Совершенствование методик анализа и обработки результатов исследований состава крови

Недзвецкая, Эльвира Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Совершенствование методик анализа и обработки результатов исследований состава крови
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Совершенствование методик анализа и обработки результатов исследований состава крови"

На правах рукописи

НЕДЗВЕЦКАЯ Эльвира Александровна

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДИК АНАЛИЗА И ОБРАБОТКИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ СОСТАВА КРОВИ

03.0013 - физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань2004

Работа выполнена на кафедре физиологии и пологии животных ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э.Баумана»

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор

Гарипов Талгат Валирахманович

Официальные оппоненты - доктор биологических наук, ст. науч-

ный сотрудник Гильмутдинов Рустам Якубович

кандидат медицинских наук, доцент Сторожев Александр Леонидович

Ведущая организация - Институт ветеринарной медицины

Омского государственного аграрного университета

Защита состоится « О б_2004 г. в «13» часов на заседании

диссертационного совета Д-220.034.02 при Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э.Баумана (420074, г.Казань, ул. Сибирский тракт, 35)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанской государственной академии ветеринарной медицины

Автореферат разослан Р£~ 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доцент

Галимзянов И.Г.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В процессе проведения физиологических исследований применяется целый ряд методов для определения показателей кропи. Анализ приводимых в литературе данных показывает, что некоторым автора не удается статистически подтвердить достоверность полученных результатов по причине наличия сравнительно большой величины ошибки опыта (порядка 10% и более). Немало случаев, когда в опытах не удается выявить даже физиологически значимые изменения показателей крови (на уровне 15-20 %), что соответственно снижает эффективность проводимых исследований.

Отмеченное положение обусловлено недостаточным уровнем разработки методических основ контроля уровня ошибки метода, структуры ошибки опыта и способов их снижения. Для успешного планирования и проведения эксперимента необходимо знать не только величину ошибки опыта, но и соотношение между ошибкой метода и ошибкой репрезентативности и в соответствии с этим - применять оптимальный способ снижения ошибки опыта.

В справочниках и учебных пособиях в достаточном объеме описываются методы определения многих показателей крови (Кудрявцев А.А., Кудрявцева Л.А., 1974; Бочарников Н.Р., 1976; Смирнов A.M., Конопелько П.Я. и со-авт., 1981; Рихтер В., Вернер Э., Бэр X., 1982; Кондрахин И.П., Курилов Н.В., Малахов А.Г. и соавт., 1985; Камышников B.C., Волотовская О.А., Ходюкова Л.Б. и соавт., 2003; и др.). Вместе с тем, только в единичных пособиях и публикациях приводятся "паспортные" значения, к тому же лишь одной составляющей ошибки регистрируемой в опытах и без возможности приведения их к используемым объемам выборок.

Часто точность методов, используемых рядом исследователей, оказывается заметно ниже "паспортных" значений и недостаточной в некоторых случаях для подтверждения в опыте существенных изменений показателей крови. Это требует применения контроля собственной погрешности анализов, приведения ее значений к конкретной величине объема выборки и соответственно обуславливает необходимость поиска относительно простых приемов снижения ошибок методов.

Важной задачей является повышение уровня статистического анализа результатов как собственных исследований, так и других авторов с целью получения дополнительной информации на основе дообработки материалов. Решению этой задачи может способствовать разработка простых приемов статистической обработки, которые позволяли бы исследователям быстро, без применения вычислительной техники, но с достаточной точностью, оценивать уровень достоверности приводимых в публикациях результатов.

Следует отметить, что известные методы статистической обработки данных, обстоятельно описанные в учебных пособиях НАПлохинского (1970), Г.Ф.Лакина (1990) и др., построены на теоретическом допущении, что ошибка

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА

метода настолько мала, чю сю можно пренебречь. Однако jro условие нередко но выполняется в биомедицине, что требует разработки новых подходов.

В определенной степени ускоренное получение информации достигается при представлении экспериментальных данных в виде графиков. Между тем, они в большинстве случаев приводятся без доверительных данных и уровня достоверности, то есть без указания основных показателей статистической обработки, что существенно затрудняет оценку представляемых материалах.

Для ускорения внедрения в практику разрабатываемых новых методик контроля структуры ошибки опыта и оперативного выбора схемы проведения опытов необходимо определенное компьютерное их обеспечение.

Вышеизложенное свидетельствует о том, что проблема выяснения структуры ошибки опыта и снижения ее составляющих, повышения уровня статистической обработки данных и их анализа, а соответственно и совершенствования техники планирования исследования является достаточно актуальной.

Цель и задачи исследований. Целью данного исследования является создание базы для повышения достоверности результатов исследований и усовершенствования приемов анализа экспериментальных данных. В соответствии с указанной целью были поставлены следующие задачи:

1. Разработать методики определения составляющих ошибки опыта и снижения ошибок метода с последующей компьютерной реализацией на базе приложения Microsoft Excel.

2. Изыскать возможность повышения точности и скорости анализа содержания лейкоцитов в крови.

3. Разработать простой способ анализа результатов исследования крови по данным литературы без применения вычислительной техники.

4. Выработать рекомендации по устранению типовых ошибок представления экспериментальных данных в табличном и графическом виде.

5. Усовершенствовать способ отображения статистических данных на графиках и таблицах и осуществить его реализацию с помощью приложения Microsoft Excel.

Научная новизна. Впервые разработаны и предложены методики определения структуры ошибки опыта - ошибки метода и показателя разнообразия признака (ошибки репрезентативности) в выборке. Установлены нормативные значения ошибки метода в структуре ошибки опыта при определении количества эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева, содержания гемоглобина гемиглобинцианидным методом, общего белка по биуретовой реакции, а также СОЭ в аппарате Панченкова с учетом используемого объема выборки.

Предложены аналитические выражения для определения ошибки опыта при К-кратном анализе проб крови и приведения ее значений к унифицированному объему выборки, равном 5.

Разработан алгоритм представления статистических показателей на графиках и осуществлена типизация ошибок, допускаемых при представлении цифрового и графического материалов.

Предложенные методики и аналитические выражения открывают во$-можность изучения динамики фоновых показателей крови, имеющее большое значение в планировании и проведении многих физиологических исследований и получении достоверных результатов.

Практическая ценность. Результаты исследований представляют практическую ценность для ветеринарии, биологии и медицины. Они могут быть применены для оценки структуры ошибки опыта и снижения ее уровня при использовании разных физиологических методов анализа.

Разработанные методики контроля ошибок метода и репрезентативности и ее компьютерная реализация на базе приложения Microsoft Excel создают основу для повышения качества планирования и проведения исследований, а также прогнозирования результатов.

Предложенный простой способ оценки уровня достоверности позволяет ускоренно осуществлять приближенный анализ публикаций без применения вычислительной техники. Даны рекомендации по устранению типовых ошибок представления результатов статистической обработки.

По результатам исследований предложено 2 методических указания, которые рассмотрены и одобрены Методическим советом КГАВМ.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Оперативный контроль составляющих ошибки опыта (ошибки средней) вначале и в ходе проведения экспериментов позволяет существенно повысить качество и эффективность физиологических исследований.

2. Применение ряда достаточно простых приемов позволяет существенно повысить достоверность анализа экспериментальных данных и уровень их представления в излагаемых материалах.

Апробация работы. Основные положения работы доложены на: Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным вопросам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2001); Всероссийской конференции токсикологов (Санкт-Петербург, 2001); Научно-практической конференции по актуальным вопросам информатики и вычислительной техники (Казань, 2001); Научной конференции молодых ученых и студентов (Казань, 2002); Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным вопросам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2003).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 146 страницах, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложений. Она содержит 33 таблицы и 8 рисунков. Список работ включает 167 источников, в том числе 32 иностранных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материал и методы исследований

Исследования проведены в период с 1999 по 2003 годы на кафедре физиологии ФГОУ ВПО КГАВМ (№ гос. регистрации 01960003759).

В опытах использованы 93 пробы крови 4 видов животных: крупного рогатого скота черно-пестрой породы, кроликов породы шиншилла, свиней крупной белой породы и беспородных собак. В пробах многократно (до 3-5 раз) определялось количество эритроцитов, лейкоцитов, содержание гемоглобина, общего белка, а также - скорость оседания эритроцитов. Всего проведено 557 анализов крови.

Определение показателей крови осуществляли общепринятыми методами - количество эритроцитов и лейкоцитов оценивали с помощью камеры Горяева, содержание гемоглобина - гемиглобинцианидным методом, общего белка - по биуретовой реакции, СОЭ - в вертикальных капиллярах с помощью аппарата Панченкова (Кондрахин И.П., Курилов Н.В., Малахов А.Г. и соавт., 1985).

Поскольку работа методического характера, то она могла быть выполнена на основе многочисленных анализов проб крови одного вида животного. Вместе с тем, исследования проведены на тех видах животных, которые были доступны на том или ином этапе исследований.

Взятие крови осуществляли у КРС из яремной вены, у кроликов - краевой ушной вены, у свиней- хвостовой вены, у собак - вены предплечья. Все животные были клинически здоровы.

В работе с целью учета пределов вариабельности ошибок методов часть лабораторных анализов крови проведены с участием и других операторов -Каримовой Р.Г. (кафедра физиологии и этологии животных КГАВМ), Шаки-рова Ф.В. (кафедра общей и частной хирургии КГАВМ), Латыпова М.М.(ВНИВИ), Камалеевой Ф.Г. (районная Высокогорская ветеринарная лаборатория РТ), за что мы искренне им благодарны.

Значения ошибки определения количества эритроцитов, лейкоцитов, содержания гемоглобина и общего белка каждой пробы крови находили вычислением на основе результатов 2, 3,4 и 5-кратных анализов.

Для определения ошибки анализа СОЭ по Панченкову использовали кровь свиней, поскольку у них данный показатель существенно выше, чем у КРС и кроликов. Значения СОЭ находили вычислением на основе результатов 2-10-кратных измерений.

Определение количества эритроцитов (в 5-ти больших квадратах) и лейкоцитов (в 100 квадратах) крови проводили по общепринятым методам путем многократных последовательных анализов.

В одной из серий опытов с целью усовершенствования способа подсчета лейкоцитов в камере Горяева их количество определяли 5-кратно в 5-ти про-

бax построчно через каждые 10 больших квадратов, а далее результаты суммировали и вычисляли ошибку метода по нижеприводимой формуле (I).

При определении СОЭ крови свиней в аппарате Панченкова заправляли 10 пипеток и устанавливали их в штатив, расположенный строго вертикально. Через I час отсчитывали показания СОЭ в каждой пипетке и вычисляли ошибку метода.

Теоретическое обоснование целесообразности введения в лабораторную практику дополнительного метрологического показателя - относительной величины ошибки опыта (Ст) приведено в работе Р.Х.Тукшаитова (2001). Как в ней показано, данный параметр вычисляется в процентах путем деления ошибки средней на среднее арифметическое значение исследуемого показателя (М) по формуле

Специальные методики обработки и схемы проведения опытов разрабатывались в ходе постановки разных серий опытов, и они подробно освещены в разделе "Собственные исследования". Вместе с тем, считаем необходимым кратко изложить использованные методики обработки данных и последовательность их применения.

В первых сериях опытов определяли значение ошибки метода в зависимости от кратности анализа пробы. После проведения анализов каждой пробы определяли величину ошибки метода по результатам 2, 3, 4 и 5-кратного анализа проб выборки. Полученные значения являются показателями уровня ошибки метода в структуре ошибки опыта при разных объемах выборок (п=2, 3,4 и 5) в случае однократного измерения каждой пробы.

Далее определяли более точное значение ошибки метода на основе усреднения анализов нескольких проб (п*) из п и таким образом, чтобы общее число определений было более 10 (п'-К>10). Поскольку кратность анализа в ряде опытов отличалась от объема выборки, то для получения представления об истинной величине ошибки метода в структуре ошибки опыта ее значение находили путем приведения к используемому объему выборки, то есть к единому масштабу по формуле

При К-кратном анализе всех проб и определении среднего значения выборки по усредненным значениям каждой пробы вычисление ошибки метода осуществляли по формуле (5), а ошибку реперезентативности - на основе уточненных значений ошибок опыта и метода по формуле

00%

О)

(2)

Данная величина служит важной и малоизученной физиологической характеристикой показателей крови опытных и контрольных групп животных.

Усовершенствование способа определения лейкоцитов в камере Горяева проводили на основе подсчета количества лейкоцитов в каждом большом квадрате. Затем осуществляли построчный подсчет лейкоцитов и сравнивали точность определения последнего значения относительно начальной величины, в первых 50 квадратах относительно вторых 50.

Для анализа уровня достоверности определения ряда физиологических показателей, приводимых с большой погрешностью, использовали статистические данные научных статей, опубликованных в журнале "Ветеринария" в период с 1993 по 1997 годы. При этом были отобраны только те клинико-лабораторные показатели крови, которые определены с погрешностью опыта не менее 8-10 %. Результаты, в которых ошибка определения показателей была в 4-5 раз ниже среднего уровня, обеспечиваемого всеми авторами, в соответствии с правилами биометрии относили к промахам и не использовали при обобщении материала.

Оценку допустимой величины ^ осуществляли на основе определения значений максимальных изменений регистрируемых показателей по формуле

СМит ■ •' оо% (4)

где Ммакс-оп - максимальная величина среднего арифметического значения показателя опытной группы, М,;ок1р - среднее значение показателя контрольной группы, а модуль разницы средних величин.

Уровень достоверности изменения отдельных показателей оценивали по таблице Стьюдента. Вместе с тем, для ускорения оценки достоверности большинства показателей использовали способ, описанный в р. 2.2.4.

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Изучение зависимости ошибки метода в структуре ошибки опыта при однократном анализе проб выборки

На первом этапе была изучена зависимость значения ошибки метода от кратности анализа одной пробы на базе проведения целого ряда серий опытов, имеющее как самостоятельное, так и прикладное значение. Полученные значения ошибки определения количества эритроцитов, лейкоцитов, содержания гемоглобина и общего белка у разных видов животных отличаются в пределах ошибки измерения (табл.1). Поскольку ошибка метода является относительной величиной, то при ее определении роль вида биообъекта практически не имеет никакого значения. На этом основании проведено усреднение

данных всех серий опытов по каждому показателю кропи с последующим графическим их представлением.

Установлено, что величина ошибок методов определения количества эритроцитов, лейкоцитов, содержания гемоглобина и общего белка с увеличением кратности анализа уменьшается (рис.1). При увеличении кратности анализа с 2 до 5 происходит уменьшение ошибки определения многих показателей приблизительно в 2,0 раза. Среднее значение ошибки метода при 5-кратном определении количества эритроцитов и лейкоцитов составляет соответственно порядка 3,2 % и 2,6 % содержания гемоглобина и белка порядка -1,0 %, СОЭ - около 14 %.

На практике, в силу ряда причин, значения ошибок метода могут быть в 1,5-2 раза выше средних значений. Кроме того, объем выборки может быть выбран равным 3. В таких случаях ошибка метода в структуре ошибки опыта примет значения порядка ±10 % и будет определять величину ошибки опыта. Такие параметры Ст , как будет показано ниже, не позволяют во многих случаях подтвердить достоверность результатов, а также выявить динамику фоновых показателей. Представленные величины в табл.1 и рис.1 приближенно также характеризуют не что иное как средние значения ошибок метода, которые имеют место в структуре ошибки опыта при однократном анализе проб крови и при объеме выборки п, равном кратности анализа К'.

При кратности анализа проб равной 3-4 для определения значения собственной ошибки метода с достаточной точностью необходимо проведение К'-кратного анализа не одной, а нескольких проб ( п') из выборки объемом п.

Смет сред

эритроциты лейкоциты гемоглобин -*-общий белок

______________, К' (п)

2 3 4 5

Рис. 1. Средние значения ошибок метода при разных объемах выборки и однократном анализе всех проб

I. Ошибка определения показателей крови (и %) при _разной кратности анализа (К')_

Показатель кропи Вид ГшооСл.сша Кратности, анализа

2 3 4 5

Эритроциты КРС 5.0 4,3 3,2 2,8

Собаки 6,0 4,5 3.5 3,0

Кролики 6,2 4,2 3,4 2,9

Лейкоциты КРС 4,3 3,5 3,1 2,7

Кролики зд 2,8 2,4 2,1

Гемоглобин • КРС 2,5 1,8 1,4 и

Кролики • 3,0 1,8 1,5 1,3

Общ. белок КРС 1,8 1,3 0,99 0,89

СОЭ Свиньи 18 16 15 14

При этом суммарное количество измерений должно быть при-

ближенно равно 10. Далее определяется уточненное (среднее) значение ошибки метода для п' проб при К'-кратном анализе каждой из них; Следующим этапом полученный результат с целью соблюдения масштаба представления данных должен приводиться к используемому объему выборки по формуле (2).

Доказано, что при однократном измерении проб крови погрешность определения ошибки опыта остается высокой за счет ошибки метода, что не позволяет с достаточной точностью вычислить по формуле (3) значение ошибки репрезентативности, а соответственно и выявить колебания фоновых показателей у животных во времени.

2.2.2. Изучение зависимости ошибки метода от кратности анализа всех проб выборки

При необходимости снижения величины ошибки метода и для определения ошибки репрезентативности с достаточной точностью в случае использования ее в качестве информативного признака необходимо применять К-кратный анализ всех проб выборки. В связи с этим одной из задач данной работы являлось экспериментальное изучение эффективности применения дан-

ною способа анализа. Полученные результаты графическн представлены на рис.2. Первая кривая построена при объеме выборки, равном 3, а вторая - при объеме, равном 10. Данные кривые построены экспериментально-расчетным путем на основе формулы

С =С

^мет.ь., ^мет,,

\пК-

V п-

-о 1

(5)

Как видно из кривых использование уже 2-кратного анализа практически позволяет уменьшить ошибку метода СМ(Я почти в 1,5 раза, а 3-кратный анализ - в 2 раза. Поскольку каждая кривая построена при одном и том же объеме выборки, то различие между ними не существенное. Следовательно, сам эффект кратности практически не зависит от используемого объема опытной группы.

Отмечаемые уровни снижения ошибки метода даже при 2-3-кратном анализе является очень существенным, так как позволяет критерий достоверности разности средних повысить в 2 раза. Так, например, если критерий ^ в опытах был равен 1,5, то стал равным 3, если был 2 - стал 4. Как следует из таблицы Стьюдента, применение только 2-кратного анализа проб при объеме выборки 3 позволяет первоначально недостоверный результат подтвердить с уровнем достоверности р< 0,05 - 0,01.

Рис.2. Зависимость относительной величины ошибки метода от кратности анализа всех проб

Дальнейшие расчеты показывают, что применение и отдельных случаях 5-кратного анализа при объеме выборки 5 позволяег уменьшить ошибку метода в 3,5 раза относительно значения ошибки метода при п=3 и кратности анализа, равной I. При дальнейшем повышении кратности анализов происходит дальнейшее, но уже менее эффективное снижение ошибки метода. Кроме того, следует иметь ввиду, что снижение ошибки метода оправдано лишь в тех пределах, пока она превалирует над ошибкой репрезентативности.

Следует отметить, что при изучении основных показателей крови вполне можно ограничиться 2 или 3-кратным анализом проб. Такой простой прием проведения опытов открывает возможность изучения фоновых колебаний многих физиологических показателей крови применением общепринятых методов анализа.

Определив уточненное среднее арифметическое значение для выборки объемом п и значение ошибки метода, приведенное к этому же объему выборки, можно вычислить значение ошибки репрезентативности по формуле

(3).

Разработанные нами методики К'-кратного анализа нескольких проб выборки позволяют оценить ошибку метода в структуре ошибки опыта, а К-кратного анализа всех проб выборки - выявить с достаточной точностью величину каждой составляющей в структуре ошибки опыта и, в соответствии с этим результатом, выработать оптимальную тактику снижения ошибки опыта. Она заключается в том, что когда ошибка метода (Сыет) больше ошибки репрезентативности (Сре„р) следует применять один из способов снижения ошибки метода, а в случае когда ошибка репрезентативности больше ошибки метода -обеспечивать большую физиологическую однородность в контрольной и опытной группах.

На основе вышеизложенных результатов изучения структуры ошибки опыта предложена специализированная программа на базе приложения Microsoft Excel, позволяющая существенно упростить и ускорить определение ошибки опыта и ее составляющих и таким образом высвободить исследователя от рутинных операций. Картина выведения промежуточных и итоговых данных на экран монитора представлена на рис. 3 и 4.

2.2.3. Повышение точности подсчета количества лейкоцитов в камере Горяева

Установлено (табл.2), что ошибка определения лейкоцитов в первых 50 больших квадратах в среднем в 1,5 раза больше, чем в 100. В то же время в первых 75 квадратах она, наоборот, в 1,6 раза меньше, чем в 100. Следовательно, применив подсчет лейкоцитов в 75 больших квадратах, можно повысить точность анализа и ускорить процесс подсчета лейкоцитов.

Выявлено, что погрешность подсчета лейкоцитов во вторых 50 квадратах и среднем в 1,8 раза больше, чем в первых 50 и в 2,7 раю больше, чем в

100. Эти результаты убедительно свидетельствуют о существенном нарастании утомления зрения в конце процесса подсчета лейкоцитов.

2. Средние значения ошибки определения количества лейкоцитов (Смет к'. %) при разных способах их 5-кратного подсчета

№ пробы Количество подсчитываемых клеток камеры Горяева

Первые 50 Первые 75 Все 100 Вторые 50

1 5,7 1,7 2,7 11

2 4,4 1,2 4,1 8,6

3 9,9 4,9 6,1 20

4 2,6 1,8 5,0 5,0

5 5,0 2,1 2,9- 3,9

Смет сред, % 5,5 2,3 3,6 9,7

Установлено, что если уменьшение числа подсчитываемых квадратов до 50 ведет к увеличению ошибки метода в 1,5, то применение через строчного способа подсчета позволяет уменьшить ошибку метода в 1,3-1,4 раза за счет частичного устранения влияния неравномерного распределения клеток в камере Горяева. Следовательно, применение через строчного способа подсчета лейкоцитов в 50 квадратах позволяет обеспечить точность анализа практически на том же уровне, что и традиционный. Поэтому в ряде опытов с целью ускорения анализа количества лейкоцитов в крови можно ограничиться их через строчным подсчетом в 50 больших квадратах камеры Горяева.

2.2.4. Простой способ для приближенной оценки уровня достоверности результатов

При ознакомлении с публикациями других авторов в периодических изданиях нередко возникает потребность в собственной статистической оценке данных в условиях отсутствия вычислительной техники и времени. Учитывая это, разработан простой способ ускоренного контроля уровня достоверности на основе критерия достоверности разности средних Для приближенных

расчетов вполне допустимо принять ГП|« Шг » т. Тогдапреобразуется к виду

Требуемые величины отношения —для разных объемов выборок (п) и

уровнен достоверности (р) получены расчетным путем на основе таблицы Стьюдента и обобщенно представлены в табл. 3.

3. Необходимые значения отношений прирост показателя к ошибке опыта для подтверждения достоверности результата

Обеспечиваемый уровень достоверности М2-М|/т или См/Ст

п > 3 п2: 10

2 0,1 £3 >2

2 0,05 >4 йЗ

В соответствии с этим способом для обеспечения уровня достоверности р< 0,05 отношение прироста показателя к ошибке опыта при объеме выборки 10 должно быть более 3. При более щадящем подходе к полученным результатам, то есть при р20,1 и том же объеме выборки, о достоверности их можно АМ 0

судить при отношении

В плане дальнейшего обоснования актуальности разрабатываемых вопросов была проведена систематизация показателей крови за 5 лет по данным журнала "Ветеринария". Учитывали физиологические показатели, ошибка определения которых была более ±8-10 %. Одновременно оценивали величину их максимального сдвига в опытах и отношение

Всего отобрано и проанализировано около 100 публикаций. При этом в 85% из них результаты оказались недостоверными, несмотря на то, что отмечаются значительные сдвиги показателей крови в организме (на целых 30-50 %). Это обусловлено тем, что ошибка опыта в этих публикациях оказалась значительной и обусловленной ошибкой метода. Причина сравнительно невысокого показателя уровня статобработки в публикациях во многом обусловлена отсутствием в них контроля уровня ошибки опыта.

Проведенный анализ результатов статистической обработки данных, представленных в литературе, позволил выявить наиболее часто встречающиеся ошибки, которые отнесены к типовым и выработать рекомендации по их устранению. Так, в статьях нередко приводят средние арифметические значения М без указания ошибки опыта, объема выборки и уровня достоверности ; ошибку опыта т приводят с одной цифрой, а значение М с избыточным числом знаков.

Если в литературе в таблицах наряду с М нередко указывают т и р, то на графиках сведения о доверительных интервалах (ДИ) и уровне достоверности нередко отсутствуют, что не позволяет проанализировать такие материалы. Кроме того нередко встречаются работы, в которых представляются графики либо со множеством ДИ, либо с 1-2. Обе формы представления ДИ являются малопригодными. В связи с этим нами был разработан алгоритм оптимального представления ДИ и уровня достоверности на кривых. Доверительные интервалы предлагается располагать взаимонаправленными, односторонними и в количестве не более 5-7; а уровни достоверности - отобра-

жать непосредственно на кривых применением специальных маркеров. Компьютерное построение ДИ реализовано разработкой специальной программы па базе приложения Microsoft Excel.

По результатам разработок составлены 2 методических указания. Методика определения структуры ошибки опыта реализована также на базе приложения Microsoft Excel. На рис. 3 и 4 представлены примеры вывода на экран монитора первичных данных и результатов компьютерного вычисления структуры ошибки опыта (количество эритроцитов в крови кроликов и статистические показатели).

Результаты K-кратных измерений

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

проба проба проба проба проба - проба проба проба проба проба

4,19 4,52 4,01 4,32 3,68

4,15 4,77 4,21 4,05 4,12

3,86 3,98 4,14 4,39 4,02

Рис.3. Форма вывода на экран первичных данных

Рис. 4. Форма вывода информации на экране монитора промежуточных и

итоговых результатов

выводы

1. Предварительный контроль составляющих структуры ошибки опыта -ошибки метода и ошибки репрезентативности при анализе многих физиологических показателей позволяет существенно повысить качество планирования и эффективность проведения эксперимента.

При превышении ошибки метода над ошибкой репрезентативности следует изыскать оптимальные способы ее снижения, а при обратном их соотношении - обеспечить более однородные сравниваемые выборки по изучаемому признаку.

2. По мере увеличения кратности анализа с 2 до 5 ошибка определения количества эритроцитов и лейкоцитов крови в камере Горяева уменьшается в структуре ошибки опыта приблизительно в 2 раза и принимает значения соответственно 3,3 и 2,4%, а ошибка определения гемоглобина и общего белка-1,2 и 0,9%. Эти значения могут быть приведены к используемым объемам выборки (п) и служить основой для планирования эксперимента.

3. Увеличение объема выборки с 3 до 5 и кратности анализа всех проб до 2-5 способствует уменьшению ошибки метода в структуре ошибки опыта в 2 - 3,5 раза. Ограничившись только 2-кратным анализом проб, можно в ряде случаев ранее недостоверные результаты измерения (р>0,05) подтвердить с уровнем достоверности р<0,05 -0,01.

4. Ошибка определения количества лейкоцитов в последних 50 больших квадратах камеры Горяева в среднем в 1,8 раза больше, чем в первых 50 и в 4 раза больше, чем в первых 75, что свидетельствует о нарастании утомляемости зрения оператора в процессе счета. Переход к подсчету лейкоцитов в 75 больших квадратах вместо 100 ведет к уменьшению ошибки метода (в 1,6 раза), времени анализа, утомляемости оператора и существенному повышению уровня достоверности результатов исследования.

5. Разработанная простая методика позволяет без применения вычислительной техники ускоренно проводить оценку достоверности результатов в публикациях. Она также применима в некоторых случаях и при отсутствии в материалах сведений об объемах выборок и значениях ошибок средних. Недостоверность результатов в некоторых публикациях в основном обусловлена повышенным значением ошибки опыта (10-30%). Это указывает на целесообразность предварительного контроля структуры ошибки опыта и уменьшения соответствующей ее составляющей в ходе постановки опытов.

Выделены и систематизированы типовые ошибки представления результатов статистической обработки, допускаемых в литературе, и даны рекомендации по их устранению, выполнение которых позволяет повысить достоверность приводимых данных и объективность их анализа.

6. Применение на графиках оптимального числа доверительных интервалов (в пределах 5-7) и специальных маркеров, соответствующих равным уровням достоверности (р<0,05; 0,01; 0,001), позволяет повысить качество, информативность и скорость анализа графического материала. В тексте и таблицах публикаций к приводимым статистическим показателям следует дополнительно приводить значения ошибок опьпа в относительных величинах в виде т/Сга

7. Предложенные методики контроля базовых составляющих структуры ошибки опыта и приведения их к унифицированному объему выборки (n=5), a также соответствующие аналитические выражения могут быть использованы при определении разных физиологических показателей.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В процессе проведения исследований следует осуществлять контроль уровня ошибки метода, а также структуры ошибки опыта.

2. При значениях ошибки метода как минимум в 1,5 раза больше ошибки репрезентативности для ее снижения следует не увеличивать объем выборок, например в 2 раза, а осуществлять 2-кратный анализ каждой пробы, что обеспечивает идентичный уровень достоверности результата.

3. Для ускорения и упрощения определения ошибки метода и структуры ошибки опыта рекомендуется использовать методические указания "Методика контроля ошибки анализа проб крови" и "Методика компьютерного вычисления значений ошибки метода и ошибки репрезентативности в структуре ошибки опыта на базе приложения Microsoft Excel", утвержденные ректором КГАВМ

4. Разработанные методики анализа и обработки результатов исследования рекомендуется использовать в учебном процессе при подготовке зоовет-специалистов и организации научных исследований.

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Тукшаитов Р.Х., Недзвецкая Э.А. Контроль погрешности методов лабораторного анализа// Ветеринария. -1999. -№ 7. -С. 26-27.

2. Тукшаитов Р.Х., Недзвецкая Э.А., Зайнашева Г.Н. Обеспечение достоверности показателей крови// Ветеринария. -1999. - №. 10. -С. 37-40.

3. Гарипов Т.В., Недзвецкая Э.А. О точности выполнения уравнения суммирования эффектов в физиологической экологии и клинической токсикологии// Мат. конф. по токсикологии Санкт-Петербург: Изд. СПГАВМ, 2001. С. 36.

4. Недзвецкая Э.А., Мингалеева Г.Н. Алгоритм оптимального отображения показателей статобработки на экспериментальных кривых// Научно-практическая конф. по актуальным вопросам информатики, вычислит. тех-

пики и информационной безопасности: Тез, докладов. - Казань: КГТУ, 2001.-С. 74-75.

5. Недзвецкая Э.А., Гарипов Т.В. Методика построения кривых распределения физиологически допустимых концентраций веществ на основе приложения Microsoft Excel // Мат. Всеросс. научно-производ. конф. по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. -Казань: Изд. КГАВМ, 2001. - С. 164-165.

6. Недзвецкая Э.А., Каримова Р.Г. Пути повышения точности определения ряда фоновых показателей// Тезисы докл. научно-практ. конференции молодых ученых и студентов КГМУ. -Казань: Изд. КГМУ, 2003. -С. 20-21.

7. Недзвецкая Э.А. Реализация методики определения показателя разнообразия гематологических признаков в выборке на базе Microsoft Excel // Мат. Всеросс. научно-производ. конф. по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. -Казань: Изд. КГАВМ, 2002. - С. 233-234.

8. Недзвецкая Э.А. Погрешность определения СОЭ крови свиней при разной кратности анализа// Мат. Всеросс. научно-производ. конф. по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. -Казань: Изд. КГАВМ, 2003. - С.92-93.

9. Недзвецкая Э.А. Оценка эффективности уменьшения погрешности определения количества лейкоцитов в крови КРС при повышении кратности анализа// Мат. Всеросс. научно-производ. конф. по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. -Казань: Изд. КГАВМ, 2003. - С.93-94.

Подписано в печать 22.OUt, Формат 60x90 1Д6

Заказ 8Jt_- Тираж 100 экз. Усл. печ. л. 1,0

Бумага офсетная Печать RISO

Центр информационных технологий КГАВМ 420074, Казань, Сибирский тракт, 35

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Недзвецкая, Эльвира Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Физиологическое значение ряда показателей крови.

1.2. Состояние вопроса определения ошибки метода

1.3. Особенности представления в литературе цифрового и графического материала. щ 1.4. Методы статистической обработки, применяемые в ветеринарии . —

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Методы и методики лабораторного анализа крови.

2.2. Примененные методики статистической обработки данных

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Сравнительное изучение ошибок методов, допускаемых при определении показателей крови

3.1.1. Ошибка метода, допускаемая при определении количества эритроцитов.

3.1.2. Ошибка метода, допускаемая при определении количества лейкоцитов.

3.1.3. Ошибка метода, допускаемая при определении концентрации ге-мо-глобина.

3.1.4. Ошибка метода, допускаемая при определении количества общего белка .

3.1.5. Ошибка метода, допускаемая при определении скорости оседания эритроцитов.

3.2. Разработка методики приведения ошибок опыта и метода к унифицированному объему выборки.

3.3. Определение погрешности, допускаемой при приведении ошибки метода к большей кратности анализа пробы крови.

3.4. Усовершенствование методики определения ошибки метода применительно к однократному анализу проб крови в выборке

3.5. Определение зависимости ошибки метода от кратности анализа каждой пробы и объема выборки.

3.6. Разработка методики определения ошибки репрезентативности при исследовании ряда показателей крови.

3.7. Ускоренный способ подсчета лейкоцитов в камере Горяева.

3.8. Разработка простого способа экспресс-контроля уровня достоверности результатов исследований.

3.9. Оценка уровня достоверности, обеспечиваемого в литературе при определении гематологических и биохимических показателей крови . 80 ЗЛО. Рекомендации к представлению статистических показателей и анализу экспериментальных данных

3.11. Совершенствование системы представления статистических данных на графиках.

3.11.1. Алгоритм оптимального представления показателей статобработки на графиках.

3.11.2. Техника отображения результатов статистической обработки на графиках с помощью приложения Microsoft Excel.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

5. ВЫВОДЫ И ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Совершенствование методик анализа и обработки результатов исследований состава крови"

Актуальность темы. В процессе проведения физиологических исследований применяется целый ряд методов для определения показателей крови. Анализ приводимых в литературе данных показывает, что некоторым авг тора не удается статистически подтвердить достоверность полученных результатов- по причине наличия сравнительно большой величины ошибки опыта (порядка. 10% и более). Имеются немало случаев, когда в опытах не удается выявить даже физиологически значимые изменения1 показателей крови (на уровне 15-20 %), что соответственно снижает эффективность проводимых исследований.

Отмеченное положение обусловлено недостаточным уровнем разработки методических основ контроля уровня ошибки метода, структуры ошибки опыта и способов их снижения. Для успешного планирования, прогнозирования и проведения эксперимента необходимо знать не только величину ошибки опыта, но и соотношение между ошибкой метода и ошибкой репрезентативности и в соответствии с ним - применять оптимальный способ снижения ошибки опыта.

В известных в справочниках и учебных пособиях в достаточном объеме описываются методы определения многих показателей крови (Кудрявцев А. А., Кудрявцева -Л. А., 1974; Бочарников Н.Р., 1976; Смирнов A.M., Коно-пелько ПЛ. и соавт., 1981; Рихтер В., Вернер Э., Бэр X., 1982; Кондрахин И.П., Курилов Н.В., Малахов А.Г. и соавт., 1985; Камышников B.C., Воло-товская О.А., Ходюкова Л.Б. и соавт., 2003; и др.). Вместе с тем, только в единичных пособиях и публикациях (Кондрахин ИЛ., Курилов Н.В., Малахов А.Г. и соавт., 1985) приводятся "паспортные" значения, к тому же лишь одной составляющей ошибки регистрируемой в опытах и без возможности приведения их к используемым объемам выборок.

Следует также иметь ввиду, что точность используемых методов, обеспечиваемая рядом исследователей, оказывается заметно ниже "паспортных" значений и недостаточной внекоторых случаях для подтверждения в опыте существенных изменений показателей крови. Это требует применения контроля собственной погрешности анализов, приведения ее значений к конкретной величине объема выборки и соответственно обуславливает необхоI димость поиска относительно простых приемов снижения ошибок методов.,

Важной задачей является также повышение уровня1 статистического анализа результатов как собственных исследований, так и других авторов с целью получения дополнительной информации на основе дообработки материалов их публикаций. Решению этой задачи может способствовать разработка простых экспресс-приемов статистической обработки, которые позволяли бы исследователям быстро, без применения вычислительной техники, но с достаточным приближением, оценивать уровень достоверности приводимых в публикациях результатов.

Следует отметить, что известные методы статистической обработки данных, обстоятельно описанные в учебных пособиях Н.А.Плохинского (1970), Г.Ф.Лакина (1990) и др., построены на теоретическом допущении, что ошибка метода настолько мала, что ею можно пренебречь. Однако это условие нередко не выполняется в биомедицине, что требует разработки новых подходов.

В определенной степени ускоренное получение информации достигается при представлении экспериментальных данных в виде графиков. Между тем, они в большинстве случаев приводятся без доверительных данных и уровня достоверности, то есть без указания основных показателей статистической обработки, что существенно сказывается на представляемых материалов.

Все вышеизложенное свидетельствует о том, что проблема выяснения структуры ошибки опыта и снижения ее составляющих, повышения уровня статистической обработки данных и их анализа, а соответственно и совершенствования техники планирования исследования является достаточно ак1 туальной.

Цель и задачи исследований. Целью данного исследования является создание базы для повышения достоверности результатов исследований и усовершенствования ■ приемов анализа экспериментальных данных. В' соответствии с указанной целью были поставлены следующие задачи:

2. Изыскать возможность повышения точности и скорости анализа содержания лейкоцитов в крови.

3. Разработать простой способ анализа результатов исследования крови» по данным литературы без применения вычислительной техники.

Разработан алгоритм представления статистических показателей на граI фиках и осуществлена типизация ошибок, допускаемых при представлении цифрового и графического материалов.

Предложенные методики и аналитические выражения открывают возможность изучения динамики фоновых показателей крови, имеющее большое значение в планировании и проведении многих физиологических исследований и получении достоверных результатов.

Практическая ценность. Результаты исследований представляют практическую ценность для ветеринарии, биологии м медицины. Они могут быть применены для оценки структуры ошибки опыта и снижения ее уровня при использовании разных физиологических методов анализа.

Предложенный простой способ оценки уровня достоверности позволяет ускоренно осуществлять приближенный анализ публикаций без применения вычислительной техники при непосредственном ознакомлении с ними Даны рекомендации по устранению типовых ошибок представления результатов статистической обработки.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Оперативный контроль составляющих ошибки опыта (ошибки средней) вначале и в ходе проведения. экспериментов позволяет существенно повысить качество и эффективность физиологических исследований.

Апробация работы. Основные положения работы доложены на: Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным вопросам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2001); Всероссийской конференции токсикологов (Санкт-Петербург); Научно-практической конференции по актуальным вопросам информатики и вычислительной техники (Казань, 2001); Научной конференции молодых ученых и студентов (Казань, 2002); Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным вопросам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2003); расширенном заседании кафедры физиологии и этологии животных (2004).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Недзвецкая, Эльвира Александровна

5.1. ВЫВОДЫ

2. По мере увеличения кратности анализа с 2 до 5 ошибка определения количества эритроцитов и лейкоцитов крови в камере Горяева уменьшается в структуре ошибки опыта приблизительно в 2 раза и принимает значения соответственно 3,3 и 2,4%, а ошибка определения гемоглобина и общего белка -1,2 и 0,9%. Эти значения могут быть приведены к используемым объемам выборки (п) и служить основой для планирования эксперимента.

5. Разработанная простая методика позволяет с удовлетворительной точностью без применения вычислительной техники ускоренно проводить оценку достоверности результатов в публикациях. Она также применима в некоторых случаях и при отсутствии в материалах сведений об объемах выборок и значениях ошибок средних. Недостоверность результатов в некоторых публикациях в основном обусловлена повышенным значением ошибки опыта (10-30%). Это указывает на целесообразность предварительного контроля структуры ошибки опыта и уменьшения соответствующей ее составляющей в ходе постановки опытов.

6. Применение на графиках оптимального числа доверительных интервалов (в пределах 5-7) и специальных маркеров, соответствующих разным уровням достоверности (р<0,05; 0,01; 0,001), позволяет повысить качество, информативность и скорость анализа графического материала. В тексте и таблицах публикаций к приводимым статистическим показателям следует дополнительно приводить значения ошибок опыта в относительных величинах в виде m/Cm.

7. Предложенные методики контроля базовых составляющих структуры ошибки опыта и приведения их к унифицированному объему выборки (n=5), а также соответствующие аналитические выражения могут быть использованы при определении разных физиологических показателей.

5.2. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

4. Разработанные методики анализа и обработки результатов исследования рекомендуется использовать в учебном процессе при подготовке зооветспециалистов и организации научных исследований.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Недзвецкая, Эльвира Александровна, Казань

1. Авдеева Н.А. Оценка методов определения концентрации гемоглобина, применяемых в клинико-диагностических лабораториях// Лабораторное дело. 1987. -№ 10. - С. 7-8.

2. Андронова В.Л., Галегов Г.А. Сравнительное изучение репродукции вируса Синдбис, чувствительного и резистентного к производным адамантана.1.* Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2000. - № 1. - С. 8689.

3. Антонов B.C. К вопросу обеспечения достоверности результатов лабораторных исследований// Клиническая лабораторная диагностика. -1997. -№ 5. -С. 46.

4. Арокина Н.К., Потехина И.Л., Волкова М.Ф. Особенности развития глубокой гипотермии у крыс при различной степени ограничения двигательнгой активности// Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова. -2002. Т.88. - № 11. - С.1477-1484.i

5. Архангельский И.И., Сошенко Л.П. Упрощенный метод определения гема-токрита крови// Ветеринария. 1993. -№ 6, - С.56-57.

6. Базанова Н.У., Голиков А.Н., Кожебеков З.К. и соавт. Физиология сельскохозяйственных животных (Изд. 3-е, перераб. и допол.) М.: Агропромиздат. - 1991.-431 с.

7. Балаханова Т.В., Погорелова О.А., Алиджанова Х.Г. и соавт. Неинвазивное определение функции эндотелия у больных гипертонической болезнью в сочетании с гиперхолестеринемией// Терапевтический архив. -1998; -№ 4„ С. 15-19.

8. Басенова А.Т., Булегенов К.В., Бальмуханов Б.С. Способ определения скорости оседания эритроцитов// Авт. Свид во 1492236 СССР МКИ А 61 В 10/00 от 31.03.1987.

9. П.Баязитов И.Т., Воронин Л.Л., Касьянов A.M. и др. Долговременная, потен-циация AMP А- и NMDA- компонент постсинаптических токов в области СА1 гиппокампа крыс// Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова. 2001. - Т.87. - № 4. - С.448-458.

10. Беляков А.А. Метрологическое обеспечение результатов анализа. Санитар-но-химические методы определения вредных веществ. -М., 1981.-51 с.

11. Бижокас В.А. Биохимические показатели лимфы у свиней при перитоните и отравлении нитратами// Ветеринария. 1993. - № 3. -С.43-44.

12. Н.Биргер М.О., Ведьмина Е.А. и соавт. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Изд. 3-е, перераб. и доп. -М.: Медицина, 1992. -464 с.

13. Бойко Т.В. Влияние хормони на некоторые показатели крови у крыс //Мат. учебно-метод. и научно-произв. конф. ин-та вет. медицины ОмГАУ. Тез. докл. за 1995-1997 гг. - Омск: изд. ОмГАУ, 1998. - С. 30.

14. Бойко Е.Р., Бичкаева Ф.А., Стрекова А.В. 24-часовой мониторинг профилясывороточных липидов у женщин с нормальной и избыточной массой тела// Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. -2000.: -№ 1. -С.133-138.

15. Борисов П.А. Влияние некоторых факторов на реакцию оседания эритроцитов И Лаб. дело. 1958. -№3. -С. 8-12.

16. Бочарников Н.Р. Изучение состава крови, молока и кормов// Метод, указания ВНИИ разведения и генетики. Л., 1976. - 183 с.

17. Будников Г.К., Латыпова В.З., Евтюгин Г.А. Методологические аспекты аналитического контроля в экологии//Каз. мед. журнал. -1992. -№ 4. -С. 283284.

18. Буковский М.И., Колесник С.И. и др. Руководство по контролю вредных веществ в воздухе рабочей зоны: Справочное изд. Книга 2. -М.: Химия, 1993.-416 с.

19. Власов Т.Д. Реактивность сосудов и параметры тромбообразования при по-стишемической реперфузии// Российский физиологический журнал. -1999. -Т. 85. -№11. С.1391-1395.

20. Всесвятская К.В. Об очистке капилляров панченкова и учете результатов РОЭ // Лаб. дело. 1965. - № 11. - С. 693.

21. Гальперин С.И. Физиология человека и животных. М.: Высш. школа, 1993.-653 с.

22. Геккелер К., Экштайн X. Аналитические и препаративные лабораторные методы: Справ, изд: Перев. с нем. М.: Химия, 1994. - 416 с.

23. Германова С.Р. Особенности роста и физиологического статуса бычков, выращенных при адаптивной технологии с назначением биогенных препаратов// Автореф. дис. канд. биол. наук. -Казань: ВНИВИ, 1997. -21 с.

24. Гильмутдинов Р.Я., Курбанов Р.З. Физиология крови. Казань: Изд. КГУ, 1999.- 183 с.

25. Головацкий А.С., Головацкая А.Л. Отбор капилляров для определения скороста оседания эритроцитов // Лаб. дело. 1978. - № 9. - С. 669-670.

26. Грикшас С.А. Улучшение репродуктивных качеств свиноматок крупной белой породы методом реципрокно-рекурентной селекции. Докл. Росс. акад. сельхоз. наук. - 1999. - № 1. - С. 31-32.

27. Даугалиева Э.Х., Сидоркин В.А., Семенов С.В. и соавт. Влияние ивермека на показатели иммунного ответа у животных// Ветеринария. 2000. - № 12. -С. 29-30.

28. Дворкин В.И. Выявление погрешностей градуировки при межлабораторном эксперименте// Журнал аналитической химии. -1999. -№ 8. -С. 790-796.

29. Долинский Е.Ф. Обработка результатов измерений. Изд. 2-ое, доп. и пере-раб. -М.: Изд. стандартов, 1973. -192 с.

30. Дубровин В.И., Коломыцев А.А., Черятников С.Л. Ликвидация классической чумы свиней общеевропейская проблема// Ветеринария. -1999. -№ 1. - С. 56-57.

31. Зайдель А.Н. Ошибки измерений физических величин. -Перераб. и доп., -Ленинград: Наука, 1974. -108 с.

32. Зайнашева Г.Н. Разработка, совершенствование и мемрологическое обеспечение методов определения СОЭ и гематокрита крови сельскохозяйственных животных // Автореф. дис. канд. биол. наук. -Казань: ВНИВИ, 1996. -22 с.

33. Запруднова Р.А. Изменение поведения и ионной регуляции у пресноводных рыб при стрессе. Успехи современной биологии. - 1999. - Т. 119. - № 6. - С.265.270;

34. Зюзин С.А., Сальникова С.И. Стимуляция синтеза белка производными сальбутамола// Ветеринария. -2000. -№ 6. -С. 47-48.

35. Измайлов С.Г., Зинкевич О.Д. Применение ксимедона в хирургическойtпрактике для повышения неспецифической резистентности организма к инфекциям// Каз. мед. журнал. 2000. -№ 1. - С. 10-11.

36. Иноземцев В.П., Балковой И.И., Нежданов А.Г. Квантовая терапия коров при метритах и маститах// Ветеринария. 2000. - № 10. - С. 9-12.

37. Каминский Л.С. Статистическая обработка лабораторных и клинических данных. -Л.: Медицина, 1964. 252 с.

38. Камышников B.C., Волотовская О.А., Ходюкова Л.Б. и соавт. Методы клинических лабораторных исследований: Учебник. Под ред. В.С.Камышникова. -2-е изд., перераб. и доп. Минск: Бел. Наука,-2003. -775 с.

39. Кармолиев Р.Х., Найденский М.С., Лукичева Л.А. Воздействие янтарной кислоты на липидно-энергетический обмен и резистентность организма ци-плят// Ветеринария. -2000. -№ 7. -С. 40-43.

40. Катина И.Е., Терентьев Д.А., Наследов Г.А. Калиевый ток входящего выпрямления в эмбриональных скелетных миоцитах лягушки// Российский физиологический журнал. -1999. -Т.85. -№ 8. -С. 1022-1030.

41. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: Справочное издание/ Кондрахин И.П., Курилов А.Г., Малахов А.Г. и соавт. -М.: Агропром-издат, 1985.-287 с.

42. Костромитинов Н.А., Сидоров И.В., Кохтюк Ф.П. и соавт. Фармакотоксико-логическая оценка и эффективность микотила при респираторных болезнях животных. Ветеринария. - 1994. - № 12. - С. 39-42.

43. Крылов А.А. К 75-летию клинического применения реакции оседания эритроцитов // Лаб. дело. -1970. № 5. - С. 494-497. .

44. Крячко О.В., Томсон В.В. Состояние гисто тематических барьеров легкихпоросят вне зоны воспаления// Ветеринария. 2001. - № 3. - С. 43-46.

45. Кудрявцев А.А., Кудрявцева JI.A. Клиническая гематология животных. М.: Колос, 1974. - 399 с.

46. Кузнецов С.Г., Гуриков В.М., Черепанов А.А. и соавт. Электродинамическое воздействие микроволн на. биологические объекты// Ветеринария. -2002.-№ 10.-С. 11-14.

47. Кузнецов А.П., Маринин Е.А., Семина Л.К. Влияние некоторых факторов на интенсивность перезаражения коров лейкозом// Ветеринария. -2000. -№ 7. -С. 16'18.

48. Куликова А.В., Тарнуев Ю.А., Абидуева Е.Ю. Диагностическое значение лейкограммы и пневмограммы// Ветеринария. 2003. - № 6. - С. 33-37.

49. Лакин Г.Ф. Биометрия: Учебное пособие для биол. спец. вузов. -Изд. -4-е, перераб. и доп. -М: Высшая школа, 1990. -352 с.

50. Латыпов М.М. Разработка кондуктометрических способов ускоренного определения ряда гематологических показателей сельскохозяйственных животных // Автореф. дис. канд. биол. наук. -Казань: ВНИВИ, 1990. 21 с.

51. Левин Г.А., Шереметьев Ю.А. Влияние гепарина на способность форменных элементов крови к деформации и агрегации // Мат. 1 Всесоюз. съезда гематологов и трнсфузиологов. М., 1979. - С. 363.

52. Легконогов А.В. Клиническое и прогностическое значение поздних потенциалов желудочков сердца у больных гипертрофической кардиомиопатией// Терапевтический архив. -1998. -№ 4. -С. 20-24.

53. Леонов В.П., Ижевский П.В. Применение статистики в статьях и диссертациях по медицине и биологии. Часть 1. Описание методов статистического анализа в статьях и диссертациях// Международный журнал медицинской практики. -1998. -Вып. 4. -С. 7-13.

54. Лисицына А.А., Малахов Н.А., Василевич Ф.И. и соавт. Биохимическое исследование печени собак при демодекозе// Ветеринария. -1997. -№ 4. -С. 4445.

55. Логинов А.С., Матюшин Б.Н., Чебанов С.М., Решетняк В.И. Оценка холе-стаза по активности антиоксидантных ферментов и составу липопротеидов плазмы крови больных с патологией печени// Терапевтический архив. -1998. -№ 4. -С. 40-42.

56. Любищев А.А. Об ошибках в применении математики в биологии. Ошибки от недостатка осведомленности// Журн. общ. биол. -1969. -№ 5. -С. 572-584.

57. Лютинский С.И., Крячко О.В., Хавинсон В.Х., Кожемякин А.Л. Влияние пептидных биорегуляторов на местный иммунитет при бронхопневмонии// Ветеринария. 1993. -№1. -С. 44-47.

58. Пономарев А.П. Гетерогенность популяций 146S частиц вируса ящура// Ветеринария. -2000. -№ 7.-С. 18-23.

59. Мартынов С.П., Добротворская Т.В. Генетическое разнообразие районированных сортов пшеницы, созданных в различных регионах бывшего СССР. -Сельскохозяйственная биология. 1998. - № 1. - С. 44-50.

60. Маршалкович Р.Д. Ускоренный метод определения реакции оседания эритроцитов // Военно-мед. ж. 1957. - № 2. -С. 80-811

61. Маточкин М.И., Буракова М.В., Сагадеева P.P. РОЭ в наклонно поставленных пипетках у собак разного возраста и при некоторых патологических состояниях // Тр. Троицкого вет. ин-та. 1969. - Т.13. - В. 2. -С. 65-69.

62. Меркурьева Е.К. Биометрия в животноводстве. М.: Колос, 1964. -311 с.

63. Метрологическое обеспечение безопасности труда: справочник/ Под ред. И.Х.Сологяна. Т.2. Измеряемые параметры химических , биологических и психофизиологических опасных и вредных производственных факторов. -М.: Изд. стандартов, 1989. -256 с.

64. Михайлов B.C., Малахов В.Н. и: соавт. Внешняя оценка микробиологических исследований по программе 1-го цикла Федеральной системы внешней оценки качества (ВОК)// Клин. лаб. диагностика. -1999. -№ 5. -С. 50.

65. Морозова В.Т. Клиническое значение гематологических исследований // Клиническая лабораторная диагностика. 1993.-№ 1. - С. 20-25.

66. Налимов В.В. Применение математической статистики при анализе веществ. -М.: Физматгиз, 1960. -431 с.

67. Наточин Ю.В., Пруцкова Н.П., Шахматова Е.И. Динамика увеличения осмотической проницаемости мочевого пузыря лягушки// Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова. 2001. - Т.87. - №8. - С.1095-1105.

68. Нежданов А.Г., Лободин А.С., Боа Антонио Педро. Стероидные гормоны в крови нетелей// Ветеринария. -1997. -№ 4. -С.36-38,

69. Немцов А.В., Зорин Н.А. Математическое обеспечение исследований в психиатрии// Социальная и клиническая психиатрия. -1996. -вып. 6, С. 94-100.

70. Никулин Д.М., Редиепа Г.Р. Влияние озона на резистентность новорожденных телят// Ветеринария. 2003. № 3. - С. 40-42.

71. Ослопов В.Н., Смирнов Ю.В., Садыков А.Р. Клиническая лабораторная диагностика. Казань: КГМИ, 1990. - 183 с.

72. Петрова Г.Г., Ильина Т.Н., Тютюник Н.Н. Специфические показатели профиля тиамина у норок в условиях его недостаточности// Ветеринария. -2000. № 3. .-С.45-52.

73. Плохинский Н.А. Биометрия. -Изд. 2-е. -М.: Изд. МГУ, 1970. 367 с.

74. Подрабинек П.А. Об определении РОЭ в наклонных капиллярах // Военно-мед. ж. 1958. - №11. - С. 61-64.

75. Портнов B.C. Некоторые аспекты механизма действия радиозащитных средств. Ветеринария. - 1997. - № 1. - С. 43-47.

76. Прошин С.Н., Гаврилов Б.А., Старожилова Т.П. и соавт. Активность рибо-сомных цистронов лимфатической крови при лейкозе// Ветеринария. 2001. -№2.-С. 25-27.

77. РД 50-502-84. Показатели точности, достоверности и воспроизводимости результатов испытаний. Методические указания. -М.: Изд. стандартов.

78. Резяпкин М.П. Специфическая профилактика при эхиноккозе овец// Ветеринария. -2000. -№ 12. -С.31-34.г

79. Решетников Ю.С., Попова О.А., Кашулин Н.А. и соавт. Оценка благополучия рыбной части водного сообщества по результатам морфопатологическо-го анализа рыб. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1999. - Т. 119.- № 2. - С. 165-177.

80. Рихтер В., Вернер Э., Бэр X. Основные физиологические показатели у животных и технология содержания. М.: Колос, 1982. - 185 с.

81. Родионов И.М., Тарасова О.С. Кошелева В.Б. Адаптация резистивности сосудов к уровню трансмерального давления// Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова. 2001. - Т. 87. - №11. - С. 1477-1485.

82. Романова М.А., Начатов Н.Я. Влияние электростимуляции стельных коров на показатели§фови новорожденных телят// Мат. учебно-метод. и научно-произв. конф. ин-та вет. медицины ОмГАУ. Тез. докл. за 1995-1997 гг. Омск: изд,ОмГАУ, 1998. -С. 110-111.

83. Савич В.И., Савич А.В. Использование системы обратной связи «введение элементов в суспензию почв изменение активности фотосинтеза» для: оценки оптимальных свойств почв. - Докл. Росс. акад. сельхоз. наук. - 1993. -№ 1. - С. 37-41.

84. Савченко В.Г., Паровичникова Е.Н., Исаев В.Г. и соавт.* Биологические особенности лечения острого промиелоцитарного лейкоза// Терапевтический архив. -1998. -№ 7. -С. 5-11.

85. Сайдуллин Т.С. Статистическая обработка результатов серологических исследований// Ветеринария. -1981. -№ 10. -С. 62-64.

86. Саульская Н.Б., Михайлова М.О. Влияние мотивационных и эмоциональных факторов на выброс глутамата в прилежащем ядре мозга крыс при потреблении корма// Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова.- 2001. Т.87. - №6. - С.858-864.

87. Сергеев П.В., Ухина Т.В., Шимановский Н.Л. Активность фосфолипазы А2 в тканях кожи крыс в норме. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2000. - № 1. - с. 70-72.I

88. Славин М.Б. Методы системного анализа в медицинских исследованиях. -М.: Медицина, 1989. -302 с.

89. Слободяник В.И., Холев С.А., Рецкий М.И. Коррекция воспроизводительной функции быков-производителей//Ветеринария. -2000. -№ 8. -С.37-40.

90. Смирнов Г.Н., Апалькин В.А., Колесникова О.П. Иммуноактивные свойства ивомека, цидектина и аверсина. Ветеринария. - 1997. - № 7. С.37-41.

91. Смирнов A.M., Конопелько П.Я., Пушкарев Р.П. и соавт. Клиническая диагностика внутренних болезней. 2-ое изд., перераб. и доп. - М.: Агропром-издат, 1988. - 512 с.

92. Снедекор Дж. У. Статистические методы в применении к исследованиям в сельском хозяйстве и биологии/ Пер. с англ. -Изд. 5-е. -М.: Сельхозиздат, 1961.-503 с.

93. Сперанский С.В. Об информационном шуме в эксперименте на животных и возможностях его снижения// Научные основы современных методов гигиенического нормирования химических веществ в окружающей среде. -М., 1971. -С. 152-158.

94. Сперанский С.В. Содержание и перспективы объемной токсикометрии// Бюллетень СО АМН СССР. -1982. -№ 5. С. 71-75; 1983. -№ 1. -С. 57-62.

95. Сперанский С.В. Феномен Сарнова и что с ним делать// Знание и сила. -1990. -№ 9. -С. 23-27.

96. Творогова М.Г., Рожкова Т.А., Алиджанова Х.Г. и соавт. Биохимическаягдиагностика диагностика наследственных гиперлипопротеидемий// Терапевтический архив. -1998. -№ 4. -С. 9-15.

97. Тихонова Г.А. Реакция оседания эритроцитов у крупного рогатого скота// Автореф. дис. канд. биол. наук. -Казань: КВИ, 1948. -22 с.

98. Титов В.Н. Критерии выбора метода исследования// Клиническая лабораторная диагностика. 1995. -№ 3. - С. 54-57.

99. Тукшаитов Р.Х. Рекомендация по математической обработке экспериментального материала при использовании в опытах ограниченного количества животных.-Казань, 1995.-11 с.

100. Тукшаитов Р.Х., Зайнашева Г.Н. Оценка предварительного отбора капилляров в обеспечении воспроизводимости СОЭ// Тез. докл. Республ. научно-произв. конф. -Казань: КГВИ, 1992. -С. 82.

101. Тукшаитов Р.Х., Зайнашева Г.Н. Обоснование низкой достоверности показателя СОЭ// Физиологические аспекты ветеринарии и зоотехнии: Межвуз. сб. науч. тр. -Казань: Изд. КГАВМ, 1994. -С. 32-34.

102. Тукшаитов Р.Х., Кузьмина О.Б. Нормативные значения ошибок определения ряда показателей крови// Ветеринария. -1999. -№ 1. -С. 40-42.

103. Тукшаитов Р.Х., Недзвецкая Э.А. Контроль погрешности методов лабораторного анализа// Ветеринария. -1999. -№ 7. -С. 26-27.

104. Тукшаитов Р.Х., Недзвецкая Э.А., Зайнашева Г.Н. Обеспечение достоверности показателей крови// Ветеринария. -1999. №. 10. -С. 37-40.

105. Тутубалин В.Н. Вероятность, компьютеры и обработка результатов эксперимента// Успехи физических наук. -1993. -№ 7. -С. 93-109.

106. Тюкавкина С.Ю., Москаленко Е.П. Влияние коклюшных препаратов на композицию субпопуляций перитонеальных макрофагов экспериментальных животных// Иммунология. -1999. -№4. -С.44-46.

107. Тяготин Ю.В., Рыбакова Л.П., Тутова И.Ю., Гончарова С.В., Куликова И.Н.// Низкомолекулярный пептид лимфоидной ткани лимфотилин как модулятор иммунологических реакций// Иммунология. -1999. -№3. -С. 36-38.I

108. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. -М.: Медицина, 1975. -295 с.

109. Федяева Ю.Я. Токсикологическая оценка сочетанного действия < кадмия;ртути и свинца на организм животных// Авторефдис. канд. биол. наук. 1. Казань. 1998. -21 с.

110. Флетчер Р., Флетчер С., Вагнер Э. Клиническая эпидемиология. Основы доказательной медицина/ Пер. с англ. -М.: Медиа Сфера, 1998. -351 с.

111. Фомин Г.С., Фомина О.Н. Воздух. Контроль загрязнений по международным стандартам. Справочник. М.: Изд. ВИНИТИ, 1994. - 228 с.

112. Хапчаев Ю.Х., Клеблеева Т.Д., Попова В.Д., Кондратьева Я.Ю. и соавт. Культивирование клеток Vero и вакцинных штаммов полиомиелита (штамм: А.Сэбина) в условиях псевдосуспензии в полупромышленном биореакторе. -Биотехнология. 1999. - № 6. - С. 45-51.

113. Шараф М.А., Иллмэн Д.Л., Ковальски Б.Р. Хемометрика/ Пер. с англ. -Под ред. И.А.Ибрагимова, А.К.Чарыкова. -Л.: Химия, 1989.>269 с.

114. Шахов В.П., Гумилевский Б.Ю., Шахова С.С. и соавт. Феномен трехкле-точной кооперации макрофагов Т-лимфоцит - кроветворная клетка в гемо-поэтическом островке костного мозга при стрессе// Иммунология.,-1999. -№3.-С.25-27.

115. Щиголев Б.М. Математическая обработка наблюдений. -М.: Изд. физ.-мат. литературы, 1962.-344 с.

116. Якушков Н.Ф. Влияние на РОЭ колебаний температуры воздуха// Лаб. дело. 1965. -№ 11.-С. 647-649.

117. Яруллина Л.Г., Ибрагимов P.M., Максимов И.В., Ахметов P.P. Защитные реакции пшеницы при поражении корневой гнилью. Докл. Росс. акад.сельхоз. наук. 1994. - № 4. - С. 8-10.

118. Awotwi Е.К., Aboagye G.S. Correlation between eryrhrocytic values and egg production in old layers// Bull. Anim. Health and Prod. Afr. 1995. - V. 43. - № 3. - P. 221-222.

119. Bailey N.T. J. Statistical Methods in biology. -Oxford: The engl. univers. press Ltd, 1959.

120. Bellamy G.J., Hinchliffe R.F. Effect of storage on blood count variables in small samples// Med. Lab. Sci. 1990. - V. 47. - № 3. - P. 230-233.

121. Brosnan Eileen Anne, Eales Marilyn M. The erythrocyte sedimentation rate (ESR) in pregnancy// N.Z.I. Med. Kab. Technol. 1990. - V. 43. - 3 1. - P. 4-6.

122. Chatterjee A. A study on the erythrocyte dimentions in relation to egg production in white leghorn hens// Ind. J. Anim. Health. 1995. V. 34. - № 1. - P. 19-27.

123. Cottrel J.C., Lingeman R., Wenger L.,Buejno B. Automated Hemoglobinometry Utilizing the Robot chemist. Amer. J. clin. Path. -1998 V. 51. - № 6. - P. 733738.

124. Gossens W., Van Orshoven F, Boel A., De Schouwer P. Time effecs on automated blood sell sounds and leucocyte differ entials// Brit. J, Haematol. 1994. -V. 87. - Suppl. № l. -P. 68.

125. Grosmann O. Beitrage zur Anwendung der statischen versuchsplanung bei der Ausarbeitung chemischer Analysenverfahren. Dresden, September, 1989.

126. Hawkins D., Lambort T. Stability of EDTA anticoagulated whole blood specimens from dogs, rabbits and rars for the determination of routine hematology parameters// Clin. Chem. -1994. V. 40. - № 6. - P.989.

127. Hall P.C., Wilson J., Syndercombe Court D. Erythrocyte sedimentation rate: a comparison between three metods// Med. Lab. Sci. -1983. - V. 40. - 3 40. - P. 367m

128. Hesertine D., Thomas Т.Н., James O.F. et al. High erythrocyte water content causes discrepancy between values of automated and micro-centrifuged haemato-crit// Acta haematol. 1988/ -V. 80. - № 2. - P. 89-90.

129. Hirase Yukiy Oshi, Makatsuka Hiroshi. Stable blood cell counts after one-week storage at room Temperature//Bull. Environ. Contam. And Toxicol. 1992. - V. 49. -№4. -P. 504-508.

130. Humple N.D., Hyde K., Urmston A. 4 C° or 20 C° for overnight storage of samples for blood count// Med. Lab. Sci. 1992. -V. 49. -3 3. - P. 178.

131. Jackva A., Korenckova В., Siklenka P., Kottferova J. The effect of cadmium on selected hematological parameters in laying hens: 17 Int. Symp. Anim.Physiol.// Zivoc. Vyroba. 1998. -V. 43. - № 1. - P. 34.

132. Knapp Rebecca Grant, Miller M. Clinton. Clinical epidemiology and biostatistics. -Baltimore: Williams & Wilkins, 1992. -435 p.

133. Kallner Anders. On the temporal development of erythrocyte sedimentation rate usign sealed vacuum tubes// Amer. J. HematoI. 1991. V. 37. № 3. - P. 186-189.

134. Kung-Ming J.C. Role of surface electric charge in red blood cell interactions// J. Gen. Physiol. 1973. V. 17. - № 5. - P. 638-654.

135. Lang T.A., Secic M. How to report statistics in medicine: annotated guidelines for authors and reviewers, Philadelphia: American College of Pysicians, 1997. -367 p.

136. Levine R.A., Wardlaw S.C. A new technique for examining blood// Amer. Sci. -1988. V. 76. - № 6. - P. 592-599.

137. Long Mian, Toyama Ioshihary. Effect of electric field on erythrocyte sedimentation rate// Rets. Progr. Polym. Phys. lap. 1990. - V. 33. - № 7. P. 623-626.

138. Lowe Gordon D.O. Should plasma viscosityreplace the ESR?// Brit. J. Heama-tol. 1994. - V. 86. - № 7. - P. 6-11.

139. Moeley D.L., Bull B.S. A comparison of the wintrobe, the westergen and the ZSR erythrocyte sedimentation rate (ESR) methods to a candidate referencemethod// Clin. lab. Haemat. 1982. - V.4. - № 2. - P. 169-178.

140. Morgan E. Chemometrics. Experimental desing, Chichester, U.K.: J. Wiley, 1991.

141. Nappert G., Vrins A., Lariviere N., Ochoa L.N. Rapid determination of equinethaemoglobin concentration with the Spencer haemoglobinometer// Canad. Veter. J. -1989. V. 30. - № 1. - P. 52-63.

142. Pandey M.M., Misra S.K. Chemico-haematological changes in experimental chronic haemorragic anaemia in cross-bred cow calves// Indian veter. J. 1986. -V. 12.-P. 1023-1026.

143. Pries A.R., Neuhous D., Gaehtgens P. Blood viscosity in tube flow: Dependence on diamiter and heamatocrit// Amer. J. Physiol. 1992. - № 6. - P. 17701778.

144. Ramcharam J., Shaja N., Piggott M. et al. The effects of vibration upon blood-viscosity and red-cell mobility: a study in vivo and vitro// Biorheology. -1982. -V. 19.-P. 341-352.

145. Scheliner H. Blood sedimentation rate and hematocrit value of fowls blood using various anticoagulants . Vet. Bull. 1969. - V. 40. - P. 863.

146. Song Y., Milam D., Hill III W.T. Long narrow oll-ligt guide// Optics letters. -1999. -V.24. -№ 24. -P. 1805-1807.

147. Varcoe B.H., Brarre S., Engld B.-G. The generation of fock-states in the jneatom maser// Laser physics. 2000. -V.34. - № 1. -P. 1-7.

148. Zhou A., Qi L., Lui J. Изучение влияния питания и физиологического состояния на общий белковый обмен на разных стадиях роста утят// Xiumu Shouyi Xuebao Acta vet. et zootech. Sin. - 1998. - V. 26. -№ 2. - P. 97-103.

Информация о работе

Недзвецкая, Эльвира Александровна
кандидата биологических наук
Казань, 2004
ВАК 03.00.13

Диссертация

Совершенствование методик анализа и обработки результатов исследований состава крови - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы