать биохимические и морфофунк-циональные нарушения сперматогенной функции крыс при длительной интоксикации полихлорированными бифенилами в низких концентрациях.

Задачи исследования.

1. Оценить влияние интоксикации полихлорбифенилами в низких дозах на оплодотворяющую способность самцов, количественные и качественные параметры эякулята.

2. Выполнить динамическое морфометрическое исследование влияния «Совола» на тестикулярную ткань с изучением количественного состава клеток сперматогенеза и стероидогенеза.

3. Изучить тканевой уровень биохимических маркеров функционального состояния придатка яичка и акцессорных половых органов (семенные пузырь-

ки, вентральная простата) в условиях субхронической интоксикации «Сово-лом».

4. Охарактеризовать биохимический, прооксидантный статус, неферментативное и энзиматическое звенья антиоксидантной системы семенников и спермы животных, подвергшихся длительному отравлению полихлорбифени-лами в различных дозах.

Научная новизна. Показано, что ежедневная длительная интоксикация смесью ПХБ («Совол») в низких концентрациях в суммарных дозах 0,05 ЛД50 и 0,1 ДЦ50 приводит у самцов экспериментальных животных к снижению репродуктивного потенциала. Об этом свидетельствуют уменьшение числа забеременевших особей при спаривании экспонированных ПХБ самцов крыс с интакт-ными самками и количества крысят в каждом помете потомства, изменения тендерного баланса новорожденных с увеличением доли самок.

Впервые показано негативное влияние полихлорированных бифенилов на количество клеток Сертоли и интерстициапьных клеток Лейдига в семенниках, выраженность генерации гамет, а также на созревающие и сформировавшиеся сперматозоиды. Установлено дозозависимое снижение при действии ПХБ уровня сперматогоний, спрематоцитов и ранних сперматид в тестикулах, общей концентрации сперматозоидов с существенным возрастанием доли неподвижных гамет и половых клеток с колебательными движениями в эякуляте. Выявлено, что наиболее чувствительными звеньями гаметогенеза к действию ПХБ являются этапы ранней дифференцировки. Показано, что при подострой интоксикации низкими концентрациями ПХБ у самцов крыс наблюдается падение продукции тестостерона на фоне подавления секреции лютенизирующего и фолликулостимулирующего гормонов. При этом содержание в периферической крови ингибина В при непродолжительном действии поллютантов повышается, а в режиме субхронической интоксикации в суммарной дозе «Совола» 0,1 ЛД5о -падает.

Впервые выявлено, что поступление полихлорированных бифенилов вызывает заметное снижение функциональной активности акцессорных половых желез, участвующих в формировании спермоплазмы, а также существенные изменения метаболического статуса сперматозоидов, выделенных из эякулята. В тканях семенных пузырьков, эпидидимиса и вентральной простаты зафиксировано снижение уровня фруктозы, активностей нейтральной гликозидазы и кислой фосфатазы; в лизате сперматозоидов зарегистрировано увеличение содержания мочевой кислоты, уменьшение концентрации общего белка, альбумина, фруктозы, глюкозы, снижение активностей аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, лактатдегидрогеназы, щелочной фосфатазы.

Установлено, что экспозиция крыс ПХБ в низких концентрациях приводит в тестикулах к дозозависимому усилению липопероксидации и снижению физиологической антиокислительной защиты: падению содержания восстановленного глутатиона, аскорбиновой кислоты, а-токоферола, активности глутати-онпероксидазы, глутатионтрансферазы, супероксидцисмутазы, каталазы. Полученные данные указывают на центральную роль в патохимических механизмах

репротоксического действия полихлорбифенилов развитие окислительного стресса.

Научно-практическая значимость. Полученные экспериментальные данные о влиянии ПХБ на основные показатели репродуктивного статуса самцов существенно расширяют и дополняют имеющиеся представления о ведущих механизмах развития субфертильных состояний в условиях субхронических интоксикаций поллютантами. Совокупный анализ результатов морфомет-рического исследования тестикулярной ткани, изучение эндокринного статуса и качественно-количественных параметров спермограммы указывают на многоуровневый характер токсического действия хлорбифенилов и предопределяют направления дальнейших исследований. Выявленные особенности биохимического статуса тестикулярной ткани и сперматозоидов, полученных из эякулята экспериментальных животных, доказывают важнейшую роль нарушений оксидантного баланса в репротоксичности полихлорированных бифенилов и служат основой для выбора наиболее перспективных способов восстановления мужского репродуктивного потенциала.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Длительное воздействие поллютантов вызывает нарушение репродуктивного потенциала самцов крыс, проявляющееся снижением индексов фер-тильности, плодовитости, а также ассиметрию тендерного соотношения полученного от них потомства.

2. Структурной основой угнетения функций яичек крыс, подвергшихся субхронической интоксикации «Соволом» является уменьшение тестикулярных содержаний клеток стероидогенеза и сперматогенеза.

3. Длительное поступление полихлорбифенилов в низких дозах приводит к выраженным сдвигам функциональной активности акцессорных половых органов, биохимического статуса тестикул, сперматозоидов, полученных из эякулята. Направленность и димамика их развития свидетельствуют о многоуровневом характере действия поллютанта и важной роли нарушений оксидантного статуса биологических тканей в патогенезе репродуктивной токсичности полихлорированных бифенилов.

Внедрение результатов исследования в практику. Результаты исследования используются в учебном процессе на кафедрах биологической и биоорганической химии, общей гигиены с экологией с курсом гигиенических дисциплин медико-профилактического факультета, мобилизационной подготовки здравоохранения и медицины катастроф ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Росздрава» (Уфа, 2010).

молекулярных биологов (Новосибирск, 2008), 6-й Международной медицинской выставке «Мужское здоровье и долголетие» (Москва, 2008), 6-й Международной Германо-Российской конференции «От Ильи Мечникова и Пауля Эрли-ха к современным достижениям медицинской науки» (Санкт-Петербург, 2008), Всероссийской конференции, посвященной 80-летию со дня рождения профессора Р.И. Лифшица «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» (Челябинск, 2009), совместном заседании кафедр биологической и биоорганической химии ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава», общей гигиены с экологией с курсом гигиенических дисциплин медико-профилактического факультета ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава» (Уфа, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 21 работа, из них 5 статей в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК для публикации материалов диссертаций.

Структура и объем диссертации.

Диссертационная работа представлена на 148 страницах печатного текста, иллюстрирована 30 рисунками, содержит 24 таблицы и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных данных, заключения, выводов и списка литературы, включающего 59 отечественных и 211 иностранных источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования. Экспериментальные исследования выполнены на 250 белых беспородных крысах-самцах половозрелого возраста массой 180-220г. Животные содержались в одинаковых условиях, на стандартной диете в виварии. Эксперименты выполнены в соответствии с этическими нормами и рекомендациями о гуманном отношении к лабораторным животным, изложенными в Хельсинской декларации и «Правилах проведения работ.с использованием экспериментальных животных» [Касаткина Т.Б., 2000].

Интоксикацию вызывали воздействием отечественной смеси ПХБ «Со-вол», включающей 26% тетра-, 64,6% пента-, 9% гексахлорбифенилов и следовые количества гептахлорбифенилов. Токсикант вводили внутрижелудочно в растворе оливкового масла с помощью специального металлического зонда один раз в сутки в течение 30 и 60 суток.

Самцы крыс были разделены на 6 групп. Животные 2-й и 5-й групп подвергались интоксикации в ежесуточной дозе 5 мг/кг веса тела в течение 30-и и 60-и дней соответственно. Самцы из 3-й и 6-й групп получали токсикант в количестве 10 мг/кг'сут на протяжении 30-и и 60-и дней соответственно. Таким образом, суммарная токсическая экспозиция крыс 5-й и 6-й групп составляла 0,05 1Л350 (300 мг/кг) и 0,1 ЬО50 (600 мг/кг), установленных для «Совола». Крысам контрольных групп вводили оливковое масло в тех же объемах - по 1,0 мл: 1-й группе - в течение 30 дней, 4-й группе - в течение 60 дней.

На 15-е, 30-е, 45-е и 60-е сутки интоксикаци у крыс получали эякулят путем трансректальной электростимуляции семенного бугорка через слизистую прямой кишки [Рыжаков Д.И, 1980].

Оценку оплодотворяющей способности проводили по стандартной методике in vivo. Для этого животных, подвергшихся интоксикации, помещали в одну клетку с интактными самками (1 самца к двум самкам). Через неделю самок отсаживали. После родоразрешения производили подсчет потомства и определяли долю самцов в каждом помете.

По ходу эксперимента животных групп 2 и 3 умерщвляли под легким эфирным наркозом путем декапитации на 30-й день, а животных групп 5 и 6 -на 60-й день эксперимента, извлекали для исследования семенники, эпидиди-мис, семенные пузырьки и вентральную простату. Последующие процедуры подготовки тканей осуществляли на холоду.

Для решения поставленных задач при морфометрическом исследовании тестикулярной ткани проводили подсчет сперматогоний, сперматоцитов, спер-матид ранних и поздних, а также сперматозоидов [Кузнецова C.B., 2006].

В сыворотке крови определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) содержание тестостерона, эстрадиола, лютеинизирующего гормона, фолликулостимулирующего гормона с использованием стандартных тест-систем производства «DRG Diagnostics» (Германия), концентрацию ингибина В

- с применением тест-системы производства фирмы DSL (США).

В тканях акцессорных органов исследовали содержание фруктозы по методике Mann (1964), активности нейтральной гликозидазы и кислой фосфатазы

- колориметрическим методом [Paquin R., 1984]

В эякуляте и гомогенате семенников определяли содержание глутатиона восстановленного (ГВ) [Гаврилова А.Н., 1986; Карпищенко А.И., 1997], свободных сульфгидрильных групп (ССГ) [Bellomo G., 1990], аскорбата [Omaye S.T. et al., 1971], токоферола [Desai I.D., 1984], активности глутатионпероксида-зы (ГПО) [Гаврилова А.Н., 1986], глутатионредуктазы (ГР) [Carlberg I., 1974], глутатион-Б-трансферазы (ГТ) [Habig W.H., 1973], гамма-глутамилтрансферазы (ГГТ) [Orlowski M., 1965], катапазы [Королюк М.А., 1988] и супероксидцисму-тазы (СОД) - с помощью набора реактивов RANSOD (Randox Labor Ltd.).

Содержание соединений, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-РП), и общую антиокислительную активность (ОАА) изучали с использованием диагностических наборов производства ООО «Агат-Мед» (Россия) и по Клебанову Г.И. (1988) соответственно.

С помощью биохимического автоматического анализатора «Sapphir-400» в лизате сперматозоидов определяли содержание общего белка, альбумина, мочевой кислоты, фруктозы, глюкозы, активности аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы, лактатдегидрогеназы и щелочной фосфатазы.

Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета Statistica 6,0 фирмы StatSoft. В группах выборки оценивали следующие параметры: значения медианы, нижний и верхний квартили. Оценку достоверности различий осуществляли с использованием непараметрического критерия (U) Манна-Уитни с поправкой Бонферонни. Корреляционный анализ полученных в эксперименте данных проводили по Спирмену.

Результаты исследования и их обсуждение. Эксперименты по спариванию животных выявили заметное уменьшение численности самок, принесших приплод, после спаривания с самцами, получавшими токсикант. Причем гипо-фертильный эффект ПХБ проявлялся как при воздействии малых и больших доз, так и спустя 30 и 60 дней интоксикации. С учетом того, что срок формирования сперматозоидов составляет у грызунов около 40 дней можно предположить, что исследуемые токсиканты могут оказывать негативное влияние на оплодотворяющую способность самцов и на посттестикулярном уровне, на что указывают результаты тридцатидневного эксперимента, и на уровне собственно яичек, о чем свидетельствуют итоги двухмесячного отравления (рис.1).

индекс индекс

фертильности плодовитости

Рисунок 1. Индекс фертильности и индекс плодовитости самцов крыс, подвергшихся отравлению «Соволом» (в % к контролю) * здесь и далее - р<0,05 в сравнении с группой контроля.

Зафиксировано значительное падение общей численности потомства, полученного от подвергшихся отравлению «Соволом» самцов, достигающее при максимальной токсической нагрузке 34,8% от количества крысят в помете группы сравнения. Важно, что степень снижения данного параметра зависела от интенсивности и сроков отравления, поскольку зарегистрированы статистически значимые отличия между группами самцов, получавших одинаковую дозу в течение 30-и либо 60-и дней, а также между теми, кто получил ту же суммарную дозу полихлорбифенилов (0,05 ЛД50), но за различный промежуток времени.

Другим интересным наблюдением оказалось достоверное увеличение доли мужского потомства до 57,7% самцов, получавших токсикант по 5 мг/кг*сут в течение 30 дней, и ее снижение до 40,0% при определении тендерного баланса помета от самцов, подвергшихся длительному воздействию поллютанта в большей дозе (рис.2).

30-й день

60-й день

□контроль ЕЗбмг'кгхсут И10 мг/кг х сут

Рисунок 2. Доля самцов в приплоде крыс, родившихся от экспони-рованнных «Соволом» крыс в дозах 5 и 10 мг/кг'сут (в % к контролю)

Динамическое изучение параметров эякулята этих животных, получаемого нами через каждые 15 дней наблюдения, показало, что тенденция к уменьшению общего содержания гамет в единице объема спермы обнаруживается уже в ранние сроки наблюдения, а по истечению 45 и 60 суток интоксикации концентрация сперматозоидов статистически значимо снижается независимо от суточных дозировок (рис.3). Это является одной из причин выявленного в условиях субхронического отравления ПХБ угнетения оплодотворяющей способности самцов in vivo.

%110

15 день 30 день 45 день

—•—S мг/кг х сут —♦"10 мг/кг х сут

60 день

Рисунок 3. Общая концентрация сперматозоидов в эякуляте крыс при субхронической интоксикации «Соволом» в дозах 5 и 10 мг/кг'сут (в % к контролю)

Угнетение оплодотворяющей способности зафиксировано и при воздействии поллютанта в течение месяца, когда количественные показатели спермо-граммы не отличались от контроля.

% 100 80 60 40 20

15 день 30 день 45 день 60 день

Поступательные □Колебательные □Неподвижные

исходный уровень

Рисунок 4. Доли сперматозоидов крыс по подвижности при ежедневной интоксикации «Соволом» в дозе 10 мг/кг (в % к контролю)

Однако анализ качественных характеристик эякулята выявил грубые нарушения двигательной активности спермиев в эти сроки наблюдения. Уже к 15-му дню отравления относительное содержание сперматозоидов с поступательной двигательной активностью достоверно снижалось до 55,2% против контрольного значения 68,8%, а после двух месяцев воздействия ПХБ мужских гамет, способных к активному движению in vitro, не выявлялось (рис.4). Сопоставление этих данных приводит к выводу о том, что ПХБ обладают прямыми спермотоксическими свойствами, то есть в механизмы реализации их действия вовлечены посттестикулярные эффекты. В целом эти данные согласуются с результатами других исследователей, использовавших в своих работах иные промышленные смеси ПХБ [Абдуллина Г.М., 2009; Murugesan P. et al., 2007]. %

100 •

□ Сперматогонии Ш Сперматиды ранние ■ Сперматозоиды

■ Сперматоциты 0 Сперматиды поздние

Рисунок 5. Содержание сперматогоний, сперматоцитов, сперматид ранних,

сперматид поздних и сперматозоидов в семенниках крыс, подвергшихся субхронической интоксикации «Соволом» в дозе 10 мг/кг«сут на 60-е сутки

(в % к контролю)

полученным в ходе исследования мазков тестикулярной ткани, пероральное поступление ПХБ, особенно, длительное и в больших дозах приводит к заметному статистически значимому снижению содержания сперматогоний, сперматоци-тов, сперматид и собственно сперматозоидов (рис.5).

Кроме того, по истечению двухмесячной интоксикации «Соволом» зафиксировано значительное уменьшение количества клеток Сертоли, называемых буквально в зарубежной литературе «няньками» сперматогенеза [Сп5\тоМ М.Б., 1995], и клеток Лейдига, отвечающих за синтез андрогенов (табл.1). Это свидетельствует о цитотоксическом действии «Совола» как на родоначальные клетки спермопоэза, клетки всех этапов дифференцировки мужских гамет, так и на процессы стероидогенеза.

Выявленное в последующем в образцах крови этих животных падение уровня половых стероидов, очевидно, нужно признать следствием токсического поражения эндокриноцитов тестикулярной ткани крыс.

Таблица 1 - Содержание клеток Сертоли и клеток Лейдига в семенниках крыс, подвергшихся субхронической интоксикации «Соволом» в суточных дозах 5 и 10 мг/кг, п=10

Доза Дни интоксикации Клетки Сертоли Клетки Лейдига

5 мг/кг-сут 0 день (1) 18,0 [15,0;22,0] 19,0 Г16,0;23,01

30 день (2) 17,0 [14,0;21,0] р,.2=0,3477 18,0 [15,0;22,0] Рь2=0,3691

60 день (3) 13,0 [10,0;16,0] р,.з=0,0079 р2.з=0,0199 12,0 [10,0;15,0] р,.з=0,0010 р2.з=0,0025

10 мг/кг*сут 0 день (4) 19,0 [16,0;23,01 21,0 [17,0;26,0]

30 день (5) 17,0 [14,0;21,0] р2.5=1,0000 Рз-5=0,0199 р4.,=0,1530 14,00 [11,0;17,0] р2.5=0,3691 р3.5=0,3691 р4-5.0,0028

60 день (6) 10,5 [9,0; 13,0] Рз.6=0,1530 р4-б=0,0002 р5-б=0,0009 6,5 [5,0;8,0] р3-б=0,0002 р4.б=0,0002 р5^=0,0002

При этом выраженная гипотестостеронемия обнаруживалась у всех животных, подвергшихся воздействию «Совола» в любых дозах. Сниженная сывороточная концентрация эстрадиола в отличие от андрогена выявлялась лишь в конечной точке наблюдения - на 60-е сутки экспериментального отравления полихлорбифенилами в обеих дозах (рис.6).

□ группа 2 ■ группа 5 □ группа 3 □ группа 6

Рисунок 6. Содержание гормонов в сыворотке крови самцов крыс на 30-й и 60-дни субхронической интоксикации при воздействии «Совола» в различных

дозах (в % к контролю)

Кратковременное воздействие ПХБ сопровождалось заметным подъемом уровня ингибина В, основным продуцентом которого являются клетки Сертоли. Увеличение дозы и длительности воздействия ПХБ приводило к падению этого гликопротеина. Сывороточные уровни ФСГ и ЛГ в крови крыс с гипотестосте-рон- и гипоингибинемией, против ожидания, не возрастали, а, либо, в ранние сроки интоксикации малыми дозами не отличались от уровня контроля, либо заметно падали с увеличением дозы токсиканта или длительности его воздействия. Согласно результатам, полученным в условиях применимой нами модели интоксикации, имеются основания полагать, что первоосновой отсутствия реакции гипофиза на падение уровня гормонов тестикулярного происхождения является более глубокое повреждение хлорбифенилами клеток, продуцирующих гонадотропины.

Обнаруженное резкое снижение содержания в семенных пузырьках фруктозы, активностей нейтральной а-гликозидазы в эпидидимисе и кислой фосфа-тазы в вентральной простате (рис.7) однозначно указывают на серьезное поражение тканей указанных органов, участвующих в сохранении и созревании сперматозоидов и образовании эякулята в момент семяизвержения. Выявленные количественные сдвиги свидетельствуют о глубоком нарушении метаболического статуса этих органов, что вероятно является следствием как ослабления андрогенной стимуляции, так и прямым токсическим действием ПХБ. В литературе имеются сообщения о накоплении последних в тканях репродуктивной системы [Andric S.A., 2004]. Особенно в высоких концентрациях бифенилы аккумулируются тканями эпидидимиса [Абдуллина А.З., 2009], богатого содержанием липидов.

100 80 60 40 20 О

Рисунок 7. Содержание фруктозы в семенных пузырьках, активности гликози-дазы в эпидидимисе и кислой фосфатазы в простате крыс на 30-й и 60-й день субхронической интоксикации «Соволом» в различных дозах (в % к контролю)

Биохимический анализ лизата отмытых сперматозоидов выявил существенное влияние ПХБ на ряд отдельных параметров. Наиболее заметные сдвиги обнаружены в отношении общего белка и альбумина, уровень которых заметно снижался в условиях высокой токсической экспозиции. Концентрация мочевой кислоты, напротив, с увеличением токсической нагрузки, возрастала до 1,5 раз, что, вероятно, объясняется усилением процессов катаболизма нуклеиновых кислот и пуриновых нуклеотидов (табл.2).

В лизате сперматозоидов также постепенно падали под действием возрастающих доз ПХБ активности АлТ, АсТ и ЩФ. В целом выявленные сдвиги биохимического статуса сперматозоидов указывают на глубокое нарушение клеточного метаболизма сперматозоидов, в частности нуклеинового, белкового

и энергетического обменов. %

140 -120 -100 -80 -6040 -20 -0 -

Рисунок 8. Динамика ферментативной активности аланинаминотранс-феразы, аспартатаминотрансферазы, лактатдегидрогеназы и щелочной фосфатазы в эякуляте крыс при субхронической интоксикации «Соволом»

(в % к контролю)

гликозидаза фруктоза кислая

фосфатаза

□группа 2 Нгруппаб ПЗгруппа 3 ^группа 6

АлТ АсТ ЛДГ Щф

□ группа 2 ■ группа 5 □ группа 3 0 группа 6

Таблица 2 - Содержание общего белка, альбумина и мочевой кислоты в эякуляте крыс на 30-й и 60-й дни субхронической интоксикации «Соволом» в различных дозах, п=10

П оказатели Сроки исследования

30-й день

Контроль (1) Группа 2 Группа 3

46,57 62,24 55,17

Общий белок, г/л [38,93;55,13] [50,66;75,40] Рь2=0,0191 [44,31;67,60] Р!.з=0,1509 Рг-з=0,2899

5,19 5,73 5,18

Альбумин, г/л [4,28;6,22] [4,64;6,97] Р1-2=0,4962 [4,24;6,25] Р1_з=0,0587 Р2-з=0,1987

10,98 10,34 12,40

Мочевая кислота, мкмоль/л [8,68;13,64] [8,07;13,00] р,.2=0,7054 [9,99;15,16] рьз=0,2899 р2.з=0,1509

60-й день

Контроль (4) Группа 5 Группа 6

43,53 36,88 30,11

Общий белок, г/л [36,10;51,89] рЬ4=0,5967 [30,42;44,17] р2.5=0,0008 Рз.5=0,0040 р4.5=0,0963 [24,64;36,31] Рз.6=0,0003 р4.«=0,0081 Р5.6=0,0963

5,49 4,63 3,81

Альбумин, г/л [4,56;6,55] Рь4=0,7054 [3,78;5,60] р2.5=0,0155 Рз-5=0,0963 р4.5=0,0024 [3,08;4,65] Рз-6=0,4056 р4.6=0,0081 р5.6=0,4273

10,44 15,45 16,32

Мочевая кислота, мкмоль/л [8,32;12,88] Рм=0,7054 [12,35;19,02] р2.5=0,0081 Рз-5=0,0963 р4.5=0,0081 [12,87;20,32] рз.«=0,0493 Р4-б=0,0051 р5.6=0,7054

Уровень основных энергетических субстратов сперматозоидов - фруктозы и глюкозы менялся по-разному. В условиях воздействия высоких доз бифе-нилов их содержание в сперматозоидах крыс снижалось до 74,7% и 26,6% по отношению к контрольным значениям соответственно. Это сопровождалось снижением активности одного из ферментов гликолиза - лактатдегидрогеназы (рис.8).

Таблица 3 - Содержание ТБК-РП в семенниках и эякуляте крыс при субхронической интоксикации «Соволом» в различных дозах (мкмоль/г ткани, п=10)

Группа Семенник Эякулят

Контроль (1) 2,90 [2,40;3,48] 3,14 [2,53;3,90]

Группа 2 3,75 [3,04;4,57] р,.2=0,0412 5,21 [4,26;6,37] Pi.2=0,0010

Группа 3 5,51 [4,50;6,66] р,.з=0,0002 р2.з=0,0081 6,26 [5,01 ;7,69] р,.3=0,0002 Р2-з=0,1305

Контроль (4) 2,80 [2,33;3,34] р,.4=0,7054 3,01 [2,30;4,26] Pi_4=0,9097

Группа 5 7,48 [6,13;9,02] р2.5=0,0002 Рз-5=0,0283 р4.5=0,0001 6,60 [5,28;8,30] р2.5=0,0756 Рз-5=0,2413 р4.5=0,0005

Группа 6 7,29 [5,89;8,90] рз.6=0,0283 р4.6=0,0001 Р5-б=0,7054 9,98 [7,89;12,68] Рз.6=0,0024 р4.6=0,0001 р5.6=0,0081

Окислительный стресс как типовой патохимический феномен лежит в основе самых различных патологических процессов, в том числе, при широком круге заболеваний мужской половой системы [Меньшикова Е.Б., 2008; Aitken Т., 1998; Agarwal А., 2006]. Изучение содержания продуктов ПОЛ, отражающих интенсивность липопероксидации, показало увеличение концентрации ТБК-РП как в семенниках, так и в эякуляте (табл.3).

Одновременное определение уровня отдельных компонентов и ферментов, участвующих в нейтрализации свободных радикалов, следует, что перо-ральное введение «Совола» приводит к развитию резкого дисбаланса между прооксидативными процессами и антиокислительными возможностями как в тестикулярной ткани, так и в эякуляте (рис.9,10).

5мг/кгхсуг Юмг/ю-хсуг 5мг/кг1сут Юмг/кгкуг

семенники эякулят

Рисунок 9. Влияние субхронической интоксикации «Соволом» на содержание аскорбата, токоферола, глутатиона восстановленного (ГВ) и свободных сульф-гидрильных групп (ССГ) в семенниках и эякуляте крыс (в % к контролю)

мг/ю хсут 10 мг/етхсут 5 мг/кг хсуг 10 мг/ктхсуг

Рисунок 10. Активность ГПО, ГТ, ГР, ГГТ в семенниках и эякуляте крыс на 60-й день субхронической интоксикации «Соволом» в различных дозах

(в % к контролю)

Воздействие токсиканта по мере увеличения дозы и длительности приводит в итоге к резкому увеличению содержания вторичных продуктов липопе-роксидации, снижению общей антиокислительной активности, уменьшению концентрации витаминов С, Е, ГВ, ССГ, угнетению СОД, каталазы, ГПО, ГТ, ГР и ГГТ

В то же время при детальном изучении развития этих сдвигов выявляются некоторые характерные отличия в целом соответствующие общебиологическим закономерностям. Антиоксиданты (АО) прямого действия содержатся в эякуляте в значительно меньших количествах по сравнению с тестикулярной тканью, а уровень активности антиоксидантных ферментов заметно ниже. Как следствие, эякулят обладает менее мощными антиокислительными ресурсами, чем яички и признаки развития окислительного стресса в нем появляются раньше и при меньшей интенсивности воздействия ксенобиотика. Эти особенности объясняют и большую устойчивость клеточных систем гонад к токсиканту, тогда как морфометрические и, особенно, функциональные характеристики мужских гамет ухудшаются в самые ранние сроки наблюдения. Кроме того, в гомогенатах яичек крыс, подвергшихся отравлению «Соволом» в дозе 5 мг/кг'сут в течение 30 дней было зафиксировано достоверное увеличение активностей каталазы и ГПО (рис.11), чего не наблюдалось в эякуляте.

Эти отличительные особенности, безусловно, закономерны, поскольку антиоксидантная система половой клетки является в значительной степени редуцированной в сравнении с клетками сперматогенного эпителия гонад. При этом сперматозоиды весьма подвержены атакам свободных радикалов в силу особенно высокого содержания в составе плазматических мембран полиненасыщенных жирных кислот, что обусловлено спецификой биологической роли гамет.

5 мг/кг х сут 10 мг/кг х сут 5 мг/кг х сут 10 мг/кг х сут

семенники эякулят

Рисунок 11. Активность глутатионпероксидазы и каталазы в семенниках и эякуляте крыс на 30-й день субхронической интоксикации «Соволом» в различных дозах (в % к контролю)

Важным источником АО прямого действия и ферментов обезвреживания свободных радикалов для спермы являются антиоксиданты, содержащиеся в секрете добавочных половых желез и, особенно, эпидидимиса, снабжающего эякулят особой уникальной изоформой ГПО 5-го типа. Однако, функциональные активности семенных пузырьков, вентральной простаты и эпидидимиса в условиях отравления бифенилами также снижаются, что влечет за собой более глубокий дефицит антиоксидантных ресурсов спермы экспериментальных животных и развитие окислительного стресса. В основе его развития при интоксикации ПХБ может лежать AhR-опосредованная активация экспрессии генов семейства цитохромов CYP1A1, 1А2, способных генерировать АФК в процессе окисления, эндогенных и экзогенных субстратов (в т.ч. низкохлорированные ПХБ) [Safe S., 1995; Twarovski L.W., 2001]. Образующиеся при этом моно- и дигидроксильные метаболиты могут спонтанно, либо ферментативно окисляться до семихинонов и хинонов [McLean M.R., 2000]. АФК могут также формироваться при дальнейших окислительно-восстановительных превращениях ПХБ-хинонов. Наконец, ПХБ могут реагировать с Н202 с образованием наиболее реакционно способного гидроксил-радикала [Murugesan Р., 2007]. Активированные кислородные метаболиты способны атаковать молекулы липидов, ДНК, белков и, в меньшей степени, углеводов, что приводит к инактивации и потере нативных функций соответствующих биологически активных соединений [Зен-ков Н.К., 2001; Панкин В.З., 2005; Дубинина В.А., 2006; Меныцикова Е.Б., 2008; Arunakaran Р., 2008].

Корреляционный анализ результатов исследования отдельных показателей крыс-самцов, подвергшихся максимальной токсической экспозиции - 10 мг/кг*сут смеси «Совол» в течение 2-х месяцев. Проведенный непараметрический анализ по Спирмену спермограммы, сперматограммы и биохимических параметров семенников выявил, что уровень конечных продуктов липоперок-сидации связан обратной связью с общей концентрацией сперматозоидов в эякуляте (г=-0,9151; р=0,0002), относительным содержанием в тестикулярной ткани сперматогоний (г=-0,6986; р=0,02426), сперматоцитов (г=-0,6945; р=0,0258), сперматид поздних (г=-0,7012; р=0,0238), клеток Сертоли (г=-0,6504; р=0,0417) и Лейдига (г=-0,6994; р=0,0243). Эти статистические данные под-

тверждают высказанные нами ранее предположения о ведущей роли активации пероксидативных процессов в патогенезе репротоксического действия поли-хлорированных бифенилов. Тесная положительная связь (г=0,9057; р=0,0003) выявлена между концентрацией ТБК-РП в семенниках и долей неподвижных гамет в эякуляте экспериментальных животных. И напротив, обнаружена обратная зависимость относительного содержания спермиев, лишенных какой-либо двигательной активности от уровня как антиоксидантов прямого действия - восстановленного глутатиона (г=-0,6443; р=0,0443), аскорбата (г=-0,6322; р=0,0498), а-токоферола (г=-0,7902; р=0,0065), так и ферментной природы -СОД (г=-0,6930; р=0,0262), каталазы (г=-0,7720; р=0,0088), ГПО (г=-0,6626; р=0,0368), ГТ (г=-0,7112; р=0,0210).

С величиной тканевой концентрации аскорбиновой кислоты, необходимой в процессе стероидогенеза, взаимосвязаны содержание в тестикулярной ткани клеток Лейдига (г=0,7976; р=0,0057), сывороточные уровни синтезируемого ими тестостерона (г=0,8545; р=0,0016) и стимулирующего их функциональную активность лютеинизирующего гормона (г=0,7212; р=0,0185). Количество клеток Лейдига, в свою очередь, тесно коррелировало с содержанием в крови тестостерона (г=0,7976; р=0,0057), ЛГ (г=0,7362; р=0,0151) и эстрадиола (г=0,6564; р=0,0392) и активностью СОД (г=0,7792; р=0,0078), ГПО (г=0,7239; р=0,0179) и уровнем ГВ (г=0,8282; р=0,0030).

Уровень ФСГ оказался связанным прямой корреляцией с общей концентрацией сперматозоидов в эякуляте, со всеми изученными показателями анти-оксидантной системы тестикулярной ткани, с содержанием в ней сперматого-ний, сперматоцитов, клеток Сертоли. Отрицательная связь выявлена между уровнем ФСГ в крови и долей неподвижных мужских половых клеток (г=-0,9240; р=0,0001).

В семенниках крыс, подвергшихся в течение 60 суток интоксикации ПХБ в ежесуточной дозе 10 мг/кг уменьшение содержания клеток Сертоли коррелировало со снижением продуцируемого ими ингибина В (г=0,8997; р=0,0003), что в совокупности с другими сведениями свидетельствует о нарушениях обратной связи в системе гипофизарного контроля тестикулярных функций и является косвенным подтверждением прямого поражения ткани гипофиза при отравлении ПХБ. Тесно также связан со всеми изучаемыми показателями уровень тестостерона, что является абсолютно закономерным фактом и доказывает важность дисгормональных сдвигов при интоксикации ПХБ в развитии субфер-тильности крыс-самцов.

Другим параметром с большим количеством сильных корреляционных связей с показателями морфофункционального состояния сперматогенеза и гормонального статуса оказался ГВ. Его тестикулярная концентрация сильно коррелирует с общей концентрацией и долей неподвижных сперматозоидов (г=0,8424; р=0,0022), (г=-0,6443; р=0,0443) соответственно, содержанием в ткани семенников сперматоцитов, клеток Сертоли, клеток Лейдига, сывороточными уровнями тестостерона, эстрадиола, ФСГ, ЛГ, ингибина В. Все это позволяет прийти к выводу, что механизмы поддержания межорганного оборота и ре-

генерации восстановленного глутатиона, занимающего центральное место в ан-тиоксидантной системе, имеют важнейшее значение для адекватного функционирования мужской репродуктивной системы в норме и определяет глубину адаптационных резервов тканей к воздействию агрессивных внешних факторов и, прежде всего, ксенобиотков. Наличие тесных корреляционных взаимосвязей между уровнем отдельных компонентов антиоксидантной системы, оксидант-ного статуса и большинством морфофункциональных параметров репродуктивной системы экспериментальных животных при действии ПХБ указывает на то, что патогенетической основой развития субфертильности является интенсификация свободнорадикальных процессов в тканях мужской половой системы самцов.

Таким образом, сопоставление результатов экспериментального исследования влияния субхронической интоксикации ПХБ на репродуктивный статус самцов, гормональный профиль, различные морфофункциональные и биохимические параметры тестикул и эякулята, позволяют прийти к заключению о том, что негативное действие ксенобиотиков данного класса на мужскую половую систему опосредовано цитотоксическими эффектами поллютантов, патохими-ческой основой которых является развитие окислительного стресса в мужских гаметах и тканях, где происходит их образование, созревание и осуществляется их высокоспециализированная биологической функции переноса генетической информации для самовоспроизведения, как конечной цели существования вида.

ВЫВОДЫ

1. Длительное отравление крыс полихлорированными бифенилами в суммарных дозах 0,05 ЛД50 и 0,1 ЛД50 приводит к выраженному угнетению оплодотворяющей способности самцов in vivo, достигающего при двухмесячном поступлении «Совола» в дозе 10 мг/кг»сут пятикратного снижения количества успешных исходов беременностей интактных самок. При этом наблюдается значительное уменьшение общей численности потомства, полученного от самцов, подвергшихся воздействию ксенобиотика. Поступление ПХБ в организм самцов оказывает влияние на тендерный состав их потомства: в условиях низкой токсической нагрузки превалируют новорожденные мужского пола и, наоборот, при длительной интоксикации ПХБ в большей дозе (10 мг/кг'сут) - особи женского пола.

2. Кратковременная интоксикация ПХБ низкой интенсивности оказывает преимущественное влияние на функциональный статус сперматозоидов, существенно подавляя их двигательную активность. Продолжительное введение низких доз полихлорбифенилов приводит к более грубым функциональным нарушениям, а также к заметному падению спермальной концентрации мужских гамет к 45-м и 60-м суткам экспериментального отравления. Структурной основой ухудшения параметров эякулята под действием «Совола» является угнетение ранних этапов сперматогенеза, что проявляется последовательным уменьшением содержания сперматогоний, сперматоцитов, сперматид и незрелых форм сперматозоидов в тестикулярной ткани крыс.

3. Патохимической основой гонадотоксичности полихлорированных би-фенилов является окислительный стресс, развивающийся в яичках экспериментальных животных. С увеличением дозы и продолжительности воздействия ксенобиотиков в тестикулярной ткани крыс наблюдается накопление продуктов липопероксидации, снижение общей антиокислительной активности в результате угнетения активностей супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионперок-сидазы, глутатионтрансферазы, глутатионредуктазы, гамма-глутамилтрансферазы и истощения неферментативного звена антиоксидантной системы в виде снижения тканевого содержания глутатиона восстановленного, а-токоферола, аскорбата и свободных сульфгидрильных групп.

4. Уменьшение количества интерстициальных клеток Лейдига в ткани яичек крыс, подвергшихся субхроническому отравлению «Соволом», сопровождается снижением сывороточных концентраций тестостерона и эстрадиола. В условиях длительного воздействия токсиканта наблюдается падение тестикулярной концентрации клеток Сертоли и содержания в крови ингибина В. Отсутствие адекватной реакции гипофиза на развивающуюся гипоандрогенемию с последующим падением выработки гонадотропинов (ЛГ и ФСГ) свидетельствует о влиянии ПХБ на мужскую половую систему и на претестикулярном уровне.

5. Отравление «Соволом» сопровождается нарушением функциональных свойств, на что указывает угнетение в соответствующих тканях активности а-гликозидазы (в эпидидимисе), кислой фосфатазы (в вентральной простате) и снижение содержания фруктозы (в семенных пузырьках). Субхроническое воздействие полихлорированных бифенилов приводит к нарушению биохимических параметров сперматозоидов: уменьшению содержания общего белка, альбумина, фруктозы, глюкозы, снижению активности аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, лактатдегидрогеназы, щелочной фосфатазы, приросту уровня мочевой кислоты, свидетельствующих об изменениях в мужских половых клетках различных видов обмена веществ с превалированием катабо-лических процессов.

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Влияние полихлорированных бифенилов на оплодотворяющую способность крыс в экспериментальных условиях / Э.Ф. Аглетдинов, Ф.Х. Камилов, Е.К. Алехин, О.Н. Шевантаева, К .В. Булыгин // Морфологические ведомости. -2008. - № 2. - С. 205-207.

2. Патохимические механизмы тестикулярной токсичности стойких органических загрязнителей / Ф.Х. Камилов, Е.К. Алехин, Э.Ф. Аглетдинов, К.В. Булыгин. Л.О. Макашева // Медицинская наука и образование Урала. - 2008. - № 6. - С. 44-46.

3. Изучение гонадотоксических эффектов полихлорированных бифенилов в условиях экспериментального отравления крыс-самцов / Э.Ф. Аглетдинов, Ф.Х. Камилов, Е.К. Алехин, М.Г. Романцов, К.В. Булыгин. Л.О. Макашева // Антибиотики и химиотерапия. - 2008. - Т. 53, № 7-8. - С. 15-18.

4. Гонадотоксическая активность полихлорированных бифенилов в условиях экспериментального отравления ксенобиотиками / Э.Ф. Аглетдинов, Ф.Х. Каминов, Е.К. Алехин, К.В. Булыгин. Л.О. Макашева // Вестник Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова. - 2008. - № 3 (28). - С. 183-187.

5. Состояние антиоксидантной системы эякулята крыс в условиях субхронической интоксикации бифенилами / Э.Ф. Аглетдинов, К.В. Булыгин. Л.О. Макашева, Г.М. Абдуллина, Е.К. Алехин, Ф.Х. Камилов // Вестник Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова.-2009.-№2(31).-С. 142-145.

6. Хабиров, Р.Э. Общая антиокислительная защита репродуктивных органов крыс, подвергнутых интоксикации соволом / Р.Э. Хабиров, К.В. Булыгин // Материалы IV Всероссийской университетской научно-практической конференции молодых ученых и студентов. - Тула, 2005. - С. 238.

7. Булыгин. К.В. Свободно-радикальные процессы в репродуктивных органах крыс-самцов в условиях подострого отравления соволом / К.В. Булыгин // Вопросы теоретической и практической медицины: материалы 70-й юбилейной Республиканской итоговой научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием. - Уфа, 2005. - С. 33-35

8. Аглетдинов, Э.Ф. Про- и антиоксидантный статус тканей репродуктивных органов крыс-самцов при экспериментальной интоксикации полихлорбифени-лами / Э.Ф. Аглетдинов, Р.Э. Хабиров, К.В. Булыгин // Вопросы теоретической и практической медицины: материалы 71-ой итоговой Республиканской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием. -Уфа, 2006. - С. 257-258.

9. Влияние полихлорированных бифенилов на оксидантный статус тканей репродуктивных органов самцов крыс / Э.Ф. Аглетдинов, К.В. Булыгин. Р.Э. Хабиров, Л.О. Макашева // Научный прорыв-2007: сборник научных трудов конференции ученых Республики Башкортостан, посвященной Году 450-летия Единства Башкортостана и России, 75-летию БГМУ, Дню Республики. - Уфа, 2007. - С. 6-8.

10. Аглетдинов, Э.Ф. Тестикулярные эффекты подострой интоксикации поли-хлорбифенилами в эксперименте / Э.Ф. Аглетдинов, К.В. Булыгин. Л.О. Макашева // Вестник Российской военно-медицинской академии. - 2008. - № 3 (23): прил. 2 (ч. 1): Окружающая среда и здоровье человека: Второй Санкт-Петербургский экологический форум. - С. 49.

11. Влияние полихлорированных бифенилов на оплодотворяющую способность крыс в экспериментальных условиях / Э.Ф. Аглетдинов, Ф.Х. Камилов, Е.К. Алехин, К.В. Булыгин // Медицинский вестник Башкортостана. - 2008. - Т. 3, № 2, прил.: Морфофункциональные аспекты норы и патологии: материалы Российской межрегиональной конференции с международным участием. - С. 8-11.

12. Макашева, Л.О. Антиоксидантный статус тестикулярной ткани при отравлении полихлорированными бифенилами / Л.О. Макашева, Э.Ф. Аглетдинов, К.В. Булыгин // Вопросы теоретической и практической медицины: материалы

73-й итоговой Республиканской научной конференции студентов и молодых ученых. - Уфа, 2008. - Т. 2. - С. 154.

13. Сперматогенез в условиях экспериментальной интоксикации полихлорбифенилами / Э.Ф. Аглетдинов, К.В. Булыгин. Л.О. Макашева, Ф.Х. Камилов // IV съезд Российского общества биохимиков и молекулярных биологов: сборник материалов. - Новосибирск, 2008. - С. 420.

14. Состояние системы глутатиона печени крыс в условиях интоксикации бифенилами / Э.Ф. Аглетдинов, К.В. Булыгин. Л.О. Макашева, Ф.Х. Камилов // IV съезд Российского общества биохимиков и молекулярных биологов: сборник материалов. - Новосибирск, 2008. - С. 464.

15. Булыгин, К.В. Нарушения сперматогенной функции крыс в условиях подострой интоксикации полихлорбифенилами / К.В. Булыгин. Э.Ф. Аглетдинов, Л.О. Макашева // Мужское здоровье и долголетие: материалы 6-ой Международной медицинской выставки. - М., 2008. - С. 28.

16. Макашева, Л.О. Некоторые особенности состояния антиоксидантного статуса тканей семенников в условиях подострого отравления бифенилами / Л.О. Макашева, Э.Ф. Аглетдинов, К.В. Булыгин // Мужское здоровье и долголетие: материалы 6-ой Международной медицинской выставки. - М., 2008.-С. 65.

17. Динамическое исследование сперматогенеза крыс в условиях отравления стойкими органическими загрязнителями / К.В. Булыгин. Э.Ф. Аглетдинов, Л.О. Макашева, Г.М. Абдуллина, Ф.Х. Камилов // Окружающая среда и здоровье: III Всероссийская научно-практическая конференция молодых ученых и специалистов. - М., 2009 - С.

18. Некоторые особенности состояния антиоксидантного статуса тканей семенников в условиях подострого отравления бифенилами / Л.О. Макашева, Э.Ф. Аглетдинов, К.В. Булыгин. Г.М. Абдуллина, Ф.Х. Камилов // Окружающая среда и здоровье: III Всероссийская научно-практическая конференция молодых ученых и специалистов. - М., 2009 - С.

19. Клеточный состав семенников крыс, подвергшихся подострому отравлению хлорированными бифенилами / Э.Ф. Аглетдинов, К.В. Булыгин. Л.О. Макашева, Ф.Х. Камилов // Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии: Всероссийская конференция, посвященная 80-летию со дня рождения профессора Р.И. Лифшица. - Челябинск, 2009. - С. 205-207.

20. Влияние полихлорбифенилов на состояние антиоксидантной системы эякулята крыс / Л.О. Макашева, Э.Ф. Аглетдинов, К.В. Булыгин. Г.М. Абдуллина // Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии: Всероссийская конференция, посвященная 80-летию со дня рождения профессора Р.И. Лифшица. - Челябинск, 2009. - С. 236-238.

21. Булыгин. К.В. Характеристика оксидантно-антиоксидантной системы эякулята самцов крыс при действии полихлорированных бифенилов / К.В. Булыгин // Медицинский вестник Башкортостана. - 2009. - № 6. - С. 63-67.

БУЛЫГИН КИРИЛЛ ВЛАДИМИРОВИЧ

БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ВЛИЯНИЯ ПОЛИХЛОРИРОВАННЫХ БИФЕНИЛОВ НА МОРФОФУНКЦИОИАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ СПЕРМАТОГЕНЕЗА В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ УСЛОВИЯХ

03.01.04 - Биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Лицензия № 0177 от 10.06.1996 г. Подписано в печать 27.04.2010 г. Бумага офсетная. Отпечатано на ризографе. Формат 60x84 1/16.Усл.-печ. л. 1,5. Уч.-изд. л. 1,7. Тираж 150 экз. Заказ № 125.

450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3, ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Булыгин, Кирилл Владимирович

Условные обозначения и сокращения

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные проблемы ухудшения мужского репродуктивного здоровья

1.2. Биохимические аспекты интоксикации полихлорироваными бифенилами

1.3. Роль процессов свободнорадикального окисления в развитии нарушений мужской репродуктивной системы

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объект исследования и экспериментальная модель интоксикации

2.2. Методы исследования

2.3. Статистическая обработка результатов исследования

ГЛАВА 3.

3.1. Влияние интоксикации ПХБ на фертильность самцов крыс, функциональные характеристики и общую концентрацию сперматозоидов в эякуляте крыс

3.2 Характеристика клеточного состава семенников при интоксикации полихлорбифенилами

3.3. Влияние полихлорированных бифенилов на некоторые параметры эндокринной системы

3.4. Интенсивность липопероксидации и состояние антиоксидантной системы тестикулярной ткани экспериментальных животных при субхронической интоксикации «Соволом»

3.5. Влияние субхронической интоксикации полихлорбифенилами на биохимические показатели эякулята

3.6. Взаимосвязи между биохимическими и морфофункциональными показателями, характеризующими репродуктивный статус экспериментальных животных в условиях субхронического отравления бифенилами. 97 Заключение ЮЗ ВЫВОДЫ 118 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ

АлТ - аланинаминотрансфераза

АМК - активные молекулы кислорода

АсТ - аспартатаминотрансфераза

АОЗ - антиокислительная защита

АОС - антиоксидантная система

АО - антиоксиданты

АФК - активные формы кислорода

ГВ - глутатион восстановленный

ГПО - глутатионпероксидаза

ГТ - глутатионтрансфераза

ГР - глутатионредуктаза

ГГТ - гамма-глутамилтрансфераза

ДЦ50 - доза, вызывающая гибель 50% животных

ЛДГ - лактатдегидрогеназа

ОАА - общая антиокислительная активность

ОС - оксидантный стресс

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ПХБ - полихлорированные бифенилы

СОД - супероксиддисмутаза

СОЗ - стойкие органические загрязнители

СРО - свободнорадикальное окисление

ССГ - свободные сульфгидрильные группы

ТБК-РП - продукты, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой

Т4-УДФ-ГТ - тироксин-уридиндифосфат-глюкуронилтрансфераза

ТХУ - трихлоруксусная кислота

ЩФ - щелочная фосфатаза

AhR - арилуглеводородный рецептор

ARE - антиоксидант-респонсивный элемент

XRE - ксенобиотик-респонсивный элемент

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биохимические механизмы влияния полихлорированных бифенилов на морфофункциональное состояние сперматогенеза в экспериментальных условиях"

Актуальность проблемы. Улучшение репродуктивного здоровья нации является одной из важнейших задач государства в области медико-социальной политики. За последнее десятилетие XX века уровень рождаемости в России снизился в 2 раза - с 17,2 до 8,5 рождений на 1000 жителей. Коэффициент суммарной рождаемости (число детей, приходящихся на одну женщину репродуктивного возраста) уменьшился с 2,2 до 1,2-1,3 [Демографические ежегодники, 1995-2008].

В связи с неблагоприятной демографической ситуацией в нашей стране разработана Концепция демографической политики Российской Федерации до 2025 года, в которой особое внимание отведено вопросам сохранения и восстановления репродуктивного здоровья мужчин [Указ Президента РФ № 1351 от 9 октября 2007].

В России доля семей, неспособных иметь детей, составляет 15-19% [Кулаков, 2005]. При этом от 30% до 50% случаев семейного бесплодия обусловлено мужским фактором [Turner, 2008; Sigman, 2009]. При обследовании около 3000 мужчин, выполненным в научном Центре акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова РАМН частота нарушений репродуктивной функции мужчин в структуре бесплодного брака составила 47,2% [Тер-Аванесов, 2000, 2004]. При этом в 22,8% случаев причина патоспермии остается неустановленной. Отмечается высокая частота эндокринопатий (14,8%), среди которых преобладает андрогенная недостаточность.

Результаты широкомасштабных исследований спермограмм здорового населения развитых стран также подтверждают факт снижения фертильности мужчин за последние 50 лет. Выявлено уменьшение объема эякулята с 3,4мл в 1940 году до 2,7 мл в 1990 году и концентрации гамет со 113 млн/мл до 66 млн/мл [Carlsen et al., 1992]. Близкие данные получены в других популяционных исследованиях, согласно которым, скорость падения концентрации сперматозоидов в сперме здоровых мужчин составляет около

2% в год [Auger et al., 1995]. Похожие результаты получены при обследовании мужчин Великобритании, Греции, Италии, Германии, Бельгии, Канады и др. [van Waeleghem, 1996; Pajarinen, 1997; De Mouzon, 1999].

Большинство авторов при попытке объяснения причин данного феномена отмечают связь выявленных тенденций с изменявшимися на протяжении прошлого века внешними факторами и, прежде всего, прогрессивным ростом уровня загрязнения окружающей среды [Hauser, 2002; Swan, 2003; Comhaire, 2007]. В пользу этого предположения свидетельствует и тот факт, что абсолютное большинство экополлютантов появились именно в середине прошлого века и имеют искусственное антропогенное происхождение [Майстренко, 2004].

Особое место среди них занимают полихлорированные бифенилы (ПХБ) как отдельный класс стойких органических загрязнителей. Всего, по некоторым оценкам, в мировых масштабах было произведено от 1 до 2 млн. тонн полихлорбифенилов [Майстренко, 2004]. Благодаря чрезвычайно высокой физико-химической стабильности и исключительным электроизоляционным свойствам, ПХБ в нашей стране использовались в виде технологических смесей «Совол» и «Совтол», предназначавшихся преимущественно для трансформаторов, конденсаторов, рефрижираторов [Ибатуллина, 2002; Майстренко, 2004]. Сейчас их промышленный выпуск, осуществлявшийся на протяжении более половины прошлого столетия, запрещен международными соглашениями [Стокгольмская конвенция, 2001], однако эксплуатация содержащего хлорированные бифенилы оборудования продолжается до сих пор.

Благодаря высокой липофильности, хлорбифенилы обладают выраженной способность к аккумуляции в звеньях пищевой цепи и в последующем в органах с высоким содержанием липидов и интенсивным стероидогенезом, таких как нервная ткань, надпочечники, яичники, яички [Bessmann, 1981; Andric, 2000; Feshin, 2005]. В результате интоксикации ПХБ выявляются изменения нервной, иммунной, эндокринной, кардиоваскулярной и репродуктивной систем, развитие гепатотоксических, канцерогенных и других эффектов [Майстренко, 2004; Cooke, 1996; Hauser, 2002; Lee, 2003; Supriyo, 2004; Toft, 2006].

Наименее изученными на сегодняшний день остаются патохимические механизмы токсического повреждения репродуктивной функции при отравлении хлорированными бифенилами. Имеющиеся в литературе сведения о механизмах токсического поражения стойкими органическими загрязнителями мужской половой системы неоднозначны, противоречивы и требуют углублённого исследования [Barone, 1991; Thonneau et al., 2003; Shimada et al., 2003; Colborn, 2004; Reddy et al., 2006; Acharya et al., 2006; Ishikawa T. et al., 2007; Murugesan P. et al., 2007]. Между тем, без детального и целостного представления о биохимических основах угнетения сперматогенеза при действии указанных экотоксикантов невозможны объективный анализ патогенетических механизмов и разработка на этой основе принципов рациональной терапии и профилактики интоксикаций.

Некоторые исследования показали, что полихлорбифенилы способны индуцировать в организме процессы свободнорадикального окисления [Safe, 1994, 2000; McLean, 2000; Twarovski, 2001; De Supriyo, 2004; Murugesan, 2007]. Вместе с тем известно также, что одним из важных патогенетических факторов снижения мужской фертильности может являться окислительный стресс, развивающийся в результате дисбаланса системы, генерирующей активные формы кислорода, и антиоксидантной защиты в тканях репродуктивной системы [Agarwal, 2006].

Цель исследования. Охарактеризовать биохимические и морфофункциональные нарушения сперматогенной функции крыс при длительной интоксикации полихлорированными бифенилами в низких концентрациях.

Задачи исследования.

3. Изучить тканевой уровень биохимических маркеров функционального состояния придатка яичка и акцессорных половых органов (семенные пузырьки, вентральная простата) в условиях субхронической интоксикации «Соволом».

Научная новизна. Показано, что ежедневная длительная интоксикация смесью ПХБ («Совол») в низких концентрациях в суммарных дозах 0,05 ЛД50 и 0,1 ЛД50 приводит у самцов экспериментальных животных к снижению репродуктивного потенциала. Об этом свидетельствуют уменьшение числа забеременевших особей при спаривании экспонированных ПХБ самцов крыс с интактными самками и количества крысят в каждом помете потомства, изменения тендерного баланса новорожденных с увеличением доли самок.

Впервые показано негативное влияние полихлорированных бифенилов на количество клеток Сертоли и интерстициальных клеток Лейдига в семенниках, выраженность генерации гамет, а также на созревающие и сформировавшиеся сперматозоиды. Установлено дозозависимое снижение при действии ПХБ уровня сперматогоний, спрематоцитов и ранних сперматид в тестикулах, общей концентрации сперматозоидов с существенным возрастанием доли неподвижных гамет и половых клеток с колебательными движениями в эякуляте. Выявлено, что наиболее чувствительными звеньями гаметогенеза к действию ПХБ являются этапы ранней дифференцировки. Показано, что при подострой интоксикации низкими концентрациями ПХБ у самцов крыс наблюдается падение продукции тестостерона на фоне подавления секреции лютенизирующего и фолликулостимулирующего гормонов. При этом содержание в периферической крови ингибина В при непродолжительном действии поллютантов повышается, а в режиме субхронической интоксикации в суммарной дозе «Совола» 0,1 ЛД50 - падает.

Установлено, что экспозиция крыс ПХБ в низких концентрациях приводит в тестикулах к дозозависимому усилению липопероксидации и снижению физиологической антиокислительной защиты: падению содержания восстановленного глутатиона, аскорбиновой кислоты, а-токоферола, активности глутатионпероксидазы, глутатионтрансферазы, супероксиддисмутазы, каталазы. Полученные данные указывают на центральную роль в патохимических механизмах репротоксического действия полихлорбифенилов развитие окислительного стресса.

Научно-практическая значимость. Полученные экспериментальные данные о влиянии ПХБ на основные показатели репродуктивного статуса самцов существенно расширяют и дополняют имеющиеся представления о ведущих механизмах развития субфертильных состояний в условиях субхронических интоксикаций поллютантами. Совокупный анализ результатов морфометрического исследования тестикулярной ткани, изучение эндокринного статуса и качественно-количественных параметров спермограммы указывают на многоуровневый характер токсического действия хлорбифенилов и предопределяют направления дальнейших исследований. Выявленные особенности биохимического статуса тестикулярной ткани и сперматозоидов, полученных из эякулята экспериментальных животных, доказывают важнейшую роль нарушений оксидантного баланса в репротоксичности полихлорированных бифенилов и служат основой для выбора наиболее перспективных способов восстановления мужского репродуктивного потенциала.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Длительное воздействие поллютантов вызывает нарушение репродуктивного потенциала самцов крыс, проявляющееся снижением индексов фертильности, плодовитости, а также ассиметрию тендерного соотношения полученного от них потомства.

3. Длительное поступление полихлорбифенилов в низких дозах приводит к выраженным сдвигам функциональной активности акцессорных половых органов, биохимического статуса тестикул, сперматозоидов, полученных из эякулята. Направленность и димамика их развития свидетельствуют о многоуровневом характере действия поллютанта й важной роли нарушений оксидантного статуса биологических тканей в патогенезе репродуктивной токсичности полихлорированных бифенилов.

Апробация результатов работы. Материалы работы были представлены и обсуждены на: региональной научной конференции «Научный прорыв-2007», посвященной Году 450-летия Единства Башкортостана и России, 75-летию БГМУ, Дню Республики (Уфа, 2007), 73-й итоговой Республиканской научной конференции студентов и молодых ученых (Уфа, 2008), II Санкт-Петербургском экологическом форуме «Окружающая среда и здоровье человека» (Санкт-Петербург, 2008), IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (Новосибирск, 2008), 6-й Международной медицинской выставке «Мужское здоровье и долголетие» (Москва, 2008), 6-й Международной Германо-Российской конференции «От Ильи Мечникова и Пауля Эрлиха к современным достижениям медицинской науки» (Санкт-Петербург, 2008), Всероссийской конференции, посвященной 80-летию со дня рождения профессора Р.И. Лифшица «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» (Челябинск, 2009), совместном заседании кафедр биологической и биоорганической химии ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава», общей гигиены с экологией с курсом гигиенических дисциплин медико-профилактического факультета ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава» (Уфа, 2010).

Структура и объем диссертации.

Диссертационная работа представлена на 148 страницах печатного текста, иллюстрирована 30 рисунками, содержит 24 таблицы и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных данных, заключения, выводов и списка литературы, включающего 61 отечественный и 206 иностранных источников.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Булыгин, Кирилл Владимирович

выводы

1. Длительное отравление крыс полихлорированными бифенилами в суммарных дозах 0,05 ЛД50 и 0,1 ЛД50 приводит к выраженному угнетению оплодотворяющей способности самцов in vivo, достигающего при двухмесячном поступлении «Совола» в дозе 10 мг/кг*сут пятикратного снижения количества успешных исходов беременностей интактных самок. При этом наблюдается значительное уменьшение общей численности потомства, полученного от самцов, подвергшихся воздействию ксенобиотика. Поступление ПХБ в организм самцов оказывает влияние на тендерный состав их потомства: в условиях низкой токсической нагрузки превалируют новорожденные мужского пола и, наоборот, при длительной интоксикации ПХБ в большей дозе (10 мг/кг*сут) - особи женского пола.

3. Патохимической основой гонадотоксичности полихлорированных бифенилов является окислительный стресс, развивающийся в яичках экспериментальных животных. С увеличением дозы и продолжительности воздействия ксенобиотиков в тестикулярной ткани крыс наблюдается накопление продуктов липопероксидации, снижение общей антиокислительной активности в результате угнетения активностей супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионпероксидазы, глутатионтрансферазы, глутатионредуктазы, гамма-глутамилтрансферазы и истощения неферментативного звена антиоксидантной системы в виде снижения тканевого содержания глутатиона восстановленного, а-токоферола, аскорбата и свободных сульфгидрильных групп.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Совершенствование приборной базы и аналитических методов в последние десятилетия привело к уточнению и выработке региональных референтных значений таких рутинных лабораторных показателей как гемоглобин и его производные, лейкоформула, альбумин крови и общий белок в моче. Однако самым беспрецедентным, не имеющим равных аналогов среди прочих оказался базовый параметр мужской фертильности -концентрация сперматозоидов в единице объема эякулята. В результате двух сделанных с небольшим временным промежутком пересмотров нормативный показатель содержания сперматозоидов в 1,0 мл эякулята к настоящему времени снизился до 20 млн. с 60 млн. в середине XX века, преодолев предел критического уровня оплодотворяющей способности человека [Никитин, 2005]. Если у самцов других млекопитающих общая средняя концентрация сперматозоидов превышает пороговый уровень в тысячекратно, то у среднестатистического мужчины при самых оптимистических оценках лишь в 3-4 раза. Следует заметить, что эти изменения носят объективный характер и не могут являться следствием повышения выявляемое™ патологии, поскольку, несмотря на несомненное улучшение способов визуализации, кардинальных преобразований техники микроскопии, насчитывающей несколько столетий, не произошло. Определенный скепсис могут вызывать сведения относительно роста распространенности бесплодия и доли в нем мужского фактора, на что, безусловно, влияет улучшение качества медицинского обслуживания населения. Примерно 7% всех мужчин сталкивается с проблемой нарушения фертильности. Однако этот уровень, как считают некоторые специалисты, остался прежним и соответствует частоте инфертильного состояния в животном мире в целом, что позволяет рассматривать его как общебиологический феномен или даже инструмент естественного отбора, сохранение и эволюционирование вида. Возможно, с учетом этого изменения в сторону уменьшения количественных показателей «нормальной» спермограммы человека в руководствах ВОЗ, и не оказались столь сенсационными, если бы не ряд масштабных популяционных исследований. R. Dougherty и соавт. (1980) и W. Н. James (1980) одними из первых установили, что у мужчин США за период 1930-80 гг. среднее число сперматозоидов в 1 мл эякулята снизилось более чем в 2 раза - со 140 до 60 млн. Наибольший интерес вызвал проведенный Е. Carlsen и соавт.(1992) анализ параметров спермограмм почти 15000 мужчин разных стран Европы за период 1938-1990 гг., а также исследование Swan и соавт. (2003), проведших «реанализ» данных группы Carlsen и изучивших дополнительный материал до 1996 г. Авторы установили, что средняя концентрация сперматозоидов уменьшилась за указанное время в среднем со 113 до 60 млн/мл и на 0,7 мл уменьшился объем эякулята. Обнаруженная тенденция была подтверждена многими исследователями. Так, при изучении спермограмм кандидатов в доноры спермы в Бельгии было отмечено, что если до 1980 г. субнормальные характеристики спермограммы обнаруживались лишь у 5% обследованных, то в последующие десятилетия -уже у 40%. «Отсев» кандидатов в доноры спермы как «неперспективных» увеличился за 17 лет с 13% до 54%. Согласно расчетам, "скорость" снижения концентрации спермиев в эякуляте мужчин Европы составляет примерно 2% в год и свидетельствует об "истощении" репродуктивной системы современных мужчин.

При попытке объяснения возможных причин столь стремительных темпов мужского репродуктивного потенциала большинство авторов обращают внимание на тот факт, что за период наблюдения единственные видимые изменения произошли в образе жизни человека и, особенно, среде его обитания. Очевидно, что при таком подходе именно последнее обстоятельство является наиболее вероятным фактором повреждения репродуктивной системы человека. Во внешней среде всегда существовало бесчисленное количество опасных для человека и животных факторов химической и физической природы, но на протяжении миллионов лет они оставались стабильными, а в ходе эволюции видов формировались

104 механизмы устойчивости организма к чужеродным соединениям, их обезвреживания и удаления из организма. В целом это обеспечивало эффективную адаптацию живых организмов к незначительным изменениям условий обитания. Ситуация изменилась с появлением и развитием человека, оказавшегося неспособным к активным преобразованиям природы. С началом научно-технической революции в середине XX века антропогенное давление на биосферу усилилось и приобрело глобальный характер. При этом наиболее очевидные изменения коснулись химических параметров окружающей среды. Увеличилось не только количество традиционных вредных веществ, но и появились и стали накапливаться качественно новые химические соединения, представляющие реальную угрозу здоровью человека в силу неготовности его метаболических систем к их эффективной нейтрализации и элиминации. Несмотря на осознанную опасность загрязнителей антропогенного происхождения, массивное поступление в среду обитания сельскохозяйственных, промышленных и бытовых отходов сохраняет экспоненциальные темпы их прироста.

По мере накопления сведений о молекулярных механизмах токсического действия различных по структуре химических поллютантов на организм в целом и отдельные органы и ткани внимание исследователей больше фокусируется на изучении влияния ксенобиотиков на репродуктивную систему. За последние годы в связи с продолжающимся ростом производства разнообразных химических соединений резко возросли и усложнились требования к проверке их безопасности для человека, в том числе в отношении функции воспроизведения. Однако эти, безусловно, необходимые меры носят предупредительный характер, появились спустя десятилетия применения различных соединений в огромных количествах и ставят вопрос об их утилизации. Учитывая планетарный масштаб проблемы, разрабатываются различные международные программы действий, наиболее глобальной из которых является Стокгольмская конвенция о СОЗ. Согласно этому документу страны-участницы, к которым относится и Россия обязуются прекратить производство и применение 12 классов химических соединений. В их число входит отдельный класс синтетических углеводородов - полихлорированные бифенилы.

Особое значение, представляет изучение одного из представителей хлорорганических соединений экотоксикантов-полихлорированные бифенилы (ПХБ) [8\¥ес1епЬиг§, 2009]. В отличие от других экотоксикантов, ПХБ имеют высокую липофильность и физико-химическую стабильность, что приводит к их накоплению в живых организмах и объектах неживой природы [Майстренко, 2006]. Полученные нами данные демонстрируют, что длительное воздействие суперэкотоксикантов нарушает нормальное функционирование репродуктивной системы самцов-крыс. Интоксикация ПХБ приводит к различным системным тканевым гормонально-метаболическим нарушениям мужской половой сферы. Согласно данным других исследователей, резкое снижение сывороточного уровня тестостерона на фоне увеличения концентрации эстрадиола и гиперпролактинемии свидетельствуют об антиандрогенных свойствах экотоксикантов [Галимов, 2002, 2003; Громенко, 2006; Хабиров, 2006; Аглетдинов, 2007; Камилов, 2009] Доказательством репротоксичности можно рассматривать также установленные высокие уровня содержания ПХБ в сборных образцах спермы, что в определенной степени объясняет и подтверждает концепцию об угнетении фертильности мужчин, проживающих в районах с высокой техногенной нагрузкой [Громенко, 2008]. Важными отличительными признаками ПХБ являются выраженная липофильность и чрезвычайно высокая физико-химическая стабильность и живых организмах. Для полихлорбифенилов характерна также низкая скорость биологической деградации, что, в свою очередь, ведет к их аккумуляции в жировой ткани, последовательно возрастающей по ходу пищевой цепи, конечным звеном которой является человек [Бирпуо, 2004].

В условиях глобального загрязнения мирового океана полихлорбифенилами практически невозможно заблокировать общепризнанно ведущий путь попадания ПХБ в организм человека с морепродуктами. Так, по некоторым оценкам, поступление полихлорбифенилов может достигать 100 мкг/чел*сут [Толстопятова, 1997]. Экспериментальные и популяционные исследования доказали наличие у ПХБ выраженных токсических свойств. В относительно небольших дозах они обладают нейро-, гепато-, иммунотоксическим действиями [ЗкегГу^, 1994].

Многие авторы отмечают разнообразные эндокринотоксические эффекты ПХБ, объясняя данный феномен гормономиметическим действием токсикантов другим следствием чего считают нарушение сперматогенеза как одного из наиболее андрогензависимых процессов [Хабиров, 2005; Громенко, 2008; Галимов, 2009]. Однако мужские половые гонады, выполняющие эти функции, (стероидо- и сперматогенную функцию) до сегодняшнего дня в качестве центрального объекта углубленного исследования токсического действия ПХБ используются необъяснимо редко. В связи с этим, считая такие сведения крайне необходимыми, для глубинного понимания репротоксического действия названных поллютантов было предпринято настоящее исследование, основной целью которого явилось изучение патохимических и морфофункциональных основ нарушения гормонопродуцирующей и гаметообразующей функции яичек экспериментальных животных. Учитывая, что основным общепризнанным путем поступления бифенилов в организм животных, а также человека считается пероральный для моделирования отравления промышленную смесь «Совол» вводили крысам в желудок с помощью специального зонда. При выборе доз руководствовались подходами, применявшимися в нашей лаборатории. С целью дальнейшего сопоставления с результатами, уточнения дозо- и хронозависимости влияния ПХБ на изучаемые параметры, а также динамики развития их сдвигов, мы использовали две суточные дозировки токсиканта - 5 и 10 мг/кг и кроме того несколько точек наблюдения - 30-й и 60-й дни. При оценке воздействия бифенилов на основные количественные и качественные параметры спермограммы эякулят у животных получали каждые 15 дней до завершения эксперимента (60-й день). Уже первые эксперименты по спариванию с интактными самками самцов, подвергшихся отравлению ПХБ, подтвердили имеющиеся в литературе сведения и выявили новые особенности. Однако наиболее явным доказательством антифертильных свойств бифенилов явилось заметное уменьшение численности самок, принесших приплод, после спаривания с самцами, получавшими токсикант. Причем этот эффект обнаруживался во всех вариантах эксперимента как при воздействии малых и больших доз, так и спустя 30 и 60 дней интоксикации. С учетом того, что срок формирования сперматозоидов составляет у грызунов около 40 дней можно предположить, что исследуемые токсиканты могут оказывать негативное влияние на оплодотворяющую способность самцов на посттестикулярном уровне, на что указывают результаты тридцатидневного эксперимента и на уровне собственно яичек, о чем свидетельствуют итоги двухмесячного отравления. Зафиксировано значительное падение общей численности потомства, полученного от подвергшихся отравлению «Соволом» самцов, достигающее при максимальной токсической нагрузке 34,8% от количества крысят в помете группы сравнения. Важно, что степень снижения данного параметра зависела от интенсивности и сроков отравления, поскольку зарегистрированы статистически значимые отличия между группами самцов, получавших одинаковую дозу в течение 30-и либо 60-и дней, а также между теми, кто получил ту же суммарную дозу бифенилов (0,05 ЛД50), но за различный промежуток времени. Другим интересным наблюдением оказалось достоверное увеличение доли мужского потомства до 57,7% самцов, находившихся в самых мягких из всех условиях экспериментальной интоксикации (группа 2), и ее снижение до 40,0% при определении тендерного баланса помета от самцов группы 6, подвергшихся воздействию поллютанта в максимальных количествах. Это обстоятельство указывает на то, что сдвиги, развивающиеся в результате поступления бифенилов в мужской организм, каким-то образом затрагивают генетический материал половых клеток, о природе которого рассуждать более ответственно можно лишь с учетом других требующих специальных исследований сведений. Доказательством этим предположениям служат результаты динамического изучения картины эякулята этих животных, получаемого нами через каждые 15 дней наблюдения. Согласно им, тенденция к уменьшению общего содержания мужских гамет в единице объема спермы обнаруживалась уже в ранние сроки наблюдения, а по истечению 45 и 60 суток интоксикации концентрация сперматозоидов статистически значимо снижалась независимо от суточных дозировок. Это объясняет выявленное в условиях субхронического отравления ПХБ серьезное угнетение оплодотворяющей способности самцов in vivo. В то же время снижение последней зафиксировано и спустя месяц воздействия поллютанта, когда еще не наблюдалось никаких количественных нарушений спермограмм. Однако, как показал анализ качественных характеристик эякулята, в эти сроки выявляются грубые нарушения двигательной активности спермиев. Уже к 15-му дню отравления относительное содержание сперматозоидов с поступательной двигательной активностью, а после двух месяцев воздействия ПХБ мужских гамет, способных к активному движению in vitro, не выявлялось.

Сопоставляя данные экспериментов in vitro и in vivo, считаем возможным высказать предположение, что ПХБ обладают прямыми спермотоксическими свойствами, то есть в механизмы реализации их антифертильного действия вовлечены посттестикулярные эффекты. В целом эти данные согласуются с результатами исследователей нашей лаборатории и других, использовавших в своих работах иные промышленные смеси бифенилов. Таким образом, вышеизложенное позволило определить дальнейшие пути экспериментального поиска подтверждения или опровержения высказанных гипотез.

Обнаруженное ухудшение количественных параметров эякулята крыс в условиях интоксикации ПХБ побудило нас подвергнуть изучению тестикулы для морфометрической оценки состояния сперматогенеза. Согласно данным, полученным в ходе исследования мазков тестикулярной ткани, пероральное поступление бифенилов, особенно, длительное и в больших дозах приводит к заметному статистически значимому снижению содержания сперматогоний, сперматоцитов, сперматид и собственно сперматозоидов. Кроме того, по истечению двухмесячной интоксикации «Соволом» зафиксировано значительное уменьшение количества клеток Сертоли, называемых буквально в зарубежной литературе «няньками» сперматогенеза [ОпбууоЫ, 1995]. Очевидно, столь грубое поражение яичек не могло не сказаться на описанных выше фертилизационных способностях экспериментальных животных. Это свидетельствует о цитотоксическом действии «Совола» как на родоначальные клетки спермопоэза, так и на клетки всех этапов дифференцировки мужских гамет. Такие выводы следуют также из результатов подсчета относительного содержания в тестикулярной ткани отвечающих за синтез андрогенов клеток Лейдига, количество которых также достоверно отличалось в сторону уменьшения от показателей интактных животных. Выявленное в последующем в образцах крови этих животных падение уровня половых стероидов очевидно нужно признать следствием токсического поражения эндокриноцитов тестикулярной ткани крыс. При этом выраженная гипотестостеронемия обнаруживалась у всех животных, подвергшихся воздействию «Совола» в любых дозах. Сниженная сывороточная концентрация эстрадиола в отличие от андрогена выявлялась лишь в конечные точки наблюдения - на 60-е сут экспериментального отравления полихлорбифенилами в обеих дозах.

С позиций имеющихся представлений выявленные нами особенности стероидного профиля можно объяснить принципиальным отличием путей и локализации синтеза половых гормонов. Известно, что 95% андрогенов в мужском организме образуется в яичках, остальная часть имеет надпочечниковое (в основном) происхождение. Тогда как формирование основной доли эстрогенов, напротив, происходит в печени и жировой ткани в процессе ароматизации андрогенов [Нишлаг, 2005].

Литературные сведения относительно влияния ПХБ на содержание эстрадиола в крови содержат различные мнения на этот счет. Ряд авторов [Хабиров, 2006; Галимов, 2009,] сообщает о повышении его уровня, другие приводят данные о снижении [Desaulniers, 1999; Wojtowicz, 2005; Murugesan, 2007] по степени сопоставимой со сдвигами, зарегистрированными в наших экспериментах. Существующие противоречия могут быть обусловлены различиями использованных изолированных бифенилов и в изомерном составе промышленных смесей, разницей аналитических и методических подходов при выборе доз и сроков введения токсиканта.

И тем не менее большинство публикаций придерживаются единого мнения о ПХБ-индуцированном снижении выработки эстрогенов в мужском организме. В эту пользу свидетельствует ряд работ, в которых помимо результатов непосредственного определения эстрогенов в крови, содержатся сведения о влиянии ПХБ на активность различных ферментов в стероидогенезе располагающихся как до, так и после «развилки метаболических путей биосинтеза тестостерона и эстрогенов. Murugesan (2007) с коллегами показали, что воздействие ПХБ вызывает в клетках Лейдига угнетения активностей 3(3- и 17Р-гидроксистероиддегидрогеназы, а также значительное снижение уровней экспрессии соответствующих генов. Другие авторы сообщают об ингибиторном действии ПХБ и их метаболитов на активности ароматазы и 5а-редуктазы [Напу, 1999; Кауа, 2002; Woodhouse, 2004; Heneweer, 2005; Sanderson, 2006; Sharpe, 2010]. Функции главных половых экзо-и эндокринных желез - яичек находятся под тонким нейрогуморальным контролем, благодаря наличию механизмов, работающих по принципу обратной связи. Мы не сочли возможным обойти вопрос и выполнили иммуноферментное определение сывороточных концентраций важнейших гипофизарных гонадотропинов - ЛГ и ФСГ. В физиологических

111 условиях уровень синтеза в гипофизе и секреции меняется реципрокно по отношению к содержанию в крови продуктов клеток Сертоли и клеток Лейдига. Здесь уместно упомянуть, что кратковременное воздействие ПХБ сопровождалось заметным подъемом уровня ингибина В, основным продуцентом которого являются клетки Сертоли. Увеличение дозы и длительности воздействия ПХБ приводило к падению этого гликопротеина, роль которого не ограничивается простым подавлением секреции ФСГ. Ингибин является ростовым фактором, оказывающим локальное модулирующее действие и расценивается как. выфсокочувствиетльный эндокринный маркер местных дефектов сперматогенеза [Eckardstein, 1999]. Однако, против ожидания, сывороточные уровни ФСГ и ЛГ в крови крыс данный группы не возрастали, а либо в ранние сроки интоксикации малыми дозами не отличались от уровня контроля, либо заметно падали с увеличением дозы токсиканта или длительности его воздействия. В других исследованиях подобное противоречие довольно аргументированно, на основании результатов нагрузочных проб с гонадолиберином объясняется авторами, так называемой, десенситизацией различных отделов гипоталамо-гипофизарно-тестикулярной оси к нисходящим стимулирующим сигналам [Галимов, 2009; Geisthoevel, 1988].

Согласно результатам, полученным в условиях применимой нами модели интоксикации, имеются основания полагать, что первоосновой отсутствия реакции гипофиза на падение уровня гормонов тестикулярного происхождения является более глубокое повреждение бифенилами клеток, продуцирующих гонадотропины. Известно, что липофильные ПХБ беспрепятственно преодолевают гематотестикулярный и гематоэнцефалический барьер, и склонны к накоплению в головном мозге, богатом жировой тканью [Абдуллина, 2008; Faqi , 1998]. В ряде похожих по дизайну работ, посвященных изучению нейротоксических эффектов ПХБ, было показано их повреждающее действие на кору большого мозга, мозжечок, гиппокамп, гипоталамус, выражающееся в угнетении активности

Ка+, К+, Mg2+ и Са2+-зависимых АТФаз, снижение уровня продукции ЛГ, ФСГ, сопровождающееся грубыми патоморфологическими изменениями полученных тканей [Ми11шуе1, 2006; Бпёеу!, 2007; УепкаСашагап, 2008, 2010]. Резюмируя вышеизложенное, необходимо подчеркнут, что ПХБ обладают более широким спектром механизмов глубиной токсического действия на ткани различных органов мужской половой системы, чем это представлялось ранее.

В последующем, учитывая, что в реализации оплодотворяющей способности принимают самое непосредственное участие придаточные половые железы, метаболический и, особенно, морфофункциональный статус которых находится под жестким контролем андрогенной стимуляции, мы посчитали необходимым изучить ряд маркеров, характеризующих состояние основных акцессорных органов.

Обнаруженное резкое снижение содержания в семенных пузырьках фруктозы, активностей нейтральной а-гликозидазы в эпидидимисе и кислой фосфатазы в вентральной простате однозначно указывают на серьезное поражение тканей указанных органов, участвующих в сохранении и созревании сперматозоидов и образовании эякулята в момент семяизвержения. Выявленные количественные сдвиги свидетельствуют о глубоком нарушении метаболического статуса этих органов, что вероятно является следствием как ослабления андрогенной стимуляции, так и прямым токсическим действием ПХБ. О накоплении последних в тканях репродуктивной системы сообщают многие исследователи [Ап<Мс, 2000]. В особенно высоких концентрациях бифенилы аккумулируются тканями эпидидимиса [Абдуллина А.З., 2009], богатого содержанием липидов.

Особый интерес представляют сведения о характере влияния токсикантов на биохимический профиль эякулята и, особенно, оплодотворяющую способность сперматозоидов. В эякуляте обнаруживаются многие биологически важные вещества и их метаболиты, присутствующие в сыворотке крови. [Виопа^Ш, 1991]. Они имеют различные источники происхождения как из сперматозоидов, так и из секретов добавочных половых желез. Очевидно, что выявленные нами функциональные сдвиги в работе акцессорных органов репродуктивной системы самцов влекут за собой изменения биохимического состава спермоплазмы, создающей микроокружение для сперматозоидов, оптимальные условия для поддержки их жизнедеятельности. Однако, в большей степени нас заинтересовали особенности биохимического статуса самих мужских половых клеток, основной и единственной ролью которого является донесение генетической информации до яйцеклетки. Для этого проводили изучение некоторых биохимических аналитов в лизате отмытых сперматозоидов. Как следует из выполненных исследований, ПХБ оказывают существенное влияние на отдельные биохимические параметры. Наиболее заметные сдвиги обнаружены в отношении общего белка и альбумина, уровень которых заметно снижался в условиях высокой токсической экспозиции. Особого внимания заслуживает зафиксированное нами увеличение содержания общего белка в эякуляте крыс, получивших отравление малой интенсивности. Концентрация мочевой кислоты, напротив, с увеличением токсической нагрузки, возрастала до 1,5 раз, что, вероятно, объясняется усилением процессов катаболизма пуриновых нуклеотидов. Уровни основных энергетических субстратов сперматозоидов - фруктозы и глюкозы менялись по-разному. В условиях воздействия высоких доз хлорбифенилов их содержание в сперматозоидах крыс снижалось. Концентрация глюкозы, однако, при кратковременном отравлении токсикантом в меньшей суточной дозе заметно возрастала, что, вероятно, является следствием нарушения ее утилизации спермой с нормальными количественными показателями, но нарушенной двигательной активностью гамет. Активности АлТ, АсТ, ЛДГ и ЩФ также постепенно снижались под действием возрастающих доз ПХБ за исключением ЛДГ, в отношении которой была обнаружена индукция на 30-е сутки отравления «Соволом» в меньшей дозе. Полученные результаты при их сопоставлении с уже имеющимися значениями, на наш взгляд, могут оказать содействие в раскрытии новых патогенетических механизмов, снижающих активность сперматозоидов.

В целом выявленные сдвиги биохимического статуса сперматозоидов отражают количественные изменения эякулята, а также указывают на глубокое нарушение клеточного метаболизма, в частности белкового, энергетического и электролитного.

Совокупный анализ вышеизложенного предопределил пути дальнейшего поиска и уточнения наиболее вероятных причин обнаруженных патологических сдвигов в функциональном равновесии системы воспроизведения самцов экспериментальных животных. Динамический характер, выраженность и направленность описанных изменений на различных уровнях ее структурной организации послужили веским аргументом для изучения оксидантного статуса тестикулярной ткани и эякулята животных в условиях отравления полихлорбифенилами.

В основе развития окислительного стресса может лежать ПХБ-индуцированная клеточная активация [Twaroski, 2001]. Известно о способности ПХБ специфически связываться, подобно ТХДД, с арилуглеводородным рецептором AhR и активировать, таким образом, семейство, способных генерировать АФК в процессе окисления, эндогенных и экзогенных субстратов (в т.ч. низкохлорированные ПХБ) [Safe, 1995]. Образующиеся при этом моно- и дигидроксильные метаболиты могут спонтанно, либо ферментативно окисляться до семихинонов и хинонов [MaLean, 2000]. АФК могут также формироваться при дальнейших окислительно-восстановительных превращениях ПХБ-хинонов. Наконец, ПХБ могут реагировать с Н2О2 с образованием наиболее реакционно способного радикала (НО') [Murugesan, 2007]. АФК (НО', 02", Н202) способны атаковать молекулы липидов, ДНК, белков и, в меньшей степени, углеводов [Arunakaran, 2008].

Окислительный стресс как типовой патохимический феномен лежит в основе самых различных патологических процессов, в том числе и при широком круге заболеваний мужской половой системы. Неоднозначный характер и отсутствие глубокой проработки вопроса влияния ПХБ на отдельные звенья АОС яичек и спермы получили основания для расширенного динамического изучения отдельных субстратов и ферментов, участвующих в нейтрализации свободных радикалов. Из полученных результатов следует, что пероральное введение «Совола» приводит к развитию резкого дисбаланса между прооксидативными процессами и антиокислительными возможностями как в тестикулярной ткани, так и в эякуляте. В обоих случаях воздействие токсиканта по мере увеличения дозы и длительности в итоге приводит к резкому увеличению содержания конечных продуктов липопероксидации, снижению ОАА, уменьшению концентрации витаминов С, Е, глутатиона восстановленного, свободных сульфгидрильных групп, угнетению СОД, каталазы, ГПО, ГТ, ГР и ГГТ. В то же время при детальном изучении развития этих сдвигов выявляются некоторые характерные отличия в целом соответствующие общебиологическим закономерностям. Во-первых, АО прямого действия содержаться в эякуляте в значительно меньших количествах по сравнению с тестикулярной тканью, а уровень активности ферментов заметно ниже. Во-вторых, как следствие, эякулят обладает менее мощными антиоксидантными ресурсами, чем яички и признаки развития окислительного стресса в нем появляются раньше и при меньшей интенсивности воздействия ксенобиотика. Эти особенности объясняют и большую устойчивость клеточных систем гонад к токсиканту, тогда как морфометрические и, особенно, функциональные характеристики мужских гамет ухудшаются в самые ранние сроки наблюдения. В гомогенатах яичек крыс, подвергшихся отравлению «Соволом» в дозе 5 мг/кг*сут в течение 30 дней зафиксировано достоверное увеличение активностей каталазы и ГПО, чего не наблюдалось в эякуляте в отношении каких-либо ферментов. Эти отличительные особенности, безусловно, закономерны, поскольку АОС половой клетки является в значительной степени редуцированной в сравнении с соматическими клетками гонад. В то же время сперматозоиды весьма подвержены атакам свободных радикалов в силу повышенного содержания в составе плазматических мембран полиненасыщенных жирных кислот, что необходимо для выполнения ими биологической роли.

Таким образом, сопоставление результатов экспериментального исследования влияния субхронической интоксикации полихлорированными бифенилами на репродуктивный статус самцов, гормональный профиль, различные морфофункциональные и биохимические параметры тестикул и эякулята, позволяют прийти к заключению о том, что негативное действие ксенобиотиков данного класса на мужскую половую систему опосредовано цитотоксическими эффектами поллютантов, патохимической основой которых является развитие окислительного стресса в мужских гаметах и тканях, где происходит их образование, созревание и осуществляется их высокоспециализированная биологической функции переноса генетической информации для самовоспроизведения, как конечной цели существования вида.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Булыгин, Кирилл Владимирович, Уфа

1. Абдуллина, А.З. Нарушение сперматогенеза полихлорированными бифенилами: эндокринные и паракринные механизмы повреждения / А.З. Абдуллина, Э.Ф. Галимова // Авиакосмическая и экологическая медицина. -2007.-№ 6.-С. 51-56.

2. Абдуллина, Г.М. Метаболические изменения в печени крыс при экспериментальной интоксикации полихлорированнымии бифенилами / Г.М. Абдуллина, А.Ж. Гильманов // Проблемы теоретической медицины: тез. докл. конф. Уфа, 1999. - С. 86.

3. Аглетдинов, Э.Ф. Фармакологическая коррекция тестикулярных эффектов полихлорированных бифенилов в эксперименте / Э.Ф. Аглетдинов, A.A. Никоноров, Ф.Х. Камилов // Гигиена и санитария. 2009. - № 4. - С. 6870.

4. Андрологические проблемы в репродуктологии / С.Б. Артифексов, A.A. Артифексова, М.Ю. Сергеев, И.В. Седышева // Вспомогательные репродуктивные технологии сегодня и завтра: тезисы XVI междунар. конф. РАРЧ. Ростов н/Д, 2006. - С. 44.

5. Андрология. Мужское здоровье и дисфункция репродуктивной системы: пер. с англ. / под ред. Э. Нишлага, Г.М. Бере. М.: МИА, 2005. -554 с.

6. Бесплодный брак: современные подходы к диагностике и лечению: руководство для врачей / В.И. Кулаков. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - 616 с.

7. Быков, В.Л. Сперматогенез у мужчин в конце XX века: (Обзор литературы) / В.Л. Быков // Проблемы репродукции. 2000. - № 1. - С. 6-13.

8. Влияние диоксинсодержащего гербицида 2,4-ДА на гормональный статус экспериментальных животных / А.Ж.Гильманов, Ш.Н.Галимов, Э.Г.Давлетов и др. // Медицина труда и промышленная экология. 1997 -№8.-С. 15-18

9. Гаврилова, А.Н. Определение активности глутатионпероксидазы эритроцитов при насыщающих концентрациях субстратов / А.Н. Гаврилова, Н.Ф. Хмара // Лабораторное дело. 1986. - № 12. - С. 21-24.

10. Галимов, Ш.Н. Генерация активных форм кислорода сперматозоидами в патогенезе мужского бесплодия / Ш.Н. Галимов, P.P. Фархутдинов, Д.С. Громенко // Эфферентная терапия. 2006. - № 1. - С. 28-32.

11. Галимова, Э.Ф. Лечение мужского бесплодия: новый взгляд на старую проблему / Э.Ф. Галимова, Э.Ф. Аглетдинов, Ф.Х. Камилов // Мужское здоровье и долголетие: материалы 2-го Российского научного форума. М., 2004. - С. 33-34.

12. Гонадотоксическое действие полихлорбифенилов / Д.С. Громенко, Ш.Н. Галимов, З.К. Амирова и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2008. - № 7. - С. 76-79.

13. Демографические ежегодники России. М.: Госкомстат России; Росстат, 1995-2008.

14. Карпищенко, А.И. Глутатион-зависимая антиоксидантная система в некоторых тканях крыс в условиях острого отравления дихлорэтаном / А.И. Карпищенко, С.И. Глушков, В.В. Смирнов // Токсикологический вестник. -1997.-№3.-С. 17-23.

15. Карпищенко, А.И. Глутатионредуктаза гемолизатов крови / А.И. Карпищенко, С.И. Глушков, В.В. Смирнов // Токсикологический вестник.1997.-№3.-С. 17-23.

16. Касаткина, Т.Б. Этика экспериментальных исследований животных в космической биологии и медицине / Т.Б. Касаткина, A.C. Капланский // Авиакосмическая и экологическая медицина. 2000. - № 2. - С. 17-21.

17. Клюев, H.A. Определение полихлорированных бифенилов в окружающей среде и биоте. Полихлорированные бифенилы / H.A. Клюев, Е.С. Бродский // Супертоксиканты XXI века: инф. выпуск / ВИНИТИ. М., 2000.-№ 5.-С. 31-63.

18. Клюев, H.A. Полихлорированные бифенилы / супертоксиканты XXI века / H.A. Клюев. М.: ВИНИТИ, 2000. - Инф. вып. № 5. - С. 104-116.

19. Концепция демографической политики Российской Федерации до 2025 года / Указ Президента Российской Федерации № 1351 от 9 октября 2007

20. Кузнецова, C.B. Воздействие острой гипобарической гипоксии на мужскую репродуктивную функцию в эксперименте. // Патофизиология и современная медицина. Материалы 2-й международной конференции -Москва, 2004 С. 231-232

21. Кулинский, В.И. Биологическая роль глутатиона / В.И. Кулинский, JI.C. Колесниченко // Успехи соврем, биологии. -1990. Т. 110, вып. 1(4). - С. 20-33.

22. Куценко, А. Основы токсикологии / А. Куценко. СПб., 2004. - 720 с.

23. Лечение женского и мужского бесплодия. Вспомогательные репродуктивные технологии / под ред. В.И. Кулакова, Б.В. Леонова, Л.Н. Кузьмичева. М.: Медицинское информационное агентство, 2005. - 592 с.

24. Мажарова, И.В. Пестициды и охрана окружающей среды / И.В. Мажарова// С.-х. экология. -1989. № 5. - С. 103-111.

25. Майстренко, В.Н. Эколого-аналитический мониторинг стойких органических загрязнителей / В.Н. Майстренко, H.A. Клюев. М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2004. - 323 с.

26. Меныцикова, Е.Б. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов / Е.Б. Меныцикова, Н.К. Зенков // Успехи современной биологии. -1993. -Т. 113, вып.4. С. 442-455.

27. Меньшикова, Е.Б. Биохимия окислительного стресса. Оксиданты и антиоксиданты / Е.Б. Меныцикова, Н.К. Зенков, С.М. Шергин. -Новосибирск, 1994.-203 с.

28. Метод определения каталазы / М.А. Королюк, Л.И. Иванова, И.Г. Майорова, В.Е. Токарев // Лабораторное дело. 1988. - № 1. - С. 16-19.

29. Мужчина в зеркале эволюции, экологии, экономики и эмансипации / Ш.Н. Галимов, Д.С. Громенко, А.З. Абдуллина и др. // Мужское здоровье: материалы V Российского конгресса. Кисловодск, 2009. - С. 35-40.

30. Нарушения взаимодействия тиреоидных и половых гормонов у крыс интоксикации гербицидом 2,4-ДА и их экспериментальная коррекция / А.Ж. Гильманов Ш.Н. Галимов Э.Г.Давлетов // Биоантиоксидант. Межд. симпозиум. Тюмень.: Изд-во ТГУ. 1997. - С. 158-161

31. Никитин, А.И. Вредные факторы среды и репродуктивная система человека (ответственность перед будущими поколениями) / А.И. Никитин. -СПб., 2005.-215 с.

32. Никитин, А.И. Исчезающий пол? / А.И. Никитин // Морфология. 2003. - № 6. - С. 80-89.

33. Никитин, А.И. Факторы среды и репродуктивные системы человека / А.И. Никитин // Морфология. -1998. № 6. - С. 7-9.

34. Никитин, И.А. Гормоноподобные ксенобиотики и репродуктивная система / И.А. Никитин // Проблемы репродукции. 2002. - № 2. - С. 5-15.

35. Основы медико-биологической опасности диоксинов / B.C. Румак, С.П. Позняков, Н.В. Умнова и др. // Диоксины супертоксиканты XXI века. -М.: ВИНИТИ, 1998. - № 4. - С. 5-15.

36. Оценка антиокислительной активности плазмы крови с применением желточных липопротеидов /Г.И. Клебанов, И.В. Бабенков, Ю.О. Теселкин и др. // Лабораторное дело. 1988. - № 2. - С. 59-62.

37. Профилактическая эффективность тиетазола и оксиметилурацила при воздействии хлорфенолов / Р.Б. Ибатуллина, В.А. Мышкин, С.А. Сергеева и др. // Медицина труда и промышленная экология. 2002. - № 5. - С. 16-19.

38. Руководство ВОЗ по лабораторному исследованию эякулята человека и взаимодействию с цервикальной слизью / четвертое издание Издательство «Cambridge University Press», 1999. 143 с.

39. Рыжаков, Д.И. Мужское бесплодие: реальность и перспективы / Д.И. Рыжаков. Н. Новгород, 2003. - 22 с.

40. Рыжаков, Д.И. Функционально-морфологическое исследование половой системы самцов белых крыс с использованием метода электростимуляции / Д.И. Рыжаков, А.В. Молодюк, С.Б. Артифексов // Изв. АН СССР. Серия Биология. 1980. - № 1. - С. 133-135.

41. Синдром андрогенной недостаточности как маркер техногенного загрязнения среды обитания / Ш.Н. Галимов, Ф.Х. Камилов, Э.Ф. Аглетдинов и др. // Проблемы репродукции. 2002. - Т. 8, № 1. - С. 46-50.

42. Среда обитания и репродуктивное здоровье мужчин / Ш.Н. Галимов, Ф.Х. Камилов, Э.Ф. Аглетдинов, Д.С. Громенко // Влияние окружающей среды на формирование личности: материалы Российской науч.-практич. конф. Уфа: Восточный университет, 2003. - С. 193-195.

43. Стокгольмская конвенция, 2001.

44. Тер-Аванесов, Г.В. Андрологические аспекты бесплодного брака / Г.В. Тер-Аванесов // Болезни репродуктивной системы. — 2004. -— № 3. — С. 60—65.

45. Тер-Аванесов, Г.В. Андрологические аспекты бесплодного брака: практическое руководство / Г.В. Тер-Аванесов. М., 2000. - 68 с.

46. Тер-Аванесов, Г.В. Фертильность мужчин в XXI веке / Г.В. Тер-Аванесов, Т.А. Назаренко, В.И. Кулаков // Андрология и генитальная хирургия. 2000. - № 1. - С. 32.

47. Тиунов, JI.A. Роль глутатиона в процессах детоксикации / JI.A. Тиунов, В .А. Иванова // Вестник АМН СССР. 1988. - № 1. - С. 62-69.

48. Толстопятова, Г.В. Токсикологическая характеристика полихлорированных бифенилов (обзор литературы) / Г.В. Толстопятова, В.И. Коркач // Врачебное дело. 1982. - № 7. - С. 52-60.

49. Турусов, B.C. Трансплацентарный и трансгенерационный канцерогенез / B.C. Турусов, JI. Томатис // Архив патологии. -1997. № 5. - С. 7-12.

50. Указ об утверждении Концепции демографической политики Российской Федерации на период до 2025 годаЫ 1351 от 9 октября 2007 г. -М., 2007.

51. Федоров, JI.A. Пестициды токсический удар по биосфере / JI.A. Федоров, А.В. Яблоков. - М.: Наука, 1999. - 461 с.

52. Шевлюк, Н.Н. Биология размножения наземных грызунов из семейства беличьих / Н.Н. Шевлюк, В.М. Руди, А.А. Стадников. Екатеринбург, 1999. -145 с.

53. Abelsohn, A. Idtntifyung and managing adverse eniromental health effects: 5. Persistent organic pollutants / A. Abelsohn, B. Gibson, M. Sanborn // Can. Med. Assoc. Z. 2002. - Vol. 166. - P. 1549-1554.

54. Acute testicular ischemia results in germ cell-specific apoptosis in the rat / T.T. Turner, K.S.K. Tung, H. Tomomasa, L.W. Wilson // Biol. Reprod. 1997. -Vol. 57. - P. 1267.

55. Adriamycin promotes macrophage dysfunction in mice / R. Asmis, M. Qiao, R.R. Rossi et al. // Free Radic. Biol. 2006. - Vol. 41. - P. 165-174.

56. Adverse reproductive outcomes in the transgenic Ah-receptor-deficient mouse / B. Abbot, J. Schmid, J. Pitt et al. // Toxicol. Appl. Pharmacol. -1999.-N155.-P. 62-70.

57. Agarwal, A. Relationship between oxidative stress, varicocele and infertility: A meta-analysis / A. Agarwal, S. Prabakaran, S.S. Allamaneni // Reprod. Biomed. Online. 2006. - № 12. - P. 630-633.

58. Agarwal, A. What an andrologist/urologist should know about free radicals and why / A. Agarwal, S. Prabakaran, S. Allamaneni // Urology. 2006. - Vol. 67. - P. 2-8.

59. Aging and oxidative stress / V.B. Junqueira, S.B. Barros, S.S. Chan et al. // Mol. Aspects Med. 2004. - Vol. 25. - P. 5-16.

60. Aging and the Brown Norway rat Leydig cell antioxidant defense system / L. Luo, H. Chen, M.A. Trush et al. // J. Androl. 2006. - Vol. 27. - P. 240-247.

61. Alcohol abuse-duration dependent decrease in plasma testosterone and antioxidants in males / M. Maneesh, S. Dutta, A. Chakrabarti et al. // Indian J. Physiol. Pharmacol. 2006. - Vol. 50. - P. 291-296.

62. Allard, E.K. Fate of germ cells in 2,5-hexanedione-induced testicular injury. I. Apoptosis is the mechanism of germ cell death / E.K. Allard, K. Boekelheide // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1996. - Vol. 137. - P. 141-148.

63. Alpha-lipoic acid attenuates x-irradiation-induced oxidative stress in mice / K. Manda, M. Ueno, T. Moritake, K. Anzai // Cell Biol. Toxicol. 2007. - Vol. 23. - P. 129-137.

64. Alterations of seminal and hormonal parameters: an extrahepatic manifestation of HCV infection? / M. Durazzo, A. Premoli, C. Di Bisceglie et al. // World J. Gastroenterol. 2006. - N 12. - P. 3073-3076.

65. Aluminium, lead and cadmium concentrations in seminal plasma and spermatozoa, and semen quality in Finnish men / O. Hovatta, E.R. Venalainen, L. Kuusimaki et al. // Hum Reprod. 1998. - Vol. 13, N 1. - P. 115-119.

66. An oligonucleotide microarray study on gene expression profile in mouse testis of experimental cryptorchidism / Y.C. Li, X.Q. Hu, L.J. Xiao et al. // Front. Biosci. 2006. - N 11. - P. 2465-2482.

67. Anderson, J.B. Fertility after torsion of the spermatic cord / J.B. Anderson, R.C.N. Williamson // Br. J. Urol. 1990. - Vol. 65. - P. 225-230.

68. Annema, Z. Evaluation of PCB Fluxes in the Environment / Z. Annema, Z. Beurskens, C. Bodar. Bilthoven: RIVM, 1995. - 220 p.

69. Antioxidant activity of seminal plasma in fertile and infertile men / Y. Koca, O.L. Ozdal, M. Celik et al. // Arch. Androl. 2003. - Vol. 49. - P. 355-359.

70. Antioxidant effect of ascorbic acid on PCB (Aroclor 1254) induced oxidative stress in hypothalamus of albino rats / R. Muthuvel, P. Venkataraman, G. Krishnamoorthy et al. // Clin. Chim. Acta. 2006. - Vol. 365, N 1-2. - P. 297-303.

71. Apoptosis and cell removal in the cryptorchid rat testis / S.P. Chaki, M.M. Misro, D. Ghosh et al. // Apoptosis. 2005. - N 10. - P. 395-405.

72. Aryl Hydrocarbon Receptor Regulates Growth, But Not Atresia, of Mouse Preantral and Antral Follicles / J. Benedict, K. Miller, T.-M. Lin et al. // Biol. Reprod. 2003. - Vol. 68. - P. 1511-1517.

73. Assessment of the pro-oxidant activity of uranium in kidney and testis of rats / V. Linares, M. Belles, M.L. Albina et al. // Toxicol. Lett. 2006. - Vol. 167.-P. 152-161.

74. Association study of four polymorphisms in three folate-related enzyme genes with non-obstructive male infertility / H.C. Lee, Y.M. Jeong, S.H. Lee et al. // Hum. Reprod. 2006. - Vol. 21. - P. 3162-3170.

75. Autoimmune prostatitis: state of the art / R.D. Motrich, M. Maccioni, C.M. Riera, V.E. Rivero // Scand. J. Immunol. 2007. - Vol. 66. - P. 217-227.

76. Bacterial lipopolysaccharide-induced oxidative stress in the impairment of steroidogenesis and spermatogenesis in rats / M.M. Reddy, S.V. Mahipal, J. Subhashini et al. // Reprod. Toxicol. 2006. - Vol. 22. - P. 493-500.

77. Bakke, J.E. Metabolism of 2,4,,5'-trichlorobiphenyl in the mercapturic acid pathway / J.E. Bakke, A. Bergman, G.L. Larsen // Science. 1982. - Vol. 217. - P. 645-657.

78. Bakke, J.E. Metabolites of 2,4',5-trichlorobiphenyl in rats / J.E. Bakke, V.J. Feil, A. Bergman // Xenobiotica. 1983. - Vol. 13. - P. 555-564.

79. Baskin, L.S. Hypospadias and endocrine disruption: is there a connection? / L.S. Baskin, K. Himes, T. Colborn // Environ. Health Persp. 2001. - Vol. 109. -P. 1175-1183.

80. Bellomo, G. Modulation of cellular glutathione and protein thiol status during quinone metabolism / G. Bellomo, H. Thor, S. Orrenius // Methods Enzymol. -1990. Vol. 186. - P. 627-635.

81. Bessmann, A. Accumulation of polychlorinated biphenyls in steroidogenic tissue of gonads and adrenals in Japanese quail / A. Bessmann // Arch. Environ. Contam. Toxicol. -1981. Vol. 10. - P. 653-662.

82. Bioaccumulation and Distribution of PCBs in Hens and Chickens / D.B. Feshin et al. // Organohal. Compounds. 2005. - P. 1498-1501.

83. Birnbaum, L. Endocrine effects of prenatal exposure to PSBs, dioxins, and other xenobiotics / L. Birnbaum // Environ. Health Perspect. 1994. - Vol. 102. -P. 676-670.

84. Birth defects among offspring of Norwegian farmers, 1967-1991 / P. Kristensen, L.M. Irgens, A. Anderson et al. // Epidemiology. 1997. - Vol. 8, N 5. - P. 537-544.

85. Bonde, J.P. The risk of male subfecundity attributable to welding of metals. Studies of semen quality, infertility, fertility, adverse pregnancy outcome and childhood malignancy / J.P. Bonde // Int. J. Androl. 1993. - Vol. 16, suppl. 1. -P. 1-29.

86. Buonaguidi, A. Prospectives of the study of seminal fluid in the diagnosis of infertility / A. Buonaguidi, R. Mondina, F. Polvani // Minerva Ginecol. 1991. -Vol. 43, N 11. - P. 499-503.

87. Cancer in offspring of parents engaged in agricultural activities in Norway: Incidence and risk factors in the farm environment / P. Kristensen, A. Anderson, L.M. Irgens et al. // Int. J. Cancer. 1996. - Vol. 65, N 1. - P. 39-50.

88. Cancer of breast among men in electrical occupations / D.P. Loomis // Lancet. 1992. - Vol. 339, № 8807. - P. 1482-3.

89. Cardioprotective effect of the pentacyclic triterpene, lupeol and its ester on cyclophosphamide-induced oxidative stress / P.T. Sudharsan, Y. Mythili, E. Selvakumar, P. Varalakshmi // Hum. Exp. Toxicol. 2005. - Vol. 24. - P. 313318.

90. Carlberg, I. Glutathione S-trans-ferases. The first enzymatic step in mercapturic acid formation / I. Carlberg, B. Mannervik // J. Biol. Chem. 1974. -Vol. 249.

91. Changes in Circulating and Testicular Levels of Inhibin A and B and Activin A During Postnatal Development in the Rat / J.J. Buzzard, K.L. Loveland, M.K. O'Bryan et al. // Endocrinology. 2004. - Vol. 145. - P. 3532-3541.

92. Changes in fetal bain aromatase activity following in utero 2, 3, 7, 8-Tatrachlorodibenzo-p-dioxin Exposure in rats / M. Ikeda, N. Inukai, T. Mitsui et al. // Environm. Toxical. Pharmacol. 2002. - N 11. - P. 1-7.

93. Chemically-induced alterations in sexual and functional development: the wildlife / eds. T. Colbora, C. Clement. Princeton: Sci. Publ., 1992. - 403 p.

94. Chronic pelvic pain syndrome/chronic prostatitis affect the acrosome reaction in human spermatozoa / R. Henkel, M. Ludwig, H.C. Schuppe et al. // World J. Urol. 2006. - Vol. 24. - P. 39-44.

95. Colborn, T. Neurodevelopment and endocrine disruption / T. Colborn // Environ. Health Perspect. 2004. - Vol. 112. - P. 944-949.

96. Collins Jr., W.T. Fine structural lesions and hormonal alterations in thyroid glands of perinatal rats exposed in utero and by the milk to polychlorinated biphenyls / W.T. Collins Jr., C.C. Capen // Am. J. Pathol. 1980. - Vol. 99. - P. 125-142.

97. Comhaire, F. Sperm quality, birth rates and the environment in Flanders (Belgium) / F. Comhaire, A. Mahmoud, F. Schoonjans // Reprod. Toxicol. 2007. -Vol. 23,N2.-P. 133-137.

98. Cooke, P.S. Neonatal polychlorinated biphenyls treatment increases adult testis size and sperm production in the rat / P.S. Cooke, Y.D. Zhao, L.G. Hansen // Toxicol. Appl. Pharmacol. -1996. Vol. 136. - P. 112-117.

99. Cryptorchidism and hypospadias in sons of gardeners and farmers. Environ / J.S. Weinder, H. Moller, T.K. Jensen et al. // Environ. Health Persp. 1998. -Vol. 106. - P. 793-796.

100. Decline in Semen Quality among fertile men in Paris during the past 20 years / J. Auger, J. Kuntsmann, F. Czyglik et al. // N. Engl. J. Med. 1995. - Vol. 332. - P. 281-285.

101. Declining sperm count. Semen quality has declined among men born in France since 1950 / J. de Mouzon, P. Thonneau, A. Spira, L. Multigner // BMJ. -1996. Vol. 313, N 7048. - P. 43.

102. Depue, R.H. Estrogen exposure during gestation and risk of testicular cancer / R.H. Depue, M.C. Pike, B.E. Henderson // J. Natl. Cancer Inst. 1983. - Vol. 71, N6.-P. 1151-1155.

103. Desai, I.D. Vitamin E analysis methods for animal tissues / I.D. Desai // Methods in Enzymology. 1984. - Vol. 105. - P. 138-147.

104. Deterioration of sperm quality in young Belgian men during recent decades / K. van Waeleghem, N. De Clezcq, L. Vermenlen et al. // Hum. Reprod. 1996. -Vol. 9. - P. 73.

105. Development of normal reference values for seminal reactive oxygen species and their correlation with leukocytes and semen parameters in a fertile population / K.S. Athayde, M. Cocuzza, A. Agarwal et al. // J. Androl. 2007. - Vol. 28. - P. 613-620.

106. Dibromochloropropane inhibits spermatogonial development in rats / M. Meistrich, G. Wison, G. Schuttlesworth, K. Porter // Reprod. Toxicol. 2003. - N 2. - P. 263-271.

107. Dietary intakes of polychlorinated dibenzo p- dioxins, dibenzofurans and polychlorinated Biphenyls in Finland / H. Kiviranta, A. Hallirainen, M. Ovaskainen et al. // Food Addit. Contam. - 2001. - Vol. 18. - P. 945-953.

108. Differential expression of Prx I and II in mouse testis and their up-regulation by radiation / K. Lee, J.S. Park, Y.J. Kim et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2002. - Vol. 296. - P. 337-342.

109. DNA damage in human sperm is related to urinary levels of phthalate monoester and oxidative metabolites / R. Hauser, J.D. Meeker, N.P. Singh et al. // Hum. Reprod. 2007. - Vol. 22. - P. 688-695.

110. Doreswamy, K.M. Genotoxic consequences associated with oxidative damage in testis of mice subjected to iron intoxication / K.M. Doreswamy // Toxicology. 2005. - Vol. 206. - P. 169-178.

111. Effect of di(n-butyl) phthalate on testicular oxidative damage and antioxidant enzymes in hyperthyroid rats / E. Lee, M.Y. Ahn, H.J. Kim et al. // Environ. Toxicol. 2007. - Vol. 22. - P. 245-255.

112. Effect of lindane on testicular antioxidant system and steroidogenic enzymes in adult rats / R. Sujatha, K.C. Chitra, C. Latchoumycandane et al. // Asian J. Androl. 2001. - N 3. - P. 135-138.

113. Effect of pesticides on the ratio of 16-alpha-2-hydroxyestrone: a biologi marker of breast canner risk / H. Bradlow, D. Davis, G. Lin et al. // Environ. Health Persp. 1995. - Vol. 103, suppl. 7. - P. 147-150.

114. Effect of psychological stress on the L-arginine-nitric oxide pathway and semen quality / S. Eskiocak, A.S. Gozen, A. Taskiran et al. // Braz. J. Med. Biol. Res. 2006. - Vol. 39. - P. 581-588.

115. Effect of smoking on seminal plasma ascorbic acid in infertile and fertile males / T. Mostafa, G. Tawadrous, M.M. Roaia et al. // Andrologia. 2006. -Vol. 38.-P. 221-224.

116. Effects of acute exposure to PCBs 126 and 153 on anterior pituitary and thyroid hormones and FSH isoforms in adult Sprague Dawley male rats / D. Desaulniers, K. Leingartner, M. Wade et al. // Toxicol. Sei. 1999. - Vol. 47. -P. 158-169.

117. Effects of bisphenol A on the metabolisms of active oxygen species in mouse tissues / H. Kabuto, S. Hasuike, N. Minagawa et al. // Environ. Res. -2003.-Vol. 93.-P. 31-35.

118. Effects of melatonin on lipid peroxidation and antioxidant enzymes in streptozotocin-induced diabetic rat testis / A. Armagan, E. Uz, H.R. Yilmaz et al. // Asian J. Androl. 2006. - N 8. - P. 595-600.

119. Effects of polychlorinated biphenyl (Aroclor 1254) on steroidogenesis and antioxidant system in cultured adult rat Leydig cells / P. Murugesan et al. // J. Endocrinol. 2007. - Vol. 192. - P. 325-338.

120. Effects of psychological stress on human semen quality / L. Fenster, D.F. Katz, A.J. Wyrobek et al. // J. Androl. 1997. - Vol. 18. - P. 194-202.

121. Effects of single non-ortho, mono-ortho, and di-ortho chlorinated biphenyls on cell functions and proliferation of the human prostatic carcinoma cell line LNCaP / F. Endo, T. Monsees, H. Akaza et al. // Reprod. Toxical. 2003. - Vol. 17. - P. 229-236.

122. Endocrine-Disrupting Chemicals: An Endocrine Society Scientific Statement / E. Diamanti-Kandarakis, J.-P. Bourguignon, L.C. Giudice et al. // Endocr. Rev. 2009. - Vol. 30. - P. 293-342.

123. Evidence for decreasing quality of semen during past 50 years / E. Carlsen, A. Giwercman, N. Keiding, N.E. Skakkebaek // Br. Med. J. 1992. - Vol. 305, N 6854.-P. 609-613.

124. Evidence of deteriorating semen quality in the United Kingdom: birth cohort study in 577 men in Scotland over 11 years / S. Irvine, E. Cawood, D. Richardson et al. // Br. Med. J. 1996. - Vol. 312, N 7029. - P. 467-471.

125. Expression of Aryl Hydrocabon Receptor and Aryl Hydrocarbon Receptor Nuclear Translocator Messenger Ribonucleic Acids and Proteins in Ratand Human Testis / R. Schultz, J. Souminen, T. Verre et al. // Endocrinology. -2003. Vol. 144. - P. 767-776

126. Facemire, C.F. Reproductive impairment in the Florida panther: nature or nurture? / C.F. Facemire, T.S. Gross, L.J. Guillette // Environ. Health Persp. -1995. Vol. 103, suppl. 4. - P. 79-86.

127. Fertility and offspring sex ratio of men who develop testicular cancer: a record linkage study / R. Jacobsen, E. Bostofte, G. Engholm et al. // Hum. Reprod. 2000. - Vol. 15, N 9. - P. 1958-1961.

128. Genetic and teratogenic effects of cancer treatments on gametes and embryos / J. Arnon, D. Meirow, H. Lewis-Roness, A. Ornoy // Hum. Reprod. Update. 2001. - N 7. - P. 394-403.

129. Griswold, M.D. Interactions between germ cells and Sertoli cells in the testis / M.D. Griswold // Biol. Reprod. 1995. - Vol. 52. - P. 211-216.

130. Habig, W.H. Glutathione-S-transferase. The first enzymatic step in mercapturic formation / W.H. Habig, M.J. Palst, W.B. Jakoby // J. Biol. Chem. -1973.-Vol. 249.-P. 7130-39.

131. Hauser, P. Resistance to thyroid hormone: implications for neurodevelopmental research on the effects of thyroid hormone disruptors / P. Hauser, J.M. McMillin, V.S. Bhatara // Toxicol. Ind. Health. 1998. - Vol. 14. -P. 85-101.

132. Hauser, R. Environmental organochlorines and semen quality: results of a pilot study / R. Hauser, L. Altshul // Environ. Health Perspect. 2002. - Vol. 110, N3. - I*. 229-233.

133. Howell, W.H. Abnormal expression of secondary sex characters in a population of mosquitofish, Gambusia Affinis holbrooki: evidence for environmental-induced masculinization / W.H. Howell, D.A. Black, S.A. Bortone // Copeia. 1980. - N 4. - P. 676-681.

134. Hydroxyl radical scavenger ameliorates cisplatin-induced nephrotoxicity by preventing oxidative stress, redox state unbalance, impairment of energetic metabolism and apoptosis in rat kidney mitochondria / N.A. Santos, C.S. Bezerra,

135. N.M. Martins et al. // Cancer Chemother. Pharmacol. 2008. - Vol. 61. - P. 145-155.

136. Impact of folate and homocysteine metabolism on human reproductive health / T. Forges, P. Monnier-Barbarino, J.M. Alberto et al. // Hum. Reprod. Update. 2007. - Vol. 13. - P. 225-238.

137. In utero and lactational exposure to 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) induces genital dys-morphogenesis in the female rat / J. Flaws, R. Sommer, E. Silbergeld et al. // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1997. - Vol. 147. - P. 351-362.

138. Incidence of disorders of spermatogenesis in middle aged finnish men, 1981-91: two necropsy series / J. Pajarinen, P. Laippala, A. Penttila et al. // Br. Med. J. 1997. - Vol. 314, N 7073. - P. 13-18.

139. Increase of oxidative stress in human sperm with lower motility / S.H. Kao, H.T. Chao, H.W. Chen et al. // Fertil. Steril. 2007. - (30 July, 2007, online publication ahead of print).

140. Increased concentrations of polychlorinated biphenyls, hexachlorobenzene, and chlordanes in mothers of men with testicular cancer / L. Hardell, B. van Bavel, G. Lindstrom et al. // Environ. Health Persp. 2003. - Vol. Ill, N 7. - P. 930934.

141. Increased lipid peroxidation and ascorbic acid utilization in testis and epididymis of rats chronically exposed to lead / M. Marchlewicz, B. Wiszniewska, B. Gonet et al. // Biometals. 2007. - Vol. 20. - P. 13-19.

142. Increased sperm DNA damage in vatients with varicocele: relationship with seminal oxidative stress / R. Smith, H. Kaune, D. Parodi et al. // Hum. Reprod. -2006. Vol. 21. - P. 986-993.

143. Increased testicular 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine in patients with varicocele / T. Ishikawa, H. Fujioka, T. Ishimura et al. // BJU Int. 2007. - Vol. 100. - P. 863-866.

144. Inhibin B levels in plasma of the male rat from birth to adulthood: effect of experimental manipulation of Sertoli cell number / R.M. Sharpe, K.J. Turner, C. McKinnell et al. // J. Androl. 1999. - Vol. 20. - P. 94-101.

145. Inhibition of aromatase activity by methyl sulfonyl PCB metabolites in primary culture of human mammary fibroblasts / M. Heneweer, M. van den Berg, M.C. de Geest et al. // Toxicol. Appl. Pharmacol. 2005. - Vol. 202, N 1. - P. 50-8.

146. Inhibition of rat testicular androgenesis by a polychlorinated biphenyl mixture Aroclor 1248 / S.A. Andric, T.S. Kostic, S.S. Stojilkovic, R.Z. Kovacevic // Biol. Reprod. 2000. - Vol. 62. - P. 1882-1888.

147. Insulin dependent diabetes mellitus: Implications for male reproductive function / I.M. Agbaje, D.A. Rogers, C.M. McVicar et al. // Hum. Reprod. -2007. [Epub ahead of print].

148. Intake of dioxins and related compounds from in the U. S. popylation / A. Schecter, P. Cramer, K. Boggess et al. // J. Toxicol. Environ. Health. 2001. -Vol. 63. - P. 1-18.

149. Is male fertility potential on the decline? / R. Menkveld, K. Coetzee, T. Smith, T.F. Kryer // Hum. Reprod. 1997. - Vol. 12. - Abstr. Book 1. - P. 136137.

150. Jacobson, C.F. Species difference in 1,3-dinitrobenzend testicular toxicity: in vitro correlation with glutathione status / C.F. Jacobson, M.G. Miller // Reprod. Toxicol. 1998. - N 12. - P. 49-56.

151. James, W.H. Secular trend in reported sperm counts / W.H. James // Andrologia. 1980. - Vol. 12. - P. 381-388.

152. Kaur, P. Effect of diethyl maleate induced oxidative stress on male reproductive activity in mice: Redox active enzymes and transcription factors expression / P. Kaur, S. Kalia, M.P. Bansal // Mol. Cell Biochem. 2006. - Vol. 291.-P. 55-61.

153. Kholrute, S. Reproductive toxicity of Aroclar 1254: effects an oocyte, spermatozoa, in vitro fertilization, and eembryo development in the mouse / S. Kholrute, J. Rodiguez, W. Durelow // Reprod. Toxical. - 1994. - N 8. - P. 487-493.

154. Khosrowbeygi, A. Levels of oxidative stress biomarkers in seminal plasma and their relationship with seminal parameters / A. Khosrowbeygi, N. Zarghami // BMC Clin. Pathol. 2007. - N 7. - P. 6.

155. Koibuchi, N. Thyroid hormone action and brain development / N. Koibuchi, W.W. Chin // Trends Endocrinol. Metab. 2000. - N 11. - P. 123-128.

156. L-ascorbic acid ameliorates postnatal endosulfan induced testicular damage in rats / M. Rao, K. Narayana, S. Benjamin et al. // Indian J. Physiol. Pharmacol. 2005. - Vol. 49. - P. 331-336.

157. Latchoumycandane, C. Induction of oxidative stress in the rat testis after short-term exposure to the organochlorine pesticide methoxychlor / C. Latchoumycandane, P.P. Mathur // Arch. Toxicol. 2002. - Vol. 76. - P. 692-698.

158. Lead, magnesium, selenium and zinc: comparison with semen parameters and fertility / M. Saaranen, U. Suistoma, M. Kautola et al. // Hum. Reprod. -1987.-N2.-P. 475-479.

159. Lee, Y.W. 2,2',4,6,6-pentachlorobiphenyl (PCB 104) induces apoptosis of human microvascular endothelial cells through the caspasedependent activation of CREB / Y.W. Lee, H.J. Park // Toxicol. Appl. Pharmacol. 2003. - Vol. 189. - P. 1-10.

160. Male reproductive health and environmental xenoestrogens / J. Toppari, JiC. Larsen, P. Christiansen et al..// Environ. Health Persp. 1996. - Vol. 104, suppl. 4. - P. 741-803.

161. Male reproductive health and environmental xenoestrogens / J. Toppari, J.C. Larsen, P. Christiansen et al. // Environ. Health Persp. 1996. - Vol. 104, suppl. 4.-P. 741-803.

162. Mann, T. Biochemistry of Semen and of the Male Reproductive Tract Methuen / T. Mann. London, 1964. - P. 36-46.

163. Matthews, R.G. Methylenetetrahydrofolate reductase: a common human polymorphism and its biochemical implications / R.G. Matthews // Chem. Rec. -2002.-N2.-P. 4-12.

164. McKinney, J. PCBs as hormonally active structural analogues / J. McKinney, C. Waller // Environ. Health Perspect. 1994. - Vol. 102. - P. 290297.

165. McLean, M.R. Redox cycling of 2-(x'-mono, -di, -trichlorophenyl)- 1, 4-benzoquinones, oxidation products of polychlorinated biphenyls / M.R. McLean, T.P. Twaroski, L.W. Robertson // Arch. Biochem. Biophys. 2000. - Vol. 376, N 2. - P. 449-55.

166. Meng, Z. Oxidation damage of sulfur dioxide on testicles of mice / Z. Meng, W. Bai // Environ. Res. 2004. - Vol. 96. - P. 298-304.

167. Misro, M.M. Germ cell death and their removal during initial stages of testicular ischemia and cryptorchidism: a comparative analysis / M.M. Misro, S.P. Chaki, D.K. Gautam // Indian J. Exp. Biol. 2005. - Vol. 43. - P. 1080-1087.

168. Occupationally related exposures and reduced semen quality: a case-control study / E. Tielemans, A. Burdorf, E.R. te Velde, R.F. Weber // Fertil. Steril. 1999. -Vol. 71.-P. 690-696.

169. Omaye, S.T. Selected methods for the determination of ascorbic acid in animal cells, tissues and fluids / S.T. Omaye, J.W. Tumball, H.E. Sauberlich // Methods in Enzymology. 1971. - Vol. 62. - P. 1-11.

170. Organochlorine contaminants in beluga (Delphinapterus leucas) from Canadian waters / D.C. Muir, C.A. Ford, R.E. Stewert et al. // Can. Bull. Fish. Aquat. Sci. 1990. - Vol. 224. - P. 165-190.

171. Orlowski, M. Isolation of gamma-glutamyl transpeptidase from hog kidney / M. Orlowski, A. Meister // J. Biol. Chem. 1965. - Vol. 240. - P. 338-47.

172. Otto, D. 3,3',4,4-tetrachlorobiphenyl effects on antioxidant enzymes and glutathione status in different tissues of rainbow trout / D. Otto, T. Moon // Pharmacol. Toxicol. -1995. Vol. 77. - P. 281-287.

173. Oxidative stress induced by torsion of the spermatic cord in young rats / S.B. Guimaraes, A.A. Aragao, J.M. Santos et al. // Acta Cir. Bras. 2007. - Vol. 22. -P. 30-33.

174. Oxidative stress modulates membrane bound ATPases in brain regions of PCB (Aroclor 1254) exposed rats: protective role of alpha-tocopherol / N. Sridevi, P. Venkataraman, K. Senthilkumar et al. // Biomed. Pharmacother. 2007. - Vol. 61, N7.-P. 435-40.

175. Paulozzi, L.J. International trends in rates of hypospadias and cryptorchidism / L.J. Paulozzi // Environ. Health Persp. 1999. - Vol. 107. - P. 297-302.

176. Perez-Crespo, M. Scrotal heat stress effects on sperm viability, sperm DNA integrity, and the offspring sex ratio in mice / M. Perez-Crespo, B. Pintado, A. Gutierrez-Adan // Mol. Reprod. Dev. 2007. - Vol. 75. - P. 40-47.

177. Pesticide appliers, biocides, and birth defects in rural Minnesota / V.F. Garry, D. Schreinemachers, M.E. Harkins et al. // Environ. Health Persp. 1996. - Vol. 104. - P. 394-399.

178. Plasms Concentrations of Polychlorinated Byphenils and the Risr of Breast Cancer:A Condener specific Analysis / A. Demers, P. Ayotte, J. Brisson et al. // Am. J. Epidemiol. - 2002. - Vol. 155. - P. 620-635.

179. Polychlorinated biphenyl-induced effects on metabolic enzymes, AP-1 binding, vitamin E, and oxidative stress in the rat liver / T.P. Twaroski, M.L. O'Brien, N. Larmonier et al. // Toxicol. Appl. Pharmacol. 2001. - Vol. 171, N 2. - P. 85-93.

180. Polychlorinated Biphenyl-Mediated Decrease in Serum Thyroxine Level in Rodents / Y. Kato, K. Haraguchi, Y. Ito et al. // Drug Metab. Dispos. 2010. -Vol. 38. - P. 697-704.

181. Polychlorinated biphenyls and their hydroxylated metabolites (OH-PCBS) in pregnant women from eastern Slovakia / J.S. Park, L. Linderholm, M.J. Charles et al. // Environ. Health Perspect. 2007. - Vol. 115. - P. 20-27.

182. POPs in Murre Eggs from the Bering Sea and bulk of Alaska / Y. Kucklick, S. Vander Pol, P. Becker et al. // Organogal. Comp. 2002. - Vol. 59. - P. 13-16.

183. Porterfield, S.P. Thyroidal dysfunction and environmental chemicals-potential impact on brain development / S.P. Porterfield // Environ. Health Perspect. 2000. - Vol. 108, suppl. 3. - P. 433^138.

184. Possible mechanisms of action of environmental contaminants on St. Lawrence Beluga Whales (Delphinapterus leucas) / S. De Guise, D. Martineau, P. Beland, M. Fournier // Environ. Health. Persp. -1995. Vol. 103. - P. 73-78.

185. Prins, G. Assault on the male / G. Prins, R. Twombly // Environ. Health Persp. -1995. -Vol. 103, N 9. P. 802-805.

186. Prolactin and gonadotrophin dynamics in response to antagonists of LHRH and dopamine in ovariectornized rhesus monkeys: a dissection of their common secretion / F. Geisthoevel, J.B. Arana, J.P. Balmaceda et al. // Hum. Reprod. -1988.-N3.-P. 591-595.

187. Pro-oxidative and anti-oxidative imbalance in human semen and its relation with male fertility / N. Garrido, M. Meseguer, C. Simon et al. // Asian J. Androl. 2004. - N 6. - P. 59-65.

188. Protection against oxidative stress in diabetic rats by wheat bran feruloyl oligosaccharides / S.Y. Ou, G.M. Jackson, X. Jiao et al. // J. Agric Food Chem. -2007. Vol. 55. - P. 3191-3195.

189. Protein measurement with Folin phenol reagent / O. Lowry, N. Rosebrough, A. Farr, G. Randal. //J. Biol. Chem. -1951. Vol. 193. - P. 265-275.

190. Reproductive toxicity and tissue concentrations of 3,3',4,4-tetrachlorobiphenyl (PCB 77) in male adult rats / A.S. Faqi, P.R. Dalsenter, W. Mathar et al. // Human Experim. Toxicol. -1998. Vol. 17. - P. 151-156.

191. Response of Hepatic MFO Activity and Plasma Sex Steroids to Secondary Treatment of Bleached Kraft Mill Effluent and Mill Shutdown / M.R. Munkittrick, G J. Van Der Kraak, M.E. McMaster, C.B. Port // Environ. Toxicol. Chem. 1992. -Nil.-P. 1427.

192. Results of the french multicenter study comparing babies born after IVF and after natural conception / J. De Mouzon, F. Allali, A. Bachelot et al. // Hum. Reprod. 1998. - Vol. 13. - Abstr. Book 1. - P. 107-108.

193. Role ex environmental estrogens in the determination of male factor fertility / R. Rozati, P. Reddy, P. Reddanna, R. Mujataba // Fertil. Steril. 2002. - Vol. 78. - P. 1187-1194.

194. Safe, S. Development validation and problems with the toxic equivalency factor approach for risk assessment of dioxins and related compounds / S. Safe // J. Anim. Sei. -1998. Vol. 76, N 1. - P. 134-141.

195. Safe, S. Polychlorinated biphenyls (PCBs) and polybrominated biphenyls (PBBs): biochemistry, toxicology, and mechanism of action / S. Safe // Crit. Rev. Toxicol. 1984. - Vol. 13. - P. 319-395.

196. Safe, S.H. Endocrine disruptors and human health—is there a problem? An update / S.H. Safe // Environ. Health Perspect. 2000. - Vol. 108, N 6. - P. 48793.

197. Safe, S.H. Polychlorinated biphenyls (PCBs): environmental impact, biochemical and toxic responses, and implications for risk assessment / S.H. Safe // Crit. Rev. Toxicol. 1994. - Vol. 24, N 2. - P. 87-149.

198. Samanta, L. Age-related changes in rat testicular oxidative stress parameters by hexachlorocyclohexane / L. Samanta, A. Sahoo, G.B. Chainy // Arch. Toxicol. -1999,-Vol. 73.-P. 96-107.

199. Sanderson, J.T. The Steroid Hormone Biosynthesis Pathway as a Target for Endocrine-Disrupting Chemicals / J.T. Sanderson // Toxicol. Sei. 2006. -Vol. 94. -P. 3-21.

200. Schräder, S.M. Mechanisms of Male Reproductive Toxicology Chapter 1 / S.M. Schräder, J.S. Kesner // Occupational and Environmental Reproductive Hazards: A Guide for Clinicians. Williams and Wilkins, Baltimore, MD, 1992. -P. 3-17.

201. Schroder, T. Examination of selected food additives and ordanochlorins food contaminants for androdenic activity in vitro / T. Schroder, O. Coore // Toxcol. Sci. 2000. - Vol. 53. - P. 278-288.

202. Semen quality in relation to biomarkers of pesticide exposure / S.H. Swan, R.L. Kruse, F. Liu et al. // Environ. Health Persp. 2003. - Vol. Ill, N 12. - P. 1478-1484.

203. Sharpe, R.M. Environmental/lifestyle effects on spermatogenesis / R.M. Sharpe // Phil. Trans. R. Soc. B. 2010. - Vol. 365. - P. 1697-1712.

204. Sigman, M. Semen analysis and sperm function assays: what do they mean? / M. Sigman, A. Baazeem, A. Zini // Semin. Reprod. Med. 2009. - Vol. 27, N 2. -P. 115-23.

205. Similar biochemical properties of human seminal plasma and epididymal a-1,4-glucosidase / R. Paquin, P. Chapdelaine, J.V. Dube, R.R. Tremblay // J. Androl. 1984. - N 5. - P. 277-282.

206. Sohoni, P. Several enviromental oestrogens are also anti-androgens / P. Sohoni, J. Suniptor//J. Endocrinol. 1998. -Vol. 158, N 3. - P. 327-339.

207. Somani, S.M. Exercise training alters kinetics of antioxidant enzymes in rat tissues / S.M. Somani, K. Husain // Biochem. Mol. Biol. Int. 1996. - Vol. 38. -P. 587-595.

208. Sonmez, M. The protective effects of melatonin and Vitamin E on antioxidant enzyme activities and epididymal sperm characteristics ofhomocysteine treated male rats / M. Sonmez, A. Yuce, G. Turk // Reprod. Toxicol. 2007. - Vol. 23. - P. 226-231.

209. Sperm characteristics and accessory sex gland functions in HIV-infected men / E. Umapathy, T. Simbini, T. Chipata, M. Mbizvo // Arch. Androl. 2001. -Vol. 46.-P. 153-158.

210. Sperm chromatin structure and semen quality following occupational styrene exposure / H.A. Kolstad, J.P. Bonde, M. Spano et al. // Scand. J. Work Environ. Health. 1999. - Vol. 25, suppl. 1. - P. 70-73.

211. Sperm output in patients with primary infertility and hepatitis B or C virus; negative influence of HBV infection during concomitant varicocele / E. Vicari, D. Arcoria, C. Di Mauro et al. // Minerva Med. 2006. - Vol. 97. - P. 65-77.

212. Spira, A. The effect of industrial and agricultural pollution on human spermatogenesis / A. Spira, L. Multinger // Hum. Reprod. 1998. - Vol. 13. - P. 2041-2042.

213. Swan, Sh. Have sperm densities declined? A reanalysis of global trend data / Sh. Swan, E.P. Elkin, L. Fenster // Environ. Health Persp. 1997. - Vol. 105, N 11.-P. 1228-1232.

214. Swan, Sh. The question of declining sperm density revisited of 101 studies published 1934-1996 / Sh. Swan, E. Elkin, L. Fenster // Environ. Health Persp. -2000. Vol. 108. - P. 961-966.

215. Tanabe, S. PCB problems in the future foresight from current knowledge / S. Tanabe // Environ. Poll. - 1988. - Vol. 50. - P. 5-28.

216. Testicular dysfunction and antioxidative defense system of Swiss mice after chromic acid exposure / U.R. Acharya, M. Mishra, R.R. Tripathy et al. // Reprod. Toxicol. 2006. - Vol. 22. - P. 87-91.

217. The protective effect of vitamin E against oxidative damage caused by formaldehyde in the testes of adult rats / D.X. Zhou, S.D. Qiu, J. Zhang et al. // Asian J. Androl. ~ 2006. N 8. - P. 584-588.

218. The relationship between human semen parameters and environmental exposure to poly chlorinated biphenyls and p,p'-DDE / R. Hauser, Z. Chen, L. Pothier et al. // Environ. Health Persp. 2003. - Vol. Ill, N 12. - P. 1505-1511.

219. The unique eyacúlate and hormonal characteristics of the Florida panther / M.A. Barone, J.G. Howard, M.E. Roelke et al. // Proc. Annu. Meet. Soc. Theriogenol. 1991. - Vol. 2. - P. 354-357.

220. Thonneau, P. Cryptorohiclism: Incidence, Risk Factors, and Potential Role of Environment; An Update / P. Thonneau, P. Candia, R. Mieusset // U. Androl. -2003. Vol. 24. - P. 155-162.

221. Thyroid hormone action and brain development / K.R. Munnkittrick, K.P. Porr, van der Kraak et al. // Can J. Fish. Aquat. Set. 1991. - Vol. 48. - P. 13711330.

222. Thyroid hormone, brain development, and the environment / R.T. Zoeller, A.L.S. Dowling, C.T.A. Herzig et al. // Environ. Health Perspect. 2002. - Vol. 110.-P. 355-361.

223. Tissue distribution and half-lives of polychlorinated biphenyls and serum levels of 4-hydroxy-2,3,3',4',5-pentachlorbiphenyl / M. Oberg, A. Sjodin, H. Casabona et al. // Toxicol. Sei. 2002. - Vol. 70. - P. 171-182.

224. Toft, G. Semen quality and exposure to persistent organochlorine pollutants / G. Toft, A. Rignell-Hydbom // Epidemiology. 2006. - Vol. 17, N 4. - P. 450458.

225. Towards a global historical emission inventory for selected PCB congeners a mass balance approach 1. Global production and consumption / K. Breivik, A. Sweetman, J.M. Pacyna, K.C. Jones // Sci. Total Environ. - 2002. - Vol. 290. - P. 181-198.

226. Toxicity of polychlorobiphenyls and its bioremediation / De Supriyo, S.K. Pramanik, A.L. Williams et al. // Int. J. Human Genetics. 2004. - Vol. 4. - P. 281-290.

227. Turner, T.T. De Graaf's Thread: The Human Epididymis / T.T. Turner // J. Androl. 2008. - Vol. 29. - P. 237-250.

228. Turner, T.T. The molecular pathology of experimental testicular torsion suggests adjunct therapy to surgical repair / T.T. Turner, H.J. Bang, J.L. Lysiak // J. Urol. 2004. - Vol. 172. - P. 2574-2578.

229. Update of daily intafe of PCDDS, PCDFs and dioxin-like PSBs from food in yopan / T. Tsutsumi, T. Yanadi, M. Nakamura et al. // Chemosphere. 2001. -Vol. 45. - P. 1129-1237.

230. Verma, RJ. Ameliorative effect of vitamin E on aflatoxin-induced lipid peroxidation in the testis of mice / R.J. Verma, A. Nair // Asian J. Androl. 2001. -N3.-P. 217-221.

231. Wellejus, A. Iron-induced oxidative DNA damage in rat sperm cells in vivo and in vitro / A. Wellejus, H.E. Poulsen, S. Loft // Free Radic. Res. 2000. - Vol. 32.-P. 75-83.

232. Williams, D. Acomparison of organochlorine resudies in human adipose tissue autopsy samples from two Ontario municipalities / D. Williams, G. Lebel, E. Zunkins //J. Toxicol. Environ. Health. -1984. Vol. 13. - P. 19-29.

233. Wolf, M.B. The anti-cancer drug, doxorubicin, causes oxidant stress-induced endothelial dysfunction / M.B. Wolf, J.W. Baynes // Biochem. Biophys. Acta. -2006. Vol. 1760. - P. 267-271.

234. Woodhouse, A.J. Suppression of aromatase activity in vitro by PCBs 28 and 105 and Aroclor 1221 / A.J. Woodhouse, G.M. Cooke // Toxicol. Lett. 2004. -Vol. 152, N1.-P. 91-100.

235. Yousef, M.I. Acrylamide-induced oxidative stress and biochemical perturbations in rats / M.I. Yousef, F.M. El-Demerdash // Toxicology. 2006. -Vol. 219.-P. 133-141.

236. Zirkin, B.R. Regulation of Leydig cell steroidogenic function during aging / B.R. Zirkin, H. Chen // Biol. Reprod. 2000. - Vol. 63. - P. 977-981.

Информация о работе

Булыгин, Кирилл Владимирович
кандидата медицинских наук
Уфа, 2010
ВАК 03.00.04

Диссертация

Биохимические механизмы влияния полихлорированных бифенилов на морфофункциональное состояние сперматогенеза в экспериментальных условиях - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы