Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Специфические и неспецифические иммуномодуляторы в повышении эмбриональной выживаемости крупного рогатого скота

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Специфические и неспецифические иммуномодуляторы в повышении эмбриональной выживаемости крупного рогатого скота"



/

На правах рукописи

МИХАЙЛЕНКО Ева Викторовна

Специфические и неспецифические иммуномодуляторы в повышении эмбриональной выживаемости крупного рогатого скота

Специальность 03.00.13 - Физиология человека и животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

л.Дубровицы, Московской облает 2000 г.

Диссертационная работа выполнена на кафедре племенного дела, биотехнологии и биологии воспроизведения с.-х. животных Российской академии менеджмента в животноводстве.

Научный руководитель: доктор биологических наук В.П.Радченков

Официальные оппоненты: - доктор биологических наук

Даровских В.Е.

кандидат биологических наук Мороз Т. А.

Ведущая организация - Биотехцентр РАСХН

Зашита состоится 2000 г. в 10 часов, на заседай^'-

диссертационного совета Д 020.16.02 во Всероссийском научж," исследовательском институте животноводства.

Адрес института: 142132, Московская обл., Подольский район,

пос.Дубровицы.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЖа. Автореферат разослан » ^сгъ^ 2000 г.

/Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук . В.П.Губанова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. В удельном весе всех нарушений процесса воспроизводства по-прежнему ведущее место занимают эмбриональные потери. По многочисленным данным отечественных и зарубежных исследователей огхлодотворяемость у крупного рогатого скота составляет 90-95%, тогда до рождения доживают лишь 50-55% зародышей, наибольшие пренатальные потери происходят в предплацентационный и плацентационный периоды внутриутробного развития (Милованов В.К., 1982; Sreenan J.M, et.al, 1997; Wrenzychi С. et, al, 1999; Gallagher D.S. eL al, 1999).

Несмотря на длительный период изучения причин эмбриональных потерь до сих пор не разработано эффективных и практически приемлемых методов их предотвращения. Одной из ведущих причин отсутствия прогресса в этой области биологии воспроизведения было отсутствие знаний конкретных механизмов, вызывающих эмбриональные потери.

В 30-ые годы было установлено важное значение роли иммунной системы самки в нормальном и нарушенном пренатальном развитии. Большой вклад в этом направлении сделали отечественные ученые И.И.Соколовская, А.В .Вронская и Н.М, Решетникова.

К концу 80-х и началу 90-х годов было установлено, что распознавание иммунной системой самки антигенов зародыша отцовского галлотипа приводит не к формированию реакций отторжения зародыша, а, наоборот, стимулирует рост и развитие как зародыша, так - и плаценты. Эти исследования легли в основу новой теории роли иммунной системы самки в нормальном пренатальном развитии — иммунотрофической (Wegmann T.G., 1988; Радченков В.П., 1993).

Ко второй половине 90-ых годов было установлено, что большинство

эмбриональных потерь опосредуется через аподтоз клеток зародыша. Было

обнаружено, что такие различные и наиболее частые причины

эмбриональных потерь как высокая степень совпадения антигенов

гистосовместимости между самкой и зародышем, генетически

детерминированное нарушение распознавания иммунной системой самки

антигенов зародыша отцовского гаплотипа и различные стрессы,

вызывают гибель зародышей через TNFa индуцированный алоптоз клеток

трофобласта (Yai J. et. al, 1994; Artz P.C. et. al, 1995). Показано, что

эмбриональные потери, вызванные этими причинами, предотвращаются

иммунизацией самок клетками, имеющими общие антигены с клетками

зародыша, либо обработкой таких самок неспецифическими

иммуномодуляторами (Gorivodsky М. et. al, 1998). Установлено, что у

самок, обработанных специфическими^ . либо -- неенедифическими

иммуномодуляторами, происходит в эсстановле^йе'''0ммте<?]^феческого

взаимодействия в системе «са? кйзароДьлЬк '^гооявлщошреся

Uoz-I. ^кадскти"

им. К. А. Тимирязеву ,

переключении в плаценте синтеза с про- на противовоспалительные цитокины. К настоящему времени установлено, что в повышении противоаполгогической активности зародыша ведущую роль осуществляют такие цнтокины, как - ИЛ-1, ИЛ-3, ИЛ-10, ТФР р, ГМ-КСФ, КСФ-1 и др. (Clark D.А., 1999).

Ранее было обнаружено, что у крупного рогатого скота, имеющего синдесмохориальный ran плаценты, как и у самок с иными видами плаценты, эмбриональные потери, вызванные иммунными причинами, составляют 20-25% от числа оплодотворенных яйцеклеток- Эти потери предотвращаются внутрикожной иммунизацией коров спермиями быков-производителей; на вторые сутки после осеменения (Радченков В.П., Стоянов В.К, 1995). Хотя этот метод снижения эмбриональных потерь имеет высокую эффективность и при этом виде иммунизации отсутствует риск возникновения анафилаксии, он имеет существенный недостаток — высокую трудоемкость.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЙ - Изучить иммунотрофи чес кое взаимодействие в системе «самка-зародыш» у крупного рогатого скота и на основе ■ этих исследований разработать подходы к повышению эмбриональной выживаемости посредством стимуляции этого взаимодействия специфическими или неспецифическими иммуномодуляторами. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить величину пренатальных потерь у крупного рогатого скота, обусловленную нарушением иммунотрофического взаимодействия в системе «самка-зародыш».

2. Выяснить возможность повышения эмбриональной выживаемости посредством внутримышечной иммунизации коров спермиями быков-производителей.

3. Изучить возможность применения неспецифического иммуномодулятора левамизола для повышения пренатальиой выживаемости у коров.

4. Определить величину эмбриональной выживаемости у коров, иммунизированных спермиями быков-производителей в первые, либо вторые сутки после осеменения.

5. Установить величину пренатальиой выживаемости у коров, двухкратно проиммунизированных спермиями быков-производителей.

6. Изучить возможность использования для повышения эмбриональной выживаемости внутривлагалищной сенсибилизации коров инактивированными спермиями быков-производителей.

7. Определить содержание Т-клегок, В-лимфоцитов, Е-РОК и Ж-РОК в периферической крови коров, обработанных или необработанных специфическими или неспецифическими иммуномодуляторами.

8. Изучить уровень антислермальных антител в крови коров, обработанных или необработанных специфическими иммуномодуляторами.

НОВИЗНА ПОЛОЖЕНИЙ ДИССЕРТАЦИИ. Впервые показано что:

- хотя у самок во время беременности и происходит развитие иммунного ответа преимущественно по Тх2-пути, внутримышечная иммунизация коров спермиями быков-производителей не вызывает анафилактического шока, но в тоже время имеет такой же эмбрнопротехтивный эффект, как и внутрикожная иммунизация этими же клетками;

- несмотря на то, что внутримышечная иммунизация может действовать как стрессовый фактор, иммунизация этим способом коров в первые сутки после осеменения не вызывает нарушения о плодотворя емости;

- однократная иммунизация коров спермиями быков-производителей не полностью предотвращает эмбриональные потерн, вызванные нарушением иммуиотрофического взаимодействия в системе «самка-зародыш»;

- двухкратная иммунизация коров антигенам» спермиев быков-производителей по сравнению с однократной сенсибилизацией повышает эмбриональную выживаемость почти на 10%;

- однократная обработка коров неспецифическим иммуномодулятором левам изодом хотя и повышает пренатальную выживаемость, но эффективность этой обработки ниже, чем при однократной специфической нммуномодуляции спермиями быков-производителей;

- у коров во время стельности и особенно в предплацентационный периоды внутриутробного развития в периферической крови происходит увеличение численности субпопуляции Т-лимфоцитов — Е-РОК, однако общее количество Т-клеток практически не изменяется;

- внутримышечная иммунизация коров спермиями быков-производителей в значительно меньшей степени влияет на численность Е-РОК в периферической крови, но значительно увеличивает количество Ж-РОК в ней;

- дополнительная внутримышечная, также как и внутрикожная, сенсибилизация коров спермиями быков-производителей в дозе 2x106 спермиев / на одну иммунизацию практически не влияет на уровень антисперм ал ьных антител в периферической крови, индуцированный эндогенной сенсибилизацией спермиями, использовавшимися для осеменения.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Разработан новый подход к разработке методов повышения пренатальной выживаемости у коров с нарушенной иммунотрофической функцией в интерфазе «самка-зародыш». Этот подход основывается на возможности предотвращения пренатальных потерь у коров путем обработки их специфическими иммуномодуляторами (иммунизация спермиями быков-производитеяей или суспензией лейкоцитов посторонних доноров), либо неспецифическими

иммуномодуляторамн (левамизолом и др.). Данная разработка может быть использована для дальнейшего совершенствования предложенного метода иммунопрофилактики эмбриональных потерь посредством стимуляции (специфическими, или неслецифичсскими иммуномодуляторамн) иммунотрофической функции организма коровы по отношению к зародышу.

АПРОБАЦИЯ. Основные результаты работы были доложены на научно-практической конференции «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения» (1-3' июня 1998г., п .Быково); на научно-практической конференции «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечениям (3-4 нюня 1999г., п. Быково); на научной конференции отдела биологии воспроизведения ВИЖа «50 лет Открытия возможности замораживания н получения потомства от замороженного семени» (23-24 октября 1997г., п .Быково).

ПУБЛИКАЦИИ. Материалы диссертации опубликованы в 4 статьях,

ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация изложена на 122 страницах машинописного текста, состоит из введения, литературного обзора, целей и задач исследований, собственных исследований, обсуждения результатов и выводов, содержит 15 таблиц и 8 трафиков. Список литературы включает 221 источник, в том числе 189 иностранных.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.,

Научно-производственные исследования были проведены в совхозе «Поваденский» Домодедовского района Московской области. Лабораторные исследования проводились в Российской академии менеджмента в животноводстве Минсельхозпрода России и НИИ эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф.Гамалеи РАМН.

Всего в опытах было использовано 376 коров. Животные в опытные и контрольные группы были подобраны по принципу аналогов. Последовательность проведения экспериментов представлена на схеме 1.

Дополнительную сенсибилизацию коров к антигенам спермиев быков-производителей осуществляли посредством внутрикожной, либо внутримышечной иммунизации, или влагалищным введением инакти вированных спермиев быков-производителей по ранее описанному методу (Радчеяков В.П., Стоянов В.К., 1995г.). Коровам контрольных групп вводили плацебо (1 мл 0,9% раствора ИаС), содержащего 0,01%мертнодатаКа).

В качестве неспецифического иммуномодулятора, активирующего имунотрофическую функцию в системе «самка-зародыш», использовали — левам изо л в дозе 10мг/кг массы тела животного, который вводили подкожно.

У коров контрольных и опытных групп величину пренатальных потерь определяли косвенным методом по повторным проявлениям течки.

СХЕМА ОПЫТОВ

s

Выделение мононуклеарных клеток периферической крови осуществляли традиционным способом на градиенте плотности фиколл-верографина.

Количественное определение живых клеток в суспензии мононуклеарных клеток проводили в тесте с 0,2% раствором трипанового синевого.

Реакцию спонтанного (Е-РОК), комплементарного {НАС-РОК) розетко-образования и реакцию формирования розеток лимфоцитами коров со спермиями быков-производителей проводили по Соколовской И.И. и др. (1985).

Количественное определение Т-лимфоцитов крупного рогатого скота осуществляли нммунофлуоресцентным методом по Young T.J. (1981).

Уровень антиспермальных антител определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа по Lander M.F. et.al. (1990).

Реакцию ЭСЭ (экстракт-сыворотка-эмбрион) ставили по методу Соколовской И.И. идр, (1985).

Статистическую обработку полученных результатов проводили общепринятым способом.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Результативность осеменения, клеточные н гуморальные иммунные реакции у коров, иммунизированных спермиями быков-

пронзводнтелей,

3.1.1; Результативность осеменении у коров« иммунизированных спермиями быков в 1-е либо 2-е сутки после осеменения.

Ранее было показано, что внутрикожная иммунизация коров антигенами сперм иев быков на 2-е сутки после осеменения повышает результативность осеменения посредством повышения эмбриональной выживаемости. Достоинством этого вида иммунизации является: I) медленное поступление антигенов в кровь, чем достигается больший иммунный ответ, нежели при внутримышечном либо внутривенном введении антигена; 2) данный вид иммунизации не вызывает анафилактического шока; 3) более того, в практической иммунологии внутрикожную иммунизацию в субоптимальных дозах используют для десенсибилизации предупреждения проявления аллергической реакции немедленного типа. Уже длительное время известно, что некоторые антигены не только при внутривенном, но и при внутримышечном введении способны. вызывать анафилактический шок. Одни и те же антигены способны вызывать как аллергию немедленного типа, так и аллергию замедленного типа (гиперчувствительность замедленного типа). Ранее было показано, что у стельных коров существует

гиперчувствител ьность замедленного типа к антигенам, имеющим общие детерминанты с антигенами эмбрионов, то есть вполне вероятно, что внутримышечная иммунизация слермиями быков может вызвать аллергию немедленного типа — анафилаксию, В тоже время значительным достоинством внутримышечной иммунизации коров антигенами спермиев с целью профилактики эмбриональных потерь является его большая практическая приемлемость, чем внутри кожная иммунизация в несколько точек. В связи с этим на первом этапе мы провели сравнительное изучение эмбрнопротектн вного эффекта внутримышечной и внутршсожной сенсибилизации коров к антигенам спермиев. Иммунизацию проводили на вторые сутки после осеменения. Результаты эксперимента представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Результативность осеменения коров, иммунизированных спермиями быков на вторые сутки после осеменения.

Осеменено коров Время от обработки

Обработка Всего Стало стельными в одну охоту Повторили охоту е течение первого полового цикла, % Повторили течку с запозданием % до плодотворного осеменения (сутки) Индекс осеменения

Всего %

Спврмии Внутримышечно Внутри-КОЖНО 18 20 13 14 72,2+9.4 70,0+10,2 5,6 10,0 22,2+9,7 20,0+4,5 1.8,9+7.8 18.2+7.6 1.43+0.19 1,38+0,12

Плацебо Внутримышечно Внутри-кожно 21 20 11 10 52.4+10,9 50.0+11.2 9,5 15,0 38.1+10,5 35,0+7,8 27.4+9,7 26.2+8.1 1,94+0,22 1,73+0,20

Как видно из данных, представленных в таблице 1, у коров обеих опытных групп по сравнению с животными контрольных групп повысилась результативность осеменения (практически на одну величину) и соответственно снизилось время от обработки до плодотворного осеменения, а также индекс осеменения. Ни у одной нз коров, иммунизированных внутримышечно спермиями быков, не было обнаружено признаков анафилактического шока. Увеличение результативности осеменения у животных опытных групп произошло не в результате повышения оплодогворяемости, так как число коров.

повторивших течку в течение первого полового цикла после осеменения в опытных и контрольных группах было практически одинаково. Рост этого показателя был обусловлен снижением числа коров, повторивших течку с запозданием среди животных опытных групп по сравнению с контрольными. Известно, что повторение течки с запозданием (после осеменения), как правило, свидетельствует о снижении пренатальной выживаемости . Следовательно, увеличение результативности осеменения у коров, иммунизированных внутримышечно, либо внутрикожно спермшши быков произошло вследствии снижения у них (по сравнению с контрольными животными) пренатальных потерь. В тоже время эмбриопротектнвный. эффект как внутримышечной, так и внутрикожной дополнительной сенсибилизации коров антигенами сперм иев был практически одинаков. В связи с этим в дальнейшей работе для повышения эмбриональной выживаемости использовали только внутримышечную иммунизацию.

Известно, что иммунизация может действовать как стрессовый фактор. Считают, что даже незначительные стрессы могут быть причиной нарушения оплодотворения у крупного рогатого скота. В связи с этим в следующем эксперименте изучали возможность использования внутримышечной иммунизации коров антигенами спермнев с целью повышения эмбриональной выживаемости. Результаты эксперимента представлены в таблице 2.

Таблица 2.

Пренатальная выживаемость у коров, иммунизированных спермиями быков в первые, либо вторые сутки после осеменения.

Осеменено коров Время от 1

Повторили! Повтори- обработки Индекс

охоту в те- ли течку до плодо- осемене-

Обработка Все- Стало стельным« чении пер- запозда- творного ния

го в одну охоту вого поло- нием осемене-

вого цик- % ния (сутки)

ла, %

Всего %

Спермии

1-ые сутки 21 15 71,4+6,3 9,5 19,0+8,5 ■¡6,3+7,9 1,41+0,15

2-ые сутки 19 14 73,7+10,3 10,5 15,8+8,4 16.1+7.9 1,40+0,14

Плацебо

1-ые сутки 21 10 47,6+10,9 4,8 47,6-И 0,9 29,6+9,8 1,80±О,21

2-ые сутки 17 9 52,9+12,1 11,8 41,2+12,0 27,8+9,8 1.74+0,20

Как видно из данных, представленных в таблице 2, дополнительная сенсибилизация коров антигенами сперм иев как в первые сутки, так и во

вторые сутки после осеменения повысила результативность осеменения и, соответственно, снизила время от обработки до плодотворного осеменения. Как и в предыдущем эксперименте, в этом опыте изменение данных показателей было связано не с различной оплодотворяемостью в опытных и контрольных группах (число животных, повторивших течку в течение первого полового цикла после осеменения во всех группах было практически одинаково), а со снижением в опытных группах (по сравнению с контрольными) численности животных, повторивших течку с запозданием. Следовательно, в этом эксперименте, как и в предыдущем, повышение результативности осеменения у коров опытных групп (по сравнению с контрольными) было обусловлено снижением эмбриональных потерь. Так как эмбриопротективный эффект иммунизации коров антигенами спермиев как в первые, так и во вторые сутки после осеменения был практически одинаков, в дальнейшей работе для повышения пренатальной выживаемости использовали только дополнительную сенсибилизацию антигенами спермиев только в первые сутки после осеменения.

3.1.2. Влияние дополнительной сенсибилизации коров антигенами спермиев быков на показатели клеточного иммунитета..

Известно, что Т-лимфоциты играют ведущую роль в ретуляторных и эффекторных функциях клеточного и гуморального иммунитета. Ранее было показано, что у коров уже на ранних этапах стельности происходит увеличение в периферической крови численности Е-РОК (СШ'1). В связи с этим в следующем эксперименте изучали состояние клеточных иммунных реакций у коров, иммунизированных и неиммунюированных спермиями быков-производителей. Результаты эксперимента представлены в таблице 3.

Как видно нз данных, представленных в таблице 3, у коров уже в период эструса в периферической крови происходит увеличение числа Е-РОК. Разница в численности этих клеток у коров на стадии эструса, по сравнению с животными, находящимися на стадии диэструса, статистически достоверна. Данное повышение количества Е-РОК в периферической крови коров, пришедших в охоту, по сравнению с животными, не, пришедшими в охоту, по видимому, обусловлено действием эстрогенов. С увеличением сроков стельности происходит дальнейшее нарастание численности, этих клеток, так уже к Л 8 суткам стельности, по - сравнению с 0 (время осеменения), количество Е-РОК возросло на статистически достоверную величину (РХ),01). Более интенсивный рост численности Е-РОК происходит в периферической крови коров, обработанных антигенами спермиев быков. Так у этих животных, по сравнению с коровами, обработанными плацебо, уже к 10 суткам количество Е-РОК возросло на статистически достоверную величину (Р>0,05). .Повышение численности Е-РОК в периферической

крови уже на ранних этапах стельности, по-видимому, связано с миграцией СС2* (Е-РОК) у5 Т-клеток из селезенки в эндометрий и к месту формирования плаценты.

Таблица 3.

Влияние иммунизации спермиями и сроков стельности на число Е-РОК,. Ж-РОК и Т-клеток в периферической крови коров.

Время взятия Число Подсчитано лимфоцитов

Обработка . крови по отноше- коров Из них

нию ко времени Всего Е-РОК Ж-РОК Т- клетки

обработки (сутки) Число % Число % Число %

Живчиками 0 . 10 9 9 2700 2700 114 165 12,6+1,2* 18,3+1,3 165 259 18.3+1,3 28,8+1,5 648* 608 72,0+1,5 67,6+1,8

18 9 2700 218 24,2+2,3 331 36,8+2,4 596 66,2+1,6

Плацебо 0 10 18 7 7 ' 7 2100 2100 2100 95 107 152 13,6+1.3* 15,3+1,4 21,7+1.6 107 157 204 15,3+1.4 22,4+1,6 29,0+1,7 476 471 448 68,3+1,5 67,3+1,5 64,0+1,8

Необработанные, не-стельные 10 3000 78 7,8+0,9 127 12,7+1.1 771 77,1+1,8

• Р>0,01

Из данных, представленных в таблице 3, также видно, что у коров, находящихся в стадии диэструса, в периферической крови присутствуют лимфоциты, экспрессирующие рецепторы к антигенам спермнев — Ж-РОК. Наличие этих клеток у нестельных коров, по видимому, связано с предыдущей эндогенной сенсибилизацией их иммунной системы во время осеменения.'В период охоты у коров, по сравнению с животными в стадии диэструса, в периферической крови численность Ж-РОК увеличилась на статистически достоверную величину (Р>0,01). Рост этого показателя, по видимому, связан с иммуномодул ирующем действием эстрогенов. Известно, что эстрогены обладают способностью стимулировать поликлональную активацию лимфоцитов. Уже на ранних этапах стельности к 10 суткам после оплодотворения (по сравнению со временем осеменения) число Ж-РОК в периферической крови повышается на статистически достоверную величину (Р>0,01). Возрастание же

численности Ж-РОК на ранних стадиях стельности, по видимому, связано с эндогенной сенсибилизацией антигенами спермиев во время осеменения. У коров, иммунизированных спермиями быков, по сравнению с животными, обработанными плацебо, количество Ж-РОК в периферической крови повышалось более интенсивно. К 18 суткам после оплодотворения у них, по сравнению с контрольными животными, число Ж-РОК в периферической крови было выше на: статистически достоверную величину (Р>0,01). Эта более высокая численность Ж-РОК у иммунизированных коров, по сравнению с неиммунизированными, по-видимому, связана с двойной сенсибилизацией первый раз антигенами спермиев — в период осеменения и второй раз во время иммунизации.

Из таблицы 3 также видно, что хотя у стельных коров и коров в стадии охоты, по сравнению с животными в период диэструса, происходят значительные изменения в количестве Е-РОК, Ж-РОК в периферической крови, значительных изменений в общем количестве-Т-клеток у этих животных не происходит.

' Таким образом, результаты этого эксперимента показали, что хотя у нестельных коров, коров в стадии охоты и животных на ранних этапах стельности численность популяции Т-лимфоцитов в периферической крови практически одинакова, у этих животных происходят субпопуляционные изменения - увеличение количества Е-РОК и Ж-РОК в периферической крови коров в период охоты и на ранних этапах стельности.

3.13. Гуморальный иммунный ответ у коров, иммунизированных спермиями быков,.

Считают, что у млекопитающих во время беременности преобладает направление иммунного ответа по Тх2-пути. В связи с этим в следующем эксперименте мы изучали влияние дополнительной сенсибилизации коров антигенами спермиев на величину гуморального иммунного ответа к этим антигенам. Результаты эксперимента представлены в таблице 4,

Как видно из данных таблицы 4, уровень антиспермальных антител при разведении сывороток в диапазоне от 1:30 до 1:90 повысился у животных всех групп (независимо от способа обработки) на: статистически достоверную величину. Следовательно, как: внутрикожная, так и внутримышечная иммунизация спермиями быков практически не повлияла на уровень антиспермальных антител - в периферической крови, индуцированный эндогенной сенсибилизацией спермиями; во время осеменения.

Уровень антиспермальных антител у коров, дополнительно сенсибилизированных антигенами спермиев быков.

Время взятия крови: по от- Оптическая плотность при степени разведения сыворотки крови в соотношении

Обработка ношению ко времени обработки (сутки) 1:30 1:60 1:90 1:120 1:240

Живчиками, в/м 0 10 0,684+0,097* 1,276+0,138 0,534+0,069" 0,912+0.121 0,449+0,041" 0,784+0,104 0,233+0.032 0,345+0,049 0.189+0.029 0.212+0,031

Жиачи~ каш а/к 0 10 0.763+0.002: 1.404+0.159- 0,525+0,068* 1,200+0,134 0,337+0.043* 0.879+0,095 0,219+0,037* 0.441+0,049 0.177+0,027 0,213+0,036

Плацебо 0 10 0,722+0,108 1.197+0.146 0,488+0.056* 0,942+0.123 0.314+0,059* 0,688+0,108 0,225+0,051 0,168+0,041 0,358+0,096 0.200+0,058

*-Р< 0.05; **-Р<0,01

Известно, что у коров во время стельности в периферической крови появляются антитела к антигенам зародышей. Часть этих антител реагирует с антигенами зародышей к живчиков, имеющих общие детерминанты, другая реагирует только с тканеспецифическими антигенами, либо спермиев, либо зародышей. Ранее И.И.Соколовскон с соавторами был разработан способ раннего определения стельности по наличию в сыворотке крови антител к антигенам зародышевых тканей -реакция ЭСЭ. Степень совпадения реакции ЗСЭ зависит от величины эмбриональных потерь. В связи с этим в следующем эксперименте изучали степень совпадения- реакции. ЭСЭ с результатами ректальных исследований у коров, иммунизированных живчиками быков. Результаты эксперимента представлены в таблице 5.

Как видно из данных, представленных в таблице 5, у коров, иммунизированных спермиями быков, по сравнению с животными, обработанными плацебо, степень совпадения реакции ЭСЭ была выше. Эта разница в результатах определения стельности двумя разными способами

ее определения обусловлена более высокими эмбриональными потерями у коров, обработанных спермиями, по сравнению с животными опытной группы.

Таблица 5;

Реакция ЭСЭ у коров, иммунизированных антигенами спермиев быков.

Обработка в/м в Число коров Коровы с. положительной - Стельность подтверждена ректально Повторили течку Совладение ЭСЭ с ректаль-

первые сутки после осеменения реакцией. ЭСЭ В течение полового цикла С запозданием ными исследованиями, %

Число % Число % Число % Число %

Спермии 21 17 81,0+6,6 15 71,4+8,3 2 0,5 4 19,0+8.5 88,2+7.8

Плацебо 21 16 76.2+11,1 10 47.6+10,9 1 4,8 10 47,6+10,9 62,5+10,1

Увеличение эмбриональной выживаемости у животных, иммунизированных спермиями быков, по видимому, опосредовано более сильной сенсибилизацией этих животных к антигенам эмбрионов. С другой стороны, общее количество коров, стельность которых подтверждена ректально я число коров, повторивших течку с запозданием, была выше, нежели число коров, имевших положительную реакцию ЭСЭ (особенно заметно это проявилось в группе животных, обработанных плацебо). Это несовпадение количества животных, стельность которых подтверждена ректально, по сравнению с числом животных, имевших положительную реакцию ЭСЭ, может быть связана с тем, что даже однократная дополнительная сенсибилизация коров антигенами спермиев недостаточна для стимуляции полноценного иммунотрофического взаимодействия в системе "самка-зародыш". В связи с этим на следующем этапе исследований изучали возможность использования для повышения эмбриональной выживаемости у коров двукратной иммунизации их спермиями быков.

3.1.4. Пренатальная выживаемость и уровень антиэмбриональных антител у коров, иммунизированных двукратно спермиями быков.

На этом этапе исследований первую обработку спермиями быков-производителей проводили в первые сутки, вторую — на 16-18 сутки после осеменения. Результаты эксперимента представлены в таблице 6.

Результативность осеменения и реакция ЭСЭ у коров двукратно иммунизированных спермиями.

Показатели Изме- Обработка коров

рение Два раза спермиями- Один раз спермиями Два раза; плацебо

Всего коров 22 20 19

Стельность от первичного осеменения Число % 19 86,3 + 7,6* 15 75,0 + 9,7 10 52,6 + 11,5*

Повторили течку в течение первого полового цикла Число % 1 4.5 1 5 2 10.5

Повторили течку с запозданием Число % . 2 9.1 ± 6.4* 4 20,0 + 8,9 7 36,8+11,0*

Положительная реакция ЭСЭ Число % 18 30,0 + 6,4 18 90.0 + 6.7 14 73,4 + 10,1

Совладение ЭСЭ с данными ректальных исследований % 94,4 + 4,9- 83,3 + 8.3 71.4 + 10,3

Время от обработки до плодотворного осеменения Сутки 14.2+7.7 17,4 + 8,9 24,0 + 9,8

Индекс осеменения 11,9 + 0.09 1,27 + 0,14 1,68 + 0,23

* - Р < 0.05

Как видно кз данных, представленных в таблице б, двухкратная обработка коров спермиями быков, по сравнению с однократной обработкой этими клетками повышает результативность от первичного осеменения на большую величину (при статистически достоверной' разнице с контрольными животными, обработанными плацебо). Это повышение результативности осменения у коров, обработанных двухкратно, по сравнению с животными, обработанными однократно спермиями'быков, произошло вследствие снижения среди них коров, повторивших течку с запозданием (при Р < 0,05 с контролем). В тоже время число животных всех контрольных и опытных групп, повторивших

течку, в течение полового цикла было практически одинаково. В связи с этим из результатов одного эксперимента можно сделать вывод о том, что повышение результативности осеменения у коров, обработанных спермиями быков двукратно, по сравнению с животными, обработанными однократно, обусловлена большей эмбриональной выживаемостью в первой группе животных. Этот вывод подтверждается и более высокой степенью совпадения реакции ЭСЭ с данными ректальных исследований у животных, обработанных двухкратно спермиями быков, по сравнению с двумя остальными группами животных.

3.1.5. Результативность осеменения и показатели клеточного гуморального иммунного ответа у коров, просенсибнлизированных спермиями различными способами.

В течение 80-х годов появилось несколько публикаций о том, что введение в период эструса в полость матки или влагалища антигенов, имеющих общие детерминанты с антигенами эмбрионов, повышают эмбриональную выживаемость. В связи с этим в следующем эксперименте изучали результативность осеменения у коров, дополнительно сенсибилизированных внутримышечно либо внутривлагалищно спермиями быков. Для этого животных первой опытной группы иммунизировали внутримышечно этими клетками, двум остальным опытным группам коров внутривлагалищно вводили инактивированные спермии быков в дозе 2x10 либо 1x10®. Животных контрольных групп обрабатывали плацебо по аналогичной схеме. Результаты эксперимента представлены в таблице 7.

Как видно из данных, представленных а таблице 7, дополнительная внутривлагалищная сенсибилизация коров спермиями быков в дозах как 2х106, так и 1x10® практически не повлияла на результативность осеменения. В этих группах число животных, повторивших течку в течение первого полового цикла, а также повторивших ее с запозданием, было практически одинаковым с аналогичными показателями у коров контрольных групп.

Эмбриональная выживаемость и реакция ЭСЭ у коров, сенсибилизированных внутримышечно либо внутривлагалнщно спермиями быков.

Ед.иэ- Сенсибилизация коров

Показатели мере-ния Спермиями Плацебо

в/м 2x10° В/в* 2x10й в/в 2x10° В/в В/м

Всего коров Число 18 18 19 20 17

Стельность от первичного осеменения Число % 14 77,8 + 9,9 10 55,6 + 3,7 9 47.4 + 11.4 10 50,0 + 11.2 9 52,9+12,1

Повторили течку в течение первого, полового цикла %. 0 5,6 10.5 10 0

Повторили течку с запозданием Число % 4 22,2 + 9,8 7 38,9 + 11,5 8 42,1 + 11,3 8 40,0 + 11,0 8 47.2 + 12,1

Положительная реакция ЭСЭ Число % 17 94,4 + 5,4 13 72,2 + 12,6 ,13 68,4 + 10,7 14 70,0 + 10,2 13 76,5 + 10,3

Совпадение ЭСЭ сданными ректальных исследований % 82,4 + 8.9 76,9 + 9,9 69,2 + 12,2 71,4 + 10.1 76,5+10,3

Время от обработки до плодотворного осеменения Сутки 15,8 + 7,9 28,6+8,6 32,3 + 9,8 30,2 + 9,7 33,1+10.6

* - в/в - внугривлагалнщная обработка

В этом эксперименте также был изучен уровень антиспермальных антител у коров, дополнительно сенсибилизированных внутрнвлагалищно спермиями быков производителей. Результаты этих исследований представлены в таблице 8.

Из данных, представленных в таблице 8 видно, что у коров, как дополнительно сенсибилизированных внутривлагалищно спермиями быков, так и несенсибилизированных спермиями быков, к десятым суткам после осеменения уровень антиспермальных антител в разведенкии сыворотки крови в диапазоне с 1:30 до 1:120 повысился на статистически

достоверную величину (Р < 0,01). В тоже время это повышение титра антител было практически одинаково как у животных опытной, так и контрольной групп. Следовательно, дополнительная внутривлагалищная сенсибилизация коров спермиями быков практически не повлияла на изменение их гуморального иммунного ответа к спермалькым антигенам. Увеличение уровня актиспермальных антител в обоих {опытной и контрольной) группах животных было обусловлено эндогенной сенсибилизацией их по вторичному типу гуморального иммунного ответа антигенами спермиев, поступивших в валовые пути в период осеменения.

Таблица 8.

Динамика уровня антиспермалышх антител у коров, дополнительно сенсибилизированных внутривлагалшцно спермиямн быков.

Дополнительная сенсибилизация Время взятия крови по отношению Оптическая плотность при степени разведения сыворотки крови в соотношении

спермиямн в дозе 1x10 е ко времени осеменяя (сутки) 1:30 : 1:60 1:90 1:120 1:240

+ 10 2 1,209+0.087" 0.766+0,078 0,993+0.083* 0,514+0,076 0,571+0,053* 0,379+0,042 0,306+0,044 0,219+0,037 0,214+0,035 0,184+0,027

—.....— 10 2 1,327+0,091 0,819+0,089 0,968+0.087" 0,548+0,066 0,614+0,063 0,363+0,047 0,345+0,048 0.235+0.033 0,272+0,031 0,202+0.025

Таким образом, результаты экспериментов, представленных в этой главе, показали, что внутривяагаяищная обработка коров инактнвированнымн сяермлжии быков, не оказывает влнянт на становление иммунотрофической функции по отношению к зародышу н поэтому не обладает, в отличие от внутримышечной обработки (этими же антигенами), змбриопротективным действием.

го

3.1.6. Пренатальная выживаемость и показатели клеточного иммунитета у коров, нммувизированных спермнямн, либо лейкоцитами, В течение последних десяти лет многочисленными исследованиями было показано, что у особей с гемохорнальным и гемоэндотелиальным типом плаценты снижение нренатальной выживаемости предотвращается иммунизацией лейкоцитами, полученными от нескольких доноров. -

В связи с этим в следующем эксперименте изучали возможность предотвращения . эмбриональных потерь у коров (имеющих синдесмохориальный тип плаценты) посредством иммунизации их лейкоцитами. Результаты эксперимента представлены в таблице 9.

Таблица 9.

Результативность осеменения коров, иммунизированных спермнямн, или

лейкоцитами.

Иммунизация Число животных Время от иммунизации до плодотворного осеменения (сутки) Индекс осеменения

Всего Стало стельными от первичного осеменения

Число %

Спермиями 16 12 75,0 + 10.8 16,2 + 8,1 1.24 + 0.13

Лейкоцитами 15 11 73,3 + 11.4 16,6 + 8,2 1,27 + 0,14

Плацебо 18 9 50,0+11,2 29,4 + 9,1 1.69 + 0,25

Р<0,01

Как видно из данных, представленных в таблице 9, иммунизация коров лейкоцитами, также как и спермиями, повышает эмбриональную выживаемость. Следовательно, у крупного рогатого скота, также как и у особей с гемохорнальным и эпителиохориальным типами плацент, лейкоциты имеют антигены, сходные с антигенами зародышей. Лейкоциты крупного рогатого скота, также как и спермии быков-производителей, могут быть использованы для иммунопрофилактики эмбриональных потерь у коров.

У коров, иммунизированных спермиями или лейкоцитами было исследовано содержание Е-РОК и Т-клеток в периферической крови. Результаты эксперимента представлены в таблице 10.

Как видно из данных, представленных в таблице 10, во всех группах животных, независимо от способа обработки, к 10 суткам после осеменения (по сравнению со 2-ми сутками аналогичного периода) в периферической крови количество Е-РОК увеличилось на статистически достоверную величину. В тоже время численность Т-лимфоцитов практически не изменилась.

Таблица 10,

Численность Е-РОК и Т-клеток в периферической крови коров, иммунизированных спермиямн или лейкоцитами.

Сутки взятия Подсчитано лимфоцитов'

Обработка крови по от- Всего Из них-

ношению ко

времени осе- Е-РОК Т-клеток

мененения

Число % Число %

Спермиями 2 1000 94 9.4 + 0.92* 712 71,2 + 1,2

10 1000 197 19,7 + 1.3 687 68,7 + 1,5

Лейкоцитами 2 1000 101 10,2+0,95* 704 70,4 + 1,4

10 1000 175 17.5+1,2 718 71,8 + 2,0

Плацебо 2 1000 88 8.8 + 0.90* 674 67.4 + 1,5

10 1000 152 15,2 + 1,2 690 69.0 + 1,5

*-Р<0101

3.1.7. Изучение влияния обработки коров специфическим н неспеци-фнческнм иммуномодулятором на эмбриональную выживаемость и -показания реакции ЭСЭ.

Известно, что интенсивность иммунного ответа может быть повышена обработкой неспецифическим иммуномодулятором. Ранее было показано, что у самок с эндотелиохориальным типом плаценты нарушения пренаталькой выживаемости, вызванное спонтанным либо экспериментальным нарушением иммунотрофического взаимодействия в системе «самка зародыш» может быть восстановлено обработкой специфическими иммуномодуляторами - спермин, лейкоциты, так и неспецифическими - левамизол, тамопоэтин, адъювант Фрейнда. В связи с этим в следующем эксперименте изучали результативность осеменения и данные реакции ЭСЭ у коров, обработанных специфическим иммуномодулятором - спермин быков-производлтеяей или неспецифическим - левамизолом. Результаты эксперимента представлены в таблице II.

Как видно из данных, представленных в таблице 11, обработка коров неспецифическим иммуномодулятором левамизолом хотя и повысила результативность от первичного осеменения по сравнению с животными, обработанными плацебо, но на меньшую величину, чем обработка специфическим иммуномодулятором - спермиями быков-производителей.

Увеличение числа животных, ставших стельными в группах животных, обработанных специфическим либо неспецифическим иммуномодулятором, произошло в результате снижения среди них числа коров, повторивших течку с запозданием, то есть вследствие снижения эмбриональных потерь. Степень совпадения реакции ЭСЭ у коров, обработанных левамизолом или про иммунизированных спермнямн быков-производителей, была практически одинаковой, но значительно выше, нежели у животных, обработанных плацебо.

Таблица 11.

Пренатальная выживаемость и реакция ЭСЭ у коров, обработанных специфическим, либо неспецифическим иммуномодулятором.

Исследуемые Единица - Обработка

показатели измерения Спермиями Левамизолом Плацебо

Всего коров Число 21 23 19

Стельность от первичного осеменения Число % 15 71.4 + 9.7 14 60,9+10.2 9 47.4 + 11,6

Повторили течку в течение первого полового цикла Число % 2 9,5 1 4.3 1 5,3

Повторили течку с запозданием Число %: 4 19,0 + 8,6 8 34,8 + 9,9 9 47,4 +11.6

Положительная реакция ЭСЭ Число % 18" 85,7+10.0 17 73,9 + 9,2 13 64,6 + 11,3

Совпадение реакции ЭСЭ с данными ректальных исследований. % 83,3 + 8,1 82,4 + 7,9 62,2 + 11,6

Время от обработки до плодотворного осеменения Сутки 16,3 + 8,1 19,1 +8,8 25,7 + 9.9

Индекс осеменения 1,31+0.15 1.43 + 0,16 1,72 + 0.26

Таким образом, результаты этого эксперимента показали, что однократная обработка коров иммуномодулятором левамизолом, по сравнению с однократной иммунизацией спермияыи быков-производителей, повысила эмбриональную - выживаемость на меньшую величину, что, по-видимому, связано с более слабой стимуляцией иммунотрофической функции ■ в системе «самка-зародыш» левамизолом, по сравнению с сенсибилизацией спермиями.

3.1*8. Научно производственное изучение эмбрнопротекггивного действия у коров, иммунизации их спермнями быкоп-проиэводнтелей.

В научно-производственном опыте изучали прекатальную выживаемость у коров, иммунизированных внутримышечно спермнями быков производителей. Результаты эксперимента представлены в табл. 12.

Таблица 12.

Научно-производственное изучение результативности осеменения у коров, иммунизированных спермнями быков-про из водителей.

Исследуемые показатели Единица Обработка

измерения Сперм иями Плацебо

Всего коров Число 161 158

Стельность от первичного осеменения Число % 12. 74,5 + 4.1* 75 47,5+4,0*

Повторили течку в течение первого полового цикла Число % 15 9,3 + 2,2 14 6,9 + 2,3

Повторили течку с запозданием Число % 26 16,1+2,9*-. 69 43,7 + 4,0*

Время от обработки до плодотворного осеменения Сутки 17,9 + 3,1" 32,3 + 4.3"

Индекс осеменения 1.36 + 0,06" 1,69 + 0,09"

*-Р<0,001 **-Р<0,01

Как видно из данных, представленных в таблице 12, внутримышечная иммунизация коров спермнями быков увеличила результативность осеменения по сравнению с животными, обработанными плацебо на статистически достоверную величину (Р < 0,001). Это повышение результативности осеменения у животных опытной группы произошло не вследствие увеличения оплодотворяемости, так как число животных повторивших течку в течение первого полового цикла, в опытной и контрольной группах было практически одинаково (Р > 0,5). Повышение результативности осеменения у коров, иммунизированных спермнями, произошло вследствие значительного снижения среди них, по сравнению с животными, обработанными плацебо, числа коров, повторивших течку с запозданием (Р < 0,001), то-есть в результате повышения эмбриональной выживаемости. У животных опытной труппы, по сравнению с

контрольной, также значительно снизилось время от обработки до плодотворного осеменения (Р < 0,01) и индекс осеменения (Р < 0,01). Ни у одной из коров, проиммунизированных внутримышечно спермиями быков-производителей, признаков анафилаксии не было обнаружено.

Таким образом, результаты этого эксперимента показали, что внутримышечная иммунизация коров в день их осеменения спермиями быков-производителей, во-первых, не вызывает аллергии немедленного типа, во-вторых, значительно повышает результативность от первичного осеменения вследствии снижения эмбриональных потерь.

ВЫВОДЫ.

1. Внутримышечная иммунизация коров спермиями быков-производн-телей не вызывает анафилаксию, но в то же время обладает таким же эмбриопротекгивным эффектом, как и внутрикожная иммунизация этими же клетками.

2. Несмотря на то, что иммунизация может действовать как стрессовый фактор, внутримышечная иммунизация коров спермиями быков в первые сутки после осеменения не вызывает нарушения пренатального развития на ранних его этапах, а более того, повышает эмбриональную выживаемость.

3. Однократная иммунизация коров спермиями быков-производителей не полиостью предотвращает эмбриональные потери, вызванные нарушением иммуногрофического взаимодействия в системе исамка-зародыщ*\ Двухкратная иммунизация коров этими клетками повышает пренатальную выживаемость более чем на 30%, то есть почти на 10% выше, чем однократная иммунизация,

4. Внутривлагалнщная сенсибилизация коров и н активированными спермиями быков практически не повлияла на эмбриональную выживаемость, что, по-видимому, связано с быстрой элиминацией этих спермиев и поэтому неспособностью их индуцировать полноценное иммунотрофи-ческое взаимодействие в системе "самка-зародыш".

5. У коров уже на ранних этапах стельности в периферической крови происходит внутрипопуляционное изменение Т-лимфоцитов — увеличивается численность Е-РОК, хотя общее количество Т-клеток практически не меняется. Это увеличение численности Е-РОК, по-видимому, связано с миграцией у5 СЭ2+ Т-лимфоцитов из селезенки в плаценту, где эти клетки продуцируют цитокины, необходимые для нормального пренатального развития.

6. Иммунизация коров спермиями быков-производителей мало влияет на количество Е-РОК в периферической крови, но значительно увеличивает численность Ж-РОК, что, по-видимому, связано с активацией антиген-

специфического клеточного иммунитета, участвующего в становлении иммунотрофического взаимодействия в системе «самка-зародыш».

7. У коров уже на ранних этапах стельности в периферической крови увеличивается уровень антиспермальных антител, в то же время однократная как внутримышечная, так и внутрикожная иммунизация спермиями быков-производ ителей практически не влияет на уровень этих антител.

8. Однократная обработка коров иммуномодулятором — левамизолом хотя и повышает эмбриональную выживаемость, но на меньшую величину, нежели однократная внутримышечная иммунизация спермиями быков-производителей, что может быть связано с недостаточностью одной обработки левамизолом для индукции полноценного иммунотрофического взаимодействия в системе «самка-зародыш»,

9. Иммунизация коров аллогенными лейкоцитами повышает пренаталь-ную выживаемость на такую же величину, как и иммунизация спермиями быков-производителей, что свидетельствует о наличии у лейкоцитов и зародышей крупного рогатого скота ТЬХ-антигенов.

10. У коров эмбриональные потери, вызванные нарушением иммунотро-фического взаимодействия в системе «самка-зародыш», достигают более 20% от числа оплодотворенных яйцеклеток, или до 50% общего числа этих потерь.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для повышения пренатальной выживаемости эмбрионов у крупного рогатого скота рекомендуется проводить двухкратную внутримышечную иммунизацию специфическими иммуномодуляторами {спермиями быков-производителей) в дозе 2х106 спермиев/мл в первые сутки после осеменения.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Михайленко Е.В., Богданова НВ., Радченков В.П. Результативность осеменения коров, иммунизированных спермиями быков.]| Зоотехния, 1999, №7, с. 23-23.

2. Михайленко Е.В. Пренаталъная выживаемость у коров, обработанных иммуномодуляторами.]) Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения (1-3 июня 1998 г.), п.Быково, Московская обл., с. 129-131.

3. Михайленко Е.В., Радченков ВЛ., Турко Т.И. Пренатальная выживаемость эмбрионов у коров, обработанных специфическими, либо неспецифическими иммуномодуляторами.Ц Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения (3-4 июня 1999 г.), п.Быково, Московская обл., с. 58-60.

4. Михайленко Е.В., Богданова Н.В., Радченков В.П., - Турко Т.И. Повышение эмбриональной выживаемости у коров, иммунизированных спермиями быков.)| Доклады РАСХН, 2000, Ха 1 январь-февраль, с, 35-37.

Заказ № 190 от 24.05.2000 г.

Объем 1 п.л.

Тираж 100 экз.

Типография ООО «Петроруш» г, Москва, ул. Палеха, д. 2а

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Михайленко, Ева Викторовна

1. Общая характеристика работы.

2. Литературный обзор.

2.1. Эмбриональная выживаемость у крупного рогатого скота и факторы, влияющие на нее.

2.2. Иммунологическое взаимодействие в системе «самка-зародыш».

2.2.1. Антигены трофобласта.

2.2.2. Трансплацентарный переход зародышевых клеток.

2.2.3. Гуморальный иммунный ответ к аллоантигенам зародышей.

2.2.4. Клеточные иммунные реакции в становлении иммунобиологических взаимоотношений в системе «самка-зародыш».

2.2.5. Иммунорегуляция в интерфазе «самка-зародыш».

2.3. Иммунные причины пренатальных потерь и способы их предотвращения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Специфические и неспецифические иммуномодуляторы в повышении эмбриональной выживаемости крупного рогатого скота"

Актуальность темы. В удельном весе всех нарушений процесса воспроизводства по-прежнему ведущее место занимают эмбриональные потери. По многочисленным данным отечественных и зарубежных исследователей оплодотворяемость у крупного рогатого скота составляет 90-95%, тогда как до рождения доживают лишь 50-55% зародышей, наибольшие пренатальные потери происходят в предплацентационный и плацентационный периоды внутриутробного развития (Милованов В.К., 1982; Sreenan J.M. et.al, 1997; Wrenzychi С. et. al, 1999; Gallagher D.S. et. al, 1999).

Несмотря на длительный период изучения причин эмбриональных потере до сих пор не разработано эффективных и практически приемлемых методов их предотвращения. Одной из ведущих причин отсутствия прогресса в этой области биологии воспроизведения было отсутствие знаний конкретных механизмов, вызывающих эмбриональные потери.

В 80-ые годы было установлено важное значение роли иммунной системы самки в нормальном и нарушеном пренатальном развитии. Большой вклад в этом направлении сделали отечественные ученые И.И.Соколовская, А.В.Бронская и Н.М. Решетникова.

К концу 80-х и началу 90-х годов было установлено, что распознавание иммунной системой самки антигенов зародыша отцовского гаплотипа приводит не к формированию реакций отторжения зародыша, а, наоборот, стимулирует рост и развитие как зародыша, так и плаценты. Эти исследования легли в основу новой теории роли иммунной системы самки в нормальном пренатальном развитии - иммунотрофической (Wegmann T.G., 1988; Радченков В.П., 1993).

Ко второй половине 90-ых годов было установлено, что большинство эмбриональных потерь опосредуется через апоптоз клеток зародыша. Было обнаружено, что такие различные и наиболее частые причины эмбриональных потерь, как высокая степень совпадения антигенов гистосовместимости между самкой и зародышем, генетически детерминированным нарушением распознавания иммунной системой самки антигенов зародыша отцовского гаплотипа и различные стрессы, вызывают гибель зародышей через TNFa индуцированный апоптоз клеток трофобласта (Qai J. et. al, 1994; Artz P.С. et. al, 1995). Показано, что эмбриональные потери, вызванные этими причинами, предотвращаются иммунизацией самок клетками, имеющими общие антигены к клеткам зародыша, либо обработкой таких самок неспецифическими иммуномодуляторами (Gorivodsky М. et. al, 1998). Установлено, что у самок, обработанных специфическими, либо неспецифическими иммуномодуляторами, происходит восстановление иммунотрофического взаимодействия в системе «самка-зародыш», проявляющееся в переключении в плаценте синтеза с про- на противовоспалительные цитокины. К настоящему времени установлено, что в повышении противоапоптотической активности зародыша ведущую роль осуществляют такие цитокины, как - ИЛ-1, ИЛ-3, ИЛ-10, ТФР (3, ГМ-КСФ, КСФ-1 и др. (Clark D.А., 1999).

Ранее было обнаружено, что у крупного рогатого скота, имеющего синдесмохориальный тип плаценты, как и у самок с иными видами плаценты, эмбриональные потери, вызванные иммунными причинами, составляют 20-25% от числа оплодотворенных яйцеклеток. Эти потери предотвращаются внутрикожной иммунизацией коров спермиями быков-производителей на вторые сутки после осеменения (Радченков В.П., Стоянов В.К, 1995). Хотя этот метод снижения эмбриональных потерь имеет высокую эффективность и при этом виде иммунизации отсутствует риск возникновения анафилаксии, он имеет существенный недостаток - высокую трудоемкость.

Научная новизна. Впервые показано что:

- хотя у самок во время беременности и происходит развитие иммунного ответа преимущественно по Тх2-пути, внутримышечная иммунизация коров спермиями быков-производителей не вызывает анафилактического шока, но в тоже время имеет такой же эмбриопротективный эффект, как и внутрикожная иммунизация этими же клетками;

- несмотря на то, что внутримышечная иммунизация может действовать как стрессовый фактор, иммунизация этим способом коров в первые сутки после осеменения не вызывает нарушения оплодотворяемости;

- однократная иммунизация коров спермиями быков-производителей не полностью предотвращает эмбриональные потери, вызванные нарушением иммунотрофического взаимодействия в системе «самка-зародыш»;

- двухкратная иммунизация коров антигенами спермиев быков-производителей, по сравнению с однократной сенсибилизацией, повышает эмбриональную выживаемость почти на 10%;

- однократная обработка коров неспецифическим иммуномодулятором левамизолом хотя и повышает пренатальную выживаемость, но эффективность этой обработки ниже, чем при однократной специфической иммуномодуляции спермиями быков-производителей;

- у коров во время стельности и, особенно в предплацентационный период внутриутробного развития, в периферической крови происходит увеличение численности субпопуляции Т-лимфоцитов - Е-РОК, однако общее количество Т-клеток практически не изменяется;

- внутримышечная иммунизация коров спермиями быков-производителей в значительно меньшей степени влияет на численность Е-РОК в периферической крови, но значительно увеличивает количество Ж-РОК в ней;

- дополнительная внутримышечная, также, как и внутрикожная, сенсибилизация коров спермиями быков-производителей в дозе 2x106 спермиев / на одну иммунизацию, практически не влияет на уровень антиспермальных антител в периферической крови, индуцированный эндогенной сенсибилизацией спермиями, использовавшимися для осеменения.

Практическая значимость работы. Разработан новый подход к разработке методов повышения пренатальной выживаемости у коров с нарушенной иммунотрофической функцией в интерфазе «самка-зародыш». Этот подход основывается на возможности предотвращения пренатальных потерь у коров путем обработки их специфическими иммуномодуляторами (иммунизация спермиями быков-производителей или суспензией лейкоцитов посторонних доноров), либо неспецифическими иммуномодуляторами (левамизолом и др.). Данная разработка может быть использована для дальнейшего совершенствования предложенного метода иммунопрофилактики эмбриональных потерь посредством стимуляции (специфическими, или неспецифическими иммуномодуляторами) иммунотрофической функции организма коровы по отношению к зародышу.

Апробация. Основные результаты работы были доложены на научно-практической конференции «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения» (1-3 июня 1998г., п.Быково); на научно-практической конференции «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения» (3-4 июня 1999г., п. Быково); на научной конференции отдела биологии воспроизведения ВИЖа «50 лет Открытия возможности замораживания и получения потомства от замороженного семени» (23-24 октября 1997г., п.Быково).

Публикации. Материалы диссертации опубликованы в 4 статьях.

2. Обзор литературы.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Михайленко, Ева Викторовна

6. Выводы.

1. Внутримышечная иммунизация коров спермиями быков-производителей не вызывает анафилаксию, но в то же время обладает таким же эмбриопротективным эффектом, как и внутрикожная иммунизация этими же клетками.

2. Несмотря на то, что иммунизация может действовать как стрессовый фактор, внутримышечная иммунизация коров спермиями быков в первые сутки после осеменения не вызывает нарушения пренатального развития на ранних его этапах, а более того, повышает эмбриональную выживаемость.

3. Однократная иммунизация коров спермиями быков-производителей не полностью предотвращает эмбриональные потери, вызванные нарушением иммунотрофического взаимодействия в системе "самка-зародыш". Двухкратная иммунизация коров этими клетками повышает пренатальную выживаемость более чем на 30%, то есть почти на 10% выше, чем однократная иммунизация.

4. Внутривлагалищная сенсибилизация коров инактивированными спермиями быков практически не повлияла на эмбриональную выживаемость, что, по-видимому, связано с быстрой элиминацией этих спермиев и поэтому неспособностью их индуцировать полноценное иммунотрофи-ческое взаимодействие в системе "самка-зародыш".

5. У коров уже на ранних этапах стельности в периферической крови происходит внутрипопуляционное изменение Т-лимфоцитов - увеличивается численность Е-РОК, хотя общее количество Т-клеток практически не меняется. Это увеличение численности Е-РОК, по-видимому, связано с миграцией у§ СЭ2+ Т-лимфоцитов из селезенки в плаценту, где эти клетки продуцируют цитокины, необходимые для нормального пренатального развития.

6. Иммунизация коров спермиями быков-производителей мало влияет на количество Е-РОК в периферической крови, но значительно увеличивает численность Ж-РОК, что, по-видимому, связано с активацией антиген-специфического клеточного иммунитета, участвующего в становлении иммунотрофического взаимодействия в системе «самка-зародыш».

7.У коров уже на ранних этапах стельности в периферической крови увеличивается уровень антиспермальных антител, в то же время однократная? как внутримышечная, так и внутрикожная, иммунизация спермиями быков-производителей практически не влияет на уровень этих антител.

8.Однократная обработка коров иммуномодулятором - левамизолом хотя и повышает эмбриональную выживаемость, но на меньшую величину, нежели однократная внутримышечная " иммунизация спермиями быков-производителей, что может быть связано с недостаточностью одной обработки левамизолом для индукции полноценного иммунотрофического взаимодействия в системе «самка-зародыш».

9. Иммунизация коров аллогенными лейкоцитами повышает пренаталь-ную выживаемость на такую же величину, как и иммунизация спермиями быков-производителей, что свидетельствует о наличии у лейкоцитов и зародышей крупного рогатого скота ТЬХ-антигенов.

10.У коров эмбриональные потери, вызванные нарушением иммунотрофического взаимодействия в системе «самка-зародыш», достигают более 20% от числа оплодотворенных яйцеклеток, или до 50% общего числа этих потерь.

7.Практические предложения.

Для повышения пренатальной выживаемости эмбрионов у крупного рогатого скота рекомендуется проводить двухкратную внутримышечную иммунизацию специфическими иммуномодуляторами (спермиями быков-производителей) в дозе 2х106спермиев/мл в первые сутки после осеменения.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Михайленко, Ева Викторовна, п. Быково, Московской обл.

1. Амерханов Х.А., Марзанов Н.С. Генетики работают на будущее.|| Племенное дело, 1999, № 10, с. 7-9.

2. Богданова Н.В. Иммунологическая функция в регуляции нормального эмбриогенеза у крупного рогатого скота.|| Канд.дисс., Дубровицы, 2000, 108 с.

3. Брондз Б.Д. Т-лимфоциты и их рецепторы в иммунологическом распознавании.¡I М.Наука, 1987,471с.

4. Бронская A.B., Радченков В.П., Соколовская И.И. Реакция Э, ЭАК и ауторозеткообразования в ходе стельности у коров.|| Biol.Immunol. Reprod., 1984, № ю, рр.13-15.

5. Бронская A.B., Соколовская И.И., Горбунова Р.П., Туре У.Б. Поведение ксеногенных эритроцитов, нагруженных эмбриональным антигеном в сыворотке крови стельных коров.|| Тез. 2-го Всесоюз.симп. по иммунолог.воспроизвед., М. 1980, с. 257.

6. Говалло В.И. Иммунология репродукции.|| М.Медицина, 1987, 303 с.

7. Губанова В.П. Иммунные ответы организма коров на экзогенные антигены и витамин А.|| Кн. Направления и новые результаты исследований по биологии воспроизведения животных, Дубровицы 1977, вып. 3, часть 2, с. 54-60.

8. Дыбан А.П. Раннее развитие млекопитающих.|| Л.Наука, 1988, 255 с.

9. Есинков В.И., Горлинская Т.А., Мошкин М.П., Осетрова Т.Д., Потапов М.А. Генетико-физиологическое взаимоотношение мать-плод и их влияние на адаптивные признаки потомков.|| Онтогенез, 1998, т. 29, № 6, с. 405-417.

10. Клинский Ю.Д. Зоотехническая эндокринология в практике животноводства.II Сб.научных трудов ВИЖ, 1989, вып. 52, с. 82-87.И

11. П.Клинский Ю.Д., Чомаев A.M., Титов М.Н. Эффективность применения аналога рилизинг-гормона сурфагона для повышения оплодотворяемости телок.|| С-х биология, 1987, №5, с. 105-108.

12. Медуницин Н.В. Цитокины и аллергия.|| Иммунология, 1999, № 5, с. 5-9.

13. Милованив В.К. Интенсификация воспроизводства в молочном скотоводстве.|| Животноводство, 1982, № 10, с. 50-53.

14. Мороз Т.А. Действие биостимуляторов на эффективность воспроизведения высокопродуктивных коров.|| Автореферат канд.дисс., Дубровицы, 1990, 26 с.

15. Радченков В.П. Иммунорегуляция эмбрионального развития. Экспериментальное моделирование.|| Автореферат докт. дисс., Дубровицы, 1993, 32 с.

16. Радченков В.П. Разработка методов раннего определения беременности и повышения эмбриональной выживаемости у сельскохозяйственных животных.|| Автореферат канд.дисс., Дубровицы, 1984, 19 с.

17. Радченков В.П. Роль антигенов плазмы спермы в нормальном и нарушенном пренатальном развитии.|| Доклады ВАСХНИЛ, 1991, № 10, с. 49-50.

18. Радченков В.П., Бронская A.B., Соколовская И.И. Повышение пренатальной выживаемости путем разобщения конкуренции антигенов.|| Доклады ВАСХНИЛ, 1986, № 11, с. 31-32.

19. Радченков В.П., Литвинов Н.С. Угнетение иммунной системы самок как причина нарушения имплантации сингенного зародыша.|| С-х биология, 1991, №6, с. 134-138.

20. Радченков В.П., Стоянов В.К. Иммунопрофилактика эмбриональных1

21. V потнрь у крупного рогатого скота.Ц Доклады ВАСХНИЛ, 1995, № 3, с. 40-41.

22. Решетникова Н.М., Вронская A.B., Губанова В.П. Иммунные взаимосвязи самка-зародыш и механизмы нарушений пренатального развития.|| В кн.: Направления и новые результаты исследований по биологии воспроизведения животных., Дубровицы, 1977, с. 43-49.

23. Соколовская И.И. Гематогенитальные барьеры: доказательства и значение.|| В кн: Направления и новые результаты исследований по биологии воспроизведения животных. Дубровицы, 1977, с. 63-76.

24. Соколовская И.И., Бронская A.B., Субботин А.Д., Ойвадис Р.Н., Радченков В.П., Абилов А.Н., Соловьева Н.П., Таг Т.Н., Осадчук B.C., Федорова М.Е. Методические рекомендации по иммунологии воспроизведения.|| Дубровицы, 1985, 76 с.

25. Соколовская H.H., Милованов В.К. Зоотехническая иммунология воспроизведения.|| Труды V Межд.симпоз.по иммунологии репродукции. Варна, 1982, с. 30-55.

26. Турко Т.Н. Оплодотворяемость и эмбриональная выживаемость у крупного рогатого скота в связи с разными степенями инбридинга и иммунными реакциями материнского организма. || Автореферат канд.дисс., Лесные Поляны, 1997, 23 с.

27. Утешев Д.Б., Сергеев A.B., Утешев Б.С., Шашкина М.С., Сторожаков Г.Н. Перспективы применения ß-каротина как иммуннотропного препарата. || Иммунология, 1999, № 4, с. 17-19.

28. Утешев Д.Б., Сторожаков Г.Н., Сергеев A.B., Утешев Б.С. Ретиноевая кислота как возможный регулятор апоптоза в иммунном ответе. || Иммунология, 1999, № 5, с. 13-16.

29. Фонталин Л.Н. Молекулярно-клеточные механизмы иммунологической толерантности.|| Наука, 104 с.

30. Фонталин Л.Н. Происхождение антигенраспознающей иммунной системы позвоночных животных. Сравнительно-иммунологические эволюционные аспекты.|| Иммунология, 1999, № 6, с. 4-10.

31. Хант С. Выделение лимфоцитов и вспомогательных клеток. В кн: «Лимфоциты.Методы.»|| М.Мир, 1990, с. 15-68.

32. Чомаев A.M., Клинский Ю.Д., Харламов Ю.Е. Влияние лютеостабила на эмбриональную смертность у коров. || Закономерности и пути регулирования воспроизведения животных.: Сб.научн.трудов ВИЖ, Дубровицы, 1997, вып. 58, с. 47-48.

33. Ярилин А.А. Апоптоз и его место в иммунных процессах.|| Иммунология, 1996, №6, с. 10-23.

34. Addonda S.J., Cullinan E.G., Mclntyre К. Reproductive mice lacking a functional type 1 IL-1 receptor.|| Endocrinol., 1996, V 137, pp. 3598-3601.

35. Ahmad N., Schrick F.N., Butcher R.L. Effect of persistent follicles on early embryo.H Biol., Reprod., 1998, V 52, N 5, pp. 1129-1135.

36. Antezar D.F., Miller J.M., Remick L.H. Lymphocyte alloantigens of the horse. II Antibodies of ELA antigens produced during equine pregnancy.|| J.Reprod. Immunol/, 1984, V 6, pp. 283-297.

37. Arechiga C.F., Staples C.R., McDowell P.T. Effects of time insemination an supplemental (3-carotene on reproduction and milk yield of dairy cows under heat stress.|| J.Dairy Sci., 1998, V 81, N 2, pp. 390-402.

38. Arnold L.L. Pregnancy-specific glycoprotein gene expression in recurrent aborters: a potental correlation on the interleukin 10 expression.|| AJRI, 1999, V 41, N 3, pp. 174-182.

39. Artzt K., Benneti D. Serological analysis of sperm of antigenically cross-reaction T/t haplotip and their recombinantsi.|| Immunogenetics, 1977, V 5, pp. 97-107.

40. Athasas-Platsis S., Morton H., Dunglison G. Antibodies to early pregnancy factor retard embryonic development in vivo.|| J.Reprod.Fertil., 1991, V. 92, N 2, pp. 443-451.

41. Artz P.C., Morili F.S., Mannel S. Stress-trigged abortion: inhibition of protective suppression and promotion of tumor sorption in mice.|| AJRI, 1995, V 33, pp. 74-79.

42. Artz P.C., Trontt A.B., Clark D.A. Soluble receptors neutralizing TNF-a and IL-1 block stress-triggered murine abortion.|| AJRI, 1997, V 37, pp. 262-270.

43. Bacci M.L., Barazzoni A.M., Forni M. In situ detection of apoptosis in regressing corpus luteum of pregnant sow: evidence of an early presence of DNA fragmentation.|| Dom.Anim.Endocrinol., 1996, V 13, N 4, pp. 361-372.

44. Ban watt D., Mannel J., Clark D.A. Immunotherapy of stress-triggered abortion in mice.|| J.Immunol., Immunopharmacol., 1992, V 12, N 2, pp. 73.

45. Baxter S.J., Ward W.R. Incidence of fetal loss in dairy cattle after pregnancy diagnosis using an ultrasound scanner.|| Vet.Rec., 1997, V 140, N 11, pp. 237-238.

46. Behr E., Ponpot R., Peyrat M.A. Plasmodium falciparum stimuli of human y5-T-cell are related to phosphorylated antigens of Mycobacteria. || Inf.Immunity, 1996, V 64, N 6, pp. 2892-2896.

47. Bell S.J. Humoral immune responses in murine pregnancy. IV Strain dependency and alloantibody specificity.|| J.Immunogenics, 1984, V 11, N 1, pp. 21-31.

48. Bell S.C., Billington W.D. Humoral immune responses in murine pregnancy. I Anti-paternal alloantibody levels in maternal serum.|| J.Reprod.Immunol., 1981, V3,N 1, pp. 3-13.

49. Bell S.C., Billington W.D. Humoral immune responses in murine pregnancy. Ill Rilationship between anti-paternal alloantibody levels in maternal serum, placenta and fetus.|| J.Reprod. Immunol., 1983, V 5, N 5, pp. 299-310.

50. Benoit S., Blustone J.A. LFA-1 interaction with ICAM-1 and ICAM-2 regulates Th2 cytokine production.|| J. Immunol., 1998, V 161, N10, pp. 5138-5142.

51. Bianehi D.W., Zickwolf G.K., Sylvester S. Male fetal progenitor cells persist in maternal blood for as long as 27 years postparum.|| Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1996, V 93, pp. 705-719.

52. Bochmer H., Aifantis I., Azogni 0. Crucial function of the pre-T-cell receptor (TCR) in TCR3 selection, TCR|3 allelic exelusion and a,p versus yô lineage commitment^ Immunol.Rev., 1998, V 165, pp. 111-119.

53. Boismenn R., Harvan W.L. Modulation of epithelial cell growth by intraepithelial yô T-cells.|| Science, 1994, V 266, pp. 1253-1255.

54. Bonney E.A., Matzinger P. The maternal immune sistem's interaction with circulating fetal cells.|| J.Immunol., 1997, Y 158, N 1, pp. 40-47.

55. Brann W.F., Yongonist R.S. Female bouine infertility.|| Vet.Clin. North. Amer. Food. anim. pract, 1993, V 9, N 2, pp. 223-420.

56. Breder C.D., Dinarillo E.A., Saper C.B. Interleukin-1 immunoreactive innervation of human hypothalamus.|| Science, 1988, V 240, N 4850, pp. 321-324.

57. Brochier S., Bonnean M., Roberts J. Anti HLA Dr alloantibodies eluted from human placental tissne.|| Transplant. Proc., 1989, V 11, N 1, pp. 779-782.

58. Brown W.C., Allison C.R.F., Estes D.M. Bovine type 1 and type 2 responsis.|| Vet.Immunol., Immunopathol., 1998, V 63, N 1-2, pp. 45-55.

59. Bushell A., Masanori N., Morris P.J. Evidence for immune regulation in the induction of transplantation tolerance: a coditional but limited role for IL-4.|| J.Immunol., 1999, V 162, N 3, pp. 1359-1365.

60. Chaouat G., Menn E., Athanassakis I. Maternal T-cell regulate placental size and fetal survival.|| Regional.Immunol., 1988, V 1, N 1, pp. 143-148.

61. Chaouat G., Menn E., Clark D.A. Control of fetal survival in CBAxDBA/2 mice by lymphokine therapy.|| J.Reprod.Fertil., 1990, V 89, pp. 447-459.

62. Chehava-Francic T., Farin P.W., Cross J.C. Effect of injection bovine interferon-oci 1 on oestrons cycle lenght and pregnancy success in sheep.|| J.Reprod.Fert., 1991, V 91, N 1, pp. 347-356.

63. Chen J.J., Sun Y., Nabel C.J. Regulation on the proinflammatory effects of Fas ligand (CD95L).|| Science, 1998, V 282, N 5384, pp. 1714-1717.

64. Clark D.A. Host immunoregulatory mechanisms and the suceses of conceptus fertilized in vivo and in vitro.|| In early pregnancy failure: mechanisms and treatment (Bread R.W., Sharp F. edd.). Peacock Press, 1988, pp. 215-232.

65. Clark D.A. Signaling at the fetomaternal interface.| AJRI, 1999, V 41, N 3, pp. 169-173.

66. Clark D.A.,Chaouat G. What do we now about spontaneons abortion mechanisms?|| AJRI, 1989, V 19, N 1, pp. 28-37.

67. Collins R.A., Camon E.B., Chaplin P.J. Influence of IL-IL on interferon-y production on by bovine leucocyte subsets in response to bovine respiratory syncytial virus.|| Vet.Immunol., Immunopathol., 1998, V 63, N 1, pp. 69-72.

68. Clover M., Sargent I.L., Townsed A. Expression of TAP-1 by human trophoblast.|| Enr.J.Immunol., 1995, V 25, pp. 543-547.

69. Coulam C.B., Fanlk W.P., Mclntyre S.A. Immunotherapy for recurrent spentaneous abortion and its analogies to treatment for cancer.|| AJRI, 1991, V 25, N 3, pp. 114-119.

70. Crump A., Domaldson W.L., Miller J.M. Expression of maijor histocompatibility complex (MHC) antigens on horse trophoblast.|| J.Reprod.Fertil., 1987, V 35, N Suppl, pp. 379-388.

71. Darwash A.O., Lamming G.E., Woolliams J.A. The potential for identifying heritable endocrine parametrs associated with fertility in postparum dairy cows.11 Anim.Sci., 1999, V 68, N 2, pp. 333-347.

72. Davidson J.A., Tieman N., Betts J.G., Hansen P.J., DNA synthesis and prostoglandin secretion by bovine endometrial cells as regulated by interleukin-l.|| Reprod.Fertil., Dev., 1995, V 7, pp. 1037-1043.

73. Davis W.C., Zuchermann F.A., Hamilton M.J. Analys of monoclonal antibodies that recognise y5 T-lymphocyte.|| Vet.Immunol., Immunopathol., 1998, V 60, pp. 305-316.

74. Davis W.A., Hamilton M.J. Compraison of unique characteristics of the immune system in different species of animals. || Vet.Immunol., Immunopathol., 1998, V 63, N 1-2, pp. 7-13.

75. Diehle M., Munz C., Kielholz W. Nonclassical HLA-G molecules are classical peptide presenters.|| N.Curr.Biol., 1996, V 6, pp. 305-312.

76. Dillon D.M., Comnigham C., Catto C.K. Characterization of humoral immune response during murine pregnancy.|| J.Reprod.Immunol., 1998, V 14, N 2, pp. 50-72.

77. Doetsham N.G., Katz M. In vitro development of blastocyst derived embrionic stem cell lines.|| J.Exp.Embryob.Exp.Morph., 1985, V 87, pp. 27-45.

78. Duclos A.J., Pomerantz D.A., Baines M.G. Relationship between decidual leukocyte infiltration and spontaneons abortion in murine model of early fetal resoiption.|| Cell.Immunol., 1994, V 159, N 2, pp. 184-193.

79. Dunne L.D., Diskin M.G., Boland M.P., O'Farrell K.J. Nutrition and embryo survival in cattle.|| Irish.J.Agri Food Res., 1997, V 36, N Suppl, abst. 95.

80. Dunne L.D., Diskin M.G., Sreenan J.M. The effect of reducing feed intake following insemination on embryo survival in cattle.|j Proc.Brit.Soc.Anim.Sci., 1999, p.3.

81. Ealy A.D., Drost, Hansen R.J. Developmental changes in embryonic resistence to adverse effects of maternal heat stress in cows.|| J.Dairy Sci., 1993, V 76, N 10, pp. 2899-2905.

82. Erskine R.J., Bartlett P.C., Tavernier S.R. Recombinant bovine interleukin-2 and dry cow therapy: effeacy to cure and prevont intramamary infections safety, and effect gestational J.Dairy Sci., 1998, V 81, N 2, pp. 403-411.

83. Faulk W.P., Hunt J.S. Human placental: from on immunological basis.|| AJRI, 1989, V 21, N3-4, pp. 108-113.

84. Fiers W., Begaert R., Boone E. TNF induced intracellular signaling leading to gene induction or cytotoxicity by necrosis or by apoptosis.|| J.Inflamm., 1996,1. V 47, pp. 67-75.

85. Forar A.L., Say J.M., Hancock D.D. The fregnency of endemic fetal loss in dairy cattle.y Theriogenology, 1995, V 43, N 6, pp. 989-1000.

86. Fowler V.J., Dalchan R., Fabre J.W. Membrane-bound and water-soluble nonclassical class I MHC antigens on rat placenta.|| Immunogenetics., 1990,1. V 31, N 3, pp. 152-160.

87. Fu Y.X., Vollemer M., Kalataradi K. Structural requirments for peptides that stimulate a subset ofyS T-cells.|| J.Immunol., 1994, V 152, pp. 1578-1592.

88. Gachlin G. The cell surface antigens of mouse embryonal carcinoma cells.|| Biochem.Biophys.Acta., 1978, V 516, pp. 27-60.

89. Gallagher D.S., Lewis B.C., Donato M.D. Antosomal trisomy 20 (61, xx, +20) in malformed bovine fetus.|| Vet.Pathol., 1999, V 36, N 5, pp. 448-451.

90. Gobin S.J.P., Wilson L., Keijsers V. Antigen processing and presentation by human trophoblast derived cell lines.|| J. Immunology, 1997, V 158, N 8, pp. 3587-3592.

91. Gogolin-Ewens K.J., Affure D., Lee C.S. Site-directed difference in immune response to the fetus.|| Immunol., 1989, V 66, pp. 312-317.

92. Gorczynski R.M., Chen Z., Ming X.F. Specificity for in vivo graft prolongation in y§ T-cell receptor hibrifoms derived from mice given portal vein donor-specific preimmunization and skin allografts.|| J.Immunol., 1997, V 159, pp. 3698-3706.

93. Gorivodsky M., Zemla K.I., Orenstein H. TNF-a messenger RNA and protein expression in the uteroplacental unit mice with pregnancy loss.|| J.Immunol., 1998, V 160, N 9, pp. 4280-4288.

94. Granea I.I., Androlewic M.J., Athwal R.S. Dependence of peptide binding by MHC class I moleculs on their interaction on with TAP.|| Science, 1995,1. V 270, pp. 105-106.

95. Gronx H.A., Carra M., Bigler A. A CD4 T-cell subset inhibits antigen-specific T-cell responses and prevents colitis.|| Nature, 1997, V 389, pp. 737-739.

96. Hack G., Wagner H. Proliferative and cytotytic responses of human y8 T-cell displan a distinct specifity pattern.|| Immunology, 1994, V 81, N4, pp. 564-568.

97. Hakuno N., Koji T., Yano T. Fas/APO-l/CD95 system as a mediator of granulosa cell apoptosis in ovarian follicule atresia.|| Endocrinology, 1996,1. V 137, N5, pp. 1938-1948.

98. Hanada H. Distribution of the robertsonian translocation and its effect fertility in cattle.|| Anim.Sci. and Thechnol., 1998, V 69, N 11, pp. 977-987.

99. Hansen P.J., Ealy A.D. Effect of heat stress on the establisment and maintenance of pregnancy in cattle.|| Revista Brasil.Reproduc.Anim., 1991, V3,pp. 108-119.

100. Hant J.S., Vassmer D., Fergunson T.S., Miller L. Fas ligand is positioned in mouse uterus and placenta to prevent trafficking of activated leukocytes between the mother and conceptus.|| J.Immunology, 1997, V 158, N 9, pp. 4122-4128.

101. Hedley M.L., Drake B.K., Head J.R., Tucker P.W. Differential expression of class I MHC genes in the embryo and placenta during midgestational development in the mouse.|| J.Immunol., 1989, V 142, N 11, pp. 4640-4653.

102. Hein W.R., Dudler L. TCR yd T-cells are prominent in normal bovine skin and express a diverse repertior of antigen receptor.|| Immunology, 1997, V 91, pp. 58-64.

103. Heyborne K., Fu Y.X., Nelson A. Recognation of trophoblasts by y8 T-cell.|| J.Immunology, 1994, V 153, pp. 2918-2926.

104. Hunt J.S. Functional aspects of the timor necrosis factor gene family in pregnancy.|| In Proc.l3th Rocheater Trophoblast Conf.; Publish Banf.Alberta, Canada, 1997, abst. 38.

105. Hunt J.S. Macrophage in human uteroplacental tissue; reviw.|| AJRI, 1989,1. V 3-4, pp. 119-122.

106. Hunt J.S., Robertson S.A. Uterine macrophage and enviromental programming for pregnancy success.|| J.Reprod.Immunol., 1996, V 32, pp. 1-25.

107. Juokuma H. Changes of peripheral blood lymphocyte subclasses of Japanes Black newborn calves.|| Anim.Sci.Technol., 1997, V 68, N 1, pp. 34-37.

108. Jaattela M. Overexpression of major heat shock protein hsp 70 inhibits mumor necrosis factor induced activation of phospholipase A2.|| J.Immunol., 1993, V 151, pp. 4286-4294.

109. Jacob F. Mouse teratocarcinoma and embryonic cells.|| Immunol.RCV, 1977, V 33, N l,pp/3-32.

110. Jones W.M., Waleckek B., Sulita Generation of new y8 T-cell specific monoclonal anti body (GD 35): biochemical comprisons of GD 35 antigen with the previously discribed workship cluster 1 (WC1) family.|| J.Immunol., 1996,1. V 156, pp. 3772-3779.

111. Kelley L.C., Mahaffey E.A., Bonnous D.I. Detection of equine and bovine T and B-lymphocytes in formalin fixed paraffin-anbedded tissues.|| Vet.Immunol., 1997, V 54, N 3-4, pp. 187-200.

112. Kindred B. Nude mice in immunology.|| Prog.Allergy, 1979, V 26, pp. 137-238.

113. King W.A. Embrio-mediated pregnancy failure in cattle.|| Canad.Vet.J., 1991, Y 32, N 2, pp.99-103.

114. Klima F., Tiemann N., Christian P. Serological detection of early pregnancy in cattle and partial characterisation of serum glicoprotein associated with early pregnancy.|| J.Reprod.Immunol., 1987, V 11, N 1, pp. 31-39.

115. Knitter M.R., Gulow K., Seelig A. MHC class I molecule compete in endoplasmic reticulum for access to transporter associated with antigen processing.|| J.Immunol., 1998, V 161, N 11, pp. 5967-5977.

116. Kronenberg M. Antigens recognized by a5 T-cell.|| Curr.Opinion.Immunol., 1994, V 6, N l,pp. 64-71.

117. Lamming G.E., Darwash A.O. The use of milk progesterone profils to characterise components of subfertility in milked dairy cows.|| Anim.Reprod.Sci., 1998, V 52, pp. 175-190.

118. Lander M.F., Hansen P.J., Drost M. Antisperm antibodies in cows after subentaneous and intrauterine immunisation.|| Vet.Rec., 1990, V 126, pp. 461-462.

119. Lee C.S., Gogolin-Ewens K.J., Brandon M.K. Identification of unique lymphocyte subpopulation in the sheep uterus.|| J.Immunol., 1988, V 63, pp. 155-164.

120. Lee N., Malacko A.R., Ishitani A. The membrane-bound and soluble forms HLA-G bing identical sets of endogenous peptide but differ with respect to TAP association.!! J.Immunol., 1995, V 3, pp. 541-549.

121. Licence S.T., Danis W.C., Carr M.M. The behaniour of monoclonal antibodies in Ferst International Pig CD Workshop reacting with y5 / null T-lymphocytes in the blood of SLAb/b line pig.|| Vet.Immunol., Immunopathol., 1995, V 47, pp/ 253-271.

122. Lin H., Mosmann T.R., Gnilbert L. Syntesis of T-helper 2 type cytokines at the maternal-fetal interface.|| J.Immunol., 1993, V 151, N 9, pp. 4562-4573.

123. Low B.G., Hansen P.J., Drost M. Expression of major histocompatibility complex antigens on bovine placenta.|| J.Reprod., Fertil., 1990, V 90, N 1, pp. 235-243.

124. Mathy N.L., Walker J., Lee R.P. Characterization of cytokine profiles and double-positive lymphocyte subpopulation in normal bovine lungs.|| Am.J.Vet.Res., 1997, V 58, N 9, pp. 969-979.

125. Matonser J., Kicha J. Anti-lencocyte antibodies and embryonic mortality in embryo transfered cows.|. Animal.Genetic., 1991, V 22, N 3, pp. 245-250.

126. Marno S., Oh-Hara M., Ahn H.J. B-cell regulate CD40 ligand-induced IL-12 production in antigen-presenting cell (APC) during T-cell/APC interaction. || J.Immunol., 1997, V 158, N 1, pp. 120-126.

127. Mattson R., Mattson A., Sulila P. Allogenic pregnancy in B-cell deprived CBA/Ca mice effect on fetal survival and maternal lymphoid organs.|| Dev.Comp.Immunol., 1985, V 9, pp. 709-717.

128. McMaster M.T., Librach C.L., Zhon Y. Human placental HLA-G expression is restricted to differential cytotrophoblasts.|| J.Immunol., 1995, V 152, N 8, pp. 3771-3778.

129. McMaster M.T., Newton R.C., Dey S.R. Activation and distribution of inflammatory cells in the mouse uterus during the preimplantation period. || J.Immunol., 1992, V 148, pp. 1669-1705.

130. McMaster M.T., Zhon Y., Simon S. HLA-G isoforms produced by placental cytotrophoblasts and found in amniotic fluid are due to imusual glycosylation.|| J.Immunol., 1998, V 160, N 12, pp. 5923-5927.

131. McDonald H.R., Wilson A. The role of T-cell receptor (TCR) in oc|3/y5 lineage commitment: clues from intracellular TCR staining.|| Immunol.,Rev., 1998, V 165, pp. 87-94.

132. Mclntyre J.A. In research of trophoblast-lymphocyte crossreactive (TLX) antigen.11 AJRI, 1988, V 17, pp. 100-110.

133. Mclntyre J.A., Conlam C.B., Fanlk W.P. Reccurent spontaneous abortion.|| AJRI, 1989, V 21, N3-4, pp. 100-104.

134. Meding J.H., Kruse P.E., Coenen G.J. Undersgelser over effeten af intrauterin sensibilisering pa frugtbarheden hos gylte.|| Forskin.St.Husbur., 1993, V 12, pp. 14-19.

135. Melusen E., Fox A., Brandon M. Activation of uterine intraepithelial yS TCR-positive lymphocytes during pregnancy.|| Enr.J.Immunol., 1993, V 23, pp. 1112-1115.

136. Mialon M.M., Renand G., Martal J. Perifetal concentration of 60 kDa pregnancy serum protein during gestation and after calving and relationship to embrionic mortality in cattle.|| Reprod.Nutrit.Develop., 1993, V 33, N 3, pp. 269-282.

137. Michael S., Taguchi O., Nishizuka Y. Hormonal characterization of fenal SG/Ni mice small thymus gland strain exhibiting ovarian dysgenesis.|| J.Reprod.Immunol., 1988, V 12, pp. 277-286.

138. Moley K.H. Hyperglycemia induced apoptosis in preiplantation embryos through cell death effector pathway.|| Nat.Med., 1998, V 12, N4, pp. 1421-1424.

139. Momelilov B., Oghyana R.J. Immunological invistigation of serum proteins in relation to normal and pathological pregnancy. || J.Immunol.,Immunopharmacol., 1992, V 12, N 2, p. 119.

140. Mueller U.W., Hawes C.S., Wright A.E. Isokation of fetal trophoblast cells from peripheral blood of pregnant women.|| Lancet, 1990, V 336, pp. 197-198.

141. Muzikova E., Clark D.A. In spontaneous resorption in the DBA/2 mated CBA/J mouse due to defect in "seed" or in "soil".|| AJRI, 1995, V 33, N 1, pp. 81-85.

142. Nandi D., Allison S.P. Phenotypic analysis and yô T-cell receptore of murine T-cell associated with vaginal epithelium.|| J.Immunol., 1991, V 147, N 6, pp. 1773-1778.

143. Newmann P. Unterzuchungen zu vorkommed und bedeutung lymphozytotoxicher anti-korper wahrend der reproduction beim weiblichen rind.11 Monatsh.Vet., 1991, V 46, N 13, ss. 474-477.

144. Nivano Y., Hansen T.R., Keremi M. Suppression of T-lymphocyte blastogenesis by ovine trophoblast protein-1 and human interferone-a may independent of interleukin-2 production.|| AJRI, 1989, V 20, N 1, pp. 21-26.

145. Nolan R., O'Callagham D., Duby R.T. The influence of shortterm nutrient chauges on follicle growth and embryo production following superovulation beef neifers.|| Theriogenology, 1998, V 50, pp. 1263-1274.

146. O'Callagham D., Boland M.P. Nutritional effect on ovulation embryo development and the establishment of pregnancy in ruminants.|| Anim.Sci., 1999, V 68, N2, pp. 299-314.

147. Oriss T.B., McCathy S.A., Campana M.A. Evidence of positive eroseregulation on Thl by Th2 and antigen-presenting cell: effect on Thl induced by IL-4 and IL-12.|| J.Immunol., 1999, V 164, N 4, pp. 1199-1207.

148. Ostrad-Rosenberg S. Cell mediated immune response to mouse embrionic cell.|| Top.Dev.Biol., 1980, V 14, pp. 147-168.

149. Ousenberg J.R., Brantbar C. In vitro suppression of murine blastocyst growth by sera from women with reproductive disorders.|| AJRI, 1986, V 11, N4, pp. 118-124.

150. Pamfer S., Wun Y.D., Herton D. Expression tumor necrosis factor-a receptor and selective effector of TNF-a on murine cell mass in mouse blastocysts.|| Endocrinology, 1994, V 134, pp. 134-206.

151. Parr M.B., PaiT E.L. Antigen recognarion in female reproductive tract.|| J.Reprod.Immunol., 1990, V 17, N 2, pp. 101-114.

152. Parr E.L., Parr M.B., Zheng S.M. Mouse granulated internal gland originate by local activation of murine natural killer lymphocytes.|| Biol.Reprod., 1991,1. V 44, N5, pp. 834-841.

153. Pate J.L. Cellular components involved in luteolisis.|| J.Anim.Sci., 1994,1. V 72, pp. 1884-1890.

154. Panla-Lopes F.F., Moraes A.A., Edwards J.L. Regulation of preimplantation development of bovine embryos by interleukin-lß.|| Biol.Reprod., 1998, V 59, N6, pp. 1406-1412.

155. Panla-Lopes F.F., Moraes A.A., Hansen P.J. Presense of interleukin-1 ß in the bovine reproductive tract.|| Biol.Reprod., 1998, V 58, N Suppl, p. 85.

156. Pell J.M., Aston R. Prenciples of immunomodulation.|| Liv Prod.Sei., 1995,1. V 42, N 2-3, pp/ 123-135.

157. Phue L.H. Thymic involution in pregnant mice.|| Exp.Immunol., 1981, V 44, N2, pp. 247-252.

158. Pierre B., Chaonat G., Stanislawski M., Kiger N. Immunogenetic studies of spontaneous abortion in mice.|| Antiabortive effects are independent of systemic regulatory mechanisms. Cell. Immunol., 1986, V 98, N2, pp. 477-485.

159. Piotrowski P., Crog B.A. Maternal cells are widely distributed in murine fetuses in utero.|| Biol.Reprod., 1996, V 54, pp. 1103-1119.

160. Pollard J.W., Bartocci A., Areci R., Orlofsky A. Apparent role of the macrophage growth factor CSF-1, in placental development.|| Nature, 1987, V 330, N6147, pp. 484-486.

161. Price J.O., Elias S., Wachtel S. Prenatal diagnosis with fetal cells isolated from maternal blood by multiparametr flow cytometry.|| Am.J.Obstet.Gynecol., 1994, V 165, pp. 1736-1742.

162. Pursley J.R., Silcox R.W., Wiltbank M.C. Effect of time of artification insemination on pregnancy loss and gender ratio after synchronization of ovulation in lactating dairy cows.|| J. of Dairy.sci., 1998, V 81, N8, pp. 2139-2145.

163. Qai G., Garcia-Lloret M., Wegman T.G. Cytotoxicity of tumor necrosis factor-alpha and gamma-interferon against primary human placental trophoblast.il Placenta, 1994, V 15, pp. 819-829.

164. Qeoh S.C., Sargent I.L., Redman W.Y. Detection of fetal cells in maternal blood.ll Prenat.Diagn., 1991, V 12, pp. 117-122.

165. Qian S. Demetris A.J., Murase N. Murine liver allograft transplantation: tolerance and donor cell chimerism.|| Hepatology, 1994, V 19, pp. 916-1017.

166. Quade M.J., Roth J.A. Dual-color flow cytometric analysis of phenotype activation marker expression and proliferation of mitogen-stimulate bovine lymphocyte subsets.|| Vet.Immunol., Immunopathol., 1999, V 67, N 1, pp. 33-45.

167. Rinsky R., Wegmann T.G., Singh B. Prevention of NK activated mediated abortion by vaccination with mutant or synthetic MHC immunodominant peptides.|| J.Immunol., Immunopathol., 1992, V 12, N 2, p. 108.

168. Roberts R.M. Conceptus interferons and maternal recognation of pregnancy.|| Biol.Reprod., 1989, V 40, pp. 449-452.

169. Robertson S.A., Wegmann T.G., Seamark R.F. Cytokine in gestation.|| Crit.Rev.Immunol., 1994, V 14, pp. 239-292.

170. Robinson J.J., Sinelair K.D., McEvoy T.G Nutritional effect on fetal growth.11 Anim.Sci., 1999, Y 68, N 2, pp. 315-331.

171. Roby K.F., Laham N., Kronning P.F. Expression and localization of messenger RNA for tumor necrosis factor receptor (TNF-R) I and TNF-RII in pregnant mouse uterus and placenta.|| Endocrin, 1995, Y 3, pp. 557-569.

172. Rogers A.M. Maternal-fetal tolerance is maintained dispite transgene-driven trophoblast expression of MHC class I and defect Fas and its ligand.|| Enr.J.Immunol., 1998, V 28, N 11, pp. 3479-3484.

173. Rogge L., D'Ambrosio D., Manro B. The role of stat 4 in species-specific regulation of Th cell development by type I JFNS.|| J.Immunol., 1998, V 161, N 12, pp. 6566-6574.

174. Sato S., Kanzaki H., Yoshida M. Studies of T-lineage cell in human decidua of first trimestre pregnancy.|| AJRI, 1990, V 24, N 3, pp. 67-72.

175. Schuize-Ostoff K., Ferrari D., Los M. Apoptosis signaling by death receptor.11 Enr.J.Biochem., 1998, V 254, pp. 439-459.

176. Semba R.D. Yitamin A, immunity, and infection.|| Clin.Infec.Disease, 1994, V 19, N 3, pp. 489-499.

177. Sheldon M. Bovine fertility practical implication of maternal recognation of pregnancy.|| Pract., 1997, V 19, N 10, pp. 546-556.

178. Shild H., Mavaddat N., Ehrich E.W. The nature of major histocompatibility complex recognation by y8 TO cell.|| Cell, 1999, V 76, pp. 29-38.

179. Shimizu K., Goto T., Takahashi J. Detection of early pregnancy factor in cattle and its clinical application.|| J.Jap.Vet.Med., 1990, V 43, N 5, pp. 325-329.

180. Shmid D.O. Lymphocytotoxic antibodies infetale breeding.|| Zent.Vet., 1988, V25B,N6, pp. 516-523.

181. Simon C. Cytocines and embrio implantation.|| J.Reprod.Immunol., 1998, V 39, N 1-2, pp. 117-131.

182. Simon S., Frances A., Piquette C.N. Embrionic implantation in mice is bloked by interleukin-1 receptor antagonist.| Endocrinologia, 1994, V 134, N2, pp. 521-528.

183. Simons C., Tsafriri A., Chun S.Y. Interleukin-1 receptor antagonist suppreses human chorionic gonadotropin induced ovulation in rat.|| Biol.Reprod., 1994, V 51, pp. 662-667.

184. Sreenan J.M., Diskin M.G., Dunne L. Embryo mortality the major couse of reproductive wastage in cattle.|| Stocarstovo, 1997, V 51, N 2, pp. 93-112.

185. Stanger S., Hanson D.A., Titelban R. An antimicrobial activity of cytolitic TOcell mediated by granulysin.|| Science, 1998, V 282, N 5386, pp. 121-125.

186. Stephen M.H., Sharp L.L. T-cell fate. || Immubol. Rev., 1998, V 165, pp. 95-110.

187. Stern P.L., Beresford N., Friedman C.I. Class 1-like MHC molecules expressed by baboon placental syncytiotrophoblast.|| J.Immunol., 1987, V 138, pp. 1088-1091.

188. Stroynowski I., Forman J. Novel molecules related to MHC antigens.|| Curr.Opin.Immunol., 1995, V 7, pp. 97-106.

189. Suberbielle C., Gaillat-Zucman S., Legendre C. Peripheral microchimerism in long-term cadaveric-kidney allograft recipients.|| Lancet, 1994, V 343, pp. 1468-1469.

190. Sun Y., Chen Z., Chung S.W., Zeng H., Gorezynski R.M. TCR diversity in yS TCR hybridomas derived from mice given portal vein donor specific pre-immunization and skin allografts.|| Mol.Med., 1997, V 3, pp. 156-172.

191. Suzuki T., Hiromatsu K., Ando Y. Regulatory rule of y§T-cell in uterine intraepithelial lymphocytes in maternal immune response.|| J.Immunology, 1995, V 154, N 9, pp. 4476-7784.

192. Taams L.S., Eden W., Wanben H.M. Dose-dependent induction of distinct anergic phenotypes: multiple levels of T-cell anergy.|| J.Immunology, 1999,1. V 162, N4, pp. 1975-1981.

193. Taguchi O., Nishizuka Y., Sakakara T. Interaction of the thymus and ovary.|| In Factors Regulating ovarian function.(eds. Greenwald G.S., Terranova) New York: Raven Press, 1993, pp. 445-464.

194. Tangri S., Wegmann T.G., Lin H. Maternal anti-placental reactivity in natural immunologiccaly-mediated fetal resorptions.|| J.Immunology, 1994,1. V 152, pp. 4903-4911.

195. Taylor C., Faulk W.P. Prevention of recurrent abortion with leukocyte transfusion.11 Lancet, 1981, V 2, pp. 68-70.

196. Templeton J.W., Tipton R.C., Garber T. Expression and genetic segregation of parental Bola serotypes in bovine embryos.|| Anim.Genetics., 1987, V 18, pp. 317-322.

197. Thatcher W.W., MacMillian K.L., Hansen P.J. Embryonic losses: cause and prevention.|j In.Factors affecting calf crop.(eds. Filds M.J., Sand R.S.) USA, CRC Press, 1994, pp. 135-153.

198. Toder V., Savion S., Gorivodsky J. Teratogen-indused apoptosis may be affected by immunopotentiation.|| J.Reprod.Immunol., 1996, V 30, pp. 173-192.

199. Toder V., Strassburger D., Irlin Y. Nonspecific immunopotentiators and pregnancy loss: complete Freund adjuvant reverses high fetal resorption rate in CBAxDBA/2 mouse combination.|| AJRI, 1990, V 24, N 3, pp. 63-64.

200. Torchinsky A., Toder V., Savion S. Immunostimulation increases the resistance of mouse embryos to the teratogenic effect of diabetes melbitus.|| Diabetologia, 1997, V 40, pp. 635-651.

201. Vandenabeele P., Daclereq W., Beyaert R. Two tumor necrosis factor receptor: structure and function.|| Trend.Cell.Biol., 1995, V 5, pp. 392-399.

202. Vandenabeele P., Daclereq W., Vanhaesebroeck B. Both TNF receptors are required for TNF-a -mediated induction of apoptosis in PC 60 cells.|| J.Immunol., 1995, V 154, pp. 2904-2913.

203. Van der Hock K.H., Wodhouse C.M., Brannstrom M. Effect of interleukin-b, lutenizing hormone and IL-lf3 induced ovulation and steroidogenesis in the rat ovary.|| Biol.Reprod., 1998, V 58, N 5, pp. 1266-1271.

204. Van Rensen A.J., Pollen M.C., Van Els C.A. Anergic T-cell activation suppressor T-cell responses via the antigen presenting cell.|| Enr. J.Immunol., 1998, V 28, pp. 2902-2905.

205. Veropotvelyan P.N., Veropotvelyan N.P., Zavgorodnaya L.I. The role of the use of levamysol for correction of immunological disorders in case of spontaneous abortion.|| J.Reprod.Immunol., 1989, V Suppl, p. 168.

206. Wachtel S., Elias S., Price J. Fetal cells in the maternal circulation isolation by multiparametrs flaw cytometry and confirmation by polymerase chain reaction.11 Hum.Reprod., 1991, V 6, pp. 1466-1475.

207. Wegmann T.G. The cytokine for cross-talk between the maternal immune and reproduction systems.|| Curr.Opinion.Immunol., 1990, V 2, N 5, pp. 765-769.

208. Wegmann T.G. Maternal T-cell promote placental growth and prevent spontaneous abortion.|| Immunol.Lett., 1988, V 17, N 4, pp. 297-302.

209. Wrenzychi C., De'Sousa P., Herrmann D. Effect of diet type and quantity feed during superovulation on the relative.|| Theriogrnology, 1999, V51, N Suppl, abst. 195.122

210. Wyatt C.R., Brackett E.J., Perrymann L.E. Identification of y8 T-lympho-cytes subsets that populate calf ileal mucose after birt.|| Vet.Immunol., Immunopathol., 1996, V 62, pp. 91-103.

211. Wyatt C.R., Madruga C., Cluff C. Differential distribution of y5 T-cell receptor lympocyte subpopulation in blood and spleen of young and adult cattle.11 Vet. Immunol., Immunopathol., 1994, V 40, N 3, pp. 187-199.

212. Xu Z.Z., Burton L.J. Effect of oestrus synchronisation and fixed-time artifical insemination on the reproductive performance of dairy heifers.|| New Zel.Vet.J., 1999, V 47, N 3, pp. 101-104.

213. Yamashita T. Analysis of human antigen-G polimorphism including intron 4 in Sapanes couple with habitnal abortion.|| AJRI, V 41, N 2, pp. 159-163.

214. Young T.J. Identification of bovine T and B-lymphocyte subpopulations by immunofluorescense surface.|| Amer.J.Vet.Res., 1981, V 42, N 5, pp. 755-757.

215. Zhang L., Miller R.G. The correletion of prolonged survival of maternal skin graft with naturally transferred maternal T-cell.|| Transplantation, 1993, V 56, pp. 918-929.

216. Zugril m., Fein A. Immunopotentiation reverses the embryotoxic effect of serum from female with pregnancy loss.|| J.Reprod.Immunol., 1989, V Suppl, p. 179.