Антицитолитическая активность антиоксидантов (Витамина Е, селенита натрия и их комбинации при токсическом повреждении печени D-галактозамина гидрохлоридом)

Илларионова, Татьяна Семеновна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Антицитолитическая активность антиоксидантов (Витамина Е, селенита натрия и их комбинации при токсическом повреждении печени D-галактозамина гидрохлоридом)
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Антицитолитическая активность антиоксидантов (Витамина Е, селенита натрия и их комбинации при токсическом повреждении печени D-галактозамина гидрохлоридом)"

На правах рукописи

Илларнонова Татьяна Семеновна*

РГВ од

- 4 НОЯ 1593

АНТИЦЙТОЛИТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ АНТИОКСИДАНТОВ: ВИТАМИНА Е, СЕЛЕНИТА НАТРИЯ И ИХ КОМБИНАЦИИ ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ПОВРЕЖДЕНИИ ПЕЧЕНИ £>- Г АЛ А КТОЗАМИНА ГИДРОХЛОРИДОМ

03.00.04 - биохимия, 14.09.25 - фармакология.

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва -1999

Работа выполнена на кафедре биохимии медицинского факультета Российского университета дружбы народов и в лаборатории фармакологии и биохимии НИИ общей и клинической патологии при Российском университете дружбы народов

Научные руководители -

академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор Т.Т.Бсрезов

доктор биологических наук, профессор .Л.Ф.Виноградова

Официальные оппоненты -

доктор биологических наук, профессор Шишкин С.С.

академик РАЕН, доктор медицинских наук, профессор Ковалев И. Е.

Ведущая организация -

Российский государственный медицинский университет

Защита диссертации состоится ц{Ж> Я& иь'м\999 г. в/9часов на заседании диссертационного совета Д 053.2Z.02 в Российском университете дружбы народов по адресу: И 7198, ГСП, ул.Миклухо-Маклая, д.8.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского Университета дружбы народов по адресу: 117198, ГСП, ул.Миклухо-Маклая, д.б.

Автореферат разослан « »_1999 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор

В.Э.Торбек

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

В течение многих лет профилактика и терапия вирусных гепатитов была и остается важной проблемой здравоохранения. В мире насчитывается более 500 млн. носителей вируса гепатита В и С; только в России зарегистрировано более 10 млн. человек, инфицированных вирусом гепатита В (Блохина Н.Л., 1997; Горбаков Н.В. и др., 1997). У значительной части из них в будущем возможно развитие хронических заболеваний печени, фармакотерапия которых основывается на применении этиотропных и патогенетических лекарственных средств. Действие последних направлено на предупреждение или устранение одного из ведущих механизмов патогенеза поражений печени -дестабилизации мембран гепйтоцитов, зависящей от инициирования свободнорадикального пероксидного окисления липияов (ПОЛ) биомембран (Арчаков А.И., 1975; Копылова Т.Н. и др., 1978, Владимиров Ю.А., 1989). Для предупреждения или ограничения этого патологического процесса в клетке целесообразно использовать фармакологические средства, обладающие антиоксидантной активностью, способные ограничить ПОЛ и стабилизировать биомембраны. Такими препаратами являются антиоксиданты (АО): витамин Е, селенит натрия и их комбинация (Кудрин А.Н. и др., 1982; Виноградова Л.Ф., 1990).

В последнее десятилетие произошли существенные изменения представлений об этиологии, патогенезе, принципах лечения и профилактики гепатитов и их осложнений. Знание биохимических и морфологических закономерностей поражения печени при вирусном гепатите позволило моделировать этот процесс в лабораторных условиях с помощью гепатотоксических ксенобиотиков. В экспериментальной гепатологии для поиска новых биологически активных веществ, защищающих печень, до сих пор применяют модель острого токсического повреждения печени классическим гепатотропным ядом четыреххлористым углеродом (СС/Д Высокая токсичность ССЦ, способного повреждать печень при всасывании через неповрежденные кожные покровы, ограничивает широкое применение его для экспериментального моделирования. В настоящее время наиболее перспективной и безопасной моделью для скрининга и фармакологического изучения новых гепатозащитных средств признана модель повреждения печени D-галактозамина гидрохлоридом (D-ГА) (Сугробова Н.П. и др., 1992), близкая по биохимическим и морфологическим проявлениям картине поражения печени при вирусном гепатите В (Матюшин Б.Н., 1983; Моисеенок А.Г. и др., 1988).

Цель Ii задачи исследования

Цель настоящей работы состояла в изучении возможности использования АО: витамина Е, селенита натрия и их комбинации как средств фармакологической регуляции цитолиза гепатоиитов при интоксикации животных D-ГА.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1) изучить механизмы гепатотоксичности D-ГА в сравнении с действием CCU и хлоксила по изменению интенсивности ПОЛ в печени, состоянию активности ферментов - маркеров цитолиза гепатоиитов АлАТ, АсАТ и гистидинаммиаклиазы в динамике;

2) изучить в сравнительном аспекте и в динамике морфологические изменения мембранных структур гепатоиитов на субклеточном уровне при токсическом поражении печени D-ГА, CCU и хлоксилом;

3) оценить антицитолитическую активность витамина Е, селенита натрия и их комбинации на течение острого токсического поражения печени D-ГА по указанным выше показателям метаболизма.

Научная новизна

Впервые выявлена гепатопротекторная активность АО: витамина Е, селенита натрия и их комбинации при остром токсическом поражении печени, вызываемом D-ГА. Установлено, что комбинация витамина Е и селенита натрия проявляет синергизм и потенцирование гепатопротекторного эффекта при поражении печени D-ГА.

В работе впервые проведено комплексное изучение патогенетических механизмов гепатотоксичности D-ГА в динамике и в сравнении с патогенезом поражений печени хлорированными углеводородами. Установлен типовой механизм повреждающего действия D-ГА, ССЦ и хлоксила на печень, заключающийся в усилении ПОЛ биомембран гепатоцитов свободными радикалами, образованными при метаболизме указанных выше гепатотоксинов.

Впервые изучено in vivo в динамике изменение активности ферментов АлАГ, АсАТ, гистидинаммиаклиазы в сыворотке крови и содержания продуктов ПОЛ, а также проведено электронно-микроскопическое исследование ультраструктурных изменений гепатоцитов при интоксикации D-ГА.

На основании экспериментальных данных предложена «мягкая» модификация модели токсического поражения печени при однократном внутрибрюшинном введении D-ГА в дозе 300 мг/кг, которую можно использовать для изучения новых гепатотропных средств.

Теоретическая ценность работы Устаиовлены молекулярные, мембранные и клеточные механизмы токсического повреждения печени D-ГА, связанного с конформационной перестройкой молекул структурных белков и инициированием ПОЛ в биомембранах гепатоцитов. Дано теоретическое обоснование путей профилактики и патогенетической терапии токсических повреждений печени и повреждений печени при вирусном гепатите В и его осложнениях витамином Е, селенитом натрия и их комбинацией. Представлены доказательства определяющей роли витамина Е, селенита натрия и их комбинации в стабилизации субклеточных и клеточных мембран гепатоцитов, в усилении репаративных и белоксинтетических процессов при поражении печени D-ГА.

Практическая ценность работы >

Изучена антицитолитическая активность АО: витамина Е, селенита натрия и их комбинации при токсическом повреждении печени D-ГА. По результатам работы получен Евразийский патент № 000210 «Препарат, защищающий печень при вирусном гепатите» от 5 октября 1998 г. Разработана «мягкая» модификация модели острого токсического поражения печени D-ГА, которую можно использовать для изучения новых гепатопроте кторов.

Положения, выносимые на защиту Автор развивает научное направление, посвященное изысканию средств фармакологической регуляции токсических поражений печени и выясняющее их типовые патогенетические механизмы на молекулярном, субклеточном, клеточном, органном и организменном уровнях.

1. D-галактозамина гидрохлорид - истинный гепатотоксин косвенного действия - и хлорированные углеводороды: четыреххлористый углерод, хлоксил - истинные гепатотоксины прямого действия - вызывают идентичное по типовому механизму действия поражение печени, в основе которого лежит усиление перекисного окисления липидов биомембран, гиперферментемия, деструкция субклеточных и клеточных мембран гепатоцитов с последующим некрозом.

2. Изменение проницаемости цитоплазматических мембран гепатоцитов на ранних сроках поражения печени D-галактозамина гидрохлоридом, вследствие особенностей его метаболизма, обусловлено конформационной перестройкой молекул структурных белков, что приводит к ингибированию синтеза белка в гепатоцитах и стимулированию катаболических процессов.

3. Антиоксиданты: витамин Е, селенит натрия и их комбинация являются эффективными средствами фармакологической регуляции

цитолиза геиатоцитов при остром токсическом поражении печени D-галактозамина гидрохлоридом - модельном аналоге поражения органа при вирусном гепатите В человека.

4. Комбинация антиоксидантов, содержащая в своем составе витамин Е и селенит натрия в малых дозах обнаруживает синергизм и потенцирование антиоксидантного и антицитолитического эффекта.

Связьисследоваинй с научной программой Диссертационная работа выполнена в соответствии с основным научным направлением НИР РУДН «Диагностика и лечение основных заболеваний человека». Тема Jfe 901611 «Проведение фундаментальных исследований в области молекулярных основ развития высших организмов в норме и патологии, исследование основных механизмов регуляции клеточного метаболизма и дифференцировки клеток», государственный регистрационный номер № 01.9.10 033119.

Апробации работы Отдельные фрагменты диссертационной работы представлены для обсуждения на конференциях и симпозиумах: II Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (1у1осква, 1995), научно-практической конференции молодых ученых медицинского факультета РУДН (Москва, 1996), Ш Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1996), V Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1998).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 9 работ, в том числе получен 1 Евразийский патент.

Объем и структура диссертации Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, обсуждения результатов, заключения, выводов и библиографии. Работа изложена на ... страницах текста, содержит ... таблиц и ... рисунков. Список литературы включает ... источников, из них ... на иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования.

Экспериментальная работа выполнена в условиях острого эксперимента на 180 беспородных белых крысах обоего пола с массой тела 150,0-230,0 г. Для решения поставленных задач в лабораторных условиях моделировали острое токсическое поражение печени. Первую модель острого токсического поражения печени у крыс создавали путем подкожного введения CCU в 50% растворе растительного масла ежедневно один раз в день в течение 4 дней подряд в дозе 0,4 мл/100 г массы (курсовая доза 1,6 мл/100 г массы). Все показатели исследовали

через 1,5 часа и на 3, 7, 14 сутки от начала отравления. Вторую модель острого токсического поражения печени у крыс создавали путем однократного введения хлоксила в токсической дозе 2 г/кг массы peros в 2% крахмальном геле. Все показатели исследовали через 1 час, 5 часов, 3 и 7 суток после введения токсина. Третью модель поражения печени получали после однократного введения водного раствора D-ГА в дозе 0,3 г/кг массы внугрибргошинно. Все показатели исследовали через 30 минут, 4, 14, 20,24 и 72 часа после введения токсина. Животные были разделены на следующие экспериментальные группы. В качестве контрольных взяты группы: а) интактных животных; б) животных, получавших селенит натрия (Na¡SeOj), витамин Е (Е) в отдельности и в комбинации; в) животных, получавших растительное масло. В остальных группах животным вводили следующие вещества: 1 - CCU +Е; 2- CCU + Na^SeOf, 3 - CCU + Е + Na2SeO¡, 4 - хлоксил + Е\ хлоксил + Na^SeOy, хлоксил + Е + NaiSeOy, 5 - D-ГА + 6 - D-ГА + Na2Se03; 7 - D-ГА + Е + NaßeOy, 8 -СС74; 9 - хлоксил; 10 - D-ГА. Содержание продуктов ПОЛ, активность ферментов гистидинаммиаклиазы, АлАТ и АсАТ исследовали также в группах животных, которым вводился растворитель (растительное масло) per os, подкожно в тех же количествах, что и при введении витамина Е и CCh. Разность в содержании КД и МДА в группах интактных животных и животных, получавших растительное масло, учитывали как поправку на растворитель при расчете средних значений содержания КД и МДА в опытных группах (поправка для КД - 27 нМоль/г ткани печени, для МДА 3,0 нМоль/г ткани печени). Показатели активности гистидинаммиаклиазы, АлАТ и АсАТ в группах животных, получавших растворитель, не отличались от соответствующих показателей у интактных животных.

Селенит натрия в виде 0,001% водного раствора и витамин Е в виде 5% ампульного масляного раствора а-токоферола ацетата вводили крысам per os. Выбор доз и длительность курса основывался на экспериментальных данных, полученных профессором Л.Ф.Виноградовой и коллегами. Для оценки антиоксидантного действия витамина Е, селенита натрия и их комбинации использовали профилактическую схему их введения. АО вводили по 1/3 курсовой дозы в течение 3 дней подряд до введения хлоксила. При поражении печени крыс CCU витамин Е, селенит натрия и их комбинация вводились ежедневно один раз в день в течение трех дней за 2 часа до каждого введения CCU, начиная с первого его введения! При остром токсическом гепатите, вызванном D-ГА, АО и их комбинацию вводили в тех же дозах в течение 3 дней подряд вечером до введения D-ГА, а на 4-ый день утром вводили внутрибрюшинно D-ГА.

Содержание в печени КД и МДА определяли через 1,5 часа, на 3, 7 и 14 сутки после введения CCU. При моделировании острого токсического гепатита с помощью хлоксила вышеуказанные параметры исследовали через 1 и 5 часов, на 3 и 7 сутки после введения токсина. При поражении печени, вызванном D-ГА, содержание КД и МДА в гомогенате печени крыс определяли через 30 минут, 4 часа, 14 часов, 24, 72 часа, 5 и 7 суток после в веления гелатотоксина. Активность АлАТ и АсАТ в сыворотке крови определяли через 30, 60, 120 минут и на 1, 3 и 7 сутки после введения хлоксила,-а также через 3 суток от начала введения СС/4. Активность гистидинаммиаклиазы в сыворотке крови крыс определяли на 3 сутки после введения хлоксила н CCh, то есть в срок максимального поражения печени. При ОТГ, вызванном D-ГА, активность АлАТ, АсАТ и гистидинаммиаклиазы в сыворотке крови крыс определяли через 30 минут, 4 часа, 14 часов, 24, 72 часа, 5 и 7 суток после введения D-ГА. Действие АО и их комбинация при остром поражении печени D-ГА исследовали в интервалы времени, характеризующиеся значительной интенсивностью ПОЛ и гиперферментемией. Влияние селенита натрия, витамина Е и их комбинации на содержание КД, МДА в гомогенате печени и активность АлАТ, АсАТ и гистидинаммиаклиазы в сыворотке крови крыс исследовали через 24 и 72 часа после введения животным D-ГА. В эти же сроки часть животных (3-4) из каждой группы забивали, изолировали печень и исследовали её методом световой и электронной микроскопии. Для электронномикроскопического исследования кусочки органа фиксировали в четырехокиси осмия и обрабатывали по общепринятой методике. Срезы просматривали в электронном микроскопе "Philips".

Применялись следующие методы исследования. I. Состояние ПОЛ при повреждении печени хлорированными углеводородами оценивалось по содержанию КД и МДА а гомогенате печени (Placer, Kvzela, 1968) в общих липидах, выделенных из гомогената печени методом J.Folch (1957). II. При токсическом поражении печени D-ГА определение содержания ДК и МДА в гомогенате печени проводили по методу И.Д.Стальной и Г.Г.Гаришиили (1977). III. О степени повреждения цитоплазматической мембраны гепатоцитов судили по изменению активности ферментов АлАТ, АсАТ в сыворотке крови крыс по методу Reitman, Frenkel (1957) и гистидинаммиаклиазы по методу Tabor и Mehler (1955) в модификации С.С.Буробиной (1979). IV. Изучение морфологических изменений при токсических поражениях печени проводили методами световой и электронной микроскопии. V. Для определения характера эффекта комбинации антиоксидантов использовался метод L.Webb (1966). Статистический анализ полученных

данных проводили с помошыо /-критерия Стыодента (М.Л.Беленький, 1963). Различия считались достоверными при р<0,05.

Результаты и их обсуждение

Результаты проведенных исследований показали, что D- ГА, введенный крысам внутрибрюшинно однократно в дозе 0,3 г/кг массы, оказывал гепатотокснческое действие, связанное с инициированием ПОЛ биомембран гепатоцитов. Значительное увеличение образования КД в печени при поражении £>-ГА регистрировалось через 20-24 часа, в то время как при поражении печени хлорированными углеводородами существенное повышение содержания этих продуктов имело место в первые часы после введении токсина. Максимальный подъем КД при действии СС/4 наблюдался на 3-7 сутки, а к 14-м суткам снижался до нормы. Наибольшее увеличение данного показателя при поражении печени хлоксилом выявлялось уже через 5 часов, а на 3-й сутки содержание КД снижалось до нормы.

При введении животным СС14 содержание МДА в печени достигало значительного уровня на 3-й, 7-е и 14-е сутки, что в 1,8, 1,6 и 1,8 раза выше, чем в контроле. При введении хлоксила повышение уровня МДА в 1,4 раза (р<0,001) по сравнению с контролем отмечалось на 3-й сутки и в 1,6 раза - на 7-е сутки. Максимальное повышение содержания МДА после введения D-ГА отмечалось на 3-5 сутки, а к 7-м суткам его содержание снижалось до нормы. Исходя из вышеизложенного, можно сделать вывод о наличии общего аспекта в патогенезе гепатотоксичности D-ГА, CCU и хлоксила, связанного с их прооксидантным действием.

На ранних сроках поражения печени, а именно через 30 минут после внутрибрюшинного введения D-ГА животным не отмечалось структурных нарушений цитоплазматической мембраны гепатоцитов, мембран Мх, а также мембран ЭПР. Выраженные ультраструктурные изменения в гепатоцитах обнаруживались через 4 часа после введения D-ГА животным. При этом наблюдались фрагментация и лизис гладкого ЭПР светлых гепатоцитов, единичные липидные включения, мелкие Мх, неравномерное распределение хроматина в ядре в виде глыбок. В темных гепатоцитах отмечались структурные нарушения в виде расширений и вакуолизации сети со слушиванием рибосом. На билиарном полюсе наблюдались единичные мелкие вторичные лизосомы.

Через 14 часов после введения D-ГА картина поражения печени нарастала. Наблюдалось увеличение явлений гидропической дистрофии с признаками баллонной дистрофии. Через 24 часа_ после введения животным D-ГА электронномикроскопическое исследование выявило нарастание лизиса ЭПР, деструкцию кариолеммы и цитолеммы, гидропическую дистрофию с переходом в колликвационный некроз.

Целостность и проницаемость биомембран гепатоцитов зависит от содержания в фосфолипидах полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК), которые прежде всего подвергаются переокислению. В результате инициирования ПОЛ свободными радикалами, образованными при метаболизме указанных выше хлорированных углеводородов и В-ГА, появляются молекулы гидроперекисей с двумя сопряженными двойными связями - КД - метаболиты переокисленных ПНЖК. КД содержат полярные гидрофильные группировки, ведущие к ослаблению гидрофобных связей в биомембранах и разрыхлению мембран с появлением в липидном слое перекисных кластеров или гидрофильных каналов, что ведет к нарушению проницаемости мембран. Этот процесс завершается выделением содержимого клеток в межклеточное пространство и кровь. Таким образом, гиперферментемия является надежным показателем повреждения клеточных мембран гепатоцитов. Чувствительными маркерами начинающегося цитолиза гепатоцитов являются повышение активности цитоплазматического фермента АлАТ и, особенно, активности гистидинаммиаклиазы, которая у здоровых животных в крови не определяется - появление её активности свидетельствует о нарушении проницаемости цитолеммы гепатоцитов. Необходимо отметить, что активность гистидинаммиаклиазы регистрировалась уже через 30 мин после введения животным 23-ГА. В этот период времени активность АлАТ не повышалась, содержание продуктов ПОЛ в печени достоверно снижалось, а морфологические изменения ультраструктуры гепатоцитов отсутствовали. Факт появления в крови гистидинаммиаклиазы свидетельствует о сложном механизме нарушения проницаемости цитоллазматической мембраны гепатоцитов, зависящей от нарушения синтеза белка, РНК, липопротеидов, гликолипопротеидов, а также о преобладании катаболического пути белкового обмена, поскольку ги стид и н а мм и а к л иаз а является ферментом, катализирующим дезаминирование аминокислоты гистидина. При воздействии О-ГА нарушаются конформационные связи в молекулах гликолипопротеидов, за счет чего появляются гидрофильные кластеры в цитоллазматической мембране клеток печени. Таким образом, этот маркер свидетельствует о наличии пускового механизма гепатотоксичности £)-ГА, связанного с нарушением синтеза пиримидиновых нуклеотидов, синтеза ядерных белков - мРНК, тРНК, белка в рибосомах шероховатого ЭПР, усилением катаболизма белка в гепатоцитах, что подтверждается электронно-микроскопическими исследованиями.

Достоверное повышение активности АлАТ в сыворотке крови при поражении печени О-ГА регистрировалось через 4 часа после введения токсина и коррелировало с постепенным нарастанием содержания

первичных и вторичных продуктов ПОЛ, свидетельствовавшим о деструкции цитоплазматической мембраны гепатоцитов. Явления наиболее выраженного цитолиза наблюдались уже через 14 часов после введения животным D-ГА. В этот период времени достоверно повышалась активность и фермента АсАТ в сыворотке крови. Максимальное повышение активности ферментов АлАТ, АсАТ и гистидинаммиаклиазы наблюдалось через 20-24 часа. Через 72 часа после введения животным D-ГА в токсической дозе 0,3 г/кг активность АлАТ и АсАТ приближалась к контрольному уровню. Активность гистидинаммиаклиазы в крови к этому сроку исследований ещё не нормализовалась.

При поражении печени CCU и хлоксилом увеличение активности АлАТ, АсАТ и гистидинаммиаклиазы наблюдалось уже че'рез 30-60 минут. Максимальная активность АлАТ определялась к 3-м суткам, а к 7-м и 14-м суткам-значительно снижалась. Нарастание активности АсАТ в эти сроки было менее выражено, по сравнению с АлАТ. Максимум увеличения активности АсАТ отмечался на 3-й сутки, что, возможно, связано с локализацией фермента на мембранах Мх, а не только в цитоплазме гепатоцита. При поражении печени хлорированными углеводородами активность гистидинаммиаклиазы умеренно повышалась в начальные сроки отравления животных. Максимум активности фермента наблюдался на 3-й сутки после введения CCU и хлоксила, что соответствовало также максимальному проявлению деструктивных процессов в гепатоцитах при электронномикроскопическом исследовании в печени. Необходимо отметить, что увеличение активности АлАТ, АсАТ и гистидинаммиаклиазы в сыворотке крови при действии хлорированных углеводородов было связано, прежде всего, с деструктивным действием КД и МДА на гепатоциты, что подтвердилось морфологически. Начальные деструктивные изменения гепатоцитов наблюдались в печени в течение первого часа после введения указанных гепатотоксинов. Были обнаружены дистрофические изменения, главным образом, светлых гепатоцитов в виде дегрануляции, вакуолизации и дефрагментации шероховатого ЭПР, увеличения количества лизосом и пероксисом и снижения количества Мх. Наиболее выраженные изменения в печени при действии хлорированных углеводородов - центролобулярные некрозы -наблюдались на 3-й сутки. Эти изменения говорят о нарушении белоксинтетической функции гепатоцитов. Процесс деструкции гепатоцитов при действии хлорированных углеводородов по нашим данным и данным литературы начинался в липидном слое мембран и был прямо связан с нарушением мембранной проницаемости. Далее изменениям подвергались белковые молекулы. Происходило образование нерастворимых полимерных продуктов, денатурация белка, и усиление

процессов катаболизма, чго подтвердилось результатами наших экспериментов, обнаруживших появление активности гистидинаммиаклиазы, свидетельствующее о преобладании катаболического пути в обмене белка и угнетении его синтеза.

Истинный гепатотоксин косвенного действия D-ГА нарушает специфические пути метаболизма в клетке, а именно изменяет пиримидиновый обмен нуклеогидов, ингибмрует синтез тРНК. в том числе и мембранных белков, что ведет к усилению ПОЛ в биомембранах и их деструкции на более поздних сроках поражения печени. В срок максимального поражения печени D-ГА нами наблюдался усиленный выход АлАТ, АсАТ и гистидинаммиаклиазы в результате повышения проницаемости мембран и увеличением содержания продуктов ПОЛ в печени. По нашим представлениям усиление проницаемости цитоплазматических мембран обусловлено нарушением синтеза белка в клетке в результате метаболических превращений D-ГА, сопровождающихся дефицитом уридилатов. Данное предположение получило подтверждение при элекгронномикроскопическом исследовании, выявившем деструктивные изменения ядерных структур кариолсммы, мембран ЭПР и Мх.

Печень представляет собой орган с большой регенераторной способностью, о чем свидетельствовало наблюдавшееся нами снижение активности ферментов на 3-й (АсАТ), 5-е (АлАТ) и на 5-7-е (гисгидинаммиаклиаза) сутки. В эти же сроки наблюдений происходила нормализация показателей ПОЛ в печени крыс при токсическом поражении D-ГА - КД - на 3-й сутки и МДА - на 7-е сутки после введения токсина. Морфологическая картина ультратонких срезов печени, взятых для исследования степени поражения органа в данные интервалы времени, подтвердила полученные нами результаты исследований. Мы выявили, что наряду с общей картиной поражения гепатоцитов наблюдались изменения компенсаторного характера. Было выявлено равномерное распределение хроматина в ядре, сохранение целостности кариолеммы, формирование плотноприлежащих канальцев шероховатого ЭПР, покрытых рибосомами, скопление гранул гликогена в нем, укрупнение Мх, наличие коротких крист в Мх, образованных тесно прилежащими мембранами и электронно-плотным матриксом. Наблюдавшиеся изменения свидетельствовали об усилении репаративных процессов и активации компенсаторных механизмов в гепатоцитах через 72 часа после введения D-ГА. Восстановительные процессы при поражении печени CCh и хлоксилом наблюдались только через 7-14 суток-после поражения органа. В эти сроки наблюдалось уменьшение активности цитоплазматических ферментов АлАТ, АсАТ, а также нормализовалась морфологическая картина печени.

Полученные данные свидетельствуют о наличии общих функциональных и структурных процессов, наблюдаемых при токсических повреждениях печени хлорированными углеводородами и £>-ГА: дистрофические изменения гепатоцитов с признаками цитолиза, некроза и стеатоза вследствие нарушения проницаемости субклеточных и клеточных мембран гепатоцитов. Пусковые механизмы нарушения мембранной проницаемости у £>-ГА и хлорированных углеводородов различны. Для хлорированных ^углеводородов таким механизмом является усиление инициирования ПОЛ свободнорадикальными метаболитами, образующихся при участии цитохрома Р-450. В основе проницаемости мембран при действии О- ГА лежит нарушение специфических путей метаболизма в клетке, вследствие ингибирования синтеза белка, что приводит к повреждению органелл ЭПР, Мх, нарушению синтеза и метаболизма липопротеинов, инициированию реакций ферментативного ПОЛ, истощающих антиоксидантную систему клеток и нарушающих функционирование плазматических, митохондриальных мембран и мембран ЭПР.

Следовательно, усиление инициирования ПОЛ является необходимым условием гелатотоксичности £-ГА и хлорированных углеводородов, и является обоснованием целесообразности применения антиоксидантов для фармакологической регуляции этого процесса и предупреждения токсического действия реакционноспособных продуктов ПОЛ на биомембраны гепатоцитов. В качестве таких препаратов, обладающих универсальными мембраностабилизирующими свойствами, нами были использованы витамин Е, селенит натрия и их комбинация.

АО существенно снижали содержание продуктов ПОЛ в печени крыс с острым токсическим повреждением печени £>-ГА. Селенит натрия при поражении печени £>-ГА, умеренно снижал содержание КД в печени животных в сравнении с действием витамина Е и их комбинации. Витамин Е уменьшал этот показатель в печени животных в 1,5 раза эффективнее по сравнению с селенитом натрия, что связано с величиной дозы витамина Е, превышавшей более, чем в 300 раз курсовую дозу селенита натрия. В свою очередь, комбинация витамина Е и селенита натрия оказалась эффективнее селенита натрия в 1,6 раза и витамина Е в 1,3 раза. Из литературы известно, что витамин Е и селенит натрия являются синергистами. Наши исследования также выявили усиление антиоксидантного действия витамина Е селенитом натрия при их совместном применении.

Указанные АО ингибировали образование МДА в печени при поражении её О-ГА. При сравнительном анализе эффективности АО оказалось, что витамин Е и селенит натрия в разных дозах, но в равной мере снижали содержание МДА в печени, что свидетельствовало об

изоэффективности их доз. На основании этого мы полагаем, что селенит натрия оказался эффективнее витамина Е более, чем в 300 раз. Наибольшую антиоксидантную активность обнаружила комбинация АО, что позволяет говорить о потенцировании эффекта витамина Е и селенита натрия.

Наличие антиоксидантных и мембраностабилизирующих свойств у АО и их комбинации обусловливает снижение проницаемости цитолеммы гепатоцитов, препятствуя выходу ферментов в кровь, что выражается в уменьшении активности АлАТ, АсАТ и гистидинаммиаклиазы через 24 часа после введения животным Л-Г А. При этом витамин Е проявлял весьма умеренный мембраностабилизируюший эффект, селенит натрия был активнее витамина Е более чем в 300 раз. Комбинация АО оказывала наибольшее защитное действие, вследствие синергизма и потенцирования мембраностабилизирующей активности. Аналогичные результаты были получены при исследовании фармакологического эффекта применения витамина Е, селенита натрия и их комбинации через 72 часа после введения £)-ГА.

АО и их комбинация уменьшали выраженность деструктивных процессов в гепатоцитах и улучшали компенсаторные и репаративные процессы. Защитный эффект селенита натрия, заключавшийся в снижении некротического поражения и восстановлении ультраструктурной организации гепатоцитов, был выражен более значительно, чем у витамина Е. Наибольшим защитным действием обладала комбинация АО. Улучшение компенсаторно-регенераторных процессов в гепатоцитах при действии селенита натрия было связано с увеличением количества рибосом, полисом, развитостью шероховатого ЭПР и контурируемостью мембран. Действие витамина Е проявлялось, в основном, в увеличении количества и размеров Мх. Комбинация АО проявила наибольший эффект. При электронно-микроскопическом исследовании наблюдалась гиперплазия шероховатого ЭПР, рибосомального аппарата, гипертрофия и гиперплазия Мх. Таким образом, электронномикроскопическая картина гепатоцитов свидетельствовала не только об усилении защитного действия АО и их комбинации, заключавшегося в сохранении целостности клеточных и субклеточных мембран, но и об активации компенсаторно-регуляторных процессов в гепатоцитах. Гииерплазия ЭПР, гипертрофия Мх, скопление свободных полисом и рибосом, наличие ядер с крупными ядрышками и обнаружение большого количества пор в кариолемме свидетельствовало об активации белоксиятетической функции печени под влиянием АО и их комбинации. Подобная ультраструктурная' организация клеток печени указывает на стимулирование витамином Е, селенитом натрия и их

комбинацией белоксинтетическич процессов на многих мембранных образованиях клетки.

Завершая обсуждение результатов исследований активности витамина Е, селенита натрия и их комбинации при поражении печени О-ГА, целесообразно отметить, что указанные АО являются незаменимыми средствами фармакологической регуляции, как процесса цитолиза клеток печени, так и синтеза белка. Витамин Е и селенит натрия тесно взаимосвязаны в широком аспекте обменных процессов и их присутствие в физиологических количествах является обязательным в органах и системах живого организма. Данная работа создает предпосылки для создания лекарственных препаратов на основе исследованных АО и их комбинации, действующих не только на устранение звеньев патологического процесса, развивающегося в печени в условиях токсического или вирусного поражения, но и необходимых для нормальной жизнедеятельности животного и человеческого организма.

Таким образом, моделирование патологии печени с помощью О-ГА и фармакологическая регуляция её витамином Е, селенитом натрия и их комбинацией по основным звеньям патологического процесса позволяет рекомендовать применение указанных АО для профилактики и комплексной терапии поражения печени при вирусном гепатите В человека.

ВЫВОДЫ

1. Биохимические изменения при поражении печени £>-галактозамина гидрохлоридом (£>-ГА) аналогичны изменениям при вирусном гепатите В и токсическом гепатите, вызванном хлорированными углеводородами. Инициирование пероксидного окисления липидов (ПОЛ) при поражении печени О-ГА является типовым процессом, и сопровождается значительным увеличением содержания в печени продуктов ПОЛ - конъюгированных диенов (КД) и малонового диальдегида (МДА).

2. £>-ГА, подобно ССЬ и хлоксилу, вызывает нарушение проницаемости биомембран гепатоцитов, сопровождающееся гиперферментемией. Достоверное повышение активности цитоплазматических ферментов аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы. (АсАТ) наблюдается через 4-14 часов, а органоспецифического фермента гистидинаммиакпиазы - через 30 минут после введения £>-ГА.

3. На ранних сроках (30 минут) повреждения печени й-ГА изменений ультраструктуры гепатоцитов не выявляется, в то время как активность гистидинаммиаклиазы - химического маркера цитолиза гепатоцитов - достоверно повышается, что свидетельствует о нарушении проницаемости цитоплазматических мембран за счет возможных

конформационных изменений мембранных белков. Деструкция субклеточных и клеточных мембран гепатоцитов в виде гидропической дистрофии, переходящей в колликвационный некроз, наблюдается через 24 часа после введения О-ГА.

4. Выявлены общие структурные изменения печени при токсических поражениях ССЬ, хлоксилом и £>-ГА, в виде дистрофических изменений гепатоцитов, цитолиза, некроза и стеатоза, в патогенезе которых основное место принадлежит поражениям субклеточных и клеточных мембран гепатоцитов.

5. Витамин Е, селенит натрия и их комбинация ингибируют ПОЛ в печени животных, стабилизируют биомембраны гепатоцитов, снижают активность цитоплазматических ферментов АлАТ, АсАТ и гИстидинаммиаклиазы, стимулируют репаративные процессы при остром токсическом поражении печеии, вызываемом й-ГА.

6. Представлены доказательства того, что селенит натрия в 300 раз эффективнее витамина Е при токсическом поражении печени й-ГА. Выявлен синергизм и потенцирование антиоксидантной и фармакотерапевтической активности витамина Е и селенита натрия при комбинированном их применении при остром токсическом повреждении печени £)-ГА.

7. Высокая фармакотерапевтическая эффективность витамина Е, селенита натрия и их комбинации является следствием стимулирования белоксинтетических процессов в гепатоцитах и ингибирования ими типового молекулярного мембранного патогенетического механизма -инициирования ПОЛ и повреждения субклеточных и плазматических мембран гепатоцитов с последующими дистрофическими и некротическими процессами в паренхиме печени при действии О-ГА. Витамин Е, селенит натрия и их комбинация стимулируют защитные механизмы на молекулярном, субклеточном и клеточном уровнях.

8. Витамин Е, селенит натрия и их комбинация являются основными и незаменимыми средствами фармакологической регуляции процесса цитолиза гепатоцитов, вызываемого О-ГА - модельным аналогом вирусного гепатита В, и поэтому могут быть рекомендованы как эффективные гепатопротекторы при вирусном гепатите В.

Основные публикации по теме диссертации

1. Виноградова Л.Ф., Харлицкая Е.В., Мирзоян Ж.А., Манякина Н.С., Бекетова Т.П., Буробина С.С., Илларионова Т.С. Патогенетические механизмы гепатотоксичности антигельминтика хлоксила // Тезисы •докладов II Российского национального конгресса «Человек и лекарство», Москва, 10-15 апреля 1995 г.-М., «Фармединфо».-1995.-С.49.

2. Виноградова Л.Ф., Илларионова Т.С., Харлицкая Е.В., Березов Т.Т., Буробина С.С. Антицитолитическая активность антиоксидантов при

поражении печени Д- гая а кто з а м и н а гидрохлоридом //Тезисы докладов III Российского национального конгресса «Человек и лекарство», Москва, 16-20 апреля 1996 г.-М., «Фармедикфо».- 1996. -С. 91.

3. Виноградова Л.Ф., Илларионова Т.С., Харлицкая Е.В., Березов Т.Т., Буробина С.С. Фармакологическая регуляция антиоксидантами процесса цитолиза гепатоцитов при острой интоксикации D-галактозамина гидрохлоридом // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Экспериментальная медицина. -1997.-№2.-С. 65-70.

4. Илларионова Т.С., Виноградова Л.Ф., Харлицкая Е.В., Буробина С.С., Березов Т.Т. Обшие аспекты патогенеза острого токсического поражения печени D-галактозамина гидрохлоридом и хлорированными углеводородами // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Экспериментальная медицина. - 1997. - №2. -С. 71-75.

5. Виноградова Л.Ф., Харлицкая Е.В., Манякина Н.С., Мирзоян Ж.А., Илларионова Т.С,, Березов Т.Т. Коферменты убихиноны-9 и -10 -активные средства защиты печени от токсических эффектов D-галактозамина гидрохлорида // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Экспериментальная медицина. — 1997. - №2. -552-553.

6. Виноградова Л.Ф., Березов Т.Т., Харлицкая Е.В., Манякина Н.С., Илларионова Т.С. Буробина С.С. Препарат, защищающий печень при гепатите // Бюллетень Евразийского патентного ведомства. - 1997 -№3.

7. Виноградова Л.Ф., Харлицкая Е.В., Манякина Н.С., Мирзоян Ж.А., Илларионова Т.С., Березов Т.Т. Коферменты убихиноны-9 и -10 -активные средства защиты печени от токсических эффектов D-галактозамина гидрохлорида // Тезисы докладов V Российского национального конгресса «Человек и лекарство», Москва, 21-25 апреля 1998 г. - М., «Фармединфо».— С. 552-553.

8. Виноградова Л.Ф., Березов Т.Т., Харлицкая Е.В., Илларионова Т.С., Буробина С.С., Манякина Н.С. Препарат, защищающий печень при вирусном гепатите // Евразийский патент №000210 от 5 октября 1998 г.

9. Виноградова Л.Ф., Илларионова Т.С., Харлицкая Е.В., Буробина С.С., Березов Т.Т. Фармакологическая регуляция антиоксидантами процесса цитолиза гепатоцитов при острой интоксикации D-галактозамина гидрохлоридом // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1998. - №4. -С. 417-419.

Список

АО - антиоксиданш

АлАТ ~ аланинаминотрансфераза АсАТ - аспартатаминотрансфераза ГП - глутатиоялероксидаза КД - конъюгированные диены МДА - малоновый диальдегид Мх - митохондрии

ктиччых сокращении

ННЖК - полиненасыщенные жирные кислоты

ПОЛ - перекисное окисление липидов ЭПР - эндоллазматический ретихулум ССЦ - четыреххлористый углерод •О-ГА - О-галактозамина гидрохлорид Ми&Оз - селенит натрия

Илларионова Татьяна Семеновна (Россия)

«Антицитолитическая активность антиоксидантов: витамина Е, селенита натрия и их комбинации при токсическом повреждении печени D-галактозамина гидрохлоридом» В работе выявлены общие аспекты патогенеза токсического поражения печени D-галактозамина гидрохлоридом (£>-ГА) и хлорированными углеводородами - СО, и хлоксилом, сводящиеся к инициированию процесса перекисного окисления липидов биомембран гепатоцитов и повышенной их проницаемости для цитоплазматичесхих ферментов атанин-, аспартатаминитрансферазы и гистидиналшиаклиазы, являющихся химическими маркерами цитолича гепатоцитов в сыворотке крови. Исследована антИоксидантная и мембраностабилизирующая активность витамина Е, селенита натрия и их комбинации при повреждении печени D-ГА. Витамин Е проявил умеренный фармакологический эффект, селенит натрия был в 300 раз активнее витамина Е, а их комбинация выявила синергизм и потенцирование антицитолитической активности, что позволяет рекомендовать применение их для профилактики и комплексной терапии поражения печени при вирусном гепатите В человека.

Tatyana S. Illarionova (Russia)

"Anticytolytic activities of sodium selenite, vitamin E and their combination in the rat liver lesion by D-galactosamine hydrochloride".

The common aspects of the pathogenesis of toxic hepatitis caused by D-galactosamine hydrochloride (£>-ГА), ССЦ and chloxyle was revealed. The basis of pathogenesis of toxic liver lesion caused by this drugs are the initiation of the peroxidation of the membrane lipids, increase of hepatocyte biometnbranes permeability for cytoplasmic enzymes - alanin aminotransferase, aspartat aminotransferase and histidine ammoniumlyase which are the markers of cytolysis of hepatocyte in blood serum. Antioxidants and membranostabilizing activities of sodium selenite, vitamin E and their combination were tested on the experimental model of the rat liver lesion by D-ГА. Vitamin E showed a moderate pharmacological effect, sodium selenite activity was 300 times as much as vitamin E activity for liver damage prevention and their combination revealed synergism and potentiation for anticytolytic activity. From the results it is concluded that vitamin E and sodium selenite are indispensable substances for the pharmacological regulation of this process.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Илларионова, Татьяна Семеновна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные представления о токсических поражениях печени

1.1.1. Общие патогенетические механизмы токсических поражений печени

1.1.2. Патогенетические механизмы гепатотоксичности D-галактозамина гидрохлорида и хлорированных углеводородов: четыреххлористого углерода и хлоксила

1.2. Фармакология, токсикология и молекулярные механизмы действия соединений селена, витамина Е и их роль в биологии и медицине

1.2.1. Защитная роль соединений селена и витамина Е при токсических поражениях печени

ГЛАВА II. ПАТОЛОГИЧЕСКОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ, МЕТОДЫ

ИССЛЕДОВАНИЙ И ПРЕПАРАТЫ

2.1. Патологические модели и материалы исследований

2.2. Методы исследований

2.2.1. Методы исследования перекисного окисления липидов

2.2.2. Методы определения активности аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови крыс

2.2.3. Метод определения активности гистидинаммиаклиазы в сыворотке крови крыс

2.2.4. Изучение морфологической структуры печени методами световой и электронной микроскопии

2.2.5. Метод оценки защитной (гепатопротекторной) активности комбинации антиоксидантов: витамина Е и селенита натрия

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА III. ОБЩИЕ АСПЕКТЫ ПАТОГЕНЕЗА ОСТРОГО ТОКСИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ D-ГАЛАКТОЗАМИНА ГИДРОХЛОРИДОМ И ХЛОРИРОВАННЫМИ УГЛЕВОДОРОДАМИ: ЧЕТЫРЕХХЛОРИСТЫМ УГЛЕРОДОМ И ХЛОКСИЛОМ

3.1. Действие D-галактозамина гидрохлорида, четыреххлористого углерода и хлоксила на интенсивность перекисного окисления липидов печени в динамике

3.2. Изменение активности аминотрансфераз в сыворотке крови крыс под действием D-галактозамина гидрохлорида, четыреххлористого углерода и хлоксила в динамике

3.3. Изменение активности гистидинаммиаклиазы в сыворотке крови крыс под действием D-галактозамина гидрохлорида, четыреххлористого углерода и хлоксила в динамике

3.4. Изменение структуры печени под действием D-галактозамина гидрохлорида, четыреххлористого углерода и хлоксила в динамике

ГЛАВА IV. ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ РЕГУЛЯЦИЯ

АНТИОКСИДАНТАМИ: СЕЛЕНИТОМ НАТРИЯ, ВИТАМИНОМ Е И ИХ КОМБИНАЦИЕЙ ЦИТОЛИЗА ГЕПАТОЦИТОВ ПРИ ПОРАЖЕНИИ ПЕЧЕНИ D-ГАЛАКТОЗАМИНА ГИДРОХЛОРИДОМ

4.1. Регулирующее действие селенита натрия, витамина Е и их комбинации на перекисное окисление липидов печени, пораженной D-галактозамина гидрохлоридом, в динамике

4.2. Регулирующее действие селенита натрия, витамина Е и их комбинации на активность аминотрансфераз в сыворотке крови крыс при поражении печени D-галактозамина гидрохлоридом в динамике

4.3. Действие селенита натрия, витамина Е и их комбинации на активность гистидинаммиаклиазы в сыворотке крови крыс при поражении печени D-галактозамина гидрохлоридом в динамике

4.4. Защитное влияние селенита натрия, витамина Е и их комбинации на структуру печени, пораженной D-галактозамина гидрохлоридом

ГЛАВА V. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Антицитолитическая активность антиоксидантов (Витамина Е, селенита натрия и их комбинации при токсическом повреждении печени D-галактозамина гидрохлоридом)"

Актуальность проблемы. В течение многих лет профилактика и терапия вирусных гепатитов была и остается важной проблемой здравоохранения. В мире насчитывается более 500 млн. носителей вируса гепатита В и С. Только в России вирусом гепатита В инфицировано более 10 млн. человек [9, 189]. У значительной части из них в будущем возможно развитие хронических заболеваний печени [78].

В последнее десятилетие произошли существенные изменения представлений об этиологии, патогенезе, принципах лечения, профилактики острых, хронических вирусных гепатитов и их осложнений [2, 9, 33]. Современный этап фармакотерапии ряда острых и хронических болезней печени характеризуется применением как этиотропных, так и патогенетических лекарственных средств. Действие последних направлено на предупреждение или устранение одного из ведущих механизмов патогенеза поражений печени - дестабилизации мембран гепатоцитов, зависящей от инициирования свободнорадикального перекисного окисления липидов (ПОЛ) биомембран [5, 13, 26]. Увеличение интенсивности процесса ПОЛ, в свою очередь, вызывает структурные нарушения в липидном слое мембран за счет преимущественного окисления ненасыщенных жирных кислот; следствием этого являются как нарушение ассоциации и активности мембраносвязанных ферментов, так и окисление SH-групп трансмембранных белков и образование комплексов окисленных липидов с белками, способствующих полимеризации белковых молекул [13, 25, 45, 46], Указанный механизм молекулярной патологии ведет к разрушению субклеточных и клеточных мембран гепатоцитов. Для предупреждения или ограничения этих патологических процессов в клетке целесообразно использовать фармакологические средства, обладающие антиоксидантной активностью, способные ограничить ПОЛ и стабилизировать биомембраны. Такими препаратами являются антиоксиданты (АО): витамин Е, селенит натрия и их комбинация [24, 51, 52, 54]. а-Токоферол (витамин Е), являясь антирадикальным фактором и структурным стабилизатором биомембран, относится к наиболее активным компонентам антиоксидантной системы клетки. Наряду с витамином Е в организме человека и животных функционирует ферментная антиоксидантная система, особая роль в которой принадлежит глутатионпероксидазе (ГП), в активный центр которой входит селен [147, 162, 188, 250, 268]. Селен, как часть ГП, оказывает защитное действие от окислительного стресса в клетке, катализируя распад перекиси водорода или разложение гидроперекисей липидов без образования свободных радикалов, прерывая пероксидную цепную реакцию. Витамин Е и селен выполняют в клетке раздельные, но взаимосвязанные функции, направленные против окислительного повреждения биомембран. Этим объясняется необходимость применения их комбинации как средства фармакологической регуляции этого процесса. Неоценимый вклад в изучение фармакологии соединений селена и расшифровку молекулярных механизмов их действия внесла российская школа фармакологов, возглавляемая профессором А.Н.Кудриным.

Углубленное изучение биохимических и морфологических закономерностей поражения печени при вирусном гепатите и при его осложнениях позволило разработать экспериментальную модель этого процесса в лабораторных условиях с помощью гепатотоксических ксенобиотиков. В экспериментальной гепатологии для поиска новых биологически активных веществ, защищающих печень, до сих пор используется модель острого токсического повреждения печени классическим гепатотропным ядом четыреххлористым углеродом (СС/4) -истинным гепатотоксином прямого действия, вызывающим поражение клеток печени в результате усиления ПОЛ и необратимого связывания его активных метаболитов с эндоплазматическим ретикулумом. Идентичный пусковой патогенетический механизм обусловливает гепатотоксичность антигельминтного препарата хлоксила, применявшегося для лечения тканевого гельминтоза печени - описторхоза [24]. Высокая токсичность хлорированных углеводородов, особенно СС/4? способного повреждать печень, всасываясь через неповрежденные кожные покровы, ограничивает широкое применение его для экспериментального моделирования гепатитоподобного повреждения печени.

Изыскание новых эффективных средств фармакологической регуляции вирусного гепатита и других заболеваний печени, в том числе и токсических её поражений, а также необходимость проведения более безопасных клинических испытаний гепатопротекторов, обусловливает необходимость моделирования гепатитоподобного повреждения печени в лабораторных условиях. В настоящее время наиболее перспективной моделью для скрининга и фармакологического изучения новых гепатозащитных средств признана модель повреждения печени £)-галактозамина гидрохлоридом (D-ГА), близкая по биохимическим и морфологическим проявлениям картине поражения печени при вирусном гепатите В [18, 19, 70].

Пусковой механизм гепатотоксичности D-ГА обусловлен дефицитом пула уридилатов, содержание которых в печени снижается при метаболических превращениях гепатотоксина, а далее нарушается синтез различных типов РНК в клетках и, в конечном счете, синтез белка, в том числе сложных белков, таких как гликопротеины и гликолипопротеины. Нарушение синтеза макромолекул приводит к повреждению органелл эндоплазматического ретикулума (ЭПР) и митохондрий (Мх), что сказывается на процессах синтеза, окисления жирных кислот, а также секреции и метаболизме липопротеинов [70]. Инициирование реакций ферментативного ПОЛ - типовой механизм гепатотоксичности D-ГА - ведет к истощению антиоксидантной системы клеток и нарушению функционирования плазматических, митохондриальных мембран и мембран ЭПР [19].

Целесообразность применения витамина Е, селенита натрия и их комбинации при токсических, вирусных гепатитах и их осложнениях обусловлена абсолютной необходимостью указанных АО для сохранения гепатоцитов и нормализации обмена веществ, поскольку в основе патологии печени любой этиологии лежит общий фундаментальный механизм -инициирование ПОЛ биомембран. Поэтому в данной работе мы использовали витамин Е, селенит натрия и их комбинацию для фармакологической регуляции нарушенной проницаемости биомембран гепатоцитов при токсическом повреждении печени, вызванном D-ГА.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы состояла в изучении возможности использования АО: селенита натрия, витамина Е и их комбинации для фармакологической регуляции цитолиза гепатоцитов при интоксикации животных £>-ГА.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1) изучить механизмы гепатотоксичности £)-ГА в сравнении с действием СС/д и хлоксила по изменению интенсивности ПОЛ в печени, состоянию активности ферментов - маркеров цитолиза гепатоцитов -аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАТ) и гистидинаммиаклиазы в динамике;

2) изучить в сравнительном аспекте и в динамике морфологические изменения мембранных структур гепатоцитов на субклеточном уровне при токсическом поражении печени £>-ГА, CCl\ и хлоксилом;

3) оценить антицитолитическую активность селенита натрия, витамина Е и их комбинации на течение острого токсического поражения печени £)-ГА по указанным выше показателям метаболизма.

Научная новизна исследований. Впервые выявлена гепатопротекторная активность АО: витамина Е, селенита натрия и их комбинации при остром токсическом поражении печени, вызываемом D-TA. Установлено, что комбинация витамина Е и селенита натрия проявляет синергизм и потенцирование гепатопротекторного эффекта при поражении печени D-TA.

В работе впервые проведено комплексное изучение патогенетических механизмов гепатотоксичности D-TA в динамике и в сравнении с патогенезом поражений печени хлорированными углеводородами - СС/4 и антигельминтным препаратом хлоксилом. Установлено, что типовой механизм повреждающего действия D-ГА на печень, как и при действии СС14 и хлоксила, связан с увеличением содержания в печени конъюгированных диенов (КД) и малонового диальдегида (МДА), свидетельствующих об усилении ПОЛ биомембран гепатоцитов свободными радикалами, образованными при метаболизме указанных выше хлорированных углеводородов и D-ГА. Следствием этого процесса является структурная дезорганизация мембран с увеличением их проницаемости и выходом цитоплазматических ферментов АлАТ, АсАТ и гистидинаммиаклиазы в кровь, что свидетельствует о цитолизе гепатоцитов. Появление активности гистидинаммиаклиазы в крови уже через 30 мин после введения животным D-ГА на фоне достоверного снижения содержания продуктов ПОЛ в печени и отсутствия морфологических изменений ультраструктуры гепатоцитов свидетельствует о наличии иного пускового механизма гепатотоксичности D-ГА в сравнении с хлорированными углеводородами. Проницаемость цитоплазматических мембран гепатоцитов в результате метаболических превращений D-ГА изменяется за счет конформационной перестройки молекул структурных белков вследствие ингибирования белоксинтетических процессов, а именно синтеза ядерных белков - мРНК, тРНК, белка в рибосомах гранулярной эндоплазматической сети (ГрЭС), сложных белков, таких как гликопротеины и липогликопротеины, и повреждения клеточных органелл -эндоплазматического ретикулума и Мх, вследствие стимуляции катаболических процессов.

Впервые изучено in vivo в динамике изменение активности ферментов -химических маркеров цитолиза гепатоцитов АлАТ, АсАТ, гистидинаммиаклиазы в сыворотке крови и содержания продуктов ПОЛ в печени, а также проведено электронно-микроскопическое исследование ультраструктурных изменений печени при интоксикации D-ГА. Уже через 4 часа после внутрибрюшинного введения D-ГА животным наблюдаются фрагментация и лизис АЭС, единичные липидные включения, неравномерное глыбчатое распределение хроматина в светлых гепатоцитах.

В темных гепатоцитах отмечаются структурные нарушения в виде расширений и вакуолизации ГрЭС со слущиванием рибосом (Р) и наличием единичных мелких вторичных лизосом (JI) на билиарном полюсе. Через 14 часов после введения D-ГА наблюдается увеличение явлений гидропической дистрофии с признаками баллонной дистрофии. Через 24 часа после введения животным D-ГА наблюдается максимум поражения печени - нарастает лизис АЭС и ГрЭС, отмечается деструкция кариолеммы и цитолеммы, ярко выраженная гидропическая дистрофия с переходом в колликвационный некроз. Данный временной интервал (24 часа после введения D-ГА) характеризуется значительным подъемом содержания в гомогенате печени продуктов ПОЛ, вызывающих изменения биологических мембран гепатоцитов с последующим цитолизом и некротическим их поражением.

На основании экспериментальных данных впервые предложена «мягкая» модификация модели токсического поражения печени при однократном внутрибрюшинном введении D-ГА в дозе 300 мг/кг, которую можно использовать для изучения новых гепатозащитных средств.

Теоретическая ценность работы заключается в установлении пускового и типового механизмов токсического повреждения печени D-ГА, ведущих к нарушению проницаемости цитоплазматических мембран, связанного с конформационной перестройкой молекул структурных белков, и инициированием ПОЛ в биомембранах гепатоцитов. Дано теоретическое обоснование путей профилактики и патогенетической терапии токсических повреждений печени и повреждений печени при вирусном гепатите и его осложнениях АО: витамином Е, селенитом натрия и их комбинацией, Представлены доказательства определяющей роли витамина Е, селенита натрия и их комбинации в стабилизации биомембран гепатоцитов и в усилении репаративных и белоксинтетических процессов при поражении печени D-ГА.

Практическая ценность работы. Выявлена антицитолитическая активность АО: селенита натрия, витамина Е и их комбинации при токсическом повреждении печени D-ГА - модельном аналоге повреждения печени при вирусном гепатите В человека, что позволяет рекомендовать их в качестве эффективных гепатопротекторов при вирусном гепатите. По результатам работы получен Евразийский патент №000210 «Препарат, защищающий печень при вирусном гепатите» от 5 октября 1998 года.

Разработана «мягкая» модификация модели острого токсического поражения печени £>-ГА, которую можно использовать для изучения новых гепатопротекторов. Установлено, что D-ГА в дозе 300 мг/кг при однократном внутрибрюшинном введении вызывает не только функциональные, но и структурные изменения печени на ранних сроках поражения, завершающиеся развитием гидропической дистрофии с переходом в колликвационный некроз.

Положения, выносимые на защиту. Автор развивает научное направление, посвященное изысканию средств фармакологической регуляции токсических поражений печени и выясняющее их типовые патогенетические механизмы на молекулярном, субклеточном, клеточном, органном и организменном уровнях.

2. Изменение проницаемости цитоплазматических мембран гепатоцитов на ранних сроках поражения печени избирательным гепатотоксином D-ГА, проявляющееся повышением активности гистидинаммиаклиазы, обусловлено конформационной перестройкой молекул структурных белков, вследствие особенностей его метаболизма, приводящего к ингибированию синтеза белка в гепатоцитах и стимулированию катаболических процессов.

3. Антиоксид анты: витамин Е, селенит натрия и их комбинация являются эффективными средствами фармакологической регуляции цитолиза гепатоцитов при остром токсическом поражении печени, вызванном D-галактозамина гидрохлоридом - модельным аналогом поражения органа при вирусном гепатите В человека.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Илларионова, Татьяна Семеновна

ВЫВОДЫ

1. Биохимические изменения при поражении печени D-галактозамина гидрохлоридом (D-ГА) аналогичны изменениям при вирусном гепатите В и токсическом гепатите, вызванном хлорированными углеводородами. Инициирование перекисного окисления липидов (ПОЛ) при поражении печени D-ГА является типовым процессом и сопровождается значительным увеличением содержания в печени первичных продуктов ПОЛ - конъюгированных диенов (КД) и вторичного продукта ПОЛ - малонового диальдегида (МДА).

2. D-ГА, подобно CCU и хлоксилу, вызывает нарушение проницаемости цитоплазматических мембран гепатоцитов, сопровождающееся гиперферментемией. Достоверное повышение активности цитоплазматических ферментов (химических маркеров цитолиза гепатоцитов) аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАТ) наблюдается через 4-14 часов, а органоспецифического фермента гистидинаммиаклиазы - через 30 минут после введения D-ГА.

3. На ранних сроках (30 минут) повреждения печени D-ГА в дозе 300 мг/'кг изменений ультраструктуры гепатоцитов не выявляется, в то время как активность гистидинаммиаклиазы - химического маркера цитолиза гепатоцитов - достоверно повышается, что свидетельствует о нарушении проницаемости цитоплазматических мембран за счет возможных конформационных изменений мембранных белков. Деструкция субклеточных и клеточных мембран гепатоцитов в виде гидропической дистрофии, переходящей в колликвационный некроз печени, наблюдается через 24 часа после введения D-ГА.

4. Выявлены общие структурные изменения печени при токсических поражениях CCU, хлоксилом и D-ГА, в виде дистрофических изменений гепатоцитов, цитолиза, некроза и стеатоза, в патогенезе которых основное место принадлежит деструктивным изменениям субклеточных и клеточных мембран гепатоцитов.

5. Витамин Е, селенит натрия и их комбинация ингибируют ПОЛ в печени животных, стабилизируют биомембраны гепатоцитов, снижают активность цитоплазматических ферментов АлАТ, АсАТ и гистидинаммиаклиазы, стимулируют репаративные процессы при остром токсическом поражении печени, вызываемом D-ГА.

6. Представлены доказательства того, что селенит натрия в 300 раз эффективнее витамина Е при токсическом поражении печени D-ГА. Выявлен синергизм и потенцирование антиоксидантной и фармакотерапевтической активности витамина Е и селенита натрия при комбинированном их применении при остром токсическом повреждении печени D-ГА.

7» Высокая фармакотерапевтическая эффективность витамина Е, селенита натрия и их комбинации является следствием стимулирования белоксинтетических процессов в гепатоцитах и ингибирования ими типового молекулярного мембранного патогенетического механизма -инициирования ПОЛ и повреждения субклеточных и плазматических мембран гепатоцитов с последующими дистрофическими и некротическими процессами в паренхиме печени при действии D-ГА. Витамин Е, селенит натрия и их комбинация стимулируют защитные механизмы на молекулярном, субклеточном и клеточном уровнях.

8. Витамин Е, селенит натрия и их комбинация являются основными и незаменимыми средствами фармакологической регуляции процесса цитолиза гепатоцитов, вызываемого D-ГА - модельным аналогом поражения печени при вирусном гепатите В, и поэтому могут быть рекомендованы как эффективные гепатопротекторы при вирусном гепатите В.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Илларионова, Татьяна Семеновна, Москва

1. Абрамова Ж. И., Оксигендлер Г. И. Человек и противоокислительные вещества. - JL: Наука, 1985. - 230 с.

2. Авцын А.П. Недостаточность эссенциальных микроэлементов и ее проявления в патологии //Tep.apx.-1990.-№3.-C.3-8.

3. Ажукова Т. А. Повреждение печени и их фармакотерапия//АН СССР. -Улан-Удэ, 1991.-99 с.

4. Антиоксиданты в терапии ишемической болезни сердца / М.А.Дудченко, М.С.Расин, Е.А.Воробьев и др. // Тез докл. II Всесоюзн. конф., 14-16 мая, 1986 г. Черноголовка, 1986.-Т. II.-С. 4.

5. Арчаков А.И., Карузина И.И. Молекулярные механизмы взаимодействия четыреххлористого углерода с мембранами эндоплазматического ретикулума // Успехи гепатологии / Под ред. Е.М.Тареева, А.Ф.Блюгера. Рига, РМИ: 1973. - Вып. 4. - С. 39-59.

6. Афонина Г.Б., Брозгина Т.С., Кравченко Э.Я. Применение антиоксидантов для регуляции ПОЛ в иммунокомпетентных органах // III Всесоюз. конф. «Биоантиоксидант», 27-29 июня 1989 г.: Тез. докл. -М, 1989.-Т. И.-С. 46-47.

7. Бекетова Т.П. К обоснованию специализации функций гепатоцитов различной структуры // Актуальные проблемы клинической морфологии. М., 1982. - С. 64-67.

8. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1982.-С. 286-287.

9. Блохина Н.П. Возможности, варианты и перспективы лечения хронического гепатита С после проведения одного курса интерферонотерапии // Вирусные гепатиты: достижения и перспективы. 1998. - №1 (2). - С. 9-12.

10. Блюгер А.Ф., Майоре А.Я. Итоги и перспективы применения антиоксидантов в гепатологии // Изв. АН Латв. ССР. 1979. - № 12. -С. 101-112.

11. Блюгер А.Ф., Майоре А.Я. Молекулярно-биологический этап изучения патологии печени / Успехи гепатологии / Под ред. Е.М. Тареева и А.Ф. Блюгера. Рига, 1973. - С. 7-38.

12. Блюгер А.Ф., Майоре А.Я. Проблемы перекисного окисления липидов в гепатологии // Успехи гепатологии / Под ред. Е.М.Тареева, А.Ф.Блюгера. Рига, РМИ: 1978. - Вып. 7. - С. 22-54.

13. Блюгер А. Ф., Новицкий И. Н. Практическая гепатология. Рига: Звойгзне, 1984.-405 с.

14. Бурлакова Е.Б., Крашаков С. А., Храпова Н.Г. Кинетические особенности токоферолов как антиоксидантов. Черноголовка, 1992. -56 с.

15. Буробина С.С. Активность гистидинаммиаклиазы в нормальных и злокачественных тканях человека и животных // Сб. научн. трудов "Энзимология опухолей". М.: УДН, 1979. - С. 28-33.

16. Буробин В.А. Определение гистидазы и уроканиназы в крови новые диагностические тесты на поражение печени: Автореф. дис. . канд. биол. наук. - М., 1972. - 16 с.

17. Венгеровский А.И., Саратиков А.С. Метаболизм липидов и функциональное состояние печени при интоксикации D-галактозамином у крыс // Патолог, физиология. 1988. - № 3. - С. 52-55.

18. Венгеровский А.И., Саратиков А.С. Механизмы гепатотоксичности парацетамола // Фармакол. и токсикол. 1991. - Т. 54. - № 1. - С. 76-80.

19. Виноградова Л.Ф., Мирзоян Ж.А., Харлицкая Е.В., Бекетова Т.П. О патогенетических механизмах поражения печени антигельминтным препаратом хлоксилом // Фармаколог, и токсикол. 1989. - Т. 52. - № 2. - С. 62 - 66.

20. Виноградова Л.Ф., Мирзоян Ж.А., Харлицкая Е.В., Бекетова Т.П. Экспериментальная терапия антиоксидантами при токсическом повреждении печени СС14 и хлоксилом // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1989. - № 4. - С. 52-56.

21. Виноградова Л.Ф. Теоретические и экспериментальные предпосылки к комбинированному применению природных антиоксидантов при поражениях печени различного генеза // Вестник Российского Университета дружбы народов. 1997. - №2. - С. .

22. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М., 1972. - 252 с.

23. Владимиров Ю.А. Биологические мембраны и патология клетки. М.: Знание, 1979.-47 с.

24. Владимиров Ю.А. Роль нарушения барьерной и матричной функций липидного слоя биологических мембран в патологии: Актовая речь. -М., 1986. 39 с.

25. Влияние этидина на пораженную а-нафтилизотиоцианатом печень крыс / А.Ф.Блюгер, А.Я.Майоре, Э.С.Горштейн, А.В.Кузнецова и др. // Экспериментальная медицина. Рига, 1985. - Вып. 20. - С. 109-112.

26. В оскресенский О .Н. Фармакологические основы применения антиоксидантов в животноводстве и ветеринарии // Биоантиоксидант: Тез. II Всесоюз. конф., 14-16 мая 1986 г. Черноголовка, М., 1986. - С. 162-163.

27. Гевондян B.C. Роль липидных перекисей в механизме токсического действия хлорированных углеводородов (антигельминтиков) // Труды Всесоюзн. Ин-та гельминтологии. 1972. - Т. 19. - С. 69-75. 259.

28. Гепатоцит: функционально-метаболические свойства / П.В.Гувлак, А.М.Дудченко, В.В.Зайцев и др. / Отв. ред. Л.Д.Лукьянова. М.: Наука, 1985.-270 с.

29. Голиков С.Н., Бучко В.М., Михальчук М.А. Гепатопатии при экзогенных интоксикациях и их лечение // Успехи гепатологии / Под ред. Е.М.Тареева, А.Ф.Блюгера. Рига, РМИ: 1982. - Вып. X. - С. 355-365.

30. Голиков С.Н., Саноцкий И.В., Тиунов Л.А. Общие механизмы токсического действия // АМН СССР. Л.: Медицина, 1986. - 280 с.

31. Григорьев П.Я., Яковенко Э.П. Диагностика и лечение хронических болезней органов пищеварения // М.: Медицина.- 1990 .- 348 с.

32. Гусев В. А., Брусов О. С., Панченко Л.Ф. Супероксиддисмутаза -радиобиологическое значение и возможности // Вопросы медицинской химии. 1980. - Т. 26. - Вып. 3. - С. 291-301.

33. Донченко Г.В. Регуляция витамином Е обмена и функции убихинона Q: Автореф. дис. . докт. биол. наук. Киев. - 1985. - 42 с.

34. Изучение гепатопротекторной активности соединений 1,4-дишдропиридинового ряда / А.Г.Одынец, Г.Я.Дубур, Э.А.Бисениекс идр. 11 Экспериментальная медицина (экспериментальная гепатология). Рига, 1985. Вып. 20. - С. 124-129.

35. Исмаилова Е.Ю. Влияние различной обеспеченности крыс витамином Е и полиненасыщенными жирными кислотами на антителообразующую функцию спленоцитов // III Всесоюзн. конф. «Биоантиоксидант»: Тез. докл., 27-29 июня 1989 г. М., 1989. - Т. II. -С. 42-43.

36. Климнюк Е.В. Функциональное состояние печени и перекисное окисление липидов при поражении её индометацином // Фармакол. и токсикол. 1989. - Т. 52, № 2. - С. 81-82.

37. Козлов Ю.П., Каган В.Е., Архипенко Ю.В. Молекулярные механизмы повреждения кислородом системы транспорта кальция в саркоплазматическом ретикулуме мышц. Иркутск: Изд-во Иркут. унта, 1983.- 136 с.

38. Коновалова JI.А. Сдвиги метаболизма в печени под влиянием хлоксила у интактных и зараженных описторхозом животных // Механизмы регуляции обмена веществ в норме и патологии. Свердловск, 1982. -С. 86-88.

39. Копылова Т.Н., Майоре А.Я. Экспериментальное изучение состояния антиокислительной системы печени крыс при остром токсическом гепатите // Лабораторные животные. Т. 2. - № 2. - 1992. - С. 5-12.

40. Кудрин А.Н., Левшин В.И., Мехтиев М.А. Фармакотерапия препаратами селена экспериментального гепатита. Баку: ЭЛМ, 1982. -222 с.

41. Кудрин А.Н. О некоторых направлениях в изучении соединений селена // Фармакология и токсикология препаратов селена. -М., 1967.-С.3-8. 13.

42. Кудрин А.Н., Ряженов В.В. Теория фармакологической регуляции мембранных функций систем организма // Актуальные проблемы современной фармации.-М.? 1986.-С. 123-127.

43. Кудрявцева JI.A. Селен, его биологическое действие и применение в ветеринарии и животноводстве. М., 1969. - 30 с.

44. Кузнецова Н.Е. Профилактическое использование аденозинтрифосфорной кислоты и селенофена при лучевом поражении беременных животных и их плодов: Автореф. дис. . канд. биол. наук. -М., 1971.

45. Ланкин В.З., Гуревич С.М. Переокисление липидов в микросомах при злокачественном росте // Биоантиокислители. М.: Наука, 1975. - С. 146-150.

46. Лебедев П.А. Селенодефицит у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями и его коррекция препаратом «Селена» // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1996. -№7.-С. 5-7.

47. Левшин Б.И. Экспериментальная фармакотерапия препаратами селена и тиозолидина токсического повреждения печени: Автореф. дис. . докт. мед. наук. Харьков, 1973. - 43 с.

48. Логинов А.С. Механизмы хронизации заболеваний печени // Клин, мед.- 1991.-№ 12.-С. 7-10.

49. Логинов А. С. Узловые вопросы клинической гепатологии // Тер. арх.-1990.- № 2.- С. 3-7.

50. Логинов А.С., Чебанов С.М. Печень и гомеостаз холестерина в организме при заболеваниях холестатическим гепатитом и первичным билиарным циррозом // Заболевания печени и желчевыводящих путей / Под ред. А.С.Логинова. М., 1982. - С. 5-24.

51. Ломоносова Е.Е., Пикулев А.Т., Курченко В .П. Механизм антиоксидантной защиты печени крыс при действии ароматических аминов // Биохимия. 1992. - Т. 57. - Вып. 7. - С. 1077-1082.

52. Лопухин Ю.М., Арчаков А.И., Владимиров Ю.В. Коган Э.М. Холестериноз. М., «Медицина», 1983. 351 с.

53. Лужников Е.А., Новиковская Т.В. Поражение печени при острых экзогенных отравлениях // Успехи гепатологии. Рига: РМИ, 1981. -Вып. IX. - С. 247-266.

54. Лукьянова Л.О. Влияние селенита натрия, витамина Е и их комбинации со строфантином и обзиданом на перекисное свободнорадикальное окисление липидов и течение инфаркта миокарда: Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 1983. - 22 с. 14.

55. Лычко Н.Д, Влияние некоторых антигельминтных препаратов на внешнесекреторную функцию печени: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -М., 1977.-23 с.

56. Мазгутов В.З. Влияние селенита натрия, витамина Е, ретаболила на некоторые показатели белкового обмена крыс разного возраста при экспериментальной гипотрофии // Вопросы питания. 1987. - №1. - С. 38-41.

57. Мазгутов В.З. К вопросу действия витамина Е // Механизмы патологических процессов. ташкент, 1981. - С. 51-56.

58. Мирзоян Ж.А. К изучению патогенеза токсического повреждения печени антигельминтным препаратом хлоксилом и экспериментальная фармакотерапия этого повреждения. Автореф. дисс. . канд. мед. наук. М., 1988, с. 246.

59. Моисеенок А.Г., Шейбак В.М., Золотухина С.Ф., Дэкер К. Модель и биохимические механизмы развития гепатита, индуцированного галактозамином // Успехи гепатологии. Сб. научен, ст. 1988. - Вып. 14.-С. 176-193.

60. Николаев С.М. Влияние селенита натрия, а-токоферола и их комбинации на течение экспериментального инфаркта миокарда: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -М., 1976. 19 с.

61. Озерецковская Н.Н., Арнаутова В.И., Кондрашова М.Н. Устранение янтарной кислотой неблагоприятных изменений лактатдегидрогеназы в сыворотке крови при лечении хлоксилом // Терапевтическое действие янтарной кислоты. Пущино, 1976. - С. 122-127.

62. Озерецковская Н.Н., Зальнова Н.С., Тумольская Н.И. Клиника и лечение гельминтозов. Л.: Медицина, Ленинградское отд., 1985. -183 с.

63. Павлов Б.А. Острый описторхоз. Клиника, диагностика, лечение, профилактика: Автореф. дис. . докт. мед. наук. Л., 1982. - 43 с.

64. Плецитый К.Д., Сухих Г.Т., Давыдова Т.В. Влияние витамина Е на содержание Т- и В-лимфоцитов в периферической крови и некоторые показатели неспецифической резистентности // Вопросы питания. -1984.-№4.-С. 42-44.

65. Погабало А.В. Изучение антиоксидантных и иммунотропных свойств комплексных иммуномодуляторов // VI Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», 19-23 апреля, М., 1999. С. 59-60.

66. Подымова С. Д. Болезни печени. М.: Медицина, 1993. - 544 с.

67. Поиск средств с антиоксидантным действием и сравнительная эффективность их при поражении печени ксенобиотиками /

68. H.П.Скакун, А.Н.Олейник, В.В.Шманько и др. // Тез. докл. II Всесоюзн. конф. «Биоантиоксидант». Черноголовка, 1986. - Т. 1. - С. 81-82.

69. Применение антиоксидантов новый принцип профилактики и лечения инфаркта миокарда / А.Н.Кудрин, А.Х.Коган, С.М.Николаев и др. // Биоантиоксидант: Тез. всесоюзн. совещ., АН СССР, 16-18 мая, 1983 г.-М., 1983.-С. 95-96.

70. Пуртова З.Д. Влияние хлоксила на функциональное состояние печени и меры предупреждения гепатотоксических эффектов: Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 1977. - 14 с.

71. Савина М.Д., Кудрин А.Н. Перспективы поиска антиаритмических средств с противоишемическим эффектом среди селенсодержащих веществ// Фармация.-1992.-№1.-С.39-46.

72. Саратиков А. С., Венгеровский А. И., Седых И. М. Коррекция гепатопротекторами структурно-метаболических нарушений в печени при интоксикации D-галактозамином // Фармакол. и токсикол. 1990. -Т. 53.- №2. -С. 38-40.

73. Сербинова E.JL, Савов В.М., Каган В.Е. Усиление протеолитической деградации цитохрома Р-450 при перекисном окислении липидов в микросомах печени крыс // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1983. - Т. 95, №6.-С. 53-55.

74. Серов В.В. Морфологическая диагностика заболеваний печени, М., 1989.-336 с.

75. Скакун Н.П., Высоцкий И.Ю. Сезонные особенности гепатотоксичности тетрациклина // Антибиотики. 1984. - Т. XXIX, №1.-С. 42-45.

76. Скакун Н.П., Олейник А.Н. Тетрациклиновые поражения печени и их лечение (обзор литературы) // Врач. дело. 1984. - № 11. - С. 91-95.

77. Скакун НИ, Шманько В.В., Охримович Л.М. Клиническая фармакология гепатопротекторов.-ТернополыЗбручД995.-272с.

78. Скакун Н.П., Шманько В.В. Эффективность антиоксидантов при поражении печени изониазидом // Фармакол. и токсикол. 1986. - Т. XLIX. - № 4. - С. 86-89.

79. Смирнов Л. Защитный агент и качество жизни // Медицинский вестник. № 22 (64). - 1996. С.2.

80. Смирнов Ю.В., Лукиенко П.И. Защита а-токоферолом гидроксилирующей системы мембран эндоплазматического ретикулума печени от повреждающего действия гипербарической оксигенации // Вопр. мед. химии. 1984. - Т. 30, вып. 6. - С. 51-53.

81. Сштинський В.В., Антоняк Г.П. Бюх1м1чна роль селену // Укр. бюх1м.журн. — 1994.- Т.66, №5. С.3-16.

82. Современные методы в биохимии / под ред. акад. АМН СССР В.Н.Ореховича // М., "Медицина". 1977. - С. 63-64.

83. Современные методы в биохимии / под ред. акад. АМН СССР В.Н.Ореховича // М., "Медицина". 1977. - С. 66-68.

84. Состояние активности фосфолипаз, переокисление липидов и антиоксидантных систем при описторхозе у детей в процессе лечения хлоксилом / Э.А. Кашуба, В.И. Крылов, М.Д. Орлов, В.П. Мананников // Бюл. Сиб. отд. АМН СССР. 1983. - № 5. - С. 116-119.

85. Состояние дыхания и окислительного фосфорилирования, активности ферментов митохондрий печени при её токсических поражениях / Н.Х.Абдулаев, Х.Я.Каримов, Г.Р.Сологуб и др. // Пат. физиол. 1976. -№5.-С. 43-48.

86. Стабилизация синаптических мембран а-токоферолом от повреждающего действия фосфолипаз. Возможный механизм биологического действия витамина Е / А.Е.Ерин, Н.В.Горбунов, В.И.Брусованик и др. // Биохимия. 1985. - Вып. 6. - С. 998-1004.

87. Сугробова Н.П., Медведник Р.С. Ефимова J1.B., Катаржанова В.М., Обольникова Е.А., Познанская А.Д. // Бюл. экспер. биологии и медицины. 1992. - № 11. - С. 504-506.

88. Тасполатов Б.К., Никитин С.А. Влияние дефицита антиоксидантных витаминов А и Е на нормальную киллерную активность спленоцитов крыс // Тез. II. Всесоюз. конф. «Биоантиоксидант», 14-16 мая 1986 г. -Черноголовка, 1986. Т. I. - С. 141-142.

89. Трахтенберг И.М., Иванова JI.A. Современные представления о воздействии ртути на клеточные мембраны // Гиг. и сан. 1984. - №5. -С.59-63.

90. Трахтенгерц М.И., Голиков П.П. Ранняя ферментодиагностика токсического поражения печени при острых отравлениях // Тер. архив. 1981.-Т. 53.-№4. -С. 91-93.

91. Уикли Б. Электронная микроскопия для начинающих // М., 1975. С. 61-62.

92. Уэбб JI. (Webb L.) Ингибиторы ферментов и метаболизма. Общие принципы торможения // М.: Мир, 1966. 862 с.

93. Фархутдинов P.P., Власюк В.А. Влияние антиоксидантов на микробицидные свойства нейтрофилов // III Всесоюз. конф. «Биоантиоксидант», 27-29 июня 1989 г.: Тез. докл. М., 1989. - Т. II. -С. 44.

94. Характеристика нарушений целостности мембран клеток печени при некоторых видах поражения органа / А.Ф.Блюгер, А.Я.Майоре,

95. Э.С.Горштейн, А.В.Кузнецова и др. // Успехи гепатологии / Под ред. А.Ф.Блюгера. Рига: РМИ, 1981.-Вып. IX.-C. 5-24.

96. Храпова Н.Г. Система природных антиоксидантов и возможность направленного воздействия на неё синтетическими ингибиторами: Автореф. дисс. докт. хим. наук. Москва, 1988. - 49 с.

97. Шулутко Б.И. Болезни печени и почек // Издание 2-е. Санкт-Петербург. Издательство «Ренкор», 1995. с. 25

98. Эффективность антиоксидантов при поражении печени четыреххлористым углеродом / Н.П. Скакун, А.Н.Олейник, И.Т.Цилюрик и др. // Тез. Всесоюзн. совещ. "Биоантиоксидант". -Черноголовка, 1983.-С. 131-132.

99. Aaseth J., Smith-Kielland A., Thomassen Y. Selenium, alcohol and liver diseases // Ann. Clin. Res. 1986. - 18. - P. 43-47.

100. Albin M.M.H., Vincon G., Paccalin J. Aspects actuals des hepatites medicamenteuses // Bordeaux, med. 1979. - V. 12, N12. - P. 775 - 782.

101. Andreesen, JR, Ljungdahl, LG. Formate dehydrogenase of Clostridium thermoaceticum, incorporation of selenium-75, and the effect of selenite, molybdate, and tungstate on the enzyme // J. Bacteriol. 1973. -№116.-P. 867-873.

102. Antioxidant effects on cell-mediated immunity / H.C.Mecker, M.L.Eskew et al. // J. Leuk. Biol. 1985. - V. 38. - P. 451-458.

103. Arkowitz R. A., Abeles R. H. Mechanism of action of clostridial glycine reductase: isolation and characterization of a covalent acetyl enzyme intermediate // Biochemistry 1991. - №. 30. - P. 4090-4097.

104. Arnon R., DeVivo D., Defelice A.R., Kazlow P.G. Acute hepatic failure in a child treated with lamotrigine // Pediatr. Neurol. 1998. - V.18. -№3. - P. 251-252.

105. Arthur J.R., Beckett G.J. Roles of selenium in Type I Iodthyronine 5Л-Deiodinase and in Thyroid Hormone and Iodine Metabolism // Selenium in

106. Biology and Human Health. New York, Springer-Verlag, 1994. P. 93-116 Selenium in Biology and Human Health. New York, Springer-Verlag, 1994. - P. 26-44.

107. Artnur J.R., Morrice P.C., Nicol F., Beddows S.E., Boyd R., Hayes J.D., Beckett G.J. The effects of selenium and copper deficiencies on glutathione S-transferase and glutathione peroxidase in rat liver // Biochem. J. 1987. -N248. - P. 539-544.

108. Artnur J.R., Morrice P.C., Beckett G.J. Thyroid hormone concentrations in selenium-deficient and selenium-sufficient cattle // Res. Vet. Sci. 1988. -N46.-P. 226-230.

109. Artnur J.R., Nicol F., Boyene R., Allen K.G.D., Hayes J.D., Beckett G.J. Old and new roles for selenium. In: Hemphill D.D. ed. Trace Substances in environmental Health XXI. Columbia, MD, University of Missoury Press, 1987.-P. 487-498.

110. Arthur J.R., Nicol F., Hutchinson A.R., Beckett G.J. The effects of selenium depletion and repletion on the metabolism of thyroid hormones in the rat // J. Inorg. Biochem. 1990. - N39. - P. 101-108.

111. Artnur J.R., Nicol F., Rae P.W.H., Beckett G.J. Effects of combined iodine and selenium deficiency on thyroid gland of the rat // J. Endocrinol. (Suppl.). 1990. -N124. - P. 240.

112. Beckett G.J., Beddows S.E., Morrice P.C., Nicol F., Arthur J.R. Inhibition of hepatic deiodination of thyroxine caused by selenium deficiency in rats // Biochem. J. 1987. - N248. - P. 443-447.

113. Beckett G.J., MacDougall D.A., Nicol F., Artnur J.R. Inhibition of type I and type II iodthyronine deiodinase activity in rat liver, kidney and brainproduced by selenium deficiency // Biochem. J. 1989. - N259. - P. 887-892.

114. Beckett G.J., Nicol F., Proudfoot D., Dyson K., Loucaides G, Arthur J.R. The changes in hepatic enzymes expression caused by selenium deficiency and Hypothyroidism in rats are caused by independent mechanisms // Biochem. J. 1990. - N266. - P. 743-747.

115. Beckett G.J., Nicol F., Rae P.W.H., Beech S., Guo Y., Arthur J.R. Effects of combined iodine and selenium deficiency on thyroid hormone metabolism in the rat // Am. J. Clin. Nutr. (Suppl.). 1993. - N57. - P. 2405-2435.

116. Beckett G.J, Rassell A, Nicol F, Sahu P, Wolf C.R, Arthur J.R. Effect of selenium deficiency on hepatic type I iodthyronine deiodinase activity and hepatic thyroid hormone levels in the rat // Biochem. J. 1992. - N282. - P. 483-486.

117. Behne D, Kyriakopoulos A, Meinhold H, Kohrle J. Identification of type-I iodthyronine 5-deiodinase as a selenoenzyme // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1990. - N 173. - P. 1143-1149.

118. Berger M.L, Reynolds R.C, Combes B. Carbon-tetrachloride-induced morphologic alterations in isolated rat hepatocytes // Exp. Mol. Pathol. -1987.-V. 46, N3.-P. 245-257.

119. Berry M.J, Banu L, Chen Y, Mandel S.J, Kieffer J.D, Harney J.W, Larsen P.R. Recognition of UGA as a selenocysteine codon in type I deiodinase requires sequences in the 3' untranslated region // Nature. -1991.-N353.-P. 273-276.

120. Berry M.J, Banu L, Larsen P.R. Type-I iodthyronine 5-deiodinase is a selenocysteine-containing enzyme // Nature. 1991. - N349. - P. 438-440.

121. Bisgaard H.C., Quistroff В. The use of a large scale sinusoid model (hepatocyte column) in the study of zonation of carbon tetrachloride metabolism and toxicity // Acta pharmacol. toxicol. -1985.-V.57, Suppl. Nl.-P. 827.

122. Bock A. Incorporation of Selenium into Bacterial Selenoproteins // Selenium in Biology and Human Health. New York, Springer-Verlag, 1994. -P. 11-21.

123. Bryson P. D. Mushrooms // In: Bryson P. D. Comprehensive review in toxicology for emergency clinicians. 3rd ed. Washington D.C.: Taylor and Francis, 1996.-P. 685-693.

124. Burk R.F. Biological activity of selenium // Ann. Rev. Nutr. 1983. - № 3. -P. 53-70.

125. Burk R.F. Introduction // Selenium in Biology and Human Health. New York, Springer-Verlag, 1994. P. 2-7. 078.

126. Burk R.F., Lane J.M. Modification of chemical toxicity by selenium deficiency // Fund. Applied Toxicol. 1983. - N3. - P.218-221.

127. Burk R.F., Lawrence R.A., Lane J.M. Liver necrosis and lipid peroxidation in the rat as result of paraquat and diquat administration // J. Clin. Invest. -1980.-N65.-P. 1024-1031.

128. Burk R. F. Molecular biology of selenium with implications for its metabolism // FASEB. 1991. - №5. - P. 2274-2279.

129. Burk R.F., Nishiki K., Lawrence R.A., Chance B. // Peroxide removal by selenium-dependent and selenium-independent glutathione peroxidases in hemoglobin-free perfused rat liver // J. Biol. Chem. 1978. - V. 25. - N3. -P. 43-46.

130. Burk R. F. Recent developments in trace element metabolism and function: newer roles of selenium in nutrition // J. Nutr. 1989. - N119. - P. 1051-1054.

131. Butler T.C. Reduction of carbon tetrachloride and chloroform in vitro by tissues and tissue constituents // J. Pharmacol. 1961. - V. 134. - N2. - P. 311-317.

132. Cameron R., Feuer G., F. de la Iglesia. Drug-Induced Hepatotoxicity: Handbook of Experimental Pharmacology. NY, Springer-Verlag, 1996. -Vol. 121.-632 p.

133. Chambers I., Frampton J., Goldfarb P.? Affara N., McBain W., Harrison P. R. The structure of the mouse glutathione peroxidase gene: the selenocysteine in the active site is encoded by the "termination" codon, TGA // EMBO J. 1986. - №5. - P. 1221-1227.

134. Chauvin P., Dillon J.C., Moren A. An outbreak of Heliotrope food poisoning, Tadjikistan, November 1992 March 1993 // Sante. - Vol. 4. -ISS4.- 1994.-P. 263-268.

135. Cohen H.J., Avissar N. Extracellular Glutathione Peroxidase // Selenium in Biology and Human Health. New York, Springer-Verlag, 1994. P. 80-87.

136. Cox J.C., Edwards E.S., DeMoss J.A. Resolution of distinct selenium-containing formate dehydrogenases from Escherichia coli // J. Bacteriol. -1981.-№145.-P. 1317-1324.

137. Cytochrome P-450 distribution in rat liver and the effect of sodium phenobarbitone administration / P.E.Gooding, J.Chayen, B.Sawyer et al. // Chem.-Biol. Interact. 1978. - №20. - P. 299-310.

138. Diamond A. M., Dudock В., Hatfield D. Structure and properties of a bovine liver UGA supressor serine tRNA with a tryptophan anticodon // Cell. 1981. - №25. - P. 497-506.

139. Dianzani M.U. Free radicals in physiology and pathology // Boll. Soc. Ital. Biol. Sper. 1992. V. 68. - № 8-9. - P. 491-511.

140. Dianzani M.U. The role of free radicals in liver damage // Proc. Nutr. Soc. 1987. - V. 46. - № 1. - P. 43-52.

141. Dworkin B.M. Selenium deficiency in HIV infection and the acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) // Chem. Biol. Interact. 1994. -№91.-P. 181-186.

142. Einborn M., Davidsohn I. Hepatotoxicity of mercaptopurine // JAMA. -1964.-V. 188.-P. 802.

143. El-Bayoumy K. The role of selenium in cancer prevention / De Vita V.T., Hellman S., Rosenberg S.S., eds. Cancer Principles and Practice of Oncology, 4th ed. Philadelphia: J.B.Lippincott. 1991. - P. 1-15.

144. Epp O., Ladenstein R., Wendel A. The refined structure of the selenoenzyme glutathione peroxidase at 0.2-nm resolution // Eur. J. Biochem. 1983. - № 133. - P. 51-69. 108.

145. Ewan R.C. Effect of selenium on rat growth, growth hormone and diet utilization // J. Nutr. 1976. - N106. - P. 702-7029.

146. Fair W.R., Fleshner N.E., Heston W. Cancer of the prostate: a nutritional disease? // Urology. 1997, Dec. - V. 50. - № 6. - P. 840-848.

147. Farber E. Biochemistry of disease V. II. The pathology of transcription and translation / Ed. by E.Farber. New York, Marcel Dekker, 1972. - P. 128-132.

148. Farber J.L., Gerson R.J. Mechanisms of cell injury with hepatotoxic chemicals // Pharmacol. Rev. 1984. - V. 36. - P. 718.

149. Flohe L., Gunzler W.A., Scholks H.H. Glutathione peroxidase: a selenoenzyme // Febs. Lett. 1973. - V. 32. - № 1. - P. 132-134.

150. Flohe L., Loschen G., Gunzler W. A., Eichole E. Glutathione peroxidase. V. The kinetic mechanism // Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. 1972. - №. 353.-P. 987-989.

151. Folch J., Less V., Stanley S. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissue // J. Biol. Chem. 1957. - V. 226. - P. 497-509.

152. Forchhammer K., Bock A. Selenocysteine synthase from Escherichia coli: analysis of the reaction sequence // J. Biol. Chem. 1991. - №266. - 6324-6328.

153. Gladyshev V.N., Jeang K.T., Wootton J.C., Hatfield D.L. A new human selenium-containing protein. Purification, characterization, and cDNA sequence // J. Biol. Chem. 1998.- V. 10, N 273(15). - P. 8910-8915.

154. Greenspan H.C., Aruoma O.I. Could oxidative stress initiate programmed cell death in HIV infection? A role for plant derived metabolites having synergistic antioxidant activity // Chem. Biol. Interact. 1994. Jun. - V. 91. -N. 2-3.-P. 187-97.

155. Gtinzler W. A., Steffens G. Т., Grossman A., Kim S.-M., Otting F., Wendel A., Flohe L. The amino-acid sequence of bovine glutathione peroxidase // Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. 1984. - № 365. - P. 195-212.

156. Gunzler W. A., Vergin H., Miiller I., Flohe L. Glutathione-peroxidase VI die Reaktion der Glutathione-peroxidase mit verschiedenen Hydroperoxiden // Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. 1972. - № 353. - P. 1001-1004.

157. Halliwell В. Free radicals and metal ions in health and disease // Proc. Nutr. Soc.- 1987.-V. 46.-№ 1.-P. 13-26.

158. Hatfield D., Choi I. S., Lee B. J., Jung J.-E. Selenocysteine, a new addition to the universal genetic code // in: Transfer RNA in Protein Synthesis / Hatfield D., Lee B. J., Pirtl R., eds., Boca Raton, FL CRC Press, Inc., 1992. P. 265-274.

159. Hatfield D.L., Choi I. S., Mischke S., Owens L. D. Selenocysteyl-tRNAs recognize UGA in Beta vulgaris, a higher plant, and in Gliocladium virens, a filamentous fungus // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1992. - 184. - P. 254-259.

160. Hatfield D. L., Diamond A. M., Dudock B. Opal suppressor serine tRNA from bovine liver form phosphoseryl-tRNA // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1991.-79.-P. 1982.

161. Hatfield D., Diamond A. M. UGA: A split personality in the universal genetic code // Trends Genet. 1993. - №9. - P. 69-70.

162. Hatfield D. L., Lee B. J., Hampton L., Diamond A. M. Selenium induces changes in the selenocysteil-tRNASer.Sec population in mammalian cells // Nucleic Acids Res. 1991. - №19. - P. 939-943.

163. Hatfield D.L., Lee B. J., Price N. M., Stadtman Т. C. Selenocysteyl-tRNA occurs in the diatom Thalassiosira and in the ciliate Tetrahymena // Mol. Microbiol. 1991. - №5. - P. 1183-1186.

164. Hatfield D., Portugal F. H. Seryl-tRNA in mammalian tissues: chromatographic differences in brain and liver and specific response to the codon, UGA // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1970. - №67. - P. 1200-1206.

165. Hatfield D. Recognition of nonsense codons in mammalian cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1972. - №67. - P. 3014-3018.

166. Hatfield D., Smith D. W. E., Lee B. J, Worland P. J, Oroszlan S. Structure and function of supressor tRNAs in higher eukaryotes // Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 1990. - №25. - P. 71-96.

167. Heider J, Leinfelder W, Bock A. Occurrence and functional compatibility within Enterobacteriaceae of a tRNA species that inserts selenocysteine into protein // Nucleic Acids Res. 1989. - №17. - P. 2529-2540.

168. Herd D. Ideology, history and changing models of liver cirrosis epidemiology //Brit. J. Addiction. 1992. - Vol.87, N8.- P.l 113-1126.

169. Hill K.E, Burk R.F. Effect of selenium deficiency and vitamin E deficiency on glutathione metabolism in isolated rat hepatocytes // J. Biol. Chem. -1982. N 257. - P. 10668-10672.

170. Hill K.E, Burk R.F. Effect of selenium deficiency on the dispozition of plasma glutathione // Arch. Biochem. Biophys. 1985. - N 240. - P. 166-171.

171. Hill K.E, Burk R.F. Influence of vitamin E and selenium on glutathione-dependent protection against microsomal lipid peroxidation // Biochem. Pharmacol. 1984. - V. 33, N7. - P. 1065-1068.

172. Hill К. E, Burk R.F, Lane J.M. Effect of selenium depletion and repletion on plasma glutathione and glutathione dependent enzymes in the rat // J. Nutr. 1987. -N1197. - P. 99-104.

173. Hill K.E, Burk R.F. Selenoprotein P // Selenium in Biology and Human Health. New York, Springer-Verlag, 1994. P. 118-128.

174. Hill K.E, Burk R.F. Toxicity studies in isolated hepatocytes from selenium-deficient rats and vitamin E-deficient rats // Toxicol. Appl. Pharmacol. -1984.-N72.-P. 32-39.

175. Hill K.E. Selenium Status and Glutathione Metabolism // Selenium in Biology and Human Health. New York, Springer-Verlag, 1994. P. 152-167.

176. Hill K.E., Taylor M.A., Burk R.F. Influence of selenium deficiency on glutathione disulfide metabolism in isolated perfused rat heart // Biochim. Biophys. Acta. 1987. -N923. - P. 431-435.

177. Hopen C., Nesthus I., Laerum O.D. Fatal carbamasepine-associated hepatitis // Acta med. Scand. 1981. - V. 210. - N 4. - P. 333-335.

178. Hughes D.A. Effects of dietary antioxidants on the immune function of middle-aged adults// Proc Nutr. Soc. 1999. - V. 58. - N 1. - P. 79-84.

179. Howard D., Thompson D.F. Taurine: on essential amino acid to prevent cholestasis in neonates // Ann. Pharmacother. 1992. - Vol. 26. - N 11. -P. 1390-1392.

180. Inorganic and organic radicals. Their biological and clinical relevance: Discuss. 30-31 Jan., 1985 // Phil. Trans. Roy. Soc. London. 1985. - V. B311,N 1158. -P. 449-489.

181. International conference on «Superoxide dismutases: Recent Advances and Clinical Applications» May 14-15, 1998. Institute Pasteur. Paris. - 125 p.

182. Ip C., Ganther H.E. Novel Strategies in Selenium Cancer Chemoprevention Research / In: Burk R.F. ed. Selenium in Biology and Human Health. Springer-Verlag, New York, 1994. P. 169-180.

183. Ip C., Medina D. Current concept of selenium and mammary tumorgenesis / In: Medina D., Kidwell W., Heppner G., Anderson E.P. eds. Cellular and Molecular Biology of Breast Cancer. New York: Plenum Press, 1987. P. 479-494.

184. Ip C. Selenium and experimental cancer // Ann. Clin. Res. 1986. - №18. -P. 22-29.

185. Ip C. The chemopreventive role of selenium in carcinogenesis // J. Am. Coll. Toxicol. 1985. -N44. - P. 2568-2572.

186. Jones J. В., Stadtman Т. С. Selenium-dependent and selenium-independent formate dehydrogenases of Methanococcus vannielii II J. Biol. Chem. -1981. -№ 256. P. 656-663.

187. Khorana G.H., Btichi H., Ghosh H., Gupta N., Jacob T.M., Kossel H., Morgan R., Narang S.A., Ohtuska E., Wells R.D. Polynucleotid synthesis and the genetic code // Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 1966. -N31.-P. 39-49.

188. Kiremidjian-Schumacher, G.Stotzky. Selenium and immune responses // Environ. Res. 1987. - V. 42, N 2. - P. 277-303.

189. Klein A.S., Hart J., Brems J.J., Goldstein L., Lewin K., Busuttil R.W. Amanita poisoning: Treatment and the role of liver transplantation // Am. J. Med. 1989. - V. 86. - P. - 187-193.

190. Koppel C. Clinical symptomatology and management of mushroom poisoning//Toxicol. 1993. - Vol. 31. - P. 1513-1540.

191. Lane H.W., Medina D. Selenium concentration and glutathione peroxidase activity in normal and neoplastic development of the mouse mammary gland//Cancer Res. 1983.-№43.-P. 1558-1561.

192. Lane H.W., Tracey C.K., Medina D. Growth, reproduction rates and mammary gland selenium concentration and glutathione peroxidase activity of BALB/c female mice fed two dietary levels of selenium // J. Nutr. -1984.-№114.-P. 323-331.

193. Lee B.J., Rajagopalan M., Kim Y.S., You K.-H., Jacobson K.B., Hatfield D. Selenocysteine tRNASer.Sec gene is ubiquitous within the animal kingdom // Mol. Cell. Biol. 1990. -№10. - P. 1940-1949.

194. Lee B.J., Worland P.J., Davis J.N., Stadtman T.C., Hatfield D. L. Identification of selenocysteyl-tRNASer in mammalian cells that recognizes the nonsense codon, UGA // J. Biol. Chem. 1989. - №264. - P. 9724-9727.

195. Leinfelder W., Forchhammer K., Veprek В., Zehelein E., Bock A. In vitro synthesis of selenocysteil-tRNAuca from seryl- tRNAuca: involvement and characterization of the selD gene product // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1990.-№87.-P. 543-547.

196. Leinfelder W., Stadtman Т. C., Bock A. Occurrence in vivo of selenocysteyl-tRNAUGA in Escherichia coli II J. Biol. Chem. 1989. -№264.-9720-9723.

197. Leinfelder W., Stadtman Т. C., Bock A. Occurrence in vivo of selenocysteinyl-tRNAUCA: involvement and characterization of the selD gene product II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989. - №87 - P. 543-547.

198. Leonard J.L., Visser T.J. Biochemistry of deiodination. In: Hennemarm G., ed. Thyroid Hormone Metabolism. New York: Marcel Dekker, 1986. P. 189-222.

199. Littarru G.P., Lippa S. Coenzyme Q and antioxidant activity; facts and perspectives // Drugs exptl. clin. res. 1984. - V. 10, N 7. - P. 491-496.

200. Little C., O'Brien P.J. An intracellular GSH peroxidase with a lipid peroxide substrate // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1968. - №. 31. -P. 145-150.

201. Long R.M., Mocre L. Elevated cytosolic calcium in rat hepatocytes exposed to carbon tetrachloride // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1986. - V. 238, N1. -P. 181-191.

202. MacGregor Ian L. Indus Trial and environmental Toxins / Zakim D. Boyer Th. D. (ed.) // Hepatology: A Textbook of Liver Disease. Philadelphia; London; Toronto; Mexico, 1982. - P. 723.

203. Maddrey W.C. Isoniasid-induced liver disease // Semin. Liver disease. -1981.-V. l.-P. 129.

204. Maret G. Traber. Molecular mechanisms of vitamin E transport // Annu. Rev. Nutr. 1999. - № 19. - P. 343-355.

205. Muller F. Can HIV infection be treated with antioxidants? // Tidsskr. Nor. Laegeforen. 1995. - N10. - P. 115(7):835-7

206. McCay P.B. Vitamin E. Interaction Molecular mechanisms of vitamin E transport with free radicals and ascorbate // Ann. Rev. Nutr. 1985. - V. 5. -P. 323-340.

207. Mclntyre T.M, Curthoys N.P. The interorgan metabolism of glutathione // Int. J. Biochem. 1980. - №12. - P. 545-551.

208. Medina D, Morrison D. G. Current ideas on selenium as a chemopreventive agent // Pathol. Immunopathol. Res. 1988. - №7. - P. 187-199.

209. Meister A. On the antioxidant effects of ascorbic acid and glutathione // Biochem. Pharmacol. 1992. - №44. - P. 1905-1915.

210. Mills G.C. Hemoglobin catabolism. 1. Glutathione peroxidase, an erythrocyte enzyme which protects hemoglobin from oxidative breakdown // J. Biol. Chem. 1957. - Vol. 229- P. 189-197.

211. Mills G.C. The purification and properties of glutathione peroxidase of erythrocytes // J. Biol. Chem. 1959. - №. 234. - P. 502-506.

212. Milner J.A. Effect of selenium on virally induced and transplantable tumor models // Fed. Proc. 1985. - N44. - P.2568-2572.

213. Mizutani T, Hashimoto A. Purification and properties of supressor seryl-tRNA: ATP phosphotransferase from bovine liver // FEBS Lett. 1984. -Vol. 169.-P. 319-322.

214. Mol J.A, Van Den Berg T.P, Visser T.J. Partial purification of the rat liver iodothyronine deiodinase I. Solubilization and ion-exchange chromatography // Mol. Cell. Endocrinol. 1988. - N 55. - P. 149-157.

215. Mullenbach G. Т., Tabrizi A., Irvine B. D., Bell G. I., Hallewell R. A. Selenocysteine's mechanism of incorporation and evolution revealed in cDNAs of three glutathione peroxidases // Protein Eng. 1988. - №2. - P. 239-246.

216. Maenpaa P. H., Bernfield M. R. A specific hepatic transfer RNA for phosphoserine // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1970. - Vol. 67. - P. 688-695.

217. Ndiweni N., Finch J.M. Effects of in vitro supplementation with alpha-tocopherol and selenium on bovine neutrophil functions: implications for resistance to mastitis // Vet. Immunol. Immunopathol. 1996. - V. 51, N 1-2. - P. 67-78.

218. Nirenberg M., Caskey Т., Marshell R., Brimacombe R., Kellog D., Doctor В., Hatfield D., Levin J., Rottman F., Pestka S., Wilcox M., Anderson F. The RNA code and protein synthesis // Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 1966. -N31. - P. 11-24.

219. Nishiguchi S., Kuroki Т., Takeda Т., Nakajima S., Shiomi S., Seki S., Matsui-Yuasa I., Otani S., Kobayashi K. Effects of putrescine on D-galactosamine-induced acute liver failure in rats // Hepatology. 1990. - № 12.-P. 348-353.

220. Orrenius S., Nicoters P. Studies of Ca+2-mediated toxicity in hepatocytes // Klin. Wahr. 1986. - V. 64, Suppl. 7. - P. 138-141.

221. Parke D.V., Obrebcka-Parke M.J. Biochemical mechanisms of chemical toxicity // Polia med. cracov. 1987. - V. 28, N1-2. - P. 27-46.

222. Passwater Richard A. Selenium in food and medicine. Introd. by J.E.Spallhols. New Canaan. - Keats publ., 1980. - 240 p. JSB N 0-87983-229-0.

223. Patterson E.L., Milstrey R., Stokstad E.L.R. Effect of selenium in preventing exudative diathesis in chicks // Proc. Soc. Exptl. Biol. Med. -1957.-№95.-P. 617-620.

224. Pecher, A, Zinoni, F, Bock, A. The selenopolypeptide of formic dehydrogenase (formate-hydrogen-lyase-linked) from Escherichia coli: genetic analysis // Arch. Microbiol. 1985. - Vol. 141. P. 359-363.

225. Peck, HD, Gest, H. Formic dehydrogenase and the hydrogenlyase enzyme complex in coli-aerogenes bacteria // J. Bacteriol. 1957. - Vol. 73. - P. 706-721.

226. Peter L., Bullock, Ph.D. Pharmacogenetics and Its Impact on Drug Development // Drug Benefit Trends, SCP Communications, Inc. 1999. -V. 11.-N1.-P. 53-54.

227. Piao J.H., Hill K.E., Hunt R.W., Burk R.F. Effect of selenium deficiency on tissue taurine concentration and urinary taurine excretion in the rat // J. Nutr. Biochem. 1990. - N1. - P. 427-432.

228. Pinsent J. The need for selenite and molybdate in formation of formic dehydrogenase by members of the Coli aerogenes group of bacteria // Biochem. J. 1954. - № 57. - P. 10-16.

229. Pinsent J. The need for selenite and molybdate in formation of formic dehydrogenase by members of the coli-aerogenes group of bacteria // Biochem. J. 1954. - № 57. - P. 10-16.

230. Pinson C. W., Day M. R., Benner K. G. et al. Liver transplantation for severe Amanita falloides mushroom poisoning I I Am. J. Surg. 1990. -Vol. - 159.-P.-493-499.

231. Placer Z., Kuzella L. In vivo lipoperoxidation in der leber nach partieller hepatectomie // Acta Biol. med. Germ. - 1968. - Bd. 21. - № 1. - S. 121-124.

232. Pratt C.B., Johnson W.W. Duration and severity of fatty metamorphosis of the liver following L-asparaginase therapy // Cancer. 1971. - V. 28. - P. 361.

233. Protection against carbon tetrachloride hepatotoxicity by pretreatment with indole-3-carbinol / H.G.Shertzer, M.P.Niemi, F.A.Reitman et al. // Exp. Mol. Pathol. 1987. - V. 46, N2. - P. 180-189.

234. Pryzybyla A., Pobbins J., Menon N., Peck Jr H. D. Structure-function relationships among the nickel-containing hydrogenases // FEMS Microbiol. Rev. 1992. - Vol. 88. - P. 109-136.

235. Purchase I.F.H., Farras D.G., Whitaker A. Carbon tetrachloride // ATLA. -1987.-V. 14. -N3,- P. 184.

236. Reiter R., Wendel A. Selenium and drug metabolism. II. Independence of glutathione peroxidase and reversibility of hepatic enzyme modulations on deficient mice // Biochem. Pharmacol. 1984. - N33. - P. 1923-1928.

237. Reitman S., Frenkel S. A colorimetrie method for the determination of serum glutamil oxaloacetic and glutamil pyruvic transaminases // Amer. J. Clin. Path. 1957. - V. 28. - № 8. - P. 56-63a.

238. Relationship between the loss of a specific microsomal cytochrome P-450 and the formation of CC13 from CC14 / McCay P.B., Nogishi Т., Lay E.K. et al. // Fed. Proc. 1980. - V. 39. - P. 612-615.

239. Rotruck J. Т., Pope A. L., Ganther H.E., Swanson А. В., Hafeman D.G., Hoekstra W.G. Selenium: biochemical role as a component of glutathione peroxidase // Science. 1973. - № 179. - P. 585-590.

240. Salonen J. Т., Huttunen J. K. Selenium in cardiovascular diseases // Ann. Clin. Res. 1986. - №18. - P. 30-35.

241. Sawers G., Heider J., Zehelein E., Bock A. Expression and operon structure of the sel genes of Escherichia coli and identification of a third selenium-containing formate dehydrogenase isoenzyme // J. Bacteriol. 1991. - Vol. 173.-P. 4983-4993.

242. Schanne FA, Pfau RG, Farber JL Galactosamine-induced cell death in primary cultures of rat hepatocytes // Am. J. Pathol. 1980. - N100. - P. 25-38.

243. Schener P.J. Drugs and toxins // Liver biopsy interpretation. Baltimore: Williams @ Wilkins, 1980. - 3rd ed. - P„ 28-39.

244. Scherlock S. Drugs and the liver // Diseases of the liver and biliary system. Oxford: Blackwell Scientific Publ, 1981. - 5th ed. - P. 295-322.

245. Schiodt F, Rochling F, Casey D, Lee W. Acetaminophen toxicity in an Urban County Hospital // The New England Journal of Medicine. 1997. -V. 337. -№ 16.-P. 38-42.

246. Schlindwein, C, Giordano, G, Santini, G-L, Mandrand, M-A. Identification and expression of the Escherichia coli fdhD and fdhE genes, which are involved in the formation of respiratory formate dehydrogenase // J. Bacterid. 1990. - N 172.-P. 6112-6121

247. Schwarz K, Foltz C.M. Selenium as an integral part of Factor 3 against dietary necrotic liver degeneration // J. Am. Chem. Soc. 1957. - № 79. -P. 3292-3293.

248. Sharp S. J, Stewart T. S. The characterization of phosphoseryl tRNA from lactating bovine mammalian gland // Nucleic Acids Res. 1977. - №4. - P. 2123-2136.

249. Shimazu F, Tappel A. Selenoaminoacides as radiation protectors in vitro // Rad. Res. 1964. - V. 23. - № 2. - P. 210-217.

250. Siclaff T.D, Hu M.Y, Rollins M.D., Bloomer J.R, Amiot B, Hu W.S, Cerra F.B. An anesthetized model of lethal canine galactosamine fulminate hepatic failure // Hepatology. 1995. - Vol. 21. - № 3. - P. 796-804.

251. Sire O, Mangeney M, Normann J. Preventive effect of calibrate on carnitine palmitoyltransferase 1 inhibition and mitochondrial membrane phospholipid depletion induced by galactosamine // Biochim. Biophys. Acta.- 1986.-Vol. 876.-N l.-P. 138-145.

252. Stadtman T.C. Biosynthesis and function of selenocysteine-containig enzymes // J. Biol. Chem. 1991. - Vol. 266. - P. 16257-16260.

253. Stadtman T.C., Davis J. N., Ching W.-M., Zinoni F., Bock A. Amino acid sequence analysis of Escherichia coli formate dehydrogenase (FDHH) confirms that TGA in the gene encodes selenocysteine in the gene product // BioFactors . 1991. - №3. - 21-27.

254. Strohmeyer G. Эссенциальные фосфолипиды: спектр активности при различных заболеваниях печени // Современные аспекты мембранной терапии печени. М., 1998. С. 9-12.

255. Studies on lipid peroxidation using whole liver cells / E. Chiarpotto, J. Olivero, E. Albano et al. // Experientia. 1981. - V. 37, N4. - P. 396-397.

256. Sukenaga Y., Ishida K., Takeda Т., Takagi K. cDNA sequence coding for human glutathione peroxidase // Nucleic Acids Res. 1987. - №15. - P. 71-78.

257. Sunde R. A. Intracellular Glutathione Peroxidases Structure, Regulation, and Function // Selenium in Biology and Human Health. New York, Springer-Verlag, 1994. - P. 46-77.

258. Sunde R. A. Molecular biology of selenoproteins // Annu. Rev. Nutr. -1990. -№10.-P. 451-474.

259. Sunde R. A., Evenson J. K. Serin incorporation into the selenocysteine moiety of glutathione peroxidase // J. Biol. Chem. 1987. - Vol. 262. - P. 933-937.

260. Sunde R. A., Hoekstra W. G. Incorporation of selenium from selenite and selenocysteine into glutathione peroxidase in the isolated perfused rat liver //Biochem. Biophys. Res. Commun. -1980. Vol. 93. - P. 1181-1188.

261. Sunde R.A. Molecular biology of selenoproteins // Ann. Rev. Nutr. 1990. -N10.-P. 451-474.

262. Tabor H., Mehler A.H. Methods in enzymology. 1955. - V.2. - P. 22. 35.

263. Tappel A. Free-radical lipid peroxidation damage and its inhibition by vitamin E and selenium // Fed. Proc. 1965. - V. 24, N 1. - P. 73-78.

264. Taurog A.G. Hormone synthesis: Thyroid iodine metabolism / In: Braverman L.E., Utiger R.D., eds. Werner and Ingbaf s The Thyroid. New York: J.B. Lipincott, 1992. P. 51-98.

265. Tedesco F.J., Mills L.R. Diasepam (valium) // Hepat. Digest. Dis. Sci. -1982. V. 27, N 5. - P. 470-472.

266. Thill R., Millikan K., Doolas A. Isoflurane Hepatitis // Infect. Med. 1996. -V. 13. -№4.-P. 322-324.

267. Tissue concentrations of coenzyme Q in liver of rats intoxicated by carbon tetrachloride / A.Bertelly, L.Giovanini, A.A.E.Bertelly et al. // Int. J. Tis. React. 1986. - V. 8. - N4. - P. 343-346.

268. Ursini, F, Maiorino, M, Gregolin, C. The selenoenzyme phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase // Biochim. Biophys. Acta. 1985. -Vol. 839.-P. 62— 70.

269. Mills G.C. The purification and properties of glutathione peroxidase of erythrocytes // J. Biol. Chem. 1959. - №. 234. - P. 502-506.

270. Wendel A., Pilz W., Ladenstein R., Sawatzki G., Weser U. Substrate-induced redox change of selenium in glutathione peroxidase studied by X-ray photoelectron spectroscopy // Biochim. Biophys. Acta. 1975. - N377. -P. 211-215.

271. Whanger P.D., Weswig P.H. Effects of selenium, chromium and antioxidants on growth, eye cataracts, plasma cholesterol and blood glucose in selenium deficient, vitamin E supplemented rats // Nutr. Rep. Int. 1975. - № 12.-P. 345-348.

272. Witting L.A. Vitamin E and lipid antioxidants in free-radical-initiated reactions. In: Pryor W.A., ed. Free Radicals in Biology. New York: Academic Press, 1980. P. 295-319.

273. Xia Y., Hill K.E., Burk R.F. Effect of selenium deficiency on hydroperoxide-induced glutathione-release from the in isolated perfused rat heart // J. Nutr. 1985. - N115. - P. 733-742.

274. Xia Y. Keshan Disease and Selenium Status of Populations in China // Selenium in Biology and Human Health. New York, Springer-Verlag, 1994. -P. 182-194

275. Zimmerman H.J., Maddrey W.C. Toxic and Drug-induced hepatitis // Diseases of the liver. 6-th Edit. London, Mexico, Ciby, New York, 1987. -P. 591 -667.

Информация о работе

Илларионова, Татьяна Семеновна
кандидата биологических наук
Москва, 1999
ВАК 03.00.04

Диссертация

Антицитолитическая активность антиоксидантов (Витамина Е, селенита натрия и их комбинации при токсическом повреждении печени D-галактозамина гидрохлоридом) - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы