Специфическая профилактика инфекционного баланопостита откормочных бычков смешанной этиологии

Коннов, Максим Николаевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Специфическая профилактика инфекционного баланопостита откормочных бычков смешанной этиологии
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Специфическая профилактика инфекционного баланопостита откормочных бычков смешанной этиологии"

Па правах рукописи

конной

Максим Николаевич

СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННОГО БАЛАНОПОСТИТА ОТКОРМОЧНЫХ БЫЧКОВ СМЕШАННОЙ ЭТИОЛОГИИ

03.00.07 - микробиология

16.00.03 - ветеринарная мшфобиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Казань - 2004

Работа выполнена во ФГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт (г. Казань).

Научный руководитель:

Научный консультант:

Официальные оппоненты:

Ведущее учреждение:

Доктор ветеринарных наук, профессор Макаев Харис Нуртдинович

Доктор ветеринарных наук, профессор Гаффаров Харис Зарипович

Доктор ветеринарных наук, профессор Угрюмова Валентина Степановна Кандидат ветеринарных наук, доцент Сибгатуллин Рафаэль Сагидуллович

Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина

Защита состоится // 2004 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте (420075, г. Казань, Научный городок-2, ВНИВИ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института (г. Казань).

Автореферат разослан "а " /{) 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат ветеринарных наук, ^^^

ст. научный сотрудник В.И. Степанов

2005-4

L ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. Основными задачами ветеринарной медицины и агробиологической промышленности являются обеспечение ветеринарной службы страны препаратами для профилактики, диагностики и терапии болезней животных, расширение номенклатуры и объемов производства лекарственных средств, создание современных производств по выпуску импортозамещающих и конкурентоспособных на мировом рынке ветеринарных биопрепаратов против инфекционных болезней животных [Непоклонов Е.А., 2003].

Значительный экономический ущерб в ряде скотоводческих откормочных хозяйств Среднего Поволжья наносит инфекционный баланопостит, первичной этиологией которого является герпесвирус типа 1 крупного рогатого скота [Straub О.С., 1978; Андреев Е.В., 1979; Гаффаров Х.З., 1986], который осложняется разнотипной условно-патогенной микрофлорой. Гени-тальная форма болезни у коров и телок проявляется как инфекционный пустулезный вульвовагинит, у быков - в форме инфекционного баланопостита [Крюков H.H., 1970,1980].

В настоящее время эта инфекция диагностируется практически повсеместно [Закутский Н.И., 2000; Мищенко В.А., 2000; Нефедченко A.B., 2002].

Для специфической профилактики герпесвирусных инфекций крупного рогатого скота за рубежом и у нас в стране применяют живые и инактивиро-ванные вакцины, выпускаемые в виде монокомпонентных, ассоциированных и комбинированных препаратов. Однако эффективность их применения сильно варьирует в зависимости как от свойств биопрепарата, так и от состава осложняющей условно-патогенной микрофлоры.

Как свидетельствуют литературные данные [Коннов Н.М., Гаффаров Х.З., Равилов А.З. и др. 1980; Jensen IL, Mackey D., 1977], закономерное выделение из биоматериалов больных баланопоститом бычков, наряду с гер-песвирусом типа 1, анаэробных бактерий, идентифицированных как F. necrophorum, позволяет говорить о нем как о постоянном сопутствующем осложняющем факторе этого заболевания.

В этой связи представляется весьма актуальной разработка ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков на основе антигенов герпесвируса типа 1 и бактерий рода F. necrophorum, которая обеспечивала бы более эффективную защиту животных. Кроме того, введение в состав вакцины бактерий F. necrophorum, обладающих способностью вызывать гнойно-некротические поражения кожи, слизистых оболочек и подлежащих тканей, в конечном итоге приводящие к гибели животного, будет способствовать снижению частоты проявления этой патологии.

1.2. Цель и задачи исследований. Разработка ассоциированной инак-

тивированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных

бычков на основе антигенов герпесвируса типа-1 крупного рогатого скота и

РОС НАЦИОНАЛЬНА»

бактерий Р. песгорЬогит. Для достижения данной цели решали следующие задачи:

1. Изучить клинико-эпизоотологическис особенности проявления инфекционного баланопостита откормочных бычков в регионе Среднего Поволжья;

2. Выделить и изучить биологические свойства возбудителей инфекционного баланопостита откормочных бычков;

3. На основании результатов изучения этиопатогенеза и биологических свойств выделенных возбудителей инфекционного баланопостита бычков на откормочных площадках разработать технологию изготовления средства специфической профилактики, обеспечивающего эпизоотологическое благополучие скотоводческих хозяйств по данной инфекции;

4. Изучить иммунобиологические свойства вакцины, депонированной на основе гидроокисиалюминия и масляного адъюванта, провести оценку эффективности ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков смешанной этиологии в лабораторных условиях;

5. Испытать профилактическую эффективность изготовленной вакцины в условиях хозяйств, стационарно неблагополучных по инфекционному баланопоститу смешанной этиологии;

6. Разработать нормативно-техническую документацию на ассоциированную вакцину против инфекционного баланопостита откормочных бычков смешанной этиологии.

13. Научная новизна работы. Впервые на основании клинико-эпизоотологических и лабораторных исследований показан смешанный характер течения и особенности проявления инфекционного баланопостита откормочных бычков этиологически обуславливаемого герпесвирусом типа 1 и бактериями рода Р. песгорЬогит. Определен наиболее значимый в этиопато-генезе болезни возбудитель - бактерии Е песгорЬогит н изучены их основные биологические свойства.

Обоснованы технологические параметры изготовления ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков на основе антигенов герпесвируса типа 1 и бактерий рода Р. песгорЬогит.

Изучена динамика формирования иммунитета после одно- и двукратной вакцинации и подтверждена иммуногенная активность инактивирован-ной ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков в лабораторных и производственных условиях.

1.4. Практическая ценность. Результаты исследований явились основанием для составления научно-технической документации:

- Временной инструкции по изготовлению и контролю «Ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков,

инактивированной эмульсионной»;

■■

* * ' • го

т»« (яЯ

- Технических условий на «Ассоциированную вакцину против инфекционного баланопостита откормочных бычков, инактивированную эмульсионную»;

- Временного наставления по применению "Ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков, инактивирован-ной эмульсионной".

Нормативно-техническая документация одобрена Научно-методическим советом ВНИВИ (г. Казань) и утверждена Главным управлением ветеринарии Кабинета Министров Республики Татарстан.

1.5. Апробация работы. Материалы диссертации доложены на: научной конференции, посвященной 130-летию Казанской

государственной академии ветеринарной медицины, Казань, 2003 г;

- международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию факультета ветеринарной медицины Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии, Ульяновск, 2003 г.;

- международной научной конференции, посвященной 45-летию ФГУ ВНИИЗЖ, Владимир, 2003 г.;

- Всероссийской научно-практической конференции, КГАВМ, 2004 г.

1.6. Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 4 работы.

1.7. Основные положения, выдвигаемые на защиту:

научное обоснование целесообразности создания ассоциированной вакцины с учетом смешанного характера проявления инфекционного баланопостита откормочных бычков, обуславливаемого возбудителями вирусной и бактериальной природы;

лабораторный регламент технологии изготовления, контроля и применения ассоциированной вакцины;

результаты изучения иммуногенных свойств ассоциированной инактивированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков в лабораторных и производственных условиях.

1.8. Объем и структура диссертационной работы. Диссертация изложена на 134 страницах компьютерного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов собственных исследований, выводы, практические предложения, библиографический список использованной литературы (289 источников, в том числе 110 иностранных) и приложения. Работа иллюстрирована 11 таблицами, 2 графиками и 2 рисунками.

6 1

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы

Работа выполнена в 2001-2003 гг. в секторе контроля и стандартизации биопрепаратов, в лабораториях контроля и индикации возбудителей болезней молодняка с.-х. животных, контроля и индикации возбудителей вирусных и хламидийных инфекций в объектах ветнадзора ВНИВИ и в хозяйствах Республики Татарстан и Марий Эл, неблагополучных по инфекционному рино-трахеиту и некробактериозу крупного рогатого скота. Отдельные этапы исследований выполнены с участием кандидатов ветеринарных наук, старших научных сотрудников Гумерова В.Г., Спиридонова Г.Н., Хузина Д.А. и кандидата биологических наук, старшего научного сотрудника Акимова Е.К.

Эпизоотологическому обследованию были подвергнуты 10 неблагополучных по инфекционному баланопоститу бычков хозяйств Республик Татарстан и Марий - Эл. Анализ эпизоотической ситуации в неблагополучных хозяйствах проводили согласно рекомендациям, разработанным Бакуловым И.А., Юрковым Г.Г. (1975) и Джупина С.И. (1991).

Диагноз на инфекционный баланопостит/пустулёзный вульвовагинит (ИБП/ИПВ) в обследованных хозяйствах устанавливали на основании эпизо-отологических, клинических, патологоанатомических, бактериологических, вирусологических и серологических исследований. Некробактериоз диагностировали в соответствии с «Методическими рекомендациями по лабораторным методам диагностики некробактериоза сельскохозяйственных животных» (1987).

В процессе выполнения работы были использованы:

а) вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота:

- вакцинный штамм «ТК-А (ВИЭВ)-В2\>;

- полевой штамм «МБ-7»;

б) возбудитель некробактериоза крупного рогатого скота:

- полевой штамм «Л-2» Fusobacterium necrophorum;

- эпизоотический штамм «Кон» Fusobacterium necrophorum.

в) культуры клеток:

- культура перевиваемых клеток почки эмбриона коровы (линия MDBK);

- культура перевиваемых клеток трахеи эмбриона коровы (линия TR).

г) питательные среды для культур клеток:

- среда Игла MEM (рН 7,5 -7,6) с глутамином;

- 0,5 % раствор гидролизата лактоальбумина на растворе Хенкса;

- синтетическая среда 199;

- сбалансированный раствор Хенкса по стандартной прописи рН 7,17,4;

- сыворотка крови крупного рогатого скота.

д) питательные среды для бактериологических исследований:

- МПА, МПБ, Сабуро, Китта-Тароцци, ФМПГ.

При проведении экспериментов использовали лабораторных и естественно восприимчивых животных: кроликов с массой 2,0-2,5 кг, белых мышей с массой 18-20 г., крупный рогатый скот - откормочных бычков 6-20 месячного возраста черно-пестрой породы.

С целью выделения предполагаемых возбудителей баланопостита из материала от больных, вынужденно убитых и павших животных, брали смывы из препуциального мешка, кусочки слизистой оболочки половых органов. Из этих материалов готовили 10% суспензии на растворе Хенкса, которыми заражали перевиваемую линию культуры клеток МОВК.

Первоначальную идентификацию выделенных цитопатогенных агентов проводили путем определения типа нуклеиновой кислоты по методу Майра и др. [Лярский 3., 1980], с использованием 5-бром-дезоксиуридина.

Электронно-микроскопическую идентификацию выделенных штаммов вирусов проводили методом негативного контрастирования при инструментальном увеличении 3000-5000 под электронным микроскопом ШМ-100В.

Для выделения этиологических агентов бактериальной природы из патологического материала делали высевы на питательные среды МПА, МПБ, Сабуро и Китта-Тароцци. После обнаружения в мазках характерных форм грамотрицательных микроорганизмов, предположительно ставили диагноз на некробактериоз. Окончательное заключение делали по результатам биопробы на лабораторных животных и выделения чистой культуры.

Дополнительно проводили серологические исследования крови с использованием РИГА, РВН, ИФА и РНИФ.

Постановку РИГА и ИФА для выявления специфических антител к вирусу ИРТ проводили согласно "Временным наставлениям по применению наборов препаратов", разработанным сотрудниками ВНИВИ [Гумеров В.Г., Галиуллин А.К., 2000 г.].

Постановку реакции вируснейтрализации осуществляли согласно общепринятой методике [Сюрин В.Н. и др., 1986], используя при этом вирус штамм "ТК-А(ВИЭВ) В-2" с инфекционной активностью 6,0 ^ ТЦД^мл. Титром сыворотки считали предельное ее разведение, сдерживающее развитие ЦП Д вируса в 50% зараженных культур клеток.

Постановку ИФА для выявления специфических антител к возбудителю некробактериоза осуществляли согласно методическим рекомендациям, разработанным сотрудниками ВНИВИ [Акимов Е.К. и др. 1998].

При исследовании проб сыворотки крови для обнаружения специфических антител к возбудителю некробактериоза с помощью РНИФ использовали взвесь микробных клеток возбудителя некробактериоза густотой 5 ед. стандарта мутности, фиксированную на предметном стекле. После обработки стекол разведениями сывороток крови больных животных в титрах 1:10, 1:20 ... 1:2560, препараты подвергали отмывке и выявляли образовавшиеся иммунные комплексы коммерческой флуоресцирующей антибычьей сывороткой. Учет реакции проводили на микроскопе "МЛ-ЗУ 4.2".

Интенсивность свечения клеток фузобактерий оценивали по 4-х бальной системе. Наибольшее разведение исследуемой сыворотки, при котором отмечается специфическое свечение микробных клеток не менее чем на два плюса, принимали за титр антител.

Т- и В-лимфоциты выделяли на градиенте плотности методом центрифугирования, их идентификацию осуществляли методами Е-РОК и ЗС3-РОК.

Эффективность опытных серий ассоциированной инактивированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков изучали в лабораторных и производственных условиях. В качестве контроля использовали вакцины:

- инактивированную вакцину против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота;

- полиштаммовую формол-эмульсионную вакцину против некробакте-риоза крупного рогатого скота.

Оценку иммуногенной активности двух экспериментальных вариантов инактивированной ассоциированной вакцины (гидроокисьалюминиевой и эмульсионной) против инфекционного баланопостита откормочных бычков проводили на 24 кроликах весом 2-2,5 кг, разделенных на 8 основных групп - по 3 головы в каждой.

Кроликов первой, второй и третьей групп иммунизировали подкожно гидроокисьалюминиевой вакциной соответственно в дозах 1,0; 2,0 и 3,0 см3/гол.

Животным четвертой, пятой и шестой групп вводили эмульсионную вакцину внутримышечно в дозах 0,5; 1,0 и 2,0 см /гол соответственно.

Животные седьмой и восьмой групп служили контролем - их не вакцинировали.

На 14 день после вакцинации животные с 1 по 6 группы были повторно иммунизированы выше указанными вакцинами в тех же дозах.

С целью изучения сероконверсии специфических антител у подопытных животных брали кровь до вакцинации; на 7, 14, 21 и 51 дни после вакцинации, а так же на 5, 35 и 50 дни после заражения. Антитела к вирусу ИРТ определяли в реакциях ИФА, РНГА и РВН, а к возбудителю некробактериоза в реакциях ИФА и РНИФ.

На 60-ый день после вакцинации все кролики, как подопытных так и контрольных групп, были подвергнуты заражению изолятом вируса ИРТ и возбудителем некробактериоза.

В последующем изучение иммуногенности двух вариантов (ГОА и эмульсионной) ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита проводили на 6-20-месячных бычках в условиях двух неблагополучных по ИРТ и некробактериозу хозяйств Республики Татарстан.

В опыте по определению оптимальной иммунизирующей дозы вакцины и изучению ее протективности использовали 36 откормочных бычков 810 месячного возраста.

Производственное сравнительное изучение профилактической эффективности двух выше указанных вариантов ассоциированной инактивирован-ной вакцины против инфекционного баланопостита, проводили на 419 бычках 6-20 месячного возраста в двух неблагополучных по ИРТ и некробакте-риозу хозяйствах Республики Татарстан.

Статистическую обработку полученного материала проводили общепринятыми методами вариационной статистики с помощью критерия Стью-дента с применением пакета прикладных программ Microsoft Excel 2000.

2.2. Особенности клгатко-этсоогатогичсского проявления инфекционного баланопостита откормочных бычков смешанной этиологии

При обследовании 10-ти неблагополучных по ИРТ и некробактериозу крупного рогатого скота хозяйств было установлено, что во всех хозяйствах инфекционный баланопостит регистрируется у откормочных бычков 6-20-месячного возраста. Клинически заболевание проявлялось воспалением, отеком, некрозом и вывертыванием препуция у быков, которые откармливались на площадке 100 и более дней. В отдельных случаях регистрировали заболевание у животных только что поступивших на откорм. Наиболее высокая частота заболевания приходилась на весенние и осенние месяцы и совпадала с периодом дождей и появлением грязи в загонах.

Так, в отделении "Алга" ОГК им. Ленина Тюлячинского района РТ в 1998-2002 гг., где содержались бычки на откорме 6-20 месячного возраста в количестве 600-800 голов, ежегодно наблюдался инфекционный баланопостит на фоне циркуляции среди поголовья герпесвируса типа 1 крупного рогатого скота. Частота заболевания колебалась от единичных случаев до 35% животных. Летальность пораженных животных не превышала 1-5%.

Выяснилось, что быстрому перезаражению поголовья бычков, которые откармливались на площадке 100 и более дней, способствовала безвыгульная технология выращивания и откорма, содержание в летне-осенние месяцы на плохо дренированных откормочных площадках, размещенных в низинах, а зимой - в помещениях, построенных из железобетонных конструкций, в условиях высокой влажности, зановоженности и большой скученности на ограниченной площади. Аналогичное заболевание с признаками поражения наружных половых органов наблюдали среди 60 откормочных бычков 8-12 месячного возраста в СПК им. Нариманова Лаишевского района РТ.

При тщательном клиническом осмотре больных бычков было установлено, что первичный воспалительный процесс локализовался в препуции, где наблюдали отек и гиперемию слизистой оболочки. Затем на поверхности слизистой появлялись мелкие, а тогда довольно крупные (величиной с горох) бесцветные и розовые пузырьки, содержимое которых мутнело и они превращались в пустулы. Наступало флегмонозное воспаление, которое быстро распространялось по подкожной клетчатке. Воспалительный процесс быстро прогрессировал, отек и некротический процесс охватывал весь пре-

пуциальный мешок и переходил на окружающую кожу и подкожную клетчатку живота. Животные погибали на 2-4 сутки, если своевременно не проводился курс этиотропного лечения.

Для выяснения этиологии баланопостита в лабораториях вирусологии и биотехнологии ВНИВИ были проведены серологические, вирусологические и бактериологические исследования.

При заражении перевиваемой линии культуры клеток МГОВК 10%-ными суспензиями патологических материалов на растворе Хенкса на втором пассаже был выделен инфекционный агент, вызывающий такой же цитопа-тический эффект, что и вакцинный штамм вируса инфекционного ринотра-хеита "ТК-А (ВИЭВ)-В2И.

Исследованием 80 проб сывороток крови, взятых однократно от больных и переболевших животных, были выявлены нейтрализующие антитела в титре 1:4-1:8 и гемагтлютинирующие антитела в титре 1:16-1:64 к антигену вируса инфекционного ринотрахеита.

При исследовании этих же сывороток крови в РНИФ были выявлены антитела против И. песгорЬогиш в ттрах 1:80-1:160.

Микроскопией мазков-отпечатков патологического материала обнаруживали грамотрицательные нитевидные палочки и нити с характерной зернистостью, морфологически типичные для возбудителя некробактериоза.

При изучении культурально-морфологических и биологических свойств, полученные изоляты были определены как Р. песгорЬогиш, относящиеся к биотипу АБ.

Таким образом, проведенные клинико-эпизоотологические и лабораторные исследования показали, что в вышеуказанных хозяйствах неблагополучных по ИРТ и некробактериозу крупного рогатого скота регистрировали баланопостит смешанной вирусно-бактериальной этиологии.

В связи с этим перед нами была поставлена цель - провести дополнительные серологические, вирусологические и бактериологические исследования выделенных инфекционных агентов для подтверждения предварительного диагноза.

2.3. Выделение и изучение биологических свойств этиологических агентов, вызывающих инфекционный баланопостит откормочных бычков

С этой целью нами были взяты пробы патологических и клинических материалов от больных, вынужденно убитых и павших животных в 10-ти неблагополучных по инфекционному баланопоститу бычков хозяйствах Республик Татарстан и Марий-Эл.

Как отмечалось ранее вирусологическими исследованиями патологического материала, взятого от вынужденно убитого бычка из СПК им. Нариманова был выделен на культуре клеток инфекционный агент, обозначенный нами как «МБ-7», вызывающий аналогичный с вакцинным штаммом ИРТ цитопатический эффект. В таблице 1 приведены результаты сравнительного

изучения биологических свойств вакцинного штамма ИРТ с изолятом «МБ-7».

Таблица 1.

Результаты изучения биологических свойств _выделенного вирусного агента_

№ п/п Наименование штаммов Инфекционная активность на к/кл^ТЦД 50/мл Чувствительность штаммов к РГА с 1% ЭМС Нейтрализующая активность специфически* аитисывороток (1ов2)

5-бромде-зоксиу-ридину, ^ ТЦД 50'чл хлороформу, 18 ТЦД 50/мл 5б°С мин рн 3,0 и 5,0 тцц 50/мл ПГ-3, шт «птк -2» ИРГ. шт «тк- А» Хла ми-диоз, шт «250»

1 Вакцинный штамм «ТК-А(ВИЭВ)В-2» 6,5 3,25 0 20 5,75 6.0 0 0 7,5 0

2 Изолят «МБ-7» 6,25 3,5 0 25 5,5 5,75 0 0 6,0 0

По данным электронной микроскопии, размеры вирусных частиц колебались в пределах 140-180 нм, а их нуклеокапсидов - 105-110 нм. Во всех препаратах, приготовленных из полевого штамма вируса, присутствовали как безоболочные «голые» вирионы, так и вирионы с суперкапсидной оболочкой. В зависимости от структуры капсида различались «полные» вирионы с оптически-плотным нуклеотидом и «пустые» - с прозрачной сердцевиной.

Таким образом, на основании изучения биологических, морфологических и серологических свойств, данный изолят был идентифицирован как вирус инфекционного ринотрахеита.

При бактериологическом исследовании патологического материала от бычков с признаками баланопостита в среде Китта-Тароцци нами был выделен инфекционный агент, который давал рост через 48-96 часов при температуре 37°С в строго анаэробных условиях. В начале происходило помутнение в нижних слоях пробирки, а затем и всего столбика среды. В среде с добавлением глюкозы отмечали газообразование. Через 2-е суток роста наступала самоагглютинация - кусочки печени покрывались слизистым серым налетом. Для усиления роста возбудителя некробактериоза в среду добавляли 10% свежей крови крупного рогатого скота. Одновременно с усилением роста происходил быстрый гемолиз. Хорошим стимулятором роста являлся цис-теин, которого добавляли 0,03-0,05%. Для идентификации возбудителя некробактериоза из полученных культур готовили серию мазков на предметных стеклах. Густота мазка была такой, чтобы в поле зрения микроскопа было несколько десятков микробов. Мазки фиксировали метиловым спиртом в течение 15 минут. Затем их помещали в чашки Петри на мостиках с влажными тампонами и на каждый мазок наносили 1-2 капли специфической антинек-рофорусной сыворотки меченой ФИТЦ в рабочем разведении и оставляли при комнатной температуре в закрытых чашках Петри в течение 15 минут. Затем препараты промывали 4 раза физиологическим раствором, ополаскивали дистиллированной водой и подсушивали на воздухе. Перед микроско-

пированием мазки увлажняли одной каплей забуферного до рН 8,0 глицерина и накрывали покровными стеклами, на которые наносили каплю диметил-фталата. При люминисцентной микроскопии мазков нами было обнаружено специфическое свечение полиморфных палочек (0,5-10 мкм длиной) и нитей (до 300 нкм длиной) характерных для возбудителя некробактериоза. Данный изолят возбудителя некробактериоза обозначен нами "Л-2".

Представленные результаты клинико-эпизоотологических, вирусологических и бактериологических исследований свидетельствуют о вирусно-бактериальной этиологии инфекционного баланопостита бычков в обследованных хозяйствах.

В связи с этим, было решено разработать биологический препарат для специфической профилактики инфекционного баланопостита на основе антигенов герпесвируса крупного рогатого скота типа 1 и бактерий РшоЬайегшт песгорЬогат.

2.4. Лабораторный регламент технологии изготовления вакцины

Для изготовления ассоциированной инактивированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков использовали полевой штамм бактерий Р.песгорЬогит «Л-2», выращенный на питательной среде на основе ферментативно маточно-плацентарного гидролизата (ФМГТГ) и биомассу герпесвируса крупного рогатого скота (штамм «ТКА-ВИЭВ-В2», инфекционный титр 7,0-7,5 ^ТЦЦ 50/мл), полученную на перевиваемой культуре клеток трахеи эмбриона коровы (линия ТИ), в роллерных трехлитровых бутылях на комбинированной ростовой среде, состоящей из среды 199 - 10%, ГЛА - 40%, среды Игла МЭМ - 40% и сыворотки крови крупного рогатого скота -10%.

Наработанную биомассу обоих инфекционных агентов подвергали инактивации формалином с последующим контролем на стерильность.

Состав компонентов экспериментальных серий ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков представлен в таблицах 2 и 3.

Таблица 2.

Состав компонентов экспериментальных серий ассоциированной

гидроокисьалюминиевой вакцины против инфекционного _баланопостита откормочных бычков_

Компоненты вакцины Содержание их в 1 л. вакцины (в мл)

Антиген Bovine Herpesvirus, шт. «ТКА-ВИЭВ-В2» с инфекционным титром 7,0-7,5 lgTI-Щ 50/мл 700

Антиген Fusobacterium necrophorum, шт. «Л-2», содержащий 15 мг/мл специфического белка 200

6%-ный раствор гидроокисиалюминия 100

Таблица 3.

Состав компонентов экспериментальных серий ассоциированной эмульсионной вакцины против инфекционного баланопостита

Компоненты вакцины Содержание их в 1 л. вакцины (в мл)

Антиген Bovine Herpesvirus, шт. «ТКА-ВИЭВ-В2», содержащий 30-35 мг/мл, белка в 1 мл 250

Антиген Fusobacterium necrophorum, шт. «Л-2», содержащий 15 мг/мл специфического белка 250

Адъювант масляный 500

Проведенный контроль каждой серии вакцины на стерильность, безвредность и иммуногенность показал, что биопрепараты соответствуют требованиям, предъявляемым к инактивированным вакцинам.

2.5. Изучение иммуногенной активности ассоциированной инактивированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков на лабораторных животных

Оценку иммуногенной активности двух вариантов инактивированной ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков проводили на 24 кроликах весом 2-2,5 кг, разделенных на 8 основных групп - по 3 головы в каждой.

Результаты серологических исследований до введения вакцин, показали, что у всех опытных кроликов, а у контрольных - до заражения вирулентными изолятами вируса ИРТ и возбудителя некробактериоза антитела отсутствовали.

При исследовании сывороток крови на 7-й день после вакцинации были выявлены антитела к вирусу ИРТ в титрах 0,4-1,5 log2 в РВН, 2,0-3,5 log2 в РИГА и 4,2-5,6 log2 в ИФА, а к F. necrophorum в титрах 4,0-5,6 log2 в РНИФ и 4,0-6,1 lofo в ИФА. Максимальное накопление специфических антител у опытных кроликов против обоих возбудителей было выявлено на 30-50 дни после вакцинации. При этом антитела к вирусу ИРТ регистрировались в титрах на 2,9-5,1 log2 в РВН; 4,6-6,2 1о& в РИГА; 6,9-9,2 1о& в ИФА икр. necrophorum на 7,2-9,5 log2 в РНИФ и 7,7-10,6 log2 в ИФА выше чем у контрольных животных.

На 60-ый день с начала опыта все кролики, как из опытной, так и контрольной группы были подвергнуты заражению изолятами вируса ИРТ и возбудителя некробактериоза. При исследовании сывороток на 5-ый день после инфицирования был выявлен незначительный (на 0,3 - 1,4 log2) прирост антител у всех животных к вышеуказанным возбудителям. Серологические исследования, проведенные на 35-ый день после заражения, показали резкое снижение титров антител к вирусу ИРТ (на 0,2 - 2,5 log2) и к F. necrophorum (на 3,0 - 3,7 log2) у кроликов, вакцинированных ГОА-вакциной. В то же вре-

мя у животных, вакцинированных эмульсионной вакциной, в дозе 1,0 и 2,0 см3 титры антител оставались на том же уровне к вирусу ИРТ или были всего на 0,3 - 0,5 1о^2 ниже к возбудителю некробактериоза. О более низком иммунитете у кроликов, вакцинированных ГОА-вакциной, свидетельствует и тот факт, что в каждой группе животных был отмечен падеж: 1-я группа - 2 головы, 2 и 3-я группы - по одной голове при 100%-ной гибели всех контрольных кроликов.

На 50-й день после контрольного заражения пали все кролики, вакцинированные ГОА-вакциной, и только одно животное из 4-ой группы, привитой эмульсионной вакциной в дозе 0,5 см3.

Таким образом, эмульсионный вариант вакцины против инфекционного баланопостита обладает более высокой иммуногенной активностью, чем ГОА-вакцина и двукратное введение препарата животным в дозе 1,0 и 2,0 см3/гол. обеспечивает их защиту от смешанной герпесвирусной и некробак-териозной инфекции.

Изучение особенностей клеточного и гуморального факторов иммунитета после введения ассоциированной вакцины проводились у кроликов, вакцинированных в дозе 2,0 см ГОА вакцинной и в дозе 1,0 см3 эмульсионной вакциной. Контролем при этом служили кролики из контрольной (не вакцинированной) группы. Взятие крови для иммунологических исследований осуществляли до вакцинации, через 14 дней после первой вакцинации и 35 дней после второй вакцинации.

Нами установлено, что процент В-клеток до вакцинации во всех трех группах составлял в среднем 16,3±0,3 - 17,2±0,4; то после первой вакцинации их уровень в подопытных группах равнялся 20,8±0,7 - 20,3±0,4; а после ревакцинации они достигали максимального значения 24,6±0,7 - 25,3±0,4. У контрольных кроликов процент В-клеток оставался на исходном уровне и равнялся 16,4±0,3. Уровень Т-лимфоцитов в крови кроликов, иммунизированных ГОА и эмульсионной вакциной, статистически достоверно повышался только после второй вакцинации (р<0,05).

Из приведенных данных следует, что в иммунном ответе на введение инактивированной вакцины участвуют обе системы защиты с преобладающей ролью гуморальных факторов - статистически достоверное увеличение В-лимфоцитов отмечалось после первой вакцинации (р<0,01), а после второй вакцинации (р<0,001) по отношению к контрольной группе (25,3±0,4 и 16,4±0,3 соответственно).

2.6. Изучение иммуногенной активности и оценка эффективности ассоциированной инактивированной вакцины против инфекционного баланопостита на откормочных бычках

Иммуногенность двух вариантов (ГОА и эмульсионной) ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита изучали на 6-20-месячных бычках в условиях двух неблагополучных по ИРТ и некробакте-риозу хозяйств Республики Татарстан.

В опыте по определению оптимальной иммунизирующей дозы вакцины и изучению ее протективности использовали 36 откормочных бычков 810 месячного возраста. Животных разделили: на: 6 опытных групп и 3 контрольные по 4 головы в каждой.

Бычков 1-3-ей опытных групп вакцинировали 2-кратно ГОА вакциной в дозах 2,0; 5,0 и 8,0 см3 соответственно. Животным с 4-6-ой опытных групп вводили эмульсионную вакцину 2-кратно с интервалом 14 дней в дозах ¡,0; 2,0 и 4,0 см соответственно.

Седьмую контрольную группу бычков вакцинировали коммерческой инактивированной вакциной против ИРТ крупного рогатого скота (контроль 1) и восьмую контрольную группу животных - иммунизировали полиштам-мовой формол-эмульсионной вакциной против некробактериоза крупного рогатого скота (контроль 2). Вакцины вводили бычкам согласно наставлений по их применению.

Животных девятой группы в количестве 4-х голов (контроль 3) не вакцинировали ни одним из выше указанных биопрепаратов.

Динамику накопления специфических антител к вирусу инфекционного ринотрахеита определяли в РНГА, а к возбудителю некробактериоза в РНИФ (таблица 4).

Таблица 4

Динамика накопления антител в сыворотке крови бычков (М±т, п=4)

№ груп пы Доза вакцины, см3 Антитела к Тигры антител (1оь)

Сроки исследования проб (дни)

до вакц. 0 ревакц. 14 • 45 75 180

1 2 3 4 5 6 7 8

Опытные группы бычков, вакцинированные ГОА вакциной

1 2,0 вирусу ИРТ 1,53±0,29 3,91±0,21 5,59±0,11 5,93±0,24 3,91±0,22

Р.песгорЬогит 3,19±0,24 4,74±0,15 6,41±0,3^ 6,86±0,18 5,17±0,28

2 5,0 вирусу ИРТ 1,62±0,18 4,29±0,14 6,24±0,2^ 6,32±0,27 4,72±0,17

Р.песгорЬогит 3,41±0,18 5,20±0,24 7,09±0,19 7,49±0,12 5,89±0,15

3 8,0 вирусу ИРТ 1,64±0,36 4,44±0,20 6,58±0,14 6,59±0,19 4,88±0,29

Р.песгорЬогит 3,37±0,42 5,18±0,18 7,31±0,26 7,67±0,20 6,08±0,24

Опытные группы бычков, вакцинированные эмульсионной вакциной

4 1,0 вирусу ИРТ 1,49±0,34 3,31±0,18 4,90±0,28 6,14±0,22 |5,61±0,25

Р.песгорЬогит 2,58±0,29 3,72±0,26 5,91±0,24 7,31±0,34 й,62±0,24

5 2,0 вирусу ИРТ 1,81 ±0,3 7 3,72±0,32 5,59±0,31 6,88±0,24 1б,42±0,29

Р.песгорЬогит 3,06±0,19 4,34±0,22 6,42±0,27 7,75±0,18 |7,39±0,20

6 4,0 вирусу ИРТ 1,63±0,22 3,77±0,11 5,79±0,16 6,97±0,18 |б,65±0,18

Р.песгорЬогит 3,11±0,25 4,39±0,27 6,59±0,23 7,78±0,21 7,54±0,29

Контрольные группы бычков: вакцинированные коммерческой вакциной против ИРТ

7 10,0 ревак-цин.

вирусу ИРТ 1,70±0,42 2,73±0,22 4,62±0,11 6,83±0,18 5,41±0,14

Р.песгорЬогит 3,24±0,35 3,13±0,18 3,46±0,22 3,84±0,19 3,78±0,29

1 2 3 i 4 | 5 I 6 | 7 I 8

8 2,0 вакцинир. коммерч. вакциной против нек робактериоза

вирусу ИРТ 1,84±0,27 1,82+0,32 2,24±0,24 2,26+0,20 2,90±0,31

F.necrophorum 3,09+0,31 4,92±0,29 7,08+0,18 7,34±0,18 5,77±0,21

9 - не вакцинированные животные

вирусу ИРТ 1,91 ±0,28 1,81±0,11 2,43±0,08 2,27+0,21 2,80+0,33

F.necrophorum 3,18±0,16 3,03+0,09 3,44±0,11 3,60+0,08 3,42±0,12

Как видно из таблицы, до вакцинации у откормочных бычков всех групп выявились антитела в титрах ниже диагностического уровня (1:4 - 2,0 !og2 в РИГА к вирусу ИРТ и 1:20 - 3,0 1о& к F. necrophorum в РНИФ). Через 14 дней после первой вакцинации ГОА вакциной титры антител у животных первой группы составили: к вирусу ИРТ 3,9±0,21 log2 и к F. necrophorum 4,7+0,15 log2; у второй и третьей группы бычков эти показатели были почти на одном уровне и составили соответственно: к вирусу ИРТ 4,2+0,14 log2 и 4,4±0,2 log2, а к F. necrophorum 5,2±0,24 log2 и 5,1 ±0,18 log2, у животных из контрольных седьмой и восьмой групп были выявлены антитела к вирусу ИРТ в титре 2,7±0,22 log2 икр. necrophorum 4,9±0,29 log^ титры антител у девятой контрольной (не вакцинированной) группы бычков составили: к вирусу ИРТ 1,8±0,11 log2, а к F. necrophorum 3,0±0,09 log2.

При исследовании сывороток крови у животных вакцинированных эмульсионной вакциной на 14 день после первого введения препарата были выявлены антитела в титрах: у четвертой группы бычков к вирусу ИРТ 3,3±0,18 log2, к возбудителю некробактериоза 3,7±0,26 log2; у пятой и шестой группы животных титры антител были на одном уровне, и составляли: к вирусу ИРТ 3,7±0,32 log2, к F. necrophorum 4,3±0,27 log2-

Максимальное накопление поствакцинальных антител у откормочных бычков вакцинированных как ГОА вакциной, так и эмульсионной происходило к 2 месяцам после повторного введения биопрепаратов. При этом титры антител у животных 1-ой группы составили: к вирусу ИРТ 5,93±0,24 log2 и к F. necrophorum 6,8б±0,18 log2; а у бычков 2-ой и 3-ей группы существенно не отличались и были на уровне 6,32±0,27 log2 и 6,59±0,19 log2 соответственно к вирусу ИРТ, а к возбудителю некробактериоза 7,49+0,12 log2 и 7,67±0,26 Iog2 соответственно. Титры антител у животных 4-ой группы вакцинированных эмульсионной вакциной составили: к вирусу ИРТ 6,14±0,22 log2 и к F. necrophorum 7,31±0,34 log2; титры антител у бычков 5-ой и 6-ой группы были почти одинаковы и составили: к вирусу ИРТ б,88±0,24 log2 и 6,97±0,18 log2, а к F. necrophorum 7,75±0,18 log2 и 7,78±0,21 log2 соответственно. Титры антител у животных 7-ой и 8-ой группы вакцинированные коммерческими вакцинами составили: к вирусу ИРТ 6,83+0,18 log2 и к F. necrophorum 7,34+0,18 log2; титры антител у 9-ой контрольной (не вакцинированной) группы бычков

к вирусу ИРТ и Р. песгорЬогиш практически не изменялись и колебались в пределах диагностического уровня.

При исследовании сывороток крови у животных после шести мссяисп (срок наблюдения) с начала вакцинации регистрировали значительное снижение (на 1,6-2,0 1оа) антител к вирусу ИРТ и к возбудителю некробакте-риоза у бычков иммунизированных ГОА вакциной, а у животных вакцинированных эмульсионным вариантом препарата изменения этих показателей были незначительными (0,3-0,6 1о&).

Таким образом, результаты проведенных исследований по изучению антигенной активности ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков показали, что оба варианта биопрепарата после 2-кратного введения животным обеспечивают выработку специфических антител против вируса ИРТ и Р. песгорЬогиш, которые достигают максимального уровня к 2 месяцам после ревакцинации. Однако следует отметить, что при сопоставлении результатов серологических исследований установлена более высокая антигенная активность эмульсионной вакцины по сравнению с ГОА вакциной. При этом оптимальными иммунизирующими дозами для откормочных бычков являются 5,0 см3 для ГОА вакцины и 2,0 см3 для эмульсионного препарата.

В дальнейшем была проведена сравнительная оценка профилактической эффективности двух выше указанных вариантов ассоциированной инак-тивированной вакцины против инфекционного баланопостита, на 419 бычках 6-20 месячного возраста в двух неблагополучных по ИРТ и некробактериозу хозяйствах республики Татарстан. С этой целью в каждом хозяйстве животных разделили на 3 группы. Первую группу бычков дважды с интервалом 14 дней вакцинировали ГОА вакциной в дозе 5,0 см3, вторую группу 2-кратно в дозе 2,0 см3 эмульсионной вакциной, а третья группа животных служила контролем, их не вакцинировали. Схема и результаты исследований представлены в таблице 5.

Анализ результатов производственных опытов показал, что в ОПХ им. Ленина среди бычков 1-ой группы заболело 12 животных (17,1%); во 2-ой -16 голов (12,5%), а в 3-ей контрольной группе - 9 бычков (36,0%). Больные животные были отобраны в отдельную группу и подвергнуты лечению поливалентной гипериммунной сывороткой против ПГ-3, ИРТ и хламидиоза крупного рогатого скота, а также обработке препаратом "Фузобаксан". Бычки которые не поддавались лечению были в дальнейшем выбракованы. Сохранность животных в 1-ой группе составила 88,6%, во 2-ой группе - 96,9% и в 3-ей контрольной группе - 76,0%.

Результаты исследований, которые были проведены в СПК им. Нариманова показали, что наибольшую сохранность бычков (96,7%) обеспечивала эмульсионная вакцина. В то же время в группе животных, которым вводили ГОА-вакцину, сохранность бычков в течение 6 месяцев составила 91%, а в контрольной (не вакцинированной) группе - 66,7%.

Таблица 5 - Профилактическая эффективность ассоциированной инактивированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков в производственных условиях

Наименование хозяйства Группы Кол-во животных Заболело Выбраковано Обеспечена сохранность поголовья, в %

Кол-во % Кол-во %

ОПХ имени Ленина Тюля-чинского района РТ 1 70 12 17,1 8 11,4 88,6

2 128 16 12,5 4 3,1 96,9

3 25 9 36,0 6 24,0 76,0

СПК имени Нариманова Лаишевского района РТ 1 55 10 18,1 5 9,0 91,0

2 120 12 10,0 4 з,з 96,7

3 21 9 42,8 7 33,3 66,7

Обобщенные данные 1 125 22 17,6 13 10,4 89,6

2 248 28 11,2 8 3,2 96,8

3 46 18 39,1 13 28,2 71.8

Примечание: 1 группа - животные, вакцинированные ассоциированной инактивированной ГОА вакциной

против инфекционного баланопостита откормочных бычков

2 группа - животные, вакцинированные ассоциированной инактивированной эмульсионной

вакциной против инфекционного баланопостита откормочных бычков

3 группа - контрольные животные (не вакцинированные)

Анализ обобщенных данных по двум выше указанным хозяйствам показал высокую протективность ассоциированной инактивированной -эмульсионной вакцины по сравнению с аналогичной вакциной, в которой вместо масляного адъюванта использовали гидроокись алюминия.

Таким образом, разработанная нами ассоциированная инактивированная эмульсионная вакцина против инфекционного баланопостита обуславливав формирование у откормочных бычков после 2-кратного внутримышечноп-введения в дозе 2,0 см3 напряженного иммунитета, обеспечивающего до 96,8°' сохранность вакцинированных животных в условиях неблагополучных по ИРТ и некробактериозу хозяйств.

3. ВЫВОДЫ

1. Клинико-эпизоотологическими исследованиями и изучением патоло-гоанатомической картины выявлены характерные особенности течения баланопостита среди откормочных бычков в ряде неблагополучных хозяйств Республики Татарстан и Марий-Эл. Установлены потенциальные источники возбудителей и механизмы их передачи.

2. В результате вирусологических и бактериологических исследований доказано, что этиологическими агентами, вызывающими инфекционный ба-ланопостит откормочных бычков, являются герпесвирус типа 1 и бактерии Fusobacterium necrophorum. Изучены основные культурально-биохимические и иммунобиологические свойства выделенных возбудителей и определен наиболее значимый осложняющий процесс возбудитель болезни - бактерии F. necrophorum, что изменило традиционное представление об этиопатогенезе изученной формы патологии. Впервые показано, что баланопостит у откормочных бычков протекает, в основном, в виде смешанной инфекции.

3. Комплексными исследованиями и с учетом анализа литературных данных обоснована целесообразность разработки ассоциированной инактивированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков.

4. Разработан лабораторный регламент технологии изготовления и контроля ассоциированной инактивированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков.

5. Сравнительное испытание гидроокисьалюминиевой и эмульсионной вакцин на кроликах показало, что масляный вариант биопрепарата обладает более выраженной антигенной активностью, обеспечивает к 30-50 дням после двукратного внутримышечного введения максимальную выработку специфических антител: к вирусу ИРТ в титрах 3,4-5,1 1о& в РВН; 4,9-6,2 log2 в РИГА; 7,9-9,2 log2 в ИФА и к F. necrophorum 8,6-10,6 log2 в ИФА и 7,8-9,5 log2 В РНИФ.

6. Высокая иммуногенная активность эмульсионного варианта ассоциированной инактивированной вакцины по сравнению с ГОА вариантом препарата подтверждена в остром опыте с экспериментальным заражением

лабораторных животных эпизоотическими штаммами вируса ИРТ и бактерий F. necrophorum.

7. В производственных опытах установлено, что ассоциированная инактивированная эмульсионная вакцина против инфекционного бапанопо-стита откормочных бычков при двукратном внутримышечном введении животным в дозе 2,0 см3 обеспечивает сохранность 96,8% привитого поголовья в течение 6 месяцев.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Временная инструкция по применению и контролю "Ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков, инактивированной эмульсионной", утвержденная директором ВНИВИ 17 мая 2004 г.

2. Технические условия на: "Ассоциированную вакцину против инфекционного баланопостита откормочных бычков инактивированную эмульсионную", утвержденные директором ВНИВИ 17 мая 2004 г.

3. Временное наставление по применению "Ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков инактивированной эмульсионной", утвержденное Главным управлением ветеринарии Кабинета Министров Республики Татарстан 26 мая 2004 г.

5. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Коннов М.Н., Гумеров В.Г., Гаффаров Х.З., Макаев Х.Н., Хузин Д. А., Спиридонов Г.Н., Шакуров М.Ш. Инфекционный баланопостит крупного рогатого скота смешанной этиологии // Ученые записки КГАВМ. —2003. -Т. 175. -С.87-92.

2. Коннов М.Н. Этиология и клиника баланопостита, вызванного возбудителями ИРТ и некробактериоза // Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию факультета ветеринарной медицины Ульяновской Государственной сельскохозяйственной академии, 26-26 сентября 2003. -Т.1. -С.101-102.

3. Макаев Х.Н., Гумеров В.Г., Коннов М.Н., Акимов Е.К., Хузин ДА., Ахметсафин Р.Г. Изучение иммуногенности ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита крупного рогатого скота // Актуальные проблемы инфекционной патологии животных. Материалы Международной научной конференции, посвященной 45-летию ФГУ "ВНИИЗЖ". -Владимир. -2003. —С.435-437.

4. Коннов М.Н. Изучение профилактической эффективности ассоциированной инактивированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков // Материалы Всероссийской научно-практической конференции по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса, КГАВМ. -2004. -С.42-43.

Подписано в печать 01.10.2004. Формат 60x90 1/16. Усл. п.л. 1. Заказ №44. Тираж 100 лм Офсетный участок ВНИВИ. 420075, г. Казань, Научный городок-2

1 I

>19407

РНБ Русский фонд

2005-4 12391

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Коннов, Максим Николаевич

1. Введение.

2. Обзор литературы.

2.1. Этиопатогенез генитальной формы герпесвирусной инфекции и некробактериоза крупного рогатого скота.

2.2. Средства и методы лабораторной диагностики герпесвирусной инфекции и некробактериоза крупного рогатого скота.

2.3. Особенности иммунитета при герпесвирусной инфекции и некробактериозе крупного рогатого скота. Средства и методы их специфической профилактики.

3. Собственные исследования.

3.1. Материалы и методы исследования.

3.2. Результаты исследований.

3.2.1. Особенности клинико-эпизоото логического проявления инфекционного баланопостита откормочных бычков смешанной этиологии.

3.2.2. Выделение и изучение биологических свойств этиологических агентов, вызывающих инфекционный баланопостит откормочных бычков.

3.2.3. Лабораторный регламент технологии изготовления вакцины.

3.2.4. Изучение иммуногенной активности ассоциированной инактивированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков на лабораторных животных. у 3.2.5. Изучение иммуногенной активности и эффективности ассоциированной инактивированной вакцины против инфекционного баланопостита на откормочных бычках

4. Обсуждение результатов исследований.

5. Выводы.

6. Практические предложения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Специфическая профилактика инфекционного баланопостита откормочных бычков смешанной этиологии"

Актуальность темы. Выполнение стратегической задачи повышения эффективности агропромышленного производства возможно при устойчивом ветеринарном благополучии и получении экологически чистой высококачественной продукции животноводства. В связи с этим основными задачами ветеринарной медицины и агробиологической промышленности являются обеспечение ветеринарной службы страны препаратами для профилактики, диагностики и терапии болезней животных, расширение номенклатуры и объемов производства лекарственных средств, создание современных производств по выпуску импортозамещающих и конкурентоспособных на мировом рынке ветеринарных биопрепаратов (Непоклонов Е.А., 2003). Все это свидетельствует о необходимости совершенствования методов и средств надежной защиты животных от множества возбудителей вирусной и бактериальной природы, которые могут воздействовать на организм животных одновременно или последовательно, усугубляя и ухудшая течение инфекционного процесса.

Несмотря на многочисленность этиологических факторов вирусной природы, вызывающих различные формы патологии у крупного рогатого скота, основное значение приходится на долю возбудителя инфекционного ринотрахеита - герпесвируса типа 1, который имеет ряд особенностей, свойственных только данному вирусу и отличающих его от других, а именно: поражает животных всех возрастов, в том числе коров и быков-производителей, бычков в откормочных площадках, вызывая целый ряд патологических форм, которые проявляются в виде вульвовагинита, баланопостита, аборта, менингоэнцефалита, конъюктивита, мастита и генерализованного процесса у новорожденных телят; имеет вертикальный путь передачи; длительно сохраняясь в организме переболевших животных и во внешней среде (Гаффаров Х.З., 1983; Сухарев О.И., 1988).

Генитальная форма болезни у коров и телок проявляется как инфекционный пустулезный вульвовагинит, у быков - в форме инфекционного баланопостита. При естественном инфицировании или экспериментальном заражении восприимчивых животных вирусом ИРТ/ИПВ защита их осуществляется посредством факторов специфического (клеточный, гуморальный) и неспецифического иммунитета.

В настоящее время ИРТ/ИПВ диагностируется практически повсеместно. |

В ряде специализированных хозяйств по откорму крупного рогатого скота в регионе Среднего Поволжья, инфекционный баланопостит наносит значительный экономический ущерб. Это обуславливает необходимость детального изучения этиопатогенеза данной формы патологии.

Известно, что первичным этиологическим агентом инфекционного баланопостита откормочных бычков является герпесвирус типа 1 крупного рогатого скота (Straub О.С., 1978; Андреев Е.В., 1979; Гаффаров Х.З. и др., 1986), который, как ранее считалось, осложняется разнотипной условно-патогенной микрофлорой.

Для специфической иммунотерапии инфекционного баланопостита откормочных бычков была предложена полиспецифическая гипериммунная сыворотка, полученная к вирусам ИРТ, ПГ-3, хламидиям и микоплазмам крупного рогатого скота. Двукратное с интервалом 3 дня внутримышечное введение больным животным этой сыворотки, содержащей высокие титры вируснейтрализующих антител, приводило к полному их выздоровлению (Коннов Н.М., Гаффаров Х.З., Равилов А.З., 1980).

Для специфической профилактики герпесвирусных инфекций крупного рогатого скота за рубежом и у нас в стране применяют живые и инактивированные вакцины, выпускаемые в виде монокомпонентов, ассоциированных и комбинированных препаратов. В ряде странах были предложены аттенуированные штаммы герпесвируса типа 1, имеющие различные свойства и характеристики.

Закономерное выделение из биоматериалов больных баланопоститом бычков, наряду с герепесвирусом типа 1, анаэробных бактерий, идентифицированных как Р. песгорЬогит, изменило традиционное представление о патогенезе данной болезни, что указывало на смешанный характер течения инфекции.

В этой связи представляется весьма актуальной разработка ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков на основе антигенов герпесвируса типа 1 и бактерий рода Р. песгорЬогит, которая обеспечивала бы более эффективную защиту животных. Кроме того, как нам представляется, введение в состав вакцины бактерий Р. песгорЬогит, обладающей способностью вызывать гнойно-некротические поражения кожи, слизистых оболочек и подлежащих тканей, в конечном итоге приводящие к гибели животного, будет способствовать снижению частоты проявления этой патологии.

На основании вышеизложенного определены цель и задачи данного исследования.

Цель работы: Разработка ассоциированной инактивированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков на сонове антигенов герпесвируса типа 1 крупного рогатого скота и бактерий Б. песгорЬогит.

Для ее выполнения были поставлены следующие задачи:

1. Изучить клинико-эпизоотологические особенности проявления инфекционного баланопостита откормочных бычков в регионе Среднего Поволжья;

2. Выделить и изучить биологические свойства возбудителей инфекционного баланопостита откормочных бычков;

3. На основании результатов изучения этиопатогенеза и биологических свойств выделенных возбудителй инфекционного баланопостита бычков на откормочных площадках разработать технологию изготовления средства специфической профилактики, обеспечивающего эпизоотологическое благополучие скотоводческих хозяйств по данной инфекции;

Научная новизна. Впервые на основании клинико-эпизоотологических и лабораторных исследований показан смешанный характер течения и особенности проявления инфекционного баланопостита откормочных бычков этиологически обусловливаемые герпесвирусом типа 1 и бактериями рода Б. песгорЬошш. Определен наиболее значимый в этиопатогенезе болезни возбудитель - бактерии Р. песгорЬошш и изучены их основные биологические свойства.

Изучена динамика формирования иммунитета после одно- и двукратной вакцинации и подтверждена иммуногенная активность инактивированной ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков в лабораторных и производственных условиях.

Практическая значимость работы. Результаты исследований явились основанием для составления научно-технической документации:

Временной инструкции по изготовлению и контролю «Ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков, инактивированной эмульсионной»;

- Временного наставления по применению ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков, инактивированной эмульсионной. Нормативно-техническая документация одобрена Научно-методическим советом ВНИВИ (г. Казань) и утверждена Главным управлением ветеринарии Кабинета Министров Республики Татарстан.

Основные положения, выносимые на защиту:

- научное обоснование целесообразности создания ассоциированной вакцины с учетом смешанного характера проявления инфекционного баланопостита откормочных бычков, обусловливаемого возбудителями вирусной и бактериальной природы;

- лабораторный регламент технологии изготовления, контроля и применения ассоциированной вакцины;

- результаты изучения иммуногенных свойств ассоциированной инактивированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков в лабораторных и производственных условиях.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены на: научной конференции, посвященной 130-летию Казанской Государственной академии ветеринарной медицины, Казань, 2003 г;

- международной научной конференции посвященной 45-летию ФГУ "ВНИИЗЖ", Владимир, 2003 г.;

- Всероссийской научно-практической конференции, КГАВМ, 2004 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 научные работы.

Структура и объем диссертации.

Дисертация изложена на 44$ страницах и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложения. Работа иллюстирована 11 таблицами, 2 графиками и 2 рисунками. Список литературы содержит 289 источников, из них 110 зарубежных.

Приложения к диссертации включают в себя копии актов производственных испытаний, временной инструкции, технических условий и временного наставления по применению ассоциированной инактивированной эмульсионной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков.

2. Обзор литературы

2.1. Этиопатогенез геиитальиой формы герпесвирусиой инфекции и некробактериоза крупного рогатого скота

Изменение технологии ведения животноводства в связи с созданием крупных специализированных хозяйств в 70-80-ые годы заложили определенный отпечаток на эпизоотическую ситуацию по многим инфекционным заболеваниям, в том числе вызываемых герпесвирусами и фузобактериями некроза.

В настоящее время, несмотря, на многочисленность этиологических агентов вирусной природы, вызывающих различные патологии у крупного рогатого скота, основное значение приходится на долю возбудителя ИРТ -герпесвируса типа 1.

Вирус впервые изолирован и идентифицирован в 1956 году (Madin S.H. et. al.) из носовой слизи, взятой у больного теленка в острой стадии респираторного заболевания, а затем экспериментально воспроизвели эту инфекцию на естественно восприимчивых животных.

Установленная данными авторами возможность использования различных тканевых культур для репродукции вируса послужила мощным стимулом для детального изучения болезни и биологических свойств возбудителя.

В 1958 году Greig A.S. et. al, а затем Kendrick J.M. et. al. (1956, 1967) аналогичный вирус выделили из слизисто-гнойных выделений половых путей крупного рогатого скота. На основании изучения перекрестных иммунологических реакций Gillespie J.H. et. al. (1958) также показали, что вирус, выделенный при респираторной форме заболевания, является и возбудителем инфекционного пустулезного вульвовагенита (ИПВ). Исходя из этого, по предложению Mc.Kercher D.G. et. al. (1959, 1964) болезнь официально стали называть ИРТ-ИПВ. Позднее идентичность этих двух Изолированных вирусов Gringer J. et. al. (1962) доказали электронномикроскопическим исследованием. В нашей стране первое сообщение о выделении вируса ИРТ от больных телят с остро протекающей респираторной инфекцией в специализированном совхозе «КИМ» по откорму крупного рогатого скота Тамбовской области было сделано

Крюковым H.H. (1970).

При более подробном изучении ИРТ-ИПВ многими исследователями установлено, что вирус в зависимости от места внедрения, наряду с указанными формами заболевания, часто вызывает у крупного рогатого скота аборты, конъкжтивиты, баланопоститы, менингоэнцефалиты, ре>ке метриты и эндометриты, маститы, энтериты, дерматиты и эрозивные стоматиты

Сюрин В.Н., Фомина Н.В., 1984, 1991, 1998; Андреев Е.В. и др., 1977, 1979;

Коннов Н.М. и др., 1980; Крюков H.H., 1980; Жданов В.М., Гайдамович С.Я.,

1982; Карышева А.Ф. и др., 1983, 1989; Матковська С.Г., 1999; Kendrick J.W. et. al., 1956; Durham P.J.K., 1974; Espinasse J., 1975; Neuman L.E., 1976;

Lomba F. et. al., 1976; Kahrs R.F., 1977; Arnault G., 1977; Mohanty S.B., 1978;

Straub O.C., 1979; Moussa A. et. al., 1979; Beck B.E., 1985; Nesbitt G., 1990). \ ,

Герпесвирусы - являются ДНК-содержащими возбудителями большой группы инфекционных болезней животных, человека, птиц, рыб и амфибий.

В классической и наиболее часто встречаемой форме герпесвирус вызывает у крупного рогатого скота два четко1 выраженных синдрома поражение дыхательных путей (ринотрахеит) и половых органов пустулезный вульвовагинит, баланопостит.

Вирус ИРТ морфологически сходен со всеми вирусами, входящими в группу герпеса. Герпесвирусы характеризуются стабильной антигенной структурой. Основной особенностью всех герпесвирусов является способность к персистенции, хотя место персистенции может быть различным в зависимости от хозяина. Получены доказательства персистенции вируса герпеса в неинфекционной форме в ганглиях тройничного нерва. Вирус был выделен при совместном культивировании клеток ганглиев с чувствительными к вирусу клетками. Следовательно, уникальность герпесвирусов в том, что они могут оставаться в латентном состоянии в хозяине, в котором они размножаются. Геном герпесвирусов может встраиваться в геном клетки хозяина и длительное время персистировать. При разнообразных. стрессах герпесвирусы могут реактивироваться с последующей экскрецией вируса во внешнюю среду (Мищенко В.А. и др., 1999, 2000).

Электронно-микроскопическими исследованиями полевых штаммов вирусов группы герпеса, выделенных в СССР от больных телят, установлено, что вирионы состоят из нуклеокапсида и окружающей его суперкапсидной оболочки. Общий диаметр вириона с суперкапсидной оболочкой составляет 140-215 нм. Вирион состоит из электронно-оптически плотной сердцевины, капсида и оболочки (Крюков Н.Н., 1972; Гуненков В.В. и др., 1987).

Вирус ИРТ хорошо сохраняется в условиях глубокого замораживания. Культуральный вирус при температуре 4°С снижает титр через месяц. Полная инактивация вируса происходит через 45 дней хранения температуре 22°С. Вирус полностью утрачивает инфекционность при нагревании до 56°С в течение при 7-20 мин.

Вирус сравнительно устойчив при рН 6,0-9,0. Этиловый эфир в концентрации 20% разрушает вирус в течение 18 часов, а хлороформ в концентрации 5% - в течение 10 мин. Добавление в питательную среду при культивировании вируса 5-йод-2-дезоксиуридана в количестве 100 мкг/мл задерживает репродукцию вируса на 2,5-3,0 ^ (НаЬг^еЫ Н., Шэапек, 1970).

Лиофилизация почти не влияет на его активность, однако замораживание и оттаивание снижают вирулентность и иммуногенность вируса. Раствор формалина 1:500 инактивируют вирус через 24 часа, 1:4000 через 46, 1:5000 через 96 часов. Ацетон, эфир, хлороформ и этиловый спирт инактивируют его немедленно.

Имеются сообщения о выживании вируса в сперме быков, хранящейся при температуре сухого льда, в течение 4-12 месяцев, а в жидком азоте - в течение года.

Показана возможность инактивации вируса в свежей сперме быков при обработке ее 0,3%-ным раствором трипсина. Активность вируса, хранящегося в лиофилизированном состоянии в течение 3 лет, снижалось на 0,5 ^ ТЦД50/мл и составляла 6,5 ТЦД50/мл. Хранение вируса при 5°С даже в присутствии сыворотки, через год снижало титр вируса на 0,65-1,2 ^ ТЦД50/мл. (Семенченко О.Г. и др., 1990; Петрова О.Г. и др., 1994, 2001; Тапу! ега\, 1992).

Установлено, что все штаммы вируса, выделенные при респираторном и генитальном синдромах, в антигенном отношении идентичны и имеют одинаковую плавучую плотность, равную 1,731 г/см . Соотношение гуанина и цитозина было одинаковым и соответствовало 72%.

При естественном и экспериментальном заражении вирус индуцирует образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и преципитирующих антител, которые обнаруживаются в реакции нейтрализации, связывания комплемента и диффузионной преципитации в геле. Нет корреляции между титром антител и сроками выделения вируса от больных животных.

Вирус ИРТ легко культивируется в монослое клеток почки эмбриона коров. При низких титрах вируса его цитопатогенное действие в культуре этой ткани наступает через 48-96 часов. Для культивирования пригодны перевиваемые линии клеток почек эмбриона коровы (МОВК) и тестикул телят (Закутский Н.И. и др., 1997).

Сообщения различных отечественных и зарубежных авторов свидетельствует о широком распространении инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота во всех странах мира, особенно в хозяйствах с высокой концентрацией сборного поголовья (Сюрин В.Н., 1985; Атамась

В.А. и др., 1986; ГТанкова Г.Е., 1986; Ковалев H.A. и др., 1988; Литвин В.П., Поживил А.И., 1991; Kelling C.L. et. al, 1973, 1996). Согласно данным последних исследований, проблема ИРТ в Российской Федерации в настоящее время не претерпела существенных изменений (Глотов А.Г., 1999; Мищенко В.А. и др., 2000; Нефедченко A.B., 2002).

Генитальная форма болезни проявляется как инфекционный пустулезный вульвовагинит (пузырьковая сыпь) у коров и телок и инфекционный баланопостит (ИБП) у быков (Крюков H.H., 1970, 1980; Коннов Н.М., 1980; Штрауб О.Х, 1981).

У больных быков процесс локализуется на слизистой оболочке препуция и полового члена. Иногда- имеет место прогрессирующее заболевание мочевыводящих путей (Straub О. С., 1966, 1977). Характерным признаком является образование пустул и пузырьков (Сюрин В.Н. и др., 1991, 1998). Процесс заживления у быков обычно затягивается из-за повреждения пораженной слизистой в процессе случки. Гиперемийные узелки сохраняются более длительное время чем у коров. После заживления из-за растяжения эпителия препуция во время эрекции нередко происходит разрыв тканей и мелких кровеносных сосудов. Вследствие этого от переболевших быков длительное время не удается получить сперму. Поэтому больным животным необходимо создать все условия для обеспечения покоя. При генитальной форме болезни у быков может развиться орхит, что приводит к их бесплодию. Выделение вируса у больных быков происходит дольше, чем у коров, что связано с более длительным периодом болезни. Инфицированная вирусом сперма может быть причиной эндометритов и бёсплодия у коров и телок (Сюрин В.Н. и др., 1998; Глотов А.Г., 1999; Straub О.С., 1972, 1990).

Восприимчив к вирусу крупный рогатый скот всех возрастов. Неинфицированные животные заражаются в результате контакта с больными животными или вирусоносителями, как правило, при перемещении из хозяйства в хозяйство. Форма возникающего при этом заболевания во многом зависит от путей проникновения вируса в организм, а также от его адаптации к органам.

При генитальной форме болезни особенно опасным источником инфекции являются быки-производители и инфицированная сперма. Наибольшую опасность при этом представляют вирусовыделители, не обнаруживающие клинических признаков болезни (реинфицированные быки с низкими титрами гуморальных антител, а также в стадии инкубационного периода) (Глотов А.Г., 1995, 1999; Нефедченко A.B., 2002). Таким образом, возбудитель передается от быка к корове во время случки, а также при искусственном осеменении.

По данным ряда исследователей, вспышкам заболевания способствует большая концентрация поголовья крупного рогатого скота на ограниченных площадях, что являлось характерной особенностью животноводства 70-80-х годов 20-го века (Крюков H.H., 1970, 1972; Straub О.С., 1977, 1979). Повышенная тенденция к перезаражению животных вирусом ИРТ на крупных комплексах во многом связана с часто перемежающимися пассажами вируса, ведущими к повышению его вирулентности (Мауг А. et aL, 1984, 1988; Семенченко О.Г. и др.," 1986). Повышение вирулентности вируса путем быстрых пассажей на восприимчивых особях доказано также и при генитальной форме болезни.

Как указывалось выше, причиной опухания и отека слизистой препуция и полового члена является герпесвирус типа1.

В литературе имеются отдельные сообщения, свидетельствующие о существовании возбудителя вторичного некроза - бактерий Fusabacterium necrophorum, которые наслаиваются на поврежденную слизистую оболочку препуция и полового члена (Дженсен Р., Маккей Д., 1977; Сидорчук A.A., 1987; Самоловов A.A., 1998).

Возбудитель некробактериоза F. necrophorum впервые был выделен Кохом Р. в 1881 году, а подробно описан Леффлером в 1884 году. Культивирование микроба на питательных средах впервые удалось Бангу в 1890 году.

Согласно современной классификации зоопатогенных микроорганизмов (Сидоров М.А. и др., 1995) возбудитель некробактериоза -F. necrophorum, относится к роду Fusobacterium (веретенообразные), входящий в состав семейства Bacteriodaceae (Самоловов A.A., 1999; Соломаха О.И., 2000).

Возбудитель некробактериоза - Fusobacterium necrophorum представляет собой грамотрицательные, полиморфные палочки (0,5-10 мкм длиной), нити (до 300 мкм длиной) и кокковидные формы. Спор и капсул не образует, является облигатным анаэробом, неподвижен. Он довольно хорошо окрашивается по Муромцеву, Романовскому-Гимза, Леффлеру и Граму (Хузин Д.А. и др., 1997; Самоловов A.A., 1999; Соломаха О.И., 2000).

Морфология возбудителя зависит от типа используемой среды и возраста культуры. Нитевидные формы наиболее часто наблюдаются в молодых культурах, а палочковидные - в старых. Вдоль нитей или на одном конце могут быть утолщения (Пилипенко A.A. и др., 1972; Камалов Г.Х. и др., 1991; Kanoe М. et al., 1976).

Микроорганизм довольно требователен к питательным средам. В их состав обязательно должны входить белковые компоненты. На обычных казеиновых средах микроорганизмы вырастают в течение 18-48 час, при этом, рост многих культур сопровождается образованием газа, имеющего неприятный, гнилостный запах (Хузин Д.А. и др. 1997).

Для культивирования возбудителя некробактериоза необходимы соответствующие питательные среды и условия для роста: t-37-39°C, анаэробиоз, pH среды - 7,2-7,6. Наиболее употребляемые при работе с Fusobacterium necrophorum жидкие питательные среды: мясо-пептоннопечёночный бульон, среда Китта-Тароцци, бульон Мартена и др. Для выделения отдельных колоний микроба и получение чистой культуры возбудителя используют такие плотные питательные среды как: печеночный агар, сывороточный агар, кровяной агар Цейсслера, глюкозо-кровяной агар и др. (Garcia М.М., McKay К.А., 1973; Simon P.C., 1974; Самоловов A.A., 1985; Меныиенин B.B. и др., 1997).

Фазы роста культур на жидких питательных средах (типа Китта-Тароцци) имеют следующие параметры: лаг-фаза - 4-5 часов, экспонентная фаза 10-13 часов, фаза замедленного роста - 7-11 часов (Хузин Д.А. и др., 1997).

Культуры Fusobacterium necrophorum продуцируют индол (один из видовых признаков), превращают треонин и лактат в пропионат, образуют сероводород. Образование масляной кислоты в качестве основного продукта метаболизма пептона и глюкозы, является таксономическим признаком различия между родами Fusobacterium и Bacteroides, входящие в одно семейство Bacteriaceae (Сидоров М.А. и др., 1995). Культуры F. necrophorum свертывают молоко, но не всегда пептонизируют, восстанавливают метиленовую синьку, желатин разжижают не все штаммы. Большинство штаммов расщепляют липазу (Соломаха О.И., 1973; Самоловов A.A., 1984; Nakaqaki М. et al., 1991) .

По сведениям Борисовой JIM. (1976) сахаролитические свойства культур F. necrophorum не постоянны и часто слабые, хотя некоторые штаммы активно ферментируют глюкозу, фруктозу, лактозу, маннозу, сахарозу, левулезу, галактозу.

Таким образом, вид Fusobacterium necrophorum можно дифференцировать от других видов рода Fusobacterium, как по наличию индола и сероводорода, так и по образованию пропионовой кислоты из лактата (Werner Н.Е. et al., 1971; Kanoe М. et al, 1986, 1996; Самоловов A.A., 1984).

Литературные данные свидетельствуют, что антигенная структура возбудителя некробактериоза не является серологически однородной, опыты с адсорбцией антител показали, что имеются штаммы идентичные в антигенном отношении, но есть также серологические варианты. (Соломаха О.И., 1973; Shinjo Т. et al, 1981; Berg J.N.; Scanlon C.M., 1982). У Fusobacterium necrophorum различают 3 основных биотипа: А, В, С и один промежуточный биотип - АВ (Berg J.N., 1982; Inoue Т. et al, 1985; Smith G.R. et al, 1993).

Биотип А обычно выделяют из абсцессов печени крупного рогатого скота, биотип АВ в основном обнаруживают в патологическом материале от пораженных конечностей, биотип В постоянно выделяют из содержимого рубца, а также из поражений, первично вызванных биотипами А и АВ. Биотип С - апатогенный, поэтому в настоящее время выделен в новый вид-Fusobacterium pseudonecrophorus, его можно установить в содержимом абсцессов и фекалий (Emery D.L. et al, 1985; Smith G.R. et al, 1993; Narayanau S. etal, 1997).

По данным Scanlan C.M., Harris D.J. et al, (1983, 1988) культуры биотипа А (АВ) являются наиболее патогенными, не седиментируют при росте на жидких питательных средах, гемолизируют эритроциты, агглютинируют куриные эритроциты, выделяют в культуральную жидкость экзотоксин, в связи с чем считаются наиболее подходящими для изготовления вакцин против некробактериоза. Бактерии типа В, менее патогенны, не агглютинируют куриные эритроциты и в отличие от типов А и С седиментируют при росте на жидких питательных средах. Тип С не патогенен для всех видов животных и не обладает ни одним из дифференциальных признаков (Shinjo Т. et al., 1986, 1988, 1990).

По поводу образования токсинов как факторов патогенности палочки некроза существуют различные мнения. Ревнивых А.Г. (1932) считал, что бактерия некроза не выделяет гемолизин. Муромцев С.Н. (1935), напротив сообщает о феноменах гемолиза в культурах возбудителя некробактериоза, причем различной интенсивности в зависимости от штамма.

Коваленко Я.Р. (1945) установил, что гемотоксин, образуемый Fusobacterium necrophorum, лизирует эритроциты барана, крупного рогатого скота, лошади, морской свинки, кролика и голубя, что было подтверждено другими исследователями (Лайшев А.Х., Семенов Н.С., 1971; Маслухин Б.В. и др., 1971; Самоловов A.A., 1999; Shinjo Т., 1986, 1988). Автор в результате многочисленных опытов пришел к выводу, что некротоксин является эндотоксином, тесно связанным с телом клетки и не выделяется в окружающую среду (Коваленко Я.Р., 1954).

Roberts D.S. (1967, 1969, 1970) сообщил о продукции Fusobacterium necrophorum термостабильного токсина - лейкоцидина, как основного патогенного фактора, что было подтверждено другими исследователями (Emery D.L. et al., 1986; Kanoe M. et al., 1986; Tan Z.L. et al., 1992, 1994). Tan Z.L. (1992, 1994) считает, что лейкоцидин способствует проникновению F.necrophorum в печень, ослабляя защитные механизмы и повреждая печёночную паренхиму.

Степень вирулентности культуры зависит от качества питательных сред, частоты пересевов, длительности культивирования на питательных средах, пассажей через организм лабораторных животных. При длительном культивировании микроорганизмов на питательных средах вирулентность не только снижается, но и полностью теряется (Галиев P.C., 1972; Emery D.L. et al., 1985). Наиболее стабильные вирулентные свойства отмечают у лиофильно высушенных культур (Галиев P.C., 1972; Хузин Д.А., 2002; Emery D.L. et al., 1985).

Некробактериоз широко распространен во многих странах мира.

К нему восприимчивы все виды домашних животных и большинство диких животных, а также человек (Голосов И.М., Маслухин Б.М., 1969; Балабанов В.А., 1971; Бондарько Д.Н., 1980; Магомедов A.A. и др., 1993;

Сидорчук A.A., Панасюк С.Д. и др., 1994; Хузин Д.А., Камалов Г.Х., 1995; Russell A.M.et. al., 1982; Feenstra P.et. al, 1983; Mahin L. et. al., 1986; Paye В., 1988.; Harris D.J. et. al., 1988).

Чаще всего болезнь регистрируется у северных оленей, овец, коз и крупного рогатого скота, несколько реже у свиней и лошадей (Кирьянов Е.А., Больных В.Т., 1989; Самоловов A.A., 1993; Pedersen G. et. al. 1992), описаны энзоотии у кур (Мустакимова А.Г., 1961).

Болеет также человек, инфекция больше известна как синдром -Лемиера (Dufillot D. et. al., 1986; Boersma W.G. et. al., 1993; Groeneveld P.H. et. al., 1993; Figueras G. et. al., 1995; Gong J., Garsia J., 1999).

У крупного рогатого скота заболевание некробактериозом регистрируется довольно часто. По сведениям Балабанова В.А. (1971), Зайцева Е.А. (1982), Самоловова A.A. (1998) болезнь наносит большой экономический ущерб за счет снижения молочной продуктивности (5-25%), снижения интенсивности роста (25-40%) и ухудшения воспроизводительной способности.

Однако некробактериоз у крупного рогатого скота в основном проявляется с признаками поражения конечностей (Баймишев Х.Б., 1988; АнакинаЮ.Г., 1989).

Некробактериозные поражения слизистой оболочки ротовой полости (Балабанов В.А., 1971) регистрируют также у молодняка. Заподозрить животных в заболевании можно по выделению изо рта пенисто-тягучей слюны гнилостного запаха. У животных уменьшается позыв к корму и воде, больные больше лежат. При осмотре ротовой полости на губах, деснах, щеках или языке обнаруживаются глубокие гнойно-некротические язвы, покрытые сероватыми дифтеретическими пленками со свищевыми ходами. Налеты могут перейти на гортань, трахею и полость носа. При развитии некротического процесса на слизистой оболочке щек и десен могут ф наступить периодонтит и периостит с последующим выпадением зубов

Демкин Г.П. и др., 1990; CookN.B. et al, 1995).

Из внутренних органов чаще поражаются печень, легкие, селезенка, почки. Изменения во внутренних органах в основном выявляются при убое животных или их гибели, они обычно представлены абсцессами разной величины. (Балабанов В.А., 1971; Самоловов A.A., Никоноров П.Н., 1982; Самоловов A.A., 1993; Хузин Д.А., 2001; Pedersen G. et. al., 1992).

По данным Самоловова A.A. (1989, 1998) некробактериозные поражения хвоста встречаются при откорме животных. Отмечается отечность основания хвоста, кончик покрыт сухой темно-коричневой корочкой. У отдельных животных отмечаются язвочки.

Некробактериоз половых органов у коров протекает как некротический вагинит (Самоловов A.A., 1998).

Заболевания у коров в виде аборта могут проявляться на 8-9-ом месяце стельности.

После аборта послед долго не отделяется. Инволюция матки происходит медленно, имеют место метриты и эндометриты. (Балабанов В.А., 1971; Волкова A.A., 1973; Мажуга Е.П., 1983; Никоноров П.Н., 1985;

Кирьянов Е.А., 1989; Джупина С.И., 1999; Baggott D., 1982; Pedersen G.et. al., 1992; PatiaikN. et. al., 1994).

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Коннов, Максим Николаевич

5. ВЫВОДЫ

1. Клинико-эпизоотологическими исследованиями и изучением патологоанатомической картины выявлены характерные особенности течения баланопостита среди откормочных бычков в ряде неблагополучных хозяйств Республики Татарстан и Марий-Эл. Установлены потенциальные источники возбудителей и механизмы их передачи.

2. В результате вирусологических и бактериологических исследований ^ доказано, что этиологическими агентами, вызывающими инфекционный баланопостит откормочных бычков, являются герпесвирус типа 1 и бактерии РшоЬайепит песгорЬогит. Изучены основные культурально-биохимические и иммунобиологические свойства выделенных возбудителей и определен наиболее значимый осложняющий процесс возбудитель болезни - бактерии Б. песгор1югит, что изменило традиционное представление об этиопатогенезе изученной формы патологии. Впервые показано, что баланопостит у откормочных бычков протекает, в основном, в виде смешанной инфекции.

3. Комплексными исследованиями и с учетом анализа литературных данных обоснована целесообразность разработки ассоциированной

9 инактивированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков.

1о& в РЫТА; 7,9-9,2 1<^2 в ИФА и к Б. песгорЬогиш 8,6-10,6 1ов2 в ИФА и 7,8-9,51ов2вРНИФ.

7. В производственных опытах установленно, что ассоциированная инактивированная эмульсионная вакцина против инфекционного баланопостита откормочных бычков при двукратном внутримышечном введении животным в дозе 2,0 см обеспечивает сохранность 96,8% привитого поголовья в теченще 6 месяцев;

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

2. Технические условия на: "Ассоциированную вакцину против инфекционного баланопостита откормочных бычков, инактивированную эмульсионную", утвержденные директором ВНИВИ 17 мая 2004 г.

3. Временное наставление по применению ассоциированной вакцины против инфекционного баланопостита откормочных бычков, инактивированной эмульсионной, утвержденное Главным управлением ветеринарии Кабинета Министров Республики Татарстан 26 мая 2004 г.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Коннов, Максим Николаевич, Казань

1. Анакина Ю. Г. Причины и пути предупреждения болезней конечностей у скота в условиях интенсивной технологии. // Ветеринария. -1989. -№ 3. С.68-70.

2. Андреев Е.В. Средства и способы пассивной иммунизации телят в хозяйствах по производству говядины // Пробл. вет. иммунол. -М., -1985. С.135-138.

3. Андреев Е.В., Михайлюк А.П., Пронина H.A. и др. Материалы экспериментального изучения противоящурной вакцины 1. Изучение свойств сапонина //Ящур: Тематич. сб. работ. Владимир. -1970. - Т.1. - С.136-134.

4. Андреев Е.В., Чечеткина Н.П., Дудник О.Д., Добролюбова Н.И., Фурсова А.И. Герпетическая инфекция быков производителей. // Ветеринария. -1977. -№9. -С. 56-57.

5. Андреев Е.В., Драгомир A.B. Острые респираторные заболевания крупного рогатого скота // Кишинев. -1979. -С. 126.

6. Антонов B.C., Кленина Н.В., Михайлова С.А. Динамика классов иммуноглобулинов и других сывороточных белков у крупного рогатого скота в онтогенезе // Пробл. вет. иммунол. М., - 1985. -С. 49-50.

7. Атамась В.А., Андреев В.Е., Чечеткина Н.Т. Респираторные болезни сельскохозяйственных животных. Киев: Урожай. - 1986. - 184с.

8. Баймишев Х.Б. Роль двигательной активности в профилактике заболевания копытцев крупного рогатого скота в условиях промышленных комплексов. // Селекционные и технологические основы повышения продуктивности животных.- М., -1988. -С. 42-44.

9. Бакулов И.А., Юрков Г.Г., Песковацков А.П. Рекомендации по методике эпизоотического исследования. -Покров. -1975. -75с.

10. П.Балабанов В.А. Некробактериоз животных.- М., -1971. 136с.

11. Белкина Н.М. Изучение некоторых биологических свойств вирусов группы герпеса: Автореф. дис. . канд. вет. наук. М., -1974. - 20 с.

12. Бондарько Д.Н. Болезни конечностей у крупного рогатого скота в животноводческих комплексах.// Диагностика и профилактика болезней животных в молочных комплексах Омской области./ Учеб. пособ. Омск. -1980. -С. 51-59.

13. Борисова JI.M. Влияние различных источников углевода на рост и размножение бактерий некроза // Сиб. вест. с.-х. науки. -1976. -№5. -С.82-84.

14. Братюха С.И. Особенности патологии конечностей крупного рогатого скота в хозяйствах промышленного типа.// Болезни конечностей е.- х. животных.- М., -1988. -С.30-34.

15. Васильев A.B. Обнаружение антител к вирусу инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом РДП // Проб л. молекулярной биологии и патологии с.-х. животных: Сб. науч. тр. MBA. М,-1980. - Т. 113. - С. 71-75.

16. Волкова A.A. Некробактериоз.// Вет. Энциклопедия. -Т.4. -1973. -С.394-402.

17. Воробьев A.A. Проблема адъювантов в вакцинно-сывороточном деле: Тез. докл.-М., -1975. -С.19-22.

18. Воробьев A.A., Васильев H.H. Адырванты. М.,Медицина,1969. 206 с.

19. Галиев P.C. Вирулентность штаммов бактерий некроза, выделенных из разных объектов.// Природная очаговость и инфекционные болезни овец.- Фрунзе, -1972. С.77-84.

20. Гаффаров Х.З. Диагностика и специфическая профилактика респираторно-кишечных болезней у телят (Обзор иностр. литературы). // Ветеринария, 1983. - № 4. - С. 73-76.

21. Гаффаров Х.З. Инфекционные болезни рогатого скота хламидийной, микоплазменной и вирусной этиологии: разработка диагностических и лечебно-профилактических препаратов: Автореф. дис. . докт. вет. наук. Казань. -1986. -39 С.

22. Глебов Н.Х. К вопросу о выяснении «фактора распространения» (гиалуронидазы) у В. песгорЬогш.// Учен. зап. Казан, вет. ин-та им Н.Э. Баумана. -1957. -Т.65. С.219-223.

23. Глотов А.Г. Диагностика инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом молекулярной гибридизации и особенности эпизоотического процесса заболевания в современных условиях: Автореф. дис. . докт. вет. наук. Новосибирск. -1999. -39с.

24. Глотов А.Г., Орешкова С.Ф. Диагностика инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом молекулярной гибридизации // Ветеринария. 1996. - №6. - С. 24-27.

25. Голосов И.М., Маслухин Б.М. Некробациллез северных оленей. -Норильск.-1969.-147с.

26. ГОСТ 25755 91. Крупный рогатый скот. Методы лабораторной диагностики инфекционного ринотрахеита. - М.: Изд-во стандартов, -1992.

27. Гуненков В.В., Сухарев Л.И. Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота // Справочник: Инф. бол. животных М. «Агропромиздат», -1987. С. 98-99.

28. Гумеров В.Г. Сравнительное изучение эффективности ассоциированной вакцины против ПГ-3, ИРТ и хламидиоза крупного рогатого скота. // Матераилы Международной научной конференции посвященной 125-летию КГАВМ, часть 1, -Казань, -1998. С. 134.

29. Гумеров В.Г. Иммуноферментная тест-система для серологической диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота. // Тезисы докладов Всероссийской научной конференции

30. Совершенствование методов контроля, стандартизации и сертификации ветерианрных препаратов". ВГНКИ, Москва. - 2001. -С.125.

31. Дженсен Р., Маккей Д. Болезни крупного рогатого скота при промышленном откорме // Москва "Колос". -1977.

32. Джупина С.И. Методы эпизоотического исследования и теория эпизоотического процесса. // -Новосибирск: Наука. -1991. -144с.

33. Джупина С.И. Некробактериоз инфекция факторная.// Ветеринария. - 1999.-№2.-С.9-11.

34. Дудников А.И., Коропов В.Н., Ашуров С.А. и др. Иммуногенность у крупного рогатого скота и свиней противоящурной вакцины с маслянным адъювантом // Пробл. вет. иммунол. М., -1985. С. 138-139.

35. Егорова A.M., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика ИФА // -1991.

36. Емельяненко П.А. Иммунная система жвачных // Пробл. вет. иммунол. -М.,-1985.-С. 40-46.

37. Ефанова Л.И. Диагностика и профилактика наиболее распространенных инфекционных болезней телят и поросят: Учебное пособие. Воронеж: ВГАУ, 1991. - 128 с.

38. Жданов В.М., Гайдамович С .Я. Частная вирусология: Руководство. -М.: Медицина, 1982. Т. 2. - 496 с.

39. Зайцев Е.А., Симбирцев П.Ф., Зиневич Л.А. Влияние заболеваний и деформаций копытец на некоторые показатели спермопродукциибыков- производителей.// Актуал. вопросы акушер.- гинек. и хирург, патологии е.- х. животных.- М., -1982. С.56-58.

40. Закутский Н.И., Жестерев В.И., Вишняков И.Ф. и др. Культуральная инактивйрованная вакцина против ИРТ крупного рогатого скота // Ветеринария 1997. - №8. - С. 17-20.

41. Закутский Н.И., Жестерев В.И., Вишняков И.Ф. и др. Применение новой инактивированной вакцины против ИРТ КРС // Вестник РАСХН.- 1999. №5.-С. 66-68.

42. Иванов Г.А., Фомин Ю.В. Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота // Лабораторная диагностика вирусных болезней животных. -М.: Колос. 1972. - С. 101-107.

43. Иммунопрофилактика болезней животных: Пер. с нем. М.: Колос, 1981.-451с.

44. Кабанцев А.И. Иммунологические аспекты профилактики респираторных заболеваний телят: Автореф. дис. . канд. биол. наук.- Новосибирск, -1989. 18 с.

45. Какоулин Т.Е., Лудыпов Ц., Атутова С.Н. Профилактика и лечение некробактериоза крупного рогатого скота в Иркутской области.// Эпизоотология, диагностика, профилактика и меры борьбы с болезнями животных.- Новосибирск, -1997. С. 120-122.

46. Какоулин Т.Е., Лудыпов Ц., Атутова С.Н., Тириков И.Г. Некробактериоз крупного рогатого скота в Иркутской области.// Ветеринарные проблемы Забайкалья. -Новосибирск, 1997. -С.45-46.

47. Какоуллин Т.Е., Лудыпов Ц. Некробактериоз крупного рогатого скота.// Эпизоотология, диагностика, профилактика и меры борьбы с болезнями животных.- Новосибирск, -1997. С.115-116.

48. Камалов Г.Х., Алексеева И.И., Хузин Д.А. Получение чистых культур некробактериоза крупного рогатого скота.// Респ. науч.-произв. конференция.- Казань, -1991. С. 29.

49. Камалов Г.Х., Хузин Д.А., Алексеева И.И., Новиков О.С. Испытание эффективности инактивированных эмульгированных вакцин против некробактериоза крупного рогатого скота.// Респ. науч.-произв. конференция.-Казань,-1991. С.ЗО.

50. Камалов Г.Х., Хузин Д.А., Алексеева И.И. Формол-эмульсионная вакцина против некробактериоза.// Матер, науч.-произв. конференции по проблемам ветер, и животноводства. Казань, -1994. - С.ЗО.

51. Каримуллина И.Г. Оптимизация технологии культивирования вирусов парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и хламидий при разработке ассоциированной вакцины, Казань, Автореферат, -2004г.

52. Карышева А.Ф., Даньшина М.С. Профилактика и меры борьбы с инфекционными болезнями животных в комплексах Молдавии. Кишинев: Штиинца, -1983. - 129 с.

53. Карышева А.Ф., Конопаткин A.A., Спатырь Ф.В. Эпизоотология, меры профилактики и борьбы с острыми респираторными болезнями крупного рогатого скота. Кишинев: Штиинца, -1983. -100 с.

54. Карышева А.Ф., Конопаткин A.A., Спатырь Ф.В. Эпизоотология, меры профилактики и борьбы с острыми респираторными болезнями крупного рогатого скота. Кишинев: Штиинца, -1989. - 658 с.

55. Кирьянов Е.А., Больных В.Т. Эпизоотология некробактериоза животных.// Патология животных.- Владивосток, -1989.- С. 12-17.

56. Ковалев H.A., Музычин С.И., Бутьянов Д. Д. Профилактика инфекционных болезней животных // Под ред. H.A. Ковалева и С.И. Музычина. Минск: Ураджай. - 1988. - 173 с.

57. Коваленко Я.Р. Некробациллёз крупного рогатого скота и овец: Автореф. Дис.докт. вет. наук.-М., -1945. 25с.

58. Коваленко Я.Р. Некробациллёз.// Анаэробные инфекции с.-х. животных,- М., -1954. С.167-222.

59. Козловский P.A., Носов И.И., Шанин М.Ф., Ибрагимов А.И. Методика изготовления вакцины из лапинизированного вируса яшура типа О // Тез. докл. науч. произв. конф. (ВГНКИ). - М., -1972. - С. 54-55.

60. Коннов Н.М., Гаффаров Х.З., Шарипов Д.Ш., Равилов А.З., Шакуров М.Ш. Инфекционный ринотрахеит баланопостит у откормочных бычков // Научные труды КВИ, - 19.80, - Т. 133. - С. 9-12.

61. Кормолиев Р.Х. Иммуносупрессорные процессы при колостральном иммунитете у телят // Ветеринария. 1993. -№6. - С. 27-29.

62. Костыркин Ю.А. Усовершенствование средств и методов специфической профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, Владимир, Автореферат, 2003 г.

63. Крюков H.H. Инфекционный ринотрахеит (пустулезный вульвовагинит) крупного рогатого скота // Тр. ВИЭВ, 1970. - Тем 37. -С. 146-149.

64. Крюков H.H. Инфекционный ринотрахеит-пустулезный вульвовагинит крупного рогатого скота // Итоги науки и техники. Животноводство и ветеринария. М., -1980. -Т. 13. -С. 32-113.

65. Крюков H.H. Инфекционный ринотрахеит-пустулезный вульвовагинит крупного рогатого скота // Тр. ВИЭВ. 1970. - Т.37. - С. 164-149.

66. Крюков H.H. Некоторые итоги изучения вирусных болезней сельскохозяйственных животных // Тр. ВИЭВ. -1972. Т. 40. - С. 40.

67. Крюков H.H. Специфическая профилактика вирусных респираторных болезней сельскохозяйственных животных // Тр. ВИЭВ. -1982. -Т.55. -С. 52-57.

68. Кузнецова C.B., Кузнецов Д.П., Самуйленко А .Я., Белоусов В.И. Получение и очистка моноклональных а-тел к вирусу инфекционного ринотрахеита // Вирусные болезни с.-х. ж-ных: Тез. докл. науч.-практ. конф. Владимир, -1995. - С. 75.

69. Лабораторные методы диагностики некробактериоза е.- х. животных (Метод. Рекомендации) / НИИСХ Крайнего Севера. -Новосибирск. -1987.-42 с.

70. Лайшев А.Х., Семёнов Н.С. Некробактериоз северных оленей.-Якутск, -1971. -146 с. ■

71. Латария Т.Н. Иммунологические свойства вирусвакцины против инфекционного ринотрахеита при вакцинации стельных коров // Тр. ВИЭВ 1979. - Том 49. - С. 59-63.

72. Литвин В.П., Поживил А.И. Инфекционные и инвазионные болезни телят. Киев: Наукова думка, -1991. - 208с.

73. Лихолетов С.М. Современные аспекиы разработки вакцин, адъювантов и иммуномодуляторов // Успехи современной биологии. 1988. -Т. 105.-Вып. 1.-С. 83-99.

74. Лозовой Д.А. Усовершенствование технологии изготовления инактивированной эмульгированной вакцины против синдрома снижения яйценоскости-76: Дис. канд. вет. наук. Владимир, 2001.- 147 с.

75. Лярский 3. Диагностика вирусных болезней животных. М.: Космос, -1980.-400 с.

76. Магомедов A.A., Кебиров М.Г. Периодичность некробактериоза животных.// Тез. докл. юбил. науч.- произв. конф., посвящ. 75- летию Горе гос. аграр. ун- та. Владикавказ. -1993. - С. 304-305.

77. Магомедов A.A., Шарипов К.О., Раджабов М.Д. Эпизооотология, этиология и мероприятия при некробактериозе животных в Дагестане.// Тез. докл. юбил. науч.- произв. конф., посвящ. 75- летию Горе гос. аграр. ун- та. Владикавказ. -1993. - С.302.

78. Мажуга Е.П. Причины выбраковки коров на молочном комплексе.// Новое в борьбе с незаразными болезнями, бесплодием и маститами крупного рогатого скота. Персиановка. -1983. - С.7-10.

79. Мажуга Е.П. Сульфацитал при гнойно-некротических поражениях пальцев у крупного рогатого скота.//Ветеринария. 1998. - №3. - С.55.

80. Макаев Х.Н., Хузин Д.А., Акимов Е.К., Александров Д.И., Сабирова В.В. Разработка средств диагностики, лечения и профилактики некробактериоза крупного рогатого скота.// Тр. II съезда ветер, врачей РТ. -Казань. -2001. С. 152-154.

81. Макаев Х.Н., Хузин Д.А., Акимов Е.К. и др. Чтобы победить зло (разработка средств диагностики, лечения и профилактики некробактериоза крупного рогатого скота) // Ветер, врач 2000. - №4 -С. 56-60.

82. Мамков Н.С. Масляные адъюванты для противояшурных вакцин: Дис. . докт. вет. наук. Владимир. -1999. - 327с.

83. Матковська С.Г. Д1агностика шфекцшного ринотрахе1ту-пустульозного вульвовапшту великой рогатой худоби за позазниками антитш в носовому, шхвовому секретах та сльозк Автореф. дис. . канд. вет. наук. — Харьюв. -1999. 20 с.

84. Матковська С.Г. Сравнительное изучение диагностикумов для постановки РИГА и ее модификаций при инфекционном ринотрахеите крупного рогатого скота // Повышение продуктивности с.-х. ж-ных.: Тез. докл. науч. конф. 17-22 сент. 1991. Харьков. -1991. - С.133.

85. Медуницын Н.В. Вакцинология. М.: Триада-Х, -1999. - 272с.

86. Мельник Н.В., Пышкина Т.И., Меныпин В.В. Новые возможности эффективной борьбы с некробактериозом. // Материалы Международной научно-практической конференции, 24-25 апреля 2003- Щелково. 2003. - С. 1480149.

87. Меныпенин В.В., Ловченко Е.Г., Соломаха О.И. и др. Питательная среда для промышленного культивирования F. necrophorum // Ветеринария. 1997. - №3. - С. 27-28.

88. Мищенко В.А., Яременко H.A., Сухарев О.И., Ручнов Ю.Е. Экологические особенности герпесвирусов крупного рогатого скота / Экологические аспекты эпизоотологии и патологии животных. Матер. Международ, научно-произв. конф. -Воронеж. -1999. -С. 125-126.

89. Мищенко В.А., Гусев A.A., Яременко H.A. и др. Особенности респираторных инфекций телят // Ветеринария. -2000. -№9. С. 5-6.

90. Мищенко В.А., Ручнов Ю.Е., Коропова Н.В. и др. Результаты эпизоотологического мониторинга при инфекционном ринотрахеите крупного рогатого скота // Акт. пробл. патол. с.-х. ж-ных: Матер. Междунар. науч.-практ. конф. Минск. -2000. - С. 158-160.

91. Мищенко В.А., Лисицын В.В., Гетманский О.И. и др. Вакцинация новорожденных телят против инфекционного ринотрахеита и парагриппа-3 крупного рогатого скота // Вет. бютехнолопя. Бюл. Кшв. - 2002. - №2. - С. 171-176.

92. Муромцев С.Н. Копытная болезнь северных оленей.-Л.,-1935. -48 с.

93. Муромцев С.Н., Новикова Л.С. В. necrophorum и его роль в патологии е.- х. животных.// Советская ветеринария. -1935. -№8. -С. 1417.

94. Мустакимова А.Г. Некробациллёз у кур.// Сельское хозяйство Таджикистана. 1961. - №4. - С.35-36.

95. Нефедченко A.B. Латенция вируса ИРТ у крупного рогатого скота: особенности течения и эффективность иммуномодуляторов: Автореф. дис. . канд. вет. наук. Новосибирск. - 2002. - 23 с.

96. Никаноров П.Н. и др. Влияние кормления и физиологического состояния коров на заболеваемость некробактериозом.// Эпизоотология и меры борьбы с инфекционными болезнями животных. Новосибирск. -1985. - С.69-71.

97. Панкова Г.Е. Респираторные болезни крупного рогатого скота. -М.,-1986.-44 с.

98. Петрова О.Г., Климова Г.В., Татарчук А.Т. Иммунопрофилактика инфекционного пустулезного вульвовагинита крупного рогатого скота в хозяйствах свердловской облости // Тезисы научно-практической конференции. Санкт-Петербург. - 1994. - С. 55-56.

99. Пилипенко A.A., Борисова JI.M., Маслухина Б.В. Морфологические и физиологические особенности возбудителя некробактериоза северных оленей.// Вестник е.- х. науки, -1972. №2. - С. 66-69.

100. Пилипенко A.A., Борисова JI.M. Иммунологическое изучение комплексного антигена Bact. necrophorum // Диагностика, профилактика и терапия болезней животных на Крайнем Севере. -Новосибирск. -1983. С. 35-41.

101. Ребров П.И. Феномен иммунитета и вакцинация против некробациллеза северных оленей // Тр. НИИ СХ Крайнего Севера. -1960. -Т.8. -С. 14-20.

102. Ревнивых А.Г. Копытная болезнь северного оленя и её возбудитель.// Сб. по оленеводству, тундровой ветеринарии и зоотехнии.- М., -1932. С. 209-233.

103. Ревнивых А.Г. Этиология так называемой «копытной болезни» северных оленей.// Советская ветеринария. -1935. №8. - С. 18-21.

104. Романов Е.А. Усовершенствование технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против рота-, корона-, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят, Казань, Автореферат, канд. дисертации. 1999 г.

105. Самоловов A.A. Некробактериоз крупного рогатого скота (эпизоотология, диагностика и меры борьбы).// Авт. дис.докт. вет. наук. Новосибирск. -1991. - 24 с.

106. Самоловов A.A. F. necrophorum: морфологические, биологические свойства, классификация.// Научное обеспечение ветеринарных проблем в животноводстве. -Новосибирск. -1999. -С. 399-406.

107. Самоловов A.A. Диагностическая ценность культурально-биологических свойств F. necrophorum.// Диагностика болезней животных и профилактика их на фермах и комплексах. Новосибирск. -1984. - С. 53-58.

108. Самоловов A.A. Некробактериоз животных. -Новосибирск. -1993. -128 с.

109. Самоловов A.A. Причины некроза хвоста у бычков и их профилактика.// Диагностика и профилактика инфекционных болезней животных. Новосибирск. -1989.- С. 24-27.

110. Самоловов A.A. Современный взгляд на проблему некробактериоза крупного рогатого скота.// Актуальные вопросы ветеринарной медицины в России. Новосибирск. -1998. - С. 320-325.

111. Самоловов A.A. Среда для культивирования возбудителя некробактериоза.//Ветеринария. 1985. - №3. - С. 68-69.

112. Самоловов A.A., Лопатин C.B. Резистентность крупного рогатого скота при некробактериозе.// Эпизоотология, профилактика и меры борьбы с инфекционными болезнями. Новосибирск. -1993. - С. 91-94.

113. Самоловов A.A., Лопатин C.B., Цурбанов В.А. Лечение крупного рогатого скота при разных стадиях некробактериозного процесса.// Эпозоотология, диагностика, профилактика и меры борьбы с болезнями животных. Новосибирск. -1997. - С. 122-124.

114. Самоловов A.A., Никоноров П.Н. Заболеваемость коров некробактериозом при различных условиях кормления и содержания.// Сибирский вестник е.- х. науки. Новосибирск. -1982. -№4. - С. 81- 83.

115. Самоловов A.A., Никонорова М.Н. Обсеменённость содержимого рубца у крупного рогатого скота бактерией некробактериоза.// Эпизоотология, диагностика и меры борьбы с инфекцонными болезнями. Новосибирск. -1986. - С. 96-98.

116. Самуйленко А.Я. Зависимость уровня специфического местного и гуморального иммунитета у вакцинированного крупного рогатого скота от компонентного состава инактивированных противоящурных вакцин // Акт. пробл. вет. вирусол. Владимир. -1983. - С. 93-95.

117. Семенченко О.Г., Жукова Е.А., Климова Г.В. Передача вируса ИРТ-ИПВ крупного рогатого скота через сперму быков // Тезисы докладов ССХИ. Свердловск. - 1990. - С. 90-91.

118. Семенченко О.Г., Слободенюк В.К., Кондрашкова Е.Д. Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота // Методические рекомендации. Свердловск. - 1986 - 6 с.

119. Семенченко О.Г., Кондрашова Е.Д., Жукова Е.А. Эпизоотологические факторы инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в хозяйствах Свердловской области // Тезисы докладов научно-производственной конференции ССХИ. Свердловск. - 1988. -С. 76.

120. Сергеев В.А. Вирусные вакцины. Киев: Урожай. -1993. - С. 159-183.

121. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федотов В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов.- М.: «Колос», -1995. -320 с.

122. Сидорчук A.A. Некробактериозы животных.- Инфекционные болезни животных.- М.: ВО «Агропромиздат», -1987.- 231 с.

123. Сидорчук A.A., Дриаева М.Д. и др. Значение анаэробных микроорганизмов и их ассоциации в норме и при патологии у е.- х. животных.// Новое в диагностике, лечении и профилактике болезней животных. М., -1996. - С. 177-180.

124. Сидорчук A.A., Панасюк С.Д. и др. Комплекс мероприятий при некробактериозе крупнорго рогатого скота.// Ветеринария. -1994. №1. - С.12-15.

125. Сидорчук A.A., Панасюк С.Д., Кружнов H.H. и др. Система мероприятий по борьбе с некробактериозом крупного рогатого скота и копытной гнили овец.// Ветеринария. -1999. №6. - С. 23-27.

126. Соловьев Б.В., Фомин Ю.В., Шарабрин О.И. Испытание инактивированной вакцины против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота // Тр. ВГНКИ. -1975. -Том 22. -С.67-68.

127. Соломаха О.И. Серологическая идентификация В. necrophorum и обнаружение антител к ним в сыворотках крови северных оленейиммунофлуоресцентным методом: Автореф. дис. канд. вет. наук. М.,-1973. - 17 с.

128. Соломаха О.И. Некоторые морфологические особенности F.necrophorum.// Аграр. Россия, -2000. №3. - С. 59-61.

129. Сулейманов С.М. Структурно-функциональные особенности возникновения патологии у животных // Экол. аспекты эпизоотол. и патол. животных Воронеж. -1999: - С. 404-406.

130. Сулейманов С.М., Люкова Ю.П., Магомедов М.З. Электронная и люминесцентная микроскопия сурфактантной системы при бронхопневмании телят // Диагн., патогенез, патоморф. и профил. болезней с.-х. животных, Воронеж. -1993. С. 126-127.

131. Сулейманов С.М. Структурно-функциональные основы адаптации у молодняка сельскохозяйственных животных // Акт. пробл. с.-х. животных: Матер. Междунар. науч.-практ. конф. Минск, -2000. -С. 65-68.

132. Сурнев Д.С. Усовершенствование технологии изготовления инактивированной вакцины против синдрома гидроперикардита кур: Автореф. дис. . канд. вет. наук. Владимир, -2000. - 29 с.

133. Сухарев О.И., Петрова И. А. Результаты применения инактивированной вакцины против ИРТ животных // Пробл. молекулярной биологии: Сб. науч. тр. МВА, -1980. С. 21-23.

134. Сухарев О.И. Профилактика инфекционного ринотрахеита и парагриппа крупного рогатого скота. Автореф. дисс. докт. вет. наук. -Москва. -1988.

135. Сюрин В.Н., Фомина В.Н. Частная ветеринарная вирусология: Справочная книга. М.: Колос. - 1979. -472 с.

136. Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., Фомина Н.В. Ветеринарная вирусология. М.: Колос, -1984. - 376 с.

137. Сюрин В.Н., Васильев A.B., Карелин В.П. Закономерности и особенности противовирусного иммунитета // Пробл. вет. иммунол. -М.,-1985. -С. 28-31.

138. Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., Фомина Н.В. Диагностика вирусных болезней животных. М.: Агропромиздат, -1991. - 528с.

139. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В., Фомина Н.В. Вирусные болезни животных. М.: ВНИТИБП, -1998. - 928 с.

140. Тириков И.Г. Лечение некробактериоза у крупного рогатого скота.// Информ. Листок./ Иркутский межотраслевой центр науч.-техн. информ. и пропаганды. 1991. - С. 86-91.

141. Тириков И.Г. Оптимизацция лечебно-профилактичеких мероприятий при некробатериозе крупного рогатого скота.// Авт. дисс. канд. вет. наук. -Новосибирск, -1996. -18 с.

142. Трофимов И.Т., Митрофанов П.М., Гаффаров Х.З. Морфология цитопатического действия некоторых респираторных вирусов телят. // Ученые записки Казанского ветеринарного института им. Н.Э.Баумана, -Т.101.-1967.-С. 43-48.

143. Фомин Ю.В., Иванова Г.А., Бояршинов Б.Д., Судников В.А., Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота: клинические признаки и патологоанатомические изменения. -Материалы I межвуз. вет. вирусолог, конф., М., -1970. -4.2. -С.115-117.

144. Хараламбиев X. Иммунитет и иммунопрофилактика при вирусните респираторни заболявания по телетата в условията на промышленного им отглеждане. Обзорна информация. -София. -1977.

145. Хузин Д.А Клиническая диагностика некробактериоза крупного рогатого скота.// Материалы науч.-произв. конференции по проблемам ветер.и зоотехнии.-Казань. -2001. С. 101-102.

146. Хузин Д.А. Определение иммунного статуса животных вакцинированных против некробактериоза.// Матер, науч.-произв. конференции по проблемам ветер, и животноводства.- Казань. -1997. С. 272.

147. Хузин Д.А. К вопросу эпизоотологии некробактериоза крупного рогатого скота.// Актуальные проблемы жив-ва и ветеринарии.- Казань. -1999. С. 61.

148. Хузин Д.А. К вопросу патогенеза некробактериоза.// Материалы науч.-произв. конференции по проблемам ветер.и зоотехнии.- Казань, 2001.-С. 99-101.

149. Хузин Д.А., Камалов Г.Х. Результаты применения полиштаммовой формол-эмульсионной вакцины против некробактериоза крупного рогатого скота.// Мат. Научн.-произв. Конференции по проблемам ветеринарии и животноводства. -Казань. -1995.- С.49.

150. Хузин Д.А., Камалов Г.Х., Акимов Е.К. Культурально-морфологические и биохимические свойства музейных штаммов и изолятов возбудителя некробактериоза. Материалы Респ. научн.-производ. конференции. - Казань. -1997. - С.272.

151. Штрауб О.Х. Инфекции крупного рогатого скота, вызываемые вирусами герпеса // Пер. с нем. Л.Т. Осипян; Под ред. и с предисл. Д.Ф. Осидзе. М.: Колос, -1981. - 207 с.

152. Щербаков П.Н. Инактивированная вакцина против ИРТ: Автореф. . дисс. канд. вет. наук. --М., -1993. 25 с.

153. Юрков С.Г., Курносов А.Н., Витина С.А. и др. Универсальная роллерная технология культивирования перевиваемых клеток животных // Ветеринария 1995. - №9. - С. 29-34.

154. Юров К.П., Шуляк А.Ф. Профилактика инфекционных болезней телят // Болезни с.-х. животных вирусной и др. этиологий и меры борьбы с ними: Матер, науч.-практ. конф., 6-7 сентября 2001 г., Иркутск. Новосибирск, - 2001. - С. 9.

155. Ярцев В., Берников П. Сравнительная эффективность лечения быков при некробактериозных баланопоститах.// Болезни с.-х.животных в Забайкалье и на Дальнем Востоке.- Благовещенск, -1980. С.14-16.

156. Amoako К.К. et al. The effects of physical and chemical agents on the secretion and stability of a F. necrophorum hemolysin. // Vet. Microbial. -1996. V.51. -№ 1-2. - P. 115-124.

157. Arnault G.A. propos du complexe IBR/IPV observations de quelques formes clinniquesen en elevage traditionnel bovin dans le departement de la Creuse. Problemes poses. // Bull. Soc. Veter. Prat. F.R., 1977, V. 61., № 9, P. 585-621.

158. Baggott D. Hoof lameness in dairy cattle. // In Pract.- 1982.- V.4.- № 5.-P. 133-141.

159. Bamford A.I., Adair B.M., Foster J.C. Primary cytotoxic response of bovine peripheral blood leukocytes to'parainfluenza type 3 virus infection // Vet. Immunol. 1995. - V. 45, №12. - P. 85-95.

160. Baner K. und and. Serologiche Untersuchngen uber den vorbreitungegrad der IBR/IPV-Viruinfection bei Rinderm in Baneru // Tierarztl. Umsch. 1980. №9. - S. 594-600.

161. Beck B.E. Infectious bovine rhinotracheitis Encephalimyelit is in cattle and its differential diagnosis // Can. Vet. J., 1985, V. 16, №9, P. 269271.

162. Berg J.N., Scanlon C.M. Studies of Fusobacterium necrophorum from bovine hepatic abscesses; biotypes, "quantitation, virulence and antibiotic susceptibility//Am. J. Veter. Res.- 1982. -V.43. -№9. -P. 1580-1586.

163. Boersma W.G. et al. Post-laryngitis sepsis caused by Fusobacterium necrophorum: Lemierre syndrome. // Ned.Tijdschr.Geneeskd (Dutch.).-1993,-V.137.-№ 40.-P.2057-2058.

164. Brison D. Infectious bovine respiratory disease emerging essues and progress towards control // Proc. 19 World buiatrics Congr. - Edinburgh, 1996.-V. l.-P. 1-8.

165. Bryson D.G. Infectious bovine respiratory disease-emerging issues and progress towards control // Proc. 19 World Buiatrics Congr. -Edinburgh, 1996. V. 1. - P. 1-8.

166. Clark B.L. et al The role of Fusobacterium necrophorum and Bacteroides melaninogenicus in the aetiology of interdigital necrobacillosis in cattle // Austral. Veter. J 1985-V.62-№2-P-47-49.

167. Clark B.L. et al. Studies into immunisation of cattle against interdigital necrobacillosis // Aust. Vet J. 1986 - V63.-№4-8107-110.

168. Cook N.B. et al. Treatment and outcome of a severe form of foul-in-the-foot. // Vet. Ree.- 1995. -V. 136. -№ I. .p. 19-20.

169. Dufillot D. et at. Post-angina septicemia caused by Fusobacterium necrophorum in a 7-year-old child. // Arsh. Fr. Pediatr.- 1986.- V.43.- № 9.-P.719-721.

170. Durham P.J.K. Infectious bovine rhinotraheitis virus and its role in bovine abortion//N.Z. Veter. J., 1974, V. 22, № 10, P. 175-180.

171. Emery D.L. et al. Cultural characteristics and virulence of strains of Fusobacterium necrophorum isolated from the feet of cattle and sheep. // Aust. Vet. J.- 1985.- V.62.- № 2,- P.43-46.

172. Emery D.L. et al. Studies on the purification of the leucocidin of Fusobacterium necrophorum and its neutralisation by specific anticera. // Vet. Microbial.- 1986.- V. 11.-№ 4.- P.357-372.

173. Espinasse J. Aspects cliniques de la rhinotracheitis infectienses bovine (IBR/IPV) dans le sud-onest dela France // Proc. 20 th world Veter. congress., 1975, №3, P. 2055-2056.

174. Faye B. Environmental factors associated with lameness and limb disease in French dairy herds. // Rapp. / Sver. Lantbruksuiv. Veter. Med. Fak. Inst. Hustjurshyg. Skara.- 1988,- № 20.- P.67-75.

175. Feenstra P., Peters D., Seinhorst J. Klauenkrenpelheldsproblematick bij rundvee in Nederland. // Bedrijfson twikkeling.- 1983.- Bd. 14.- H.10.-P.766-770.

176. Figueras G. et al. Otogenic Fusobacterium necrophorum meningitis in children. // Pediatr. Infect, Dis. J.- 1995.- V. 14.- № 7,- P.627-628.

177. Foulkes G.D. et al. Fusobacterium osteomyelitis associated with intraosseosus gas. // Clin. Orthop. -1990. -№ 251. -P.246-248.

178. Garcia M.M., McKay K.A. A Satisfactory medium and technique for the mass cultivation of Sphaerophorus necrophorus. // Canad. J. Microbial.-1973.-V. 19.- P.396-398.

179. Garcia M.M, Chariton K.M„ McKay K.A. Characterization of endotoxin from Fusobacterium necrophorum. // Infect. Immun. 1975. -V. 11. -№ 2. -P.371-379.

180. Garcia M.M., Alexander D.C., McKay K.A. Biological characterization of Fusobacterium necrophorum cell fractions in preparation for toxin and immunization studies. // Infect. Immun. -1975. -V.ll. -№ 4. -P.609-616.

181. Gillespie J.H., Baker J.A., Wagner W.C. The relationship of infectious postular vulvovaginitis to infectious bovine rhinotracheitis virus. // Proc. 62 nd. Ann. Meet. Us Livestock Sanit. Assoc., Florida, 1958, V. 62, P. 119-126.

182. Greig A.S. Continuous cultivation and sucseptility to bovine viruses of cell lines derived from bovine embrionic tissus // Canad. J. Microbiol. -1958. V. 4.-P. 487-492.

183. Greig A.S. et al Cultivation in tissue culture of an infections agent from coital exanthema of cattle. A preliminari report. Canad. J. Comp. Med. Vet. Sci., 1985, V. 22, P. 119-122.

184. Gong J., Garcia J. Lemierre's syndrome. // Eur. Radiol.- 1999.- V.9.-№ 4,- P.672-674.

185. Groeneveld P.H. et al. Post-pharingitis sepsis caused by Fusobacterium necrophorum: Lemierre's syndrome. // Ned. Tijdschr. Geneeskd.- 1993.- V.137.- № 30.- P.1526.

186. Harris D.J., Hibburt C.D., Anderson G.A. The incidence, cost and factors associated with foot lameness in dairy cattle in south-western Victoria. //Austr. Veter. J.- 1988.- V.65.-№ 6,- P. 171-176.

187. Herric K., John B. Footrot in cattle // Jova state univ. Coop. ext. Paphlet 663-15. animal health Jact sheep 1976 - № 15.

188. Inoue T. et al. Chemical and biological properties of lippopolysaccharides from Fusobacterium necrophorum biovar A and biovar B strains. // NIPPON Juigaku Zasshi.- 1985,- V.47.- № 4.- P.639-645.

189. Kahrs R.F. Infections Bovine Rhinotracheitis // A. Revied and Update. J. Amer. Vet. Med. Assoe., 1977, V. 171, №. 10, P. 1055-1064.

190. Kanoe M., Imagawa H., Toda M., Sato A et al. Bacteriology of bovine hepatic abscesses. //Nippon Juigaku Zasshi.- 1976.-V.38.-№ 3.-P.263-268.

191. Kanoe M. et al. Partial characterisation of leukocidin from Fusobacterium necrophorum, // Zentralbl. Bacteriol. Microbiol. Hyg. (A) -1986. -V.261. -№ 2. -P. 170-176.

192. Kanoe M. et al. Use of enzyme-linked-immunosorbent assay for detection of IgG and lgM antibodies to Fusobacterium necrophorum in cattle. // Microbiols.- 1996.- V.87.- №353.- P.257-262.

193. Katie R.M., Katrinka M.O. mogusnosti proizvodnje hiperimunoy seruma protiv infekcije ovaca sa Sphaerophrus necrophorusam // Veter. Glasn- 1981 G-35-Br.6.-S-649-652.

194. Katie R., et al Resultatinasih ispitivanja vrednjsti aktivne immunophrofilakse za suzbijanje aferofornihinfekcija junadi u tovullveter. Glasnik- 1974-G28-Brl2-S947-954.

195. Kelling C.L., Schipper I. A., Strum G.E. Infections bovine rhinotracheitis (IBR) abortion observation on incidence in vaccinated andnonvaccinated and exposed cattle // Cornell. Vet. 1973. - V. 63, №3. - P.383.389.

196. Kelling C.L., Brodersen B.W., Perino L.J. et al Potentiation of bovine respiratory syncytial virus infection in calves by bovine viral diarrhoea virus // Proc. 19 World Buiatrics Congr. Edinburgh, 1996. V.l. - P. 20-26.

197. Kendrick J.W., McEntee K. The effect of artificial insemination with semen contaminated with IBR-IPV-Virus // Cornell Vet. 1967. - V. 57. -P. 3-11.

198. Kendrick J.W., York C.I., McKercher D.G.G comtroled field Triel ofvaccine for infections bovin rhinotracheitis // Proc. U.S. Livestok. San. Ass. 1956.-P. 155-158.

199. Kit S., Qavi H., Gaines J.D. et al Thymidine kinasenegative bovine gerpesvirus type-1 mutant is stable and highly attenuated in calves // Arch. Virol. 1985. -V. 86. - P. 63-83.

200. Kolar I.R., Schecheister I.L., Kammulage W.C. Use in cattle of Formalin-killed polivalent vaccine with adjuvant against IBR, BVD and PI-3 viruses // Amer. J. Vet. Res. 1972. - V. 33. #7. - P. 1415-1420.

201. Langworth B.L. Fusobacterium necrophorum: Its characteristics and + role as an animal pathogen. // Bacretiological. Reviews.-1977.- V.41.-№2.1. P.373-390.

202. Lee C.Y., Lee G.G., Nam S.M. Seroepidemiological studies on virusborne diseases of cattle in the Kwangju and Connam areas // Korean J. Vet. Res. 1995. - V. 35., №3. - P. 615-623.

203. Lim B.K. et al.// Echague E. Arch. Intern. Phar. Therapie.- 1961.- V. 130.-№3-4.- P. 336.

204. Lomba F., Bienfet V. IBR virus and occurrence of Metritis at Parturition in the Bovine Belgian Blue white Breed. Brit. Vet. J., 1976, V. 132 n. 2, P. 178-181.

205. Ludwig H. Bovine herpesviruses // The Herpesviruses (Ed. B. Roizman) I.B. New York; London, Charter, 1982. P. 135-214.

206. Ludwig H. Herpesviruses of bovidae: The characterization, gronping and role of different types, including viruses // CEC Symp. on "Latendy of herpesviruses", Tubigen, 21-23 Sept. 1982. 1984. - P. 171-189.

207. Madin S.H., York C.J., McKercher D.G. Isolation og the infectious bovine rhinotracheitis virus. Science, 1956, V. 124, P. 721-722.

208. Mahin L., Chadli M., Addi A. A study on digital disease of cattle in Morocco. // Ann.Rech.Veter. -1986. -V.17. -№1. -P.7-13.

209. Mayr A. Pathogenese und Bekempfung von Herpesinfektionen beim Nutztier // Tierarztl. Umsch. 1988. Bd. 43. - S. 4-11.

210. Mayr A., Eissner G., Mayr-Bibrack B. Handbuch der Schutzimpfungen in der Tiermedizin. Berlin; Hamburg: Verlag Paul Parey, 1984.

211. McKercher D.G., Wada E.M. The pathology of Abortion caused by the virus of Infectiouns bovine Rhinitracheitie // Pathology Vet. 1964. -№1. - P. 1-17.

212. McKercher D.G., Saito J.K., Wada E.M., Straub O. Current status of the newer virus diseases of cattle // Proc. 62 Annual Proceedings U.S. Livestock Sanit. Ass. 1958. - V. 1959. - P. 136-156.

213. Mohanty S.B. Bovine respiratiny viruses. Adv. in Veter. Sc. Comp Med., New York, 1978, V. 22, P. 83-109.

214. Moussa A., Fedida M. Les abortement in fectieux non bruce iliques des bovins. Role des virus Bull. Soc. Sc. Veter. Med. Comp. Lyon, 1979, V. 81, n. 2, P. 117-121.

215. Nakagaki M. et al. Partial characterization of Fusobacterium necrophorum protease. //Microbios.-199l.-V.66.-V.-№ 627.-P. 117-123.

216. Narayanau S. et at. Ribotyping to compare Fusobacterium necrophorum isolates from bovine liver abscesses, ruminal walls andruminal contains. // Appl. Environ. Microbiol.- 1997.- V.63.- № 12.-P. 4671-4678.

217. Nesbitt G. Bovine dermatotropic herpesvirus infections. Med. veter. Pract., 1990, V. 61., №.9, P. 751-753.

218. Neumann L.E. Infectious bovine rhinothacheitis and bovine virus diarrhea. J. Dairy. Sci, 1976, V. 59., № 6, P. 1179-1183.

219. Patinaik N., Mohanty B.N., Ray S.K.H. et al. Isolation of Fusobacterium necrophorum from bovine abortion. // Indian J. Anim.-1994,- Vol.64.- .№4.-P.355-357.

220. Pedersen G. et al. Necrobacillosis. // Ugeskr. Laeger.- 1992.- V. 154.-№30.-P. 2061-2064.

221. Pospisil L., Mensik J., Valicek L. Isolation and identification of a bovine respiratory syncytial virus in Czechoslovakia // Acta. Vet. Brno. -1978. V. 47.-P. 185-190.

222. Richard C. De pietin conception actualles sur l'etiopathogenie et sur la vaccination.//Bull. Soc. Prat. Fr. 1977.- № 5.- P. 307-329.

223. Roberts D.S. The pathogenic synergy of Fusiformis necrophorus and Corynebacterium pyogenes. 1. Influence of the leucocidal exotoxin of Fusobacterium necrophorum. // Br. J. Exp. Pathol.-1967.- № 48.- P.665-673.

224. Roberts D.S., Egerton I.R. The aetiology and pathogenesis of ovine foot rot. II .The pathogenic association of F. nodosus and F. necrophorum. // J. Comp. Pathol.- 1969.- № 79.- P.217-227.

225. Roberts D.S. Toxic, allergenic and immunogenic factors of Fusiformis necrophorus. // J. Comp. Pathol.- 1970.- № 8.- P.247-257.

226. Scanlan C.M. et al. Experimental hepatic necrobacillosis infection in cattle // Cornel Vet.- 1983.-V.73.-№2.-P.l 17-124.

227. Scanlan C.M. et al. Bovine rumenitis liver abscess complex: a bacteriological review. // Cornell Vet.-1983.-V.73.-№ 3.-P.288-297.

228. Scanlan C.M. et al. Comparative biological features of a rat liver abscess model induced with three Fusobacterium necrophorum strains. // Am, J. Vet. Res.-1983.- V.44.- № 9.-P. 1789-1792.

229. Scheicher F., Salat O., Bezille P., Espinasse J. Approache seroepidemiologiques des troubles respiratoire syncytial // Rev. Med. Vet. -1990. V. 141, №2. - P. 117-123.

230. Schroeder R.J., Moys U.M.D. An acute upper respiratory infection of dairy cattle // J. Am. Vet. Med. Ass. 1954. - V. 125. - P. 471.

231. Shinjo T., Miyzato S„ Kaneuchi C., Physiological and biochemical characteristics of Fusobactorium necrophorum biovar A and biovar B strains and their deoxyribonucleic acid homology. // Japan. J. Veter. Sc.- 1981.-V.43.-№ 2.-P.233-341.

232. Shinjo T. Stability of hemagglutinating and hemolytic activities in Fusobacterium necrophorum biovar a-strains. // Japan. J. Veter. Sc.- 1986.-V.48.- № 3.- P.603-604.

233. Shinjo T.S. Stability of hemagglutinating and hemolytic activities in Fusobacterium necrophorum biovar A strains. // Nippon Juigaku Zasshi.-1986,- V.48.- № 3.- P.603-604.

234. Shinjo T. et al. Adherence of Fusobacterium necrophorum biovar A and B strains to erythrocytes and tissue culture cells // Ann. Inst. Pasteur. Microbiol.- 1988.- V. 139.- № 4.- P.453-460.

235. Shinjo T. at al. Recognition of biovar C of F. necrophorum (Flügge) Moore and Holdeman as Fusobacterium pseudonecrophorum sp. nov., nom. rev.(ex Prevot 1940). // Int. J. Syst. bacterial.- 1990.- V.40.-№ 1.-P.71-73.

236. Shulc L. If you think a live IRB, BVD, PI-3, vaccine is more effective than killed-think again // Beef. 1987. - V. 24, №4. - P. 563.

237. Siebert S., Auer S., Heinen E. et al Marker-Vakzinen-Nueue moglichkeiten in der IRB-Kontrolle. T. 1. BHV-1 -Infektionen das Problem // Tierarztl. Umsch. - 1995. - V. 50, №8. - P. 530-533.

238. Simon P.C. Cultivation and maintenance anaerobic medium for aerobic incubation. // Canad. J. Comp. Med,- 1974.- V.38r- Jan.- P.94-96.

239. Slauson D.O., Lay I.C., Castleman W.L. Neilsen N.R. Alveolar macrofage phagocytic kinetics following pulmonary parainfluenza-3 virus infection // J. Leucocyte Biol. 1987. - V. 41, №5. - P. 412-420.

240. Smith G.R. et al. The prevalence of Fusobacterium necrophorum biovar A in animal faeces. // Epidemiol. Infect.- 1993.-V. 110.-№ 2.-P.327-331.

241. Solberg I.M. Neutralising antibody to infectious bovine rhinotracheitis/infectious pustular vulvovaginitis (IBR/IPV) virus in foetal calf serum // Acta. vet. scand. 1975. - V. 16. - P. 549-550.

242. Spratbrow P.B. The isolation of infectious bovine rhinotracheitis xirus from bovine semen // Acta. Vet. Scand. 1968. - V. 44. - P. 410-412.

243. Straub O.C. Allergische Sofort- und Spatreaktionen bei IBR-IPV-immunen Rindern // Zbl. Bakt. I. Abt. Orig. 1970. - Bd. 214. - S. 483-495.

244. Straub O.C. Blaschenausschlag und Sterilitet beim Rind // J. AndersBericht IV. Tagung der Weltgesellschaft f. Buiatrik Zurich. 1966. S. 535538.

245. Straub O.C. Erfahrungen bei der Bekämpfung der Intektiosen Bovinen Rhinotracheitis (IBR) und der Infektiösen Pustulosen Vulvovaginitis (IPV) // Tierarztl. Umsch. 1977. Bd. 32. - S. 107-112.

246. Straub O.C. Impfung gegen den Blaschenausschlag und die Rhinotracheitis des Rindes // Tierarztl. Umsch. 1972. - Bd. 27. - S. 496500.

247. Straub O.C. Infectious bovine rhinotracheitis virus // Virus Infectious of Rhinotracheitis. Amsterdam, 1990. V. 9. - P. 71-108.

248. Straub O.C. Persistence of infectious bovine rhinotracheitis-infectious pustular vulvovaginitis virus in the respiratory and genital tract of cattle // Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 1979. - V.2. - P. 285-294.

249. Straub O.C., Ohlinger V., Wittman G. Die Impfung von Rinden mit einer inaktivierten Aujeszkyvirusvakzine. I. Homologe und heterology (IBR-IPV) Antikorperbildung // Tierarztl. Umschau. 1983. - Bd. 38. - S. 528-534.

250. Tan Z.L. et al. Factors affecting the leukotoxin activity of F. necrophorum.//Vet. Microbial.- 1992,-V.31.-№ 1 .-P. 15-28.

251. Tan Z.L. at al. Serum neutralising antibodies against Fusobacterium necrophorum leukotoxin in cattle, which experimentally induced or naturally developed hepatic abscesses. // J. Anim. Sei.- 1994.- V.72.-№ 2-P. 508.

252. Tan Z.L. et al. Biochemical and biological characterization of ruminal Fusobacterium necrophorum. //FEMS Microbial. Lett.- 1994.-V. 120.-№ 1-2.-P. 81-86.

253. Tan Z.L. et al. Biological and biochemical characterization of Fusobacterium necrophorum leucotoxin. // Am. J. Vet. Res.- 1994.- V.55.-№ 4.- P.515-522

254. Tan Z.L. et al. Purification and quantification of Fusobacterium necrophorum leucotoxin by using monoclonal antibodies. // Vet. Microbial.-1994,- V.42.- № 2-3.-P. 121-133.

255. Tan Z.L., Okwumabua 0., Nagaraja T.G. Differentiation of Fusobacterium necrophorum ribotyping. // Conference of research workers in animal diseases, 75 th. / Abstracts of papers of the annual meeting.-Chicago,1994.-P. 16.

256. Tanyi J.,Romvary J., Aldasy F., Isolation of influenza a virus strains from cattle. Acta Vet. Acad. Sei. Hung., 1992, V. 24, P. 341-343.

257. Todd J.D. Development of intranasal vaccination for the immunization of cfittle against infectious bovine rhinotracheitis // Canad. Vet. J. 1974. -V. 15, №9. - P. 257-259.

258. Todd J.D., Volenec F.J., Paton I.M. Intranasal vaccination agains infectious bovine rhinotracheitis: studies on earli of protection and use of thevaccine in pregnant cows // J. Amer. Vet. Med. Ass. 1971. - V. 159. - P. 1370.

259. Turpin M. et al Essaide prevention et de traitement du fourvhet et de lucere de la zinc associee a une vaccination speeifique // Revul de Medceine Veterinaire- 1983 V134-№l-P. 19-24.

260. Van Drunen Littel-van den Hurk S., Tikoo S.K., Liang X. et al Bovine herpesvirus-1 vaccines // Immunology and Cell Biology. 1993. - V. 71. -P. 405.-420.

261. Wagner K., Becker W., Zettl K. Infektiöse bovine Phinotracheitis-infektiose pustulose Vulvovaginitis (IBR-IPV) // Tierarztl. Praxis. 1982. -Bd. 10. -S. 329-338.

262. Werner H.E., Neuhaus F., Hussels H. A biochemical study of fusiform anaerobes. //Med. Microbiol. Immunol.- 1971.-№ 157.-S. 10-16.

263. Wilke J., Letz W. Gleichzeitiges Auftreten von Konjunktivitis und Vulvovaginitis verus sacht durch IBR/IPV virus in einer Farsenherde. FORTPEL. Besem und Anfzucht. Hanst., 1980, V. 6, n. 4, P. 256-258.

264. Wilson T.E. Observations and Comments on Two Outbreaks of Abortion Associated with IBR virus Infection. Canad. Vet. J., 1984, V. 15, P. 227-229.

265. Yates W.D.G. A review of infectious bovine rhinotracheitis? shipping fever pneumonia and viral-bacterial synergism in respiratory diseaseof cattle // Canad. J. Comp. Med. 1982. - V. 11. - P. 225-263.

Информация о работе

Коннов, Максим Николаевич
кандидата ветеринарных наук
Казань, 2004
ВАК 03.00.07

Диссертация

Специфическая профилактика инфекционного баланопостита откормочных бычков смешанной этиологии - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы