Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Иммунотрофическая функция в регуляции нормального эмбриогенеза у крупного рогатого скота
ВАК РФ 03.00.13, Физиология
Автореферат диссертации по теме "Иммунотрофическая функция в регуляции нормального эмбриогенеза у крупного рогатого скота"
Ца правах рукописи
БОГДАНОВА Наталья Владимировна
РГ 5 ОД
Иммунотрофическая функция в регуляции нормального эмбриогенеза у крупного рогатого скога
Сиецииавость 03.00.13 - Фвзиология человека и животных
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
п. Дубров«цы, Московской области 2000 г.
Д.йБсгри1С>к1ш;и-1 ¡i,¡6oTf, винолпекг. na кафедре плекгштою дгяа, óKoicxi.ojurins и 6 сило ; ч и псспроиэведскнк с.-х. шгбоподх Россввсгэь мгодсчев ?.:гя5дх:ирнта в жг.вятаводсюг.
Нчучиьш руюподиг «.: доктор бпологичсских ниук В.!1. Рздчеиков.
Офкцчальнме оппоке£-:;н: - Заслуженный деятель к&укя ffertÉctañ Фгдерпции, диктор оиоложчггквх в сук, профессор Ю.Д. Клпнсг.БЙ -.чакДКДВТ (.»иолоюческвх Езук ГлЛ. Черных
1члу:лйя орминзшия - Ьс?ро"скйсквй паучио-
В С Г Г, » К ;ttl ель С К.Н Й К П CT И f у I
aatttotrm дела (ВШШолпг)
Зсщнга сосюпш: ^'júlcXÁCJ/s-i....' » M чего», «s жтиьм Явссершишнншо соя m -Д 020.16.02 ь,. Всероссийской тучкз-нсследовакльскоц вне ¡«vre жякотпонокства
Адрес кистнтуто: Î42132 Московская обл., Пололок®рейсе,
roc. Дубров «вы.
С диссертацией иожно ознакомии-ся в библиотеке1 ВВЖ«. _ Авторгферт разослан
Ученый секретарь дйссертацнонног каадвдиг биологических navK
Г/кУ z п, С
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.
АКТУАЛЬНОСТЬТЕМЫ. В нарушении воспроизводительной функции у крупного рогатого скоте, по-прежнему, ведущее место занимают эмбриональные потери. По многочисленным данным как отечественных, так я зарубежных исследователей, у крупного рогатого скота оплодотворяекость составляет 90-95 %, тогда как до рождения доживают лишь 50-55 % зародышей (Милованов В.К., 1982;Laming O.E. et al., 1998:Darwash А.О. et. al., 1999; Хн Z.Z. et.al., 1999).
Несмотря на длительный период изучеипя причин эмбриональных потерь, до сих пор не разработаны эффективные и практически приемлемые методы их предотвращения.
Значительные успехи в изучении эндокрннпых факторов в нормальном и нарушенном эмбриональном развития били достигнуты отечественными учеными А.Л. Падучевой, Ю.Д. Клинскин, М.И. Прокофьевым.
В начале 70-х годов началось интенсивное изучение роли иммунных факторов в нормальном и нарушенном пренатальноа развитии. Крупный вклад в выявления изменений иммунного статуса у крупного рогатого скота во время стельности были сделаны отечественными учеными И.И. Соколовской, Н.М. Решетниковой я A.B. Бролской.
К концу 80-х годов было установлено, что у самок с гемоэндотелиальным типом плаценты угнетение иммунной системы вызывает снижение эмбриональной выживаемости, которое предотвращается иммунизацией таких самок лейкоцитами посторонних доноров или обработкой нмнуномодуляторами. Это обнаружение необходимости рпспозневаиня иммунной системой самки «чужеродных» антигепов зародыша послужило основой формирования новой теории - иммупотрофической. пришедшей на смену иммуносупресснвпой.
В то же время, хотя ичмупизация самок с первичными или вторичными яммунодефицитами предупреждает снижение эмбриональной выживаемости, длительное время не> была известна конкретная популяция материнских лимфоцитов, участвующих в распознавания «чужеродных» антигенов зародыша и формировании нммунотрофнческой функция в нормальной эмбриогенезе. Недавно было показано, что у самок с гемоэндотелиальным типом плаценты эту функцию осуществляют не aß+, а у&* Т-лнмфоцнты Ileybome К. et. al., 1994).
У крупного рогатого скрта, имеющего синдесмохориальный тип плаценты, как и у других видов млекопитающих, во время стельности (особенно в период плацентации) происходит изменение клеточных и гуморальных иммунных реакций. Следовательно, вполне вероятно, что у крупного рогатого скота, как и у самок, с гемоэндотелнальной плацентой, существует иммунотрофическое взаимодействие в системе «самка-зародыш*». Изучение этою возможною иммунотрофического взаимодействия во время
стельности у коров, с одной стороны, углубляет познание физиологических процессов, обеспечивающих течение нормальной стельности, с другой -открывает перспективы разработки методов повышения оренатальвой выживаемости.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЙ - Определить возможность существования у крупного рогатого скота иммунотрофического взаимодействия в системе «самка-зародыш», а также выяснить возможность иовышения эмбриональной выживаемости посредством коррекции этого физиологического процесса.
Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:
1. Определить влияние на эмбриональную выживаемость дополнительной сенсибилизации коров антигенами сиермиев в субоптимальпой Дозе.
2. Выяснить оптимальное и практически приемлемое время иммунизации коров спермнями быков с целью повышения эмбриональной выживаемости.
3. Установить величину эмбриональных потерь, обусловленных нарушением иммунных взаимоотношений в системе «самка-зародыш».
4. Изучить численность Е-РОК р периферической крови у коров, 'иммунизированных и ненммуннзированных епермичми быков-производителей.
5. Определить уровень антиспермальных антител у коров, дополнительно сенсибилизированных и несенсибнлизированных антигенами спермиев.
6. Определить величину эмбриональной выживаемости у коров, иммунизированных спермиянн быков-производителей при закладке нескольких стельности подряд.
НОВИЗНА ПОЛОЖЕНИЙ ДИССЕРТАЦИИ, Впервые установлено, что иммунизация коров субоптимальной дозой сиермиев быков повышает эмбриональную выживаемость; несмотря на то, что иммунизация действует как стрессовый фактор, дополнительная сенсибилизация коров антигенами спермиев в первые сутки после осеменения, так же как и во вторые, проявляет эмбраопротехтивный эффект; иммунизация спермиями коров после осеменения независимо от числа (первая, вторая или третья) охот в течении одного сервис-периода повышает преиатальную выживаемость; дополнительная сенсибилизация коров антигенами спермиев в течении закладки нескольких стельностей подряд пе только не снижает эмбриональную выживаемость, но даже значительно ее повышает; у коров, осемененных несколько раз безрезультатно в течении одного полового цикла, по сравнению с коровами осемененными в одну охоту, уровеиь антиспермальных антител выше. Иммунизация таких коров спермнямн быков-производителей в оптимальной дозе увеличивает этот показатель тогда как аналогичная обработка в субоптнмальной дозе не влияет на уровень антиспермальных антител. Вт» же время данное увеличение 1итра антиспермальных антител не оказывает отрицательного влияния на
эмбриональную выживаемость; уровень антиспермальных антител у коров, дополнительно сенсибилизированных антигенами спермнев быков, при закладке предыдущих стельностей увеличивается значительно интенсивнее, нежели у животных, обработанных аналогичными аитигенаии один-раз. В то же время это более интенсивное повышепие тятра антиспермальных ангител не оказывает эмбриодеструктивного действия; у коров уже на ранних этапах стельности происходит изменение клеточного иммунитета, проявляющееся в увеличении численности Е-РОК (СБ2+) в периферической крова. Иммунизация коров спермиями быков а оптимальной дозе повышает количество этих лимфоцитов, а в субоптимальяой практически не влияет на данный показатель; степень совпадения реакции ЭСЭ у коров, дополнительно сенсибилизированных антигенами спермнев быков, выше по сравнению с необработанными животными, что связано с увеличением препатальной выживаемости у коров, иммунизированных спермиями быков-производителей.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Разработан новый подход к изучению методов повышения эмбриональной выживаемости у коров с нарушением нммунотрофической функции в пренатальном развитии. Эгот подход основывается на возможности профилактики эмбриональных потерь посредством иммунизации коров в первые сутки после осеменения антигенами спермнев, имеющих общие детерминанты с антигенами звродышей. Данная разработка может быть использована как для совершенствования предложенного метода иммунопрофилактики эмбриональных потерь посредством дополнительной сенсибилизации коров антигенами сперииев быков, так и для разработки новых методов повышения препатальной выживаемости.
АПРОБАЦИЯ. Основные результаты работы были доложены на научно-практической конференции «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения» (1-3 июня 1993 г., п. Быково); яа научно-практической конференции «Повышепие хоикурентоспособвости животноводства и задачи кадрового обеспечения» (3-4 июня 1999 г., п. Быково); на яаучной конференция отдела биологии воспроизведения ВИЖа «50 лег Открытия возможности замораживания п получения потомства от замороженного семени» (23-24 октября 1997 г., п. Быково).
• ПУБЛИКАЦИИ. Материалы диссертации опубликованы в 3 статьях.
ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация изложена на 108 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материала в методик исследований, резулыатов, обсуждения результатов я выводов, содержит 13 таблиц, 8 графиков. Список литературы . включает 167 источников, в том числе 140 иностранных.
2. МАТЕРИАЛ Н МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ.
Лабораторные исследования были проведены в Российской академии неиеджмент&в животноводстве* НИИ эпидимиологии и микробиологии имени почетного академика И.Ф. Гамалеи РАМН.
Научно-производственные исследования были проведены в совхозе «Повадинский» Домодедовского района, Московской области. Всего в экспериментах было задействовано 419 коров черно-пестрой породы, опытные и контрольные группы были подобраны по принципу аналогов (схема 1).
Суспензию спермиев быков-производителей для иммунизации коров готовили по способу предложенному Радченковыи В.П. и Стояновын В.К., 1995. Для получения антигена был взят эякулят от 4-х быков-производителей (принадлежащих ЦСИО сельскохозяйственных животных). Концентрация сперматозоидов была подсчитана традиционным методом с использованием камеры Горяева. После подсчета концентрации спермиев суспензия была разбавлена (физ. раствором NaCI) до конечной концентрации 0,5-1,0x10', 2x107, 2x10 спермиев на мл. В полученную суспензию был добавлен мертиолат натрия из расчета 0,01%.
Стерильность суспензии была определена традиционным методом, посредством высева на МПА, МПБ.
Приготовленной суспензией спермиев быков-производителей иммунизировали виутрикожно (в несколько точек) коров опытных групп в первые или вторые сутки после осеменения в дозах 0,5-1,0x10', 2x10 , 2х107 клеток. Животных контрольных трупп также внутрикожно (в/к) обрабатывали . плацебо, в качестве которого использовали физиологический раствор хлорида натрия, содержащий 0,01% мертиолата натрия.
Определение численности Е-РОК в периферической крови крупного рогатого скоТа проводили по методу Соколовской И.И. и др., 1984.
Уровень антиспермальных антител в периферической хровн коров контрольных и опытных групп осуществляли по методу Herr C.J. et. al., 1986 в модификации M.F, Lander, P.J. Hansen, NL Drost., 1990. Для этого, до постановки реакции 96 луночные планшеты обрабатывали спермиями быка-производителя, используемого для осеменения в данном хозяйстве. Эякулят быка, после его получения, был три раза отмыт в ЗФР с рН-7,2. После подсчета концентрации спермиев полученная суспензия была доведена до конечной концентрации ЗФР содержащим PMSF (антипротеаза) с рН-7,2. По 100 мкл полученной суспензии было внесено в каждую лунку планшета. Планшеты были поставлены в термостат на 24 часа при 37°. После в инкубации • в термостате планшеты были обработаны стабилизирующим раствором, содержащим 10% сахарозы и 4 ПВП (поливинилпиролидона) в дионизированвой воде. Приготовленные планшеты хранились при 4 до использования.
СХЕМА ЭКСПЕРИМЕНТА.
Контроль ПЛАЦЕБО.
Определение уровня кнтиспермальных антител
Повторная обработке
коров после отела и осеменения
[Определение уровня антиспермальных антител
Третья обработка коров после отела и осеменения
Определение уровня антиспернальшх ашякд
Обработка коров Нпосле осеменения (па 2 сутки)
Повторная обработке коров после отела и осеменения_
Третьи обработка -{коров после отела в осеменения
Определение результативности осеменения по повторным приходам _коров в охоту и данным ректальных исследований_
Реакцию ЭСЭ ставили по методу Соколовской И.И. и Милованоза В.К., 1981. В качестве антигена использовали ткани 25-30 суточных эмбрионов крупного рогатого ско1в.
Эмбриональные потери определяли косвенным методом по повторению течки с запозданием (перегулам).
Статистическая обработка данных проводилась по общепринятым методикам. .
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. Результативность осеменения и состояние клеточных и гуморальных иммунных реакций у корез, дополнительно сенсибилизированных антигенами спермкеа быков-производителей.
3.1.1. Влияние на результативность осеменения дополнительной сенсибилизации коров антигенами спермиев.
• Ранее (Радченковым В.П., Стояновым В.К., 1995) было показано, что дополнительная сенсибилизация коров антигенами спермиев (в доле 0,5-1x10® спермиев на одну внутрикожную иммунизацию) повышает результативность осеменения на 20-25%. В то же время известно, что использующаяся при искусственном осемененин коров глубоко замороженным семенем доза спермиев составляет от 4-5х107до 2,5x10^ (в зависимости от числа спермиев с прямолинейно-поступательным движением), которая оплодотворяет практически все яйцеклетки и также стимулирует специфическую сенсибилизацию иммунной системы коров к антигенным детерминантам,' общим для спермиев и зародышей. В связи с этим, на первом этапе экспериментальных исследований была изучена возможность снижения дозы спермиев, использующейся для дополнительной сенсибилизации коров. Для этих целей коров на вторые сутки после осеменения дополнительно сенсибилизировали различными дозами спермиев быков-производителей.
Результаты эксперимента представлены в таблице 1.
Как видно из данных, предстанленных в таблице 1, по сравнению с контролем, дополнительная сенсибилизация коров антигенами спермиев повысила результативность от первичного осеменения, снизила индекс осеменения и время от обработки до плодотворного осеменения (при статистически достоверной разнице с контролем, по всем исследованным показателям). Это увеличение результативности осеменения в опытных группах, по сравнению с контрольной, не было вызвано разницей в оплодотворяемости или выживаемости зародышей ва самых ранних этапах лренатального развития, так как иосле обработки число животных, пришедших в охоту в течении первого полового цикла во всех группах было практически одинаково.
Таблица 1
Результативность осеменения коров, иммунизированных различными _____лозами спермиев быков-протводителеЗ.__
Обработка сперння-ып в дозе Осеменеио короа Индгкс осеменения Время спг обработки п до плодотворного осеменения (р. .сутках)
всего стало стельными от первичного осеменения повторили охоту в 1-й половой цикл, %. повторили течку с запозданием, %.
0,5-1x10* 2x107 2x10' 24 22 25 66,6±9,6' 6Э,6±10,2 68,0*9,3 12,5±6,7 9,1±б,1 8,0±5,4 20,8*8,3"' 27,3±9,5' 24,0*8.5" 1,41*0,18"* 1,4510,14' 1,44*0,15' 17,3*6,9"* 19,8*6,7" 18,8*6,?'
плацебо (фнз. р-р.) 28 35,7±9,0 7,1±4,9 57,1±9,2. 2,0710,20 50,9*9,9
хх- обработка (иммунизация, либо мньекция плацебо); х-Р<0,05; хх)-Р<0,01 -
Повышение результативности осеменения в группах коров, иимуиизмроваыых спермиями, по сравнению с контрольными животными было обусловлено снижением (на статистически достоверную величину по сравнению с контролем) числа коров в опытных группах, повторивших течку с запозданием.
В связи с тем,чтв у осемененных самок повторение течки с запозданием, как правило, свидетельствует о препатальных потерях, из результатов, представленных в таблице 1, можно сделать вывод, что в данном »йсяеримевте увеличение результативности осеменения у коров, иммунизировании* спермиямн быков-производителей, произошло > результате снижения пренатальных потерь.
Данные, представленные в таблице 1, твкже показала, что дозы спермиев (0,5-1,0x10*; 2хТ06), использовавший;« для дополнительной сенсибилизации, обладали практически одинаковым эмбраопротектнвным эффектом (разница между группами статистически недостоверна). Исходя *з этих результатов в дальнейшей работе для иммунизации коров, использовали дозу 2x10е спермиея на одну обработку.
5.1.2. Гуморальные и клеточные иммунные реакции у коров, дополнительно сенсибилизированных спермиями быков-производителей.
Известно, чго сенсибилизация коров к антигенам спермиев как прэ экспериментально» иммунизации, так и при искусственном или при естественном осеменении, сопровождается изменением в организме гуморальных и клеточных иммунных реакций. В связи с этим в следующей эксперименте нами было изучено изменение иммунных реакций у коров, иммунизированных и неиммуиизированных антигенами спермиев.
Результаты исследо1аний уровня антител у коров с дополнительной сенсибилизацией антигенами спермиев и без нее показаны в таблице 2.
Как видно из данных, представленных в таблице 2, при разведении сыворотки крови в диапазоне от 1: 30 до 1:120 уровень ангиспермапьных антител на 10-е сутки после осеменения, по сравнению со вторыми сутками аналогичного периода, во всех трех группах повысился на статистически достоверную величину (р<0,05; р<0,01). Резкое повышение уровня антиспермальиых антител во всех трех группах животных, по-видимому, обусловлено тем, что у исследуемых животных иммунный ответ к антигенам спермиев происходит по вторичному типу, так как все животные, использованные в опыте, имели ранее одну или две стельности. Известно, что уже во время первой стельности и особенно после родов происходит сенсибилизация организма самок к антигенам эмбрионов, имеющих общие детерминанты с антигенами спермиев.
Из данных, представленных н таблице 2, также видно, что повышение уровня антиспермальиых антител при разведении сыворотки в диапазоне от 1:30 до 1:90 произошло у коров, иммунизированных спермиями быков-производителей в дозе 0,5-1x10* по сравнению с контрольными (стельными, неиммунизированными), разница между группами статистически достоверна (р<0,05).
Иммунизация коров спермиями в дозе 2x10® практически пе повлияла на уровень антител, индуцированный эндогенной сенсибилизацией животных к антигенам спермиев (разница статистически недостоверна), в то же время согласно данным, представленным ч таблице 1, дополнительная сенсибилизация животных спермиями в дозе 2x106, также как-и в дозе 0,5-1x10*, повысила результативность ог первичного осеменения па статистически достоверную величину.
По-видимому, данная разница между эмбриопротективным действием и стимуляцией специфического антителогенеза спермиями в дозе 2x104 (по сравнению с дозой 0,5-1x10') обусловлена тем, что не антиспермальные антитела осуществляют ведущую роль в становлении иммунотрофического ' взаимодействия в системе «самка-зародыш».
Таблица2
Динамика уровня ангаспершльных антител у хоров, неиммунизированных шш иммунизированных различными дозами спермиев быков-прогаводитедей
Иммунизация сперздшмх а дсае Супавшш кровяпо отношению ко времени осеисксния Оптическая плотность при степени разбавления сыворотки кровк в соотношении
1:30 1:60 1:90 ■ 1:120 1:240
0,5-1,0x10' до шлгухнлдии 10 2 1,507±0,1бЗ*' 0,76110,094 ^ЭЗЮ,^*5 0,54310,082 0,971±0,124'> 0,37110,042 0,57510,079* 0,32910,042 0,39110,083 0,27110,035
2x10® до нымутппжшм 10 2 1,08710,104' 0,712Ю,09 0,81210,102* 0,513±0,047 0,52710,073* 0,35510,048 0,43610,044' 030410,031 0,34410,057 0.25310,037
исякмундаиров. -А 10 2 1,07210,093* 0,74310,08 0,814Ю,091* 0,51210,062 0,50310,041* 0.362Ю.037 0,41710,058' 0,25710,031 0,31210,047 0,22510,038
ху Р<0,01; я- Р<0,05
Ранее Соколовской И.И. в др. был разработан метод раннего определения стельности в реакции ЭСЭ. Метод осаован на определении наличия в сыворотке крови внтиэмбриональвых антител. В отличии от иымунофермеитного анализа, данный метод имеет меньшую разрешающую способность в определении уровня антител, но в то же время он позволяет достаточно объективно определить пороговый уровень аптнэмбриональных антител, совпадающий с течением плацентации и дальнейшим нормальным пренатальным развитием. По данным этих авторов степень совпадения результатов, полученных методом ЭСЭ, с данными ректальных исследований при постановке реакции на 15-18. либо на 31-45 сутки после-осеменения, соответственно совпадает на 75-100%.
В связи с этим, в следующем эксперимент; нами было изучено влияние дополнительной сенсибилизации коров различными дозами сперииев на показания реакции ЭСЭ. Кровь для исследования брали у животных на 17-18 сутки после осеменения..Результаты эксперимента представлены в таблице 3.
Таблица 3
Реакция ЭСЭ у коров неиимунизированных или иммувизированных различными дозами спермкев быков-производителей.■ _
Имиувиза- Всего Коровы, Стельность Повторили Совпадение
цпя коров живот- имевшие подтвержденная течку с данных ЭСЭ с
сперишшн ных. положитель- ректально запозданием данными
в дозе. ную реакцию ЭСЭ. ректальных исследований.
• ЧИС- % чис- % чис- %
ЛО ло . ло
0,5x10' 24 18 75,018,8 16 66,619.6 5 20,818,3 75,018,8
2x10' 25 20 80,0±8,0 17 68,0±У,3 6 24,018,5 80,018,0
веаммуныз. 28 18 64,3±8,8 10 35,719,0 16 57,119,2 64,318,8
Как видно из данных, представленных в таблице 3, степень совпадения результатов реакции ЭСЭ с данными ректальных исследований у иммунизированных коров по сравиепию с веиммунизированнымн была выше.
Известно, что повышение степени совпадения метода ЭСЭ с данными ректальных исследований связано со снижением эмбриональных потерь, следовательно, из результатов эксперимента, представленных в таблице. 3, можно сделать вывод о том, что повышение результативности осеменения у животных, иммунизированных спермиями быков-производителей, по .сравнению с неиммунизироваиными, обусловлена повышением эмбриональной выживаемости.
Известно, что нормальная и нарушенная. стельность сопровождается изменением не только туморальных, но и клеточных иммунных реакций. В частности, в начале 80-х годов было установлено, что у крупного рогатого
скота, в отличив от других видов млекопитающих, в период плацентацяи увеличивается численность Е-РОК в периферической крови. Известно, что Е-РОК соответствует CD2 антиген. У крупного рогатого скота (в отличии от . других видов млекопитающих) субпопуляции Т-лимфоцитов в периферической крови представлены \УСГС02'у5+ - 30-75 % (и зависимости от возраста), WCrCD2*y8+ - 3-5 %, aß - 0 -25 %, причем среди последней лишь небольшое число экспрессирует CD2. D то же время у этого вида животных, как и у других видов млекопитающих, основная масса CD2tyS< Т-клеток сосредоточена в селезенке - 40 %, от общего числа лимфоцитов (Davis W.C. et al.,1998). Известно, что увеличение числа E-JOK в периферической крови крупного рогатого скота может быть вызвано миграцией этих лимфоцитов из селезенки в периферическую кровь (Xu Z.Z. et. al., 1999).
В связи с этим в следующем эксперименте нами была изучена численность Е-РОК в периферической крови коров, неиммунизированных или иммунизированных антигенами спермиев быков-производителей.
Известно, что у млекопитающих во время беременности CD2*y5 Т-клетки мшрируют из селезенки в ткани матхи, преимущественно в плаценту, причем в селезенке их относительное количество (по отношению ко всем спленоцитам) снижается вдвое, соответственно в тканях матки н плаценты их относительная величава (ко всем лимфоцитам) возрастает вдвое, а абсолютная в 80 раз. В тканях плаценты эти клетки синтезируют цигокины (ИЛ-10, ТФР-j, ИЛ-1, ИЛ-3, ГМ-КСФ, КС'Ф), которые способствуют росту н развитию зародыша (Heyborne K.D. et al., 1994). Ранее было показано, что число Е-РОК в периферической крови крупного рогатого скога определяется главным образом количеством С02+у8Т-клеток.
Результаты эксперимента представлены в таблице 4.
Таблица 4
Численность Е-РОК в периферической крови коров, иммунизированных
ил и неиммунизированных спермиянн быков-производителей.
Сутки взятия Иммунизация Исследовано Всего подсчитано лимфоцитов
крови по спермиянн в проб кроян
отношению дозе
ко времени 1
осеменеин*
число из них Е-РОК ■ среднем на одно животное
16-18 0,5-1,0 х 10* И 11000 25,0*4,5"
2 16-18 2 - 16-18 0 • 2 х 10* контроль -/- 11 11 И 11 11 11000 11000 11 ООО 11000 11000 10,8*3,6 18,7*3,0" 7,7*1,6 15,7*2,5" 5,8±1,0"
х-Р<0,05
Таким образом из результатов, представленных в таблице 4, можно сделать вывод о том, что у коров в начальный период формирования плаценты, увеличение числя Е-РОК в периферической крови связано с увеличением в ней С02*уо Т-лиыфоцитов, мигрирующих из селезенки к месту плацентации. Дополнительная сенсибилизация коров антигенами сперкиев, увеличивает эту миграцию.
3.1.3. Результативность осеменения у коров, иммунизированных антигенами спермиеа я раглмчные сроки после осеменения.
Иммунизация животных антигенами спсрмисв быков-производителей (с целью повышения результативности осеменения) на вторые сутки после осеменения имеет значительные технологические недостатки. Эти недостатки могут быть существенно снижены посредством проведения иммунизации сразу же после осеменения. В то же время известно, что иммунизация может действовать как стрессовый фактор, а стрессовые факторы, как считают, могут быть причиной нарушения оплодотворясмости и эмбрионального развития. Ранее было показано, что первые сутки после осеменения являются периодом пренатального развития наиболее чувствительным к действию таких факторов.
В связи с этим, в следующем эксперименте нами была изучена результативность осеменения у коров, ккмункзированных сперниями быков-нроизнодителей на вторые или первые сутки после осеменения. Результаты эксперимента представлены в таблице 5.
Таблица 5
Влияние на результативность осеменения коров дополнительной сенсибилизации их антигенами спсрмисв в первые или вторые сутки после
осеменения.
Суткп обрабсл к« по отношепню ко времени осенеиекня Обработка Осеменено короь Индекс осеменения Время от обработки до плодотворного осеменения (в сутках)
всего из них стало стельными от первичного осеменения.
Число ' %
1 сперыпяия 16 10 66,7±12,2 1,4310,16 17,319,6
2 15 12 75,8110,8 1,3710.17 15,519,9
1 плацебо 15 7 46,6112,8 1,8010,27 28,8111,4
Данные, представленные в таблице 5 показывают, что результативность осеменения в первую охоту, индекс осеменения и время от обработки до плодотворного осеменения в группах коров, дополнительно сенсибилизированных спермнями производителей на первые или пторые сутки после осеменения были практически одинаковы (разница между группами статистически недостоверна).
Таким образом, результаты этого эксперимента показали, что иммунизация корой в первые сугкн после осемепення антигенами спермгтев не только не оказывает отрицательного влияния нарезультатнвносгь осеменения, но также как и иммунизация па вторые сутки (аналогичного периода) повышает ее по сравнению с контролем. Исходя из полученных в этом эксперименте результатов в дальнейшей работе дополнительную сенсибилизацию коров осуществляли только в первые сутки после оссмечепия.
3.2. Пренатзльмая вьпкизасмость, клеточные И гуморальные иммунные реакции у коров, дополнительно семскбилиеирозанмых спермиямн а разное время сервис-периода.
3.2.1. Результативность осеменения у коров, иммунизированных спермиями а первую, вторую или трятыо охоту.
Существует мнение, что с увеличением числа осеменений увеличивается сенсибилизация самок к антигенам спермиев, которая может быть причиной снижения оплодотворяемосгя и препэтопьной выживаемости.
В связи с этим в следующем эксперименте нами было изучено влияние на результативность осеменения коров численности их осеменений, связанных с осеменением в первую, вторую и третью охоту. Также, задачей этого эксперимента было выяснение оптимального времени проведения дополнительной сенсибилизации коров антигенами спермиев с пелыо повышения результативности осеменения.
Для этих целей нами было отобрано шесть групп животных, три опытных и три контрольных. В первую опытную группу были взяты животные, пришедшие в первую охоту и проннмунизнрованные спермиямн быков-производителей. Во вторую опытную группу вошлк животные, осемененные в первую охоту, но пришедшие вновь в охоту в течении полового цикла после первого осеменения. Эти коровы после повторного прихода в охоту были вновь осеменены и дополнительно сепсибилизнрояаны спермкями. В третью опытную группу были взяты животные, осемененные безрезультатно в первую и вторую охоты. После третьего прихода в охоту эти хоровы были вновь осеменены и проиммупизированы антигенами спермиев быков-производителей. В контрольные группы были взяты аналогичные животные. Результаты эксперимента представлены в таблице б.
Таблица 6
Результативность осеменения коров, иммунизированных спермнями быков-производителей после первой, второй или третьей охоты._
Охо- Обработ- Осеменено коров Индекс Время от
та ка осеменения* иммунизации до плодотворного осеменения
все- Повторили течку Стали (в сутках)
го с запозданием стельными от
первичного осеменения.
чне % чне %
ло ло
1 Иммуниз. 71 17 23,9+4,7* 43 61,115,6* 1,4210,07* 18,613,7"
2 3 Плацебо Иммуниз. Плацебо Им ну 11 из. Плацебо 63 31 19 18 12 31 8 8 3 49,116,2 25,817,9 42,1111,3 16,618,7 24 19 8 15 8 38,016,1 6-1,518,5 42,1111,3 83,318,7 1,9810,13 1,4510,12 1.7810,22 1,3310,19 46,116,9 23,417,5 32,4110,1 13,119,0
25,0112,5 66,6113,6 1,4310,19 22,7111,9
х)- Индекс осеменения учитывался со времени обработки;
х-Р<0,01;хх-Р<0,001
Как видно из данных, представленных в таблице 6, с увеличением числа осеменений наметилась тенденция повышения результативности осеменения. Во всех опытных группах дополнительная сенсибилизация спермнями быков-производителей повысила результативность осеменения и снизила число животных, повторивших течку с запозданием.
Таким образом, результаты этого эксперимента показали, что дополнительная сенсибилизация антигенами спермиев быков-производителей коров, имеющих • эндогенную сенсибилизацию (вызванную осеменением животных) к этим антигенам не только не повышает пренатальные потери, но наоборот, снижает их. В наибольшей стсени данная тенденция проявилась в группе животных, проиммунизированных спермнями после прихода в первую охоту.
3.2.2. Уровень антиспермальных антител у коров, дополнительно сенсибилизированных антигенами спермиев в разные сроки сервис-периода.
Известно, что многократное осеменение коров приводит к повышению у них в периферической крови титра антиспермальных антител. В связи с этим нами было изучено изменение уровня антиспермальных антител у коров дополнительно сенсибилизированных антигенами спермиев в первую няя третью охоту. Результаты эксперимента представлены в таблице 7.
Таблица 7
Уровень антиепермальных антител у коров, нммунгоярованиых спермиями бьтэв-протводегтедейв первую нзп третью охоту.
Охота Сутки взятия крови по отношению ко вреиевд осемененка Оптическая пшиность лрн степей! разбаглапи сьтороткн крови в соотношении
- 1:30 1:60 1:90 1:120 1:240
первая первые 0,162+0,094' 0,535*0,056" 0,370*0,034' О^э+О.О!? 0,176*0,015
десятые 0,955*0,114' 0,565*0,68" 0,432*0,032 0,299*0,029 0,195*0,015
третья первые 1,920*0,163х 1,664*0,114* 1,21610,094' 0,613*0,055* 0,271*0,043
десятые 1,928*0,151* и 46*0,056" 1,280*0,090 0,763±0,121 0,347±0,035
х-Р<0,01
Как видно из данных, представленных б таблице 7, у коров, ставших стельными в третью охоту, по сравнению с коровами плодотворно осемененными в первую охоту, уровень антиспермальных ан1ител, при разведении сывороток в диапазоне с 1:30 до 1:120, был выше на статистически достоверную величину. В то же время, согласно данным, представленным в таблице 6, повышение уровня этих антител не повлияло на результативность осеменения. Дополнительная сенсибилизация антигенами спермвев коров обеих групп практически не повлияла на уровень дапиых антител.
Нами были также изучены показания реакции ЭСЭ у коров, дополнительно сенсибилизированных в первую или третью охоту. Кровь брали от животных в первые сутки или на 16-18 после иммунизации. Результаты эксперимента представлены в таблице 8.
Таблица 8
Реакция ЭСЭ у коров иммунизированных спермиянн в первую или ___ третью охоту!__
Охо- Время Число Дали Стельность Совпадение
та ааятия крови по ЖНЕОТ- шлх. положительную реакцию по ЭСЭ подтверждена ректально данных реакции ЭСЭ с
отношению данными
ко времени обработки ректальных исследований. (%)
число % число %
1 спермшшв 1-ые 28 4 14,3±6,б
15-18 плацебо 28 22 78,6±7,8 17 60,Ш,2 77,217,9
1-ые 15-18 30 30 5 22 1(5,7±б,8 73,318,1 13 43,319,1 43,319,0
3 сперынямн 1-ые 18 8 44,4111,7
15-18 плацебо 18 17 1 94,4±5,4 . 15 83,3*8,7 88,2±7,6 '
1-ые 15-18 12 12 б 10 50,0114,4 83,3110,7 8 66,6113,6 80,0111,5
Как видно из данных, предстанлснпых в таблице 8, у коров осемененных в первую охоту, по сраввенню с животными, осеменепвыыи в третью охоту, уровень антиэмбриопальных антител в периферической крова был значительно ниже. В обеих опытных группах коров уровень этих антител, повысился к 15-18 суткам после осеменения.
Повышение уровня антиэмбриопальных антител у животных не оказало отрицательною влияния иа результативность осеменения. Более того, степень совпадения реакции ЭСЭ у коров, иммунизированных спсрм няни быков-
производителей, была выше по сравнению с контрольными животными, что является косвенпым признаком снижения эмбриональных потерь у жипотных опытных групп.
3.3. Влишмэ дополнительной сенсибилизации коров антигенами спермкев
на зэкпадху последующих стельностей и уровень антмспермальнык
антител.
3.3.1. Пренатальная выживаемость у корса, иммунизированных при ээкладках нескольких стельностей.
Существует мнение, что эндогенная сенсибилизация коров к антигенам спсрмиев (имеющих общие детерминанты к антигенам эмбрионов), происходящая во время стельности, а также во время родов, может оказывать отрицательное влияние на оплодогворясмость я пренатальное развитие.
В наших экспериментах данная эндогенная сенсибилизация коров к ?тим антигенам могла усиливаться в результате экзогенной обработки животных антигенами спсрмиев при закладке предыдущей стельности. В связи с этим, в следующем эксперименте нами было изучено влияние дополнительной сенсибилизации коров антигенами спермнев (осуществленной при закладке предыдущих стельностей) на результативность осеменения и пренатальное развитие у животных, вновь иммунизированных данными антигенами. Для этих целей отбирали корое, ранее не обработанных антигенами спермнев, обработанных во время закладки первой или второй стельности. Животных всех - трех групп иммунизировали спермиямн быков-производителей. Животные контрольных групп имели такое же число стельностей, но ранее не были иммупизированы антигенами спермнев. Результаты эксперимента представлены в таблице 9.
Таблица 9
Влияние дополнительной сенсибилизации коров антигенами спсрмиев па
закладку последующей стельности.
Обработка Коровы Число животных. Результатнв ноеть от первичного осеменения, (%) Повторили течку с опозданием > 21 суток, (О/о) Индекс осеменения Время (,'.' обработки до плодотворного осеменения, (сутки)
спермиямн пдаДебо Обработанные 1 раз 44 42 72,7*б;5 54,7±7,5 27,2*6,7 42,8*7,6 1,36*0,10 1,69*0,15 19,7*5,6 40,1*8,7
спермиямн плацебо Обработанные 2 раза' 45 30 82,2*5,5* 50,0*9,1 13,3*5,1 40,0*8,9 1,40*0,16 1,76*0,17 21,1*8,4 37,7*9,2
спермиямн "плацебо Обработанные 3 раза" 21 19 85,7*7,6* 42,1*11,4 9,5*6,4 . . 31,6*10,8 1,38*0,12 1,78*0,22 20,4*8,7 32,4*10,1
х- Обработанные после первой стельности; хх- обработанные после второй стельности; х)-Р<0,01 , '
Как видно из данных, представлепных в таблице 9, дополнительная сенсибилизация коров во всех опытных группах повысила результативность от первичного осеменения. Хотя в группе коров первый раз обработанных антигенами сперинев, это увеличение и было статистически недостоверным, но розница между опытной и контрольной группами была близка к достоверной (^=1,82), что свидетельствует с наличии тенденции повышения результативности осеменения у коров дополнительно сенсибилизированных антигенами спермиев.
В то же время, у рапсе сенсибилизированных к л км антигенам коров вс время закладки второй или третьей стельности дополнительная сенсибилизация к антигенам спермиев повысила результативность от первичного осеменения на статистически достоверную величину (р<0,01). Это увеличение результативности осеменения в группах животных, иммунизированных спер мня и н быков-нроизводнтелей, было вызвано снижением средв них.числа корол, повторивших течку с запозданием, что свидетельствует о эмбриопротективном действии дополнительной сенсибилизации антигенами сперинев.
Таким образом результаты, полученные в этой эксперименте, показали, что дополнительная сенсибилизация коров антигенами спермиев в течении закладок нескольких стельностей подряд не оказывает отрицательного влияния на результативность осеменения.
Известно, что иммунизация коров спермнями быков-производителей повышает уровень антиспермальных ашител в периферической крови. В связи с этим нами было изучено изменение уровня этих антител у коров, иммунизированных антигенами спермиев однократно или трехкратно (нри закладке трех стельностей подряд). Результаты эксперимента представлены в таблице 10.
Как видно из данных, представленных в таблице 10, однократная иммунизация хоров спермнямн быков-производителей повысила уровень антьспермольных антител в периферической крови, хотя это повышение п было статистически недостоверным, но в разведении 1:30 оно было близко к достоверному. В то же, время у животных, трехкратно иммулизврованных этими антигенами, уровень антисцермальных"антител (в диапазоне разведения сыворотки с 1:30 до 1:120) повысился как по отношению к уровню данных Антител в первые сутки после иммунизации, так и к уровню антител у \ однократно дополнительно сенсибилизированных коров, на статистически : достоверную величину (р'<0,0$ и р<0,01).
Таким образом, результаты этого эксперимента показапи,' что ; иммунизация коров спермяями быков-производителей при лвкладхе трех ч стельностей подряд хотя и повышает уровень антиспермальных антител в периферической крови, но в то же время не оказывает отрицательного влияния на результативность осеменения.
Динампха антиспермальных ангател у коров, иммунизированных одно-
прэтводигелгй
Таблица 10
или трехкратно спершими быггов-
- Нимунзпащга спераеимк (гратносгь) Сутки ВЗЯХНЯ кроаихо времени осеменения Опгнчесхал плотность яри ст епени разбаадения сыворогки кроьк л соотнохпе;шн |
1:30 1:60 1:90 1:120 1:240 '
Одногратная 10 1,194x0,143 0,75410,117 0,56010,096 ' 0,39110,062 0,23010,033
2 0,83210,055 0,58310,076 0,35610,042 0,227зЮ,016 0,13310,015
трехкратная1^ 10 1,75|6±0,1431 1,4Э8Ю,124П 1,13910,051" 0,66310,065" 0,33510,060
* 1,14510,179 0,86610,132 0,54510,114 0,32010,071 0,19!Ю,053
х)- Иммунизированы при закладке 3-х стелыюсгей подряд. Х- Р<0,05; XX- Р<0,01
гг
Также нами были изучены показания реакции ЭСЭ у хоров одно- или трехкратно (при захладке 3-х стельностей подряд) сенсибилизированных антигенами спермиев быков-производителей. Кровь брали от животных на 1618 сутки после осеменения.
Результаты этого эксперимента показали, что степень совпадения реакции ЭСЭ с данными ректальных исследований была выше в группах коров, иммунизированных одно- или трехкратно антигенами спермиев быков-производителей. Это повышение степени совпадения данных реакции ЭСЭ с данными ректальных исследований в труппе коров, иммунизированных однократно спермиями было близко к статистически достоверной величине (1,1=1,82). В то же время, в группе коров, 3-х кратно дополнительно сенсибилизированных антигенами спермиев, по сравнению с животными 3-х кратно обработанных плацебо, степень совпадения этих показателей повысилась на статистически достоверную величину (Р<0,05).
3.4. Научно-производственные исследования результативности осеменения у коров, дополнительно сенсибилизированных антигенами спермиев быков-
производителей.
В предыдущих исследованиях нами было установлено, что иммунизация коров в первые сутки после осеменения сперииями быков-производителей в дозе 2х106 повышает результативность осеменения. Эти исследования были продолжены в научно-производственном эксперименте. Результаты этого эксперимента иредставлены в таблице 12.
Таблица 12
Научно-производственные исследования результативности осеменения у коров дополнительно сенсибилизированных антигевами спермиев быков-
Обработка Число коров Стали стельными от первичного осеменения. Индекс осеменения Время от обработки до плодотворного осеменения
число " % • (суток)
спермнхмя 182 ' 137 75,213,2' 1,3910,06' 18,613,01°
пшщебо 138 73 53,0±4,2 1,6510,08 30,714,11
х-Р<0,01; хх-Р<0,05
Как видпо из данных, представленных в таблице 12, обработка коров антигенами спермиев повысила стельность от первичного осеменения, а также снизила индекс осеменения и время от обработки до плодотворного осеменения, по сравнению с контрольными животными на статистически достоверную величину.
ВЫВОДЫ.
1. У крупного рогатого скота распознавание иммунной системой самки «чужеродных» антигенов зародыша приводит не к формированию реакций отторжения, а наоборот к становлению ннмуяотрофической функция но отношению I зародышу.
2. Нарушение иммунотрофической функция в системе «самка-зародыш» приводит к снижению пренатальной выживаемости. Это снижение, пренатальной выживаемости предотвращается внутрикожной иммунизацией хоров антигенами спермиев быков-производителей.
3. У круппого рогатого скота эмбриональные потерн, обусловленные нарушением иммунотрофического взаимодействия в системе «самка-зародыш». составляют 20 %, от числа оплодотворенных яйцеклеток, ллк около 40 %, от общего количества этих потерь.
4. Уже на ранних этапах стельности, особенно в период формирования плаценты, в периферической крови увеличивается численность Е-РОК (С024). Это увеличение, по-видимому, связано с миграцией (как у особей с гемоэндотелиальныи и гемохориальным типом плаценты^ у8+ С02* Т-лимфоцитов из селезенки к месту формирования плаценты.
5. У коров, уже на ранних этапах стельности, в периферической крова увеличивается уровень антиспермальных антител, то есть происходит развитие вторичного иммунного ответа к этим антигенам. Следовательно, у крупного рогатого скота (как и у особей с гемоэндотелиальныи я гемохориальным типами плаценты) антигены спермиев являются первичными индукторами становления иммунотрофического взаимодействия в системе «самка-зародыш».
6. Во время стельности происходит увеличение уровпя антиспермальных антител в периферической крови. Дополнительная сенсибилизация коров антигенами спермиев в оптимальной дозе'повысила уровень этих антител, аналогичная обработка в субоптинальпой дозе, практически не повлияла на величину данного показателя. Повышения уровня аитиспермальных антител, во время стельности, не оказало отрицательного влияния на пренатальвую выживаемость.
.7. Несмотря на то, что иммунизация выступает как стрессовый фактор, дополнительная сенсибилизация коров (в дозе 2 х 10( спермиев) не только на вторые сутки после осеменения, во и в первые сутки проявляет эмбрнонротективное действие.
8. У коров с увеличением числа осеменений, в течении одного сервис-периода, повышается уровень антиспермальных антител. В то же время увеличение этого показателя не оказывает отрицательного влияния в» пренатальную выживаемость. Иммунизация таких коров снермиям»
производителей (в лозе 2 х 10*) практически не повлияла не изменение уровня антиспермальных антител, по повысила результативность осеменения.
9. С увеличением количества стельностей происходит возрастание уровня антиспермальных антител Дополнительная сенсибилизация таких коров (при закладке нескольких стельностей подряд) не только не оказывает отрицательного влияния на пренатальную выживаемость, но даже повышает ее.
10. У коров, иммунизированных спермиями, по сравнению с ненмму-низированными, степень совпадения реакции ЭСЭ с данными ректальных исследований выше, что связано с повышением эмбриональной выживаемости в группах животных дополнительно сенсибилизированных антигенами спермиев.
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Богданова Н.В., Михайленко Е.В., Радченков В.П. Результативность осеменения коров, иммунизированных спермиями быков.// Зоотехния. - 1999. № 7. - С. 23-25.
2. Богданова Н.В. Иммунопрофилактика эмбриональных потерь у крупною рогатого скота. // Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения (1-3 нюня 1998 г) / п. Быково, Московская обл.- С. 127-128.
3. Богданова Н.В. Антиспсрмальные антитела и пренатальная выживаемость у коров, обработанных несколько раз антигенами живчиков. // Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения (3-4 июня 1999 г} / п. Быково, Московская обл.- С. 56-57.
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Богданова, Наталья Владимировна
Введение.
1.Обзор литературы.
1.1. Внутриутробное развитие у крупного рогатого скота и влияющие на него факторы.
1.1.1. Пренатапьная выживаемость и ее величина у крупного рогатого скота.
1.1.2. Эмбриональные потери и факторы их вызывающие.
1.1.2.1.Эндогенные причины снижения пренатальной выживаемости.
1.1.2.2. Влияние экзогенных факторов на эмбриональную выживаемость.
1.2. Иммунобиологическое взаимодействие в системе «самка-зародыш».
1.2.1. Распознавание иммунной системой самки антигенов зародыша отцовского гаплотипа.
1.2.2. Роль А-клеток и синтезируемых ими цитокинов в нормальном и нарушенном пренатальном развитии.
1.2.3. Т-лимфоциты и синтезируемые ими цитокины в нормальном и нарушенном эмбриогенезе.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Иммунотрофическая функция в регуляции нормального эмбриогенеза у крупного рогатого скота"
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. В нарушении воспроизводительной функции у крупного рогатого скота, по-прежнему, ведущее место занимают эмбриональные потери. По многочисленным данным как отечественных, так и зарубежных исследователей» у крупного рогатого скота оплодотворяемость составляет 90-95 %, тогда как до рождения доживают лишь 50-55 % зародышей. Наибольшие пренатальные потери (40-45 % от числа оплодотворенных яйцеклеток) происходят в эмбриональный период, особенно в период плацентации (24, 53, 92, 142,163).
Несмотря на длительный период изучения причин эмбриональных потерь, до сих пор не разработаны эффективные и практически приемлемые методы их предотвращения. Разработка методов повышения эмбриональной выживаемости невозможна без выяснения конкретных физиологических процессов, обеспечивающих нормальное пренатальное развитие.
Значительные успехи в изучении эндокринных факторов в нормальном и нарушенном эмбриональном развитии были достигнуты отечественными учеными A.JI. Падуч ев ой, Ю.Д. Клин-ским и М.И. Прокофьевым.
В начале 70-х годов началось интенсивное изучение роли иммунных факторов в нормальном и нарушенном пренатальном развитии. Крупный вклад в выявлении изменений иммунного статуса у крупного рогатого скота во время стельности были сделаны отечественными учеными ИИ. Соколовской, Н.М. Решетниковой и A.B. Вронской.
К концу 80-х годов было установлено, что у самок с гемоэндотелиальным типом плаценты угнетение иммунной системы вызывает снижение эмбриональной выживаемости, которое предотвращается иммунизацией таких самок лейкоцитами посторонних доноров или обработкой иммуномодуляторами (12, 43, 152). Это обнаружение необходимости распознавания иммунной системой самки «чужеродных» антигенов зародыша послужило основой формирования новой теории - иммунотрофической, пришедшей на смену иммуносупрессивной.
В то же время, хотя иммунизация самок с первичными или вторичными иммунодефицитами предупреждает снижение эмбриональной выживаемости, длительное время не была известна конкретная популяция материнских лимфоцитов, участвующих в распознавании «чужеродных» антигенов зародыша и формировании иммунотрофической функции в нормальном эмбриогенезе. Недавно было показано, что у самок с гемоэндотелиальным типом плаценты эту функцию осуществляют не сф+, а у8+Т-лимфоциты (83).
У крупного рогатого скота, имеющего синдесмохориальный тип плаценты, как и у других видов млекопитающих, во время стельности (особенно в период плацентации) происходит изменение клеточных и гуморальных иммунных реакций. Следовательно, вполне вероятно, что у крупного рогатого скота, как и у самок с гемоэндотелиальной плацентой, существует иммунотрофическое взаимодействие в системе «самка-зародыш». Изучение этого возможного иммуно-трофического взаимодействия во время стельности у коров, с одной стороны, углубляет познание физиологических процессов, обеспечивающих течение нормальной стельности, с другой -открывает перспективы разработки методов повышения прена-тальной выживаемости.
ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ. Целью работы является определение возможного существования у крупного рогатого скота (как и у млекопитающих с гемоэндотелиальным и гемохориальным типом плаценты) иммунотрофического взаимодействия в системе «самка-зародыш», а также выяснение возможности повышения эмбриональной выживаемости посредством коррекции этого физиологического процесса.
Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи: 1. Определить влияние на эмбриональную выживаемость дополнительной сенсибилизации коров антигенами спермиев в субоптимальной дозе.
2. Выяснить оптимальное и практически приемлемое время иммунизации коров спермиями быков с целью повышения эмбриональной выживаемости.
3. Установить величину эмбриональных потерь, обусловленных нарушением иммунных взаимоотношений в системе «самка-зародыш».
4. Изучить численность Е-РОК в периферической крови у коров, иммунизированных и неиммунизированных спермиями быков-производителей.
5. Определить уровень антиспермальных антител у коров, дополнительно сенсибилизированных и несенсибилизированных антигенами спермиев.
6. Определить величину эмбриональной выживаемости у коров, иммунизированных спермиями быков-производителей при закладке нескольких стельностей подряд.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые установлено, что иммунизация коров субоптимальной дозой спермиев быков повышает эмбриональную выживаемость; несмотря на то, что иммунизация действует как стрессовый фактор, дополнительная сенсибилизация коров антигенами спермиев в первые сутки после осеменения, так же как и во вторые, проявляет эмбриопротективный эффект; иммунизация спермиями коров после осеменения независимо от числа (первая, вторая или третья) охоты в течении одного сервис-периода повышает пренатальную выживаемость; дополнительная сенсибилизация коров антигенами спермиев в течении закладки нескольких стельностей подряд не только не снижает эмбриональную выживаемость, но даже значительно ее повышает; у коров, осемененных несколько раз безрезультатно в течении одного полового цикла по сравнению с коровами осемененными в одну охоту, уровень антиспермальных антител выше. Иммунизация таких коров спермиями быков-производителей в оптимальной дозе увеличивает этот показатель, тогда как аналогичная обработка в субоптимальной дозе не влияет на уровень антисперм альных антител. В то же время данное увеличение титра антисперм альных антител не оказывает отрицательного влияния на эмбриональную выживаемость; уровень антисперм&пьных антител у коров, дополнительно сенсибилизированных антигенами спермиев быков, при закладке предыдущих стельностей увеличивается значительно интенсивнее, нежели у животных, обработанных аналогичными антигенами один раз. В то же время это более интенсивное повышение титра антиспермальных антител не оказывает эмбриодеструктивного действия; у коров уже на ранних этапах стельности происходит изменение клеточного иммунитета, проявляющееся в увеличении численности Е-РОК (С02+) в периферической крови. Иммунизация коров спермиями быков в оптимальной дозе повышает количество этих лимфоцитов, а в субоптимальной практически не влияет на данный показатель; степень совпадения реакции ЭСЭ у коров, дополнительно сенсибилизированных антигенами спермиев быков, выше по сравнению с необработанными животными, что связано с увеличением пренатальной выживаемости у коров, иммунизированных спермиями быков-производителей.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Разработан новый подход к изучению методов повышения эмбриональной выживаемости у коров с нарушением иммунотрофической функции в пренатальном развитии. Этот подход основывается на возможности профилактики эмбриональных потерь посредством иммунизации коров в первые сутки после осеменения антигенами спермиев, имеющих общие детерминанты с антигенами зародышей. Данная разработка может быть использована как для совершенствования предложенного метода иммунопрофилактики эмбриональных потерь посредством дополнительной сенсибилизации коров антигенами спермиев быков, так и для разработки новых методов повышения пренатальной выживаемости.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные результаты работы были доложены на научно-практической конференции «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения» (1-3 июня 1998 г., п. Быково); на научно-практической конференции «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения» (3-4 июня 1999 г., п.Быково); на научной конференции отдела биологии воспроизведения ВИЖа «50 лет Открытия возможности замор шкив ания и получения потомства от замороженного семени» (23-24 октября 1997 г., п. Быково).
СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация изложена на 108 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материала и методик исследований, результатов, обсуждения результатов и выводов, содержит 13 таблиц, 8 графиков. Список литературы включает 167 источников, в том числе 140 иностранных.
Заключение Диссертация по теме "Физиология", Богданова, Наталья Владимировна
5. Выводы.
1.У крупного рогатого скота, как и у особей с гемохориальным типом плаценты, распознавание иммунной системой самки «чужеродных» антигенов зародыша приводит не к формированию реакций отторжения, а наоборот, к становлению иммунотрофической функции по отношению к зародышу.
2. Нарушение иммунотрофической функции в системе «самка-зародыш» приводит к снижению пренатальной выживаемости. Это снижение пренатальной выживаемости предотвращается внутрикожной иммунизацией коров антигенами спермиев быков-производителей.
3. У крупного рогатого скота эмбриональные потери, обусловленные нарушением иммунотрофического взаимодействия в системе «самка-зародыш», составляют 20%, от числа оплодотворенных яйцеклеток, или около 40%, от общего количества этих потерь.
4. Уже на ранних этапах стельности, особенно в период формирования плаценты, в периферической крови увеличивается численность Е-РОК (С02+). Это увеличение, по-видимому, связано с миграцией (как у особей с гемоэндотелиальным и гемохориальным типом плаценты) у5+ СБ2+ Т-лимфоцитов из селезенки к месту формирования плаценты.
5. У коров, уже на ранних этапах стельности, в периферической крови увеличивается уровень антиспермальных антител, то есть происходит развитие вторичного иммунного ответа к этим антигенам. Следовательно, у крупного рогатого скота (как и у особей с гемоэндотелиальным и гемохориальным типами плаценты) антигены епермиев являются первичными индукторами становления иммунотрофического взаимодействия в системе «самка-зародыш».
6. Во время стельности происходит увеличение уровня антиспермальных антител в периферической крови. Дополнительная сенсибилизация коров антигенами епермиев в оптимальной дозе повышает уровень этих антител, аналогичная обработка в су б оптимальной дозе практически не повлияла на величину данного показателя. Повышение уровня антиспермальных антител, во время стельности, не оказало отрицательного влияния на пренатальную выживаемость.
7. Несмотря на то, что иммунизация выступает как стрессовый фактор, дополнительная сенсибилизация коров (в дозе 2х10б епермиев) не только на вторые сутки после осеменения, но и в первые сутки проявляет эмбриопротективное действие.
8. У коров с увеличением числа осеменений в течении одного сервис-периода повышается уровень антиспермальных антител. В то
89 же время увеличение этого показателя не оказывает отрицательного влияния на пренатальную выживаемость. Иммунизация таких коров спермиями производителей (в дозе 2x106) практически не повлияла на изменение уровня антиспермальных антител, но повысила результативность осеменения.
9, С увеличением количества стельностей происходит возрастание уровня антиспермальных антител. Дополнительная сенсибилизация таких коров (при закладке нескольких подряд) не только не оказывает отрицательного влияния на пренатальную выживаемость, но даже повышает ее.
10. У коров иммунизированных спермиями, по сравнению с неиммунизированными, степень совпадения реакции ЭСЭ с данными ректальных исследований выше, что связано с повышением эмбриональной выживаемости в группах животных дополнительно сенсибилизированных антигенами спермиев.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Богданова, Наталья Владимировна, п. Быково, Московской обл.
1. Броядз Б.Д. Т-лимфоцигы и их рецепторы в иммунологическом распознавании. -М.:Наука, 1987.-c.471.
2. Бронская A.B., Радченков В.П. Иммунологический способ раннего определения стельности у коров. //Животноводство.- 1995.-№ 3.- С.46-47.
3. Бронская A.B., Соколовская И.И., Горбунова Р.И., Туре У.Б. Поведение ксеногенных эритроцитов, нагруженных эмбриональными антигенами: Тез. докладов 2-го Всесоюзного симпозиума по иммунологии воспроизведения. 1980 г.- Москва.- С. 237.
4. Бронская A.B., Соколовская Й.Й., Горбунова Р.И., Радченков В.П. Изменение реакции лимфоцитов на ксеногенные эритроциты в ходе беременности: Тез. докладов 2-го Всесоюзного симпозиума иммунологии воспроизведения. 1980 г.-Москва.- С.185.
5. Болгов А.Е., Карманова Е. П., Хакана А,И Ранняя эмбриональная гибель у коров код влиянием пар атипических факторов. // Сельхоз. биология,- 1989.- Ш 4.- С 67-70.
6. Говалло В.И. Иммунология репродукции.-Л. .Медицина, 1987.- С.303.
7. Горбунов В.И. Направления а новые результаты исследований по биологии воспроизведения животных. // Бюл. науч. работ./ ВИЖ.-Вып. 3.- 1977. С. 77.
8. В.Дыбан А.П. Раннее развитие млекопитающих.- Л.: Наука, 1988,-С. 225.
9. Клинский Ю.Д., Дедов Ю.М., Чомаев A.M. Влияние энке-фалинов на половую функцию коров. Использование гормональных препаратов в животноводстве.- ВЙЖ.- Дубровицы, 1991,- С.2-3.
10. Милованов В.К. Интенсификация воспроизводства в молочном скотоводстве. //Животноводство.- 1982.-№ 10.- С. 50-53.
11. U Мороз Т.А. Действие биостимуляторов на эффективность воспроизведения высокопродуктивных коров: Автореф. дис. канд. биол. наук /ВЙЖ.- Дубровицы, Моск. обл., 1990.- 26 с.
12. Радченков В.П. Разработка методов раннего определения беременности и повышения эмбриональной выживаемости у сельскохозяйственных животных: Автореф. дис. канд. биол. наук/ ВИЖ. Дубровицы, Моск.обл., 1984. 19 с.
13. Радченков В.П., Литвинов Н.С. Маркеры и функции крупного рогатого скота. //С-х. биология.- 1988.- № 6.- С. 115-123.
14. Радченков В.П. Иммунорегуляция эмбрионального развития. Экспериментальное моделирование: Автореф. дис. д-ра. биол. наук/ ВИЖ.- Дубровицы, Моск. обл., 1993, 36 с.
15. Радченков В.П. Роль антигенов плазмы спермы в нормальном и нарушенном пренатальном развитии. // Доклады ВАСХНЙЛ.- 1991.-№ 10.- С. 49-50.
16. Радченков В.П., Стоянов В.К. Иммунопрофилактика эмбриональных потерь у крупного рогатого скота. // Доклады РАСХН.- 1995.- № 3.- с. 40-41.
17. Решетникова Н.М., Вронская A.B., Губанова В.П. Иммунные взаимосвязи самка-зародыш и механизмы нарушения пренатального развития. Направление и новые результаты исследований по биологии воспроизведения. //Дубровицы.- 1977.-вып. 3.- часть 2.- С. 43-49.
18. Репнин B.C. Критические факторы химической регуляции развития.- М.: Медицина, 1980.- С. 247.
19. Румянцев С.Н. Конституциональный иммунитет и его молекулярно-экологические основы.- Л.: Наука, 1983.- С. 240.
20. Соколовская И.Н. Некоторые причины и меры предотвращения эмбриональной смертности. // Докл. сов. ученых к 5
21. Междунар. конгрессу по биологии воспроизведения с.-х. животных. М.> 1964, С 122-126.
22. Соколовская И.И., Бондаревская Л.Ф. Действия возраста гамет на выживаемость эмбрионов. // Доклады ВАСХНИЛ.- 1965.-№ 1.- с. 22-27.
23. Соколовская И.й. Иммунные реакции в воспроизведении сельскохозяйственных животных и результаты новых экспериментов. //Направления и новые результаты исследований по биологии воспроизведения животных,- Дубровицы.- 1977.- С. 3-16.
24. Соколовская И. И., Милованов В.К. Иммунология воспроизведения животных.- М.: Колос, 1981.- С. 264.
25. Соколовская И. И., Милованов В.К. Зоотехническая иммунология воспроизведения: Тез. 5-го межд. симп. иммун. репрод. 1982.- София,- С. 30-43.
26. Соколовская И.И. , Бронская A.B., Радченксв В.П. Реакция Э, ЭАК и ауторозеткообразования в ходе стельности у коров. // Biol. Reprod.- 1984,- № 10,- рр.13-15.
27. Солсбери ГУ., Ван-Демарк Н.Л. Теория и практика искусственного осеменения коров в США,- М.:Колос, 1966.526 с.
28. Турко Т.Н. Оплодотворяемость и эмбриональная выживаемость у крупного рогатого скота в связи с разными степенями инбридинга и иммунными реакциями материнского организма: Автореф. дис. канд. биол. наук/ Лесные поляны, Моск. обл., 1997, 23 с.
29. Addonda S.J, Cu Hin an E.G., McJntyre R. Reproductive in mice lacking a functional type 1 IL-1 receptor. // En do crin.- 1996.- vl37.-p.3598-3601.
30. Ahmad W., Schrick F.W., Butcher R.L. Effect of persistent follicles on early embryonic losses in beef cows, //Biol. Reprod.- 1995.-v 52.-№5.-p. 1129-1135.
31. Anwerx J., Stales. Leptin. Lancet.//1997, v 351, pp. 737- 742.
32. Arechiga C.F., Staples C.R., McDowell K.R., Hansen P.J. Effect of time insemination an supplemental B-carotine on reproduction and milk yield of dairy cows under heat stress. // J. Dairy Sci.- 1998,- v 81.-№ 2.-pp. 390-402
33. Barash I.A., Cheung C.C., Wigel D.S. Leptin is metabolic signal to the reproductive system. // Endocrinology.- 1996.- v 137.- pp. 31443147.
34. Baxter S.J., Ward W.R. Incidence of fetal loss in dairy cattle after pregnancy diagnosis using an ultrasound scanner. // Vet. Rec.- 1997.-v.140.- № 11,-pp. 287-288.
35. Bernard 0., Ripohe M.A., Bennet D. Distribution of maternal immunoglobulins in the mouse uterus and embryo in the day after implantation. //J. Exp. Med.- 1977.- v 145.- № 7.- pp. 58-75.
36. Belurri S., Libralesso L., Ciantil L. Mortalita embrional della bovina// Odv. Obiettivi. Doc.Vet.-1991.- v 12.-№ 8,- pp.49-53.
37. Becman E.M., Porcell S.A., Morita S.M. e.a. Recognation of a lipid antigen by CD 1-restricted a{3 T-cells natyre.- 1994.- v 372,-pp. 691-692.
38. Bigger B.G., Geisert R.D., Wettmann R.P., Buchanan D.S. Effect of heat stressed on early embryonic development in the tell cow. II J. Anim. Sci.- 1987,- v 64.- pp. 1512-1518.
39. Boismenn R.s Havran W.L. Modulation of epithelial cell growth by interaepitalial ycr T-cell. // Science.- 1994,- v 266.- № 18,-p. 1253-1255.
40. Brown W.C., Allison C.R-F., Ester D.M. Bovine type 2 and type 1 responses // Vet. Immunol. Immunopatho).- 1988.- v 63.- № 12.-pp. 45-55.
41. Broun W.F., Yongonist R.S. Femaiy bovine in fertility. // Vet. Cein. North Amer. Food Anim. Pract -1993.- v 9.- № 2.- pp. 223-240.
42. Bucy B.P., Panaskaetsis-Martaria., Huang G. Heterogenety of single cell cytokine gene expression in clonal T-cell population. // J.Exp. Med.- 1994.- v 180 pp. 1251-1262.
43. Chaouat G., Mean E., Clark D.A. Control of fetal survival in CBA x DBA/2 mice by lymph ok in e therapy. // J. Reprod. Fert.- 1990,- v 89.- № 2.- pp. 447-458.
44. Chaouat G., Kiger N., Wegmann T.Z. Vaccination against spontaneous abortion in mice, if J. Reprod. Immunol.- 1988 v 5,-pp. 389-394.
45. Chartain I., Niara J., King W.A. e.a. Nucleoli and nucleolus organizer in early goat embryos. // Theiogenology.- 1986,- v 25,-pp. 145-153.
46. Chauham M.S., Singa S.K., Palta P. IGFM stimulation of vitro maturation in vitro fertilisation and subsequent development of bovine oocytes in vitro. //Vet. Rec.- 1998,- v 142,-pp. 727-728.
47. Christmas S.E., Brew R., Deniz G. T-cell receptor heterogenity of y<? T-cell clones from human female reproductive tissues. // Immunology 1993.- v 78.- pp. 436-445.
48. Chu C.L., Chen S.S., Wu T.S. Differential effect ofIL-2 and IL-5 on the death and survival of activated TCR y<?+ intestinal intraepithelial lymphocytes. //J. Immynol.- 1999,- v 162.- № 4,-pp. 1896-1903.
49. Clark D.A., Chaonat G. What do we now about spontaneous abortion mechanisms? //AJRL- 1989,- v 19.- № 1,-pp. 28-37.
50. Clark D.A. Host Jmmunoregulatorv mechanisms and the success of concept»s fertilized in vivo and in vitro.// Jn: Early pregnancy failure: mechanisms and treatment (Beard R.W , Sharp F eds.) Peacoc Press.-1988,- pp. 215-232.
51. Crocer G., Sopp P., Parson R. et.al. Analysis the ycr T-cell restricted antigen WC 1. // Vet. Immynol. Immynopath.- 1991.- v 39,- pp. 137-144.
52. Darvlid U.,Gustaffson H., Shamsuddin M. Survival rate and ultrastructure of vitrified bovine in vitro and in vivo developed embryos. //Acta. Veter. Scand.- 1994.- v 35.- Ks 4,-pp. 417-426.
53. Darwash A.O., Lamming G.E., Woolliams J.A. The potential for identifying heritable andocrine parametrs associated with fertility in postpartum dairy cows. // An im. Sei. 1999 - v 68.- Ks 2, - pp. 333-347.
54. Dunne L.D., Disk in M I, Bo land M.P. e.a. Nutrition and embryo survival in cattle. // Irish. J. agri. Food. Res.- 1997.- v 36.- p. Suppl., abstr. 95.
55. Davis W.C., Davis J.E., Hamilton. M.J. Use of monoclonal antibodies specific for y5 TcR. // Vet. Immunoparth.- 1996.- v 52.-pp. 275-283.
56. Davis W.C., Zuck ermann F. A., Hamilton M.J. Analysis of monoclonal antibodies that recognise yS T/ null cell. // Vet. Immunol. Immuiiopath,- 1998.- v 60.-pp. 305-316.
57. Daynes R.A., Arano B.A. Contrasting effect of glucocorticoids on the capacity of T-cell to produce the growth factors interleukin-2 and interleukin-4. //Eur. J. Immunol.- 1989.- v 19.- pp. 2319-2335.
58. De loss Santos M.J., Mercarden A., Frances A. Role of endometrial factors in regulating secretion of components of the immunoreactive human embryonic IL-1 system during embryonic development. //Biol. Reprod.- 1996.- v 54,- pp. 563-574.
59. Dillon D.M., Cannigham C., Catto C.R. Characterization of humoral immune response during murine pregnancy. // Reprod. Immunol.- 1988.- v 14.-№ 1,-pp. 59-72.
60. Discarpentis R. La screrile de la genisse: etude clinigue et etio-pathogenique. //Bull. Soc. Vet. Prat. Fr.- 1986.- v 70.- № 2.- pp. 105-113.
61. Dore J.J., Wilkinson J.E., Godkin J.D. Ovine endometrial expussion of transforming growth factor B-isoform during the pre implantation period. //Biol. Reprod.- 1996,- v 54.- № 5.- pp. 1080-1087.
62. Ealy A.D., Drost M., Hansen P.J. Developmental changes in embryonic resistance to adverse effects of maternal heat stress in cow. // J. Dairy Sei.- 1993.- v 76.- № 10.- pp. 2899-2905.
63. Erskine R.J., Bartlett P.C., Tavernier S.R. e.a. Recombinant bovine IL-2 and dry cow therapy. // J. Dairy Sei.- 1998.- v 81.- № 2.-pp. 403-411.
64. Fernander R.C., Logan S.M., Lee S.H. Elevated levels of legionella pneumophila stress protein Hsp 60 early in infection on human monocytes and L 929 cell correlate with virulence. // Inf. Immun.- 1996.-v 64.- pp. 1968-1976.
65. Fisch P., Malkovsky M., Kovats S e.a. Recognation by human Vv9/y82 T-cell of a GroEL homolog on Dandi Burk it's lymphoma cells. // Scienel.- 1990.- v 250.- pp. 1269-1271.
66. Flach G.> Jhonson M.H., Brand P.K. The transition from maternal to embryonic control in the 2-cell mouse embryos. // EMBOJ.- 1982.-v l.-pp. 681-686.
67. Forar A.L., Gay J.M., Hancoec D.D. The pregnency of endemic fetal loss in dairy cattle: arview. // Theriogenology.- 1995.- v 43.- № 6.-pp. 989-1080.
68. Frutos P., Buraiovich 0., Gizaldez F.J. Feed supplementation of grazing merino ewes during mid-pregnancy on changes in body composition and on the conceptus. // J. Anim. Feed. Sci.- 1999.- № 3.-pp. 395-406.
69. Gardino F.A., Gardino E., Hoffman P.S. Surface-associated invasion in Hella cell model, if Inf. Immun.- 1998.- v 66.- № 10.-pp. 4602-4610.
70. Gorczvnski R.M., Chen Z., Hoang Y. A subset of y8 T-cell receptor positive cells produce T-helper type -2 Mid regulate mouse skin graft rejection following portal venous pretransplant preimmunization. // Immunobiology.- 1996.- v 87.- pp. 381-395.
71. Gorivodski M., Zemlyak. J ., Orenstein H. TNF-a messenger RNA and protein expression in the uteroplacental unit of mice with pregnancy loss. //J. Immunolog.- 1998.- v 160.- № 9.- pp. 4280-4288.
72. Haas W., Pereira P., Toneghwa S. Gamma/ delta cells. // Aunu. Rev. Immunol.- 1993.- v 11.-pp. 637-645.
73. Haeck G., Wagner H. Proliferative and cytotytic responses of human yS T-cell display a distinct specifity pattern. // J.Immunol.- 1994.-v 81,- № 4,-pp 564-568.
74. Hamovici F., Yuan R., Anderson D.J. The role of IL-1 extracellular matrix interaction in implantation. // J. Immunol. Immu-nopharmacol.- 1992,- v 12.- № 2.- p. 8.
75. Han ad a H. Distribution of the robertson translocation and its effect on fertility in cattle. //Anim. Sci. Thechnol.- 1998,- v 69.- № 11.-pp. 997-987.
76. Hansen P.J., Ealy A.D. Effect of heat stressed on the establishment and maintenance of pregnancy in cattle // Rev. Brasil. Reprod. Anim.- 1991,- v 3.- № 1.-pp. 108-119.
77. Hanter R.H.F. Chronological and cytological details of fertilization and early embryonic development in domestic pig. // Ins. Scrof. Anat. Rev.- 1974.- v 12.- pp. 178-186.
78. Hant J.S., Soares M.J. Expression of histocompatibility antigens, transferrin receptor and alcaline phosphatase in vitro cultured rat placental cell. //Placenta.- 1988.- v 9.- № 2,-pp. 159-171.
79. Herr J.C., Flickinger C.J., Hovard S.C. An enzyme linked immunosorbent assay for measuring antisperm autoantibodies folloving vasectomy in lenties rats. //JAJRIM.- 1986.- v 11.-pp. 75-81.
80. Hein W.R., Dubler L. TCR yS cells are prominent in normal bovine skin and expess a diverse repertoir of antigen receptor. // Immunology.- 1997,- v 91,- pp. 58-64.
81. Hetherington C.M., Dresser D.W. Establishment of functional T-cell in SCID mice does not lead to termination of pregnency. // Immynol. 1990.-v 71,-№3,-pp. 449-453.
82. Hey borne K.D., Cran fie R.L., Carding S.R. e.a. Characterization of y8 T-limphocytes at the maternal-fetal intrface. // J. Immunol.- 1992 -v 149.-pp. 2872-2881.
83. Heyborne K., Welson A., Farr A. e.a. Recognation of trophob lasts by yS T-cells. //J. Immunol.- 1994.- v 153.- pp. 2918-2926.
84. Hunt J.S., Robertson S.A. Uterine macrophages and enviromental programming for pregnancy success. Il J. Reprod. Immunol.- 1996.- v 32.-№ l.-pp. 1-25.
85. Jones W.M., Waiehek B., Sutila M. Generation of new y8 T-cell-specific monoclonal antibody (GD.3.5.) biochemical comporison of G.D.3.5. antigen with the previously descwribed workshop cluster 1 (WC1) family. //J. Immunol.- 1996.- v 156,- pp. 3772-3779.
86. Kabelitz. D. Function and specificity of human y/S positive T-cell. // Crit. Rev. Immunol.- 1992.- v 11.- № 5.- pp. 281-303.
87. Kanlour A., Ho H-W. Differential expression of MHC class I antigens on placenta of the rat. // J. Exp. Med.- 1987 v 106.-pp. 1861-1882.
88. King W.A., Nair A. Nucleolus organizer region and nucleoli in preattachment bovine embryos. // J. Reprod. Fert.- 1988.- v 82 -pp. 87-95.
89. King W.A. Embrio mediated pregnancy failure in cattle. II Can ad. Vet. J.-1991.- v 32,- № 2.- pp. 99-103.
90. Kronen berg M. Antigens recognized by yS T-cell. // Curr. Opinion. Immunol.- 1994.- v 6.- № 1.- pp. 64-71.
91. Lamming G.E., Darwash A.O. The use of milk progesterone profils to characterise components of subfertility in milked dairy cows. // Anim. Reprod. Sci.- 1998.- v 52.-pp. 175-190.
92. Lander M.F., Hansen P.J., DrastM. Antisperm antibodies in cows after subcutaneous and intrauterine immunisation. II Veterinary Record.-1990.- v 126.- pp.461-462.
93. Larson R.C., Ignotz G.G., Currie W.B. Transforming growth factor p and basis fibroblast growth factor synergistically promote earlybovine embryo development during the fourth cell cycle. //Mol. Reprod. Dev.- 1992.- pp. 432-435.
94. Lee E.S., Fukni J. Effect of various growth factor in defined culture medium on in fertilized in vitro. // Theiogenology.- 1995.- v 44.-pp. 71-83.
95. Lin H., Mosmann T.R., Gulbert L., Tuntipopipat S., Wegmann T.G. // J. of Immunol.- 1993.- v 151.-№ 9,- pp. 4562-4573.
96. Lion S.S., Lim J.M., Blair M.R. e.a. Leptin causes release of LH a FSH from perfised murine and bovine pituitary glahds. it Biol. Reprod.-1997.- v 56.- № supple.- abstr. 171.
97. London C.A., Abbas A.K., Kelso A. Helper T-cell subsets: heterogeneity function and development. // Vet. Immunol. Immuno-pathol.- 1998,- v 63.-№ 1-2.-pp. 37-44.
98. Low E.G., Hansen P.G. Expression of major hystocompatibility complex antigens on bovine placenta. II J.Reprod. Fert.- 1990.- v 90.-№ l.-pp. 235-249.
99. Lula C., Kastelic J.P., Carruther T.C.,Mapletoft R.J. Role of luteal regression in embryonic loss in cattle.//Proc. 12 Inter. Congr. Anim. Reprod. S.J.- 1992,- v 3.-pp. 1255-1257
100. Ly C.Y., Redline R., Shea C.M. Pregnancy as natural model of allograft tolerance: interactions between adherent macrophages and trophoblast populations. //Transplant.- 1989.- v 48.- pp. 848-855.
101. MachidaT., Taga., Minaguchi H. Effector of epidermal growth factor and transforming growth factor -a on the mouse trophoblast out growth in vitro. //Eur. J. Endocrin.- 1995,- v 133.- № 6,- pp. 141-146.
102. Magoffin D.A., Huang C.T. Leptin and reproduction. // Endocrinologist.- 1998.- v 8,- pp. 79-86.
103. Max.A. Obumielnose zarodcow and zwierzat. // Med. Vet.-1991.-v 47,-№ 9.-pp. 416-418.
104. Mc Master M., Zhou Y., Simon S. HLA-G isoforms produced by placenta! cytotrophoblast and found in amniotic fluid are due to unusual glycosylation. // J. Immunol.- 1998 v 160.- № 12,- pp. 59235927.
105. Meensen E., Fox A., Brandon M., Lee C.S. Activation of uterine intraepithelial y8 TCR-positive limphocyte during pregnancy. // Eur. J. Immunol.- 1993.- v 23.- pp. 1112-1116.
106. Mialon M.M., Camons S., Renand G. Peripheral concentrations of 60 kDa pregnancy serum protein during gestation and after calving and relation ship to embryonic mortality in cattle. // Reprod. Nutrit. Develop.- 1993.- v 33.- № 3,-pp. 427-428.
107. Michael S., Taguchi O., Nishizuka Y. Hormonal characterization of female SL/ni mice small thymus gland strain exibiting ovacian disgenesi. //J. Reprod. Immunol.- 1988.- v 12.- pp. 277-286.
108. Mincheva-Nilsson L., Ham mar strom S., Hammarstrom M.L. Human decidua leukocytes from early pregnancy contain high members of yS+ cells and show selective down-regulation of alloreactivity. // J. Immunol.- 1992,- v 149.- pp. 2203-2215.
109. Mosman T.R., Sad. The expanding universe of T-cell subsets: Thl, Th2 and more. //Immunol. Today.- 1996.- v 17.- pp. 138- 147.
110. Motousek J., Rina J. Anti-leucocyte antibodies and embryonic mortality in embryo transferred cows. // Animal. Genetics.- 1991.- v 22.-Ns 3.-pp. 245-250.
111. Munson L., Welhite A., Boltz F. Transforming growth factor p in bovine placentas //Biol. Reprod.- 1996, v 55, № 4, pp.748-755.
112. Muzikova E., Clark D.A. In spontaneous resorption in the DBA/2 mated CBA/J mouse due to defect in «seed» or in «soil». // AJRI.-1995.-v 33,-№ l.-pp. 81-85.
113. Neumann P. Undersuchungen zu vorkommen and bedentung lymph ozytotoxicher antikorper wahrend der reproduktion beim weiblichen rind. //Med. Veter.-1991.- v 46.- № 3.- pp. 474-477.
114. Oriss T.V., Me Carthy S.A., Morell B.F. Crossregulation between T helper cell (Thl and Th2). Inhibition of Th2 proliferation by INF-y involves interference with IL-1. // J. Immunol.- 1997.- v 158,- № 8.-pp. 3666-3672.
115. Pania-Lopes E.F., Moracs A.A., Hansen P.J. Presense of interleukin-1 in the bovine reproductive tract. // Biol, reprod.- 1998 v 58.- № Suppl.- p. 85.
116. Pan la-Lopes E.F., Moraes A.A., Edwards J.L., Hansen P.J. Regulation of preim plantation development of bovine embryos by IL-lp. if Biol. Reprod.- 1998.- v 59.-№ 6,-pp. 1406-1412.
117. Pardonx C., Assetin C., Chehimi J. Functional interaction between TGF-P and IL-12 in human primary allogenic cytotoxiciti and proliferative response. // J. Immunol.- 1997 v 158.- № 1.- pp. 136-143.
118. Pollard J.W., Elaine Y., Zhu L. Complexity in uterine macrophage responses to cytokines in mice. //Biol. Reprod 1988.- v 58-№> 6,- pp. 1469-1475.
119. Redline R.W., Ly C.V. Localization of fetal major histocompatibility antigens and maternal leukocytes in murine placenta. // Lab. invest.- 1988,- v 61.- № 1.- pp. 27-36.
120. Riccardi C., Nicolett J., Pagliacci C. Glucocorticoids induced thymocyte apoptosis: Ingibition by IL-4.//in. 11th. Eur. Immunol. Meet. ESPO, Helsinci.-1991.-p.66.
121. Robers R.M., Schaule T., Francis H. Maternal recognaton of pregnancy and embryonic loss. // Theriogenology.- 1990.- v 33.- № 1.-pp. 175-183.
122. Roberts R.M. A novel group of interferon associated with ovine and bovine embryo. //J. Interferon Res.- 1989.- v. 9.- № 3.- pp. 373-378.
123. Roberts SJ., Smith A.L West A.B. e.a. T-cell op and yS deficient mice display abnormal but distinct phenotypes to ward a natural, widespread infection on intestinal epitelium./Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1996,-v 93.-pp. 11774-11785.
124. Robertson S.A., Braunstom M., Stamark R.F., Cytokines in rodent reproduction and cytokine-endocrine interaction. // Curr. Opin. Immunol.- 1992.- v 4,- № 6,- pp. 585-589.
125. Robinson J.J.„ Sinclair K.D., Me Evoy T.G. Nutritional affect on fetal growth. //Anim. Sci.- 1999.- v 68.- № 2.-pp. 315-331.
126. Rotimic €., Luke A.? Li Z.N. Heritability of plasma leptin in a population sample of african-american familirs. // Genetic. Epidem.-1997.- v 14.- pp. 255-263.
127. Sanford T.K., Woads G. W. Expression of 11-1, IL-6 and tumor necrosis factor-a in mouse uterus during the pre-implantation period of pregnancy. //J. Reprod. Fertil.- 1993,- v 97.- pp. 83-89.
128. Sato S., Kanzaki H., Yoshida M. Studies of T-lineage cell in human decidua of first trimester pregnancy. //AJKI.- 1990.- v 24,- № 3.-pp.67-72.
129. Segerson E.G., Gunset F.C. In vitro and in vivo effect of lymphokineactivated killer cell upon preattachment ovine conceptuses. // J. Immunol.- 1994.- v 152.- № 6.- pp. 2938-2951.
130. Shabnam T.5 Wegmann T.G., Lin H., Raghupathy R. Maternal anti-placenta! reactivity in natural immunologically-mediated fetal resorptions. //J. immunol.- 1994.- v 152.- pp. 4903-4915.
131. Sheldon M. Bovine fertility-practical implication of maternal recognation of pregnancy. // Jn. Pract.- 1997.- v 9,- № 10.- pp. 546-556.
132. Schulre-OsthoffK., Ferrari D., Los M. Apoptosis signaling by death receptors. //Eur. J. Biochem.- 1998.- v 254,- pp. 439-459.
133. Simon C., Frances A., Piquette C.W., Danasonris J., Zu raw ski G. Embryonic implantation mice is bloked by IL-1 receptor antagonist. // Sndocrin 1994.- v 134.- № 2,- pp. 521-528.
134. Slam a H., Vaillancourt D., Goff A.K. Pathofhisiology of puerperal period relationship between PGF^ and uterine involution in cow. //Theriogenology.-1991.- v 36.- № 1.- pp. 6-11.
135. Srabo D.J., Dighe A S., Guller N. Regulation of interleukin (IL)-12R beta 2 subunit expression on developing T-helper 1 (Thl) and T-helper 2 (Th2). //E. Ex. Med.- 1997.- v 185.- pp. 817-824.
136. Sreenan J. M., Diskin M.G., Dunner L. Embryo mortality the major conse of reproductive wastage in cattle. // Stocarstovo.- 1997.- v 51.-№2.-pp. 93-112.
137. StollaR. Summersterilial bei rinden in Trope an. // Zuchtigene.1988.-v 23.-№6.-pp. 267-275.
138. Suzuki T., Hiromatsu K., Yoshihiro A. e.a. Regulatory role of yd T-cells in uterine intraepithelial lymphocytes in maternal antifetal immune response. //J, Immunol.- 1995.- v 154.- № 9,- pp. 4476-4484.
139. Suzuki H., Kanagawa H., Nishihira J. Evidence for the presence of macrophage migration inhibitory factor in murine reproductive organs and early embryos. //Immunol. Lett.- 1996.- v 51.- № 3.- pp. 141-147.
140. Taams L.S., Eden W., Wanbel H.M. Dose dependent induction of distinct anergic phenotypes: multiple levels of T-cell anergy. // J. Immunol.- 1999.- v 162.- № 4.- pp. 1975-1981.
141. Tanaka S., Kunath T., Wagy A. Promotion of trophoblast stem cell proliferation by FGF 4. // Scince.- 1998.- v 282,- № 5396.-pp. 2072-2075.
142. Tartakovski B., Ben-Yair E. Cytokine modulate preimplantation development and pregnancy. //Del. Biol.-1991.- v 146.- pp. 345-352.
143. Tezabwala B.U., Johnson P.M., Rees R.C. Inhibition of pregnancy viability in mice following IL-2 administration. // Immunol.1989.-v 67.-№ l.-pp. 115-119.
144. Thatcher W.W., Macmillian K.L., Hansen P.J,, Bazer F.W. Embryonic losses: cause and prevention./ Jn.: Factor affecting calf crop, (ed. Fields M.J., Sand R.S) USA, CRS Press.- 1994.- pp. 135-155
145. Toder U., Strassburger D., Irlin Y. Nonspecific inimunopotentiators and pregnancy loss: complete Freund adjuvant reverses high fetal resorption rate in CBA x DBA/2 mouse combination. II AJRI.- 1990,- v 24,- № 3.-pp. 63-64.
146. Tripathi D., Sharma S., Sing S.K. Identification of bovine sperm polypeptides reactive with antisperm antibodies. // Ind. J. Exp. Biol.- 1999.-v 37.-pp. 655-661.
147. Tsukagnehi K., Balaji R.W., Boom W.H. CD4 ap T-cell and y5 T-cell responsess to Micobacterium tuberculosis // J. Immunol.- 1995-v. 154,- № 4.- pp. 1786-1796.
148. Van Ren sen A.J., Pollen M.C., Van Els e.a. Anergic T-cell activation suppressor T-cell responses via the antigen presenting cell. // Eur. J.Immunol.- 1998.- v 28.-pp. 2902-2905.
149. Vlasselar P., Borremans B., Gorp U. IL-10 inhibits transforming growth factor-p (TGF-p) synthesis reguired for osteogenic commitment of mouse bone marrow cells. // J. Cell. Biol.- 1994,- v 124.- № 4.-pp. 569-577.
150. Wandi D., Allison J.P. Phenotypic analysis and y5 T-cell receptore of murine T-cell associated with the vaginal epithelium. // J. Immunol.- 1991.- v 147.- № 6.- pp. 1773-1778.
151. Wegmann T.G., Gnilbert L.J., Mosmann T.K., Lin H. Bidirectional cytokine interactions in maternal fetal relationship: Successful pregnancy is a Th-2 phenomen. // Immunol. Today 1993 -v 14.- pp. 353-358.
152. Whittle B.L., Smith R.M., Mathael R.J. Enhancement of the specific mucosal Ig A response in vivo by IL-5 expressed by an attenuatedstrain of Salmonella serotype dublin. if J. Med. Microbiol.- 199?.- v 46.-№ 12.-pp. 1029-1038.
153. Wolfeason D.? Blum 0. Embryonic development, conception rate, ovarion function and structure in pregnant rabbits heat stressed before or during implantation. // Anim. Reprod. Sci.- 1988,- v 3/4.-pp. 259-270.
154. Wrerychi C., De Sousa P., Herrmann D. Effect of diet type and quantity feed during superovulation on the relative abundance of m RNA of bovine embryos. if Theriogenology.- 1999.- v 51.- p. suppl.-abstr. 195.
155. Wyat C.R., Madruga C„ Cluff C. Differential distribution of yS T-cell receptor lumphocyte subpopuiation in blood and spleen of young and adult cattle. // Vet. Immunol., Immunopath- 1994.- v 40.- № 3,-pp. 187-199.
156. Xu Z.Z., Burton L.J. Effect oestrus synchonisation and fixed time artifical insemination on the reproductive performance of dairy heifers. // New. Zel. Vet. I.- 1999.- v 47,-pp. 101-104.
157. Yuade M.J., Roth J.A. Dual-color flow cytometric analysis of phenotype activation marker expression and proliferation of mitogen stimulated bovine lymphocyte subsets. // Vet. Immunol., Immunopath.-1999.-v 67,-№ l.-pp. 33-45.
158. Yu P.W., Schuler L.A., Rejman J.J., Chen H.T. Regulation of bovine IL-1 receptors, if Vet. Immunol. Immunophathol.- 1998.- v 63.-№ 1-2.- p. 25.
159. Yu W.N., KimuraM., Walezewska A. Role leptin in hypotalamic pituitary function, if Proc. Nath. Acad. Sci. USA.- 1997.- v 94.-pp. 1023-1028.108
160. Zuck ermann F. A., Head J.R. Murine trophoblast resists cell mediated lysis. II Resistence to natural cell-mediated cytotoxic. // Cell. Immun.- 1998.- v 116.- pp. 274-286.
-
Богданова, Наталья Владимировна
-
кандидата биологических наук
-
п. Быково, Московской обл., 2000
-
ВАК 03.00.13
- ИММУНОТРОФИЧЕСКАЯ ФУНКЦИЯ В РЕГУЛЯЦИИ НОРМАЛЬНОГО ЭМБРИОГЕНЕЗА У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
- Специфические и неспецифические иммуномодуляторы в повышении эмбриональной выживаемости крупного рогатого скота
- Иммунорегуляция эмбрионального развития. Экспериментальное моделирование
- Возрастные особенности крови плодов крупного рогатого скота
- Закономерности развития стенки тонкой кишки и ее эпителиальной ткани крупного рогатого скота в онтогенезе
