Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Совершенствование технологии трансплантации эмбрионов свиней

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Совершенствование технологии трансплантации эмбрионов свиней"

БЕЛОРУССКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА

УДК 636.4:612.64.089.67

МИНИНА Наталья Генраховна.

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ СВИНЕЙ

06.02.01 — разведение, селекция и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

Жодино — 1995 г.

Работа выполнена в отделе биотехнологии Белорусского научно-исследовательского института животноводства.

Научные руководители: член-корр. ААН РБ, доктор с.-х.

наук, профессор Горин В. В., кандидат биологических наук Горбунов Ю. А.

Официальные оппоненты: доктор с.-х. наук Федосова Н. X.,

кандидат биологических наук Трощенкова Л. В.

Оппонирующая организация: Белорусский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. С. Н. Вышелесского.

Защита состоится » . . 1995 г. на

заседании совета по защите диссертаций Д 05.14.01 при Белорусском научно-исследовательском институте животноводства по адресу: 222160, г. Жодино Минской обл., ул. Фрунзе, И.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Белорусского научно-исследовательского института животноводства.

Автореферат разослан » . 1995 г.

Ученый секретарь совета по защите диссертаций

Л

'• З'4'"' М. А. Гузенок

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность течи диссертация. В настоящее время трансплантация эмбрионов служит ооновой использования современных биотехнологических методов в животноводегве. Она получила теоретическое признание и находится на стадии активной разработки в странах о развитой отрасльо свиноводства. По мнение специалистов, применение метода трансплантация открывает перспективы для максимального использования генетичеоксго потенциала особо ценных в племенном отношении матон и позволяет быстро злменить худших животных более продуктивными ( Да^ О.Ь. . с/а.те$, О. Е. Д56Ч).

Основными мотивами применения трансплантации эмбрионов в свиноводстве является распространение новых линий,освежение крови в инбредных отадах, размножение потомков от проверенных свиноматок, вклшение новых генов в опецифичеокие стада, свободные от патогенных заболеваний, и тестирование самцов на рецессивные гены, экспорт и импорт эмбриочов, генетическо-селекционное улучшение пород (¿ал(£Я.&.. Нс££ ,1975; 1961; Ро£л&С., 1585).

Трансплантация зародышей открыла у овиней доотуп к ооцитам, зиготам и эмбрионам, что позволяет веоти эксперименты ¿л. па»о я выполнять генно-инженерные работы, а также повысить потенциал реализации яйценлеток у элитных свиней. Посредством метода ведутся попытки определить пол эмбрионов перед пересадкой путем хромооом-ного анализа и использования специфических внтигенов к клеткам мужского пола {■Лдл.ср I. , ъ&ги.ззои'Ягй, 1993).

Несмотря на многочисленные исследования, которые проводились и проводятся во многих странах мира по получению эмбрионов овиней, ряд вопросов научно-методячесного плана остаются неревенными. В их числе основные приемы, касающиеся техники извлечения и пересадки, а также оценки качества и культивирования зародышей, изучение взаимосвязи гормонального отатуса о результатнв -ноотью трансплантации эмбрионов. Недостаточно хорошо изучены вопросы, касающиеся вариабельности и нестабильности реакции яичников на введение гонадотропяых препаратов, завискиоотя выхода жизнеспособных эмбрионов от дозы применяемого для обработки доноров гояадотролина. Зги и другие вопросы обусловили проведение наиих исследований по совершенствованию технологии трансплантации эмбрионов свиней.

Связь работы о крупными научными программами, темами. Исследования проведены в соответствии с заданием 03 (номер госудэрот-

венной регистрации 195486) подпрограммы "Еивотноводство программы "Агроксмплеко".

Цель и задачи исследований. Целью наших исследований явилооь совершенствование технологии трансплантации вибрионов свиней.

Для достижения этой цели были поставлены следувдие задачи:

- разработать методы синхронизации охоты и полиовуляции у свиноматок-доноров и реципиентов;

- отработать наиболее эффективные приемы операционного наркоза;

- разработать способы, позволяющие повысить точность оценки качества и выход эмбрионов от числа овуляций;

- установить взаимосвязь прогестерона, эстрадиола и кортизона о уровнем полиовудяции, качеством эмбрионов н их приживляе-мостьв.

Научная новизна. Предложены технологические элементы трансплантации вибрионов свиней, включающие устройства для извлечения, пересадки, культивирования эмбрионов. Впервые установлена связь физических свойств (интерференции) промывной маточной жидкости с качеством зародышей в их приживляемостью. Выявлена взаимосвязь между гормональным фоной нровн свиноматок и уровнем полиовуляции, а также количеством, качеством извлеченных эмбрионов и их приживляемостью у реципиентов.

Практическая значимость полученных результатов. Предложена технология трансплантации эмбрионов свиней, позволяющая достичь 90-93$ извлеченных зародышей а обеспечивающая получение опоросов на уровне 5С$ от числа пересадок. Установлены оптимальные дозировки использования гонадотропных препаратов для индукции пади-овуляции у свиноматок после отъема поросят. Предложен способ повышения эффективности трансплантации эмбрионов с использованием метода интерферометрии, позволяющей повысить их приживляемость на 10,9%, а также способ отбора свиноматок-доноров и реципиентов по гормональным показателям крови. Материалы диссертации могут быть использовавы в работе селекционеров-свиноводов, а также в учебном процессе при изучении курса "Акушерство, гинекология и искусственное осеменение сельскохозяйственных животных".

Экономическая значимость подученных результатов. Применение разработанных методов трансплантат« эмбрионов свиней позволяет своевременно выявить и исключить случаи использования непродуктивных животных на основании применения гормональных тестов, повысить количество жизнеспособных эмбрионов на 11%, а также ис-

пользовать в работе распространенные в условиях республики, недорогие и простые в приготовлении и эффективные медикаменты, инструменты и оборудование.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- гормональный тест оиенки доноров и реципиентов на пригодность к трансплантации;

- дозировка гояадотропных препаратов, пркмемемых для индукции полиовуляиии;

- правила применения операционного наркоза;

- извлечение, оценка качеотва и пересадка эмбрионов;

- усовершенствовать« ««годи трансплантации эмбрионов свиней.

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена

лично автором. Отдельные этапы исследований проводились оовмеот-но о сотрудниками лаборатории физико-химических я специальных исследований.

Апробация результатов диссертации. Основные положения диссертации доложены и получили положительную оценку на: I-оЙ Международной научной конференции молодых ученых я специалистов (Киев, 199*0; научно-практической конференции по свиноводству (Харьков, 1954); заседаниях Ученого совета БелНИИ! (1993-1995); расширенном заседании отдела биотехнологии (1995).

Опубликованность результатов. По теме диссертации опубликовано 4 научные работы.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на /У-/ страницах машинописного текста, состоит из введения, общей характеристики работы, обзора литературы, материалов и методов исследований, экспериментальной части, обсуждения результатов, выводов и практических предложений, списка использованной литературы, содержащего 167 источников, в том числе 114 иностранных. Содержит 23 таблицы и 5 рисунков.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследований

Исследования проведены в 1993-1995 гг. в ОПХ "Будагово" Минской области, а также в отделах биотехнологии и физино-химичеоких и специальных исследований Белорусского НИИ животноводства. Схема проведения опыта представлена на рисунке.

В качестве доноров использовали клинически здоровых основных cdиноматок белорусского мясного типа, живой массой 150 кг,

и

Схема проведения опыта

после завершения у них продуктивного периода. В качестве реципиентов- аналогичных животных, о менее выраженной племенной ценностью.

Полиовуляцию у доноров вызывали с помощью инъекции ГС1К (сывороточный гонадотропин) через 24 ч после отъема поросят. Для изучения оптимальной дозы препарата было сформировано три группы животных-аналогов по возрасту, живой маоое, физиологическому состоянию, которым вводили соответственно 10, II, 12 ИЕ/кг живой массы. Для синхронизации овуляции попользовали ХГ(хоряоничесиий гонадотропин) в дозе 5 ИЕ/кг живой маосы, который инъецировали через 72 ч после инъекции ГИК.

Эмбрионы вымывали через 18 и 72 ч после первого искусственного осеменения под общим наркозом методом лапэротомии.

Наркоз осуществляли хлоралгидратом (0,04 г/кг живой маооы, ректально) в ксмпленсе о аминазином (0,21 мл/кг живой маосы, внугримыпечяо).

Разрез делали по белой линии живота, между второй задней парой молочных сосков. Через него поочередно извлекали о каждой стороны яйцеводы, яичники и рога матни. После учета реакции яичников на гонадотропин промывали яйцеводы и рога матки с помоадью гибкого катетера специальной конструкции, который вставляли со стороны бахроики яйцевода на глубину 7-6 см. Для одноиоментного вымывания эмбрионов из яйцеводов, зоны маточно-грубного сочленения и верхушки рога матки использовали 15 мл среды Дюльбекко, содержащий 15?-ный раствор плодной сыворотни теленка и имеющей температуру 37°С. Извлечение зародышей проводили о помощью катетера Фаллея (США), который вставляли через прокол отенки рога матки на расстоянии 10-15 см от исгмуса. Аналогичны» манипуляции осуществляли на другом яичнике, яйцеводе и роге матки. По окончании извлечения эмбрионов органы возвращали в походное положение, а рану зашивали.

Промывную жидкосп. сливали в чашки Петри и исследовали под микроскопом МБС-9. Оценку жизнеспособности эмбрионов проводили по 5 бальной шкале.

Для изучения влияния плотиости промывной жидкости на качество эмбрионов и их лриживляемость ее исследовали на интерферометре ЛИР-с. При кратковременном культивировании полученных зароди-шей до момента пересадки их реципиенту использовали термостат нашей конструкции.

Подготовку и прозедение операций на свиноматках-реципиентлх

б

осуществляли аналогично, как и на свиноматках-донорах. Имплантировали эмбрионы в яйцеводы и рога матки при помощи катетера конструкции БелНИИХ.

Для изучения факторов, влияющих на результативность эмбрио-пареоадок, учитывали такие показатели, как вид и доза использованных гонадотропинов; количество и качество желтых тел; количество ановуляторных фолликулов; число извлеченных зародышей, их качество и стадия развития; рог матки, в который пересаживали эмбрионы.

Исследования крови на содержание эстрадиола, прогестерона и кортизола проводили дважды. Первый раз - через сутки после отъема поросят, перед обработкой ГСЕК, о целью отбора животных в качестве доноров и реципиентов. Повторно - перед извлечением эмбрионов, в целях выяснения степени влияния гормональной обработки ва уровень полиовуляции. Кровь для исследований брали у свиноматок из ушной вены. Концентрацию гормонов определяли радиоимцуно-логичсским методом в лаборатории физико-химических и специальных исследований БелНИИЖ.

Полученный в результате экспериментов цифровой материал обработан методом биометрической статистики по Рокнцкому П.®. (1571) о использованием ЭВМ "Иокра-Ш".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Индукция охоты и полиовуляции у свинсыаток-доноров и реципиентов

Введение гонадогропных препаратов позволяет повысить потенциальные возможности тех фолликулов, которые без дополнительной гормональной обработки никогда не овулируют.

В результате наших исследований (табл. I) было установлено достоверно большее 0,001) количество свуляций у животных -доноров, которые подвергались гормональной обработке (21 против 13). Увеличение числа овуляций при обработке свиноматок ГСЛК в комплексе о ХГ достоверно (Р^. 0,01) повышало количество извлеченных зародышей от одного донора с 11,6 до 19. Пригодных ' к пересадке зародышей было получено достоверно больше (Р<0,01) у животных I группы, которым инъецировали гонадотропины, по сравнению о животньыи П группы, которые приходили в охоту спонтанно (17 против 10,4).

Уровень полиовуляции и качество эмбрионов у свиноматон--доноров в спонтанную и индуцированную охоту

Группы

Коли- . Количество желтых чество".___тел_____

Гвсего 7 на~1~го-~

ных : : лову

Извлечено эмбрионов, ___штук_____

: Из них пригодных к пере: садке,_ятук______

всего :на I го- : :лову :

".всего: на I го: лову

опытная

5 105 21+0,4х" 95 19+0,7" 90+0,7 85 17+0,7" 89+0,7

контрольная 5 65 13+0,7 56 11,6+0,9 89+0,4 52 10,4+0,7 89,6+0,9

Здеоъ ■ далее: х - Р-с 0,05; хх - р.с 0,01; ххх - Рг. 0,001

П

Оптимальной дозой гонадотропина для индукции полиовуляции следует считать II ИБ/кг живой маооы, Нецелесообразно дальнейшее повышение дозы препарата до 12 ИЕ/кг живой массы вследствие понижения количества пригодных к пересадке эмбрионов на 11% (16,6 против 14,6).

Введение гонадотропных препаратов животным опытной группы увеличивает продолжительность течке на ч (72 против 96), а также доотоверно (Р 0,01) увеличивает саму охоту на 12 чаоов (46 против 60).

В проведенных нами исследованиях для овнхронизации овуляции у доноров я реципиентов использовали хорионичеокий гонадотропии, обладавший овуляционнш действием. Инфекцию хориогонина проводила в дозе 500 И ва животное через 72 часа после введения ГС1К. Данная доза хорионичеокого гонадотропина является оптимальной.

Использование операционного наркоза

В качестве наркопчеоисго вецеотва применяли хлоралгидрат в дозе 0,04 г/кг, который вводили ректально, предварительно растворенным в раотворе крахмального клейотера (в виду раздражающего действия на слизистую оболочку кишечника). Для улучшения течения наркоза использовали премедикацив нейролептический средством - шин&зиноы (0,21 мл/кг живой маосы). Нами установлено, что наиболее эффективным является двукратное потенцирование наркоза. Еавотные хорошо переносили хлоралгидратный наркоз, стадия возбуждения у них не наблюдалось. Однако время наступления наркоза, его интенсивность и продолжительность были различны в зависимости от многих уоловий: возраста, типа нервной деятельности, температуры окружающей среды.

Общее послеоперационное состояние животных при выходе из наркоза было без случаев осложнения, животные оаыоотоятельно передвигались в индивидуальны: боксы.

Установлено, что использование хлоралгидрата в комплексе о аминазином не оказало отрицательного влияния на воспроизводительную функцию животных (табл. 2). В результате проведенных исследований не было выявлено больших различий по количеству поро-оят в помете между двумя группами свиноматок. Многоплодие в I и П группах »йвотйых составило в среднем на одну свиноматку 10,9 и 10,1 голов соответственно. В го же время процент супоросности бил несколько выше у свиноматок контрмьной группы (75 против 69).

Изучение действия наркотичеоних средств на оплодотворящуг» способность и плодовитость овиноматок

Показатели

__Группы

I - -~l.~S.~-

0,9^-ный раотвор : аминазин +■ хлорал-хлорида натрия__:_гид2ат______

Количеотво животных В т.ч. супоросных Процент оупороснооти Чиоло опорооов Многоплодие, голов

13 10 75 10

10,9

12 в 69 7 10,1

Извлечение и переоадка зародыаей

В процеоое исследований была изучена эффективность извлечения эмбрионов в зависимоотв от места введения катетера Фаллея (табл. 3). Отмечено, что целесообразно вводить катетер на расстоянии 10-15 см от маточно-трубного оотленения. Это обеспечивает получение 90-935? эмбрионов от количества желтых тел.

Таблица 3

Эффективность извлечения эмбрионов в зависимоотя от места введения катетера

Показатели

Место введения катетера, ом

" ~5 7 1о ~ ~ 7 "

15

Количеотво животных 5

Реакция яичников на I

донора 20+0,7

Извлечено эмбрионов

на I донора 15,8+0.

Процент извлечения 79+0,7

5

21,2+0.4

19,1+0,6 90+0,7

5

22+0,5

20,5+0,6 93+078*

хх

Всего было извлечено 463 эмбриона, из них 203 - через 48 чаоов и 260 -через 72 часа. Вчмытые эмбрионы находилиоь на стадия 2-х, 4-х, 6-ти, 6-ми, 16-ти блаотомеров.

Возраст евин ома ток-доноров не оказал существенного влияния на количество извлекаемых у них зародышей, однако число жизне-

способных вибрионов о возраотом доноров уменьшалось.

Более высокий процент оупорооности был установлен у свиноматок-реципиентов при переоадке »ародышей в яйцевод - 505?, что на 11% болы&е, чем при переоадке эмбрионов в рог матки. Супорос-ность реципиентов бша выше (50£) при переоадке эмбрионов на стадии от б до 16 блаотомеров, в оравнении о пересадкой зародышей на стадии от £ до 4 блаотомеров (40$). Таким образом, эффективность трансплантации тем выше, чей старше эмбрионы.

С увеличением количества имплантируемых зародышей возрастает их приживляемооть в половых путях свиноматок-реципиентов. Так, при переоадке от 8 до 15 эмбрионов оупороснооть составила 33%. При увеличении количества зародышей от 16 до 21 супороонооть возросла на 10$ и составила 43%. Сна была наивысшей (50$) у тех свиноматок-реципиентов, которым имплантировали от 22 до 26 эмбрионов.

Таблица 4

Приживляемооть эмбрионов в зависимости от количества пересаженных зародышей

Показатели

Количество зародышей

6-15 : 16-21 : 22-28

Количество эмбриопересадок 6 7 10

Число супоросных реципиентов 2 3 5

Процент супороонооти 33 43 50

Число опоросов 2 с 4

Многоплодие, голов 4 6.5 8

С увеличением количества зародышей многоплодие повысилось о 4 до 8 поросят в среднем на одну свиноматку.

Использование метода интерферометрии (табл. 5) позволяет повысить эффективность эмбриопересадок, которая выражаетоя в увеличении правивляемоста эмбрионов у свиноматок-реципиентов на 10,9% по сравнение о общепринятш методом визуальной оценки зародышей иод микроскопом (50 против 39,1). Показатель светового црелоиления промывной жидкости, равный 0,257-0,576, считается соответствующим полноценный биологическим показателям качества трансплантируемых эмбрионов.

Установлена обратная взаимосвязь между содержанием в крови

Изучение эффективности трансплантации эмбрионов в связи с показателем светового преломления промывной жидкости

Группы животных

Показатели : опыгныв ("п0 показателю • светового преломления ¡ промывной жи^кости^__ •оТ579-оТ983 ¡0,257^0,578~ Контрольная (методом визуальной оценки под микроскопом)

Произведено эмбриопере-оадок II 12 23

Трансплантировано эмбрионов, шт. 198 216 414

В среднем на одного реципиента, шт. 18 18 18

Установлена супорооность, гол. 3 6 9

Установлена супорооность27 50 39,1

Выявлено многоплодие,голов 5,7 7,3 6,4

прогестерона и эотрадиола и показателем интерференции. С уменьшением яониентрации в крови двух данных гормонов происходит увеличение показателя оветового преломления промывной жидкости. По содержанию кортизола и показателю интерференции связи не обнаружено (табл. 6).

Таблица б

Показатель светового преломления в связи о гормональньм профилем крови доноров

¡Коли- ¡Показатель Группа :чество ¡светового ¡голов ¡преломления

¡промывной : ¡жидкости

I б 0,257-0,368 П 6 0,365-0,625 Ш 7 0,626-0,983

Содержание гормонов

Прогестерон, Зстрадиол,: Кортизол, нг/мл : пг/мл ; нг/мл

61£В,5 204 ,8*2£.6 517э±В,0 164,1+22,9 4,^7,3 202.6^7,9

41.3*6.3х 33,579,4 21,475,4

Э{.'{¡ектйвнэзть трансплантация аибрионов моягп лоэысить л-/Т4и испсяьзоэзния транквилизаторов. С этой аельс ч&/и применяло?! с,Ъ%-ный раствор аминазина. Причем данный преазраг вводили в

два приема: 1/3 чаогь дозы - в первую инъекцию и 2/3 части -после 15-20 минут экспозиции. Оптимальной дозой аминазина является 0,21 мл/кг живой масоы.

Опорос овиноматок-решшиенгов проходил в обычные для данного вида животных ороки, через 110-115 дней пооле переоадки зародышей. На одну свиноматку-реципиента получено в среднем 6 поросят. Однако пооле опорооа наблюдалось снижение оплодотворяв -мости до Это можно обадонить тзм, что хирургическое вмешательство сопровождается некоторой осложнениями и определенной физиологической перестройкой организма оамок, что окааываег непосредственное влияние на последующий процесс, связанный о нормализацией их воспроизводительной функции.

Сравнительное изучение гормонального огатуоа крови свиноматок-доноров и реципиентов в овязи о уровнем полиовуляции, количеством и качеотвом извлеченных эмбрионов, а также их приживляемостью

Проведены исследования по изучению влияния инъекций сывороточного гонадотропика на содержание половых гормонов,коры над-цочечников в периферической крови овиноматок. Установлено повышение концентрации прогеотерона о 1,7 до 31,5 нг/мл, эстрадио-ла - с 12,7 до 50,4 яг/мл, кортизола - о 111,9 до 197,5 нг/мл при индуцированном половом цикле, по сравнению о концентрацией данных гормонов в спонтанную охоту.

Доза введения гонадотропина оказывает непосредственное влияние на концентрацию гормонов в крови свиноматок. Результаты исследований показали, что о увеличением дозы ГСЕК происходит повышение концентрации гормонов в плазме крови.

Изучена связь между гормональньм статусом свиноматок-доноров в период, предшествующий введению экзогеннис гонадотропинов для вызывания полиовуляции и ответной реакцией яичников (табл.7).

Существует положительная зависимость между концентрацией прогестерона, эстрздиода и кортизола в крови и ответной реакцией яичников на введение гонадотропинов. Содержание в ней прогеотерона на уровне 63,2 яг/мл, эстрадиола - 78 пг/мл и кортизола на уровне 249,6 нг/ыл позволило получить максимальное количество овуляций (22-27).

Нами установлена также прямая связь между общим количеством извлеченных вибрионов, о одной стороны, и содержанием эстра-

Уровень полиовуляции в зависимости от гормонального фона крови свиноматок-доноров

Группа , число овуляций

Показатели : I, -7 : П, »7 : Ш, -4

14-17 : IÜ-2I : 22-27

Прогеотерон, нг/мл 18,02+2,3 30,8+4,04 63,2+4,6х*

Зотрадиол, пг/мл 39,64; 3,4 47,9+7,5 78,0+7,2ХХ

Кортизол, нг/мл 164,8+ 8,5 197,9+11,9 249,6+25,7х

диола и прогестерона в крови доноров - о другой. Наибольшее количество эмбрионов (19-26) извлечено у овиноматок о повышением уровня прогеотерона до 52,3 нг/мл и эстрадиола до 68,7 пг/мл (табл. 6).

Таблица 8

Связь количества извлеченных эмбрионов о содержанием гормонов в крови доноров

: Группы, ноличеотво извлеченных эмбрионов

Показатели : I, -5 : П. "6 : И, -7

10-15 : 16-18 : 19-26

Прогеотерон, нг/мл 15,3+1,9 25,3+3,6 52,3+5,8ХХ

Зотрадиол, пг/мл 33,6+3,4 45,6+7,6 б6,7+6,1ххх

Кортизол, нг/мл 183,5+13,9 167,4+10,5 230,9+18,2х

В результате проведенных исследований выявлено, что максимальное ноличеотво пригодных для пересадок зародывей (17-25) можно получить при концентрации прогестерона на уровне 48,5 нг/мл и эстрадиола - 64,6 пг/мл.

Основным критерием эффективности использования метода трансплантации эмбрионов является их приживляемость, оупо-роснооть реципиентов. Повышение ее результативности возможно как при использовании зародышей лучшего качества, так и более тщательном подборе реципиентов. Нами проведены исследования, по предварительному изучение гормонального профиля кровх сви-

нома ток-реципиентов в связи о приживляетстьв эмбрионов (тайя,9).

Таблица 9

При жив ля ем ость эмбрионов в овяаи о концентрацией гормонов в крови реципиентов

Группы

:Коли-:чеотво :живот-:ных

Содержание гормонов

Прогеоте-рон, нг/мл

Эстрад иол, пг/мл

Кортизол, нг/мл

Су пор оон ыв

• п

Несупорооные

9 7

13,Э+1ЛХ 38,6+4,6 192,7+15,3 8,9+0,9 30,4+5,2 206,6+19,1

Материалы табличных данных свидетельствует о том, что состоянию оупоросности реципиентов соответствует содержание про -гестерона у них в крови перед проведением пересадки зародышей на уровне 13,3 нг/мл, в то время как концентрация гормона у несупоросных животных была дооговерно ниже на 4,4 нг/мл и составляла 8,9 нг/мл (Р-С 0,05),

ВЫВОДЫ

1. Предложена технология трансплантации эмбрионов свиней, позволяйся повысить точность оценки качества (на 10,9$) и выход эмбрионов от количества желтых тел (до 90-93$), обеспечивающая прикивляемость их у 50$ реципиентов.

2. Введение свиноматкам-донорам ГС1К (сывороточный гонадотро-пин) в сочетании о ХГ (хорионичеокий гонадотропин) повышает количество овулировавших фолликулов, что приводит к увеличению числа извлекаемых зародышей. Оптимальной дозой ГСЖК для индукции полиовуляции следует считать II ИЕ/кг живой маосы.

3. Наиболее эффективным является двукратное потенцирование наркоза, где ооновнш наркотическим веществом взят раствор хлоралгидрата (0,04 г/кг «ивой массы), а для улучшения течения наркоза использована преиеднкаикя нейролептическим средством -аминьэинои (0,21 мл/кг живой масоы),

В целях «влечения зародышей целесообразно вводить катетер на расстоянии 10-15 си от маточно-трубного сочленения. Данный опособ обеспечивает 50-93% извлекаемы* эмбрионов от чис-

ла овуляций.

5. Установлено, что о увеличением количеотва имплантируемых зародышей возрастает их приживляемооть в половых путях овинома-гок-реиипиентов. Супороснозгь у реципиентов была наивысшей (50!?), которым пересаживали от 22 до 28 эмбрионов.

6. Использование метода интерферометрии позволяет повысить эффективность эмбриопереоадон, которая выражается в увеличении приживляемооти эмбрионов у свиноматок-реципиентов на 10,95? по сравнению о общепринятым методом визуальной оценни. зародышей под микроскопом (50 против 39,1). Выявлена обратная взаимосвязь между содержанием в крови прогестерона и эотрадиола и показателем интерференции. С уменьшением концентрации в крови данных гормонов происходит увеличение показателя светового преломления промывной жидкости.

7. Выявлена положительная зависимость между концентрацией прогестерона, эотрадиола и кортизола в крови доноров и ответной реакцией яичников на введение гонадотропинов. Содержание в ней прогестерона на уровне 63,2 нг/мл, эотрадиола - 78 пг/мл и кортизола на уровне 249,6 нг/мл позволяет получить максимальное количество овуляций (22-27).

8. Установлена прямая овязь между количеством полученных зародышей и содержанием прогестерона и эотрадиола в крови доноров, Максимальное количество эмбрионов (19-26) извлечено у свиноматок о повышением уровня прогестерона до 52,3 нг/мл и эотрадиола до 68,7 пг/мл, а также выявлена зависимость между концентрацией этих гормонов и качеством эмбрионов. Наибольшее количество пригодных для пересадки зародышей (17-25) можно получить при концентрации прогестерона на уровне 48,5 нг/мл н эотрадиола - 64,8 пг/мл.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Производству предлагается усовершенствованная технология трансплантации эмбрионов свиней, использование которой позволяет значительно ускорить разведение наиболее ценных животных при создании специализированных типов и линий, вести обмен генетическим материалом (эмбрионами) между различити племенными хозяйствами без риска переноса ин{екциояных зэболе'чкий.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Горбунов Ю.А., Минина Н.Г., Лукашевич Т.Н., Гандха А.И. Техника рационального получения эмбрионов у свиней// Научные основы развития животноводства в Республике Беларусь. - Мн.,1994,-Вып. 25. - С. 126-133.

2. Горин В.В., Горбунов Ю.А., Минина Н.Г. Метод отимуляции охоты и полиовуляции у свиноматок при трансплантации эмбрионов. -Мн,, 1995. - 4 о. - (Информ. БелНИИ экономики и информации АПК).

3. Минина Н.Г. Индукция суперовулнции фолликулов у свиней -доноров эмбрионов // Селекционно-биотехнологические методы использования генетического потенциала животных: Тез. докл. I Меж-дунар. конф. молодых ученых и специалистов (16-17 февраля 1994 г., Киев). - Киев, 1994. - С. 56.

4. Минина Н.Г. Техника и результаты траноплантации эмбрионов свиней. - Мн., 1995. - 4 с. - (БелНИИ экономики и информации АПК).

Р Э 3 Ю М Е

дысертацыйнай работы М1н1най Н.Г. "Удасканаленне тэхналогП траноплантацы1 эмбрыёнау св1ней".

ЭМЕРЫЕН, ДОНАР, РЭЦЫЦЕНТ. АВУЛЯЦЬН, 1ШЛАНТАЦШ, КАТЭТАР, ГАРМОНЬ!, ЛАПАРАТАШ , ТРАНСПЛАНТАЦИЯ, Б1ЯТЭХНАЛ0Г1Я.

Прапанавана тэхналог1я траноплантацы1 эмбрыёнау св1ней, уклвчаючая аптымальныя даз1роук! I выкарыстанне ганадатропных прэпаратау для Хндукцы! палХавуляцы1 у св1наыатак пасля адыман-ня парасят, прыстасаванне для павялХчзннл, перасадк1 I кульгы-вавання зародкау, а таксама опооаб павышэння эфектыунасц1 транс-плантацы! эмбрыёнау з прымяненням метаду 1нтэрферометры1, даз-валяочы павыс1иь дакладнасць ацэнк! якасц1 I 1х прыжыуляльнасць на 10,9"?. распрацаваны спосаб адбору св1наматак-донарау I рэиы-гПентау на аснове номплекснага гарманальнага тэсту. Выкарыстанне лраланаааных метпдау дазвол1иь атрымаиь 90-93$ вынятых за-родклу ад л1ку авуляцый I забяопечвае атрыманне ? вытворчых умовах апзросау у 50,? жывёл!н ад л!ку рэиып!ентау.

17

РЕЗНЫЕ

диссертационной работы Мининой Н.Г. "Совершенствование технологии траноплантации эмбрионов свиней".

ЭМБРИОН, ДОНОР, РЕЦИПИЕНТ, ОВУЛЯЦИЯ, ИЗВЛЕЧЕНИЕ, ИМПЛАНТАЦИЯ, КАТЕТЕР, ГСРМОИЫ, ЛАПАРОТСМИЯ, ТРАНСПЛАНТАЦИЯ, БИОТЕХНОЛОГИЯ

Предложена технология траноплантации эмбрионов свиней, внлю-чаицая оптимальные дозировки использования гонадотропных препаратов для индукции пслиовуляции у свиноматок пооле отъема поросят, устройства для извлечения, пересадки и культивирования зародышей, а также способ повышения эффентивностж трансплантации эмбрионов о использованием метода интерферометрии, позволяющий повысить точноогь оценки качества и их прияивляемооть на 10,9$. Разработан способ отбора овиноматок-доноров и реципиентов на основе ксмплеко-ного гормонального теста. Использование предложенных методов позволяет получить 90-93% извлеченных зародышей от числа овуляций и обеспечивает получение в производственных условиях опоросов у 50$ животных от числа реципиентов.

of the thesis by il.U.Uinina " Improvement of the technology ol' embryo* transfer in swine".

UifiKYDS, mURWS I'liiMSPKB, i^BhTOSKXTIUC'.ÍIOil, Xi. JOH, HfiCIiaiUij!, ÜVUJ*mOtf, iia-iAUTATiOM, CAl'Htí'l'isií, HOit «iOí.ES, UWAííCI'CjUY,

üiü'i'üCiiiioxoaY.

A technology of embryos transfer in swine is proposed which is based on the optimal doseo oI ¿onadotrophic preparations for multiovulatioa induction in bows after piolets weaning, a device for embrycB extraction and transfer and the application of interferometry method which enable« to improve the accuracy of embryos quality estimation and their surviving rate by 10. A method of donors and recipients selection has been developed based on hormonal teBte. Our technology enables to incxea&u thft number of viable embryos to 90-93/* and the rate of farrowin¿u to 50».

s и а а А к у

Полиграфическое предприятие Управления делами Президента Республики Беларусь Зак. Тир. Ь%>