Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Совершенствование методов введения гена в пронуклеусы зиготы и получение трансгенных кроликов с геном гранулоцитарного колониестимулирующего фактора

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шепель, Никита Иванович

ВВЕДЕНИЕ

1. Обзор литературы. 9 1.1. Получение и использование трансгенных животных.

1.1.1. . Методы переноса генов

1.1.1.1. Перенос генов посредством микроинъекции ДНК

1.1.1.2. Транспорт ДНК с использованием ретровирусных векторов.

1.1.1.3. Пересадка ядер транфецированных генами.

1.1.1.4. Использование сперматозоидов в качестве векторов экзогенного ДНК.

1.1.2. Экспрессия генов.

1.1.3. Области применения транспорта генов. 19 1.1.3.1. Рост и развитие животных. 19 •1.1.3.2. Получение молока с желаемыми свойствами.

1.1.3.3. Повышение качества и выхода шерсти у овец.

1.1.3.4. Повышение устойчивости сельскохозяйственных животных к инфекционным заболеваниям. 23 •

1.1.3.5. Биологическое моделирование патологических состояний человека.

1.1.3.6. Создание трансгенных животных - доноров органов для трансплантации человеку.

1.1.3.7. Трансгенные животные - продуценты биологически активных веществ медицинского назначения и для перерабатывающей промышленности.

1.1.3.8. Выбор вида для получения трансгенных животных

1.1.3.9. Кролик, как продуцент гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (ГКСФ)

1.1.3.10. Биология, функция методы получения и применения гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (ГКСФ)

2. Материалы и методы исследования

2.1. Объекты исследования

2.2. • Генные конструкции

2.3. Подбор доноров и реципиентов

2.4. Схема гормональной подготовки доноров

2.5. Синхронизация овуляции у реципиентов.

2.6. Методика извлечения зигот у кроликов. '

2.7. Оценка полученных эмбрионов и микроинъекция гена.

2.8. Пересадка микроинъецированных эмбрионов

2.9. Методика получения вазектомированных самцов кроликов.

2.10. Получение и выращивание крольчат.

2.11. Молекулярно-генетический анализ

2.11.1. Выделение геномной ДНК и анализ интеграции.

2.11.2. Полимеразная цепная реакция

3. Результаты исследований.

3.1. Изучение возможности применения нового способа транспорта гена после инъекции в цитоплазму зиготы.

3.1.1. Сравнительная оценка разных способов стимуляции суперовуляции.

3.1.2. Влияние микроинъекции на развитие эмбрионов in vitro.

3.1.3. Эффективность трансплантации микроинъецированных эмбрионов. 75 •

3.1.4. Анализ интеграции трансгена

3.2. Получение трансгенных кроликов с геном гранулоцитарного колонестимулирующего фактора (ГКСФ).

3.2.1. Изучение ряда факторов на эффективность стимуляции суперовуляции и получение эмбрионов и потомков.

3.2.2. Изучение влияния разных способов извлечения зигот кроликов н выход эмбрионов.

3.2.3. Изучение качества извлеченных зигот и яйцеклеток после стимуляции суперовуляции у кроликов.

3.2.4. Изучение качества микроинъецированных эмбрионов кроликов при культивировании in vitro.

3.2.5. Изучение эмбриональных потерь в плодный период у кроликов после введения микроинъецированных зигот.

3.2.6. Изучение влияния возраста пронуклеуса на эффективность интеграции гена.

3.2.7. Изучение эффективности получения трансгенных кроликов с введением gl GCSF в зиготу.

3.2.8. Изучение интеграции генной конструкции gl GCSF в плодах кроликов после пересадки микроинъецированных зигот.

4. Обсуждение результатов исследований.

5. Выводы.

6. Практические предложения.

7. Литература.

Принятые сокращения aiAT a i-антитрипсин а-Лак а-лактоглобулин

Ad5 аденовирус H

•ALV вирус лейкоза кур

Ар ампициллин

ARE область, содержащая АТ-богатые элементы

BLG р-лактоглобулин bo бычий cas казеиновый

CHO яичник китайского хомячка

CMV мышиный цитомегаловирус

DAF фактор, усиливающий отторжение

DHFR дигидрефолатредуктаза

ES эмбриональные стволовые клетки

GFP зеленый флуоресцирующий белок gl глобулиновый h человеческий hGH гормон роста человека hI12 ген интерлейкина человека

ICF-1 инсулиноподобный фактор рост

Ig иммуноглобулин

MCP мембранный кофакторный белок

NLS сигнал ядерного транспорта rab кроличий

RSVLTR участок длинного терминирующего повтора вируса саркомы Рауса

SDS додецилсульфат натрия

Sh ble фактор устойчивости актиномицетов к блеомицину

SV вирус саркомы Рауса tPA тканевой плазминогенный активатор

UTR нетранслируемая область

WAP кислый белок сыворотки молока

ААТ а 1-антитрипсин асРНК антисмысловая рибонуклеиновая кислота

БГР бычий гормон роста

БЛВ вирус лейкоза крупного рогатого скота

ГКСФ гранулоцитарный колониестимулирующий фактор

ГМКСФ гранулоцитарный макрофагальный колониестимулирующий фактор

Гн - РГ гонадотропный рилизинг гормон

ГР гормон роста

ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота дНТФ дезоксирибонуклеотидтрифосфат

ИЕ интернациональные единицы кДНК комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота

КОЕ колониеобразующая единица

КРС крупный рогатый скот

КСФ колонесимулирующий фактор

ЛГ лютеотропный гормон

ME международные единицы мРНК матричная рибонуклеиновая кислота

МСН главный комплекс гистосовместимости ' !

ПГФ простогландин

ПЦР полимеразная цепная реакция

ПЯЛ полиморфноядерный лейкоцит

РНК рибонуклеиновая кислота

CAT хлорамфениколацетилтрансфераза

СЖК сыворотка жеребых кобыл

СПИД синдром приобретённого иммунодефицита

СТГ соматотропный гормон

ФСГ гипофизарный фолликулостимулирующий гормон

ХГ хорионический гонадотропин

ЧГР гормона роста человека

ЧХГ человеческий хорионический гормон

Введение Диссертация по биологии, на тему "Совершенствование методов введения гена в пронуклеусы зиготы и получение трансгенных кроликов с геном гранулоцитарного колониестимулирующего фактора"

Развитие молекулярной генетики, позволяющей целенаправленно нарабатывать ДНК, как носителя генетической информации, открывает новые перспективы в животноводстве и с помощью трансгенных животных в .биомедицине. Применение метода генной инженерии связаны с надеждами ученых с улучшением продуктивности и качества животноводческой продукции, повышения резистентности к болезням и созданием так называемых "генных форм" или трансгенных животных - биореакторов ценных биологически активных веществ главным образом для медицины. Основа стратегии использования трансгенных животных как биореакторов состоит во включении в клетки организма генов, которые вызывают у них синтез новых белков, как правило, медицинского назначения.

С молоком трансгенных животных уже получены целый ряд ценных лекарственных веществ а-антитрипсин [Archibald et al., 1990], антитромбин -III [Meade at al. 1997], ИГФ - 1 [Brem et al., 1994], протеин С [Velander et al., 1992] и биологически активных веществ технологического назначения -химозин (Эрнст и др. 1997, Прокофьев М.И. 1999), лактоферрин [Kimpenfort et al. 1991].

Выбор трансгенного животного определяется, прежде всего, потребностью планируемого продукта на мировом рынке и сроками, требуемыми для производства трансгенных животных, чтобы удовлетворить потребность рынка.

В наших экспериментах для получения рекомбинантного белка, гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (ГКСФ) были выбраны кролики, так как потребность в этом препарате не высокая, около 500-700 граммов для всей страны, а кратчайшие сроки получения лактирующих кроликов для удовлетворения потребность в этом продукте составляют 15 месяцев, тогда как на крупном рогатом скоте 30-40 месяцев.

В задачу исследований входило:

1. Изучение возможности получения трансгенных кроликов путем ■ микроинъекции различных генных конструкций в цитоплазму ооцита.

2.Совершенствование гормональной обработки и техники пересадки микроинъецированных зигот на эффективность выхода эмбрионов на одного донора, токсичность действия различных генных конструкций на дальнейшее развитие эмбрионов, их приживляемость по результатам имплантации и получения потомства.

3. Сравнительное изучение хирургического извлечения эмбрионов и после убоя кроликов на эффективность выхода эмбрионов на одного донора.

4. Изучение синхронности индукции овуляции у кроликов доноров и • реципиентов на приживляемость микроинъецированных зигот после пересадки реципиенту.

5. Получение трансгенных кроликов на уровне плода и получения потомков после пересадки микроинъецированных зигот реципиенту.

1. Обзор литературы.

1.1. Получение и использование трансгенных животных.

Развитие молекулярной генетики привело к разработке методов, позволяющих целенаправленно и в больших количествах нарабатывать ДНК как носителя наследственной информации. Эти методы открывают для животноводства новые перспективы, так как появляется возможность работать на генном уровне (выделение, секвенирование, рекомбинация и транспорт отдельных генов). Применение методов генной инженерии в животноводстве дает основание прогнозировать, что традиционные методы разведения животных будут дополнены и даже заменены новыми-технологиями.

Животное, несущее в своём геноме чужеродный ген, определяют как трансгенное, а интегрировавшийся в геном реципиента ген - как трансген. Продукт этого гена - белок является трансгенным или рекомбинантным продуктом.

С помощью переноса генов, можно добиться изменения некоторых свойств организма, придать ему новые качества. При передаче трансгена потомству возможно создание трансгенных линий животных.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Шепель, Никита Иванович

ВЫВОДЫ

1. Сравнительное изучение двух препаратов сыворотки жеребой кобылы, нативного СЖК и очищенного сергона, показало проявление различной реакции яичников кроликов на обработку, как по числу овуляций, так и по выходу оплодотворенных яйцеклеток, а именно, 17,2 и 29,6 овуляций, 15,3 и 25,5 яйцеклеток на одного донора при применении СЖК и сергона, соответственно.

2. Выявлено влияние микроинъекции различных генных конструкций на эмбриональное развитие оплодотворенных яйцеклеток кролика. Введение в цитоплазму зиготы генных конструкций GCN и GAL нормальное развитие продолжалось у незначительно меньшего числа зигот (77,8 и 66,7%) по сравнению с контролем (90,3%). Микроинъекция генной конструкции gl. GCSF в зиготы кролика не оказала влияние на развитие эмбрионов до стадии бластоцисты (78,7% против 77,1% в контроле). После микроинъекции генной конструкции Rec А ни одна зигота не продолжила развитие до стадии морулы и бластоцисты, что свидетельствует о токсическом действии этой генной конструкции.

Если микроинъекция большинства генных конструкций не оказала существенного влияния на развитие эмбрионов до стадии бластоцисты, то дальнейшее их развитие в течение беременности сопровождалось снижением выживаемости до 32,6% в период имплантации и до 17,5% в период, рождения живого потомства по сравнению с процентом эмбрионов на стадии бластоцисты (78,6%).

3. Микроинъекция генных конструкций GCN и GAL и пересадка их кроликам-реципиентам сопровождалось, соответственно, сохранением беременности у 75% и 42,9% крольчих и выживаемостью 15,0 и 13,7% эмбрионов до рождения живых потомков. Вместе с тем, в этих экспериментах не было получены кролики после пересадки эмбрионов, микроинъецированных генной конструкцией Rec А, что подтвердило ее токсическое действие на развитие эмбрионов.

Продемонстрирована возможность получения трансгенного потомства (8,3%) при микроинъецировании одной из трёх генных конструкций (GCN) в цитоплазму, а не в пронуклеус зиготы, как это достигается обычно.

4. Сравнивалась эффективность получения эмбрионов из яйцеводов кроликов при хирургическом извлечении и после убоя. Процент извлеченных яйцеклеток при хирургическом извлечении (66,13%) статистически достоверно ниже, чем после убоя (92,63%) (р <0,001). Кроме того, после второй гормональной обработки при повторной хирургической операции снижается число извлеченных яйцеклеток. Вместе с тем, проведение двух хирургических операций и затем убоя кролика, эффективность использования доноров по числу извлеченных зигот повышается вдвое, по сравнению с тем, которое получают при убое кролика-донора.

5. Изучено влияние синхронности индукции овуляции у кроликов-доноров и реципиентов на приживляемость микроинъецированных зигот после пересадки. Стимуляция овуляции у реципиентов непосредственно перед микроинъекцией и пересадкой зиготы, т.е. примерно, после 2-х часов после индукцией овуляции у кролика-донора или' одновременно со стимуляцией овуляции у кролика-донора, сопровождалось сохранением беременности до рождения потомства у 50% и 62,5% кроликов-реципиентов. Индукция овуляции у кроликов- реципиентов за 44 часа до пересадки, т.е. за сутки до вызывания овуляции у донора ни в одном случае не сопровождалось рождением потомства.

6. Изучена эффективность приживляемости микроинъецированных зигот и интеграции гена после использования 5 фрагментов генной конструкции gl GCSF, полученных с использованием одинаковой техники конструирования, но в разное время. После применения первых двух фрагментов наблюдалась сравнительно пониженная приживляемость эмбрионов (53,1%-53,5%), а в последующих экспериментах повысилась до 67,3%-70,2%, а в последние до 94,6%. Эти различия можно объяснить повышением квалификации оператора по пересадке эмбрионов. Об этом же свидетельствует и примерно одинаковая приживляемость отдельных эмбрионов во всех группах, за исключением второй.

7. Микроинъекция гена gl GCSF в первых двух группах не' сопровождалось получением трансгенных животных, что, по-видимому, объясняется некорректными сроками введения гена на поздней стадии развития пронуклеусов, а в остальных группах при микроинъекции более ранних пронуклеусов интеграция колебалась в пределах 1,3-12,0%, что согласуется с литературными данными.

Практические предложения.

1. Для стимуляции суперовуляции у кроликов-доноров зигот, с целью получения трансгенных животных, предпочтительно использовать очищенный препарат сыворотки крови жеребых кобыл (СЖК) - Сергон, по сравнению с нативной СЖК.

2. Для оценки токсичности генной конструкции рекомендуется предварительная проверка микроинъекции гена на выживаемость зигот до стадии бластоцисты в условиях культивирования in vitro.

3. При повторных хирургических извлечениях зигот из яйцеводов кроликов, по сравнению с убоем кроликов-доноров для извлечения зигот, эффективность их использования повышается примерно вдвое.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шепель, Никита Иванович, п. Ленинские горы, Московской обл.

1. Абертс Б., и др. Молекулярная биология клетки? Москва, "Мир", 1994).

2. Амиров А.Р. Определение интеграции трансгенов./ Биотехнология. 1998.-№1.

3. Зеленин А.В., Тарасенко О.В., Колесников В.А. и др. Экспрессия гена дистрофина человека в скелетных мышцах мышей mdx после баллистической трансфекции // Генетика. 1998. - Т.34. - №6. - С.730-736.

4. Зиновьева Н.А., Безенфельдер У. Получение яйцеклеток и пересадка микроинъецированных зигот у кроликов. / Онтогенез. 1996. Т.27.№3. с 214-217.

5. Иванова М.М. Изучение рецептор-опосредуемого трансгенеза в клетки эмбрионов млекопитающих доимплантационных стадий развития и анализ-ДНК трансгенных животных. / Автореф. М. ВНИИСБ. 1998.

6. Кеда Ю.М. Биологические свойства гормона роста человека. Гормон роста человека: Сб.науч.тр. Пущино, 1988. - Т.12. - С.17-23.

7. Кузнецов А.В. Трансгенные животные. Приёмы конструирования // Биотехнология. 1995. - №3-4. - С.3-6.

8. Леонтюк С.В., Дубницкий А.А., Гусев Б.А., Дёмина М.Ф. Болезни кроликов. "Колос", 1974.

9. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование./М. "Мир". 1984.

10. Ю.Мусиенко М.И., Макаревич А.В., Эрнст Л.К. и др. Культура клеток из ткани легкого трангенного кролика продуцент гормона роста КРС //Докл. ВАСХНИЛ, 1991. №1. - С.28-32.

11. Пигаревский В.Е. Зернистые лейкоциты и их свойства. М.: Медицина, 1978.-302 с.

12. Прокофьев М.И. , Захарченко В.И. и др. Методы получения биоинженерных с/х животных. Сельскохозяйственная биология. 1994, №4, стр. 12-25.

13. Саркисов Д.С., Пальцин А. А., Втюрин Б.В. Электронно-микроскопоическая радиоавтография клетки. М. гМедицина, 1980.

14. Саркисов Д.С., Пальцын А.А., Колкер И.И. и др. Синтез РНК при активации нейтрофила//Арх. Пат. 1986. - № 12. - С. 6-13.

15. Серов В.В. и B.C. Пауков "Воспаление", Москва "Медицина", 1995.

16. Симонян Г.А., Ф.Ф.Хисамутдинов, "Ветеринарная гематология", Москва, "Колос", 1995.

17. П.Смирнов А.В. Специфические эффекты и возможные механизмы действия экзогенных РНК//Успехи совр. Биол. 1988 - Т. 106, № 1(4). - С. 20-36.

18. Тоневицкий А.Г., Топтыгин А.Ю., Маркс У. и др. // ДАН. 1989; - Т.307. -С.1507-1511.

19. Учанеишвили Э.К. Особенности синтеза РНК и белка в сегментоядерных нейтрофильных гранулоцитах раны//Бюлл. Экспер. Биол. 1987. - № 2. — С. 202-205.

20. Чиркин А.А., Оккороков А.Н., Гончарик И.И. Диагностический справочник терапевта. Мн.: Беларусь, 1993, С. 465.

21. Эрнст J1.K. Состояние и перспективы генной инженерии сельскохозяйственных животных //Аграрная наука. 1996. - С.8-9.

22. Эрнст JI.K., Гольдман И.Д., Зиновьева Н.А. и др. // Докл. АН. 1995. - Е.45.• С.555-558.

23. Эрнст Л.К., Гольдман И.Л., Кадулин С.Г. Генная инженерия в животноводстве: трансгенные сельскохозяйственные животные, кормовые растения, микроорганизмы рубца //Биотехнология. 1993. - №5. - С.2-14.

24. Adams С.Е. Egg transfer in the rabbit. Mammalian egg transfer. Веса Ration: CRC Press, 1982.P.29-48.

25. Aigner B, Besenfelder U, Seregi J, Frenyo LV, Sahin-Toth T, Brem G. Expression of murine tipe tyrosinase gene in transgenic rabbits. Transgenic Res 1996;5:405-411.

26. Anderson G., Gutierrez A., Maga E. et al. The use of transgenes to alter the physical and functional properties of milk. In: Proc. Beltsville Symposia on Agricultural Animals XX. P.3.

27. Andrews P., Babior B. Phosphorylation of cytos'olic proteins by resting and activated human neutrophils // Blood. 1984/ - V. 64. N 4. - P. 883-890.

28. Arakawa T, Prestrelski SJ, Narhi LO, Boone TC, Kenney WC Cysteine 17 of recombinant human granulocyte-colony stimulating factor is partially solvent-exposed. J Protein Chem 1993 Oct;12(5):525-31. .

29. Archer J.S., Kennan W.S., Gonld M. N. and Bremel K.D. Proc. Natl. Acad. Sci. Usa, 1992, v.89, pp. 12003-12007.

30. Archibald A., McClenaghan M., Hornsey V. et al. High-level expression of biologically active human a-1-antitrypsin in the milk of transgenic mice // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1990. - Vol.87. - Р.51?8.

31. Auchincloss H.Jr. // Transplantation. 1988.- V.46. - P. 1-20.

32. Bach F.H. Xenogaft 25 / Ed. M. Hardy. New York: Elsevier, 1989. - P. 183190.

33. Bawden C., Sivaprasad A., Verma P. et al. Expression of bacterial cysteine genes in transgenic mice and and sheep: toward a new in vivo amino acidbiosynthesis pathway and improved wool growth // Transgenic Research. -1995.-Vol.4.-P.87.

34. Besenfelder U., Muller M., Brem G. Transgenics and modern renroductive technologies // The genetics of the pigs / Eds M. Rothschild and A. Ruvinsky. -1998. -P.345-374.

35. Bickenbach J., Longley M., Budman D. at al. A transgenic mouse model that recapitulates the clinical features of both neonatal and adult forms of the skin' disease epidermolytic hyperkeratosis // Differentiation. 1996. Vol.61(2). -P.129-139.

36. ВНп, Stafford. A rapid and sensitive method for the quantition of microgram Quantities of protein utilizing.// Anal. Biochem. 1976, №72, p. 248 -254.

37. Brem G. (1989): Aspects of the application of ene transfer as a breeding technique for farm animals. Biot. Zent. Bl. 108. 1-8.

38. Brem G. Transgenic animals. In: Biotechnology, VCH, in press. 1992:745-832.

39. Brem G., Besenfelder U, Zinovieva N, Seregi J,, Solti L, Hartl P. Mammary gland specific expression of chimosin construction in transgenic rabbits.' Teriogenology 1995; 43:175.

40. Brem G., Besenfelder U. Production of foreign proteins in the mammary glands of transgenic animals.// Chemicalogy. 1993. №10. P. 21-25.v

41. Brem G., Brenig В., Salmons B. et al. Unerwartete transgene Expression eines gesaeugespezifischen Wachstumshormor Genkonstruktes in dem Bergman-Gliazellen der Maus. Tierarztl. Prax., 1991a, 19: 1-6.

42. Brem G., Hartl P, Besenfelder U, Wolf E, Zinovieva N, Pfaller R. Expression of. synthetic cDNA sequences encoding human insulin-like grown factor-1 (IGF-1) in the mammary gland of transgenic rabbits. Gene 1994; 149:351-355.

43. Brem G., Hartl P. High-level expression prochymosin in the milk of transgenicь.rabbits. In Proc. Frontiers of Biotech. In Agriculture Sea of Galilee, Israel, 1991b. P.22.

44. Bremel R., Yom H., Bleck G. Alteration of milk composition using molecular genetics //J. Dairy Sci. 1987. - Vol.72. - P.2826.

45. Brett J., Gerlach H., Nawroth P. et al. // J. Exp. Med. 1989. - V.169. -P.1977-1991.

46. Brinster R.L., Avarbock M.R. Germline transmission of donor haplotype following spermatogonia transplantation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1994, 91, 11303-11307.

47. Brinster R.L., Chen H.Y., Trumbauer M.E. et al. Factors affecting the efficiency of introducting foreign DNA into mice by microinjecting eggs. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1985, 82: 4432-4442.

48. Buhler T.A., Bruyre D., Went G. et al. Rabbit P-casein promoter directs secretion of human interleukin-2 in to the milk of transgenic rabbits // Bio/Technology. 1990, Vol.8, P. 140-143.

49. Butler S. P., Van Cott K., Subrumanian A., Gwazdanskas F.C. Velander W.H. Thromb Haemond, 1997, 78, 537-542.

50. Campbell D.A., Burtch G.D., Merion R.M. Clinical Ischemic Syndromes: Mechanisms and Consequences of Tissue Indjury / Eds. G.B. Zelenock, L.G. D'Alecy et al. St. Louis: C.V. Mosby, 1990. -P.493-516.

51. Casali P., Notkins A.L. // Ann. Rev. Immunol. 1989. - V.7. -P.513-535.

52. Castro F.O., J. Janne. et al. Mammary gland transgenesis: therapeutic protein production. Springer. 1997.

53. Chan С et al. Mutual exclusivity of DNA binding and nuclear localization signal.// Gene Theraphy. 1998. №5. P. 1204-1212.

54. Cibelli J.B., Stice S.L., Golueke P.J., Kane J.F., Jerry J., Blackwell F., Ponce de Leon F., Robl JM. Cloned transgenic calves produced from nonquiescent fetal fibroblast. Science, 1998, 280, 1256-1258.

55. Clark A., Bessos H., Bishop J. Et al. Expression of human anti-hemophilic factor IX in the milk of transgenic sheep //Bio/Technology. 1989b. - Vol.7. -P487-492.

56. Clark A.J., All S., Archibald A.L. et al. The molecular manipulation of milk composition. Genom, 1989a, 31: 950-955.

57. Cooper D., Rolf L., Zuhdi Jr. The pig as potential organ donor for man. In: Cooper D., Kamp E., Reemsta K. et al. The transplantation of organs and tissue between species. Springer-Verlag, 1991.-P.481.

58. Critchley JA, Critchley LA, Yeung EA, Young RP, Young RJ, Chan TY, Goh VK. Granulocyte-colony stimulating factor in the treatment of colchicine poisoning. Hum Exp Toxicol 1997 Apr;16(4):229-32.

59. Daifuku R, Andresen J, Morstyn G. Recombinant methionyl human granulocyte colony-stimulating factor for the prevention and treatment of non-neutropenic infectious diseases. J Antimicrob Chemother 1993 Jul;32 Suppl A:91-7.

60. Dobrovolsky V.N., Lagutin O.V., Vinogradova T.V. et al. // FEBS Lett. 1993. V.319. P. 181-184.

61. Drohan W.N., Young J.M., Lubon H. et al. Expression of human protein С in the milk transgenic mice and pigs. Thrombosis and'Haemostasis, 1991, 65: 465.

62. Ebert K.M. et al. Biotechnology, 1994, 12, 699-702.

63. Ebert K.M., Selgrath J.P., Di Tullio P. et al. Transgenic production of a variant of human tissue-type plasminogen activator in goat milk: generation of transgenic goats and analysis of expression. Bio/Technology., 1991, V.9.P.835-838.

64. Ehmann W.C., Eyster M.E., Aledort L.M. and Goedert J.'J. Causes of death in hemophgilia. Nature, 1995, 378, p. 124.

65. Ernst L.K., Zaharchenco V.I., Suraeva N.M., Ponomareva T.I., Miroshnichenco O.I., Procofiov M.I., Tihonenco T.I. Transgenic rabbits with antisense RNA gene targeted at adenovirus H5. Teriogenology, 1991, 35, 16, 1257-1271.

66. Evans R.W. Executive summary // The National Cooperative Transplantation Study. Seattle. WA: BHARC, 1991.

67. Evans R.W. Xenogaft 25 / Ed. M. A. Hardy. New York: Elsevier, 1989. -P.359-371.

68. Fata F, Myers P, Addeo J, Grinberg M, Nawabi I, Cappell MS. Cyclic neutropenia in Crohn's ileocolitis: efficacy of granulocyte colony-stimulating factor. J Clin Gastroenterol 1997 Jun;24(4):253-6.

69. Fodor W., Williams D., Matis L. et al. Expression of a functional human complement inhibitor in a transgenic pig as a model for the prevention ofxenogeneic hyperacute organ rejection // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. -Vol.91.-P.1153.

70. Foster P.N., Trejdosiewics L.K. // Clin. Immunol. 1992. - V89. - P.36.9-373.

71. Freedman MH. Safety of long-term administration of granulocyte colony-stimulating factor for severe chronic neutropenia. Curr Opin Hematol 1997 May; 4(3):217-24.

72. Galili U. Interaction of the natural anti-Gal antibody with alpha-galactosyl epitopes: major obstacle for xenotransplantation in humans // Immunology Today, 1993. Vol.14. P.480-482.

73. Gallangher D., Schelling C., Groenen M. et al. Confirmation that the casein gene cluster resides on cattle chromosome 6 //Mamm. Genome. 1994. - Vol.' 5: -P.524.

74. Gandolfi F., Lavirtano M., Camaioni A., Spadafora C., Siracusa G., Lauria A. The use of sperm- mediated gene transfer for the generation of transgenic pigs abstract. J/ Reprod. Fertil. 1989, 4, 10.

75. Geller R.L., Turman M. A., Dalmasso A.P., et al. // JASN. 1993. - V. 3. -P. 1189-2000.

76. Gibelli J.B., S. L. Stice, P.J. Golueke, J.J. Kane, J. Jerry, C. Black well, F A. Ponce de Leon, J. M. Robl. Cloned Transgenic Calves Producedfrom Nonguiscent Fetal Fibroblasts. Science, 1998, v. 280, p. 1256-1258.

77. Gordon J.,Ruddle F. Integration and stable and stable germ line transmission of genes ingected into mouse pronuclei.//Science (Wash DC). 1981. - Vol. 214. -P.1244L

78. Gordon J.W., Ruddle F.H. Integration and stable germ line transmission of genes infected into mouse pronuclei. Science 1981, 214, 1244-1246.

79. Gordon J.W., Scangos G.A., Plotkin D.J., Barbosa J.A., Ruddle F.H. Genetic transformation of mouse embryos by microinjection of purified DNA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1980, 77, 7380-7384.

80. Gordon K., Lee J., Vitale A. et al. Production of human tissue plasminogen activator in transgenic mouse milk //Bio/Technology. 1987. Vol.5. - P. 11831187.

81. Greenberg N.M., Anderson J.W., Hsueh A.J.W. et al. Expression of biologically active heterodimeric bovine folliclestimulating hormone in milk of transgenic mice. Proc. Natl. Acad.Sci. USA, 1991, 88: 8327-8331.

82. Groopman J.E., Cell, 1987, 50, 5.

83. Ha J., Kim K. Inhibition of fatty acid synthesis by expression of an acetil-CoA-carboxilase-specific ribozime gene // Proc. Natl. Acid. Sci. USA. 1994. - Vol. 91.-P.9951.

84. Hammer C. // Transplant. Proc. 1987. - V.19. - P.4443-4447.

85. Hammer R.E., Pursel V.G., Rexroad C.E., Jr., Wall R.J., Bolt K.M., Ebert R.D., Palmiter R.D., Brinster R.L. Production of transgenic rabbits, sheep and pigs by microinjection. Nature, 1985, №20. 315,680.

86. Harris S., McClenaghan M., Simons J.P. et al. Developmental regulation of the sheep P-lactoglobulin gene in the mammary gland of transgenic mice. Developmental Genetics, 1991, 12: 299-307.

87. Heim R. et al. Improved green fluorescence.// Nature. 1995.vol 373. №23. p.663-664.

88. НШ, C. P., Osslund, T. D., Eisenberg, D. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1993,90,5167-5171.

89. Holloway С J. Applications of recombinant DNA technology in the productionof glycosylated recombinant human granulocyte colony stimulating factor. Eur Jк

90. Cancer 1994;30A Suppl 3:S2-6

91. Houdebin L. Production of pharmaceutical proteins from transgenic animals // J. Biotechnology. 1994. - Vol.34. - P.269.

92. Ho ward E.A., Zupan R.J. The VIR D2 protein.// Cell. 1992. Vol.68, p. 109118.

93. Huang M. Gene targeting technology for creating transgenic models of limphopoiesis. Laboratory animal science. 1992. Vol.43. -P.156-159.

94. Hynd P. Effect of nutrition on wool follicle cell kinetics in sheep differing in efficiency of wool production //Aust. J. Agriculture Research. 1989. - Vol.40. -P.409-417.

95. Jaenishk. Infertion of mouse blastocysts with SV 40 DNA: Normal development of infected embrygos and persistane SV 40 specitic LNA seguences in the adult animals. Cold spring Harpor Symp., 1974, 39, 375-380.

96. Jeanisch R., Mintz B. Simian virus 40 DNA sequences in DNA of healthy-adult mice derived from preimplantation blastocysts injected with viral DNA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1974, 71:1250-1254.

97. Jeanisch R. Germ line integration and Mendelian transmission of the•lexogenous Moloney leucemia virus. Proc.Natl. Acad. Sci. USA, 1976, 73: 1260.

98. Kash'ian SK, Bystrov NS, Boldyreva EF, Poliakova IA, Severtsova IV, Korobko VG. Chemical-enzymatic synthesis and cloning in Escherichia coli of a gene coding for human granulocyte-colony stimulating factor. Bioorg Khiml992 Jan; 18(l):71-7.

99. Katayama N, Kita K, Kawakami K, Mitani H, Sugawara T, Mizuno S, Yonezawa A, Nishii K, Miwa H, Wada H, Minami N, Shiku H. Granulocyte colony-stimulating factor and its receptor in acute promyelocyte leukemia. Am J Hematol 1998 May;58(l):31-5.

100. Kim J.H., Jung-Ha H.S., Lee H.T., Chung K.S. Development of a positive method for male stem cell-mediated gene transfer in mouse and pig. Mol. Reprod. Dev. 1997, 46, 1-12.

101. Koloc G, Scharnweber К Recombinant human granulocyte . colony-stimulating factor: an overview. J IntravenNurs 1993 Jul-Aug;16(4):234-8.

102. Korhonen V. et al., Eur. J. Biochem., 1997, 245, 482-489.к

103. Kuipers H., Langford G., White D. Analysis of transgene sites in transgenic pigs fluorescence in situ hybridisation // Transgenic. Res. 1997. - Vol.6. -' P:253-259.

104. Kulmburg P, Radke M, Mezes B, Mertelsmann R, Rosenthal FM. Cloning and sequence analysis of the immediate promoter region and cDNA of porcine granulocyte colony-stimulating factor. Gene 1997 Sepl5;197 (1-2): 361-5.

105. Langford G., Yannoutsos N., Cozzi E. et al. Production of pigs transgenic for human decay acceleration factor // Transpl. Proc. 1994. Vol.26. - P. 14001401.

106. Lavitrano M., Camaioni A., Frati V.M., Dolci S., Farace M.G., Spadafora C. Sperm Cells as vectors for introduction foreign DNA into eggs: Genetic transformation of mice. Cells 1989, 57, 717-723.

107. Lee K., Atice S., Rosen J., Differential regulation of rat P-casein-chloramphenicol acetyltransferase fusion gene expression in transgenic mice // Molecular Cell Biology. 1989. - Vol.9. - P.560-565.

108. Lee K.F., Demayo F.J.,Atiee S.H. et al. Tissue-specific expression of the rat P-casein gene in transgenic mice. Nucl. Acid. Res., 1988, 16: 1027-1041.

109. Limonta J, Castro F, Martinez R et al. Transgenic rabbits as bioreactors for the production of human grownth gormone. J Biotech 1995; 15:49-58.

110. Lindenmann J. Inheritance of resistance to influenza virus in mice. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1964. 116: 506-509.

111. Lovejoy, В., Cascio, D., & Eisenberg, D. (1993) J. Mol. Biol. 234, 640-653.

112. Maga E.A., Anderson G. В., Murray J. D., The effect of mammary gland expression of human lysozyme on the properties of milk from transgenic mice. J. Dairy Sci., 1995, 78. 2645-2652.

113. Marlton PV, Wright SJ, Taylor KM. Granulocyte colony stimulating factor in the management of chronic neutropenia. Med J Aust 1992 May 18; 156(10):729-31.

114. Maschio A., Brickell P.M., Kioussis D. et al. Transgenic mice carrying the gunea-pig-lactalbumin gene transcribe milk protein genes in their sebaceous glands during lactation. Biochem. J., 1991, 275: 459-467.

115. Massond M. et al. Reprod. Natr. Dev., 1996, 36, 555-563.

116. McKeeC. etal. Nat. Biotechnol, 1997, 15,971-975.

117. Mc Kee C. et al., Nat Biotechnol., 1998, 16, 647-651.

118. McBride В., Burton J., McLead G., et al. Influence of somatotropin treatment of lactating cows on maintance energy expenditures // Can.J.Anim.Sci. 1992. - Vol.72. - P.413-416.

119. McFadden Т., Akers R. et al. Alpha-lactalbumin in bovine' serum: Relationships with udder development and function // Dairy Sci. 1987. -m Vol.70. -P.259.

120. Mead H., Groet S., 1997. Antithrombin-III-Clinical development results and future plans. In: Presented at International Business Communications Trird

121. Annual International Symposium on Producing the Next Generation of Transgenic Therapeutics held in West Palm Beach, Florida, February 5th and 6th, 1997.

122. Meade H., Gates L., Lacy E. Lonberg N. Bovine aSi-caseinse sequences direct high expression of active human urokinase in mouse milk // Bio/Technology. 1990. -Vol.8 - P.443-446.

123. Mehigh C., Elias V., Mehigh R., et al. Development of recombinant bovine leukemia virus vector for delivery of a sintetic bovine growth hormone-releasing factor gene into bovine cells // J. of animal science. 1993. - Vol.71. -P.687-693.

124. Menck M.C., Mercier Y., Lobo R.B., Heyman Y., Renard J.P., Thompson E.M. Prediction of transgene integration by non-invasive bioluminescent screening of microinjected bovine embryos. Transgenic Res., 1998, 7, 331-341.

125. Metcalf, D., Cell, 1985, 45, 5.

126. Morstyn G., Burgess A. Cancer Res., 1988b, 48, 5624.

127. Nagata S, Tsuchiya M, Asano S, Kaziro Y, Yamazaki T, Yamamoto O,. Hirata Y, Kubota N, Oheda M, Nomura H, et al. Molecular cloning and expression of cDNA for human granulocyte colony-stimulating factor. Nature 1986 Jan 30-Feb 5;319(6052):415-8.

128. Nielsen SD, Dam-Larsen S, Nielsen C, Wantzia P, Mathiesen L, Hansen JE. Recombinant human granulocyte colony-stimulating factor increases circulating CD34-postive cells in patients with AIDS. Ann Hematol 1997 May;74(5):215-20.

129. Ninomija Т., Hoshi V, Miruno A, Nagao V., Yuki A. Selection of mouse preimplantation embryyos carryind exogenous DNA by polymerase chain, reaction, mol. Reprod. Dev., 1989, 1, 242-248

130. Nissen C. Glycosylation of recombinant human granulocyte colony stimulating factor: implications for stability and potency. Eur J Cancer 1994;30A Suppl 3:S12-4.

131. O'Brien PM, Seow HF, Rothel JS, Wood PR. Cloning and sequencing of an ovine granulocyte colony-stimulating factor cDNA. DNA Seql994;4(5):339-42.

132. Oftedal O. Milk composition, milk yield and energy output at peak lactation: A comparative review. In: Peaker M., Vernon R., Knight C. Physiological Strategies in Lactation. Academic Press, London., 1984. - p.33.

133. Oh-eda et al. J. Biol. Chem. (1990) 265, 11,432-11,435. 141. Paleyanda Re R., W.H. Velander, Т.К. Lee, D.H. Scandella, F.C. Gwazadanskas, J. W. Knight, L.W. Hoyer, W.N. Drohan and H. Lubon.v.

134. Transgenic pigs produce funtional human factor VIII in milk. Nature Biotechnology, 1997, v.15, p. 971-975.

135. Palmiter R.D., Brinster R.L., Hamm R.E., Trumbauer M.E., Rosenfeld M.G., Birnberg N.C., Evan R.M. Dramatic growth of mice that develop from eggs microinjected with metallothionein growth hormone fusion genes. Nature. 1982. 300,611-615.

136. Palmiter R.D., Sandgren E.P., Avarbock M.R. et al. Heterologous intron can enhance expression of transgenes in mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, 88: 478-482.

137. Pavlovic J., Arzet H., Herti H. et al. Enhanced virus resistance of transgenic mice expressing the human MxA protein // J. Virol, 1995. Vol.69(7). -P.4506-4510.

138. Perez-Perez J, Martinez-Caja C, Barbero JL, Gutierrez J. DnaK/DnaJ supplementation improves the periplasmic production of human granulocyte-colony stimulating factor in Escherichia coli. Biochem Biophys Res Commun 1995 May 16;210(2):524-9.

139. Perper R.J., Najarian J.S. // Transplantation. 1966. - V.4. - P.377-388.

140. Perper R.J., Najarian J.S. // Transplantation. 1967. - V.5. - P.514-533.

141. Persry M.A., Stinnakre V.G., Printz C., Mabe M.F. and Mercier J. C. High expression of the caprine P casein gene in transgenic mice. Eur. J. Biochem. 1992, 205, 887-893.

142. Pinkert C, Kooyman D, Dyer T et al. Enhanced growth performance in trasgenic swine //Biotechnology. 1991. - Vol.16. - P.251-258.

143. Pittius C.W., Hennighausen L., Lee E. et al. A milk protein gene promoter detects the expression of human tissue plasminogen activator cDNA to the mammary gland in transgenic mice. Proc. Natl., Acad. Sci., USA, 1988, 85: 5874.

144. Pittius C. W., Sankaran L., Topper Y.J. et al. Comparison of the regulation of the whey acidic protein gene with that of a hybrid gene containing the wheyacidic protein gene promoter in transgenic mice. Molec. Endocrinology, 1988, 2: 1027-1032.

145. Piatt J., Parker W. Another step towards xenotransplantation .//Nature Medicine, 1995.- Vol.1. -P.1248-1250.

146. Piatt J.L., Bach F.H. // Transplantation. 1991a. - V.52. - P.937-947.

147. Piatt J.L., Fisher R.J., Matas A.J. et al. // Transplantation. 1991b; - V.52. -P.214-220.

148. Piatt J.L., Vercellotti G.M., Lindman B.J. et al. // J. Exp. Med. 1990. -V. 171. - P. 1363-1368.

149. Powell В., Roger G. Hard keratin IF and associated proteins. In: Goldman R., Steinert P. Cellularc and Molecular Biology of Intermediate Filament. -New York, 1990. P.267-300.

150. Powell D., Walker S., Bawden C. et al. Transgenic sheep and wool growth: possibilities and current status // Reprod. Fertil. Dev. 1994. - Vol.6. - P.615-623.

151. Prusinere S. Molecular biology of prion diseases //. Science. 1991. -Vol.252.-P.1515-1522.

152. Pursel V.G., Campbell R.G., Miller K. F., Behringer R.B., Palmiter R.D., Brinster R.L. Growth potential of transgenic pigs, expressing a bovine growth hormone gene. J. Anim. Sci. 1988, 66, 267.

153. Anim.Sci.- 1993.-Vol.71. P.10.

154. Pursel V.J. et al. Genetic engineering of liverstock. Sci., 1989, 244,12811289.

155. Reis P., Tunks D., Munro S. Effect of infusion of amino acids into The abomasum of sheep, With emphasis on the relative value of metionine, cysteine and homocysteine for wool growth //Agriculture Science. 1990. - Vol.114 -P.59-68.

156. Riego E, Limonta J, Aguilar A et al. Production of transgenic mice and rabbits that carry and express the human tissue plasminogen activator cDNA under the control of bovine alpha SI casein promoter. Teriogenology 1993; 39:1173-1185.

157. Robinson AS, Wittrup KD. Constitutive overexpression of secreted heterologous proteins decreases extractable BiP and protein disulfide isomerase levels in Saccharomyces cerevisiae. Biotechnol Prog 1995 Mar-Apr; 11(2): 1717.

158. Robl J.M. Cloning, genetic modification, and embrionic stem cells in cow// Proceedings. Genetically engineering end cloning animals: science, society&indastry. June 21-23, 1998.

159. Rodriguez A, Castro FO, Aguilar A et al. Expression of active human eritropoetin in the mammary gland of transgenic^ mice and rabbits. Biol Res 1995;28:141-153.

160. Roger G. Improvement of wool prodaction through genetic engineering // Trends Cameron E. Recent advances in transgenic technology // Mol. Biotechnol. 1997. - Vol.7. - P.253-265.

161. Roos D. The metabolic response to phagocytosis//The cell biology of inflammation/Ed. G. Weissmann. New York, 1980. - P. 337-385.

162. Root R.K., Dale D.C. Granulocyte colony-stimulating factor and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor: comparisons and potential for use in the treatment of infections in nonneutrppenic patients. J Infect Dis 1999 Mar; 179 Suppl 2:S342-52.

163. Rosengard A., Сагу N., Horsley J. et al. Endothelial expression of human decay accelerating factor in transgenic pig tissue: A potential approach for human complement inactivation in discordant xenografts. // Transplant. Proc. -1995.-Vol.27.-P326.

164. Rotondaro L, Mazzanti L, Mele A, Rovera G. High-level expression of a cDNA for human granulocyte colony-stimulating factor in Chinese hamster ovary cells. Effect of З'-noncoding sequences. . Mol Biotechnol 1997 Jun; 7(3): 231-40

165. Rowe JM, Liesveld JL. Hematopoietic growth factors and acute leukemia. Cancer Treat Res 1999;99:195-226.

166. Rudolph N.S. Biopharmacentical production in transgenic livestock. Treds in Biotechnology, 1999, v. 17, p. 367-374.

167. Sabour M, Ramsey U, Nagai J. Decreased frequency of the rat growth hormone transgene in mouse populations with or without selection for increased adult body weight //Theoretical and applied genetics. -1991. Vol.81. - P. 327' 332.

168. Sahlu Т., Fernandez J. Effect of intraperitoneal administration of lisine and metionine on mohair yield and quality in angora goats // J. Animal Scince. -. 1992. -Vol.70. -P.3188-3193.

169. Saiki R.K. Primer-detected enzymatic amplifications of DNA-polymerase.// Science.№239. 1988. P.487-491.

170. Salter S.W., E.J. Smith, S.H. Hughes, S.E. Wright, A.M. Fadly, R.L. Witter, L.B. Crittenden (1986): Gene insertion into the chicken germ line by retroviruses. Poultry Sci. 65, 1445.

171. Sandrin M., Fodor W., Mouhtorius E. et al. Enzymatic remodelling of the carbohidrat surfase of a xenogenic cells substantially reduces human antibody binding and complement-mediated cytolysis // Nature Medicine, 1995. Vol.1. -P.1261-1267.

172. Scarffe JH, Kamthan A. Clinical studies of granulocyte colony stimulating factor (G-CSF). Cancer Surv 1990;9(1):115-30.

173. Schnieke A.E., A.J. Kind, W.A. Ritchie, K. Mycock, A.R. Scott, M. Ritchie, I. Wilmut, A. Colman, K.H.S. Campbell. Human^Factor IX Transgenic, sheep Produced by Tranfer of Nucle from Trans fected Fetae Fibroblasts, science, 1997, v. 278,2130-2133.

174. Scopes J, Daly S, Atkinson R, Ball SE, Gordon-Smith EC, Gibson FM. Aplastic anemia: evidence for dysfunctional bone marrow progenitor cells and the corrective effect of granulocyte colony-stimulating factor in vitro. Blood 1996 Apr 15;87(8):3179-85.

175. Seto Y, Fukunaga R, Nagata S. Chromosomal gene organization of the human granulocyte colony-stimulating factor receptor. J Immunol 1992 Jan l;148(l):259-66.

176. Sharma A., Ocabe J., Birch P. et al. Reduction in the level of Gal(al,3)Gal transgenic mice and pigs by the expression of an a(l,2) fructosyltransferase //

177. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. Vol.93. -P.7190-7195.

178. Simmons J.P. et al. Biotechnology, 1998, 6, p. 179-183.

179. Simons J.P., McClenaghan M., Clark A.J. Alteration of the quality of milk by expression of sheep p-lactoglobulin in transgenic mice. Nature, 1987, 328, 530-532.

180. Sivaprasad A., Kuczek Т., Bawder C. et al. Coexpression of the cysE and cysM genes of Salmonella typhimurium in mammalian cells: a step towards' establishing cysteine biosyntesis in seep by transgenesis // Transgenic Research. -1992.- Vol.1. -P.79-92.

181. Snell G.D. //Ann. Rev. Microbiol. 1957. - V.ll. - P.4349-4452.1.

182. Soulier S., Vilotte J.L., Stinnakre M.G. et al. Expression analysis of ruminant a-lactalbumin in transgenic mice; developmental regulation and general location of important cis-regulatory elements. FEBS, 1992, 297:13-18.

183. Souza, L.M., et al., Science, 1986, 232, 61.

184. Stewart C.L., S. Schuetze, M. Vanek, E. Wagner (1987): Expression of retroviral vectors in transgenic mice obtained by embryo infection. EMBO 6," 383-388.

185. Stice S., StrelchenkoN. Domestic animal embrionic stem cells: progress toward gene line contribution. In: Biotechnology's role in the genetic improvement og farm animals. 1996. - P. 189-202.

186. Stinnakre M.C., Vilotte J.L., Soulier S. et al. The bovine a-lactflbumin promoter directs expression of ovine trophoblast interferon in the mammary gland of transgenic mice. FEBS, 1991, 284: 19-22.

187. Strelchenko N., Betthauser J., Jurgella G., Forsberg E., Damiani P., Golueke P., Pace M.M., Bishop M.D. Use the somatic cells in cloning// Proceedings. Genetically engineering and cloning animals: science, society & industry. June 21-23, 1998.

188. Tacada Т., Iida K., Awaji Т., Itoh K., Takahashi R., Shibui A., Yoshida K., Sugano S., Tsuujimoto G. Selective production of transgenic mice using green fluorescent protein as a marker. Nat. Biotechnology 1997, 15, 458-461.

189. Tomasetto С., Wolf С., Rio M.C. et al. Breast canser protein P sinthesis in mammary gland of transgenic mice and secretion to milk. Molec. Endocrinology, 1989, 3: 1579-1584.

190. Tonevitsky A.G., Shamshiev A.T., Agapov I.I. et al. // Immunol. Lett. -1995.-V.46.-P.5-8.

191. Tonevitsky A.G., Toptygin A. Yu., Pfuller U. et al. // Int. J. Immunopharmacol. 1991. - V. 13. - P1037-1041.

192. ToyonagaT., Hino O., Sugai S. et al. Chronic active hapatitis in transgenic mice expressing interferon gamma in the liver // Proc. Natl. Acad. Sci USA, 1994. -Vol.91 (2). - P.614-618.

193. Turman M.A., Casali P., Notkins A.L. et al. // Transplantation. 1991. -V.52. -P.710-717.

194. Valander W., Lubon H., Drohan W. Transgenic livestock as drug factories // Sci.American, 1997. Vol.55.

195. Van Cott K., Lubon H., Russel C. Et al. Phenotypic and genotypic stability of multiple lines of transgenic pigs expressing recombinant human protein С // Transgenic Res, 1997. Vol.6(3). - P.203-212. '

196. Van der Putten H., F.M. Botteri, A.D. Miller, M.G. Resenfeld, H. Fan, R.M. Evans, I.M. Verma (1985): Efficient insertion of genes into the mouse germ line via retroviral vectors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 6148-6152.

197. Vel W., Namavar F., Verweij A. et al. Killing capacity of human polimorphonuclear leucocytes in aerobic and anaerobic conditions//.!. Med. Microbiol. 1984. - V. 18, N 2.-P. 167-172.

198. Velander W.H., Page R.L., Morcol T. et al. // Ann.N.-Y. Acad. Sci. 1992b. - V.665. - P.391-403.

199. Viallard JF, David S, Grosset C, Puntous M, Lacombe F, Reiffers J. Acute myeloid leukemias: role of growth factors to. improve the efficacy of chemotherapy. Presse Med 1995 May 6-13;24(17):822-6.

200. Vickers M. Successful use of granulocyte colony-stimulating factor to correct neutropenia in chronic lymphocytic leukaemia. Clin Lab Haematol 1997 Mar;19(l):77-8.

201. Violotte J.-L., Soulier S., Stennakre M. G. et al. Efficient tissue-spesific expression of bovine a-lactalbumin in transgenic mice. Eur. J. Biochem., 1989, 186.

202. Wall R., Kerr D., Bondioli K. Transgenic dairy cattle: genetic engineering on large scale // J. Dairy Sci. 1997. - Vol. 80. - P. 2213-2224.

203. Wall R.J., Seidel G.E.JR. Transgenic farm animals A critical analysis. Teriogenology, 1992, 38,337-357.

204. Walt R. J., H.W. Hawk, N. Nee. J. Cell. Biochem., 1992,49,113.

205. Ward K., Nancarrow C. The genetic engineering of production traits in domestic animals // Experientia. 1991. Vol.47. - P.913-922.

206. Wei Y., Yarns S., Greenberg N. et al. Production of human surtactant protein с in milk of transgenic mice. Transgenic Research. 1995, v.4, p.232-240.

207. Weidle U.H., Lenz H., Brem G. Genes encoding a mouse monoclonal antibody are expressed in transgenic mice, rabbits and pigs. Gene, 1991, 98, 185-191.

208. Weinbach J., Camus A., Barra J. et al. Transgenic mice expressing the Sh ble bleomycin resistance gene are protected against bleomycin-induced pulmonary fibrosis // Cancer Res, 1996. Vol.56(24). - P.5659-5665.

209. White D., Langford G., Cozzi E. et al. Prodaction of pigs transgenic for human DAF strategy for xenotransplantation // Xenotransplantation. 1995. -Vol.2.-P.213-217.

210. Whitelaw C.B.A., Archibald A. L., Harris S., Mc Clenagham M., Simons J. and Clark A.J. Targeting expression to the mammary gland, intronic seguences can enhance the efficiency of gene expression in transgenic mice Trasgenic res., 1991, 1,3-13.

211. Wilkie T.M., Brinster R.L., Palmiter R.D. Germline and somatic mosaicism in tramsgenic mice. Devl.Biol., 1986, 118: 9-18. t

212. Wilmut I., Archibald A., Harris S. Modificatioin of milk composition //J. Reprod. Fertil. Suppl. 1990. - Vol.41. - P.135.

213. Wolf E. (1990). Expressionsbedingte Veranderungen bei Wachstumshormong-transgenen Mausen. Diss. Med. Vet., Munchen.

214. Wright G., Carver A., Cottom D. et al. High level expression of active human a-1-antitrypsin in the milk of transgenic sheep // Bio/Tecnology. 1991. - Vol.9.-P.830-834.

215. Yamamura K., Miyazaki Т., Uno M. et al. Transgenic mouse as a tool for the study of autoimmune disease: insulin-dependent diabetes mellitus. // J. Immunopharmacol. 1992. - Vol.14. -P.451-455.

216. Yom H., Bremel R. Genetic engineering of milk composition: Modification of milk components in lactating transgenic animals // J. Clin. Nutr. 1993. -' Vol. 58. - P.2995.

217. Zanta M. et al. Gene delivery: A single nuclear localization signal.// Proc.Natl. Acad. Sci. US A. vol 96. 1999.